WO1992012968A1

WO1992012968A1 - Composition pharmaceutique contre les thrombis

Info

Publication number: WO1992012968A1
Application number: PCT/JP1992/000072
Authority: WO
Inventors: Yoshiaki Yoshikuni; Kazuya Mori; Naoyoshi Yamada
Original assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1991-01-28
Filing date: 1992-01-28
Publication date: 1992-08-06
Anticipated expiration: 1993-07-28

Description

明細害

血栓用医薬組成物

技術分野

本発明は、血栓用医薬組成物に関する。

背棗技術

生体は、血管が物理的損傷を受けて出血すると、生命維持のために血管の障害部位で、血小板の凝集、練いておこるフィプリンの析出と重合により血液をすばやく固め止血栓をつくる。ところがこの止血栓は、一方において血流を阻害し、その末梢部位での組織の虚血や壊死の原因となるため、生体は通剰な血栓や不要になった血栓を取り除く仕組みを備えている。過剰な血栓や不要になった血栓の溶解は、ブラスミノ一ゲン活性化因子（以下「PA J という）によつてブラスミノ一ゲンが活性化され、それにより生じるブラスミンがフイブリンを分解することにより起こる（線溶）。

一方、血管組織が完全に條復するまでに止血栓が溶解してしまうと、生体は血液を失い生命を維持する上で危険な状態に陥る。このため生体は通剰な線溶に対してそれを制御する仕組みをも備えている。その仕組みの中心的役割を担うのが 2-ブラスミンインヒビタ一（以下「α 2-ΡΙ」という）である。《2-ΡΙは、血中で上記プラスミンの作用を解時に阻害し、止血栓の溶解を防ぐとともに、止血栓の中に取り込まれて血栓を安定化するものである。また、 α 2-ΡΙは、一種の急性期蛋白として手術後に増加し、術後血栓の原因の一つとなる。

心筋梗塞、脳梗塞、肺梗塞などの病態の主 Θは、血管内にできた血栓が血流を阻害し、末梢組織にダメージを与えるために起こると考えられている。これは生体が本来持っている線溶系と凝固系のパランスが崩れたためであると推測される。現在、これら病態の治瘐にはゥロヰナーゼ（下 r uKj という）、ストレブトキナーゼ及び組纔ブラスミノ一ゲン活性化因子（J¾下「t-PAj という）等の PAを投与する血栓溶解療法が行われている。

しかしながら、前述の如く血中及び血栓中に存在する α 2-ΡΙは、 ΡΑ投与によりできたブラスミンを阻害するため、 ΡΑを投与して血栓を溶解するには自ずと限界があり、また全身性の線溶による出血などの副作用を伴う危険性が多分にある。

徒って、血中の《2-ΡΙの活性を低下させ、線溶凝固系のバランスをより線溶方向に傾けることができれば、術後血栓、血栓症の予防に役立つと共に、心筋梗塞や肺梗塞などの血栓が原因である病態の治瘐に投立つこととなる。

試験管内で作られた血栓に《2-ΡΙの活性を阻害するモノク π—ナル抗体を加えると、血栓が速やかに溶解することが知られている（ Sakataら、 Blood, 74, 2692-2697 (1989) ) 。

一方、公知化合物である本発明化合物及びその誘導体はマンノシダーゼ阻害剤として知られている。しかしながら、本発明化合物をさらに具体的薬理作用を特定して研究し、医薬品としての製品化に結びつけようとする試みはなされていない。（Bl bei n, A. D. ； PASBB J, Vol. 5, 3055〜3063 (1991)、特開昭 61-200967 号公報 )

先に本発明者らは、この α 2-ΡΙの作用に着目し、 N—置換モラノリンが α 2-ΡΙの活性を低下させる作用があることを見出し、そしてこのものが優れた血栓溶解促進作用を有することを示し特許出願した（特開平 1-250350号公報）。

本発明者らは、先に開示した N—厣换モラノリンよりも強い " 2 - PI活性低下作用を有する薬剤を見出し、心筋梗塞、肺梗塞など広く血栓に原因を匿く疾患の治療剤に有効な血栓溶解促進剤を提供することを目的として検討を行った。

発明の開示

上記目的を達成するために、本発明者らは多くの化合物群をスク U 一二ングした結果、幸いにも次の一般式〔 I〕で表される 1 —デォキシマンノジリマイシン（ ^下「MI C-1 J ともいう）及びこれの薬理学的に許容される酸付加塩が N—置換モラノリンよりも強い o 2-PI活性低下作用を有することを見出し、このものが抗血栓剤として有効であることを確認し、ようやく本発明を完成するに到った 0

〔 I〕

ここに酸付加埴としては、塩酸塩、硝酸塩、硫^塩、臭化水素酸塩、 U ン酸塩等の無機酸塩、酌酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、.メタンスルホン酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。

本発明化合物は、極めて毒性が低いことが判っている。

後に試験例を示すように、本発明化合物は i n v i t roにおいて顕著な血栓溶解促進作用を有している。本発明化合物は、例えば、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、肺梗塞、末梢動静脈閉塞、術後血栓等の血栓形成に基づく疾患に有効である, 本発明の医薬耝成物は、単独で適用することができるが、例えば t-PA (human t i ssue-type plasmi nogen act ivator) と併用する等により有効に薬効を発現させることができる。本発明の医薬は、血栓症の再発防止には極めて有効である。

本発明医薬組成物を投与する場合、同時に投与すべき薬剤と併用するか又は混合することにより適用することができる。本発明化合物はそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば 0. 1% ~ 99. 5%、好ましくは 0. 5%〜90%含有する医薬組成物として、人を含む動物に投与される。

担体としては、固形、半面形、又は液状の希釈剤、充填剤、及びその他の処方用の助¾一種以上が用いられる。医薬組成物は、投与単位形想で投与することが望ましい。本発明医薬組成物は、柽ロ投与、組耩内投与、局所投与（柽皮投与等）又は柽直腸的に投与することができる。これらの投与方法に適した ¾型で投与されるのはもちろんである。例えば、柽ロ投与及び組織内投与、特に静脈内投与が好ましい。

抗血栓剤としての用量は、年齡、体重、等の患者の钛態、投与柽路、病気の性質と程度等を考慮した上で調整することが望ましいが、通常は、成人に対して本発明の有効成分量として、 1 日あたり、 10mg〜： LO g Z日 Zヒトの範囲が、好ましくは、 100mg〜 3 g Z日 Z ヒトの範囲が一般的である。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ JSi上の用量を必要とすることもある。また 1 日 2 〜 3回に分割して投与することが望ましい。柽ロ投与は面形又は液状の用量単位、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カブセル剤、顆粒剤、魅海剤、液剤、シロッブ剤、ドロッブ剤、舌下錠その他の剤型によって行うことができる。

末剤は活性物質を適当な钿かさにすることにより製造される。散剤は活性物質を速当な細かさと成し、ついで同様に細かくした医薬用担体、例えば濺粉、マンニトールのような可食性炭水化物その他と混合することにより製造される。必要に応じ風味剤、保存剤、分散剤、蓊色剤、香料その他のものを混じてもよい。

力ブセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように穎粒化したものを、例えばゼラチンカブセルのようなカブセル外皮の中へ充填することにより製造される。滑沢剤や流動化剤、例えばコロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレングリコールのようなものを粉末状想のものに混合し、然るのちに充填操作を行うこともできる。崩壞剤ゃ可溶化剤、例えばカルボヰシメチルセルース、力ルボキシメチルセル TD —スカルシウム、低置换度ヒドロキシブ口ビルセル Π —ス、ク Πスカルメロースナトリウ厶、カルボキシメチルスターチナトリウ厶、炭酸力ルシゥ厶、炭酸ナトリウム、を添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。

また、本品の徴粉末を植物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カブセル剤とすることができる。錠剤は陚形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し、ついで崩壊剤又は滑沢剤を加えたのち打錠することにより製造される。粉末混合物は、適当に粉末化された物 Kを上述の希釈剤やペースと混合し、必要に応じ結合剤（例えば、力ルポキシメチルセル口ースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシブ口ピルメチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロりドン、ポリビニルアルコールなど）、溶解遅延化剤 ( 例えば、パラフィンなど）、再吸収剤（例えば、四扱塩）や吸着剤 (例えばペントナイト、カオリン、リン酸ジカルシウムなど）をも併用してもよい。粉末混合物は、まず結合剤、例えばシロップ、澱粉糊、アラビアゴム、セルロース溶液又は高分子物貢溶液で湿らせ、攙拌混合し、これを乾崁、粉砕して顆粒とすることができる。このように粉末を顆粒化するかわりに、まず打锭機にかけたのち、得られる不完全な形態のスラグを披砕して顆粒にすることも可能である。

このようにして作られる顆粒は、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイルその他を添加することにより、互いに付着することを防ぐことができる。このように滑沢化された混合物をついで打錠する。こうして製造した素錠にフィルムコ一ティングゃ糖衣を施すことができる。

また薬物は、上述のように顆粒化ゃスラグ化の工程を柽ることなく、流動性の不活性担体と混合したのちに直接打錠してもよい。シラ ' jクの密閉被膜からなる透明又は半透明の保護被覆、糖ゃ髙分子材料の被覆、及び、ワックスよりなる磨上被覆の如きも用いうる。他の経口投与剤型、例えば溶液、シロップ、エリキシルなどもまたその一定量が薬物の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。シロップは、化合物を適当な番昧水溶液に溶解して製造され、またェリキシルは非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造される。懸濁剤は、化合物を非毒性担体中に分散させることにより処方される。可溶化剤や乳化剤（例えば、ヱトキシ化されたイソステ了リルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風昧賦与剤（例えば、ぺパミント油、サッカリン）その他もまた必要に応じ添加することができる。

必要とあらば、柽ロ投与のための用量単位処方はマイクカブセル化してもよい。该処方はまた被覆をしたり、高分子 · ワックス等中にうめこんだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。

組織内投与は、皮下 ·筋肉又は静脈内注射用としたところの液状用量単位形態、例えば溶液ゃ懇濁剤の形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、化合物の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば水性や油性の媒体に懸痴.し又は溶解し、ついで孩懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加してもよい。更に安定剤、保存剤、乳化 ¾等を併用することもできる。

直腸投与は、化合物を低 »点の水に可溶又は不溶の面体、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、半合成の油脂（例えば、ウイテブゾール、登録商標）、髙极エステル類（例えばパルミチン酸ミ I) スチルヱステル）及びそれらの混合物に溶解又は懸濁させて製造した坐剤等を用いることによって行うことができる。本発明化合物の製剤には、本発明に係る有効成分に加えて他の薬剤、例えば、 UK 、ストレプトキナーゼ、 t- PA、等を併用することができる。

以下に本発明化合物の《2-Ρ Ι活性低下作用及び血栓溶解作用について試験例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。試験例 1 ビーグル犬における血中な 2- PI活性低下作用（静娠内投与）

1 —デォキシマンノジリマイシン（^下「MI C- 1 J という）の血中 α 2-ΡΙ活性低下作用を一群 4匹の雄性ビーグル犬（ 7力月齢、体重 9〜： llkg) を用い、 N—メチルモラノリン（以下「M0R-14」という）と比较しつつ検討した。

実験は、以下のようにして行った。

まず、 MIC- 1の S度が 3、 10、 30flJg/ml となるように、 M0R-14の接度が 100fflg/mlとなるように滅菌生理食塩永に溶解し、溶解後、これらを滅菌フィルター（ポ了サイズ 0. 2 x ra)を用いて tt通滅菌し、ビーグル犬の体重 1 kgあたり 1 nilを前肢静脈より 1 日 1回 3 日 K午前 9時に投与した。コントロール群には滅菌生理食塩水を同様に投与した。

採血は初回投与照始日（Day0)、その翌日（Dayl)及び最終投与曰（ Day2) の薬物投与前と各投与 6時間後、そして最終投与時（Day2)の 24時間後（Day3)と 48時 K後（Day4)に行った。採取した血液は 3. 8S5クェン酸ナトリウム 1容に対し血液 9容となるように混合し、 3000 rpra X 15 mi n遠心分雜して血漿を分雜した。

ατ 2-ΡΙ活性は、第一化学薬品株式会社製の測定キットテストチーム APL · 2キットを用いて測定した。

測定結果を表 1に示す。なお、（）内は被検体投与前のプラスミン阻害活性を 100 としたときの值である。表 l ィヌ雄な 2-PI¾¾ «Ϊ脈! ¾δ与)

" ： θϋ^から Ofiifim (hri

*：コント n—ルに対して P<a05 (Dunnett)

**: コントロールに対して P<a01 (Dunnett) 表 1から明らかなように、 MI C - 1投与により用量依存性の a 2-PI 活性低下作用が Ϊ8められた。

3rog/kgの IH C- 1速統投与では、 a 2-P I活性は初回投与より 30時 ¾ 後に投与前值の 72%に低下し（p < 0. 05) 、 48時間後、 54時間後ではそれぞれ 51%、 58%に低下した（P< 0. 01) 。薬物最終投与 24時 K後 (Day3)においても有意な低下作用がめられたが 48時間後（Day4)にはやや回復した。

10mg/kg 及び 30mg/kg の MI C- 1連銃投与では、 2-P I活性は投与前値に対して 24時簡後でそれぞれ 70%と 60%に低下し（p < 0. 05) 、 30時閒後にはそれぞれ 59%と 52%に低下した（p< 0. 01) 。また、 10 nig/kg 投与群においては 48、 54時間後でそれぞれ 50%と 39%に、 30 mg/kg 投与群においてはそれぞれ 38%と 34%にまで低下した。この値は薬物最終投与 24時間後（Day3)でもなお有意に低下しており、 48 時 K後（Day4)には若干回復した。

100rog/kgの JJ0R-14速銃投与では、 α 2-PI活性は初回投与から 30時間後に投与前谊の 84%に低下し（P< 0. 05) 、 54時 ¾後では 68%に低下した（P< 0. 01) 。投与終了後この值は速やかに回復した。

£1上の結果より MI C- 1は、 M0R-14と比較して QT 2-PI活性を大きく低下させ、 M0R-Uの 30分の 1 下の低用量で《2-ΡΙの活性を十分に低下させた。

試験例 2 ビーグル犬における血中 2-ΡΙ活性低下作用（経口投与 L

MIC- 1の g口投与による血中な 2-ΡΙ活性低下作用を一群 5匹の雄性ビーグル犬（10力月齢、体重 9〜llkg) を用い、 K0R-14と比较し検針し, 。

実驗方法は以下のように行った。

カブセルに JJIC-l (30mg/kg)及び M0R- U (300mg/kg) をそれぞれの用量で充填し、 1日 1回 3日顯午後 3時に口投与した。

採血は初回投与開始日（Day0)、その次の日（Dayl)及び最辂投与曰 (Day2)の薬物投与前と投与 6時照後、そして最終投与時（Day2)の 24 時間後（Day3)、 48時龃後（Day4)及び 120 時簡後（Day7)に行った。採取した血液は 3. クェン酸ナトリウム 1容に対し血液 9容となるように混合し 3，000rpm x l5 rain遠心分離し血漿を得た。

QT 2-PI活性の測定はテストチーム APL キット（第一化学薬品株式会社製）を用いて行った。

測定結果を表 2に示す。 0 内の値は被検体投与前のブラスミン阻害活性を 100 としたときの值である。

"： mm と ffls与前（ « 離

w：： ras^から ΦββΜ <hr: im

t ：コントールに対して P<0.05 (Dunnett)

**: コント o— して P<0.01 (Dunnett)

表 2から明らかなように、 MIC-1投与により用量依存性の α2-ΡΙ 活性低下作用が S8められた。

MIC-1 (30aig/kg) 及び MOR-l"300ojg/kg)投与 24時間後では、それぞれ 70%(p<0.01) と 86%(P<0.01) に低下が ISめられた。そして、 «IC-Κ M0R-14ともに 3日照の速統投与 6時屈後（54hr.) では、投与前のそれぞれ 36%(p<0.01) と 47%(p<0.01) にまで低下した a 最終投与 24時間後（72hr.) 及び 48時間後（96hr.) では、 a2-PUま徐々に回復し、 120 時簡後（168hr.〉ではいずれも投与前の 80%〜90 %まで回復した。

以上の結果より、 MIC-1、 M0R-14ともに柽ロ投与で血漿中 a2-PI 活性を十分に低下させ、また MIC-1は M0R-Uに比較して低用量で有効性を示した。

なお、特開昭 61-200967 号に記載されている化合物（例えば、 N ーメチルー 1一デォキシノジリマイシン）について同様の試験を行つたところ、いずれも 30mg/kg で全く《2-ΡΙ活性低下作用を認めなかった o

試験例 3 インビト n (in vitro)における血栓溶解作用

試験例 1で得た血漿を用いてィンビトロでフイブりン塊を作製し、血栓溶解剤である lii (を作用させたときの溶解度を測定した。上記血漿は、轼联例 1で《2-ΡΙ活性の低下が顕著であったものを試験に供した。即ち、 MIC-1 (3、 10、 30rag/kg)については初回投与より 72時 K後、 MOR-U (lOOnig/kg) については初回投与より 54時間後に得た血漿をそれぞれ用いた。

実験は、 J¾下のようにして行った。

まず、分雔した血羝 500 1 にブイブリノ一ゲン a85kBq/ ml) を 10 il 加え混合し、これを 100/il ずつ試験管に分注した。そしてこれに 25 ill/mlト口ンビン溶液、 0.5ίί埴化カルシゥム溶液をそれぞれ 5 jul づっ加え、 37"Cで 30分簡ィンキュペートし、フイブ 9ン塊を作製した。次に了ルブミン生理食埴永溶液に UI (が 0、 10 及び 30ϋ/ιη1となるように溶解したものを各々の試联管に 1 oilづっ加え、 37tでィンキュぺートし、 3、 6、 9、 12及び 24時間後に上清 25 xl を RU用チューブに採取し、上清中に遊雔する ^12SI-フィブ Uン分解物の放射活性を 7"—カウンターを用いて測定した。

30U/mlの UI (溶液を 1 ml添加したときのフィブリン塊溶解の柽時変化（各群 4例の平均植）を図 1、図 2に示した。

図から明らかなように、 MIC-1 (3、 10、 30mg/kg)及び MQR-U(1 OOrog/kg)を投与したィヌ血漿から作製したフィブリン塊溶解率はコントロールに比较して有意に亢進した。

また、（ 0 U、 10U、 30U) 添加 12時間後の溶解率を表 3、表に示す。

() 内の值は、コントロール群に対する％值である

表 3 イブリン ®a¾?sii (½)

コント Τϊ' -ル MIC-IS^群

鲰瞵位 N 3mgAg lOnsks 30oskg

4 29±2 28±1 ( 97) 28±1 (97) 27±1 ( 93) 4 3±1 45+7034) 5?±6'* (168) 80±6 **(235) 4 42+5 6±10(152) 87±8 **(207) 101±1 **(240)

1 !+++ 1

<r2-PIS¾0) 4 89±6 50±8 4±10 33±4

*：コントロー ΛΗ=¾して P< 05 (Ounnett)

**: コント n—ルに対して 01 (Dunnett)

表 4 ΜΟίΗ^δ ^ヌから得たフイブリン ©i^?³? (¾) コントロール

N QOOng/kg)

4 ' 32±2 019)

4 46±3* (135)

4 60±5 * (146〉

«2-PI¾¾«) 4 89±6 76±5

*：コント ti一こ対して Pく 0.05 (Ounnett) HI C- 1投与群において ϋΚ無添加の場合のフィブリン溶解率は、コントロール群と変わらなかったが、 UKを 10 U、 30 U添加した場合、 MIC- 1は用量依存的にフイブリン溶解率を亢進させた。即ち、 UK10 U添加において、 3rag/kg、 lOrag/kg 及び 30mg/kg の MIC- 1投与群のフイブリン溶解率は、コントロール群に対してそれぞれ 34、 68、 13 5X増加した。また UKを 30U添加した場合、 3 nig/kg 、 lOmg/kg 及び 30nig/kg の MI C - 1投与群のフィブリン溶解率は、コントロール群に対し、それぞれ 52、 107 、 U0X増加した。

100rag/kgの M0R-14投与群においては、 UK無添加でコントロール群に対し若干の溶解亢進作用を認め、 ϋΚを 10U、 30 U添加した場合では、フイブリン溶解率はコントロール群に対し、それぞれ 35、増加した（P< 0. 05) 。

^上の結果より、 MIC- 1及び M0R-14投与により活性が低下した血漿では《2-ΡΙ活性の低下度に応じ、 ϋΚによるフィブリン塊の溶解が亢進することが明らかであり、またこの作用は MIC- 1投与群で特に顕著に S8められた。

試験例 4 ィヌ肺梗塞モデルにおける血栓溶解促進作用

試験例 1、 2、 3から MI C-1 をィヌに 3日間連続投与（静脈内、柽ロ）すると血漿中の《2-ΡΙ活性が低下すること、そしてその血漿を用いて作製した血栓は、ゥ口キナーゼ存在下でコントロールに比ベて速やかに溶解することが判明している。そこで MI C-1 の in v i v o での血栓溶解促進作用を検討する目的でィヌ肺梗塞モデルを用いる実験を実施した。

MI C-KlOffig/iBl/kg) 又は生理食塩氷（loi l/kg) ( コントロール群）を 1 曰 1回、 3日閒前肢静脈より投与した雄性ビーグル犬（8〜20力月齢、体重 8〜； 14kg) をペントバルビタール（0.6rol/kg)で麻酔し、頸静脈と顔面静脈の分岐部より末梢側の顔面静脈に 5Pのシースィントロデューサー（テルモ社製）を留置した。 3.8%クェン酸ナトリゥム 1容に対し血液 9容となるよう揉血し、この血液 2mlに ¹²⁵1— フイブリノ一ゲン（2.6MBeq/ml)10ju 1 、 25<nM CaCl₂溶液及びトロンビン（lOOU/ml) 50〃 1 を順次加え内径 3romのポリエチレンチユーブに吸入し 37t：、 15分間放置して凝面させた。生成した血栓をチューブより押出し、約 3cro の長さに切断し生理食塩水で洗浄した

(20rolx 3 ) 。

血栓の総放射饞活性を r線力ゥンター（A5424型、パッカード社製 ) で測定した後、シースイントロデューサーを通して血栓を体内に注入した。血栓は頸静脈、右心房、右心室を柽由して肺勐脤末梢部位で保持されたことを G1!管式サーベイメーター（TGS-113型、ァロカ社製）を用いて確 ISした。

t-PAは血栓注入直後 0.4ng/0.4ral/kgをにシースィントロデューサ一を通じて投与した。

観察期間中は生理食塩水をシースィントロデューサーを通じて、 0.5ml/rainの速度で持統注入した。血栓注入 0, 15,30分後に、それ以後は 30分毎に 420分まで柽時的に 2 nil採血し r線力ゥンターで放射活性を測定した。血液量を体重の 1/13 として各測定点での全血中の放射活性を箅出し、（全血中の放射活性/総放射活性） X 100 (以下「X of dose j という）を求めた。測定結果は以下の 4指標で標示した。

(1) % of doseの最高值（以下「ピークハイト」という）

(2) それが観察された時間（以下「ピークタイム」という） (3》 420分までの of doseの総計（以下「X of dose の総計楦」という）

(4) (3) の総計の 50^に達する時照（50%到達時閒、以下「T₅₀ 」という）。結果を表 5に示す。

表 5 ィヌ肺梗塞モデルでの血栓溶解作用

ビークビーク % of dose Τδ o 群 N タイムハイトの総計佳 (分）

(分） (分） (420 分まで) ηン -& 4 233±8 19 ±2 206 ±20 223±15 IC-1 4 128±43 22 ±2 252 ±22 175±14·

(10rag/kg) (55) (116) (122) (78) t-PA 4 68±38^b 26 ±3 273 ±20 150±9 ^b

(0.4mg/kg) (29) (137) (133) (67)

MIC-l+t-PA 4 26±4 ^b 36 ±·3 ^bce 312 ±38· 122±5 ^bcd

(lOrogO+0.4rag/kg) (11) (189) (151) (55) 数僚は平均揎土樓準誤差

0内はコト n-Aに対する X

* p<0.05?s.コジトロ- Dunnett) ^d p<0.057S. MIC-1 (Dunnett) b pく 0· Olvs-コ： /トロ- MDunnett) ^β pく 0. Olvs. MIC-1 (Dunnett) C P<0.05vs. t-PA(Dunnett)

コントロールの生理的線溶に基づくピークタイムは約 4時間後に認められた。

MIC-1 を lOrag/kg/day で 3日藺投与した動物の場合は約 130分でコント口ールに対して有意差は認められなかった。 t-PAを 0.4mg/kg 術後単回投与した場合は約 70分でコント σ—ルに対して有意差が認められた（P<0.01) 。

MIC-1 投与動物に t-PAを投与した場合は約 25分でコントロールに対して有意差が铋められた（P<0.01) 。

コントロールのビークハイトの平均値は 19%であった。 MIC-1 を 10mg/kg/da で 3 日蘭投与した勐物の場合のビークハイトは 22%、 t-PAの場合は 26%で、いずれもコントロールに対し有意差は認められなかった。 MIC-1 投与動物に t-Ρλを投与した場合は 36%でコントロールに対して有意差がめられた（P<0.01) 。

また MIC-1 +t-PAは、 MIC - 1 と t-PAに対し有意差が S8められた（それぞれ Pく 0.01, P<0.05) 。

コントロールの X of dose の総計の平均值は 206であり、 MIC-1 を 10mg/kg/day で 3 日蘭投与した場合 252、 t-PAを投与した場合は 273でいずれも增加領向は示したがコントロールに対する有意差は認められなかった。 MIC-1 投与動物に t-PAを投与した場合は 312でコントロールに対して有意差が認められた（pく 0.05)。

Τ₅₀ 値はコントロールの平均が 223分であり、 MIC-1 を 10rag/kg/ day で 3 日簡投与した場合は 175分（コントロールの 78%) 、 t-PA を投与した場合は 150分（コントロールの 67%) であった。

MIC-1 投与勐物に t-PAを投与した場合 122分（コントロールの 55 %) であった。これらの群はいずれもコントロールに対して有意差が認められた（MIC-1を 10mg/kg/dayで 3 日間投与した場合は Pく 0. 05、 t-PA, MIC-1+t-PAは Pく 0.01) 。また MIC- 1+t-PAは、 IC-1 と t-PMi:対して有意差が SSめられた（Pく 0.05) 。

MiC-1 単独では T_s。值についてのみコントロールに対して有意な薬効をめた。 t-PA単独の場合はビークタィムと T_s。植においてコントロールに対し有意な薬効を認めた。 MIC-1 と t-PAを併用した場合ビークタイム、ビークハイト、 X of dose の総計億、及び Τ₅。においてコントロールに対して有意な薬効が認められ、さらに MI C- 1 単独あるいは t-PA単独に対してはビークハイトと T_s。镲において有意な薬効が認められた。

上の結果から MIC-l (10fflg/kg)は血栓溶解促進作用を有していることが明かとなった。そして MI C-1 と t-PAを併用した場合にはそれぞれを単独で用いた場合に比較してその効果が著明となることから、 I C-1 は t-PAの血栓溶解癍法の治療効果を高めることが明らかでめ。

毒性

MI C-1 をマウス 5匹に 1, 000 rag/kg柽口で投与したところ、 72時

M中に死亡したマウスはいなかった。

MI C-1 をラット 5匹に 1, 000 mg/kg柽口で投与したところ、 72時中に死亡したラットはいなかった。本発明の急性毒性は非常に低いことが明白である。製剤例 1

—锭（150mg)あたり、本発明化合物（MI C- 1 ) lOOrag 、乳糖 25tng 、トウモ ϋコシデンプン 10rng、低置換度ヒドロキシプロビルセル口ース 7. 5mg 、ヒドロキシブ口ビルセル口ース 2. 5mg 、ステアリン酸マグネシウム 5nig を含有するよう、常法に従って錠剤を調製した。製剤例 2

注射用蒸留永を用いて、一管（ 5 ml) あたり、本発明化合物（Ml C- l ) lOOfflg 、塩化ナトリゥム 45oigを含有するよう、常法に従って注射剤を躕製した。

図面の簡単な鋭明

1は、試験例 1で得た MIC-1投与 72時間後の血漿から作製したフイブリン塊に、 UK (30U/ral) を 1 ml添加したときのフイブリン溶解曲線を示す。

横軸は、インキュベーションを行った時間（時間）、縦軸は、溶解率（％) をそれぞれ表す。 ◊は MIC-1を 30mg/kg 投与した場合、厶は MIC-1を lOmg/kg 投与した場合、口は MIC-1を 3 mg/kg 投与した場合、〇はコント o—ルをそれぞれ表す。

図 2は、試験例 1で得た MDR-14投与の 54時間後の血漿から作製したフイブリン塊に、 UK (30U/ral) を 1 ml添加したときのフィブ、) ン塊の溶解曲線を示す。

横軸は、インキュベーションを行った時蘭（時間）、維軸は、溶解率（％) をそれぞれ表す。 □は MDR-14を 100tng/kg 投与した場合、〇はコントロールをそれぞれ表す。

Claims

請求の範囲

( 1 ) 1—デォキシマンノジリマイシン又はこれの薬理学的に許容される酸付加塩を主成分とする血栓症の治療のための医薬組成物。