UA127680C2 - Гаплоїдизація у сорго - Google Patents
Гаплоїдизація у сорго Download PDFInfo
- Publication number
- UA127680C2 UA127680C2 UAA201910053A UAA201910053A UA127680C2 UA 127680 C2 UA127680 C2 UA 127680C2 UA A201910053 A UAA201910053 A UA A201910053A UA A201910053 A UAA201910053 A UA A201910053A UA 127680 C2 UA127680 C2 UA 127680C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- plant
- amino acid
- age
- avr
- rgo
- Prior art date
Links
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 title claims abstract description 72
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 title claims description 38
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 243
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 claims abstract description 87
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 claims abstract description 87
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 73
- 101710091688 Patatin Proteins 0.000 claims abstract description 68
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 46
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 134
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 93
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 87
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 85
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 84
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 84
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 74
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 71
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 66
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 59
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 32
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 21
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 19
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 19
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 18
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 17
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 16
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 13
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 12
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 12
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- 241000021394 Veia Species 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 5
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 claims description 5
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 244000005894 Albizia lebbeck Species 0.000 claims 2
- 235000003913 Coccoloba uvifera Nutrition 0.000 claims 2
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims 2
- 240000008976 Pterocarpus marsupium Species 0.000 claims 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims 2
- MGBDANYXBKROBW-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1,3-dimethyl-5-nitrosopyrimidine-2,4-dione Chemical compound CN1C(N)=C(N=O)C(=O)N(C)C1=O MGBDANYXBKROBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100049050 Arabidopsis thaliana PVA41 gene Proteins 0.000 claims 1
- 240000005220 Bischofia javanica Species 0.000 claims 1
- 235000010893 Bischofia javanica Nutrition 0.000 claims 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 claims 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims 1
- 101000831622 Locusta migratoria Locustatachykinin-4 Proteins 0.000 claims 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims 1
- GFBKORZTTCHDGY-UWVJOHFNSA-N Thiothixene Chemical compound C12=CC(S(=O)(=O)N(C)C)=CC=C2SC2=CC=CC=C2\C1=C\CCN1CCN(C)CC1 GFBKORZTTCHDGY-UWVJOHFNSA-N 0.000 claims 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 claims 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 claims 1
- 235000021167 banquet Nutrition 0.000 claims 1
- ZEKANFGSDXODPD-UHFFFAOYSA-N glyphosate-isopropylammonium Chemical compound CC(C)N.OC(=O)CNCP(O)(O)=O ZEKANFGSDXODPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000008676 import Effects 0.000 claims 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 abstract description 60
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 36
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 25
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 21
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 21
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000036086 Chromosome Duplication Diseases 0.000 abstract 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 58
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 48
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 38
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 20
- 241000894007 species Species 0.000 description 20
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 19
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 18
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 14
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 14
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 8
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 5
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 240000005499 Sasa Species 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 241000182988 Assa Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 2
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 2
- 229910019567 Re Re Inorganic materials 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000209072 Sorghum Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241001132374 Asta Species 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100492787 Caenorhabditis elegans mai-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241001547860 Gaya Species 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000895811 Myza Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- WXOMTJVVIMOXJL-BOBFKVMVSA-A O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)OS(=O)(=O)OC[C@H]1O[C@@H](O[C@]2(COS(=O)(=O)O[Al](O)O)O[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H]2OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H]1OS(=O)(=O)O[Al](O)O Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)O.O[Al](O)OS(=O)(=O)OC[C@H]1O[C@@H](O[C@]2(COS(=O)(=O)O[Al](O)O)O[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H]2OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H](OS(=O)(=O)O[Al](O)O)[C@@H]1OS(=O)(=O)O[Al](O)O WXOMTJVVIMOXJL-BOBFKVMVSA-A 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241001387976 Pera Species 0.000 description 1
- 241001315609 Pittosporum crassifolium Species 0.000 description 1
- 241000320996 Poeta Species 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 241000718541 Tetragastris balsamifera Species 0.000 description 1
- 235000018936 Vitellaria paradoxa Nutrition 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 244000193174 agave Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000024346 drought recovery Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 238000003898 horticulture Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
- C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
- C12N15/8231—Male-specific, e.g. anther, tapetum, pollen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
- A01H1/08—Methods for producing changes in chromosome number
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01002—Arylesterase (3.1.1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/04—Phosphoric diester hydrolases (3.1.4)
- C12Y301/04004—Phospholipase D (3.1.4.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Винахід стосується рослини сорго, здатної індукувати гаплоїдію за допомогою модифікацій у геномі, що належать до пилкоспецифічної експресованої пататин-фосфоліпази, яка продукує гаплоїдне потомство, і які можуть бути продуковані для гібридного схрещування за короткий час за допомогою подвоєння хромосом в інбредних ліній, тобто гомозиготних батьківської й материнської ліній. Крім того, запропоновані способи продукування індукторів гаплоїдів трансгенних і нетрансгенних рослин або підвищення ефективності індукції рослин.
Description
(54) ГАПЛОЇДИЗАЦІЯ У СОРГО (57) Реферат:
Винахід стосується рослини сорго, здатної індукувати гаплоїдію за допомогою модифікацій у геномі, що належать до пилкоспецифічної експресованої пататин-фосфоліпази, яка продукує гаплоїдне потомство, і які можуть бути продуковані для гібридного схрещування за короткий час за допомогою подвоєння хромосом в інбредних ліній, тобто гомозиготних батьківської й материнської ліній. Крім того, запропоновані способи продукування індукторів гаплоїдів трансгенних і нетрансгенних рослин або підвищення ефективності індукції рослин.
Винахід належить до галузі спрощення трудомістких програм зі схрещування за допомогою молекулярно-біологічних способів, маркерної технології та генної інженерії. Зокрема, запропоновані рослини сорго, здатні індукувати гаплоїдію за допомогою модифікацій у геномі щодо, переважно, пилкоспецифічної експресованої пататин-фосфоліпази, за допомогою якої продукується гаплоїдне потомство, і здатні продукувати інбредні лінії для гібридного схрещування за короткий час шляхом подвоєння хромосом. Зокрема, запропоновані рослини сорго, які мають мутації в пататин-фосфоліпазі, способи продукування й ідентифікації цих мутацій або мутованої рослини та відповідна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує мутовану пататин-фосфоліпазу, і вектори, і клітини-господарі, зокрема, клітини рослини, що містять молекулу нуклеїнової кислоти, і рослини, згенеровані з таких рослинних клітин, здатні продукувати гаплоїдію та своє потомство, кросбредні продукти, інбредні лінії та їхні відповідні частини рослини й продукти.
На основі знань про сорго у цьому винаході запропоновано способи продукування та ідентифікації індукторів гаплоїдів трансгенних і нетрансгенних рослин і відповідні рослини, які набули властивості індукції гаплоїдії або у яких була підвищена ефективність індукції. Крім того, цей винахід також містить насіння або потомство, органи, частини рослини, тканини або клітини рослини за цим винаходом і їх використання.
ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Сорго є відносно новою сільськогосподарською культурою в Німеччині, але завдяки його здатності нарощувати масу, посухостійкості й високій ефективності використання води та поживних речовин воно перебуває в центрі уваги науки й практики, спрямованих на пошук нових високоврожайних сільськогосподарських культур для виробництва субстрату, зокрема, який стосується виробництва біогазу, а також для використання як корму, продуктів харчування та для виробництва етанолу.
Основними цілями схрещування сорго є адаптація до клімату Центральної Європи, тобто підвищення холодостійкості, підвищення врожайності, стабільності в поєднанні з хорошим розвитком молодих рослин і розвитком стійкості до хвороб і шкідників.
Сорго можна поліпшити за допомогою схрещування, як це можливо в самозапилюваної сільськогосподарської культури. Поліпшення популяції може бути досягнуто за допомогою
Зо розробленої селекційної схеми схрещування шляхом цілеспрямованого відбору найкращих рослин для виробництва насіння на наступний урожайний рік. Крім того, гібридне схрещування створило нові варіанти поліпшення сортів. Однак процес гібридного схрещування грунтується на декількох поколіннях безперервної генерації гомозиготних батьківських або материнських ліній, що, зі свого боку, робить процес гібридного схрещування витратним за часом і дорогим, попри хороші результати.
Отже, метою цього винаходу була пропозиція ефективної системи схрещування сорго.
КОРОТКИЙ ВИКЛАД СУТНОСТІ ВИНАХОДУ
Винахід належить до галузі спрощення трудомістких програм зі схрещування, маркерної технології та генної інженерії. У цьому винаході запропоновані рослини сорго, здатні індукувати гаплоїдію за допомогою модифікацій у геномі щодо пилкоспецифічної експресованої пататин- фосфоліпази, за допомогою якої продукується гаплоїдне потомство, і які можуть бути отримані для гібридного схрещування за короткий час шляхом подвоєння хромосом в інбредних лініях, тобто в гомозиготних батьківських або материнських лініях. Крім того, отримані результати можуть бути використані для продукування індукторів гаплоїдів трансгенних і нетрансгенних рослин або для підвищення ефективності індукції рослин.
Отже, цей винахід належить до варіантів виконання, перелічених у нижченаведених пунктах
П11-(291, і які проілюстровані на прикладах.
ПЇЇ Рослина сорго, здатна індукувати гаплоїдію, що характеризується тим, що рослина має щонайменше одну модифікацію, що належить до ендогенної пататин-фосфоліпази, яка є, у переважному варіанті виконання цього винаходу, експресованою пилкоспецифічною. (2) Рослина за пунктом |1|, що характеризується тим, що пататин-фосфоліпаза кодується нуклеотидною послідовністю відповідно до ЗЕО ІО Мо. 1 або 2, або нуклеотидною послідовністю, яка щонайменше на 80 95 ідентична послідовності ЗЕО ІО Мо. 1 або 2, або кодується нуклеотидною послідовністю, яка гібридизується з послідовністю, комплементарною нуклеотидній послідовності відповідно до ЗЕС ІЮО Мо.: 1 або 2 в жорстких умовах, або яка містить амінокислотну послідовність, показану в 5ЕО ІЮ Мо.: 3, або гомологічну амінокислотну послідовність.
ІЇЗЇ Рослина за пунктом (1) або (2), водночас модифікація пататин-фосфоліпази є причиною того, що вона придатна як індуктор гаплоїдів.
ЇЇ Рослина за одним з пунктів (|11-(3), що характеризується тим, що щонайменше одна модифікація а) є щонайменше однією мутацію в ендогенному гені, що кодує пататин-фосфоліпазу, визначену в пункті (2), у переважному варіанті виконання цього винаходу, заміщення, що призводить щонайменше до одного обміну амінокислот або до генерації стоп-кодона; р) являє собою щонайменше одну вставку касети експресії, яка містить промотор, функціонально зчеплений з () молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує а5РНК, водночас а5РНК містить щонайменше 19 нуклеотидів, яка комплементарна частковій послідовності нуклеотидної послідовності, визначеній у пункті (21; або (ї) молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує пататин-фосфоліпазу, визначену в пункті |21, або з функціональною частиною пататин-фосфоліпази, водночас закодована пататин- фосфоліпаза або її функціональна частина має щонайменше одну мутацію, що призводить щонайменше до одного обміну амінокислот або до генерації стоп-кодона; або с) викликає нокаут пататин-фосфоліпази.
ІЗ Рослина за пунктом |4Ї, що характеризується тим, що щонайменше одна мутація призводить до обміну амінокислот а) у діапазоні положень амінокислоти від 37 до 240 відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 3, у переважному варіанті виконання цього винаходу, водночас цей діапазон відповідає функціональному домену пататин-фосфоліпази; та/або р) у діапазоні положень амінокислоти від 241 до 385 відповідно до 5ЕО ІО Мо.: 3, або с) до генерації стоп-кодона в діапазоні положень амінокислоти від 241 до 385 відповідно до
ЗЕО ПО Мо.: 3.
І6Ї Рослина за пунктом |4) або (|5), що характеризується тим, що щонайменше одна мутація для обміну амінокислот відбувається в діапазоні положень амінокислоти 40-93, 135-204 та/або 270-320 відповідно до 5ЕО ІО Мо. 3, у переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 53-85, 150-192 та/або 285-311 відповідно до 5ЕО ІО Мо.: 3, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 55- 75, 157-167 та/або 285-298 відповідно до 5ЕБО ІЮО Мо. 3, або генерування стоп-кодона
Зо відбувається в діапазоні положень амінокислоти 322-402 відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 3, у переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 342-392 відповідно до ЗЕО ІО Мо: 3, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 362-382 відповідно до ЗЕО ІЮО Мо.: 3.
Ї/ Рослина за одним з пунктів І41-(6Ї, що характеризується тим, що щонайменше одна мутація призводить до обміну амінокислот у положенні амінокислоти 59, 162 та/або 291 відповідно до ЗЕО ІЮО Мо.: З та/або до стоп-кодона в положенні амінокислоти 372 відповідно до
ЗЕО ПО Мо.: 3.
ВІЇ Рослина за одним з пунктів (|11-(7Ї), що характеризується тим, що модифікована пататин- фосфоліпаза () містить амінокислотну послідовність відповідно до ЗЕО ІЮО Мо. З або гомологічну амінокислотну послідовність, у якій присутній щонайменше один обмін амінокислот, водночас аргінін (К) у положенні 59, валін (М) у положенні 162 та/або серин (5) у положенні 291 відповідно до ЗЕО ІО Мо.: З замінюється іншою амінокислотою, у переважному варіанті виконання цього винаходу, глутаміном (С) у положенні 59, ізолейцином (І) у положенні 162 та/або лейцином (І) у положенні 291; (її кодується нуклеотидною послідовністю, яка містить послідовність, що кодує послідовності ДНК відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 1 (одержуваної з відповідної СДНК відповідно до
ЗЕО ІЮО Мо.: 2) або послідовність ДНК, яка щонайменше на 80 95 ідентична 5ЕО ІО Мо.: 1, у якій присутній щонайменше один обмін нуклеотидів, що призводить до обміну амінокислот, водночас щонайменше один нуклеотид обмінюється в положеннях нуклеотиду 421-423, 815- 817, 1420-1422 та/або 1663-1665 відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 1 (що відповідає положенням нуклеотиду 175-177, 484-486, 871-873 та/або 1114-1116 відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 2); (ії) містить амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІО Мо.: 6, 9 або 12; або (м) кодується нуклеотидною послідовністю, яка містить послідовність, що кодує послідовності ДНК відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 4 (одержуваної з відповідної СДНК відповідно до
ЗЕО ІЮО Мо.: 5), БЕО ІО Мо.: 7 (одержуваної з відповідної СДНК відповідно до ЗЕО ІО Мо.: 8), ЗЕО
ІОЮО Мо.: 10 (одержуваної з відповідної СДНК відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 11), 5ЕО ІЮО Мо.: 13 (одержуваної з відповідної СДНК відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 14).
ІЗЇ Рослина за одним з пунктів (11-(8), що характеризується тим, що рослина є гомозиготною бо або гетерозиготною щонайменше для однієї мутації, у переважному варіанті виконання цього винаходу, що характеризується тим, що рослина є гомозиготною щонайменше для однієї мутації.
ПОЇ Молекула нуклеїнової кислоти, що кодує одну з ідентифікованих пататин-фосфоліпаз, яка мутувала в пунктах |41-І8І.
М1| Молекула нуклеїнової кислоти за пунктом |10Ї, що характеризується тим, що її присутність у рослині, у переважному варіанті виконання цього винаходу, за відсутності пататин-фосфоліпази дикого типу, призводить до того, що рослина здатна індукувати гаплоїдію. 121 Молекула нуклеїнової кислоти, яка містить у довжину щонайменше 15, 16, 17, 18, 19 або 20, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 21, 22, 23, 24 або 25, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 30, 35, 40, 45 або 50 і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 100, 200, 300, 500 або 1000 нуклеотидів, яка специфічно гібридизується з нуклеотидною послідовністю, визначеною в одному з пунктів І51-(8І, і містить одну з мутацій або пару молекул нуклеїнової кислоти, яка придатна для діапазону, що містить щонайменше одну з мутацій, для ампліфікації в полімеразній ланцюговій реакції (РСК), у переважному варіанті виконання цього винаходу, у формі олігонуклеотиду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, що має в довжину щонайбільше 50 нуклеотидів, який, у переважному варіанті виконання цього винаходу, має одну з нуклеотидних послідовностей відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 28-30, 32-34, 36-38 або 40-42. 13) Вектор, у переважному варіанті виконання цього винаходу, вектор рослини, що містить молекулу нуклеїнової кислоти за одним з пунктів |101-І/12| або касету експресії, визначену в пункті 4). 114) Клітина-господар, у переважному варіанті виконання цього винаходу, рослинна клітина, яка містить молекулу нуклеїнової кислоти за одним з пунктів І101-(І12), касету експресії, визначену в пункті І4|Ї, вектор за пунктом |І13)| або молекулу нуклеїнової кислоти за одним з пунктів (101-І12| як трансген, у разі потреби регульований гетерологічним промотором, у переважному варіанті виконання цього винаходу, пилюкоспецифічним промотором. 15 Спосіб отримання рослини, яка здатна індукувати гаплоїдію або має підвищену швидкість індукції щодо дикого типу, що містить такі етапи: (а) () мутагенез рослинних клітин і потім регенерацію рослин з рослинних клітин, підданих
Зо мутагенезу, або мутагенез рослин; (ї) ідентифікацію рослини з етапу (), що має щонайменше одну мутацію в ендогенній послідовності ДНК, яка відповідає тал"або яка призводить щонайменше до однієї з мутацій, ідентифікованих у пунктах І41-І(8), де аспарагінова кислота (0) у положенні 75, гліцин (5) у положенні 79 та/або пролін (Р) у положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до ХЕО
ІО Мо.: 3, замінюється іншою амінокислотою, у переважному варіанті виконання цього винаходу, аспарагіном (М) у положенні 75, аргініном (К) у положенні 79 та/або лейцином (І) у положенні 203, або відповідними їм амінокислотами, і здатної індукувати отримання гаплоїдного потомства з підвищеною швидкістю, порівняно з рослиною, що не була піддана мутагенезу; або (Б) () введення молекули нуклеїнової кислоти, що має щонайменше одну мутацію, яка відповідає щонайменше одній з мутацій, ідентифікованих у пунктах (|41-(8), та/"або призводить до такої ситуації, коли аспарагінова кислота (0) у положенні 75, гліцин (б) у положенні 79 та/або пролін (Р) у положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: З замінюється іншою амінокислотою, у переважному варіанті виконання цього винаходу, аспарагіном (М) у положенні 75, аргініном (К) у положенні 79 та/або лейцином (І) у положенні 203, або відповідними їм амінокислотами, у рослинних клітинах, або введення касети експресії, визначеної в пункті 4), у рослинні клітини; і (і) регенерацію рослини, наприклад трансгенної рослини, з рослинних клітин з етапу (І). 16Ї Спосіб за пунктом (15), водночас ендогенна послідовність ДНК або молекула нуклеїнової кислоти є кодувальною нуклеотидною послідовністю, яка містить амінокислотні
БО послідовності, показані в 5ЕО ІЮ Мо. З для сорго (Зогдпит бБісоїог), ЗЕБО ІО Мо.: 18 для соняшнику (Неїїапіпи5 аппиц5), ЗЕО ІЮ Мо.: 21 для ячменю (Ногдешт мцідаге) або в ЗЕО ІО Мо.: 24 або 27 для Веїа миЇдагі5 (наприклад, для цукрових буряків).
І17| Спосіб за пунктом |(16Ї, водночас введення молекули нуклеїнової кислоти може здійснюватися, наприклад, за допомогою трансформації Адгорасіегішт, гомологічної рекомбінації, наприклад за допомогою систем СКІЗБРК/Са5 або СКІ5РЕ/СрИи і матриці для репарації, і він містить мутагенез хімічних речовин і фізичний мутагенез, ТІССІМО, цілеспрямований мутагенез, наприклад, з використанням цинк-пальцевих нуклеаз, ТАЇ Е- нуклеаз (ТАГЕ - ефектор, подібний до активаторів транскрипції), мегануклеаз і систем
СРІЗРЕ/Саз або СКІЗРЕ/СРрИ.
18) Рослина, що містить рослинну клітину за пунктом (|14| та/або отримується в спосіб за одним з пунктів | 151-(17|, у переважному варіанті виконання цього винаходу, водночас рослина є сорго, соняшником, житом, пшеницею, картоплею, ячменем або цукровим буряком. 1191) Орган, частина рослини, тканина або клітина рослини за одним з пунктів (|11-(9| або (181, або насіння, або потомство рослини за одним з пунктів (|11-(9| або (18), водночас насіння або потомство мають мутацію, яка визначена в пунктах І41-(8), та/або молекулу нуклеїнової кислоти за одним з пунктів (101-121, касету експресії за пунктом І4) або вектор за пунктом (131. (20) Спосіб отримання гаплоїдної рослини, що містить такі етапи: (а) схрещування рослини за одним з пунктів (11-(9Ї або (18)| з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, (Б) відбір обпиленого гаплоїдного насіння або зародка, і (с) продукування гаплоїдної рослини з насіння або зародка з етапу (Б). (211| Гаплоїдна рослина, гаплоїдне запилене насіння або зародок можна отримати в спосіб за пунктом |201. (22) Орган, частина рослини, тканина, клітина, насіння або потомство рослини за пунктом (21. (23) Спосіб отримання диплоїдної рослини, що містить такі етапи: (а) продукування гаплоїдної рослини в спосіб за пунктом (201; (Б) подвоєння гаплоїдного набору хромосом щонайменше в одній клітині гаплоїдної рослини, і (с) регенерацію диплоїдної рослини з клітини з етапу (б). (24)| Диплоїдну рослину можна отримати в спосіб за пунктом (231. (25) Спосіб продукування гібридних рослин, що містить такі етапи: (а) схрещування рослини за пунктом (|24)| з другою рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, (Б) відбір гібридних рослин з урахуванням бажаної ознаки. (26) Гібридна рослина, яку можна отримати в спосіб за пунктом (251. (27| Спосіб ідентифікації рослини за одним з пунктів (11-(9| або (18) за допомогою детекції мутації в гені пататин-фосфоліпази, наприклад, мутації, визначеної в пунктах І41-І(9), або
Зо маркерної алелі, яка з'єднана з мутацією, у переважному варіанті виконання цього винаходу, з використанням нуклеїнової кислоти за пунктом |12| як молекулярного маркера. (28) Використання нуклеїнової кислоти за пунктом І|10) або (11), касети експресії, визначеної в пункті (4), або вектора за пунктом |13) у рослині для надання властивості індуктора гаплоїдів або для підвищення швидкості індукції для продукування рослини або трансгенної рослини, здатної індукувати гаплоїдію.
І29| Використання рослини за одним з пунктів (|11-(9| або (18) для продукування гаплоїдного запиленого насіння або зародка, або гаплоїдної рослини.
ІЗОЇ Використання нуклеїнової кислоти за пунктом (12| як молекулярного маркера для детекції мутації в гені пататин-фосфоліпази.
По-перше, деякі терміни, які використовуються в цій заявці, більш докладно пояснюються таким чином:
Вираз "надати властивість індуктора гаплоїдів" або "надання властивості індуктора гаплоїдів", або "здатний індукувати гаплоїдію" означає експресію, порівнянну з експресією у рослини, яка здійснюється з використанням нуклеїнової кислоти за цим винаходом або за допомогою модифікації генома, зокрема за допомогою мутації пататин-фосфоліпази, яка змінюється для того, щоб вона була здатна продукувати запилене насіння або зародки, що мають простий (гаплоїдний) набір хромосом, унаслідок схрещування з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, яка не має властивості індуктора гаплоїдів. Властивість індуктора гаплоїдів, представлена як абсолютна швидкість індукції
БО гаплоїдів, означає, що щонайменше 0,1 о, 0,2 Зо, 0,3 бо, 0,490, 0,5 90, 0,6 90, 0,7 Фо, 0,8 Фо, 0,9 Фо або 1 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 1,5 95, 2 9, 2,5 У, З У, 3,596, 4905, 4,595 або 595, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 6 95, 795, 895, 9905, 10905, 1195, 1295 1395, 14 95 або 15 95, або в ще більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 20 Фо, 25 в, 30 90, 35 90, 40 Фо, 45 95 або 50 95 запиленого насіння або зародків мають гаплоїдний набір хромосом.
Термін "функціональний фрагмент" нуклеотидної послідовності означає ділянку нуклеотидної послідовності, яка має функціональні можливості, ідентичні або порівнянні із загальною нуклеотидною послідовністю, з якої отримано функціональний фрагмент. Як такий, функціональний фрагмент може мати нуклеотидну послідовність, ідентичну або гомологічну 60 загальній нуклеотидній послідовності щонайменше на 50 9бо, 55 о, 60 95, 65 о, 70 Уо, 75 90, 80 Фо,
8595, 9095, 9295, 9495, 9695, 9795, 9895 або 9995 за довжиною. Крім того, термін "функціональний фрагмент" нуклеотидної послідовності також може означати ділянку нуклеотидної послідовності, що змінює функціональні можливості всієї нуклеотидної послідовності, наприклад, під час посттранскрипційного або транскрипційного сайленсингу генів. Як такий, функціональний фрагмент нуклеотидної послідовності може містити щонайменше 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120 або 140, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 160, 180, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 або 1000 послідовних нуклеотидів загальної нуклеотидної послідовності.
Термін "функціональна частина" білка означає ділянку білка або ділянку амінокислотної послідовності, що кодує білок, водночас ця ділянка може реалізовувати функціональні можливості, ідентичні або зіставні з функціональними можливостями загального білка в рослинній клітині. Функціональна частина білка має довжину, яка щонайменше на 50 95, 55 о, 60 то, 65 то, 70 о, 75 9о, 80 то, 85 то, 90 то, 92 то, 94 то, 96 то, 97 то, 98 95 або 99 95 ідентична або схожа з амінокислотною послідовністю, з урахуванням консервативного й напівконсервативного обмінів амінокислот, як у білка, з якого отримана ця функціональна частина.
Термін "індуктор гаплоїдів" також означає індуктор гаплоїдів в умовах іп мімо.
Термін "гетерологічний" означає, що введений полінуклеотид, наприклад, походить з однієї клітини або організму, що має інший генетичний фон одного й того ж виду або іншого виду, або він гомологічний прокаріотичній або еукаріотичній клітині- господарю, але потім розташовується в іншому генетичному середовищі, і, таким чином, він відрізняється від будь-якого відповідного полінуклеотиду природного походження. Гетерологічний полінуклеотид може бути присутнім на додачу до відповідного ендогенного гена.
Під терміном "гібридизування" або "гібридизація" розуміють процес, у якому молекула одноланцюжкової нуклеїнової кислоти приєднується до практично комплементарного ланцюга нуклеїнової кислоти, тобто вступає з нею в спаровування основ. Стандартні способи гібридизації описані, наприклад, у роботі Сембрук та ін., Молекулярне клонування: Інструкція щодо здійснення лабораторних робіт, 3-є видання, Соїд бргіпд Нагбог І арогаїогу Рге55, Колд
Зо Спрінг Харбор, Нью-Йорк, 2001. У переважному варіанті виконання цього винаходу передбачається, що щонайменше 80 95 або 85 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 90 95, 91 95, 9295, 9395, 9495 або 9595, в особливо переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 основ молекули нуклеїнової кислоти вступають у парування основ з практично комплементарним ланцюгом нуклеїнової кислоти. Можливість такого приєднання залежить від жорсткості умов гібридизації.
Термін "жорсткість" стосується умов гібридизації. Висока жорсткість задається, коли спарювання основ ускладнено, а низька жорсткість задається, коли спарювання основ полегшено. Жорсткість гібридизації залежить, наприклад, від концентрації солі або іонної сили й температури. Зазвичай жорсткість може бути підвищена шляхом підвищення температури та/або зниження вмісту солі. Під терміном "жорсткі умови гібридизації" розуміють такі умови, за яких гібридизація відбувається переважно тільки між гомологічними молекулами нуклеїнової кислоти й гомологами. Термін "умови гібридизації" стосується не тільки умов, які переважають у час фактичного приєднання нуклеїнових кислот, але також умов, які переважають у час наступних етапів відмивання. Жорсткі умови гібридизації являють собою, наприклад, умови, за яких гібридизуються переважно тільки ті молекули нуклеїнової кислоти, які мають щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90595 або щонайменше 9595 ідентичності послідовностей. Жорсткими умовами гібридизації є, наприклад: гібридизація в 4-кратному розчині хлориду й цитрату натрію (5552) за 65 "С з подальшим багаторазовим відмиванням у 0,1-кратному 55С за 65 "С протягом, загалом, приблизно 1 години. Використовуваний у цьому документі термін "жорсткі умови гібридизації" також може означати: гібридизацію за 68 "С у 0,25
М фосфоаті натрію, рН 7,2, 7 96 додецилсульфату натрію (505), 1 мМ етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕЮТА) та в 1 95 бичачому сироватковому альбуміні (ВБА) протягом 16 годин з подальшим дворазовим відмиванням у 2-кратному З55С і 0,1 95 505 за 68 "С. У переважному варіанті виконання цього винаходу, гібридизація відбувається в жорстких умовах.
Вираз "підвищення ефективності індукції індуктора гаплоїдів" або подібні вирази означають, що швидкість індукції гаплоїдів у рослини, що має властивість індуктора гаплоїдів, підвищена.
Таким чином, кількість запиленого насіння, яке має гаплоїдний набір хромосом, і схрещування індуктора гаплоїдів з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, яка не має властивості індуктора гаплоїдів, збільшилася щонайменше на 0,1 95, 60 0,2 о, 0,3 о, 0,4 о, 0,5 9, 0,6 оо, 0,7 о, 0,8 Фо, 0,9 95 або 1 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше на 1,5 95, 2 9, 2,5 95, З Уо, 3,5 Уо, 4 ФУ, 4,5 Уо або 5 95, і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше на 6 95, 7 95, 8 95, 9 о, 10 95, 15 95, 20 96, 30 95 або 50 95 вище, ніж кількість запиленого насіння, досягнута без використання нуклеїнової кислоти або без модифікації генома, зокрема без мутації пататин-фосфоліпази в контексті цього винаходу, тобто швидкість індукції гаплоїдів може бути підвищена щонайменше наб,195,0,295,0,3 90, 0,4 90, 0,5 90, 0,6 о, 0,7 У, 0,8 Ус, 0,9 95 або 1 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше на 1,5 95, 2 в, 2,5 Уо, З Уо, 3,5 У, 4 У, 4,5 У або 595, і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше на 6 95, 7 Фо, 8 95, 9 9,
Фо, 15 У, 20 Фо, 30 95 або 50 95 щодо раніше досягнутої швидкості індукції гаплоїдів. 10 Термін "комплементарна" нуклеотидна послідовність щодо нуклеїнової кислоти у формі дволанцюжкової ДНК означає, що другий ланцюг ДНК, комплементарний першому ланцюгу
ДНК, має нуклеотиди відповідно до правил спаровування основ, які відповідають основам першого ланцюга, відповідним правилам Уотсона-Кріка.
Термін "молекулярний маркер" - це нуклеїнова кислота, яка є поліморфною в популяції рослин і використовується як вихідна або орієнтувальна точка. Маркер для детекції події рекомбінації повинен бути здатний відстежувати відмінності або поліморфізми у межах популяції рослин. Таким чином, такий маркер здатний детектувати й розрізняти різноманітні алельні стани (алелі). Термін "молекулярний маркер" також стосується нуклеотидних послідовностей, які комплементарні або принаймні практично комплементарні або гомологічні геномним послідовностям, наприклад, нуклеїновим кислотам, які використовуються як зонди або праймери. Для маркерів ці відмінності можуть бути виявлені на рівні ДНК, і вони являють собою, наприклад, відмінності в полінуклеотидних послідовностях, як-от 55 (прості повторювані послідовності), КЕР (поліморфізм довжин рестрикційних фрагментів), БІР (поліморфізм довжин фрагментів) або 5МР (однонуклеотидний поліморфізм). Маркери можуть бути отримані з нуклеїнових кислот, геномних або таких, що експресуються, як-от сплайсовані
РНК, сДНК або ЕБ5ЗТ, а також вони можуть належати до нуклеїнових кислот, які використовуються й вважаються придатними як зонд або пара праймерів для ампліфікації фрагмента послідовності з використанням способів на основі РСК. Маркери, які описують генетичний поліморфізм (між частинами популяції), можуть бути детектовані з використанням добре відомих способів відповідно до відомого рівня техніки (Вступ у генетичний аналіз. 7-е видання, Гріффітс, Міллер, Сузукі та ін., 2000). Вони включають, наприклад, секвенування ДНК, сиквенс-специфічну ампліфікацію на основі РСК, детекцію КР Р, детекцію полінуклеотидного поліморфізму за допомогою алель-специфічної гібридизації (А5Н), детекцію ампліфікованих варіабельних послідовностей генома рослини, детекцію З5К (самопідтримувана реплікація послідовностей), детекцію ЗОК, ЗМР, КР Р або АРІ Р. (поліморфізм довжин ампліфікованих фрагментів). Крім того, також відомі способи детекції ЕТ (маркерні послідовності, що експресуються) і маркерів З9К, отриманих з послідовностей Е5БТ і КАРО (випадково ампліфікована поліморфна ДНК). Залежно від контексту, термін "маркер" в описі цього винаходу може також означати специфічне положення хромосоми в геномі того виду, у якого може бути виявлений специфічний маркер (наприклад, ЗМР).
Термін "функціонально зчеплений" означає з'єднаний у загальну молекулу нуклеїнової кислоти таким чином, що об'єднані елементи розташовані й орієнтовані один до одного таким чином, що може статися транскрипція молекули нуклеїнової кислоти. ДНК, функціонально зчеплена з промотором, регулюється цим промотором на рівні транскрипції.
Термін "рослина" в контексті цього винаходу може, якщо не вказано інше, належати до будь- якого виду дводольних та однодольних рослин. Перевага надається рослинам, вирощуваним у сільському господарстві або садівництві, або для виробництва біоенергії (біоетанол, біогаз тощо). До них належать, наприклад, бБоїапит Шреговит, Тийіїсцт аєеєвіїмит, Тийсит аигит,
Тийісут 5рейца, Неїїапіпив5 аппицв, Зесаїе сегеаіІє, Ногдеит уцідаге, Ногаєит риїрозит, Вгавзвзіса парив, Вгаззіса оіегасеа, Вгаззіса гара, Вгаззіса |ипсасеа, Вгаззіса підга, Сіусіпе тах, Соззуріит 5р., Зогуапит бБісоїог, Богупит зцдапепве, богупит бБісоїог х Богудпит 5идапепзе, Іісаїе, зЗасспагит ойісіпагійт, 5беїагіа Наїїса, Огула заїїма, Огула тіпша, Огуга айзігаііепвів, Огуга ана,
Вгаспуродішт аївіаспуоп, Ногдецт тагіпит, Аедіор5 їайвспії, Юайсив діоспідіате, ЮОайсив5 ризіїйнв, Оайсив тигпісаїшв5, ЮОайсив сагоїа, Еисаіуріиз дгапаїі5, Егуїнгапіне дицаїа, Сепіїзва ацгєа,
Миза зр., Амепа 5р., Місоййапа зуїмевігі5, Місойїйапа їабасит, Місоїйапа тепіовігюгтів, 5оїапит
Іусорегзісит, СоМПеа саперпога, Міїї5 міпітега, Сиситів взаїйми5, Могив поїабіїв5, СтисіпітаІауа пПітаїйаіса, Стисіпітаіауа маїЇїснії, Сагдатіпе Пехиоза, І еріаійт мігаіпісит, СарзеїЇа ригза-равіогів,
ОІтагарідорвіз ритійа, Агарів Пігзша, Нарпапив заїїмив5, Егиса мевзісагіа займа, Сімив 5іпепвів,
Уаїгорна сигсав, Роршив іспосагра або Веїа миїдагів. б
Рослина сорго за цим винаходом являє собою рослину роду богапит, зокрема, виду зогопит бБісоїог, Зогапит 5идапепзе, Зогопит Брісоїог х Зогапит 5зйидапепзе, Зогупит х аіїтит (Зогоапит бБісоїог х Зогопит ВПаіІерепзе), Зогапит агипаіпасецт, Зогоапит х дгиттопаїйїї, Зогдапит
НаіІєрепзе та/або 5огдпит ргоріпдиит, або їхні гібриди та всі отримані з них сорти.
Термін "органи" рослини означають, наприклад, листя, каулом, стебло, коріння, вегетативні бруньки, меристеми, зародки, пиляки, насінні зачатки, насіння або плоди, зокрема зерна. Термін "частина рослини" або "частини рослини" включає, але не обмежується цим, вісь пагона або стебло, листя, квітки, суцвіття, коріння, плоди й насіння і пилок. Термін "частини" рослини також означають комбінацію з декількох органів, наприклад, квітки або насіння, або частину органа, наприклад, поперечний переріз від осі пагона. Термін "тканини" рослини означає, наприклад, калусну тканину, запасальну тканину, меристематичні тканини, тканину листа, тканину пагона, тканину кореня, пухлинну тканину рослини або репродуктивну тканину і тканину, що розвинулась, основну тканину (так звану паренхіму), ксилему, опорно-трофічну тканину й покривну тканину (так званий епідерміс). Однак тканина не обмежується цим переліком. Під терміном "клітини" рослини розуміють, наприклад, ізольовані клітини, що мають клітинну стінку або її агрегати, або протопласти.
Термін "промотор" означає нетрансльований сегмент ДНК, зазвичай розташований вище кодувальної області, який включає сайт зв'язування полімерази РНК та ініціює транскрипцію
ДНК. Промотор також містить інші елементи, які діють як регуляторний ген експресії генів (наприклад, цис-регуляторні елементи). Термін "основний або мінімальний промотор" означає промотор, який має щонайменше основні елементи, потрібні для ініціації транскрипції (наприклад, ТАТА-бокс та/або ініціатор).
У контексті цього винаходу, термін "модифікації" стосується нуклеотидної послідовності, яка впливає на специфічність та/або рівень експресії, наприклад, такої, у якій регуляторна послідовність опосередковує тканеспецифічну специфічність. Така регуляторна послідовність може бути розташована вище, а також нижче за точку ініціації транскрипції мінімального промотора, наприклад, у транскрибовуваній, але не трансльованій лідерній послідовності або в інтроні.
Термін "трансгенна рослина" стосується рослини, у геном якої інтегрований щонайменше
Зо один полінуклеотид, у переважному варіанті виконання цього винаходу, гетерологічний полінуклеотид. У переважному варіанті виконання цього винаходу, полінуклеотид є стабільно інтегрованим, а це означає, що інтегрований полінуклеотид стабільно підтримується в рослині, експресується й може стабільно успадковуватися потомством. Стабільне введення полінуклеотиду в геном рослини також включає інтеграцію в геном рослини попереднього батьківського покоління, водночас полінуклеотид може стабільно успадковуватися в подальшому. Термін "гетерологічний" означає, що введений полінуклеотид, наприклад, походить з однієї клітини або організму, що має інший генетичний фон одного й того ж виду або іншого виду, або він гомологічний прокаріотичній або еукаріотичній клітині-господарю, але потім розташовується в іншому генетичному середовищі, і, таким чином, він відрізняється від будь- якого відповідного полінуклеотиду природного походження. Гетерологічний полінуклеотид може бути присутнім на додачу до відповідного ендогенного гена.
Вираз "придатний для використання як гаплоїдний індуктор" або "здатний індукувати гаплоїдію" означає, що рослина здатна продукувати запилене насіння, що має простий (гаплоїдний) набір хромосом, унаслідок схрещування з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, яка не має властивості індуктора гаплоїдів.
Використання індуктора гаплоїдів, представленого як абсолютна швидкість індукції гаплоїдів, означає, що щонайменше 0,1 95, 0,2 90, 0,3 Фо, 0,4 о, 0,5 90, 0,6 У, 0,7 Уо, 0,8 о, 0,9 95 або 1 95,, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 1,5 95, 2 95, 2,590, З У, З,5 бо, 4 95, 4,5 95 або 5 95, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 6 95, 79, Во, 990, 1095, 11 95, 12 95, 13 95, 14 9У5 або 15 95, або в ще більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 2095, 2595, З0 95, Зою, 4095, 4595 або 5095 запиленого насіння або зародків мають гаплоїдний набір хромосом.
Схеми й варіанти виконання цього винаходу описані як приклад з посиланням на додані фігури й послідовності:
Фігура 1: Вирівнювання послідовностей (СІ Ш5ТАЇ. О 1.2.4) амінокислотних послідовностей пататин-фосфоліпази дикого типу із сорго (Зогойит РРІ АА, 5ЕО ІЮО Мо.: 3), пататин- фосфоліпази із сорго з обміном амінокислоти аргінін (КК) на глутамін (0) у положенні амінокислоти 59 (Зогдайит РРІ К590, ЗЕО ІЮ Мо.: 6), пататин-фосфоліпази із сорго з обміном амінокислоти валін (М) на ізолейцин (І) у положенні амінокислоти 162 (Зогюпит РРІ М1621, бо ЗЕО ІО Мо.: 9), пататин-фосфоліпази із сорго з обміном амінокислоти серин (5) на лейцин (І) у положенні амінокислоти 291 (ЗБогдопит РРІ 52911, 5ЕО ІЮО Мо.: 12) і пататин-фосфоліпази із сорго з обміном амінокислоти глутамін (0) на стоп-кодон у положенні амінокислоти 372 (ЗБогуопит РР 0372510р, БО ІО Мо.: 15). Положення амінокислот 59, 162 і 291 виділені чорним кольором.
Фігура 2: Вирівнювання послідовностей (СІ Ш5ТАЇГ. О 1.2.4) амінокислотних послідовностей пататин-фосфоліпази дикого типу із сорго (Зогдпит Бісоїог РРІ АА, 5ЕО ІЮ Мо.: 3), пататин- фосфоліпази з ячменю (Ногдешт миЇдаге РРІ АА, 5ЕО ІО Мо.: 21), пататин-фосфоліпази із соняшнику (Неїапійи5 аппии5 РРІ АА, 5ЕО ІЮ Мо.: 18), пататин-фосфоліпази 1 з цукрових буряків (Веїа мцЇдагіє РРІ1 АА, 5ЕО ІЮ Мо.: 24) і пататин-фосфоліпази 2 з цукрових буряків (фосфоліпаза Вейа »умцшідагіз 2 АА, 5ЕБО ІО Мо: 27). Положення амінокислот, що є функціональним доменом фосфоліпази, виділені жирним шрифтом.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ ВИКОНАННЯ ВИНАХОДУ
Цей винахід пропонує рослину роду Зогупит, у подальшому також іменовану рослиною сорго, яка здатна індукувати гаплоїдію. Завдяки цій властивості індукції гаплоїдів, рослина здатна продукувати запилене насіння або зародки, що мають простий (гаплоїдний) набір хромосом, унаслідок схрещування з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, яка не має властивості індуктора гаплоїдів. Завдяки цій системі винахідники змогли запропонувати ефективну систему схрещування рослин сорго, оскільки лінії інокуляції, тобто гомозиготні батьківська й материнська лінії для гібридного схрещування, можуть бути згенеровані за допомогою подвоєння хромосом у гаплоїдного потомства.
Рослини сорго за цим винаходом характеризуються тим, що вони мають щонайменше одну модифікацію, яка належить до пататин-фосфоліпази, яка або надає властивість індукції гаплоїдів, або також покращує природно наявну здатність до індукції гаплоїдів, або підвищує ефективність індукції. Таким чином, модифікація щодо пататин-фосфоліпази є причиною того, що рослина сорго за цим винаходом придатна для застосування в ролі індуктора гаплоїдів у програмах зі схрещування.
Рослини за цим винаходом характеризуються тим, що вони мають швидкість індукції яка становить, у переважному варіанті виконання цього винаходу, щонайменше 0,5 95, і вони, тим самим, відрізняються від рослин дикого типу або індукторів, які не є індукторами гаплоїдів.
Зо В експериментах, здійснених у контексті цього винаходу, було виявлено, що пататин- фосфоліпаза в сорго є пилкоспецифічно експресованою і тому, імовірно, впливає на зростання пилкової трубки або взаємодію між гаметофітами. Таким чином, рослина сорго за цим винаходом, у переважному варіанті виконання цього винаходу, характеризується тим, що пататин-фосфоліпаза є пилюоспецифічно експресованою та/або впливає на зростання пилкової трубки або взаємодію між гаметофітами.
У переважному варіанті виконання цього винаходу, пататин-фосфоліпаза кодується нуклеотидною послідовністю відповідно до 5ЕО ІЮО Мо. 1 або 2, або нуклеотидною послідовністю, яка щонайменше на 80 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу, на 8595, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 9095, у ще більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 95 95, в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 99 95 ідентична 5ЕО ІО Мо.: 1 або 2, або кодується нуклеотидною послідовністю, яка має послідовність, комплементарну нуклеотидній послідовності відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 1 або 2 в жорстких умовах, або містить амінокислотну послідовність, показану в
ЗЕО ІО Мо.: 3, або гомологічну амінокислотну послідовність. Як уже згадувалося вище, рослина сорго за цим винаходом містить рослини будь-яких видів роду Зогопит, зокрема, виду ЗОГгОпПИТт рісоїог, Зогуапит 5цидапепбзе і Богойшт бБісоїог х Зогуопит 5йидапепзе або їхні гібриди та всі отримані з них сорти. Відповідно, розумно припустити, що в процесі видоутворення й схрещування сортів нуклеотидна послідовність і, відповідно, амінокислотна послідовність пататин-фосфоліпази змінилися. У цьому контексті термін "гомологічний" означає, що гени, які розглядаються (з двох різних видів або сортів рослин), мають, по суті, одну й ту ж функцію і спільного попередника, і тому зазвичай виявляють істотну ідентичність у своїй нуклеїновій кислоті або в закодованій амінокислотній послідовності, відповідно, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше на 80 95.
У контексті цього винаходу, під терміном "гомолог" розуміють білок, який має однакове філогенетичне походження, під терміном "аналог" розуміють білок, який виконує таку ж функцію, але він має інше філогенетичне походження, а під терміном "ортолог" розуміють білок з рослини іншого виду, який виконує таку ж функцію, і під терміном "паралог" розуміють білок, який був створений за допомогою дуплікації в межах виду, водночас ця копія або зберігає таку ж функцію білка, або у неї змінюється профіль експресії гена, але не функція, у неї змінюється функція 60 білка, або функція предкового гена розділена між обома копіями.
Закодований білок (або амінокислотна послідовність), по суті, Є гомологом у контексті цього винаходу, коли він виконує одну й ту ж функцію, незалежно від того, чи має він однакове або різне філогенетичне походження, або походить від одного й того ж або іншого виду. Гомолог, крім того, здатний комплементувати властивість індукції гаплоїдів, тобто за допомогою модифікації кодованого гомологом генного продукту рослини, з якого походить ген, надавати властивість індуктора гаплоїдів або підвищувати ефективність індукції індуктора гаплоїдів.
Відповідно, гомолог, який відповідає пататин-фосфоліпазі, закодований нуклеотидною послідовністю відповідно до ЗЕО ІЮО Мо. 1 або 2, або містить амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 3, може, у переважному варіанті виконання за цим винаходом, бути охарактеризований як такий, що має здатність комплементувати властивість індуктора гаплоїдів, яка спостерігається у рослини сорго за цим винаходом. Додатково або як альтернатива, гомолог пататин-фосфоліпази може бути, у переважному варіанті виконання цього винаходу, охарактеризований опосередкуванням властивості індуктора гаплоїдів або підвищенням ефективності індукції індуктора гаплоїдів за допомогою модифікації генного продукту, закодованого гомологом.
Фахівцям у цій галузі техніки відомі відповідні методи і способи комплементарності в генетиці у сорго, наприклад, з публікації Лі та ін., у. Сзепеї. 94 (2015), 445-452, за яких фенотип сорго, який характеризується коричневою середньою жилкою і який викликаний точковою мутацією в гені бтг-6, був комплементований уведенням гена дикого типу рітг-6.
Як показано на Прикладі 2, амінокислотна послідовність в амінокислотної послідовності пататин-фосфоліпази із сорго (ЗЕО ІЮО Мо. 3) призводить до того, що швидкість індукції гаплоїдів у сорго частково перевищує 1,595. Можна припустити, що подальше підвищення швидкості індукції може бути результатом додаткових обмінів амінокислот, що призводить до подальшої модифікації кодувальної послідовності пататин-фосфоліпази. Таким чином, рослини сорго, що містять щонайменше одну модифікацію або мутацію, яка належить до пататин- фосфоліпази, включені до цього винаходу.
У контексті цього винаходу, вищезгадані модифікації, які належать до пататин-фосфоліпази, у переважному варіанті виконання цього винаходу, характеризуються тим, що вони є мутаціями, які призводять щонайменше до одного обміну амінокислот або до продукування стоп-кодона в
Зо ендогенній послідовності ДНК, що кодує пататин-фосфоліпазу.
Мутація означає модифікацію на рівні ДНК, тобто зміну в генетиці та/або епігенетиці.
Наприклад, зміна в генетиці може полягати в обміні щонайменше однієї нуклеотидної основи в ендогенній послідовності ДНК або в регуляторній послідовності ендогенної послідовності ДНК.
Якщо такий обмін нуклеотидної основи відбувається, наприклад, у промоторі, то це може призвести до зміни активності промотора, оскільки, наприклад, цис-регуляторні елементи модифікуються таким чином, що афінність фактора транскрипції для мутованого цис- регуляторного елемента, порівняно з промотором дикого типу, змінюється таким чином, що активність промотора з мутованим цис-регуляторним елементом підвищується або знижується, залежно від того, чи є фактор транскрипції репресором або індуктором, або від того, посилюється або послаблюється афінність фактора транскрипції для мутованого цис- регуляторного елемента. Якщо такий обмін нуклеотидної основи відбувається, наприклад, к кодувальній області ендогенної послідовності ДНК, то це може призвести до обміну амінокислот к закодованому білку, що може викликати зміну активності або стабільності білка порівняно з білком дикого типу. Ще одним прикладом зміни в генетиці є делеція нуклеотидів у регуляторній послідовності та/або ендогенній послідовності ДНК і додавання нуклеотидів у регуляторній послідовності та/або ендогенній послідовності ДНК. Зміна епігенетики може відбуватися, наприклад, унаслідок зміни профілю метилування ДНК.
Способи мутагенізації послідовностей ДНК описані більш докладно в контексті способу отримання індуктора гаплоїдів рослини.
Оскільки описані мутації призводять до зміни або вкорочування амінокислотної послідовності пататин-фосфоліпази, то можна припустити, що мутації змінюють активність або стабільність пататин-фосфоліпази, закодованої ендогенною послідовністю ДНК в рослині сорго, порівняно з рослиною дикого типу, тобто підвищують або знижують.
Генерація стоп-кодонів у функціональних доменах білка зазвичай призводить до втрати функції білка, тоді як генерація стоп-кодона після функціонального домену також могла б призвести до підвищення активності або стабілізації білка. У разі мутацій, які, у переважному варіанті виконання цього винаходу, є обмінами амінокислот, може відбуватися підвищення активності білка, наприклад, за допомогою оптимізації послідовності або, однаковою мірою, за допомогою інгібування або втрати активності. Мутації в промоторній області також можуть 60 призводити до зміни експресії гена.
Отже, відповідно до цього винаходу, описана мутація змінює біологічну активність пататин- фосфоліпази, унаслідок чого її початкова функція в пилку більше не виконується тією ж мірою, як у разі із сорго дикого типу.
Цього можна досягти, з одного боку, за допомогою надекспресії гена, асоційованої з підвищеною кількістю білка й активністю, наприклад, за допомогою мутацій у промоторній області, за допомогою підвищення стабільності білка, наприклад, за допомогою вкорочення білка шляхом генерації стоп-кодона або за допомогою утворення більш активної форми пататин-фосфоліпази, наприклад, за допомогою обмінів амінокислот у функціональному домені, наприклад, які могли б призвести до більш швидкого зростання пилкової трубки, роз'єднання транспорту генеративних клітин у пилковій трубці в міру її зростання або до порушеної взаємодії гаметофітів з подальшим неповним запиленням з подальшим видаленням хромосом.
З іншого боку, надекспресія гена також могла б інгібувати, запобігати або зменшувати правильне утворення, згортання та/або стабільність пататин-фосфоліпази. Однак також могло б відбуватися знижене утворення функціональної пататин-фосфоліпази або утворення функціональної пататин-фосфоліпази могло б бути відсутнім, наприклад, за допомогою мутацій у промоторній області, для утворення менш активної, неактивної або нестабільної форми пататин-фосфоліпази, наприклад, за допомогою генерації стоп-кодона або за допомогою обмінів амінокислот у функціональному домені, що, зі свого боку, могло б призвести до неправильного запилення. Крім того, локалізація пататин-фосфоліпази могла б бути змінена за допомогою описаних мутацій для того, щоб, наприклад, вона більше не була пилкоспецифічно експресованою.
У результаті цей винахід також містить рослини сорго, що мають щонайменше одну вставку касети експресії, яка є молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує пататин-фосфоліпазу, яка, за допомогою послідовності нуклеїнової кислоти відповідно до 5ЕО ІЮ Мо. 1 або 2, або за допомогою нуклеотидної послідовності, яка щонайменше на 80 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу, на 85 95, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 90 95, у ще більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 95 95 і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 99 95 ідентична 5ЕО ІЮ Мо.: 1 або 2, або кодувальну функціональну частину цієї пататин-фосфоліпази, або що містить молекулу нуклеїнової кислоти, що має нуклеотидну послідовність, яка гібридизується з послідовністю, комплементарною нуклеотидній послідовності відповідно до 5ЕО ІЮО Мо: 1 або 2 в жорстких умовах, або яка містить молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує пататин-фосфоліпазу, що має амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮО Мо: З або гомологічну амінокислотну послідовність або її функціональну частину, і функціонально зчеплену з промотором, у переважному варіанті виконання цього винаходу, з пилюоспецифічним промотором, водночас закодована пататин-фосфоліпаза або її функціональна частина має щонайменше одну мутацію, що призводить щонайменше до одного обміну амінокислот або до генерації стоп-кодона і, таким чином, запропонована пататин-фосфоліпаза, що кодує надекспресію гена, що кодує рослину або її частину, порівняно з рослиною дикого типу або її відповідною частиною.
Крім того, до цього винаходу також включено рослини сорго, у яких експресія пататин- фосфоліпази частково або цілковито інгібується, або присутня зменшена кількість білка пататин-фосфоліпази, або функціональна пататин-фосфоліпаза не утворена. Таким чином, цей винахід також містить рослини сорго, у яких експресія зазначеної пататин-фосфоліпази частково або цілковито інгібується за допомогою методу РНК-інтерференції (Фаєр та ін., Майшге 391 (1998), 806-811). Відповідно, рослина за цим винаходом також характеризується тим, що вона має щонайменше одну вставку касети експресії, що містить промотор, і в разі потреби термінатор, який функціонально зчеплений з молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує а5РНК, яка містить щонайменше 19 або 20, у переважному варіанті виконання за цим винаходом щонайменше 21, 22, 23, 24 або 25, у більш переважному варіанті виконання за цим винаходом щонайменше 30, 35, 40, 45 або 50 і в найбільш переважному варіанті виконання за цим винаходом щонайменше 100, 200, 300 або 500 нуклеотидів, комплементарних частковій послідовності нуклеотидної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 1 або 2, або частковій послідовності нуклеотидної послідовності, яка щонайменше на 80 95, у переважному варіанті виконання цього винаходу, на 85 95, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 90 95, у ще більш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 95 95 і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу, на 99 95 ідентична частковій послідовності нуклеотидної послідовності відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 1 чи 2.
Крім того, цей винахід також містить рослини сорго, у яких відбувається нокаут пататин- фосфоліпази за допомогою мутації.
Відповідні промотори, які використовуються в касетах експресії, можуть бути промоторами, які індукуються конститутивно (наприклад: промотор 355 з роботи "Вірус мозаїки цвітної капусти" (Оделл та ін., Майшге 313 (1985), 810-812), відповідними промоторами є промотори, у яких спостерігаються специфічні для розвитку рослини (наприклад, промотори, специфічні для квітки), або тканиноспецифічні промотори, зокрема, промотори, у яких спостерігається активність, специфічна для пилку (приклади: Чен та ін., МоІесшіаг Віоіоду Керогів 37 (2010), 737- 144, Чжао та ін., Ріапіа 224 (2006), 405-412 або Твелл та ін. Сепе5 85 ОемеІортепі 5(1991), 496- 507). Відповідні промотори також можуть бути синтетичними або химерними промоторами, які не зустрічаються в природі, які складаються з декількох елементів і містять мінімальний промотор, і вище мінімального промотора у них є щонайменше один цис-регуляторний елемент, який служить сайтом зв'язування для специфічних факторів транскрипції. Химерні промотори можуть бути сконструйовані відповідно до бажаної специфічності й індуковані або репресовані різними факторами. Приклади таких промоторів можна знайти в роботі Гурра й Раштона (ТАЕМОЗ5 іп Віотесппоїоду 23 (2005), 275-282) або в роботі Вентера (Тгепавз іп Ріапі Зсієпсе 12 (2007), 118-1249). Відповідним термінатором є, наприклад, термінатор нопалін-синтази (Депікер та ін., Чоигпаи! ої МоїІесшаг апа Аррієа Сепеїійс5 126 (1982), 561-573). Промотори й інші регуляторні елементи транскрипції добре відомі й доступні фахівцям у цій галузі техніки; див., наприклад, УМО 00/75359 на стор. 23, рядок 5 - стор. 24, рядок 17.
Як показано в Прикладі 2, обмін амінокислоти аргінін на глутамін у положенні амінокислоти 59 відповідно до амінокислотної послідовності пататин-фосфоліпази, показаної в зЕО ІО Мо.: 6, або обмін амінокислоти валін на ізолейцин у положенні амінокислоти 162 відповідно до амінокислотної послідовності пататин-фосфоліпази, показаної в 5ЕО ІЮ Мо.: 9, призводить до того, що швидкість індукції гаплоїдів у сорго перевищує 0,595. З Фігури 2 видно, що ці положення амінокислоти лежать у функціональному домені пататин-фосфоліпази, що відповідає діапазону положень амінокислоти від 37 до 240.
Таким чином, цей винахід пропонує рослини сорго, що мають щонайменше одну мутацію, що призводить до обміну амінокислот у діапазоні положень амінокислоти від 37 до 240 відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: З, відповідному, у переважному варіанті виконання цього винаходу, функціональному домену пататин-фосфоліпази. У переважному варіанті виконання цього
Зо винаходу щонайменше одна мутація в діапазоні положень амінокислоти 40-93 або 135-204, у переважному варіанті виконання цього винаходу, в діапазоні положень амінокислоти 53-85 або 150-192, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, в діапазоні положень амінокислоти 55-75 або 157-167 призводить до обміну амінокислот.
Крім того, обмін амінокислоти серин на лейцин у положенні амінокислоти 291 відповідно до амінокислотної послідовності пататин-фосфоліпази, показаної в ХЕО ІО Мо.: 12, у рослин сорго призводить до того, що швидкість індукції гаплоїдів перевищує 1,595. Крім того, індуктор гаплоїдів сорго міг би бути згенерований мутацією в нуклеотидній послідовності відповідно до
ЗЕО ІО Мо.: 1, яка призводить до стоп-кодона в положенні амінокислоти 372 відповідно до зЕО
ІО Мо.: 3. Ця мутація замінила амінокислоту глутамін (0) у положенні 372 на стоп-кодон.
З Фігури 2 видно, що ці положення лежать за межами функціонального домену пататин- фосфоліпази.
Таким чином, цей винахід також пропонує рослини сорго, що мають щонайменше одну мутацію, що призводить до обміну амінокислот у діапазоні положень амінокислоти від 241 до 385 відповідно до ЗЕО ІЮО Мо. З, відповідному, у переважному варіанті виконання цього винаходу, області, що перебуває за межами функціонального домену пататин-фосфоліпази, водночас мутація також може призводити до стоп-кодона та, отже, до вкорочення пататин- фосфоліпази. У переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше одна мутація в діапазоні положень амінокислоти від 270 до 320, у переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти від 285 до 311, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти від 285 до 298, призводить до обміну амінокислот та/або до стоп-кодона в діапазоні положень амінокислоти 322-402, у переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 342-392, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу, у діапазоні положень амінокислоти 362- 382.
В особливо переважному варіанті виконання цього винаходу, рослина за цим винаходом характеризується тим, що щонайменше одна мутація призводить до обміну амінокислот у положенні амінокислоти 59, 162 та/або 291, та/(або до стоп-кодона в положенні амінокислоти 372 відповідно до 5ЕО ІЮ: 3.
У зв'язку з цим в одному варіанті виконання цього винаходу модифікована пататин- 60 фосфоліпаза містить амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 3, у якій присутній щонайменше один обмін амінокислот, водночас аргінін (К) у положенні 59, валін (М) у положенні 162 та/або серин (5) у положенні 291 замінюється на іншу амінокислоту, у переважному варіанті виконання винаходу, глутамін (0) у положенні 59, ізолейцин (І) у положенні 162 та/або лейцин (у у положенні 291 або кодується нуклеотидною послідовністю відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 1, у якій присутній щонайменше один обмін нуклеотидів, що призводить до обміну амінокислот та/або до стоп-кодона, водночас щонайменше один нуклеотид обмінюється в положеннях 421- 423, 815-817, 1420-1422 та/або 1663-1665 відповідно до 5ЕБО ІЮ Мо.: 1 (що відповідає положенням нуклеотиду 175-177, 484-486, 871-873 та/або 1114-1116 відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 2).
Рослини, як і еукаріоти, мають щонайменше по дві копії своєї генетичної інформації на кожну клітину. Кожен ген зазвичай представлений двома алелями, які можуть бути ідентичними в гомозиготному стані або різними в гетерозиготному стані. Фенотип рослини за цим винаходом викликаний щонайменше однією мутацією в пататин-фосфоліпазі, водночас рослина за цим винаходом є гомозиготною або гетерозиготною, у переважному варіанті виконання цього винаходу, гомозиготною для пататин-фосфоліпази, яка мутувала.
В іншому варіанті виконання цього винаходу заявлена молекула нуклеїнової кислоти, яка містить раніше визначені специфічні мутації, що призводять до обмінів амінокислот К59О,
М1621І, 52911. та/або 0372510ор на основі амінокислотної послідовності відповідно до 5ЕО ІЮ Мо.: 3. У цьому разі молекула нуклеїнової кислоти за цим винаходом характеризується тим, що її присутність у рослині призводить до того, що рослина здатна індукувати гаплоїдію, або до того, що ефективність індукції рослини, уже здатної індукувати гаплоїд, поліпшується. У переважному варіанті виконання цього винаходу присутність молекули нуклеїнової кислоти за цим винаходом за відсутності пататин-фосфоліпази дикого типу в рослині призводить до того, що рослина здатна індукувати гаплоїдію або покращувати ефективність індукції рослини, уже здатної індукувати гаплоїдію.
Молекула нуклеїнової кислоти за цим винаходом може бути використана як трансген для надання властивості індуктора гаплоїдів рослині або для підвищення ефективності індукції індуктора гаплоїдів. У переважному варіанті виконання цього винаходу, молекула нуклеїнової кислоти за цим винаходом є ізольованою молекулою нуклеїнової кислоти, яку виділили з її
Зо природного або вихідного середовища, тобто поза генетичним контекстом. Молекула нуклеїнової кислоти може бути дволанцюжковою або одноланцюжковою, лінійною або кільцевою. Це може бути геномна ДНК, синтетична ДНК, сДНК або тип РНК, наприклад 5іРНК або тіРНК, водночас нуклеотидна основа урацил входить до складу РНК замість нуклеотидної основи тимін.
У переважному варіанті виконання цього винаходу, нуклеїнова кислота за цим винаходом або РНК, закодована нуклеїновою кислотою, або білок, або поліпептид, закодований нуклеїновою кислотою, впливає на зростання пилкової трубки в рослині, на взаємодію між гаметофітами або на запилення як таке.
Гібридизаційні ДНК-зонди, отримані з модифікованої послідовності пататин-фосфоліпази, тобто такі, що містять будь-яку з вищеописаних мутацій, можна використовувати для ідентифікації рослин за цим винаходом, тобто для детекції мутацій у гені пататин-фосфоліпази.
Для досягнення специфічної гібридизації такі зонди повинні бути специфічними й мати в довжину щонайменше 15 нуклеотидів, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 20 нуклеотидів. Докладне керівництво з гібридизації нуклеїнових кислот можна знайти в роботі Тієсена, Лабораторні методи в біохімії та молекулярній біології - Гібридизація із зондами нуклеїнових кислот, Частина 1, Глава 2, Огляд принципів гібридизації та стратегія аналізів нуклеїнових кислот, ЕІбеміег, Нью-Йорк (1993); і в роботі, Поточні протоколи в молекулярній біології, Глава 2, Осубель та ін., за ред., Сгеепе Рибіїхпіпуд і Уміеу Іпіегосіепсе,
Нью-Йорк (1995). Зонди також можуть бути використані для ампліфікації цілого ряду модифікованої послідовності пататин-фосфоліпази, яка отримує щонайменше одну з раніше описаних мутацій шляхом відомого процесу полімеразної ланцюжкової реакції (РСК).
Таким чином, молекула нуклеїнової кислоти, яка містить у довжину щонайменше 15, 16, 17, 18, 19 або 20, у переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 21, 22, 23, 24 або 25, у більш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 30, 35, 40, 45 або 50 і в найбільш переважному варіанті виконання цього винаходу щонайменше 100, 200, 300, 500 або 1000 нуклеотидів, є об'єктом цього винаходу, водночас згадана молекула нуклеїнової кислоти специфічно гібридизується з раніше описаною нуклеотидною послідовністю, що містить ген модифікованої пататин-фосфоліпази, і містить одну з мутацій або пару відповідних молекул нуклеїнової кислоти в області, що містить щонайменше одну з мутацій, для ампліфікації в бо полімеразній ланцюжковій реакції (РСК), у переважному варіанті виконання цього винаходу, у формі олігонуклеотиду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, з максимальною довжиною - 50 нуклеотидів. Переважний варіант виконання молекули нуклеїнової кислоти за цим винаходом описаний у пункті (121.
Ще одним об'єктом цього винаходу є вектори, що містять молекулу нуклеїнової кислоти за цим винаходом або вищезгадану касету експресії. Вектор за цим винаходом може містити ген мутантної пататин-фосфоліпази, що має вищезгадані характеристики нуклеотидної послідовності, функціонально зчеплений з гетерологічним промотором, або він може містити ген мутантної пататин-фосфоліпази разом зі своїм природним промотором.
Інший вектор може містити ген дикого типу пататин-фосфоліпази, функціонально зчеплений з гетерологічним промотором. Крім того, вектор може містити молекулу рекомбінантної ДНК, яка має нуклеотидну послідовність, що кодує дволанцюжкову РНК ії, отже, призводить до експресії гена пататин-фосфоліпази після експресії в рослинній клітині.
Крім того, вектор може містити раніше описану молекулу нуклеїнової кислоти, яка специфічно зв'язується з нуклеотидною послідовністю пататин-фосфоліпази, яка мутувала.
Описаний вектор може бути плазмідою, космідою, бактеріофагом або експресійним вектором, вектором для трансформації, біфункціональним вектором або клонувальним вектором, він може бути дволанцюжковим або одноланцюжковим, лінійним або кільцевим, або він може трансформувати прокаріотичного або еукаріотичного господаря або за допомогою інтеграції в його геном, або екстрахромосомно. У переважному варіанті виконання цього винаходу, молекула нуклеїнової кислоти за цим винаходом функціонально зчеплена в експресійному векторі, що має щонайменше одну регуляторну послідовність, яка дає змогу здійснювати транскрипцію і в разі потреби експресію в прокаріотичній або еукаріотичній клітині- господарі; див., наприклад, Сембрук та ін., Молекулярне клонування: Інструкція щодо здійснення лабораторних робіт, 3-є видання, Соїд Зргіпд Нагбог І арогайгу Рге55, Колд Спрінг
Харбор, Нью-Йорк, 2001, і міжнародна заявка МО 00/75359 на стор. 21, рядок 20 - стор. 22, рядок 32. Регуляторна послідовність, у переважному варіанті виконання за цим винаходом -
ДНК, може бути гомологічною або гетерологічною щодо нуклеїнової кислоти за цим винаходом.
У переважному варіанті виконання цього винаходу ці регуляторні послідовності є промоторами або термінаторами, зокрема, початковою точкою ініціації транскрипції, сайтом зв'язування
Зо рибосом, сигналом опроцесингу РНК, сайтом термінації транскрипції та/або сигналом поліаденілювання. Крім того, вектори зазвичай містять гени-індикатори/гени-репортери або гени стійкості для детекції перенесення бажаного вектора або молекули ДНК/молекули нуклеїнової кислоти й для відбору індивідуумів, що містять їх, оскільки безпосередня детекція експресії гена доволі утруднена. У переважному варіанті виконання цього винаходу, вектор є вектором рослини.
Додатково до вищеописаних векторів, цей винахід також пропонує спосіб, що містить уведення описаного вектора в клітину-господаря. Вектор може бути введений, наприклад, за допомогою кон'югації, мобілізації, біолістичної трансформації, трансформації, опосередкованої
Адгобасіегішт, трансфекції, трансдукції, вакуумної інфільтрації або електропорації. Такі способи й способи отримання описаних векторів відомі фахівцеві в цій галузі техніки (Сембрук та ін., 2001).
В іншому аспекті, цей винахід стосується клітин-господарів, що містять описані вектори, молекули нуклеїнової кислоти або касети експресії. Клітина-господар у контексті цього винаходу може бути прокаріотичною (наприклад, бактеріальною) або еукаріотичною клітиною (наприклад, рослинною клітиною або дріжджовою клітиною). У переважному варіанті виконання цього винаходу, клітина-господар являє собою Адгобасіегічшт, наприклад Адгорасієгічт їшптегасіеп5 або Адгобасіегішт гпігодепе5, або рослинну клітину, що містить нуклеїнову кислоту за цим винаходом, описані вектор або касету експресії. Фахівцю в цій галузі техніки відомі численні способи, як-от кон'югація або електропорація, за допомогою яких він може вводити нуклеїнову кислоту за цим винаходом, вектор за цим винаходом або касету експресії в Адгобасіегіит, і способи, як-от різні способи трансформації (біолістична трансформація, трансформація, опосередкована Адгобасіегіцшт), за допомогою яких він може вводити нуклеїнову кислоту за цим винаходом, вектор або касету експресії за цим винаходом у рослинну клітину (Сембрук та ін., 2001).
У більш переважному варіанті виконання, цей винахід стосується трансгенної рослинної клітини, що містить молекулу нуклеїнової кислоти за цим винаходом як трансген, вектора за цим винаходом або касети експресії і трансгенної рослини або її частини, яка містить клітину трансгенної рослини. Така трансгенна рослинна клітина або рослина є, наприклад, рослинною клітиною або рослиною, яка, у переважному варіанті виконання цього винаходу, стабільно 60 трансформована молекулою нуклеїнової кислоти за цим винаходом, вектором за цим винаходом або касетою експресії. Трансгенна рослина за цим винаходом, у переважному варіанті виконання цього винаходу, придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів. У переважному варіанті виконання трансгенної рослинної клітини за цим винаходом, молекула нуклеїнової кислоти функціонально зчеплена щонайменше з однією регуляторною послідовністю, яка забезпечує транскрипцію і в разі потреби експресію в рослинній клітині.
Регуляторна послідовність, у переважному варіанті виконання цього винаходу - ДНК, може бути гомологічною або гетерологічною щодо нуклеїнової кислоти за цим винаходом. Загальна конструкція молекули нуклеїнової кислоти за цим винаходом і регуляторної послідовності (послідовностей) надалі є трансгеном. Частина рослини може бути запиленим або незапиленим насінням, зародком, пилком, тканиною, органом або рослинною клітиною, водночас запилене або незапилене насіння, зародок або пилок продукується на трансгенній рослині й у її геномі, нуклеїнова кислота за цим винаходом інтегрована як трансген, вектор або касета експресії. Крім того, цей винахід також включає потомство трансгенної рослини, у геном якої інтегрована нуклеїнова кислота за цим винаходом як трансген, вектор або касета експресії і яка придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів.
В іншому аспекті, цей винахід стосується способу продукування рослини, яка придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів. Спосіб може містити такі етапи: (а) мутагенез рослинних клітин і потім регенерацію рослин з рослинних клітин, підданих мутагенезу, або мутагенез рослин; і (Б) ідентифікацію рослини з етапу (а), що має щонайменше одну мутацію в ендогенній послідовності ДНК, що кодує вищеописану пататин-фосфоліпазу, що призводить до щонайменше одного обміну амінокислот або до генерації стоп-кодона, у переважному варіанті виконання цього винаходу до щонайменше одного з описаних обмінів амінокислот 52911, К590,
М162І ї 03725і0р відповідно до амінокислотної послідовності зЗЕО ІЮО Мо. З або призводить щонайменше до одного обміну амінокислот у послідовностях пататин-фосфоліпаз рослини, відповідному обміну амінокислот 52911, К590, М162І ї 0372510ор відповідно до амінокислотної послідовності ЗЕ ІЮ Мо. 3, і яка здатна індукувати отримання гаплоїдного потомства з більшою швидкістю, порівняно з рослиною, що не була піддана мутагенезу. У цьому разі щонайменше одна мутація призводить до додавання властивості індуктора гаплоїдів
Зо ідентифікованій рослині або до підвищення ефективності індукції індуктора гаплоїдів.
Крім того, подальші дослідження свідчать, що існують додаткові потенційні мутагенні сайти, які придатні для надання рослинам властивості індукції гаплоїдів або для підвищення у них ефективності індукції. Ці мутації призводять до обміну аспарагінової кислоти (0) в положенні 75, гліцину (б) в положенні 79 та/або проліну (Р) в положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до 5ЕО ІЮО Мо. З на іншу амінокислоту, у переважному варіанті виконання цього винаходу, на аспарагін (М) у положенні 75, аргінін (К) у положенні 79 та/або лейцин (Г) у положенні 203 або до таких обмінів амінокислот, які відповідають обміну амінокислот, що відбувається в пататин-фосфоліпазах рослини.
Ендогенна послідовність ДНК з етапу (Б) вищевказаного способу може, по суті, кодувати будь-яку пататин-фосфоліпазу рослини. У переважному варіанті виконання цього винаходу, ендогенна послідовність ДНК кодує пататин-фосфоліпазу із сорго (ЗЕО ІЮО Мо.: 3), соняшнику (ЗЕО ІО Мо.: 18), ячменю (ЗЕО ІЮ Мо.: 21) або цукрових буряків, причому цукровий буряк має дві передбачувані пататин-фосфоліпази (ЗЕО ІЮО Мо.: 24 і 27). Пататин-фосфоліпази рослини, згадані в етапі (Б), у переважному варіанті виконання цього винаходу, є пататин-фосфоліпазами рослини із соняшнику (ЗЕО ІО Мо.: 18), ячменю (5ЕО ІО Мо.: 21) або цукрового буряка, водночас цукровий буряк має дві передбачувані пататин-фосфоліпази (ЗЕО ІЮО Мо.: 24 і 27).
Фахівцю в цій галузі техніки відомо, як може бути досягнута мутація в контексті цього винаходу за допомогою процесу мутагенізації в етапі (а) способу продукування рослини, яка придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів. У цьому документі мутагенез включає як звичайний мутагенез, так і сайт-специфічний мутагенез або "редагування генома". Модифікація на рівні ДНК не є навмисно індукованим звичайним мутагенезом. Рослинна клітина або рослина піддається мутагенним умовам, наприклад ТІЇ ІМО, за допомогою опромінення ультрафіолетовим світлом або за допомогою використання хімічних речовин (Тілл та ін., ВМС
Ріапі Віоіоду 4 (2004), 12). Іншим способом випадкового мутагенезу є мутагенез за допомогою транспозону. Сайт-специфічний мутагенез дає змогу ввести модифікацію на рівні ДНК, націлену на попередньо визначені сайти ДНК. Наприклад, можуть використовуватися методи ТАГЕМ (МО 2010/079430, УМО 2011/072246), мегануклеази (Сілва та ін., Сштепі бепе Тегару 11 (2011), 11), хоумінг-ендонуклеази (Шевальє, МоїІесціаг Се 10 (2002), 895-905), цинк-пальцеві нуклеази (Ллойд та ін., Ргосеєдіпов ої Те Маїйопа! Асадету ої бсіепсез ої Те Опіїєйд еаїез5 ої Атегіса 102
(2005), 2232-237 або система СКІЗРЕ/Саз (Гай та ін., Тгепав іп Віоїесппоїоду 31 (2013), 397- 405).
Ідентифікація рослини в етапі (Б) може бути здійснена, наприклад, за допомогою молекулярних маркерів або зондів. ДНК-зонди являють собою, наприклад, праймери або пари праймерів, які можна використовувати в реакції РОК. Наприклад, ТІСГІМО-мутанти (ТІССІМО --
Тагаеїпа Іпдисед Госаї І евіоп5 іп Сепоте5 - цілеспрямований вплив на індуковані локальні пошкодження в геномах - метод "зворотної" генетики) можуть бути детектовані або ідентифіковані за допомогою секвенування гена-мішені в ТІ ІМО-популяції або за допомогою інших способів, які детектують помилкові спарювання основ у ДНК, як-от аналізи температури плавлення або використання нуклеаз, специфічних для помилкового спаровування основ. Цей винахід також включає праймер / пари праймерів, які можна використовувати для цієї мети, наприклад праймери для пататин-фосфоліпази.
Крім того, мутанти, згенеровані за допомогою транспозонів, можуть бути детектовані з використанням транспозон-специфічних праймерів і праймерів, специфічних для гена-мішені, у
РСК у всій популяції й у продуктів РСК, підданих подальшому секвенуванню. Цей винахід також містить такі праймери. Фахівцям у цій галузі техніки відомі й інші методи та способи, які вони можуть використовувати для ідентифікації рослини в етапі (Б). Цей винахід також стосується молекулярних маркерів, які детектують наявність або відсутність мутації в ендогенній послідовності ДНК або в регуляторній послідовності ендогенної послідовності ДНК. Наприклад, такі маркери засновані на ЗМР (бБіпдіє МисіІеоїде Роїутогрпізт - однонуклеотидний поліморфізм), і вони є специфічними для мутації (приклади: маркери КАЗРаг або Тадмап).
Ідентифікація рослини в етапі (Б) також може бути здійснена за допомогою тестування ефективності індукції, як описано в Прикладі 1, що розглядається. Таким чином, цей винахід також стосується способу ідентифікації рослини за цим винаходом за допомогою детекції мутації в гені пататин-фосфоліпази або за допомогою детекції маркерної алелі, яка з'єднана з мутацією, у переважному варіанті виконання цього винаходу, з використанням вищеописаних молекулярних маркерів.
Прикладом рослини, продукованої й ідентифікованої таким способом, є рослина сорго за цим винаходом.
Зо Цей винахід також стосується рослини, яка може бути продукованою або продукованою вищевказаним способом, або частини цієї рослини, водночас частина рослини може являти собою запилене або незапилене насіння, зародок, пилок, тканину, орган або рослинну клітину, водночас запилене або незапилене насіння, зародок або пилок продуковані на трансгенній рослині, у геномі якої присутня щонайменше одна мутація. Крім того, цей винахід також включає потомство рослини, що має щонайменше одну мутацію й придатне для використання в ролі індуктора гаплоїдів. По суті, цей спосіб може бути застосований до будь-якої рослини, що містить пататин-фосфоліпазу, і, таким чином, їй можна надати властивість індукції гаплоїдів. У переважному варіанті виконання цього винаходу, ця рослина являє собою сорго, соняшник, ячмінь, цукровий буряк, жито, пшеницю або картоплю.
В іншому аспекті, цей винахід стосується способу продукування трансгенної рослини, що придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів. Спосіб може містити такі етапи: (а) введення молекули нуклеїнової кислоти за цим винаходом, яка кодує вищеописану пататин-фосфоліпазу і має щонайменше одну мутацію, що призводить щонайменше до одного з описаних обмінів амінокислот або до генерації стоп-кодона, у переважному варіанті виконання винаходу, що призводить щонайменше до одного обміну амінокислот, відібраного із 52911,
КБ9О, М162І ї 0372510р відповідно до амінокислотної послідовності 5ХЕО ІЮО Мо. 3, введення молекули нуклеїнової кислоти, що має щонайменше одну мутацію, що призводить щонайменше до одного обміну амінокислот у послідовностях пататин-фосфоліпаз рослини, відповідного обміну амінокислот 52911, 2590, М162І ії 0372510р відповідно до амінокислотної послідовності
ЗЕО ІО Мо. 3, введення раніше описаної касети експресії, що містить або молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує модифіковану пататин-фосфоліпазу рослини за цим винаходом і функціонально зчеплену з промотором, або містить промотор і в разі потреби термінатор, функціонально зчеплений з молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує а5РНК, що містить щонайменше 19 нуклеотидів нуклеотидної послідовності відповідно до ЗЕО ІО Мо.: 1 або 2, або має нуклеотидну послідовність, яка щонайменше на 80 95 ідентична нуклеотидній послідовності відповідно до ЗЕО ІО Мо.: 1 або 2, або введення вектора за цим винаходом у рослинну клітину; і (Б) регенерацію трансгенних рослин з рослинних клітин з етапу (а).
Спосіб продукування трансгенної рослини, що придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів, також включає пропозицію щонайменше двох вищеописаних нуклеїнових кислот, а бо також, за допомогою відбору різних варіантів виконання нуклеїнової кислоти за цим винаходом і в разі потреби щонайменше в одному векторі, і схильних до трансформації рослинних клітин за допомогою введення щонайменше двох нуклеїнових кислот. В альтернативному або додатковому варіанті виконання цього винаходу, додатково до нуклеїнової кислоти за цим винаходом запропонована й трансформована або введена в систему схрещування щонайменше одна нуклеїнова кислота, про яку відомо, що вона придатна для генерації індуктора гаплоїдів (наприклад, підданий маніпуляціям ген сепі3З (Раві й Чан, Майшге 464 (2010), 615-618, ЕР 2989889 А1; ЕР 3037540 А1, МО 2016/138021 АТ).
Молекула нуклеїнової кислоти з етапу (а) способу продукування рослини, придатної для використання в ролі індуктора гаплоїдів, може кодувати пататин-фосфоліпазу будь-якої рослини. У переважному варіанті виконання цього винаходу, ендогенна послідовність ДНК кодує пататин-фосфоліпазу із сорго (ЗЕО ІО Мо.: 3), соняшнику (ЗЕО ІЮ Мо.: 18), ячменю (ЗЕО
ІЮО Мо.: 21) або цукрових буряків, причому цукровий буряк має дві передбачувані пататин- фосфоліпази (5ЕО ІЮ Мо.: 24 і 27). Пататин-фосфоліпази рослини, згадані в тому ж етапі (Б), У переважному варіанті виконання цього винаходу, є пататин-фосфоліпазами соняшнику (ЗЕО ІЮ
Мо.: 18), ячменю (5ЕО ІЮ Мо.: 21) або цукрового буряка, водночас цукровий буряк має дві передбачувані пататин-фосфоліпази (5ЕО ІЮ Мо.: 24 і 27).
Введення молекули нуклеїнової кислоти або вектора з етапу (а) відбувається за допомогою трансформації, у переважному варіанті виконання цього винаходу, за допомогою стабільної трансформації рослинних клітин. Вектор може бути введений, наприклад, за допомогою кон'югації, мобілізації біолістичної трансформації, опосередкованої Адгорасіегійт трансформації, трансфекції, трансдукції, вакуумної інфільтрації або електропорації. Такі способи відомі фахівцеві в цій галузі техніки (Сембрук та ін., 2001). Крім того, молекула нуклеїнової кислоти також може бути введена в геном рослини за допомогою гомологічної рекомбінації, наприклад за допомогою системи СКІЗРЕ/Сах або системи СКІЗРЕ/СрИ і матриці для репарації.
Цей винахід також стосується трансгенної рослини, яка може бути продукованою або продукованою цим способом, або до частини цієї рослини, водночас частина рослини може являти собою запилене або незапилене насіння, зародок, пилок, тканину, орган або рослинну клітину, водночас запилене або незапилене насіння, зародок або пилок продуковані на
Зо трансгенній рослині, у геном якої інтегрована введена нуклеїнова кислота як трансген або вектор. Крім того, цей винахід також включає потомство трансгенної рослини, що має введену нуклеїнову кислоту як трансген і придатне для використання в ролі індуктора гаплоїдів. По суті, цей спосіб може бути застосований до будь-якої рослини, що містить пататин-фосфоліпазу, і, таким чином, їй можна надати властивість індукції гаплоїдів. У переважному варіанті виконання цього винаходу, ця рослина являє собою сорго, соняшник, ячмінь, цукровий буряк, жито, пшеницю або картоплю.
В іншому аспекті, цей винахід стосується способу продукування гаплоїдної рослини, який містить такі етапи: (а) схрещування нетрансгенної або трансгенної індукованої рослини за цим винаходом, яка придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів, з рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, (Б) відбір обпиленого гаплоїдного насіння або зародка, і (с) продукування гаплоїдної рослини з насіння або зародка з етапу (Б).
У переважному варіанті виконання цього винаходу, рослину, що придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів, використовують як батьківську форму й схрещують з материнською формою того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду. Рослину, придатну для використання в ролі індуктора гаплоїдів, також можна використовувати як материнську форму для схрещування з батьківською формою того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду. Обидва партнери зі схрещування в етапі (а), тобто материнська форма й батьківська форма, також можуть бути одним і тим же індивідуумом. Етап схрещування далі є самозапиленням.
Відбір гаплоїдного запиленого насіння або зародка може містити етап детектування гаплоїдії та відділення гаплоїдного запиленого насіння або зародка від поліплоїдного запиленого насіння або зародків. Детектування гаплоїдії запиленого спермія або зародка може бути фенотипічним або генотипічним, наприклад, за допомогою пропозиції індуктора зі специфічним для зародка домінантним маркером, який видно в усього диплоїдного потомства, але не в індукованого гаплоїдного потомства. Крім того, статус плоїдності може бути визначений за допомогою проточної цитометрії. Крім того, патерн цілковитої гомозиготності молекулярних маркерів указує на гаплоїдні рослини. Відділення може бути автоматизованим, 60 наприклад на основі даних, отриманих унаслідок детекції гаплоїдії.
Цей винахід також відноситься до гаплоїдного запилення насіння або зародка, які отримують унаслідок схрещування в етапі (а) способу продукування гаплоїдної рослини, і до гаплоїдної рослини, яка може бути продукованою або продукованою цим способом, або до частини цієї рослини, водночас частина рослини може бути насінням, зародком, тканиною, органом або рослинною клітиною. Крім того, цей винахід також включає потомство рослини.
Крім того, цей винахід також включає подвійну гаплоїдну (диплоїдну) рослину або її частину, водночас подвійна гаплоїдна (диплоїдна) рослина або її частина була продукована за допомогою подвоєння хромосом гаплоїдної рослини або її частини. Ці подвійні гаплоїдні (диплоїдні) рослини можуть бути отримані в такий спосіб: (а) продукуванням гаплоїдної рослини за допомогою способу за цим винаходом; (Б) подвоєнням гаплоїдного набору хромосом у щонайменше одній клітині гаплоїдної рослини, і (с) регенерацією диплоїдної рослини з клітини з етапу (Б).
У способі отримання подвійних гаплоїдних рослин за цим винаходом, гаплоїдні рослини з етапу (а) обробляють інгібітором клітинного ділення колхіцином. Це призводить до подвоєння хромосом. Фахівець у цій галузі техніки знає про цей процес, і він описаний, наприклад, у роботі
Сегі-Сімарро й Нуец, Суїодепеїйс апа Сепоте ВНезвєагсі 120 (2008), 358-369.
Фахівцям у цій галузі техніки відомі загальні способи продукування гаплоїдних і подвійних гаплоїдних рослин, наприклад, з роботи Двіведі та ін., Віотесппої. Адм. 33 (2015), 812-29, і з роботи Муровець і Боганець, Біохімія, генетика й молекулярна біологія "Схрещування рослин" (2012), за ред. Абдурахмонова, Глава 5, і вони можуть бути застосовані до цього винаходу.
Інший варіант виконання цього винаходу містить спосіб продукування гібридних рослин за допомогою таких етапів: (а) схрещуванням подвійної гаплоїдної (диплоїдної) рослини за цим винаходом з другою рослиною того ж роду, у переважному варіанті виконання цього винаходу, того ж виду, (5) відбором гібридних рослин з урахуванням бажаної ознаки.
Подвійні гаплоїдні рослини є гомозиготними, і відомий ефект гетерозису виникає під час схрещування двох гомозиготних рослин, що призводить до особливо вираженої ефективності гібридних рослин. Відповідно, гібридні рослини, отримані в такий спосіб, також є об'єктом цього винаходу.
В іншому аспекті, цей винахід стосується використання нуклеїнової кислоти за цим винаходом, вектора за цим винаходом або вищеописаної касети експресії в рослині для надання властивості індуктора гаплоїдів або для підвищення ефективності індукції індуктора гаплоїдів, або до використання нуклеїнової кислоти за цим винаходом, вектора за цим винаходом або раніше описаної касети експресії для продукування рослини або трансгенної рослини, придатної для використання в ролі індуктора гаплоїдів. Крім того, цей винахід також включає використання рослини за вищеописаним винаходом, яка придатна для використання в ролі індуктора гаплоїдів для продукування гаплоїдного запиленого насіння або зародка, або гаплоїдної рослини. Наведені вище пояснення об'єктів і способів цього винаходу також застосовні до згаданих варіантів використання.
В експериментах з рослинами сорго за цим винаходом міг би бути виявлений ген, зокрема, ген пататин-фосфоліпази, що має щонайменше одну мутацію, яка була б придатною для надання рослині властивості індуктора гаплоїдії та ефективності індукції на рівні щонайменше від 0,4 95 до 1,5 95 або більше, унаслідок чого вперше могла б бути запропонована ефективна і, отже, економічно прийнятна система продукування гаплоїдних і подвійних гаплоїдних рослин сорго для гібридного схрещування. Спосіб за цим винаходом для продукування таких індукторів гаплоїдів та ідентифікації пататин-фосфоліпаз у майбутніх сільськогосподарських культурах також може бути перенесений у цю систему.
Наведені нижче приклади демонструють цей винахід, однак вони не обмежують обсяг цього винаходу. Якщо не вказано інше, використовувалися стандартні способи молекулярної біології, див., наприклад, (Сембрук та ін., Молекулярне клонування: Інструкція щодо здійснення лабораторних робіт, 3-є видання, Соїа бргіпд Нагбог І абогаїюгу Ргев55, Колд Спрінг Харбор, Нью-
Йорк, 2001), Фріч та ін., Соїй Зргіпод Нагбог І арогаогу Ргез5: 1989; Майєр та ін., Імунохімічні способи в клітинній та молекулярній біології, за ред., Асадетіс Рге55, Лондон, 1987) і Вейр та ін., Довідник з експериментальної імунології, Томи І-ІМ, ВіасКучеїЇ, за ред., 1986).
ПРИКЛАДИ
1. Ідентифікація пататин-фосфоліпази як мішені для додання сорго властивості індукції гаплоїдів
У ТІШІМО-популяції була виявлена рослина сорго, здатна індукувати гаплоїдію з бо ефективністю приблизно 1 95. Особливу увагу надано різним генам як потенційним мішеням під час пошуку генетичної основи, яка надає цю властивість ідентифікованій рослині сорго. Відбір генів був здійснений на основі того факту, що вони переважно експресуються в репродуктивних органах рослини й певним чином відіграють роль у запиленні, тому що елімінація хромосом може відбуватися за допомогою дефектного або неповного запилення, наприклад, за відсутності або некоректного транспортування генеративних клітин у жіночі насінні зачатки або за допомогою впливу на енергетичний метаболізм пилку, що призводить до гаплоїдного набору хромосом.
Згідно з попередніми дослідженнями в контексті цього винаходу, був згодом виявлений мутований ген, який можна було б ідентифікувати як пататин-фосфоліпазу в сорго за допомогою біоінформаційних методів ВІ А5ТР і Зупіепу 5іцау (дослідження синтенії) (Альтшуль та ін., Мисівїс Асій Кев5. 25 (1997), 3389-3402), нуклеотидна й амінокислотна послідовності якого проілюстровані в ЗЕО 10 Мо: 1 або ЗЕО ІО Мо. 3, і вони були ідентифіковані як пилкоспецифічна експресована пататин-фосфоліпаза за допомогою РНК-секвенування (РНКЗед). Мутований ген мав точкову мутацію в нуклеотидній послідовності пататин- фосфоліпази (див. 560 ІЮО Мо.: 10), що викликало заміну амінокислоти серин на лейцин у положенні 291 (див. БЕО ІЮО Мо.: 12). Точкова мутація в нуклеотидній послідовності пататин- фосфоліпази була ідентифікована з використанням способу РОК з праймерами відповідно до
ЗЕО ІЮО Мозв.: 44 і 45.
Для верифікації того факту, що мутований ген є причиною спостережуваної індукції гаплоїдівб, у генетичний фон неіндуктора ввели локус, що містить ген, за допомогою схрещування та способів біотехнології. Це дало змогу ввести властивість індуктора гаплоїдів в неіндуктор із середньою ефективністю 1,5 95, коли мутація була гомозиготною, і 1,2 95, коли мутація була гетерозиготною. Під час верифікації за мутантним геном могла б слідувати РСЕ. з праймерами відповідно до 5ЕО ІО Мо5.: 36-38. Ефективність індукції потенційного індуктора здійснювали за допомогою запилення рослин сорго мутантними рослинами сорго (що містять мутований ген). У цьому разі використані рослини сорго дикого типу генетично відрізнялися від декількох маркерів лінії потенційного індуктора. Ці маркери були використані для ідентифікації гомозиготних рослин, які згодом були протестовані на предмет гаплоїдії за допомогою проточної цитометрії.
Зо 2. Створення в умовах іп мімо інших індукторів гаплоїдів сорго
Після верифікації, за допомогою раніше описаного експерименту, того факту, що пататин- фосфоліпаза в сорго є придатною мішенню для надання сорго властивості індукції гаплоїдів, у ендогенний ген дикого типу були введені додаткові мутації. Була введена мутація, яка призвела до обміну амінокислоти глютамін (0) на стоп-кодон у положенні 372. Це призвело до вкорочення білка пататин-фосфоліпази й надало рослині сорго, яка містить цю мутацію, властивість індукції гаплоїдів із середньою ефективністю від 1 9о до З 95. Як показано на Фігурі 2, раніше описані мутації 52911 їі 9372510р перебувають поза межами функціонального домену пататин-фосфоліпази. Отже, у наступному експерименті мутації були введені в ген пататин- фосфоліпази, які, з одного боку, викликали обмін амінокислот К590), а з іншого боку, обмін амінокислот М162І. Ці дві мутації перебувають у межах функціонального домену й змушують сорго набути властивості індуктора гаплоїдів, водночас початкові експерименти показали, що швидкість індукції лежить у межах, що перевищують приблизно 0,595. Вирівнювання послідовностей чотирьох мутантів з білком дикого типу показано на Фігурі 1.
Очікується, що додаткові або різні мутації, або комбінація множинних мутацій у пататин- фосфоліпазі призведуть до підвищення або до подальшого підвищення швидкості індукції, таким чином, можуть бути здійснені подальші експерименти для скринінгу ТІСГІМО -популяцій з метою ідентифікації рослини, що має підвищену ефективність індукції.
Крім того, мутації також можуть бути введені в пататин-фосфоліпазу не тільки за допомогою
ТІШІМО або інших способів мутагенезу в різних видів сорго й у видів, отриманих з нього, але, наприклад, додаткові індуктори гаплоїдів можуть бути продуковані за допомогою трансгенної експресії пататин-фосфоліпази. Для цієї мети відповідні гени, включно з їхніми промоторами з ліній індукторів сорго, що мають мутації 52911, К590, М162!І та/або 0О372510р у пататин- фосфоліпазі відповідно до ЗЕО ІЮ Мо.: 3, повинні бути клоновані. Ці гени можуть бути клоновані у відповідний вектор для трансформації й трансформовані в бажану рослину.
Вищеописану властивість індукції рослин сорго можна віднести до проілюстрованих мутацій у пататин-фосфоліпазі, які зазвичай призводять до зміни їхньої біологічної активності. Однак біологічна активність може бути змінена не тільки за допомогою введення описаних мутацій, але також за допомогою численних додаткових способів генної інженерії.
Наприклад, ген дикого типу пататин-фосфоліпази разом з відповідним промотором може бо бути клонований у вектор для трансформації й трансформований у бажану рослину, що призводить до надекспресії пататин-фосфоліпази. Крім того, активність пататин-фосфоліпази можна знизити за допомогою РНК-інтерференції. Для цього, наприклад, потрібно продукувати шпилькові конструкції, які потім клонуються у відповідний вектор для трансформації й трансформуються в бажану рослину, включно з відповідним промотором і термінатором, які забезпечують здійснення транскрипції шпилькової конструкції до або під час утворення пилку. В альтернативному варіанті виконання цього винаходу, можуть бути виявлені нокаутні мутанти, які ще більше знижують активність. 3. Створення в умовах іп мімо нових індукторів гаплоїдів
Перші дослідження в контексті цього винаходу дають розумні підстави припускати, що деяким іншим сільськогосподарським культурам можливо надати властивість індукції гаплоїдів або поліпшення цієї властивості за допомогою модифікацій пататин-фосфоліпази, зокрема, за допомогою вищеописаних відповідних мутацій для рослини сорго або відповідно до способу за вищеописаним винаходом. Це - гени-мішені, що кодують передбачувані пататин-фосфоліпази, які мають одну з таких амінокислотних послідовностей у соняшнику (ЗЕО ІЮ Мо.: 18), ячмені (ЗЕБЕО ІО Мо: 21) або цукровому буряку, водночас цукровий буряк має дві потенційні фосфоліпази (ЗЕО ІЮ Мо.: 24 і 27). Вирівнювання послідовностей білка із сорго, соняшнику, ячменю й цукрових буряків проілюстровано на Фігурі 2, на якій додатково охарактеризований (жирним шрифтом) передбачуваний функціональний домен. Експресія цих генів у пилку може бути здійснена, наприклад, за допомогою РНКЗед пилку.
Відповідно до вищеописаного способу за цим винаходом, модифікації, які стосуються пататин-фосфоліпази, тепер можна, за допомогою відбору, вводити в соняшник, ячмінь (та інші зернові культури, як-от пшениця, жито й овес) і цукровий буряк. Наприклад, за допомогою вирівнювання послідовностей на Фігурі 2 можна ідентифікувати амінокислоти, відповідні й такі, що обмінюють, амінокислоти в положеннях 291, 59, 162 і 372 відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: 3.
Відповідно, рослини соняшнику, ячменю або зернова культура й рослина цукрового буряку також є об'єктом цього винаходу, які здатні індукувати гаплоїдію й характеризуються тим, що вони мають щонайменше одну модифікацію, одну ендогенну, в переважному варіанті виконання цього винаходу, пилкоспецифічну пататин-фосфоліпазу, що експресується, яка відповідно стосується одного з варіантів виконання цього винаходу, охарактеризованих у вищевказаних
Зо пунктах (| або у формулі винаходу, зокрема, для рослин сорго та/або для рослин, одержуваних способом за вищеописаним винаходом або описаних у формулі винаходу. Уже є перші показники, які свідчать, що обміни амінокислот у положенні 75 (аспарагінова кислота (0) замінюється аспарагіном (М) (075М)), у положенні 79 (гліцин (5) замінюється аргініном (К) (279К)) та/або в положенні 203 (пролін (Р) замінюється лейцином (І) (Р20О3І)3) амінокислотної послідовності відповідно до 5ЕО ІЮО Мо.: З також можуть надати індукцію гаплоїдів як сорго, так і іншим сільськогосподарським культурам. Щ
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕИ
1105 КВСЗААТ СЕ 120» Гаплоїдизація у сорго «1305 КУ/50259РСТ «1505 ЕРІ7158439.4 «1515 2017-02-28 «160» 45 «170» Расепца уетвіоп 3.5 «2105 1 «2115 2031 «2125 ДНК х213» 5оОгеПшт бісоЇог
«400» 1 асесарівсс (а(агасаса авссассаїс (ріс цесс Іссїссіссії савсісаєса 60 сіарісасас яасасссес ааісвайта ааашася сецсвісса аасаагасса 120 і вавсісвасе аєсаїсцаа Пецерас васівааа аєс(цсис айсеіевсс 180 ісвасрарта аріароіарс їсашвеас рабсаассес враріріоісс Праїсвтаат 240 рсерсайво срассіастіа сісйсесее сріссаєрса асрссірсар сасваареся 300 агрессвера рсріврісре серарсссріс ріосіроеос арарерівас роірсіраст 360 рірврасерся всеесассе (ерісіса(с сссрраасса (ссЦрсси ссісварясс 420 7 серрсівсаро арсісврасеро вссерароиц аросісесер асіасисра сіасаїстсс 480 рерасварса ссресееосі саїсассесс аг(есісасся срсссррсаа ррасаростя 540 ссісісіасе сірссаарра саїсаассаа цсіасаєро араацеосссісрсаєсис 600 ссісаазарії гаріссрас а(сссеесся рссрссаце Цеессісрс ацайрає 660 расагесаї всагесарс а(ріса(єріо (аррарсарс аресЦесере ссессаєвіс 720 7 сесесіраре аарссаарої асаасерсаа ріессіссрі аассіраєсарарсаєрсі 780 сррсрарасе ароріварсяе асасрсісас саасріса(с агсссіассіїсвасрісая 840 рсірсірсав сссабсасі (сіссассіа свастіасріасрссессво ссессрісті 900 сагєеаа(аа сайссарсів гасацаце саса(еосів са(оссіасі гаасаєец 960 аашесаре ссаарарсаї рссісіваар аасесесірс (сіссрасрі рівєсаїсрес 1020 7 асріссессе сессрасса ссісссррсе сасіасцсс арассаареа сессресавті 1080 реисаарраас рсрартасаа ссіса(свас ррсерісісе ссессаасааєссеріаай 1140 аацаасіра ааасеаасра асесаацсес агагссаце (ссараарає сваєестіаає 1200
ІРйесцав рсасрісей вссессррсс райесаце сасцесасаестіараст 1260 асерйцесра (гасесаваї сассаараар а(есЦрсса рсаареавраа ррссваврат 1320 7 сіртасссар (ваарссрів раасівссеяс аарцссіро (осіріссаєсрррасврря 1380 ісрасрісво арсаресссі ріасасерся сресарівссі срсерісеоо саїсівссто 1440
Іррассера асаасеесаї ресссссаїс агсрасагстіса(ресеррс вравсістрас 1500 сіррісраса (ссасрісес сесрасвцс сарісесісс асарсвасее свасіассію 1560 сесаєссаре асаасісесі рсасеесесс всерссассе (ррасесеворс расрссврар 1620 і ааса(есева сесісрісео ра(срерорав срора(ссіро сесарсеері ріссароріс 1680 аасрірвавра сарерароеа сраассерів ссіророраат раарсаасес іса(осесіс 1740 рсірерасе сааресарсі сісераррар аррареасаа росісрсрсе ссесассісс 1800 рссасріса рсіссеріво (ессісіара сеіасріріо ссісааароі сіссаа(ріс 1860 єаарараарії гаашіеце ссісацааа аїсцааца ацаайсів (сресівіря 1920 сбсада(ааа асід(асаї (аааааассс рсса(еаасі арйсіарра ааасасесає 1980 врішараа арааааасаї ааасіаайс (аасаааагст (асасассіс 1 2031 «2105» 2 «211» 1314 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» х223» кодує послідовність послідовності ДНК 5огеПшт БісоІог фосфоліпази «400» 2 асерсвассі асчіасісне рсеесвісса Гесаасессї рсарсасеаа ресра(врсс 60 вевавсріве ісерсварсс срісрівсів рерсаравее гїрасереіесі вгасевіввас 120 весевсерса (ссріерісІї са(ссссера ассагссце ссцссісва ресссевсів 180 саррарсіво асерессеяра рецавосіс рсерастасі ісрасіасаєсессряраст 240 7 арсассересе восісаєсас сессагосіс ассесесссе рсаарерасар рсеорссісіс 300 гасесівсса ареасаєсаа ссаайсіас аєерараай есссісесає сисссісаа 360 аарарсарса ррсЦесерос сессагрісс всесіварра арссаареіа саасвясаат 420 (вссіссріа ассірасаї рарса(рсіс ресрарасва рерірарсва сасесісасс 480 аасрісаєса (сссгасси свасрісаро сіосіосарс ссаїсаєсИ сіссассіас 540 7 расрссаара рсаїессісї раараасесе сірсісіссе асрісівсаєсерсасрісс 600 вссрсессра ссіассіссс ррсесастіас цссарасса аррасессрр сарівтсаат 660 рваасесрарі асаассісаї свасерсері рісессесса асааіссвас расррйося 720 асрасрсава ісассаараа ра(есЦесс арсаарравра арессрарра рсірсіассса 780 рірбаарссрі реаасівсся саарцессіо ріссіріссаісерррасере рісвасріст 840 варсареосс Іріасасеес рсресарівс ісесерівоо всаїсіоссе рірваїссро 900 аасаасреса (сесссссаї са(срасаєс цса(ресео сравсісввра ссіврісвас 960 асссасріся ссрсрарії ссарісесіс сасарсрасе рсвасіассі рсрсаїссає 1020 расаасісес (осасресес срсеррссасс ріврасесео свасерссеяра раасаєвстт 1080 асерсісріся рраїсрроса всера(рсів рсесарсеро (сіссареоі саасеістат 1140 асарреаррі асеаассері вссіресоаа рраарсаасе сіра(рсесі срсівоваєс 1200 рсааресарс ісісерарра раррареаса аресісесес вссесассіс сессагстіс 1260 арсіссеррів рівссістар асріасрірі вссісаааре (сіссааірі сіаа 1314 «210» З «2115» 437 «2125 ПРТ «213» 5огеПшт бБісоЇог «400» з
Меї Аа Тг Туг Туг 5ег 5ег Аге Аге Рго Суб Авп Аа Сув 5ег ТІг 1 5 10 15
Гуз АІа Меї Аа О1Іу 5ег Маї МаїЇ О1УуУ Си Рго Маї Маї І еп О1у СЇп 20 25 30
Ате Маї Тіг МУаїЇ І еи ТІг МУаїЇ Авр СТу ОТу О1у Це Аге ОС1уУ Гей Це 35 40 45
Рго СТу Ті Це Геп Аа Ре Гей Си Аа Аге Геп Сп Сп Гей Авр 50 55 60
ОІу Рго Сіш Маї Аге І еп Аа Авр Туг Ре Авр Туг Пе Аа СІу ТОг 65 70 75 80
Зег Тіг О1Іу СІу Геи Це Тіг Аа Меї І еи ТНг Аа Рго О1у Гуз Авр 85 90 95
Атге Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз Авр Це Авп СіІп Ре Туг Меї Сп 100 105 110
Авп Сув Рго Аге Це Ре Рго Сіп Гуз 5ег 5ег Аге Гей Аа Аа Аа
БО 115 120 125
Меї 5ег Аа І ей Аге ув Рго Аге Туг Авп С1у Муз Сув Гей Аге Авп 130 135 140
Ге Це Меї 5ег Ме( І еи СТу Си ТНг Аге Маї 5ег Авр ТП Гецп ТНг 145 150 155 160
Азвп Маї Пе Це Рго ТІг Ре Авр Маї Аге І еи Геп Сп Рго Це Це 165 170 175
РНе 5ег Тіг Туг Авр Аа Гуз 5ег Меї Рго І ей Гуз Авп Аа Г еп І еп 180 185 190
Зег Авр МУаї Сув Це СІу Тіг 5ег Аа Аа Рго Тіг Туг І еи Рго Аа 195 200 205
Нів Туг Ре СІп Тнг Гуз Авр Аа СІу 5ег ОТу Гуз ОЇи Аге Оп Туг 210 215 220
Авп Гей Це Авр СІу ОТу Маї Аа Аа Авп Авп Рго Тіг Меї Маї Аа 225 230 235 240
Меї Тіг Сп Це Тіг Гуз був Ме ГГ еп Аа 5ег Гув СОТи Гуз Аа Си 245 250 255
СІи Гей Туг Рго МаїЇ Гув Рго Тгр Азп Сув Аге Муз Ре ГГ еи Маї І еп 260 265 270
Зег Це СОТу Тіг СТу 5ег Тіг 5ег ОЇш СІп О1уУ Гей Туг Тіг Аа Аге
Зо 215 280 285
СІп Сув 5ег Аге Ттр СТу Це Сув Аге Ттр Це Аге Авп Авп С1у Меї 290 295 300
Аа Рго Це Це Авр Пе Ре Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еп Маї Авр 305 310 315 320
Пе Нів МУаї Аа Аа Меї Ре Сіп 5ег І еи Ні» 5ег Авр О1у Авр Туг 325 330 335
І еи Аге Пе Сіп Авр Авп 5етг ГГ еи Нів О1у Аа Аа Аа Тіг Маї Авр 340 345 350
Аа Аа Тіт Рго СЇши Авп Меї Аге Тіт І еи Маї О1у Це О1у Ой Аге 355 360 365
Ме еп Аа Сіп Аге Маї 5ег Аге МаїЇ Авп МаїЇ СЇи Тіг О1у Аге Туг 370 375 380
СІ Рго Маї Рго С1Іу ОЇи СІу 5ег Авп Аа Авр Аа Геп Аа СТУ Це
385 390 395 400
Аа Аге Сіп І еи 5ег СЇи СІ Аге Аге Тіг Аге Гей Аа Аг Аге ТНг 405 410 415 бег АІа Це Маї 5ег 5ег О1у СІу Аа 5ег Аге Агео ТІг Сув Аа 5ег 420 425 430
Гуз МУаїЇ 5ег Авп Маї 435 «210» 4 «2115 2031 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність «220» «223» геномна ДНК мутованого 5огеТшт БісоЇІог фосфоліпази К590 «400» 4 асесарівсс га(асасаса арссассаїс грісРцесс (сеасеаїссї сарсісаєса 60 сіарісасас яасасссес ааісвайта ааашася сецсвісса аасаагасса 120 вавсісвасе аєсаїсцаа Пецерас васівааа аєс(цсис айсеіевсс 180 ісвасрарта аріароіарс їсашвеас рабсаассес враріріоісс Праїсвтаат 240 врсеесайсве срассіасіа сісйсесре срісса(рса асессівсар сасвааряся 300 абрессеорва рсріврісре сеарсссріс ріосірреос арарерівас роіосіваст 360 рірврасерся всеесассе (ерісіса(с сссрраасса (ссЦрсси ссісварясс 420 сарсірсаре арсірвасее вссреароц аросісесее асіасисва сіасаїстсс 480 рерасварса ссресееосі саїсассесс а(есісасся срсссррсаа ррасаресет 540 ссісістасе сірссаароа сабсаассаа цсіасаєре араацесссісвсаєсис 600 ссісаааарі раріссрас а(сссеорссе рссессаце Цеоссісрс ацайеає 660 расагесаї всагесарс а(ріса(єріо (аррарсарс аресЦесере ссессаєвіс 720 сесесіраре аарссаарої асаасерсаа рівссіссрі аассіраєсарарсаєвсі 780 сррсрарасе ароріварсяе асасрсісас саасріса(с агсссіассіїсвасрісая 840 всірсівсар сссаєсасі (сіссасса срасетіасеіасессессевр ссессрісті 900 5О саграйаа: сайісарсія їасайаце сасагросів са(ессіасі раасаєеєці 960 аашесаре ссаарарсаї рссісіваар аасесесірс (сіссрасрі рівєсаїсрес 1020 асріссессе сессрасса ссісссррсе сасіасцсс арассаареа сессресавті 1080 реисаарраас рсрартасаа ссіса(свас ррсерісісе ссессаасааєссетіаай 1140 аацаасіра ааасеаасра асесаацсес агабссаце (ссараарає сваєестіаає 1200 (ейесцар рсасрісец рссессресс райесаця сасцесаса (рсріавася 1260 асерйцесра (гасесаваї сассаараар а(есЦрсса рсаареавраа ррссваврат 1320 сіртасссар (гаарссріс раасівєссеяс аарцссіво (осіріссаєсрррасврря 1380 ісрасрісво арсаресссі ріасасерся сресарівссі срсерісеоо саїсівссто 1440 (рвраїссера асаасресаї восссссас а(сеасагсі (са(ресеврс рарсістрас 1500 сіррірраса (ссасрісес сесеа(рис сарісесісс асарсрасре срасіассія 1560 сесаєссаре асаасісесі рсасеесесс всерссассе (ррасесеворс расрссврар 1620 ааса(есева сесісрісео ра(срерорав срора(ссіро сесарсеері ріссароріс 1680 аасрірвавра сарерароеа сраассерів ссіреораат раарсаасес іра(осесіс 1740 всірерасяе сааресарсі сісерареар арраррасаа ресісрсесе ссесассісс 1800 рссабсеіса рсіссеріре (ессіставра стасеіоіе ссісааареї сіссааіріс 1860 єаарараарії гаашіеце ссісацааа аїсцааца ацаайсів (сресівіря 1920 сісааагааа асіа(аса: (аааааассс рссасеаасі арйсіарва ааасасесає 1980 вріШЩараа арааааасаї азасіаацє (аасаааате (асасассіс 2031 «2105» 5 «2115» 1314 «212» ДНК «2135» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК 5огеПшт бБісоІог фосфоліпази мутованої к590
«400» 5 асерсвассі асчіасісне рсеесвісса Гесаасессї рсарсасеаа ресра(врсс 60 вевавсеіве їсвесравсс свісеіесів вреесарарее їрасереіесі васеріврас 120 весеесерса (ссср ріс сагссссерра асса(єссце ссиссісвра весссавсів 180 саррарсіво асерессеяра рецавосіс рсерастасі ісрасіасаєсессряраст 240 авсассерсе весісаєсас сессаїесіс ассесессся всааревасав, ясевсссіс 300 гасесівсса ареасаєсаа ссаайсіас аєерараай рсссісесає сисссісаа 360 аарарсарса рерсЦесеос сессарісс всесіварра арссаареіа саасвесаар 420 7 (вссіссріа ассірасаї рарса(рсіс ресрарасва рерірарсва сасесісасс 480 аасрісаєса (сссгассиї свасрісаре сіосіосарс ссабсаєсИ сіссассіас 540 рвасессаара рса(рвссісї раараасесяе сіосісіссе асрівіссаєсресастісс 600 вссрсессра ссіассіссс ррсесастіас цссарасса аррасессрр сарівтсаат 660 раасесрарі асаассіса( срасеесері рісессрсса асааіссвас рагсецеся 720 7 асрасрсава ісассаараа ра(есЦесс арсаарравра арессрарра рсірсіассса 780 рірбаарссрі реаасівсся саарцессіо ріссіріссаісерррасере рісвасріст 840 рарсарресс (сіасасеос рсеррсарірс ісесеріворо врсагсівссе рірраїссто 900 7 аасаасреса (сесссссаї саєсрасаєс цса(ресео срарсісвра ссіврісвас 960 асссасріся ссрсрарії ссарісесіс сасарсрасе рсвасіассі рсрсаїссає 1020 расаасісес (всасеесрс сесеррссасс рірсвасесее срасрссера раасаєрстя 1080 асерсісріся рраїсрроса всера(рсів рсесарсеро іріссарері саасрістат 1140 асарерваррі асраассері вссіресоаа рраарсаасе сіра(ссесі срсівосаєс 1200 7 рсааресарс ісісерарра раррареаса аресісесес вссесассіс сессагстіс 1260 арсіссеррів рівссістар асріасрірі вссісаааре (сіссааірі сіаа 1314 «2105 6 «211» 437 «212» ПРТ «213» штучна послідовність
АБО «2205 «223» амінокислотна послідовність мутованого 5огеПпшт БісоІот фосфоліпази К590 «400» 6
Меї Аа Тіг Туг Туг 5ег 5ег Аге Аге Рго Суб Авзп Аа Сув 5ег ТІг
Гуз АІа Меї Аа ОС1у 5ег Маї Уаї О1У Си Рго Маї Маї еп О1у СіІп 5
Ате Маї Тіг МУаїЇ І еи ТІг МУаїЇ Авр СТу ОТу О1у Це Аге ОС1уУ Гей Це
Рго СТУ Ті Це Геп Аа Ре Гей ОЇи Аа Сіп Гей Сп Сп Гей Авр 10 50 55 60
О1Іу Рго Сни Маї Ага ГІ еп Аа Авр Туг Ре Авр Туг Пе Аа СІу ТОг 65 70 75 80 15 бег г Оу О1у Геи Це Тіг Аа Ме І еи ТПг Аа Рго С1у Гуз Авр 85 90 95
Атге Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз Авр Це Авп СіІп Ре Туг Меї Сп 100 105 110 20
Авп Сув Рго Аге Це Ре Рго Сіп Гуз 5ег 5ег Аге Гей Аа Аа Аа 115 120 125
Меї 5ег Аа І ей Аге ув Рго Аге Туг Авп С1у Муз Сув Гецп Аге Авп 25 130 135 140
І и Це Меї 5ег Ме І еп О1у ОЇи Тіг Аге Маї 5ег Авр ТНг Гей Трг 145 150 155 160 30 Авп МаїЇ Це Пе Рго Тіт Ріє Авр Маї Аге Геп Гей Сп Рго Це Це 165 170 175
РНе 5ег Тіг Туг Авр Аа Гуз 5ег Меї Рго Гей Гув Авп Аа ГГ еп І ей 180 185 190 35
Зег Авр Маї Сув Це СІу Тіг 5ег Аа Аа Рго Тіг Туг І еи Рго Аа 195 200 205
Нів Туг Ре СІп Тнг Гув Авр Аа С1Іу 5ег О1уУ Гуз ОЇи Аге Оп Туг 40 210 215 220
Авп І еп Це Авр СІу О1у Маї Аа Аа Авп Авп Рго ТІг Меї Маї Аа 225 230 235 240 45 Ме Ті СіІп Це Тіпг був був Мес І ей Аа 5ег Гуз ОЇТи Гув Аа ОїЇй 245 250 255
СІи Гей Туг Рго МаїЇ Гуз Рго Тгр Азп Сув Аге Гуз Ріє Г еп Маї І еп 260 265 270
Зег Це СТУ Тіт ОС1у 5ег Тіг 5ег ОЇш СОЇп ОС1уУ Гей Туг Тіг Аа Аге 2175 280 285
СІп Сув 5ег Аге Ттр СТу Це Сув Аге Тгр Це Аге Авп Авп СТу Меї 290 295 300
Аа Рго Це Це Авр Це Ріе Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еи Маї Авр 305 310 315 320
Це Нів МаїЇ Аа Аа Меї Ре Сіп 5ег І еи Нів 5ег Авр С1у Авр Туг 325 330 335
І еи Аге Пе Сіп Авр Авп 5етг ГГ еи Нів О1у Аа Аа Аа Тіг Маї Авр 340 345 350
Аа Аа Тіт Рго СЇши Авп Меї Аге Тіт І еи Маї О1у Це О1у СЇмп Аге 355 360 365
Ме еп Аа Сіп Аге Маї 5ег Аге МаїЇ Авп МаїЇ СЇи Тіг О1у Аге Туг 370 375 380
СІи Рго Маї Рго Су ОЇи ОС1у б5ег Авп Аа Авр Аа Гей Аа СТу Це 385 390 395 400
Аа Аге Сіп І еи 5ег СЇи СІ Аге Аге Тіг Аге Гей Аа Аг Аге ТНг 405 410 415
Зег Аа Це МУаї 5ег 5ег ОТу Оу Аа 5ег Аге Аге ТНг Сув Аа 5ег 420 425 430 з0 ув МаїЇ бег Авп Маї 435 «2105 7 «2115» 2031 х2125 ДНК «2135 штучна послідовність «220» «223» геномна ДНК мутованого 5огеТшт бБісоЇог фосфоліпази У1621І «400» 7 асесарівсс (а(агасаса авссассаїс (ріс цесс Іссїссіссії савсісаєса 60 сіарісасас яасасссес ааісвайта ааашася сецсвісса аасаагасса 120 вавсісвасе аєсаїсцаа Пецерас васівааа аєс(цсис айсеіевсс 180 ісвасрарта аріароіарс їсашвеас рабсаассес враріріоісс Праїсвтаат 240 рсррсайаво срассіасіа сісйсесео сріссаєрса асессіссар сасваареся 300 агрессвера рсріврісре сварсссріс ріосірреос арарерівас роіосіваст 360 рірврасерся всеесассе (ерісіса(с сссрраасса (ссЦрсси ссісварясс 420 і серрсівсаро арсісврасеро вссерароиц аросісесер асіасисра сіасаїстсс 480 рерасварса ссресееосі саїсассесс а(есісасся срсссррсаа ррасаресет 540 ссісбісасе сірссаареа са(саассаа цсіасаєре араацесссісвсаєсис 600 ссісаазарії гаріссрас а(сссеесся рссрссаце Цеессісрс ацайрає 660 расагесаї всагесарс а(ріса(єріо (аррарсарс аресЦесере ссессаєвіс 720 7 сесесіраре аарссаарої асаасерсаа рівссіссрі аассіраєсарарсаєвсі 780 сресрарасе ареріварсяе асасесісас саасаєсаєс абсссіассіісврасрісає 840 всірсірсав сссабсасі (сіссассіа свастіасріасрссессео ссессрісті 900 сагєеаа(аа сайссарсів гасацаце саса(росіє са(есстасі граасаєеці 960 аашесаре ссаарарсаї рссісіваар аасесесірс (сіссрасрі рівєсаїсрес 1020 7 асріссессе сессрасса ссісссррсе сасіасцсс арассаареа сессресавті 1080 реисаарраас рсрартасаа ссіса(свас ррсерісісе ссессаасаа ссееіаай 1140 аацаасіра ааасеаасра асесаацсес агагссаце (ссараарає сваєестіаає 1200
ІРйесцав рсасрісей вссессррсс райесаце сасцесасаестіараст 1260 асерйцесра (гасесаваї сассаараар а(есЦрсса рсаареавраа ррссваврат 1320 7 сіртасссар (гаарссріс раасівєссеяс аарцссіво (осіріссаєсрррасврря 1380 ісрасрісво арсаресссі ріасасерся сресарівссі срсерісеоо саїсівссто 1440
Ірра(ссера асаасеесаї ресссссаїс агсрасагстісагресеррс вравсістрас 1500 сіррісраса (ссасрісес сесрасвцс сарісесісс асарсвасее срасіассів 1560 сесаєссаре асаасісесі рсасеесесс всерссассе (ррасесеворс расрссврар 1620 7 ааса(есева сесісрісео ра(срерорав срора(ссіро сесарсеері ріссароріс 1680 аасрірвавра сарерароеа сраассерів ссіреораат раарсаасес іра(осесіс 1740 всірерасяе сааресарсі сісерареар арраррасаа ресісрсесе ссесассісс 1800 рссасріса рсіссеріво (ессісіара сеіасріріо ссісааароі сіссаа(ріс 1860 єаарараарії гаашіеце ссісацааа аїсцааца ацаайсів (сресівіря 1920 сісаайгсааза асідсаса (аааадассс вссасраасі агисіарра ааасасесає 1980 врішараа арааааасаї ааасіаайс (аасаааагст (асасассіс 1 2031 «2105 8 «2115 1314 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК 5огеПшт бБісоІог фосфоліпази мутованої
М1621 «400» 8 асерсвассі асчіасісне рсеесвісса Гесаасессї рсарсасеаа ресра(врсс 60 7 вевавсеіве їсвесравсс свісеіесів реесарарее ггасеріссі врасеріввас 120 весевсерса (ссріерісІї са(ссссера ассассце ссцссісва ресссеесів 180 саррарсіро асреоссера воЦаросіс рсерастасі (срастасаєсессрртаст 240 арсассересе восісаєсас сессагосіс ассесесссе рсаарерасар рсеорссісіс 300 гасесівсса ареасаєсаа ссаайсіас аєерараай рсссісесає сисссісаа 360 7 аарарсарса ресЦесеос сессаїрісс рсрсірарра арссаареіа саасврсаар 420 (вссіссріа ассірасаї рарса(рсіс ресрарасва рерірарсва сасесісасс 480 аасагсасса (сссіасси сврасрісаре сірсіосарс ссабсаєсИ сіссассіас 540 расрссаара рсаїгессісї раараасесе сірсісіссе асрісівсаї сеосасрісс 600 вссрсессра ссіассіссс ррсесастіас цссарасса аррасессрр сарівтсаат 660 ваасесрарі асаассісаї срасеесері рісессесса асааіссрас рассеЦеся 720 асрасрсава ісассаараа ра(есЦесс арсааррара арессрарра всіріассса 780 рірбаарссрі реаасівсся саарцессіо ріссіріссаісерррасере рісвасріст 840 7 рарсарресс (сіасасеос рсеррсарірс ісесеріворо врсагсівссе рірраїссто 900 аасаасреса (сесссссаї саєсрасаєс цса(ресее срарсісвра ссіврісвас 960 абссасрісе ссрсраії ссарісесіс сасарсрасе всеасіассі рсесаїссар 1020
Зо расаасісес (осасресес срсеррссасс ріврасесео свасерссеяра раасаєвстт 1080 асерсісріся рраїсррора всеоа(рсів рсесарсеро (ріссарорі саасяіссатє 1140 асареваррі асраассері рссіреосаа гоаарсаасе сіра(рсесі сесівоваїс 1200 рсааресарс ісісерарра раррареаса аресісесес вссесассіс сессагстіс 1260 арсіссро(е рірссістар асріасріві рссісаааре ісіссаасяї сіаа 1314 «2105 9 «2115 437 «212» ПРТ «213» штучна послідовність «220» «223» амінокислотна послідовність мутованого 5огейшит БісоЇог фосфоліпази
М1621 «4005» 9
Меї Аа Тг Туг Туг 5ег 5ег Аге Аге Рго Суб Авп Аа Сув 5ег ТІг 5 10 15
Гуз АІа Меї Аа О1Іу 5ег Маї МаїЇ О1Уу Он Рго Маї Маї еп О1у СЇп 20 25 30
Ате Маї Тіг МУаїЇ І еи ТІг МУаїЇ Авр СТу ОТу О1у Це Аге ОС1уУ Гей Це
Ко 35 40 45
Рго СТу Ті Це Геп Аа Ре Ге ОЇ Аа Аге І еи СІп Сп Гей Авр 50 55 60
ОІу Рго СЇш Маї Аге І еп Аа Авр Туг Ре Авр Туг Пе Аа СІу ТОг 65 70 75 80
Зег Тіг О1Іу С1у Геп Це Тіг Аа Ме І еи Тг Аа Рго СОІУ Гуз Авр 85 90 95
Атге Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз Авр Це Авп СіІп Ре Туг Меї Сп 100 105 110
Авп Сув Рго Аге Це Ре Рго Сіп Гуз 5ег 5ег Аге Гей Аа Аа Аа 115 120 125
Меї 5ег Аа І ей Аге ув Рго Аге Туг Авп С1у Муз Сув Гей Аге Авп 130 135 140
І еп Це Меї 5ег Ме І еи СІу СЇи ТІг Аге Маї 5ег Авр Тіг І еи ТОг
145 150 155 160
Азвп Це Це Це Рго ТІг Ріе Авр Маї Аге Ге Геп Оп Рго Це Це 165 170 175
РНе 5ег ТПг Туг Авр Аа Гуз 5ег Меї Рго Гей Гуз Авп Аа ГГ еп І ей 180 185 190
Зег Авр МУаї Сув Це СІу Тіг 5ег Аа Аа Рго Тіг Туг І еи Рго Аа 195 200 205
Нів Туг Ре СІп Тнг Гув Авр Аа С1Іу 5ег О1уУ Гуз ОЇи Аге Оп Туг 210 215 220
Азвп Ге Це Авр СІу ОСІу Маї Аа Аа Авп Авп Рго Тіг Меї Маї Аа 225 230 235 240
Меї Тіг Сп Це Тіг Гуз був Ме ГГ еп Аа 5ег був ОЇш Гуз Аа Си 245 250 255
СІи Гей Туг Рго МаїЇ Гув Рго Тгр Азп Сув Аге Муз Ре ГГ еи Маї І еп 260 265 270
Зег Це СТУ Тіт ОС1у 5ег Тіг 5ег ОЇш СОЇп ОС1уУ Гей Туг Тіг Аа Аге 2175 280 285
СІп Сув 5ег Аге Ттр СТу Це Сув Аге Ттр Це Аге Авп Авп С1у Меї 290 295 300
Аа Рго Це Це Авр Пе Ре Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еп Маї Авр 305 310 315 320
Пе Нів МУаї Аа Аа Меї Ре Сіп 5ег І еи Ні» 5ег Авр О1у Авр Туг 325 330 335
І еи Аге Пе Сіп Авр Авп 5етг ГГ еи Нів О1у Аа Аа Аа Тіг Маї Авр 340 345 350
Аа Аа Тіт Рго СЇши Авп Меї Аге Тіт І еи Маї О1у Це О1у Ой Аге 355 360 365
Ме еп Аа Сіп Аге Маї 5ег Аге МаїЇ Авп МаїЇ СЇи Тіг О1у Аге Туг 370 375 380
СІ Рго Маї Рго С1Іу ОЇи ОІу б5ег Авп Аа Авр Аа Гей Аа СТУ Це 385 390 395 400
Аа Аге Сіп І еи 5ег СЇи СІ Аге Аге Тіг Аге Гей Аа Аг Аге ТНг 405 410 415 5ег Аа Це Маї 5ег 5ег СОТу О1у Аа 5ег Аге Аге Тіг Сув Аа 5ег
420 425 430
Гуз МУаїЇ 5ег Авп Маї 435 «210» 10 «2115 2031 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність «220» «223» геномна ДНК мутованого б5огеТшт БісоЇІог фосфоліпази 52911, «400» 10 асесарівсс га(асасаса арссассас (рісецесс іссіссіссї сарсісаєса 60 сіарісасас яасасссес ааісвайта ааашася сецсвісса аасаагасса 120 вавсісвасе аєсаїсцаа Пецерас васівааа аєс(цсис айсеіевсс 180 (Ісвасрарта аріароіарс їсашеас рабсаассес раріріоіес Цеаїсваат 240 врсеесайсве срассіасіа сісйсесре срісса(рса асессівсар сасвааряся 300 абврссеворва рсріврісре серарсссріс ріссірроос арареоісас роівсіваст 360 рірврасерся всеесассе (ерісіса(с сссрраасса (ссЦрсси ссісварясс 420 серрсівсарео арсісврасеро вссерароц аросісесер асіасисра сіасаїстсс 480 рерасварса ссресееосі саїсассесс а(рсісасся срсссррсаа ррасаросяв 540 ссісістасе сірссаароа сабсаассаа цсіасаєре араацесссісвсаєсис 600 ссісаааарі раріссрас а(сссеорссе рссрссацео Цеоессісрсацайраїєс 660 расагесаї всагесарс а(ріса(єріо (аррарсарс аресЦесере ссессаєвіс 720 сесесіраре аарссаарої асаасерсаа рівссіссрі аассіраєсарарсаєвсі 780 сррсрарасе ароріварсяе асасесісас саасрісас агсссіассі(свасрісар 840 всірсівсар сссаєсасі (сіссасса срасетіасеіасессессевр ссессрісті 900 саграйаа: сайсарсія гасайаце сасагресів сасоссіасі ваасаїецші 960 аашесаре ссаарарсаї рссісіваар аасесесірс (сіссрасрі рівєсаїсрес 1020 асріссессе сессрасста ссісссррсе сасіасцсс арассаареа сессврсаті 1080 рерсаарраас рсрартасаа ссіса(свас ресерірісе ссессаасаа ссреіаай 1140 аацаасіра ааасеаасра асесаацсес агабссаце (ссараарає сваєестіаає 1200
І8Цесцар рсасрісви рссессррсс райесаце сасцесаса (рсріавася 1260 асерйцесра (гасесаваї сассаараар а(есЦрсса рсаареавраа ррссваврат 1320 сіртасссар (ваарссріс раасієссеяс аарцссіво (осіріссаєсрррасврря 1380 (Ісвасрісето арсаресссі ріасасерся сресаріосі (рсерісроо са(сіоссвтя 1440 (рвраїссера асаасресаї восссссас а(сеасагсі (са(ресеврс рарсістрас 1500 сіррірраса їссасрісес сесвагвицс сарісесісс асарсрасее срасіассів 1560 сесаєссаре асаасісесі рсасеесесс всерссассе (ррасесеворс расрссврар 1620 ааса(есева сесісрісво раїсерросар сера(грсіво срсарсерері ріссареріс 1680 аасрірвара сарорароа сраассерів ссіроораар раарсаасесіса(осесіс 1740 всірерасяе сааресарсі сісерареар арраррасаа ресісрсесе ссесассісс 1800 рссасріса рсіссеріво (ессісіара сеіасріріо ссісааароі сіссааіївіс 1860 єаарараарії гаашіеце ссісацааа аїсцааца ацаайсів (сресівіря 1920 сісааагааа асіагасас (аааааассс рссасеаасі арйсіарра ааагасесає 1980 врІШЩараа арааааасаї азасіааціє (аасаааате (асасассіс 2031 «210511 «2115 1314 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК 5огеПшт бБісоІог фосфоліпази мутованої 52911, «4005 11 асерсвассі асчіасісне рсеесвісса Гесаасессї рсарсасеаа ресра(врсс 60 вевавсеіве їсвесравсс свісеівсів веесараєее їгасеріссі васеріврас 120 весевсерса (ссріерісІї са(ссссера ассагссце ссцссісва ресссевсів 180 саррарсіво асерессеяра рецавосіс рсерастасі ісрасіасаєсессряраст 240 арсассеррсе росісаєсас сессаїосіс ассесесссе рсааррасар рсеессісіс 300 гасесівсса ареасаєсаа ссаайсіас аєерараай рсссісесає сисссісаа 360 аарарсарса рерсЦесеос сессарісс всесіварра арссаареіа саасвесаар 420 (вссіссріа ассірасаї рарса(есіс росрарасра реріварсра сасрсісасс 480 аасрісаєса (сссгасси свасрісаро сіосіосарс ссабсаєси сіссасстас 540 расрссаара рсаїессісї раараасесе сірсісіссе асрісівсаєсерсасрісс 600 вссрсессра ссіассіссс ррсесастіас цссарасса аррасессрр сарівтсаат 660 раасесрарі асаассіса( срасерсері рісессесса асааіссвас рагсоцяся 720 абрасесара (сассаараа ра(есцЦесс арсааррара арессрарра рсіріассса 780 рірбаарссрі реаасівсся саарцессіо ріссіріссаісерррасере рісвасріст 840 рарсарресс (сіасасерс рсерсарівсс Песерівоо рсаїсівссе рірраїссво 900 аасаасреса (сесссссаї саєсрасаєс цса(ресее срарсісвра ссіврісвас 960 асссасріся ссрсрарії ссарісесіс сасарсрасе рсвасіассі рсрсаїссає 1020 васаасісес (всасеесрс сесеррссасс рірсвасесее срасрссера раасаєрстя 1080 асерсісріся рраїсррора всеоа(рсів рсесарсеро (ріссарорі саасвірватє 1140 асарерваррі асраассері вссіресоаа рраарсаасе сіра(ссесі срсівосаєс 1200 рсааресарс ісісерарра раррареаса аресісесес вссесассіс сессагстіс 1260 арсіссеррів рівссістар асріасрірі вссісаааре (сіссааіяі сіаа 1314 «2105» 12 «2115» 437 «2125 ПРТ «2135 штучна послідовність «2205 «223» амінокислотна послідовність мутованого 5огейшт БісоІог фосфоліпази 52911, «400» 12
Меї Аа Тг Туг Туг 5ег 5ег Аге Аге Рго Сув Азп Аа Сув 5ег ТІг 1 5 10 15
Гуз АІа Меї Аа ОС1у 5ег Маї Уаї О1У Си Рго Маї Маї еп О1у СіІп 20 25 30
Ате Маї Тіг МУаїЇ І еи ТІг МУаїЇ Авр СТу СТу О1у Це Аге С1Ту Гец Це 35 40 45
Рго СТу Ті Це Геп Аа Ре Гей Си Аа Аге Геип Сп Си Гей Авр 50 55 60
СОІУ Рго Сни Маї Ага ГГ еп Аа Авр Туг Ре Авр Туг Пе Аа ОСІу Тіг 65 70 75 80 бег г О1у О1у Геи Це Тіг Аа Ме І еи ТПг Аа Рго С1у Гуз Авр 85 90 95
Атге Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз Авр Це Авп Сп Ре Туг Меї Си 100 105 110
Авп Сув Рго Аге Це Ре Рго Сіп Гуз 5ег 5ег Аге Гей Аа Аа Аа 115 120 125
Меї 5ег Аа І ей Аге ув Рго Аге Туг Авзп С1у Гуз Сув Гей Аге Авп 130 135 140
І и Це Меї 5ег Ме І еп О1у ОЇи Тіг Аге Маї 5ег Авр ТНг Гей Трг 145 150 155 160
Авп МаїЇ Це Пе Рго Тіт Ре Авр Маї Аге Геп Гей Сп Рго Це Це 165 170 175
РНе 5ег Тіг Туг Авр Аа Гуз 5ег Меї Рго Гей Гув Авп Аа ГГ еп І ей 180 185 190
Зо
Зег Авр МУаї Сув Це СІу Тіг 5ег Аа Аа Рго Тіг Туг І еи Рго Аа 195 200 205
Нів Туг Ре СІп Тнг Гув Авр Аа С1Іу 5ег О1уУ Гуз ОЇи Аге Оп Туг 210 215 220
Авп І еп Це Авр О1у О1у Маї Аа Аа Авп Авп Рго Тіг Меї Маї Аа 225 230 235 240
Ме Ті СіІп Це Тіпг був був Мес І ей Аа 5ег Гуз ОЇТи Гув Аа ОїЇй 245 250 255
СІи Гей Туг Рго Маї Гув Рго Тгр Азп Сув Аге Муз Ре І еи Маї І еп 260 265 270
Зег Це СТУ Тіт ОС1у 5ег Тіг 5ег ОЇш СОЇп ОС1уУ Гей Туг Тіг Аа Аге 2175 280 285
СІп Сув Гей Аге Тгр СТУ Це Сув Аге Ттр Це Аг Авп Авп СТу Меї 5О 290 295 300
Аа Рго Це Це Авр Це Ріе Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еи Маї Авр 305 310 315 320
Це Нів Маї Аа Аа Меї Ре Сіп 5етг І еи Нів 5ег Авр О1у Авр Туг 325 330 335
І еи Аге Пе Сіп Авр Авп 5етг ГГ еи Нів О1у Аа Аа Аа Тіг Маї Авр 340 345 350
Аа Аа Тіт Рго ОЇй Авзп Меї Аге Тіг І еи Маї СТУ Це О1у Сіи Аг 355 360 365
Ме еп Аа Сіп Аге Маї 5ег Аге МаїЇ Авп МаїЇ СЇи Тіг О1у Аге Туг 370 375 380
СІ Рго Маї Рго С1Іу ОЇи ОІу б5ег Авп Аа Авр Аа Гей Аа СТУ Це 385 390 395 400
Аа Аге Сіп І еи 5ег СЇи СІ Аге Аге Тіг Аге Гей Аа Аг Аге ТНг 405 410 415
Зег Аа Це Маї 5ег 5ег ОТу Оу Аа 5ег Аге Аге ТНг Сув Аа 5ег 420 425 430 ув МаїЇ бег Авп Маї 435 «210» 13 «2115 2031 з0 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність «220» «223» геномна ДНК мутованого 5огеТПшт БісоІог фосфоліпази 0О372510р «400» 13 асесарівсс (а(агасаса авссассаїс (ріс цесс Іссїссіссії савсісаєса 60 сіарісасас яасасссес ааісвайта ааашася сецсвісса аасаагасса 120 вавсісвасе аєсаїсцаа Пецерас васівааа аєс(цсис айсрівесс 180 ісвасрарта аріароіарс їсашвеас рабсаассес враріріоісс Праїсвтаат 240 всррсайаво срассіасіа сісйсесео сріссаєрса асессіссар сасваареся 300 агрессвера рсріврісре серарсссріс ріссівороос арарерісас роіосісаст 360 рірврасерся всеесассе (ерісіса(с сссрраасса (ссЦрсси ссісварясс 420 серрсівсаро арсісврасеро вссерароиц аросісесер асіасисра сіасаїстсс 480 рерасварса ссресееосі саїсассесс аг(есісасся срсссррсаа ррасарясяр 540 сесісіасе сірссаарра сабсаассаа йстасаєро араацесссісесаєсцс 600 ссісаазарії гаріссрас а(сссеесся рссрссаце Цеессісрс ацайрає 660 расагесаї всагесарс а(ріса(єріо (аррарсарс аресЦесере ссессаєвіс 720 7 сесесіраре аарссаарої асаасеесаа ріессіссрі аассіраєсарарсаєссі 780 сррсрарасе ароріварсяе асасрсісас саасріса(с агсссіассіїсвасрісая 840 ресірсірсав сссабсасі (сіссассіа свасріасріасрссессео ссессрісті 900 сагєеаа(аа сайссарсів гасацаце саса(єросіо сагессіасі гаасаєецйй 960 аашесаре ссаарарсаї рссісіваар аасесесірс (сіссрасрі рівєсаїсрес 1020 7 асріссессе сессрасса ссісссррсе сасіасцсс арассаареа сессресавті 1080 рерсаарраас рсрартасаа ссіса(свас ресерірісе ссессаасаа ссреіаай 1140 аацаасіра ааасеаасра асесаацсес ага(ссаце (ссараарає сваєестіаає 1200
ІРйесцав рсасрісей вссессррсс райесаце сасцесасаестіараст 1260 асерйцесра (гасесаваї сассаараар а(есЦрсса рсаареавраа ррссваврат 1320 7 сіртасссар (гаарссріс раасівссяс аарцссіво (ссіріссаєсерррасвртя 1380 ісрасрісво арсаресссі ріасасерся сресарівссі срсерісеоо саїсівссто 1440
Ірра(ссера асаасеесаї ресссссаїс агсрасагстіса(ресеррс вравсістрас 1500 сіррісраса (ссасрісес сесрасвцс сарісесісс асарсвасее срасіассію 1560 сесаєссаре асаасісесі рсасеесесс всерссассе (ррасесеворс расрссврар 1620 аасагрсера сесісрісво раїсрресар сера(рсіре сріарсеррі ріссарреіс 1680 аасрірвавра сарерароеа сраассерів ссіророраат раарсаасес іса(осесіс 1740 всірерасяе сааресарсі сісерареар арраррасаа ресісрсесе ссесассісс 1800 7 рссасріса рсіссеріво (ессісіара сеіасріріо ссісааароі сіссаа(ріс 1860 єаарараарії гаашіеце ссісацааа аїсцааца ацаайсів (сресівіря 1920 5О сбсааасааа асід(асаї (аааааассс рссагеаасі арисіарра ааагасесає 1980 врішараа арааааасаї ааасіаайс (аасаааагст (асасассіс 1 2031 «210» 14 «2115 1116 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК 5огеПшт бБісоІог фосфоліпази мутованої
О3725ор «400» 14 асерсвассі асчіасісне рсеесвісса Гесаасессї рсарсасеаа ресра(врсс 60 7 вевавсеіве їсвесравсс свісеіесів реесарарее ггасеріссі врасеріввас 120 весевсерса (ссріерісІї са(ссссера ассагссце ссцссісва ресссевсів 180 саррарсіро асреоссера воЦаросіс рсерастасі(свастасаєсессрртаст 240 арсассересе восісаєсас сессагосіс ассесесссе рсаарерасар рсеорссісіс 300 гасесівсса ареасаєсаа ссаайсіас аєерараай рсссісесає сисссісаа 360 7 аарарсарса рерсЦесеос сессаїрісс рсесірарра арссаароса саасврсаат 420 (вссіссріа ассірасаї рарса(рсіс ресрарасва рерірарсва сасесісасс 480 аасрісаєса (сссгасси свасрісаро сіосіосарс ссабса(си сіссасстас 540 расрссаара рсаїессісї раараасесе сірсісіссе асрісівсаєсеорсасрісс 600 вссрсессра ссіассіссс ррсесастіас цссарасса аррасессрр сарівтсаат 660 7 раасесрарі асаассісаї срасеесері рісессрсса асааіссврас ра(соЦеся 720 асрасрсава ісассаараа ра(есЦесс арсаарравра арессрарра рсірсіассса 780 ріваарссрі реаасірсся саарцесів ріосіріссаісрерасеро рісвасріст 840 рарсарресс (сіасасеос рсеррсарірс ісесеріворо врсагсівссе рірраїссто 900 аасаасреса (сесссссаї саєсрасаєс цса(ресее срарсісвра ссіврісвас 960 7 асссасріся ссрсрарії ссарісесіс сасарсрасе рсрасіассі ясрсаєссар 1020 расаасісес (осасресес срсеррссасс ріврасесео свасерссеяра раасаєвстт 1080 асрсісрісе рра(севрора рсера(рсія рсяат 1116
«210» 15 «2115 371 «212» ПРТ «213» штучна послідовність «220» «223» амінокислотна послідовність мутованого 5огейшит БісоЇог фосфоліпази
О3725ор «400» 15
Меї Аа Тг Туг Туг 5ег 5ег Аге Аге Рго Суб Авп Аа Сув 5ег ТІг 5 10 15
Гуз АІа Меї Аа ОС1Ту 5ег Маї Ма! О1Уу Он Рго Маї Маї І еп О1у СЇп
Ате Маї Тіг МУаїЇ І еи ТІг МУаїЇ Авр СТу ОТу О1у Це Аге ОС1уУ Гей Це 20 35 40 45
Рго СТу Ті Це Геп Аа Ре Гей Си Аа Аге Гей Сп Сп Гей Авр 50 55 60 25 ОІу Рго СЇш Маї Ага І еп Аа Авр Туг Ре Авр Туг Пе Аа СІу ТОг 65 70 75 80
Зег Тіг О1Іу О1у Геи Це Тіг Аа Ме І еп ТНг Аа Рго СОІУ Гув Авр 85 90 95
Зо
Атге Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз Авр Це Авп СіІп Ре Туг Меї Сп 100 105 110
Авп Сув Рго Аге Це Ре Рго Сіп Гуз 5ег 5ег Аге Гей Аа Аа Аа 115 120 125
Меї 5ег Аа І ей Аге ув Рго Аге Туг Авп С1у Муз Сув Гей Аге Авп 130 135 140
І еп Це Меї 5ег Ме ГГ еи СІу СЇи ТІг Аге Маї 5ег Авр Тіг І еи ТОг 145 150 155 160
Азвп Маї Пе Це Рго ТІг Ре Авр Маї Аге І еи Геп Сп Рго Це Це 165 170 175
РНе 5ег Тіг Туг Авр Аа Гуз 5ег Меї Рго Гей Гув Авп Аа ГГ еп І ей 180 185 190
Зег Авр МУаї Сув Це СІу Тіг 5ег Аа Аа Рго Тіг Туг І еи Рго Аа 5О 195 200 205
Нів Туг Ре СІп Тнг Гув Авр Аа С1Іу 5ег О1уУ Гуз ОЇи Аге Оп Туг 210 215 220
Авп Гей Це Авр ОТу СТу Маї Аа Аа Авп Авп Рго ТІг Меї Маї Аа 225 230 235 240
Меї Тіг Сп Це Тіг Гуз був Ме ГГ еп Аа 5ег був ОЇш Гуз Аа Си 245 250 255
СІи Гей Туг Рго МаїЇ Гув Рго Тгр Азп Сув Аге Муз Ре ГГ еи Маї І еп 260 265 270
Зег Це СТУ Тіт ОС1у 5ег Тіг 5ег ОЇш СОЇп ОС1уУ Гей Туг Тіг Аа Аге 275 280 285
СІп Сув 5ег Аге Ттр СТу Це Сув Аге Ттр Це Аге Авп Авп С1у Меї 290 295 300
Аа Рго Це Це Авр Пе Ре Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еп Маї Авр 305 310 315 320
Пе Нів МУаї Аа Аа Меї Ре Сіп 5ег І еи Ні» 5ег Авр О1у Авр Туг 325 330 335
І еи Аге Пе Сіп Авр Авп 5етг ГГ еи Нів О1у Аа Аа Аа Тіг Маї Авр 340 345 350
Аа Аа Тіт Рго СЇши Авп Меї Аге Тіт І еи Маї О1у Це О1у Ой Аге 355 360 365
Ме еп Аа 370 «210» 16 35002115 2979 «2125 ДНК «213» НеПапшив аппий5 «400» 16 агваайааса (сайсиеї аайаршцсе сиеіаасяе сеацеарс саїссаассс 60 сЦерсесаар, авсааассва (етарвівав, всааашієся їсасівисі г(авсагсваї 120
РІВ РеВІе Псріерсаї грцсссесс ассцесце сицсива аїссаааац 180 сарріасісе аасцаааас рсасасрівс аєсасацас аарсісіаас Цацайва 240 аагрівссрі сісцсераї ареаайгара (рроссараї рсасраайце сесацацї 300
Іраг(віайа рссрраасаа рсасарраре рсісагсаса асіа(есце сарсісстаа 360 лі
(гараааааї срісссагрі (сессесааа арасацасс аасисіасі йсаасайс 420 вссіаррас Цессіаааа (ареоааас ісіаастарі йссеоасга(гаараєає 480 і сацааавас ааршсайц нсищшсе айгбсааасас арасасаса( йрасраретс 540 рсаассцаї ссисісааза асеаарссів срааа(росо сайсісста сааагасі 600 еіаайсаї ристаріся ріеШеваї ріссецца ааасігаца Цашасає 660
Ріаршсів аарааайіаа аасарцац садасасш цеРиаааа йсіастара 720 ааааааааає ссиеісаре ааацаана ааааааарцї ассаєстай ааагисті 780 4 і сцасіааіс аааарии азайцай асака( асаастааа сасасасаєс 840 саваасасіаї сісагассас аєїгацасас аарістаца еайааєе сіаасцаві 900 ашсаа айгаарци (аааасесса сабссаааас ссцрайсіїайцасає 960 гРівтарста адасаріси (агасагааа аасадісарі (агасєаааіс ааагсацає 1020 цаасіааар (аарсісері (сазасіста (аарараай аагасасгасея арісвавійс 1080 сірЦерасса гашсесіа рісцаари (сварисаа аайеіасаєраасцеаас 1140 сіріваса (сабгасцера сащааасс асаагейеї (раа(аааса аагісацій 1200 ашоегарі серассаааї (саєраацс реаріаасс ріасцерісаррссассря 1260
Зо ассазаріа: рагеятааваї аїсисрарс сасеесааар агегагеЦаа аааассісас 1320 єацааараї асецрасра агеирісаї ассіссішс расацарес ррсцсаасс 1380
Трцасис (ссісірсіс ааріаацаа асісеши (агашща(а рсарисісї 1440 ажшаааац гайреіоа: саєааааєво сіре агасещшав реаааараря 1500 ісесріреаа ааа(госще сіарсарася (а(осацав (ассесересе рсассаасає 1560 4
І Шисссрсс агасіацї варасіарав асрісваєре аассаарсас асицеваєс 1620 гайгсраєво серееетарсі рсааасааіс серітарцас ашісаасаа айеавці 1680 рсашай Шаррасаа ріарісаса( (ареіваае воівісцса арсісаєссс 1740 рааррівева врсерісцсс сасісріасс (са(ресяса ШИсИсИ ецесарсі 1800 ссаацицаа ааарссассс сессццсс ацйссасгарс рссасрісаа сівовтаааєт 1860 рівцсссас (еоіайера рашераво сесіасеясса ссісірісайсссваарсса 1920 сасссіссас ссцареарі царі саршйсео Шаасарі Шаааве ці 1980
ШШери рааассаааа ассраасіса асісаасееа айсереіав йсасаасіє 2040 аассааааас (гайсссава йсеецс (с Швассяе аабааїсай ашецай 2100 ігацоесе аррцаааа агайсарса аааайетаа цаацераї йерсіааає 2160 расаашаа а(аассеца шейасс рацсааасс раасасссаа сісвашщівя 2220
Шайассе аассрасаас серагасета ацсарисяе сіацаааат пс 2280 втарреш аасссаше ааагсрааіс цсарарааа рееИсесіа агрісассса 2340 7 саєаассаза радаїсцеї йазаасеца агресараса сашеосіа сасасаєа! 2400 аассааараа рсерірасве гоааагасар рИсісірес ссррарршісврасераат 2460 асерра(вси ріссшсас (сеосасіре гасесарасе гасааівасі (а(а(гасівс 2520 асааааресі рсааайівсо ворцесцав Пера ассаасро(а сіосессааї 2580 ссіссвсац Шерівае ссагрісара (а(ерісрас абссавірі саасіагацй 2640 7 ссайісеце саарістааа аазасіаісі ястайцсар, ріа(аасіаа раасаєтаіаа 2700 агави пмагареца саїещарі аасааграрі ШИаєво рсаррааває 2760 аасйрааар рераарсаас (есаагеоаї ашсасас сігараасає рареесеста 2820 раргасаце рсаарааац реаарааа ссеИсісра рацйераїві врарасарес 2880 аарсцеаас сарйаааре араароасе ай(есіваєо сацарсася Шесеосасі 2940 7 Персщріе ссраасрааа рсессрсааї ссарсцаа 2979 «210» 17 «2115 1305 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК НеПпапфив» аппише фосфоліпази 7 «400» 17 асайаааса їсаіснеї агар цся, спасе свайетавс сабєссаассс 60 сЦерсесаар, авсааассва (етарвівав, всааацся (сасівисі гарсагсваї 120
Вір еееріе Цсрісесаї (ецсссрсс ассцесце списива асссаааай 180 саррааасар а(сооссара (ссасраай ясерацацй Пеагріаасарссррааса 240 арсасареар восіраїрас аасіас(еси всарсісста а(ргарааааа свісссаєв 300 йпсрссесаа аарасацас саасистас фсаасай сессіаррає сисссіааа 360 асарвасаса сашеа(ра ресесаассі (а(їссцсіс аааасраарс сірсваааєт 420 ррісерасса аайсасоаа йсеріаріа асстаснця рісарессас сррассааар 480 гаграсета айасисе арссаївоса аара(саєрі (аааааассі састайааа 540 рагасрира срайгайеї сасассірсі Псрасагєса грсерсисаассівцає 600 нсіссісір сісааррааза араррісесе їреааааасо спшосіарсарасеіа(рс 660 айаріасся сеесерсасс аасецшіс ссросагастайширарасіараваєріс 720 ваг(реаасса арсасасц ісасіааіс рагсосееоо (арсірсааа сааїссвтаса 780 сашеосіа (сасасаає аассадавраа рсерісасєро ррааасасар рИсіствос 840 ссвраррій (срасерсар асреаєвсії ріссшсас ісерсасісе(асрсарася 900 єасайсорасі (абсасасірс асааааросі ясаааасрео рецесцавя Поета 960 ассайсе ота сірсессааї ссіссясац Шерірае ссагрісара асрсрісрас 1020 абсса(рірі саасіагайц ссааісеЦе саарісрааа аааасіаєсі ясріайсає 1080 раарагаасі (гааареера арсаасіоса а(ерагаці саїсасссра раасаєраря 1140 всесіараре асацеосаа гааайеце аарааассрі (рісварай реагвірват 1200 асаресаарс Праассарі (аааррараа ретасрайіо сіра(єосац арсасеціс 1260 врссасшрс Шеоі(вссра асрааарсяс сесааіссар сцаа 1305 «210» 18 «2115 434 «2125 ПРТ «213» НеПапшив аппий5 «400» 18
Меї Авп Авп Пе Авп ГІ еп Маї Це Маї 5ег І еи Ма! Це Аа Це Маї 1 5 10 15
Аа Це Сіп Рго Ге Аа СіІп СОЇи Сіо Тіг Авр Маї СОІУ СЇшй Аа Авп
БО 20 25 30
РІе ХУаї Тіг Ма! І еи 5ег Це Авр ОСІу Оу СІу Маї Аге СТу Це Маї 35 40 45
Рго АІа Тіг І еп Гей Аа Ре Гей ОЇ 5ег Суб Це СІп СТи Це Авр 50 55 60
СОІУ Рго Авр Аа Аге Це Аа Авр Туг Ре Авр Маї Це Аа С1у ТНг 65 70 75 80
Зег Тіг Оу С1у Геи Меї Тіг Тіт Ме І ей Аа Аа Рго Авп ОЇпи Гуз 85 90 95
Авп Аге Рго Меї Ре Аа Аа Гуз Авр Це Тіт Авп РНе Туг Рре СІп 100 105 110
НІів 5ег Рго Аге Це Ре Рго Гуз Це СТу Нів ТНг Ріе Авр Сни Аа 115 120 125
СІп Рго Туг Рго 5ег СіІп Авп ОЇи Аа Суз ОЇш Ме СТУ Аге Тіт Гуз 130 135 140
Ре Меї Аві 5ег МУаї Ма! ТІПг МУаїЇ Їеи СТУ ОЇи Аа Тнг О1Ту Рго Гув 145 150 155 160
Туг Авр О1у Гуз Туг Гей Аге Аа Меї Аа Гуз Меї Мей І еп Гув Авп 165 170 175
І ви ТІг Це Гув Авр Тг Геи ТНг Авп Це Маї Пе Рго Аа Ре Авр 180 185 190
Зо
Це Аге Аге І еп Сп Рго Маї Це Рре 5ег 5ег АІа СІп С1у Гу СТи 195 200 205
Уаї Аа Тгр Гуз Авп Аа Г еп ГГ еи Аа Авр Маї Сув Це 5ег Тіг Аа 210 215 220
Аа Аа Рго Тіг Ре Ре Рго Рго Туг Туг Рре СІи Тіг Аге Авр Маї 225 230 235 240
Авр ОТу Тіт Гуз Нів Тіг Ре Авр Гей Це Авр СтТу О1у Маї Аа Аа 245 250 255
Авп Авп Рго Тг Нів І ей Аа Пе ТІг Нів Пе ТНг Гуз Спи Аа Маї 260 265 270
Ме Оу Гуз Туг Аге РНе 5ег СТу Рго СЇши Маї Ре Авр О1у Аго Аг 2175 280 285
Ме еи Маї ГГ еп 5ег еп О1Ту Тіг С1Ту Тіг Со Тіт Туг Авп Авр Гей 5О 290 295 300
Туг Ті Аа Сіп Гуз Аа Аа Гуз Ттр СОІУ І еп Ге 5ег Тгр Це Ріє 305 310 315 320
Ті Авп О1Іу Тіг Аа Рго Пе І еп Аге Це Ре С1у Авр Аа Меї 5ег 325 330 335
Авр Меї ХМаї Авр Пе Нів Маї 5ег ТІг Це Ре Сіп 5ег І еп СіІп Маї 340 345 350
СІ Гув Авп Туг І ей Аге Це Сп Си Авр Авп Гей Суб СТу ОЇ Аа 355 360 365
Ті Аа Меї Авр Пе 5ег 5ег Рго СЇи Авп Меї Аге Аа І еп СЇшп Авр 370 375 380
Пе СТу Гуз Суб Гей Геп Гуз Гуз Рго Гец 5ег Аге Гей Авр Маї СЇи 385 390 395 400
Тіт ОТу був Гец ОЇ Рго МаЇ був СТу ОЇш СТУ Тіг Аві Аа Авр Аа 405 410 415
І си Аа Аге Ре Аа Тг Ге Ге Сув Аа СІи Аг Гув Аге Аге Авп 420 425 430
Рго Аа «210» 19 «2115 1531 «2125 ДНК «213» Ногдешт ушіраге «400» 19 аггесаарсі асіврівсся всрассеес рарісвівса всасвавеес вагтесерес 60 авсрівріся рссарссеві весессевее савареріва серіесівас саїстасервс 120 весевсасс всевссїсаї сссееесасс агссісессі Іссісваврес савесівсаєт 180 рарсіврасе рессерасес рсессівосс расіасися асірса(срс среясассавс 240 ассресерос (сабсассес сагрсісасс рсерсссррсс аррасеррсся сссесісцс 300 вссрссааре асрісаасся систассіс расаасееос ссіасаїсцЦ сссссааарт 360 сраравсасе арсеасіса грессагера (сагрссарс (раассеоів айраєрівї 420 ваайртіви рарсіріврсс арравроівсе сесісрссес ррісассесрісрсірарос 480 веиссрарята сарсеесаар гассіосасе рсаараєсар рарсаїрсів ресварасва 540 весірірсра сесесісасс васрісріса (ссссасси свасрісаар сисіссарс 600 ссабєаси сіссасабгас васріасесі аашасесс айса(сара араєссаїс 660 сіссце раї сарасараса (сере осіааа а(срЦраао ра(сагрсрі всарессаря 720 ааса(есссс (раараасес рсресцрсс раса(сіосасресассіссрссвсссся 780 ассгіассісс сресрсасса сиссасасс саарасраса асеріаарра рсесваріас 840 аассісаєсе асеесеесрі сессессаас айгїссеріаа ссаассааіс аарсріссає 900 сарісаєсас агайсараї асесівсссе арсасасіра (саасірарі(рірараває 960 рсарасрае рірсассаєвра сесараєсас саараараце агорісааро асарерарса 1020 всіріассся ріваарссрі серасіосео саарцссів ріссісісса(срерасстт 1080 сісвасрісе рассарееос (остасасеос саарсарівс Ісссарівсоо рсаїсаїсся 1140 сіррсівсес аасаарееса (сесесссаї саїсрасаєс йсасррсее ссарсісста 1200 ссісрісрас абссасесся ссрівсіси ссарісесіє сасарсрасе ріаасіассі 1260 ссрсабссар расаасісес (ссасррссс арссрсрасе рірвасессея ссасрсссва 1320 рааса(ресе варсіссіса рраїсеесра рсераїро рсасарароо (ріссареоі 1380 ваасрісрар ассрреавоі асрароараї асеореосесс рерарсаасея ссрасесесі 1440 сессересцс рссадаасарс ісіссрасра гаррарраса аросісресс вссрясетсті 1500 іресрссрос срісіраааї ссарасесів а 1531
«2105 20 «2115 1269 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність
«220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК Ногдешт ушвраге фосфоліпази «400» 20 аггвесаарсі асіврівсся всрассеес ваврісвівса всасвавеес вагтесррес 60 авсрівріся рссарссеві весессевее савареріва серіесівас саїстасервс 120 весевсасс всевссїсаї сссееесасс агссісессі (ссісварес саресівсаєв 180 рарсіврасе рессерасес рсессівосс растіасисяе асірсагсес сврсассарс 240 ассресерос (сабсассес сагрсісасс рсерсссррсс аррасеррсся сссесісцс 300 вссрссааро асрісаасся систассіс расаасррес ссіасаїсЦ сссссаааря 360 авррівсесерс (срссесері рассесрісяо сіраресрес срароіасар сресааттас 420 сірсасееса арафсаррає сагрсірсеос рарасварос (ріосрасес рсісассвас 480 7 рісрісаєсс ссассисва срісаарси сіссарссса (саїсисіс сасагасвас 540 рссареааса (рссссіраа раасесесео сПессраса (сіосаїсре сассісстсс 600 рвссссрассі ассісссрес рсассасис сасасссаар асрасаасее (аарварсяс 660 раріасаасс (саїсвасео сеесрісесс вссаасааіс свасрас(рорі рассабрвася 720 сараєсасса араарагваї реісааррас ареравррарс (сіасссері раарсстіст 780 васівсврса арцссіврі рсірісса(с рерассерсі срасрісврассарересів 840 єасасеесса арсарівсіс ссаріреоос аг(са(ссесі восірсесаа саарресаєт 900 рсесссаса (срасаєси са(росерсс арсіссврасс (срісрасаєссасессясс 960 7 рівсісисс арісесірса сарсеасеоі аасіассісс рсаїссарра саасісеясіс 1020 сасресссар ссерсрасері врасессесс асесссрара аса(ресера рсіссісарт 1080 абсресварс реа(рЦеос асарарерів (ссаросіва асрісраврас сервартас 1140 раргавра(ас рорерсессре рарсаасесс расесесіся ссресцсес сааасарсіс 1200
Іссвасрара рраррасаар рсісеррссес сересесвцо рсессррсся ісірааайсс 1260 7 авасесіва 1269 «2105» 21 «2115 422 «2125 ПРТ «213» Ногдешт ушіраге «4005» 21 /Меї Аа 5ег Тутг Тгр Сув Аге Аге Рго Суз ОЇи 5ег Сув 5ег ТІг Аг 5 10 15
Аа Меї Аа СІу 5ег Ма! Ма! СО1у Сіп Рго Маї Аа Рго СІу Сіп Аге 20 25 30
Уа! Тіг Ма! І еи Тіг Це Авр ОЇу СІу СТу Це Аге СТУ Гепц Це Рго 35 40 45
СТУ ТІг Це І ей Аа Ре Геп Сни Аа Аге Геи Сп СІ Гей Авр Оу 50 55 60
Рго Авр Аа Аге І еп Аа Авр Туг Ріе Авр Сув Пе Аа СТу ТПг 5ег 65 70 75 80
Тіт СТу СТУ Ге Це ТНг Аа Ме ГГ еи Тіг Аа Рго СТУ Сіп Авр СІу 85 90 95
Ате Рго І еи Ре Аа Аа Гуз Авр Маї Авп Аге Ре Тут І еп Авр Авп 100 105 110
СІу Рго Туг Це Ре Рго Сіп Аге Аге Сув Аа І еи Аа Аа Маї ТОг 115 120 125
Аа 5ег І еп Агео Аге Рго Аге Туг 5ег СІу Гув Туг І еи Нів СОІУ Гув 130 135 140
Це Аго 5ег Ме( І ей СТу СТи Тг Аге Гей Сув Авр Аа Геи Тіг Авр 145 150 155 160
Маї МаїЇ Це Рго Тіг Ріє Авр Маї Гуз Гей Ге Сп Рго Це Це Рре 165 170 175
Зег Тіг Туг Авр Аа Аге Авп Меї Рго І еи МГув Авп Аа Аге І еи Аа 180 185 190
Зо
Авр Це Сув Це СІу ТІг 5ег Аа Аа Рго ТІг Туг І еи Рго Аа Нів 195 200 205
Нів Ре Нів ТП Сп Авр Авр Авп Оу Гуз СЇнй Аге Оп Туг Авп Гей 210 215 220
Це Авр ОСІу О1Ту Маї Аа Аа Авп Авп Рго Тіг Меї Маї Тіт Меї ТОг 225 230 235 240
СІо Пе Тіг був був Меї Меї Маї Гуз Авр Аге Си Сн І еи Туг Рго 245 250 255
Уа! Гуз Рго 5зег Азр Сув О1у Гуз Ре ГГ еп Маї І еп 5ег Це СІу Тіг 260 265 270
СІу 5ег Тіг 5ег Авр СіІп СІу Гей Туг Тг Аа Гув Сп Сув бег СІп 2175 280 285
Тгр О1у Це Це Аге Тгтр Ге Аге Авп Гуз О1у Меї Аа Рго Це Це 5О 290 295 300
Авр Це Ріе Меї Аа Аа 5ег 5ег Авр І еи Маї Авр Це Нів Аа Аа 305 310 315 320
Ма еп РБе Сіп 5ег І еп Нів 5ег Авр О1у Авп Тут Гей Аге Пе СІп 325 330 335
Авр Авп 5ег І еп Нів Оу Рго Аа Аа Тіг Уаї Авр Аа Аа Тіг Рго 340 345 350
СІ Авп Меї Аа Сі І еп Гей Аге Це О1у Сп Аге Мей Гей Аа СіІп 355 360 365
Ате Уаї 5ег Аге Маї Азп МаїЇ ОЇш ТІПг СТу Аге Туг ОЇпи ОЇи Це Аге 370 375 380
СОІУ Аа СТУ 5ег Азп Аа Авр Аа ГГ еп Аа ОСІу Ріе Аа Гув Сп І ей 385 390 395 400
Зег Авр Сп Аге Агео ТІг Аге І ей О1у Аге Аге Аге Маї СІу Аа СІу 405 410 415
Аге І еи ув 5ег Аге Аге 420 «2105 22 «2115 9001 «2125 ДНК «213» Веїа ушрагів «2205 «221» тівс Теаште «222» (2702)..02702) «223» піва,с, 5, ог з5 «4005 22 писсааса асагассвав Тагцшцсіс саагцаав» башагсеі тайетаай 60
Ріаагріаае арсіартааа ссісаршща сшсщшеї щаріасєе аасотассає 120
Шара їаацагесі Шаайаа саааації ссейр(ааа аааааріста 180 сагрісссіс Песарараї аааіеіааро гасацайео сцпарисіс растіааща 240 сацгаарий абзац аєсаєсецс агеартасіс сірйсасараареасаата 300 ашагсазаар рашсцарі арсиссайї расерасрсіс аа(расссіо Цаацарсі 360 ааріаааар йрессаца рссааіааса асіртацаєарсіавіаа рисацара 420
Ісваа(аас йа(аарісї аагсайаа аагаєеааціа ара(сеаасі раааіравій 480 паашеа аааацарір рсагасеівс Цааасе ці Шисацаєресіаваара 540 сцавраасеа арцерартра айсисай сагагааац (а(есіаваєааасіааєат 600 ссарісаарі саагшщас шкааааа ааагсцас (саге(аріа срарааісц 660 їашшагаа фсецага агєааасаєос ашісасісс Шсааасєсе Царсіасає 720 сасисівоса ассаарсаар саарссаїаа гашаасса сареист аасасіаат 780 їсіагасада сабесааісс асцасаца ацассасєсі айсіссса саєсаагаа 840 аасасацас айіссааара ай(аааасаї ррараайсі арагсісіво ріаасссівї 900 арссегара сссссіааєс агертаасі саєаасаац Цааріаце аберрерарт 960 сацареевра аайсссів сарца(есі Їраайсси раасасаасіссаретаєє 1020 єасагааца араааєрае а(єагасраєс аїсщарта сісйецаа аграшівас 1080
Ріаараааіс асетагасає (асесаєосс Цасіасгааї айосрівса (рИсасаає 1140 сасаасараа рИарагеоі рареаарсаа райсесіва цайшіеаєецацйесся 1200 ваасрарсас серісессіс а(6аасівсса (ецаассес сссіаасрас аааасістес 1260 сасістасяс сессааррар, айасіссії Шаф(сцра рсацріссе аараєсисс 1320 рссаассаар, ріаааааає сазашаєс асіаса аєсавраце ріааайавга 1380
Зо рареаграаа аасссцаава (ссцераас гацаасесі сгариссаа Цагїрессса 1440 песісца гаррісісаа сайсаші писіасар саресесевасіаавгац 1500
Іраашевра ареріссіаа сіааассада радасааай асааграсса ацаасаєа. 1560 єаагаар ції аршааса а(6аараааас саасарцер (споіаара рассрістас 1620 пшаащша адаріареся сеесссаарс ссаагацаа гаарарааіа раїсаїаці 1680 4
І сцайагав (сасіасій айхстаща рісассаці (аагстаіарівассаві 1740 йайсац сацайааас айсщаа (сашаріе асігашаа ссашаві 1800 васіарсца а(ссайцое (аарасісас реастаци (ааааайеї цеистіаає 1860 їсаазаща раарераазаї аааараарта раарарааір расрасіаре а(еоіссаар 1920 авсассіаааа адарієцає рцарарагра аайрайссо ссисЦаре арааєріарт 1980
Шерсайеї стааєщца: айааааца вассрістає гагаасаацй ісісваааас 2040 аааасщає ацашеаа (сасетаца рагагасси аацасаце аєаїснаає 2100
Рцасиса царіаа ацйсаасара Шрашоеї асаїссеЦа аса(аєссва 2160 і сасіаасац (гагаїсис арцагасі (саєаацй щщааа аарцераса 2220 бааашіеві ааасеааааї арарасааах (сасаації асагаріааєацаєиса 2280 амашерва аасаарсце рісааасца агагарсааї ассяіарааа рісааацає 2340 їгаашай (сааасаааа госарайааї сеца(аєса сааааааааа артацаааа 2400 царарсіаа айаарарат айеоіарса йсаара(аа (саааісаєр ацавсасаса 2460 4 і ааааавраааа ра(еагаааа рараааарії ааараасаро аарресаср(ісісйсарс 2520 абсаааасарс (еаасіваас їаассівайі г(еаасірац ррарсіваасіраасіваас 2580
Траасіваас (гаайсай цаашаає цаайегає (саацаааєсааашаає 2640 йаашай (саанеай гааайеаах яіаасааага (агааасааєашіааасаа 2700 шартасарі гайа(ааа амаайріос ссисірааа Цецааресасеісвше 2760 2 і саарашеї ссицесає їаааашее ріссаааісс (ссасааац вааасаєта 2820
Ріацасіс (ссасісай шасисі (еіаїсаці (аросісвас аабаассасі 2880 сірссараро ротарцеаа ссисцаца (сассаєсаїє аацйсаєааєааєаацца 2940 цпагаагас (сссіссей ссаааасава рисісрш сша сраєрташі 3000 (весаартара абсіаарісе ааг6ааіаааа ШИШКИ сашаааса аасайетає 3060 рраааарсаї гайщароа раразааате раааагаац срісааарарацаацої 3120 амаєщавр йрайааза( аасарааааа ссаааа(аса араарсааасаааіраєрря 3180 асасраси (сіарасаза Цасараааа ашееааас райіагераа асрерааста 3240 4
І (ашіеера сасссаадіа рааагееоаа сіагайця ррасерарее атіаасаца 3300 авааса(аа айацаага агаааріаа (аацайса (асіаассаєаацааєаас 3360 севаараєсес рігайаці рівнева (авіа гашерис аагаревасі 3420 сіааграарс (есіааврсео рссеаайсас расерааарі ассцсасаа сіаріааає 3480 раацесісе расааараае еЦесаїсаа всецеаста а(сісецаєсссаасии 3540 рагаєссаара аїсисарсс (РИсісцщ (стаснаца (сріассцо Цераацієс 3600 защшацеа артасаца(є (айр(ассс Пеецасіайсацар саааастар 3660 сайсааава ясашаар (рашеїгса араааааааа (ааріараре ааїсаєарй 3720 аєсасцац араасіассі сішщараае аагасгасис сісташи йараєстаа 3780 сашасси Шеріваві агацааааї ааіса(асєоі (еташааа аааасаваає 3840 їартасагає сисіцеї рісасагаає асасиваєс аашіаааар аєаасаєтає 3900 їссайгайе асшщаї асасагааиї (сасагеіса аагбаасараа ааааарісла 3960 сШесіраа Шерсара(є агаагасава ещагсоте ее цаарта ашісавасі 4020 асіасайра (агацагва аайеасаа раааасіааї сааіаацаа рацаєаає 4080 враїссіавріс ссаайеста аараайеса сріоЦесів (сарасасаг рса(аросас 4140 рісівсарсі ссаасе цес гассарсеса їсайцеаа аасааараєр аїсареосаа 4200 (рісааараа Ццсаассіса йеагосріво (айесівсс айбаагссір аагацай 4260 їсцсабєсса(Шерай цсісіссаї ссстаааці аашеаца реаацаріс 4320 айсцайа аадацасса аєсаєсаай азацаста аєаааааріа айсааасає 4380 пеисеага гаагетаси ашища йааанца айісарас агацссааа 4440
1рісрісста саааараааї (есаайсса істааааасі (сещшрага сагсіааєда 4500 г(ріагрисе арісайсаї гааациса (ассаараа аагаєсааар ааваєрт 4560 садасіща сцарісваї ї(заайсіац аайссаріс аашассаєсаасисис 4620 ерісиссса азасааагсре аааайааї айсасівса гасрісіси (сіейцаса: 4680 ісстассісї ааартаща арищагсе агацарсас а(асагацс (стартає 4740 аайрарааар, а(сеаааарі Ше (саєаааасс Цаасаасів стайсаааа 4800 сагасраєаа рісассаа сайасссас їаацааасе (аашісасі ріаєааріас 4860 арісацарі ресайгаарс раарігасаа аасааагарі гаарарсаас ссваашієї 4920
(ісссрагааа россасераї сріваасері (осівоіраї а(сеЦарре асісвраєсся 4980 асаареава рсарсістаї айіесіаааа есесарсааа рісеораай ашісаєреї 5040
5О ашрасаа (еоайасі ссастасце а(есіщаа (сааісааав есірасаєрт 5100 їсгашсса саацсіеіо рссісаав сага(срис (сйеасаас(аїсисяса 5160 іссааріаар ЦКашкає (асгасевай (срака (етасріаваавасиств 5220 і цазаареце аєаараєсар арцасесес їсайцасс ааррасш решісааівт 5280 підашере ассерісара сссрісесір среоссіаїс асерісаага айшщаці 5340 саресісрса ссрісасрар ссівссіара (ресісесра рссеаасасі сашіссці 5400 всшщарс сіаааасіої саааарісса ааааасраса (аааасасее вссарсістс 5460 аррарссасе арсссарісс рісрагаааа (сцрааац ісаррсссвра сссассаші 5520 7 ссссадассс рсерессрар сссрівааса арсісаєесс сіва(ессса ррісіартіс 5580 (вссісеясас ррарссиса Ісссраарсс сацасаарс сарасассса асіссстаса 5640 асассаса(с аасссисса абссасісес сцсссіси сасіосірсс ресівсссіс 5700 7 їарешаєс ашцсга арсісіце (стаарцаа агїссасіврі Цсшісай 5760 сива шаарисе айассаасо Шсщшщаас Шесааси йерерарає 5820 ассцацеї аашресісї аагсаваариї (сцагрси агаа(аасес ісаайцеїсі 5880 нсирасі аріааісіва гарцаєсса рішаааса рцарарсіа вШсасіда 5940 (ерівесайї аарееісіво саререосра (еспеош (срасшее (аа(гсеісеії 6000 7 айіраарева рецасасар (гароагвої воЦерівта айооіроео ааасісворея 6060 єарарарага ассссіааат рсрарацаї есцарісаа (срааареіе ірсстацї 6120 аарсерасса ссіааарріс герацацаї ааісаациї (ссіааасєаа айссааййі 6180 рРігеРцераї старше азасіаааєс (саайесаа рісієсаасс ріаєсааста 6240 (раассаші (гарна а(аставар ашщаці саааааааа (ааааасаєса 6300 7 цашсааа аароіссаав ааасріси цаарарірі ссаараасає сіаассасва 6360
Рига геістацнає ріеріваєа спйсаав ашірарріс Шаацаря 6420 ссЦра(раї абарашеї (арарааааа сашесице ацаааааат рааасаааєт 6480 асаєрасааа (гасіааце асісагоісії аассицаа агсіврівів ашаасіст 6540 асатщаайаа (стер йерагааай царсрарса сесщааєаарісіаасі 6600
БА їагагаєси рівсагаарі йарцаш ашішасі цацаааса ааацйеаєаа 6660 аа(еавца риаацааа (аацасіс (са(ааасса авсіассста ааісіріааа 6720 їрсааацаї айесарраї вагасасіаа аресаріас арсагсаріс ра(сівосаа 6780 ссасараааа Шерсаааї сцеісасаа церааарес асісцеааа аарссаріає 6840 ссареацаа Шсраасе еріара(ас аассіа(іссс (аа(срарер ассааїраря 6900 аарссцаас (автасня ашааааа аєсацсага аарааісасе сісайеси 6960 рісайіаааа гащасек (ас щаа асіаасесиї епйсіааєасийааса 7020 сшасшс цасасєрара (ессрарася аріотарарі аашщайцеї яіареіаасі 7080
Шесіса (агеарісас цЦасасаааза рісасагса(а (агеотіааа агцассівї 7140 аарасеароі їзаасіаше ссагааагар, рісасщас цаса(араа рісасісай 7200 їаарацааа ацаарцас сещцаща ааайеассс асайраці раааарівас 7260 ссавайра:є йеаааарів асссащаа ссщааріе аасісаєеів асааааай 7320 єацагасас ссеріосаса (айгасааає гешщааац аїсаарері(еЦерасаа 7380 ааріаайеі гарцеаар систарсіа грав Шео арсішара(вссіаррта 7440
Ршсіаасі Шарцаге адасіарця ісіааарісї йеріаасаааацайеа 7500 сеааайщціа асасе(ааає аатащааа Шерсаасі Шеа(аааа рсіассвааа 7560 арсцайса (сцараці (ргассаарас їасісаааар сіаааарца істаааарії 7620 асаєссаааа встасшва геаагаща аасаашиї (сааараста ааарсіаїстї 7680 їаастасага аааартагсрі саааарцас ассааасасео (ссіасаце ассасецає 7740 (сізасссас ааваасісасі рресааассі рсіасшщеос аарароіаєсаршацая 7800 вріощшсаї сцассіасс газасаріаа ааріааа(аї агаааєаааа сааасацаа 7860 пшасагаа агайцасе агайарає (аагетацає ссіасаасаєсаасацсаа 7920 аааасіща срайгара(а аааарасава цаарааца ааацасеса аайсаааат 7980 їсаансааа Цасісстає їааааацео серіагаства Шааасі саааааіаає 8040 ааааца(аа аацасетса сісшеца сіасівааа сагр(шріс саайрасає 8100
РшШесрааа сіссцассе ареаааарар сарасрсраа саа(а(сера сраассраар 8160 ггастайіає сасайц ааасссасрі йсайсераї асіаєраца (агавтаєтає 8220 маса асацасас аграсівса аааааасца сесісваш агсаєаааа 8280 аашреісаа асса(р(арс ісісасаааа (сівтааає йаассаац Цавіаєсся 8340 єара(гасерос сіагееесрії реаасаща (ссагріаас їсашаці йасавсіза 8400 рісацесаї Шааістас гааашісіс (айсаа (аассіаааа абааагаги 8460 (ріесаєсаа Шесіста щасісіої ааташіеі (риси ацйеаасва 8520 гаастасарії рссасісста (агагасаар, араєсасій сіааассіар рраїаастає 8580 асаараарар адаасіаасся Цааааси (сіасеаєса асааааррає райсасаєаа 8640 ісасасєрааа ріссраааа аїсаасасаа рігаєшаа (сссіссес сасісіаасі 8700 сашссега сістасасії аайсіссса сесіаісааї сссайсай (асіссарта 8760 ісаваєеста ріаайсис абарайаєте ааагагасіа грацасац йесешев 8820 аа(арції гтларайаа саацегасі старцасеі шсіасіастайресаєга 8880 їссшараа (ріаассіаї ааааасрає саа(ааааас асісаааєсааррааєшща 8940 сесаайаа ессіреаєс ааарсіа(ас (ааїсцааа гацашиц іссисеває 9000 с 9001
Зо «2105 23 «2115 1224 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК Вега ушрагів фосфоліпази 1 «4005» 23 аггвраваай старасісії реетаасссї яцарссса расссссегаа їсате етааї 60 сісаєаасаа Сцаарасє (вгасвевева весацавевя, ваагаасссс Тесаяцатт 120 сцЦраацсс цеайсаса асіссавраат Царагсеріе авєраарсаав, айсеосіваї 180 ацивас йацессре аасрарсасс ррісоссіса (аасівссай вЦаассвсс 240 ссіаасраса ааасісеесс асісіасрсс рссааррара Цасіссі цаїсцрає 300 сацріссра араїсицссе ссаассаарі рерагаше рисайа(аре васісіааєт 360 аарсірсіаа рсреессеаа асасеа(рра аартассис асааісіарсааареааце 420 сісерасааа раарецеса їсаарсеце асіайсоісо Цаїсссаас Шіирагаіс 480 аарадісне арссірсисії сицстасі (а(агррісс саайесіааараацерас 540
РІЄЦесіві сарасасаєе са(аросасе Істосарсіс саасрисстассарсеясає 600 саййрааа асазараєра ісареесааї рісааарааї ісаассісаєірагврівяї 660 айрсієсса аб(айіссис айаріреса аг(аарсеаар (расааааса аагарісаая 720 аврсаасссра ашіснцссс ра(аааресс асерасрів аасеерсі ррірагавст 780 царерасів ваїссрасаа еріарарсар, сіста(єаате сіаааарсес арсаааріст 840 грРаацацші сарай (расайсері ай(асіссасіасцраєвс Шааєсаа 900 їсадаросіо а(агеоісва фесасаа (сірірессі йсаарсага реисісн 960 расаацаєс цсесаїсса ара(еагаса сіаааресаср (а(сарсаєс арісваєів 1020 рсаассасар аааашеес аааісцеї(с асаайераа аресасісц рааааарсса 1080 рідіссареа Цаашсва (асееотара (абсаасста іІсссіааєро арерассааї 1140 рареаарссі (аайцавеоц (есеааасіс сцассраре аааарарсар асесваасаа 1200 абсерасра ассрааріва сіаа 1224 «2105 2А «2115» 407 «2125 ПРТ «213» Вега ушвратгів «4005 2А
Меї Сн Авп 5ег Аге 5ег І еи О1у Авп Рго Маї 5ег Рго Аге Рго Рго 401 5 10 15
Авп Нів С1у Авп Гей Це ТПг Пе Гец 5ег Це Авр СТу СТу СТу Це 20 25 30
Аге СТу Це Пе Рго Аа МаїЇ Ме І еи СЇши Ре Геп Он 5ег Сіп І ей 35 40 45
СІп Гув Гей Авр ОТу ОЇшп Си Аа Аге Ге Аа Авр Туг Ріе Авр Маї 60 50
Це Аа С1у Тіг 5ег Тіг СІу ОТу Геи Це Тіг Аа Ме І еи Тіг Аа 65 70 75 80
Рго Авп Авр Гуз Тіг Аге Рго І еи Туг Аа Аа Гуз ОЇи Це Тнг Рго 85 90 95
Ре Туг І еи СЇш Нів Сув Рго Гуз Це Ріре Аге Сп Рго 5ег С1у Це 100 105 110
Ре ОСІу 5ег Це СІу Тіт Геи Меї Гуз Геи Ге 5ег СТУ Рго Гув Туг 115 120 125
Авр СТУ Гуз Туг І еп Нів Авп Гей Маї Суб ОЇи Гец Гей О1у СІп Аг 130 135 140
Атге І еи Нів СІп Аа ГГ еи Тг Авп Маї Маї Це Рго Тіг Ріе Авр Це 145 150 155 160
Гуз Авп І ей Сп Рго Маї І еи Ре 5ег Тіг Туг Меї Маї Рго Це Аа 165 170 175
Гуз СІп Гей Авр МаїЇ І еи І еи 5ег Авр Це Сув Пе ОС1у ТІг 5ег Аа 180 185 190
Аа Рго Ті Ре І еи Рго Аа Нів Ні Ре Спи Авп Гуз Авр Авр Сп 195 200 205
СОІУ Авп Маї Гуз ОЇи Ре Азвп Ге Це Авр ОІу О1у Це Аа Аа Авп 210 215 220
Зо
Авп Рго 5ег І еи Маї Аа Це 5ег СЇи МаїЇ Тіг Гу Сп Це Маї Гув 225 230 235 240
Зег Авп Рго Авп Ре Ре Рго Це Гуз Аа Тіг Авр Аге ОЇ Аге Гей 245 250 255
І си Маї Це 5ег еп ОІу Тіг О1у 5ег Авр Гуз Маї СІи Сіп І ей Туг 260 265 270
Авп Аа Гуз 5ег Аа Аа Гуз Тгр СТУ Це Це 5ег Тгр Геи Ріре Авр 2175 280 285
Авп О1у Авп Ті Рго І еи І ей Авр Аа Ре Авп Сіп 5ег Гу Аа Авр 290 295 300
Меї Маї Авр Ріе Нів Азвп 5ег Маї Аа Ре Сіп Аа Туг О1у бег І еп 305 310 315 320
Авр Авп Туг І еи Аге Це СіІп Авр Авр Тіг Гей Гуз ОТу Маї 5ег Аа 5О 325 330 335
Зег Ма! Авр Маї Аа Тіг Тіг Он Авп І еп Аа Авп Гей Маї Тіг Це 340 345 350
О1у Цу5 Аа Гей Гей Гуз Гуз Рго Маї 5ег Аге Це Авп Ре Авр ТНг 355 360 365
СОІУ Аге Туг Сіп Рго Це Рго Авп СІу СОТу Тнг Авп ОЇ Си Аа Гей 370 375 380
Це Аге Ріе Аа Гуз Гей ЇГеи ТНг СОЇш СТ Гуз 5ег Аге Аге ОЇи СІп 385 390 395 400
Туг Аге Тіг Авп Аге 5ег Авр 405 «2105 25 «2115 14701 «212» ДНК «213» Вега ушвратгів «220» «221» тівс Теаште «222» (10783)..010802) х223» піва,с, 5, ог1 «4005» 25 варівіеває гарцеси рівсвавєсяї пщещше гесеаасис Тесівісасе 60 еще граанесіо їсасещшаа цассайса арісісаєсі ссистатма 120
Зо райеіваєс Чесні гагацераї врісірарсс ссарасетіса ШІецсвя 180 пеагесері (ріосасрі цсіссаааа сссіарцре Шеріосре Цасесаїст 240 цашраї грецасеї росссаєсса арсіайеіо Церіесеоіоіасагарі 300 (вгагессега арігасеааї (сайсаєса арецееце рИріссасаацсааааає 360 вташси вецессаї аайсазаза аретацісі (сеИріссс іааєссаааа 420 (еРіРіаг гер цріссс гаа(сцааа арсісоцасіраареясеи рашісасяі 480 сцайеріс ісстіаріааї аайсіща (папи саайерарі вПеівна 540 сіабссіаір айсареоре ратгіацара еЦасеоіаа ріасацаса йарартай 600 асешерав гаймаш айареаріс Ппетацага гасстасвар спісаєатт 660 сасесрасс ріесРцаай йсаааацї епайсіає (арасасіссайстаси 720 їашаса ааасцааа (оіеаааааї (саасарца раїсааша вагатацаа 780 несрсіааге (аааааайа аааарецеї вгарірацеї (аасацаас шщеіваа 840 їрайацеа асараааваа саадайіааї гар аасіаааца аасартаєса 900 ааартаріса а(гисарас Цисаївіо сасецас(сі абоссаєси ШИщаєаа 960
РИасааца ширіссає цаайшце айсаартає йеасесагасассацца 1020 зааспрцй адагресаат йреааграє аайщшаа абсашесі Шесаашіі 1080 шагансї айсацара (сацаарее гайцеріс асшщаааав арвасассас 1140 ассіссіссс Церсцаа (аа(арараї стецаари яНаріасеі агсаєстави 1200 саріаареаї цсісагайц арецегаа (а(асайсс їсаааарці раїааєціс 1260 ссаєайсіа аассцааса сшраріса рісаааєріо всараарста ашіснца 1320 (Ріагацва грасагасас арааівсасо сао ща (араарасі ассайсааа 1380 аєссаасадіа (асаїеетай араасааійї цаааасега сисаації сісісасівт 1440 асцерасас райсорраср аараареіре (срасассрі ріаррарсеар аарасіваат 1500 авраараса(а сасса(ассі йсаараава аггагарарі агеіріотає ріайарста 1560 ресарасіяі (ерарісіав ароисараї рісеаааар ааррарайіа агасереіса 1620
Зо рагешщар Чцаайоіса аагейесес (сіарсаає ріссцацяе абараєсасі 1680 рісааар ці йеасасіа рсіссцац (састасіаа а(асіааца сасіааіста 1740 сіртасасгас асссасасас ага(а(агас агагассара а(сарераа асстаттвої 1800 єайгесисі сісссвецс сареаріссі а(са(свай сісасссце асаарцаряя 1860 псіссща Иссссаарс Цасбсасасе (асасасріс есівіса(ар асагрісаєс 1920 4
І шаарща арцааааає йасаасааа цаанаарі піагресае сасетаєсаті 1980 (всцссарс аацаацсс (ссіаадац ааагарцав сцассаріс сасаасвтає 2040 вайзаасааа гайаааісе гееааріара рісайаа (агагаайс асасаасавт 2100 сісесеесіа Цаараарас гайшесі аарсіреца (врісіоце сис 2160 исісіс йесісароі аайавеце рісшврара айбаасасів аааасрасва 2220 асцасадає сісіссісса (сснсаай асіасаасар раараааціе рісасааісс 2280 царсасва серісвірес айсрареса цацссіос ірісацси рсцйсце 2340 арсрасисі (сарріасяї асагааааса (аассагасі асасасгасає аїсісстаєа 2400 (аіссаєса (сісісрсас (сашегас їсашарся (ріваа(сеі рсасгаїсаса 2460 ісраасааіт цашіва! аєрайаасо аєаацавро( іссіаріавра рцвресаєв 2520 абарссррес аріссааса сриссасса (ргасшас серЦаїссс сасасваєас 2580 аашеис рааарісааа расасіоца (сооісаа аг(арасаєса Шаааає 2640
Мперсаааа (агеараасі агетааціс саєспрца (сацйеа(ас спріаааас 2700 4 і єгагрсааіся (осагрсасс гай(еаайіаа (аасааааа сааіаааріа асідацаая 2760 єагайгсрарі арівтасааі (етасагрія сасааіаац (сара(єесра аасрааааіа 2820 цащшасіа срисагааї аєецававда аарсасіссі рарасагайі рісасрсага 2880 рРцассссес адаааасайі їзайааах вагеісароі аайеецаїаацаєта 2940 врарцеваї рраравраая (аарасіарс агайцації рагеіра(гар саряаасаая 3000 2 і сасрерарое Црацасат ссабєецаас (осассараї расіасгаасс ріссістага 3060 (есівсрааа ра(аєсасаа сайщаси раарса(ері ссісааа(а Цссісавра 3120 аареіааааа ащааасрі сагааіацс сасассасаа (аїаацій аасаартаєс 3180 сіабааасро (еоісасася сіаарсаєра саайщац аааараєсааїсваацій 3240 айаадіси аєаргацаа ааайарайі ісацееріе еааааааааа (сааааареяї 3300 7 іРіРаши сріссассяї гаааісвааза сааааарааа арісааартаааресцац 3360 ашсісай (а(ааасає саааіцав (асссайас ссагєаааіавт йсраассає 3420 абарасасаа є(аахсааці (сріріеааї грШоаре рааасссіаєсстшісцає 3480 ссагайагеві піа(ааасаа айцассса саааааіаса сааєшіснц са(абгастає 3540 асасеаааа (аасіацає расага(аєс (асцарца сссрісраріарешасста 3600 аасцаєсса гасассаааї агеісааааа рааіссарц аайешеа враїріваві 3660 сагвіраце рігарсіаєс аайеисаї сасшсіаа айсааасіс врарраатіаа 3720 їсаацеріс Керсагарі прИцріссас Шеоіссси ааїсаацаєсрартацся 3780 айсісаацй Шерраасе радараай Шеассарі ссщасссіаарівіавс 3840 асісгаарсея араргайцаа (сайосісі сеесеоісваа (асцавац вишаааа 3900 аааасцеваєт роарісаас (арсараса (іассіса (еШерісаа (раароісів 3960 саааріааї рсіартасос (астассесс са(васссіо ааайсаай шсацей 4020 гРІШари всайеіссі ашеесіає йсаагаси гартаасшщ аааааааааа 4080 гасиссісс а(сісши асісестіаса сищаца (ссеаарій сасацаси 4140 встасасис Ше рес айазастай сістассісі сіссісссас абраріссся 4200 (вигавас сісіарарії ссадазаавас і(сіасасеоі арарисеи ааа(ассарі 4260 срцеацаа раайісааар вста гсписсаа ааа(сссссс(ацйсссс 4320 срадіассі рссайгаєсії Шссццс сассайссас рарссцшіра цасєрсаєа 4380 (агреісаре ацсаасісї асшіетавра реийсаїаа аасістарар раїссврасс 4440 ссаєрарісс сицсцц (айсістас Ццсісісис іссааааац рссіарваті 4500 ссріврааасо араарівіат сраріааааа рааасерат аартагаця йцаасації 4560 цаааааца (лга(щає іе(авгаца аєсцайсаа цасіааррр ашіссааса 4620
Ршрарі сессівац йесівсасса аршарааа аацеагаро Пошісіаа 4680
Зо саїсцще ссрессасса арсіррараї піарасагаєгарааріарИц аєраціис 4740 ссасшеаа сігецагас агасайаає гагцацас аарісши (араєсаца 4800 сіссасра( (ссассаце нсаїрісаї сиеісагасасарсраси (сяіаастає 4860 гРіРтацає гайагагас (сссіста ссадістара (ссаацац Цссішщає 4920
РРШСІсСсе расасасц цасаєстає гайагаає (аріараай (арцаєава 4980 1расагаце (ааашаа сацацеаа асааассіаа (а(еааці асаєсаєаає 5040 шашесі їасаєссарта аааааа(ає спарцаас айсасраїс(шаассста 5100 разаадаасааа (еИрсаарі (а(аг(ееааі (аасааарра гецасаш Ипспеврааа 5160 аваассагав Црісісц ссиеаарта саацасраї рісарівеоі аасевааістї 5220 асссреасс аааїсації йарсеації ріасссісаа аййцеврасс саасярасає 5280 рврасавіс йааасай асагераріс ріаїссаці асссаши (ааааацає 5340
Шааажма: аєаайаааа рісададасі гєаааграші Шаасісва абаасасааа 5400 сшерессе, йсісісеса абаагасааа сийеаца ШШааа асасаааси 5460 і гарессаааа Иссіссарі агриааас серцеріаа сцецо(ар рареіаасса 5520 аврсігасрів всассщар врасасеівіс шашеасівосірви Шаааща 5580 рерааааааа ааассааааї ШИСЦИ ЩИсСщс Цсіссірсіссссссиса 5640 псісшсі сасіасісса ссссассрас ссссассссі рессссівсс сссарссссії 5700 сесірссівс асассесас ссіссвасра ссаасссссс аг(сісіррсс сЦсссссас 5760 7 сссрааасса (ассрсассс сіссрасаас сассссірос сссіссссса сссраааасс 5820 асассесасс Ісцсрасаа ссаассссса Шсівоссс сісссссасс ссрааассас 5880 асірсасссс (ссаасерсс абсассівас рссайсісе а(сесісваа сцЦараєссі 5940 йсссрсаса асаасааріс рісрісвіса ссрсесрааа (сааіасрасацсваааає 6000 весерісай йацасра сраайссар рареарраав арасрісецй рИсасвай 6060 7 ісесагарії асесеасів рерааріврі Псрівівоі ерісарше ароівсоціс 6120 ріррівовро аршіварос рошсаре йреосасра роісоіваєв рірецшсаї 6180 ссріверері врарсіріве врареееріве аасіріррар рірареріве вреравврв 6240
ГРвревІера всірівраре гРреррааре рерІверарі ррарссріве арріррарра 6300
Ререрівера рірросщшс асайісар Церцеосі арросаарра реааравай 6360
Церарщша аааааайсеа ссіацетас агецайво (саасцеас сіасірраря 6420 аайеесс їаааршеї айацаааа аагаассааа агшіетац ацесварар 6480 аасеесссаа агшетай айсрарца аааааіссаа асцаааасс айшщаєрає 6540 7 шаєсщшс ааацасца (агещай рісаєрааіа Шасі сацацай 6600 сшегаагсе сасааасаєрт аййесааї раасаасага сіабсасава сиссіссає 6660
Цегаайгаа ріосаасац ісцешс асашесса агосацац йаассатта 6720 асассисаа йабсааіаа р(ааааацна (ааааарце асацааааа аайсасай 6780 гараграйіс (аасаараєс ссасаєрасі аїгицсс (аааасесаа аїсасіааат 6840 сіаацеа(т Шааасісї ргайгаріааа сасіаєрсаа агецасасіташавааа 6900 серареаарі айааа(аас ссаацеааї арйа(а(аа цабсааааа аєааріаай 6960 асаааара(єе риаайцсаї айгетатає яіасссаарі ріарааасаєаассааааєа 7020 аа(амаа фсе(аана аасасіаце арисацаа раарасгацс Цесцйева 7080 врсцссцсс ашссрай гашеайа рірсарасіс расассаєаа сеіаєсцар 7140 пешеаас гарісеаай раасіва(ас аарааареаа а(арсаріат Шаааааааа 7200 цайнсаарі ца(аааса а(єсаасаєаа Шисааас абасаацаа сасайсіза 7260 айасайгса ааса(єесісс срсасагарі сссвасіайц аресівірса аасаасссаа 7320 єарсасарра ссссраацї сцарерісс ссааааісіє рааасааааа аасасарія 7380 айасеесес їаааасааії саасіаса(а гацарсара риецагає равацаасі 7440 сіасаасаар аагасесаар йсрасісаї риссеесаа (аїсщасаасшшес 7500 заарієщаї гагайисі (стар шва рсашсасі са(сісссса ссасисага 7560 сбасшсі аастацієс спаси шсааасі ШИшеРаєсааайсций 7620 їсісаайсі цареоасі НИеаєаа айсикца( саайссца геетасцає 7680
Ищшера аріета(ац (ріссааіаа гаайеааа ашіссіоссасаавшас 7740
Тавшассе рарісас сісаєса(аї агатаааші ШИ рйасси 7800 цараріваєт агарааааає гайасєсей аєсщагаа ріараасаєс арісаєааєт 7860 (ге Іщшага йеарцец асасасаай (сааасрарі йрарецщщавцшисва 7920
Шасаараїє ааашацає аайетааа цаєаааага ШИЩаєсашеарій 7980 рсаааааааї гарацарео ріссайіссі аааайесаа саарассісс аааасшща 8040 авасерсссі рсссесасас айгсарсае (гайааааї рарсаєеца яіаасасаає 8100 раасаєсаас сіаааайтеї всассиета Шоеааа(т ріасааааа (аєсасаєаа 8160 (сабгасадар аасашеаа сааасаєсас асашасар асааа(а(ає аєраєааєса 8220 асссаєсайц аацса(аєс ашсайра а(асгацаса аасаса(єаас раайаєрас 8280 (гаайігесаа (адасаєсіе ассаасаєеї яШсаріва асасайсів айоесасаас 8340 5О рваасагаєс саєаайсаї ецацайе саацайа: рісісааара саєааєааає 8400 аггеаараа сівтаса(аа са(стеааса аасасагааї ааасагаєсо сіаааєріаа 8460 єааасасасе ассаасасаа айсаацає (асайасаа (аагасаасе аасаєасац 8520 і єасартасаа сайассівї ШИсСІар, агоісеаасі сецсаїсіс сщацйсає 8580 (реесісісї саше цса Цеерасаїс аайесааре йоцйсасєсасаада 8640 їассаараєс йсасіараа аарас(ссааа ааадайсаат ааасеааарі рсаагаєтта 8700 ааааааааіа йСИЦИс цасєсааасе сасараєста агаасцаєр йсшфесаа 8760 сісРиоа сасисаї ріасеаазає (еєщааааа ааіраарааі Цааааареї 8820 ва(рарааа рейараває аарцааара гасецЦерар рашеоосоа раарараєаа 8880 ааарісше аааашісів гееаааааст аааріааєра айсаааці шасі 8940
Шерірис айееарас аасадааєри сашсеівс айшщери (ааєсаатас 9000 7 всРіІшасе (Шрирас аїссріше асссагєрсас ассиссіса асагасаєсс 9060 рРисесасее Праїсасі раїсацсес йеаааарее айбааррісасасарсяй 9120 аарайсеааа саарадараї стіагаше йееіаасії гоітастасаа Парето 9180 ісассерісс ареа(севаї сраассівас сірссіррас сепсщасросайсис 9240 врассаррів (срагсераа ааасбсареіс (срісцсар (ссерассів Цоресства 9300 7 аааацаасі (р(асісте ацсисера ссірцасра сссассаїса агааасаєса 9360 раацссава гашаєсар Шасараре ассаасіаса асаарсааас ааааааасаа 9420
Цегартасі (ссісср ШКас йесаасасі ШИЦса( саасіссаає 9480
Рідадашіе роаг(сараї аресагасар рааааааара рараїссссаїрівайера 9540 рагара(ара гарааареаа аарааааарі агааарісц рсааріаай аацацис 9600 7 щареаа арірцесаа ріааааарас реарраатта Шари щ ацасааай 9660
РшШерорео рооореосаро араса(сває (сасасіара сіареасасі сааараряса 9720 ссайарсас (сасіааріс айааарца аара(арада арреіваааа арасісвсва 9780 асігазазаас адассівра(с ровів ос вріарсіося рісессірар сеосрісвія 9840 всрісеріос расівеце рсраррсрів ассесрівар расівароіс Шеарисі 9900 спцарееш сицараай вгасіаааєра ргараресава аріареааіааареесівос 9960 ашщаа аааааааааа (асідадаар сиссрарцї Цсерісівв ассввацї 10020 нсрарше аассарассе аассреааас ссреайаіара сасайссас ррассврера 10080 і ссррацевра агсессеріс серисвас срассаааа (ссеріссра Цараїссрта 10140 сссассіа(е (саасарссс (арстасайї асіасасєсас (ассівссцЦ айаасісіс 10200 ссіщаца гашисрі (арсіааіаа сісссцаре агацесааісасшенце 10260
РИа(аасіс йабаарца сіацагарі аргавраасаа стайацає рієсаааац 10320 асасавгаац (гИшсИ ссайщшає рерассасиії всісавсіва йарсисає 10380 4 і сааарсайіе асареессаа айагсаєсе саартаща сессаса(асіаарресаааа 10440 айрааарар асаарецес абсасасасі аасааасе и рісайссаа сийевасає 10500 їаарассцс саассарца (айсісне сіасаар а аагааанах ааісеівівс 10560 (сабсіссаа (аайшасс цаайіеааї шсасаас (ааїсаше сшіесіває 10620 расса(єссиї гашреаагсе аарарайа а(аса(цає асасасасає аєасаєсасаї 10680 2 і ага агатагагає айасаєага стасгасагає артасетарі асеіасятає 10740
Рцасртасе цасеаріа сятасее ота сцаасрісе (апппппппо попопопопо о / 10800 ппаріагарі аріасааца (а(а(агсага (асгагасага (асасасаса састасагата 10860 єагагасаа (а(асасава (а(асасаца (а(агавоаї рарраастар сісаєріврі 10920 аварсасісс ссісіваєсс йераррісав пре цсрас сцассссса асацає 10980 7 ррресашс сцарсаєрс Шесаїрсі Цассарсса а(еіосісеіарцссіаса 11040 авесіавттав аабесаації асрісцаца асіса(асса а(ааріса(е їаасіссааа 11100 ааааааааа цараааааа рааацсаар, аааааааааа йеееаєсаа аацішаа 11160 ее Рааас (стіайгааае сгайріаасі сіаасссааї сагрісрісе ааайсайс 11220 їсашсіса Шазаарарс айсісагаї ргагацасіс сіасгасасаєісеіосирі 11280
ШШсЩШ ацарагваї ссіарсцва (агсвасеса аасіаараас Цсаааавта 11340 амаасраваа йастації аатецисі ие Іща йссага(ає аєсіааасас 11400 атміацаєсе, агєсіва(гаре сасааатей асасцаасе (гацаєсса ааїаршаа 11460 пеарарш гасісна(єс аарцаєсаї рісвістарі пйаасаай сщарцний 11520 асРІСТаці (еісяарсі асаріссрас (ерісааріа сираєсааа саршщаарс 11580 вріраассіа йЦеса(всасі Шассіаре саасіаріаї агсісісеаа аарієааєта 11640 срасісіса Шисагарі гааашаса асгайсіста авсіщаєе агайааєра 11700 гареісагас аєсагесвар, рцайеаар (ріоіевай цссіарісс ссщарвца 11760 сайецай цецавері (гайсаарі агашасар ассіасаєра рерсабаасі 11820 аарарассаї ацацва (геаараааа піарарарое (сасшщарс авсіасіссї 11880 асіасварга рсіаартай асерашаа ааааіацес ісссаасаєарааайаає 11940 рісеааааа аасаасаці (аарагєааса сасашщацса аааасаааас (арігааааа 12000 (аассіарас ааацсеааї сцашеса (срасааасі ссаасації саїсацац 12060 псаааааса (а(сааааса йЦеаадаєрс сараєсисі ріссесссссісссшврас 12120 саааааєра ашіагасеї аатар ци ассисеіаа щасаці рісацнеє 12180 авасинсаай (аасаціс ашоівис аацадааси (есрасцарісаасвтай 12240 аацасаєсс псщагсос а(аааааарі ссашаєса аїсаасссаа раарасісас 12300 ааггища їсашаац Шесааай сіаарцає ашаайи сасагайсії 12360
Зо аарцассі раїсісва(т сразацас ара(ага(рі аєаресасає сррссесісс 12420 єассайсів ссисшсї ашссаааа (есашеаа аасеаааара сааррваай 12480 саассісай расеоісваа йоісартас аааіссе ота арісаарсіс аагсаасає 12540 айацацс йасесцар ареагесаса агарсагері цсасцесре весаааретіва 12600 ассайг(еооії рарецеріс Цассацее ро(варісаа госааасаєо рсцпааєрає 12660 вЦереа(аа Шосісссс сісісіссса асссас(осаї серассаара рсссаарста 12720 ріаасадааат ясЦрівтас Шсасарат айгїсарсис агрісшва рісіаравсі 12780 шиссис ссааасрісс їасісцара айецац асагаасста сшаацає 12840 шищшас аашагсаа аагарцек агецацас агаріаариї рісяіаєсає 12900 арисццс асеаавдасіс адарсісааа сагїаааааса гасваєща йсабсаєас 12960 5О /сассіарага (ассасайа(єв йбавтасацй йецаци вееаасіаєсс ааассаасаа 13020 єаарсарааа айгаріскце арівіавіої стасааіеи сасайгасає (саарівтає 13080
Риваації йеіагаара ессіаааааа сіщаєсса асаасасіщі ааассавсар 13140 і аварааай ашраетга (савіаації сайсіассії еще (срісівреяс 13200 авасцасі ресайгаааї гаарцасса аасаааграї гааррарааї ссарацася 13260 реассасса (аагаарце сісоцца: срагареаас ареаїсавра аааайетарс 13320 авраайгасаа (осіаааасії ясареааарі реооресцеї сісцеосі Шсааааіє 13380 расаєсасс аайагаарії вспщае аарссеееес (расцарії райассааа 13440 4 і авгааассі сиссайісяя Шсрисар арвасаарта ссуисеіоіе сааріааріс 13500 рса(рагасс сисааайї аасшаагсе (аріааісся Шасраца аїсресасає 13560 айрцрееаа агаааасаре а(сасарсиї аасареааса асіссисаа сараєсіарс 13620 аасарараат аасцералгва агсіарієаа аайерісаа вгаацесца асааассарс 13680 сарсареоів расссарааа сісоросаїсі рааарсаац ссасассце яіассааєос 13740 2 і авасесісиї сеаарецее йсагааай цасааацй ессаагаєаа айосасай 13800 айарцай астіасіараї арайцаасаа рісацааса айгтарецсе саааасаасї 13860 сісерасєваа арааайіасс рсарееосаа арасіссааї сара(єесаар аріасавсіє 13920
Зо аврсігасраї ріссаресаї йсірартас (варсірісі Працегаї асіаєаєсає 13980 ааасоіеіос айгеіааця ассісааасс йсіасіса зай астайцсіяї 14040
ІрРРИгаца гааашога асеисіааа гайасєсца аааретасіа гассятатта 14100 сааассіос (айгааага (аріарсава сайсши Цеесісссі(ссрреаас 14160 сів ріаара (саацієсї Царасівіс сісасасаро вессасісасс сараарасса 14220 4
І асаасссссс Іссссссаас (агайсааа ШИесце сассаараціраассире 14280 сисссаа рірарасасе ааассасасс айерассса ареоіссце ріасаєааає 14340 арсагасаї рірасасаса аарагараса ріараєрие сисароіаа(есарааасс 14400 ссеіага(ра (саасасраї саасараасі агетагасі абгасисц сссіараєаа 14460 рсаарааці абераресіа аста(єссце Шессіва аєесцагсас аараараєрс 14520 ааайарааа есісарарсс арагасісіс Цайгарасс сареаріаас сіраасцес 14580 єассагайцс аасасаща арссарааре (аааасасар аарисрааа ріааарасає 14640 саарцсаса аарсіарера (сцшщйеаа ріссаассаї серасацає рреацясіа 14700 а 14701 «2105» 26 «2115 1215 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» кодує послідовність послідовністи ДНК Веїа ушвагів фосфоліпази 2 «400» 26 асасеаасі тасааарсіс Іссіссаєсс йсаацасі асаасареаа гааацеріс 60 асайіссца рсаїсврасео (срісесац сраресаца ссіосіві сайсцесі 120 шесирарс васцсиса рварцевраї врарареаае гаарастарс агадаци 180 рагрісасав сароаасаар сасрерарео йрацасар ссасеЦаасірсассараї 240 7 васіагаас ріссісіа(а (осірсеааа рагаїсасаа сайщаси раарсаєвяї 300 ссісааага( йссісарра аареерасса сЦесісарсірацйарси саїсааарса 360 абрасаррес сааааагса (сосааріаї Цасессага (асіаарова аааайтааа 420 рарасаароі (ссабсасас асізасааа!є ецоісацс саасццеа сайаарасєсс 480 цпссаассар йасайсіс Ццссіасаар айсіаари агссіра(стррасссвааа 540 7 цабсараца (агеіагаре сасаїсерсс рсісстасса йсівссис Шссгашіс 600 саадасєрсаї йеаааасра адарасааре раайсаасс ісацеа(ро(ераацето 660 аргасаааіс срасцасі росайаааї раарцасса аасааасєрає раареараає 720 ссарацасе ррассаєсса гайаарце сісосіща( сра(арваасарраєсарра 780 аааацеарс араайгсасаа (рсіаадасі рсареааарі рррооспрісісцврси 0840 7 шсааайе ваїссаєсасс аацагаарі ясищас аарссерерсівасцавий 900 рацассааа а(ааєссі сиссааіся Шсрисав арсасааріа ссцсеіві 960 саараєсаса рсцаасаре аасаасіосі Ісаасара(е (арсаасара раараасця 1020 рааааістар їгаааацео їсаарааце сцаасааас сарссарсав реірврассса 1080 разаасісеос а(єсірааарс аайссасас сцертіасса агессарасрсісцсваарт 1140 нсрсааазас аасісісяра (гааараааа (ассрсарое есааарасіс саасараєє 1200 саараріаса рсіва 1215 «2105 27 «211» 404 «212» ПРТ «213» Веїа ушрагів х4005» 27
Меї Тіг Авп ГГ еп Сп 5ег 5ег Рго Рго 5ег Рре Авп Туг Туг Авп Аге 5 10 15 ув був Гецп Маї Тіт Пе Гепц 5ег Це Авр СТу СТу СТу Це Аге О1у 20 25 30
Пе Пе Рго Аа Маї Це Ге Аа РБе Гей Си Аге Геп Гей Сп Сн 35 40 45
І ей Авр О1уУ ОїЇнп Сн Маї Аге І еп Аа Авр Тут Ріє Авр Маї Це Аа 50 55 60
СІу Тіг 5ег Тіг О1Іу С1у Геи Це Тіг Аа Ме І еп Тг Аа Рго Авр 65 70 75 80
Авр Туг Авп Аге Рго І еи Туг Аа Аа був Авр Пе Тіг ТІг Ре Туг 85 90 95
Ге Гув Нів СТу Рго СіІп Це Ре Рго Сіп Си Аге ОС1Іу Рго І еи Аа 100 105 110
СІп Ге Це 5ег Ріе Це Гуз АІа Меї Тіг СІу Рго Гуз Туг Авр СТу 115 120 125
Гуз Туг І ей Аге Нів Це Гей Аге СЇи Гу Гей Гу Си Тіг Аге Гей 130 135 140
Нів Нів Тг Гей Тг Авп Маї Маї Це Рго ТІг Рре Авр Пе Гув ТОг 145 150 155 160
РНе Сіп Рго Маї Це Ре 5ег 5ег Туг Гув Це ГІ еи 5ег Туг Рго Авр 165 170 175
Гей Авр Аа Гуз Г еп 5ег Авр Це Сув Це ОІу ТІг 5ег Аа Аа Рго
180 185 190
Тіг Це Гей Рго 5ег Рре Туг Ре Сіп Авп Аа Ріе Сп Авп Спи Гув 195 200 205
Тіг Аге Оп Ре Авп І еи Це Авр СІу СТу Це Маї 5ег ТНг Авп Рго 210 215 220
Ті Туг Гей Аа Це Авп Си Маї Тіг Гув СІп Меї Меї Гуз ОЇи Авп 10. 225 230 235 240
Рго Авр Туг СІу Тіт Це Нів Авп Гуз Г еп ГГ еп Ма! І еи 5ег Пе СІу 245 250 255
Ті ОтТу бег ОТу був Це СЇш СіІп Гуз Туг Авп Аа Гув Тіг Аа О1у 260 265 270
Гуз Тгр СІУ Г еп Маї 5ег Ттр Гей Ріе СіІп Авп ОС1у 5ег 5ег Рго Це 2175 280 285
Це 5ег Аа Ре Туг ОЇмй Аа СІу Аа Авр Ге Маї Авр Туг СіІп Авп 290 295 300
Авп Це ІГеи Ре Сіп 5ег Ре Аге 5ег СЇши Авр Гуз Туг Гей Аге Маї 305 310 315 320
СІп Авр Авр 5ег Іеи ТОг СІу ТОг Тіг Аа 5ег ТіПг Авр Маї Аа ТНг 325 330 335
СТи був Авп Гей Сп Авп Гей Маї Гув Це О1у Сіп СІ І ей Гей Авп 340 345 350
Гуз Рго Аа 5ег Аге Маї Авр Рго СЇи Тіг СТу Нів Геп Гуз Аа Це 355 360 365
Рго Нів Ге Оу Тіг Авп Аа Авр Аа Гей Аге Аге Ре Аа Гуз Сп 370 375 380
І си 5ег Авр Сп Аге ув Туг Аге Аге ОЇу Гув Авр 5ег Авп Сп Меї 385 390 395 400
СІп Оп Туг бег «2105 28 «2115» 40 «212» ДНК «2135 штучна послідовність «2205
«223» К590О мутована - праймер АПЦеїеХ «400» 28 ваавррівасс аарисатес іссріссарс (сстесарсі 40 х2105 29 «2115» 39 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність «2205 «223» К59О мутована - праймер аПеієУ «400» 29 ваавррісева рісаасеваї (свіссарсі ссірсавсс 39 «2105» 30 «2115 22 «2125 ДНК «2135 штучна послідовність «220» «223» К590О мутована - праймер соттоп «400» 30
Іїссссрраас са(їссцрсс й 22 «210» 31 «2115 201 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» 223 часткова послідовність яка вказує на проявяемьій однонуклеотидний поліморфізм викликає амінокислотне заміщення К590) в 5огеПлит БісоЇог фосфоліпазі «400» 31 вавсссрісе (есівереса варерівасяе ріесівасее (срасевсее сеесассрі 60 ввіссасс ссеваассаї ссцессис сісварессс тесіврсавва всіврасевя 120 ссевавєеца весісесева стасцсвас Гасагєсесся ррасварсас сеесеврсіс 180 ассассесса (рсісассяс 201 «2105 32 «2115 41 «2125 ДНК -213» штучна послідовність
-223» У1621 мутована - праймер АПеіеХ «4005 32 ваавріврасс аарцса(ес (вавсрасас всісассааса 41 «2105» 33 «2115 41 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» -223» У1621 мутована - праймер АПеїеУ «400» 33 вааврвісевга рісаасеваї (савсеасас есісассаас 8 41 «2105» 34 «2115 21 х212» ДНК -213» штучна послідовність «220» «223» МУ1621 мутована - праймер соттоп
«400» 34 сіссарсарс сісасрісва а 21 «2105 35 «2115 201 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 005223» часткова послідовність яка вказує на проявяемьій однонуклеотидний поліморфізм викликає амінокислотне заміщення МУ 1621 в БогеПишт бБісоЇог фосфоліпазі «4005 35 сагріссрсе сірарраарс сааретасаа серсааріес сіссяіаасс (сасагвар 60 сагесісерс рарасеавео їраврсевасас рсїсассаас пісаїсаєсс стіассисва 120 срісаресія сірсарссса їса(сцсіс сассгасврас ртасртасес сессевссес 180 срісрісаге ай(айсааї с 201 «2105» 36 «2115» 39 50005212» ДНК
-213» штучна послідовність
-223» 52911, мутована - праймер АПеіеХ
«400» 36 вааррівасс аарисатес Терсавасвс сссассясе 39 «2105 37 «2115 39 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» х223» 52911, мутована - праймер АПеЇеУ «400» 37 ваавррісева рісаасеваї (весара(свс сссассеса 39 «2105» 38 «2115 19 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 223» 52911, мутована - праймер соттоп «400» 38 рессіріасас ррсесерса 19
«2105» 39 «2115 201 «212» ДНК -213» штучна послідовність
«220» 223 часткова послідовність яка вказує на проявяемьй однонуклеотидний поліморфізм викликає амінокислотне заміщення 52911, в 5огейит БісоЇог фосфоліпазі
«400» 39 сіртасссавр їраавссвів ваасівссес аарцсстіве (всівісса( свврасевоя 60 їсвасрісее авсаревссії ртасасееся сеесарівсі урсевіввве саїсівссяв 120 тева(ссера асаасеесаї ресссссас асвеасасі (са(весевс варсісевас 180 сіррівраса (ссасрісяс с 201 «210» 40
«2115» 39 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» х223» ()3725ор мутована - праймер АПеіЇеХ «400» 40 вааррівасс аарисатес грасссівра сасссесів 39 «210» 41 «2115 42 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» х223» О)372850ор мутована - праймер АПеЇеУ «400» 41 вааврвісевга рісаасеваї (ецеасссї врасасссес а 42 «210» 42 «2115 20 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 223» О)37250юр мутована - праймер соттоп «400» 42 вісвераєсе рерарсераї 20
Зо «2105» 43 «2115 197 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 223 часткова послідовність яка вказує на проявяемьій однонуклеотидний поліморфізм викликає амінокислотне заміщення 0О37251ор в Богепйит бБісоЇог фосфоліпазі «400» 43 врсаїссарра саасісрсів сасресессе серссассві ррасесерся асессерава 60 аса(есеврас всісрісере, аїсеверарс врагевсівевс вуаврсевріе їссаверіса 120 асрівєварас ареваєветас раассерівс сіврегааре, аарсаасесі вагесесіся 180 сірераїсес ааресар 197 «210» 44 «2115 19
-212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 223» прямий праймер «400» 44 ресссссас аг6сеасаєс 19 «210» 45 «2115 24 -212» ДНК -213» штучна послідовність «220» 223» зворотний праймер «400» 45 адісаресаа сазайсасі їсіс 2А
Claims (16)
1. Рослина сорго, здатна індукувати гаплоїдію, яка відрізняється тим, що вона має щонайменше одну заміну, що стосується ендогенного гена, який кодує пататин-фосфоліпазу, де пататин-фосфоліпаза кодується нуклеотидною послідовністю відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 1 або 2, або нуклеотидною послідовністю, яка щонайменше на 80 95 ідентична послідовності зЕО ІЮ МО: 1 або 2, або кодується нуклеотидною послідовністю, яка гібридизується з послідовністю, комплементарною нуклеотидній послідовності відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 1 або 2 в жорстких умовах, або яка містить амінокислотну послідовність, показану в ХЕО ІЮ МО: 3, або гомологічну амінокислотну послідовність; при цьому щонайменше одна заміна є щонайменше однією мутацію в ендогенному гені, що кодує пататин-фосфоліпазу, і щонайменше одна мутація приводить до обміну амінокислот в діапазоні положень амінокислоти 53-85, 150-192 та/або 285-311 відповідно до ЗЕО ІЮО МО: 3, або утворення стоп-кодона в діапазоні положень амінокислоти 342-392 відповідно до хЕО ІЮ МО: 3.
2. Рослина за п. 1, яка відрізняється тим, що щонайменше одна мутація приводить до обміну амінокислот у положенні амінокислоти 59, 162 та/або 291 відповідно до 5ЕО ІЮО МО: З та/або до стоп-кодона в положенні амінокислоти 372 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 3.
3. Рослина за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що пататин-фосфоліпаза: () містить амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: З або гомологічну амінокислотну послідовність, у якій присутній щонайменше один обмін амінокислот, водночас аргінін (К) у положенні 59, валін (М) у положенні 162 та/або серин (5) у положенні 291 відповідно до ЗЕО ІЮО МО: З замінюється іншою амінокислотою; (ї) кодується нуклеотидною послідовністю, яка містить послідовність, що кодує послідовності ДНК відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 1 або послідовність ДНК, яка щонайменше на 80 95 ідентична ЗЕО ІЮ МО: 1, у якій присутній щонайменше один обмін нуклеотидів, що приводить до обміну амінокислот, водночас щонайменше один нуклеотид обмінюється в положеннях 421-423, 815- 817, 1420-1422 та/або 1663-1665 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 1; (ії) містить амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 6, 9 або 12; або (ії) кодується нуклеотидною послідовністю, яка містить послідовність, що кодує послідовності ДНК відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 7, 5ЕО ІЮ МО: 10, 5ЕО ІЮ МО: 13.
4. Рослина за п. З (ї), яка відрізняється тим, що аргінін (К) у положенні 59, валін (М) у положенні 162 та/або серин (5) у положенні 291 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 3 замінюється глутаміном (С) у положенні 59, ізолейцином (І) у положенні 162 та/або лейцином (І) у положенні
291.
5. Молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує мутовану пататин-фосфоліпазу за будь-яким з пп. 1-4.
6. Молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що її присутність у рослині, за відсутності пататин-фосфоліпази дикого типу, приводить до того, що рослина здатна індукувати гаплоїдію.
7. Молекула нуклеїнової кислоти, яка містить у довжину щонайменше 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 100, 200, 300, 500 або 1000 нуклеотидів, яка специфічно гібридизується з нуклеотидною послідовністю, визначеною в будь-якому із пп. 1-4, і містить одну з мутацій або пару молекул нуклеїнової кислоти, яка придатна для діапазону, що містить щонайменше одну з мутацій, для ампліфікації в полімеразній ланцюговій реакції (РСК), у формі олігонуклеотиду.
8. Молекула нуклеїнової кислоти за п. 7, яка відрізняється тим, що олігонуклеотид має максимальну довжину - 50 нуклеотидів.
9. Молекула нуклеїнової кислоти за п. 8, яка відрізняється тим, що олігонуклеотид має одну з наступних нуклеотидних послідовностей відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 28-30, 32-34, 36-38 або 40-
42.
10. Рослинна клітина, яка містить молекулу нуклеїнової кислоти або молекула нуклеїнової кислоти за одним з пп. 5-7 у ролі трансгена, у разі потреби регульованого гетерологічним промотором.
11. Спосіб отримання рослини, здатної індукувати гаплоїдію або такої, що має підвищену швидкість індукції щодо дикого типу, що включає такі етапи: (а) () проводять мутагенез рослинних клітин, а потім регенерують рослину з рослинних клітин, підданих мутагенезу, або мутагенезу рослини; (ї) ідентифікують рослину з етапу (), що має щонайменше одну мутацію в ендогенній послідовності ДНК, яка відповідає та/або яка приводить щонайменше до однієї мутації, ідентифікованої в пп. 3-5, де аспарагінову кислоту (0) в положенні 75, гліцин (5) у положенні 79 та/або пролін (Р) у положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ МО: З замінюють іншою амінокислотою у відповідному положенні, і яка здатна індукувати отримання гаплоїдного потомства з підвищеною швидкістю, порівняно з рослиною, що не була піддана мутагенезу; або (р) () вводять молекулу нуклеїнової кислоти, що має щонайменше одну мутацію, яка відповідає щонайменше одній мутації, яка приводить до обміну амінокислот в діапазоні положень амінокислоти 53-85, 150-192 та/або 285-311 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 3, або утворення стоп- кодона в діапазоні положень амінокислоти 342-392 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 3, та/або яка приводить до заміни в клітині рослини аспарагінової кислоти (0) в положенні 75, гліцину (5) в положенні 79 та/або проліну (Р) в положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ МО: З іншою амінокислотою у відповідному положенні в рослинній клітині, і (ії) регенерують рослину з рослинної клітини (і).
12. Спосіб за п. 11, який відрізняється тим, що на етапі (аХ(її) або (Б)(ї) аспарагінову кислоту (0) в положенні 75, гліцин (0) в положенні 79 та/або пролін (Р) в положенні 203 амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮО МО: З замінюють аспарагіном (М) у положенні 75, аргініном (К) у положенні 79 та/або лейцином (І) у положенні 203.
13. Спосіб за п. 11 або 12, який відрізняється тим, що ендогенна послідовність ДНК або молекула нуклеїнової кислоти є кодувальною нуклеотидною послідовністю, яка містить амінокислотні послідовності, показані в «ЕО ІЮ МО: З для сорго (богдпит бісо!юог), ЗЕ 10 МО: 18 для соняшнику (Не/апіпих аппиив), хЕО ІЮ МО: 21 для ячменю (Ногаєит ушцідаге) або в БХЕО ІО МО: 24 або 27 для Веїа мушідагіз (наприклад, для цукрового буряку).
14. Рослина, що містить рослинну клітину за п. 10, та/або отримувана способом за будь-яким із пп. 11-13.
15. Рослина за п. 14, яка відрізняється тим, що вона являє собою сорго, соняшник, жито, пшеницю, картоплю, ячмінь або цукровий буряк. БО
16. Орган, частина рослини, тканина або клітина рослини за одним з пп. 1-4, 14 або 15, або насіння, або потомство рослини за одним з пп. 1-4, 14 або 15, який відрізняється тим, що насіння або потомство має мутацію, що приводить до обміну амінокислот в діапазоні положень амінокислоти 53-85, 150-192 та/або 285-311 відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 3, або утворення стоп- кодона в діапазоні положень амінокислоти 342-392 відповідно до 5ЕО ІЮО МО: 3, та/(або молекулу нуклеїнової кислоти за одним з пп. 5-7.
Векули ЕКІооАА МАТЕУПОВАВОНаСОВТКАМАЦУЧФЕВТ ОВУ ТОКМАК КАВЬ Мсежковпше КЕ ВЯщОа КАТЕ МАСВЕКАВАСУ ЕМО ЕК ВК ВУХ В ней МсЕЩІНЕ ВОЮ АвиХ МАКЕТІВ еЕСМАСВ КАМИ КК КУ КУМ МКК БАК СКАН У ох КВ ЗеІ МОВІ МАВО КАНОЕ АК УМОВАМ Векуйже ВІ: ОЗ йаєоюв МеТЕТОЕВАЕВсНВе о тКАНАВО УВІ А НОВУ ТТ ОКО ЕТ ВМ ЕаНЬ жкжтжкжж ЕК ЖЖ ЖЖ Ки ЖК ЖЖ КК В КК Ж ЖУК ЖЖ Ж дж жк жах хх дохо КМ МЕНІ КУ МКМ ЕЖ ТУЮ ВОІВ КИ КУМ І АВОКМАВК СО АЕМІВЦК ЕМВ К ВО пеки ЕВ: КОХ ОБР ЕУВоВУКСЕ ВІТ ами тАроКоВВрІТААКОТНОЮУНЕНСОВІВ ВО Хек ЖК ЕВ дЕВИОКЕУВСАМЕКМЕ АНТИ ОМАКМММКИКОККЕ вАККИМОВМНКМОККЕВВ жохани ВВ че МЕБООВЕУВ ОК УЮ ІМ БІАВСКИКЕВСЖАКОІКО ТНК Босха ВВ МІК ЕкОю СТОК ККХ МЕМ ТАТ АВОКЕВВЕБУВАКТИВ СВ ВЕР совка ха мл жк хм кю хх кока ки КЕ ххх кох хх кох Кк хо. кота КК АВ КИЕВА АЖМОАЬНКВХКУКСМНММІ НІНО КЕКЕМІММи КІТ ОКО ОКХ ехо ВВС; КОМОД АМОМОКАВКЕМНККЬКН МАКІВКИ МКК КАМ шожхолих КК, КОЕІВОВАВМОВЕВКРЕ АСВ Монети ІТК. ї хеоешххчхкхизіххУехххехкхІхихкувикникх их ї сих: хм М дек КК ль КАН КУН УК АК ЕМ К КХ МКАНТЕ УК КИМ ОМ КК МО З ТОК У ЕК ТКА Хелен В: ОБО ДАВ КМ АКІОМ КІВІ Х БАНКЕТУ КК КЕКЕККН КЕ В КЕКВ, похани ВКА ЕЖХ СЕМЕН АУЕАНАВ І ОКАНХКОЇ КМТ УЗ ККУ ЄМ КЕ У ДАНУ шок лв же Ма аю ВАКОВЕКККИАСООМуУ КОАТУУ Х ЖЖ дж Ко ж Ж Ж жою м ж В ож кю Ж ж Кох В Жов КК и ко док м ж КК ко може КВ ВО МУМЕТКЕМОАІКЕКАВЕМУУ УКР ВАК КУКИ ЕММА КОСИ КК КВ. Мохенш ЗВ БОБИ. МІОКТкКНОАоКЕКАККІ УВУ КВЧСКККО ВВ сто Коко ьУт восків вожаниВ БК І лах МЕУОКІКЕМОАОКЕКЕУвУММККЕ ІОВ СВ КВ. . шок ЖЖ м в дожив ом кож кож хек ож ккд ожож ж ж жожомож кож ком жк В жо жк шожани КБ АВ КИЗМАВІХКІНАВЕ МИТІ АМЕ НОМ КОМУ ВАКУВЕНМК похо КРОКВ ІНЕМАКІХВІТМАВОСВОУСІВУАЕМЕОВЕВОрОВХ ВІН НОААВІУВАВТРЕВІВ і й а НК ЕН и В ЕЕ в В М В З Зони БЕ КТ Те НЗЕНМІ ЛОВУ ВНУКІВ В НАС М І АКОС ОВЕН ТВОВКЕТЬУ Зожхани во ті БАХ УМІВ М Ко КУ ОО В КК КІВЬАККІАЇУ похо КК ЗВ ТАН ОВК МОВОКУ УМА У ОКОМ МАО АВС ТВОМЕІІУ хежкхжшкж вки хижих кажи Вход кож ж ж ож КК ОЮА ОВК УСЕ ОМУ Хетевне ВВ І сова КОшМУ ож ВК оОВи УК «5пВомсоватсалЕаУ шОоЖеТиН БР. Хе) схе же з ххх с о хохх Й Ії жхжвх ххх « ;
Фіг. 1 я .
декани Межі БЕ АВ МВХКХМОВИВСН ОК мк ВОМУ КТ У УМ ВХ зБккени «вішак ВК АВ «ВАЖКО КК ВКА. ко ККУ У КОКО ОКО ВО Мерів мвиа апа БОБ ДА осн УВА КН а КО ек хзічаків КІ А ІК я КК ик ласк о КВК Дух кю ВК ОВЕН МІ БВ ВХ ета тів ЕКО КК ВК КК КК тю Кк У Кф в ММК ТК ІВ КОНІ ВО ем А ек о НК Я ех Міссемаю БЕК тОСТІБАКОВАВАВОООНВУНОАУК МІ АВІА ІВАНО НЕ ВеКео: аа ЕР В ОТАМАН АІК НУТ А КІНО АКНЕ нехіавівих зп о ве о БшАсЬОК ьо АВАКОВ МО АННИ В НИ ААКО ХЕ Зеїа ззідекіз ВІ А АХА ОВУ КОАОУТ І ІАОІ НЕ ТАНКА ВЕНА ху ких збу х т,бужика кахвикаххукуєкаюх, ххх. беІціие: Кксік ВРЕ ЗВ ВУМЕОСВН ІК ВО дою ох амеб се ВОВНИ КОН НК ВІВ КК В ЕХЕЗНОВЕ ПЕЖО СД ую пеню кн хи кни Де М ВЕ КЕН Жесз «зіва і В ТВ Ах ЖЕТЕИСИКІЖК УМОВ сехенссеюоюестоесттеютетоюсо есе В НО КОКОН ее Зі ЕК ВЕК НОВО КЕ ОВО бе нею зок ВО КЕ КАНТ жу ж Ж в 3 жі жЖ ух ето зва ви ЕМ и КІНО ВОСВАСООУ ЧІВ УЮ ОХ МАМИ АМНИНОАОІСІ ОА Х ес зві Ві ОВ. БУКВИ ОКНУ ЕКОНОМІКУ МОСК ОАВЄ ох хо Жахи, жуки Ух кох ЖЖ Фо ЗЕ це ВЕК КВК ТАТА МАСОВУ ОА АННО УМА О УКЕМЕАЗКЕКАЮКМКК УВК КК А У Я ХОРНІ НОМ ОАЕ МУ Т УВЕМКУК ОКЕ ККУ КИ Жеба звішвкіЕ ВК ВХ ВІКНОМ НУ КВУ НОМ ААКН ВАК УК ее МЕ ВЕК ее Бі ВВ АВ. ХИБНА НКУ ОК КОВІ НКУ КОМ У Деежя ож ж я жк у ка ку КК щ вок Фо я ж г ой дж є ож жо ж х екон БІК КБ ВА ПОВЕ Ба МНК АВК СКК КНТ ОХ КМУ СІ КУХ ношею зміщаее Бе А ОК СК КК ЯК КВ КК С ТОН КК ЕК Яеба звідки ЯК ах шЕЖи ІМ У КУ МК АМІККМН УКМАМНКЕ Яесаз сзеідвкв ВХ А «ВЕЖІ ОВК ОКУ НОВО КІТ КУВАСКІВ І ОК хво й « Ж ве их вх й вх Ух - "МАВ ж ще ж Ж х У щ Ся ех х ж х хх х х Ж Ж Веожениє Бен х ЕЕ АХ Дек КОМА МАТКОВІ ввізне аврвива тк ав ІКОН ТОКМАК ОКО ХВ БОКИ БОКУ йсесз віщеківЗ ВВЕ В ОКРОБУСВВОНУ МНОЖЕННІ КАВОВІ ОКА Я-есз УузізакіЗ ВІ АХ ТЕРОБЕ ВІКО ТЕКУ МТА МАЕ У В КОМУ КВК ших жежажея ВМ Жах Во мих Ж Жах вої хг хх дека За цах ТЕО КУКА АВК ВВА УМОВАХ Вокер змі БЕ АК БЕТВОМОВ НАВАН АК ООН УВС КВ УВК ОА ох хоною юю ою оба тмісвКУ ЕХ А ЦК ДВК М КЕ ДЕ АВК ВУ КОМ Ме з темою ож еєсткте юю деїа Умізввкі В РКО Ва. КАВУ НАНУ ОЬ ОВК У ВЕС дру усю жкоютютм 5: жа же юЖ Ж жЖЕ сх
Фіг. 2 чи.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17158439.4A EP3366778A1 (de) | 2017-02-28 | 2017-02-28 | Haploidisierung in sorghum |
| PCT/EP2018/054901 WO2018158301A1 (de) | 2017-02-28 | 2018-02-28 | Haploidisierung in sorghum |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA127680C2 true UA127680C2 (uk) | 2023-11-29 |
Family
ID=58212937
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201910053A UA127680C2 (uk) | 2017-02-28 | 2018-02-28 | Гаплоїдизація у сорго |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11661607B2 (uk) |
| EP (2) | EP3366778A1 (uk) |
| CN (1) | CN110546266A (uk) |
| AR (1) | AR111006A1 (uk) |
| BR (1) | BR112019017802A2 (uk) |
| CA (1) | CA3054855A1 (uk) |
| CL (2) | CL2019002439A1 (uk) |
| EA (1) | EA201991923A1 (uk) |
| ES (1) | ES2992413T3 (uk) |
| PE (1) | PE20191361A1 (uk) |
| UA (1) | UA127680C2 (uk) |
| WO (1) | WO2018158301A1 (uk) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102014016667B4 (de) * | 2014-11-12 | 2024-03-07 | Kws Saat Se | Haploideninduktoren |
| WO2019234129A1 (en) | 2018-06-05 | 2019-12-12 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Haploid induction with modified dna-repair |
| EP3689135A1 (en) | 2019-01-30 | 2020-08-05 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Haploid inducers |
| AR118995A1 (es) | 2019-05-25 | 2021-11-17 | Kws Saat Se & Co Kgaa | Mejorador de la inducción de haploides |
| JP2023527446A (ja) * | 2020-05-29 | 2023-06-28 | カー・ヴェー・エス ザート エス・エー ウント コー． カー・ゲー・アー・アー | 植物単数体の誘導 |
| CN114957422B (zh) * | 2022-06-15 | 2024-08-27 | 中国水稻研究所 | 一种诱导单倍体的方法及其在植物育种中的应用 |
| CN114656546B (zh) * | 2020-12-03 | 2023-09-19 | 中国农业大学 | 孤雌生殖单倍体诱导基因及其应用 |
| AR130789A1 (es) * | 2022-10-18 | 2025-01-22 | Advanta Holdings B V | Métodos y composiciones de plantas haploides |
| CN120193001B (zh) * | 2025-01-07 | 2025-11-21 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 一种高粱双单倍体的育种方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6198000A (en) | 1999-06-09 | 2000-12-28 | University Of Rochester | Gene encoding short integuments and uses thereof |
| EP2206723A1 (en) | 2009-01-12 | 2010-07-14 | Bonas, Ulla | Modular DNA-binding domains |
| CN106834320B (zh) | 2009-12-10 | 2021-05-25 | 明尼苏达大学董事会 | Tal效应子介导的dna修饰 |
| PL2989889T3 (pl) | 2014-08-28 | 2023-09-11 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Otrzymywanie roślin haploidalnych |
| EP3037540A1 (en) | 2014-12-23 | 2016-06-29 | Kws Saat Se | Haploid inducer |
| DE102014016667B4 (de) | 2014-11-12 | 2024-03-07 | Kws Saat Se | Haploideninduktoren |
| US20180116141A1 (en) | 2015-02-24 | 2018-05-03 | The Regents Of The University Of California | Haploid induction |
| EP3091076A1 (en) * | 2015-05-07 | 2016-11-09 | Limagrain Europe | Polynucleotide responsible of haploid induction in maize plants and related processes |
| US20190200554A1 (en) * | 2016-08-16 | 2019-07-04 | Monsanto Technology Llc | Compositions and Methods for Plant Haploid Induction |
-
2017
- 2017-02-28 EP EP17158439.4A patent/EP3366778A1/de not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-02-28 AR ARP180100462A patent/AR111006A1/es unknown
- 2018-02-28 CA CA3054855A patent/CA3054855A1/en active Pending
- 2018-02-28 BR BR112019017802-3A patent/BR112019017802A2/pt unknown
- 2018-02-28 UA UAA201910053A patent/UA127680C2/uk unknown
- 2018-02-28 PE PE2019001775A patent/PE20191361A1/es unknown
- 2018-02-28 US US16/489,201 patent/US11661607B2/en active Active
- 2018-02-28 EP EP18708396.9A patent/EP3589737B1/de active Active
- 2018-02-28 CN CN201880027936.XA patent/CN110546266A/zh active Pending
- 2018-02-28 EA EA201991923A patent/EA201991923A1/ru unknown
- 2018-02-28 ES ES18708396T patent/ES2992413T3/es active Active
- 2018-02-28 WO PCT/EP2018/054901 patent/WO2018158301A1/de not_active Ceased
-
2019
- 2019-08-23 CL CL2019002439A patent/CL2019002439A1/es unknown
-
2020
- 2020-09-17 CL CL2020002415A patent/CL2020002415A1/es unknown
-
2023
- 2023-04-18 US US18/302,547 patent/US20230279415A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110546266A (zh) | 2019-12-06 |
| AR111006A1 (es) | 2019-05-22 |
| WO2018158301A1 (de) | 2018-09-07 |
| EP3366778A1 (de) | 2018-08-29 |
| ES2992413T3 (es) | 2024-12-12 |
| CA3054855A1 (en) | 2018-09-07 |
| EP3589737A1 (de) | 2020-01-08 |
| PE20191361A1 (es) | 2019-10-01 |
| CL2019002439A1 (es) | 2019-11-29 |
| BR112019017802A2 (pt) | 2020-03-31 |
| CL2020002415A1 (es) | 2021-01-29 |
| US20230279415A1 (en) | 2023-09-07 |
| US11661607B2 (en) | 2023-05-30 |
| US20190390213A1 (en) | 2019-12-26 |
| EP3589737B1 (de) | 2024-10-30 |
| EA201991923A1 (ru) | 2020-01-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA127680C2 (uk) | Гаплоїдизація у сорго | |
| US12234467B2 (en) | Diplospory gene | |
| EP3018217A2 (en) | Maize cytoplasmic male sterility (cms) c-type restorer rf4 gene, molecular markers and their use | |
| Hisano et al. | Genomic regions responsible for amenability to Agrobacterium-mediated transformation in barley | |
| CA3197663A1 (en) | New native clubroot resistance in rapeseed brassica napus | |
| US20170280645A1 (en) | Dominant mutation in the tdm gene leading to diplogametes production in plants | |
| US10253326B2 (en) | Mutant sorghum bicolor having enhanced seed yield | |
| JP2023544753A (ja) | 単為生殖遺伝子の改変されたプロモーター | |
| JP2018532405A (ja) | 種子製造における変更された特性を有するアブラナ属植物 | |
| JP6012016B2 (ja) | 単為結果制御遺伝子およびその利用 | |
| EP3689135A1 (en) | Haploid inducers | |
| US11930756B2 (en) | Wheat comprising male fertility restorer alleles | |
| US20230183737A1 (en) | Tomato plants having suppressed meiotic recombination | |
| US20230183725A1 (en) | Method for obtaining mutant plants by targeted mutagenesis | |
| CN120192998B (zh) | 一种生产多花多荚高产大豆的基因、方法及其应用 | |
| EA043415B1 (ru) | Гаплоидизация у сорго | |
| US20220033899A1 (en) | Screening of germplasm for desired polymorphisms by assays tested on synthetic dna | |
| JP2023111899A (ja) | 短葯形質を有するイネ、及びその製造方法 | |
| BR112018004300B1 (pt) | Gene quimérico, constructo genético, vetor, uso e método para conferir diplosporia em uma planta | |
| EA046710B1 (ru) | Гаплоидный индуктор |