[go: up one dir, main page]

TWI395756B - 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑 - Google Patents

對肝細胞生長因子具專一性之結合劑 Download PDF

Info

Publication number
TWI395756B
TWI395756B TW093121407A TW93121407A TWI395756B TW I395756 B TWI395756 B TW I395756B TW 093121407 A TW093121407 A TW 093121407A TW 93121407 A TW93121407 A TW 93121407A TW I395756 B TWI395756 B TW I395756B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
seq
residue
amino acid
heavy chain
Prior art date
Application number
TW093121407A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200524958A (en
Inventor
Teresa L Burgess
Angela Coxon
Larry L Green
Ke Zhang
Original Assignee
Amgen Inc
Amgen Fremont Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc, Amgen Fremont Inc filed Critical Amgen Inc
Publication of TW200524958A publication Critical patent/TW200524958A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI395756B publication Critical patent/TWI395756B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Description

對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
本申請案主張於2003年7月18日提出之美國臨時專利申請案第60/488,681號之優先權，其併為本專利申請案中任何用途之參考資料。
本發明關於結合至肝細胞生長因子(HGF)之專一性結合劑。本發明亦描述用於不同疾病(如：某些類型之癌症，包括，但不限於：實體腫瘤及血液惡性病)之組成物，製造該組成物之方法，及治療這些疾病的方法。
肝細胞生長因子(HGF)已被視為有效之肝細胞有絲分裂因子。HGF亦被視為可誘導表皮細胞之能動性的纖維母細胞和平滑肌的分泌蛋白質。在文獻中，HGF亦被稱為散射因素(SF)。
HGF為一種主要由間葉細胞產生之多功能性雜二聚體多肽，其可作為Met受體酪胺酸激酶(Met)的配合體。人類Met受體亦稱為"c-met"。透過Met受體酪胺酸激酶-HGF(Met-HGF)途徑傳訊顯示出可導致一系列之細胞反應，包括，但不限於：增殖(細胞有絲分裂)、散射(能動性)、刺激細胞通過間質移動(侵入)，及分支成形。在活體內，該Met-HGF傳訊通路(Met-HGF)涉及，如：神經感應、肝臟再生、傷口癒合、血管生成、生長、侵入 、形態分化，及正常之胚胎發育等作用。除了這些功能外，Met-HGF對亦涉入人類癌症。異常之Met-HGF傳訊顯示出涉及腫瘤生成，尤其是涉及侵入性及轉移性表型之發展。某些病原，如：瘧疾亦已被發現可發出異常之Met-HGF傳訊。見，Carrolo et al.,Nat Med.2003 9(11)：1363-9(Oct.12,2003)，其內容併為本專利申請案中任何用途之參考資料。
再者，某些團體已報告HGF可能涉入血管生成，及血管生成-傳介之疾病，如：增殖性糖尿病性腎病。見，Grant,D.S.et al.,Proc.Nat.Acad.Sci.u.S.A.90(5)1937-41(1993)；Bussolino et al.,J.Cell Biol.,119(3)：629-641(1992)；Montesano et al.,Cell,67：901-908(1991)；Canon et al.,Br.J.Ophthalmol.84(7)：732-5(2000)。HGF亦涉入細胞淍亡或預定程序之細胞死亡。當正常之調整機制無法維持細胞增殖和淍亡間的平衡而細胞過量累積時，即產生腫瘤。根據生物學的字義，HGF可同時影響細胞增殖和淍亡。
由於HGF涉及多種生理過程，在某些情況下，使用可調整其活性之分子可能有所幫助。例如：在某些情況下，這類分子可用來治療多種不同型態之癌症。
發明摘述
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之多肽，其含有至少一種選自如下群體之互補決定區(CDR)： CDR1a、CDR2a，和CDR3a
其中CDR1a含有胺基酸序列a b c d e f g h i j k l m n o p q，其中胺基酸a係選自賴胺酸、精胺酸，或麩胺醯胺；胺基酸b係選自絲胺酸或丙胺酸；胺基酸c為絲胺酸，胺基酸d為麩胺醯胺，胺基酸e係選自絲胺酸、甘胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸f係選自纈胺酸或異白胺酸，或不存在；胺基酸g係選自白胺酸或苯丙胺酸，或不存在；胺基酸h係選自苯丙胺酸或酪胺酸，或不存在；胺基酸i為絲胺酸，或不存在；胺基酸j為絲胺酸，或不存在；胺基酸k係選自天門冬醯胺、蘇胺酸，或不存在；胺基酸l係選自天門冬醯胺、異白胺酸，或纈胺酸；胺基酸m係選自賴胺酸、精胺酸、絲胺酸、天門冬醯胺，或天門冬胺酸；胺基酸n係選自天門冬醯胺，或絲胺酸；胺基酸o係選自酪胺酸、天門冬胺酸、色胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p為白胺酸；且胺基酸q係選自丙胺酸、甘胺酸，或天門冬醯胺；其中CDR2a含有胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r係選自色胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩胺酸，或甘胺酸；胺基酸s為丙胺酸，胺基酸t為絲胺酸，胺基酸u係選自蘇胺酸、絲胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸v係選自精胺酸或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺酸、麩胺醯胺或丙胺酸；且胺基酸x係選自絲胺酸、天門冬醯胺，或蘇胺酸；其中CDR3a含有胺基酸序列y z a’b’c’d’e’f’g’h’，其中胺基酸y係選自麩胺醯胺，或白胺酸；胺基酸z 係選自麩胺醯胺、天門冬醯胺或精胺酸；胺基酸a’係選自酪胺酸、組胺酸、丙胺酸，或絲胺酸；胺基酸b’係選自苯丙胺酸、酪胺酸、天門冬胺酸、天門冬醯胺，或異白胺酸；胺基酸c’係選自絲胺酸、甘胺酸或天門冬醯胺；胺基酸d’係選自脯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、天門冬胺酸、白胺酸或色胺酸；胺基酸e’為脯胺酸；胺基酸f’為脯胺酸，或不存在；胺基酸g’為色胺酸、白胺酸、脯胺酸、酪胺酸，或異白胺酸；且胺基酸h’為蘇胺酸，或天門冬醯胺；且其中該多肽(與一抗體重鏈聯結)可結合肝細胞生長因子(HGF)。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之多肽，其含有至少一種選自如下群體之互補決定區(CDR)：CDR1b、CDR2b，和CDR3b
其中CDR1b含有胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a為絲胺酸，或不存在；胺基酸b係選自天門冬胺酸或甘胺酸，或不存在；胺基酸c係選自天門冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、纈胺酸、蘇胺酸，或異白胺酸；胺基酸d為酪胺酸；胺基酸e係選自酪胺酸，或甘胺酸；胺基酸f係選自異白胺酸、甲硫胺酸或色胺酸；且胺基酸g係選自組胺酸、天門冬醯胺，或絲胺酸；其中CDR2b含有胺基酸序列h i j k l m n o p q r s t u v w x，其中胺基酸h係選自色胺酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬醯胺，或麩胺酸；胺基酸i係選自異白胺酸、苯 丙胺酸，或纈胺酸；胺基酸j係選自天門冬醯胺、絲胺酸、色胺酸，或酪胺酸；胺基酸k係選自脯胺酸、絲胺酸、酪胺酸，或組胺酸；胺基酸l係選自天門冬醯胺、絲胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸m係選自絲胺酸，或甘胺酸；胺基酸n係選自甘胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸o係選自甘胺酸、蘇胺酸、天門冬胺酸、絲胺酸、異白胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p係選自蘇胺酸、異白胺酸，或賴胺酸；胺基酸q係選自天門冬醯胺，或酪胺酸；胺基酸r係選自酪胺酸，或組胺酸；胺基酸s係選自丙胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸t係選自麩胺醯胺、天門冬胺酸，或脯胺酸；胺基酸u係選自賴胺酸，或絲胺酸；胺基酸v係選自苯丙胺酸、纈胺酸，或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺醯胺，或賴胺酸；且胺基酸x係選自甘胺酸，或絲胺酸；其中CDR3b含有胺基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’，其中胺基酸y係選自麩胺酸，天門冬胺酸、絲胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸z係選自白胺酸、麩胺酸、天門冬胺酸、組胺酸、脯胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸a’係選自麩胺酸、酪胺酸，或白胺酸，或不存在；胺基酸b’係選自白胺酸、天門冬醯胺、甘胺酸、組胺酸、酪胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸c’係選自精胺酸、絲胺酸、麩胺酸、酪胺酸、甘胺酸，或苯丙胺酸，或不存在；胺基酸d’為甘胺酸，或不存在；胺基酸e’係選自色胺酸，或酪胺酸；胺基酸f’為 天門冬胺酸，或不存在；胺基酸g’係選自絲胺酸，或精胺酸，或不存在；胺基酸h’為絲胺酸，或不存在；胺基酸i’係選自甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸j’係選自酪胺酸、麩胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸k’係選自酪胺酸、苯丙胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸l’係選自酪胺酸、天門冬胺酸、組胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸m’係選自酪胺酸、甘胺酸、天門冬胺酸、脯胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸n’係選自甘胺酸、纈胺酸，酪胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸o’係選自白胺酸、丙胺酸、甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸p’係選自甲硫胺酸、苯丙胺酸，或酪胺酸；胺基酸q’為天門冬胺酸；且胺基酸r’係選自纈胺酸、酪胺酸、異白胺酸，或脯胺酸；且其中該多肽(與一抗體輕鏈聯結)可結合HGF。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之專一性結合劑，其中該專一性結合劑含有：(i)第一種多肽，其含有至少一種選自如下群體之互補決定區(CDR)：CDR1a、CDR2a，和CDR3a
其中CDR1a含有胺基酸序列a b c d e f g h i j k l m n o p q，其中胺基酸a係選自賴胺酸、精胺酸，或麩胺醯胺；胺基酸b係選自絲胺酸或丙胺酸；胺基酸c為絲胺酸，胺基酸d為麩胺醯胺，胺基酸e係選自絲胺酸、甘胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸f係選自纈胺酸或異白胺酸，或不存在；胺基酸g係選自白胺酸或苯丙胺酸，或不存在； 胺基酸h係選自苯丙胺酸或酪胺酸，或不存在；胺基酸i為絲胺酸，或不存在；胺基酸j為絲胺酸，或不存在；胺基酸k係選自天門冬醯胺、蘇胺酸，或不存在；胺基酸l係選自天門冬醯胺、異白胺酸，或纈胺酸；胺基酸m係選自賴胺酸、精胺酸、絲胺酸、天門冬醯胺，或天門冬胺酸；胺基酸n係選自天門冬醯胺，或絲胺酸；胺基酸o係選自酪胺酸、天門冬胺酸、色胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p為白胺酸；且胺基酸q係選自丙胺酸、甘胺酸，或天門冬醯胺；其中CDR2a含有胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r係選自色胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩胺酸，或甘胺酸；胺基酸s為丙胺酸，胺基酸t為絲胺酸，胺基酸u係選自蘇胺酸、絲胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸v係選自精胺酸或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺酸、麩胺醯胺或丙胺酸；且胺基酸x係選自絲胺酸、天門冬醯胺，或蘇胺酸；其中CDR3a含有胺基酸序列y z a’b’c’d’e’f’g’h’，其中胺基酸y係選自麩胺醯胺，或白胺酸；胺基酸z係選自麩胺醯胺、天門冬醯胺或精胺酸；胺基酸a’係選自酪胺酸、組胺酸、丙胺酸，或絲胺酸；胺基酸b’係選自苯丙胺酸、酪胺酸、天門冬胺酸、天門冬醯胺，或異白胺酸；胺基酸c’係選自絲胺酸、甘胺酸或天門冬醯胺；胺基酸d’係選自脯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、天門冬胺酸、白胺酸或色胺酸；胺基酸e’為脯胺酸；胺基酸f’為脯胺酸，或不存在；胺基酸g’為色胺酸、白胺酸、脯 胺酸、酪胺酸，或異白胺酸；且胺基酸h’為蘇胺酸，或天門冬醯胺；且其中該第一種多肽(與一抗體重鏈聯結)可結合肝細胞生長因子(HGF)；及(ii)第二種多肽，其含有至少一種選自如下群體之互補決定區(CDR)：CDR1b、CDR2b，或CDR3b
其中CDR1b含有胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a為絲胺酸，或不存在；胺基酸b係選自天門冬胺酸或甘胺酸，或不存在；胺基酸c係選自天門冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、纈胺酸、蘇胺酸，或異白胺酸；胺基酸d為酪胺酸；胺基酸e係選自酪胺酸，或甘胺酸；胺基酸f係選自異白胺酸、甲硫胺酸或色胺酸；且胺基酸g係選自組胺酸、天門冬醯胺，或絲胺酸；其中CDR2b含有胺基酸序列h i j k l m n o p q r s t u v w x，其中胺基酸h係選自色胺酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬醯胺，或麩胺酸；胺基酸i係選自異白胺酸、苯丙胺酸，或纈胺酸；胺基酸j係選自天門冬醯胺、絲胺酸、色胺酸，或酪胺酸；胺基酸k係選自脯胺酸、絲胺酸、酪胺酸，或組胺酸；胺基酸l係選自天門冬醯胺、絲胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸m係選自絲胺酸，或甘胺酸；胺基酸n係選自甘胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸o係選自甘胺酸、蘇胺酸、天門冬胺酸、絲胺酸、異白胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p係選自蘇胺酸、異白胺酸，或賴胺酸；胺基酸q係選自天門冬醯胺，或酪胺酸；胺基酸 r係選自酪胺酸，或組胺酸；胺基酸s係選自丙胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸t係選自麩胺醯胺、天門冬胺酸，或脯胺酸；胺基酸u係選自賴胺酸，或絲胺酸；胺基酸v係選自苯丙胺酸、纈胺酸，或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺醯胺，或賴胺酸；且胺基酸x係選自甘胺酸，或絲胺酸；其中CDR3b含有胺基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’，其中胺基酸y係選自麩胺酸，天門冬胺酸、絲胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸z係選自白胺酸、麩胺酸、天門冬胺酸、組胺酸、脯胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸a’係選自麩胺酸、酪胺酸，或白胺酸，或不存在；胺基酸b’係選自白胺酸、天門冬醯胺、甘胺酸、組胺酸、酪胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸c’係選自精胺酸、絲胺酸、麩胺酸、酪胺酸、甘胺酸，或苯丙胺酸，或不存在；胺基酸d’為甘胺酸，或不存在；胺基酸e’係選自色胺酸，或酪胺酸；胺基酸f’為天門冬胺酸，或不存在；胺基酸g’係選自絲胺酸，或精胺酸，或不存在；胺基酸h’為絲胺酸，或不存在；胺基酸i’係選自甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸j’係選自酪胺酸、麩胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸k’係選自酪胺酸、苯丙胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸l’係選自酪胺酸、天門冬胺酸、組胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸m’係選自酪胺酸、甘胺酸、天門冬胺酸、脯胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸n’係選自 甘胺酸、纈胺酸，酪胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸o’係選自白胺酸、丙胺酸、甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸p’係選自甲硫胺酸、苯丙胺酸，或酪胺酸；胺基酸q’為天門冬胺酸；且胺基酸r’係選自纈胺酸、酪胺酸、異白胺酸，或脯胺酸；且其中該第二種多肽(與一抗體輕鏈聯結)可結合HGF。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之多肽，其含有至少一種選自如下群體之胺基酸序列：SEQ ID NO：24、26、28、30、32、34、36、38、40和42。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之多肽，其含有至少一種選自如下群體之胺基酸序列：SEQ ID NO：25、27、29、31、33、35、37、39、41和43。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之核酸分子，其含有至少一種選自如下群體之核苷酸序列：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17和19。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之核酸分子，其含有至少一種選自如下群體之核苷酸序列：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18和20。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之核酸分子，其編碼含有至少一種選自CDR1a、CDR2a，和CDR3a之互補決定區(CDR)的多肽
其中CDR1a含有胺基酸序列a b c d e f g h i j k l m n o p q，其中胺基酸a係選自賴胺酸、精胺酸，或麩胺醯 胺；胺基酸b係選自絲胺酸或丙胺酸；胺基酸c為絲胺酸，胺基酸d為麩胺醯胺，胺基酸e係選自絲胺酸、甘胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸f係選自纈胺酸或異白胺酸，或不存在；胺基酸g係選自白胺酸或苯丙胺酸，或不存在；胺基酸h係選自苯丙胺酸或酪胺酸，或不存在；胺基酸i為絲胺酸，或不存在；胺基酸j為絲胺酸，或不存在；胺基酸k係選自天門冬醯胺、蘇胺酸，或不存在；胺基酸1係選自天門冬醯胺、異白胺酸，或纈胺酸；胺基酸m係選自賴胺酸、精胺酸、絲胺酸、天門冬醯胺，或天門冬胺酸；胺基酸n係選自天門冬醯胺，或絲胺酸；胺基酸o係選自酪胺酸、天門冬胺酸、色胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p為白胺酸；且胺基酸q係選自丙胺酸、甘胺酸，或天門冬醯胺；其中CDR2a含有胺基酸序列r s t u v w x，其中胺基酸r係選自色胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩胺酸，或甘胺酸；胺基酸s為丙胺酸，胺基酸t為絲胺酸，胺基酸u係選自蘇胺酸、絲胺酸，或天門冬胺酸；胺基酸v係選自精胺酸或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺酸、麩胺醯胺或丙胺酸；且胺基酸x係選自絲胺酸、天門冬醯胺，或蘇胺酸；其中CDR3a含有胺基酸序列y z a’b’c’d’e’f’g’h’，其中胺基酸y係選自麩胺醯胺，或白胺酸；胺基酸z係選自麩胺醯胺、天門冬醯胺或精胺酸；胺基酸a’係選自酪胺酸、組胺酸、丙胺酸，或絲胺酸；胺基酸b’係選自苯丙胺酸、酪胺酸、天門冬胺酸、天門冬醯胺，或異白胺 酸；胺基酸c’係選自絲胺酸、甘胺酸或天門冬醯胺；胺基酸d’係選自脯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、天門冬胺酸、白胺酸或色胺酸；胺基酸e’為脯胺酸；胺基酸f’為脯胺酸，或不存在；胺基酸g’為色胺酸、白胺酸、脯胺酸、酪胺酸，或異白胺酸；且胺基酸h’為蘇胺酸，或天門冬醯胺；且其中該多肽(與一抗體重鏈聯結)可結合肝細胞生長因子(HGF)。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之核酸分子，其編碼含有至少一種選自CDR1b、CDR2b，和CDR3b之互補決定區(CDR)的多肽
其中CDR1b含有胺基酸序列a b c d e f g，其中胺基酸a為絲胺酸，或不存在；胺基酸b係選自天門冬胺酸或甘胺酸，或不存在；胺基酸c係選自天門冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、纈胺酸、蘇胺酸，或異白胺酸；胺基酸d為酪胺酸；胺基酸e係選自酪胺酸，或甘胺酸；胺基酸f係選自異白胺酸、甲硫胺酸或色胺酸；且胺基酸g係選自組胺酸、天門冬醯胺，或絲胺酸；其中CDR2b含有胺基酸序列h i j k l m n o p q r s t u v w x，其中胺基酸h係選自色胺酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬醯胺，或麩胺酸；胺基酸i係選自異白胺酸、苯丙胺酸，或纈胺酸；胺基酸j係選自天門冬醯胺、絲胺酸、色胺酸，或酪胺酸；胺基酸k係選自脯胺酸、絲胺酸、酪胺酸，或組胺酸；胺基酸l係選自天門冬醯胺、絲胺酸 ，或天門冬胺酸；胺基酸m係選自絲胺酸，或甘胺酸；胺基酸n係選自甘胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸o係選自甘胺酸、蘇胺酸、天門冬胺酸、絲胺酸、異白胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸p係選自蘇胺酸、異白胺酸，或賴胺酸；胺基酸q係選自天門冬醯胺，或酪胺酸；胺基酸r係選自酪胺酸，或組胺酸；胺基酸s係選自丙胺酸，或天門冬醯胺；胺基酸t係選自麩胺醯胺、天門冬胺酸，或脯胺酸；胺基酸u係選自賴胺酸，或絲胺酸；胺基酸v係選自苯丙胺酸、纈胺酸，或白胺酸；胺基酸w係選自麩胺醯胺，或賴胺酸；且胺基酸x係選自甘胺酸，或絲胺酸；其中CDR3b含有胺基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’，其中胺基酸y係選自麩胺酸，天門冬胺酸、絲胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸z係選自白胺酸、麩胺酸、天門冬胺酸、組胺酸、脯胺酸，或甘胺酸，或不存在；胺基酸a’係選自麩胺酸、酪胺酸，或白胺酸，或不存在；胺基酸b’係選自白胺酸、天門冬醯胺、甘胺酸、組胺酸、酪胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸c’係選自精胺酸、絲胺酸、麩胺酸、酪胺酸、甘胺酸，或苯丙胺酸，或不存在；胺基酸d’為甘胺酸，或不存在；胺基酸e’係選自色胺酸，或酪胺酸；胺基酸f’為天門冬胺酸，或不存在；胺基酸g’係選自絲胺酸，或精胺酸，或不存在；胺基酸h’為絲胺酸，或不存在；胺基酸i’係選自甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸j’係選 自酪胺酸、麩胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸k’係選自酪胺酸、苯丙胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸l’係選自酪胺酸、天門冬胺酸、組胺酸，或色胺酸，或不存在；胺基酸m’係選自酪胺酸、甘胺酸、天門冬胺酸、脯胺酸，或絲胺酸，或不存在；胺基酸n’係選自甘胺酸、纈胺酸，酪胺酸，或天門冬胺酸，或不存在；胺基酸o’係選自白胺酸、丙胺酸、甘胺酸，或酪胺酸，或不存在；胺基酸p’係選自甲硫胺酸、苯丙胺酸，或酪胺酸；胺基酸q’為天門冬胺酸；且胺基酸r’係選自纈胺酸、酪胺酸、異白胺酸，或脯胺酸；且其中該多肽(與一抗體輕鏈聯結)可結合HGF。
在某些實施態樣中，本發明提供一種分離出之細胞株，其可產生選自如下群體之抗體：1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1。
在某些實施態樣中，本發明提供一種抑制HGF結合至Met的方法，其包含投服一種對HGF之專一性結合劑。
在某些實施態樣中，本發明提供一種多肽，其含有至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列。
在某些實施態樣中，本發明提供一種多肽，其大體上係由至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列所組成。
在某些實施態樣中，本發明提供一種專一性結合劑， 其可結合至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列。
在某些實施態樣中，本發明提供一種抗體或抗原結合功能區塊，其可結合至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列。
在某些實施態樣中，本發明提供一種取得可結合肝細胞生長因子(HGF)之抗體的方法，其包含給予動物至少一種選自SEQ ID NO：164和165之多肽，並從動物取得可結合HGF之抗體。
在某些實施態樣中，本發明提供一種減少或防止專一性結合劑結合至肝細胞生長因子(HGF)的方法，此方法係藉由投服含有至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列的多肽來進行。
在某些實施態樣中，本發明提供一種減少或防止專一性結合劑結合至肝細胞生長因子(HGF)的方法，此方法係藉由投服由至少一種選自SEQ ID NO：164和165之胺基酸序列所組成的多肽來進行。
本發明之其它實施態樣中可很容易地從此處所提供之揭示內容中明白察知。
 某些示範性實施態樣的詳細說明
吾人需了解先前之一般說明和下列詳細說明二者均只用於示範及解說，而非如申請專利範圍般限制本發明。在 本申請書中，除非具體指出，否則使用單數形亦包括複數形。在本申請書中，除非另外指出，否則使用"或"時意指"及/或"。再者，"包括(including)"一詞，以及其它形式之"包括"(如："includes"和"included")的用途並無限制。還有，除非另外具體指出，否則"要素(element)"或"成分"等詞包括含有一個單位的元素和成分，以及含有超過一個次單位的要素和成分。再者，"部分(portion)"一詞的用途可能包括一部分(a moiety)或完全之部分(entire moiety)中的一份(part)。
此處所使用之章節標題係僅為了條理化，而非用來限制所描述之主題。所有本申請書中所列之文件，或文件部分，包括，但不限於專利、專利申請書、文章、書藉和條約全文均明確併為本申請書中用於任何目的的參考資料。
定義
標準技術可用於重組DNA、寡核苷酸之合成，及組織培養和轉形反應(如：電穿孔、微脂粒感染)中。酶反應和純化技術可根據製造者之說明書進行，或依本技藝中之一般方法完成，或依此處之說明進行。一般而言，前述技術和程序可根據本技藝中所熟知的習知方法，或依本專利申請書全文中所列舉和討論之各種一般和特殊參考資料中的描述來進行。見，如：Sambrook et al.Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989 ))，其併為本申請書中用於任何目的的參考資料。除非提供特殊定義，與此處所描述之分析化學、合成有機化學，及醫學和藥學相關的命名學，及實驗程序和技術均為本技藝中所熟知和常用的。標準技術可用在化學合成，化學分析，藥物之製備、調配，和遞送，以及治療患者中。
除非另外指出，根據本揭示內容所使用之下列名詞應具有下列意義：
"肝細胞生長因子"或"HGF"一詞係指Nakamura et al.,Nature 342：440-443(1989)中所列之多肽或其片段，以及相關之多肽，其包括，但不限於：對偶基因變異體、DNA剪接變異體、衍生之變異體、取代變異體、缺失變異體，及/或插入變異體，融合多肽，及種間同源體。在某些實施態樣中，HGF多肽包括終端殘質，如，但不限於：領導序列殘質、瞄準殘質、胺基端甲硫胺酸殘質、賴胺酸殘質、tag殘質，及/或融合蛋白質殘質。
"專一性結合劑"一詞係指特異結合至靶的之天然或非天然分子。專一性結合劑之實施例包括，但不限於：蛋白質、肽、核酸、碳水化合物、脂質，及小分子化合物。在某些實施態樣中，專一性結合劑為一種抗體。在某些實施態樣中，專一性結合劑為一抗原結合區。
"對HGF之專一性結合劑"一詞係指特異結合至HGF之任何部分的專一性結合劑。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑為一種對HGF之抗體。在某些實施態樣中，專一性結合劑為一抗原結合區。
"多株抗體"一詞係指結合至相同抗原之不同抗原決定部位的異源抗體混合物。
"單株抗體"一詞係指由相同核酸分子所編碼之抗體的集合。在某些實施態樣中，單株抗體係由單一雜交瘤或其它細胞株，或由導入外來基因之哺乳動物所製造。單株抗體通常係辨識相同之抗原決定部位。"單株"一詞不限於任何製造抗體的特殊方法。
"嵌合型抗體"一詞係指一種抗體，其中此抗體的一部分與一特殊物種或特殊抗體種類的序列同源，而此抗體的另一部分與一不同物種或抗體種類的序列同源。見，如：美國專利第4,816,567號，和Morrison et al.,Proc Natl Acad Sci(USA),81：6851-6855(1985)。
"CDR-移植抗體"一詞係指一種抗體，其中將來自一種抗體的CDR插入另一抗體的框構中。在某些實施態樣中，衍生CDR之抗體與衍生框構之抗體為不同物種。在某些實施態樣中，衍生CDR之抗體與衍生框構之抗體為相異之同種型(isotype)。
"多-專一性抗體"一詞係指一種抗體，其中有二或多種可變區結合至不同之抗原決定部位。抗原決定部位可在相同或相異的靶的上。在某些實施態樣中，多-專一性抗體為一種"二-專一性抗體"，其可辨認二種在相同或相異之抗原上的抗原決定部位。
"催化性抗體"一詞係指一種抗體，其中有一或多個催化部分附著在其上。在某些實施態樣中，催化性抗體為一 種細胞毒殺性抗體，其包含一細胞毒殺性部分。
"人類化抗體"一詞係指一種抗體，其中一抗體框構區的全部或部分係源自人類，但有一或多個CDR區之全部或部分係源自另一物種，如：老鼠。
"全人類抗體"一詞係指一種抗體，其中CDR和框構二者實質上含有人類序列。在某些實施態樣中，全人類抗體係在非-人類之哺乳動物(包括，但不限於：小老鼠、大鼠及兔子)中製造。在某些實施態樣中，全人類抗體係在雜交瘤細胞中製造。在某些實施態樣中，全人類抗體係以重組方式製造。
"抗-特應性抗體"一詞係指一種特異結合至另一抗體的一種抗體。
"特異性結合"一詞係指專一性結合劑可以較其結合至非-靶的來得高的親和力結合至靶的能力。在某些實施態樣中，特異結合係指以至少為結合至非-靶的之親和力的10、50、100、250、500，或1000倍的親和力來結合至靶的。在某些實施態樣中，親和力係藉由親和力ELISA分析來測定。在某些實施態樣中，親和力係藉由BIAcore分析來測定。在某些實施態樣中，親和力係藉由動力學方法來測定。在某些實施態樣中，親和力係藉由平衡/溶液方法來測定。
"抗原決定部位"一詞係指能被專一性結合劑結合之一分子部分。在某些實施態樣中，抗原決定部位通常含有分子之化學活性表面原子團，如：胺基酸或碳水化合物側鏈 ，且具有特殊之三-次元構造特性，和特殊之電荷特性。抗原決定部位可為連續，或不連續的。在某些實施態樣中，抗原決定部位可為擬態的，其中其含有類似於用來產生抗體之抗原決定部位的三-次元構造，但不含有或僅含有一些在該用來產生抗體之抗原決定部位中所發現的胺基酸殘質。
"抑制及/或中和之抗原決定部位"一詞係指一種抗原決定部位，當其在活體中、玻管中，及/或原位被專一性結合劑結合時可使生物活性降低。在某些實施態樣中，中和之抗原決定部位係位在靶的之生物活性區，或與其相聯結。
"活化之抗原決定部位"一詞係指一種抗原決定部位，當其在活體中、玻管中，及/或原位被專一性結合劑結合時可活化或維持生物活性。在某些實施態樣中，活化之抗原決定部位係位在靶的之生物活性區，或與其相聯結。
此處所使用之"分離出的多核苷酸"一詞係指基因組的、cDNA，或合成來源，或其一些組合的多核苷酸，由其起源來看，該"分離出之多核苷酸"：(1)並不與多核苷酸之全部或一部分相聯結，其中該"分離出的多核苷酸"可在天然中發現，(2)連接至一與其並非自然連接之多核苷酸上，或(3)不天然為一較大序列的一部分。
"分離出的蛋白質"一詞在此係指由cDNA、重組之RNA，或合成來源，或其一些組合所編碼的蛋白質，其(1)至少不含一些在正常情況下可與其一同被發現的蛋白 質，(2)大體上不含其它來自相同來源的蛋白質，如：來自相同物種，(3)由來自不同物種之細胞所表現，或(4)不會自然產生。
此處所使用之"多肽"一詞為一總稱，其係指天然蛋白質，或缺少、加入，及/或取代天然序列之一或多個胺基酸的這類蛋白質的改良體。在某些實施態樣中，多肽缺少、加入，及/或取代至少一個，但不超過50、30、20、15、10、8、5，或3個天然序列之胺基酸。
此處所使用之應用在物體上的"天然產生"一詞係指一物體可在自然中找到的事實。例如：存在有機體(包括病毒)中，可從自然來源中被分離出，且未曾被人們在實驗室中蓄意修改，或為天然產生之多肽或多核苷酸序列。
此處所使用之"可操作式地連接"一詞係指一些成分，其處於可令其以其預定之方式作用的關係中。例如：將控制序列"可操作式地連接"至編碼序列的連接方式為：編碼序列可在與控制序列相容之條件下表現出來。
此處所使用之"控制序列"一詞係指一多核苷酸序列，其可影響與其連接之編碼序列的表現和處理過程。根據宿主有機體，這類控制序列之性質可能有所不同。根據某些實施態樣，原核細胞之控制序列可能包括啟動因子，核糖體結合部位，及轉錄終止序列。根據某些實施態樣，真核細胞之控制序列可能包括啟動因子，一或多個增強子，及轉錄終止序列。在某些實施態樣中，"控制序列"可包括領導序列，及/或融合搭檔序列。
此處所使用之"多核苷酸"一詞係指長度至少為10個鹼基之聚合型核苷酸。在某些實施態樣中，該鹼基可為核糖核苷酸，或去氧核糖核苷酸，或其中一型核苷酸之改良型。此名詞包括單股及雙股型式之DNA。
此處所使用之"寡核苷酸"一詞係包括天然核苷酸，及藉由天然，及/或非-天然寡核苷酸鍵結連接在一起之修改的核苷酸。寡核苷酸為多核苷酸次組，通常含有200個或更少之鹼基長度。在某些實施態樣中，寡核苷酸之長度為10至60個鹼基。在某些實施態樣中，寡核苷酸之長度為12、13、14、15、16、17、18、19，或20至40個鹼基。寡核苷酸可為單股或雙股，如：用來建構基因突變種。寡核苷酸可為意義或反義寡核苷酸。
"天然產生之核苷酸"一詞包括去氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。"經修改之核苷酸"一詞包括帶有經修改或取代之糖基團，等的核苷酸。"寡核苷酸鍵結"一詞包括，如：磷酸硫代酸化物、磷酸二硫代酸化物、磷酸硒酸化物、磷酸二硒酸化物、磷酸二硫酸化物、phosphoroanilothioate、phosphroaniladate、磷酸醯胺化物，等。見，如：LaPlanche et al.Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Stec et al.J.Am.Chem.Soc.106-6077(1984)；Stein et al.Nucl.Acids Res.16：3209(1988)；Zon et al.Anti-Cancer Drug Design 6：539(1991)；Zon et al.Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach,pp.87-108(F.Eckstein,Ed.,Oxford University Press, Oxford England(1991))；Stec et al.U.S.Pat.No.5,151,510；Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90：543(1990)，其揭示內容併為本專利申請案中任何目的之參考資料。在某些實施態樣中，寡核苷酸可包含一用於偵測之標示。
相關多肽之一致性和類似性可藉由已知方法很容易地計算出。這類方法包括，但不限於記述於下列文獻中者：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York(1988)；Biocomputing：Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York(1993)；Computer Analysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press(1987)；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M.Stockton Press,New York(1991)；and Carillo et al.,SIAM J.Applied Math.,48：1073(1988)。
某些測定一致性之方法的設計係在測試序列之間產生最大配合。測定一致性之方法描述於可公開取得之電腦程式中。用於測定二種序列間之一致性的電腦程式法包括，但不限於：GCG程式包，包括：GAP(Devereux et al.,Nucl.Acid.Res.,12：387(1984)；Genetics Computer Group,University of Wisconsin,Madison,WI,BLASTP, BLASTN,and FASTA(Altschul et al.,J.Mol.Biol.,215：403-410(1990))。BLASTX程式可從生物技術資料國家中心(NCBI)和其它來源(BLAST Manual,Altschul et al.NCB/NLM/NIH Bethesda,MD 20894；Altschul et al.,supra(1990))公開取得。亦可使用吾人所熟知之史密斯瓦特曼計算程序來測定一致性。
某些用於比對二種胺基酸序列之相似性的相似性比對計劃可能僅配對出該二種序列的一小區，而即使該二種全長序列間並無明顯關係，此一小相似性比對區可能具有非常高之序列一致性。因此，在某些實施態樣中，所選擇之相似性比對的方法(GAP程式)可產生標的多肽之至少50個連續胺基酸的相似性比對。
例如：利用電腦計算程式GAP(威斯康辛卅麥廸生市，威斯康辛大學，遺傳學電腦組)可將二種欲測定序列一致性百分比之多肽進行比對，以將其各自之胺基酸做最理想的配對(經由計算程序來測定出"相配延展")。在某些實施態樣中，將空隙開放懲罰(其推算為平均對角線之3X；"平均對角線"為所使用之比較矩陣A之對角線的平均值；"對角線"為由特殊比較矩陣派定給各完美胺基酸配對之分數或數目)，及空隙延伸懲罰(其通常為空隙開放懲罰之1/10倍)，和比較矩陣(如：PAM 250或BLOSUM 62)與計算程式一起使用。在某些實施態樣中，計算程序亦使用標準之比較矩陣(PAM 250比較矩陣參考Dayhoff et al.,Atlas of Protein Sequence and Structure,5(3)(1978)；BLOSUM 62比較矩陣參考Heniloff et al.,Proc.Natl.Acad.Sci USA,89：10915-10919(1992)。
在某些實施態樣中，多肽序列比較之變數包括下列各項：計算程序：Needleman et al.,J.Mol.Biol.,48：443-453(1970)；比較矩陣：BLOSUM 62(來自Henikoff等人，如上述(1992))；空隙懲罰：12空隙長度懲罰：4相似性門檻：0
GAP程式可以上述變數使用。在某些實施態樣中，上述變數為利用GAP計算程序之多肽比較的預設變數(終端空隙無懲罰)。
在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的重鏈，該可變區含有一與選自如下群體之胺基酸序列具有至少90%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：25、27、29、31、33、35、37、39、41和43。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的重鏈，該可變區含有一與選自如下群體之胺基酸序列具有至少95%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：25、27、29、31、33、35、37、39、41和43。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的重鏈，該可變區含有一與選自如下群體 之胺基酸序列具有至少99%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：25、27、29、31、33、35、37、39、41和43。
在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的輕鏈，該可變區含有一與選自如下群體之胺基酸序列具有至少90%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：24、26、28、30、32、34、36、38、40和42。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的輕鏈，該可變區含有一與選自如下群體之胺基酸序列具有至少95%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：24、26、28、30、32、34、36、38、40和42。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一包含可變區的輕鏈，該可變區含有一與選自如下群體之胺基酸序列具有至少99%之一致性的胺基酸序列：SEQ ID NO：24、26、28、30、32、34、36、38、40和42。
此處所使用之20種習知胺基酸及其縮寫係依循傳統之用法。見：Immunology-A Synthesis(2nd Edition,E.S.Golub and D.R.Gren,Eds.,Sinaure Associates,Sunderland,Mass(1991))，其併為本專利申請案中任何目的之參考資料。該20種習知胺基酸之立體異構物(如：D-胺基酸)，非天然胺基酸，如：α -,α -二取代之胺基酸，N-烷基胺基酸，乳酸，及其它非習知胺基酸亦可能為用於本發明之多肽的合適成分。非習知之胺基酸的實施例包括：4-羥基脯胺酸、γ -羧基麩胺酸化物、ε-N,N,N-三甲基賴胺酸、ε-N-乙醯基賴胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙醯基絲胺酸、N-甲醯基甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥基 賴胺酸、σ-N-甲基精胺酸，及其它類似之胺基酸和亞胺基酸(如：4-羥基脯胺酸)。此處所使用之多肽標記法中，根據標準用法和傳統，左手方向為胺基端方向，右手方向為羧基端方向。
類似地，除非另外具體指定，單股多核苷酸序列之左手端為5’端；雙股多核苷酸序列之左手端係指5’方向。由5’往3’加入初發生之RNA轉錄子的方向稱為轉錄方向；DNA股上，具有與RNA相同之序列，且為5’，對著RNA轉錄子之5’端的序列區稱為"上游序列"；DNA股上，具有與RNA相同之序列，且為3’，對著RNA轉錄子之3’端的序列區稱為"下游序列"。
保留性胺基酸取代可包含非-天然發生之胺基酸殘質，其通常係經由化學的肽合成法併入，而非在生物系統中合成。這些包括肽模擬物，及其它反向或逆轉型之胺基酸部分。
天然發生之殘質亦可根據共同之側鏈性質區分成數類：1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；3)酸性：Asp、Glu；4)鹼性：His、Lys、Arg；5)影響鏈之方位的殘質：Gly、Pro；和6)芳香族的：Trp、Tyr、Phe。
例如：非保留性取代可能涉及這些類別其中之一的一 員與另一類別之一員交換。這類經取代之殘質可被引入人類抗體中，與非人類抗體同源的區域內，或被引入該分子之非同源區。
根據某些實施態樣，在製造這類改變時可考慮胺基酸之水療指數。根據各胺基酸之疏水性和帶電特性，各胺基酸被指定一水療指數。其為：異白胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；白胺酸(+3.8)；苯丙胺酸(+2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(+2.5)；甲硫胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；蘇胺酸(-0.7)；絲胺酸(-0.8)；色胺酸(-0.9)；酪胺酸(-1.3)；脯胺酸(-1.6)；組胺酸(-3.2)；麩胺酸化物(-3.5)；麩胺醯胺(-3.5)；天門冬胺酸化物(-3.5)；天門冬醯胺(-3.5)；賴胺酸(-3.9)；及精胺酸(-4.5)。
水療胺基酸指數於賦予蛋白質交互作用生物功能上的重要性已為本技藝所了解。Kyte et al.,J.Mol.Biol.,157：105-131(1982)。已知：某些胺基酸可取代其它具有類似之水療指數或分數的胺基酸，但仍保留類似之生物活性。在某些實施態樣中，根據水療指數所製造的改變可包括其水療指數在±2內之胺基酸的取代作用。在某些實施態樣中，包括其水療指數在±1內者。在某些實施態樣中，包括其水療指數在±0.5內者。
本技藝中亦已了解，類似胺基酸之取代作用，尤其是當由此創造之生物功能性蛋白質或肽欲用於免疫學實施態樣中時(如本案例的情況)，可根據親水性來使反應生效 。在某些實施態樣中，蛋白質之最大局部平均親水性(此由其相鄰胺基酸之親水性所控制)與其致免疫性和抗原性有關，也就是與該蛋白質之生物性質有關。
這些胺基酸殘質已被指定下列親水性數值：精胺酸(+3.0)；賴胺酸(+3.0)；天門冬胺酸化物(+3.0±1)；麩胺酸化物(+3.0±1)；絲胺酸(+0.3)；天門冬醯胺(+0.2)；麩胺醯胺(+0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(-0.4)；脯胺酸(-0.5±1)；丙胺酸(-0.5)；組胺酸(-0.5)；半胱胺酸(-1.0)；甲硫胺酸(-1.3)；纈胺酸(-1.5)；白胺酸(-1.8)；異白胺酸(-1.8)；酪胺酸(-2.3)；苯丙胺酸(-2.5)；及色胺酸(-3.4)。在某些實施態樣中，根據類似之親水性數值所製造的改變可包括其親水性數值在±2內之胺基酸的取代作用。在某些實施態樣中，包括其水療指數在±1內者。在某些實施態樣中，包括其水療指數在±0.5內者。個人亦可根據親水性從一級胺基酸序列鑑定出抗原決定部位。這些區域亦稱為"抗原決定部位之核心區域"。
示範性之胺基酸取代作用列於表1中。
本技藝中之技術熟習人士能夠利用為人熟知之技術決定如此處所列出之多肽的合適變異體。在某些實施態樣中，本技藝中之技術熟習人士可鑑定出適合改變之分子區域，以經由瞄準吾人相信對活性而言並不重要之區域進行改變，而不會破壞活性。在某些實施態樣中，個人可鑑定出保留在類似多肽間之分子殘質和部分。在某些實施態樣中，即使是對生物活性，或對構造而言重要的區域亦可進行保留性胺基酸取代，而不會破壞其生物活性，或不會對多肽構造有不良影響。
另外，本技藝中之技術熟習人士可回顧構造-功能研究，以鑑定在類似之多肽中，對活性，或對構造而言重要的殘質。鑑於這類比較，個人可預測出在蛋白質中與那些在類似之蛋白質中，對活性或構造很重要之胺基酸殘質相當的胺基酸殘質的重要性。本技藝中之技術熟習人士可選擇化學上類似之胺基酸來取代這類經預測為重要之胺基酸殘質。
本技藝中之技術熟習人士亦可相關於類似多肽中之構造來分析該三次元構造和胺基酸序列。鑑於這類資料，本技藝中之技術熟習人士可參考抗體之三次元構造來預測抗體之胺基酸殘質的排列。在某些實施態樣中，本技藝中之技術熟習人士可選擇不對預期係在蛋白質表面上之胺基酸殘質進行基本改變，因為這類殘質可能涉及與其它分子之重要交互作用。再者，本技藝中之技術熟習人士可在各所需之胺基酸殘質製造包含單一胺基酸取代之測試變異體。 然後，可利用本技藝中之技術熟習人士所已知的活性分析篩選變異體。這類變異體可用來收集關於適合變異體之資料。例如：若個人發現一特殊胺基酸殘質之變化會產生受到破壞，被不利地降低，或不合適的活性時，可避免具有這類改變的變異體。換言之，根據從這類例行實驗中收集的資料，本技藝中之技術熟習人士可很容易地測定該胺基酸是否需避免單獨被進一步取代，或加上其它突變。
有許多科學文獻已專門用來預測二級構造。見：Moult J.,Curr.Op.in Biotech.,7(4)：422-427(1996),Chou et al.,Biochemistry,13(2)：222-245(1974)；Chou et al.,Biochemistry,113(2)：211-222(1974)；Chou et al.,Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.,47：45-148(1978)；Chou et al.,Ann.Rev.Biochem.,47-251-276 and Chou et al.,Biophys.J.,26：367-384(1979)。再者，目前電腦程式可用來協助預測二級構造。一種用於預測二級構造的方法係根據同源造型。利如：二種具有超過30%之序列一致性，或其類似性超過40%的多肽或蛋白質通常具有類似之構造拓樸學。最近之蛋白質構造資料庫(PDB)的成長已增强二級構造(包括在多肽或蛋白質構造中之可能的摺壘數)之預測力。見：Holm et al.,Nucl.Acid.Res.,27(1)：224-247(1999)。(Brenner et al.,Curr.Op.Struct.Biol.,7(3)：369-376(1997))提出在指定之多肽或蛋白質中的摺疊數有限，一旦解析出關鍵數之構造後，構造之預測將明顯變得更為 正確。
預測二級構造之其它方法包括"穿針引線法(Threading)"(Jones,D.,Curr.Opin.Struct.Biol.,7(3)：377-87(1997)；Sippl et al.,Structure,4(1)：15-19(1996))，"略圖分析法"(Bowie et al.,Science,253：164-170(1991)；Gribskov et al.,Meth.Enzym.,183：146-159(1990)；Gribskov et al.,Proc.Nat.Acad.Sci.,84(13)：4355-4358(1987))，及"進化連結法(evolutionary linkage)"(見Holm,supra(1999),and Brenner,Supra(1997))。
在某些實施態樣中，專一性結合劑變異體包括其中醣化部位的數目及/或型態與母多肽之胺基酸序列相較下已被改變的醣化變異體。在某些實施態樣中，蛋白質變異體較天然蛋白質含有較多數或較少數的N-連接醣化部位。N-連接醣化部位之特徵為下列序列：Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中該命名為X之胺基酸殘質可為除了脯胺酸外之任何胺基酸殘質。用於創造此序列之胺基酸殘質取代作用可提供可能用來加入N-連接之碳水化合物鏈的新部位。或者，用於排除此序列之取代作用可移除一已存在之N-連接碳水化合物鏈。亦可提供重組之N-連接碳水化合物鏈(其中排除一或多個N-連接之醣化部位(通常為天然發生者)，並創造一或多個新的N-連接部位)。其它較佳之抗體變異體包括半胱胺酸變異體，與母胺基酸序列相較下，此變異體中有一或多個半胱胺酸殘質被删除，或被 另一胺基酸(如：絲胺酸)所取代。當抗體必須再摺疊成生物活性構造時(如：在分離出不可溶之包涵體之後)可使用半胱胺酸變異體。一般而言，半胱胺酸變異體較天然蛋白質具有較少之半胱胺酸殘質，且通常具有偶數殘質，以讓由未配對之半胱胺酸產生的交互作用降至最少。
根據某些實施態樣，胺基酸取代具有如下述之作用：(1)其降低對蛋白質水解之感受性，(2))其降低對氧化作用之感受性，(3)其改變對形成蛋白質複合物之結合親和力，(4)改變結合親和力，及/或(4)提供或修改這類多肽之其它物化或功能性質。根據某些實施態樣，在天然產生之序列(在某些實施態樣中係在形成分子間接觸之功能區塊外的多肽部分中)中可進行單一或多個胺基酸取代(在某些實施態樣中為保留性胺基酸取代)。在某些實施態樣中，保留性胺基酸取代通常不會實質改變母序列之構造特性(如：替代胺基酸不會傾向打斷母序列中之螺旋，或擾亂其它表現母序列之特徵的二級構造型式)。本技藝所認可之多肽二級和三級構造的實施例描述於下列文獻中：Proteins,Structures and Molecular Principles(Creighton,Ed.,W.H.Freeman and Company,New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden and J.Tooze,eds.,Garland Publishing,New York,N.Y.(1991))；and Thornton et al.Nature 354：105(1991)，其各併為本專利申請案之參考資料。
"衍生物"一詞係指包括除了插入、删除，或取代胺基 酸外之化學修正的分子。在某些實施態樣中，衍生物含有共價修正，包括，但不限於：與聚合物、脂質，或其它有機或無機部分化學鍵結。在某些實施態樣中，經化學修正的專一性結合劑可能較未經化學修正之專一性結合劑具有較長之循環半生期。在某些實施態樣中，經化學修正的專一性結合劑對所需之細胞、組織，及/或器官可能具有改良之瞄準能力。在某些實施態樣中，衍生性專一性結合劑係經共價修正以包含一或多個水溶性聚合附著物，包括，但不限於：聚乙二醇，聚氧化乙二醇，或聚丙二醇。見，如：美國專利案第4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192和4,179,337號。在某些實施態樣中，衍生性專一性結合劑含有一或多種聚合物，包括，但不限於：一甲氧基-聚乙二醇、葡萄聚糖、纖維素，或其它以碳水化合物為基礎之聚合物、聚-(N-乙烯基吡咯酮)-聚乙二醇、丙二醇高聚合物、聚丙烯氧化物/乙烯氧化物共聚物、聚氧乙基化之多元醇(如：甘油)和聚乙烯醇，以及這類聚合物之混合物。
在某些實施態樣中，衍生物係以聚乙二醇(PEG)次單位進行共價修正。在某些實施態樣中係將一或多個水溶性聚合物結合在衍生物之一或多個特殊位置上，例如：在胺基端上。在某些實施態樣中係將一或多個水溶性聚合物任意連接至一或多個衍生物之側鏈上。在某些實施態樣中係使用PEG來改良專一性結合劑之治療能力。在某些實施態樣中係使用PEG來改良人類化抗體之治療能力。一 些這類方法之討論可在，如：美國專利案第6,133,426號(其併為本專利申請案中任何目的之參考資料)中找到。
此處所使用之"多肽片段"一詞係指帶有胺基-端及/或羧基-端缺失之多肽。在某些實施態樣中，片段長度至少為5至478個胺基酸。吾人可察知在某些實施態樣中，片段長度為至少5、6、8、10、14、20、50、70、100、150、200、250、300、350、400，或450個胺基酸。
肽同系物在製藥工業中常作為非-肽藥物，其具有類似模板肽所具有之性質。這些類型之非-肽化合物稱為"肽模擬物"或"擬肽物"。Fauchere,J.Adv.Drug Res.15：29(1986)；Veber and Freidinger TINS p.392(1985)；and Evans et al.J.Med.Chem.30：1229(1987)，其併為本專利申請案中任何目的之參考資料。這類化合物通常係藉由電腦化之分子造型的輔助發展出。構造上類似治療上有用之肽的肽模擬物可用來產生類似之療效或預防效果。一般而言，擬肽物在構造上類似於樣式多肽(也就是具有生化性質或藥學活性之多肽)，如：人類抗體，但其有一或多個肽連結係經由本技藝所熟知的方法被選自如下群體之連結所隨意置換：--CH2 NH--，--CH2 S--，--CH2 -CH2 --，--CH=CH-(順式和反式)，--COCH2 --,--CH(OH)CH2 --，及-CH2 SO--，以相同類型之D-胺基酸系統性取代一致序列之一或多個胺基酸(如：以D-賴胺酸取代L-賴胺酸)的作用可用於某些實施態樣中，以產生更穩定之肽。另外，含有一致序列或實質上相等之一致序列變化的限制肽 可藉由本技藝所已知的方法來產生(Rizo and Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992)，其併為本專利申請案中任何目的之參考資料)；例如：經由加入可形成分子內二硫橋之內半胱胺酸殘質(其可將肽環化)來產生。
"抗體"或"抗體肽"一詞係指完整之抗體，或與完整抗體競爭特異性結合之結合片段。在某些實施態樣中，結合片段係經由重組DNA技術來製造。在某些實施態樣中結合片段係經由將完整抗體以酶或化學方法進行分裂來製造。結合片段包括，但不限於：Fab、Fab’、F(ab’)2，及單-鏈抗體。
"重鏈"一詞包括任何具有足夠可變區序列，以提供對靶的之專一性的多肽。"輕鏈"一詞包括任何具有足夠可變區序列，以提供對靶的之專一性的多肽。全長之重鏈包括一可變區功能區塊，VH ，及三個恆定區功能區塊，CH 1、CH 2，和CH 3。VH 功能區塊係在多肽之胺基端，而CH 3係在羧基端。此處所使用之"重鏈"一詞包含全長之重鏈及其片段。全長之輕鏈包括一可變區功能區塊，VL ，及一恆定區功能區塊，CL 。VH 。如同重鏈，輕鏈之可變區功能區塊係在多肽之胺基端。此處所使用之"輕鏈"一詞包含全長之輕鏈及其片段。Fab片段係包含一輕鏈，及一重鏈之CH 1和可變區。Fab分子之重鏈不能與另一重鏈分子形成二硫鍵。Fab’片段含有一輕鏈，及一含有介於CH 1和CH 2間之恆定區的重鏈，如此可在二個重鏈間形成鏈間之二硫鍵，以形成F(ab’)2分子。Fv區包含來自重鏈和輕鏈 二者之可變區，但缺乏恆定區。單-鏈抗體為Fv分子，其中該重鏈和輕鏈可變區由一彈性聯結子連接，以形成一單一多肽鏈，此多肽鏈可形成一抗原-結合區。單鏈抗體詳細討論於，如：WO 88/01649和美國專利第4,946,778和5,260,203號中。
"可變區"或"可變功能區塊"一詞係指抗體之輕鏈和/或重鏈的一部分，通常約包括重鏈中胺基端120至130個胺基酸和輕鏈中100至110個胺基端胺基酸。在某些實施態樣中，不同抗體之可變區的胺基酸序列極不相同，即便是同物種之抗體間亦然。抗體之可變區通常會決定一特殊抗體對其靶的之專一性。
"免疫功能性免疫球蛋白片段"一詞係指含有至少一免疫球蛋白重鏈及一免疫球蛋白輕鏈之可變功能區塊的多肽片段。在某些實施態樣中，免疫功能性免疫球蛋白片段可結合至一配合體，阻止該配合體結合至其受體，以藉此中斷由配合體結合至受體所產生之生物反應。在某些實施態樣中，免疫功能性免疫球蛋白片段可結合至一受體，阻止該配合體結合至其受體，並藉此中斷由配合體結合至受體所產生之生物反應。在某些實施態樣中，免疫功能性免疫球蛋白片段可結合一受體，並將該受體活化或去活化。
在某些實施態樣中，除了"多專一性"或"多功能性"抗體外之二價抗體的各結合部位通常被認為完全相同。
當過量專一性結合劑減少結合至抗衡受體之受體的量至少約20%、40%、60%、80%、85%，或更多時(在玻管 內競爭結合分析中測量)，專一性結合劑可實質上抑制配合體黏附至受體。
"靶的"一詞係指能被專一性結合劑結合之分子，或分子的一部分。在某些實施態樣中，靶的可具有一或多個抗原決定部位。在某些實施態樣中，靶的為一抗原。
"抗原決定部位"一詞包括任何能特異結合至免疫球蛋白或T-細胞受體的多肽決定簇。在某些實施態樣中，抗原決定部位決定簇包括分子之化學活性表面原子團，如：胺基酸、糖側鏈、磷基或磺基，且，在某些實施態樣中，其可具有特殊之三次元構造特性，及/或特殊電荷特性。抗原決定部位為一被抗體結合之抗原區域。在某些實施態樣中，當抗體優先辨識其在蛋白質，及/或巨分子之複合混合物中的靶的抗原時，該抗體被認為係特異結合一抗原。在某些實施態樣中，當分解常數≦1μM時，該抗體被認為係特異結合一抗原，在某些實施態樣中，當分解常數≦100nM時，該抗體被認為係特異結合一抗原，而在某些實施態樣中，當分解常數≦10nM時，該抗體被認為係特異結合一抗原。
此處所使用之"作用劑"一詞係指一化學化合物、化學化合物之混合物、生物巨分子，或從生物物質製得之萃取物。
此處所使用之"標示"或"經標示的"一詞係指合併一可偵測之標記，如：合併一經放射標示的胺基酸，或連接至一生物素部分之多肽上，而該生物素部分可藉標示之卵白 素來偵測(如：含有螢光標記的抗生蛋白鏈菌素，或可藉光學或比色法偵測之酶活性)。在某些實施態樣中，該標示或標記亦可為治療性的。本技藝中已知且可使用多種用於標示多肽及醣蛋白質之方法。用於多肽之標示的實施例包括，但不限於下列各項：放射性同位素或放射性核素(如：3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)，螢光標示(如：FITC、若丹明、鑭燐光體)，酶性標示(如：辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、發光酶、鹼性磷酸酶)，化學光、生物素基、可被二級報告子辨識之預定的多肽抗原決定部位(如：白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合部位、金屬結合功能區塊、抗原決定部位標籤)。在某些實施態樣中，標示係藉由不同長度之間隔臂附著，以減少可能之立體遮蔽。
此處所使用之"生物樣本"一詞包括，但不限於：來自存活物，或先前存活物之任何量的物質。這類存活物包括，但不限於：人類、小鼠、猴子、大鼠、兔子，及其它動物。這類物質包括，但不限於：血液、血淸、尿液、細胞、器官、組織、骨頭、骨髓、淋巴結，和皮膚。
"癌症"一詞包括，但不限於：實體腫瘤和血液惡性病。示範性之癌症包括，但不限於：乳癌、結腸直腸癌、胃癌、神經膠瘤、頭和頸鱗狀細胞癌、遺傳性和偶發性乳頭狀腎癌、白血病、淋巴瘤、李-弗洛曼尼(Li-Fraumeni)徵候群、惡性肋膜間皮瘤、黑色瘤、多發性骨髓瘤、非-小細胞肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰臟癌、攝護腺癌、小細 胞肺癌、滑膜肉瘤、甲狀腺癌，及膀胱之移行細胞癌。
"HGF活性"一詞包括任何HGF之生物效果。在某些實施態樣中，HGF活性為Met-HGF活性。在某些實施態樣中，HGF活性為與Met無關之HGF活性。
"Met-HGF傳訊"一詞包括HGF與Met受體之交互作用。
"Met-HGF活性"一詞包括任何從Met-HGF傳訊產生之生物活性。示範性活性包括，但不限於：神經誘導、肝臟再生、傷口癒合、生長、侵入、形態分化、胚胎發育、散射、增殖、細胞凋亡、細胞能動性、轉移、移動、細胞黏連、黏合素成串、黏蛋白(paxillin)之磷酸化、形成病灶黏連，和從異常Met-HGF傳訊產生癌症。
"異常之Met-HGF傳訊"一詞包括任何其中Met-HGF傳訊均無法刺激出任何當正常傳訊時可產生之Met-HGF活性的情况。異常Met-HGF傳訊亦包括任何其中Met-HGF傳訊所產生之Met-HGF活性較正常傳訊所產生者來得少的情况。異常活性亦包括任何其中Met-HGF傳訊所產生之Met-HGF活性較正常傳訊所產生者來得高的情况。異常Met-HGF傳訊可產生，如：某些癌症。
"與Met無關之HGF活性"一詞係指任何不倚賴HGF結合至Met受體，而受HGF影響的生物活性。這類活性包括，但不限於：受HGF與其它受體之交互作用影響的生物活性，及透過其它途徑(如：Ron或Met/ron異質二聚體)受HGF影響的生物活性。
"異常之HGF活性"一詞係指任何其中HGF活性較其所應有者來得高或低的情况。在某些情况中，異常之HGF活性係由異常之HGF傳訊所產生。在某些情况中，異常之HGF活性係由較其應有者來得高之HGF濃度所產生。在某些實施態樣中，異常HGF活性係由較其應有者來得低之HGF濃度所產生。
此處所使用之"藥學作用劑或藥物"一詞係指當正確地投給患者時能誘導出所需之治療效果的化學化合物或組成物。
此處所使用之"調節劑"一詞係指改變或轉變分子之活性或功能的化合物。例如：調節劑可使某些分子之活性或功能的强度較無該調節劑存在時所觀察到之活性或功能的强度增加或减低。在某些實施態樣中，調節劑為一種抑制劑，其可減低至少一種分子之活性或功能的强度。一些示範性之分子的活性或功能包括，但不限於：結合親和力、酶活性，和訊號轉導。一些示範性抑制劑包括，但不限於：蛋白質、肽、抗體、肽體、碳水化合物，或小有機分子。肽體描述於，如：美國專利第6,660,843號(相當於PCT申請案第WO 01/83525號)中。
此處所使用之"實質上純化"一詞係指一實物種類為最優勢之存在種類(也就是，以莫耳計，其較組成物中之任何其它個別物種更為多量)。在某些實施態樣中，實質上純化之部分為一種其中該實物種類含有至少約50%(以莫耳計)之所有存在的巨分子種類的組成物。在某些實施態 樣中，實質上純化之組成物將含有超過約80%、85%、90%、95%，或99%之所有存在的巨分子種類。在某些實施態樣中，該實物種類係經純化至實質上同質(其無法藉習知之偵測方法測到組成物中的污染物)，其中該組成物實質上係由單一巨分子物種所組成。
"患者"一詞包括人類和動物個體。
一些示範性專一性結合劑
在某些情況中，HGF結合Met受體以誘導Met磷酸化。在某些情況中，正常之由HGF誘導的Met磷酸化作用可調節多種細胞處理過程。在某些情況中，異常之Met-HGF活性與多種人類疾病狀態有關。例如：在某些情況中，過量之HGF活性與某些癌症有關。因此，在某些情況中，調節HGF活性可用於治療上。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可用來將HGF活性的量從異常高之水準降低下來。在某些實施態樣中，將HGF活性之量從異常高之水準降低下來可降低致腫瘤活性，並可減低癌症之嚴重症。根據某些實施態樣，對HGF之專一性結合劑可用來治療癌症。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可用來預防癌症。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可用來治療其中HGF活性為正常的癌症。例如：在這類癌症中，將HGF活性降低至低於正常值可提供療效。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可用來 調節至少一種Met-HGF活性。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可用來調節至少一種與Met無關之HGF活性。在某些實施態樣中，使用超過一種對HGF之專一性結合劑來調節HGF活性。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑為完整之人類單株抗體。在某些實施態樣中提供編碼重鏈和輕鍵免疫球蛋白分子之核苷酸序列，及包含重鏈和輕鍵免疫球蛋白分子之胺基酸序列，尤其是相當於可變區之序列。在某些實施態樣中提供相當於互補決定區(CDR’s)，尤其是CDR1至CDR3之序列。根據某些實施態樣，提供表現這類免疫球蛋白分子之雜交瘤細胞株。根據某些實施態樣，提供表現這類單株抗體之雜交瘤細胞株。在某些實施態樣中，雜交瘤細胞株係選自至少一種如下群體：1.24.1，1.29.1，1.60.1，1.61.3，1.74.3，1.75.1，2.4.4，2.12.1，2.40.1和3.10.1。在某些實施態樣中，提供純化之對人類HGF的人類單株抗體。
在酵母菌人造染色體(YACs)中選殖及重建百萬鹼基大小之人類基因座，並將其引入老鼠種系中的能力可提供用來說明非常大之功能性成分，或簡略繪出之基因座的方法，並可產生有用之人類疾病模型。再者，使用這類以老鼠之人類同等物來取代老鼠基因座的技術可在發育期間用來詳細了解人類基因產物之表現和規則，其與其它系統之交流，及其所涉及之疾病誘發和進展。
這類策略的一種重要實際應用為將老鼠體液免疫系統 "人類化"。將人類免疫球蛋白(Ig)基因座引入其內生性Ig基因已被去活化的老鼠體內可提供用來研究潛在之已制訂的表現，和抗體組合的機制，以及其在B細胞發展中之角色。再者，這類策略可提供用於製造完整人類單株抗體(Mabs)之來源。在某些實施態樣中，完整之人類抗體被預期可將對老鼠或老鼠衍生之Mabs的內在免疫和過敏反應減至最少，且因此，在某些實施態樣中可增加投服之抗體的效力和安全性。在某些實施態樣中，完整之人類抗體可用來治療慢性或再發之人類疾病，如：可能涉及重複投服抗體之癌症、瘧疾，或增殖性糖尿病腎病。
個人可以大片段之人類Ig基因座將缺乏製造老鼠抗體之老鼠品種進行遺傳工程處理，並預期這類老鼠可在無老鼠抗體之存在下製造人類抗體。大人類Ig片段可保量大可變基因之多樣性，並適當調節抗體之製造和表現。經由利用老鼠之抗體多樣性和選擇的機制，以及缺少對人類蛋白質之免疫耐受性，在這些老鼠品種中所複製的人類抗體集庫可產生對任何所關注之抗原(包括人類抗原)具高親和力的完整人類抗體。利用雜交瘤技術可製造並選擇具所需之專一性的抗原-專一性人類Mabs。一些示範性方法描述於WO 98/24893、美國專利案第5,545,807號、EP 546073B1，和EP 546073A1中。
在某些實施態樣中，個人可將來自除了人類外之物種的恆定區，與人類可變區一起使用。
天然存在之抗體構造
天然存在之抗體構造單位通常含有一四聚體。典型上，這類四聚體各由二對相等之多肽鏈對所組成，每一對具有一完整長度之"輕"(在某些實施態樣中約為25kDa)，及一完整長度之"重"鏈(在某些實施態樣中約為50-70kDa)。典型上，各鏈之胺基-端部分包括一具有約100至110，或更多個胺基酸之可變區(其通常負責辨識抗原)。典型上，各鏈之羧基-端部分係定義可能負責效應子功能的恆定區。人類輕鏈通常被分類成和λ輕鏈。重鏈通常被歸類為mu、△、γ、α，或ε，並將抗體之同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA，和IgE。IgG具有數種次類，包括，但不限於：IgG1、IgG2、IgG3，和IgG4。IgM之次類包括，但不限於：IgM1和IgM2。IgA被同樣地次分為次類，包括，但不限於：IgA1和IgA2。典型上，在完整長度之輕鏈和重鏈內，可變和恆定區係藉由一具有約12或更多個胺基酸的"J"區連結，且該重鏈亦包括具有約10或更多個胺基酸的"D"區。見，如：Fundamental Immunology Ch.7(Paul,W.,ed.,2nd ed.Raven Press,N.Y.(1989))(其併為本專利申請案中任何目的之參考資料)。各輕鏈和重鏈對之可變區通常形成抗原結合部位。
可變區通常會顯示出被高度保留之框構區(FR)的相同大致構造，此框構區係由三個高可變區(亦稱為互補決定區或CDRs)聯結。來自每一對之二種鏈的CDRs通 常靠著框構區配置排列，其可賦予結合至特殊抗原決定部位的能力。從N-端至C-端，輕鏈和重鏈二者之可變區通常含有功能區塊FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3，和FR4。各功能區塊所派定之胺基酸典型上係根據Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987及1991))，或Chothia & Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Chothia et al.Nature 342-878-883(1989)之定義。
在某些實施態樣中，抗體重鏈在無抗體輕鏈之存在下結合至抗原上。在某些實施態樣中，抗體輕鏈在無抗體重鏈之存在下結合至抗原上。在某些實施態樣中，抗體結合區在無抗體輕鏈之存在下結合至抗原上。在某些實施態樣中，抗體結合區在無抗體重鏈之存在下結合至抗原上。在某些實施態樣中，個別之可變區在無其它可變區之存在下特異結合至抗原上。
在某些實施態樣中，CDR之明確記述和含有抗體結合部位之殘質的確認可經由解析抗體之構造，及/或解析抗體-配合體複合物的構造來完成。在某些實施態樣中，其可藉由任何本技藝中之技術熟習人士所已知的多種技術，如：X-光晶體照相術來完成。在某些實施態樣中，可使用不同之分析方法來鑑定或模擬CDR區。這類方法之實例包括，但不限於：卡巴(Kabat)定義周西亞(Chothia)定義、AbM定義和接觸定義。
卡巴定義為替抗體中之殘質編號的一種標準，典型上係用來鑑定CDR區。見，如：Johnson and Wu,Nucleic Acids Res,28：214-8(2000)。周西亞定義類似於卡巴定義，但周西亞定義將某些構造性環狀區的位置列入考慮。見，如：Chothia et al.,J Mol Biol,196：901-17(1986)；Chothia et al.,Nature,342：877-83(1989)。AbM定義係利用由牛津分子團體所製造之塑造抗體構造的集成的電腦程式組。見，如：Martin et al.,Proc Natl Acad Sci(USA)86：9268-9272(1989)；AbMTM ,a computer program for modeling variable regions of antibodies，Oxford,UK；Oxford Molecular,Ltd.。AbM定義利用知識資料庫和從頭開始之方法(如，描述於下列文獻中者：Samudrala et al.,Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach,PROTEINS,Structure,Function and Genetics Suppl.3：194-198(1999)的組合，從一級序列塑造出抗體之三級構造的模型。接觸定義係根據可取得之複雜的結晶構造分析。見，如：MacCallum et al.,J Mol Biol,5：732-45(1996)。
慣例上，重鏈中之CDR區通常稱為H1、H2和H3，並以從胺基端至羧基端之方向依序編號。輕鏈中之CDR區通常稱為L1、L2和L3，並以從胺基端至羧基端之方向依序編號。
雙特異性或雙功能性抗體
雙特異性或雙功能性抗體典型上為具有二種不同之重/輕鏈對和二種不同之結合部位的人工雜種抗體。雙特異性抗體可藉由多種方法製造，包括，但不限於：雜交瘤之融合，或連接Fab’片段。見，如：Songsivilai et al.,Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny et al.,J.Immunol.148：1547-1553(1992)。
抗體之製備方法
根據某些實施態樣，本發明包含某些特異結合至HGF之抗體。在某些實施態樣中，可經由免疫接種抗原來製造抗體。"抗原"一詞係指用於在動物體內製造能結合至該抗原及/或其它靶的之抗體的分子。在某些實施態樣中，可經由免疫接種完整長度之HGF、可溶型式之HGF、DNA剪接變異體型式之HGF，或其片段來製造抗體。在某些實施態樣中，本發明之抗體可為多株或單株。在某些實施態樣中，本發明之抗體為經由，如：對可製造人類抗體之導入外來基因動物進行免疫接種後所製造之人類抗體(見，如：PCT已出版之申請案第WO 93/12227)。
在某些實施態樣中，可使用一些策略來處理抗體之固有性質，如：抗體對其靶的之親和力。這類策略包括，但不限於：使用編碼抗體之多核苷酸分子的定位或隨機突變來製造抗體之變異體。在某些實施態樣中，以這類方法製造抗體之後再篩選那些顯示出所需變化(如：增加或減少親和力)的抗體變異體。
在某些實施態樣中，在致突變策略中所瞄準的胺基酸殘質為那些在CDRs中之胺基酸殘質。在某些實施態樣中，瞄準的為在可變功能區塊之框構區中的胺基酸。在某些實施態樣中，這類框構區顯示出可促成某些抗體之靶的結合性質。見，如：Hudson,Curr Opin Biotech,9：395-402(1999)，及其中之參考資料。
在某些實施態樣中，可藉由限制CDRs中之高突變部位(其相當於在身體親和性成熟過程中易突變的部位)的隨機或定位突變來製造較小且被更有效地篩選過的抗體變異體集合庫。見，如：Chowdhury and Pastan,Nature Biotech,17：568-572(1999)，及其中之參考資料。在某些實施態樣中，某些型式之DNA要素可用來鑑定高-突變部位，包括，但不限於：某些直接和反轉之重複段，某些一致性序列、某些二級構造，及某些迴文。例如：可用來鑑定高-突變部位之這類DNA要素包括，但不限於：含有嘌呤(A或G)，其後為鳥嘌呤(G)，接著為嘧啶(C或T)，再接著為腺苷酸或酪胺酸(A或T)之四鹼基序列(也就是A/G-G-C/T-A/T)。另一種可用來鑑定高-突變部位之DNA要素的實施例為絲胺酸密碼子；A-G-C/T。
在某些實施態樣中，抗體為人類化之抗體。在某些實施態樣中，人類化之抗體在人體中大體上為非-致免疫性的。在某些實施態樣中，人類化之抗體與來自衍生出該人類化之抗體的另一物種的抗體大體上對靶的具有相同之親和力。見，如：美國專利案第5,530,101號；美國專利案 第5,693,761號；美國專利案第5,693,762號；美國專利案第5,585,089號。
在某些實施態樣中係鑑定一抗體之可變功能區塊中，可被修改，但不會削減抗原結合功能區塊之天然親和力，而可降低其致免疫力的胺基酸。見，如：美國專利案第5,766,886和5,869,619號。
在某些實施態樣中，藉由本技藝所已知的方法修改抗體通常係為了增加其對靶的的結合親和力，及/或降低抗體在接受者中之致免疫力。在某些實施態樣中係修改人類化抗體，將醣化部位排除，以增加抗體對其同源抗原的親和力。見，如：Co et al.,Mol Immunol 30：1361-1367(1993)。在某些實施態樣中，使用如："改造"、"高度嵌合化"，或"鑲飾/敷設新表面"等技術來製造人類化之抗體。見，如：Vaswami et al.,Annals of Allergy,Asthma,& Immunol 81：105(1998)；Roguska et al.,Prot Engineer 9：895-904(1996)；和美國專利案第6,072,035號。在某些實施態樣中，這類技術典型上可經由減少外來殘質之數目來降低抗體之致免疫性，但不會在重複投服抗體後防礙抗-遺傳性型，和抗-同種異型之反應。一些其它用於降低致免疫性之方法描述於，如：Gilliland et al.,J Immunol 62(6)：3663-71(1999)中。
在某些情況下，人類化之抗體可造成抗原結合能力之損失。在某些實施態樣中，人類化之抗體為"回復突變"。在某些這類實施態樣中，人類化之抗體經過突變以包括一 或多個在捐贈者抗體中所發現的胺基酸殘質。見，如：Saldanha et al.,Mol Immunol 36：709-19(1999)。
在某些實施態樣中，對HGF之抗體的輕鏈和重鏈可變區的互補決定區(CDRs)可被移植至來自相同，或另一物種的框構區(FRs)。在某些實施態樣中，對HGF之抗體的輕鏈和重鏈可變區的互補決定區(CDRs)可被移植至一致之人類FRs。在某些實施態樣中，為了創造一致之人類FRs，將來自數種人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之FRs做一致性比對，以鑑定出一致之胺基酸序列。在某些實施態樣中，對HGF之抗體的輕鏈和重鏈的FRs可以來自不同重鏈或輕鏈之FRs取代。在某些實施態樣中，對HGF之抗體的輕鏈和重鏈的FRs中的稀有胺基酸未被取代，而剩餘之FR胺基酸被取代。稀有胺基酸為位在不常在FRs中找到它們之位置中的特殊胺基酸。在某些實施態樣中，來自對HGF之抗體的移植可變區可與一和對HGF之抗體的恆定區不相同的恆定區一起使用。在某些實施態樣中，移植之可變區為單鏈Fv抗體的部分。CDR移植描述於，如：美國專利案第6,180,370、6,054,297、5,693,762、5,859,205、5,693,761、5,565,332、5,585,089，和5,530,101號，及Jones et al.,Nature 321：522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature,332：323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239：1534-1536(1988),Winter,FEBS Letts 430：92-94(1998)中，其併為本專利申請案中任何目的之參考資料。
在某些實施態樣中，使用噬體顯示技術來產生單株抗體。在某些實施態樣中，這類技術可製造完整之人類單株抗體。在某些實施態樣中，編碼單一Fab或Fv抗體片段之多核苷酸係表現在噬體顆粒之表面上。見，如：Hoogenboom et al.,J Mol Biol 227：381(1991)；Marks te al.,J Mol Biol 222：581(1991)；美國專利案第5,885,793號。在某些實施態樣中，"篩選"噬體以鑑定那些對靶的具有親和力的抗體片段。因此，某些這類過程係透過將抗體片段集庫顯示在絲狀噬菌體之表面上來模擬免疫選擇，並接著藉由其對靶的之結合情况來選擇噬體。在某些這類程序中可分離出高親和力之功能性激動抗體片段。在某些這類實施態樣中，經由選殖來自周圍血液淋巴球之自然重排的人類V基因來創造完整之人類抗體基因集合庫。見，如：Mullinax et al.,Proc Natl Acad Sci(USA)87：8095-8099(1990)。
根據某些實施態樣，本發明之抗體係透過使用導入外來基因小鼠來製備，此種小鼠具有一能產生人類抗體之實質部分的插入的基因組，但無法產生內生性之老鼠抗體。因此，這類小鼠可製造人類免疫球蛋白分子和抗體，且不會製造老鼠的免疫球蛋白分子和抗體。用於取得此結果之技術揭示於本專利申請書中所揭示之專利、申請案和參考資料中。在某些實施態樣中，個人可使用揭示於PCT已出版之申請案第WO 98/24893號，或Mendez et al,Nature Genetics 15：146-156(1997)中的方法，其併為 本專利申請案中任何目的之參考資料。
根據某些實施態樣中，特異於HGF之完整的人類單株抗體係依下述方法製造。以所關注之抗原(如：HGF)免疫接種含有人類免疫球蛋白基因之導入外來基因小鼠，再從表現抗體的小鼠取得淋巴球(如：B-細胞)。將這類回收之細胞與骨髓-型細胞株融合，以製備永生化之雜交瘤細胞株，並將這類雜交瘤細胞株進行篩選和選擇，以鑑定可製造特異於所關注之抗原的抗體。在某些實施態樣中係提供可生產特異於HGF之雜交瘤細胞株的製備方法。
在某些實施態樣中，完整之人類抗體係經由在宿主細胞中由重組DNA之表現來製造，或經由在雜交瘤細胞中表現來製造。在某些實施態樣中，抗體係利用上述之噬體顯示技術來製造。
在某些實施態樣中，完整之人類抗體係經由在玻管中將人類脾細胞(B或T細胞)暴露至抗原，然後在經過免疫減弱的老鼠(如：SCID或nod/SCID)中重建該暴露過之細胞來製造。見，如：Brams et al.,J Immunol,160：2051-2058(1998)；Carballido et al.,Nat Med,6：103-106(2000)。在某些實施態樣中，將人類胎兒組織移植入SCID小鼠(SCID-hu)中可造成長期造血，並發展人類T-細胞。見，如：McCune et al.,Science 241：1532-1639(1988)；Ifversen et al.,Sem Immunol 8：243-248(1996)。在某些情況中，這類嵌合小鼠體內之體液免疫反應係倚賴在動物體內共同-發展人類T-細胞。見，如： See,e.g.,Martensson et al.,Immunol 83：1271-179(1994)。在某些方法中係將人類周圍血液淋巴球移植入SCID小鼠中。見，如：See,e.g.,Mosier et al.,Nature 335：256-259(1988)。在某些這類實施態樣中，當以初次作用劑(如：金黃葡萄球菌腸毒素A(SEA))，或以抗-人類CD40單株抗體處理這類移植細胞時，可偵測到高水準之B細胞產量。見，如：Martensson et al.,Immunol 84：224-230(1995)；Murphy et al,.,Blood 86：1946-1953(1995)。
在某些實施態樣中，本發明之抗體係由至少一種下列雜交瘤製造：1.24.1，1.29.1，1.60.1，1.61.1，1.74.1，1.75.1，2.4.4，2.12.1，2.40.1，和3.10.1。在某些實施態樣中，專一性結合劑以KD 為10-8 、10-9 ，或10-10 M結合至HCF。在某些實施態樣中，專一性結合劑以介於約0.099和0.79nM(此係經由動力學方法測量)間之離解常數(KD )結合至HGF(第6A圖)。在某些實施態樣中，專一性結合劑以低於10pM至約54pM之KD 結合至HGF(此係經由平衡/溶液方法測量)(第6B圖)。
在某些實施態樣中，專一性結合劑含有至少一種下列群體之免疫球蛋白分子：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD和IgM同種型。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有人類輕鏈及/或人類重鏈。在某些實施態樣中，該重鏈為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD或IgM同種型之重鏈。在某些實施態樣中，專一性結合 劑經過選殖，以表現在哺乳動物細胞中。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一除了下列任一種恆定區外的恆定區：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD和IgM同種型。
在某些實施態樣中，專一性結合劑含有人類κ輕鏈及人類IgG1重鏈。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有人類κ輕鏈及人類IgG2重鏈。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有人類κ輕鏈及人類IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD或IgM重鏈。在某些實施態樣中，專一性結合劑含有連接至既不為IgG1同種型之恆定區，亦不為IgG2同種型之恆定區的恆定區上的抗體可變區。在某些實施態樣中，專一性結合劑經過選殖，以表現在哺乳動物細胞中。
在某些實施態樣中，對來自至少一種下列雜交瘤細胞株之抗體的重鏈和輕鏈進行保留性修改：1.24.1，1.29.1，1.60.1，1.61.1，1.74.1，1.75.1，2.4.4，2.12.1，2.40.1，和3.10.1(及對編碼之核苷酸之相對性修改)，可產生具有類似於來自下列雜交瘤株之抗體所具者的功能和化學特性的對HGF之抗體：1.24.1，1.29.1，1.60.1，1.61.1，1.74.1，1.75.1，2.4.4，2.12.1，2.40.1，和3.10.1。相反地，在某些實施態樣中，對HGF之抗體的功能和化學特性的實質修改可經由選擇性取代重鏈和輕鏈之胺基酸序列來完成，這些取代使其在維持下列各項之效果上顯著不同：(a)取代區中之分子主鏈的構造，如：長帶狀或螺旋狀構型，(b)靶的部位之分子的電荷或疏水性，(c)側 鏈體積。
例如："保留性胺基酸取代"可能涉及以非天然殘質取代天然胺基酸殘質，如此，對在該位置之胺基酸殘質的極性或電荷僅有很小或沒有作用。再者，在多肽中之任何天然殘質亦可被丙胺酸所取代，如同之前關於"丙胺基酸掃描致突變性"的描述。
本技藝中之技術熟習人士可在需要進行胺基酸取代時決定所需之胺基酸取代(不論是保留或非保留性的)。在某些實施態樣中，胺基酸取代可用來鑑定對HGF之抗體的重要殘質，或用來增加，或降低對抗此處所描述之抗體對HGF的親和力。
在某些實施態樣中，本發明之抗體可表現在除了雜交瘤細胞株外之細胞株中。在某些實施態樣中，編碼特殊抗體之序列可用來將合適之哺乳動物宿主細胞轉形。根據某些實施態樣，轉形反應可經由任何已知之用來將多核苷酸引入宿主細胞的方法進行，包括，如：將多核苷酸包在病毒內(或包裝在病毒載體內)，並以該病毒(或載體)將宿主細胞進行轉導，或可經由任何本技藝中已知之轉染程序，如：美國專利案第4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455號中所示範者(其併為本專利申請案中任何目的之參考資料)來進行。在某些實施態樣中，所使用之轉形程序取決於欲轉形之宿主。用於將異源多核苷酸引入哺乳動物細胞的方法為本技藝所熟知，包括，但不限於：葡萄聚糖-傳介之轉染反應、磷酸鈣沈澱法、聚凝胺製劑 傳介之轉染反應、原漿融合、電穿孔、將多核苷酸包囊在脂粒中，及直接將DNA顯微注射入細胞核內。
可作為用於表現之宿主的哺乳動物細胞株為本技藝所熟知，其包括，但不限於：可從美國型培養收集處(ATCC)取得之永生化細胞株，包括，但不限於：中國田鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、幼田鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞之癌細胞(如：Hep G2)，及多種其它細胞株。在某些實施態樣中，可透過測定何種細胞株具有高表現水準，且可製造具有組成性之HGF結合性質的抗體來選擇細胞株。用於哺乳動物宿主細胞的合適表現載體為本技藝所熟知。
在某些實施態樣中，專一性結合劑含有一或多種多肽。在某些實施態樣中，可使用多種表現載體/宿主系統中之任一種來表現編碼多肽之多核苷酸分子。這類系統包括，但不限於：微生物，如：以重組噬菌體、質體或黏接質體DNA表現載體轉形之細菌；以酵母菌表現載體轉形之酵母菌；以病毒表現載體(如：桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統；以病毒表現載體(如：花椰菜鑲嵌病毒、CaMV、煙草鑲嵌病毒、TMV)轉染之植物細胞系統，或以細菌表現載體轉形(如：Ti或pBR322質體)轉形之植物細胞系統；或動物細胞系統。
在某些實施態樣中，多肽係以重組方式表現在酵母酵中。一些這類實施態樣係依照製造者之指示使用市售之表現系統，如：畢赤酵母表現系統(因維特金(Invitrogen )，加卅聖地牙哥)。在某些實施態樣中，這類系統係倚賴pre-pro-α 序列來指導分泌。在某些實施態樣中，插入子之轉錄係在藉甲醇誘導時，由醇氧化酶(AOX1)驅動。
在某些實施態樣中，分泌出之多肽係從酵母生長介質中純化出來。在某些實施態樣中，用來從酵母生長介質中純化多肽的方法與用來從細菌和哺乳動物細胞上淸液中純化多肽的方法相同。
在某些實施態樣中，將編碼多肽之核酸選殖入桿狀病毒表現載體，如：pVL1393(PharMingen，加卅聖地牙哥)中。在某些實施態樣中，這類載體可根據製造者(PharMingen)之指示用來感染在不含sF9蛋白質介質中的草地黏蟲細胞，並製造重組多肽。在某些實施態樣中，利用肝素-瓊脂糖管柱從這類介質(法馬西亞(Pharmacia)中純化並濃縮多肽。
在某些實施態樣中，多肽係表現在昆蟲細胞中。一些用於表現多肽之昆蟲系統為本技藝中之技術熟習人士所熟知。在一種這類系統中係使用苜蓿銀紋夜蛾核多角體病毒(AcNPV)作為載體，在草地黏蟲細胞或毛紋夜蛾幼蟲中表現外來基因。在某些實施態樣中，可將編碼多肽之核酸分子插入病毒之非必須基因，如：在多角體基因內，並受該基因之啟動因子的控制。在某些實施態樣中，成功插入核酸分子可將該非-必須基因去活化。在某些實施態樣中，去活化反應可產生可偵測之特性。例如：將多面體基因 去活化可製造缺乏外套蛋白質之病毒。
在某些實施態樣中，可使用重組病毒來感染草地黏蟲細胞或毛紋夜蛾幼蟲。見，如：Smith et al.,J Virol 46：584(1983)；Engelhard et al.,Proc Nat Acad Sci(USA)91：3224-7(1994)。
在某些實施態樣中，在細菌細胞中所製造之多肽係以不可溶之包涵體型式在細菌中製造。在某些實施態樣中係經由過濾收集含有這類包涵體之宿主細胞；在0.15M NaCl，10mM Tris，pH8，1 mM EDTA中淸洗；並在室温中，以0.1毫克/毫升溶菌酶(史格馬公司，密蘇里卅聖路易市)處理15分鐘。在某些實施態樣中，藉超音波使溶解產物變淸澈，並在12,000 Xg離心10分鐘，以使細胞碎片沈澱成小丸。在某些實施態樣中，將含多肽之小丸重新懸浮在50mM Tris，pH8，和10mM EDTA中；將其疊層在50%甘油上；並在6000 Xg離心30分鐘。在某些實施態樣中，可將該小丸懸浮在不含Mg++ 和Ca++ 之標準的磷酸鹽緩衝的生理食鹽水溶液(PBS)中。在某些實施態樣中，經由將重新懸浮之小丸在變性SDS聚丙烯醯胺凝膠中分餾來將該多肽進一步純化(見，如：Sambrook et al.,如上述)。在某些實施態樣中，可將此凝膠浸泡在0.4 M KCl中，以讓蛋白質可被目視，並可將此蛋白質在缺少SDS之凝膠-移行緩衝液中切出及電洗提之。根據某些實施態樣中，可在細菌中製造可溶性蛋白質型式之麩胺基硫-S-轉移酶(GST)融合蛋白質。在某些實施態樣中 ，這類GST融合蛋白質係利用GST純化組件(GST Purification Module)(法馬西亞)進行純化。
在某些實施態樣中，最好將某些多肽"再摺疊"在某些實施態樣中，這類多肽係利用此處所討論的一些重組系統製造。在某些實施態樣中，將多肽"再摺疊"及/或氧化，以形成所需之三級構造，及/或產生二硫鍵。在某些實施態樣中，這類構造，及/或鍵結與某些多肽之生物活性有關。在某些實施態樣中，"再摺疊"可利用多種本技藝中已知之程序中的任一種來完成。示範之方法包括，但不限於：將可溶性多肽作用劑在高濃度促進劑(chaotropic agent)之存在下暴露於典型上高於pH7之環境中。胍為一種示範性高濃度促進劑。在某些實施態樣中，再摺疊/氧化溶液亦含有還原劑及該還原劑之氧化型式。在某些實施態樣中，該還原劑及其氧化型式以可產生一特殊氧化還原電位的比例存在，此電位能產生二硫化物重排(shuffling)。在某些實施態樣中，這類移動可形成半胱胺酸橋。示範性氧化還原對包括，但不限於：半胱胺酸/胱胺、谷胱甘肽/二硫代雙GSH、氯化銅、二硫代蘇糖醇、DTT/狄森((二噻烷)DTT，和2-巰基乙醇(bME)/二硫代-bME。在某些實施態樣中，使用共溶劑來增加再摺疊的效率。示範性之共溶劑包括，但不限於：甘油、不同分子量之聚乙二醇，及精胺酸。
在某些實施態樣中，個人可實質上純化多肽。本技藝中之技術熟習人士已知一些蛋白質純化技術。在某些實施 態樣中，蛋白質純化牽涉到將多肽分液從非-多肽分液中粗略分餾出來。在某些實施態樣中，多肽係利用色層分析及/或電泳技術進行純化。示範性純化方法包括，但不限於：以硫酸銨沈澱；以PEG沈澱；免疫沈澱法；熱變性後再離心；色層分析法，包括，但不限於：親和力色層分析法(如：蛋白質-A-瓊脂糖)、離子交換色層分析法、排除色層分析法，及逆相色層分析法；凝膠過濾法；羥基磷灰石色層分析法；等電點聚焦法；聚丙烯醯胺凝膠電泳法；及這類和其它技術之組合。在某些實施態樣中，多肽係經由快速蛋白質液態色層分析法，或高壓液態色層分析法(HPLC)進行純化。在某些實施態樣中，可改變純化步驟，或可忽略某些步驟，而仍為用於製備大體上純化之多肽的方法。
在某些實施態樣中，個人可定量多肽製品之純化程度。本技藝中之技術熟習人士知道一些定量純化程度之方法。一些示範性方法包括，但不限於：測定該製劑之專一結合活性，並藉由SDS/PAGE分析評估製劑內之多肽量。一些用於評估多肽製劑之純化量的示範方法包含計算製劑之結合活性，並將其與原始萃取物之結合活性加以比較。在某些實施態樣中，這類計算之結果係以"摺疊純化"之型式表示。用來代表結合活性之量的單位係取決於所使用之特殊分析。
在某些實施態樣中，多肽係經部分純化。在某些實施態樣中，部分純化可利用較少之純化步驟，或利用不同型 式之相同一般純化計劃的不同型式來完成。例如：在某些實施態樣中，利用HPLC裝置來進行陽離子-交換管柱色層分析法通常可產生較利用低-壓色層分析系統的相同技術來得高的"摺疊純化"。在某些實施態樣中，產生較低純化度之方法有利於多肽完全回收，或維持多肽之結合活性。
在某些實施態樣中，多肽之電泳移動可根據SDS/PAGE之不同條件而有不同，有時會顯著不同。見，如：Capaldi et al.,Biochem Biophys\Res Comm,76：425(1977)。吾人可察知：在不同之電泳條件下，純化或部分純化之多肽的表面分子量可能不同。
一些示範性抗原決定部位
在某些實施態樣中，提供抗-HGF抗體結合之抗原決定部位(見，如：實施例8，第10和11圖，及SEQ ID NO.164和165)。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來阻止抗-HGF抗體或專一性結合劑結合至HGF。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來減少抗-HGF抗體或專一性結合劑結合至HGF。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來實質上抑制抗-HGF抗體或專一性結合劑結合至HGF。當過量之抗原決定部位減少結合至HGF之抗-HGF抗體或專一性結合劑的量至少約20%、40%、60%、80%、85%，或更多時，抗原決定部位可實質上抑制抗-HGF抗體或專一性結合劑結合至HGF。在某 些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來結合抗-HGF抗體或專一性結合劑。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來鑑定結合HGF之抗體或專一性結合劑。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來分離結合HGF之抗體或專一性結合劑。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來產生結合HGF之抗體或專一性結合劑。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可作為免疫原，以產生結合HGF之抗體或專一性結合劑。在某些實施態樣中，可將HGF抗原決定部位投予動物，以接著從該動物取得結合HGF之抗體。在某些實施態樣中，HGF抗原決定部位可用來干擾正常之HGF-Met傳訊。
一些治療用途
在某些實施態樣中，提供治療癌症之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑。在某些實施態樣中，提供治療癌症之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑，及另一種治療劑。
在某些實施態樣中，提供治療或預防瘧疾之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑。在某些實施態樣中，提供治療或預防瘧疾之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑，及另一種治療劑。
在某些實施態樣中，提供治療或預防增殖性糖尿病性 腎病之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑。在某些實施態樣中，提供治療或預防增殖性糖尿病性腎病之方法，其包含投服治療上有效量之一或多種對HGF的專一性結合劑，及另一種治療劑。
在某些實施態樣中，單獨投服對HGF之專一性結合劑。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑係在投服至少一種其它治療劑之前投服。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑係與至少一種其它治療劑同時投服。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑係在投服至少一種其它治療劑之後投服。治療劑包括，但不限於：至少一種其它癌症治療劑。示範性之癌症治療劑包括，但不限於：放射治療和化療。
本發明之藥學組成物可以組合療法投服，也就是與其它作用劑組合。在某些實施態樣中，組合治療包含一能結合HGF之專一性結合劑，加上至少一種抗血管生成劑。作用劑包括，但不限於：玻管內合成製備之化學組成物、抗體、抗原結合區、放射性核素，及其組合物和結合物。在某些實施態樣中，作用劑可作為激動劑、拮抗劑、異位調節劑，或毒素。在某些實施態樣中，作用劑可抑制或刺激其靶的(如：受體或酶之活化或抑制)，以藉此促進細胞死亡，或遏止細胞生長。
化療處理包括，但不限於：抗-惡性作用劑，包括，但不限於：烷基化作用劑，包括：氮芥，如：二氯甲基二乙胺、環磷醯胺、伊氟醯胺(ifosfamide)、左旋溶肉瘤 素和苯丁酸氮芥；亞硝基尿素，如：雙氯乙基亞硝尿素(BCNU)、洛慕斯汀(lomustine)(CCNU)，和沙慕斯汀(semustine)(甲基-CCNU)、鐵莫達(Temodal)TM (鐵莫柔醯胺(temozolamide))、伸乙基亞胺/甲基蜜胺，如：三伸乙基蜜胺(TEM)、三乙烯、硫代磷醯胺(硫太巴(thiotepa))、六甲基蜜胺(HMM，歐特塔胺(altretamine))、磺酸烷酯類，如：白消安；三類，如：甲氮咪胺(DTIC)、抗代謝物，包括：葉酸同系物，如：氨甲喋呤和三美喋呤(trimetrexate)、嘧啶同系物，如：5-氟尿嘧啶(5FU)、氟去氧尿苷、傑塞塔賓(gemcitabine)、胞嘧啶樹膠醛糖苷(AraC，阿糖胞苷)、5-氮雜胞苷、2,2’-二氟去氧胞苷、嘌呤同系物，如：6-巰嘌呤、6-硫鳥糞嘌呤、氮雜硫嘌呤、2’-去氧基助間型黴素(戊史塔汀(pentostatin))、紅羥壬基腺嘌呤(EHNA)、磷酸氟達拉賓(fludarabin)和2-氯去氧腺苷酸(克拉利賓(Cladribine)，2-CdA)；天然產物，包括：抗有絲分裂藥物，如：派克利塔索(paclitaxel)，長春花鹼，包括：長春花生物鹼(VLB)、長春花新鹼，和長春花利賓(vinorelbine)，帖索泰(texotere)、雌醇芥，和磷雌醇芥，哌哚族毒素類(ppipodophylotoxins)，如：鬼臼乙叉苷和表鬼臼毒噻吩糖苷；抗生素類，如：放射線菌素D、柔毛黴素(紅比黴素)、阿黴素、邁朵仙隆(mitoxantrone)、伊達如辛黴素(idarubicin)、博來黴素、光輝黴素(光神黴素)、自力黴素C和放射黴素；酶 類，如：L-天門冬醯胺酶；生物反應修正劑類，如：干擾素-α、IL-2、G-CSF私GM-CSF；其它作用劑，包括：鉑協調複合物類，如：氯氨鉑和碳氨鉑(carboplatin)、蒽二酮類，如：邁朵仙隆，經取代之脲，如：羥基脲，甲基肼衍生物類，包括：N-甲基肼(MIH)和甲苄肼，腎上腺皮質遏抑劑類，如：氯苯二氯乙烷(o,p’-DDD)和胺基苯乙哌啶酮；激素和拮抗劑類，包括：腎上腺皮質類固醇拮抗劑類，如：腎上腺皮質酮同等物、氟美松和胺基苯乙哌啶酮；傑沙(Gemzar)TM (傑塞塔賓)、黃體脂酮，如：羥基黃體脂酮己酸化物、甲基乙醯氧孕前酮和醋酸甲地孕酮；動情繳素，如：二乙基春情素和乙炔基雌二醇同等物；抗動情激素，如：三苯氧胺；雄性素，包括：丙酸睪脂酮和氟羥甲基睪丸素/同等物；抗雄性素類，如：氟它醯胺(flutamide)，促性腺素-釋出激素同系物和白普來(leuprolide)；及非-類固醇類抗雄性素類，如：氟它醯胺。
可與對HGF之專一性結合劑一起投服之癌症治療劑亦包括，但不限於：被瞄準之治療劑。被瞄準之治療劑的實施例包括，但不限於：治療性抗體之用途。示範之治療性抗體包括，但不限於：老鼠、老鼠-人類嵌合性、CDR-移植的、人類化的和完整的人類抗體，以及合成的抗體，包括，但不限於：經由篩選抗體集合庫所選出者。示範性之抗體包括，但不限於：那些結合至下列蛋白質上，且隨意地對顯示這些蛋白質之腫瘤細胞誘導出細胞抑制，及/ 或細胞毒殺效果的抗體：細胞表面蛋白質Her2、CDC20、CDC33、似-黏蛋白之糖蛋白，及呈現在腫瘤細胞上之表皮生長因子受體(EGFR)。示範性之抗體亦包括：赫塞普汀(HERCEPTINN)TM (特蘇如美(trastuzumab))，其可用來治療乳癌及其它型態之癌症，和利突仙(RITUXAN)TM (利突西美(rituximab))，才瓦林(ZEVALIN)TM (伊比突莫美(ibritumomab tiuxetan))，格利維(GLEEVEC)TM ，和淋弗塞得(LYMPHOCIDE)TM (伊普蘇美(epratuzumab))，其可用來治療非-霍吉金氏淋巴瘤及其它型態之癌症。一些示範性之抗體亦包括：爾必突(ERBITUX)TM (IMC-C225)，爾提諾(ertinolib)(伊利沙(Iressa))；畢沙(BEXXAR)TM (碘131托蘇莫美(tositumomab))；KDR(激酶功能區塊受體)抑制劑；抗VEGF抗體和拮抗劑(如：艾維斯汀(Avastin)TM 和VEGAF-TRAP)；抗VEGF受體抗體和抗原結合區；抗-Ang-1，和Ang-2抗體和抗原結合區；對Tie-2及其它Ang-1，和Ang-2受體之抗體；Tie-2配合體；對抗Tie-2激酶抑制劑之抗體；和坎伯斯(Campath)® (艾利蘇美(Alemtuzumab))。在某些實施態樣中，癌症治療劑為選擇性地在腫瘤細胞中誘導細胞凋亡的多肽，包括，但不限於：TNF-相關之多肽TRAIL。
在某些實施態樣中，癌症治療劑為減少血管生成之抗-血管生成劑。一些這類作用劑包括，但不限於：IL-8；坎伯斯，B-FGF；FGF拮抗劑；Tek拮抗劑(Cerretti et al.,美國專利案第2003/0162712號；Cerretti et al.,美國專利案第6,413,932號，及Cerretti et al.,美國專利案第6,521,424號，其內容併為本專利申請案中任何目的之參考資料)；抗-TWEAK作用劑(其包括，但不限於：抗體和抗原結合區)；可溶性TWEAK受體拮抗劑(Wiley，美國專利案第6,727,225號)；拮抗黏合素結合其配合體之ADAM去組合蛋白功能區塊(Fanslow et al.,美國專利案第2002/0042368號)；抗-eph受體和抗-艾夫林(ephrin)抗體；抗原結合區，或拮抗劑(美國專利案第5,981,245；5,728,813；5,969,110；6,596,852；6,232,447；6,057,124號及其專利案一族成員)；抗-VEGF作用劑，如：特異結合VEGF之抗體或抗原結合區，或可溶性VEGF受體或其配合體結合區)如：艾維斯汀(Avastin)TM 或VEGF-TRAPTM ，和抗-VEGF受體作用劑(如：特異結合至其上之抗體或抗原結合區)，EGFR抑制劑(如：特異結合至其上之抗體或抗原結合區)，如：潘提慕美(pantitumumab)、IRESSATM (傑夫提尼(gefitinib))、TARCEVATM (而洛提尼(erlotinib))、抗-Ang-1和抗-Ang-2作用劑(如：特異結合至其上，或其受體之抗體或抗原結合區，如：Tie-2/TEK)，和抗-Tie-2激酶抑制劑(如：特異結合並抑制生長因子之活性的抗體或抗原結合區，如：肝細胞生長因子(HCF，亦稱為散射因素)，及特異結合其受體"c-met"之抗體或抗原結合區；抗-PDGF-BB拮抗劑；對PDGF-BB配合體之抗體和抗原結合 區；及PDGFR激酶抑制劑。
在某些實施態樣中，癌症治療劑為血管生成抑制劑。一些這類抑制劑包括，但不限於：SD-7784(輝瑞，美國)；塞蘭吉肽(cilengitide)(默克KGaA，德國，EPO 770622)；八鈉佩佳坦尼(pegaptanib octasodium)(吉利(Gilead)科學，美國)；艾菲史塔汀(Alphastatin)(BioActa，英國)；M-PGA(塞爾金(Celgene)，美國，US 5712291)；伊珞瑪泰(ilomastat)(艾利瓦(Arriva)，美國，US 5892112)；塞瑪仙尼(semaxanib)(輝瑞，美國，US 5792783)；維他拉尼(vatalanib)(諾瓦提斯(Novartis)，瑞士)；2-甲氧基雌二醇(安得美(EntreMed)，美國)；TLC ELL-12(艾倫(Elan)，愛爾蘭)；醋酸安可他(anecortave acetate)(艾爾康(Alcon)，美國)；α -D148 Mab(安金(Amgen)，美國)；CEP-7055(塞法隆(Cephalon)，美國)；抗-Vn Mab(庫塞爾(Crucell)，荷蘭)；DAC：抗血管生成(康化(ConjuChem，加拿大)；安吉西汀(Angiocidin)(因凱(InKine)製藥，美國)；KM-2550(Kyowa Hakko，日本)；SU-0879(輝瑞，美國)；CGP-79787(諾瓦提斯，瑞士，EP 970070)；ARGENT技術(艾列雅得(Ariad)，美國)；YIGSR-史提斯(Stealth)(强生，美國)；纖維蛋白原-E片段(BioActa，英國)；血管生成抑制劑(特利金(Trigen)，英國)；TBC-1635(英塞辛(Encysive)製藥，美國)；SC-236(輝瑞，美國) ；ABT-567(亞培，美國)；曼塔史塔汀(Metastatin)(安得美，美國)；血管生成抑制劑，(特利普(Tripep)，瑞典)；瑪斯平(maspin)(舒塞(Sosei)，日本)；2-甲氧基雌二醇(腫瘤科學公司，美國)；ER-68203-00(IVAX，美國)；貝尼芬(Benefin)(蘭實驗室(Lane Labs)，美國)；Tz-93(蘇慕拉(Tsumura)，日本)；TAN-1120(塔奇達(Takeda)，日本)；FR-111142(富吉沙(Fujisawa)，日本，JP 02233610)；血小板因子4(瑞比利金(RepliGen)，美國，EP 407112)；血管內皮生長因子拮抗劑(波利安(Borean)，丹麥)；癌症治療劑(南加州大學，美國)；貝瓦西如美(Bevacizumab)(pINN)(金泰克(Genentech)，美國)；血管生成抑制劑(SUGEN，美國)；XL 784(艾西利斯(Exelixis)，美國)；XL647(艾西利斯，美國)；MAb，α5β3黏合素，第二代(應用分子演化，英國，和醫用免疫公司，美國)；基因治療，腎病(牛津生物醫學，英國)；英沙陶林(enzastaurin)氫氯化物(USAN)(禮來，美國)；CEP 7055(塞法隆，美國，和珊諾非-合成實驗室(Sanofi-Synthelabo)，法國)；BC 1(吉那歐癌症研究機構，義大利)；血管生成抑制劑(歐克米(Alchemia)，澳洲)；VEGF拮抗劑(瑞吉隆(Regeneron)，美國)；rBPI 21和BPI-衍生之抗血管生成劑(XOMA，美國)；PI 88(普洛金(Progen)，澳洲)；塞倫吉肽(cilengitide)(pINN)(默克KGaA，德國；慕 尼黑科技大學，德國，史克利普臨床和研究基金會，美國)；塞突西美(cetuximab)(INN)(艾文提斯(Aventis)，法國)；AVE 8062(日淸，日本)；AS 1404(癌症研究實驗室，紐西蘭)；SG 292(泰利歐(Telios)，美國)；內史塔汀(Endostatin)(波士頓兒童醫院，美國)；ATN 161(安提農(Attenoun)，美國)；血管史塔汀(Angiostatin)(波士頓兒童醫院，美國)；2-甲氧基雌二醇(波士頓兒童醫院，美國)；ZD 6474(艾特芮妮卡(AstraZeneca)，英國)；ZD 6126(安吉歐金(Angiogene)製藥，英國)；PPI 2458(普瑞西(Praecis)，美國)；AZD 9935(艾特芮妮卡，英國)；AZD 2171(艾特芮妮卡，英國)；維他拉尼(vatalanib)(pINN)(諾瓦提斯，瑞士，和仙靈AG，德國)；組織因子途徑抑制劑(安得美，美國)；佩佳坦尼(pegaptanib)(吉利)科學，美國)；仙索羅(xanthorrhizol)(永西(Yonsei)大學，南韓)；疫苗，以基因為基礎，VEGF-2(史克利普臨床和研究基金會，美國)；SPV5.2(超技術(Supratek)，加拿大)；SDX 103(加州大學聖地牙哥分校，美國)；PX 478(ProIX，美國)；曼塔史塔汀(安得美，美國)；托普寧(troponin)I(哈佛大學，美國)；SU 6668(SUGEN，美國)；OXI 4503(OXiGENE，美國)；鄰-胍(次元製藥，美國)；莫突玻胺C(motuporamineC)(英國哥倫比亞大學，加拿大)；CDP 791(細胞技術群(Celltech Group)，英國)；艾提普莫(Atiprimod)(pINN)(葛蘭素史密斯克來，英國)；E7820(艾沙(Eisai)，日本)；CYC381(哈佛大學，美國)；AE 941(艾特納(Aterna)，加拿大)；疫苗，血管生成(安得美，美國)；尿激酶纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑(丹德翁(Dendreon)，美國)；歐庫芬尼(Oglufanide)(pINN)(美爾莫(Melmotte)，美國)；HIF-1α抑制劑(塞諾瓦(Xenova)，英國)；CEP 5214(塞法隆，美國)；BAY RES 2622(拜爾，德國)；安吉西汀(Angiocidin)(殷凱(InKine)，美國)；A6(安斯壯(Angstrom)，美國)；KR 31372(韓國化學技術研究機構，南韓)；GW 2286(葛蘭素史密斯克來，英國)；EHT 0101(艾松希(ExonHit)，法國)；CP 868596(輝瑞，美國)；CP 564959(OSI，美國)；GP 547632(輝瑞，美國)；786034(葛蘭素史密斯克來，英國)；KRN 633(奇林布威(Kirin Brewery)，日本)；藥物遞送系統、眼內、2-甲氧基雌二醇(安得美，美國)；安吉內克(anginex)(馬斯特克(Maastricht)大學，荷蘭，及明尼蘇達大學，美國)；ABT 510(亞培，美國)；AAL 993(諾瓦提斯，瑞士)；VEGI(普洛提歐(Proteom)技術，美國)；腫瘤壞死因子-α抑制劑(國際老化問題組織，美國)；SU 11248(輝湍，美國，和SUGEN，美國)；ABT518(亞培，美國)；YH 16(揚泰隆昌，中國)；S-3APG(波士頓兒童醫院，美國，和安得美，美國)；MAb、KDR (殷克隆(ImClone)系統，美國)；MAb、α5β1(蛋白質設計，美國)；KDR激酶抑制劑(細胞技術群，英國；和強森&強森，美國)；GFB 116(南佛羅里達大學，美國，和耶魯大學，美國)；CS 706(山奇歐(Sankyo)，日本)；坎布利塔史塔汀(Combretastatin)A4先驅藥物(亞歷桑那州立大學，美國)；軟骨膠酶AC(IBEX，加拿大)；BAY RES 2690(拜爾，德國)；AGM 1470(哈佛大學，美國、塔奇達(Takeda)，日本，和TAP，美國)；AG 13925(阿庫隆(gouron)，美國)；四硫鉬酸化物(密西根大學，美國)；GCS 100(韋恩州立大學，美國)；CV 247(常春藤醫學，英國)；CKD 732(中庫丹(Chong Kun Dang)，南韓)；MAb、血管內皮生長因子(仙諾瓦(Xenova)，英國)；艾索葛汀(irsogladine)(INN)(日本新雅庫(Nippon Shinyaku)，日本)；RG 13577(艾文提斯(Aventis)，法國)；WX 360(威勒克斯(Wilex)，德國)；角鯊胺(pINN)(吉芮拉(Genaera)，美國)；RPI 4610(希那(Sirna)，美國)；癌症治療劑(馬林諾瓦(Marinova)，澳州)；乙醯肝素酶抑制劑(因塞特(InSight)，以色列)；KL 3106(柯隆(Kolon)，南韓)；霍諾奇(Honokiol)(艾莫利大學，美國)；ZK CDK(仙林AG，德國)；ZK安吉歐(仙林AG，德國)；ZK 229561(諾瓦提斯(Novartis)，瑞士，和仙林AG，德國)；XMP 300(XOMA，美國)；VGA 1102(太修(Taisho)，日本)；VEGF受體調節 劑(法馬柯佩(Pharmacopeia)，美國)；VE-卡德林(cadherin)-2拮抗劑(殷克隆系統，美國)；血管史塔汀(Vasostatin)(國家健康組織，美國)；疫苗、Flk-1(殷克隆系統，美國)；TZ 93(蘇慕拉(Tsumura)，日本)；湯史塔汀(TumStatin)(貝斯以色列醫院，美國)；截形可溶性FLT 1(血管內皮生長因子受體1)(默克公司，美國)；Tie-2配合體(利金隆(Regeneron)，美國)；血栓史潘汀(thrombospondin)1抑制劑(艾利珍尼(Allegheny)健康教育和研究基金會，美國)；2-苯磺醯胺，4-(5-(4-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-；艾利瓦(Arriva)；和C-Met。AVE 8062((2S)-2-胺基-3-羥基-N-〔2-甲氧基-5-〔(1Z)-2-(3,4,5-三甲氧苯基)乙烯基〕苯基〕丙醯胺一氫氯化物)；美泰利慕美(metelimumab)(pINN)(免疫球蛋白G4，抗-(人類轉形生長因子.β .1.(人類單株CAT 192.γ .4-鏈))，加上人類單株CAT 192.-鏈二聚體之二硫化物)；Flt3配合體；CD40配合體；介白素-2；介白素-12；4-1BB配合體；抗-4-1BB抗體；TNF拮抗劑和TNF受體拮抗劑，包括：TNFR/Fc，TWEAK拮抗劑和TWEAK-R拮抗劑，包括：TWEAK-R/Fc；TRAIL；VEGF拮抗劑，包括：抗-VEGF抗體；VEGF受體(包括：VEGF-R1和VEGF-R2，亦稱為Flt1和Flk1或KDR)拮抗劑；CD148(亦稱為DEP-1，ECRTP，和PTPRJ，見：Takahashi et al.,J.Am.Soc.Nephrol.10：2135-45(1999)，其併為本專利申請 案中任何目的之參考資料)激動劑；血栓史潘汀1拮抗劑，和Tie-2或Tie-2配合體(如：Ang-2)二者之一，或此二者之抑制劑。本技藝中已知多種Ang-2之抑制劑，包括：已出版之美國專利申請案第20030124129號(相當於PCT申請案第WO 03/030833號)和美國專利案第6,166,185號(其內容全部併為本專利申請案之參考資料)中所描述之抗-Ang-2抗體。另外，本技藝亦知Ang-2肽體，其可在，如已出版之美國專利申請案第20030229023號(相當於PCT申請案第WO 03/057134號)和已出版之美國專利申請案第20030236193號中找到，其內容全部併為本專利申請案之參考資料。
一些癌症治療劑包括，但不限於：沙利竇邁和沙利竇邁同系物(N-(2,6-二酮基-3-六氫吡啶基)酞醯亞胺)；泰可嘉蘭鈉(tecogalan sodium)(硫酸化之多醣肽聚醣)；TAN 1120(8-乙醯基-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-10-〔〔八氫-5-羥基-2-(2-羥丙基)-4,10-二甲基吡喃並〔3,4-d〕-1,3,6-二咢若辛(dioxazocin)-8-基〕氧基〕-5,12-萘笚二酮)；蘇拉狄斯搭(suradista)(7,7’-〔羰基雙〔亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基〕〕雙-1,3-萘二磺酸四鈉鹽〕；SU 302；SU 301；SU 1498((E)-2-氰基-3-〔4-羥基-3,5-雙(1-甲基乙基)苯基〕-N-(3-苯丙基)-2-丙烯醯胺)；SU 1433(4-(6,7-二甲基-2-喹喏啉基)1,2-苯二醇)；ST 1514；SR 25989；可溶性Tie-2； SERM衍生物，法莫斯(Pharmos)；沙美仙尼(semaxanib)(pINN)(3-〔(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)伸甲基〕-1,3-二氫-2H-吲哚-2-酮)；S 836；RG 8803；RESTIN；R 440(3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-1H-吡咯-2,5-二酮)；R 123942(1-〔6-(1,2,4-噻二唑-5-基)-3-噠〕-N-〔3-(三氟甲基)苯基〕-4-六氫吡啶胺)；脯胺醯基羥基酶抑制劑；進展提昇之基因；普林諾美史達(prinomastat)(INN)((S)-2,2-二甲基-4-〔〔對-(4-吡啶氧基)苯基〕磺醯基〕-3-三嗎福啉羰基羅沙米酸(roxamic acid))；NV 1030；NM 3(8-羥基-6-甲氧基-α -甲基-1-酮基-1H-2-苯並吡喃-3-醋酸)；NF 681；NF 050；MIG；METH 2；METH 1；馬內仙汀B(manassantin B)(α -〔1-〔4-〔5-〔4-〔2-(3,4-二甲氧苯基)-2-羥基-1-甲基乙氧基〕-3-甲氧苯基〕四氫-3,4-二甲基-2-呋喃基〕-2-甲氧苯氧基〕乙基〕-1,3-苯並二呋喃-5-甲醇)；KDR單株抗體；α 5β 3黏合素單株抗體；LY 290293(2-胺基-4-(3-吡啶基)-4H-萘並〔1,2-b〕吡喃-3-碳腈)；KP 0201448；KM 2550；黏合素-專一性肽；INGI 401；GYKI 66475；GYKI 66462；葛林史塔汀(greenstatin)(101-354-血漿蛋白原(人類))；類風濕性關節炎、攝護腺癌、卵巢癌、小神經膠瘤、內史塔汀、結腸直腸癌、ATF BTPI、抗血管生成基因、血管生成抑制劑，或血管生成之基因治療劑；膠酶抑制劑，FR 111142(4,5-二羥基-2-己烯酸-5-甲 氧基-4-〔2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)環氧乙烷基〕-1-氧雜螺〔2,5〕辛-6-基酯)；氟芬尼邁(pINN)(S)-α -胺基-3-羥基-4-(羥甲基)苯醋酸)；纖維結合素拮抗劑(1-乙醯基-L-脯胺醯基-L-組胺醯基-L-絲胺醯基-L-半胱胺醯基-L-天門冬醯胺)；纖維母細胞生長因子受體抑制劑；纖維母細胞生長因子拮抗劑；FCE 27164(7,7’-(羰基雙〔亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基〕〕雙-1,3,5-萘三磺酸-六鈉鹽)；FCE 26752(8,8’-〔羰基雙〔亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基(1-甲基-1H-吡咯-4,2-二基)羰亞胺基〕〕雙-1,3,5-萘三磺酸)；內皮單核細胞活化多肽Ⅱ；VEGFR反義寡核苷酸；抗-血管生成和滋養因子；ANCHOR血管拮抗劑；內史塔汀；Del-1血管生成蛋白質；CT 3577；康德托史塔汀(contortrostatin)；CM 101；軟骨膠酶AC；CDP 845；坎史塔汀(CanStatin)；BST 2002；BST 2001；BLS 0597；BIBF 1000；ARRESTIN；艾波米格(apomigren)(1304-1388-XV型膠原蛋白(人類基因COL 15A1 α1-鏈先質1)；血管抑制素(angioinhibin)；aa ATⅢ；A36；9α -氟甲氧基黃體脂酮醋酸化物((6-α )-17-(乙醯氧基)-9-氟-6-甲基-孕-4-烯-3,20-二酮)；2-甲基-2-酞醯亞胺基-戊二酸(2-(1,3-二氫-1-酮基-2H-異吲哚-2-基)-2-甲基戊二酸)；經鐿90標示之單株抗體BC-1；沙美仙尼(Semaxanib)(3-(4,5-二甲基吡咯-2-基伸甲基)吲哚啉-2-酮)(C15 H14 N2 O)；PI 88(硫酸磷甘露戊糖)；歐弗西廸(Alvocidib)(4H-1-苯並吡喃-4-酮,2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(3-羥基-1-甲基-4-六氫吡啶基)-順-(-)-)(C21 H20 Cl N O5)；E7820；SU 11248(5-〔3-氟-2-酮基-1,2-二氫亞吲哚-(3Z)-烯基甲基〕-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙胺乙基)醯胺)(C22 H27 F N4 O2)；史夸胺(Squalamine)(膽烴-7,24-二醇,3-〔〔3-〔(4-胺丁基)胺丙基〕胺基〕-,24-(硫酸氫),(3.β .,5.α .,7.α .)-〕(C34 H65 N3 O5 S)；羊毛鉻黑T；AGM 1470(胺基碳酸,(氯乙醯基)-,5-甲氧基-4-〔2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)環氧乙烷基〕-1-氧雜螺〔2,5〕辛-6-基酯,〔3R-〔3α ,4α (2R,3R),5β ,6β 〕〕)(C19 H28 Cl N 06)；AZD 9935；BIBF 1000；AZD 2171；ABT 828；KS-介白素-2；子宮球蛋白；A6；NSV639366(1-〔3-(二乙胺基)-2-羥丙胺基〕-4-(環氧乙烷-2-基甲胺基)蒽醌丁烯二酸酯)(C24 H29 N3 O4.C4 H4 O4)；ISV 616；抗-ED-B融合蛋白質；HUI 77；托彭寧(Troponin)I；BC-1單株抗體；SPV 5.2；ER 68203；CKD 731(3-(3,4,5-三甲氧苯基)-2(E)-丙烯酸(3R,4S,5S,6R)-4〔2(R)-甲基-3(R)-3(R)-(3-甲基-2-丁烯基)環氧乙烷-2-基〕-5-甲氧基-1-氧雜螺〔2,5〕辛-6-基酯)(C28 H38 O8)；IMC-1C11；aaATⅢ；SC 7；CM 101；安吉歐可(Angiocol)；克林哥(Kringle)5；CKD 732(3-〔4-〔2-(二甲胺基)乙氧基〕苯基〕-2(E)-丙烯酸)( C29 H41 N O6)；U 995；肯史塔汀(Canstatin)；SQ 885；CT 2584(1-〔11-(十二烷胺基)-10-羥十一烷基〕-3,7-二甲基黃嘌呤)(C30 H55 N5 O3)；沙莫辛(Salmosin)；EMAP Ⅱ；TX 1920(1-(4-甲基六氫吡基)-2-(2-硝基-1H-1-咪唑基)-1-乙酮)(C10 H15 N5 O3)；α -vβ -x抑制劑；CHIR 11509(N-(1-丙炔基)甘胺醯基-〔N-(2-萘基)〕甘胺醯-〔N-(胺甲醯基甲基)〕甘胺酸 雙(4-甲氧苯基)甲醯胺)(C36 H37 N5 O6)；BST 2002；BST 2001；B 0829；FR 111142；4,5-二羥基-2(E)-己烯酸(3R,4S,5S,6R)-4-〔1(R),2(R)-環氧基-1,5-二甲基-4-己烯基〕-5-甲氧基-1-氧雜螺〔2,5〕辛-6-基酯(C22 H34 O7)；和激酶抑制劑，包括，但不限於：N-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶甲基)-1-酞胺；4-〔4-〔〔〔〔4-氯-3-(三氟甲基)苯基〕胺基〕羰基〕胺基〕苯氧基〕-N-甲基-2-吡啶羧醯胺；N-〔2-(二乙胺基)乙基〕-5-〔(5-氟-1,2-二氫-2-酮基-3H-亞吲哚-3-烯基)甲基〕-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧醯胺；3-〔(4-溴-2,6-二氟苯基)甲氧基〕-5-〔〔〔〔4-(1-吡咯烷基)丁基〕胺基〕羰基〕胺基〕苯氧基〕-4-異噻唑羧醯胺；N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-〔(1-甲基-4-六氫吡啶基)甲氧基〕-4-喹唑啉胺；3-〔5,6,7,13-四氫-9-〔(1-甲基乙氧基)甲基〕-5-酮基-12H-茚並〔2,1-a〕吡咯並〔3,4-c〕咔唑-12-基〕丙酯N,N-二甲基-甘胺酸；N-〔5-〔〔〔5-(1,1-二甲基乙基)-2-唑基〕甲基〕硫基〕- 2-噻唑基〕-4-六氫吡啶羧醯胺；N-〔3-氯-4-〔(3-氟苯基)甲氧基〕苯基〕-6-〔5-〔〔〔2-(甲磺醯基)乙基〕胺基〕甲基〕-2-呋喃基〕-4-喹唑啉胺；4-〔(4-甲基-1-六氫吡)甲基〕-N-〔4-甲基-3-〔〔4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基〕胺基〕-苯基〕苯醯胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-〔3-(4-嗎福啉基)丙氧基〕-4-喹唑啉胺；N-(3-乙炔苯基)-6,7-雙(2-甲氧乙氧基)-4-喹唑啉胺；N-(3-((((2R)-1-甲基-2-吡咯烷基)甲基)氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-((3-(1,3-唑-5-基)苯基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；2-(((4-氟苯基)甲基)胺基)-N-(3-((((2R)-1-甲基-2-吡咯烷基)甲基)氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-吡啶羧醯胺；N-〔3-(雜氮環丁烷-3-基甲氧基)-5-三氟甲基-苯基〕-2-(4-氟-苄胺基)-菸醯胺；6-氟-N-(4-(1-甲基乙基)苯基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；2-((4-吡啶甲基)胺基)-N-(3-(((2S)-2-吡咯烷基甲基)氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-吡啶羧醯胺；N-(3-(1,1-二甲基乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(3,3-二甲基-2,3-二氫-1-苯並呋喃-6-基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(3-((((2S)-1-甲基-2-吡咯烷基)甲基)氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；2-((4-吡啶甲基)胺基)-N-(3-((2-(1-吡咯烷基)乙基)氧基)-4-(三氟甲基)苯基)-3-吡啶羧醯胺；N-( 3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(4-(五氟乙基)-3-(((2S)-2-吡咯烷甲基)氧基)苯基)-2-((4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(3-((3-(雜氮環丁烷基甲基)氧基)-5-三氟甲基)苯基)-2-(4-吡啶甲基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(3-(4-六氫吡啶氧基)-5-三氟甲基)苯基)-2-((2-(3-吡啶)乙基)胺基)-3-吡啶羧醯胺；N-(4,4-二甲基-1,2,3,4-四氫-異喹啉-7-基)-2-(1H-吲唑-6-基胺基)-菸醯胺；2-(1H-吲唑-6-基胺基)-N-〔3-(1-甲基吡咯烷-2-基甲氧基)-5-三氟甲基)苯基〕-菸醯胺；N-〔1-(2-二甲基胺基-乙醯基)-3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基〕-2-(1H-吲唑-6-基胺基)-菸醯胺；2-(1H-吲唑-6-基胺基)-N-〔3-(吡咯烷-2-基甲氧基)-5-三氟甲基)苯基〕-菸醯胺；N-(1-乙醯基-3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基)-2-(1H-吲唑-6-基胺基)-菸醯胺；N-(4,4-二甲基-1-酮基-1,2,3,4-四氫-異喹啉-7-基)-2-(1H-吲唑-6-基胺基)-菸醯胺；N-〔4-(第三-丁基)-3-(3-六氫吡啶基丙基)苯基〕〔2-(1H-吲唑-6-基胺基)(3-吡啶基)〕羧醯胺；N-〔5-(第三-丁基)異唑-3-基〕〔2-(1H-吲唑-6-基胺基)(3-吡啶基)〕羧醯胺：和N-〔4-(第三-丁基)苯基〕〔2-(1H-吲唑-6-基胺基)(3-吡啶基)〕羧醯胺，和揭示於下列文獻中之激酶抑制劑：美國專利案第6,258,812號；6,235,764號；6,630,500號；6,515,004號；6,713,485號；5,521,184號 ；5,770,599號；5,747,498號；5,990,141號；美國刊物案第US20030105091號；和專利合作條約刊物第WO01/37820號；WO01/32651號；WO02/68406號；WO02/66470號；WO02/55501號；WO04/05279號；WO04/07481號；WO04/07458號；WO04/09784號；WO02/59110號；WO09/45009號；WO98/35958號；WO00/59509號；WO99/61422號；WO00/12089號；和WO00/02871號，各刋物併為本專利申請案中任何目的之參考資料。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可在投服癌症治療劑之前、同時，或治療之後投服。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可以預防方式投服，以預防或緩和因癌症轉移所開始的骨質流失。在某些實施態樣中，可投服對HGF之專一性結合劑以治療因癌症轉移所存在之骨質流失狀況。
示範性之癌症包括，但不限於：乳癌、結腸直腸癌、胃癌、神經膠瘤、頭和頸鱗狀細胞癌、遺傳性和偶發性乳頭狀腎癌、白血病、淋巴瘤、李-弗洛曼尼徵候群、惡性肋膜間皮瘤、黑色瘤、多發性骨髓瘤、非-小細胞肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰臟癌、攝護腺癌、小細胞肺癌、滑膜肉瘤、甲狀腺癌，及膀胱之移行細胞癌。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可單獨使用，或與至少一種用於治療癌症之其它治療劑一起使用。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑係與一治 療上有效量之其它治療劑一起使用。可與對HGF之專一性結合劑一起使用之示範性治療劑包括，但不限於：茴香黴素抗生素之格爾德黴素族的一員；前-HGF；NK2；c-Met肽抑制劑；Grb2 Src同系2之拮抗劑；Gab1調節劑；顯性-陰性Src；凡-希伯-蘭道von-Hippel-Landau抑制劑，包括，但不限於：瓦特曼寧(wortmannin)；P13激酶抑制劑，其它抗-受體治療劑、抗EGFR、COX-2抑制劑、希樂葆(Celebrex)TM 、維歐克斯(Vioxx)TM ；血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF調節劑、纖維母細胞生長因子(FGF)、FGF調節劑、表皮生長因子(EGF)、EGF調節劑、角質細胞生長因子(KGF)、KGF-相關分子、KGF調節劑；基質金屬蛋白酶(MMP)調節劑。
在某些實施態樣中，將對HGF之專一性結合劑與特殊之治療劑一起使用，以治療不同的癌症。在某些實施態樣中，將對HGF之專一性結合劑與特殊之治療劑一起使用，以治療或預防瘧疾。在某些實施態樣中，將對HGF之專一性結合劑與特殊之治療劑一起使用，以治療或預防增殖性糖尿病性腎病。在某些實施態樣中，鑑於病況和所需之治療水準，可投服一、二、三，或更多之作用劑。在某些實施態樣中，可經由將這類作用劑包含在相同調和物內來一起提供。在某些實施態樣中，可經由將這類作用劑和對HGF之專一性結合劑包含在相同調和物來一起提供。在某些實施態樣中，可將這類作用劑分別調配，再將其包含在一治療套組中一起提供。在某些實施態樣中，可將 這類作用劑分別提供。在某些實施態樣中，當經由基因治療來投服時，可將編碼蛋白質作用劑之基因，及/或對HGF之專一性結合劑包含在相同載體中。在某些實施態樣中，編碼蛋白質作用劑之基因，及/或對HGF之專一性結合劑可受相同啟動因子區之控制。在某些實施態樣中，可將編碼蛋白質作用劑之基因，及/或對HGF之專一性結合劑包含在分開之載體中。
在某些實施態樣中，本發明提供含有對HGF之專一性結合劑，加上藥學上可接受之稀釋劑、載體、助溶劑、乳化劑、防腐劑，及/或佐劑的藥學組成物。
在某些實施態樣中，本發明提供含有對HGF之專一性結合劑，及一治療上有效量之至少一種其它治療劑，加上藥學上可接受之稀釋劑、載體、助溶劑、乳化劑、防腐劑，及/或佐劑的藥學組成物。
在某些實施態樣中，本發明針對含有對HGF之專一性結合劑，及一治療上有效量之至少一種絲胺酸蛋白酶抑制劑的治療劑，以及利用這類治療劑的治療方法。在某些實施態樣中，治療劑含有對HGF之專一性結合劑，和絲胺酸蛋白酶抑制劑，以及至少一種此處所描述之其它分子。
在某些情況中，擾亂蛋白酶/蛋白酶抑制劑之平衡可導致蛋白酶-傳介之組織破壞，包括，但不限於：腫瘤侵入正常組織，導致轉移。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可與至 少一種用於發炎之治療劑一起使用。在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑可與至少一種用於免疫疾病之治療劑一起使用。用於發炎和免疫疾病之示範性治療劑包括，但不限於：38kDa有絲分裂因子-活化之蛋白質激酶(p38-MAPK)的第1型環氧酶(COX-1)和第2型環氧酶(COX-2)抑制劑的小分子調節劑；涉及發炎途徑之細胞內分子的小分子調節劑，其中這類細胞內分子包括，但不限於：jnk、IKK、NF-B、ZAP70，和lck。一些用於發炎之示範性治療劑描述於，如：C.A.Dinarello and L.L.Moldawer Proinflammatory and Anti-Inflammatory Cytokines in Rheumatoid Arthritis：A Primer for Clinicians Third Edition(2001)Amgen Inc.Thousand Oaks,CA中。
在某些實施態樣中，藥學組成物將包括超過一種不同之對HGF的專一性結合劑。在某些實施態樣中，藥學組成物將包括超過一種對HGF的專一性結合劑，其中該對HGF之專一性結合劑結合超過一種抗原結合部位。
在某些實施態樣中，可接受之配方物質在所使用之劑量和濃度下宜為對受者無毒性。
在某些實施態樣中，藥學組成物可含有用於修改、維持或保存下列各項的配方物質，如：pH、滲透壓、黏度、澄明度、顏色、等張性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋出之速度、組成物之吸收或滲透。在某些實施態樣中，合適之配方物質包括，但不限於：胺基酸(如：甘胺酸 、麩胺醯胺、天門冬醯胺、精胺酸，或賴胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(如：壞血酸、亞硫酸鈉，或氫化鈉-亞硫酸鹽)；緩衝劑(如：硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽，或其它有機酸)；膨脹劑(如：甘露糖醇，或甘胺酸)；螯合劑(如：乙二胺四醋酸(EDTA))；複合劑(如：啡啡因、聚乙烯基吡咯酮、β -環糊精或羥丙基-β -環糊精)；充填劑；單醣類；雙醣類；及其它醣類(如：葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(如：血淸白蛋白、凝膠或免疫球蛋白)；染色劑、調味劑和稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如：聚乙烯基吡咯酮)；低分子量之多肽；鹽-形成抗衡離子(如：鈉)；防腐劑(如：殺藻胺、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基過苯甲酸甲酯、對羥基過苯甲酸丙酯、雙氯苯脈己烷(chlorhexidine)、山梨酸或過氧化氫)；溶劑(如：甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(如：甘露醇或山梨醇)；懸浮劑；界面活性劑或濕潤劑(如：普朗尼、PEG、山梨醇酐酯類、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、三通、胺丁三醇(tromethamine)、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙伯(tyloxapal))；穩定性增進劑(如：蔗糖或山梨醇)；張力增進劑(如：鹼金屬鹵化物，宜為氯化鈉或鉀、甘露醇、山梨醇)；遞送載劑；稀釋劑；賦形劑，及/或藥學佐劑。(Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Edition,A.R.Gennaro,ed.,Mack Publishing Company(1990)。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑，及/或 治療分子係連接一本技藝所已知之半生期延長的載劑。這類載劑包括，但不限於：聚乙二醇和葡萄聚糖。這類載劑描述於，如：美國申請案序號第09/428,082號，及已出版之PCT申請案第WO 99/25044號中，其併為本專利申請案中任何目的之參考資料。
在某些實施態樣中，本技藝之技術熟習人士可根據，如：欲投服之途徑、遞送形式和所需劑量來決定理想之藥學組成物。見，如：Remington's Pharmaceutical Sciences,同上。在某些實施態樣中，這類組成物可影響生理狀態、穩定性，本發明抗體在活體中之釋出速度，和淸除速度。
在某些實施態樣中，在藥學組成物中之主要載劑或載體本質上可為水溶性，或非水溶性。例如：在某些實施態樣中，合適之載劑或載體可為注射用水，生理食鹽水溶液，或人工腦脊髓液，其中可能補充以常用於腸胃道外投服之組成物中的其它物質。在某些實施態樣中，中性之緩衝的生理食鹽水溶液，和與血淸白蛋白混合之生理食鹽水溶液為其它示範性載劑。在某些實施態樣中，藥學組成物含有pH約為7.0-8.5之Tris緩衝液，或pH約為4.0-5.5之醋酸緩衝液，其可另外包含山梨醇，或用於其中之合適替代物。在某些實施態樣中，可製備含有對HGF之專一性結合劑，加上或不加上至少一種其它治療劑的貯存用組成物，此係經由將所選出之具有所需純度的組成物，與隨意之配方作用劑(Remington's Pharmaceutical Sciences,同 上)以凍乾團塊，或水溶液型式混合來製造。再者，在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)的藥學組成物可利用合適之賦形劑(如：蔗糖)，調備成凍乾劑。
在某些實施態樣中，本發明之藥學組成物可選擇於腸胃道外途徑遞送。在某些實施態樣中，該組成物可選擇以吸入方式，或透過消化道途徑(如：口服)來遞送。這類藥學上可接受之組成物的製備方法係在本技藝之技術範圍內。
在某些實施態樣中，配方成分係以可被投服部位接受之濃度存在。在某些實施態樣中，使用緩衝液來將組成物維持在生理pH值，或稍低之pH值，通常係在從約5至8之pH範圍內。
在某些實施態樣中，當考慮經腸胃道外途徑投藥時，治療組成物可為在藥學上可接受之載劑中，含有所需之對HGF的專一性結合劑，加有或不加有其它治療劑的無熱原，腸胃道外途徑可接受的水溶液型式。在某些實施態樣中，用於非經腸胃道之注射的載劑為無菌蒸餾水，其中將一對HGF之專一性結合劑(加有或不加有至少一種其它治療劑)配製成經適當保存之無菌等張溶液。在某些實施態樣中，該製備方法涉及將所需分子與可用來控制產物釋出或持續釋出產物的作用劑(如：可注射之中心體、生物-可食之顆粒、聚合之化合物(如：聚乳酸或聚甘醇酸)、小珠或脂粒一起調配，然後再將其經由狄波注射來遞送。 在某些實施態樣中，亦可使用玻尿酸，且可具有促進在循環系統中持續存在的效果。在某些實施態樣中，可使用可植入之藥物遞送裝置來引入所需分子。
在某些實施態樣中，藥學組成物可配製成用於吸入途徑。在某些實施態樣中，可將對HGF之專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)配製成用於吸入之乾燥粉末。在某些實施態樣中，可將含有對HGF之專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)的吸入溶液與一種用於氣溶膠遞送之推進劑一起配製。在某些實施態樣中，可將溶液霧化。肺部投藥法進一步描寫於PCT申請案第PCT/US94/001875號中，其描述經化學修改之蛋白質的肺部遞送法。
在某些實施態樣中，可考慮經由口服途徑投藥。在某些實施態樣中，可將以此方式投服之對HGF的專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)與那些常用於合成固體劑型(如：錠劑和膠囊)之載體一起調配。在某些實施態樣中，膠囊係設計成其中之調和物的活性部分係在生物可利用性達到最大，而前-系統性降解最小時才於胃腸道中釋出的型式。在某些實施態樣中，可包含至少一種其它治療劑，以促進對HGF之專一性結合劑，及/或其它治療劑的吸收。在某些實施態樣中，亦可使用稀釋劑、調味劑、低熔點蠟、蔬菜油、潤滑劑、懸浮劑、錠劑崩散劑，和結合劑。
在某些實施態樣中，藥學組成物可能涉及將有效量之 對HGF的專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)與非-毒性賦形劑(其適合用於製造錠劑)一起混合。在某些實施態樣中，經由將錠劑溶解在無菌水，或其它合適之載劑中可製備單位-劑型之溶液。在某些實施態樣中，合適之賦形劑包括，但不限於：惰性稀釋劑，如：碳酸鈣、碳酸鈉或重碳酸鹽、乳糖，或磷酸鈣；或結合劑，如：澱粉、凝膠或金合歡膠；或潤滑劑，如：硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。
其它藥學組成物對本技藝中之技術熟習人士而言是明白易知的，包括，但不限於：在持續或經控制遞送之調和物中含有對HGF之專一性結合劑，加上或不加上至少一種其它治療劑。在某些實施態樣中，用於配製多種其它持續或經控制遞送媒介(如：脂粒載體、生物-可食之微粒，或多孔小珠及狄波注射)的技術亦為本技藝中之技術熟習人士所知。見，如：PCT申請案第PCT/US93/00829號，其描述用於遞送藥學組成物之經控制釋出的多孔聚合性微粒。在某些實施態樣中，持續釋出之製劑可包括為成形物體型式(如：薄膜或微膠囊)的半滲透性聚合物基質。持續釋出之基質可包括：聚酯類、水凝膠類、聚交酯類(U.S.3,773,919和EP 058,481)，L-麩胺酸和γ乙基-L-麩胺酸酯之共聚物(Sidman et al.，Biopolymers,22：547-556(1983))，聚(2-羥乙基-異丁烯酸酯)(Langer et al.,J.Biomed.Mater.Res.,15：167-277(1981)和Langer,Chem.Tech.,12：98-105(1982))，伸乙 基乙烯基醋酸酯(Langer et al,同上)，或聚-D(-)-3-羥基丁酸(EP 133,988)。在某些實施態樣中，持續釋出之組成物亦可包括脂粒，其可經由本技藝中數種已知之任一方法來製備。見，如：(Eppstein et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82：3688-3692(1985)；EP 036,676；EP 088,046和EP 143,949)。
用於活體內投服之藥學組成物通常為無菌的。在某些實施態樣中，此可經由通過無菌過濾膜來完成。在某些實施態樣中，當組成物為凍乾型時，利用此方法之消毒過程可在凍乾和重建之前，或之後進行。在某些實施態樣中，用於非經腸胃道途徑投服之組成物可以凍乾型式，或在溶液中貯存。在某些實施態樣中，通常係將非經腸胃道之組成物置於具有無菌入口之容器(如：靜脈內溶液袋，或具有一可被注射針刺穿之塞子的玻璃瓶)中。
在某些實施態樣中，一旦配製好藥學組成物，可將其以溶液、懸浮液、凝膠、乳劑、固體之型式，或以脫水或凍乾粉末之型式貯存在無菌玻璃瓶中。在某些實施態樣中，這類調和物可以即時可用之型式，或以在投服前重建之型式(如：凍乾的)來貯存。
在某些實施態樣中，本發明係針對用於製造單一-劑量投服單位之套組。在某些實施態樣中，該套組可各含有第一個容器(具有乾燥之蛋白質)，和第二個容器(具有水溶性調和物)。在本發明之某些實施態樣中係包括含有單一和多-隔室之預先-充填針筒(如：液體針筒和溶式針 筒(lyosyringe))的套組。
在某些實施態樣中，欲用於治療之含有對HGF之專一性結合劑(加有或不加有至少一種其它治療劑)的藥學組成物的有效量係根據，如：治療內容和對象而定。根據某些實施態樣，本技藝中之技術熟習人士可察知：治療所用之合適劑量水準係部分取決於遞送之分子，所使用之對HGF之專一性結合劑(加有或不加有至少一種其它治療劑)的適應症，投服路徑，患者之尺寸(體重、體表面或器官尺寸)，及/或患者之狀況(年齡和一般健康)。在某些實施態樣中，臨床醫師可決定劑量之力價，並修改投服途徑，以取得理想之療效。在某些實施態樣中，根據上述因子，典型之劑量範圍可從約0.1微克/公斤至約100毫克/公斤，或更多。在某些實施態樣中，劑量範圍可從約0.1微克/公斤至約100毫克/公斤；或1微克/公斤至約100毫克/公斤；或5微克/公斤至約100毫克/公斤。
在某些實施態樣中，給藥頻率需考慮在所使用之調和物中，對HGF之專一性結合劑，及/或任何其它治療劑的藥物動力學變數。在某些實施態樣中，臨床醫師將給予該組成物直到達到可取得所需效果之劑量。因此，在某些實施態樣中，該組成物可在一段時間內以單一劑量，或以二或多個劑量(其可含，或可不含相同量之所需分子)之型式投服，或以連續注入之型式經由植入裝置，或導管投服。本技藝中之技術熟習人士例行對合適劑量做進一步之琢磨，且此為其例行進行之工作範圍。在某些實施態樣中， 合適之劑量可透過使用正確之劑量-反應資料來確認。
在某些實施態樣中，本藥學組成物之投服途徑係根據已知方法，如：口服，經由靜脈內、腹膜內、顱內(主質內)、腦室內、肌肉內、眼內、動脈內、門靜脈內，或病灶內途徑注射；藉由持續釋出系統，或植入裝置進行。在某些實施態樣中，組成物可經由大丸藥注射，或持續注入，或植入裝置來投服。
在某些實施態樣中，組成物可經由植入其上已吸收所需分子，或將所需分子包囊的膜、海綿或其它合適物質來局部投服。在某些實施態樣中，使用植入裝置時，該裝置可被植入任何合適之組織或器官中，且該所需分子可經由注入、定時釋出之大丸藥，或持續投藥來遞送。
在某些實施態樣中，在活體外方法中可能需要使用含有對HGF之專一性結合劑(加上或不加上至少一種其它治療劑)的藥學組成物。在這類情況中，將從患者移出之細胞、組織，及/或器官暴露於含有對HGF之專一性結合劑(加有或不加有至少一種其它治療劑)的藥學組成物，然後，接著將該細胞、組織，及/或器官植回患者體中。
在某些實施態樣中，對HGF之專一性結合劑，及/或任何其它治療劑可經由植入某些已利用，如：本專利申請書中所描述之方法，經過遺傳工程處理，以表現並分泌多肽的細胞來遞送。在某些實施態樣中，這類細胞可為動物或人類細胞，且可為同體、異種，或異體的。在某些實施態樣中，該細胞為永生化之細胞。在某些實施態樣中，為 了降低免疫反應的機會，可將細胞包入囊中，以避免周圍組織之浸潤。在某些實施態樣中，包囊物質通常為可使蛋白質產物釋出，但防止細胞被患者之免疫系統，或其它來自周圍組織之有害因子破壞的生物相容、半-滲透性聚合包圍物，或膜。
下列實施例，包括進行之實驗和所取得之結果係僅用來說明，而非限制本發明。
實施例1
抗-HGF雜交瘤之產生方法
在XenoMouse® 小鼠(艾伯堅尼(Abgenix)，加卅佛利蒙市)(此種小鼠含有人類免疫球蛋白基因)中提升對HGF之抗體。使用三組XenoMouse® 小鼠，第1a、1b和2組，來製造對HGF之抗體，並摘要於表1中。第1a組係由XenoMouse® 品種XMG2之小鼠所組成，其可製造完整之人類IgG抗體。以HGF將第1a組小鼠免疫化。利用Nakamura et al.,Nature 342：440-443(1989)中之序列，藉標準重組技術來製備HGF。
第1b組亦由XenoMouse® 品種XMG2之小鼠所組成，但第1b組小鼠係以已經化學方式結合至T-細胞抗原決定部位(TCE)的HGF來進行免疫接種，該TCE具下列序列：Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Lys Lys Cys(SEQ ID NO.47)。此TCE係利用 Sulpho-SMCC(皮爾斯(Pierce)，目錄編號22322)和二硫代蘇糖醇(費雪(Fisher)科學)，通過TCE之C-端半胱胺酸交叉連接至HGF之N端來結合至HGF上。利用Centricon® 管柱(艾美康(Amicon))從未結合之肽中將所產生之結合的TCE-HGF分離出來。
第2組係由XenoMouse® 品種XMG1之小鼠所組成，其可製造完整之人類IgG1κ 抗體。以上述之結合的TCE-HGF將第2組小鼠免疫化。
根據表1中之計劃，以抗原(HGF或TCE-HGF)注射所有三組之小鼠8次。在最初之免疫接種中，在各小鼠之後腳掌中注射全部為10微克之抗原(每一腳掌5微克)。那些注射液中含有佐劑TiterMax® Gold(史格馬公司，目錄編號T2684)。在第2至7次之注射中，以在佐劑明礬凝膠(Alum Gel)(磷酸鋁凝膠佐劑；Superfos Biosector a/s，由紐澤西卅克利夫頓市，E.M.Sargent Pulp and Chemical Co.配售，目錄編號1452-250)中，全部為5微克之抗原注射每一隻小鼠。每隻小鼠之最後一次注射液中含有全部為10微克之抗原，但不含佐劑。
在第六次注射後二天為各小鼠抽血。藉ELISA分析來自那些抽血之血液樣本，以測定對HGF之抗體的力價。在那些ELISA之分析中，在96-槽分析盤(費雪科學，目錄編號12-565-136)中塗覆之0.1M碳酸鹽緩衝液(pH 9.6)中的HGF。加入血液樣本，並將分析盤在室温中温育2小時。温育後，以淸洗溶液(0.05%在PBS中之吐温20)淸洗分析盤三次，並加入100微克/槽之第二種抗體。第二種抗體為與辣根過氧化酶(南方生物技術，目錄編號9060-05)結合之山羊抗-人類IgGFC 抗體。在室温培育1小時後，淸洗分析盤，並加入100微升/槽之TMB顯影液(BioFX實驗室，目錄編號TMSK-0100-01)，10分鐘後。加入50微升/槽之TMB終止液(BioFX實驗室，目錄編號STPR-0100-01)。在ELISA盤讀計上於450nm波長處讀取吸收。
在最後一次注射後4天殺死小鼠，收集其滴乾之淋巴結，並回收淋巴球。分別累積來自三組小鼠之各小鼠的淋巴球。為了增濃B-細胞之淋巴球樣本，加入抗-CD90磁珠(米爾泰尼生物技術(Miltenyi Biotech)，目錄編號491-01)，以將T-細胞削減，再使淋巴球通過LS+ 管柱(米爾泰尼生物技術，目錄編號424-01)。
利用電細胞融合裝置(吉內特(Genetronic)公司，型號ECM2001)將三種B-細胞增濃之淋巴球樣本各與P3骨髓瘤細胞融合，以製造雜交瘤。將三組融合的雜交瘤株平皿接種於96-槽之盤中，密度為每槽中含有在雜交瘤介 質(成分參見表2)中之1x106 個B-細胞增濃的淋巴球，此雜交瘤介質中含次黃嘌呤-氮雜絲胺酸(史格馬公司)。將雜交瘤株在37℃，15%CO2 中培養14天。
14天後，利用上述分析血液樣本之相同策略，藉ELISA來分析培養上淸液，以偵測是否有對HGF之人類IgG抗體存在。將在ELISA中測試為陽性之培養上淸液進行第二次ELISA分析，以測試是否有人類鏈存在。在第二次ELISA分析中，所使用之條件與第一次ELISA分析相同，但第二種抗體為結合至辣根過氧化酶之山羊抗-人類κ鏈抗體。將在二次ELISA分析中測試為陽性之雜交瘤進一步增殖，以製造5毫升用於玻管中功能測試(此將在實施例8和9中進行討論)之上淸液。測試來自相當於第1a組之小鼠的82個選植株，相當於第1b組之小鼠的42個選植株，和相當於第2組之小鼠的176個選植株的上淸液。
根據那些功能分析之結果，鑑定數種可生產對HGF之抗體的雜交瘤株。使用限制稀釋來從各細胞株中分離出3至6個選殖株。以雜交瘤株之編號(如：1.24)和選殖編號(如：1.24.1)來為選殖株命名。藉由實施例8和9中所討論之功能分析並未偵測出在一特殊株中的不同選殖間有任何差異。將那些分離出之選殖株各自在50-100毫升之雜交瘤介質中增殖，並使其生長至竭盡(也就是細胞存活力小於約10%)。藉ELISA，及實施例8和9中所討論之玻管內功能分析來測定在那些培養上淸液中之對HGF 的抗體的濃度和力價。鑑定出10種具有最高力價之對HGF的抗體的雜交瘤。那些雜交瘤株之命名為1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1，和3.10.1。
實施例2
從雜交瘤製造抗體的方法
利用下列二種不同系統的其中之一，從實施例1中所討論的10種雜交瘤中備抗體：因特果(Integra)燒瓶和射流旋轉燒瓶(sparged spinner)。
因特果燒瓶
讓7種雜交瘤株，2.12.1，1.24.2，1.29.1，1.74.1，1.75.1，1.60.2，和2.40.1，各自分別生長在T75燒瓶中的20毫升HSFM介質(介質成分見表2)中。當T75燒瓶中的雜交瘤接近融合時，將其轉入因特果燒瓶(因特果生物科技，因特果CL11000，目錄編號90 005)中。
因特果燒瓶為一種細胞培養燒瓶，其被一層膜分隔成二個隔室，一個小隔室和一個大隔室。將20-30毫升之分別來自7種雜交瘤株的雜交瘤細胞各以1x106 細胞/毫升之最低細胞密度分別置入在7個因特果燒瓶的小隔室中的因特果介質(因特果介質之成分見表2)內。將因特果介質(1升)單獨置於因特果燒瓶的大隔室中。分隔二個隔室之膜可使小分子量營養滲透通過，但雜交瘤細胞和由那些細胞所製造之抗體則無法滲透通過。因此，雜交瘤細胞和由那些細胞所製造之抗體維持在小隔室中。
一週後，從該7個因特果燒瓶的二個隔室中各自移除介質，並以新鮮因特果介質取代之。將從7個小隔室收集到的介質分別保存。在生長第二週後，再次從小隔室中收 集介質。將從各雜交瘤株收集到之第1週介質與從相同雜交瘤株收集到之第2週介質合併在一起。將收集到之來自7個雜交瘤株的7種介質樣本加以離心，以去除細胞和碎片(在3000rpm離心15分鐘)，並將所產生之上淸液進行過濾(0.22微米)。
射流旋轉燒瓶(3升)
將三種雜交瘤株，3.10.1、2.4.4和2.12.1分別生長在T75燒瓶中之20毫升HSFM介質中。當雜交瘤達到足夠的細胞密度時，將其轉移至T175燒瓶中。同樣地，當T175燒瓶中之雜交瘤達到足夠的細胞密度時，將其轉移至100毫升之旋轉燒瓶中，然後轉移至500毫升之旋轉燒瓶中，然後轉移至1升之旋轉燒瓶中。當在1升旋轉燒瓶中之細胞達到足夠的細胞密度時，將其轉移至3升之噴灑過的射流旋轉燒瓶(貝爾可(Bellco)生物技術，目錄編號1965-300，帶有側臂裝配，目錄編號1965-30003)中。
該3升之射流旋轉燒瓶為一種玻璃容器，其中係以一由磁臺控制之推進器來混合培養。將該旋轉瓶連接至氣體管線，以提供5%CO2 和空氣。
雜交瘤3.10.1
將在HSFM介質中之來自雜交瘤株3.10.1的雜交瘤細胞接種入2個3升大之射流旋轉燒瓶中，而這二個射流 燒瓶所需特別注意之其它生長條件摘述於表3中。
讓培養生長15天，當藉由錐蟲藍染色排除法測定出生存力低於20%時，則收成該培養。收成步驟係包括在7000rpm離心15分鐘，再接著將所產生之上淸液通過0.22微米濾器過濾。藉由蛋白質A HPLC測量在最終收成樣本中所存在之蛋白質量，以測定生產力，結果記錄於表 3中。
雜交瘤2.4.4
將在HSFM介質中之來自雜交瘤株2.4.4的雜交瘤細胞接種入5個3升大之射流旋轉燒瓶中，而這5個射流燒瓶所需注意之其它生長條件摘述於表4中。
依表4之指示讓培養生長7、8或10天，並依上述，當細胞生存力低於20%時，則收成該培養。
雜交瘤2.12.1
將在HSFM介質中之來自雜交瘤株2.12.1的雜交瘤細胞接種入6個3升大之射流旋轉燒瓶中，而這6個射流燒瓶所需注意之其它生長條件摘述於表5中。
依表5之指示讓培養生長7或10天，並依上述，當細胞生存力低於20%時，則收成該培養。
實施例3
抗體重鏈和輕鏈之選殖與序列分析
A.輕鏈之選殖
依實施例1之討論鑑定出10種表現出對HGF之單株抗體的雜交瘤(1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1)。利用TRIzol® 試劑(因維特金，加卅卡斯巴市)，從這10種雜交瘤之每一種中分離出總體RNA。修改10種雜交瘤之總體RNA製品的5’端，以使其適合利用GeneRacer® 套組(因維特金)之cDNA端之5’快速增數反應(5’ Rapid Amplification of cDNA Ends)(RACE)。然後，將10種5’-修改之RNA製品用於10個分別之RACE反應中，其各使用一具有一延伸接合子(5'-GGC CGG ATA GGC CTC CAN NNN NNT-3')(SEQ ID NO：48)的任意引物來產生10種cDNA分子。
然後，將10種cDNA分子在分別之聚合酶鏈反應(PCR)中增數，以產生10種增數之輕鏈序列。在此各反應中，正向引物為正向GeneRacerTM 套式引物(5' GGA CAC TGA CAT GGA CTG AAG GAG TA-3')(SEQ ID NO：49)。逆向引物(5'-GGG GTC AGG CTG GAA CTG AGG-3')(SEQ ID NO：50)係設計為結合至與κ輕鏈 互補之序列。
然後，將10種增數之κ輕鏈序列的各分別連接至各別之pCR4-TOPO質體(因維特金)。將10種所產生之質體(各含有10種κ輕鏈序列的其中一種)分別在細菌中擴增，並各分析數個選殖株的序列。使用那些序列來設計PCR引物，以依下述擴增來自選殖之質體的10種κ輕鏈開放閱讀框構。
10組PCR之各引物組包含一5’-引物和3’-引物。各5’-引物含有一與特殊κ輕鏈序列之胺基端序列互補的部分、一最優化之Kozak序列，和一或多個限制部位。例如：在以基本上從雜交瘤3.10.1中衍生出之質體進行的反應中所使用的5’-引物序列為：。各PCRs之3’-引物含有一與特殊κ輕鏈序列之羧基端互補的部分，包括終止密碼子和一限制部位。例如：在以基本上從雜交瘤3.10.1中衍生出之質體進行的反應中所使用的3’-引物序列為：
將分別之引物組用於相對應之選殖質體的PCR反應中，以擴增該10種κ輕鏈編碼區序列。將來自那些反應 的10種增數產物分別進行凝膠分離，並利用QIAquick® 凝膠萃取套組(目錄編號28704，加卅華倫西亞市奎爾金公司)進行純化。然後，將純化之產物各以適當之限制酶切出，以取得不含質體之κ輕鏈編碼區序列。例如，以XbaI和SalI切出相對應於雜交瘤3.10.1的純化產物(該部位係在選殖之質體進行PCR增數期間由引物引入)。將所產生之經限制酶分解出的κ輕鏈編碼區序列再分別進行凝膠分離，並利用QIAquick® 凝膠萃取套組(目錄編號28704，加卅華倫西亞市奎爾金公司)進行純化。
然後，將10種已純化之經限制酶分解的κ輕鏈編碼區序列各自分別接合入哺乳動物表現載體，pDSRα 20(WO 90/14363)中，以創造相對應於該10種原始雜交瘤的10種分別之κ輕鏈表現載體。然後，決定該10種κ輕鏈表現載體插入子之序列。含有基本上從雜交瘤3.10.1衍生出之κ輕鏈編碼區的pDSRα 20表現載體(pDSRα 20：3.10.1)確定含有5473個鹼基對，包括一719個鹼基對的PCR片段，其編碼3.10.1 κ輕鏈的235個胺基酸殘質(包括20個胺基酸之κ輕鏈訊號序列)。該表現載體含有如表6中所描述之7個功能區。
B.重鏈之選殖
利用如上述實施例3A中所討論之用於輕鏈的相同方法來選殖來自該10種雜交瘤之對HGF的抗體的重鏈可變區。從該10種雜交瘤之每一種中分離的總體RNA，修改5’端以適合RACE，並依上述實施例3之描述來產生cDNA分子。
然後，依實施例3A中關於輕鏈之描述，將10種cDNA分子在分別之PCR中增數，但逆向引物(5'-GGA CAC TGA CAT GGA CTG AAG GAG TA-3'(SEQ ID NO：53))係設計為結合至重鏈可變區之互補序列。正向引物仍為正向GeneRacerTM 套式引物(5' GGA CAC TGA CAT GGA CTG AAG GAG TA-3)(SEQ ID NO：49)。
然後，將10種增數之重鏈可變區序列各分別連接入分別之pCR4-TOPO質體內。將10種所產生之質體(各含有10種重鏈可變區序列之一)分別在細菌中擴增，並依上述實施例3A中用於分析輕鏈的描述各分析數個選殖株的序列。使用那些序列來設計PCR引物，以依下述擴增來自10種選殖之質體的重鏈可變區。
利用上述實施例3A中所討論之用於輕鏈的相同策略來設計該10組PCR之每一組的引物組。各5’-引物含有一與特殊重鏈可變區序列之胺基端序列互補的部分、一最優化之Kozak序列，和一或多個限制部位。例如：用於擴增基本上從雜交瘤3.10.1中衍生出之重鏈可變區的5’-引物序列為：
該10組PCR之每一組的3’-引物含有一與該特殊重鏈可變區序列之一致序列的羧基端互補的部分，包括終止密碼子和一限制部位。例如：用於擴增基本上從雜交瘤3.10.1中衍生出之重鏈可變區的3’-引物序列為：
將分別之引物組用於相對應之選殖質體的PCR反應中，以擴增該10種重鏈可變區序列。將來自那些反應的10種增數產物分別進行凝膠分離，並利用QIAquick® 凝膠萃取套組進行純化，然後，依實施例3A關於輕鏈之描述，以適當之限制酶切開。所產生之經限制酶分解出的重鏈可變區序列再分別進行凝膠分離，並依實施例3A之描述利用QIAquick® 凝膠萃取套組進行純化。
然後，將10種已純化之經限制酶分解的重鏈可變區序列中的3種(基本上從雜交瘤3.10.1、1.24.1和2.4.4衍生者)分別接合入哺乳動物表現載體pDSRα 20：hIgGCH 中，以創造3種重鏈IgG1表現載體。pDSRα 20：hIgGCH 表現載體與pDSRα 20相同，但其亦含有IgG1恆定區序列。pDSRα 20：hIgGCH 表現載體摘述於表7中。
分析該3種IgG1表現載體插入子之重鏈可變區的序列。表8中摘述含有基本上從雜交瘤3.10.1(pDSRα 20：hIgGCH ：3.10.1)衍生出之重鏈可變區的pDSRα 20：hIgGCH 表現載體。
將10種已純化之重鏈可變區序列各自分別接合入pDSRα 20哺乳動物表現載體中，加上編碼IgG2恆定區之序列，以創造10種IgG2表現載體。該10種所產生之IgG2表現載體(命名為pDSRα 20：hIgG2：雜交瘤#)各含有編碼IgG2之恆定區的序列，及10種重鏈可變區序列的其中之一。分析該10種重鏈可變區序列插入子之序列，以確認其含有來自pCR4-TOPO選殖株之選殖質體內的相同重鏈可變區序列。含有基本上從雜交瘤2.12.1(pDSRα 20：hIgG2：2.12.1)衍生出之重鏈可變區的pDSRα 20：hIgG2表現載體摘述於表9中。
κ輕鏈可變區之cDNA序列(SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13、15、17和19)、κ輕鏈恆定區(SEQ ID NO：21)、重鏈可變區(SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14、16、18和20)，以及IgG1和IgG2重鏈恆定區(SEQ ID NOs：22和23)顯示於第3圖中。
決定從那些cDNA序列所各預測得之多肽序列。κ輕鏈可變區之預測的多肽序列(SEQ ID NOs：24、26、28、30、32、34、36、38、40和42)、κ輕鏈恆定區之預測的序列(SEQ ID NO：44)、重鏈可變區之預測的多肽序列(SEQ IDNOs：25、27、29、31、33、35、37、39、41和43)，及IgG1和IgG2重鏈恆定區之預測的多肽序列(SEQ ID NOs：45和46)顯示於第4圖中。
根據序列之資料可測定各重鏈或輕鏈可變區係從何種系基因衍生得來。在第1、2、3，和4圖中，種系基因之鑑定證明係表示在相對應之雜交瘤株的旁邊。進一步分析序列之相關性(第1B和2B圖)可產生第1A圖(κ輕鏈可變區)和第2A圖(重鏈可變區)中所顯示之樹圖。
實施例4
293T細胞中之過渡性表現
在10種分別之共同-轉染反應中，以實施例3A中所描述之含有κ輕鏈序列的pDSRα 20表現載體(輕鏈載體)，和實施例3B中所描述之含有重鏈序列的pDSRα 20表現載體(重鏈載體)來共同-轉染393T細胞。在那10 種分別之共同-轉染反應中，以基本上從實施例1所討論之雜交瘤的其中一種衍生得到的輕鏈載體，和重鏈載體來共同-轉染393T細胞。具體地說，為了共同轉染基本上從雜交瘤3.10.1衍生得到的載體，使用含有IgG1(pDSRα 20：hIgGCH ：3.10.1)的重鏈載體。為了共同轉染基本上從其它9種雜交瘤衍生得到的載體，使用含有IgG2(pDSRα 20：hIgG2：雜交瘤#)的重鏈載體。共同-轉染反應係利用Fugene 6或X-TremeGene RO-1539(二者均來自印第安那卅印第安那波里市，羅氏(Roche)分子生物化學公司)，依照製造者之指示進行。
共同-轉染首先係利用黏附在標準滚筒瓶中之293T細胞進行。將在DMEM(含有5%胎牛血淸(FSH)(海克隆，目錄編號SH 30070.03)，1X非必須胺基酸(史格馬，目錄編號M 7145)、1X青黴素/鏈黴素(史格馬，目錄編號P 7539(10,000 U/毫升青黴素/鏈黴素))，和1X丙酮酸鈉(因維特金，加卅卡斯巴市))中之4x107 至5x107 細胞/滾筒接種入滾筒瓶中。當細胞達到60-70%融合時，將基本上從一特殊雜交瘤所衍生的重鏈載體，和輕鏈載體共同-轉染入細胞中24小時，然後，將介質改為不含血淸之相同介質。收集不含血淸之介質，並在轉染48和96小時後，以新鮮之不含血淸的介質替換二次，以產生全部體積為1.25升之不含血淸的介質。
利用已適應不含血淸之293T細胞(此細胞係在上述所討論之不含血淸的相同介質內的懸浮液中)重複進行 10種分別之共同-轉染反應。將相對應於一特殊雜交瘤之重鏈載體和輕載體共同-轉染入細胞中，其培養體積為500毫升。將已轉染之細胞培養7天，然後，收集不含血淸之條件介質。
實施例5
CHO細胞之抗體表現和選殖
使用缺乏DHFR之中國大頰鼠卵巢細胞(CHOd- )來產生對HCF之重組抗體的穩定表現。在10種分別之共同-轉染反應中，依實施例4之討論，以基本上從實施例1所討論之其中一種雜交瘤衍生得到的重鏈載體和輕鏈載體來共同-轉染CHOd- 細胞。利用標準之磷酸鈣方法來達成共同-轉染反應。
將來自該10種共同-轉染組之各轉染細胞分別生長在含高葡萄糖、缺少次黃嘌呤-胸腺核苷，帶有5%透析之胎牛血淸的DMEM選擇介質(吉布可/BRL，加卅卡斯巴市，目錄編號11965)中。這類缺少次黃嘌呤-胸腺核苷之介質係用來長成可表現重組之DHFR酶的細胞。利用標準之ELISA分析篩選來自各長成之轉染株的介質，以偵測是否有人類抗體存在。
實施例6
CHOd- 殖株中，對HGF之抗體的表現
將實施例5中所描述之10種不同的穩定CHOd- 選殖 株(各個不同選殖株表現該10種對HGF之抗體的其中之一)的各6個樣本分別生長於生長介質中。該生長介質為具有高葡萄糖(吉布可/BRL，加卅卡斯巴市，目錄編號11965)之DMEM，其中並補充有5%透析之FBS、非必須胺基酸和L-麩胺醯胺(生命技術，加卅卡斯巴市)。讓細胞在37℃，5%CO2 中生長。
當CHOd- 選殖株達到生長之6-槽階段時，將10nM胺基甲基葉酸加入生長介質中，以擴增抗體之表現。當細胞達到融合後，將其移至100毫米培養皿中。胺基甲基葉酸之濃度從10nM至20nM，至50nM，至100nM，至250nM，至500nM，至1μM，至2μ M，至4μ M，逐步增加，最後達10μ M。將細胞在各濃度至少維持一週，直到其足夠適應指定濃度之胺基甲基葉酸(由目視測定)。
在各胺基甲基葉酸濃度下，分析來自各選殖株之條件介質，以測定對HGF之各抗體的表現水準。藉由標準ELISA和時間-解析螢光(TRF)三明治分析，以半-定量方式測量對HGF之抗體結合至已塗覆人類HGF之分析盤的情況來分析該介質。
依下述，讓具有最高抗體表現水準之胺基甲基葉酸-擴增選殖株適應在不含血淸之生產介質中生長。以胰蛋白酶將選殖株從培養瓶中移出，離心，並以4x105 細胞/毫升之密度將其重新懸浮在250毫升之固體蓋搖動燒瓶內之不含血淸的生產介質50毫升中。將培養在37℃之温室中培養，並在約125RPM攪拌之。每3-4天將細胞離心下來 ，並以新鮮之不含血淸的生產介質將其稀釋成4x105 細胞/毫升。每一培養約需加入10次新鮮、不含血淸的生產介質，以完成此適應相。
實施例7
從重組細胞之條件介質中純化抗體
收集來自實施例1中所描述之雜交瘤、來自實施例4中所描述之過渡表現293T細胞、來自實施例5中所描述之穩定轉染株，以及來自實施例6中所描述之胺基甲基葉酸-擴增的選殖株的介質。依照製造者之指示，利用YM30螺旋剝離筒匣(spiral wound cartridge)(米厘波(Milipore)，麻卅貝德福市，目錄編號S10Y30)將來自各來源之介質分別濃縮約10倍。藉由高效能液態色層分析法(HPLC)來評估在各濃縮介質樣本中所存在之抗體濃度。
利用重組蛋白質A瓊脂糖(Protein A Sepharose)(rProA)(艾默森公司，紐澤西卅匹斯凱特威市，目錄編號17-1279-03)，藉由親和力樹脂純化作用從濃縮之介質樣本中純化抗體。先以磷酸鹽緩衝之生理食鹽水(PBS)淸洗rProA 4次。最後一次淸洗後，經由混合等體積之rProA和PBS來製造在PBS中之淸洗的rProA的漿液。將rProA漿液加入各濃縮介質樣本中，其量為：5微克介質樣本中之抗體約使用1微升rProA漿液。但任何介質樣本中均不可使用少於50微升之rProA漿液。將所產生之介 質/漿液樣本在4℃培育一整夜，並一邊搖動。然後，將介質/漿液樣本離心，以沈澱出rProA小丸。丟棄含有未結合之蛋白質的上淸液分液。將rProA小丸各分別再懸浮於0.5毫升PBS中。然後，將再懸浮之rProA樣本轉移至0.45微米Spin-X管(CoStar，紐約卅康寧，目錄編號8162)中，並離心去除PBS。然後，以每次0.5毫升之PBS淸洗在Spin-X管中之rProA三次。
經由加入1.5體積之0.1M甘胺酸，pH2.7，並在室温培育10分鐘來將抗體分液從Spin-X管內之rProA中洗提出來。然後，將Spin-X管離心，並分別收集來自各Spin-X管之洗提液。重複洗提，並將來自各Spin-X管的二次洗提液累積在一起。以1/25體積之1.0M Tris，pH9.2中和累積的洗提液。然後，將各樣本通過新的Spin-X管過濾，以去除顆粒。
利用人類IgG作為標準，藉由布雷福(Bradford)分析來決定最終製劑的蛋白質濃度。為了評估純度。將各最終製劑的樣本分別在分開之SDS-PAGE凝膠道上移行，以考麻薩(coomassie)染色，並經由目視檢查之。
實施例8
決定抗體結合至HGF的特徵
A.親和力之測量
根據製造者之指示，利用BIAcore® 3000(拜爾可(Biocore)公司，紐澤西州匹斯凱特威市)分析實施例6 中所描述之6種對HGF之抗體(那些基本上從雜交瘤3.10.1、2.4.4、2.12.1、1.29.1、1.75.1，和1.74.3衍生者)的親和力。用於那些分析之移行緩衝液為帶有0.005%P20界面活性劑(拜爾可公司，紐澤西州匹斯凱特威市)的PBS。利用胺偶合套組(拜爾可(Biocore)公司，紐澤西州匹斯凱特威市)，根據製造者之指示，經由一級胺基團將重組蛋白質G(Recombinant Protein G)(皮爾斯(Pierce)公司，伊利諾州洛克福市)經由固定在一研究級CM5感應片(拜爾可公司，紐澤西州匹斯凱特威市)上。
根據製造者之指示，在6個分別之樣本中，將該6種對HGF之抗體各約200個共振單位(RU)分別連接至固定的蛋白質G上。將含有不同濃度(0-100nM)之人類HGF的樣本，以50微升/分之流速注入結合之抗體表面上3分鐘。利用BIA估算3.1電腦程式(拜爾可公司，紐澤西州匹斯凱特威市)來測定抗體結合動力學變數，包括ka (結合速率常數)、kd (離解速率常數)，及KD( 離解平衡常數)。較低之離解平衡常數表示抗體對HGF之親和力較大。其資料呈現於第6A圖中。
利用平衡結合方法測量4種對HGF之抗體(那些基本上從雜交瘤2.4.4、1.29.1、1.74.2和2.12.1衍生者)的個別KD 值。此方法係利用帶有0.005%P20界面活性劑(拜爾可公司，紐澤西州匹斯凱特威市)的PBS作為移行緩衝液，以BIAcore® 3000(拜爾可公司，紐澤西州匹 斯凱特威市)來進行。利用胺偶合套組(拜爾可(Biocore)公司，紐澤西州匹斯凱特威市)，根據製造者之指示，將4種對HGF之抗體經由一級胺基團分別固定在研究級之CM5感應片(拜爾可公司，紐澤西州匹斯凱特威市)上。
在分別之分析中，將在一濃度範圍(從0.01nM至50nM)內之4種對HGF的抗體各分別與二種在PBS(帶有0.005%P-20和0.1毫克/毫升BSA)中之不同濃度(0.05nM和1nM)的人類HGF在室温中培育至少6小時。然後，將那些樣本各注入CM5感應片(其上已固定該相同之對HGF的抗體)之表面上。所得之結合訊號與溶液中之游離HGF成比例。利用雙-曲線 一-部位同質結合模型(KinExA軟體，沙比待(Sapidyne)儀器公司，印弟安那州波伊斯市)，從競爭曲線之非線性回歸分析中取得離解平衡常數(KD )。那些離解平衡常數值呈現於第6B圖中。
B.對HGF之抗體的結合專一性
將人類HGF或者是表現在CHO細胞中，或者是從R&D系統(R&D系統，明尼蘇達州明尼艾波里市，目錄編號294-HG-005)購得。重組之老鼠HGF係利用Liu et al.,Molecular cloning and characterization of cDNA encoding mouse hepatocyte growth factor,Biochim Biophys Acta.16：1216(2)：299-300(1993)中的序 列來製備。重組之老鼠HGF係經由利用桿狀病毒載體表現在昆蟲細胞中，或經由表現在293T細胞中來取得。在任一種情況中，老鼠HGF係藉由硫酸肝素親和力色層分析法來進行純化。
每一種人類和老鼠HGF之製品均顯示出其為生物活性的。人類HGF可在人類PC3細胞(ATCC曼那薩斯(Manassas)，VA # CRL 1435)和老鼠4T1細胞(ATCC曼那薩斯，VA # CRL 2531)中誘導出劑量-倚賴性之人類Met磷酸化作用。老鼠HGF可在老鼠4T1細胞中誘導出Met磷酸化作用，但在人類PC3細胞中則不。
將人類HGF和老鼠HGF在分開之SDS PAGE凝膠道上移行。將人類HGF和老鼠HGF各分別以100毫微克/道和10毫微克/道進行移行實驗。一些凝膠係在非-還原條件下進行移行，其它分別之凝膠則在利用β-巰乙醇之還原條件下進行移行。將在SDS PAGE凝膠中之人類HGF和老鼠HGF轉移至硝基纖維素膜上。將那些膜分別與實施例6中所描述之10種對HGF的抗體的其中一種一起培育。將10種對HGF之抗體各分別在還原條件下與來自含人類HGF和老鼠HGF之凝膠的硝基纖維素膜一起培育，以及在非-還原條件下與來自含人類HGF和老鼠HGF之凝膠的硝基纖維素膜一起培育。然後，將膜與連接HRP(皮爾斯公司，伊利諾州洛克福市，目錄編號31412)之山羊抗-人類IgG抗體一起培育。依照製造者之指示，藉由電發光(ECLTM ；Amersham Pharmacia Biotech,Piscataway, NJ,Cat.# RPN2106)化學偵察來自連接HRR之山羊 抗-人類IgG抗體的訊號。
第7圖顯示實施例6中所描述之測試該10種對HGF之抗體的凝膠圖。左邊之表板顯示在非還原條件下，測試對抗100毫微克人類HGF(第1道)、10毫微克人類HGF(第2道)、100毫微克老鼠HGF(第3道)，和10毫微克老鼠HGF(第4道)之各抗體的凝膠圖。右邊之表板顯示在還原條件下，測試對抗100毫微克人類HGF(第5道)、10毫微克人類HGF(第6道)、100毫微克老鼠HGF(第7道)，和10毫微克老鼠HGF(第8道)之各抗體的凝膠圖。在非還原條件下，各測試之對HGF的抗體結合至人類HGF(第1和第2道)。在非還原條件下，所有測試之對HGF的抗體均不顯著結合老鼠HGF(第3和第4道)，或者，在還原條件下，所有測試之對HGF的抗體均不顯著結合人類HGF(第5和第6道)，或老鼠HGF(第7和第8道)。
C.利用融合蛋白質製作抗原決定部位圖輿
利用標準之分子技術建構其中含有鄰近載體pCEP4(因維特金，加卅卡斯巴市，目錄編號V044-50)之多選殖部位的編碼雞卵白素之cDNA序列的哺乳動物表現載體(第9A圖)。該載體包括雞卵白素訊號序列(第9B圖)，以分泌接著表現出之融合蛋白質。表現載體係經由將編碼特殊之靶的蛋白質的序列插入融合蛋白質表現載體之多 選殖部位來建構。所產生之融合構造物各編碼一在靶的蛋白質之N-端的卵白素蛋白質。
利用此技術，製備含有融合至下列靶的蛋白質之卵白素的融合蛋白質：全長之人類蛋白質；d5 HGF，其為天然產生之人類HGF的基因剪接變異體(Rubin,J.et al.PNAS 88：415-419(1991))；全長之老鼠HGF；嵌合體#1，其含有人類HGF之N-端部分(胺基酸32-505)和老鼠HGF之C-端部分(胺基酸508-728)；嵌合體#2，其含有老鼠HGF之N-端部分(胺基酸33-506)和人類HGF之C-端部分(胺基酸506-728)；和嵌合體#3，其含有人類HGF之N-端部分(胺基酸32-582)和老鼠HGF之C-端部分(胺基酸583-728)。
融合蛋白質之圖解表示顯示於第10圖中。HGF之N-端功能區塊含有4個由標示K1-K4之方格代表的丹麥餡餅(kringle)功能區塊。HGF之C-端功能區塊與絲胺酸蛋白酶同源。該功能區塊由棒形條代表。開放之方格和實體棒形條表示人類HGF序列。有陰影之方格和條紋棒形條表示老鼠序列。
根據製造者之指示，利用脂染胺(Lipofectamine)(吉布可BRL公司，加卅卡斯巴市，目錄編號18324)，以一種個別之融合蛋白質表現載體分別轉染細胞，以使個別之融合蛋白質過渡表現在293T細胞中。在轉染後約48小時收集並分析條件化之介質。
在分別之樣本中，將實施例6中所描述之10種對 HGF的抗體中的5種(那些基本上從雜交瘤2.4.4、1.74.1、1.75.1、3.10.1和2.12.1所衍生者)分別與含有各下列靶的蛋白質的融合蛋白質一起培育：全長之人類HGF、d5 HGF和老鼠HGF。培育後，將各樣本中之融合蛋白質分別利用經生物素塗覆之小珠(史芬洛泰(Spherotech)公司，伊利諾州自由丘市，目錄編號TP-60-5)捕捉。加入經FITC標示之抗-卵白素抗體(維克多(Vector)實驗室，加州柏林根市，目錄編號SP-2040)來標示所產生之小珠-蛋白質複合物。加入經藻紅質(PE)標示之山羊抗-人類F(ab’)2抗體(南方生物技術聯合公司，阿拉巴馬州伯明罕市，目錄編號2043-09)來決定是否有對HGF之抗體的存在。
然後，將那些樣本進行螢光活化之細胞分類器(FACS)分析。在貝克通 狄金森 生物科學(Becton Dickinson Bioscience)FACScan(BD，紐澤西州富蘭克林湖市)上偵測以FITC(其指出是否有卵白素存在)，及/或PE(其指出是否有對HGF的抗體存在)標示之小珠複合物。該5種測試之對HGF的抗體的FACS散射繪圖呈現在第8圖中。
在分別之樣本中，將實施例6中所描述之10種對HGF的抗體中的2種(那些基本上從雜交瘤2.12.1和2.4.4所衍生者)分別與含有各下列靶的蛋白質的融合蛋白質一起培育：全長之人類HGF、d5 HGF和老鼠HGF、嵌合體#1、嵌合體#2和嵌合體#3。依上述，將那些樣本 進行FACS分析。
那些結合實驗之結果摘述於第10A圖中，計畫圖解之右邊。抗體2.12.1和2.4.4均未結合至嵌合體#1。抗體2.12.1和2.4.4二者均結合至嵌合體#2。抗體2.4.4結合至嵌合體#3。抗體2.12.1未結合至嵌合體#3。
D.利用融合蛋白質進一步製作抗原決定部位圖輿
依上述實施例8C中之描述建構其它人類/老鼠嵌合體，並進行分析(第10B圖)，以提供其它關於抗體2.4.4和2.12.1所結合之HGF的抗原決定部位的資料。用來產生嵌合體的引物顯示於表10中。
第10B圖顯示所創造之用於研究的老鼠和人類HGF 嵌合分子的圖解圖形，圖形右手邊所指示的為抗體2.12.1和2.4.4結合至各嵌合體的行為。在本研究中嵌合體#1-3等同於實施例8C和第10A圖中之嵌合體#1-3。嵌合體#4-6將老鼠HGF之N-端增加量併入另一完全的人類HGF之分子中。嵌合體#7將老鼠HGF之胺基酸507-585用於另一人類HGF分子中，嵌合體#8將人類HGF之胺基酸507-585用於另一老鼠HGF分子中。嵌合體#9係從老鼠HGF之胺基酸1-585和人類HGF之胺基酸586-737建構出。
依實施例8C中之描述分析抗體2.4.4和2.12.1對嵌合蛋白質之結合情形。將抗體2.4.4或抗體2.12.1與一種融合蛋白質一起培育後，利用經生物素塗覆之小珠(史芬洛泰公司，伊利諾州自由丘市，目錄編號TP-60-5)分別捕捉在各樣本中之融合蛋白質。加入經FITC標示之抗-卵白素抗體(維克多實驗室，加州柏林根市，目錄編號SP-2040)以標示所產生之小珠-蛋白質複合物。加入經藻紅質(PE)標示之山羊抗-人類F(ab’)2抗體(南方生物技術聯合公司，阿拉巴馬州伯明罕市，目錄編號2043-09)以決定是否有對HGF之抗體的存在。然後，將那些樣本進行螢光活化細胞分類器(FACS)分析。在貝克通 狄金森 生物科學FACScan(BD，紐澤西州富蘭克林湖市)上偵測以FITC(其指出是否有卵白素存在)，及/或PE(其指出是否有對HGF的抗體存在)標示之小珠複合物。在某些情況中，利用FITC將表現標準化後，以PE標示結合抗體後進行單-色FACS分析。此方法可增加分析之 敏感度，並協助測量與表現水準並非很高之構造物結合的情況。
如第10B圖中所示，抗體2.4.4和2.12.1二者均結合至嵌合體#8(第10B圖)(含有人類HGF之胺基酸507-585)。這些結果提出該區含有直接或間接涉及抗體2.4.4和2.12.1結合至HGF的殘質。含有在此相同507-585區中之老鼠序列的嵌合體(嵌合體7和9)不會結合抗體2.12.1和2.4.4。雖然有人類HGF之胺基酸507-585存在，嵌合體3不會結合抗體2.12.1，但會結合抗體2.4.4。
為了取得人類HGF之胺基酸507-585(GWMVSLRYRNKHI CGGSLIKESWVLTARQCFPSR-DLKDYEAWLGIHDVHGRGDEKCKQVLNVSQLVYGPEGSDL VLM(SEQ ID NO：123)(見第10D圖))的進一步資料，利用表10中所列之引物創造含有特殊之單點突變的突變種HGF(第10C圖)，此突變可將胺基酸507-585區內之人類殘質改變成老鼠殘質。建構人類HGF-卵白素融合蛋白質，其含有從人類HGF序列至老鼠HGF序列(Genebank編號分別為NM_000601和NM_010427)之5種單一，非保留性胺基酸變化。亦創造二種其它構造物，其中一種構造物係包含在人類HGF序列中插入二個胺基酸，另一包含從老鼠HGF序列删除二個胺基酸(第10C圖)。
依實施例8C和8D之描述，將這些構造物表現出，並進行結合分析。將抗體2.4.4或抗體2.12.1與一種突變 蛋白質培育後，利用經生物素塗覆之小珠(史芬洛泰公司，伊利諾州自由丘市，目錄編號TP-60-5)分別捕捉在各樣本中之突變蛋白質。加入經FITC標示之抗-卵白素抗體(維克多實驗室，加州柏林根市，目錄編號SP-2040)來標示所產生之小珠-蛋白質複合物。加入經藻紅質(PE)標示之山羊抗-人類F(ab’)2抗體(南方生物技術聯合公司，阿拉巴馬州伯明罕市，目錄編號2043-09)來決定是否有對HGF之抗體的存在。然後，將那些樣本進行螢光活化細胞分類器(FACS)分析。在貝克通 狄金森 生物科學FACScan(BD，紐澤西州富蘭克林湖市)上偵測以FITC(其指出是否有卵白素存在)，及/或PE(其指出是否有對HGF的抗體存在)標示之小珠複合物。在某些情況中，利用FITC將表現常態化後，在PE標示結合抗體後進行單-色FACS分析。此方法可增加分析之敏感度，並協助測量與表現水準並非很高之構造物結合的情況。
結果發現在胺基酸561之突變會中斷突變之人類HGF和抗體2.12.1間，以及突變之人類HGF和抗體2.4.4間的結合，但胺基酸592、601或647處的突變則不會。在胺基酸555處之突變會中斷抗體2.12.1之結合，但不會干擾抗體2.4.4之結合。插入該二個老鼠胺基酸540N和541K(不存在於人類序列中)(見第10D圖)會中斷結合至任一抗體。從老鼠HGF序列删除那二個胺基酸不會使任一抗體結合至老鼠HGF上。
E.藉由蛋白酶保護分析來製作抗原決定部位圖輿
進行互補性古典蛋白酶保護分析，以鑑定抗體2.12.1所結合之HGF抗原決定部位。見，Yiand Skalka,Mapping Epitopes of Monoclonal Antibodies Against HIV-1 Integrase with Limited Proteolysis and Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry,Biopolymers(Peptide Science)55：3-8-318(2000)。將人類HGF(30微克/10微升)與抗體2.12.1(40微克/4微升)混合在200微升之0.1MTris緩衝液，pH7.5中，並在冰上培育30分鐘。在37℃以胰蛋白酶(1微克)分解1小時。將已分解之物質進行逆相HPLC，以將肽分離。同時，將人類HGF單獨(無抗體2.12.1)以胰蛋白酶分解。將HPLC管柱(Vydac C18，2.1x150毫米，維達克(Vidac)公司，加州海斯培利市)在0.1%三氟醋酸(TFA)中操作，洗提梯度為在0.1%TFA中之2-35%乙腈。以HP 1090 HPLC裝置(惠普，帕羅歐圖)記錄洗提出之肽的UV圖形。比較二種HPLC圖輿，以檢查經由結合抗體2.12.1而受到保護之肽(第11A圖)。
接著進行N-端序列分析和質譜分析，以鑑定該特殊之受保護的肽。在ABI-Procise蛋白質序列分析儀(應用生物系統，加卅福斯特市)上，藉艾德曼(Edman)降解來進行N-端肽之序列分析。藉由將在聯結之HPLC裝置上的持留時間與胺基酸標準進行比較來鑑定各循環中之胺 基酸。在Perceptive Voyager質譜儀(應用生物系統，麻卅弗明漢市)上進行受保護之片段的質譜分析。利用基質，4-羥基氰基桂皮酸(HCCA)或芥酸來進行基質-輔助之雷射去吸附離子化反應(MALDI)。經由相對於已知標準(氧化之胰島素β 鏈和細胞色素C)進行校正，來測定分子量。
人類HGF之α 次單位展延在胺基酸32-494，而β 次單位展延在胺基酸495-728(人類HGF見Swiss-Prot項目P14210)。結合人類HGF之抗體2.12.1可保護二個峯，T33和T38.6。(第11A圖)。峯T38.6含有二種肽，此二者相當於在或接近成熟HGF之β 次單位開端的序列(見第10D圖，序列開端在粗體、下加線之文字處(VVNGIPTRTN(SEQ ID NO：172))，和第11C圖)。T33從α 次單位(第11C圖)衍生得來。根據質譜分析，所觀察到之在峯T38.6中的二種肽的質量分別測出為7165和6840道耳吞。根據存在於HGF序列中之可能的胰蛋白酶分裂部位(見，如：第10D圖中，人類HGF之胺基酸559處的粗體、下加線精胺酸殘質)，預測精胺酸殘質559號為受保護肽之C-端。
設計另一種互補實驗以檢查抗體-結合肽。依上述，以胰蛋白酶分解HGF和抗體2.12.1的混合物1小時，然後藉Microcon® 10(迷你波(Milipore)公司，麻卅貝得福市)過濾，以去除未結合之肽。已結合之肽被預期與抗體2.12.1一起被捕捉在膜中。將完整之人類HGF(15微 克)加入肽-抗體2.12.1的混合物中，以從複合物中洗提出結合的肽。將樣本在4℃培育一整夜，再藉Microcon® 10過濾，以從抗體和完整HGF中分離出HGF-洗提之肽。藉由逆相HPLC分析此二種樣本(結合和未結合之肽)(第11B圖)。藉由HPLC分離出已結合之肽，並依上述進行N-端序列分析和質譜分析。
當使用HGF來洗提已結合之肽時，可觀察到有一個大肽峯(T48，在第11B圖中)從抗體-HGF複合物中洗提出，經由N-端肽序列分析可鑑定出其含有二個在上述T38.6中所發現之相同β 次單位序列。根據質譜分析，在峯T48之肽的大小為異質性的，因此，無法由此資料中預測出確切之C-端。其它三個峯(在第11B圖中標示為#)或是不含肽，或含有未知來源，與HGF無關之肽。
此二種實驗同時指出HGF之β 次單位的N-端區為抗體2.12.1之抗原決定部位的一部分。此資料可補充實施例8D中之資料，實施例8D中發現涉及結合之抗原決定部位係位於人類HGF之胺基酸507-585之內。受保護之肽的突變分析和分子量顯示出人類HGF之抗體-結合抗原決定部位係位於人類HGF之胺基酸495-556之內。
F.抗體之競爭結合
以FITC標示實施例6中所描述之基本上從雜交瘤2.4.4衍生出之對HGF的抗體(抗體2.4.4)和基本上從雜交瘤2.12.1衍生出之對HGF的抗體(抗體2.12.1)， 以將其依下述用於競爭分析中。將抗體2.4.4和抗體2.12.1分別在PBS，pH8.5中進行透析。將來自FITC標示之貯存溶液(5毫克/毫升，在DMSO中)的FITC標示(〔6-螢光-5-(和-6)-羧醯胺基〕己酸，琥珀醯亞胺酯(5(6)-SFX)混合之同分異構物)(分子探針，目錄編號F-2181)加入二種各別之透析抗體中，莫耳比為5：1(標示：抗體)。將混合物在室温(20-22℃)、黑暗中培育一整夜。將混合物各自分別通過法馬西亞(Pharmacia)PD-10管柱(艾默森，紐澤西卅匹斯凱特威市)(已預先以PBS平衡過)移行。在分光計上，於280nM和450nM處讀取所產生之製品。利用280nm處之吸收計算那些製品之抗體濃度。利用下式計算已標示之抗體對未標示之抗體的比例： 其中Ax=在495nm處之標示吸收，而E=標示之消失係數=77500。通常，抗體之標示比約為3：1(FITC-標示抗體：未標示抗體)。
評估二種標示之抗體各自與其它9種對HGF之抗體競爭結合的能力。將二種標示之對HGF的抗體分別與HGF一起培育，且此二種經過標示之對HGF的抗體亦分別在50-倍莫耳過量之其它9種未標示之對HGF之抗體的其中一種的存在下，與HGF一起培育。因此，在9種分 別之樣本中，標示之抗體2.4.4分別與HGF，以及其它9種未標示之對HGF之抗體的其中一種一起培育。同樣地，在9種分別之樣本中，標示之抗體2.12.1分別與HGF，以及其它9種未標示之對HGF之抗體的其中一種一起培育。利用HGF之d5 DNA剪接變異體取代全長之HGF來重複這些組合。
這些競爭分析之陽性競爭對照組為將各標示之抗體與50-倍莫耳過量之未標示的相同抗體一起培育。因此，FITC-標示之抗體2.12.1係在50-倍莫耳過量之未標示的抗體2.12.1的存在下，及，另外在無未標示之抗體2.12.1的存在下進行培育。同樣地，FITC-標示之抗體2.4.4係在50-倍莫耳過量之未標示的抗體2.4.4的存在下，及，另外在無未標示之抗體2.4.4的存在下進行培育。如同所預期者，在50-倍莫耳過量之未標示的抗體的存在下，來自樣本的螢光訊號較其中未加入未標示之抗體者的訊號明顯為弱。
第12圖中提供結合略圖。第12A和12B圖示為利用標示之抗體2.12.1所進行的實驗。在12A和12B之所有表板中的曲線的線索為：A：陰性對照組(FITC-標示之抗體2.12.1，無HGF)；B：陽性對照組(FITC-標示之抗體2.12.1，加上HGF)；C：抗體1.74.1；D：抗體1.75.1；E：抗體1.29.1；F：抗體3.10.1；G：抗體1.61.3；H：抗體1.24.1；I：抗體1.60.1；J：抗體2.40.1；K：抗體2.12.1；L：抗體2.4.4。第12A圖示為利用螢光抗體 2.12.1，與d5HGF DNA剪接變異體靶的蛋白質之競爭結合分析的結果。第12B圖示為利用螢光抗體2.12.1，與全長HGF靶的蛋白質之競爭結合分析的結果。第12C和12D圖示為利用標示之抗體2.4.4的實驗。在12C和12D之所有表板中的曲線的線索為：A：陰性對照組(FITC-標示之抗體2.4.4，無HGF)；B：陽性對照組(FITC-標示之抗體2.4.4，加上HGF)；C：抗體1.74.1；D：抗體1.75.1；E：抗體1.29.1；F：抗體3.10.1；G：抗體1.61.3；H：抗體1.24.1；I：抗體1.60.1；J：抗體2.40.1；K：抗體2.12.1；L：抗體2.4.4。第12C圖示為利用螢光抗體2.4.4，與d5HGF DNA剪接變異體靶的蛋白質之競爭結合分析的結果。第12D圖示為利用螢光抗體2.4.4，與全長HGF靶的蛋白質之競爭結合分析的結果。
此資料表示該10種對HGF之抗體各與該二種標示之抗體各自競爭與全長或d5 HGF結合的結果。這些抗體中有些顯現出與標示之抗體完全競爭(如：抗體2.12.1、1.24.1和2.4.4與FITC-標示之抗體2.12.1完全競爭，在第12A和12B圖中，分別為峯H、K和L)。其它抗體僅部分競爭結合(如：抗體2.12.1、2.40.1和1.61.3與FITC-標示之抗體2.4.4部分競爭，在第12C和12D圖中，分別為峯K、J和G)。
實施例9
中和ELISA分析
中和ELISA分析係用來評估實施例6中所討論之抗體是否可阻礙Met-HGF結合。經由加入100微升HGF(每槽6.25微克/毫升)將戴非爾(Delphia)96-槽盤(目錄編號AAAND-0001，華勒(Wallac)公司，馬利蘭卅甘瑟堡市)塗層。將分析盤在37℃培育1小時，或在4℃培育一整夜。然後，在室温中，以含有0.1%吐温20之在PBS中的5%BSA(目錄編號50-61-00，KPL，馬利蘭卅甘瑟堡市)阻斷分析盤1小時，並一邊搖動。
將可溶性Met(2nM，0.256微克/毫升)分別與不同濃度之欲測試的對HGF的特殊抗體的混合在一起，以製備測試樣本。測試之濃度為：667nM、223 nM、74.1 nM、24.7 nM、8.2 nM、2.7 nM、0.91 nM、0.30 nM、0.10 nM和0.034 nM。將100微升體積之測試樣本加入分析盤之各槽中。然後，將分析盤在4℃培育一整夜，再以含有0.1%吐温20之PBS淸洗4次。接著，每槽內加入100微升，濃度為2微克/毫升之生物素化的抗-cMetR抗體(目錄編號BAF358，R&D系統公司，明尼蘇達卅明尼艾波里市)。抗體會結合在分析盤上之Met-HGF複合物，但不會結合與分析盤上之HGF結合的抗-HGF抗體。然後，將分析盤培育2小時，並一邊搖動，再以含有0.1%吐温20之PBS淸洗4次。加入Eu-抗生蛋白鏈菌素(在分析緩衝液中稀釋1：1000)(目錄編號1244-360，華勒公司，馬利蘭卅甘瑟堡市)，並將分析盤在室温搖動1小時。然後，以含有0.1%吐温20之PBS淸洗分析盤4次。接著，加 入100微升增強緩衝液(華勒公司，目錄編號：1244-105，馬利蘭卅甘瑟堡市)。至少5分鐘後，利用優洛品(Europium)方法，在維克多2(Victor2)(1420多標示計數器(Multilabel Counter)，華勒公司，馬利蘭卅甘瑟堡市)上讀取分析盤。
計算Met結合至HGF(也就是中和)的抑制百分比，並利用4變數配合方程式，Excelfit軟體包，第2.0.6版(微軟公司，華盛頓州西雅圖市)來測定IC50 值。在實施例6中所討論之抗體的存在下，Met結合HGF之反應被中和。二種實驗之資料顯示於第13圖中。
實施例10
在細胞中之中和作用
A. Met磷酸化作用
HGF誘導PC-3細胞(ATCC，曼那薩斯，VA# CRL 1435)中之Met磷酸化作用。將1x104 PC-3細胞/槽加入100微升含有5%胎牛血淸(海克隆，猶它州羅根市，目錄編號SH30070.03)，和1x青黴素、鏈黴素、麩胺醯胺(因維特金，加州卡斯巴市，目錄編號10378-016)之RPMI 1640(因維特金，加州卡斯巴市，目錄編號11875-093)中，以使PC-3細胞在96-槽法兒康(Falcon)組織培養盤(VWR，加州聖地牙哥，目錄編號62740-081)中生長。在37℃、5%CO2 下生長24小時後，以含有0.1%牛血淸白蛋白(史格馬，密蘇里州聖路易市，目錄編號 A-3156)之DMEM-低葡萄糖(因維特金，加州卡斯巴市，目錄編號11885-084)輕洗細胞一次，再以100微升含有0.1%牛血淸白蛋白(史格馬，密蘇里州聖路易市，目錄編號A-3156)之DMEM-低葡萄糖培養18至20小時。
在含有200毫微克/毫升HGF之介質(帶有0.1%牛血淸白蛋白之DMEM-低葡萄糖)中經由系列稀釋來分別製備來自實施例6之10種抗體的各8種不同的稀釋液。在分別之稀釋中的對HGF之抗體的濃度為：200nM、67 nM、22 nM、7 nM、2.5 nM、1 nM、0.3 nM和0.1 nM之對HGF的特殊抗體。將那些抗體/HGF稀釋液在37℃培育30分鐘。
以100微升含有0.1%牛血淸白蛋白之DMEM-低葡萄糖輕洗PC-3細胞一次。然後，將100微升之各抗體/HGF稀釋液分別加入PC-3細胞之分別的槽中。在37℃、5%CO2 下培養10分鐘後，將抗體/HGF稀釋液從槽中吸除，並將培養盤置於冰上1-2分鐘。以含有0.3mM正釩酸鈉(史格馬，密蘇里州聖路易市，目錄編號S-6508)之冰冷的PBS100微升輕洗細胞一次。將淸洗過之細胞在冰上，於60微升含有下列各項之溶解緩衝液中培養15-30分鐘：1%三通X-100(皮爾斯(Pierce)，伊利諾州洛克福市。目錄編號28314)、50mM Tris，pH8，100mM NaCl、0.3 mM正釩酸鈉(史格馬，密蘇里州聖路易市，目錄編號S-6508)和1X蛋白酶抑制劑混合劑(史格馬，目錄編號P-8340)。
將Dynabeads M-280抗生蛋白鏈菌素(IGEN國際公司，馬利蘭卅甘瑟堡市，目錄編號110029)與4微克/毫升之山羊-抗Met-生物素(R&D系統公司，明尼蘇達州明尼艾波里市，目錄編號BAF358)在室温下，於含有1%牛血淸白蛋白(史格馬公司，密蘇里卅聖路易市，目錄編號A-7888)、0.1%吐温20(拜爾瑞(Biorad)，加州海格力斯，目錄編號170-6531)之PBS中培育30分鐘，以製備經抗-Met抗體塗覆之小珠。在96-槽Costar分析盤(康寧，紐約卅，目錄編號3365)中之每一槽內加入體積25微升之經抗-Met抗體塗覆的小珠。
將體積25微升之不同PC-3細胞的溶胞化物各分別加入含有經抗-Met抗體塗覆之小珠的各個槽中。將分析盤在室温培育1小時，並一邊搖動。在每槽中加入體積12.5微升之含有1%牛血淸白蛋白(史格馬公司，密蘇里卅聖路易市，目錄編號A-7888)、0.1%吐温20(拜爾瑞，加州海格力斯，目錄編號170-6531)和0.04微克抗-磷酸酪胺酸抗體4G10(上卅生物技術公司，紐約州普來西湖市，目錄編號05-321)的PBS，並在室温中培育1小時，且一邊搖動之。將體積12.5微升之含有1%牛血淸白蛋白、0.1%吐温20和8微克/毫升抗-老鼠ORI-TAG-標示(IGEN國際公司，馬利蘭卅甘瑟堡市，目錄編號110087)的PBS加入其中，並將分析盤在室温中培育30分鐘，且一邊搖動之。在IGEN M8讀計(IGEN國際公司，馬利蘭卅甘瑟堡市)中測定訊號(以IGEN計數表示)。利用4 變數配合方程式，以及Excelfit軟體包，第2.0.6版(微軟公司，華盛頓州西雅圖市)來計算IC50 值。利用IGEN格式之二種實驗的資料顯示於第14圖中。在該10種對HGF之抗體方面，IC50 值係在低毫微莫耳至毫微莫耳下的範圍內。
B. U-87 MG生長/生存之中和
U-87 MG細胞(ATCC#HTB-14)為一種可同時表現Met和HGF之人類神經膠母細胞瘤細胞株。外生性HGF並未增强那些細胞在培養中之生長/生存力。然而，在生長條件下，內生性Met似乎可被內生性HGF活化。中斷內生性HGF結合至內生性Met可減少生長，及/或生存力。
以800細胞/槽之量，將U-87 MG細胞加入含5%FBS之IMEM介質(吉布可BRL，馬利蘭州洛克維爾市，目錄編號11125-028)中，使細胞在96-槽柯斯塔(Costar)分析盤(康寧，紐約卅，目錄編號3365)中生長。在約24小時後，將10種來自實施例6之對HGF的抗體各以11種不同濃度加入分別之U-87 MG細胞的槽中。在分別稀繹液中之對HGF抗體的濃度為：100微克/毫升、33.3微克/毫升、11.1微克/毫升、3.7微克/毫升、1.2微克/毫升、0.4微克/毫升、0.14微克/毫升、0.05微克/毫升、0.015微克/毫升、5.1毫微克/毫升和1.7毫微克/毫升之對HGF的特殊抗體。
加入對HGF之抗體後7天，將介質從分析盤中去除，在每槽中加入100微升之10%三氯醋酸(史格馬公司，密蘇里州聖路易市，目錄編號T-9159)，並在4℃培育1-2小時，以固定細胞。以自來水輕洗分析槽5次。經由以100微升之在1%醋酸(費雪公司，賓州匹兹堡市，目錄編號UN2789)中的0.4%硫若丹明B(史格馬，密蘇里州聖路易市，目錄編號S-9012)在室温中培育10分鐘來將固定好之細胞進行染色。染色後，以1%醋酸淸洗細胞5次並風乾之。在微量滴定盤讀計(SpectraMax PLUS，分子裝置，加州桑尼維市)上，於540nm處讀取分析盤之光學密度。光學密度與細胞單層中所存在之蛋白質總量成比例，因此，其為7-天分析期間之細胞存活/增殖的測量值。經由與那些和同位素對照抗體一起培育，或不與抗體一起培育之細胞進行比較來計算抑制百分比，以計算IC50 值。利用4變數配合方程式，以及Excelfit軟體包，第2.0.6版(微軟公司，華盛頓州西雅圖市)來計算IC50 值。
二種實驗的資料顯示於第15圖中。所有實施例6中所描述之10種對HGF之抗體均可抑制U-87 MG細胞之生長/存活。各抗體之IC50 值通常小於100nM。
實施例11
在異種移植之腫瘤中的中和作用
A. U-87 MG異種移植之最少殘餘疾病模型
讓U-87 MG細胞生長至接近融合，然後將其以25x106 細胞/毫升之濃度懸浮在不含血淸之介質中。藉由錐蟲藍染色排除法進行測定，可由目視評估細胞存活率>98.5%。將在不含血淸之介質中的5x106 U-87 MG細胞經由皮下注射入50隻雌裸鼠(CD1 Nu/Nu，查爾斯河實驗室，麻州威明頓市)之右脅腹中，以測試對HGF之單一抗體。將50隻小鼠平分為5組，每組10隻。
經由腹膜內注射途徑，以實施例7中所討論之相同劑量的對HGF之相同抗體，或以IgG1恆定區(同種型對照組)來處理在一特殊之10隻小鼠群中的每一隻小鼠。測試之抗體劑量為：1微克、3微克、10微克，和30微克/注射。每週進行二次抗體注射，持續4週，於注射U-87MG細胞後之第2天開始。每週記錄二次腫瘤測量值和體重，共30天，並利用下列程式計算腫瘤體積：長度x寬度x高度。以利用重複之ANOVA測量，和接下去之謝佛氏事後測試(Scheffe’s post hoc test)的StatView® 統計程式(SAS協會，北卡羅來鈉州凱利市)來分析結果。
在分別之實驗中，以此模型測試在實施例6中所討論之10種對HGF的抗體。第16A圖示為抗體2.4.4之劑量-反應實驗。箭頭指出給藥之時間，而劑量顯示於說明圖例中。在各劑量下不具有可測得之腫瘤的動物數(從10隻動物中測出者)指示於括弧中。在測試之二種最高劑量方面，當與每週接受二次30微克之同種型對照組(人類IgG2#PK16.3.1，艾伯堅尼克(Abgenix)公司，加州佛利 蒙市)的對照組動物相較時，每週投服10微克二次，及每週投服30微克二次，可對腫瘤之生長產生統計上有意義的抑制效果。在2.4.4之二種較低劑量(每週二次1和3微克)可見到輕微，但不具統計上之意義的生長抑制效果。數據係以平均值±標準差表示；n=10動物/組，而p≦0.05被認為係統計上有意義。測試來自實施例6之其它9種對HGF之抗體的實驗顯示出在較高劑量下對腫瘤生長具有類似之完全抑制效果。
B. U-87 MG異種移植之建立的疾病模型
依照上述實施例11A中所描述之程序，將在不含血淸之介質中的U-87 MG細胞注射入裸鼠中。在開始經由腹膜內途徑投服對HGF之抗體前，讓腫瘤生長約2週，直至其體積達到~200毫米3 。如第16B圖中之箭頭所指示，從第16天開始，每週以200微克、100微克或30微克之抗體2.4.4處理小鼠二次。依上述測量和評估腫瘤體積。在第30天時不具有可測得之腫瘤的動物數(從10隻動物中測出者)指示於括弧中。在所有劑量下均觀察到U-87 MG腫瘤之生長受到完全抑制。已建立之腫瘤在第29天之前可達到統計上有意義之消退。在分別之實驗中，以此模型測試在實施例6中所討論之10種對HGF的抗體，而在各抗體之較高劑量下均可觀察到完全抑制的情況。
C.在U-87 MG最少殘餘疾病模型中評定抗體等級
為了測定實施例6中所討論之10種對HGF之抗體在實施例11A中所討論之U-87 MG腫瘤模型中的相關效力，選擇在最少殘餘疾病模型中僅部分抑制腫瘤生長的低劑量。初步之劑量-反應研究(第16A圖)提出：每週投服5微克對HGF之抗體二次可產生部分抑制之作用。進行一系列比較至多5種不同之對HGF的抗體的頭-頭實驗。第16C和16D圖示為這些實驗中之二個實驗的結果。＊＊ 表示那些與PBS和同種型對照組IgG2抗體相較下可顯著抑制腫瘤生長(p<0.0001)之對HGF的抗體。
利用實施例11B中所討論之已建立的U-87疾病模型來進行類似之等級排列實驗。在那些實驗中，每週使用10微克之劑量二次。第16E和16F圖示為這些實驗中之二個實驗的結果。
第1A圖示為顯示出某些對HGF之抗體的輕鏈的種系關係樹圖。種系基因鑑定證明標示在抗體命名之右側。第1B圖示為某些對HGF之抗體的κ輕鏈的可變區的胺基酸序列排列。種系基因鑑定證明標示在左側。CDR區係以粗線標示在排列之序列上方。
第2A圖示為顯示出某些對HGF之抗體的γ 重鏈的種系關係樹圖。種系基因鑑定證明標示在抗體命名之右側。第2B圖示為某些對HGF之抗體的γ 重鏈的可變區的胺基酸序列排列。種系基因鑑定證明標示在左側。CDR區係 以粗線標示在排列之序列上方。
第3圖示為編碼來自某些對HGF之抗體的輕和重鏈之可變區的DNA序列。標示出的為各序列之抗體名稱、種系命名和序列ID。天然訊號肽序列在下方加線。其中亦顯示出人類κ、IgG1和IgG2恆定區之DNA序列。
第4圖示為某些對HGF之抗體的輕和重鏈之可變區的胺基酸序列。標示出的為各序列之抗體名稱、種系命名和序列ID。天然訊號肽序列在下方加線。其中亦顯示出人類κ、IgG1和IgG2恆定區之胺基酸序列。
第5圖示為某些對HGF之抗體的輕和重鏈的互補決定區(CDRs)的胺基酸序列。標示出的為各序列之抗體名稱和序列ID。第5A圖示為某些對HGF之抗體的輕鏈的CDRs的胺基酸序列。第5B圖示為某些對HGF之抗體的重鏈的CDRs的胺基酸序列。
第6圖示為某些對HGF之抗體的KD 測定結果(討論於實施例8中)。第6A圖示為來自動力學方法的資料。第6B圖示為來自平衡/溶液方法的資料。
第7圖示為來自實施例8中所討論之西方點墨分析的自體放射線照片，此分析測試某些抗體結合人類，及結合老鼠HGF之能力。左方之表板(第1-4道)顯示出在非-還原條件下進行之實驗的自體放射線照片。右方之表板(第5-8道)顯示出在還原條件下進行之實驗的自體放射線照片。
第8圖示為來自實施例8中所討論之實驗的螢光活化 細胞分類器(FACS)資料，此實驗係評估某些抗體對某些靶的之結合情況。第8圖頂端顯示來自缺乏專一性結合劑之對照組樣本的FACS資料。表板1和2(從左方)分別顯示出來自缺乏與FITC和PE一起培育之靶的的對照組樣本的資料。表板3和4分別顯示出來自含有經FITC和PE標示之d5 HGF，但缺乏專一性結合劑的對照組樣本的資料。實線下方之表板顯示出來自測試5種對HGF之抗體的實驗的FACS資料。在各抗體方面，第1個表板(從左方)顯示出來自缺乏靶的之對照組樣本的資料，第2至4個表板顯示出來自其中該靶的分別為：人類HGF、老鼠HGF，和人類d5 HGF之實驗的資料。
第9A圖示為編碼與多選殖部位相鄰之卵白素的質體的圖示，其用來產生如實驗8中所討論之含有卵白素和靶的蛋白質的融合蛋白質。第9B圖示為雞卵白素之序列。
第10A和10B圖示為某些融合蛋白質之圖解表示，及實施例8C和8D中所討論之利用那些融合蛋白質所進行的結合分析的結果。第10C圖示為某些具有單點突變、插入或缺失之融合蛋白質的圖解表示。第10D圖示為在胺基酸451-731區中之人類和老鼠HGF的胺基酸序列(分別為SEQ ID NO.120和121)，所標示出者為相對應之一致序列(SEQ ID NO.122)。
第11A和11B圖示為如實施例8E中所討論之對人類HGF進行的蛋白酶保護實驗的HPLC分析。第11C圖示為在該工作中，經由結合至抗體2.12.1來防止被蛋白酶分 解之肽的胺基酸序列。
第12A-12D圖顯示來自實施例8中所討論之競爭性結合分析的結果。
第13圖示為來自實施例9中所討論之中和分析的IC50資料。
第14圖示為來自實施例10中所討論之PC3細胞中的中和分析的資料。
第15圖示為來自實施例10中所討論之U-87細胞中的抑制分析的資料。
第16圖示為來自實施例11中所討論之實驗的結果，該實驗係評估某些對HGF之抗體對小鼠體內U-87MG異種移植腫瘤的效果。第16A圖示為最少殘餘疾病中，抗體2.4.4對U-87MG異種移植腫瘤生長的劑量-反應資料。第16B圖示為在已建立之疾病模型中，抗體2.4.4對U-87MG異種移植腫瘤生長的劑量-反應資料。第16C、16D、16E和16F圖示為在U-87最少殘餘疾病模型(16C和16D)，或U-87之已建立的疾病模型(16E和16F)中，測試對HGF之抗體的頭-頭實驗的資料。
<110> 艾恩傑股份有限公司(AMGEN INC.) 艾恩傑夫利蒙股份有限公司(AMGEN FREMONT INC.)
<120> 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
<140> TW 093121407
<141> 2004-07-16
<150> US 60/488,681
<151> 2003-07-18
<160> 194
<170> PatentIn Ver.3.2
<210> 1
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.24.1輕鏈V區(Vk,1-L15)
<400> 1
<210> 2
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.24.1重鏈V區(Vh,H3-11)-huIgG2 C區)
<400> 2
<210> 3
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.29.1輕鏈V區(Vk,4-B3)
<400> 3<210> 4 <211> 411 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.29.1重鏈V區(Vh,3-33)-huIgG2 C區) <400> 4<210> 5 <211> 387 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.60.1輕鏈V區(Vk,1-A20) <400> 5<210> 6 <211> 417 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.60.1重鏈V區(Vh,H1-02)-huIgG2 C區) <400> 6<210> 7 <211> 387 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.61.3輕鏈V區(Vk,1-018/08) <400> 7 <210> 8 <211> 444 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.61.3重鏈V區(Vh,4-31)-huIgG2 C區) <400> 8<210> 9 <211> 387 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.74.3輕鏈V區(Vk,1-012/02) <400> 9<210> 10 <211> 417 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.74.3重鏈V區(Vh,VG1-02)-huIgG2 C區) <400> 10<210> 11 <211> 387 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.75.1輕鏈V區(Vk,1-A30) <400> 11 <210> 12 <211> 432 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.75.1重鏈V區(Vh,VG4-31)-huIgG2 C區) <400> 12<210> 13 <211> 399 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.4.4輕鏈V區(Vk,4-B3) <400> 13<210> 14 <211> 426 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.4.4重鏈V區(Vh,VG 4-31)-huIgG2 C區) <400> 14<210> 15 <211> 384 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.12.1輕鏈V區(Vk,3-L2/L16) <400> 15<210> 16 <211> 417 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.12.1重鏈V區(Vh4-59)-huIgG2 C區) <400> 16<210> 17 <211> 387 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.40.1輕鏈V區(Vk,1A20) <400> 17<210> 18 <211> 420 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.40.1重鏈V區(Vh,VG 4-31)-huIgG2 C區) <400> 18<210> 19 <211> 384 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 3.10.1輕鏈V區(Vk,3-L2/L16) <400> 19<210> 20 <211> 417 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF3.10.1重鏈V區(Vh,VG 4-34)-huIgG2 C區) <400> 20<210> 21 <211> 324 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的中類K恆定區<400> 21<210> 22 <211> 993 <212> DNA <213>Sequence <220> <223> 人工序列之描述：合成的中類IgG1恆定區<400> 22<210> 23 <211> 981 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的中類IgG2恆定區<400> 23<210> 24 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.24.1輕鏈V區(Vk,1-L15) <400> 24<210> 25 <211> 141 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.24.1重鏈V區(Vh,H3-11)-huIgG2 C區)<400> 25<210> 26 <211> 133 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.29.1輕鏈V區(Vk,4-B3) <400> 26<210> 27 <211> 137 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.29.1重鏈V區(Vh,3-33)-huIgG2 C區) <400> 27<210> 28 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.60.1輕鏈V區(Vk,1-A20) <400> 28<210> 29 <211> 139 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.60.1重鏈V區(Vh,H1-02)-huIgG2 C區) <400> 29<210> 30 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.61.3輕鏈V區(Vk,1-018/08) <400> 30<210> 31 <211> 148 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.61.3重鏈V區(Vg,4-31)-huIgG2 C區) <400> 31<210> 32 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.74.3輕鏈V區(Vk,1-012/02) <400> 32<210> 33 <211> 139 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.74.3重鏈V區(Vh,VG1-02)-huIgG2 C區) <400> 33<210> 34 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 1.75.1輕鏈V區(Vk,1-A30) <400> 34<210> 35 <211> 144 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF1.75.1重鏈V區(Vh,VG4-31)-huIgG2 C區) <400> 35<210> 36 <211> 133 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.4.2輕鏈V區(Vk,4-B3) <400> 36 <210> 37 <211> 142 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.4.4重鏈V區(Vh,VG 4-31)-huIgG2 C區) <400> 37<210> 38 <211> 128 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.12.1輕鏈V區(Vk,3-L2/L16) <400> 38 <210> 39 <211> 139 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.12.1重鏈V區(Vg,4-59)-huIgG2 C區) <400> 39<210> 40 <211> 129 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 2.40.1輕鏈V區(Vk,1A20) <400> 40 <210> 41 <211> 140 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF2.40.1重鏈V區(Vh,VG 4-31)-huIgG2 C區) <400> 41<210> 42 <211> 128 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF 3.10.1輕鏈V區(Vk,3-L2/L16) <400> 42 <210> 43 <211> 139 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的HGF3.10.1重鏈V區(Vh,VG 4-34)-huIgG2 C區) <400> 43<210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的中類K恆定區<400> 44<210> 45 <211> 330 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的中類IgG1恆定區<400> 45<210> 46 <211> 326 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的中類IgG2恆定區<400> 46<210> 47 <211> 18 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的t-細胞抗原決定部位肽<400> 47<210> 48 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<220> <221> 修改的＿鹼基<222> (18)..(23) <223> a,t,c or g <400> 48<210> 49 <211> 26 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 49<210> 50 <211> 21 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 50<210> 51 <211> 48 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 51<210> 52 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 52<210> 53 <211> 26 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 53<210> 54 <211> 48 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 54<210> 55 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 55<210> 56 <211> 1043 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的pI/hCh1重鏈核苷酸序列<400> 56<210> 57 <211> 540 <212> DNA <213> 原雞 原雞<220> <221> CDS <222> (2)..(520) <400> 57<210> 58 <211> 540 <212> DNA <213> 原雞 原雞<400> 58<210> 59 <211> 173 <212> PRT <213> 原雞 原雞<400> 59<210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 60<210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 61<210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 62<210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 63<210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 64<210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 65<210> 66 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 66<210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 67<210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 68<210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 69<210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 70<210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 71<210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽 <400> 72<210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 73<210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 74<210> 75 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 75<210> 76 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 76<210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 77 <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 78<210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 79<210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 80<210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 81<210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 82<210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 83<210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 84<210> 85 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 85<210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 86<210> 87 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 87<210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 88<210> 89 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的輕鏈可變區CDR肽<400> 89<210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 90<210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 91<210> 92 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 92<210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 93<210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 94<210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 95<210> 96 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 96<210> 97 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 97<210> 98 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 98<210> 99 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 99<210> 100 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 100<210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 101<210> 102 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 102<210> 103 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 103<210> 104 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 104<210> 105 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 105<210> 106 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 106<210> 107 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 107<210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 108<210> 109 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 109<210> 110 <211> 13 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 110<210> 111 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 111<210> 112 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 112<210> 113 <211> 19 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 113<210> 114 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 114<210> 115 <211> 15 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 115<210> 116 <211> 13 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 116<210> 117 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 117<210> 118 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 118<210> 119 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的重鏈可變區CDR肽<400> 119<210> 120 <211> 279 <212> PRT <213> 現代人<400> 120 <210> 121 <211> 278 <212> PRT <213> 家鼠<400> 121<210> 122 <211> 278 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (53)..(53) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (55)..(55) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (91)..(92) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (108)..(108) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (114)..(114) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (145)..(145) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (154)..(154) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (178)..(178) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (200)..(200) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<400> 122 <210> 123 <211> 77 <212> PRT <213> 現代人<400> 123<210> 124 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 124<210> 125 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 125<210> 126 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 126<210> 127 <211> 35 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 127<210> 128 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 128<210> 129 <211> 37 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 129<210> 130 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 130<210> 131 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸 <400> 131<210> 132 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 132<210> 133 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 133<210> 134 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 134<210> 135 <211> 35 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 135<210> 136 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 136<210> 137 <211> 38 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 137<210> 138 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 138<210> 139 <211> 29 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 139<210> 140 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 140<210> 141 <211> 30 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 141<210> 142 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 142<210> 143 <211> 29 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 143<210> 144 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 144<210> 145 <211> 30 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 145<210> 146 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 146<210> 147 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 147<210> 148 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 148<210> 149 <211> 34 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 149<210> 150 <211> 31 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 150<210> 151 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 151<210> 152 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 152<210> 153 <211> 31 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 153<210> 154 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 154<210> 155 <211> 31 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 155<210> 156 <211> 38 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 156<210> 157 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 157<210> 158 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 158<210> 159 <211> 32 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 159<210> 160 <211> 40 <212> DNA <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸<400> 160<210> 161 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 161<210> 162 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 162<210> 163 <211> 6 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 163<210> 164 <211> 62 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 164<210> 165 <211> 59 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 165<210> 166 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：輕鏈CDR1一致序列(CDR1a) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 賴胺酸,精胺酸,或麩胺醯胺<220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> 絲胺酸或丙胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 絲胺酸,甘胺酸,或天門冬胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 纈胺酸或異白胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> 白胺酸或苯丙胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> 苯丙胺酸,酪胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (9)..(10) <223> 絲胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> 天門冬醯胺,蘇胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> 天門冬醯胺,異白胺酸,或纈胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> 賴胺酸,丙胺酸,天門冬醯胺,或天門冬胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> 天門冬醯胺或絲胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 酪胺酸,天門冬胺酸,色胺酸,或天門冬醯胺<220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> 丙胺酸,甘胺酸,或天門冬醯胺<400> 166 <210> 167 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：輕鏈CDR2一致序列(CDR2a) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 色胺酸,丙胺酸,纈胺酸,麩胺酸,或甘胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> 蘇胺酸,絲胺酸,或天門冬胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 丙胺酸或白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 麩胺酸,麩胺醯胺,或丙胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> 絲胺酸,天門冬醯胺,或蘇胺酸<400> 167<210> 168 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：輕鏈CDR3一致序列(CDR3a) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 麩胺醯胺或白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> 麩胺醯胺,天門冬醯胺,或丙胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> 酪胺酸,組胺酸,丙胺酸,或絲胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> 苯丙胺酸,酪胺酸,天門冬胺酸,天門冬醯胺, 或異白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 絲胺酸,甘胺酸,或天門冬醯胺<220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 脯胺酸,酪胺酸,蘇胺酸,苯丙胺酸,天門冬胺酸, 白胺酸,或色胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> 脯胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> 色胺酸,白胺酸,脯胺酸,酪胺酸,或異白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> 蘇胺酸或天門冬醯胺<400> 168<210> 169 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：重鏈CDR1一致序列(CDR1b) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 絲胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> 天門冬胺酸或甘胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> 天門冬胺酸,甘胺酸,絲胺酸,纈胺酸,蘇胺酸,或異白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 酪胺酸或甘胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 異白胺酸,甲硫胺酸,或色胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> 組胺酸,天門冬醯胺,或絲胺酸 <400> 169<210> 170 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：重鏈CDR2一致序列(CDR2b) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 色胺酸,酪胺酸,纈胺酸,天門冬醯胺,或麩胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> 異白胺酸,苯丙胺酸,或纈胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> 天門冬醯胺,絲胺酸,色胺酸,或蘇胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> 脯胺酸,絲胺酸,蘇胺酸,或組胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 天門冬醯胺,絲胺酸,或天門冬胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 絲胺酸或甘胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> 甘胺酸或絲胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> 甘胺酸,蘇胺酸,天門冬胺酸,絲胺酸,異白胺酸, 或天門冬醯胺<220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> 蘇胺酸,異白胺酸,或賴胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> 天門冬醯胺或酪胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> 酪胺酸或組胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> 丙胺酸或天門冬醯胺<220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> 麩胺醯胺,天門冬胺酸,或脯胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> 賴胺酸或絲胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 苯丙胺酸,纈胺酸,或白胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> 麩胺醯胺或賴胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> 甘胺酸或絲胺酸<400> 170<210> 171 <211> 20 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：重鏈CDR3一致序列(CDR3b) <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 麩胺酸,天門冬胺酸,絲胺酸,或甘胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> 白胺酸,麩胺酸,天門冬胺酸,組胺酸,脯胺酸, 或甘胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> 麩胺酸,酪胺酸,或白胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> 白胺酸,天門冬醯胺,甘胺酸,組胺酸,酪胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> 丙胺酸,絲胺酸,麩胺酸,酪胺酸,甘胺酸,或甘丙胺酸,或不存在 <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> 甘胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> 色胺酸或酪胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> 天門冬胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> 絲胺酸或丙胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> 絲胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> 甘胺酸或酪胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> 酪胺酸,麩胺酸,或天門冬胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> 酪胺酸,苯丙胺酸,或天門冬胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> 酪胺酸,天門冬胺酸,組胺酸,或色胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 酪胺酸,甘胺酸,天門冬胺酸,脯胺酸,或絲胺酸或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> 甘胺酸,纈胺酸,酪胺酸,或天門冬胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> 白胺酸,丙胺酸,甘胺酸,或酪胺酸,或不存在<220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> 甲硫胺酸,苯丙胺酸,或酪胺酸<220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> 纈胺酸,酪胺酸,異白胺酸,或脯胺酸<400> 171 <210> 172 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的肽<400> 172<210> 173 <211> 113 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 173<210> 174 <211> 113 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 174 <210> 175 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 175<210> 176 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 176 <210> 177 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 177<210> 178 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 178<210> 179 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列 <400> 179<210> 180 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 180<210> 181 <211> 108 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 181 <210> 182 <211> 108 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<400> 182<210> 183 <211> 114 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的k輕鏈蛋白質序列<220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (29)..(34) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (36)..(38) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (56)..(56) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (98)..(98) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (100)..(100) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (102)..(103) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<400> 183<210> 184 <211> 118 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 184 <210> 185 <211> 118 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 185<210> 186 <211> 120 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 186<210> 187 <211> 116 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 187<210> 188 <211> 127 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 188<210> 189 <211> 119 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 189<210> 190 <211> 123 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 190<210> 191 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 191<210> 192 <211> 118 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<400> 192<210> 193 <211> 116 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列 <400> 193<210> 194 <211> 128 <212> PRT <213> 人工序列<220> <223> 人工序列之描述：合成的r重鏈蛋白質序列<220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (31)..(32) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (42)..(42) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (58)..(58) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (102)..(112) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (114)..(114) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<220> <221> MOD_RES <222> (116)..(116) <223> 未測定的一致殘質；可變的胺基酸<400> 194

Claims (53)

  1. 一種經分離之抗體，其中該抗體能與肝細胞生長因子(HGF)結合，其中該抗體能中和HGF與c-Met之結合，且該抗體選自：包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：60、70及80，且該重鏈包含SEQ ID NO：90、100及110；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：61、71及81，且該重鏈包含SEQ ID NO：91、101及111；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：62、72及82，且該重鏈包含SEQ ID NO：92、102及112；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：63、73及83，且該重鏈包含SEQ ID NO：93、103及113；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：64、74及84，且該重鏈包含SEQ ID NO：94、104及114；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：65、75及85，且該重鏈包含SEQ ID NO：95、105及115；及包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：68、78及88，且該重鏈包含SEQ ID NO：98、108及118。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：60、70及80，且該重鏈包含SEQ ID NO：90、100及110。
  3. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：61、71及81，且該重 鏈包含SEQ ID NO：91、101及111。
  4. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：62、72及82，且該重鏈包含SEQ ID NO：92、102及112。
  5. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：63、73及83，且該重鏈包含SEQ ID NO：93、103及113。
  6. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：64、74及84，且該重鏈包含SEQ ID NO：94、104及114。
  7. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：65、75及85，且該重鏈包含SEQ ID NO：95、105及115。
  8. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：68、78及88，且該重鏈包含SEQ ID NO：98、108及118。
  9. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體選自：包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：24之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：25之殘基20至殘基141的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：26之殘基21至殘基133的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：27之殘基20至殘基137的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：28 之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：29之殘基20至殘基139的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：30之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：31之殘基20至殘基148的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：32之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：33之殘基20至殘基139的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：34之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：35之殘基20至殘基144的胺基酸序列；及包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：40之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：41之殘基20至殘基140的胺基酸序列。
  10. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：24之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：25之殘基20至殘基141的胺基酸序列。
  11. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：26之殘基21至殘基133的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：27之殘基20至殘基137的胺基酸序列。
  12. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：28之殘基23至殘基 129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：29之殘基20至殘基139的胺基酸序列。
  13. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：30之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：31之殘基20至殘基148的胺基酸序列。
  14. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：32之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：33之殘基20至殘基139的胺基酸序列。
  15. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：34之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：35之殘基20至殘基144的胺基酸序列。
  16. 如申請專利範圍第9項之抗體，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：40之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：41之殘基20至殘基140的胺基酸序列。
  17. 一種經分離之抗體，該抗體與HGF之抗原決定基專一性結合且能中和HGF與c-Met之結合，其中該HGF之抗原決定基係由選自SEQ ID NO：123、164或165的胺基酸序列所構成。
  18. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其係單鏈抗體。
  19. 如申請專利範圍第18項之抗體，其中該單鏈抗體係單鏈Fv抗體。
  20. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其係Fab抗體。
  21. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其係Fab’抗體。
  22. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其係F(ab’)2 抗體。
  23. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其係全長人抗體。
  24. 一種藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1至23項中任一項之抗體和藥學上可接受之載體。
  25. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於治療病患之癌症。
  26. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於治療病患之實體腫瘤。
  27. 如申請專利範圍第24項之藥學組成物，其係用於抑制HGF與Met結合。
  28. 一種由如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體所辨識的HGF之抗原決定基，其係由選自SEQ ID NO：123、164或165的胺基酸序列所構成。
  29. 一種由選自SEQ ID NO：123、164或165的胺基酸序列所構成之多肽於製備能與HGF結合之如申請專利範圍第1至23項中任一項之抗體之用途。
  30. 一種宿主細胞，其包含編碼輕鏈之第一多核苷酸和編碼重鏈之第二多核苷酸，其中該第一多肽和第二多肽形成能與肝細胞生長因子(HGF)結合之抗體，且該抗體選自包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：60、70及80，且該重鏈包含SEQ ID NO：90、100及110；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：61、71及81，且該重鏈包含SEQ ID NO：91、101及111；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：62、72及82，且該重鏈包含SEQ ID NO：92、102及112；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：63、73及83，且該重鏈包含SEQ ID NO：93、103及113；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：64、74及84，且該重鏈包含SEQ ID NO：94、104及114；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：65、75及85，且該重鏈包含SEQ ID NO：95、105及115；及包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：68、78及88，且該重鏈包含SEQ ID NO：98、108及118。
  31. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：60、70及80，且該重鏈包含SEQ ID NO：90、100及110。
  32. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：61、71及81， 且該重鏈包含SEQ ID NO：91、101及111。
  33. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：62、72及82，且該重鏈包含SEQ ID NO：92、102及112。
  34. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：63、73及83，且該重鏈包含SEQ ID NO：93、103及113。
  35. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：64、74及84，且該重鏈包含SEQ ID NO：94、104及114。
  36. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：65、75及85，且該重鏈包含SEQ ID NO：95、105及115。
  37. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：68、78及88，且該重鏈包含SEQ ID NO：98、108及118。
  38. 如申請專利範圍第30項之宿主細胞，其中該抗體選自：包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：24之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ IDNO：25之殘基20至殘基141的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：26之殘基21至殘基133的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：27之殘基20至殘基137的胺基酸序列； 包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：28之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：29之殘基20至殘基139的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：30之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：31之殘基20至殘基148的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：32之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：33之殘基20至殘基139的胺基酸序列；包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：34之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：35之殘基20至殘基144的胺基酸序列；及包含輕鏈和重鏈之抗體，該輕鏈包含SEQ ID NO：40之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：41之殘基20至殘基140的胺基酸序列。
  39. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：24之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：25之殘基20至殘基141的胺基酸序列。
  40. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：26之殘基21至殘基133的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：27之殘基20至殘基137的胺基酸序列。
  41. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體 包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：28之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：29之殘基20至殘基139的胺基酸序列。
  42. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：30之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：31之殘基20至殘基148的胺基酸序列。
  43. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：32之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：33之殘基20至殘基139的胺基酸序列。
  44. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：34之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：35之殘基20至殘基144的胺基酸序列。
  45. 如申請專利範圍第38項之宿主細胞，其中該抗體包含輕鏈和重鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：40之殘基23至殘基129的胺基酸序列，且該重鏈包含SEQ ID NO：41之殘基20至殘基140的胺基酸序列。
  46. 如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞，其中該第一多核苷酸和第二多核苷酸係經操作性連接，使得該第一多核苷酸和第二多核苷酸編碼單鏈抗體。
  47. 如申請專利範圍第46項之宿主細胞，其中該單鏈抗體係單鏈Fv抗體。
  48. 如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞，其編碼Fab抗體。
  49. 如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞，其編碼Fab’抗體。
  50. 如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞，其編碼F(ab’)2 抗體。
  51. 如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞，其編碼全長人抗體。
  52. 一種產製能與肝細胞生長因子(HGF)結合之抗體之方法，其包含培養如申請專利範圍第30至45項中任一項之宿主細胞及回收且分離由該宿主細胞所產製之抗體。
  53. 一種多核苷酸，其編碼如申請專利範圍第1至23項中任一項之抗體。
TW093121407A 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑 TWI395756B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US48868103P 2003-07-18 2003-07-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200524958A TW200524958A (en) 2005-08-01
TWI395756B true TWI395756B (zh) 2013-05-11

Family

ID=34193077

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102101626A TW201319088A (zh) 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
TW102101625A TWI476206B (zh) 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
TW093121407A TWI395756B (zh) 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102101626A TW201319088A (zh) 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
TW102101625A TWI476206B (zh) 2003-07-18 2004-07-16 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑

Country Status (26)

Country Link
US (2) US8609090B2 (zh)
EP (2) EP2341067A1 (zh)
JP (4) JP5105874B2 (zh)
KR (2) KR101254371B1 (zh)
CN (3) CN103755807A (zh)
AR (3) AR042955A1 (zh)
AU (1) AU2004265595B2 (zh)
BR (1) BRPI0412885A (zh)
CA (1) CA2532027C (zh)
DK (1) DK1648998T3 (zh)
EA (1) EA015363B1 (zh)
ES (1) ES2523837T3 (zh)
HK (1) HK1199266A1 (zh)
IL (1) IL172906A0 (zh)
ME (1) MEP31408A (zh)
MX (1) MXPA06000508A (zh)
NO (1) NO20060600L (zh)
NZ (1) NZ544797A (zh)
PL (1) PL1648998T3 (zh)
PT (1) PT1648998E (zh)
RS (1) RS53476B (zh)
SG (1) SG131943A1 (zh)
SI (1) SI1648998T1 (zh)
TW (3) TW201319088A (zh)
WO (1) WO2005017107A2 (zh)
ZA (2) ZA200601353B (zh)

Families Citing this family (196)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040208876A1 (en) * 2003-04-18 2004-10-21 Kim Kyung Jin Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
US7220410B2 (en) 2003-04-18 2007-05-22 Galaxy Biotech, Llc Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
TW201319088A (zh) 2003-07-18 2013-05-16 Amgen Inc 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
US7046714B2 (en) * 2003-09-10 2006-05-16 Intel Corporation Method and apparatus for Raman ring resonator based laser/wavelength converter
NZ552476A (en) * 2004-06-10 2009-09-25 Viventia Biotech Inc Tumor specific antibody
KR20070120559A (ko) * 2005-03-29 2007-12-24 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 새로운 모낭 생성 방법, 탈모 치료 방법 및 체모 제거 방법
ZA200710599B (en) 2005-04-15 2009-08-26 Genentech Inc HGF Beta chain variants
JP2008545753A (ja) * 2005-06-02 2008-12-18 ギャラクシー バイオテック， エルエルシー 抗体で脳腫瘍を処置する方法
KR20080068004A (ko) * 2005-08-15 2008-07-22 아라나 테라퓨틱스 리미티드 뉴 월드 영장류 구조형성영역을 가진 조작 항체
JP2009519983A (ja) * 2005-12-20 2009-05-21 アラーナ・テラピューティクス・リミテッド 部分的な新世界ザル結合領域を有するキメラ抗体
WO2007087673A1 (en) * 2006-02-01 2007-08-09 Arana Therapeutics Limited Domain antibody construct
AR059922A1 (es) 2006-04-01 2008-05-07 Galaxy Biotech Llc Anticuerpos monoclonales humanizados para el factor de crecimiento de hepatocitos
PL2027156T3 (pl) 2006-06-02 2011-06-30 Aveo Pharmaceuticals Inc Białka wiążące czynnik wzrostowy hapatocytów (HGF)
AR061170A1 (es) 2006-06-02 2008-08-06 Aveo Pharmaceuticals Inc Proteinas que se unen con el factor de crecimiento de hepatocitos (hgf)
CL2007002225A1 (es) * 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
CL2007002567A1 (es) 2006-09-08 2008-02-01 Amgen Inc Proteinas aisladas de enlace a activina a humana.
US8252749B2 (en) 2006-09-28 2012-08-28 Follica, Inc. Methods, kits, and compositions for generating new hair follicles and growing hair
US20080139790A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-12 Jennings Philip A Chimeric antibodies
US7951368B2 (en) * 2007-06-25 2011-05-31 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
US20110097318A1 (en) * 2007-08-31 2011-04-28 Amgen Inc. Solid-State Protein Formulation
US7982016B2 (en) 2007-09-10 2011-07-19 Amgen Inc. Antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin
JP5963341B2 (ja) 2007-09-14 2016-08-10 アムジエン・インコーポレーテツド 均質な抗体集団
EP2205280B1 (en) * 2007-09-27 2019-09-04 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP2219602A1 (en) 2007-11-15 2010-08-25 Amgen, Inc Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stablised by antioxidants for parenteral administration
PE20091714A1 (es) * 2008-04-11 2009-11-15 Galaxy Biotech Llc Combinacion del inhibidor hgf y el agonista pten
TW201002346A (en) * 2008-04-11 2010-01-16 Galaxy Biotech Llc Combination of HGF inhibitor and EGF inhibitor to treat cancer
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
AU2009255305B2 (en) 2008-05-29 2014-10-30 Galaxy Biotech, Llc Monoclonal antibodies to basic fibroblast growth factor
JP5723769B2 (ja) 2008-06-03 2015-05-27 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
NZ589434A (en) 2008-06-03 2012-11-30 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2010014574A (es) * 2008-07-08 2011-04-27 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable dual para prostaglandina e2 y usos de las mismas.
AU2013202410B2 (en) * 2008-07-16 2014-10-09 Institute For Research In Biomedicine Human cytomegalovirus neautralizing antibodies and use thereof
UA112050C2 (uk) * 2008-08-04 2016-07-25 БАЄР ХЕЛСКЕР ЛЛСі Терапевтична композиція, що містить моноклональне антитіло проти інгібітора шляху тканинного фактора (tfpi)
MX2011003363A (es) * 2008-10-01 2011-04-27 Ludwig Inst Cancer Res Metodos para el tratamiento de cancer.
MX2011000455A (es) 2008-11-07 2011-02-25 Galaxy Biotech Llc Anticuerpos monoclonales especificos al receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos.
WO2010056816A2 (en) * 2008-11-12 2010-05-20 Schering Corporation βGI-IGG INTRON FOR ENHANCED ANTI-IGF1 R EXPRESSION
US20120052064A1 (en) 2009-04-17 2012-03-01 Yuuki Ito Anti-hgf antibody combinational cancer therapies
MX2011011670A (es) * 2009-05-01 2011-11-18 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable dual y usos de las mismas.
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
SG178602A1 (en) 2009-09-01 2012-04-27 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2011033021A2 (en) * 2009-09-16 2011-03-24 Mipsalus Aps Improved purification of multi-specific receptors
BR112012008833A2 (pt) * 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
CA2778105C (en) 2009-10-23 2019-04-02 Amgen Inc. Vial adapter and system
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EA201892184A1 (ru) 2010-03-01 2019-03-29 БАЙЕР ХЕЛЬСКЕР ЛЛСи Оптимизированные моноклональные антитела против ингибитора пути тканевого фактора
CA2800919C (en) 2010-06-07 2019-01-15 Amgen Inc. Drug delivery device
EP2579895A4 (en) 2010-06-14 2013-12-18 Vaccinex Inc ANTI-VEGF ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2012003338A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET
SG188190A1 (en) 2010-08-03 2013-04-30 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP2013539364A (ja) 2010-08-26 2013-10-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
US20140057908A1 (en) 2010-09-27 2014-02-27 Exelixis, Inc. Method of Treating Cancer
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2853542A1 (en) 2010-11-24 2015-04-01 Glaxo Group Limited Multispecific antigen binding proteins targeting HGF
JP2014500275A (ja) 2010-12-06 2014-01-09 フォリカ，インコーポレイテッド 禿頭症を治療するため、および毛髪の成長を促進するための方法
ES2489475T3 (es) * 2011-03-18 2014-09-02 Metheresis Translational Research Sa Inhibidores MET para potenciar la eficacia de la radioterapia
WO2012135315A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Amgen Inc. Vial adapter and system
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
AU2012245231B2 (en) 2011-04-20 2016-10-13 Amgen Inc. Autoinjector apparatus
ES2748038T3 (es) 2011-07-01 2020-03-12 Ngm Biopharmaceuticals Inc Composiciones, usos y métodos para el tratamiento de trastornos y enfermedades metabólicos
AU2012304362A1 (en) 2011-09-09 2014-03-06 Amgen Inc. Use of c-Met protein for predicting the efficacy of anti-hepatocyte growth factor ("HGF") antibodies in esophageal and gastric cancer patients
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HRP20220250T1 (hr) 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi i nukleinske kiseline, te njihove uporabe
EA030868B1 (ru) 2011-10-14 2018-10-31 Эмджен Инк. Инжектор и способ его сборки
SI2791160T1 (sl) 2011-12-16 2022-07-29 Modernatx, Inc. Sestave modificirane MRNA
US9120870B2 (en) 2011-12-30 2015-09-01 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-13 and IL-17
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
AU2013243952A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
WO2013152252A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 OSI Pharmaceuticals, LLC Combination anti-cancer therapy
EP2847219A1 (en) 2012-05-07 2015-03-18 Amgen Inc. Anti-erythropoietin antibodies
US20140004121A1 (en) 2012-06-27 2014-01-02 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
WO2014058389A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Agency For Science, Technology And Research Optimised heavy chain and light chain signal peptides for the production of recombinant antibody therapeutics
MY171664A (en) 2012-11-01 2019-10-22 Abbvie Inc Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20170275367A1 (en) 2012-11-21 2017-09-28 Janssen Biotech, Inc. Bispecific EGFR/C-Met Antibodies
EP2922872B1 (en) * 2012-11-21 2018-10-10 Janssen Biotech, Inc. Bispecific egfr/c-met antibodies
US9695228B2 (en) * 2012-11-21 2017-07-04 Janssen Biotech, Inc. EGFR and c-Met fibronectin type III domain binding molecules
EP3072548B1 (en) 2012-11-21 2019-03-06 Amgen, Inc Drug delivery device
SMT202200337T1 (it) 2012-11-26 2022-09-14 Modernatx Inc Rna modificato al livello del terminale
EP2925775B1 (en) 2012-11-28 2020-09-16 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of metabolic disorders and diseases
US9290557B2 (en) 2012-11-28 2016-03-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides
EP2938740B1 (en) 2012-12-27 2022-04-20 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Chimeric fgf19 peptides for use in treating bile acid disorders
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
WO2014108854A1 (en) 2013-01-09 2014-07-17 Fusimab Ltd. Monospecific anti-hgf and anti-ang2 antibodies and bispecific anti-hgf/anti-ang2 antibodies
AU2014249458A1 (en) 2013-03-11 2015-09-24 Amgen Inc. Protein formulations
TW201438737A (zh) * 2013-03-14 2014-10-16 Alder Biopharmaceuticals Inc Ｈｇｆ抗體之治療用途
US9481725B2 (en) 2013-03-14 2016-11-01 Alderbio Holdings, Llc Antibodies to HGF and compositions containing
EP3593839A1 (en) 2013-03-15 2020-01-15 Amgen Inc. Drug cassette
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
CN105142695B (zh) 2013-03-15 2020-06-02 安进公司 身体轮廓可调适的自动注射器装置
ES2973257T3 (es) 2013-03-15 2024-06-19 Amgen Inc Casete de fármaco, autoinyector y sistema de autoinyector
AU2014227732A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 beta and IL-17
CA2897825C (en) 2013-03-22 2022-05-24 Scott R. Gibson Injector and method of assembly
KR102060540B1 (ko) 2013-04-03 2019-12-31 삼성전자주식회사 항 c-Met 항체 및 항 Ang2 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
WO2015031578A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Abbvie Inc. Hgf assay
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US10323076B2 (en) 2013-10-03 2019-06-18 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US11097055B2 (en) 2013-10-24 2021-08-24 Amgen Inc. Injector and method of assembly
AU2014340174B2 (en) 2013-10-24 2019-09-12 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
US10994112B2 (en) 2014-02-05 2021-05-04 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
EP3122900A1 (en) 2014-03-24 2017-02-01 F. Hoffmann-La Roche AG Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
CA3193070A1 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Amgen Inc. Autoinjector with shock reducing elements
US10398758B2 (en) 2014-05-28 2019-09-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants of FGF19 polypeptides and uses thereof for the treatment of hyperglycemic conditions
JP6817074B2 (ja) 2014-06-03 2021-01-20 アムジエン・インコーポレーテツド 制御可能な薬物送達システム及び使用方法
WO2015195509A2 (en) 2014-06-16 2015-12-23 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and uses for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
JP6766040B2 (ja) 2014-10-14 2020-10-07 アムジエン・インコーポレーテツド 視覚および可聴インジケータを備える薬剤注射装置
IL251834B2 (en) 2014-10-23 2023-09-01 Ngm Biopharmaceuticals Inc Pharmaceutical compositions containing peptide variants and methods of using them
US10434144B2 (en) 2014-11-07 2019-10-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of bile acid-related disorders and prediction of clinical sensitivity to treatment of bile acid-related disorders
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3848072A1 (en) 2014-12-19 2021-07-14 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
JP2017538512A (ja) 2014-12-19 2017-12-28 アムジエン・インコーポレーテツド ライブボタンまたはユーザインタフェースフィールドを含む薬物送達装置
WO2016133947A1 (en) 2015-02-17 2016-08-25 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
ES2905870T3 (es) 2015-02-27 2022-04-12 Amgen Inc Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja
EP4086264B1 (en) 2015-05-18 2023-10-25 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs having increased bioavailability
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
CA2993659A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for treatment of cancer
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
CA2997444A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Amgen Inc. Asgr inhibitors for reducing cholesterol levels
CN106589128B (zh) * 2015-10-20 2020-03-03 天津医科大学 肝癌标志物单克隆抗体的制备及其应用
KR102791773B1 (ko) 2015-10-30 2025-04-03 갤럭시 바이오테크, 엘엘씨 사멸 수용체 4 및 사멸 수용체 5에 결합하는 매우 강력한 항체
CN106674350B (zh) * 2015-11-09 2020-03-03 天津医科大学 肝癌标志物单链抗体的制备及其应用
ES2871036T3 (es) 2015-11-09 2021-10-28 Ngm Biopharmaceuticals Inc Método para el tratamiento de trastornos relacionados con ácidos biliares
EP3386573B1 (en) 2015-12-09 2019-10-02 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
US11200298B2 (en) 2016-03-15 2021-12-14 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
WO2017189089A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
EP3455142B1 (en) 2016-05-13 2023-08-09 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
CN109563144B (zh) * 2016-06-01 2023-03-28 雅斯娜 化合物
WO2017209899A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
US20190328965A1 (en) 2016-08-17 2019-10-31 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
WO2018039557A1 (en) 2016-08-26 2018-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating fibroblast growth factor 19-mediated cancers and tumors
WO2018081234A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 Amgen Inc. On-body injector
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
MX2019008432A (es) 2017-01-17 2019-11-18 Amgen Inc Dispositivos de inyeccion y metodos relacionados de uso y ensamblaje.
CA3052204A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
EP3582825A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
JP2020508803A (ja) 2017-03-06 2020-03-26 アムジエン・インコーポレーテツド 作動防止特徴部を備える薬物送達デバイス
AU2018230546B2 (en) 2017-03-07 2024-03-21 Amgen Inc. Needle insertion by overpressure
CA3052310A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
KR20240042212A (ko) 2017-03-28 2024-04-01 암겐 인코포레이티드 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법
PL3601367T3 (pl) 2017-03-30 2025-03-31 The University Of Queensland Cząsteczki chimeryczne i ich zastosowania
WO2018226515A1 (en) 2017-06-08 2018-12-13 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
AU2018282077B2 (en) 2017-06-08 2023-11-23 Amgen Inc. Torque driven drug delivery device
JP7195276B2 (ja) 2017-06-22 2022-12-23 アムジエン・インコーポレーテツド デバイス起動による衝突／衝撃の低減
EP3641861A1 (en) 2017-06-23 2020-04-29 Amgen Inc. Electronic drug delivery device comprising a cap activated by a switch assembly
WO2019014014A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Amgen Inc. NEEDLE INSERTION-RETRACTING SYSTEM HAVING DOUBLE TORSION SPRING SYSTEM
IL271173B2 (en) 2017-07-21 2024-04-01 Amgen Inc Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
MA49676A (fr) 2017-07-25 2020-06-03 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament doté d'un système d'accès à un récipient et procédé d'assemblage associé
EP4085942A1 (en) 2017-07-25 2022-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
WO2019032482A2 (en) 2017-08-09 2019-02-14 Amgen Inc. HYDRAULIC-PNEUMATIC PRESSURE CHAMBER DELIVERY SYSTEM
WO2019036181A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Amgen Inc. BODY INJECTOR WITH STERILE ADHESIVE PATCH
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
JP7196160B2 (ja) 2017-09-12 2022-12-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン
EP3691717B1 (en) 2017-10-04 2023-02-08 Amgen Inc. Flow adapter for drug delivery device
EP3691716B1 (en) 2017-10-06 2023-11-29 Amgen Inc. Drug delivery device with interlock assembly and related method of assembly
EP3694578B1 (en) 2017-10-09 2025-09-24 Amgen Inc. Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly
EP3703779A1 (en) 2017-11-03 2020-09-09 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
MA50569A (fr) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc Ensembles de remplissage-finition et procédés associés
US20200261648A1 (en) 2017-11-06 2020-08-20 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
EP3706826A1 (en) 2017-11-10 2020-09-16 Amgen Inc. Plungers for drug delivery devices
SG11202003004RA (en) 2017-11-16 2020-04-29 Amgen Inc Door latch mechanism for drug delivery device
MA50903A (fr) 2017-11-16 2021-05-12 Amgen Inc Auto-injecteur avec détection de décrochage et de point d'extrémité
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
US12303677B2 (en) 2018-07-24 2025-05-20 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation
WO2020023451A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
CA3103681A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
CA3103105A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
WO2020068623A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
IL281469B2 (en) 2018-09-28 2024-08-01 Amgen Inc Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
JP2022503983A (ja) 2018-10-02 2022-01-12 アムジエン・インコーポレーテツド 内力伝達を伴う薬物送達用の注入システム
EP3860686A1 (en) 2018-10-05 2021-08-11 Amgen Inc. Drug delivery device having dose indicator
KR102848295B1 (ko) 2018-10-15 2025-08-20 암젠 인크 댐핑 메커니즘을 갖는 약물 전달 장치
EA202191038A1 (ru) 2018-10-15 2021-07-06 Эмджен Инк. Способ платформенной сборки для устройства доставки лекарственного средства
MA54057A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament
EP3873566B1 (en) 2018-11-01 2024-11-27 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
CA3119807A1 (en) 2018-12-04 2020-06-11 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Cdk9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
US11793802B2 (en) 2019-03-20 2023-10-24 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure
MX2021012557A (es) 2019-04-24 2021-11-12 Amgen Inc Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas.
US20220227888A1 (en) 2019-06-07 2022-07-21 Amgen Inc. Bispecific binding constructs with selectively cleavable linkers
EP3772518A1 (en) * 2019-08-07 2021-02-10 Merus N.V. Modified human variable domains
JP2022543555A (ja) 2019-08-12 2022-10-13 インテアールエヌエー テクノロジーズ ビー．ヴイ． ｍｉＲＮＡ－１９３ａに関する新たな処置
EP4017560A2 (en) 2019-08-23 2022-06-29 Amgen, Inc Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
AU2021227002A1 (en) 2020-02-28 2022-09-15 Interna Technologies B.V. miRNA-193a for promoting immunogenic cell death
US20230203198A1 (en) 2020-06-04 2023-06-29 Amgen Inc. Bispecific binding constructs
AU2021393456A1 (en) 2020-12-03 2023-06-29 Amgen Inc. Immunoglobuline constructs with multiple binding domains
WO2022192661A1 (en) * 2021-03-12 2022-09-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Sars-cov-2 neutralizing antibodies and uses thereof
BR112023024278A2 (pt) 2021-05-21 2024-01-30 Amgen Inc Método de otimizar uma receita de enchimento para um recipiente de fármacos
WO2024258870A2 (en) 2023-06-12 2024-12-19 Amgen Inc. Lymphotoxin beta receptor agonist binding proteins

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6232456B1 (en) * 1997-10-06 2001-05-15 Abbott Laboratories Serine protease reagents and methods useful for detecting and treating diseases of the prostate

Family Cites Families (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
EP0088046B1 (de) 1982-02-17 1987-12-09 Ciba-Geigy Ag Lipide in wässriger Phase
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0281604B1 (en) 1986-09-02 1993-03-31 Enzon Labs Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
JPS6427491A (en) 1987-07-14 1989-01-30 Yasushi Daikuhara Monoclonal antibody
US5520914A (en) 1987-08-06 1996-05-28 President And Fellows Of Harvard College Antibodies to angiogenin: immunotherapeutic agents
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
JP3030312B2 (ja) * 1988-12-12 2000-04-10 敏一 中村 成熟肝実質細胞増殖因子（ｉ）
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5086164A (en) 1989-01-10 1992-02-04 Repligen Corporation Novel methods and compositions for treatment of angiogenic diseases
JP2762522B2 (ja) 1989-03-06 1998-06-04 藤沢薬品工業株式会社 血管新生阻害剤
JPH02240100A (ja) * 1989-03-15 1990-09-25 Takara Shuzo Co Ltd 新規ポリペプチド
AU648505B2 (en) 1989-05-19 1994-04-28 Amgen, Inc. Metalloproteinase inhibitor
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5362716A (en) 1989-12-27 1994-11-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Methods for stimulating hematopoietic progenitors using hepatocyte growth factor and lymphokines
US5871959A (en) 1989-12-27 1999-02-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of producing hepatocycte growth factor/scatter factor and related cell lines
GB9003621D0 (en) 1990-02-16 1990-04-11 Imp Cancer Res Tech Protein factor
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
GB9009548D0 (en) 1990-04-27 1990-06-20 Celltech Ltd Chimeric antibody and method
EP0461560B1 (en) 1990-06-11 1998-11-18 Toshikazu Nakamura Recombinant human hepatocyte growth factor and method for production thereof
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5821223A (en) 1990-09-14 1998-10-13 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of stimulating cell growth with a novel broad spectrum human lung fibroblast-derived mitogen
EP1069137A1 (en) 1990-09-24 2001-01-17 W.R. Grace & Co.-Conn. Peptides having thrombospondin-like activity and their therapeutic use
US5268384A (en) 1990-11-21 1993-12-07 Galardy Richard E Inhibition of angiogenesis by synthetic matrix metalloprotease inhibitors
US5892112A (en) 1990-11-21 1999-04-06 Glycomed Incorporated Process for preparing synthetic matrix metalloprotease inhibitors
WO1992010210A1 (en) 1990-12-14 1992-06-25 E.I. Du Pont De Nemours And Company Inhibition of angiogenesis by il-1
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
ATE249840T1 (de) 1991-12-13 2003-10-15 Xoma Corp Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
US5521184A (en) 1992-04-03 1996-05-28 Ciba-Geigy Corporation Pyrimidine derivatives and processes for the preparation thereof
US5684136A (en) 1992-05-18 1997-11-04 Genentech, Inc. Chimeric hepatocyte growth factor (HGF) ligand variants
DE69334159D1 (de) 1992-09-18 2007-09-13 Us Gov Health & Human Serv Medizinische Verwendung eines Antikörpers oder eines Antikörperfragments gegen die extrazelluläre Domäne von Met zur Prevention von Metastasen
US6066718A (en) 1992-09-25 2000-05-23 Novartis Corporation Reshaped monoclonal antibodies against an immunoglobulin isotype
NZ258697A (en) 1992-11-13 1996-03-26 Immunex Corp Elk-l polypeptide, coding sequence and vector therefor
US5629327A (en) 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
AU672489B2 (en) 1993-03-23 1996-10-03 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Hepatic parenchymal cell growth substance
US5516658A (en) 1993-08-20 1996-05-14 Immunex Corporation DNA encoding cytokines that bind the cell surface receptor hek
US5837676A (en) 1993-10-18 1998-11-17 Long Island Jewish Medical Center Use of scatter factor to enhance angiogenesis
US6498144B1 (en) 1993-10-18 2002-12-24 North Shore - Long Island Jewish Research Institute Use of scatter factor to enhance angiogenesis
US5700823A (en) 1994-01-07 1997-12-23 Sugen, Inc. Treatment of platelet derived growth factor related disorders such as cancers
US5429746A (en) 1994-02-22 1995-07-04 Smith Kline Beecham Corporation Antibody purification
EP0756627A1 (en) 1994-04-15 1997-02-05 Amgen Inc. Hek5, hek7, hek8, hek11, new eph-like receptor protein tyrosine kinases
US5707624A (en) 1994-06-03 1998-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of Kaposi's sarcoma by inhibition of scatter factor
US6303769B1 (en) 1994-07-08 2001-10-16 Immunex Corporation Lerk-5 dna
US5919905A (en) 1994-10-05 1999-07-06 Immunex Corporation Cytokine designated LERK-6
US5814464A (en) 1994-10-07 1998-09-29 Regeneron Pharma Nucleic acids encoding TIE-2 ligand-2
US6057124A (en) 1995-01-27 2000-05-02 Amgen Inc. Nucleic acids encoding ligands for HEK4 receptors
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
US5686292A (en) 1995-06-02 1997-11-11 Genentech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies and uses thereof
US6214344B1 (en) 1995-06-02 2001-04-10 Genetech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonists and uses thereof
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
DE19534177A1 (de) 1995-09-15 1997-03-20 Merck Patent Gmbh Cyclische Adhäsionsinhibitoren
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
US5827673A (en) 1996-08-13 1998-10-27 Akira Matsumori Method of detecting myocardial infarction
WO1998019696A1 (en) 1996-11-05 1998-05-14 Smithkline Beecham Corporation Hepatocyte growth factor antagonists
EP1500329B1 (en) 1996-12-03 2012-03-21 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that specifically bind human TNF alpha
CO4950519A1 (es) 1997-02-13 2000-09-01 Novartis Ag Ftalazinas, preparaciones farmaceuticas que las comprenden y proceso para su preparacion
US6133426A (en) 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
US20020032315A1 (en) * 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
CA2205096C (en) * 1997-05-09 2001-10-09 Ibm Canada Limited-Ibm Canada Limitee A system for remote debugging of client/server applications
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
GB9800569D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
EP1066286B1 (en) 1998-03-04 2009-04-29 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclo-substituted imidazopyrazine protein tyrosine kinase inhibitors
WO1999046291A1 (en) 1998-03-12 1999-09-16 Shanghai Second Medical University A human glia maturation factor (gmf) beta homolog gene (cbfboe11)
MXPA00009440A (es) 1998-03-26 2003-04-22 Long Island Jewish Medical Ct Uso de factor de dispersion para mejorar angiogenesis.
KR20010043323A (ko) 1998-05-06 2001-05-25 제넨테크, 인크. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법
CO5031249A1 (es) 1998-05-29 2001-04-27 Sugen Inc Pirrol substituido-2-indolinonas inhibidoras de proteinci-nasas
UA60365C2 (uk) 1998-06-04 2003-10-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні ізотіазолу, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання у ссавця
EP1097147A4 (en) 1998-07-10 2001-11-21 Merck & Co Inc NEW ANGIOGENESIS INHIBITORS
WO2000012560A1 (en) 1998-08-28 2000-03-09 Dendreon Corporation Selective apoptosis of neoplastic cells by an hla-dr specific monoclonal antibody
AU760020B2 (en) 1998-08-31 2003-05-08 Merck & Co., Inc. Novel angiogenesis inhibitors
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
ATE556713T1 (de) 1999-01-13 2012-05-15 Bayer Healthcare Llc Omega-carboxyarylsubstituierte-diphenyl- harnstoffe als p38-kinasehemmer
CA2366857C (en) 1999-03-30 2010-12-14 Novartis Ag Phthalazine derivatives for treating inflammatory diseases
US6521424B2 (en) 1999-06-07 2003-02-18 Immunex Corporation Recombinant expression of Tek antagonists
PT1187918E (pt) 1999-06-07 2006-08-31 Immunex Corp Antagonistas de tek
KR100881105B1 (ko) 1999-11-05 2009-02-02 아스트라제네카 아베 Ｖｅｇｆ 억제제로서의 퀴나졸린 유도체
WO2001034650A1 (en) * 1999-11-09 2001-05-17 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Heatlh And Human Services Hgf-sf monoclonal antibody combinations
PT1233943E (pt) 1999-11-24 2011-09-01 Sugen Inc Formulações para agentes farmacêuticos ionizáveis como ácidos livres ou bases livres
US6515004B1 (en) 1999-12-15 2003-02-04 Bristol-Myers Squibb Company N-[5-[[[5-alkyl-2-oxazolyl]methyl]thio]-2-thiazolyl]-carboxamide inhibitors of cyclin dependent kinases
US6727225B2 (en) 1999-12-20 2004-04-27 Immunex Corporation TWEAK receptor
US6800604B2 (en) 2000-02-11 2004-10-05 Genentech, Inc. Polypeptides that inhibit human serum-induced cleavage of hepatocyte growth factor
AU4721901A (en) 2000-02-25 2001-09-03 Immunex Corp Integrin antagonists
WO2001068707A1 (en) 2000-03-13 2001-09-20 Eli Lilly And Company Human hepatocyte growth factor activator inhibitor homologue
GB0006398D0 (en) * 2000-03-16 2000-05-03 Novartis Ag Organic compounds
CA2404479A1 (en) 2000-03-30 2001-10-11 University Of Connecticut Hybrid cytokine of il-7 and .beta.-chain of hepatocyte growth factor
AU5943201A (en) 2000-05-03 2001-11-12 Amgen Inc Modified peptides as therapeutic agents
JP3597140B2 (ja) 2000-05-18 2004-12-02 日本たばこ産業株式会社 副刺激伝達分子ａｉｌｉｍに対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
EP1355921A2 (en) 2000-06-29 2003-10-29 North Shore-Long Island Jewish Health System Modulators of cellular proliferation and angiogenesis, methods for use and identification thereof
US6902734B2 (en) * 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
US6630500B2 (en) 2000-08-25 2003-10-07 Cephalon, Inc. Selected fused pyrrolocarbazoles
ATE430742T1 (de) 2000-12-21 2009-05-15 Smithkline Beecham Corp Pyrimidinamine als angiogenesemodulatoren
US6995162B2 (en) 2001-01-12 2006-02-07 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
US7105682B2 (en) 2001-01-12 2006-09-12 Amgen Inc. Substituted amine derivatives and methods of use
US6878714B2 (en) 2001-01-12 2005-04-12 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
US7102009B2 (en) 2001-01-12 2006-09-05 Amgen Inc. Substituted amine derivatives and methods of use
US20020147198A1 (en) 2001-01-12 2002-10-10 Guoqing Chen Substituted arylamine derivatives and methods of use
US7521053B2 (en) 2001-10-11 2009-04-21 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
US7138370B2 (en) 2001-10-11 2006-11-21 Amgen Inc. Specific binding agents of human angiopoietin-2
US7205275B2 (en) 2001-10-11 2007-04-17 Amgen Inc. Methods of treatment using specific binding agents of human angiopoietin-2
JP2005527488A (ja) 2001-12-27 2005-09-15 バン アンデル リサーチ インスティチュート Ｍｅｔを発現し、肝細胞増殖因子と結合する腫瘍のモノクローナル抗体画像化および治療
CN1376923A (zh) * 2002-04-08 2002-10-30 刘友华 肝细胞生长因子的测定方法
US7307088B2 (en) 2002-07-09 2007-12-11 Amgen Inc. Substituted anthranilic amide derivatives and methods of use
TWI329112B (en) 2002-07-19 2010-08-21 Bristol Myers Squibb Co Novel inhibitors of kinases
US7220410B2 (en) 2003-04-18 2007-05-22 Galaxy Biotech, Llc Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
US20040208876A1 (en) 2003-04-18 2004-10-21 Kim Kyung Jin Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
ES2323425T3 (es) * 2003-06-06 2009-07-15 Genentech, Inc. Modulacion de la interaccion entre la cadena beta de hgf y c-met.
TW201319088A (zh) 2003-07-18 2013-05-16 Amgen Inc 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
AR059922A1 (es) 2006-04-01 2008-05-07 Galaxy Biotech Llc Anticuerpos monoclonales humanizados para el factor de crecimiento de hepatocitos
PL2027156T3 (pl) 2006-06-02 2011-06-30 Aveo Pharmaceuticals Inc Białka wiążące czynnik wzrostowy hapatocytów (HGF)
US9300829B2 (en) 2014-04-04 2016-03-29 Canon Kabushiki Kaisha Image reading apparatus and correction method thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6232456B1 (en) * 1997-10-06 2001-05-15 Abbott Laboratories Serine protease reagents and methods useful for detecting and treating diseases of the prostate

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Manuela Zaccolo, Dimerization of Fab fragments enables ready screening of phage antibodies that affect hepatocyte growth factor/scatter factor activity on target cells, Eur J Immunol. 1997 Mar;27(3):618-23. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103880955A (zh) 2014-06-25
SG131943A1 (en) 2007-05-28
EA200600233A1 (ru) 2007-04-27
TW200524958A (en) 2005-08-01
EA015363B1 (ru) 2011-06-30
NO20060600L (no) 2006-04-18
KR101254371B1 (ko) 2013-05-02
US20140154243A1 (en) 2014-06-05
JP2007530003A (ja) 2007-11-01
CN101124240B (zh) 2013-12-18
EP1648998A4 (en) 2007-11-14
KR20060054321A (ko) 2006-05-22
US8609090B2 (en) 2013-12-17
CN103755807A (zh) 2014-04-30
WO2005017107A3 (en) 2007-03-01
US20050118643A1 (en) 2005-06-02
AR042955A1 (es) 2005-07-13
DK1648998T3 (en) 2015-01-05
TW201319088A (zh) 2013-05-16
ZA200601353B (en) 2008-11-26
EP2341067A1 (en) 2011-07-06
RS20050975A (sr) 2008-06-05
JP2012235783A (ja) 2012-12-06
AU2004265595B2 (en) 2011-12-08
HK1087437A1 (zh) 2006-10-13
HK1199266A1 (zh) 2015-06-26
BRPI0412885A (pt) 2006-10-03
PL1648998T3 (pl) 2015-03-31
EP1648998A2 (en) 2006-04-26
KR20110129988A (ko) 2011-12-02
WO2005017107A2 (en) 2005-02-24
EP1648998B1 (en) 2014-10-01
ZA200803050B (en) 2010-08-25
AR086510A2 (es) 2013-12-18
ES2523837T3 (es) 2014-12-01
JP2012051901A (ja) 2012-03-15
JP5105874B2 (ja) 2012-12-26
JP5543315B2 (ja) 2014-07-09
MEP31408A (en) 2010-10-10
RS53476B (sr) 2014-12-31
CA2532027A1 (en) 2005-02-24
CA2532027C (en) 2016-06-14
JP5750021B2 (ja) 2015-07-15
MXPA06000508A (es) 2006-04-05
AU2004265595A1 (en) 2005-02-24
TWI476206B (zh) 2015-03-11
TW201319087A (zh) 2013-05-16
SI1648998T1 (sl) 2015-01-30
CN101124240A (zh) 2008-02-13
JP2011079837A (ja) 2011-04-21
PT1648998E (pt) 2014-11-04
NZ544797A (en) 2011-04-29
AR086511A2 (es) 2013-12-18
IL172906A0 (en) 2006-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI395756B (zh) 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
JP5718640B2 (ja) ヒトｃ−ｆｍｓ抗原結合性タンパク質
US7521048B2 (en) TRAIL receptor-2 polypeptides and antibodies
AU2011250879A1 (en) Specific binding agents to hepatocyte growth factor
HK1087437B (zh) 獨有的肝細胞生長因子黏合劑
HK1143172B (zh) 人c-fms抗原結合蛋白
HK1143172A (zh) 人c-fms抗原結合蛋白
HK1185086A (zh) 人類c-fms抗原結合蛋白
HK1185087A (zh) 人類c-fms抗原結合蛋白

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees