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TW201731528A - 用於癌症治療之單獨fgfr2抑制劑或與免疫刺激劑組合 - Google Patents

用於癌症治療之單獨fgfr2抑制劑或與免疫刺激劑組合 Download PDF

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TW201731528A
TW201731528A TW105138259A TW105138259A TW201731528A TW 201731528 A TW201731528 A TW 201731528A TW 105138259 A TW105138259 A TW 105138259A TW 105138259 A TW105138259 A TW 105138259A TW 201731528 A TW201731528 A TW 201731528A
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珍妮 包爾斯
薩文多 沛藍夏
羅伯特 希可斯基
瑪吉德 勾得西
卡提克 克里斯南
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戊瑞治療有限公司
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Abstract

本發明提供纖維母細胞生長因子受體2(fibroblast growth factor receptor；FGFR2)抑制劑在癌症治療中之用途，在某些情形下其係與諸如PD-1或PD-L1之抑制劑等免疫刺激劑組合。在一些實施例中，FGFR2抑制劑包含FGFR2抗體或FGFR2細胞外結構域(extracellular domain；ECD)多肽、或包含FGFR2 ECD及融合配偶體之FGFR2 ECD融合分子。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑包含抗PD-1抗體，諸如結合至PD-1或PD-L1且抑制該等蛋白質之間之相互作用之抗體，以及PD-1融合蛋白或多肽。

Description

用於癌症治療之單獨FGFR2抑制劑或與免疫刺激劑組合
本申請案係關於纖維母細胞生長因子受體2(fibroblast growth factor receptor 2；FGFR2)抑制劑用於治療癌症之用途，在一些情形下係與免疫刺激劑(例如PD-1或PD-L1之抑制劑)組合。
纖維母細胞生長因子(FGF)家族成員結合至四個已知酪胺酸激酶受體，即纖維母細胞生長因子受體1-4(FGFR1-4)及其同種型，其中不同FGF結合不同FGFR至不同程度(Zhang等人，J.Biol.Chem.281：15694,2006)。人類FGFR2之蛋白質序列提供於(例如)GenBank Locus AF487553中。每一FGFR係由包含三個免疫球蛋白(Ig)樣結構域(D1、D2及D3)之細胞外結構域(ECD)、單一跨膜螺旋及細胞內催化性激酶結構域組成(Mohammadi等人，Cytokine Growth Factor Revs,16：107,2005)。FGF主要係經由受體之D2及D3中之區域結合至受體。在D1與D2之間之連接體中存在酸性胺基酸之鄰接延伸段，稱作「酸盒」(acid box；AB)。據信含有D1及AB之區域涉及受體的自體抑制作用，其藉由結合至配體得以減輕。
FGFR之特徵在於其mRNA之多個選擇式剪接，此導致各種同種型 (Ornitz等人，J.Biol.Chem.271：15292,1996；關於FGFR2及其同種型之序列，亦參見Swiss-Prot P21802及同種型P21802-1至-20)。應注意，存在含有所有三個Ig結構域(α同種型)或僅兩個Ig結構域D2及D3結構域而無D1(β同種型)之形式。在FGFR1、FGFR2及FGFR3中，所有形式皆含有D3之第一半(表示為IIIa)，但兩個替代外顯子可用於D3之第二半，從而導致IIIb及IIIc形式。對於FGFR2而言，該等形式分別表示為FGFR2-IIIb及FGFR2-IIIc(或僅FGFR2b及FGFR2c)；相應β形式表示為FGFR2(β)IIIb及FGFR2(β)IIIc。FGFR2之FGFR2-IIIb形式(亦表示為K-sam-II)係FGF1及KGF家族成員(FGF7、FGF10及FGF22)之高親和力受體，而FGFR2-IIIc(亦表示為K-sam-I)充分結合FGF1及FGF2，而不結合KGF家族成員(Miki等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：246,1992)。實際上，FGFR2-IIIb係KGF家族成員之唯一受體(Ornitz等人，1996，前文所引用文獻)且因此亦命名為KGFR。
FGFR及其同種型在各種組織中表現不同。FGFR2-IIIb(及FGFR1及FGFR3之IIIb形式)在上皮組織中表現，而FGFR2-IIIc在間質組織中表現(Duan等人，J.Biol.Chem.267：16076,1992；Ornitz等人，1996，前文所引用文獻)。該等受體之某些FGF配體具有相反表現型式。因此，KGF亞家族成員(包括FGF7(KGF)、FGF10及FGF22)僅結合至FGFR2-IIIb(Zhang等人，前文所引用文獻)且在間質組織中表現，因此可為上皮細胞之旁分泌效應物(Ornitz等人，1996，前文所引用文獻)。相比之下，FGF4亞家族成員FGF4-6結合至FGFR2-IIIc且在上皮及間質譜系中表現，因此可具有自分泌或旁分泌功能。由於FGFR2及其配體之同種型之表現型式，FGFR2在上皮-間質相互作用中起作用(Finch等人，Dev.Dyn. 203：223,1995)，因此，小鼠中之FGFR2-IIIb之剔除會導致嚴重胚胎缺陷及致死率並不令人驚訝(De Moerlooze等人，Development 127：483,2000)。
KGF(FGF7)及KGFR(FGFR2-IIIb)在許多胰臟癌中會過表現(Ishiwata等人，Am.J.Pathol.153：213,1998)，且其等共表現與較差預後相關(Cho等人，Am.J.Pathol.170：1964,2007)。在一大組子宮內膜(子宮)癌之12%中發現FGFR2基因之體細胞突變，且在若干測試情形下，其係腫瘤細胞存活所需(Dutt等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105：8713,2008)。在兩種腫瘤中，發現FGFR2突變係與Apert症候群相關之相同S252W取代。FGFR2之擴增及過表現與具有尤其差之預後之未分化、瀰漫型胃癌相關，且由小分子化合物抑制FGFR2活性會強效抑制該等癌細胞之增殖(Kunii等人，Cancer Res.68：2340,2008；Nakamura等人，Gastroenterol.131：1530,2006)。
FGFR2之抑制劑包括抗體及FGFR2 ECD結構域或FGFR2 ECD融合分子。舉例而言，美國專利第8,101,723 B2號闡述(例如)結合人類FGFR2-IIIb但不充分結合或不結合至FGFR2-IIIc且反之亦然之單株抗體。美國專利公開案第2015-0050273 A1號闡述結合至FGFR2-IIIb之某些岩藻糖基化抗體。美國專利公開案第US 2013-0324701 A1號闡述(例如)包含FGFR2-IIIc之細胞外結構域及融合配偶體之特定FGFR2 ECD融合分子。其他FGFR ECD融合分子闡述於美國專利第8,338,569 B2號中。
癌症之基因變化提供可介導抗腫瘤免疫性之抗原之多樣化。經由T細胞受體(TCR)之抗原識別啟動T細胞-反應，其會被介於活化與抑制性信號之間之平衡所調節。抑制性信號或「免疫檢查點」藉由防止自體免疫性在 正常組織中起重要作用。免疫檢查點蛋白之上調會使得癌症逃避抗腫瘤免疫性。兩種檢查點蛋白已為臨床癌症免疫治療劑之焦點，即細胞毒性T-淋巴球相關之抗原4(CTLA-4)及程式化細胞死亡蛋白質1(PD-1)。抗CTLA-4抗體及抗PD-1抗體已經批准用於治療轉移性黑色素瘤且目前在臨床試驗中用於其他癌症。針對PD-1之配體之抗PD-L1抗體目前亦在臨床研發中。
已報導，FGFR信號傳導之抑制可改善抗腫瘤免疫性並削弱乳癌之轉移。(例如，參見T.Ye等人，Breast Cancer Res.Treat.143：435-446(2014))。抗FGFR2抗體已在(例如)胃癌模型中進行測試。然而，尚未知共投與FGFR2抑制劑與免疫檢查點抑制劑(例如PD-1或PD-L1抑制劑)在腫瘤模型中是否可進一步改善治療。本文之發明者已展現，FGFR2抑制性抗體與PD-1抑制性抗體之組合在小鼠乳房腫瘤模型中展現至少加和效應。本發明者進一步展示，利用單獨FGFR2抑制性抗體之處理在小鼠乳房腫瘤模型中導致腫瘤組織中之PD-L1表現細胞、NK細胞、及CD3+、CD8+及CD4+ T細胞增加，且引起腫瘤組織中之淋巴樣細胞對骨髓細胞比率增加。另外，單獨給予之FGFR2抑制劑亦有益於人類膀胱癌個體。本文中的結果一起指示，FGFR2抑制劑單獨或與PD-1/PD-L1抑制劑組合可改變腫瘤微環境且因此可增強殺死腫瘤之免疫反應。
在一些實施例中，提供治療個體之癌症之方法，其包含向個體投與FGFR2抑制劑(例如抗FGFR2抗體或FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子)與至少一種免疫刺激劑之組合。在一些實施例中，免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑，例如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、PD-1融合分子或PD-1多肽。在一些實施例中，免疫刺激劑包含以下標題為「與其他免疫刺激 劑之組合」之章節中所述之試劑中之一或多者。在一些實施例中，FGFR2抑制劑係抗體。在一些實施例中，FGFR2抑制劑係識別FGFR2-IIIb之抗體。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體以低於與FGFR2-IIIb之親和力結合至FGFR2-IIIc或無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc。在一些實施例中，FGFR2抑制劑係FGFR2 ECD。在一些實施例中，FGFR2抑制劑係包含FGFR2 ECD及融合配偶體(例如Fc結構域、白蛋白或聚乙二醇(PEG))之FGFR2 ECD融合分子。在一些實施例中，若至少一種免疫刺激劑包含PD-1/PD-L1抑制劑，則PD-1/PD-L1抑制劑係抗體。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1多肽，而在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1融合分子。
在本文之方法及組合物之實施例之任一者中，PD-1/PD-L1抑制劑可具有以下特徵。在一些實施例中，抑制劑係包含選自尼沃魯單抗(nivolumab)、匹利珠單抗(pidilizumab)及派姆單抗(pembrolizumab)之抗體之重鏈及輕鏈CDR之抗PD-1抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體包含選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗之抗體之重鏈及輕鏈可變區。在一些實施例中，抗PD-1抗體選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含選自BMS-936559、MPDL3280A(阿替珠單抗(atezolizumab))、MEDI4736及MSB0010718C(阿維魯單抗(avelumab))之抗體之重鏈及輕鏈CDR。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含選自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C之抗體之重鏈及輕鏈可變區。在一些實施例中，抗PD-L1抗體選自BMS-936559、 MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係融合分子。在一些實施例中，融合分子係AMP-224。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1多肽，例如AUR-012。
在涉及抗PD-1抗體之本文所述組合物或方法中之任一者中，抗PD-1抗體可為人類化抗體。在本文所述組合物或方法中之任一者中，抗PD-1抗體可選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。在本文所述組合物或方法中之任一者中，抗PD-1抗體可為嵌合抗體。在本文所述組合物或方法中之任一者中，抗PD-1抗體可選自IgA、IgG及IgD。在本文所述組合物或方法中之任一者中，抗PD-1抗體可為IgG。在本文所述方法之任一者中，抗體可為IgG1或IgG2。
在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抑制劑可具有以下特徵。在一些實施例中，抑制劑係FGFR2抗體。在一些實施例中，FGFR2抗體係FGFR2-IIIb抗體(本文中亦表示為αFGFR2b)。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體與FGFR2-IIIb結合之親和力高於FGFR2-IIIc，或另一選擇為，無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc。在一些實施例中，抗體抑制FGF2及/或FGF7與FGFR2之結合。
在一些實施例中，FGFR2抗體具有單株抗體GAL-FR21、GAL-FR22或GAL-FR23之重鏈及輕鏈超變區(HVR)H1、H2、H3、L1、L2及L3胺基酸序列，其闡述於美國專利第8,101,723 B2號中。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(ii)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(iii)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(v)包含SEQ ID NO：10之胺基 酸序列之HVR-L2；及(vi)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中重鏈可變結構域與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中輕鏈可變結構域與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈可變結構域與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，且輕鏈可變結構域與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中重鏈與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中輕鏈與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，且輕鏈與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列 之CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之CDR3；且輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之CDR1；(v)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之CDR2；及(vi)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之CDR3。
在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中重鏈可變結構域與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中輕鏈可變結構域與SEQ ID NO：43之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈可變結構域與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列，且輕鏈可變結構域與SEQ ID NO：43之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列。
在一些實施例中，FGFR2抗體係無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體在Asn297無岩藻糖。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含IgG1重鏈恆定區。在一些實施例中，與在Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列的抗體相比，無岩藻糖基化抗體在活體外及/或活體內具有增強之ADCC(抗體依賴性細胞細胞毒性)活性。在一些實施例中，與在位置Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列的抗體相比，無岩藻糖基化抗體具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，與對照相比(例如與不靶向FGFR2之對照抗體相比)，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中，無岩藻糖基化抗體能增加腫瘤組織中之 PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目。
在一些實施例中，FGFR2抑制劑係FGFR2 ECD，例如FGFR2 ECD融合分子。FGFR2 ECD融合分子可包含融合配偶體，例如Fc結構域、白蛋白或PEG。
在一些實施例中，且FGFR2抑制劑能結合至FGFR2以及具有活化突變(例如FGFR2-S252W突變，其在一些癌細胞中發現)之FGFR2突變體。
在涉及FGFR2抗體之本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可為人類化抗體。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可為嵌合抗體。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可選自IgA、IgG及IgD。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可為IgG。在本文所述方法中之任一者中，抗體可為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在一些實施例中，FGFR2抑制劑係以至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、20或30mg/kg或在由彼等劑量中之任兩者界定之範圍內之劑量投與。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑係以至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5或10mg/kg之劑量或以由該等劑量中之任兩者界定之範圍(例如以0.5-10mg/kg之範圍)投與。在一些實施例中，FGFR2抑制劑及至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)係每1、2、3、4或5週至少一次投與。
在一些實施例中，癌症會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在。在一些實施例中，FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學 (IHC)測定。舉例而言，過表現可藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號來測定。
在一些實施例中，癌症選自胃癌、乳癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌(包括胃食道接合部腺癌)及子宮內膜癌。在一些實施例中，癌症經選自手術、化學療法、放射療法或其組合的療法之後復發或進展。在一些實施例中，個體係PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者。在一些實施例中，個體先前接受PD-1/PD-L1抑制劑療法。
在一些實施例中，治療癌症之方法進一步包含投與至少一種選自以下之其他治療劑：鉑藥劑、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、ABRAXANE®、多西他賽(docetaxel)、吉西他濱(gemcitabine)、卡培他濱(capecitabine)、伊立替康(irinotecan)、泛艾黴素(epirubicin)、FOLFOX、FOLFIRI、甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶、絲裂黴素C(mitomycin C)及鹽酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride)。在一些實施例中，鉑藥劑選自順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)。在一些實施例中，治療癌症之方法進一步包含投與太平洋紫杉醇。在一些實施例中，治療癌症之方法進一步包含投與順鉑及/或5-FU。
在一些實施例中，FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑係同時或依序投與。在一些實施例中，FGFR2抑制劑及免疫刺激劑係同時投與。在一些實施例中，免疫刺激劑之一或多個劑量係在投與FGFR2抑制劑之前投與。在一些實施例中，在投與FGFR2抑制劑之前，個體接受免疫刺激劑療法之完整過程。在一些實施例中，FGFR2抑制劑係在免疫刺激劑療法之第二過程期間投與。在一些實施例中，在投與FGFR2抑制劑之前，個 體接受免疫刺激劑之至少一個、至少兩個、至少三個或至少四個劑量。在一些實施例中，免疫刺激劑之至少一個劑量係與FGFR2抑制劑同時投與。在一些實施例中，FGFR2抑制劑之一或多個劑量係在投與免疫刺激劑之前投與。在一些實施例中，在投與免疫刺激劑之前，個體可接受FGFR2抑制劑之至少兩個、至少三個或至少四個劑量。在一些實施例中，FGFR2抑制劑之至少一個劑量係與免疫刺激劑同時投與。
在一些實施例中，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中投與FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑引起腫瘤生長之加和或協同抑制。在一些實施例中，模型係乳癌模型。在一些實施例中，模型包含4T1細胞。
在上述方法實施例之任一者中，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中，在至少1週、10天或2週之時段中，FGFR2抑制劑與PD-1/PD-L1抑制劑之組合可將腫瘤生長抑制(例如)至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在上述方法實施例之任一者中，向個體投與FGFR2抑制劑與免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)之組合可例如在至少1個月、2個月、3個月、6個月或1年之時段內將個體中至少一個腫瘤之體積減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。
在上述方法實施例之任一者中，與對照相比，在異種移植物及/或同源腫瘤模型中投與FGFR2抑制劑可顯示NK細胞(例如NKp46+細胞)增加、PD-L1表現細胞增加、巨噬細胞(例如F480+巨噬細胞)增加、CD3+、CD8+及CD4+ T細胞中之一或多者增加、及/或腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率增加，持續至少1天、至少4天、至少1週、至少10天或至 少2週之時段，且增加(例如)至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在一些實施例中，小鼠同源腫瘤模型係4T1乳房腫瘤模型。在一些實施例中，對照係媒劑或係Ig-Fc分子或在模型中不抑制腫瘤生長之另一化合物。
本文亦提供增加患有癌症之個體之腫瘤組織中NK細胞、PD-L1陽性細胞、及/或CD3+、CD8+及/或CD8+ T細胞及/或巨噬細胞之數目的方法、及/或增加患有癌症之個體之腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞比率的方法，其包含向該個體投與有效量之FGFR2抑制性抗體，例如前述段落中所述之FGFR2抗體中之任一者。與對照相比，腫瘤組織中CD3+、CD8+及CD4+ T細胞中之一或多者增加及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率增加，持續至少1天、至少4天、至少1週、至少10天或至少2週之時段，且例如增加至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在一些實施例中，抗體可具有以下性質中之一或多者：(a)在位置Asn297無岩藻糖；(b)包含κ輕鏈恆定區；(c)包含IgG1重鏈恆定區；(d)與在位置Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列的抗體相比，具有增強之活體外ADCC活性；及(e)與在位置Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列之抗體相比，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，與對照相比(例如與不靶向FGFR2之對照抗體相比)，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中，無岩藻糖基化抗體能增加腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目。在一些實施例中，方法抑制腫瘤生長或減小個體之至少一個腫瘤之體積。在一些實施例中，個體患有乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色 素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌(包括胃食道接合部腺癌)及子宮內膜癌。在一些實施例中，方法進一步包含在投與FGFR2抗體後，自個體獲得至少一個腫瘤試樣及測定試樣中NK細胞、PD-L1陽性細胞、及/或CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目，且若一或多種彼等類型之細胞之數目相對於在FGFR2抗體投與之前之試樣或相對於來自個體之非腫瘤試樣增加，則向個體投與PD-1/PD-L1抑制劑。在一些實施例中，方法進一步包含在投與FGFR2抗體後，自個體獲得至少一個腫瘤試樣及測定試樣中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率，若比率相對於在FGFR2抗體投與之前之試樣或相對於來自個體之非腫瘤試樣增加，則向個體投與至少一種免疫刺激劑。該等方法之至少一種免疫刺激劑(例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑)可為前述段落中所述或下文標題為「與其他免疫刺激劑之組合」之章節中所述之彼等中之任一者。在一些實施例中，可向患者投與FGFR2抑制劑、PD-1/PD-L1抑制劑及至少一種其他免疫刺激劑之組合。
本文亦提供治療個體之癌症之方法，其包含向個體投與FGFR2抑制劑，且若個體經測定相對於對照(例如FGFR2抗體投與之前之試樣)或相對於來自個體之非腫瘤試樣具有增加之NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+ T細胞、CD8+ T細胞及/或CD4+ T細胞數目，則向個體投與至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。本文亦提供治療個體之癌症之方法，其包含向個體投與FGFR2抑制劑，且若個體經測定相對於對照(例如FGFR2抗體投與之前之試樣)或相對於來自個體之非腫瘤試樣具有增加之淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率，則向個體投與至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。在該等方法中，FGFR2抑制劑及免疫刺激劑 可為前述段落中或下文標題為「與其他免疫刺激劑之組合」之章節中所述之彼等中之任一者。此外，FGFR2及免疫刺激劑投與可根據前述方法，其中直至投與FGFR2抑制劑之至少一個劑量，才開始免疫刺激劑之投與。在該等情形下，用於測定NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞、淋巴及/或骨髓細胞之數目之測試可(例如)在已開始FGFR2抑制劑投與之後、但在開始FGFR2及免疫刺激劑組合投與之前執行。
亦提供包含本文所述FGFR2抑制劑中之任一者及本文所述免疫刺激劑中之任一者之組合物。在該等組台物中，FGFR2抑制劑及至少一種免疫刺激劑可位於單獨容器或同一容器之單獨隔室中，或另一選擇為，其可一起混合至同一容器或隔室中。該等組合物可用於(例如)治療癌症，例如上述癌症中之任一者。在一些實施例中，亦可包括使用說明書，例如用於治療癌症之使用說明書。
本文亦提供增加癌症個體之腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、巨噬細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞及CD8+ T細胞中之一或多者之數目的方法，其包含投與FGFR2抑制劑，其中抑制劑係具有增強之ADCC活性之FGFR2抗體。在一些該等實施例中，免疫刺激劑未與FGFR2抗體一起投與。在一些該等實施例中，與對照相比，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中，投與FGFR2抗體會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞、NK細胞、巨噬細胞、CD3+ T細胞、CD8+ T細胞及CD4+ T細胞中之一或多者之數目，及/或增加腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率。在一些該等實施例中，個體患有乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱 癌、膽道癌、食道癌(包括胃食道接合部腺癌)或子宮內膜癌，例如患有膀胱癌。
在上述方法中，FGFR2抗體可為FGFR2-IIIb抗體，其可具有以下性質中之一或多者：(a)以高於與FGFR2-IIIc之親和力結合至FGFR2-IIIb或無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc；(b)抑制FGF2及/或FGF7與人類FGFR2之結合；(c)在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中抑制人類腫瘤之生長；(d)誘導ADCC活性；(e)具有增強之ADCC活性；及(f)無岩藻糖基化。
在上述方法之一些實施例中，FGFR2抗體包含重鏈及輕鏈可變區，其中重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(ii)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(iii)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(v)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(vi)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些情形下，FGFR2抗體之重鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列，及/或FGFR2抗體之輕鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。在一些情形下，FGFR2抗體之重鏈可變結構域包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，及/或FGFR2抗體之輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。在一些情形下，FGFR2抗體之重鏈包含與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列，及/或FGFR2抗體之輕鏈包含與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。在一些情形下，FGFR2抗體之重鏈包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，及/或FGFR2抗體之輕鏈包 含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。在一些情形下，FGFR2抗體係嵌合、人類化或人類抗體。在一些實施例中，FGFR2抗體選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。在一些實施例中，FGFR2抗體具有以下性質中之一或多者：(a)在位置Asn297無岩藻糖；(b)包含κ輕鏈恆定區；(c)包含IgG1重鏈恆定區；(d)與在位置Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列的抗體相比，具有增強之活體外ADCC活性；及(e)與在位置Asn297經岩藻糖基化之具有相同胺基酸序列之抗體相比，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，與對照相比(例如與不靶向FGFR2之對照抗體相比)，在小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型中，無岩藻糖基化抗體能增加腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目。
在本發明內部分中所述之方法或用途中之任一者中，癌症先前測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在。或者，此部分中所述之方法或用途中之任一者，方法可進一步包含例如在投與FGFR2抑制劑之前測試個體之癌症，以確定癌症是否過表現FGFR2IIIb及/或確定FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增。在任一情形下，FGFR2IIIb可視情況藉由免疫組織化學(IHC)測定且FGFR2基因擴增可視情況藉由螢光原位雜交(FISH)、例如使用FGFR2基因座及上面定位有FGFR2基因之染色體10之著絲粒之探針來測定。在一些實施例中，至少10%腫瘤細胞、例如至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號指示FGFR2IIIb之過表現。在一些實施例中，FGFR2對染色體10之著絲粒(CEN10)比率大於或等於2指示FGFR2基因係經擴增。
在患者患有胃或膀胱癌之一些實施例中中，個體可能先前經測定以 具有以下特性中之一者，或另一選擇為治療方法包括確定患者關於FGFR2表現/基因擴增是否符合以下特性，且其可指示對治療之預計反應程度：a)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+；b)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+，以及FGFR2基因擴增；c)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+而無FGFR2基因擴增；d)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+或2+；e)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+；f)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為2+；g)在膀胱癌個體之情形下，H評分大於20；h)在膀胱癌個體之情形下，H評分為10-19；i)在膀胱癌個體之情形下，H評分小於10。
本揭示內容亦提供測定對上述FGFR2抑制劑、治療及用途中之任一者之反應的方法。該等方法可包含測試個體之癌症以確定癌症是否過表現FGFR2IIIb及/或確定FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增。FGFR2IIIb之過表現可視情況藉由免疫組織化學(IHC)測定且FGFR2基因擴增可視情況藉由螢光原位雜交(FISH)、例如使用FGFR2基因座及上面定位有FGFR2基因之染色體10之著絲粒之探針來測定。在一些實施例中，至少10%腫瘤細胞、例如至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號指示FGFR2IIIb之過表現。在一些實施例中，FGFR2對染色體10之著絲粒(CEN10)比率大於或等於2指示FGFR2基因係經擴增。
在患者患有胃或膀胱癌之一些實施例中，方法可包含確定患者之癌症是否屬以下類別中之一者，其可指示對治療或FGFR2抑制劑組合物之反應：a)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+；b)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+以及FGFR2基 因擴增；c)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+而無FGFR2基因擴增；d)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+或2+；e)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+；f)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為2+；g)在膀胱癌個體之情形下，H評分大於20；h)在膀胱癌個體之情形下，H評分為10-19；i)在膀胱癌個體之情形下，H評分小於10。
應理解，前述一般說明及以下詳細說明兩者皆僅為例示性及解釋性且並不限制申請專利範圍。本文所用之標題部分僅出於組織目的，且不應理解為限制所述標的物。本文所引用之所有參考文獻(包括專利申請案及公開案)之全文出於任一目的皆以引用方式併入本文中。
圖1a-1b顯示BALB/c小鼠中在用Ig-Fc對照、包含SEQ ID NO：6-11之重鏈及輕鏈HVR之無岩藻糖基化抗FGFR2b抗體(抗FGFR2)、或具有相同胺基酸序列只是在胺基酸位置297用Q取代N以消除效應物功能之抗FGFR2b抗體(抗FGFR2-N297Q)處理後植入乳房4T1腫瘤細胞之體積變化。(關於該突變之繪示，參見下文序列表中之SEQ ID NO：12)。如圖1a及圖1b二者中所示，僅抗FGFR2抗體顯示4T1腫瘤生長抑制。藉由單向ANOVA、之後Tukey多重比較測試測定統計顯著性(P<0.05=*；P<0.01=**；P<0.001=***；P<0.001=****)。
圖2a-2d顯示在第1天、即在經媒劑對照或抗FGFR2之單一劑量處理後1天(圖2a及2c)、或在第4天、即在第0天及第3天給予媒劑對照或抗FGFR2之兩次處理之第二次之後1天(圖2b及2d)，與細胞核之DAPI染色比較之存在NKp46(圖2a-2b)或PD-L1(圖2c-2d)之4T1腫瘤細胞之染色的結 果。每一影像係取自不同腫瘤且影像係使用10倍物鏡採集。與媒劑相比，在第1天及第4天二者用抗FGFR2處理增加4T1腫瘤中NKp46+細胞之數目(圖2a-2b)，且與媒劑相比，在第1天及第4天二者，增加PD-L1+細胞之數目(圖2c-2d)。
圖3顯示在第4天小鼠4T1腫瘤中抗FGFR2暴露對NKp46+細胞數目之效應的分析。與媒劑對照相比，用抗FGFR2處理增加腫瘤中之NK細胞，藉由t-測試，P<0.05。
圖4a-4b顯示雌性BALB/c小鼠中在用Ig-Fc對照、抗PD-1抗體、命名為抗FGFR2之無岩藻糖基化抗FGFR2b抗體處理後及在用抗PD-1抗體及無岩藻糖基化抗FGFR2b抗體之組合處理後植入乳房4T1腫瘤體積之變化。在每一圖中，腫瘤體積係平均值mm3 +/- SEM顯示。如圖4a中所示，直至第18天，與對照及單獨任何抗體相比，抗FGFR2(10mg/kg BIW)與抗PD1抗體(5mg/kg BIW)之組合引起4T1腫瘤生長之顯著抑制。如圖4b中所示，在腫瘤植入後18天，與Ig-Fc對照或抗PD1抗體相比，組合顯示4T1腫瘤中統計上顯著之生長抑制。藉由單向ANOVA、之後Tukey多重比較測試測定統計顯著性
圖5a-5b顯示在第1天(圖5a)、即在經媒劑對照或抗FGFR2或抗FGFR2 N297Q單一劑量處理後1天、或在第4天、即在第0天及第3天給予媒劑對照或抗FGFR2之兩次處理之第二次之後1天(圖5b)，存在NKp46細胞或PD-L1+細胞或CD3+ T細胞之4T1腫瘤細胞之染色的結果。每一影像係取自不同腫瘤且影像係使用10倍物鏡採集。與媒劑相比，在第1天及第4天二者，用抗FGFR2處理增加4T1腫瘤中NKp46+細胞之數目，且與媒劑相比，在第1天及第4天二者，增加PD-L1+細胞之數目，其中第4天可見之 細胞數目大於第1天。截至用抗FGFR2處理後第4天，CD3+ T細胞亦浸潤腫瘤。
圖6a-6b顯示在處理方案之第4天毗鄰細胞核之DAPI染色之存在CD3+及CD8+ T細胞(圖6a)或CD3+及CD4+ T細胞(圖6b)之4T1腫瘤細胞之染色的結果。影像顯示與媒劑對照及經抗FGFR2 N297Q處理相比，截至第4天，用抗FGFR2處理導致腫瘤組織中所有三種類型之T細胞之數目皆增加。
圖7a-7b分別顯示在第1天及第4天4T1同源腫瘤模型中腫瘤細胞之FACS分析的結果。CD3+ T細胞係針對每一處理組以CD45+活的單細胞之百分比提供。如圖中所示，抗FGFR2組顯示與媒劑對照及抗FGFR2 N297Q組二者相比，截至第4天，CD3+ T細胞之百分比增加。根據student T-測試，增加亦係統計上顯著的，如由符號**所指明，指示P0.01。
圖8a-8b分別顯示在第1天及第4天4T1同源腫瘤模型中腫瘤細胞之FACS分析的結果。CD8+ T細胞係針對每一處理組以CD45+活的單細胞之百分比提供。如圖中所示，抗FGFR2組顯示與媒劑對照及抗FGFR2 N297Q組二者相比，截至第4天，CD8+ T細胞之百分比增加。根據student T-測試，增加亦係統計上顯著的，如由符號**所指明，指示P0.01。
圖9a-9b分別顯示在第1天及第4天4T1同源腫瘤模型中腫瘤細胞之FACS分析的結果。CD4+ T細胞係針對每一處理組以CD45+活的單細胞之百分比提供。如圖中所示，抗FGFR2組顯示與媒劑對照及抗FGFR2 N297Q組二者相比，截至第4天，CD4+ T細胞之百分比增加。根據 student T-測試，增加亦係統計上顯著的，如由符號**所指明，指示P0.5。
圖10a-10c顯示第4天4T1同源腫瘤模型中腫瘤細胞之FACS分析的其他結果。在圖10a中，NKp46+細胞係針對每一處理組以CD45+活的單細胞之百分比提供。該圖顯示根據student T-測試，與其他組相比，抗FGFR2組中NKp46+細胞在統計上顯著增加，其中*表示P0.5，**表示P0.01，且***表示P0.001。圖10b及10c顯示與其他組相比，抗FGFR2組中骨髓細胞顯著減少，而淋巴樣細胞顯著增加，在用抗FGFR2處理後第4天，淋巴對骨髓比率增加，圖11顯示在用媒劑對照(頂部組)、抗FGFR2抗體(中間組)或抗FGFR2-N297Q抗體(底部組)處理後1或4天小鼠同源腫瘤模型中4T1腫瘤組織之染色。影像顯示利用抗F480抗體之染色以觀察F480+巨噬細胞至腫瘤組織中之浸潤及細胞核之相應DAPI染色。如自圖可見，與對照相比，在抗FGFR2處理後，F480+巨噬細胞遠更眾多(比較第4天之頂部及中間組)。在對照與抗FGFR2-N297Q組之間未觀察到差異(比較第4天之頂部及底部組)。影像係使用10倍物鏡採集。
圖12顯示在用各種抗體處理後4天小鼠同源腫瘤模型中4T1腫瘤組織之染色：對照抗體(Fc-G1抗體)(頂部組)、兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體-意欲減少NKp46細胞之數目(第二組)、抗FGFR2抗體(第三組)及抗FGFR2抗體加上抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之組合(底部組)。將組織分別用NKp46之試劑或DAPI染色以對細胞核進行染色(分別左側圖及右側圖)。抗缺乏唾液酸基之GM1抗體係以1.25mg/kg投用且抗FGFR2抗體係以10mg/kg投用。影像係使用10倍物鏡採集。如四個不同NKp46染色組中可 見，抗缺乏唾液酸基之GM1抗體耗盡腫瘤組織中之NKp46細胞，而抗FGFR2抗體增加NKp46細胞之數目。(比較頂部及第三左側圖)。與單獨抗缺乏唾液酸基之GM1抗體相比(但不與對照相比)，抗FGFR2抗體與抗缺乏唾液酸基之GM1抗體組合會增加NKp46細胞之數目，指示在NKp46細胞因競爭抗體之存在而耗盡時，抗FGFR2抗體可增加腫瘤組織中彼等細胞之數目。(比較頂部、第二及底部左側圖)。
圖13顯示在用對照抗體(Fc-G1抗體)(頂部組)、兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(第二組)、抗FGFR2抗體(第三組)及抗FGFR2抗體加上抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之組合(底部組)處理後4天小鼠同源腫瘤模型中4T1腫瘤組織之CD3+ T細胞之染色及細胞核之相應DAPI染色。抗缺乏唾液酸基之GM1抗體係以1.25mg/kg投用且抗FGFR2抗體係以10mg/kg投用。影像係使用10倍物鏡採集。如藉由比較該圖之四個左側組可見，用抗FGFR2抗體處理增加腫瘤組織中CD3+ T細胞之數目，但此時未與抗缺乏唾液酸基之GM1抗體一起投與。
圖14顯示在用對照抗體(Fc-G1抗體)(頂部組)、兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(第二組)、抗FGFR2抗體(第三組)及抗FGFR2抗體加上抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之組合(底部組)處理後4天小鼠同源腫瘤模型中4T1腫瘤組織之PD-L1陽性細胞之染色及細胞核之相應DAPI染色。抗缺乏唾液酸基之GM1抗體係以1.25mg/kg投用且抗FGFR2抗體係以10mg/kg投用。影像係使用10倍物鏡採集。如藉由比較該圖之四個左側組可見，用抗FGFR2抗體處理增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞之數目，但此時未與抗缺乏唾液酸基之GM1抗體一起投與。
圖15a及15b顯示在接種磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)對照、抗FGFR2抗 體、抗缺乏唾液酸基之GM1抗體或抗FGFR2及抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之組合後小鼠中4T1正位腫瘤之生長。圖15a顯示接種後12及15天之腫瘤體積。圖15b顯示接種後15天每一組中個別小鼠之腫瘤體積之圖。該圖顯示根據student T-測試，與對照及抗缺乏唾液酸基之GM1組相比，抗FGFR2組之腫瘤體積在統計上顯著減小，其中*表示P0.5且**表示P0.01，以及接受單獨抗FGFR2抗體之組與接受抗FGFR2與抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之組合之組之間之腫瘤體積在統計上顯著改變。
圖16a、b、c及d顯示在接種媒劑對照或抗FGFR2抗體後、直至接種腫瘤細胞後27天SCID小鼠中4T1正位腫瘤之生長。圖16a顯示隨時間之腫瘤體積。圖下方之箭頭顯示在接種後第12天及第15天投用媒劑或20mg/kg抗FGFR2抗體。星號(*)表示根據student T-測試以P0.5程度在媒劑或抗FGFR2抗體下腫瘤生長間存在統計上顯著差異。圖16b繪示接種後第19天每一組中個別小鼠之腫瘤體積。星號(*)表示根據student T-測試以P0.5程度兩個組中存在腫瘤生長之統計上顯著差異。圖16c繪示接種後第23天每一組中個別小鼠之腫瘤體積。星號(*)表示根據student T-測試以P0.5程度兩個組中存在腫瘤生長之統計上顯著差異。圖16d繪示接種後第27天每一組中個別小鼠之腫瘤體積。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張以下三個美國臨時專利申請案之優先權：於2015年11月23日提出申請之第62/258,731號、於2016年3月28日提出申請之第62/314,174號及於2016年8月24日提出申請之第62/379,094號，其各自之全部內容以引用方式併入本文中。
序列表
本申請案係與序列表以電子格式一起申請。序列表係以於2016年11月16日創建之大小為103,682字節之標題為「2016-11-16_01134-0046-00TW_SeqList_ST25.txt」的文件提供。序列表之電子格式中之資訊之全部內容以引用方式併入本文中。
定義
除非另有定義，否則結合本發明使用之科學及技術術語應具有彼等熟習此項技術者通常所理解之含義。此外，除非上下文另有需要，否則單數術語應包括複數形式且複數術語應包括單數形式。
結合重組體DNA、寡核苷酸合成、組織培養及轉型(例如，電穿孔、脂轉染)、酶促反應及純化技術使用之實例性技術為業內已知。許多該等技術及程序闡述於(例如)Sambrook等人Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))以及其他地方中。另外，用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配、及遞送、及患者之治療之實例性技術亦為業內已知。
在本申請案中，除非另外陳述，否則使用「或」意指「及/或」。在多重附屬申請專利範圍情況下，使用「或」以僅選擇一個的方式回指一個以上前述獨立或附屬申請專利範圍。同時，除非另外明確說明，否則諸如「要素」或「組份」等術語涵蓋包含一個單元之要素及組份及包含一個以上亞單元之要素及組份兩種情況。
如根據本發明所用，除非另外指示，否則以下術語應理解為具有以下含義： 術語「核酸分子」及「多核苷酸」可互換使用，且係指核苷酸之聚合物。該等核苷酸之聚合物可含有天然及/或非天然核苷酸，且包括(但不限於)DNA、RNA及PNA。「核酸序列」係指包含核酸分子之核苷酸或多核苷酸之線性序列。
術語「多肽」及「蛋白質」可互換使用，係指胺基酸殘基之聚合物，且並不限於最小長度。胺基酸殘基之該等聚合物可含有天然或非天然胺基酸殘基，且包括(但不限於)胺基酸殘基之肽、寡肽、二聚體、三聚體及多聚體。該定義涵蓋該全長蛋白質及其片段二者。該等術語亦包括多肽之表現後修飾，例如醣基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化及諸如此類。此外，出於本發明之目的，「多肽」係指包括針對天然序列之修飾(例如缺失、添加及取代(通常本質上保守))之蛋白質，只要蛋白質維持期望活性即可。該等修飾可為蓄意的，如經由定點誘變，或可為偶然的，例如經由產生蛋白質之主體之突變或由於PCR擴增之誤差。
「FGFR2」係指纖維母細胞生長因子受體2，包括其選擇式剪接形式(例如IIIa、IIIb及IIIc剪接形式)中之任一者。術語FGFR2涵蓋野生型FGFR2及天然突變體形式，例如FGFR2活化突變體形式，例如FGFR2-S252W，其在一些癌細胞中發現。「FGFR2-IIIb」或「FGFR2b」可互換使用，係指纖維母細胞生長因子受體2 IIIb剪接形式。實例性人類FGFR2-IIIb顯示於2013年7月7日之GenBank登錄號NP_075259.4中。非限制性實例性成熟人類FGFR2-IIIb胺基酸序列顯示於SEQ ID NO：1中。「FGFR2-IIIc」或「FGFR2c」可互換使用，係指纖維母細胞生長因子受體2 IIIc剪接形式。實例性人類FGFR2-IIIc顯示於2013年7月7日之GenBank登錄號NP_000132.3中。非限制性實例性成熟FGFR2-IIIc胺基酸 序列顯示於SEQ ID NO：12中。
「FGFR2 ECD」係指FGFR2之細胞外結構域，包括其天然及經改造變體。FGFR2 ECD之非限制性實例包括SEQ ID NO：13-23、29及32。「FGFR2 ECD融合分子」係指包含FGFR2 ECD及融合配偶體(例如Fc結構域、白蛋白或PEG)之分子。融合配偶體可共價附接至(例如)FGFR2 ECD之N-或C-末端或內部位置。FGFR2 ECD融合分子之非限制性實例包括SEQ ID NO：30、31及33。
「FGFR2抑制劑」係指抑制FGFR2與其一或多種配體(例如FGF1、FGF7及/或FGF2)結合之分子，例如結合FGFR2之抗體、或例如FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子。在一些實施例中，且FGFR2抑制劑能結合至FGFR2以及具有活化突變之FGFR2突變體，例如FGFR2-S252W。
如本文所用術語「免疫刺激劑」係指藉由用作免疫刺激性分子(包括共刺激分子)之激動劑、或用作免疫抑制性分子(包括共抑制性分子)之拮抗劑刺激免疫系統的分子。免疫刺激劑可為生物的，例如抗體或抗體片段、其他蛋白質或疫苗，或可為小分子藥物。
術語「程式化細胞死亡蛋白1」及「PD-1」係指屬CD28家族之免疫抑制性受體。PD-1主要在先前活化之T細胞上活體內表現，且結合至兩個配體，即PD-L1及PD-L2。如本文所用術語「PD-1」包括人類PD-1(hPD-1)、hPD-1之變體、同種型及物種同系物、及與hPD-1具有至少一個共用表位之類似物。完全hPD-1序列可參見GenBank登錄號U64863。在一些實施例中，PD-1係具有SEQ ID NO：34(前體，具有信號序列)或SEQ ID NO：35(成熟，無信號序列)之胺基酸序列之人類PD-1。
術語「程式化細胞死亡1配體1」及「PD-L1」係指在結合至PD-1時 下調T細胞活化及細胞介素分泌之PD-1之兩種細胞表面醣蛋白配體中之一者(另一者係PD-L2)。如本文所用術語「PD-L1」包括人類PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1之變體、同種型及物種同系物及與hPD-L1具有至少一個共用表位之類似物。完全hPD-L1序列可參見GenBank登錄號Q9NZQ7。在一些實施例中，PD-L1係具有SEQ ID NO：37(前體，具有信號序列)或SEQ ID NO：38(成熟，無信號序列)之胺基酸序列之人類PD-L1。
術語「PD-1/PD-L1抑制劑」係指破壞PD-1/PD-L1信號傳導路徑之部分。在一些實施例中，抑制劑藉由結合至PD-1及/或PD-L1抑制PD-1/PD-L1信號傳導路徑。在一些實施例中，抑制劑亦結合至PD-L2。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑抑制PD-1結合至PD-L1及/或PD-L2。非限制性實例性PD-1/PD-L1抑制劑包括結合至PD-1之抗體；結合至PD-L1之抗體；PD-1融合分子，例如AMP-224；及PD-1多肽，例如AUR-012。
術語「抑制PD-1之抗體」係指結合至PD-1或結合至PD-L1且藉此抑制PD-1及/或PD-L1信號傳導之抗體。在一些實施例中，抗體抑制PD-1結合至PD-1且阻斷PD-L1及/或PD-L2結合至PD-1。在一些實施例中，抗體抑制PD-1結合至PD-L1且阻斷PD-1結合至PD-L1。抑制PD-1且結合至PD-L1之抗體可稱作抗PD-L1抗體。抑制PD-1且結合至PD-1之抗體可稱作抗PD-1抗體。
在提及FGFR2抗體、FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子時，術語「阻斷配體之結合」或「抑制配體之結合」係指抑制FGFR2與FGFR2配體(例如FGF1或PGE2)之間之相互作用的能力。該抑制可經由任何機制發生，包括直接干擾配體結合，例如由於FGPR2上之重疊結合位點、及/或由改變配體親和力之抗體誘導之FGFR2之構象變化，例如在FGFR2 ECD 或FGFR2 ECD融合分子情形下，藉由競爭結合至FGFR2配體。
在提及抗PD-1抗體及PD-1融合分子或多肽時，術語「阻斷配體(例如PD-L1)之結合」或「抑制配體(例如PD-L1)之結合」及其語法變化形式係指抑制PD-1與PD-1配體(例如PD-L1)之間之相互作用之能力。該抑制可經由任何機制發生，包括直接干擾配體結合，例如由於PD-1上之重疊結合位點、及/或由改變配體親和力之抗體誘導之PD-1之構象變化等，或藉由競爭結合PD-1配體。
如本文所用術語「抗體」係指至少包含重鏈之超變區(HVR)H1、H2及H3及輕鏈之L1、L2及L3之分子，其中該分子能結合至抗原。術語抗體包括(但不限於)能結合抗原之片段，例如Fv、單鏈Fv(scFv)、Fab、Fab’及(Fab’)2。術語抗體亦包括(但不限於)嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體及各種物種(例如小鼠、人類、食蟹猴等)之抗體。其亦包括偶聯至其他分子(例如小分子藥物、雙特異性抗體及多特異性抗體)之抗體。
術語「重鏈可變區」係指包含重鏈HVR1、框架(FR)2、HVR2、FR3及HVR3之區。在一些實施例中，重鏈可變區亦包含FR1之至少一部分及/或FR4之至少一部分。
術語「重鏈恆定區」係指包含至少三個重鏈恆定結構域(CH1、CH2及CH3)之區。非限制性實例性重鏈恆定區包括γ、δ及α。非限制性實例性重鏈恆定區亦包括ε及μ。每一重恆定區對應於抗體同型。舉例而言，包含γ恆定區之抗體係IgG抗體，包含δ恆定區之抗體係IgD抗體，且包含α恆定區之抗體係IgA抗體。此外，包含μ恆定區之抗體係IgM抗體，且包含ε恆定區之抗體係IgE抗體。某些同型可進一步細分成亞類。舉例而言，IgG抗體包括(但不限於)IgG1(包含γ1恆定區)、IgG2(包含γ2恆定區)、IgG3 (包含γ3恆定區)及IgG4(包含γ4恆定區)抗體；IgA抗體包括(但不限於)IgA1(包含α1恆定區)及IgA2(包含α2恆定區)抗體；且IgM抗體包括(但不限於)IgM1及IgM2。
術語「重鏈」係指至少包含重鏈可變區且具有或無前導序列之多肽。在一些實施例中，重鏈包含重鏈恆定區之至少一部分。術語「全長重鏈」係指包含重鏈可變區及重鏈恆定區且具有或無前導序列之多肽。
術語「輕鏈可變區」係指包含輕鏈HVR1、框架(FR)2、HVR2、FR3及HVR3之區。在一些實施例中，輕鏈可變區亦包含FR1及/或FR4。
術語「輕鏈恆定區」係指包含輕鏈恆定結構域CL之區。非限制性實例性輕鏈恆定區包括λ及κ。
術語「輕鏈」係指至少包含輕鏈可變區且具有或無前導序列之多肽。在一些實施例中，輕鏈包含輕鏈恆定區之至少一部分。術語「全長輕鏈」係指包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區且具有或無前導序列之多肽。
術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域區中序列具有超變性及/或形成結構上經界定之環(「超變環」)中的每一者。通常，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個位於VH中(H1、H2、H3)，且三個位於VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自超變環及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基，後者具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。實例性超變環出現於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)。)實例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)出現於L1之胺基酸殘基24-34、L2之50-56、L3之89-97、H1之31-35B、H2之50-65及H3之95-102。(Kabat等 人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))。術語超變區(HVR)及互補決定區(CDR)二者皆係指可變區中形成抗原結合區之部分。
「親和力」或「結合親和力」係指分子(例如，抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如，抗原)間之非共價相互作用之總強度。在一些實施例中，「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如，抗體與抗原)之間之1：1相互作用的固有結合親和力。分子X對於其配偶體Y之親和力通常可表示為解離常數(Kd)。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指以下細胞毒性形式：其中結合至存在於某些細胞毒性細胞(例如NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)之經分泌Ig使該等細胞毒性效應細胞能夠特異性地結合至帶有抗原之靶細胞且隨後利用細胞毒素殺滅該靶細胞。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞上之表現匯總於Ravetch及Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)之第464頁表3中。為評價所關注分子之ADCC活性，可實施活體外ADCC分析，例如闡述於美國專利第5,500,362號或第5,821,337號或美國專利第6,737,056號(Presta)中者。用於該等分析之可用效應細胞包括PBMC及NK細胞。另一選擇為或另外，可在活體內(例如在諸如揭示於Clynes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。具有改變Fc區胺基酸序列及增加或降低ADCC活性之其他抗體闡述於(例如)美國專利第7,923,538號及美國專利第7,994,290號中。
具有「增強之ADCC活性」之抗體係指與親代抗體相比更有效在活體外或活體內介導ADCC之抗體，其中抗體與親代抗體之至少一個結構態樣不同，且此時分析中所用之該抗體及親代抗體之量基本上相同。在一些實施例中，抗體與親代抗體具有相同胺基酸序列，但抗體無岩藻糖基化，而親代抗體經岩藻糖基化。在一些實施例中，ADCC活性將使用例如美國公開案第2015-0050273-A1號中所揭示之活體外ADCC分析測定，但涵蓋例如動物模型等中用於測定ADCC活性之其他分析或方法。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體亦具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(V158)之親和力。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(F158)之親和力。
「增強之對Fc γ RIIIA之親和力」係指較親代抗體對Fc γ RIIIA(在一些情況下，亦稱作CD16a)具有更大親和力之抗體，其中抗體與親代抗體之至少一個結構態樣不同。在一些實施例中，抗體與親代抗體具有相同胺基酸序列，但抗體無岩藻糖基化，而親代抗體經岩藻糖基化。可使用用於測定對Fc γ RIIIA之親和力之任何適宜方法。在一些實施例中，藉由美國公開案第2015-0050273-A1號中所述之方法測定對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體亦具有增強之ADCC活性。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(V158)之親和力。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(F158)之親和力。
如本文所用「嵌合抗體」係指包含第一物種(例如小鼠、大鼠、食蟹 猴等)之至少一個可變區及第二物種(例如人類、食蟹猴等)之至少一個恆定區的抗體。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個小鼠可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個食蟹猴可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體包含至少一個大鼠可變區及至少一個小鼠恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體之所有可變區皆係來自第一物種，且嵌合抗體之所有恆定區皆係來自第二物種。
如本文所用「人類化抗體」係指其中非人類可變區之框架區中之至少一個胺基酸經人類可變區之相應胺基酸置換的抗體。在一些實施例中，人類化抗體包含至少一個人類恆定區或其片段。在一些實施例中，人類化抗體係Fab、scFv、(Fab’)2等。
如本文所用「人類抗體」係指人類中產生之抗體、非人類動物中產生之抗體(其包含人類免疫球蛋白基因，例如XenoMouse®)及使用活體外方法(例如噬菌體展示)選擇之抗體，其中抗體譜係基於人類免疫球蛋白序列。
「無岩藻糖基化」抗體或「無岩藻糖」之抗體係指在其恆定區醣基化中無岩藻糖之IgG1或IgG3同型抗體。人類IgG1或IgG3之醣基化發生在Asn297(N297)，其作為核心岩藻糖化二支鏈複雜寡醣醣基化，末端為最多2個Gal殘基。在一些實施例中，無岩藻糖基化抗體在Asn297無岩藻糖。端視末端Gal殘基數而定，該等結構命名為G0、G1(α1,6或α1,3)或G2聚醣殘基。參見(例如)Raju,T.S.,BioProcess Int.1：44-53(2003).抗體Fc之CHO型醣基化闡述於(例如)Routier,F.H.,Glycoconjugate J.14：201-207(1997)中。在抗體之群體內，若群體之抗體之<5%在Asn297包含岩藻糖，則將抗體視為無岩藻糖基化。
「效應物功能」係指可歸因於抗體之Fc區之生物學活性，其可隨抗體同型而變化。抗體效應子功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指以下細胞毒性形式：其中結合至存在於某些細胞毒性細胞(例如NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞)上之Fc受體(FcR)之經分泌Ig使該等細胞毒性效應細胞能夠特異性地結合至帶有抗原之靶細胞且隨後利用細胞毒素殺滅該靶細胞。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞上之表現匯總於Ravetch及Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)之第464頁表3中。為評價所關注分子之ADCC活性，可實施活體外ADCC分析，例如闡述於美國專利第5,500,362號或第5,821,337號或美國專利第6,737,056號(Presta)中者。用於該等分析之可用效應細胞包括PBMC及NK細胞。另一選擇為或另外，可在活體內(例如在諸如揭示於Clynes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。具有改變Fc區胺基酸序列及增加或降低ADCC活性之其他抗體闡述於(例如)美國專利第7,923,538號及美國專利第7,994,290號中。
具有「增強之ADCC活性」之抗體係指與除至少一個經設計以改變ADCC活性之結構變化外具有相同序列之親代抗體相比在活體外或活體內分析中更有效介導ADCC之抗體，此時分析中所用之該抗體及親代抗體之量基本上相同。在一些實施例中，除Fc結構域中之突變(例如其中親代抗體經岩藻糖基化之引起岩藻糖基化之胺基酸取代)外，抗體及親代抗體具 有相同胺基酸序列。在一些實施例中，ADCC活性將使用如本文中揭示之活體外ADCC分析測定，但涵蓋例如動物模型等中用於測定ADCC活性之其他分析或方法。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(V158)之親和力。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(F158)之親和力。
「增強之對Fc γ RIIIA之親和力」係指較親代抗體對Fc γ RIIIA(在一些情況下，亦稱作CD16a)具有更大親和力之抗體，其中抗體與親代抗體之至少一個結構態樣不同。在一些實施例中，抗體與親代抗體具有相同胺基酸序列，但抗體無岩藻糖基化，而親代抗體經岩藻糖基化。可使用用於測定對Fc γ RIIIA之親和力之任何適宜方法。在一些實施例中，藉由本文所述方法測定對Fc γ RIIIA之親和力。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體具有增強之ADCC活性。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(V158)之親和力。在一些實施例中，具有增強之對Fc γ RIIIA之親和力之抗體具有增強之對Fc γ RIIIA(F158)之親和力。
術語「前導序列」係指位於多肽之N末端之胺基酸殘基之序列，其有利於自哺乳動物細胞之多肽之分泌。前導序列可在自哺乳動物細胞導出多肽後裂解，從而形成成熟蛋白質。前導序列可為天然或合成的，且其可與和其附接之蛋白質異源或同源。非限制性實例性前導序列亦包括異源蛋白質之前導序列。在一些實施例中，抗體無前導序列。在一些實施例中，抗體包含至少一個前導序列，其可選自天然抗體前導序列及異源前導序列。
術語「載體」用於闡述可經改造以含有可在宿主細胞中繁殖之一或 多種經選殖多核苷酸的多核苷酸。載體可包括以下要素中之一或多者：複製起點、一或多個調節所關注多肽之表現之調節序列(例如啟動子及/或增強子)、及/或一或多個可選標記物基因(例如抗生素抗性基因及可用於比色分析之基因，例如β-半乳糖苷酶)。術語「表現載體」係指用於使所關注多肽在宿主細胞中表現之載體。
「宿主細胞」係指可為或已為載體或經分離多核苷酸之接受者之細胞。宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。實例性真核細胞包括哺乳動物細胞，例如靈長類動物或非靈長類動物細胞；真菌細胞，例如酵母；植物細胞；及昆蟲細胞。非限制性實例性哺乳動物細胞包括(但不限於)NSO細胞、PER.C6®細胞(Crucell)及293及CHO細胞及其衍生物(例如分別293-6E及DG44細胞)。
如本文所用術語「經分離」係指已自通常在自然界中發現之至少一些組份分離之分子。舉例而言，在多肽係自產生其之至少一些組份分離時，其稱作「經分離」。若多肽係由細胞在表現後分泌，則將物理分離含有多肽之上清液與產生其之細胞視為「分離」多肽。類似地，在多核苷酸並非通常在自然界中發現之較大多核苷酸(例如基因體DNA或粒腺體DNA，在DNA多核苷酸之情形下)之部分或自產生其之細胞之至少一些組份分離(例如，在RNA多核苷酸之情形下)時，多核苷酸稱作「經分離」。因此，包含於宿主細胞內部之載體中之DNA多核苷酸可稱作「經分離」，只要該多核苷酸在自然界中未在該載體中發現即可。
術語「升高含量」意指個體之特定組織中蛋白質之含量相對於對照(例如不患有癌症或本文所述其他病況之一或多個個體)中相同組織高。升高含量可為任何機制之結果，例如蛋白質之增加之表現、增加之穩定性、 降低之降解、增加之分泌、降低之清除等。
術語「減少」(「reduce」或「reduces」)或「增加」(「increase」或「increases」)關於蛋白質或細胞類型意指個體之特定組織中(例如腫瘤中)該蛋白質或細胞類型之含量變化至少10%。在一些實施例中，試劑(例如FGFR2或PD-1/PD-L1抑制劑)將個體之特定組織(例如腫瘤)中蛋白質或細胞類型之含量增加或減少至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。在一些實施例中，蛋白質或細胞類型之含量相對於在接觸試劑(例如FGFR2或PD-1/PD-L1抑制劑)之前蛋白質之含量或相對於對照處理之含量減少或增加。
術語「個體」及「患者」在本文中可互換使用且係指人類。在一些實施例中，亦提供治療其他哺乳動物(包括但不限於齧齒類動物、猿、貓、犬、馬、牛、豬、綿羊、山羊、哺乳動物實驗室動物、哺乳動物農場動物、哺乳動物比賽用動物及哺乳動物寵物)之方法。
如本文所用術語「試樣」係指自個體獲得或源自個體之含有欲基於(例如)物理、生物化學、化學及/或生理特性表徵、定量及/或鑑別之細胞及/或其他分子實體之組合物。實例性試樣係組織試樣。
術語「癌症」係指與不受控細胞增殖、無限制細胞生長及經由細胞凋亡而降低之細胞死亡相關之惡性增殖性病症。癌症之實例包括(但不限於)癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤及白血病。該等癌症之更特定非限制性實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食道癌(包括胃食道接合部腺癌)、星細胞瘤、軟組織肉瘤、非小細胞肺癌(包括鱗狀細胞非小細胞肺癌)、肺之腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰臟癌、神經 膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、腦癌、子宮內膜癌、睪丸癌、膽道癌、膽囊癌、胃癌、黑色素瘤及各種類型之頭頸癌(包括頭頸部鱗狀細胞癌)。
在一些實施例中，癌症係胃癌(其包括胃食道癌)。在一些實施例中，癌症係膀胱癌。如本文定義之膀胱癌包括各種疾病形式，例如膀胱癌(UBC)及移行細胞癌(TCC)(其亦稱為尿路上皮癌(UC))、以及在膀胱中發生之非移行細胞癌。
在一些實施例中，癌症包含FGFR2基因擴增，而在一些實施例中，癌症不包含FGFR2擴增。在一些實施例中，若擴增發生，則FGFR2擴增包含>3之FGFR2：CEN10(染色體10著絲粒)比率。在一些實施例中，FGFR2擴增包含2之FGFR2：CEN10比率。然而，在其他實施例中，FGFR2含量包含介於1與2之間之FGFR2：CEN10比率，此指示FGFR2係未經擴增。在一些實施例中，突變或易位會造成FGFR2基因擴增。可使用(例如)螢光原位雜交分析(FISH)測定基因擴增。
在一些實施例中，若癌症包含FGFR2基因擴增，則癌症會過表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之癌症過表現FGFR2-IIIb至較FGFR2-IIIc大之程度。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之癌症以正規化FGFR2-IIIc表現程度之超過2倍、3倍、5倍或10倍之正規化程度表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，將表現程度正規化至GUSB。在一些實施例中，癌症過表現FGFR2-IIIb，但不包含FGFR2基因擴增。
在一些實施例中，癌症包含FGFR2(例如FGFR2-IIIb蛋白質)過表 現，而在一些其他實施例中，癌症不包含FGFR2或FGFR2-IIIb蛋白質過表現。FGFR2-IIIb蛋白質過表現可藉由業內之任何適宜方法(包括但不限於基於抗體之方法，例如免疫組織化學(IHC))來測定。在一些實施例中，根據業內之方法對IHC染色進行評分。術語「FGFR2-IIIb蛋白質過表現」及「FGFR2IIIb過表現」及諸如此類意指FGFR2-IIIb蛋白質含量升高，而與該等升高含量之原因無關(即，升高含量係蛋白質之增加轉譯及/或降低降解之結果、其他機制或機制之組合)。
藉由IHC之FGFR2或FGFR2IIIb表現程度可藉由以0-3之標度給予腫瘤試樣IHC評分來測定。本文中，若未觀察到反應性或若僅在<10%腫瘤細胞中存在膜反應性，則給予「0」之評分；若在至少10%腫瘤細胞中存在微弱或幾乎不可感知之膜反應性或若細胞僅在其膜之一部分中有反應，則給予「1+」之評分；若在至少10%腫瘤細胞中存在弱至中等完全、底側面或側面膜反應性，則給予「2+」之評分；且若在至少10%腫瘤細胞中存在強的完全底側面或側面膜反應性，則給予「3+」之評分。在一些實施例中，藉由IHC之腫瘤細胞之1+、2+或3+染色指示FGFR2IIIb過表現。在一些實施例中，藉由IHC之腫瘤細胞之2+或3+染色指示FGFR2IIIb過表現。在一些實施例中，藉由IHC之腫瘤細胞之3+染色指示FGFR2IIIb過表現。在一些實施例中，胃或膀胱癌包含FGFR2基因擴增。在一些實施例中，包含FGFR2基因擴增之胃或膀胱癌過表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之胃或膀胱癌過表現FGFR2-IIIb至較FGFR2-IIIc大之程度。在一些實施例中，胃或膀胱癌過表現FGFR2-IIIb，但不包含FGFR2基因擴增。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之胃或膀胱癌以正規化FGFR2-IIIc表現程度之超過2倍、3倍、5倍或10倍之正規化程度表現 FGFR2-IIIb。在一些實施例中，將表現程度正規化至GUSB。在一些實施例中，過表現係mRNA過表現。在一些實施例中，過表現係蛋白質過表現。
如本文所用「治療」係指治療性治療及預防性(prophylactic或preventative)措施，其中目標係預防或減緩(減弱)靶定病理學病況或病症。在某些實施例中，術語「治療」涵蓋用於哺乳動物(包括人類)之疾病之治療劑之任何投與或施加，且包括抑制或減緩疾病或疾病之進展；部分或完全減輕疾病，例如藉由引起消退、或恢復或修復喪失、丟失或缺陷功能；刺激無效過程；或引起疾病平臺期以具有減輕之嚴重程度。術語「治療」亦包括減輕任何表型特徵之嚴重程度及/或降低該特徵之發病率、程度或可能性。需要治療之彼等包括已患有病症之彼等以及易於患有病症之彼等或欲預防病症之彼等。
術語「有效量」或「治療有效量」係指有效治療個體之疾病或病症之藥物之量。在某些實施例中，有效量係指在所需時間段內以所需劑量有效達成期望預防或治療結果之量。本發明之FGFR2抑制劑及/或PD-1/PD-L1抑制劑之治療有效量可根據諸如以下等因素而有所變化：疾病狀態、個體之年齡、性別及體重以及一或多種抗體於個體內引發期望反應之能力。治療有效量涵蓋其中治療有益效應勝過一或多種抗體之任何毒性或有害效應的量。在一些實施例中，表達「有效量」係指有效治療癌症之抗體之量。
與一或多種其他治療劑「組合」投與包括同時(並行)及以任一次序連續(依序)投與。
「醫藥上可接受之載劑」係指無毒固體、半固體或液體填充劑、稀 釋劑、囊封材料、調配逐級或業內習用與治療劑一起使用之載劑，其一起包含用於投與至個體之「醫藥組合物」。醫藥上可接受之載劑於所用劑量及濃度下對接受者無毒且與調配物之其他成份相容。醫藥上可接受之載劑適於所用調配物。舉例而言，若治療劑欲經口投與，則載劑可為凝膠膠囊。若治療劑欲皮下投與，則載劑理想地是不會刺激皮膚且不會引起注射位點反應。
以下章節中提供其他定義。
實例性FGFR2抑制劑
本文之方法及組合物之FGFR2抑制劑可為FGFR2抗體、FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子。
實例性FGFR2抗體
在涉及FGFR2抗體之本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可為人類化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可選自IgA、IgG及IgD。在本文所述組合物或方法中之任一者中，FGFR2抗體可為IgG。在本文所述方法中之任一者中，抗體可為IgG1或IgG3。
實例性FGFR2抗體包括結合FGFR2-IIIb之抗體。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體以較其結合至FGFR2-IIIb低之親和力結合FGFR2-IIIc。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc。
用於本文實施例中之實例性FGFR2-IIIb抗體係於2012年1月24日頒發之美國專利第8,101,723 B2號中所述之HuGAL-FR21抗體，該案件以引用方式明確併入本文中。美國專利第8,101,723 B2號之圖13及14顯示 HuGAL-FR21之可變區及全長成熟抗體鏈之胺基酸序列，且以引用方式併入本文中。抗體HuGAL-FR21之重鏈可變區序列在美國專利第8,101,723 B2號之圖13中加下劃線，且以引用方式明確併入本文中。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。可用於本文實施例中之其他抗體包括闡述於美國專利公開案第2015-0050273-A1號中之彼等，該專利闡述某些無岩藻糖基化FGFR2-IIIb抗體且以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含至少1個、2個、3個、4個、5個或6個選自以下之超變區(HVR；例如，CDR)：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含至少一條包含重鏈可變區及重鏈恆定區之至少一部分之重鏈、以及至少一條包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區之至少一部分之輕鏈。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含兩條重鏈，其中每一重鏈包含重鏈可變區及重鏈恆定區之至少一部分；及兩條輕鏈，其中每一輕鏈包含輕鏈可變區及輕鏈恆定區之至少一部分。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包括包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列之重鏈可變區及包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列之輕鏈可變區。在一些實施例 中，FGFR2-IIIb抗體包括包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含6個HVR，其包含(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含6個如上文所述之HVR且結合至FGFR2-IIIb。在一些實施例中，FGFR-IIIb抗體不結合至FGFR2-IIIc。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一個態樣中，FGFR2-IIIb抗體與包含6個HVR之FGFR2-IIIb抗體競爭，該等HVR包含(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(f)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含至少1個、至少2個或所有3個選自以下之VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。 在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含至少1個、至少2個或所有3個選自以下之VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含(a)VH結構域，其包含至少1個、至少2個或所有3個選自以下之VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2及(iii)包含選自SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；及(b)VL結構域，其包含至少1個、至少2個或所有3個選自以下之VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1、(ii)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2及(c)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：4中 已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體包含SEQ ID NO：5中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：5之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而不結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：5中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體包含SEQ ID NO：4中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3 抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列及與SEQ ID NO：5之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，且具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而不結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：4中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，在SEQ ID NO：5中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體包含SEQ ID NO：4中之VH序列及SEQ ID NO：5之VL序列，包括一個或兩個序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且VL包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：11之 胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含如上文提供之實施例中之任一者中之VH及如上文提供之實施例中之任一者中之VL。在一個實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO：4及SEQ ID NO：5中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：2之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：2中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體重鏈包含SEQ ID NO：2中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：3之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：3中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體輕鏈包含SEQ ID NO：3中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體包含與SEQ ID NO：2之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列及與SEQ ID NO：3之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之 FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之FGFR2-IIIb抗體保留結合FGFR2-IIIb之能力。在某些實施例中，該FGFR2-IIIb抗體保留選擇性結合至FGFR2-IIIb而無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：2中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，在SEQ ID NO：3中已經取代、插入及/或缺失總共1至10個胺基酸。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區中(即，在FR中)。視情況，FGFR2-IIIb抗體重鏈包含SEQ ID NO：2中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾，且FGFR2-IIIb抗體輕鏈包含SEQ ID NO：3中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(c)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且輕鏈包含1個、2個或3個選自以下之HVR：(a)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(c)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
其他實例性FGFR2抗體係美國專利第8,101,723 B2號中所述之GAL-FR22及GAL-FR23抗體，該案件以引用方式併入本文中。GAL-FR22之輕 鏈及重鏈可變區在專利第8,101,723 B2號中提供為(例如)SEQ ID NO：7及8，而Kabat CDR及輕鏈及重鏈可變區亦提供於該專利之圖16中，該案件以引用方式併入本文中。產生雜交瘤之GAL-FR21、GAL-FR22及GAL-FR23分別於2008年11月6日、11月6日及8月12日以ATCC編號9586、9587及9408存放於American Type Culture Collection,PO Box 1549,Manassas VA,USA,20108。因此，在一些實施例中，FGFR2抗體係包含自彼等三個雜交瘤菌株中之一者獲得之抗體之胺基酸序列的抗體。
GAL-FR22之重鏈及輕鏈可變區亦在本文中提供為SEQ ID NO：39及43，而Kabat CDR在本文中提供為本文中之SEQ ID NO：40-42及44-46。因此，在一些實施例中，FGFR2-IIIb抗體重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列之CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列之CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列之CDR3；且輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列之CDR1；(v)包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列之CDR2；及(vi)包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列之CDR3。
在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中重鏈可變結構域與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2抗體包含FGFR2-IIIb抗體，其中輕鏈可變結構域與SEQ ID NO：43之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列。在一些實施例中，重鏈可變結構域與SEQ ID NO：39之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列，且輕鏈可 變結構域與SEQ ID NO：43之胺基酸序列至少95%、例如至少97%、至少98%或至少99%一致，或其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
無岩藻糖基化FGFR2抗體
在一些實施例中，FGFR2抗體(例如如上文所述FGFR2-IIIb抗體)具有無岩藻糖附接(直接或間接)至Fc區之碳水化合物結構(即，無岩藻糖基化抗體)，即，抗體無岩藻糖基化。在一些實施例中，無岩藻糖基化抗體係在Asn297無岩藻糖之IgG1或IgG3抗體。
本文中，在複數種抗體包含至少95%無岩藻糖基化抗體時，可將該等抗體視為無岩藻糖基化。岩藻糖之量可藉由計算相對於所有附接至Asn 297之醣結構(例如，複雜、雜合及高甘露糖結構)之和之Asn297之糖鏈內岩藻糖之平均量來測定。檢測抗體中之岩藻糖之非限制性實例性方法包括MALDI-TOF質譜(例如，參見WO 2008/077546)、釋放螢光標記之寡醣之HPLC量測(例如，參見Schneider等人，「N-Glycan analysis of monoclonal antibodies and other glycoproteins using UHPLC with fluorescence detection」Agilent Technologies,Inc.(2012)；Lines,J.Pharm.Biomed.Analysis,14：601-608(1996)；Takahasi,J.Chrom.,720：217-225(1996))、釋放螢光標記之寡醣之毛細管電泳量測(例如，參見Ma等人，Anal.Chem.,71：5185-5192(1999))及利用脈衝電流計檢測以量測單醣組成之HPLC(例如，參見Hardy，等人，Analytical Biochem.,170：54-62(1988))。
Asn297係指位於Fc區中大約297位之天冬醯胺殘基(Fc區殘基之EU編號)；然而，因抗體中具有微小序列變化，故在給定抗體序列中，Asn297 亦可位於297位上游或下游之大約±3個胺基酸，亦即，介於294位與300位之間。在本文所述FGFR2-IIIb抗體中，Asn297係發現在序列QY N ST中，且在下文所示SEQ ID NO：2序列表中加粗及加底線。
岩藻糖基化變體具有經改良之ADCC功能。例如，參見美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。與「無岩藻糖基化」或「岩藻糖缺乏」抗體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能產生無岩藻糖基化抗體之細胞系之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其在實例11中)及基因剔除細胞系，例如無功能性α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8之細胞系，例如剔除CHO細胞(例如，參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
本文中之FGFR2抗體亦可具有二等分寡糖，例如其中附接至抗體之Fc區之二分枝寡糖由GlcNAc二等分。該等抗體可具有降低之岩藻糖基化 及/或經改良之ADCC功能。該等抗體變體之實例闡述於(例如)WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)、美國專利第6,602,684號(Umana等人)及US 2005/0123546(Umana等人)中。在一些實施例中，FGFR2抗體具有至少一個在寡醣中附接至Fc區之半乳糖殘基。該等抗體變體具有經改良之CDC功能。該等抗體闡述於(例如)WO 1997/30087(Patel等人)、WO 1998/58964(Raju,S.)及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
在本發明之一些實施例中，在人類效應細胞存在下，無岩藻糖基化FGFR2抗體較具有相同胺基酸序列之包含岩藻糖之抗體更有效地介導ADCC。通常，ADCC活性可使用美國專利公開案第2015-0050273 A1號揭示之活體外ADCC分析測定加以測定，但例如以動物模型等測定ADCC活性之其他分析或方法係涵蓋在內。
在一些實施例中，FGFR2抗體包含SEQ ID NO：2及3之重鏈及輕鏈序列。在一些實施例中，包含SEQ ID NO：2及3之重鏈及輕鏈序列之抗體無岩藻糖基化。
FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子
在一些實施例中，FGFR2抑制劑係FGFR2 ECD，諸如FGFR2 ECD融合分子。FGFR2 ECD融合分子可包含融合配偶體，例如聚合物、多肽、親脂性部分及琥珀醯基。實例性多肽融合配偶體包括血清白蛋白及抗體Fc結構域。其他實例性聚合物融合配偶體包括(但不限於)聚乙二醇，包括具有具支鏈及/或直鏈之聚乙二醇。某些實例性融合配偶體包括(但不限於)免疫球蛋白Fc結構域、白蛋白及聚乙二醇。某些實例性Fc結構域之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO：24至26中。
實例性FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子包括闡述於PCT公開案 WO 2007/014123中之彼等。FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子可包含天然ECD胺基酸序列，包括FGFR2-IIIb或FGFR2-IIIc BCD之胺基酸序列。或者，FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子可包含具有自C-末端計數一或多個及高達22個胺基酸殘基之C-末端缺失的FGFR2 ECD，其中FGFR2 ECD保留其FGF配體結合活性中之至少一者。在一些實施例中，FGFR2 ECD之C-末端缺失高達22個胺基酸。在一些實施例中，缺失不延伸至或包括天然全長FGFR2-IIIb之胺基酸殘基357或天然全長FGFR2-IIIc之胺基酸殘基359處之纈胺酸殘基。
例如，在一些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，但其中胺基酸殘基已自胺基-末端及/或羧基-末端缺，且其中所得分子能結合至FGF2。在一些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列，其對應於SEQ ID NO：14之胺基酸序列，但最後三個羧基末端胺基酸殘基YLE缺失。該等變體之其他實例包括C-末端4個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：16)、C-末端5個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：17)、C-末端8個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：18)、C-末端9個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：19)、C-末端10個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：20)、C-末端14個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：21)、C-末端15個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：22)、C-末端16個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：23)、C-末端17個胺基酸殘基缺失之彼等(SEQ ID NO：24)，所有皆係與天然FGFR2-IIIb或FGFR2-IIIc序列相比。上述FGFR2 ECD片段中之任一者皆可偶聯至上述融合配偶體中之任一者以形成FGFR2 ECD融合分子。
在某些實施例中，FGFR2 ECD序列內之至少一個胺基酸可經突變以防止多肽中該位點處之醣基化。可經醣基化之非限制性實例性FGFR2 ECD胺基酸包括SEQ ID NO：28中之N62、N102、N207、N220、N244、N276、N297及N310。
其他實例性FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子包括PCT公開案第WO2010/017198號中所述之彼等。其中包括在FGFR2 ECD之「酸盒」區中具有突變之FGFR2 ECD及FGFR2 ECD融合分子。該FGFR2 ECD酸性區突變蛋白質可用作FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子。在某些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含代替FGFR2短酸盒之FGFR1短酸盒。舉例而言，FGFR2 ECD殘基111至118(SEQ ID NO：28)可經FGFR1 ECD殘基105至112(SEQ ID NO：29)置換。在一些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列。在一些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：31-34中之任一者之胺基酸序列。「酸盒」突變體FGFR2 ECD序列(例如SEQ ID NO：30)中之任一者亦可與上述C-末端缺失FGFR2 ECD序列(SEQ ID NO：15-24)中之任一者組合，且視情況接合至一或多個融合分子(例如，SEQ ID NO：32-34)。
在某些實施例中，FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子無信號肽。在某些實施例中，FGFR2 ECD包括至少一個信號肽，其可選自天然FGFR2信號肽及/或異源信號肽，例如來自FGFR1、FGFR3或FGFR4之信號肽。
在FGFR2 ECD融合分子之情形下，融合配偶體可連接至多肽之胺基-末端或羧基-末端。在某些實施例中，多肽及融合配偶體共價連接。若融 合配偶體亦係多肽(「融合配偶體多肽」)，則多肽及融合配偶體多肽可為連續胺基酸序列之一部分。在該等情形下，多肽及融合配偶體多肽可自編碼多肽及融合配偶體多肽之編碼序列轉譯為單一多肽。在某些實施例中，FGFR2 ECD融合分子在FGFR2 ECD或FGFR2 ECD酸性區突變蛋白質與融合配偶體之間含有「GS」連接體。在某些實施例中，多肽及融合配偶體經由其他方式(例如除肽鍵外之化學連接)共價連接。在某些實施例中，多肽及融合配偶體非共價連接。在某些該等實施例中，其可使用(例如)結合對連接。實例性結合對包括(但不限於)生物素及抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白、抗體及其抗原等。
實例性PD-1/PD-L1抑制劑
實例性PD-1/PD-L1抑制劑包括抑制PD-1之抗體，例如抗PD-1抗體及抗PD-L1抗體。該等抗體可為人類化抗體、嵌合抗體、小鼠抗體、人類抗體及包含本文論述之重鏈及/或輕鏈CDR之抗體。PD-1/PD-L1抑制劑亦包括阻斷PD-1與PD-L1結合之融合分子(例如AMP-224)及與PD-1競爭結合至PD-L1之抑制性PD-1多肽(例如AUR-012)。
實例性PD-1/PD-L1抗體
PD-1係由活化T及B細胞表現之關鍵免疫檢查點受體且介導免疫抑制。PD-1係受體之CD28家族之成員，其包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1及BTLA。已鑑別PD-1之兩種細胞表面醣蛋白配體，即程式化死亡配體-1(PD-L1)及程式化死亡配體-2(PD-L2)。該等配體在抗原呈遞細胞以及許多人類癌症上表現且已顯示在結合至PD-1後下調T細胞活化及細胞介素分泌。在臨床前模型中，PD-1/PD-L1相互作用之抑制介導強效抗腫瘤活性。
以高親和力特異性結合至PD-1之人類單株抗體(HuMAb)已揭示於美國專利第8,008,449號中。其他抗PD-1 mAb闡述於(例如)美國專利第6,808,710號、第7,488,802號、第8,168,757號及第8,354,509號及PCT公開案第WO 2012/145493號中。美國專利第8,008,449號中揭示之抗PD-1 HuMAb中之每一者皆：(a)以1×10-7M或更小之KD結合至人類PD-1，如藉由表面電漿共振使用Biacore生物感測器系統所測定；(b)實質上不結合至人類CD28、CTLA-4或ICOS；(c)在混合淋巴球反應(MLR)分析中增加T-細胞增殖；(d)在MLR分析中增加干擾素-γ產生；(e)在MLR分析中增加IL-2分泌；(f)結合至人類PD-1及食蟹猴PD-1；(g)抑制PD-L1及/或PD-L2與PD-1之結合；(h)刺激抗原特異性記憶體反應；(i)刺激抗體反應；及/或(j)抑制腫瘤活體內細胞生長。本發明中有用之抗PD-1抗體包括特異性結合至人類PD-1且展現前述特徵(a)至(j)中之至少一者、至少二者、至少三者、至少四者或至少五者的抗體。
在一個實施例中，抗PD-1抗體係尼沃魯單抗。尼沃魯單抗(亦稱為「Opdivo®」；先前命名為5C4、BMS-936558、MDX-1106或ONO-4538)係選擇性防止與PD-1配體(PD-L1及PD-L2)之相互作用、藉此阻斷抗腫瘤T細胞功能之下調的完全人類IgG4(S228P)PD-1免疫檢查點抑制劑抗體(美國專利第8,008,449號；Wang等人，2014 Cancer Immunol Res.2(9)：846-56)。
在另一實施例中，抗PD-1抗體係派姆單抗(派姆單抗)。派姆單抗(亦稱為「Keytruda®」、蘭布魯珠單抗及MK-3475)係針對人類細胞表面受體PD-1(程式化死亡-1或程式化細胞死亡-1)之人類化單株IgG4抗體。派姆單抗闡述於(例如)美國專利第8,900,587號中；亦參見網址：「www」. 「cancer」.「gov」/「drugdictionary？cdrid=695789」(最後存取：2014年12月14日)。派姆單抗已由FDA批准用於治療復發或難治性黑色素瘤。
在其他實施例中，抗PD-1抗體係MEDI0608(先前稱作AMP-514)，其係針對PD-1受體之單株抗體。MEDI0608闡述於(例如)美國專利第No.8,609,089,B2號中或網址：「www」.「cancer」.「gov」/「drugdictionary？cdrid=756047」(最後存取2014年12月14日)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係匹利珠單抗(CT-011)，其係人類化單株抗體。匹利珠單抗闡述於美國專利第8,686,119 B2號或WO 2013/014668 A1中。
所揭示方法中可用之抗PD-1抗體亦包括特異性結合至人類PD-1且與尼沃魯單抗交叉競爭結合至人類PD-1之經分離抗體(例如，參見美國專利第8,008,449號；WO 2013/173223)。抗體交叉競爭結合至抗原之能力指示該等抗體結合至抗原之相同表位區，且在空間上阻礙其他交叉競爭抗體與該特定表位區結合。預計該等交叉競爭抗體具有與尼沃魯單抗之功能性質極為類似之功能性質，此乃因其結合至PD-1之相同表位區。交叉競爭抗體可在標準PD-1結合分析(例如Biacore分析、ELISA分析或流式細胞術)中基於其與尼沃魯單抗交叉競爭之能力容易地鑑別(例如，參見WO 2013/173223)。
在某些實施例中，與尼沃魯單抗交叉競爭結合至人類PD-1或結合至人類PD-1之相同表位區的抗體係單株抗體。對於投與至人類個體而言，該等交叉競爭抗體可為嵌合抗體，或可為人類化或人類抗體。
本發明方法中有用之抗PD-1抗體亦包括上述抗體之抗原結合部分。實例包括(i)Fab片段，即由V L 、V H 、C L 及C H1 結構域組成之單價片段； (ii)F(ab’)2片段，即包含兩個由鉸鏈區之二硫橋鍵所連接之Fab片段的二價片段；(iii)由V H 及C H1 結構域組成之Fd片段；及(iv)由抗體單臂之V L 及V H 結構域組成的Fv片段。
作為PD-1/PD-L1抑制劑之非限制性實例性融合分子係AMP-224(Amplimmune,GlaxoSmithKline)。作為PD-1/PD-L1抑制劑之非限制性實例性多肽係AUR-012。
實例性抗體恆定區
在一些實施例中，本文所述FGFR2或抗PD-1或抗PD-L1抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區屬選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區屬選自κ及λ之同型。
在一些實施例中，本文所述抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，在效應物功能合意時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區之抗體。在一些實施例中，本文所述抗體包含人類IgG1恆定區。在一些實施例中，本文所述抗體包含人類IgG1恆定區，其中N297未經岩藻糖基化。在一些實施例中，本文所述抗體包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈。
貫穿本說明書及申請專利範圍，除非另外指明或熟習此項技術者已知，否則免疫球蛋白重鏈中殘基之編號係EU索引之編號，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)，其以引用方式明確併入本文中。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。
在某些實施例中，本發明之抗體包含與野生型IgG或野生型抗體之Fc 區相比具有至少一個胺基酸取代之變體Fc區。在某些實施例中，變體Fc區在野生型抗體之Fc區中具有兩個或更多個胺基酸取代。在某些實施例中，變體Fc區在野生型抗體之Fc區中具有三個或更多個胺基酸取代。在某些實施例中，變體Fc區具有至少1個、2個或3個或更多個本文所述Fc區胺基酸取代。在某些實施例中，本文中之變體Fc區將與天然序列Fc區及/或親代抗體之Fc區具有至少約80%同源性。在某些實施例中，本文中之變體Fc區將與天然序列Fc區及/或親代抗體之Fc區具有至少約90%同源性。在某些實施例中，本文中之變體Fc區將與天然序列Fc區及/或親代抗體之Fc區具有至少約95%同源性。
在某些實施例中，改變本文所提供抗體以增加或降低抗體經醣基化之程度。抗體醣基化位點之添加或缺失可方便地藉由改變胺基酸序列以產生或去除一或多個醣基化位點來實現。
若抗體包含Fc區，則其所附接之碳水化合物可能有所變化。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含具支鏈、二分枝寡糖，其通常藉由N-連接附接至Fc區之CH2結構域的Asn297。例如，參見Wright等人，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可包括多種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及附接至二分枝寡糖結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可修飾本發明抗體中之寡糖以產生具有某些改良性質之抗體。
抗體亦可具有胺基末端前導延伸。舉例而言，在抗體之任一或多個重鏈或輕鏈之胺基-末端存在胺基末端前導序列之一或多個胺基酸殘基。實例性胺基末端前導延伸包含三個存在於抗體之一條或兩條輕鏈上之胺基酸殘基VHS或由其組成。
可在(例如)投與具有變體Fc區之多肽之轉基因小鼠、人類或非人類靈長類動物中分析人類FcRn高親和力結合多肽之活體內或血清半衰期。亦參見(例如)Petkova等人International Immunology 18(12)：1759-1769(2006)。
實例性嵌合抗體
在某些實施例中，本文提供FGFR2或抗PD-1或抗PD-L1抗體係嵌合抗體。某些嵌合抗體闡述於(例如)美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如，源自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(例如猴子)之可變區)及人類恆定區。在又一實例中，嵌合抗體係類別或亞類已自親代抗體發生變化之「類別轉換」抗體。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
非限制性實例性嵌合抗體包括針對包含本文所述重鏈HVR1、HVR2及HVR3及/或輕鏈HVR1、HVR2及HVR3序列之FGFR2或PD-1/PD-L1的嵌合抗體。
在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區屬選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區屬選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。
如上所述，效應物功能是否合意可取決於抗體所預期之特定治療方法。因此，在一些實施例中，在效應物功能合意時，選擇包含人類IgG1 重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區之嵌合抗體。在一些實施例中，在效應物功能不合意時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之嵌合抗體。在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含人類IgG1恆定區，其中N297未經岩藻糖基化。在一些實施例中，本文所述嵌合抗體包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈。
實例性人類化抗體
在一些實施例中，使用結合FGFR2或PD-1/PD-L1之人類化抗體。人類化抗體可用作治療分子，此乃因人類化抗體降低或消除對非人類抗體之人類免疫反應(例如人類抗小鼠抗體(HAMA)反應)，其可引起對抗體治療劑之免疫反應並降低治療劑之有效性。
在某些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。通常，將非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，而保持親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包含一或多個可變結構域，其中HVR或CDR(或其部分)係源自非人類抗體，且FR(或其部分)係源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦可包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如，產生HVR殘基之抗體)之相應殘基取代以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法綜述於(例如)Almagro及Fransson,(2008)Front.Biosci.13：1619-1633中，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：Riechmann等人，(1988)Nature 332：323-329；Queen等人，(1989)Proc.Natl Acad.Sci.USA 86：10029-10033：美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，(2005)Methods 36：25-34(闡述SDR(a-CDR)接枝)；Padlan,(1991)Mol. Immunol.28：489-498(闡述「表面重塑」)；Dall'Acqua等人，(2005)Methods 36：43-60(闡述「FR改組」)；及Osbourn等人，(2005)Methods 36：61-68及Klimka等人，(2000)Br.J.Cancer,83：252-260(闡述「導向選擇」途徑至FR改組)。
可用於人類化之人類框架區包括(但不限於)：使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(例如，參見Sims等人(1993)J.Immunol.151：2296)；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體之共有序列的框架區(例如，參見Carter等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285；及Presta等人(1993)J.Immunol,151：2623)；人類成熟(經體突變)框架區或人類種系框架區(例如，參見Almagro及Fransson,(2008)Front.Biosci.13：1619-1633)；及源自篩選FR文庫之框架區(例如，參見Baca等人，(1997)J.Biol.Chem.272：10678-10684及Rosok等人，(1996)J.Biol.Chem.271：22611-22618)。
在一些實施例中，人類化抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區屬選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區屬選自κ及λ之同型。
在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，在效應物功能合意時，抗體包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區。在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG1恆定區。在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG1恆定區，其中N297未經岩藻糖基化。在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈。
人類抗體
人類FGFR2或PD-1/PD-L1抗體可藉由任何適宜方法製得。非限制性實例性方法包括在包含人類免疫球蛋白基因座之轉基因小鼠中製備人類抗體。參見(例如)Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551-55(1993)；Jakobovits等人，Nature 362：255-8(1993)；Lonberg等人，Nature 368：856-9(1994)；及美國專利第5,545,807號、第6,713,610號、第6,673,986號、第6,162,963號、第5,545,807號、第6,300,129號、第6,255,458號、第5,877,397號、第5,874,299號及第5,545,806號。
非限制性實例性方法亦包括使用噬菌體展示文庫製備人類抗體。參見(例如)Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.227：381-8(1992)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-97(1991)；及PCT公開案第WO 99/10494號。
在一些實施例中，人類抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區屬選自IgA、IgG及IgD之同型。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區屬選自κ及λ之同型。在一些實施例中，本文所述人類抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施例中，本文所述人類抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些該等實施例中，本文所述人類抗體包含人類IgG4恆定區中之S241P突變。在一些實施例中，本文所述人類抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。
在一些實施例中，在效應物功能合意時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區之人類抗體。在一些實施例中，在效應物功能不合意時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之人類抗體。在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG1恆定區，其中N297未經岩藻糖基化。在一些實施例中，本文所述人類化抗體包含人類IgG1恆定區 及人類κ輕鏈。
實例性抗體偶聯物
在一些實施例中，FGFR2或PD-1/PD-L1抗體偶聯至標記及/或細胞毒性劑。如本文所用，標記係有利於抗體之檢測及/或有利於抗體結合之分子之檢測的部分。非限制性實例性標記包括(但不限於)放射性同位素、螢光基團、酶基團、、化學發光基團、生物素、表位標識、金屬結合標識等。熟習此項技術者可根據預期應用選擇適宜標記。
如本文所用，細胞毒性劑係降低一或多個細胞之增殖能力之部分。在例如由於細胞經歷細胞凋亡或以其他方式死亡、細胞未能進行完細胞週期及/或未能分裂、細胞分化等而使細胞較不能增殖時，細胞具有降低之增殖能力。非限制性實例性細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素、毒素及化學治療劑。熟習此項技術者可根據預期應用選擇適宜細胞毒性。
在一些實施例中，使用活體外化學方法將標記及/或細胞毒性劑偶聯至抗體。偶聯之非限制性實例性化學方法為業內已知，且包括可自(例如)Thermo Scientific Life Science Research Produces(先前為Pierce；Rockford,IL)、Prozyme(Hayward,CA)、SACRI Antibody Services(Calgary,Canada)、AbD Serotec(Raleigh,NC)等購得之服務、方法及/或試劑。在一些實施例中，在標記及/或細胞毒性劑係多肽時，標記及/或細胞毒性劑可自具有至少一條抗體鏈之相同表現載體表現以產生包含稠合至抗體鏈之標記及/或細胞毒性劑之多肽。熟習此項技術者可根據預期應用選擇將標記及/或細胞毒性劑偶聯至抗體之適宜方法。
編碼抗體之核酸分子
提供包含編碼抗體之一或多條鏈之多核苷酸的核酸分子。在一些實 施例中，核酸分子包含編碼抗體之重鏈或輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，核酸分子包含編碼抗體之重鏈之多核苷酸及編碼輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，第一核酸分子包含編碼重鏈之第一多核苷酸且第二核酸分子包含編碼輕鏈之第二多核苷酸。
在一些該等實施例中，重鏈及輕鏈係自一個核酸分子表現，或自兩個單獨核酸分子表現為兩種單獨多肽。在一些實施例中，例如在抗體係scFv時，單一多核苷酸編碼包含連接在一起之重鏈及輕鏈之單一多肽。
在一些實施例中，編碼抗體之重鏈或輕鏈之多核苷酸包含編碼前導序列之核苷酸序列，該前導序列在轉譯時位於重鏈或輕鏈之N末端。如上文所論述，前導序列可為天然重鏈或輕鏈前導序列，或可為另一異源前導序列。
核酸分子可使用業內習用之重組體DNA技術經構築。在一些實施例中，核酸分子係適於在選擇宿主細胞中表現之表現載體。
抗體表現及產生 載體
提供包含編碼抗體重鏈及/或輕鏈之多核苷酸之載體。亦提供包含編碼抗體重鏈及/或輕鏈之多核苷酸之載體。該等載體包括(但不限於)DNA載體、噬菌體載體、病毒載體、反轉錄病毒載體等。在一些實施例中，載體包含編碼重鏈之第一多核苷酸序列及編碼輕鏈之第二多核苷酸序列。在一些實施例中，重鏈及輕鏈係自載體表現為兩種單獨多肽。在一些實施例中，例如在抗體係scFv時，重鏈及輕鏈表現為單一多肽之一部分。
在一些實施例中，第一載體包含編碼重鏈之多核苷酸且第二載體包含編碼輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，第一載體及第二載體以類似量 (例如類似莫耳濃度量或類似質量量)轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，第一載體與第二載體之5：1與1：5之間之莫耳-或質量-比率轉染至宿主細胞中。在一些實施例中，使用編碼重鏈之載體與編碼輕鏈之載體之介於1：1與1：5之間之質量比率。在一些實施例中，使用編碼重鏈之載體與編碼輕鏈之載體之1：2之質量比率。
在一些實施例中，選擇針對CHO或CHO源細胞或NSO細胞中多肽之表現最佳化之載體。實例性該等載體闡述於(例如)Running Deer等人，Biotechnol.Prog.20：880-889(2004)中。
在一些實施例中，選擇用於動物(包括人類)中抗體重鏈及/或抗體輕鏈之活體內表現的載體。在一些該等實施例中，多肽之表現係在以組織特異性方式起作用之啟動子的控制下。舉例而言，肝特異性啟動子闡述於(例如)PCT公開案第WO 2006/076288號中。
宿主細胞
在各個實施例中，抗體重鏈及/或輕鏈可在原核細胞(例如細菌細胞)、或真核細胞(例如真菌細胞(例如酵母)、植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞)中表現。該表現可根據(例如)業內已知之程序實施。可用於表現多肽之實例性真核細胞包括(但不限於)COS細胞，包括COS 7細胞；293細胞，包括293-6E細胞；CHO細胞，包括CHO-S及DG44細胞；PER.C6®細胞(Crucell)；及NSO細胞。在一些實施例中，抗體重鏈及/或輕鏈可在酵母中表現。參見(例如)美國公開案第US 2006/0270045 A1號。在一些實施例中，特定真核宿主細胞係基於其對抗體重鏈及/或輕鏈進行期望轉譯後修飾之能力進行選擇。舉例而言，在一些實施例中，CHO細胞產生較293細胞中產生之相同多肽具有更高唾液酸化程度之多 肽。
向期望宿主細胞中引入一或多種核酸可藉由任何方法(包括但不限於磷酸鈣轉染、DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、陽離子脂質介導之轉染、電穿孔、轉導、感染等)完成。非限制性實例性方法闡述於(例如)Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)中。核酸可根據任何適宜方法在期望宿主細胞中瞬時或穩定轉染。
在一些實施例中，可根據任何適宜方法在經一或多個編碼多肽之核酸分子改造或轉染之動物中活體內產生一或多種多肽。
抗體之純化
可藉由任何適宜方法純化抗體。該等方法包括(但不限於)使用基質之親和力或疏水相互作用層析。適宜親和力配體包括結合抗體恆定區之抗原及配體。舉例而言，可使用蛋白質A、蛋白質G、蛋白質A/G或抗體親和力管柱以結合恆定區並純化抗體。疏水性相互作用層析(例如丁基或苯基管柱)亦可適於純化一些多肽。純化多肽之許多方法為業內已知。
抗體之無細胞之產生
在一些實施例中，在無細胞之系統中產生抗體。非限制性實例性無細胞之系統闡述於(例如)Sitaraman等人，Methods Mol.Biol.498：229-44(2009)；Spirin,Trends Biotechnol.22：538-45(2004)；Endo等人，Biotechnol.Adv.21：695-713(2003)中。
治療性組合物及方法 治療癌症之方法
在一些實施例中，提供治療癌症之方法，其包含投與有效量之本文 所述FGFR2抑制劑。一些該等實施例包括增加癌症個體之腫瘤組織中PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞及CD8+ T細胞中之一或多者之數目的方法，其包含投與FGFR2抑制劑，其中該抑制劑係具有增強之ADCC活性之FGFR2抗體。在一些該等實施例中，免疫刺激劑未與FGFR2抗體一起投與。
在一些其他實施例中，提供治療癌症之方法，其包含投與有效量之FGFR2抑制劑及有效量之至少一種免疫刺激劑。在實例性實施例中，至少一種免疫刺激劑包含PD-1/PD-L1抑制劑。在一些實施例中，同時投與FGFR2抑制劑及至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。在一些實施例中，依序投與FGFR2抑制劑及至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。在一些實施例中，在投與至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)之前投與至少1個、至少2個、至少3個劑量、至少5個劑量或至少10個劑量之FGFR2抑制劑。在一些實施例中，在投與FGFR2抑制劑之前投與至少1個、至少2個、至少3個劑量、至少5個劑量或至少10個劑量之至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。在一些實施例中，在第一劑量之FGFR2抑制劑之前至少1、2、3、5或10天、或1、2、3、5、12或24週投與最後一個劑量之至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)。在一些其他實施例中，在第一劑量之至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)之前至少1、2、3、5或10天、或1、2、3、5、12或24週投與最後一個劑量之FGFR2抑制劑。在一些實施例中，個體已接受或正接受PD-1/PD-L1抑制劑療法，且向治療方案中添加FGFR2抑制劑。
在一些實施例中，癌症選自胃癌、乳癌、鱗狀細胞癌、小細胞肺 癌、垂體癌、食道癌(包括胃食道接合部腺癌)、星細胞瘤、軟組織肉瘤、非小細胞肺癌、肺之腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、腦癌、子宮內膜癌、睪丸癌、膽道癌、膽囊癌、胃癌、黑色素瘤及各種類型之頭頸癌。在一些實施例中，肺癌係非小細胞肺癌或肺鱗狀細胞癌。在一些實施例中，白血病係急性骨髓性白血病或慢性淋巴球性白血病。在一些實施例中，乳癌係乳房侵襲性癌。在一些實施例中，卵巢癌係卵巢漿液性囊腺癌。在一些實施例中，腎癌係腎透明細胞癌。在一些實施例中，結腸癌係結腸腺癌。在一些實施例中，膀胱癌係膀胱尿路上皮癌。在一些實施例中，癌症選自膀胱癌、子宮頸癌(例如鱗狀細胞子宮頸癌)、頭頸部鱗狀細胞癌、直腸腺癌、非小細胞肺癌、子宮內膜癌、前列腺腺癌、結腸癌、卵巢癌(例如漿液性上皮卵巢癌)及黑色素瘤。在一些實施例中，癌症係胃癌(其包括胃食道癌)或膀胱癌(例如移行細胞癌，亦稱為尿路上皮癌)。
在一些實施例中，癌症包含FGFR2基因擴增，而在一些實施例中，癌症不包含FGFR2擴增。在一些實施例中，利用例如針對FGFR2基因座及染色體10著絲粒之探針使用螢光原位雜交(FISH)以評價基因擴增。在一些實施例中，若擴增發生，則FGFR2擴增包含>3之FGFR2：CEN10(染色體10著絲粒)比率。在一些實施例中，FGFR2擴增包含2之FGFR2：CEN10比率。然而，在其他實施例中，FGFR2含量包含介於1與2之間之FGFR2：CEN10比率，此指示FGFR2未經擴增。
在一些實施例中，若癌症包含FGFR2基因擴增，則癌症過表現 FGFR2-IIIb。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之癌症過表現FGFR2-IIIb至較FGFR2-IIIc大之程度。在一些實施例中，癌症不包含基因擴增，但過表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之癌症以正規化FGFR2-IIIc表現程度之超過2倍、3倍、5倍或10倍之正規化程度表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，將表現程度正規化至GUSB。在一些實施例中，癌症過表現FGFR2-IIIb，但不包含FGFR2基因擴增。在一些實施例中，胃或膀胱癌包含FGFR2基因擴增。在一些實施例中，胃或膀胱癌包含過表現FGFR2-IIIb之FGFR2基因擴增。
在一些實施例中，包含FGFR2擴增之胃或膀胱癌過表現FGFR2-IIIb至較FGFR2-IIIc大之程度。在一些實施例中，胃或膀胱癌不包含基因擴增，但過表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，包含FGFR2擴增之胃或膀胱癌以正規化FGFR2-IIIc表現程度之超過2倍、3倍、5倍或10倍之正規化程度表現FGFR2-IIIb。在一些實施例中，將表現程度正規化至GUSB。在一些實施例中，胃或膀胱癌過表現FGFR2-IIIb，但不包含FGFR2基因擴增。在一些實施例中，過表現係mRNA過表現。在一些實施例中，過表現係蛋白質過表現。在一些實施例中，點突變或易位可引起FGFR2之過表現。可(例如)使用IHC測定FGFR2物質之表現程度。
在一些實施例中，FGFR2過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。舉例而言，過表現可藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號來測定。舉例而言，在一些該等實施例中，癌症係胃癌且欲治療之患者可(例如)在至少10%腫瘤細胞中(例如在細胞膜中)具有3+之FGFR2b之IHC信號。在一些實施例中，胃癌患者可在至少10%腫瘤細胞中具有2+或3+信號。在一些實施例中，胃 癌患者可在至少10%腫瘤細胞中具有至少1+信號。
在一些實施例中，FGFR2過表現可報告為「H評分」。舉例而言，在一些該等實施例中，腫瘤係膀胱癌腫瘤。為測定H評分，第一膜染色強度可針對細胞在固定場中測定，例如經由IHC以獲得0、1+、2+或3+之評分，且H評分可使用下式計算：1×(以1+之IHC強度可視之細胞之%)+2×(以2+之IHC強度可視之細胞之%)+3×(以3+之IHC強度可視之細胞之%)。理論上，H評分可在0至300之範圍內且若視野中之所有細胞皆具有3+之IHC染色，則等於300。在一些實施例中，欲治療之患者針對FGFR2(例如FGFR2b(例如FGFR2IIIb))具有>20、例如>30、>40、>50或>100或20-300、20-100、20-50、20-40或20-30之範圍之起始H評分。在一些實施例中，患者具有>10或在10-20或15-20範圍內之H評分。在其他實施例中，患者具有0-10之H評分，此可指示無FGFR2過表現。在一些該等實施例中，患者係膀胱癌症患者。
在一些實施例中，已經測定癌症過表現FGFR2IIIb及/或帶有FGFR2基因擴增。在其他實施例中，本文中之方法首先評價在給予治療之前FGFR2IIIb表現及FGFR2基因擴增狀態中之一者或二者。且另外，本揭示內容提供測定對上述FGFR2抑制劑、治療及用途中之任一者之反應的方法，其包含評價癌症患者之FGFR2IIIb表現及/或FGFR2基因擴增。
在患者患有胃或膀胱癌之一些實施例中，方法可包含確定患者之癌症是否屬以下類別中之一者，其可指示對治療或FGFR2抑制劑組合物之反應：a)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+；b)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+以及FGFR2基因擴增；c)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為3+而 無FGFR2基因擴增；d)在胃癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+或2+；e)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為1+；f)在膀胱癌個體之情形下，在至少10%腫瘤細胞中IHC信號為2+；g)在膀胱癌個體之情形下，H評分大於20；h)在膀胱癌個體之情形下，H評分為10-19；i)在膀胱癌個體之情形下，H評分小於10。
在本文所述方法之一些實施例中，個體係PD-1/PD-L1抑制劑「不足反應者」。係PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者之個體可能先前已對PD-1/PD-L1抑制劑有反應，但可能對PD-1/PD-L1抑制劑之反應變小，或個體可能從未對PD-1/PD-L1抑制劑有反應。對PD-1/PD-L1抑制劑反應不足意指原本預計在PD-1/PD-L1抑制劑之標準劑量後改良之病況之態樣未改良，及/或僅在投與大於標準劑量之條件下發生改良。在一些實施例中，在接受標準劑量至少2週、至少3週、至少4週、至少6週或至少12週後，PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者已經歷或正經歷對PD-1/PD-L1抑制劑之不足反應。「標準」劑量係由醫學專業人士測定，且可取決於個體之年齡、體重、健康史、疾病之嚴重程度、投藥頻率等。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者已經歷或正經歷對抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體之不足反應。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者已經歷或正經歷對AMP-224之不足反應。在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者已經歷或正經歷對選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗之PD-1/PD-L1抑制劑之不足反應。
在上述方法實施例之任一者中，在小鼠腫瘤模型中，在1週、10天或2週之時段內，FGFR2抑制劑與至少一種免疫刺激劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑)之組合可將腫瘤生長抑制(例如)至少10%、至少20%、至少30%、至 少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在上述方法實施例之任一者中，向個體投與FGFR2抑制劑與PD-1/PD-L1抑制劑之組合可例如在至少1個月、2個月、3個月、6個月或1年之時段內將個體中至少一個腫瘤之體積減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。
FGFR2抗體增加NK細胞、PD-L1表現細胞、巨噬細胞及CD3+、CD8+及CD4+ T細胞之數目且亦增加腫瘤中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率
在上述方法實施例之任一者中，與對照相比，在取自小鼠腫瘤模型(例如異種移植物或同源腫瘤模型)之腫瘤中，投與FGFR2抑制劑可顯示NK細胞(例如NKp46+細胞)增加、PD-L1表現細胞增加、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞增加、巨噬細胞增加及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率增加，持續至少1天、4天、1週、10天或2週之時段，且增加(例如)至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%。在一些實施例中，小鼠腫瘤模型係4T1腫瘤模型。
本文實例中提供之數據顯示利用無岩藻糖基化抗FGFR2b抗體處理小鼠同源腫瘤模型會增加鼠類腫瘤組織中NKp46+細胞之數目，同時亦抑制腫瘤生長。利用在N297具有突變且無ADCC活性之抗體(抗FGFR2-N297Q)之類似處理不顯示NK細胞增加且不影響腫瘤生長。(參見下文實例2a-b。)
本文實例中提供之數據亦顯示利用無岩藻糖基化FGFR2抗體處理小鼠同源模型會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞之數目。(參見實例2a。)此 表明FGFR2抑制劑可與PD-1/PD-L1抑制劑充分組合用於癌症治療且所主張組合可對腫瘤體積或腫瘤生長抑制組合具有至少加和、且在一些情形下協同效應。本文中之其他數據顯示利用無岩藻糖基化FGFR2抗體處理小鼠同源腫瘤模型亦增加腫瘤組織中CD3+、CD8+及CD4+ T細胞之數目且增加淋巴對骨髓比率。利用經設計以防止效應物功能之含有N297Q突變之FGFR2抗體未觀察到該等結果。(參見實例2b。)本文中之其他數據顯示利用無岩藻糖基化FGFR2抗體處理小鼠同源腫瘤模型亦增加腫瘤組織中巨噬細胞之數目。(參見實例2c。)該等數據表明，NK細胞介導之ADCC活性部分有利於利用無岩藻糖基化抗FGFR2抗體觀察之腫瘤生長之抑制。另外，數據表明此ADCC活性可增加腫瘤中PD-L1表現細胞，此可導致腫瘤中T細胞之浸潤。淋巴對骨髓比率之增加進一步表明，無岩藻糖基化FGFR2抗體作為單一藥劑以及在與PD-1抑制劑組合使用時藉由改變腫瘤微環境可具有強效抗腫瘤活性。
因此，本文中亦包括增加個體腫瘤組織中NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率的方法，其包含向該個體投與有效量之FGFR2抑制劑，例如FGFR2抗體，例如具有增強之ADCC活性之FGFR2抗體。在投與FGFR2抗體之一些實施例中，抗體無岩藻糖基化，例如在位置N297無岩藻糖基化。在一些實施例中，增加可在至少1天、4天、1週、10天或2週之時段後觀察到，且可為(例如)與對照(例如處理之前之腫瘤組織或非腫瘤組織)相比至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%之增加。FGFR2抑制劑可在(例如)本文中別處所述之劑量條件下投與。
本文中亦包括增加個體腫瘤組織中NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率的方法，其包含向該個體投與有效量之具有ADCC活性、例如具有增強之ADCC活性之抗體。在一些實施例中，由於位置N297之岩藻糖基化，抗體具有增強之ADCC活性。在一些實施例中，增加可在至少1天、4天、1週、10天或2週之時段後觀察到，且可為(例如)與對照(例如處理之前之腫瘤組織或非腫瘤組織)相比至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%之增加。一般而言，該抗體可以約10μg/kg體重至約100mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約50μg/kg體重至約5mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約100μg/kg體重至約10mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約100μg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約0.5mg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以0.1至10mg/kg之劑量、例如以至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5或10mg/kg或在由前述數字中之任兩者界定之劑量範圍內之劑量投與。
本申請案亦包括在投與具有ADCC活性或增強之ADCC活性之抗體之前及/或之後測定個體腫瘤組織中NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率以例如確定抗體是否對個體之至少一個腫瘤具有該等效應的方法。本申請案亦包括在投與單獨或作為PD-1/PD-L1抑制劑組合之部分之FGFR2抑制劑之前及/或之後在個體腫瘤組織中測定NK細胞、PD-L1陽性細胞、 CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目、及/或測定淋巴樣細胞對骨髓細胞比率的方法。本文中亦包括在接受FGFR2與PD-1/PD-L1抑制劑處理之組合之個體之腫瘤組織中測定NK細胞、PD-L1陽性細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目及/或測定淋巴樣細胞對骨髓細胞比率的方法。
測定NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目、及/或測定淋巴樣細胞對骨髓細胞比率可(例如)經由組織之生檢或自腫瘤獲得試樣用於該正文之一些其他方式來實施。該生檢或其他試樣通常可(例如)在首次投與具有ADCC活性之抗體或FGFR2抑制劑後1、2、3、4、7、17、30、45或90天獲取。NK細胞，PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+,CD8+及/或CD4+ T細胞之數目及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率可(例如)相對於對照(例如處理之前之腫瘤試樣或來自非腫瘤組織之試樣)測定。在一些實施例中，數目可表示為特定細胞類型(例如CD45+單細胞)之百分比。在一些實施例中，特定細胞類型之數目可藉由FACS分析測定。
在一些實施例中，若在該測試中相對於對照觀察到NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率增加，則可進一步向個體投與PD-1/PD-L1抑制劑。在一些實施例中，若未觀察到增加或若未觀察到顯著增加，則可增加FGFR2抑制劑或具有ADCC活性之抗體之劑量。
在一些實施例中，可使用NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率之增加之該評價以確定是否給予與PD-1/PD-L1抑制劑之組合處理或是否繼續處理而不添加PD-1/PD-L1抑制劑。舉例而言，在FGFR2抑制劑投與後，可 針對與對照相比NK細胞、PD-L1陽性細胞、巨噬細胞、CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目、及/或淋巴樣細胞對骨髓細胞比率評估個體之腫瘤試樣，且若在試樣中觀察到彼等類型之細胞之一者或二者增加，則可根據本文所述方法實施例中之任一者一起投與PD-1/PD-L1抑制劑與FGFR2抑制劑。
投與途徑、載劑及其他醫藥組合物
在各個實施例中，抗體可藉由各種途徑(包括但不限於經口、動脈內、非經腸、鼻內、靜脈內、肌內、心內、室內、氣管內、經頰、直腸、腹膜內、真皮內、局部、經皮及鞘內或藉由植入或吸入)活體內投與。可將標的組合物調配成呈固體、半固體、液體或氣體形式之製劑；包括但不限於錠劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏劑、溶液、栓劑、灌腸劑、注射劑、吸入劑及氣溶膠。可將編碼抗體之核酸分子塗佈至金微粒上並藉由粒子轟擊裝置或「基因槍」真皮內遞送，如文獻中所述(例如，參見Tang等人，Nature 356：152-154(1992))。適當調配物及投與途徑可根據預期應用進行選擇。
在各個實施例中，包含抗體之組合物提供於具有眾多種醫藥上可接受之載劑之調配物中(例如，參見Gennaro,Remington：The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus，第20版(2003)；Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippencott Williams and Wilkins(2004)；Kibbe等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，Pharmaceutical Press(2000))。可獲得各種醫藥上可接受之載劑，其包括媒劑、佐劑及稀釋劑。此外，亦可獲得各種醫藥上可接受之輔助物質，例 如pH調節及緩衝劑、張力調節劑、穩定劑、潤濕劑及諸如此類。非限制性實例性載劑包括鹽水、緩衝鹽水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其組合。
在各個實施例中，包含抗體之組合物可藉由以下方式經調配用於注射(包括皮下投與)：將其溶解、懸浮或乳化於水性或非水性溶劑(例如植物或其他油、合成脂肪酸甘油酯、高碳脂肪酸之酯或丙二醇)；且若期望，利用習用添加劑，例如增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑穩定劑及防腐劑。在各個實施例中，組合物可使用(例如)加壓可接受之推進劑(例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮及諸如此類)經調配用於吸入。在各個實施例中，組合物亦可利用(例如生物可降解或生物不可降解聚合物)調配成持續釋放微膠囊。非限制性實例性生物可降解調配物包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。非限制性實例性生物不可降解調配物包括聚甘油脂肪酸酯。某些製備該等調配物之方法闡述於(例如)EP 1 125 584 A1中。
亦提供包含一或多個容器之醫藥包裝及套組，每一容器含有一或多個劑量之抗體或抗體之組合。在一些實施例中，提供單位劑量，其中單位劑量含有預定量之包含抗體或抗體組合、具有或無一或多種其他藥劑的組合物。在一些實施例中，該單位劑量係在一次性使用之預填充注射器中供應用於注射。在各個實施例中，包含於單位劑量中之組合物可包含鹽水，蔗糖或諸如此類；緩衝液，例如磷酸鹽或諸如此類；及/或調配於穩定且有效之pH範圍內。或者，在一些實施例中，組合物可提供為可在添加適當液體(例如無菌水)後重構之凍乾粉末。在一些實施例中，組合物包含一或多種抑制蛋白質聚集之物質，包括但不限於蔗糖及精胺酸。在一些實施例中，本發明之組合物包含肝素及/或蛋白多醣。
醫藥組合物係以有效治療或預防特定適應症之量投與。治療有效量 通常取決於所治療個體之體重、其身體或健康狀況、欲治療之病況之延伸或欲治療之個體之年齡。一般而言，抗體可以約10μg/kg體重至約100mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約50μg/kg體重至約5mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約100μg/kg體重至約10mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約100μg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。在一些實施例中，抗體可以約0.5mg/kg體重至約20mg/kg體重/劑量範圍內之量投與。
在一些實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑(例如抗體或融合分子或多肽)係以0.1至100mg/kg之劑量、例如以0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25或30mg/kg或在由前述數字中之任兩者界定之劑量範圍內之劑量投與。在一些實施例中，FGFR2抑制劑(例如抗體或融合分子或ECD多肽)係以0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5或10mg/kg、例如在由前述數字中之任兩者界定之劑量範圍內之劑量投與。
若需要，可將抗體組合物投與個體。熟習此項技術者(例如主治醫師)可基於考慮所治療病況、所治療個體之年齡、所治療病況之嚴重程度、所治療個體之一般健康狀況及諸如此類來確定投與頻率。在一些實施例中，向個體投與有效劑量之抗體一或多次。在各個實施例中，每月一次、小於每月一次(例如每兩個月或每三個月)向個體投與有效劑量之抗體。在其他實施例中，每月一次以上(例如每3週、每2週或每週)投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每1、2、3、4或5週一次投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每週兩次或三次投與有效劑量之抗體。向個體投與有效劑量之抗體至少一次。在一些實施例中，可多次投與有效劑量之抗體，包括 持續至少一個月、至少6個月或至少一年之時段。
亦提供包含如本文所述FGFR2抑制劑及如本文所述PD-1/PD-L1抑制劑之組合物。在一些實施例中，FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑包含於單獨容器或單一容器之單獨隔室內，例如使得其不混合在一起。在一些實施例中，FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑可存於同一容器或隔室中，且因此混合在一起。在一些實施例中，組合物包含使用說明書，例如癌症治療中之使用說明書。
與其他免疫刺激劑之組合
在一些實施例中，FGFR2抑制劑與除PD-1/PD-L1抑制劑外之至少一種免疫刺激劑組合。或者，在一些實施例中，FGFR2抑制劑與PD-1/PD-L1抑制劑之組合可進一步與有效量之至少一種其他免疫刺激劑組合。
免疫刺激劑可包括(例如)小分子藥物或生物劑。生物免疫刺激劑之實例包括(但不限於)抗體、抗體片段、例如阻斷受體-配體結合之受體或配體多肽之片段、疫苗及細胞介素。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫刺激性分子(包括共刺激分子)之激動劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫抑制性分子(包括共抑制性分子)之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(例如T細胞)上發現之免疫-刺激性分子(包括共刺激分子)之激動劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含免疫細胞(例如T細胞)上發現之免疫抑制性分子(包括共抑制性分子)之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含參與先天免疫性之細胞(例如NK細胞)上發現之免疫刺激性分子(包括共刺激分子)之激動劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含參與先天免疫性之細胞(例如NK細胞)上 發現之免疫抑制性分子(包括共抑制性分子)之拮抗劑。在一些實施例中，組合增強所治療個體之抗原特異性T細胞反應及/或增強個體之先天免疫性反應。
在一些實施例中，在動物癌症模型(例如小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型)中，與投與單獨FGFR2抑制劑相比，FGFR2抑制劑與至少一種免疫刺激劑之組合引起抗腫瘤反應改良。在一些實施例中，在動物癌症模型(例如小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型)中，與投與單獨任一藥物相比，FGFR2抑制劑與至少一種免疫刺激劑之組合引起加和或協同反應。
在涉及FGFR2抑制劑、PD-1/PD-L1抑制劑及至少一種其他免疫刺激劑之組合之實施例中，在動物癌症模型(例如小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型)中，與投與單獨FGFR2抑制劑相比，組合引起抗腫瘤反應改良。在一些實施例中，在動物癌症模型(例如小鼠異種移植物及/或同源腫瘤模型)中，與投與單獨個別治療劑相比，FGFR2抑制劑與其他治療劑之組合引起加和或協同反應。
在某些實施例中，免疫刺激劑靶向作為免疫球蛋白超家族(IgSF)之成員之刺激性或抑制性分子。舉例而言，免疫刺激劑可為靶向(或特異性結合至)多肽之B7家族之另一成員的藥劑。免疫刺激劑可為靶向膜結合配體之TNF家族之成員或特異性結合至TNF家族之成員之共刺激或共抑制性受體的藥劑。可由免疫刺激劑靶向之實例性TNF及TNFR家族成員包括CD40及CD40L、OX-40、OX-40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、 XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α 1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY及NGFR。
在一些實施例中，免疫刺激劑可包含(i)抑制T細胞活化之蛋白質拮抗劑(例如，免疫檢查點抑制劑)，例如CTLA4、LAG-3、TIM3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1、TIM-4及ILT4，及/或可包含(ii)刺激T細胞活化之蛋白質激動劑，例如B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、CD40L、DR3及CD28H。
在一些實施例中，免疫刺激劑可包含抑制抑制T細胞活化之細胞介素(例如，IL-6、IL-10、TGF-ß、VEGF及其他免疫抑制細胞介素)或係該細胞介素之拮抗劑的藥劑，且在一些實施例中，免疫刺激劑可包含係刺激T細胞活化之細胞介素(例如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα(例如，細胞介素自身))之激動劑的藥劑。在一些實施例中，免疫刺激劑可包含趨化介素之拮抗劑，例如CXCR2(例如，MK-7123)、CXCR4(例如AMD3100)、CCR2或CCR4(莫格利珠單抗(mogamulizumab))。
在一些實施例中，免疫刺激劑可包括NK細胞上抑制性受體之拮抗劑或NK細胞上活化受體之激動劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑係KIR拮抗劑。
免疫刺激劑亦可包括抑制TGF-β信號傳導之藥劑、增強腫瘤抗原呈 遞之藥劑(例如樹突細胞疫苗、GM-CSF分泌細胞疫苗、CpG寡核苷酸及咪喹莫特(imiquimod))、或增強腫瘤細胞之免疫原性之療法(例如，蒽環)。
免疫刺激劑亦可包括某些疫苗，例如間皮素靶向疫苗或減毒之李氏菌屬(listeria)癌症疫苗，例如CRS-207。
免疫刺激劑亦可包含耗盡或阻斷Treg細胞之藥劑，例如特異性結合至CD25之藥劑。
免疫刺激劑亦可包含抑制代謝酶(例如吲哚胺加雙氧酶(IDO)、加雙氧酶、精胺酸酶或一氧化氮合成酶)之藥劑。
免疫刺激劑亦可包含抑制腺苷形成或抑制腺苷A2A受體之藥劑。
免疫刺激劑亦可包含逆轉/防止T細胞無反應或耗盡之藥劑及觸發腫瘤位點之先天免疫活化及/或發炎之藥劑。
在一些實施例中，免疫刺激劑可包含CD40激動劑，例如CD40激動劑抗體。FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑組合亦可進一步與靶向免疫路徑之多個要素之組合方法組合，例如以下中之一或多者：至少一種增強腫瘤抗原呈遞之藥劑(例如，樹突細胞疫苗、GM-CSF分泌細胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；至少一種藉由(例如)抑制CTLA-4路徑及/或耗盡或阻斷Treg或其他免疫抑制細胞抑制陰性免疫調節之藥劑；利用(例如)刺激CD-137、OX-40及/或GITR路徑及/或刺激T細胞效應物功能之激動劑刺激陽性免疫調節的療法；至少一種全身性增加抗腫瘤T細胞之頻率的藥劑；使用(例如)CD25之拮抗劑(例如，達克珠單抗(daclizumab))或藉由離體抗CD25珠粒耗盡來耗盡或抑制Treg(例如腫瘤中之Treg)的療法；至少一種影響腫瘤中之抑制劑骨髓細胞之功能的藥劑；增強腫瘤細胞之免疫原 性之療法(例如，蒽環)；包括經遺傳修飾之細胞(例如由嵌合抗原受體修飾之細胞)的過繼性T細胞或NK細胞轉移(CAR-T療法)；至少一種抑制代謝酶(例如吲哚胺加雙氧酶(IDO)、加雙氧酶、精胺酸酶或一氧化氮合成酶)之藥劑；至少一種逆轉/防止T細胞無反應或耗竭之藥劑；觸發腫瘤位點之先天免疫活化及/或發炎之療法；投與免疫刺激性細胞介素或阻斷免疫抑制性細胞介素。
舉例而言，至少一種免疫刺激劑可包含一或多種接合陽性共刺激受體之激動劑；一或多種經由抑制性受體減弱信號傳導之拮抗劑(阻斷劑)，例如克服腫瘤微環境內之不同免疫抑制性路徑之拮抗劑；一或多種全身性增加抗腫瘤免疫細胞(例如T細胞)之頻率、耗盡或抑制Treg(例如，藉由抑制CD25)之藥劑；一或多種抑制代謝酶(例如IDO)之藥劑；一或多種逆轉/防止T細胞無反應或耗竭之藥劑；及一或多種觸發腫瘤位點之先天免疫活化及/或發炎的藥劑。
在一個實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CTLA4拮抗劑，例如拮抗性CTLA4抗體。適宜CTLA-4抗體包括(例如)YERVOY(伊匹單抗)或曲美目單抗(tremelimumab)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含LAG-3拮抗劑，例如拮抗性LAG-3抗體。適宜LAG-3抗體包括例如BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO09/44273)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD137(4-1BB)激動劑，例如激動性CD137抗體。適宜CD137抗體包括(例如)烏瑞魯單抗(urelumab)或PF-05082566(WO12/32433)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含GITR激動劑，例如激動性GITR抗體。適宜GITR抗體包括例如TRX-518(WO06/105021、WO09/009116)、MK-4166(WO11/028683)或WO2015/031667中揭示之GITR抗體。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含OX40激動劑，例如激動性OX40抗體。適宜OX40抗體包括例如MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916(RG7888；WO06/029879)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含CD27激動劑，例如激動性CD27抗體。適宜CD27抗體包括例如瓦利珠單抗(varlilumab，CDX-1127)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含MGA271，其靶向B7H3(WO11/109400)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含KIR拮抗劑，例如利利單抗(lirilumab)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含IDO拮抗劑。IDO拮抗劑包括例如INCB-024360(WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、引德西莫德(indoximod)、NLG-919(WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)或F001287。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含類鐸受體激動劑，例如TLR2/4激動劑(例如，卡介苗)；TLR7激動劑(例如，海特諾爾(Hiltonol)或咪喹莫特)；TLR7/8激動劑(例如，雷西莫特(Resiquimod))；或TLR9激動劑(例如，CpG7909)。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包含TGF-β抑制劑，例如GC1008、LY2157299、TEW7197或IMC-TR1。
其他組合療法
抑制劑可單獨投與或與其他治療模式一起投與。其可在其他治療模式(例如手術、化學療法、放射療法)或投與生物劑(例如另一治療性抗體)之前、實質上同時或之後提供。在一些實施例中，癌症經選自手術、化學療法及放射療法或其組合之療法之後已復發或進展。
對於癌症之治療，抑制劑可結合一或多種其他抗癌劑(例如化學治療劑、生長抑制劑、抗血管生成劑及/或抗贅瘤組合物投與。可與本發明抗體組合使用之化學治療劑、生長抑制劑、抗血管生成劑、抗癌劑劑抗贅瘤組合物之非限制性實例提供於以下定義中。
「化學治療劑」係可用於治療癌症之化學化合物。化學治療藥劑之實例包括(但不限於)烷基化劑，例如噻替派(thiotepa)及Cytoxan®環磷醯胺；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)及烏得哌(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫化磷醯胺及三羥甲基蜜胺；番荔枝內酯(acetogenin)(尤其係布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括其合成類似物托泊替康(topotecan))；苔蘚抑制素(bryostatin)；卡利斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(尤其係念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉斯他汀(dolastatin)；多卡米星 (duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥，例如氮芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺、甲基二氯乙基胺(mechlorethamine)、甲基二氯乙基胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(foremustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)，尤其係卡奇黴素γ1I及卡奇黴素φI1(例如，參見Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，例如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素髮色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博萊黴素(bleomycin)、c放線菌素(cactinomycin)、卡拉黴素(carabicin)、洋紅黴素(carrninomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、Adriamycin®多柔比星(包括嗎啉基-多柔比星、氰基嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及去氧多柔比星)、泛艾黴素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、 絲裂黴素(例如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，例如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，例如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺醣苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶；比斯特氮芥(bestrabucil)；比生群(bisautrene)；依達曲沙(edatrexate)；地磷醯胺(defosfamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多醣(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoid)，例如美登 素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidanmol)；硝胺丙吖啶(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西左非蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)(尤其係T-2毒素、疣皰菌素A(verrucarin A)、桿孢菌素(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加賽特辛(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇(taxoid)，例如Taxol®太平洋紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、太平洋紫杉醇之無Abraxane® Cremophor之白蛋白改造之奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)、及Taxotere®多西他賽(Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France)；氮芥苯丁酸；Gemzar®吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲喋呤；鉑類似物，例如順鉑、奧沙利鉑及卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼；Navelbine®長春瑞濱；能滅瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；截瘤達(xeloda)；骨維壯(ibandronate)；伊立替康(Camptosar,CPT-11)(包括利用伊立替康與5-FU 及甲醯四氫葉酸之治療方案)；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，例如視黃酸；卡培他濱(capecitabine)；考布他汀(combretastatin)；甲醯四氫葉酸(LV)；奧沙利鉑，包括奧沙利鉑治療方案(FOLFOX)；降低細胞增殖之PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如，埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva®))及VEGF-A之抑制劑；及上述藥劑中任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
其他非限制性實例性化學治療劑包括抗激素劑，其用於調控或抑制激素對癌症之作用，例如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括(例如)他莫昔芬(tamoxifen)(包括Nolvadex®他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及Fareston®托瑞米芬(toremifene)；抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調控腎上腺中之雌激素產生，例如，4(5)-咪唑、胺魯米特、Megase®乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、Aromasin®依西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)、法曲唑(fadrozole)、Rivisor®伏氯唑(vorozole)、Femara®來曲唑(letrozole)及Arimidex®阿那曲唑(anastrozole)；及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳培林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其抑制與貼壁細胞增殖有關之信號傳導途徑中之基因(例如，PKC-α、Ralf及H-Ras)表現之彼等；核酶，例如VEGF表現抑制劑(例如，Angiozyme®核酶)及HER2表現抑制劑；疫苗，例如基因療法疫苗，例如，Allovectin®疫苗、Leuvectin®疫苗及Vaxid®疫苗；Proleukin® rIL-2；Lurtotecan®拓樸異構 酶1抑制劑；Abarelix® rmRH；及上述藥劑中任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
「抗血管生成劑」或「血管生成抑制劑」係指小分子量物質、多核苷酸(包括例如抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、經分離蛋白質、重組體蛋白質、抗體或其偶聯物或融合蛋白，其直接或間接抑制血管生成、血管發生或不期望之血管通透性。應理解，抗血管生成劑包括結合並阻斷血管生成因子或其受體之血管生成活性之彼等藥劑。舉例而言，抗血管生成劑係血管生成劑之抗體或其他拮抗劑，例如針對VEGF-A之抗體(例如，貝伐珠單抗(bevacizumab)(Avastin®))或針對VEGF-A受體之抗體(例如，KDR受體或Flt-1受體)；抗PDGFR抑制劑，例如Gleevec®(甲磺酸伊馬替尼)；阻斷VEGF受體信號傳導之小分子(例如，PTK787/ZK2284、SU6668、Sutent®/SU11248(蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate))、AMG706、或闡述於(例如)國際專利申請案WO 2004/113304中之彼等)。抗血管生成劑亦包括天然血管生成抑制劑，例如血管抑素、內皮抑素等。參見(例如)Klagsbrun及D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53：217-39；Streit及Detmar(2003)Oncogene 22：3172-3179(例如，表3列舉惡性黑色素瘤中之抗血管生成療法)；Ferrara及Alitalo(1999)Nature Medicine 5(12)：1359-1364；Tonini等人(2003)Oncogene 22：6549-6556(例如，表2列舉已知抗血管生成因子)；及Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8：200-206(例如，表1列舉用於臨床試驗中之抗血管生成劑)。
如本文所用「生長抑制劑」係指活體外或活體內抑制細胞(例如表現VEGF之細胞)之生長的化合物或組合物。因此，生長抑制劑可為顯著降低S期中之細胞(例如表現VEGF之細胞)之百分比者。生長抑制劑之實例包括 (但不限於)阻斷細胞週期進展(在除S期以外的點)的藥劑，諸如誘導G1阻滯及M-期阻滯之藥劑。典型M-期阻斷劑包括長春花(vincas)(長春新鹼及長春鹼)、紫杉烷(taxane)及拓樸異構酶II抑制劑(例如多柔比星、泛艾黴素、道諾黴素、依託泊苷及博來黴素)。阻滯G1之彼等藥劑亦滲透至S-期阻滯，例如，DNA烷基化劑，例如他莫昔芬、普賴松(prednisone)、達卡巴嗪、甲基二氯乙基胺、順鉑、胺甲蝶呤、5-氟尿嘧啶及阿糖胞苷。其他資訊可參見Mendelsohn及Israel編輯，The Molecular Basis of Cancer，第1章，標題為「Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs」，Murakami等人(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如第13頁。紫杉烷(太平洋紫杉醇及多西他賽)係皆源自紫杉樹之抗癌藥物。源自歐洲紫杉之多西他賽(Taxotere®,Rhone-Poulenc Rorer)係太平洋紫杉醇(Taxol®,Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多西他賽會促進微管自微管蛋白二聚體之組裝並藉由防止解聚(depolymerization)而使微管穩定，此可抑制細胞有絲分裂。
術語「抗贅瘤組合物」係指可用於治療癌症之組合物，其包含至少一種活性治療劑。治療劑之實例包括(但不限於，例如)化學治療劑、生長抑制劑、細胞毒性劑劑、放射療法中所用之藥劑、抗血管生成劑、除PD-1/PD-L1抑制劑外之其他癌症免疫治療劑、細胞凋亡劑、抗微管蛋白劑及用以治療癌症之其他藥劑，例如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑(例如，酪胺酸激酶抑制劑)、HER1/EGFR抑制劑(例如，厄洛替尼(erlotinib)(Tarceva®)、血小板源生長因子抑制劑(例如，Gleevec®(甲磺酸伊馬替尼))、COX-2抑制劑(例如，塞來昔布(celecoxib))、干擾素、CTLA-4抑制劑(例如，抗CTLA抗體伊匹單抗 (YERVOY®))、PD-L2抑制劑(例如，抗PD-L2抗體)、TIM3抑制劑(例如，抗TIM3抗體)、細胞介素、結合至以下靶標ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA、PD-L2、CTLA-4、TIM3或VEGF受體、TRAIL/Apo2中之一或多者之拮抗劑(例如，中和抗體)、及其他生物活性及有機化學劑等。本發明中亦包括其組合。
具體實施例
本揭示內容之某些具體實施例包括以下：
1. 一種治療個體之癌症之方法，其包含向該個體投與纖維母細胞生長因子受體2(FGFR2)抑制劑及至少一種免疫刺激劑，例如至少一種程式化細胞死亡1(PD-1)/程式化細胞死亡配體1(PD-L1)抑制劑。
2. 如實施例1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗體。
3. 如實施例2之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-1抗體。
4. 如實施例3之方法，其中該抗PD-1抗體包含選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗之抗體之重鏈及輕鏈CDR。
5. 如實施例4之方法，其中該抗PD-1抗體包含選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗之抗體之重鏈及輕鏈可變區。
6. 如實施例5之方法，其中該抗PD-1抗體選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗。
7. 如實施例2之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體。
8. 如實施例7之方法，其中該抗PD-L1抗體包含選自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C之抗體之重鏈及輕鏈CDR。
9. 如實施例8之方法，其中該抗PD-L1抗體包含選自BMS-936559、 MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C之抗體之重鏈及輕鏈可變區。
10. 如實施例9之方法，其中該抗PD-L1抗體選自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C。
11. 如實施例1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1融合分子。
12. 如實施例11之方法，其中該融合分子係AMP-224。
13. 如實施例1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1多肽，例如AUR-012。
14. 如實施例1至13中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑係FGFR2抗體。
15. 如實施例14之方法，其中該FGFR2抗體係FGFR2-IIIb抗體。
16. 如實施例15之方法，其中該FGFR2-IIIb抗體具有以下性質中之一或多者：a. 以高於與FGFR2-IIIc之親和力結合至FGFR2-IIIb或無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc；b. 抑制FGF2與人類FGFR2結合；c. 抑制FGF7與人類FGFR2結合；d. 抑制小鼠腫瘤模型中人類腫瘤之生長；e. 誘導ADCC活性；f. 具有增強之ADCC活性；g. 無岩藻糖基化；且h. 與對照相比，能增加小鼠腫瘤模型中腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CDR+ T細胞及巨噬細胞中之 一或多者的數目。
17. 如實施例15或實施例16之方法，其中該FGFR2抗體包含重鏈及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(ii)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(iii)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且該輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1；(v)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(vi)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。
18. 如實施例17之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈可變區包含與該SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
19. 如實施例17或18之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈可變區包含與該SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
20. 如實施例17至19中任一者之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
21. 如實施例17至20中任一者之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。
22. 如實施例17之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈包含與該SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
23. 如實施例17或22之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈包含與該SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
24. 如實施例17、22或23中任一者之方法，其中該FGFR2抗體之該 重鏈包含該SEQ ID NO：2之胺基酸序列。
25. 如實施例17或22至24中任一者之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈包含該SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
26. 如實施例15至25中任一者之方法，其中該FGFR2抗體係嵌合、人類化或人類抗體。
27. 如實施例15至26中任一者之方法，其中該FGFR2抗體選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。
28. 如實施例17至27中任一者之方法，其中該FGFR2抗體具有以下性質中之一或多者：a. 在位置Asn297無岩藻糖；b. 包含κ輕鏈恆定區；c. 包含IgG1重鏈恆定區；d. 與具有相同胺基酸序列之在位置Asn297經岩藻糖基化之抗體相比，在活體外具有增強之ADCC活性；e. 與具有相同胺基酸序列之在位置Asn297經岩藻糖基化之抗體相比，對Fc γ RIIIA具有增強之親和力；及f. 與對照相比，能增加小鼠腫瘤模型中腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者的數目。
29. 如實施例1至13中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑係FGFR2細胞外結構域(ECD)或FGFR2 ECD融合分子。
30. 如實施例29之方法，其中該FGFR2抑制劑係包含FGFR2 ECD及至少一個選自Fc結構域、白蛋白及聚乙二醇之融合配偶體的FGFR2 ECD 融合分子。
31. 如實施例30之方法，其中該FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：13-33或29-33中任一者之胺基酸序列。
32. 如實施例1至31中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑與該免疫刺激劑同時或依序投與。
33. 如實施例32之方法，其中該免疫刺激劑之一或多個劑量係在投與FGFR2抑制劑之前投與。
34. 如實施例33之方法，其中在投與該FGFR2抑制劑之前，該個體接受免疫刺激劑療法之完整過程。
35. 如實施例34之方法，其中該FGFR2抑制劑係在免疫刺激劑療法之第二過程期間投與。
36. 如實施例33至35中任一者之方法，其中在投與FGFR2抑制劑之前，該個體接受該至少一種免疫刺激劑之至少一個、至少兩個、至少三個或至少四個劑量。
37. 如實施例33至36中任一者之方法，其中該至少一種免疫刺激劑之至少一個劑量係與該FGFR2抑制劑同時投與。
38. 如實施例32之方法，其中該FGFR2抑制劑之一或多個劑量係在投與免疫刺激劑之前投與。
39. 如實施例38之方法，其中在投與該至少一種免疫刺激劑之前，該個體接受該FGFR2抑制劑之至少兩個、至少三個、至少三個或至少四個劑量。
40. 如實施例38或實施例39之方法，其中該FGFR2抑制劑之至少一個劑量係與免疫刺激劑同時投與。
41. 如實施例1至40中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑係以至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、10、15、20、25或30mg/kg之劑量或以由彼等mg/kg劑量中之任兩者界定之範圍(例如6-10mg/kg、10-15mg/kg或6-15mg/kg)投與。
42. 如實施例32至41中任一者之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含PD-1/PD-L1抑制劑。
43. 如實施例42之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係以至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5或10mg/kg之劑量投與。
44. 如實施例1至43中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑與該免疫刺激劑係每1、2、3、4或5週投與一次。
45. 如實施例1至44中任一者之方法，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
46. 如實施例1至45中任一者之方法，其中該癌症經選自手術、化學療法、放射療法或其組合之療法後復發或進展。
47. 如實施例1至46中任一者之方法，其中(a)該癌症先前經測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
48. 如實施例47之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
49. 如實施例48之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信 號測定。
50. 如實施例47至49中任一者之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率來測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
51. 如實施例47至50中任一者之方法，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
52. 如實施例48至50中任一者之方法，其中：a)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
53. 如實施例1至52中任一者之方法，其中該個體係PD-1/PD-L1抑制 劑不足反應者。
54. 如實施例1至53中任一者之方法，其中在該癌症之小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑引起腫瘤生長之加和或協同抑制。
55. 如實施例54之方法，其中該癌症係乳癌且該小鼠腫瘤模型包含4T1細胞。
56. 如實施例1至55中任一者之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中NK細胞之數目。
57. 如實施例1至56中任一者之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞之數目。
58. 如實施例1至57中任一者之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中CD3+、CD8+及/或CD4+ T細胞之數目。
59. 如實施例1至58中任一者之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率。
60. 一種組合物，其包含如實施例14至31中任一者中所述之FGFR2抑制劑及至少一種如實施例2至13中任一者中所述之免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
61. 如實施例60之組合物，其中該FGFR2抑制劑及該至少一種免疫刺激劑包含於單獨容器或隔室中。
62. 如實施例60或61之組合物，其進一步包含用於癌症治療之說明書。
63. 如實施例60至62中任一者之組合物，其用於癌症治療。
64. 如實施例63之組合物，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
65. 如實施例63至64中任一者之組合物，其中該癌症會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在。
66. 如實施例65之組合物，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
67. 如實施例66之組合物，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
68. 如實施例63至67中任一者之組合物，其中癌症具有藉由FISH測定之大於或等於2之FGFR2/CEN10比率。
69. 如實施例63至68中任一者之組合物，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
70. 如實施例63至69中任一者之組合物，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之 IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
71. 一種增加患有癌症之個體之腫瘤組織中NK細胞及/或PD-L1陽性細胞之數目的方法，其包含向該個體投與有效量之FGFR2抑制劑。
72. 如實施例71之方法，其中該FGFR2抑制劑係如實施例14至31中任一者之抑制劑。
73. 如實施例71或72之方法，其中該方法抑制該個體中至少一種腫瘤之腫瘤生長或減小體積。
74. 如實施例73之方法，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
75. 如實施例71至74中任一者之方法，其中(a)該癌症先前經測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
76. 如實施例75之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
77. 如實施例76之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
78. 如實施例75至77中任一者之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率來測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
79. 如實施例75至78中任一者之方法，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
80. 如實施例75至79中任一者之方法，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或 i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
81. 如實施例71至80中任一者之方法，其中該方法進一步包含在投與該FGFR2抗體後，自該個體獲得至少一個腫瘤試樣及測定該試樣中NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞之數目，且若NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞之該數目相對於FGFR2抗體投與之前之試樣增加，則向該個體投與至少一種免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
82. 一種治療個體之癌症之方法，其包含向該個體投與FGFR2抑制劑，且若該個體經測定相對於FGFR2抗體投與之前之試樣具有增加數目之NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞，則向該個體投與至少一種免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
83. 如實施例82之方法，其中該FGFR2抑制劑係如實施例14至31中任一者之抑制劑。
84. 如實施例82或83之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含至少一種如實施例2至13中任一者之PD-1/PD-L1抑制劑。
85. 如實施例82至84中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑及該至少一種免疫刺激劑係根據如實施例38或39之方法投與。
86. 一種增加癌症個體之腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目的方法，其包含投與FGFR2抑制劑，其中該抑制劑係具有增強之ADCC活性之FGFR2抗體。
87. 如實施例86之方法，其中該抗體係如實施例15至28中任一者之抗體。
88. 如實施例86或87之方法，其中在小鼠腫瘤模型中，與對照相比，投與該FGFR2抗體會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目，及/或增加該腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率。
89. 如實施例86至88中任一者之方法，其中該個體患有乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌或子宮內膜癌。
90. 如實施例86至89中任一者之方法，其中(a)該癌症先前經測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
91. 如實施例90之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
92. 如實施例91之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
93. 如實施例90至92中任一者之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率來測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
94. 如實施例89至93中任一者之方法，其中個體患有胃癌或膀胱癌。
95. 如實施例90至94中任一者之方法，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信 號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
96. 如實施例86至95中任一者之方法，其中該FGFR2抗體係每週、每兩週、每三週或每月一次投與至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、10、15、20、25或30mg/kg之劑量或投與彼等mg/kg劑量中之任兩者界定之範圍(例如6-10mg/kg、10-15mg/kg或6-15mg/kg)。
97. 一種確定胃癌或膀胱癌患者是否對利用FGFR2抑制劑之治療有反應的方法，其包含藉由IHC確定該胃癌或膀胱癌是否過表現FGFR2IIIb，其中該過表現係藉由在至少10%癌症之腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
98. 如實施例97之方法，其中該方法進一步包含藉由使用螢光原位雜 交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率來確定該FGFR2基因是否擴增，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
99. 如實施例97或98之方法，其中該患者經測定對FGFR2IIIb抗體治療有反應，條件係：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
100. 如實施例97至99中任一者之方法，其中該FGFR2抑制劑係如實施例14至31中任一者之抑制劑。
101. 如實施例97至100中任一者之方法，其中該治療包含以至少 0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、10、15、20、25或30mg/kg之劑量或由以彼等mg/kg劑量中之任兩者界定之範圍(例如6-10mg/kg、10-15mg/kg或6-15mg/kg)投與該FGFR2抑制劑。
102. 如實施例97至101中任一者之方法，其中該治療包含實施如實施例71、82或86之方法。
103. 如實施例97至101中任一者之方法，其中該治療進一步包含向該個體投與至少一種免疫刺激劑。
104. 如實施例103之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含如實施例2至13中任一者之該免疫刺激劑。
105. 如實施例103之方法，其中該治療包含根據如實施例32至44之方法中之任一者投與該FGFR2抑制劑及該至少一種免疫刺激劑，或其中該治療包含投與如實施例60至62中任一者之組合物。
實例
下文論述之實例意欲僅對本發明具有實例性且不應認為以任何方式限制。該等實例不欲表示下文實驗係所實施之所有實驗或唯一實驗。已努力確保關於所用數字(例如量、溫度等)之準確度，但應慮及一些實驗誤差及偏差。除非另外指明，否則份數係重量份數，分子量係重量平均分子量，溫度以℃表示，且壓力為大氣壓力或接近大氣壓力。
實例1：在4T1小鼠乳房腫瘤模型中，腫瘤生長抑制需要ADCC活性
自Charles River Laboratories(Wilmington,MA,USA)購得70隻8週齡雌性BALB/c小鼠(IACUC種類：AUP 2011編號01-03)。在到達後給予動物至少3天馴化並每個籠子圈養5隻動物且自由獲得食物及水。在馴化後，將其稱重，且在腫瘤細胞植入之前剃毛。
使用來自小鼠種系BALB/cfC3H之乳房腫瘤系4T1作為腫瘤模型且其係自ATCC(Manassas,VA,USA：目錄編號CRL-2539)獲得。於37℃下在具有10%胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸及1% Penn/Strep之RPMI 1640培養基(Mediatech,Inc.,Manassas,VA,USA；目錄號10-041-CV)中培養細胞。
藉由自小鼠頭部在第4乳房乳頭(乳頭)下正位注射向每一小鼠接種5×104個4T1細胞。隨後有規則地監測小鼠腫瘤體積及體重直至腫瘤體積經量測為100mm3 +/- 25mm3。在腫瘤達到100mm3 +/- 25mm3後，根據腫瘤大小將小鼠分類成四組用於投藥。第一組投用20mg/kg Fc-G1抗體(腹膜內(IP)，每兩週(BIW))，第二組投用20mg/kg具有SEQ ID NO：6-11之重鏈及輕鏈HVR之無岩藻糖基化FGFR2抗體(抗FGFR2)(IP，BIW)，且第三組投用20mg/kg具有N297Q突變使得此分子不能刺激ADCC活性之FGFR2抗體(抗FGFR2-N297Q)(IP，BIW)。
總之，與FcG1對照相比，利用抗FGFR2之處理引起腫瘤生長之約30%抑制(P<0.001)，而與對照相比，利用抗FGFR2-N297Q之治療不抑制腫瘤生長。(參見圖1a-b。)該等數據支持ADCC作為抗FGFR2腫瘤生長抑制之機制的作用。
實例2a：暴露於抗FGFR2抗體引起腫瘤組織內NK細胞增加及PD-L1表現細胞增加
對於免疫組織化學分析而言，如上文所述藉由正位注射向BALB/cfC3H小鼠接種5×104個4T1細胞。在腫瘤達到100mm3 +/- 25mm3(第0天)後，根據腫瘤大小將小鼠分成兩個投藥組：媒劑或10mg/kg抗FGFR2(IP)。將每一組細分成(a)在第0天接受一個或兩個劑量之小 鼠，或(b)在第3天接受一個或兩個劑量之小鼠，且分別在第1天或第4天投藥後24小時將小鼠安樂死，並經處理用於組織學或FACS分析。
對於組織學而言，在第1天及第4天，分別在第一及第二治療後24小時，將小鼠用CO2安樂死且隨後灌注磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(pH 7.4)。簡言之，快速打開小鼠胸部，且使用具有20規針之注射器經由左心室中之切口向主動脈中輸注40mL PBS。血液及PBS經由右心房中之開口離開。移出4T1正位腫瘤並於4℃下浸沒於10%中性緩衝福馬林(formalin)中。2小時後，將組織用PBS沖洗3次且隨後在PBS中之30%蔗糖中轉移過夜。次日，將腫瘤在OCT化合物中冷凍並儲存於-80℃下。
切割每一腫瘤之20-μm厚之連續切片。將切片在載玻片(VWR)上乾燥1至2小時。將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS可滲透化處理並於室溫下在PBS 0.3% Triton X-100(阻斷溶液)中之5%山羊正常血清中培育1小時以阻斷非特異性抗體結合。1小時後，移除阻斷溶液並將切片在一級抗體中培育過夜。為檢測NK細胞，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗NKp46(CD335；Biolegend，目錄號137602)一起培育。為檢測PD-L1，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗PD-L1(eBioscience，目錄號14-5982-82)一起培育。在連續切片中實施NK細胞及PD-L1染色，此乃因兩種一級抗體皆係在大鼠中生成。在5%正常血清中培育二級抗體僅陰性對照樣品而非一級抗體。
次日，在用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗後，於室溫下將樣品與於PBS中1：400稀釋之Alexa Fluor 594標記之山羊抗大鼠(Jackson Immuno Research，目錄號112-585-167)及Alexa Fluor 488標記之山羊抗兔(Jackson Immuno Research，目錄號111-545-144)二級抗體一起培育4小 時。之後，將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗，隨後在1%多聚甲醛(PFA)中固定，再次用PBS沖洗，並安裝於具有DAPI之Vectashield(載體，H-1200)中。使用DAPI以標記細胞核。
利用配備有AxioCam® HRc照相機之Zeiss Axiophot® 2加上螢光顯微鏡檢驗樣品。收集顯示腫瘤內NKp46+及PD-L1+細胞之量及分佈之每一實驗組的代表性影像且其顯示於圖2a-2d中。
在注射媒劑之小鼠之4T1腫瘤中，檢測最小散射之NKp46+ NK細胞且大部分該等細胞位於腫瘤周邊。(圖2a。)藉由比較，在用10mg/kg之抗FGFR2治療1天後，NKp46+ NK細胞更眾多。儘管大部分該等細胞係在腫瘤邊緣發現，但一些已浸潤腫瘤核心。(參見圖2a。)在抗FGFR2之第二劑量後第4天觀察類似結果。(圖2b。)
PD-L1染色揭示，在經媒劑處理1天之4T1腫瘤中，僅在腫瘤內之幾個細胞中發現PD-L1免疫反應性。(圖2c。)相比之下，在抗FGFR2之1個劑量之後24小時，腫瘤核心內之PD-L1陽性細胞更眾多。(圖2c。)在處理開始後第4天觀察類似結果。(圖2d。)
作為用以定量NK細胞之增加之正交分析，對接受2個劑量之鹽水或10mg/Kg如上文所述抗FGFR2之帶有4T1腫瘤之小鼠實施FACS。對於FACS分析而言，將腫瘤切成1-2mm片並於37℃下在振盪培育器中之具有10% FBS、50U/mL DNAse I及250U/mL膠原酶I(Worthington Biochemical Corporation,Lakewood,NJ)之DMEM中放置30min。使細胞通過70μm耐綸網濾器，且根據標準方案利用購自以下之抗體對單細胞懸浮液進行染色：BD Biosciences(San Jose,CA)：CD45(純系30-F11)及CD11b(1D3)；Affymtrix eBioscience(San Diego,CA)：CD16/32 (FC受體阻斷，93)、CD335(NKp46，29A1.4)、CD8a(53.67)及CD3e(145-2C11)；R&D Systems(Minneapolis,MN)：EphA2(233720)；或ThermoFisher Scientific(Grand Island,NY)：Live/Dead Aqua。固定細胞且次日在BD LSRII上獲取。使用FlowJo(V10,Ashland,OR)利用以下門控策略分析結果：CD45+ EphA2-、單峰(FSC-H對FSC-A)、活細胞(活/死陰性)及CD11b-以分離活的淋巴球。將NK細胞門控為NKp46+ CD3-，且表示為CD45+活的單細胞之百分比。
如圖3中所顯示，經抗FGFR2治療之腫瘤與經鹽水對照處理腫瘤相比展現增加之NK細胞。
實例2b：暴露於抗FGFR2抗體而非抗FGFR2 N297Q引起腫瘤組織內NK細胞、T細胞增加及PD-L1表現細胞增加
如上文實例1中所述藉由正位注射向BALB/cfC3H小鼠接種5×104個4T1細胞。在腫瘤達到100mm3 +/- 25mm3(第0天)後，根據腫瘤大小將小鼠分類成三個投藥組：媒劑(對照組)、10mg/kg無岩藻糖基化抗FGFR2抗體(IP)(抗FGFR2組)及10mg/kg抗FGFR2 N297Q抗體(抗FGFR2 N297Q組)。N297Q修飾係抗體之Fc結構域中意欲消除抗體之效應物功能之突變。
將每一組細分成(a)在第0天接受一個或兩個劑量之小鼠，或(b)在第3天接受一個或兩個劑量之小鼠，且分別在第1天或第4天投藥後24小時將小鼠安樂死，並經處理用於組織學或FACS分析。
對於組織學而言，在第1天及第4天，分別在第一及第二治療後24小時，將小鼠用CO2安樂死且隨後灌注磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(pH 7.4)。簡言之，快速打開小鼠胸部，且使用具有20規針之注射器經由左心室中之切 口向主動脈中輸注40mL PBS。血液及PBS經由右心房中之開口離開。移出4T1正位腫瘤並於4℃下浸沒於10%中性緩衝福馬林(formalin)中。2小時後，將組織用PBS沖洗3次且隨後在PBS中之30%蔗糖中轉移過夜。次日，將腫瘤在OCT化合物中冷凍並儲存於-80℃下。
切割每一腫瘤之20-μm厚之連續切片。將切片在載玻片(VWR)上乾燥1至2小時。將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS可滲透化處理並於室溫下在PBS 0.3% Triton X-100(阻斷溶液)中之5%山羊正常血清中培育1小時以阻斷非特異性抗體結合。1小時後，移除阻斷溶液並將切片在一級抗體中培育過夜。為檢測NK細胞，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗NKp46(CD335；Biolegend，目錄號137602)一起培育。為檢測PD-L1，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗PD-L1(eBioscience，目錄號14-5982-82)一起培育。為檢測CD3+ T細胞，將切片與阻斷溶液中1：500之倉鼠抗CD3抗體(BD biosciences，目錄號553058)一起培育。為檢測CD4+ T細胞，將切片與阻斷溶液中1：500之大鼠抗CD4抗體(AbD Serotec，目錄號MCA4635)一起培育。為檢測CD8+ T細胞，將切片與阻斷溶液中1：500之大鼠抗CD8抗體(Abcam，目錄號ab22378)一起培育。在連續切片中實施NK細胞及PD-L1染色，如同在大鼠中生成兩個一級抗體。在相同切片中一起染色CD3及CD4陽性細胞。亦在相同切片中實施CD3及CD8染色。在5%正常血清中培育二級抗體僅陰性對照樣品而非一級抗體。
次日，在用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗後，於室溫下將樣品與於PBS中1：400稀釋之Alexa Fluor 594標記之山羊抗大鼠(Jackson Immuno Research，目錄號112-585-167)及Alexa Fluor 488標記之山羊抗 倉鼠(Jackson Immuno Research，目錄號127-545-160)二級抗體一起培育4小時。其後，將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗，隨後在1%多聚甲醛(PFA)中固定，再次用PBS沖洗，並安裝於具有DAPI之Vectashield(載體，H-1200)中。使用DAPI以標記細胞核。
利用配備有AxioCam® HRc照相機之Zeiss Axiophot® 2加上螢光顯微鏡檢驗樣品。收集顯示腫瘤內NKp46+及PD-L1+細胞之量及分佈之每一實驗組的代表性影像且其顯示於圖5a-5b中。
在注射媒劑或抗FGFR2 N297Q之小鼠之4T1腫瘤中，在處理1天後檢測最小散射之NKp46+ NK細胞且大部分該等細胞位於腫瘤周邊。(圖5a。)藉由比較，在用10mg/kg之抗FGFR2治療1天後，NKp46+ NK細胞更眾多。儘管大部分該等細胞係在腫瘤邊緣發現，但一些已浸潤腫瘤核心。(參見圖5a。)在抗FGFR2之第二劑量後第4天觀察類似結果。(圖5b。)
PD-L1染色揭示，在經媒劑或抗FGFR2 N297Q處理1天之4T1腫瘤中，僅在腫瘤內之幾個細胞中發現PD-L1免疫反應性。(圖5a。)相比之下，在抗FGFR2之1個劑量之後24小時，腫瘤核心內之PD-L1陽性細胞更眾多。在處理開始後第4天觀察類似結果。(圖5b。)
CD3、CD8及CD4染色揭示，在經媒劑或抗FGFR2 N297Q處理1天或4天之腫瘤中，T細胞浸潤保持僅在腫瘤周邊。相比之下，在第4天，經抗FGFR2處理之腫瘤引起腫瘤核心內CD3、CD8及CD4陽性T細胞之浸潤。(圖6a-6b。)
作為用以定量NK細胞之增加之正交分析，對接受2個劑量之鹽水或10mg/Kg如上文所述抗FGFR2或抗FGFR2 N297Q之帶有4T1腫瘤之小鼠 實施FACS。對於FACS分析而言，將腫瘤切成1-2mm片並於37℃下在振盪培育器中之具有10% FBS、50U/mL DNAse I及250U/mL膠原酶I(Worthington Biochemical Corporation,Lakewood,NJ)之DMEM中放置30min。使細胞通過70μm耐綸網濾器，且根據標準方案利用購自以下之抗體對單細胞懸浮液進行染色：BD Biosciences(San Jose,CA)：CD45(純系30-F11)CD4,(GK1.5)及CD11b(1D3)；Affymtrix eBioscience(San Diego,CA)：CD16/32(FC受體阻斷，93)、CD335(NKp46，29A1.4)、CD8a(53.67)及CD3e(145-2C11)；R&D Systems(Minneapolis,MN)：EphA2(233720)；或ThermoFisher Scientific(Grand Island,NY)：Live/Dead Aqua。固定細胞且次日在BD LSRII上獲取。使用FlowJo(V10,Ashland,OR)利用以下門控策略分析結果：CD45+ EphA2-、單峰(FSC-H對FSC-A)、活細胞(活/死陰性)及CD11b-以分離活的淋巴球。將NK細胞門控為NKp46+ CD3-。在CD3+細胞上門控CD4及CD8 T細胞，且每一亞組表示為CD45+活的單細胞之百分比。
如圖10a中所顯示，經抗FGFR2處理之腫瘤與經鹽水對照或FGFR2 N297Q處理腫瘤相比展現NK細胞增加。另外，在第二劑量後24小時，CD3、CD8及CD4 T細胞升高(圖7-9)，且與媒劑或抗FGFR2 N297Q相比，利用抗FGFR2處理之淋巴對骨髓比率優先增加(圖10b-c)。
實例2c：暴露於抗FGFR2抗體而非抗FGFR2 N297Q抗體增加腫瘤組織內F480+巨噬細胞
為檢測4T1腫瘤中之巨噬細胞，將切片與阻斷溶液中之1：500大鼠抗F480抗體(Bio-Rad AbD Serotec Inc，目錄號MCA497R)一起培育。在連續切片中實施NK細胞、PD-L1及F480染色，此時在大鼠中生成所有該等 一級抗體。
在經對照處理之小鼠之4T1腫瘤中，在整個腫瘤中檢測到大量F480+巨噬細胞(圖11，頂部組)。藉由比較，在用10mg/kg之抗FGFR2處理4天後，腫瘤內檢測到之F480+細胞之數目增加(圖11，中間組)。在經10mg/kg抗FGFR2抗體處理1天或經抗FGFR2-N297Q突變體抗體處理1天或4天之帶有4T1腫瘤之小鼠中未觀察到此效應(圖11，下方組)。
實例3：乳房4T1同源腫瘤模型中FGFR2抗體與PD-1抗體之組合
在此實例中，在免疫勝任小鼠中之乳癌之4T1同源鼠類模型中評估無岩藻糖基化FGFR2抗體(抗FGFR2)與抗PD-1抗體(Bio X Cell,West Lebanon,NH,USA，純系RMP1-14)之組合之抗腫瘤效應。4T1模型展示FGFR2-IIIb之適度過表現，但並非FGFR2擴增。
自Charles River Laboratories(Wilmington,MA,USA)購得70隻8週齡雌性BALB/c小鼠。在到達後給予動物至少3天馴化並每個籠子圈養5隻動物且自由獲得食物及水。在馴化後，將其稱重，且在腫瘤細胞植入之前剃毛。
使用來自小鼠種系BALB/cfC3H之乳房腫瘤系4T1作為腫瘤模型且其係自ATCC(Manassas,VA,USA：目錄編號CRL-2539)獲得。於37℃下在具有10%胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸及1% Penn/Strep之RPMI 1640培養基(Mediatech,Inc.,Manassas,VA,USA；目錄號10-041-CV)中培養細胞。
藉由自小鼠頭部在第4乳房乳頭(乳頭)下正位注射向每一小鼠接種5×104個4T1細胞。隨後有規則地監測小鼠腫瘤體積及體重直至腫瘤體積經量測為150mm3 +/- 25mm3。在腫瘤達到150mm3 +/- 25mm3後，根據 腫瘤大小將小鼠分類成四組用於投藥。第一組投用10mg/kg Ig-FC對照(腹膜內(IP)，每兩週(BIW))，第二組投用5mg/kg抗PD-1抗體(IP，第0、3及7天)，第三組投用10mg/kg FGFR2抗體(IP，BIW)，且第四組投用分別5mg/kg及10mg/kg之抗PD-1與FGFR2抗體之組合。
在植入後12天(投藥第0天)、植入後15天及植入後18天量測腫瘤體積。圖4a及b顯示，與Ig-FC對照組相比，截至第18天，FGFR2抗體顯著減小小鼠中4T1腫瘤體積(藉由T-測試，分別P<0.001或P=0.01)。與單獨給予之FGFR2抗體相比，截至第18天，FGFR2抗體與抗PD-1抗體之組合進一步減小腫瘤體積(分別P=0.08)。(參見圖4a-b。)且與單獨給予之抗PD-1抗體相比，截至第18天，FGFR2抗體與抗PD-1抗體之組合進一步減小腫瘤體積(P<0.01)。
總之，用FGFR2抗體處理引起與IgFC相比腫瘤生長約25%抑制，而用抗PD-1抗體處理引起與對照相比腫瘤生長0%抑制。用抗FGFR2及抗PD-1抗體二者處理將腫瘤生長抑制約40%，此展現組合療法至少具有加和益處。
下表顯示相對於Fc-G1對照之分數腫瘤體積(FTV)之分析。
a：FTV=分數腫瘤體積=經處理之平均TV/平均TV對照
b：腫瘤細胞植入後之天數
c：預計值=(平均FTV藥物1)×(平均FTV藥物2)
d：觀察值=藥物1加上藥物2之組合之平均FTV
e：報告值=預計值(c)÷觀察值(d)；值>1指示協同反應，而值=1指示加和反應且值<1指示拮抗反應
此實驗研究抗FGFR2抗體對NK細胞耗盡之腫瘤組織之效應。使用來自小鼠種系BALB/cfC3H之乳房腫瘤系4T1作為腫瘤模型且其係自ATCC(Manassas,VA,USA：目錄編號CRL-2539)獲得。於37℃下在具有10%胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸及1% Penn/Strep之RPMI 1640培養基(Mediatech,Inc.,Manassas,VA,USA；目錄號10-041-CV)中培養細胞。
藉由自小鼠頭部在第4乳房乳頭(乳頭)下正位注射向每一小鼠接種5×104個4T1細胞。隨後有規則地監測小鼠腫瘤體積及體重直至腫瘤體積經量測為100mm3 +/- 25mm3。在腫瘤達到125mm3 +/- 25mm3後，根據腫瘤大小將小鼠分類成四組用於投藥(第0天)。第1組投用10mg/kg人類Fc-G1對照抗體(腹膜內(IP)，第0天及第3天)。在0天向第2組i.v.投用50mg/kg兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(Wako Chemicals,Osaka,Japan)一次，抗體經設計以耗盡BalbC小鼠之NK細胞。第3組投用10mg/kg抗FGFR2(IP，在第0天及第3天)。第4組投用50mg/kg兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(第0天)與10mg/kg抗FGFR2(IP，在第0天及第3天)之組合。
對於組織學而言，在第4天，在第二處理後24小時，將小鼠用CO2安樂死且隨後灌注磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(pH 7.4)。簡言之，快速打開小鼠胸部，且使用具有20規針之注射器經由左心室中之切口向主動脈中輸注40mL PBS。血液及PBS經由右心房中之開口離開。移出4T1正位腫瘤並於4℃下浸沒於10%中性緩衝福馬林(formalin)中。2小時後，將組織用PBS沖洗3次且隨後在PBS中之30%蔗糖中轉移過夜。次日，將腫瘤在OCT化合物中冷凍並儲存於-80℃下。
切割每一腫瘤之20-μm厚之連續切片。將切片在載玻片(VWR)上乾燥1至2小時。將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS可滲透化處理並於室溫下在PBS 0.3% Triton X-100(阻斷溶液)中之5%山羊正常血清中培育1小時以阻斷非特異性抗體結合。1小時後，移除阻斷溶液並將切片在一級抗體中培育過夜。為檢測NK細胞，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗NKp46(CD335；Biolegend，目錄號137602)一起培育。為檢測PD-L1，將切片與在阻斷溶液中1：500稀釋之大鼠抗PD-L1(eBioscience，目錄號14-5982-82)一起培育。為檢測CD3+ T細胞，將切片與在阻斷溶液中1：500之倉鼠抗CD3抗體(BD biosciences，目錄號553058)一起培育。在連續切片中實施NK細胞及PD-L1染色，此時在大鼠中生成所有該等一級抗體。在5%正常血清中培育二級抗體僅陰性對照樣品而非一級抗體。
次日，在用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗後，於室溫下將樣品與於PBS中1：400稀釋之Alexa Fluor 594標記之山羊抗大鼠(Jackson Immuno Research，目錄號112-585-167)及Alexa Fluor 488標記之山羊抗倉鼠(Jackson Immuno Research，目錄號127-545-160)二級抗體一起培育4小時。之後，將樣品用含有0.3% Triton X-100之PBS沖洗，隨後在1%多聚甲醛(PFA)中固定，再次用PBS沖洗，並安裝於具有DAPI之Vectashield(載體，H-1200)中。使用DAPI以標記細胞核。
利用配備有AxioCam® HRc照相機之Zeiss Axiophot® 2加上螢光顯微鏡檢驗樣品。收集顯示腫瘤內NKp46+、CD3+及PD-L1+細胞之量及分佈之每一實驗組的代表性影像且其顯示於圖12-14中。
在注射Fc-G1對照抗體之小鼠之4T1腫瘤中，在腫瘤內檢測到最小散射之NKp46+ NK細胞(圖12，頂部組)。與對照相比，投與以50mg/kg投 用之兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體減少NKp46+ NK細胞之數目(圖12，第二組)。在用10mg/kg之抗FGFR2處理4天後，NKp46+ NK細胞更眾多。(參見圖12，第三組。)但在抗FGFR2與兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體及抗FGFR2組合時，未觀察到此增加。在組合處理後，浸潤NKp46+ NK細胞之數目與對照相當(圖12，第四組)。
CD3染色揭示，在經對照處理4天之4T1腫瘤中，在腫瘤中發現極少稀疏CD3+ T細胞且其大部分位於腫瘤周邊(圖13，頂部組)。與對照相比，利用以50mg/kg投用之兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之處理不影響CD3+ T細胞之數目(圖13，第二組)。在用10mg/kg抗FGFR2處理4天後，浸潤CD3+ T細胞之數目增加(圖13，第三組)。藉由比較，在抗FGFR2與兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體組合時，浸潤CD3+ T細胞之數目與對照相當(圖13，第四組)。
PD-L1染色揭示，在經對照處理4天之4T1腫瘤中，僅在腫瘤內之稀疏細胞中發現PD-L1免疫反應性(圖14，頂部組)。利用兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之處理不影響PD-L1免疫反應性(圖14，第二組)。利用單獨抗FGFR2之處理增加PD-L1陽性細胞之數目(圖14，第三組)，但在抗FGFR2係與兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體組合給予時，PD-L1染色類似於對照(圖14，第四組)。
實例4b：在NK細胞耗盡劑存在下，自抗FGFR2抗體之腫瘤生長抑制減弱
此實驗研究4T1同源腫瘤模型中耗盡NK細胞對抗FGFR2效能之效應。使用來自小鼠種系BALB/cfC3H之乳房腫瘤系4T1作為腫瘤模型且其係自ATCC(Manassas,VA,USA：目錄編號CRL-2539)獲得。於37℃下在具有10%胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸及1% Penn/Strep之RPMI 1640培 養基(Mediatech,Inc.,Manassas,VA,USA；目錄號10-041-CV)中培養細胞。
藉由自小鼠頭部在第4乳房乳頭(乳頭)下正位注射向每一小鼠接種5×104個4T1細胞。隨後有規則地監測小鼠腫瘤體積及體重直至腫瘤體積經量測為100mm3 +/- 25mm3。在腫瘤達到100mm3 +/- 25mm3後，根據腫瘤大小將小鼠分類成四組用於投藥(第0天)。第1組投用PBS作為對照(腹膜內(IP)，第0天及第3天)。在0天向第2組i.v.投用50mg/kg兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(Wako Chemicals,Osaka,Japan)一次，抗體經設計以耗盡BalbC小鼠中之NK細胞。第3組投用10mg/kg抗FGFR2(IP，在第0天及第3天)。第4組投用50mg/kg兔抗缺乏唾液酸基之GM1抗體(第0天)與10mg/kg抗FGFR2(IP，在第0天及第3天)之組合且每兩週監測腫瘤體積。
總之，與PBS對照組及抗缺乏唾液酸基之GM1抗體組(P<0.05)相比，利用抗FGFR2之處理引起腫瘤生長之約35%抑制(P<0.01)。與PBS對照組相比，利用抗缺乏唾液酸基之GM1抗體之處理對腫瘤負荷無效應。與抗FGFR2組(P<0.05)相比，抗缺乏唾液酸基之GM1抗體與抗FGFR2之組合引起腫瘤生長抑制減弱，此表明NK細胞及ADCC活性在4T1同源腫瘤模型中促進腫瘤生長抑制係重要的。與組織學數據組合，抗FGFR2藉由經由先天及適應性免疫系統修飾腫瘤微環境來抑制4T1腫瘤負荷。
實例4c：在無適應性免疫系統之CB17 SCID小鼠中鈍化抗FGFR2驅動之腫瘤生長抑制
自Charles River Laboratories(Wilmington,MA,USA)購得8週齡之雌性CB17 SCID小鼠。在到達後給予動物至少3天馴化並每個籠子圈養5隻動物且自由獲得食物及水。在馴化後，將其稱重，且在腫瘤細胞植入之 前剃毛。
使用小鼠之同源乳房腫瘤系4T1作為腫瘤模型且其係自ATCC(Manassas,VA,USA：目錄編號CRL-2539)獲得。於37℃下在具有10%胎牛血清、2mM L-麩醯胺酸及1% Penn/Strep(其係青黴素(penicillin)及鏈黴素(streptomycin))之RPMI 1640培養基(Mediatech,Inc.,Manassas,VA,USA；目錄號10-041-CV)中培養細胞。
藉由自小鼠頭部在第4乳房乳頭(乳頭)下正位注射向每一小鼠接種5×104個4T1細胞。隨後有規則地監測小鼠腫瘤體積及體重直至腫瘤體積經量測為80mm3 +/- 25mm3。在第12天，在腫瘤達到80mm3 +/- 25mm3後，根據腫瘤大小將小鼠分類成兩組用於投藥。第一組投用媒劑對照，且第二組投用20mg/Kg無岩藻糖基化抗FGFR2抗體(腹膜內(IP)，在第12及15天)。
與BalbC小鼠中腫瘤體積之約30%、P<0.001減小相比(實例1)，與具有完整先天免疫系統(NK細胞及巨噬細胞)但無適應性免疫細胞組份(T細胞及B細胞)之CB17 SCID小鼠中之媒劑對照相比，利用抗FGFR2抗體之處理引起腫瘤生長之約20%抑制、P<0.05。
該等數據表明，抗FGFR2抗體可刺激先天免疫細胞以起始直接腫瘤細胞殺傷，但CB17 SCID小鼠展現對於抗FGFR2抗體之鈍化反應，此可能係由於其不可參與適應性免疫系統。此進一步展現抗FGFR2抗體與先天及適應性免疫系統一致地起作用以驅動在免疫勝任小鼠中引起持續腫瘤生長抑制之腫瘤微環境變化。
實例5：患有經抗FGFR2抗體處理之晚期實體腫瘤之癌症患者的開放標籤、I期研究
在包含SEQ ID NO：6-11之重鏈及輕鏈HVR之無岩藻糖基化FGFR2抗體之劑量遞增研究中，在28天週期中每2週利用該抗體治療患有任何局部晚期或轉移性實體腫瘤或淋巴瘤且已耗竭標準療法之約30名患者。在研究之部分1A中，向患者之6個隊列投與劑量遞增研究中之6個不同劑量值：0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg及15mg/kg。評價患者之28天週期中劑量限制毒性之任何出現。若臨床上適應，則可跟隨額外28天週期。
在部分1B中，在至多30個胃癌患者中及/或在已知FGFR2基因擴增或FGFR2b蛋白質過表現之患者中執行進一步安全性及效能評估。此部分中之個體最初接受低於部分1A中6個隊列之目前最高劑量值的一個劑量值，即0.3、1、3或10mg/kg，且若在部分1A中未鑑別最大耐受劑量，則在部分1B中可能遞增至15mg/kg。
在研究之部分1A及1B中鑑別參照劑量後，部分2將開始。部分2包括具有組織學文獻記載之胃或胃食道癌或其他組織學或細胞學確認之實體腫瘤類型之患者，其具有：(a)FGFR2b過表現與FGFR2擴增；(b)FGFR2b過表現而無FGFR2擴增，或(c)FGFR2b非過表現，且具有在標準治療後進展或不適於標準治療之局部復發或轉移性疾病，且亦具有如藉由RECIST 1.1版定義之可量測疾病。將患者分組成三個隊列。約30名患者患有胃癌且FGFR2b過表現(藉由IHC分析測定為3+)及FGFR2基因擴增(如藉由FISH分析測定之FGFR2對CEN10之比率2)。約30名患者患有胃癌且FGFR2b過表現(IHC 3+)但不存在FGFR2b基因擴增(約1之FISH比率)。約10名患者不具有FGFR2b過表現(0至2+之IHC分析)。
研究之詳細目標、方案納入/排除準則係如下： 主要目標係評估抗體之遞增劑量在患有實體腫瘤之患者中之安全性概況、及測定最大耐受劑量(MTD)及推薦劑量(RD)(部分1A)；及評估抗體之遞增劑量在患有晚期胃或胃食道癌(部分1B)(在本文中統稱為「胃癌」)之患者中之安全性概況。次要目標係：(a)表徵靜脈內投與之抗體之單一及多個劑量在胃癌患者及其他實體腫瘤患者中之PK概況；(b)評估長期暴露於所投與抗體之安全性及耐受性；(c)評估患有FGFR2b選擇胃癌之患者中之客觀反應率(ORR)(僅部分2)；及(d)評估具有FGFR2b選擇胃之反應患者中之反應持續時間(僅部分2)。
一些探索性目標係：評估患有在FGFR2擴增存在或不存在下FGFR2b過表現胃腫瘤之患者中之穩定疾病狀態及持續時間(僅部分2)；評價患有在FGFR2擴增存在或不存在下FGFR2b過表現胃腫瘤之患者中之無進展存活(PFS)(僅部分2)；及(c)探索腫瘤組織中FGFR2b過表現程度及FGFR2擴增與臨床結果之間之相關性。
此係三部分、開放標籤、安全性、耐受性及PK研究。患者入選至研究之部分1(A或B)或部分2中，而非部分1及2二者中。至多28天(4週)之初始篩選時段後，在28天週期中每2週用抗體治療患者。在部分1A中，針對安全性評價及劑量限制毒性(DLT觀察時段)之出現觀察每一入選患者28天。若臨床上適應，可在28天週期中每2週投與其他治療(延長治療時段)。在部分1B中，在28-天週期中每2週以目前部分1A DLT清除劑量值治療患者。在部分2中，在28-天週期中每2週以在評價部分1A及1B中獲得之數據後選擇之推薦劑量(RD)用抗FGFR2抗體治療患者。
部分1A係患有任何局部晚期或轉移性實體腫瘤或淋巴瘤且標準療法已耗竭之患者中的劑量遞增研究。預期約6個劑量隊列，其中每一隊列中 入選最少3名患者。預期劑量值係0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg及15mg/kg。安全性及PK參數之綜述可告知向隊列添加替代劑量值或劑量方案(例如較不頻繁投藥)之決定以達到最佳靶暴露。所有劑量遞增決定皆係基於DLT、整體安全性及耐受性之評價且將在入選每一隊列之最後患者完成第一治療週期後進行。劑量遞增決定將由發起人及研究者組成之隊列審議委員會(Cohort Review Committee，CRC)同意。最大耐受劑量(MTD)定義為在第1週期(安全性及PK評價時段)期間<33%患者經歷DLT之最大劑量。若在3名患者中之1個中觀察到DLT，則3個額外患者將以該相同劑量值入選。劑量遞增可繼續，直至以劑量值治療之3至6名患者中之2個經歷DLT為止。隨後認為下一較低劑量為MTD。或者，在推斷已達成MTD之前，可探索最後清除之劑量值與引起>33% DLT之劑量值之間之中間劑量。一旦達到MTD或RD，可在開始部分2之前添加3至10個額外胃癌患者，以進一步探索此劑量值下之安全性及PK。
以下算法用於部分1A劑量遞增決定：
倘若未鑑別出MTD但藥物暴露超過基於非臨床藥理學數據或臨床PK概況認為必需之彼等，則發起人及研究者可決定中斷劑量遞增。
在完成第1週期(安全性及PK評價時段)時，部分1A患者可參與可選延長治療時段，其在第2週期之第1天開始。在4週週期中每2週投與抗FGFR2抗體直至疾病進展、不可接受之毒性、患者或醫師要求中斷、死亡或停止研究。
部分1B之目的係在開始部分2之前進一步評價胃癌患者中抗FGFR2抗體之安全性及評估PK。已顯示一些抗體(例如，貝伐珠單抗及曲妥珠單抗)之清除率在胃癌患者中較在患有其他實體腫瘤之患者中更快速。入選患者可為回溯性測試其腫瘤之胃癌患者，或已知FGFR2基因擴增或FGFR2b蛋白質過表現之彼等。以與部分1A劑量遞增之交錯模式，部分1B中之患者入選低於部分1A中所研究之目前最高劑量值隊列之一個劑量值。舉例而言，若所研究之部分1A中之目前劑量值係3mg/kg，部分1B患者之入選將為1mg/kg劑量值；若部分1A中所研究之目前劑量值係6mg/kg，部分1B患者之入選將為3mg/kg劑量值。
在部分1B中，在每一劑量值下可入選約3名患者，其中由發起人及研究者選定入選至多6名患者/劑量隊列。若部分1A中未鑑別出MTD，則劑量遞增在部分1B中可繼續高達15mg/kg。
在由CRC基於整體安全性、耐受性、PK及自非臨床數據外推之有效暴露之估計鑑別推薦劑量(RD)時，部分2中之入選開始。RD可與部分1A中鑑別之MTD相同或可不相同。舉例而言，若未達到MTD，或若MTD下之暴露遠高於認為效能所需之值，或若部分1B患者或兩個部分1(A及B)之治療之後續週期之數據提供關於安全性概況之額外理解，則RD可為與MTD不同、但不高於其之劑量。一旦確立RD，基於FGFR2b表現選擇之患有胃癌之患者入選研究之部分2。部分2患者入選且經治療以進一步表徵 具有來自抗體治療之臨床益處之最大潛能之所選癌症患者群體中之安全性及初步效能。治療可繼續直至疾病進展、不可接受之毒性、患者或醫師決定中斷、死亡或停止研究。
入選部分1(A或B)或部分2之患者必須符合所有以下納入準則：
1)在任何研究特定評估之前，瞭解並簽署機構審查委員會/獨立倫理委員會批准之知情同意書；
2)預期壽命至少3個月；
3)ECOG體能狀態為0至1；
4)在簽署知情同意書時，年齡18歲，但臺灣患者除外，在簽署知情同意書時患者之年齡必須20；
5)在性活躍患者(即，未經歷連續12個月無月經定義之絕經或尚未進行永久性絕育術之育齡女性，或尚未進行永久性絕育術之男性)中，願意使用2種有效之避孕方法，其中一種必須係物理屏障方法(保險套、橫膈膜或子宮頸/穹頂帽)，直至最後劑量之抗FGFR2抗體後6個月。其他有效避孕形式係在篩選前至少6個月永久性絕育(子宮切除術及/或雙側卵巢切除術、或利用手術雙側輸卵管結紮或輸精管切除術)。育齡女性患者必須在研究前至少90天進行穩定之口服避孕療法或子宮內或植入裝置，或作為生活方式戒除性交。
6)充分的血液及生物學功能，由以下實驗室值確認：
a)骨髓功能
i)ANC1.5×109/L
ii)血小板>100×109/L
iii)血紅素9g/dL
b)肝功能
i)天冬胺酸轉胺酶(AST)及丙胺酸轉胺酶(ALT)3×正常值上限(ULN)；若肝轉移，則5×ULN
ii)膽紅素1.5×ULN
c)腎功能
i)血清肌酸酐1.5×ULN
7)可用於測定FGFR2b表現及FGFR2擴增之腫瘤組織(對於部分1A患者係可選的)。
入選研究之部分1A(劑量遞增)之患者必須亦滿足以下納入準則：
8)組織學或細胞學確認之局部復發或轉移並且在標準治療後進展或不適於標準治療之實體腫瘤或淋巴瘤；
9)可量測或不可量測之疾病。
入選研究之部分1B之患者必須亦滿足以下納入準則：
10)組織學文獻記載之胃或胃食道癌；
11)用於前瞻性或回溯性測定FGFR2b表現及FGFR2擴增之腫瘤組織；
12)在標準治療後進展或不適於標準治療之局部復發或轉移性疾病；
13)如藉由RECIST 1.1版定義之可量測之疾病。
入選研究之部分2(劑量擴展)之患者必須亦滿足以下納入準則：
14)組織學文獻記載之胃或胃食道癌，其中a)FGFR2b過表現且FGFR2擴增，或b)FGFR2b過表現而無FGFR2擴增，或 c)FGFR2b未過表現；
15)在標準治療後進展或不適於標準治療之局部復發或轉移性疾病；
16)如藉由RECIST 1.1版定義之可量測之疾病。
若以下準則中之任一者適用，則排除入選部分1(A或B)或部分2之患者：
1)未經治療或症狀性中樞神經系統(CNS)轉移。患有無症狀CNS轉移之患者係合格的，前提係其已經在臨床上穩定至少4週，並且不需要介入，例如用於管控與CNS疾病相關之症狀之手術、放射或任何皮質類固醇療法。
2)受損心臟功能或臨床上顯著之心臟病，包括以下中之任一者：
a)在第一排定劑量之抗體之前，不穩定性心絞痛6個月
b)在第一排定劑量之抗體之前，急性心肌梗塞6個月
3)QTc區段>470msec
4)已知人類免疫缺失病毒(HIV)或獲得性免疫缺失症候群(AIDS)相關之疾病、或慢性B或C型肝炎之病史。
5)在第一劑量之抗體之前，利用任何抗癌療法或參與另一利用研究藥物之治療性臨床研究的治療14天(對於韓國患者，28天)。
6)來自先前治療之持續不良效應>NCI CTCAE 1級。
a)視網膜疾病或視網膜疾病或脫離之病史，或在眼科醫生看來增加視網膜脫離之風險
b)視網膜靜脈阻塞(RVO)或中心漿液性視網膜病變之目前證據或先前病史。
c)在研究第1天之前1個月內診斷出青光眼。
d)用於青光眼之進行性醫學療法。
e)針對黃斑變性之先前眼內注射或雷射治療。
f)角膜缺損、角膜潰瘍、角膜炎、圓錐角膜、角膜移植史或角膜之其他已知異常，其在眼科醫生看來可能引起抗FGFR2抗體治療的風險。
g)尚未接受分別EGFR或ALK TKI之具有外顯子19或21 EGFR突變或ALK擴增之NSCLC患者(僅1A部分)。
h)尚未接受抗HER2靶向療法之HER2過表現之胃癌及乳癌患者。
i)在抗FGFR2抗體投與之前28天不容許重大手術程序。在所有情形下，在治療投與之前，患者必須足夠恢復且穩定。
j)懷孕或哺乳之女性；育齡婦女不能在研究期間考慮懷孕。
k)存在與臨床研究不相容之任何嚴重或不穩定伴隨系統障礙(例如物質濫用、精神病學紊亂或不受控間發病，包括活動性感染、動脈血栓形成及症狀性肺栓塞)。
l)存在可能增加與研究參與相關之風險或可能干擾研究結果解釋且在研究者看來將使患者不適合進入研究之任何其他病況。
7)對包括聚山梨醇酯之抗FGFR2抗體調配物的組份已知過敏或超敏。
8)先前惡性病史，以下除外：a)治癒性治療之非黑色素瘤皮膚癌或b)實體腫瘤先前治癒性治療5年以上而無復發證據，或c)在研究者看來不會影響研究治療效應之確定的其他惡性腫瘤之病史。
9)在部分1B及2(劑量擴展)中，用FGF-FGFR路徑之任何選擇性抑制劑(例如，AZD4547、BGJ398、JNJ-42756493、BAY1179470)之先前治療。
不授權該等納入或排除準則之棄權書。
部分2將涉及以下研究隊列A、C、D、E及F。隊列A將涉及約30名具有如IHC 3+10%腫瘤膜染色定義之強FGFR2b過表現之胃癌患者。隊列C將涉及約10-30名無FGFR2b過表現之胃癌患者，如藉由IHC=0所定義。亦包括隊列D-F。隊列D將涉及約30名具有如藉由IHC 2+10%及/或IHC 3+<10%腫瘤膜染色定義之中等FGFR2b過表現之胃癌患者。隊列E將涉及約30名具有如藉由IHC 1+及/或IHC 2+<10%腫瘤膜染色定義之低FGFR2b過表現之胃癌患者。隊列F將涉及每一測試腫瘤類型約30名非胃實體腫瘤患者。對於膀胱癌患者而言，將存在兩個亞組。亞組1對於FGFR2b具有10-19之H評分且亞組2對於FGFR2b具有20或更高之H評分。
研究藥物：抗FGFR2抗體在無菌小瓶中提供，用於稀釋至靜脈內袋中以供藉由研究位點投與。在部分1A中，患者接受2個劑量之抗FGFR2抗體，間隔2週。若此在第一週期結束時耐受而無疾病進展，則患者有資格在延長治療時段內繼續研究，並且每2週接受抗FGFR2抗體，直至疾病進展或其他原因而退出研究。
劑量調節：在與發起人討論及由其批准後，對於部分1A中除DLT時段外治療中之患者或部分1B或2中之任何患者，允許劑量減少。對於不良或其他事件，患者可能錯過最多2個連續劑量(劑量之間至多6週)；對於不良或其他事件省略超過6週之額外投藥將需要患者自研究中移除，除非由研究發起人容許。不允許部分1(A和B)及部分2中每個患者之高於起始劑 量之患者內劑量遞增。若患者之劑量由於不再相關之原因而減少，則在由發起人討論及批准後，可以將劑量遞增至初始分配之劑量。
合併用藥：可以由研究者決定並根據制度程序使用支持性護理(例如，止吐藥；用於疼痛控制之止痛藥)。若指示，可使用造血刺激劑。除了長期維持治療(例如用於乳癌或前列腺癌之黃體促素釋放激素(LHRH)調節劑)外，不允許任何種類之合併抗癌療法，若患者已經服用該等藥劑且1)繼續使用不可能導致腫瘤量測之額外減少，及2)被認為係患者之標準療法，則該等療法可繼續。
退出：若以下中之任一者適用，則患者必須中斷方案處方之療法：˙應患者或其合法授權代表之要求撤回同意書；˙患者之疾病進展。儘管孤立之疾病進展仍然獲得臨床益處之患者可以在與醫學監測者討論後繼續研究；˙任何會對患者造成不可接受之安全風險的事件；˙會在很大程度上影響臨床狀態之評價之同時發生之疾病；˙在研究期間之任何時間陽性懷孕測試；˙根據發起人或其授權代表之具體要求(例如，若研究由於患者安全之原因而終止)。
藥物動力學評價：部分1A及1B中入選之患者在第1週期之第1、2、4及8天期間進行血液取樣用於量測血清抗FGFR2抗體濃度。另外，在第1週期第15天及第2-5週期第1天及自第5週期開始每隔一個週期之第1天在輸注之前及結束時收集血樣。對於部分2之第1週期中之患者而言，在第1天輸注之前及結束時以及在第8天收集血樣。在第1週期第15天及第2-5週期第1天及自第5週期開始每隔一個週期之第1天在輸注之前及結束時以及治 療結束時收集血樣，以探索在具有或無FGFR2擴增之FGFR2b過表現腫瘤之所選胃癌患者中的PK。基於血清抗FGFR2抗體濃度-時間數據測定標準PK參數。
免疫原性：研究中之所有患者在週期1-5及自週期5每隔一個週期之第1天在投藥之前收集血樣，用於量測針對抗FGFR2抗體之抗體。
效能評價：效能量度包括由以下組成之腫瘤評價：臨床檢查及適當成像技術，較佳根據RECIST具有適當切片厚度之胸、腹部及骨盆之電腦斷層攝影(CT)掃描；若需要，可實施其他評價(磁共振成像[MRI])、X射線、正電子發射斷層攝影術(PET)及超音波)。在篩選時實施腫瘤評價，隨後自第一劑每6週進行24週，且其後約每12週進行一次。一旦注意到初始完全反應(CR)或部分反應(PR)，必須在4-6週後進行確證性掃描。
安全性評價：安全性量度包括AE、血液學、臨床化學、尿分析、生命徵象、體重、合併用藥/程序、ECOG體能狀態、靶向體檢、ECG、眼科/視網膜檢查及抗FGFR2抗體劑量修改。
本研究計劃之總入選約100-130名患者：約20-30名患者入選部分1A。在部分1B中，入選高達30名胃癌患者。對於部分2而言，藉由入選以下中之一或多者檢查探索性活動：
˙隊列A：約30名具有FGFR2b過表現(IHC 3+)及FGFR2擴增(FISH2比率)之胃癌患者；
˙隊列B：約30名在不存在FGFR2擴增(FISH比率=1)下具有FGFR2b過表現(IHC 3+)之胃癌患者，以幫助表徵FGFR2選擇之預測重要性。
˙隊列C：約10-30名無FGFR2b過表現之胃癌患者，如由IHC=0至 2+所定義。
˙隊列D：約30名具有中等FGFR2b過表現之胃癌患者，如IHC 2+10%及/或IHC 3+<10%腫瘤膜染色所定義。
˙隊列E：約30名具有低FGFR2b過表現之胃癌患者，如IHC 1+及/或IHC 2+<10%腫瘤膜染色定義。
˙隊列F：每個測試腫瘤類型約30名非胃實體腫瘤患者。對於膀胱癌患者而言，將存在兩個亞組。亞組1對於FGFR2b具有10-19之H評分且亞組2對於FGFR2b具有20或更高之H評分。
實例6：利用抗FGFR2抗體之膀胱癌患者之治療
此實例闡述利用實例5中所述之研究之包含SEQ ID NO：6-11之重鏈及輕鏈HVR之無岩藻糖基化FGFR2抗體的入選上述研究(參見實例5)之76歲男性之治療，其在向其主治醫師提供血尿後於2014年7月被診斷有膀胱癌。患者進行診斷性膀胱鏡檢查及生檢，且隨後進行原發性腫瘤之切除術。其被分期為T2、N2、M0-腫瘤進入肌肉壁且6個取樣的淋巴結中有3個係陽性的-此使其成為4期個體。其在輔助設定中接受4個週期之吉西他濱及順鉑(SOC)。2015年3月，在輔助化學療法完成後約6個月，患者進行常規監督PET及CT。CT顯示在骨盆及腹膜後腔中有多個擴大之淋巴結，而PET證實該等係代謝活動的並且與復發性轉移性膀胱癌(UBC)一致。患者以大約每兩週3mg/kg之劑量開始接受抗FGFR2抗體。隨後跟蹤大小及總體腺病最大之淋巴結。在2015年4月初次篩選及第一抗FGFR2劑量時，最大淋巴結為18×12mm。六週後，最大結經量測為15×11mm，且12週後，其大小為9×7mm，因此減少約一半。2014年8月未觀察到明顯腺病。隨後之再分期掃描證實沒有明顯的淋巴結病，且在2015年11月實施之PET 顯示無異常之代謝活動。患者目前繼續進行抗FGFR2抗體療法。
實例7：針對FGFR2b過表現之膀胱癌試樣之免疫組織化學分析
為評價膀胱癌群體中FGFR2b過表現之頻率，使用免疫組織化學(IHC)。使用包含GAL-FR21之鼠類可變區之鼠類αFGFR2b抗體對正常膀胱及歸檔尿路上皮癌(UC)試樣實施免疫組織化學(IHC)(參見美國專利第8,101,723 B2號)。使用生色受質對422個福馬林固定石蠟包埋之UC切片(原發性及轉移性全切片或呈組織微陣列模式)進行染色及檢測。以0-3之量表對膜腫瘤細胞染色強度進行評分，其中若未觀察到反應性或若僅在<10%腫瘤細胞中有膜反應性，則給出評分「0」；若在至少10%腫瘤細胞中存在微弱或幾乎不可感知之膜反應性或若細胞僅在其膜之一部分中具有反應性，則給出評分「1+」；若在至少10%腫瘤細胞中存在弱至中度的完全、基底外側或側膜反應性，則給出評分「2+」；且若在至少10%腫瘤細胞中存在強的完全基底外側或側膜反應性，則給出評分「3+」。在本實驗中，在10%腫瘤細胞中具有1+膜反應性的腫瘤被認為係陽性的。
正常膀胱具有弱轉移上皮染色(<1+)。然而，422個歸檔原發性UC試樣之IHC分析顯示FGFR2b在10%試樣中過表現，表現強度為至少1+。
此外，來自手術切除之抗FGFR2反應性膀胱癌患者(參見實例6)之原發性腫瘤試樣利用FPR2-D抗體具有15% 2+ IHC染色及35% 1+染色。此與來自胃癌患者之先前數據形成對比，其中選擇具有3+染色之患者之腫瘤試樣且已觀察到客觀反應。此患者對抗FGFR2抗體(參見實例6)之反應及UC試樣中之陽性IHC染色共同地表明，膀胱癌係可能對抗FGFR2抗體治療敏感的額外適應症。
實例8：在患有晚期實體腫瘤之患者中與尼沃魯單抗組合之抗FGFR2 抗體之開放標籤I期研究
將執行兩部分、開放標籤、多中心、劑量遞增及劑量擴展研究以評估在患有晚期實體腫瘤之患者中包含SEQ ID NO：6-11之重鏈及輕鏈HVR之無岩藻糖基化FGFR2抗體與尼沃魯單抗之組合之安全性、耐受性、藥物動力學(PK)、藥效學(PD)及初步效能。研究之每一部分將由3個時段組成：篩選(長達28天)、治療及隨訪(長達100天)。抗FGFR2抗體及尼沃魯單抗將在每一14天治療週期之第1天給予。在30分鐘內以IV輸注形式投與抗FGFR2抗體，之後靜息30分鐘，且隨後在30分鐘內以IV輸注形式投與尼沃魯單抗。若在以建議輸注速率輸注任一藥物期間觀察到任何3級或更高級輸注反應，則在此研究之持續時間內，對於所有目前及隨後患者，輸注速率將延長至60分鐘。在完成研究之治療及隨訪期後，將跟蹤所有患者之存活。
該研究將包括部分1劑量遞增及部分2劑量擴展。部分1由在患有胃或胃食道接合部癌(共同稱作胃癌)之患者中抗FGFR2抗體與尼沃魯單抗之組合之兩個計劃之投藥隊列組成。對於研究進入本研究之劑量遞增部分將不需要表型表徵，但將回溯性地進行。此表型表徵包括(但不限於)藉由免疫組織化學(IHC)之FGFR2b及PD-L1之表現之分析。入選部分1之每一患者將觀察28天(或在完成兩個14天週期後)用於安全性評價及劑量限制性毒性(DLT觀察期)之發生。在部分1中入選之任何患者中第一次發生延遲之DLT(定義為在投與研究藥物後4至6週之間發生之任何AE)後，對於部分1中入選之所有其餘及隨後患者，所有正在進行及隨後之DLT期將延長至42天(或在完成三個14天週期後)。如臨床上所指示，其後可在14天週期中每2週投與額外治療(延長治療期)。
部分2由患有晚期胃癌之患者中之兩個擴展隊列組成。入選本研究之部分2需要使用驗證之分析之FGFR2b表現的前瞻性IHC分析。允許入選藉由IHC腫瘤對FGFR2b呈陽性之患者，前提係滿足其他合格性準則。本研究之部分2中之兩個隊列將由患者腫瘤中對FGFR2b之IHC陽性程度定義。隊列2a將包括在至少10%腫瘤細胞中腫瘤以1+或2+之強度染色之患者。隊列2b將包括在至少10%腫瘤細胞中腫瘤以3+之強度染色之患者。該等隊列中之每一者之開始將由發起人決定。研究之部分2劑量擴展部分係開放標籤。在14天週期中每2週利用與3mg/kg尼沃魯單抗組合之抗FGFR2抗體以在評價部分1中獲得之數據後選擇之推薦劑量(RD)治療滿足所有合格性準則之患者。患者將入選研究之部分1或部分2，而非二者。
在部分1中，預期兩個劑量隊列，其中每一隊列中入選最少6名胃癌患者。計劃劑量值係如下；第一患者將入選劑量值1中：
劑量值-1：6mg/kg抗FGFR2抗體+3mg/kg尼沃魯單抗(q2w)
劑量值1：10mg/kg抗FGFR2抗體+3mg/kg尼沃魯單抗(q2w)
劑量值2：15mg/kg抗FGFR2抗體+3mg/kg尼沃魯單抗(q2w)
所有劑量遞增決定將基於DLT之評價、總體安全性及耐受性，且將在每個隊列中入選之最後個體完成規定之DLT觀察期之後進行。劑量遞增決定將由由發起人及調查員組成之隊列審議委員會(CRC)同意。安全性及PK參數之審查可通知決定以向隊列添加替代劑量值，以達到最佳目標暴露。僅在需要檢查較低劑量之抗FGFR2抗體之劑量值1下觀察到DLT時才將訊問劑量值-1。觀察到1 DLT之最高劑量值將被認為係推薦之2期劑量(RP2D)。在鑑別RP2D後研究之部分1中入選額外8名患者。因此，對於部分1將入選約20名患者。
在完成DLT觀察期時，部分1患者可參與在週期2之第1天開始之可選延長治療期。抗FGFR2抗體將繼續在4週週期中每2週以相同劑量值與尼沃魯單抗組合投與直至疾病進展、不可接受之毒性、患者或醫師請求中斷、死亡或終止研究。
為了進一步表徵抗FGFR2抗體與尼沃魯單抗之組合之安全性及效能，部分2將入選約40名晚期胃癌患者，其中在兩個隊列中，每個隊列20名患者。該兩個隊列將在針對FGFR2b之腫瘤之IHC陽性程度上不同。藉由中央審查在10%腫瘤細胞中腫瘤評分為1+或2+(低或中等過表現)的患者將被置於隊列2A中；腫瘤分級為3+10%腫瘤細胞的患者將入選隊列2B。當CRC基於總體安全性及耐受性鑑別推薦劑量(RD)時，將開始部分2之入選。RD可與部分1中鑑別之MTD相同或可不相同。抗FGFR2抗體將在4週週期中每2週以RD與尼沃魯單抗組合投與直至疾病進展、不可接受之毒性、患者或醫師請求中斷、死亡或終止研究。
若在入選及評估前20名患者後觀察到足夠活性以值得進一步探索，則每個隊列中對另外20名患者之入選將開放。每個隊列之開放及向每個隊列添加20名患者將根據發起人決定進行。
入選部分2之患者將使用驗證之免疫組織化學(IHC)分析回溯性測試PD-L1表現之腫瘤組織(歸檔及/或最近)。在治療之前及治療中將獲得原發性腫瘤位點或轉移位點之生檢(若可行)，以檢查免疫浸潤物及所選腫瘤標記物之表現。可獲得在治療時或治療後有反應及/或進展之腫瘤的可選生檢以瞭解抗性機制。
根據方案中概述之指南，對於部分1中超過DLT期之治療中的患者或部分2中的任何患者，可以允許抗FGFR2抗體之劑量減少。
計劃將來自北美洲及歐洲之高達約60個個體入選此研究。此包括部分1劑量遞增中之20名患者及部分2劑量擴展中之約40名患者。
納入準則
入選部分1或部分2之患者必須符合 所有 以下納入準則：
1. 在任何研究特定評估之前，瞭解並簽署機構審查委員會/獨立倫理委員會批准之知情同意書
2. 預期壽命至少3個月
3. ECOG體能狀態為0至1
4. 在簽署知情同意書時年齡18歲
5. 在性活躍患者(即，未經歷連續12個月無月經定義之絕經或尚未進行永久性絕育術之育齡女性，或尚未進行永久性絕育術之男性)中，願意使用2種有效之避孕方法，其中一種必須係物理屏障方法(保險套、橫膈膜或子宮頸/穹頂帽)，直至最後劑量之抗FGFR2抗體後6個月。其他有效避孕形式係在篩選前至少6個月永久性絕育(子宮切除術及/或雙側卵巢切除術、或利用手術雙側輸卵管結紮或輸精管切除術)。育齡女性患者必須在研究前至少90天進行穩定之口服避孕療法或子宮內或植入裝置，或作為生活方式戒除性交。
6. 充分的血液及生物學功能，由以下實驗室值確認：
a)骨髓功能
˙ANC1.5×109/L
˙血小板>100×109/L
˙血紅素9g/dL
b)肝功能
˙天冬胺酸轉胺酶(AST)及丙胺酸轉胺酶(ALT)3×正常值上限(ULN)；若肝轉移，則5×ULN
˙膽紅素1.5×ULN
c)腎功能
˙血清肌酸酐1.5×ULN
7. 組織學或細胞學確認之局部復發或轉移並且在標準治療後進展或不適於標準治療之胃或胃食道癌。
入選研究之部分1(劑量遞增)之患者必須亦滿足以下納入準則：
7. 可量測或可評價之疾病
入選研究之部分2(劑量擴展)之患者必須亦滿足以下納入準則：
8. 如藉由RECIST 1.1版定義之可量測之疾病
9. 如藉由驗證之IHC分析測定之對FGFR2b表現呈陽性之腫瘤
10. 用於回溯性測定PD-L1表現之腫瘤組織(歸檔或最近)
排除準則
若以下準則中之任一者適用，則排除入選部分1或部分2之患者：
1. 未經治療或症狀性中樞神經系統(CNS)轉移。患有無症狀CNS轉移之患者係合格的，前提係其已經在臨床上穩定至少4週，並且不需要介入，例如用於管控與CNS疾病相關之症狀之手術、放射或任何皮質類固醇療法。
2. 受損心臟功能或臨床上顯著之心臟病，包括以下中之任一者：
○在第一排定劑量之抗FGFR2抗體之前，不穩定性心絞痛6個月
○在第一排定劑量之抗FGFR2抗體之前，急性心肌梗塞6個月
3. QTc區段>470msec
4. 測試對人類免疫缺失病毒(HIV)1或2呈陽性之已知歷史或已知獲得性免疫缺失症候群(AIDS)
5. 對B型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)或可檢測C型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)之陽性測試，指示急性或慢性感染
6. 篩選時對潛伏性結核病(TB)呈陽性之測試(Quantiferon測試)或活動性TB之證據
7. 症狀性間質性肺病或發炎性肺炎
8. 活動性、已知或懷疑自體免疫疾病。允許入選患有I型糖尿病、僅需要激素替代之甲狀腺功能減退、不需要全身性治療之皮膚病症(例如白斑病、牛皮癬或脫髪)或在不存在外部觸發時預計不會復發之病況的患者。
9. 任何不受控之發炎性GI疾病，包括克隆氏病(Crohn’s Disease)及潰瘍性結腸炎
10. 抗藥物抗體、嚴重變應性、過敏性或對先前生物劑之其他輸注相關反應的歷史
11. 在研究藥物投與前至少2週，必須中斷免疫抑制劑量之全身性用藥，例如類固醇或吸收之局部類固醇(劑量>10mg/天普賴松或等效日劑量)，除非在腫瘤相關之AE治療之情形下。在不存在活動性自體免疫疾病下允許患有在2週治療內需要用皮質類固醇(吸入或局部類固醇及腎上腺替代類固醇劑量>10mg/天普賴松等效物)或其他免疫抑制藥物進行慢性全身性治療之病況的患者(患有神經膠質瘤之患者除外)。
12. 在研究藥物投與之4週內用於預防傳染病之非腫瘤疫苗療法(例如，HPV疫苗)。不活化之流行性感冒疫苗可在治療前及治療時給予患者 而無限制。可允許含有活病毒之流行性感冒疫苗或用於傳染病(即，肺炎病毒、水痘等)之其他臨床上指示之疫苗接種，但必須利用發起人之醫療監測儀進行討論且在投與疫苗之前及之後可能需要研究藥物清除期。
13. 在第一劑量之研究藥物投與之前14天利用任何抗癌症療法治療或參與利用研究藥物之另一治療性臨床研究。
14. 來自先前治療之進行性急性不良效應>NCI CTCAE 1級。
15. 尚未接受抗HER2靶向療法之具有HER2過表現之胃癌患者。
16. 在FPA144投與之前28天不容許重大手術程序。在所有情形下，在治療投與之前，患者必須足夠恢復且穩定。
17. 懷孕或哺乳之女性；育齡婦女不能在研究期間考慮懷孕。
18. 存在與臨床研究不相容之任何嚴重或不穩定伴隨系統障礙(例如物質濫用、精神病學紊亂或不受控間發病，包括活動性感染、動脈血栓形成及症狀性肺栓塞)。
19. 存在可能增加與研究參與相關之風險或可能干擾研究結果解釋且在研究者看來將使患者不適合進入研究之任何其他病況。
20. 對包括聚山梨醇酯之抗FGFR2抗體或尼沃魯單抗調配物的組份已知過敏或超敏。
21. 用FGF-FGFR路徑之任何選擇性抑制劑(例如，AZD4547、BGJ398、JNJ-42756493、BAY1179470)之先前治療
22. 先前惡性病史，以下除外：a)治癒性治療之非黑色素瘤皮膚癌或b)實體腫瘤先前治癒性治療5年以上而無復發證據，或c)在研究者看來不會影響研究治療效應之確定的其他惡性腫瘤之病 史。
對於藥物動力學分析而言，將自所有患者採集血樣。將基於抗FGFR2抗體濃度-時間數據測定標準PK參數。亦採集血樣以分析針對抗FGFR2抗體之抗藥物抗體(ADA)及尼沃魯單抗。
效能量度將包括腫瘤評價，其包含臨床檢查及適當成像技術，較佳根據RECIST 1.1具有適當切片厚度之胸、腹部及骨盆之電腦斷層攝影(CT)掃描；若需要，可實施其他評價(磁共振成像(MRI)、X射線、正電子發射斷層攝影術(PET)及超音波)。將在篩選時實施腫瘤評價，隨後自第一劑每6週進行24週，且其後約每12週進行一次。一旦注意到初始完全反應(CR)或部分反應(PR)，必須在4-6週後進行確證性掃描。
對於部分2中之所有患者，在治療前及治療時第15天或29天實施腫瘤生檢(若可行，強制性)。每個時間點之可行性將由研究者評價，並應包括患者安全性之考慮。在與發起人討論之後，患者亦可具有關於文獻記載之腫瘤反應之可選治療時生檢及/或關於文獻記載之腫瘤進展之可選治療後生檢。
高達約60個個體之樣本大小係基於部分1中之劑量遞增之研究設計及部分2中治療組中每組20名患者。本研究之部分2中之每一個別組將進行Simon兩階段設計。對於PD-L1表現未選擇之晚期胃癌中作為單一療法之尼沃魯單抗的假定觀察反應率係12%；端視腫瘤中觀察之FGFR2b之表現程度而定，對於抗FGFR2抗體之ORR可不同。對於隊列2A而言，對於抗FGFR2抗體之假定ORR係0%。對於隊列2B而言，對於抗FGFR2抗體單一療法之ORR係30%。因此，若在前20名患者中觀察到<2個反應，則隊列2A將不入選20名患者擴展。對於隊列2B而言，若自前20名入選患者<6名 患者達成客觀反應，則將不開始20名患者擴展。
序列表
下表提供本文提及之某些序列表。
<110> 美商戊瑞治療有限公司
<120> 用於癌症治療之單獨FGFR2抑制劑或與免疫刺激劑組合
<130> 01134-0046-00TW
<150> US 62/258,731
<151> 2015-11-23
<150> US 62/314,174
<151> 2016-03-28
<150> US 62/379,094
<151> 2016-08-24
<160> 46
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 801
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 成熟人類FGFR2-IIIb
<400> 1
<210> 2
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b重鏈
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (294)..(294)
<223> Asn297
<400> 2
<210> 3
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b輕鏈
<400> 3
<210> 4
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b重鏈可變區
<400> 4
<210> 5
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b輕鏈可變區
<400> 5
<210> 6
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b重鏈(HC)HVR1
<400> 6
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b HC HVR2
<400> 7
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b HC HVR3
<400> 8
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b輕鏈(LC)HVR1
<400> 9
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b LC HVR2
<400> 10
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b LC HVR3
<400> 11
<210> 12
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2b N297Q重鏈
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (294)..(294)
<223> N297Q
<400> 12
<210> 13
<211> 800
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 成熟人類FGFR2-IIIc
<400> 13
<210> 14
<211> 356
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD
<400> 14
<210> 15
<211> 353
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-3
<400> 15
<210> 16
<211> 352
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-4
<400> 16
<210> 17
<211> 351
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-5
<400> 17
<210> 18
<211> 348
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-8
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<211> 347
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-9
<400> 19
<210> 20
<211> 346
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-10
<400> 20
<210> 21
<211> 342
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-14
<400> 21
<210> 22
<211> 341
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-15
<400> 22
<210> 23
<211> 340
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-16
<400> 23
<210> 24
<211> 339
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2 ECD△-17
<400> 24
<210> 25
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fc C237S
<400> 25
<210> 26
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fc
<400> 26
<210> 27
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Fc
<400> 27
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR2(111-118)
<400> 28
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> FGFR1(105-112)
<400> 29
<210> 30
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> R2(111-118)由R1(105-112)置換之FGFR2 ECD
<400> 30
<210> 31
<211> 588
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> R2(111-118)由R1(105-112)置換之FGFR2 ECD+Fc
<400> 31
<210> 32
<211> 587
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FGFR2 ECD△-3+GS連接體+Fc
<400> 32
<210> 33
<211> 353
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> R2(111-118)由R1(105-112)置換之FGFR2 ECD△-3
<400> 33
<210> 34
<211> 587
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> R2(111-118)由R1(105-112)置換之FGFR2 ECD△-3+GS連接體+Fc(亦稱作 FGFR2ECD(FGFR2(111-118)：FGFR1(105-112)：△3)-GS連接體-Fc及 R2(111-118)：R1(105-112))
<400> 34
<210> 35
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人類PD-1前體(具有信號序列)
<400> 35
<210> 36
<211> 268
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人類PD-1(成熟，無信號序列)
<400> 36
<210> 37
<211> 290
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人類PD-L1前體(具有信號序列)
<400> 37
<210> 38
<211> 272
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人類PD-L1(成熟，無信號序列)
<400> 38
<210> 39
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22重鏈可變區
<400> 39
<210> 40
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22重鏈CDR1
<400> 40
<210> 41
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22重鏈CDR2
<400> 41
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22重鏈CDR3
<400> 42
<210> 43
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22輕鏈可變區
<400> 43
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22輕鏈CDR1
<400> 44
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22輕鏈CDR2
<400> 45
<210> 46
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗FGFR2 Gal-FR22輕鏈CDR3
<400> 46

Claims (96)

  1. 一種治療個體中癌症之方法，其包含向該個體投與纖維母細胞生長因子受體2(fibroblast growth factor receptor 2；FGFR2)抑制劑及至少一種免疫刺激劑，諸如至少一種程式化細胞死亡1(programmed cell death 1；PD-1)/程式化細胞死亡配體1(programmed cell death ligand 1；PD-L1)抑制劑。
  2. 如請求項1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑，且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗體。
  3. 如請求項2之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-1抗體。
  4. 如請求項3之方法，其中該抗PD-1抗體包含選自以下抗體之重鏈及輕鏈CDR：尼沃魯單抗(nivolumab)、匹利珠單抗(pidilizumab)及派姆單抗(pembrolizumab)。
  5. 如請求項4之方法，其中該抗PD-1抗體包含選自以下抗體之重鏈及輕鏈可變區：尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗。
  6. 如請求項5之方法，其中該抗PD-1抗體選自尼沃魯單抗、匹利珠單抗及派姆單抗。
  7. 如請求項2之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體。
  8. 如請求項7之方法，其中該抗PD-L1抗體包含選自以下抗體之重鏈及輕鏈CDR：BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C。
  9. 如請求項8之方法，其中該抗PD-L1抗體包含選自以下抗體之重鏈及輕鏈可變區：BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C。
  10. 如請求項9之方法，其中該抗PD-L1抗體選自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736及MSB0010718C。
  11. 如請求項1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑，且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1融合分子。
  12. 如請求項11之方法，其中該融合分子係AMP-224。
  13. 如請求項1之方法，其中該至少一種免疫刺激劑係PD-1/PD-L1抑制劑，且其中該PD-1/PD-L1抑制劑係PD-1多肽，例如AUR-012。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑係FGFR2抗體。
  15. 如請求項14之方法，其中該FGFR2抗體係FGFR2-IIIb抗體。
  16. 如請求項15之方法，其中該FGFR2-IIIb抗體具有以下性質中之一或多者：a. 以高於與FGFR2-IIIc之親和力結合至FGFR2-IIIb，或無法檢測到地結合至FGFR2-IIIc；b. 抑制FGF2與人類FGFR2結合；c. 抑制FGF7與人類FGFR2結合；d. 抑制小鼠腫瘤模型中人類腫瘤之生長；e. 誘導ADCC活性；f. 具有增強之ADCC活性；g. 無岩藻糖基化；且h. 與對照相比，能增加小鼠腫瘤模型中腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者的數目。
  17. 如請求項15或請求項16之方法，其中該FGFR2抗體包含重鏈及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含：(i)包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列之HVR-H1；(ii)包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列之HVR-H2；及(iii)包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之HVR-H3；且該輕鏈可變區包含：(iv)包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列之HVR-L1； (v)包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列之HVR-L2；及(vi)包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列之HVR-L3。
  18. 如請求項17之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
  19. 如請求項17或18之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
  20. 如請求項17至19中任一項之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
  21. 如請求項17至20中任一項之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。
  22. 如請求項17之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈包含與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
  23. 如請求項17或22之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈包含與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少95%一致之胺基酸序列。
  24. 如請求項17、22或23中任一項之方法，其中該FGFR2抗體之該重鏈包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。
  25. 如請求項17或22至24中任一項之方法，其中該FGFR2抗體之該輕鏈包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
  26. 如請求項15至25中任一項之方法，其中該FGFR2抗體係嵌合、人類化或人類抗體。
  27. 如請求項15至26中任一項之方法，其中該FGFR2抗體選自Fab、Fv、scFv、Fab’及(Fab’)2。
  28. 如請求項17至27中任一項之方法，其中該FGFR2抗體具有以下性質中之一或多者：a. 在位置Asn297缺少岩藻糖；b. 包含κ輕鏈恆定區；c. 包含IgG1重鏈恆定區；d. 與具有相同胺基酸序列之在位置Asn297經岩藻糖基化之抗體相比，在活體外具有增強之ADCC活性；e. 與具有相同胺基酸序列之在位置Asn297經岩藻糖基化之抗體相比，對Fc γ RIIIA具有增強之親和力；及f. 與對照相比，能增加小鼠腫瘤模型中腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者的數目。
  29. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑係FGFR2細胞外結構域(extracellular domain；ECD)或FGFR2 ECD融合分子。
  30. 如請求項29之方法，其中該FGFR2抑制劑係FGFR2 ECD融合分子，該融合分子包含FGFR2 ECD及至少一個選自Fc結構域、白蛋白及聚乙二醇之融合配偶體(partner)。
  31. 如請求項30之方法，其中該FGFR2 ECD或FGFR2 ECD融合分子包含SEQ ID NO：13-33或29-33中任一者之胺基酸序列。
  32. 如請求項1至31中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑與該免疫刺激劑同時或依序投與。
  33. 如請求項32之方法，其中該免疫刺激劑之一或多個劑量係在投與FGFR2抑制劑之前投與。
  34. 如請求項33之方法，其中該個體在投與該FGFR2抑制劑之前，係接受過免疫刺激劑療法之完整過程。
  35. 如請求項34之方法，其中該FGFR2抑制劑係在免疫刺激劑療法之第二過程期間投與。
  36. 如請求項33至35中任一項之方法，其中該個體在投與FGFR2抑制劑 之前，係接受過該至少一種免疫刺激劑之至少一個、至少兩個、至少三個或至少四個劑量。
  37. 如請求項33至36中任一項之方法，其中該至少一種免疫刺激劑之至少一個劑量係與該FGFR2抑制劑同時投與。
  38. 如請求項32之方法，其中該FGFR2抑制劑之一或多個劑量係在投與免疫刺激劑之前投與。
  39. 如請求項38之方法，其中該個體在投與該至少一種免疫刺激劑之前，係接受過該FGFR2抑制劑之至少兩個、至少三個或至少四個劑量。
  40. 如請求項38或請求項39之方法，其中該FGFR2抑制劑之至少一個劑量係與免疫刺激劑同時投與。
  41. 如請求項1至40中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑係至少投與0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、10、15、20、25或30mg/kg之劑量或投與彼等mg/kg劑量中之任兩者界定之範圍，例如6-10mg/kg、10-15mg/kg或6-15mg/kg。
  42. 如請求項32至41中任一項之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含PD-1/PD-L1抑制劑。
  43. 如請求項42之方法，其中該PD-1/PD-L1抑制劑係投與至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5或10mg/kg之劑量。
  44. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑與該免疫刺激劑係每1、2、3、4或5週投與一次。
  45. 如請求項1至44中任一項之方法，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
  46. 如請求項1至45中任一項之方法，其中該癌症經選自以下治療之後復發或進展：手術、化學療法、放射療法或其組合。
  47. 如請求項1至46中任一項之方法，其中(a)該癌症先前經測定係過表現FGFR2IIIb，不論是FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟，且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
  48. 如請求項47之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(immunohistochemistry；IHC)測定。
  49. 如請求項48之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、 例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
  50. 如請求項47至49中任一項之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(fluorescence in situ hybridization；FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率加以測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
  51. 如請求項47至50中任一項之方法，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
  52. 如請求項48至50中任一項之方法，其中：a)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號； g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
  53. 如請求項1至52中任一項之方法，其中該個體係PD-1/PD-L1抑制劑不足反應者。
  54. 如請求項1至53中任一項之方法，其中在該癌症之小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑及PD-1/PD-L1抑制劑會引起腫瘤生長之加和或協同抑制。
  55. 如請求項54之方法，其中該癌症係乳癌且該小鼠腫瘤模型包含4T1細胞。
  56. 如請求項1至55中任一項之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中NK細胞之數目。
  57. 如請求項1至56中任一項之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞之數目。
  58. 如請求項1至57中任一項之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中CD3+、CDR+及/或CD4+ T細胞之數目。
  59. 如請求項1至58中任一項之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抑制劑會增加腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率。
  60. 一種組合物，其包含如請求項14至31中任一項中所述之FGFR2抑制劑及至少一種如請求項2至13中任一項中所述之免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
  61. 如請求項60之組合物，其中該FGFR2抑制劑及該至少一種免疫刺激劑包含於單獨容器或隔室中。
  62. 如請求項60或61之組合物，其進一步包含用於癌症治療之說明書。
  63. 如請求項60至62中任一項之組合物，其用於癌症治療。
  64. 如請求項63之組合物，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
  65. 如請求項63至64中任一項之組合物，其中該癌症會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在。
  66. 如請求項65之組合物，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
  67. 如請求項66之組合物，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
  68. 如請求項63至67中任一項之組合物，其中癌症具有藉由FISH測定之FGFR2/CEN10比率係大於或等於2。
  69. 如請求項63至68中任一項之組合物，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
  70. 如請求項63至69中任一項之組合物，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號； f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
  71. 一種增加患有癌症個體之腫瘤組織中NK細胞及/或PD-L1陽性細胞之數目的方法，其包含向該個體投與有效量之FGFR2抑制劑。
  72. 如請求項71之方法，其中該FGFR2抑制劑係如請求項14至31中任一項之抑制劑。
  73. 如請求項71或72之方法，其中該方法在該個體中抑制至少一種腫瘤之腫瘤生長或減小體積。
  74. 如請求項73之方法，其中該癌症選自乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌及子宮內膜癌。
  75. 如請求項71至74中任一項之方法，其中(a)該癌症先前經測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟，且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
  76. 如請求項75之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
  77. 如請求項76之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
  78. 如請求項75至77中任一項之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率加以測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
  79. 如請求項75至78中任一項之方法，其中該癌症係胃癌或膀胱癌。
  80. 如請求項75至79中任一項之方法，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號；b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之 IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
  81. 如請求項71至80中任一項之方法，其中該方法進一步包含在投與該FGFR2抗體後，自該個體獲得至少一個腫瘤試樣及測定該試樣中NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞之數目，且若NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞之該數目相對於FGFR2抗體投與之前之試樣係增加的，則向該個體投與至少一種免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
  82. 一種治療個體中癌症之方法，其包含向該個體投與FGFR2抑制劑，且若該個體經測定相對於FGFR2抗體投與之前之試樣具有增加數目之NK細胞及/或PD-L1陽性細胞及/或CD8+ T細胞，則向該個體投與至少一種免疫刺激劑，例如至少一種PD-1/PD-L1抑制劑。
  83. 如請求項82之方法，其中該FGFR2抑制劑係如請求項14至31中任一項之抑制劑。
  84. 如請求項82或83之方法，其中該至少一種免疫刺激劑包含至少一種如請求項2至13中任一項之PD-1/PD-L1抑制劑。
  85. 如請求項82至84中任一項之方法，其中該FGFR2抑制劑及該至少一種免疫刺激劑係根據如請求項38或39之方法投與。
  86. 一種增加癌症個體中腫瘤組織中之PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目的方法，其包含投與FGFR2抑制劑，其中該抑制劑係具有增強之ADCC活性之FGFR2抗體。
  87. 如請求項86之方法，其中該抗體係如請求項15至28中任一項之抗體。
  88. 如請求項86或87之方法，其中與對照相比，在小鼠腫瘤模型中投與該FGFR2抗體會增加腫瘤組織中PD-L1陽性細胞、NK細胞、CD3+ T細胞、CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及巨噬細胞中之一或多者之數目，及/或增加該腫瘤組織中淋巴樣細胞對骨髓細胞之比率。
  89. 如請求項86至88中任一項之方法，其中該個體患有乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌、胰臟癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱癌、膽道癌、食道癌或子宮內膜癌。
  90. 如請求項86至89中任一項之方法，其中(a)該癌症先前經測定會過表現FGFR2IIIb，不論FGFR2基因擴增存在或不存在，或(b)該方法包含確定該癌症是否過表現FGFR2IIIb之額外步驟且視情況亦包含確定該FGFR2基因是否在腫瘤細胞中擴增之額外步驟。
  91. 如請求項90之方法，其中FGFR2IIIb過表現係藉由免疫組織化學(IHC)測定。
  92. 如請求項91之方法，其中該過表現係藉由在至少10%腫瘤細胞中、例如在至少20%、30%、40%或50%腫瘤細胞中1+、2+或3+之IHC信號測定。
  93. 如請求項90至92中任一項之方法，其中該FGFR2基因擴增係藉由使用螢光原位雜交(FISH)獲得FGFR2對染色體10著絲粒(CEN10)之比率來測定，其中若藉由FISH測定之該FGFR2/CEN10比率大於或等於2，則認為該FGFR2基因係經擴增。
  94. 如請求項89至93中任一項之方法，其中個體患有胃癌或膀胱癌。
  95. 如請求項90至94中任一項之方法，其中：a)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號； b)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因係經擴增；c)該癌症係胃癌，該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有3+之IHC信號，且其中該FGFR2基因未經擴增；d)該癌症係胃癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+或2+之IHC信號；e)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有1+之IHC信號；f)該癌症係膀胱癌，且該癌症在至少10%腫瘤細胞中具有2+之IHC信號；g)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有20或更高之H評分；h)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有10至19之H評分；或i)該癌症係膀胱癌，且該癌症具有<10之H評分。
  96. 如請求項86至95中任一項之方法，其中該FGFR2抗體係每週、每兩週、每三週或每月一次投與至少0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、10、15、20、25或30mg/kg之劑量或投與彼等mg/kg劑量中之任兩者界定之範圍，例如6-10mg/kg、10-15mg/kg或6-15mg/kg。
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