TW200815470A

TW200815470A - Compositions and methods of use for antibodies of c-Met

Info

Publication number: TW200815470A
Application number: TW096111129A
Authority: TW
Inventors: David Raymond Stover; Josef Prassler; Catrin Berger; Bodo Brocks
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2006-03-30
Filing date: 2007-03-29
Publication date: 2008-04-01
Also published as: WO2007126799A3; EP2004693B1; EP2004693A2; MX2008012485A; US8101727B2; CN101415730A; ES2386738T3; CN101415730B; CN103183738A; JP2009532026A; CA2646048A1; BRPI0709917A2; KR20080113218A; AR060241A1; CN103183738B; CL2007000851A1; WO2007126799A2; AU2007245181A1; RU2008142833A; US20090175860A1

Description

200815470 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於含有可專一結合蛋白目標c_Met之抗體之組合物，製備此等抗體之方法，以及使用方法，以治療增殖性疾病，諸如癌症及轉移，以及炎性病況。【先前技術】肝細胞生長因子受體（在本文中稱為c-Met)係一種受體酪胺酸激酶，其已經顯示在各惡性疾病中過表現及/或突 • 變，特定言之，諸多c-Met突變已見於各種實體相之腫瘤中。c-Met配位體，肝細胞生長因子（HGF)(亦稱為分散因子（SF))可在一涉及腫瘤細胞之侵染及轉移之途徑中結合 c-Met (Ma et al·，2003 Cancer and Metastasis Reviews· 22:309-325) ° HGF與c-Met之作用可起始一串胞内事件之級聯（Derman et al.，1996 J Biol Chem 23;271(8):4251-4255)。HGF之結合可造成c-Met内源性酪胺酸激酶活性之活化以及其胞内 • 域上數個酪胺酸殘基之自體磷酸化作用（Ma et al.，2003 Cancer and Metastasis Reviews. 22:309-325) ° HGF/c-Met 途徑之活化可造成廣泛多種之細胞反應，包括細胞分散、血管新生、增殖、增進之細胞遷移、侵染、及轉移。拮抗作用可抑制自體磷酸化作用及/或誘發表面c-Met之内化及/ 或負調節c-Met活性。腫瘤細胞可侵染組織邊界，降解並重塑周圍之胞外基質，以使該等腫瘤細胞可通過該胞外基質組織界限移動， 119679.doc 200815470 因而仏成轉移散播及形成。HGF/c_Met信號傳導係一種中 ;ι正$及惡性侵染性生長之途徑^卜撾以之錯義突變已在夕種癌症中獲得辨識，其中大部分之突變係位於該激酶域。犬k體之特徵在於增加之酪胺酸激酶活性，其因而促進c-Met之生物活性。咸需要可治療癌症、癌症之轉移、以及炎性病況之組合物及方法，諸如可干擾其中c_Met之活性造成侵染及/或轉移之HGF/c-Met信號傳導途徑之試劑。【發明内容】受體酪胺酸激酶c_Met涉及伴隨胚胎發生及組織再生之遷移、侵染、及形態發生過程。諸多證據皆已指出， c-Met亦涉及腫瘤之致病機制。在c_Met激酶域中活化種系突變係與遺傳性乳頭狀腎細胞癌（pRCC)之發生相關。儘管 >、見，忒激陶：域中之突變亦已被報告於偶發形式之 PRCC、頭及頸之鱗狀細胞癌、以及胃癌中。增高含量之 c-Met以及其獨特之配位體HGF/SF已以高頻率而見於多種臨床相關性腫瘤中。增量之表現與疾病進展、轉移、及病患死亡率間之相關性已在數種癌症中獲得報告，包括膀胱癌、乳癌、及胃癌，以及平滑肌肉瘤及膠質母細胞瘤。本發明之抗體可以咼親和性專一結合c_Met，並可調控疾病之c-Met作用。可拮抗c_Met含量或活性之抗體預期可用於治療增殖性疾病或炎性疾病。咸信可由本發明之抗體治療之增殖性疾病特別包括癌症。可拮抗卜]^“含量或活性之抗體預期可用於器官再生、傷口復原、組 119679.doc 200815470 其類似者。本文中之一種本發明之具體實例提供一種可選擇性於人 c-Met蛋白之抗體，或此抗體之免疫學活性部分，或是功能性之抗體片段。在一具體實例中，該抗體或此抗體之免疫學活性部分係取自哺乳動物，具有諸如鼠類、人類、< 路騎之來源，或者係人類化抗體。在一特定具體實例中，該抗c_Met抗體之特徵係在於其具有對目標蛋白c_Met具專一性之抗原結合區域，且該抗體或功能性片段可結合籲 c-Met或c-Met之片段。該抗體可為多株或單株性者。在部分具體實例中，該抗體或此抗體之免疫學活性部分係單株抗體。本發明之其他具體實例包括，如，功能性片段，諸如抗原結合部分，或是提供於非傳統或非免疫球蛋白基礎性架構或框架上之此種片段。在另一具體實例中，該抗體或此抗體之功能性片段可以 2·〇χ1(Τ5 Μ或以下、2·〇χ1(Τ6 Μ或以下、2·〇χ1(Γ7 Μ或以 _ 下、2·〇χ1(Τ8 Μ或以下、或是2·〇χ1(Γ9 Μ或以下iKD值結合目標蛋白c-Met。在一相關具體實例中，該抗體或此抗體之功能性片段對於目標蛋白c-Met具有每秒1.〇χ1(Γ2或更小、每秒1 ·0 X 10 3或更小、每秒1 · 〇 X 1 〇-4或更小、或是每秒 1 ·〇χ 1 (Γ5或更小之分離速率（K。^)。在一相關具體實例中，該抗體或此抗體之功能性片段可以2.0X 1〇·5 Μ或以下、 2.〇χ1(Γ6 Μ或以下、2·〇χ1(Γ7 Μ或以下、2·〇χ1(Γ8 Μ或以下、或是2.0xlO·9 Μ或以下之KD值結合目標蛋白c-Met，並抑制HGF對於c-Met之結合。在一相關具體實例中，該抗 119679.doc 200815470 體或其功能性片段可拮抗c-Met活性。在部分具體實例中，該抗體或此抗體之功能性片段可# 合目標蛋白c-Met並調控（亦即，活化（激動）或抑制（拮抗）） c-Met活性，其包括但不限於磷酸化，特別係自體磷酽化。在部分具體實例中，c_Met填酸化作用之激動或活化可激發選自器官再生、傷口復原、及組織再生之至少— 、夕種活性。在一相關具體實例中，該器官係腎臟、肝臟、胰臟、心、肺、胃、腸、皮膚、胸腺、及甲狀腺。春在一較佳具體實例中，本發明之抗體可拮抗C-Met，其中拮抗作用可造成選自下列之至少一種活性：細胞增殖之抑制、細胞遷移之抑制、細胞存活之抑制、轉移之抑制、及/或HGS結合或C-Met内化作用誘發之抑制。在大部分之具體實例中，本發明之c_Met抗體拮抗劑可用於治療增殖性疾病，特別係癌症或炎性疾病。在一相關具體實例中，該結合係由一或多種分析判定， Φ Λ等刀析可用於測1為該抗體之拮抗作用或激動作用之活 ί生該等分析可測量該抗體對於c-Met配位體之至少一種作用’其至少包括：c_MeHf號轉導途徑酶活性之誘發； 0et信號轉導途徑基因表現之誘發；對於e•胞之電化學發光基礎性直接結合；c_Met結合之酶連免疫吸收分析；以及細胞之增殖、存活、遷移、或轉移。該抗體到底係具有抬抗性或激動性之作用係藉著比較該等結果與缺乏HGF 天然配位體之控制組而判定。因此，拮抗性之抗體即使在存在下仍可阻斷e_Met·發作用，而激動性之抗體 119679.doc 200815470 則係在無HGF存在之情形下造成誘發。在另一具體實例中，本發明提供經分離之胺基酸及核苷酸序列，其可提供抗體及該編碼之經分離核苷酸序列，選自 SEQ ID NOs: 1-30、73-76、及 85-88。在一相關具體實例中’本發明提供分別由此等核甞酸序列所編碼之經分離胺基酸序列，以及此等胺基酸序列之保守性變體。在另一相關具體實例中，SEQ ID NOs: 1_2〇之經分離核甞酸序列各編碼一抗原結合性輕鏈之胺基酸序列。在又另一相關具體實例中，SEQ ID NOs: 21-30之經分離核苷酸序列各編碼一抗原結合性重鏈之胺基酸序列。在另一具體實例中，本發明提供選自SEQ ID NOs: 31-72、77-84、及89-96之經分離胺基酸序列，以及此等序列之保守性變體。在一相關具體實例中，SEQ ID N〇s: 31-M 之經分離胺基酸序列各包括一抗原結合性輕鏈。在另一相關具體實例中，SEQ ID NOs: 55-72之經分離胺基酸序列各包括一抗原結合性重鏈。在部分具體實例中，本發明提供一種經分離之胺基酸序列，其與 SEQ ID NOs·· 31_72、77-84、及 89-96 具有至少 50、60、70、80、90、95、或99百分比之相同性。在一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之核苷酸序列，其與SEQ ID NOs: 1-30、73_76、及89-96中所述之序列具有至少60、70、80、90、95、或99百分比之相同性。在又另一具體實例中，本發明提供任一此等抗體之經分離抗原結合區域，或是任一此等抗體之功能性片段。因 119679.doc -10- 200815470 此，在部分具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域’其具有由選自SEQ ID NOs: 1-20之核答酸序列所編碼之輕鏈。在相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有由選自SEQ ID NOs: 21-30之核嘗酸序列所編碼之重鏈。在另一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有由選自SEq ID NOs: 1-20之核苷酸序列所編碼之輕鏈，以及由選自SEq ID NOs: 21-34之核:y：酸序列所編碼之重鏈。 _ 在一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域’其具有具選自SEQ ID NOs: 3 1-54之胺基酸序列之輕鏈。在另一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有具選自SEq ID N〇s: 55_72之胺基酸序列之重鏈。在又另一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域、其具有具選自SEq ID N〇s: 3 1-54 及此等序列之保守性變體之胺基酸序列之輕鏈，以及具選 φ 自SEQ ID N〇v 55·72及此等序列之保守性變體之胺基酸序列之重鏈。在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有由SEQ ID Ν0: 73之核甞酸序列所編碼之坨入輕鏈。在一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有由選自SEQIDNOs: 74_76之核苷酸序列所編碼之IgK輕鍵。在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有具選自SEQ ID NOs: 77-80之胺基酸序列之 119679.doc -11 - 200815470

IgX輕鏈。在另一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗原結合區域，其具有具選自SEQ ID NOs: 81-84之胺基酸序列之IgK輕鏈。在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之人類或人類化抗體或是該抗體之功能性片段，該抗體具有一抗原結合區域，其對於一可見於C-Met蛋白之抗原表位具有專一性，以致於該抗體或功能性片段可結合細胞上之c_Met表面受體，並可預防或改善癌症之發展或轉移。在一相關具體實例中，本發明提供一種經分離之抗體或功能性片段，其具有一抗原結合區域，該區域對於目標蛋白c_Met之一抗原表位具有專一性，該抗原表位含有c_Met胞外域（ECD) 之一或多個胺基酸殘基。在一相關具體實例中，該抗原表位係一構形性之抗原表位。在又另一具體實例中，該如上所述之經分離抗體或功能性片段係Fab或scFv抗體片段，或係駱駝奈米抗體 (nanobody)。該Fab或scFv在部分具體實例中係單價性者。該抗體之單價性質特別適合作為設計用以拮抗c_Met蛋白之試劑。在部分具體實例中，任一該等IgG抗體係一 IgG。在一相關具體實例中，任一上述抗體係一 Ig(H、IgG2、 IgG3、或IgG4。在一特定具體實例中，該IgG係一 IgG4。在一更特定之具體實例中，該IgG4係由選自SEQ ID NOs: 85·88之核苷酸序列編碼。在又另一相關具體實例中，該 IgG4係由與選自SEq ID n〇s: 85-88之序列具有至少6〇、 70 8 〇、9 0、9 5、或9 9百分比相同性之核苷酸序列編碼。 119679.doc -12- 200815470 在另一相關具體實例中，該IgG4具有選自SEQidn〇s: 96及此等序列之保守性變體之胺基酸序列。或者，該本文中之抗oMet抗體係一 IgA、IgD、IgE、或IgM。在另一具體實例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含至少一種上述之抗體或功能性片段或是此等抗體之保守性變體’以及其醫藥可接受之載體或賦形劑。在又另具體實例中，本發明提供一種轉基因動物或轉基因細胞，其帶有編碼任一上述之抗體或其功能性片段之基因。在部分具體實例中，本發明提供一種用以治療c_Me〇g 關性疾病或病況之方法，其涉及對需要該治療之對象投藥有效量之任一上述醫藥組合物。該疾病或病況係癌症或炎性病況。在一具體實例中，該癌症係食道癌、乳癌、腎臟癌（其包括但不限於乳頭狀腎細胞癌）、神經膠質瘤、頭及頸癌、上皮癌、肺癌、皮膚癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、腦癌、胰臟癌、胃癌、胃腸癌、胃癌、結腸癌、腸癌、肝癌生殖糸統癌、泌尿系統癌、黑素瘤、或前列腺癌，以及其他熟習技藝者已知之腫瘤。在一特定具體實例中，該癌症係肝、腎、或食道之癌，或係肉瘤。更特定言之，該癌症係選自腦癌、胃癌、生殖系統癌、泌尿系統癌、前列腺癌、膀胱癌（表面及肌肉侵染性）、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤（包括神經膠質母細胞瘤、間變性星狀細胞瘤、募星狀細胞瘤、及寡樹狀神經膠 119679.doc -13- 200815470 質瘤）、食道癌、胃癌、胃腸癌、肝癌、肝細胞癌 (HCC)(包括兒童HCC)、頭及頸癌（包括頭及頸鱗狀細胞癌、鼻咽癌）、許特萊氏（Hurthle)細胞癌、上皮癌、皮膚癌、黑素瘤（包括惡性黑素瘤）、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤 (包括多發性骨髓瘤）、白血病、肺癌（包括非小細胞肺癌 (包括所有組織學次型：腺癌鱗狀細胞癌、支氣管肺泡細胞癌 '大細胞癌、及腺鱗混合型）、小細胞肺癌）、卵巢癌、胰臟癌、别列腺癌、腎臟癌、腎細胞癌（包括遺傳性及偶發性乳頭狀腎細胞癌，第Ϊ型及第^型，以及透明細胞腎細胞癌）；肉瘤，特別係骨肉瘤、透明細胞肉瘤、及軟組織肉瘤（包括腺泡狀及胚胎型橫紋肌肉瘤、腺泡狀軟組織肉瘤）；曱狀腺癌（乳頭狀及其他次型）。在一特定具體實例中，其中一種例示性之炎性病況係因感染造成。在一具體實例中，該治療方法可用以阻斷病原感染。在一特定具體實例中，該感染係細菌感染，包括，如，李斯特桿菌如er/α)感染。參見，如，Shen et al. ceu 103: 501-10,（2000)。在不欲為作用機制限制之情形下，咸認為細菌係使用一種c-Met結合蛋白而使其本身内化。本發明之抗體將可阻斷此種作用，因而預防内化。在另一具體實例中’該治療可激發細胞反應，如，傷口復原反應。在部分具體實例中，任一上述之方法尚涉及投藥一種化療劑。在一相關具體實例中，該化療劑係一抗癌劑。特定之組合在此申請案之全文中提供。在一相關具體實例中，任一上述之方法尚涉及投藥一種 119679.doc -14- 200815470 途徑專-性抑制劑。該途徑專一性抑制劑可為一化療劑或可為-生物劑，如’諸如抗體。途徑專一性抑制劑包括，但不限於，EGFR、VEGFR、Ρ1_3Κ#之抑制劑。在又另-具體實例中’本發明提供一種用以治療非所欲細胞之方法，其涉及使該細胞接觸任— 抗體之功能性片段。在一相關具體實例中，該細胞= 胞表面帶有c-Met。在另一相關具體實例中，該上述方法尚涉及以一化療劑或放射照射治療該細胞。 " 在與數種上述方法相關之一具體實例中，在對該對象進行投藥或使該細胞進行接觸之後，此等方法可進一步涉及觀察該癌症發展或轉移之改善或減緩。在又另一具體實例中，本發明提供一種用以辨識帶有表面受體之細胞之方法，該方法涉及使該細胞接觸任一上述之抗體或功能性片段’以使該等抗體或功能性片段具有可偵測性之標記。舉例而言，該標記係放射活性、螢光、磁性、偏磁性、或化學發光。在一相關具體實例中，該上述方法尚涉及對該細胞進行顯影或分離之步驟。舉例而言，分離該細胞係使該帶有e_Meti細胞與一較大之細胞種群分離。在另一具體實例中，該上述之人類或人類化抗體或是抗體片段係一合成性之抗體，例如，由固相胺基酸合成儀所製備之多肽。在另一具體實例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包括任一上述之抗體或此等抗體之功能性片段與一額外之療 H9679.doc -15· 200815470 劑。該額外之療劑係選自抗癌劑；抗生素；抗炎劑；生長因子；以及細胞因子。本發明尚係關於一種用於在哺乳動物（特別係人類）體内以療劑之組合而預防或治療增殖性疾病或諸等疾病（諸如’癌症）之方法，該組合包含： (a) —種本發明之c-Met拮抗劑；以及 (b) —或多種醫藥活性劑；其中至少一種該醫藥活性劑係抗癌療劑。鲁本發明尚係關於一種醫藥組合物，其包含： (a) —種C-Met抗體拮抗劑； (b) —種醫藥活性劑；以及 (c) 一種醫藥可接受之載體；其中至少一種該醫藥活性劑係抗癌療劑。本發明尚係關於一種商業包裝或產品，其包含： 0)——種C-Met抗體拮抗劑之醫藥調配物；以及 0 一種醫藥活性劑之醫藥調配物，以用於進行同時、協同、分離、或接續使用；其中至少一種該醫藥活性劑係抗癌療劑。在部分具體實例中，本發明提供一種經分離之抗體，其具有一第一胺基酸序列，其係一重鏈，諸如，SEQ ID >^〇8:5 5-72，或是與選自8£()1〇^[〇8:5 5-72之序列具有至少60、70、80、9〇、95、或99百分比序列相同性之序列；以及一苐一胺基酸序列，其係一輕鏈，諸如，SEQ Π) NOs: 31_54，或是與選自SEq ID N〇s: 3卜54之序列具有至 119679.doc •16- 200815470 夕60 70 80、90、95、或99%序列相同性之序列。在又另一具體實例中，本發明提供一種免疫共軛物，其，、有為上述抗體或片段之第—組成分以及為一第二胺基酸序歹J之第_組成分。舉例而言’該免疫共輛物之第二組成分係-細胞毒素，或者係—結合蛋白或抗體，其對於一不同於c Met之目標具有結合專_@。舉例而言，該不同於 oMet之結合專—性之目標係位於癌細胞表面之腫瘤抗原

或腫瘤相關蛋白。在部分具體實例中，本發明提供為雙專一性抗體之任一上述抗體。在另-具體實例中，本發明提供—種具有任—上述抗體或：體片段之套組。在部分具體實例中，該套組尚含有其醫藥可接受之載體或賦形劑。在其他相關具體實例中，該套組中之任一上述抗體係以單元劑量之形式存在。在又另 -相關具體實例巾，該套組包括用於對—對象投藥任一上述抗體或是此等抗體之功能性片段之指示，或是用於進行研究用途或篩選之指示。可拮抗c-Met活性之療劑將預期可對廣泛之臨床相關性腫瘤之治療具有助益效應。本發明中包括全人類抗體，其可直接結合c-Met之胞外域並阻作用。【實施方式】〇本發明係關於經分離之抗體’特別係具有人類或人類化胺基酸序列之抗體，其可專nMet，特別係姓入 c-Met蛋白之-胞外部份’且其可抑制。㈣之功能特^ 在部分具體實例中’本發明之抗體係街生自特定之重及輕 119679.doc _ 17· 200815470 鏈序列及/或包含特定之結構特徵，諸如’包含特定胺基酸序列之CDR區域。本發明提供經分離之抗體、製備此等抗體之方法、偵測此等抗體之分析、包含此等抗體之免疫共輛物及雙專-性分子、以及含有該等本發明抗體、免疫共軛物、或雙專-性分子之醫藥組合物。本發明亦係關於使用該等抗體之方法’以抑制（亦即，拮抗卜彻之功能而抑制與細胞受體目標e_Met之存在相關之疾病或病況發展，因而造成增殖性疾病（如，癌症或炎性病況）之治療。在一不同之具體實例中，本發明亦係關於可活化（亦即，激動)c-Met磷酸化作用之抗體，以及使用激動性抗體之方法，其可激發’例如，器官再^、傷口復原、或組織再生。在一特定具體實例中，炎性病況係感染。在一具體實例中，該治療方法可用以阻斷病原感染。在一特定具體實例中’該感染係細菌感染’包括’如’李斯特桿菌⑹·浙⑷ 感染。為使本發明可更輕易獲得理解，部分辭彙係定義為具有此處之意義，除非由該内文要求為其他者。其他之定義則示於發明詳述之中。 ”c-Met多肽”或”c_Met受體”或”c_Met”係指可結合肝細胞生長因子之受體酪胺酸激酶。特定之實例包括，如，由 GenBank accuo· NM—000245所提供之核苷酸序列編碼之人類多肽，或是由GenBank accno· NP—000236所提供之多肽序列編碼之人類蛋白，或是其胞外域。該初級單鏈前=蛋 119679.doc -18- 200815470 白經轉譯後切割而產生α及β次單元，此等次單元由雙硫鍵連結而形成該成熟之受體。受體酪胺酸激酶C-Met涉及細胞作用’包括，如，伴隨胚胎發生及組織再生之遷移、侵染、及形態發生作用。辭茱c-Met相關性疾病或病況”係指任何疾病、異常、或病況，其係由c-Met之非所欲性表現或缺乏表現、非所欲性調控或缺乏調控、或是非所欲性活性或缺乏活性所造成，或者其可藉由调控c-Met之表現或活性而獲得調控、治療、或治癒。舉例而言，HGF/c_Met途徑之活化可預期見於大部分之癌症病患體内，或是其疾病實際係由與 c_Met途徑相關之變化而驅動之病患體内。舉例而言，正凋節可係因為不同之機制所造成，諸如，HGF及/或C-Met 之過表現，或是由C — Met之突變所造成之組成性活化。〇Met相關性疾病或病況包括，但不限於，如，增殖性疾病及異常以及炎性疾病及異常。增殖性疾病包括但不限於，如，癌症，包括，如，胃癌、食道癌、乳癌、腎臟癌 (包括乳頭狀腎細胞癌）、膠質細胞瘤、頭及頸癌、上皮癌肺癌 '皮膚癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、腦癌、胰臟癌、胃腸癌、胃癌、腸癌、結腸癌、肝癌、生殖系統癌、泌尿系統癌、黑素瘤、及前列腺癌，以及其他熟習技云者所头之腫瘤。炎性疾病包括，但不限於，如，細菌感木匕括’如’李斯特桿菌感染。其他疾病述於 ►中，jt

Online Mendelian Inheritance in Man (fOMIMn) 類孟德爾遺傳]登錄中，如，OMIN accno. 164860 119679.doc -19- 200815470 中之Met原癌基因及OMIN accno· 142409中之肝細胞生長因子/分散因子。其他實例將可為熟習技藝者所知，如，由 Corso et al·，TRENDS in Mol· Med· 11(6): 2841 (2005)及 Christensen et al.，Cancer Letts· 225: 1-26 (2005)所回顧評論者’該兩者皆併入作為參考。辭彙”免疫反應”係指淋巴細胞、抗原呈遞細胞、吞噬細胞粒細胞、以及由此專細胞或由肝臟所產生之可溶性巨

为子（包括抗體、細胞因子、及補體之生成及/或分泌）之任何活性，其可造成侵入性病原體、經病原體感染之細胞或組織、癌細胞、或是就自體免疫或病理性發炎之情形而言之正常人類細胞或組織之選擇性結合、損傷、破壞、或是自人體内排除。 ”信號轉導途徑，，係指一種生化因果關係，其一般而言係由蛋白-蛋白作用起始，諸如，生長因子與受體之結合，因而造成一信號自細胞之一部份傳遞至細胞之另一部份。一般而言，該傳遞涉及在造成信號轉導之反應系列中之一或夕種蛋白上之酪胺酸、絲胺酸、或羥丁胺酸殘基中之一或多者之特定磷酸化作用。倒數第二個作用一般而言包括核事件，因而造成基因表現之變化。 ”細胞表面受體”包括，例如，可接受信號且可將此種偉號傳遞通過細胞琪之分子或分子複合物。本發明，，細胞表 ^體"之實例之-係e彻，其可為生長因子蛋白分子= 口，如，肝細胞生長因子（HGF)。辭囊"抗體”涵括任何具有似免疫球蛋白之結合功能之分 119679.doc -20- 200815470 子部分。該辭彙包括全抗體分子及任何抗原結合片段(亦即y’抗原結合部分”）或其單鏈、路職體（包括，如，奈米抗體）&菌體展不結合建構物、及其類似者。"天然存在性抗體’’係-種糖蛋白’其包含至少兩條重⑻鏈及兩條輕（L)鏈’其間由雙硫鍵連結4條重鏈係由—重鍵可變區域（在本文中縮寫為Vh)及—重鏈怪定區域構成。該重鍵恆定區域係由三個蛋白域構成，cm、⑽、及⑽。僅有兩類型之輕鏈：九及κ。各條輕鏈係由一輕鏈可變區域 (在本文中縮寫為VL)及一輕鏈恆定區域構成。該輕鏈恆定區域係由一個蛋白域構成，cL。該等Vh&Vl區域可進一步分割為稱為互補決定區域（CDR)之高變區域，其與稱為框架區域（FR)之較保守區域交叉分布。如可見於天然者，各個VH及VL係由三個CDRs及四個FRs構成，其以下列順序自胺端至羧端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、 CDR3、FR4。該等重及輕鏈之可變區域含有可與抗原作用之結合域。該等抗體之恆定區域可中介該免疫球蛋白與宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞（如，效應細胞）以及經典補體系統之第一組成分（clq)。抗體可為單株或多株性者。辭彙抗體之”抗原結合部分π(或簡單稱為”抗原部分”）係指全長或是抗體之一或多種片段，其具有專一結合抗原 (如，c-Met之一部份）之能力。咸已獲得證實，抗體之抗原結合功能可由全長抗體分子之片段執行。含有抗體之抗原結合部分之結合片段實例包括Fab片段，其係由、 119679.doc -21- 200815470 CL、及CH1域構成之單價片段；F(ab)2片段，其係包含由雙硫橋鍵在鉸鏈區域連結之兩個Fab片段之雙價片段；Fd 片段，其具有VH及CH1域；Fv片段，其具有抗體鏈單一胺基酸序列之 VL及 VH域；dAb 片段（Ward et al·，1989 Nature 341:544-546)，其具有一VH域；以及經分離之互補決定區域（CDR)。有關含有抗原結合部分之抗體片段之參照可預期經分離之片段或是與化學或生物性分子部分綴合者，或是連結於非傳統性免疫球蛋白衍生性構架或骨架之片段，其包括但不限於，如，錨蛋白、纖連蛋白、域抗體、脂質運載蛋白 (lipocalin)、小模組免疫藥物（small modular immuno-pharmaceuticals)、maxybodies、奈米抗體、A 蛋白、 affilin、γ-晶狀蛋白（crystallin)、及遍在蛋白，以及其他熟習技藝者已知之預期骨架。同時，儘管在天然存在之抗體分子中，其中共有兩種具有Fv域之鏈，由分離之基因編碼之VL及VH，可使用重組方法而以一合成性連接子使其結合，以使其可以單一單白鏈之形式重組表現，其中該VL及VH區域可形成一單價分子 (稱為單鏈Fv (scFv);參見，如，Bird et al_，1988 Science 242:423-426 ；及 Huston et al·，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 5879-5883)。此等單鏈抗體亦涵括於辭彙抗體之抗原結合部分中。此等抗體片段可使用熟習技藝者已知之習知技術取得，且該等片段可以如同完整抗體或是其其他片段之相同方式進行篩選而使用。 119679.doc -22- 200815470

'經分離&體"係指_質上$含具有不同抗原4 一性之其他抗體之抗體（如’可專一結合為c-Met上一組胺基酸之決定區之經分離抗體實質上係不含可專一及實質結合非 c-Met之抗原之抗體）。然而，可專一結合心厘以蛋白（諸如’人類c-Met)之經分離抗體可具有對於其他抗原之交又反應性，諸如，取自其他生物種之c-Met分子，或是與人類c-Met胺基酸序列具有高量同源性之蛋白。同時，經分離抗體可實質上不含其他細胞物質及/或化學物。辭囊"單株抗體，，或"單株抗體組合物"係指一抗體分子之製備物’纟皆共有單-之分子組成。單株抗體組合物因此具有對於一特定抗原表位之單一結合專一性及親和力。在本文中，辭彙"多株抗體"係指具有異源抗體種群之抗體組合物。多株抗體通常係由取自經減動物或取自經選擇人類之集合血清衍生而來。在本文中，辭彙”人類抗體”係欲包括諸等抗體，其具有其中框架及CD㈣中之至少一者且一*而言冑其二兩 :皆係衍生自人類來源序列之可變區域。同時，如該抗體含有恆定區域，該恆定區域亦係衍生自諸等人類序列，人類種系序列，或是人類種系序列之突變體。本發明之人類抗體可包括非由人類序列編碼之胺基酸殘基，由體外之隨機或定位誘變所引入或是由體内之體突變所引入之突變，諸如，取代）。性之抗體，類序列之可辭彙”人類單株抗體，，係指具有單一結合專一其具有其中框架及CDR區域兩者皆係衍生自人 119679.doc -23- 200815470 變區域。在一具體實例中，該等人類單株抗體係由一融合瘤產生，該融合瘤包括與無限增殖化細胞（一般而言係人類來源者）融合之取自具有包含重鏈轉基因（一般而言係人類來源者）及輕鏈轉基因（一般而言係人類來源者）之基因組之轉基因非人類動物（如，轉基因小鼠）之B細胞。在本文中，辭彙，，重組人類抗體"包括由重組方法製備、表現、創造、或分離之人類抗體，諸如，自經人類免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體之動物（如，小鼠）或是由自其所製備之融合瘤所分離之抗體，自經轉形以表現人類抗體之宿主細胞（如，自轉染瘤）所分離之抗體，自重組、結合性人類抗體庫所分離之抗體，以及以涉及將全部或部分之一或多種人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列上之任何其他方法所製備、表現、創造、或分離之抗體。此等重組人類抗體具有其中框架及CDR區域係衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區域。然而，在部分具體實例中，此等重組人類抗體可遭受體外之誘變（或是，當使用經人類Ig序列轉基因之動物時，其可遭受體内之體誘變），以致於該等重組抗體Vh1 %區域之胺基酸序列儘管係自人類種系Vh&Vl序列衍生而來並與其相關，其可能係天然不存在於人類抗體之體内種系組成中之序列。在本文中，’’同種型”係指由重鏈恆定區域基因所提供之抗體類別（如，IgA、IgD、IgM、IgE、或邮，諸如，

IgGl、IgG2、IgG3、或 lgG4)。辭彙”辨識一抗原之抗體”及”對一抗原具專一性之抗體，， 119679.doc -24 - 200815470 在本文中係與辭彙’’可專一結合一抗原之抗體”交互使用。在本文中，”可專一結合人類C-Metn之抗體係指可以 2·〇χ1(Γ5 Μ或以下、2.〇xl(r6 Μ或以下、2·〇χ10·7 IV[或以下、2·〇χΐ〇·8 Μ或以下、或是2·〇χ1〇-9 Μ或以下之尺〇值結合人類c-Met之抗體。在本文中，辭彙”交叉反應性"係指

一抗體或抗體種群與其他抗原上之抗原表位之結合。此可係由該抗體之低親合力或專一性而造成，或是由具有相同或極為類似抗原表位之多種迥異抗原而造成。在欲取得對於相關抗原組群之一般性結合，或是在欲取得交又生物種之私圮而如該抗原表位序列在演化中並不具高度保守性時，交又反應性有時係所欲者。可與非人類c-Met之抗原交叉反應”之抗體係指可以 0.5x10 μ或以下、5x1ο·8 μ或以下、或是2x1 〇_9 Μ或以下之尺〇值結合該抗原之抗體。"不可與特定抗原交叉反應"之抗體係‘可以1.5x10 8 M之£〇值，或是5_ι〇χΐ〇·7汹或5><1〇-6 Μ 或上之Kd值尨合（如有任何結合）該抗原之抗體。在部分〃 _>^中此等不可與該抗原交叉反應之抗體與此等蛋 …有在；^準結合分析中基本上無法偵測之結合情形。本文中’可抑制對於C-Met之結合，，之抗體係指可以 10 nM或以下、5 Μ ηΜ或以下、；[ηΜ或以下、0.75 ηΜ或以下、〇·5 ηΜ或以nr 上、卜、或是0.25 ηΜ或以下之Kj值抑制 HGF/SF配位體結合 e_Met表面受體之抗體。在本文中，"可女庄仰制c_Met信號轉導活性”之抗體係指可以小於10 nM、5 niu 、2·5 nM、1·〇 nM、0.5 nM、或以下 119679.doc •25- 200815470 之ICw值抑制抗體。 c-Met誘發性增殖活性或是其他經誘發活性之辭彙"w或"Ka”在本文中係指特定抗體締合速率，且絲鲞”κ „ ’、乍用之丰且^ Kdis或，，KD"在本文中則係 ^抗原作用之解離速率。辭彙”KD"在本文中係指解料數’其係取自1對Ka之比例(亦即’ Kd/Ka)，且係以莫耳产度(M)表示。抗體之KD值可使用技藝中已為詳細建立之：

法測定。其中—種用以敎抗體KD值之方法係藉由使用表面胞質基因組共振或是使用生物傳感器系統，諸如： Biacore⑧系統。在本文中，辭彙"激動劑抗體"或，，活化抗體"係指在加入表現c-Met之細胞、組織、或器官時可增加至少2〇%_4〇% 之一或多種c-Met誘發性活性之抗體。在部分具體實例中，該抗體可活化至少50%、60%、70%、80%、85%、 90/^、95%、1〇〇%、或大於1〇〇%之0_^^丨活性。在部分且體實例中，本發明之激動劑抗體可使c_Met之至少一種活性增加10倍。一般而言，此種增加情形係在無其生物性誘發子HGF存在之情形下進行觀察。然而，在部分具體實例中，諸如，在分析之控制組中，該活化抗體係在HGF存在之情形下加入。在本文中，辭彙"親和力”係指在單一抗原性位點之抗體與稱為”抗原表位”之抗原部分間之作用強度。在各抗原性位點中，抗體’’臂”之可變區域可經由微弱之非共價力而與抗原在該抗體之諸多原子位置或胺基酸殘基原子處作用； 119679.doc -26- 200815470 又而"此等作用之數目越多，該抗體對於該抗原之親和力便越強。在本文中親合力係指抗體_抗原複合物整體安定性或強度之貝訊性度量。其係由三種主要因子控制··抗體_抗原表位親和力、抗原及抗體各者之效冑、以&此等作用部 /刀之結構排列或立體組態。此等因子最終可定義該抗體之專一性’亦即，該特定抗體結合精確抗原表位之可能性以及該鍵結之安定性及持久性。為取侍具有較高親合力之探針，可建構一種二聚性共軛物（偶合FACS標記物之兩個抗體蛋白或多肽分子），因而使低親和力之作用（諸如，與種系抗體之作用）可由facs更輕易偵測。增加抗原結合親合力之另-種方法係產生c-Met 抗體如本文所述之任一建構物之二聚物或多聚物。此等多聚物可經由個別分子間之共價結合而產生，例如，藉由模擬天。之C至-蝙結合，或是藉由模擬經由其恆定區域籲❿彼此連結之抗體二聚物。經由工程處理而加入該F他界面中之鍵結可為共價或非共價性者。此外，可在建構抗-c-Met抗體雜交物（諸如，雙功能性抗體）之過程中，使用非Fc之二聚化或多聚化配對物，以產生此等較高層級之結構。在本文中辭臬1gG抗體之"高親和力"係指對於目標抗原具有Γ0·8 Μ或以下、1〇4 M或以下、或是1〇, μ或以下 D值之抗體然而’ "Τ%親和力”之結合對於其他抗體同種型而言可各有不同。舉例而言，IgM同種型之，，高親和力” 119679.doc -27- 200815470 Μ或以下之KD值之抗結合係指具有ΙΟ·7 Μ或以下或是1(r 體。在本文巾辭臬對象包括任何哺乳動物，包括人類或非人類哺乳動物，或是其他動物。辭囊”非人類動物”包括所有之脊椎動物，#，浦乳動物，諸如，非人類之靈長類、羊、狗、猫、馬、牛，以及非哺乳動物，諸如，鳥類、兩棲類、爬蟲類等。辭茱"取適化"意謂一核苷酸序列已經變更而使用在該生產細胞或生物體内偏好之密碼子編碼一胺基酸序列，一般而言係一真核細胞，例如，酵母菌細胞（諸如，畢赤酵母 (P/c/n^))、哺乳動物細胞（諸如，中國倉鼠卵巢細胞（ch〇) 或人類細胞）。經最適化之核甞酸序列係經工程處理而完全或儘可能保留由該原始之起始核苷酸序列（其亦稱為"母，，序列）所編碼之胺基酸序列。本文中之最適化序列已經工私處理而具有人類細胞中所偏好之核苷酸序列密碼子，然而’此等序列在其他真核細胞中之最適化表現亦可由本文預見。由最適化核甞酸序列所編碼之本文抗體胺基酸序列亦稱為經最適化者。本發明之各種範疇進一步詳述於下列次章節中。用以評估抗體對於各種生物種之C-Met之結合能力之標準分析已為技藝中所知，其包括，例如，ELISAs、西方點潰分析、及RIAs。適當之分析為熟習技藝者所知。參見，如，F· Ausubel，et al·，ed. 2006、Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學之現有操作流程]，Greene 119679.doc -28 - 200815470 —ing and Wiley Interscience，—加。抗體之社人動力學（如’結合親和力）亦可以技藝中所知之標準分:二估’诸如’ Bla⑽e分析。用以評估抗體對於卜㈣功能特性之作用之分析（如，誘發受體之内化、抑制生長因子對 e-Met之結合、抑制物自體鱗酸化仙、抑制c胸途徑活化’因而預防或改善增瘦，或是激酶分析）述於本文之中。因此，根據技藝中已知之方法學及述於本文中者而測定為可”抑制”-或多種此等。彻功能特性(如，生化、免疫化學、細胞、生理、或其他生物活性、或是其類似者）之抗體係有關於特定活性之統計顯著性拮抗作用或降低，相對於無該抗體存在時（如，或是在具非相關性專一性之控制組抗體存在下）所g | χ )厅見者。可抑制c_Met活性之抗體可產生諸㈣測量參數至少1G%、至少观、娜、或㈣之統計 ‘、具著ί生降低’且在部分具體實例中，本發明之抗體可抑制大於95%、98%、或99%之。彻功能活性。一般而言，活性之降低係在誘發事件後測量，諸如，HGF之添加。或者’根據技藝中已知之方法學及述於本文中者而測定為可”激動”一或多種此等c-Met功能特性（如，生化、免疫化予細胞、生理、或其他生物活性、或是其類似者)之抗體係有±關於特定活性之統計顯著性增加，相對於無該抗 -子在守（如或疋在具非相關性專一性之控制組抗體存在下）所見者。可刺激或激動c_Met活性之抗體可產生諸如〜測里多數至少10%、至少5〇%、8〇%、或齋。之統計顯著 H9679.doc -29- 200815470 性增加，且在部分具體實例中，本發明之抗體可激動大於 95%、98%、或99%或以上ic_Met功能活性。重組抗體本發明之抗體係重組抗體，其如實例中所述而經分離及結構定性。該等抗體之VH核苷酸序列分別示於SEQ ID NOs: 21-30。表C-E提供不同本發明抗體之Vh核：y：酸序列實例。該等抗體之VL核苷酸序列分別示於SEq id NOs: 1-20。（表C-E提供不同本發明抗體之％核甞酸序列實例。）該等抗體之IgX及κ輕鏈核甞酸序列示於SEq ID n〇s: 73-76 及表C-E。該等抗體之IgG4核苷酸序列示於SEQ ID NOs: 85-88及表C_E。本發明之其他抗體包括經突變之核甞酸，但其與上述之諸等序列具有至少6〇、7〇、80、90、95、或 99百分比之相同性。

該等抗體之VH胺基酸序列分別示於SEQ ID NOs: 55-72 以及表A-B及E。該等抗體之Vl胺基酸序列分別示於SEQ ID NOs: 31-54以及表A-B及E。該等抗體之IgX輕鏈胺基酸序列分別示於SEQ ID NOs: 77-80以及表A-B及E。該等抗體之IgK輕鏈胺基酸序列分別示於SEq id NOs: 81-84以及表A-B及E。該等抗體之igG4胺基酸序列示於SEQ id NOs. 89-96以及表A_B及E。本發明之其他抗體包括經突變之胺基酸’且其保有與上述諸等序列之至少6〇、70、80、90、、 95、或99百分比之相同性。由於此等抗體各可結合c-Met胞外部份上之一位點，^ VH/VL(核苷酸序列及胺基酸序列）、vH/IgX輕鏈（核菩酸序 119679.doc -30- 200815470 列及胺基酸序列）、及711/1§1^輕鏈（核苷酸序列及胺基酸序列）可經"混合及配對"，以產生其他本發明抗-c_Met結合分子之組合。此等抗體之c-Met結合可使用述於上文及實例中之結合分析（如，ELISAs)而進行試驗。本發明抗體之 Vh、VL、IgX輕鏈、及IgK輕鏈序列特別可順服於新穎之組合，因此等抗體係使用衍生自相同或類似種系序列之VH、 Vl、IgX輕鏈、及IgK輕鏈序列，並因此具有結構類似性。因此，在一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其抗原結合部分，其至少具有：一重鏈可變區域（VH)，其包含選自SEQ ID NOs: 5 5-72之胺基酸序列，以及一輕鏈可變區域（¥〇，其包含選自8£()10>^〇3:31-54之胺基酸序列；其中該抗體可專一結合c-Met。重及輕鏈組合之實例至少包括·· SEQ ID NO: 65之VH及 SEQ ID NO: 32 之 VL ;或是 SEQ ID NO: 66 之 VH 及 SEQ ID NO: 34 之 VL ;或是 SEQ ID NO: 67 之 VH 及 SEQ ID NO: 37 之 VL ;或是SEQ ID NO· 68 之VH 及 SEQ ID NO: 38 之VL ;或是 SEQ ID NO: 69之VH及 SEQ ID NO: 51 之VL ;或是 SEQ ID NO: 70之 VH及 SEQ ID NO: 52之VL ;或是 SEQ ID NO: 71 之 VH 及 SEQ ID NO: 53 之 VL ;或是 SEQ ID NO: 72 之 VH 及 SEQ ID NO: 54 之 VL ;或是 SEQ ID NO: 55 之 VH 及 SEQ ID NO: 31之 VL ;或是 SEQ ID NO: 5 8之VH及 SEQ ID NO: 36之 VL ; 或是 SEQ ID NO: 61 之 VH 及 SEQ ID NO: 41 之 VL ;或是 SEQ ID NO: 62之VH及SEQ ID NO: 45之VL。表A_B說明不同本發明抗體vH及VL胺基酸序列之”混合及配對”配對之實例。 119679.doc -31 - 200815470 圖1_3係說明VH及VL胺基酸序列實例之表列，其說明可提供於不同之架構上以提供具有與本文所述抗體相同或類似 c-Met拮抗活性之建構物之FR及CDR區域。因此，在另一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其抗原結合部分，其至少具有：一 VH區域，其包含選自SEQ ID NOs: 55-72之胺基酸序列，以及一 IgX輕鏈，其包含選自SEQ ID NOs·. 77-80之胺基酸序列；其中該抗體可專一結合c-Met 〇 VH /IgX輕鏈組合之實例至少包括：SEQ ID NO·· 66之VH 及 SEQ ID NO: 77之IgX輕鏈；或是 SEQ ID NO: 65之VH及 SEQ ID NO: 78之IgX輕鏈；或是包含SEQ ID NO: 69胺基酸序列之VH區域及SEQ ID NO: 79之IgX輕鏈；或是SEQ ID NO: 70之VH區域及SEQ ID NO: 80之IgX輕鏈。因此，在另一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其抗原結合部分，其至少具有：一 VH區域，其包含選自8£(5 10^〇8:5 5_72之胺基酸序列，以及一1§【輕鏈，其包含選自SEQ ID NOs: 8 1-84之胺基酸序列；其中該抗體可專一結合c-Met。 VH/Ig/c輕鏈組合之實例至少包括：SEQ ID NO: 71之VH 區域及SEQ ID NO: 81之IgK輕鏈；或是SEQ ID NO: 68之 VH區域及SEQ ID NO: 82之IgK輕鏈；或是SEQ ID NO: 67 之VH區域及SEQ ID NO: 83之IgK輕鏈；或是SEQ ID NO: 72之VH區域及SEQ ID NO: 84之IgK輕鏈。在另一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其 119679.doc -32- 200815470 抗原結合部分，其至少具有：一 VH鏈，其包含選自SEQ ID NOs: 21-30之核苷酸序列，以及一 VL鏈，其包含選自 SEQ ID NOs: 1-20之核甞酸序列。因此，重及輕鏈組合之實例至少包括：包含SEQ ID NO: 21核苷酸序列之區域及包含SEQ ID NO: 1核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 24核嘗酸序列之vH 區域及包含SEQ ID NO: 6核：y：酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 27核甞酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 11核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 28核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 15核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 29核甞酸序列之 VH區域及包含SEQ ID NO: 18核甞酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 30核苷酸序列之VH區域及包含 SEQ ID NO: 20核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 22核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 1核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 23核甞酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 1核苷酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 24核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 7核甞酸序列之輕鏈可變區域；或是包含 SEQ ID NO: 24核菩酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 8 核甞酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 24核甞酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 9核甞酸序列之輕鏈可變區域；或是包含SEQ ID NO: 24核苷酸序列之vH區域及包含SEQ ID NO: 10核嘗酸序列之輕鏈可變區域。參見 119679.doc -33- 200815470 表A-B，其說明不同本發明抗體VH&VL核芸酸序列之"混合及配對π配對之實例以及VH及VL核苷酸序列配對之其他實例。在另一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其抗原結合部分，其至少具有：一 VH鏈，其包含選自SEQ ID NOs: 21-30之核甞酸序列，以及一 IgX輕鏈，其包含選自SEQ ID NOs·· 73之核苷酸序列。因此，其中一種VH /IgX輕鏈組合之實例包括：包含SEQ ID NO: 23核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID NO: 73核菩酸序列之IgX輕鏈。在另一態樣中，本發明提供一種經分離之重組抗體或其抗原結合部分，其至少具有··一 ^鏈，其包含選自SEQ ID NOs· 2 1 - 30之核菩酸序列’以及^^ IgK輕鍵’其包含選自SEQ ID NOs: 74_76之核苷酸序列。因此，VH及IgK輕鏈組合之實例至少包括：包含SEq id NO: 24核嘗酸序列之Vh區域及包含SEq ID N〇: 74核苷酸序列之IgK輕鏈可變區域；或是包含紐卩N〇: 25核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID N〇: 75核苷酸序列之1§/(：輕鏈可變區域’或是包含处。ID NO: 27核苷酸序列之VH區域及包含SEQ ID N〇: 76核甞酸序列之IgK輕鏈可變區域。在本文中，一人類抗體包含為一特定種系序列之"產物” 或係自其”衍生，，之重或輕鏈可變區域，如該抗體之可變區域係取自使用人類種系免疫球蛋白基因之系統。此等系統包括以目標抗原免疫一帶有人類免疫球蛋白基因之轉基因 119679.doc -34 - 200815470 J乳或疋以目標抗原篩選展示於嗟菌體上之人類免疫球蛋白基因庫。為一人類種系免疫球蛋白序列之產物或係自其竹生之人類抗體可藉由比較該人類抗體之胺基酸序列與諸等人類種系免疫球蛋白之胺基酸序列，並選擇與該人類抗體具有最相近序列(亦即，具有最大％相同性)之人類種系免疫球蛋白序列而獲得辨識。為一人類種系免疫球蛋白序列之產物或係自其衍生之人類抗體可含有與該種系序列相較之胺基酸差異。此等差異可係由，例如，至少一個天 • s產生之體突變或是定位突變之有意引入而造成。然而，經選擇之人類抗體一般而言係與由一人類種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有至少90%之胺基酸序列相同性，且其含有可在與其他生物種之種系免疫球蛋白胺基酸序列（如，小鼠種系序列）進行比較時將該人類抗體辨識為人類來源者之胺基酸殘基。在部兮情形下，該人類抗體可與由該種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有至少 _ 60%、70%、80%、90%或至少95%、或甚至至少96%、 97%、98%、或99%之胺基酸序列相同性。一般而言，衍生自特定人類種系序列之人類抗體將不會與由該人類種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有超過丨〇個之胺基酸差異。在部分情形下，該人類抗體可與由該種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有不超過5個、或甚至是不超過4、3、2、或1個之胺基酸差異。相同性抗體在又另一具體實例中，本發明之抗體至少具有與本文所 119679.doc -35- 200815470 述抗體之胺基酉夂及核甞g曼序列具有同源性或相同性之可變㈣重及輕鏈核料序列、或是可變區域重及輕鏈胺基酸序列、或疋核苷酸序列、或是1§λ胺基酸序列、或是^ /c核菩酸序列、或是IgK胺基酸序列、或是IgG4核甞酸序列、或疋IgG4胺基酸序列，且其中該等抗體保有本發明抗-c-Met抗體之所域功能特性，亦即，具有母功能活性或多種活性。該等母功能活性可為抬抗性或激動性者。在大 _ 部分之具體實例中，該活性係拮抗性者。舉例而έ，本發明提供一種經分離之重組抗體，或其抗原結合部分，其具有一 vH區域及一輕鏈可變區域，該Vh 區域包含與選自SEQIDN〇s: 55_72之胺基酸序列具有至少 80%、85%、90%、95%、或99%相同性之胺基酸序列，該輕鏈可變區域包含與選自SEQ ID N〇s: 31_54之胺基酸序列具有至少80%、85%、9G%、95%、或99%相同性之胺基酸序列，其中該抗體可專一結合C-Met，且該抗體具有下列 _ 功能性拮抗特性中之至少一者：該抗體可誘發cMet之内化、或者該抗體可抑制一蛋白生長因子與c-Met之結合、或者該抗體可抑制c_Met之自體磷酸化作用而防止^乂以途徑之活化、或者該抗體可抑制由信號轉導所造成之eMM途徑之正調節、或者該抗體可抑制c-Met之結合，因而預防或改善細胞增殖、存活、遷移、侵染、或形態改變，且特別可預防或改善癌症，諸如，腫瘤生長及或轉移。在另具體實例中，該抗體係反應性者且可活化c_Met 磷酸化作用而激發細胞反應。在一具體實例中，該細胞反 119679.doc -36 - 200815470 應係傷口復原反應。在另一實例中，本發明提供一種經分離之重組抗體，或其抗原結合部分，其具有一IgX輕鏈，該Igx輕鏈包含與選自SEQ ID NOs·· 77·80之胺基酸序列具有至少8〇%相同性之胺基酸序列。在其他具體實例中，該抗體可專一結合 c-Met，且該抗體具有下列功能特性中之至少一者··該抗盤可活化誘發c-Met受體之内化，該抗體可抑制一蛋白生長因子與c-Met之結合，此種抑制作用因而可防止該受體參之活化，如，防止由c-Met之活化及/或信號轉導所造成之途徑正調節，或者該抗體可預防或改善細胞增殖、細胞存活、遷移、侵染、或形態改變，或者該抗體可拮抗心Met 活性，因而預防或改善癌症，諸如，腫瘤生長及或轉移。在另一具體實例中，該抗體可活化c-Met麟酸化作用而激發細胞反應。在另一實例中，本發明提供一種經分離之重組抗體，或 φ 其抗原結合部分，其具有一 IgK輕鏈，其中：該IgK輕鏈包含與選自SEQ ID NOs·· 81-84之胺基酸序列具有至少8〇%相同性之胺基酸序列；該抗體可專一結合C-Met，且該抗體具有上文及本說明書全文中所提供之諸等功能特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體可活化c_Met磷酸化作用而激發細胞反應。在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之重組抗體’或其抗原結合部分，其中該抗體係一 IgG4，該igG4具有與選自SEQ ID NOs: 89-96之胺基酸序列具有至少80%相 H9679.doc -37- 200815470 同性之胺基酸序列；該抗體可專一結合e_Met，且該抗體具有上文及本說明書全文中所提供之下列功能特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體係激動性者，且其可活化c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在各種具體實例中，該抗體可具有本文所論之拮抗性功能特性中之一或多者、二或多者、或是三或多者。該抗體可為，例如，人類抗體、人類化抗體、或嵌合抗體。

在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之重組击體，或其抗原結合部分，其具有一 Vh區域及一輕鏈可變〇域’該VH區域係由與選自SEQ m n〇s: 21-30之核嘗酸/ 列具有至少80%相同性之核苷酸序列編碼，該輕鏈可變Q 域係由與選自SEQ ID NOs: 1-20之核：y：酸序列具有至」 80%相同性之核苷酸序列編碼；該經編碼之抗體可專一衾合c-Met，且該抗體具有上文及本說明書全文中所提供< 諸等功能特性中之至少-者。在另—具體實财，該抗骨可活化c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在另貝例中，本杳明k供一種經分離之重組抗體，^ 其抗原結合部分，其具有—1§λ輕鏈，該Ιβλ輕鏈係由㈣自SEQ ID紙73之核料序列具有至少嶋相同性之核^ 酸序列編碼；該經編碼之抗體可專一結合c_Met，且該老體具有上文及本說明書全文中所提供之諸等功能特性中戈至少-者。在另—具體實例中，該抗體係激動性者且盆月活化c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在另-實例中’本發明提供一種經分離之重組抗 119679.doc -38- 200815470 〃抗原、、σ &邛为’其具有一1gK輕鏈，其中：該IgK輕鏈係由舁込自SEQ ID NOs: 74-76之核:y：酸序列具有至少8〇%相同性之核苷酸序列編碼；該抗體可專一結合c_Met，且該抗體具有上文及本說明書全文中所提供之諸等功能特性中之至/ 者。在另一具體實例中，該抗體可活化c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在另一具體實例中，本發明提供一種經分離之重組抗體，或其抗原結合部分，其中該抗體係一 IgG4，其中該 IgG4係由與選自SEQ m N〇s: 85_88之核苷酸序列具有至少 80%相同性之核苷酸序列編碼；該經編碼之抗體可專一結泛c-Met，且該抗體具有上文及本說明書全文中所提供之諸等功能特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體係激動性者且其可活化c_Met磷酸化作用而激發細胞反應。在各種具體實例中，該抗體可具有本文所論之拮抗性功能特性中之一或多者、二或多者、或是三或多者。該抗體可為，例如，人類抗體、人類化抗體、或嵌合抗體。在其他具體實例中，該等¥11及/或Vl胺基酸序列可為與上不之諸等序列具有50%、60%、70%、80%、90%、 95 /〇、96%、97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與 SEQ ID NOs: 31_72之VH及vL區域具有高（亦即，80%或以上）相同性之VH及VL區域之抗體可藉由編碼8玉(）ID NOs: 3 1-72之核酸分子之誘變（如，定位或pCR_中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所 119679.doc -39- 200815470 保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該等重鏈及/或輕鏈可變區域之核苷酸序列可為與上示之諸等序列具有60%、70%、80%、 90%、95%、96%、97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與SEQ ID NOs: 21-30之可變區域重鏈及SEQ ID NOs: 1_20之可變區域輕鏈具有高（亦即，80%或以上）相同性之可變區域重鏈及輕鏈之抗體可藉由包含SEQ ID NOs: 1-30 之核酸分子之誘變（如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該等IgX輕鏈胺基酸序列可為與上示之諸等序列具有50%、60%、70%、80%、90%、95%、 96%、97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與SEQ ID NOs: 77-80之IgA輕鏈具有高（亦即，80%或以上）相同性之 IgA輕鏈之抗體可藉由編碼SEQ ID NOs: 77-80之核酸分子之誘變（如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該等IgX輕鏈核苷酸序列可為與上示之諸等序列具有60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、9 8%、或99%之相同性者。具有分別與SEQ ID NO: 73之IgX輕鏈具有高（亦即，80%或以上）相同性之IgX輕鏈之抗體可藉由包含SEQ ID NO: 73之核酸分子之誘變（如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分 119679.doc -40- 200815470 析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該等IgK輕鏈胺基酸序列可為與上示之諸等序列具有50%、60%、70%、80%、90%、95%、 96%、97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與SEQ ID NOs: 81-84之IgK輕鏈具有高（亦即，80%或以上）相同性之 IgK輕鏈之抗體可藉由編碼SEQ ID NOs: 8卜84之核酸分子之誘變（如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該等Ig /c輕鏈核甞酸序列可為與上示之諸等序列具有60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%、或99%之相同性或同源性者。具有分別與SEQ ID NOs: 74-76之IgK輕鏈具有高（亦即，80%或以上）相同性之IgK輕鏈之抗體可藉由包含SEQ ID NOs: 74-76之核酸分子之誘變（如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。在其他具體實例中，該係IgG4之抗體可為與上示之諸等胺基酸序列具有 50%、60%、70%、80%、90%、95%、 96%、97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與SEQ ID NOs: 89-96之IgG4組合物具有高（亦即，80%或以上）相同性之IgG4可藉由編碼SEQ ID NOs: 89-96之核酸分子之誘變 (如，定位或PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功 119679.doc -41 - 200815470 能分析試驗該由誘變衍生之經編碼變化抗體所保 (亦即，示於上文之諸等功能)而取得。 “ 在其他具體實例中，該抗體係—IgG4m示之核芬酸序列具有60%、鳩、嶋、90%、95%、96%、

97%、98%、或99%之相同性者。具有分別與SEQIDN0s: 85-88之1gG4具有高（亦即，80%或以上）相同性之IgG4可藉由包3 SEQ ID NOs: 85-88之核酸分子之誘變（如，定位或 PCR-中介性誘變），再使用本文所述之諸等功能分析試驗該經編碼變化抗體所保留之功能（亦即，示於上文之諸等功能）而取得。、在本文中兩胺基酸序列或兩核錢序列間之相同性百分比係勒該兩序列間之相同性百分比，且此等㈣係在本文中交互使用。兩序列間之相同性百分比係由該等序列所共有相同位置數目之函數(亦即，％同源性=相同位置之#, 位置之總#Xl〇0)，同時考慮間隙之數目、各間隙之長度，其係為進行該兩序列之最適聯配所需引人者。序列之^ 以及兩序列間相同性百分比之測定可使用數學算法完成，如述於下文之非限制性實例中者。兩胺基酸序列或兩核甞酸序列間之相同性百分比可使用

Meyers and W· Miller (Comput· Appl· Biosci·，4:11-17, 1988)之异法測定，其已被納入align程式（2 〇版）中，使用PAM120權數殘基表、間隙長度罰點以、以及間隙罰點 4。此外，兩胺基酸序列或兩核苷酸序列間之相同性百分比亦可使用 Needleman and Wimsch (J· Mol，Biol· 48:444- 119679.doc -42- 200815470 453，1970)之算法測定，其已被納入GCG套裝軟體之GAP 程式中（可於http://www.gcg.com取得），使用Blossom 62矩陣或PAM250矩陣，以及間隙權數16、14、12、10、8、 6、或4及長度權數1、2、3、4、5、或6。此外或是或者，本發明之蛋白序列尚可作為”探詢序列" 而對公開之資料庫進行搜尋，以，例如，辨識相關之序列。此等搜尋可使用 Altschul，et al.，1990 J. Mol. Biol· 215:403-10之XBLAST程式（2.0版）而進行。可以該XBLAST 程式、計分=50、字長=3而進行BLAST蛋白搜尋，以取得與本發明之抗體分子同源之胺基酸序列。為取得間隙性之聯配以進行比較，可使用如述於Altschul et al.，1997 Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402之間隙性 BLAST。在使用 BLAST 及間隙性BLAST程式時，可使用各程式之系統預設參數 (如，XBLAST及NBLAST)。參見 http: lwww.ncbi.nhn.nih.gov。將可容許核甞酸序列與本文所示之核苷酸序列雜交之條件可根據已知之技術判定。核铝酸序列之雜交可在低嚴格性、中嚴格性條件、或甚至嚴格條件下進行。低嚴格性條件之實例係37°C下之含有35-40%曱醯胺與5xDenhardt溶液、0.5% SDS、及lxSSPE之缓衝溶液。中嚴格性條件之實例係42°C下之含有40-45%甲醯胺與5xDenhardt溶液、 0.5% SDS、及lxSSPE之緩衝溶液。高嚴格性條件之實例係42°C或更高溫度下之含有50%曱醯胺與5xDenhardt溶液、0.5% SDS、及lxSSPE之缓衝溶液，根據該聚核苷酸之G+C百分比及長度而定。參見，J. Sambrook et al· (1989) 119679.doc •43- 200815470

Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選獲 '實驗室手冊](2 ed.) (Cold Spring Harbor Laboratory)。、在任何上述例示嚴格性條件下之核苷酸序列雜交係在溶液中進行並收集於濾器之上。或者，在任何上述例示嚴格性條件下之核苷酸序列雜交係在凝膠中進行，如，南方點潰分析。具有保守性修飾之抗體在部分具體實例中，本發明之抗體具有一VH區域，其包 k自SEQ id NOs: 55-72之序列，以及一輕鏈可變區域，其包括選自SEQ ID NOs: 3 1-54之胺基酸序列，其中此等序列之一或多者具有根據本文所述抗體之特定胺基酸序列或是其保守性修飾物，且該等抗體具有本發明抗_c_Met抗體之所欲功能特性。因此，本發明提供一種經分離之抗體，或其抗原結合部分，其具有一％鏈以及一％鏈，其中該 Vh鏈具有選自SEQ ID N〇s: 55_72及其保守性修飾物之胺 φ 基酸序列；且該Vl鏈具有選自SEQ ID NOs: 31_54及其保寸性修飾物之胺基酸序列；該抗體可專一結合c_Met ;且該抗體具有下列功能特性中之至少一者：該抗體可活化誘發cMet受體之内化，該抗體可抑制一蛋白生長因子與 c-Met之結合，此種抑制作用因而可防止該受體之活化，如，防止由cMet之活化及/或信號轉導所造成之途徑正調節’或者該抗體可預防或改善細胞增殖、細胞存活、遷移彳文^、或开》態改變’或者該抗體可拮抗c-Met活性，因而預防或改善癌症，諸如，腫瘤生長及或轉移。 H9679.doc -44- 200815470 在另一具體實例中，該抗體係激動性者且其可活化 c-Met鱗酸化作用而激發細胞反應。在部分具體實例中，本發明之抗體係一 IgX輕鏈，其具有選自SEQ ID NOs: 77-80之胺基酸序列，此等序列之一或多者具有衍生自本文所述抗體胺基酸序列之胺基酸序列，具有其保守性修飾物，該衍生之抗體保有本發明抗-c-Met 抗體之所欲功能特性。因此，本發明提供一種經分離之母抗體，或其抗原結合部分，其具有一IgX輕鏈，該Ιβλ輕鏈具有選自SEQ ID NOs: 77-80及其保守性修飾物之胺基酸序列；該抗體可專一結合C-Met ;且該抗體具有本文所述功能拮抗特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體係激動性者且其可活化 c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在其他具體實例中，本發明提供一種抗體，其具有一 IgKfe鏈’具有選自SEQ ID NOs: 8 1_84之胺基酸序列，此專抗體之一或多者具有衍生自本文所述抗體之胺基酸序列’具有其保守性修飾物，且其中該等抗體具有本發明母抗-c-Met抗體之功能特性。因此，本發明提供一種經分離之單株抗體，或其抗原結合部分，其具有一 IgK輕鏈，該 IgK輕鏈具有選自SEQ ID NOs: 81-84及其保守性修飾物之胺基酸序列；該抗體可專一結合c_Met ;且該抗體具有本文所提供之功能特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體可活化c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。 119679.doc -45- 200815470 在其他具體實例中，本發明之抗體係一 IgG4，其具有選自SEQ ID N〇s: 89-96之胺基酸序列，其中此等序列之一或多者具有衍生自本文所述抗體母胺基酸序列之胺基酸序列或其保守性修飾物，且該等抗體具有本發明抗_C-Met抗體之所欲功能特性。因此，本發明提供一種經.分離之抗體，或其抗原結合部分，其中該抗體係一 IgG4，其中··該igG4 具有選自SEQ ID NOs: 89-96及其保守性修飾物之胺基酸序列；該抗體可專一結合c_Met ;且該抗體具有本文所述之功能拮抗特性中之至少一者。在另一具體實例中，該抗體係激動性者且其可活化 c-Met磷酸化作用而激發細胞反應。在各種具體實例中，該抗體可具有本文所論之拮抗性功能特性中之一或多者、二或多者、或是三或多者。該抗體可為，例如，人類抗體、人類化抗體、或嵌合抗體。在本文中，辭彙"保守性序列修飾”係指諸等胺基酸修飾，其並不會顯著影響或改變含有該胺基酸序列抗體之結口特II。此等保守性之修飾包括如本文所述之胺基酸取代添加或缺失。修飾係以技藝中所知之標準技術而引入抗體之中，諸如，定位誘變以及pCR_中介性誘變。保守性之胺基酸取代係以一具有化學及物理相似性側鏈之不同胺錢殘基取代—㈣酸殘基。具有相似侧鍵之胺基酸殘基家族係為技藝中所知。此等家族包括具有驗性側鏈(如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性侧鏈(如，天夂胺酸、麵胺酸）、不帶電荷之極性側鏈（如，甘胺酸、天冬醢 H9679.doc -46- 200815470 胺、麵醯胺、絲胺酸、羥丁胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸）、非極性側鏈（如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸）、β-支鏈性侧鏈 (如，羥丁胺酸、纈胺酸、異白胺酸）、以及芳族側鏈(如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸）之胺基酸。因此，本發明抗體CDR區域中之一或多個胺基酸殘基可經取自相同側鏈家族之其他胺基酸殘基取代，且該經變更之抗體可經由使用本文所述之功能分析而試驗其所保有之功能。抗體框架咸可使用廣泛不同之抗體/免疫球蛋白框架或架構，只要該所得之多肽包括一或多個對於具本文例示性序列之c-Met蛋白具有專一性之結合區域。此等框架或架構包括人類免疫球蛋白之五種主要獨特型，或是其片段（諸如揭示於本文他處者），且其包括其他動物種之免疫球蛋白’較佳者係具有人類化部分者。單鏈重鏈抗體，諸如，在路駝體内所辨識出者，係此部分特別具有重要性者。熟習技藝者尚可繼續發現及研發新穎之框架、架構、及片段。或者’可使用已知或是未來之非免疫球蛋白框架及架構’只要其包含對於e-Met蛋白具有專一性之結合區域。此等化合物在本文中稱為"包含c_Met專一性結合區域之多月太已知之非免疫球蛋白框架或架構包括Adnectins (纖連蛋白 KCompound Therapeutics，Inc·，Waltham，MA)、錯蛋白（M〇lecular partners AG，Zurich，Switzerland)、域抗體 119679.doc -47- 200815470 (Domantis，Ltd (Cambridge，ΜΑ)及 Ablynx nv (Zwijnaarde， Belgium))、脂質運載蛋白（lip〇calin)(Anticalin)(Pieris Proteolab AG，Freising，Germany)、小模組免疫藥物 (Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle，WA)、maxybodies (Avidia，Inc· (Mountain View，CA))、A蛋白（Affibody AG， Sweden)、及 affilin (γ-晶體蛋白或遍在蛋白）（Scil Proteins GmbH, Halle，Germany) 〇可結合與本發明抗_c-Met抗體相同之抗原表位之抗體在另一具體實例中，本發明提供諸等抗體，其可與本文所提供之各種抗-c-Met抗體相同之抗原表位。此等額外之抗體可根據其在標準之c-Met結合分析中與本發明之其他抗體交叉競爭之能力而辨識（如，其可以統計顯著性之方式競爭抑制其結合）。試驗抗體抑制具有已知能力而可結合人類c-Met之抗體結合之能力可說明該試驗抗體可與該抗體競爭。根據非限制性之理論，此種抗體可結合人類 c-Met上之與其所競爭之抗體相同或相關（如，結構類似或空間相近者）之抗原表位。此等抗體可如實例中所述而進行製備及分離。駱駝抗體取自雙峰路.1¾及單峰駱駿及Ca/e/w 办om以er/w)家族成員（包括新世界之成員，諸如，駱馬生 ^ ^ {Lama paccos ^ Lama glama ^ Lama vicugna))^ It 蛋白已就其大小、結構複雜性、以及在人類對象體内之抗原性而獲得定性。部分取自此哺乳動物科之IgG抗體經發 119679.doc -48- 200815470 現天然缺乏輕鏈，且因此具有迥異於其他動物抗體特徵性之一般具有兩條重鏈及兩條輕鏈之四鏈性四級結構之結構。參見PCT/EP93/02214 (WO 94/04678，1994年3月 3 日公開）。可以基因工程技術取得駱駝抗體之一區域，其係經辨識為VHH之小型單一可變域，以產生對於目標具有高親和力之小型蛋白，因而產生稱為"駱駝奈米抗體”之低分子量抗體衍生性蛋白。參見美國專利第5,759,808號（1998年6月2 日核發）；亦參見Stijlemans，B. et al·，2004 J Biol Chem 279: 1256-1261 ； Dumoulin, M. et al_, 2003 Nature 424: 783-788 ； Pleschberger, M. et al. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448 ； Cortez-Retamozo, V. et al. 2002 Int J Cancer 89: 456-62 ;及 Lauwereys，M· et al· 1998 EMBO J 17: 3 512-3 520。可以商業取得駱駝抗體及抗體片段之基因工程庫，例如，自Ablynx，Ghent，Belgium。如同技藝中已知之其他非人類來源之抗體，駱駝抗體之胺基酸序列可經重組變更，以取得更相近類似人類序列之序列，亦即，該奈米抗體可經人類化。因此，駱駝抗體對於人類之天然低抗原性可再進一步降低。駱駝奈米抗體具有約為人類IgG分子之十分之一之分子量，且該蛋白具有僅為數奈米之物理直徑。該小型尺寸之結果之一即係駱駝奈米抗體可結合對於較大之抗體蛋白而言為功能隱形性之抗原位點，亦即，駱駝奈米抗體可作為試劑，以偵測在使用古典之免疫學技術時呈隱密性之抗 119679.doc -49- 200815470 原，並亦可作為可能之療上 N 舉例而δ，該小型尺寸之又另一結果即係一駱駝夺米 ”抗體可因結合位於目標蛋白之溝或狹缝中之特定位點而仃抑制，並因此可較古典之高分予里抗體而以更相彳斤来g々» 相近㈣古典低分子量藥物功能之能力作用0 〜低分子量以及密集之尺寸尚使得㈣奈米抗體極具熱安疋!生〜對於極端之pH值具安定性且對蛋自水解酶切消化作 ^具文疋性、並具有低抗原性。另一種結果係路騎奈米抗體可輕易自循環系統移動至勒主組織中（亦即，自脈管中溢 )’且其甚至可跨越血_腦屏障，並因此可經工程處理而用於治療影響神經組織之疾病灰届奈未抗體尚可協助藥物傳遞通過血腦屏障。參見美國專利申請案第2〇〇4〇細㈣ (2004年8月19日公開）。此等特徵結合其對於人類之低抗原性可指出極大之治瘠潜力縻，曰力冋時，此等分子可在原核細胞 (諸如，大腸桿菌W))中完全表現，其並可與禮菌體表

現為融合蛋白之形式，日士方L 式且忒如此表現脂蛋白係具功能性者。因此’本發明之特徵之-係—種對於目標蛋白有面親和力之駱駝抗體或奈米抗體。在本文之部分且體實例中，該絡銳抗體或奈米抗體係在_物體内天然產生者亦即，其係在使用本文針對其他抗體所述之技術而以目標蛋白C - M e t或其肽片段進行免疫之後由該路駝所產生，或係在轉基因駱駝動物體内重組產生。或者，該抗-c-Metm體係經工程處理，亦即，以篩選產生， 119679.doc -50- 200815470 例如，如本文實例中所述，以c-Met作為目標，使用淘選流程，自展示經適當誘變之駱駝奈米抗體之噬菌體庫而進行選擇。經工程處理之奈米抗體可再進一步經基因工程訂製’以使其在受者對象體内具有自45分鐘至兩週之半生期。工程及修飾性抗體本發明之抗體可使用具有一或多個本文所示之VH&/或 Vl序列、IgX輕鏈序列、或lgK輕鏈序列作為起始物質（亦即，作為母序列）以進行工程處理產生衍生性之經修飾抗體而製備，該經修飾之抗體可具有不同於該起始抗體之改變及改良特性。抗體可藉由修飾位於可變區域之一或兩者 (亦即 Vh及/或Vl)中、或是僅位於該IgX輕鍵中、或是僅位於該IgK輕鏈序列中、位於一或多個cdr區域、及/或位於或多個框架區域中之一或多個殘基而進行工程處理。此外或是或者，抗體可藉由修飾位於該（等）恆定區域中之殘基而進仃工程處理，例如，以改變該抗體之一效應功其中一類可予進行之可變區域工程處理係cdr嫁接。抗 _要係經由位於該等重及輕鏈互補決定區域（CDRs)中之胺基酸殘基而與目標抗原作用。因此，位於CDRS中之胺基酉夂序列係較CDRS外之序列具有較高個別抗體變異性由於CDR序列係負責大部分之抗體一抗原作用，因此 :可能藉由建構諸等表現載體 '其中包括嫁接進入取自一具有不同特性之不同抗體之框架序列中之取自—天然抗體 H9679.doc -51 - 200815470 之CDR序列，以表現模擬該特定天然抗體特性之重組抗體 (參見，W，Riechmann，L.etal.，1998 Nature 332:323-327 ; Jones，Ρ· et al·，1986 Nature 321:522-525 ; Queen, C. et al·，1989 Proc. Natl. Acad。參見，U.S.A. 86:10029-10033 ;美國專利第5,225,539號（予Winter);以及美國專利第 5,530，101; 5,585,089 ; 5,693,762;及 6，180,370 號（予 Queen et al·)) 〇此等框架序列可取自包括種系抗體基因序列之公開DN A 資料庫或是既已出版之參考文獻。舉例而言，人類重及輕鏈可變區域基因之種系DNA序列可見於"VBase"人類種系序列資料庫（可在網路上於www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase 取得），亦可見於Kabat，Ε· A·，et al.，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest [具免疫學重要性之蛋白序列]，第 5 版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 ； Tomlinson, I. M.5 et al.，1992 J. Mol· Biol· 227:776-798 ;及 Cox，L P. L. et al·，1994 Eur· J Immunol· 24:827-836 ;其各者之内容於此明白納入本文作為參考。咸已發現，在部分情形下，對位於諸等框架區域中之殘基進行突變可有益於維持或增進該抗體之抗原結合能力（參見，如，美國專利第5,530，101 ; 5,585,089 ; 5,693,762 ;及 6，180,370號（予 Queen et al·))。另一類型之可變區域修飾係對位於諸等VH及/或VL CDR1、CDR2、及/或CDR3區域中之胺基酸殘基進行突變，以因而改良該目標抗體之一或多種結合特性（如，親 119679.doc -52- 200815470 和力）’其稱為"親和成熟"。可進行定位誘變或是pcR中介性誘變而引入該（等）突變，而其對於抗體結合或對於另 -目標功能特性之後果作用係以諸等體外或體内分析進行評估，諸如本域述及實例中所提供者^可^丨人保守性之修飾（如上文所論）。該等突變可為胺基酸取代、添加、或缺失。一般而言，其係改變位於一CDR區域中之不超過一個、二個、三個、四個、或五個之殘基，但亦可預期額外之變化。本發明之工程抗體包括其中已對Vh&/4vl、及/或“入輕鏈、及/或IgK輕鏈内之框架殘基進行修飾，如，以改良該抗體特性者。-般而言，此等框架㈣制以降低該抗體之免疫原性。舉例而言，其中一種方法係將一或多個框架殘基π回復突變”為對應種系序列之殘基。更特定言之，已進行體突變之抗體可含有不同於該抗體衍生來源之種系序列之框架殘基。此等殘基可藉由比較該等抗體框架序列與該抗體衍生來源之種系序列而獲得辨識。為使該等框架區域序列回设為其種糸組態，可藉由，例如，定位誘變或是PCR-中介性誘變而使該等體突變回復突變為該種系殘基。此等經回復突變之抗體亦涵括於本發明中。另一類型之框架修飾包括對位於框架區域内，甚至是對位於或多個CDR區域内之一或多個殘基進行突變，以除去Τ細胞抗原表位，並因而降低該抗原之潛在免疫原性。此一方法亦稱為’’去免疫π，並由Carr et al·進一步詳述於美國專利公開案第20030153043號。 119679.doc -53- 200815470 此外或是或者，除在該等框架或CDR區域中所進行之修飾之外’本發明之抗體可經工程處理以包括位於卜區域；之修飾，一般而言係用以改變該抗體之一或多種功能特性，諸如，血清半生期、補體固定作肖、Fe受體結合、^ 或抗體依賴性細胞毒性。同時，本發明之抗體可經化學修飾（如，可使一或多個化學分子部分聯附於讓抗體上），或是可經改修飾以改變其糖基化狀態，同樣亦係用以改變該抗體之一或多種功能特性。此等具體實例各於下文進一步詳述。Fc區域中之殘基編號係Kabat之EU編碼殘基編號。在一具體實例中，其係修飾CH1之鉸鏈區域，以改變該叙鏈區域中之半胱胺酸殘基數目，如，增加或減少。此種方法由Bodmer et al·進一步詳述於美國專利第5,677,425 镜。其係改變該CH1鉸鏈區域中之半胱胺酸殘基數目以，例如，協助輕及重鏈之組合，或是增加或降低該抗體之安定性。在另一具體實例中’其係對一抗體之以鉸鏈區域進行突變’以降低該抗體之生物半生期。更特定言之，其係在以叙鍵片段之CH2-CH3域界面區域中引入一或多個胺基酸突變’以使該抗體具有相對於天然Fc鉸鏈域SpA結合能力之 X損葡萄球菌A蛋白（SpA)結合能力。此種方法由Ward et al.進一步詳述於美國專利第6，165,745號。在另一具體實例中’該抗體係經修飾以增加其生物半生期。各種不同之方法皆為可能。舉例而言，可引入一或多個下列之突變：T252L、T254S、T256F，如美國專利第 119679.doc -54- 200815470 6,277,375號（予Ward)所述。或者，為增加生物半生期，可在CH1或CL區域中改變該抗體，以使其含有取自一ig(}之 Fc區域CH2域之兩環之補救受體結合抗原表位，如pRSta et al·在美國專利第5,869,046及6，121，〇22號中所述。在又另一具體實例中，Fc區域係藉著以一不同之胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基而改變，以改變該抗體之效應功能。舉例而言，其可以一不同之胺基酸殘基置換一或夕個胺基酸殘基’以使該抗體對於一效應配位體具有變更之親和力，但是亦保有該母抗體之抗原結合能力。該親和力經變更之政應配位體可為，例如，一 F e受體或補體之匸1 組成份。此種方法進一步詳述於美國專利第5,624,821及 5,648,260號（兩者均為 winter et al.)。在另一具體實例中，選自諸等胺基酸殘基之一或多個胺基酸可精一不同之胺基酸殘基置換，以使得該抗體具有變更之Clq結合能力及/或降低或廢止之補體依賴性細胞毒性 (CDC)。此種方法由idUSOgie et ai·進一步詳述於美國專利第 6，194,551 號。在另一具體實例中，一或多個胺基酸殘基係經修飾而改變該抗體固定補體之能力。此種方法由B〇dmer et al.進一步詳述於PCT公開案WO 94/29351。在又另一具體實例中，Fc區域係藉由修飾一或多個胺基酸而進行修飾，以增加該抗體中介抗體依賴性細胞毒性 (ADCC)之能力及/或增加該抗體對於Fcy受體之親和力。此種方法由Presta進一步詳述於PCT公開案w〇〇〇/42〇72。同 119679.doc -55- 200815470 時，咸已針對人類IgGl上之FcyRI、FcyRII、FcyRIII、及 FcRn結合位點進行作圖，且具有改良結合能力之變體亦已獲得描述（參見 Shields，R.L. et al.，2001 J. Biol. Chem. 276:6591-6604)。具有此等經修飾Fc區域之抗體係包括於本文所述組合物之範圍中。在又另一具體實例中，其係修飾抗體之糖基化作用。舉例而言，可製備一無糖基化抗體（亦即，缺乏糖基化之抗體）。糖基化作用可經變更，例如，以增加該抗體對於 c-Met目標抗原之親和力。此等糖類之修飾可藉由，例如’改變該抗體序列中之一或多個糖基化位點而完成。例如了進行一或多個胺基酸取代，其可造成一或多個可變區域框架糖基化位點之消除，因而消除該位點之糖基化作用。此等無糖基化作用可增加該抗體對於抗原之親和力。此種方法由Co et al·進一步詳述於美國專利第5,714,35〇及 6,350,861 號。此外或是或者，可使一抗體具有變更類型之糖基化作用，諸如，具有較低量之岩藻糖基殘基之低岩藻糖基化抗體，或是具有較高等分性GlcNac結構之抗體。此等經變更之糖基化模式已經證實可增加抗體之ADCC活性。此等糖類之修飾可藉由，例如，在一一具有不同糖基化酶機制之宿

言，Hang et al·之EP 1，176，195述及一。作用之抗體。舉例而一種具有功能經破壞之 I19679.doc -56- 200815470 FUT8基因之細胞系，該基因係編碼一種岩藻糖基轉化麟，因此在此種細胞系中表現之抗體具有低岩藻糖基化之情形。Presta之PCT公開案WO 03/035835述及一種變體 CHO細胞系，Lecl3細胞，其具有較低之使岩藻糖聯附 Asn(297)-連結性糖類之能力，其亦造成表現於該宿主細胞中之抗體之低岩藻糖基化情形（亦參見Shields，R.L. et al·， 2002 JL Biol. Chem. 277:26733-26740)。Umana et al·之PCT 公開案WO 99/54342述及經工程處理而表現糖蛋白修飾性糖基轉移酶（如，β(1，4)-Ν乙醯基葡糖胺基轉移酶III (GnTIII))之細胞系，以使表現於該等經工程處理細胞系中之抗體具有較高之等分性GlcNac結構，其可造成該抗體之較高 ADCC 活性（亦參見 Umana et al·，1999 Nat. Biotech· 17:176-180)。在此由本發明所涵括之另一種抗體修飾係聚乙二醇化作用。抗體可經聚乙二醇化以，例如，增加該抗體之生物 (如，血清）半生期。為對抗體進行聚乙二醇化，一般而言其係在其中可使一或多個PEG基團共價連附該抗體或抗體片段之條件下，使該抗體或其片段與聚乙二醇（PEG)(諸如，PEG之反應性酯或醛衍生物）進行反應。聚乙二醇化作用可以醯化反應或烷化反應而以反應性之PEG分子（或是類似之反應性水溶性聚合物）進行。在本文中，辭彙”聚乙二醇”係涵括已被用於衍化其他蛋白之任何PEG形式，諸如，單（C1-C10)烧氧基-或是芳氧基-聚乙二醇或是聚乙二醇-馬來醯亞胺。在部分具體實例中，待進行聚乙二醇化之抗體 119679.doc -57- 200815470 係一無糖基化抗體。用以對蛋白了货白進行聚乙二醇化之方法係

為技藝中已知，且可應用於太狀Dn A 用於本發明之抗體上。參見，例如，Nishimura et al·之EP 〇 υ 154 316 以及 Ishikawa et al·之 EP 0 401 384。工程處理抗體之方法

如上所論，可使用具有本文所示％、nx輕鏈、及㈣輕鏈序列之該等抗+Met抗體，藉由修飾^及/或I 及/或4人輕鏈、及/或IgK輕鏈序列内之殘基，或是藉由修飾其上所連附之以區域，以進行工程處理產生額外之抗+Met抗體。因此，在本發明之另—範,，其係使用本發明航<-Met抗體之結構特徵以創造結構相關性之抗<-Met抗體，其保有至少一種本發明母拮抗性或激動性抗體之功能特性，諸如，對於人類c_Met之結合，且亦可抑制| Met之或多種功能特性（如，誘發内化，防止活化如防止由佗號轉導所造成之正調節，預防或改善細胞增殖、存活、遷移、侵染、或形態改變，或者該抗體可抑制c-Met受體結合，因而預防或改善癌症，諸如，腫瘤生長及或轉移），或者，就激動性之情形而言，其可活化c-Met私酸化作用並激發細胞反應以及本文所提供之其他功能特性。舉例而言’本發明抗體之一或多個CDR區域，或是其突變物’可以重組方法結合已知之框架區域及/或其他乂產生其他經重組工程處理之本發明抗體’如上文所論。其他類型之修飾包括述於前文章節中 119679.doc -58- 200815470 v者及方法之起始物質係本文所提供之-或多種 :。么L列’或是其一或多個CDR區域，以作為母序忠：、、、產生工程抗體，其並不須實際製備（亦即，表現為 =白形式）具有本文所提供之—❹種VH及序列或是其一或多個CDR區域之抗體。事實上，其係使用包含於該 ⑷核嘗酸或胺基酸序列中之資訊作為技藝中已知突變技術之起始物質以產生衍生自該（等）起始序列之”第二代”序列接著再製備並以蛋白形式表現該（等第二代"核替酸序列。上因此’在部分具體實例中，本發明S供一種製備抗_c_Met 杬體之方法，其具有作為起始母物質之一 Vh抗體序列，其具有選自SEQ ID N0s: 55_72之序列，以及—Vl抗體序列，其具有選自SEQIDN0s:3l_54之序列。該方法涉及改變該VH及/或vL抗體母序列中之至少一個胺基酸殘基，以創造至少一種經改變之抗體序列；再將該經改變之抗體序列表現為蛋白。在其他具體實例中，本發明提供一種製備抗-C-Met抗體之方法，其包含：一 IgX輕鏈抗體序列，其具有選自SEQ ID NOs: 77-80之序列，並改變該igX輕鏈抗體序列中之至少一個胺基酸殘基，以創造至少一種經改變之抗體序列；再將該經改變之抗體序列表現為蛋白。在相關具體實例中，本發明提供一種製備抗-C-Met抗體之方法，其包含：一 IgK輕鏈抗體序列，其具有選自SEq ID NOs: 81-84之序列；改變該IgK輕鏈抗體序列中之至少 119679.doc -59- 200815470 一個胺基酸殘基，以創造至少一種經改變之抗體序列；再將該經改變之抗體序列表現為蛋白。該經變更之抗體可具有本文所論之一或多種、二或多種、或是三或多種功能特性。該等經變更抗體之功能特性可使用技藝中可用及/或本文中所述之標準分析而進行評估，諸如述於實例中者 (如，ELISAs) 〇在本發明工程處理抗體之方法之部分具體實例中，突變可係沿著所有或部分之抗-c-Met抗體編碼序列而隨機或經選擇引入，而該所得之經修飾抗-c-Met抗體可經表現並如本文所述進行結合活性及/或其他功能特性之篩選。突變方法以述於技藝之中。舉例而言，Short之PCT公開案WO 02/092780述及使用飽和誘變、合成性接合組合、或是其結合而產生並篩選抗體突變之方法。或者，Lazar et al.之 PCT公開案WO 03/074679述及使用電腦篩選方法而對抗體之物化特性進行最適化之方法。本發明之抗體本發明抗體之核苷酸及多肽序列提供於下。該等母抗體或第一篩選抗體之胺基酸及核苷酸序列分別提供於表A及表C中。該等相較於母抗體之親和力改良性抗體之胺基酸及核苷酸序列分別提供於表B及表D中。 119679.doc -60- 200815470 表A :母抗-c-Met Fab抗體之重及輕鏈可變區域之胺基酸序列 04536 VH：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIINPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME

LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 04536 VL:

DIELI'QPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATIiTISGTQAEDE

ADYYCQAYDSSMLRVFGGGTKLTVLGQ 04687 VH: " — QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTIjVTVSS 04687 VL: LQAEDVAVYYCQQYYNHPHTFGQGTKVEIKRT 04541 VH:

QVQLQESGPGLVKPGETLSLTCTVSGGSISSSSYYWNWIRQAPGKGLEWIGEIYFGWTYYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLK

LSSVTAEDTAVYYCARGYEFHGYTTFDYWGQGTLVTVSS 04541 VL:

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQSYDFPSIVFGGGTKLTVLGQ 04537 VH:

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGFIFPDTS YTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQ

WSSLKASDTAMYYCARVKLITDYWGQGTLVTVSS 04537 VL:

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLRSYFVSWYQQKPG〇APVLVIYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE

ADYYCASWDTLSDVEVFGGGTKLTVLGQ 04690 VH: "

QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWGWIRQSPGRGLEWLGRIYYRSKWVNDYAVSVKSRITINPDTSKNQF

SLQLNSVTPEDTAVYYCARQGAVYPGPYGFDVWGQGTLVTVSS 04690 VL:

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDKLGSYFVYWYQQKPGQAPVLVIYDDDNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQSFGISNFYVFGGGTKLTVLGQ_ 04682 VH:

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYGIAWVRQMPGKGLEWMGIIYPSDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQ

WSSLKASDTAMYYCARMSYDYQHQAPSMDSWGQGTLVTVSS 04682 VL:

pIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVIWYQQLPGTAPKLLIYDDTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQSE

Ideadyycstydnyqagwfgggtkltvlgq_ 表B :親和力改良性抗體之抗-c-Met Fab抗體之重及輕鏈可變區域之胺基酸序列

05078 VH: ζΜ^νζ^ΑΕνΚΚΡΘΑΒνκνεα^ΟΥΤΓΤΟΥΥΜΝΝνΗΟΑΡΟζ^ΕνίΜαίΙϋΡΝΝΟΟΤΝΥΑΟΚΡί^ΙΐνΤΜΤΗΒΤΒΙΒΤΑΥΜΕ LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05078 VL = 04536 VL DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQAYDSSMLRVFGGGTKLTVLGQ_ 05079 VH: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGVIDPWNGITNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05079 VL = 04536 VL DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQAYDSSMLRVFGGGTKLTVLGQ_ 05087 VH = 04536 VH — ~~"" — — QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIINPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05087 VL: ΒΙΕΙ^ΡΡ8ν3νΑΡαζ}ΤΑΚΙ3〇30ϋ3ΙΟΝΚΥνΗΝΥ〇ζ}ΚΡαζ}ΑΡνΐϋνΐΥΑΌ3ΒΙΙΡ30ΙΡΕί^σ3Ν3ϋΝΤΑΤΙιΤΙ3σΤ(}ΑΕϋΕ ADYYCQSYANYHDSWVFGGGTKLTVLGQ___ 05088 VH = 04536 VH ~~ QVQLVQSGAEVKKPGAS VKVS CKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIINPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05088 VL： ϋΙΕΙϋΤΟΡΡβνΒνΑΡσΟΤΑΙ^ΟβσϋεΐΟΝΚΥνΗΝΥζΚ^ΚίΌΟΑΡνί^νΐΥΑΒβΟΙΙΕ^ΙΡΕΙ^ββΙ^ΝΤΑΊ^ΤΙβαΤΟΑΕϋΕ ADYYCQSYASDYTSWVFGGGTKLTVLGQ___ -61- 119679.doc 200815470

05091 VH = 04536 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIINPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05091 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQSYAHYHDIWVFGGGTKLTVLGQ 05092 VH = 04536 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIINPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05092 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQAHDSLYSRVFGGGTKLTVLGQ_ 05081 VH: ： QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05081 VL = 04687 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGIlSiNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCQQYYNHPHTFGQGTKVEIKRT_ 05082 VH: QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGEIDPVIGETDYAQKFQGRVTITADESTSTAYME LSSLRSEDTAVYYCARVYQDWGQGTLVTVSS 05082 VL = 04687 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS Ι^ΑΕΡνΑνΥΥΟ〇〇ΥΥΝΗΡΗΤΡΟ〇ΟΤΚνΈΙΚΗΤ_ 05097 VH = 04687 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDWGQGTLVTVSS 05097 VL: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCQQYAFGWTFGQGTKVEIKRT__ 05098 VH = 04687 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWiyiGGIDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAyMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05098 VL: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCLQYSDEPWTFGQGTKVEIKRT_ 05100 VH = 04687 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL· SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05100 VL: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCQQYAYEPNTFGQGTKVEIKRT_ 05101 VH = 04687 VH ' QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05101 VL: DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCLQYAFS PWTFGQGTKVEI KRT_ 05093 VH = 04541 VH QVQLQESGPGLVKPGETLSLTCTVSGGSISSSSYYWNWIRQAPGKGLEWIGEIYFGWTYYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLK LSSVTAEDTAVYYCARGYEFHGYTTFDYWGQGTLVTVSS 05093 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQSYDSYIFVFGGGTKLTVLGQ_ 05094 VH = 04541 VH QVQLQESGPGLVKPGETLSLTCTVSGGSISSSSYYWNWIRQAPGKGLEWIGEIYFGWTYYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLK LSSVTAEDTAVYYCARGYEFHGYTTFDYWGQGTLVTVSS 05094 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCSTYDAFTFVFGGGTKLTVLGQ_ 05095 VH = 04541 VH QVQLQESGPGLVKPGETLSLTCTVSGGSISSSSYYWNWIRQAPGKGLEWIGEIYFGWTYYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLK LSSVTAEDTAVYYCARGYEFHGYTTFDYWGQGTLVTVSS 05095 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCQSYDKYVFVFGGGTKLTVLGQ__ 05102 VH = 04537 VH QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGFIFPDTSYTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQ WSSLKASDTAMYYCARVKLITDYWGQGTLVTVSS_ _ 119679.doc -62- 200815470

05102 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLRSYFVSWYQQKPGQAPVLVIYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCASWDPPSAFEVFGGGTKLTVLGQ_ 05105 VH = 04537 VH QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGFIFPDTSYTRYS PSFQGQVTISADKSISTAYLQ WSSXjKASDTAMYYCARVKLITDYWGQGTLVTVSS 05105 VL： ADYYCASWDNDHFEVFGGGTKLTVLGQ_ 05106 VH = 04690 VH 〇ν〇ΙιζΧ^ΡΟΙΛΠα^ΤΙ^ΤαΑΙ30ϋ3ν35Ν3ΑΑ1^νίΙΙΙ(}3ίΌΙΙΟΙϋΕνίΙ^ΙΥΥΙ^Κΐ™^ΥΑν3νΚΒΙΙΙΤΙΝΡΒΤ3ΚΝ〇Ρ βΙ^ΝΒνΤΡΕΌΤΑνΥΥΟΑΗζ^ΑνΥΡΟΡΥΟΡΠ^Οζ^ΤΙΛΛη^ 05106 VL: DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDKLGSYFVYWyQQKPGQAPVLVIYDDDNRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ADYYCGSWAYLGDVFGGGTKLTVLGQ_ 05174 VH = 05078 VH ζΜ^νζ^ΑΕνΚΚίΌΑβνίΟ^ΚΑεΟΥΤΡΤσΥΥΜΝΐίνΗΟΑΡαζ^ΕΝΜΟΙ IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05174 VL = 05087 VL ΟΙΕΙίΤΟΡΡβνβνΑΡΟΟΤΑΗΙβσεΟϋΒΙΟΝΚΥνΗΝΥζ^ΚΙΌΟΑΡνίϋνΐΥΑϋΒΟΙΙΡεαίΡΕΙ^ΟΒΝβαΝΤΑΤΚΓίεσΤζ^ΑΕϋΕ ADYYCQSYANYHDSWVFGGGTKLTVLGQ_ 05184 VH = 05078 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGIIDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYME LSSLRSEDTAVYYCARDPGFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05184 VL = 05091 VL DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYADSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDE ΑΡΥΥΟζ^ΥΑΗΥΗΡΙΝΥΓΟΟσΤΚΙ^Τνΐ^_ 05185 VH = 05081 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05185 VL = 05100 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCQQYAYEPNTFGQGTKVEIKRT_ 05186 VH = 05081 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMEL SSLRSEDTAVYYCARVYQDVWGQGTLVTVSS 05186 VL = 05101 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISS LQAEDVAVYYCLQYAFSPWTFGQGTKVEIKRT_ 表C :母抗-c-Met Fab抗體之重及輕鏈可變區域之核苷酸序列

04536 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCAATCCGTGGAC TGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA_ 04536 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGGCTTATGATTCTTCTATGCTTCGTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04687 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATCGATCCGTTTGG CACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA_ 04687 VL: GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATTATAATCATCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG_ 04541 VH: CAGGTGCAATTGCAAGAAAGTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGGGCGAAACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTTTCCGGAGGTA 119679.doc -63- 200815470

GCATTTCTTCTTCTTCTTATTATTGGAATTGGATTCGCCAGGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATTGGCGAGATCTATTT TGGCTGGACCTATTATAATCCGAGCCTGAAAGGCCGGGTGACCATTAGCGTTGATACTTCGAAAAACCAGTTTAGCCTGAAA CTGAGCAGCGTGACGGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTTATGAGTTTCATGGTTATACTACTTTTGATT ATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

04541 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTG GTTCTTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATAATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGATTTTCCTTCTATTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

04537 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAAAGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATT CCTTTTCTAATTATTGGATTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCTTTATCTTTCCGGATAC TAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCAGGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAA TGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTGTTAAGCTTATTACTGATTATTGGGGCCAAGGCA CCCTGGTGACGGTTAGCTCA

04537 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTC GTTCTTATTTTGTTTCTTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATGATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCGCTTCTTGGGATACTCTTTCTGATGTTGAGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

04690 VH: CAGGTGCAATTGCAACAGTCTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAAACCCTGAGCCTGACCTGTGCGATTTCCGGAGATA GCGTGAGCTCTAATTCTGCTGCTTGGGGTTGGATTCGCCAGTCTCCTGGGCGTGGCCTCGAGTGGCTGGGCCGTATCTATTA TCGTAGCAAGTGGGTTAACGATTATGCGGTGAGCGTGAAAAGCCGGATTACCATCAACCCGGATACTTCGAAAAACCAGTTT AGCCTGCAACTGAACAGCGTGACCCCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCAGGGTGCTGTTTATCCTGGTCCTT ATGGTTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

04690 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAAGCTTG GTTCTTATTTTGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATGATAATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTTTGGTATTTCTAATTTTTATGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

04682 VH: GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGTGGCGCACCAGGTCAGCGTGTGACCATCTCGTGTAGCGGCAGCAGCAGCA ACATTGGTTCTAATTATGTGATTTGGTACCAGCAGTTGCCCGGGACGGCGCCGAAACTTCTGATTTATGATGATACTAATCG TCCCTCAGGCGTGCCGGATCGTTTTAGCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCGAGCCTTGCGATTACGGGCCTGCAAAGCGAA GACGAAGCGGATTATTATTGCTCTACTTATGATAATTATCAGGCTGGTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTC TTGGCCAG

04682 VL： caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtGaaaaaaccgggcgaaagcctgaaaattagctgcaaaggttccggatatt CCTTTACTAATTATGGTATTGCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCTATCCGTCTGA TAGCTATACCAATTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCAGGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAA TGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTATGTCTTATGATTATCAGCATCAGGCTCCTTCTA TGGATTCTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 表D :親和力改良性抗-c-MetFab抗體之重及輕鏈可變區域之核铝酸序列

05078 VH： CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATTGATCCTTGGAA TGGTCAGACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05078 VL = 04536 VL GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGGCTTATGATTCTTCTATGCTTCGTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05079 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGTTATTGATCCTTGGAA TGGTATTACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05079 VL = 04536 VL GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG 119679.doc -64- 200815470

GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGGCTTATGATTCTTCTATGCTTCGTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05087 VH = 04536 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCAATCCGTGGAC TGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05087 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGCTAATTATCATGATTCTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

05088 VH = 04536 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCAATCCGTGGAC TGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05088 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGCTTCTGATTATACTTCTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

05091 VH = 04536 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCAATCCGTGGAC TGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05091 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC IGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA .TTATTATTGCCAGTCTTATGCTCATTATCATGATATTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG AGGCATCCCG GCGGATTAT1

05092 VH = 04536 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATCAATCCGTGGAC TGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05092 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGGCTCATGATTCTCTTTATTCTCGTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05081 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATTGATCCTATTAT GGGTACTGAGTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05081 VL = 04687 VL GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATTATAATCATCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG 119679.doc -65- 200815470

05082 VH: CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGAGATTGATCCTGTTAT TGGTGAGACTGATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGG TGACGGTTAGCTCA

05082 VL = 04687 VL· GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATTATAATCATCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG

05097 VH = 04687 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATCGATCCGTTTGG CACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05097 VL: GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTTTGGTTGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAA TTAAACGTACG

05098 VH = 04687 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATCGATCCGTTTGG CACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05098 VL: GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATTCTGATGAGCCTTGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG

05100 VH = 04687 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATCGATCCGTTTGG CACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05100 VL: GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTATGAGCCTAATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG

05101 VH = 04687 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATCGATCCGTTTGG CACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05101 VL： GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACGCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATGCTTTTTCTCCTTGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG

05093 VH = 04541 VH CAGGTGCAATTGCAAGAAAGTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGGGCGAAACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTTTCCGGAGGTA 119679.doc -66- 200815470

05093 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTG GTTCTTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATAATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGATTCTTATATTTTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05094 VH = 04541 VH CAGGTGCAATTGCAAGAAAGTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGGGCGAAACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTTTCCGGAGGTA GCATTTCTTCTTCTTCTTATTATTGGAATTGGATTCGCCAGGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATTGGCGAGATCTATTT TGGCTGGACCTATTATAATCCGAGCCTGAAAGGCCGGGTGACCATTAGCGTTGATACTTCGAAAAACCAGTTTAGCCTGAAA CTGAGCAGCGTGACGGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTTATGAGTTTCATGGTTATACTACTTTTGATT ATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05094 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTG GTTCTTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATAATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCTCTACTTATGATGCTTTTACTTTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05095 VH = 04541 VH CAGGTGCAATTGCAAGAAAGTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGGGCGAAACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTTTCCGGAGGTA GCATTTCTTCTTCTTCTTATTATTGGAATTGGATTCGCCAGGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATTGGCGAGATCTATTT TGGCTGGACCTATTATAATCCGAGCCTGAAAGGCCGGGTGACCATTAGCGTTGATACTTCGAAAAACCAGTTTAGCCTGAAA CTGAGCAGCGTGACGGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTTATGAGTTTCATGGTTATACTACTTTTGATT ATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05095 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTG GTTCTTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATAATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGATAAGTATGTTTTTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05102 VH = 04537 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAAAGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATT CCTTTTCTAATTATTGGATTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCTTTATCTTTCCGGATAC TAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCAGGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAA TGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTGTTAAGCTTATTACTGATTATTGGGGCCAAGGCA CCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05102 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTC gttcttattttgtttcttggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttcttgtgatttatgatgatgatgatcgtccctc AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCGCTTCTTGGGATCCTCCTTCTGCTTTTGAGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

05105 VH = 04537 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAAAGCCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATT CCTTTTCTAATTATTGGATTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCTTTATCTTTCCGGATAC TAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCAGGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAA TGGAGCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTGTTAAGCTTATTACTGATTATTGGGGCCAAGGCA CCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05105 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTC GTTCTTATTTTGTTTCTTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATGATGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCGCTTCTTGGGATAATGATCATTTTGAGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05106 VH = 04690 VH CAGGTGCAATTGCAACAGTCTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAAACCCTGAGCCTGACCTGTGCGATTTCCGGAGATA GCGTGAGCTCTAATTCTGCTGCTTGGGGTTGGATTCGGCAGTCTCCTGGGCGTGGCCTCGAGTGGCTGGGCCGTATCTATTA TCGTAGCAAGTGGGTTAACGATTATGCGGTGAGCGTGAAAAGCCGGATTACCATCAACCCGGATACTTCGAAAAACCAGTTT AGCCTGCAACTGAACAGCGTGACCCCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCAGGGTGCTGTTTATCCTGGTCCTT ATGGTTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05106 VL: GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAAGCTTG 119679.doc -67· 200815470

GTTCTTATTTTGTTTATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGATGATAATCGTCCCTC AGGGATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCGGTTCTTGGGCTTATCTTGGTGATGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

05174 VH = 05078 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATTGATCCTTGGAA TGGTCAGACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05174 VL = 05087 VL GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGCTAATTATCATGATTCTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

05184 VH = 05078 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATA CCTTTACTGGTTATTATATGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATTATTGATCCTTGGAA TGGTCAGACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAA CTGAGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCTGGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATC TTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

05184 VL = 05091 VL GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTG GTAATAAGTATGTTCATTGGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGATTCTGATCGTCCCTC AGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAA GCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGCTCATTATCATGATATTTGGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCC AG

05185 VH = 05081 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATTGATCCTATTAT GGGTACTGAGTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05185 VL = 05100 VL GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTATGAGCCTAATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG

05186 VH = 05081 VH CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCA CTTTTTCTTCTTATGCTATTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGTATTGATCCTATTAT GGGTACTGAGTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTG AGCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGA CGGTTAGCTCA

05186 VL = 05101 VL GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGAACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGT CTATTCTTTATGGTATTAACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAACTATTAATTTATTG GGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCC CTGCAAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATGCTTTTTCTCCTTGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTG AAATTAAACGTACG 其他相關之核甞酸序列亦為本發明之範圍有，如，搖擺性驗基變化、最適化驗基使用、表現序列（如，除去隱蔽剪接序列之修飾）、變。其他相關之多肽序列亦為本發明之範圍預期，其具最適化宿主及保守性突預期，其具 119679.doc -68 200815470 有，如，保守性胺基酸變化，或是含有額外之胺基酸序列，諸如，6xHis標記或其他標記，或係與第二多肽序列融合，或是含有可降低對於該抗體療劑之免疫反應之殘基變化’或是具有經修飾之削、FR2、FR3、或FR4殘基。叹及 CDR區域提供於圖丨_3。較佳之CDR序列提供於圖式中。蛋白激酶依賴性疾病特別係增殖性疾病，較佳為良性或特別係惡性腫瘤，更佳者係腦癌、腎臟癌、肝癌、腎上腺癌、 7脱癌、礼癌、胃癌（特別係胃腫瘤）、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、別列腺癌、胰臟癌、肺癌、陰道癌、甲狀腺癌、肉瘤、神經膠質母細胞瘤、多發性骨艟瘤、或胃腸癌（特別係結腸癌或結腸直腸腺瘤）、或頸及頭之癌、上皮過度增生⑽ 別係牛皮癬)、前列腺增生、腫瘤(特別係具上皮特徵者，較佳者係乳腺癌）、或白血病，特㈣涉及。彻者。其可造成腫瘤之退行並防止腫瘤轉移之形成及轉移（亦包括微轉移）之 2。此外，其可用於上皮過度增生（如，牛皮癖）、前列腺曰腫瘤之治療（特別係具上皮特徵者，例如，乳腺癌）、 t白血病中。咸亦可能將本發明之抗㈣於免疫I统疾病之 / 口療’只要其涉及數種或是特別係個別之_酸蛋白激酶及包括）絲胺酸/經丁胺酸蛋白激酶；同時，本發明之抗中或周圍神㈣統疾病之治療，該等疾病係其丁分疋種赂胺酉夂蛋白激酶及/或（尚包括）絲胺酸/經丁胺I蛋白激酶所進行之信號傳導。 Μ目 ^例中，該抗體或此種抗體之功能性片段可。口 V蛋白c彻並調控（亦即，活化或抑制）c_Met填酸 119679.doc -69· 200815470 化作用。在部分具體實例中’ C-Met填酸化作用之活化可激發至少一種選自器官再生、傷口復原、及組織再生之活性。在一相關具體實例中，該器官係皮膚、腎臟、肝臟、胰臟、心、肺、腸、胸腺、或甲狀腺。在其他具體實例中，對抗c-Met之抗體可阻斷病原感染’特別係李斯特桿菌感染，或是可改善病原性疾病，諸如，瘧疾 (Carrolo，et al·，Nature Med. 9: 1363-1369，2003)。

顯示對於c-Met之抑制作用之抗體可用於結腸癌之治療 (包括轉移，如，在肝臟中）以及非小細胞肺癌之治療。抗-c_Met 抗體亦可用於遺傳性乳頭狀腎細胞癌之治療（Schmidt，L. et al· Nat. Genet· 16，68-73，1997)以及其他其中由突變 (Jeffers and Vande Woude· Oncogene 18，5 120·5 125，1999 ; 以及其中所引述之參考文獻)或是染色體之重排（如，TpR_ MET; Cooper et al. Nature 3115 29-33, 1984; Park, et al.

Cell 45, 895-904，1986)而造成c-MET過表現或是組成性活化之增殖性疾病之治療。本發明之抗體拮抗劑特別可用於 …療非所欲之細胞’特別係與C-Met相關性疾病（諸如，癌症轉移、或炎性病況）有關之細胞。例示性之癌症包括’但不限於，如，食道癌、乳癌、腎臟癌（包括，但不限於，礼頭狀腎細胞癌）、神經膠質瘤、頭及頸癌、上皮癌。肺癌、皮膚癌、白血病、、淋巴瘤、骨髓瘤、腦癌、胰胃癌、月腸癌、胃癌、腸癌、結腸癌、肝癌、生殖系、、先癌、泌尿系統癌、黑素瘤、及前列腺癌。其病㈣提供於本文中或為技藝中已知者。、同時’顯不對於°彻之拮抗作用之抗體可用於膀胱癌 119679.doc -70- 200815470 (表面及肌肉侵染性）、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤（包括神經膠質母細胞瘤、間變性星狀細胞瘤、寡星狀細胞瘤、及寡樹狀神經膠質瘤）、食道癌、胃癌、肝細胞癌（HCC)(包括兒童HCC)、頭及頸癌（包括頭及頸鱗狀細胞癌、鼻咽癌）、許特萊氏（Hurthle)細胞癌、惡性黑素瘤、間皮瘤、包括多發性骨髓瘤、白血病、非小細胞肺癌 (包括所有組織學次型：腺癌鱗狀細胞癌、支氣管肺泡細胞癌、大細胞癌、及腺鱗混合型）、小細胞肺癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌（包括遺傳性及偶發性乳頭狀腎細胞癌，第1型及第Π型，以及透明細胞腎細胞癌）；肉瘤，特別係骨肉瘤、透明細胞肉瘤、及軟組織肉瘤（包括腺泡狀及胚胎型橫紋肌肉瘤、腺泡狀軟組織肉瘤）；甲狀腺癌（乳頭狀及其他次型）之治療。在部分具體實例中，本發明提供—種用以治療關陡疾病或病况之方法’其涉及對需要該治療之對象投藥有效量之任一上述醫蕴h人L ^ 酉糸組合物。該疾病或病況係癌症或炎性病況。在另一相目 /、體實例中，該癌症係食道癌、乳癌、腎臟癌、頭及頸、虔 t , 及碩癌、上皮癌、肺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、腦癌、腠胳、彦田― ^ 夷臟癌、月癌、結腸癌、肝癌、生殖糸統癌、泌尿系統癌、

“、、素瘤、或則列腺癌。在一特定且體實例中，該癌症係肝或食道癌。特U 在部分具體實例中，紅一 u I #〜 + 上述之方法尚涉及投藥一種化療劑。在一相關具體訾 m 中，該化療劑係一抗癌劑。

在又另一具體實例Φ ^ v J ，本I明提供一種用以治療非所欲 I19679.doc -71 - 200815470 、、、之方法，其涉及使該細胞接觸任一上述之抗體或此等抗體之功能性片段。在一相關具體實例中，該細胞帶有夂體。在另一相關具體實例中，該上述方法尚涉及以一化療劑或放射照射治療該細胞。在另—具體實例中，該抗體係反應性者且可活lc_Met 鱗酸化作用而激發細胞反應，諸如，傷口復原。在另具體貝例中，本發明提供一種醫藥經合物，其包括任一上述之抗體或此等抗體之功能性片段與一額外之療劑。該額外之療劑係選自抗癌劑；抗生素；抗炎劑；生長因子；以及細胞因子。編碼本發明抗體之核酸分子本發明之另一範疇係關於編碼本發明抗體之核酸分子。 νΗ序列之實例示KSEQ m NOs: 21-30。VL序列之實例示於SEQ ID NOs: 1-20。IgX核苷酸序列之實例示kSEQ m NOs: 73。IgK核嘗酸序列之實例示於8叫m N〇s: 74_76。 IgG4核苷酸序列之實例示於犯卩ID N〇s: 85-88。本文所提供之編碼該等抗體之核酸可存在於全細胞中、存在於細胞裂解物中、或是可為部分經純化或是實質上純性之形式。核酸在以標準技術（包括，驗/SDS處理、CsC1 條帶分離、管柱層析、瓊脂糖凝膠電泳、以及技藝中所熟知之其他技術）而自其他細胞組成份或其他污染物中純化分離時，其係經分離或是成為實質上純性者。參見，F. Ausubel, et al.? ed. 2006 Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學之現有操作流程]，Greene Publishing 119679.doc -72- 200815470 and Wiley Interscience，New York。本發明之核酸可為，例如，DNA或RNA，且其可能含有或不含内含子序列。在— 具體實例中，該核酸係一 cDNA分子。該核酸可存在於载體中，諸如，噬菌體展示載體，或是存在於重組質體載體中0

本發明之核酸可使用標準之分子生物學技術取得。就由融合瘤（如，由帶有人類免疫球蛋白基因之轉基因小鼠所製備之融合瘤，如下文進一步詳述）所表現之抗體而言，可以標準之PCR擴增及/或cDNA選殖技術，取得編碼由該融合瘤所製備抗體之輕及重鏈之cDNA。就取自免疫球蛋白基因庫之抗體而言（如，使用噬菌體展示技術），可自該基因庫成員之各種噬菌體純系而回收編碼該抗體之核酸。一旦取得編碼Vh&Vl節段之DNA片段，此等dna片段可在進一步由標準之重組舰技術操縱，藉著將該等編碼核甘酸蛛接至已知之載體中，例如，以將該等可變區域基因轉化成為全長抗體鏈基因、成為Fab片段基因、或是成為SCFV基因。在此等操縱中，m編碼性DNA片段係以可操作之方式連結另一 DNA分子，或是連結編碼另一蛋片奴諸如抗體恆定區域或可撓性連接子。在本文辭果以可操作之方式連結"係意謂該兩DNA片段係以功能性之方式連結，例如，以以使由該兩dna片段編碼之胺基酸序列可維持符合框構稱之狀恶，或是以使該蛋白係在所欲啟動子之控制之下進行表現。編碼VH區域之經分離DNA可藉著以可操作之方式連結該 119679.doc -73- 200815470 VH-編碼性DNA與編碼重鏈恆定區域（CHI、CH2、及CH3) 之另一 DN A分子而轉化成為全長重鏈基因。人類重鏈怪定區域基因之序列係技藝中所已知者（參見，如，Kabat，E. A,，el al·，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest [具免疫學重要性之蛋白序列]，第5版，U.S· Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)，且涵括此等區域之DNA片段可以標準之 PCR擴增取得。該重鏈恆定區域可為IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgA、IgE、IgM、或IgD恆定區域。就Fab片段重鏈基因而言，該VH-編碼性DNA可以可操作之方式連結僅編碼重鏈CH1恆定區域之另一 DNA分子。編碼VL區域之經分離DNA可藉著以可操作之方式連結該 VL-編碼性DNA與編碼輕鏈恆定區域（CL)之另一 DNA分子而轉化成為全長輕鏈基因（以及Fab輕鏈基因）。人類輕鏈恆定區域基因之序列係技藝中所已知者（參見，如，Kabat， E. A.，el al·，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest [具免疫學重要性之蛋白序列]，第5版，！1.8· Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)，且涵括此等區域之DNA片段可以標準之 PCR擴增取得。該輕鏈恆定區域可為κ或λ恆定區域。為產生scFv基因’ Vh_及Vl_編碼性DNA片段可以可操作之方式連結編碼撓性連接子之另一片段，如，編碼胺基酸序列（Gly4 -Ser)3者，以使該VH及VL序列可以毗連之單鏈蛋白形式表現，其中該VL及VH區域係由該撓性連接子連接 119679.doc -74· 200815470 (參見，如，Bird et al·，1988 Science 242:423-426 ; Huston et at·，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 ； McCafferty et al·，1990 Nature 348:552-554)。本發明單株抗體之製備單株抗體（mAbs)可以各種不同之技術製備，包括習知之單株抗體方法學，如，Kohler and Milstein，1975 Nature 256·· 495之標準體細胞雜交技術。可使用諸多用以製備單株抗體之技術，如，B淋巴細胞之病毒或癌基因轉形。其中一種用以製備融合瘤之動物系統係小鼠系統。小鼠體内之融合瘤製備係一種既經詳細建立之流程。免疫流程以及用以分離經免疫之脾細胞以進行融合之技術係為技藝中所已知。融合配對物（如，小鼠骨魏瘤細胞）以及融合流程亦為已知。本發明之嵌合性或人類化抗體可基於如上所述製備之小鼠單株抗體序列而製備。編碼該重鏈及輕鏈免疫球蛋白之 DNA可自目標小鼠融合瘤取得，再使用標準之分子生物學技術進行工程處理而使其含有非小鼠（如，人類）之免疫球蛋白序列。舉例而言，為產生嵌合抗體，可使用技藝中已知之方法，使小鼠可變區域連結人類恆定區域（參見，如，美國專利第4,816,567號（予Cabilly et al·))。為產生人類化抗體，可使用技藝中已知之方法，使小鼠CDR區域插入人類框架之中（參見，如，美國專利第5,225,539號（予 Winter)，以及美國專利第 5,530，101 ; 5,585,089 ; 5,693,762 ;及 6，180,370號（予 Queen et al·))。 119679.doc -75- 200815470 在部分具體實例中，本發明之抗體係人類單株抗以。此等導向對抗c-Met之人類單株抗體可使用帶有人類免疫系統之部分而非小鼠系統之轉基因或轉染色體小鼠而產生。在本文中，此等轉基因或轉染色體小鼠分別係指HuMAb小鼠及KM小鼠，且其在本文中集合稱為”人類Ig小鼠"。

HuMAb小鼠⑧（Medarex，Inc·)含有人類免疫球蛋白基因之小基因座，其編碼未經重排之人類重（μ及γ)及κ輕鏈免疫球蛋白序列，以及可使内源性之μ及κ鏈基因座失活之導向性突變（參見，如，Lonberg，et al·，1994 Nature 368(6474): 8 5 6-859)。因此，該小鼠具有較低之小鼠IgM或κ表現，且在反應免疫時，該經引入之人類重及輕鏈轉基因會進行類別轉換及體突變，以產生高親和性之人類IgGK單株抗體 (Lonberg，N. et al·，1994上述文獻；回顧評論於Lonberg， N·，1994 Handbook of Experimental Pharmacology [實驗藥學手冊]113:49-101 ; Lonberg，Ν· and Huszar，D·，1995 Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 ；及 Harding，F. and

Lonberg，N·，1995 Ann· N. Y. Acad· Sci. 764:536-546) o HuMAb小鼠之製備及使用以及由此等小鼠所帶有之基因組修飾進一步述於 Taylor，L· et al·，1992 Nucleic Acids

Research 20:6287-6295 Ϊ Chen, J. et at., 1993 International

Immunology 5: 647-656 ; Tuaillon et al·，1993 Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 94:3720-3724 ; Choi et al·，1993 Nature

Genetics 4:117-123 ; Chen，J. et al.，1993 EMBO J· 12: 821-830 ;

Tuaillon et al.，1994 J. Immunol· 152:2912-2920 ; Taylor，L. et al” 119679.doc -76- 200815470 1994 International Immunology 579-591 ;及 Fishwild，D. et al·， 1996 Nature Biotechnology 14: 845-85 1，其全部之内容於此全文具體併入本文作為參考。尚參見美國專利第 5,545,806 ； 5,569,825 ； 5,625,126 ； 5,633,425 ； 5,789,650 ； 5,877,397 ; 5,661，016 ; 5,814,318 ; 5,874,299 ;及 5,770,429號（皆予 Lonberg and Kay);美國專利第 5,545,807號（予 Surani et al·) ; PCT公開案 WO 92103918、WO 93/12227、WO 94/25585、 WO 97113852、WO 98/24884、及WO 99/45962 (皆予Lonberg and Kay);以及PCT公開案 WO 01/14424 (予 Korman et al·)。在另一具體實例中，本發明人類抗體之製備可使用在轉基因或轉染色體上帶有人類免疫球蛋白序列之小鼠而激發 ("培養"），諸如，帶有人類重鏈轉基因及人類輕鏈轉染色體之小鼠。此等小鼠，其於本文稱為”KM小鼠”係詳述於 PCT公開案 WO 02/43478 (予 Ishida et al.)。又更甚者，表現人類免疫球蛋白基因之其他轉基因動物系統亦可在技藝中取得，且可用於培養本發明之抗-c-Met 抗體。舉例而言，可使用一種稱為Xenomouse (Abgenix， Inc.)之其他轉基因系統；此等小鼠述於，例如，美國專利第 5,939,598 ; 6,075，181 ; 6，114,598 ; 6，150,584 ;及6，162,963號（予 Kucherlapati et al,) 〇同時，表現人類免疫球蛋白基因之其他轉染色體動物系統可在技藝中取得，且可用於培養本發明之抗-c-Met抗體。舉例而言，可使用一種稱為"TC小鼠"之帶有人類重鏈轉染色體及人類輕鏈轉染色體兩者之小鼠；此等小鼠述於 119679.doc -77- 200815470

Tomizuka et al·，2000 Proc. Natl· Acad. Sci· USA 97:722-727 〇同時，帶有人類重及輕鏈轉染色體之牛已述於技藝之中 (Kuroiwa et al., 2002 Nature Biotechnology 20:889-894) 5 且其可用於培養本發明之抗-c-Met抗體。人類抗體或人類單株抗體亦可使用噬菌體展示法篩選人類免疫球蛋白基因庫而製備。此等用以辨識及選殖人類抗體之嗟菌體展示法係已在技藝中建立者。參見，例如：美國專利第 5,223,409 ; 5,403,484 ;及 5,571，698號（予 Ladner _ et al);美國專利第 5,427,908 及 5,580,717 號（予 Dower et al.);美國專利第 5,969，108 及 6，172，197號（予 McCafferty et al·);以及美國專利第 5,885,793 ; 6,521，404 ; 6,544,731 ; 6,555,3 13 ; 6,582,915 ;及 6,593,081 號（予 Griffiths et al·)。本發明之人類單株抗體亦可使用SCID小鼠製備，其體内已重構人類免疫細胞，以使其可在免疫時產生人類抗體反應。此等小鼠述於，例如，美國專利第5,476,996及 5,698,767號（予 Wilson et al.)。 ^ 對抗c-Met之人類單株抗體之產生使用表現於大腸桿菌中之純化重組胞外人類c-Met (R & D Systems, Minneapolis，MN)，或是綴合匙孔嘁血藍蛋白 (KLH)之純化重組人類c-Met作為抗原。其他經表現c-Met 之來源亦預期為涵括於本發明之範圍中，其包括，如，自表現系統分離之cMet，諸如，桿狀病毒、CHO細胞、以及熟習技藝者已知之其他系統。對抗c-Met之完全人類單株抗體係使用HuMab轉基因小 119679.doc •78- 200815470 鼠之HCo7、HCol2、及HCol7株以及轉基因轉染色體小鼠之KM株而製備，其各表現人類抗體基因。在各個此等小鼠株之體内，該内源性之小鼠κ輕鏈基因可如Chen et a1·， 1993 EMBO J.12:811-820所述而進行同合子性之破壞’且該内源性之小鼠κ輕鏈基因可如pCT公開案W0 01109 187之實例1所述進行同合子性之破壞。此等小鼠株各帶有人類κ 輕鏈轉基因 KCo5，如 Fishwild et al·，1996 Nature Biotechnology 14:845-851所述。該11007株帶有11007人類 • 重鏈轉基因，如美國專利第5,545,806 ; 5,625,825 ;及 5,545,807號所述。該HCol2株帶有沉012人類重鏈轉基因，如卩(：丁公開案冒0 01/09187之實例2所述。該1^〇17株帶有HCol7人類重鏈轉基因。該KNM株含有SC20轉染色體，如PCT公開案WO 02/43478所述。為產生對抗c-Met之完全人類單株抗體，以表現於大腸桿菌中之純化重組c_Met胞外域或是C-Met-KLH共扼物作為抗原免疫HuMab小鼠及KM小鼠。HuMab小鼠之一般性免春疫流程述於Lonberg，N. et al·，1994 Nature 368(6474): 856_ 859 ; Fishwild，D. et al·，1996 Nature Biotechnology 14:845-851 ;以及PCT公開案WO 98/24884。在第一次抗原灌注時，該等小鼠係6-16週齡。使用c-Met抗原之純化重組製備物（5-50微克）（如，自表現c-Met胞外域之轉染大腸桿菌細胞純化），經由腹膜内、皮下（Sc)、或腳掌之注射而免疫HuMab小鼠及KM小鼠。以完全弗氏（Freund)佐劑或Ribi佐劑中之抗原，由經由 119679 .doc -79- 200815470 腹膜内（IP)、皮下（Sc)、或腳掌（FP)而免疫該等轉基因小鼠兩次’接著再以不完全弗氏（Freund)佐劑或Ribi佐劑中之抗原，進行3-21天之IP、Sc、或FP免疫（共達11次免疫）。以眶後放血監測免疫反應。以ELISA篩選血漿，並使用具有足夠效價抗-C-Met人類免疫球蛋白之小鼠進行融合。在犧牲並移除脾臟之3及2天前，經由靜脈内對小鼠進行加強免疫。一般而言，其係對各抗原進行丨0-3 5組融合。各有數打之小鼠經各抗原免疫。總計有82隻HCo7、HCol2、 HCol7、及KM小鼠株之小鼠c-Met免疫。為選擇可產生能夠結合c_Met之抗體之HuMab或KM小鼠’可如Fishwild，D· et al·，1996所述，以ELISA試驗取自經免疫小鼠之血清。簡言之，在一例示性之操作流程中，其係以50微升/孔之於PBS中之丨_2微克/毫升之取自大腸桿菌之純化重組c-Met塗覆微滴定盤，在4它下隔夜進行恆溫共置，接著再以200微升/孔之於PBS/Tween (〇〇5%)中之 5%雞血清進行阻斷。亦可使用其他替代性之濃度及來源。在各孔中加入取自e_Met免疫小鼠之血漿稀釋物，再在室溫下進行恆溫共置1-2小時。以pBS/Tween清洗該等試驗盤，接著再在室溫下與綴合辣根過氧化物酶（HRp)之羊抗人類IgG Fc多株抗體進行恆溫共置i小時。在清洗後，以ABTS受質（Sigma，A_lm ’ 〇·22毫克/毫升）對該等試驗盤進行顯影，再以分光光度計於415_495 nm之波長又進行分析。或者’其他類型之偵測亦為可能，且其可為熟習技藝者所提供。使用發展出最高效價抗e_Met抗體之小鼠以 119679.doc -80 - 200815470 取得細胞進行融合。進行融合，並以ELISA試驗融合瘤± 清液之抗c-Met活性。根據標準之流程，以PEG使分離自HuMab小鼠及KM小鼠之小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞系融合。接著篩選所得融合瘤之抗原專一性抗體生產。以50% PEG (Sigma)，使取自免疫小鼠之脾淋巴細胞之單細胞懸浮液與四分之一數目之SP2/0非分泌性小鼠骨髓瘤細胞（ATCC，CRL 1581)進行融合。在平底微滴定盤中，以約1X1 05個細胞/孔之密度對細胞進行塗盤，接著在含有10%胎牛血清、10% P388D 1(ATCC，CRL TIB-63)條件培養基、DMEM 中之 3-5% Origen® (IGEN)選殖因子（Mediatech，CRL 10013，含高葡糖、L-麩醯胺、及丙酮酸鈉）加5 mM HEPES、0.055 mM 2-酼基乙醇、50毫克/升慶大黴素、及lx HAT (Sigma，CRL P-7185)之選擇性培養基中，進行約兩週之恆溫培養。在1-2 週後，在其中以HT取代HAT之培養基中培養細胞。接著以 ELISA篩選各孔之人類抗-c-Met單株IgG抗體。一旦發生大量之融合瘤生長，通常係在10-14天後監測培養基。對抗體分泌性融合瘤再次進行平板培養，再次篩選，如其仍然呈現人類IgG陽性，則以限制稀釋進行至少兩次之抗-c-Met單株抗體次選殖。接著在體外培養該等穩定之次選殖純系，以在組織培養基中產生少量之抗體而進行進一步之定—性_ ?_________________________________ _______________ — _ _ — _______________—.. .......…….. 人類Ig小鼠之免疫將用於培養本發明人類抗體之人類Ig小鼠以C-Met抗原 119679.doc • 81 · 200815470 及/或重組c-Met之純化或富集性製備物免疫，或是以c-Met 融合蛋白免疫，如 Lonberg，Ν· et al_，1994 Nature 368(6474): 856-859 ； Fishwild, D. et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851;以及 PCT 公開案 WO 98124884 及 WO 01/14424 所述。在第一次灌注時，該等小鼠為6-16週齡。舉例而言，可使用c-Met抗原之純化或重組製備物（5-50微克），經由腹膜内而免疫人類Ig小鼠。用以產生對抗c-Met之完全人類單株抗體之詳細流程係述於上文。以各種抗原所取得之累積性經驗已顯示，在以完全弗氏（Freund)佐劑中之抗原經腹膜内而進行起始免疫，接著再以不完全弗氏佐劑中之抗原每隔一週進行一次 IP免疫（直到共6次）時，該等轉基因小鼠可產生反應。然而，亦發現其他非弗氏之佐劑亦可為有效。此外，亦發現無佐劑之全細胞具高度免疫原性。在該免疫流程進行之過程中，可以取自眶後放血之血漿樣本，偵測其免疫反應。可以ELISA篩選血漿，並使用具有足夠效價抗-c-Met人類免疫球蛋白之小鼠進行融合。在犧牲並移除脾臟之3天前，可經由靜脈内對小鼠進行加強免疫。預期可能需要對各免疫作用進行2-3組融合。一般而言，其係以各抗原免疫6及24隻間之小鼠。其通常同時使用HCo7及HCol2株兩者。此外，可將HCo7及HCol2轉基因兩者同時培養在具有兩種不同人類重鏈轉基因隻單一小鼠體内（HCo7/HCol2)。可生產人類單株抗體之融合瘤之製備為產生可製造本發明人類單株抗體之融合瘤，分離取自 119679.doc -82- 200815470 經免疫小鼠之脾細胞及/或淋巴結細胞，並使其與適當之無限增殖化細胞系融合，諸如，小鼠骨髓瘤細胞系。對所得之融合瘤進行抗原專一性抗體生產之篩選。舉例而言，以50% PEG使取自經免疫小鼠之脾淋巴細胞之單細胞懸浮液與六分之一數目之P3X63-Ag8.653非分泌性小鼠骨髓瘤細胞(ATCC，CRL 1580)進行融合。在一例示性之具體實例中，在平底微滴定盤中，對細胞進行塗盤，接著在含有 20〇/〇胎純系血清、18% ”653”條件培養基、5% Origen® _ (IGEN)、4 mM L-L 麩隨胺、1 mM 丙酮酸鈉、5 mM HEPES、0·05 5 mM 2-巯基乙醇、50單位/毫升青黴素、50 微克/毫升鏈黴素、50微克/毫升慶大黴素、及IX HAT (Sigma ; HAT係在融合24小時後加入）之選擇性培養基中，進行兩週之恆溫培養。在約兩週後，在其中以HT取代HAT 之培養基中培養細胞。接著可以ELIS A篩選各孔之人類單株IgM及IgG抗體。一旦發生大量之融合瘤生長，可對培養基進行分析，通常係在10-14天後。可對抗體分泌性融合 ® 瘤再次進行平板培養，再次篩選，且如其仍然呈現人類 IgG陽性，可以限制稀釋對該等單株抗體進行至少兩次之次選殖。接著在體外培養該等穩定之次選殖純系，以在組織培養基中產生少量之抗體而進行定性。為純化人類單株抗體，在兩公升之旋轉瓶中培養所選之融合瘤以進行單株抗體純化。過濾上清液，並進行濃縮，接著再以A蛋白缓脂糖凝膠（Pharmacia，Piscataway，N.J.)進行親和層析。以凝膠電泳及高效液相層析檢驗經溶析之 119679.doc -83- 200815470

IgG以確認純度。將該緩衝溶液交換成為pbs，並使用l 43 之消光係數，以〇D28G測定濃度。將該等單株抗體分為小份，並貯存於-80°C下。可生產人類單株抗體之轉染瘤之製備本發明之抗體亦可在宿主細胞轉染瘤中，使用，例如，重組DNA技術及基因轉染方法之結合，如技藝中所熟知者 (如，Momson，S· (1985) Science 229:1202)而進行製備。

舉例而言，為表現該等抗體或其抗體片段，可以標準之分子生物學技術（如，PCR擴增或cDNA選殖，使用表現該目標抗體之融合瘤），取得編碼部分或全長輕及重鏈之 DNAs，再將，亥等DNAd#入表現載體中，以使該等基因以可操作之方式連結轉錄或轉譯控制序列。在本文中，辭彙 π以可操作之方式連結”係意謂該抗體基因係嫁接進入一載體中’以使該載體中之轉錄及轉譯控制序列可以其所欲功咸作用而調節該抗體基因之轉錄及轉譯。料表現載體及表現控制序列係經選擇而可與所用之表現宿主細胞相容。該抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因可插Α分離之載體中，或者’更典型者，該兩基因可同時插入相同之表現載體中。該等抗以基因係以標準之方法插人表現載體中（如，接合抗體基□片&及載體上之互補限制位點，或是如無限制位點存在時，可進行鈍端接合）。可使用本文所述之抗體輕鏈及重鏈可變區域，藉著將其插人已編碼所欲同種型之重鏈悝定區域及輕鏈以區域之表現載體中，使該％節段以可插作之方式連結該载體中之該（等）ch節段，並使錢節 H9679.doc • 84 - 200815470 段以可操作之方式連結該載體中之該CL節段，以產生任何抗體同種型之全長抗體基因。此外或是或者，該重組表現載體可編碼能夠協助該抗體鏈自宿主細胞分泌之信號肽。可將該抗體鏈基因選殖進入該載體中，以使該信號肽係以付&框構之方式連結該抗體鍵基因之胺端。該信號肽可為免疫球蛋白信號肽或是異源信號肽（亦即，取自非免疫球但白蛋白之信號肽）。除遠等抗體鏈基因之外，本發明之重組表現載體可帶有月b夠控制該等抗體鏈基因於宿主細胞中之表現之調控序列。辭菜”調控序列”係欲包括啟動子、增強子、及其他表現控制元件（如，聚腺甞酸化信號），其可控制該等抗體鏈基因之轉錄或轉澤。此等調控序列述於，例如，Goeddel (Gene Expression Techn〇l〇gy [基因表現技術]。Meth〇ds in

Enzymology 185, Academic Press，San Diego，CA 1990)。熟習技藝者可明瞭，表現載體之設計，包括調控序列之選擇，可取決於諸等因子，如，欲轉形宿主細胞之選擇、所欲之蛋白表現量等。可用於哺乳動物宿主細胞表現之調節序列包括可在哺乳動物細胞中指導高量蛋白表現之病毒元件，諸如，衍生自巨細胞病毒（CMV)、猴病毒4〇 (SV4〇)、腺病毒（如，腺病毒主要晚期啟動子（AdMLp))、及多瘤病毒之啟動子及/或增強子。或者，可使用非病毒之調控序列，諸如，遍在蛋白啟動子或p_珠蛋白啟動子。又更甚者，可使用由取自不同來源之序列構成之調控元件，諸如，SRa啟動子系統，其含有取自SV4〇早期啟動子以及第 119679.doc -85- 200815470 1型人類τ細胞白血病病毒之長末端重複序列之序列 (Takebe5 Y. et al.5 1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472) 〇除該等抗體鏈基因及調控序列之外，本發明之重組表現載體可帶有其他額外之序列，諸如，可調控該病毒於宿主細胞中之複製之序列（如，複製起點）以及可選擇性標記基因。該可選擇性標記基因可協助選擇其中已引入該載體之值主細胞（參見，如，美國專利第4,399,216、4,634,665、及5’179’017號’皆予Axel et al.)。舉例而言，該可選擇性鲁#記基因一般係可使其中已引入該載體之宿主細胞產生對於藥物之抗性，諸如，對於G418、潮黴素、或胺甲喋呤之抗f生。可選擇性標記基因包括二氫葉酸還原酶（dhFR)基因（用於結合胺曱喋呤選擇/擴增之仙卜宿主細胞）以及η⑶ 基因（用於G418選擇）。為進行輕及重鏈之表現，可以標準技術而將編碼該等重及輕鏈之該（等）表現載體轉染進入宿主細胞中。辭彙"轉染，， φ 之各種不同形式係欲涵括常用於將外源性之DNA引入原核或真核佰主細胞中之廣泛不同技術，如，電穿孔、鱗酸鈣沈;殿、DEAE-葡聚糖轉染、及其類似者。其在理論上可能在原核或疋真核伯主細胞中表現本發明之抗體。茲討論真核、、、田胞中之抗體表現，特別係哺乳動物宿主細胞，因為此等真核細胞，特別係哺乳動物細胞，較原核細胞更可能組合故適當折疊之免疫學活性抗體。抗體基因之原核表現已、、、二報告為無法有效生產高產量之活性抗體（B〇ss，Μ, ood, C. R·，1985 Immunology Today 6:12_13)。 H9679.doc -86- 200815470 可用於表現本發明重組抗體之哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢細胞（CHO細胞）（包括dhfr- CHO細胞，述於 Urlaub and Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220，結合DH FR可選擇性標記使用，如，如R.J.

Kaufman and P.A· Sharp，1982 Mol. Biol. 159:601-621 所述）、NSO骨髓瘤細胞、（：08細胞、及8?2細胞。特定言之，就NSO骨髓瘤細胞之使用而言，另一表現系統係示於 WO 87/04462、WO 89/01036、及 EP 338,841 之 GS基因表現系統。在將編碼抗體積因之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞中時，該抗體之生產係藉著培養該等宿主細胞一段足夠之時間，使該抗體在該等宿主細胞中進行表現，或是使該抗體分泌至該宿主細胞生長之培養基中而進行。可使用標準之蛋白純化方法而自該培養基中回收抗體。免疫共軛物在另一態樣中，本發明提供一種抗-c-Met抗體，或其片段，其綴合一治療性之分子部分，諸如，細胞毒素、藥物 (如，免疫抑制劑）、或放射毒素。此等共軛物在本文中稱為”免疫共輛物π。包括一或多種細胞毒素之免疫共輛物稱為’’免疫毒素”。細胞毒素或細胞毒性劑包括對於細胞有害 (如，可滅殺細胞）之任何試劑。其實例包括紫杉醇、細胞鬆弛素B (cytochalasin Β)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙叙、依米丁（emetine)、絲裂徵素、依托泊芬（et〇p〇side)、鬼白嘧吩苷（tenoposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙素、多柔比星（doxorubicin)、柔紅黴素（daunorubicin)、二 119679.doc -87 - 200815470 經基炭疽菌素二酮、米托蒽自昆（mitoxantrone)、光輝黴素 (mithramycin)、放線菌素D、1 -脫氫睾酮、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因（tetracaine)、力多卡因（lidocaine)、普潘奈（propranolol)、及嗓吟黴素（puromycin)，以及其類似物。治療性之試劑亦包括，例如，抗代謝物（如，氨曱蝶呤、6-酼基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞甞、5-氟尿嘧啶氮烯咪胺（decarbazine))、燒钱劑（如，氮芥、塞替派 (thiotepa)、苯丁酸氮芬、美法备（melphalan)、卡莫司、;丁 (carmustine)(BSNU)、及羅莫司汀（lomustine)(CCNU)、環磷酿胺、白消安（busulfan)、二溴甘露糖醇、鏈脲菌素 (streptozotocin)、絲裂黴素 C、及順-二氣二胺鉑（II) (DDP) 順麵、蒽環黴素類（如，柔紅黴素（daunorubicin)(先前稱為道諾黴素（daunomycin))及多柔比星（doxorubicin))、抗生素 (如，更生黴素（dactinomycin)(先前稱為放線菌素 (actinomycin))、博來黴素（bleomycin)、光輝黴素 (mithramycin)、及安曲黴素（anthramycin)(AMC))、以及抗有絲分裂劑（如，長春新鹼及長春花鹼）。可與本發明之抗體綴合之其他治療性細胞毒素實例包括苯并二 p比嘻類（duocarmycins)、卡奇黴素類（calicheamicins)、美登新類（maytansines)、奥力司他汀類（auristatins)，以及其衍生物。其中一種卡其黴素抗體共軛物之實例可由商業購得（MylotargTm; Wyeth-Ayerst)。細胞毒素可使用技藝中可得之連接子技術而與本發明之抗體綴合。已被用於使細胞毒素綴合抗體之連接子類型實 119679.doc -88- 200815470 例包括，但不限於，腙、硫醚、酯、二硫化物、及含肽連接子。可選擇，例如，易在溶酶體區隔中由低pH切割或是易由蛋白酶切割（諸如，優先表現於腫瘤組織中之蛋白酶，諸如，組織蛋白酶，如，組織蛋白酶B、C、D)之連接子。針對有關細胞毒素之類型、連接子、及使療劑綴合抗體之方法之進一步討論，亦參見8&^〇，0.6{&1.，2003八(^· Drug Deliv. Rev. 55:199-215 ； Trail, P.A. et al.5 2003 • Cancer Immunol· Immunother· 52:328-337 ; Payne，G·，2003 Cancer Cell 3:207-212 ； Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763 ； Pastan, I. and Kreitman, R. J.5 2002 Curx. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091 ； Senter, P.D. and Springer, C.J·，2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264 〇本發明之抗體亦可綴合放射性同位素，以產生細胞毒性放射性藥物，亦稱為放射性免疫共軛物。可與抗體綴合以用於診斷或治療用途之放射性同位素實例包括，但不限 _ 於，蛾131、銦111、釔90、及錙177。用以製備放射性免疫共軛物之方法已為技藝建立。放射性免疫共輛物之實例可以商業購得，包括 ZevalinTM (DEC Pharmaceuticals)及 BexxarTM (Corixa Pharmaceuticals)，且可使用類似之方法而製備使用本發明之抗體之放射性免疫共軛物。本發明之抗體共軛物可用於調控特定之生物反應，且該藥物分子部分並不應被視為僅限於經典之化學療劑。舉例而言，該藥物分子部分可為具有所欲生物活性之蛋白或多 119679.doc -89- 200815470 肽。此等蛋白包括，例如，具有酶活性之毒素，或其活性片段，諸如，相思豆毒素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素、或白喉毒素；蛋白，諸如，腫瘤壞死因子或干擾素-γ ;或是，生物反應修飾劑，諸如，舉例而言，淋巴因子、間白素-1 (IL-1)、間白素-2(IL-2)、間白素-6 (IL-6)、粒細胞巨嗟細胞集落刺激因子（GM-CSF)、粒細胞集落刺激因子（G-CSF)、或其他生長因子。用以使此種治療性分子部分綴合抗體之技術係已為熟知者，參見，如，Amon et al.，nMonoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy [癌症療法中用於進行藥物免疫導向之單株抗體]n, in Monoclonal

Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds·)，pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985) ； Hellstrom et at.? "Antibodies For Drug Delivery [用於進行藥物傳遞之抗體]"，in Controlled Drug Delivery (2nd Ed·)，Robinson et al. (eds.)? pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987) ； Thorpe,

"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review [癌症療法中細胞毒性劑之抗體載體：回顧評論]”，於 Monoclonal Antibodies 184: Biological And Clinical Applications [單株抗體’84 :生物及臨床應用]’ Pinchera et al· (eds·)，ρρ· 475-506 (1985) ; "Analysis，

Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy [癌症療法中放射性標記抗體治療用途之分析、結果、及未來展望Γ，於 119679.doc -90- 200815470

Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy [用於進行癌症彳貞測及治療之單株抗體]，Baldwin et al. (eds·)，ρρ· 303-16 (Academic Press 1985)，及 Thorpe et al·， "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates [抗體-毒素共輛物之製備及細胞毒性特性]n，Inmimol. Rev·，62:119-58 (1982)。雙專一性分子在另一態樣中，本發明提供包含本發明之抗-c-Met抗體或其片段之雙專一性分子。本發明之抗體，或其抗原結合部分，可衍生或連結另一功能性分子，如，另一肽或蛋白 (如，另一抗體或受體之配位體），以產生可結合至少兩個不同之結合位點或目標分子之雙專一性分子。本發明之抗體事實上可衍生或連結一個以上之其他功能性分子，以產生可結合兩個以上不同之結合位點及/或目標分子之多專一性分子；此等多專一性分子亦係欲由本文所用之辭彙”雙專一性分子”所涵括。為產生本發明之雙專一性分子，本發明之抗體可功能性連結（如，藉由化學偶合、基因融合、菲共價連結、或其他方式）一或多個其他結合分子，諸如，另一抗體、抗體片段、肽、或結合模擬物，以產生雙專一性分子。在部分具體實例中，雙專一性分子係導向對抗其他受體酪胺酸激酶，其包括但不限於，如，cRon或EGFR，或是 cMet途徑中之其他目標。其他雙專一性分子則導向包括由抗癌療劑導向之受體及配位體，諸如本文中所提供者。 119679.doc -91 - 200815470 因此，本發明包括雙專一性分子，其包含至少一個對於 c-Met之第一結合專一性以及對於第二目標抗原表位之第二結合專一性。舉例而言，該第二目標抗原表位係一以受體，如，人類Fcr/Rl (CD64)或人類Fca受體（CD89)。因

此’本發明包括可同時結合FqR、FcaR、或FcsR表現性效應細胞（如，單核細胞、巨嗟細胞、或多形核細胞 (PMNs))以及表現C-Met之目標細胞兩者之雙專一性分子此等雙專一性分子可使c-Met表現性細胞導向效應細胞， c-Met表現性並啟動Fc受體中介性效應細胞活性，諸如，細胞之吞噬作用、抗體依賴性細胞中介性細胞毒性 (ADCC)、細胞因子之釋出、或是超氧陰離子之產生。此外，就其中該雙專一性分子係多專一性之本發明而吕，除抗-Fc結合專一性及抗-c-Met結合專一性外，該分子尚可包括一種第三結合專一性。舉例而言，該第三結合專一性可為一增抗因子（anti_enhancement fact〇r (ef))部分，如，可結合涉及細胞毒性活性之表面蛋白之分子，並因而可增強對抗該目標細胞之免疫反應。”增抗因子部分，，可為一抗體、功能性抗體片段、或配位體，其可結合一特定分子，如，抗原或受體，並因而造成增強該結合決定區對於 Fc受體或目標細胞抗原之作用。該"増抗因子部分"可結合Fc受體或目標細胞抗原。或 :，該增抗因子部分可結合—實體，其係不同於該第一及第二結合專—性所結合之實體。舉例而言’該增抗因子部分可結合一胞毒性τ細胞（如，CD2、CD3、cD8、cD28、 119679.doc -92- 200815470 CD4、CD44、ICAM-l、或其他免疫細胞，其可造成增強之免疫反應對抗該目標細胞）。在一具體實例中，本發明之雙專一性分子包含至少一種抗體或其抗體片段作為其結合專一性，其包括，如， Fab、FaW、F(abf)2、Fv、或單鏈Fv。該抗體亦可為一輕鏈或重鏈二聚體，或其任何最小片段，諸如，Fv或單鏈建構物，如述於Ladner et al·美國專利第4,946,778號中者，其内容明確納入作為參考。在一具體實例中，對於Fq受體之結合專一性係由一單株抗體提供，其結合並不會由人類免疫球蛋白G (IgG)阻斷。在本文中，辭彙nIgG受體”係指位於染色體1上之八個 γ鏈基因中任一者。此等基因共編碼十二種穿膜或可溶性受體同種型，其可歸類成為三種受體類型：Fc^Rl (CD64)、FcyRII(CD32)、及卩。丫11111(0〇16)。在另一具體實例中，該FcY受體係人類高親和力卩〇7111。人類？〇丫111係一種72 kDa之分子，且具有對於單體IgG之高親和力（108-109 M，1)。部分抗 Fey單株抗體之製備及定性由Fanger et al.述於 PCT公開案WO 88/00052及美國專利第4,954,617號中，其教示内容完全納入本文作為參考。此等抗體可結合 FcyRI、FcyRII、及FcyRIII之一抗原表位，其位點迥異於該受體之Fey結合位點，且因此其結合並不會由生理含量 IgG之產生實質性之阻斷。可用於本發明之特定抗-FcyRI 抗體係 mAb 22、mAb 32、mAb 44、mAb 62、及 mAb 119679.doc -93- 200815470 197。產生mAb 32之雜交瘤可自美國形態培養物保藏中心 (American Type Culture Collection)之 ATCC 登錄號 HB9469 取得。在其他具體實例中’該抗受體抗體係單株抗體 22之人類化形式（H22)。H22抗體之製備及定性述於 Graziano, R.F· et al·，I9”5 J· Immun〇l 155 (10): 4996-5002 及PCT公開案WO 94/10332。1122抗體生產性細胞系以 HA022CL1之指稱寄存於美國形態培養物保藏中心且具有登錄號CRL 11177。在又其他具體實例中，對於Fc受體之結合專一性係由可結合人類IgA受體之抗體提供，如，Fc-α受體FcaRI (CD89)，其結合並不必定會由人類免疫球蛋白A (IgA)阻斷。辭彙"IgA受體”係意欲包括位於染色體19上之一種基因（FcaRI)之基因產物。此種基因已知編碼數種55至110 kDa之選擇性剪接穿膜同種型。FcaRI (CD89)係組成表現於單核細胞/巨噬細胞、嗜伊紅性及嗜中性粒細胞上，但不表現於非效應細胞種群上。FcaRI具有對於IgAl及IgA2 兩者之中間或中度親和力（5xlO7 1VT1)，其在接觸細胞因子 (諸如，G-CSF 或 GM-CSF)時會增加（Morton，H.C. et al·， 1996 Critical Reviews in Immunology 116:423-440)。共有四種FcaRI-專一性單株抗體已獲得敘述，其經辨識為A3、 A59、A62、及A77，可結合位於IgA配位體結合域之外之 FcaRI (Monteiro, R.C. et al·，1992 J· Immunol. 148:1764)。

FcaRI及FcyRI係用於本發明雙專一性分子之啟動受體，因其主要係表現於免疫效應細胞上，如，單核細胞、 119679.doc -94- 200815470 PMNs、巨噬細胞、及樹狀細胞；以高含量表現（如，每個細胞5,000-100,000個）；係胞毒性活性（如，ADCC、吞噬作用）之中介子；中介對其導向之抗原（包括自體抗原）之增強性抗原呈遞。其他可用於本發明雙專一性分子之抗體係小鼠、嵌合、及人類化單株抗體。本發明之雙專一性分子可藉由使用技藝中已知之方法綴合諸等組成份結合專一性（如，抗-FcR及抗-c-Met結合專一性）而製備。舉例而言，可分別產生該雙專一性分子之各個結合專一性，接著再使其彼此綴合。當該等結合專一性係蛋白或肽時，可使用各種不同之偶合或交聯劑而進行共價綴合。交聯劑之實例包括蛋白A、碳化二醯亞胺、N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯基-硫代乙酸酯（SATA)、5，5’-二硫代雙 (2-硝基苯甲酸）（DTNB)、鄰-苯二馬來醯亞胺（oPDM)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代）丙酸酯（SPDP)、及硫代琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基）環己烷-1-羧酸酯 (sulfo-SMCC)(參見，如，Karpovsky et al·，1984 JL Exp.

Med. 160:1686; Liu, MA et al.5 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648)。其他方法包括述於Paulus，1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132 ； Brennan et al.5 1985 Science 229:81-83);及 Glennie et al.，1987 J. Immunol. 139: 2367_ 2375)中者。綴合劑係SATA及sulfo-SMCC，該兩者皆可自 Pierce Chemical Co. (Rockford，IL)取得。抗體係由兩條重鏈之C-端鉸鏈區域之硫氫基鍵結而綴 119679.doc -95- 200815470 合。在一特定具體實例中，該鉸鏈區域係在綴合之前經修飾以含有可數個之硫鼠基殘基’例如，《個。或者，可將編碼該兩者結合專一性之基因以工程處理至相同之載體中，並在相同之宿主細胞中表現及組合，如，呈融合蛋白之形式。此種方法特別可用於其中該雙專一性分子係 mAbxmAb、mAbxFab、FabxF(ab，)2、或配位體 x Fab融合蛋白時。本發明之雙專一性分子可為一單鏈分子，包含一單鏈抗體以及一結合決定區，或是一單鏈雙專一性分子，包含兩個結合決定區。雙專一性分子可包含至少兩個單鏈分子。用以製備雙專一性分子之方法述於，例如，美國專利第5,260,203號；美國專利第5,455,〇3〇號；美國專利第4,881，175號；美國專利第5^32,405號；美國專利第5,091，513號；美國專利第5,476,786號；美國專利第 5,013,653號；美國專利第5,258,498號；及美國專利第 5,482,858 號。雙專一性分子與其特定目標之結合可由，例如，酶連免疫吸收分析（ELISA)、放射免疫分析（REA)、FACS分析、生物分析（如，生長抑制）、或西方點潰分析而確認。各個此等分析一般而言係藉由使用對於該目標複合物具有專一性之經標記試劑（如，抗體）而偵測特定目標蛋白抗體複合物之存在。舉例而言，FcR-抗體複合物可使用，如，可= 識並專—結合該FeR_抗體複合物之酶連抗體或抗體片段而偵測。或者，該複合物可使用各種其他免疫分析中之任一者而债測。舉例而言，可對該抗體進行放射活性標記，並 H9679.doc -96- 200815470 用於放射免疫分析（RIA)中（參見，例如，Weintraub; B,, Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques，The Endocrine Society， March，1986，其納入本文作為參考）。該放射性同位素可由諸等方式偵測，如，使用γ計數器或閃爍計數器或是藉由自動放射顯影術。針對c-Met活性調節（激動作用或拮抗作用）之分析分析諸等抗-c-Met抗體為具有c-Met激動或激動拮抗能力。激動作用係藉由結合及活化c-Met (例如，攜帶於培養物中之一既經建立細胞系之細胞上之人類c-Met受體，或是攜帶於自人類組織樣本建立之原初細胞系上者，或是可以商業購得（R&D Systems #358 MT)之經純化c-Met蛋白，其係固定於分析盤或玻珠上）而取代正效應劑HGF之能力。激動劑活性之測量度量之一係可產生50%之控制組 HGF活性之效應劑濃度（在此情形下為本文之抗體或抗體片段），亦即，EC5〇。EC5〇可使用配位體結合分析，如以標準之免疫學技術（諸如，ELISA、RIA)或是藉由細胞基礎性分析（諸如，細胞分散、軟瓊脂生長及/或基質侵染分析（管形態形成（tubulomorphogenesis)分析）)所判定者而而判定。較佳者，該EC5G抑制活性係小於5微克/毫升、小於1微克/ 毫升、小於0.5微克/毫升、小於0.1微克/毫升，且甚至更佳者係小於50納克/毫升，如以，例如，ELISA所測量者。拮抗作用係藉由結合c-Met受體（例如，攜帶於培養物中之一既經建立細胞系之細胞上之人類c-Met受體，或是攜帶於 119679.doc -97- 200815470 自人類組織樣本建立之原初細胞系上者，或是可以商業講得（R&D Systems #358 MT)之經純化c-Met蛋白，其係固定於为析盤或玻珠上）而防止與正效應劑HGF作用或是抑制其作用之能力。拮抗劑活性之測量度量之一係可抑制5〇% 之控制組HGF活性之效應劑濃度（在此情形下為本文之抗體或抗體片段），亦即，ICw。ICw可使用配位體結合分析’如以標準之免疫學技術（諸如，ELISA、RIA)或是藉由細胞基礎性分析（諸如，細胞分散、軟瓊脂生長及/或基質侵染分析（管形態形成分析））所判定者而而判定。較佳者，該ICm抑制活性係小於5微克/毫升、小於1微克/毫升、小於0.5微克/毫升、小於〇·ι微克/毫升，且甚至更佳者係小於 5〇納克/毫升，如以，例如，ELISA所測量者。針對由激動性或拮抗性抗c-Met抗體所造成之C-Met磷酸化作用調節之分析由本發明之抗-c-Met抗體所造成之激動作用或拮抗作用係以有及無HGF激發之細胞内之c-Met填酸化作用之活化或抑制而測量。將諸如A549細胞之細胞系之細胞，於96孔平底組織培養處理盤中（Costar，#3595)，在1〇〇微升/孔總體積之添加10% FBS之DMEM中，以每孔3xl04個細胞之密度進行平板培養。在5% C〇2大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養24小時，之後自該等試驗盤之各孔中溫和抽吸出培養基，再加入100微升/孔體積之DMEM。在5% C02 大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養24小時，之後將待試驗純化抗體之樣本（每孔100微升之該抗體或稀釋物） 119679. doc -98- 200815470 加入該等孔内以DMEM稀釋之細胞中。為作為缺乏活化作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c-Met抗原表位決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中〇在37°C下，對該等細胞進行短時間（如，2小時）或較長時間（如，24小時）之恆溫培養。在適當時，藉由添加終濃度為200納克/孔之無血清DMEM培養基中之HGF而激發細胞。一般而言，在分析該等抗體之激發活性時，除陽性控制組外（未經抗體處理者），自試驗樣本抗體孔中省略 HGF。一般而言，在分析該等抗體之拮抗活性時，在試驗樣本抗體孔中包括HGF。在37°C下，對該等試驗盤繼續進行恆溫培養10分鐘，之後自該等試驗盤之各孔中溫和抽吸出培養基。以冰PBS清洗該等細胞，再自該等試驗盤中溫和抽吸出該溶液。以50微升裂解緩衝液（NP-40裂解緩衝液：120 mM NaCM、50 mM Tris-HCl pH 7·5、1% NP-40、 1 mM EDTA、6 mM EGTA、20 mM NaF、1 mM苯曱脒（含新鮮添加之0·5 mMNa3V04)、及0·1 mM PMSF)裂解該等細胞。在室溫下震盪該等試驗盤15分鐘，接者貯存在-80°C 下，直到需要進行ELISA為止。使用ELISA以判定c-Met磷酸化作用之量。為進行ELIS A 盤之製備，以清洗緩衝液（PBS-0.05%Tween Biorad #670-6531)清洗 Nunc_ImmunoTM 盤，MaxiSorbTM 表面（VWR International AG，N°391_8786)兩次，並加入 100微升於PBS 中之c-Met單株捕捉抗體（DO-24)。在4°C下，對該等試驗 119679.doc -99- 200815470 盤進行恆溫培養隔夜，再以PBS-0.05% Tween清洗三次。以200微升/孔之PBS-T中之3%BSA在室溫下處理2小時同時予以震盪，以阻斷非專一性之結合位點。在使用之前再即時除去阻斷溶液。在室溫下震盪以融化冷凍之細胞裂解物，並將40微升之裂解物加入該等Nunc-Immuno盤中，再在4GC下對該等試驗盤進行恆溫培養4小時。以PBS-T清洗該等試驗盤三次，再加入50微升/孔之於3%牛血清白蛋白-PBS-T中之0.2微克/ 毫升抗-磷酸酪胺酸抗體PY20-HRP (ZYMED，# 03-7722)。在4°C下，對該等試驗盤進行恆溫培養隔夜，再以PBS-T清洗三次。抽吸出該PBS-T，再加入90微升/孔之鹼性磷酸酶受質（CDR-Star，TROPIX，#MS100RY)，並在室溫下溫和震盪45分鐘之同時進行顯影。使用96孔盤視讀器對該等試驗盤進行視讀。此等結果說明，拮抗劑類型抗-c-Met抗體之成員可抑制 HGF激發c-Met填酸化作用之能力。激動性及拮抗性抗c-Met抗體純系對於HGF誘發性增殖作用之調節進行分析以測量無或有HGF激發情形下抗-c-Met抗體之拮抗性或激動性作用。將一細胞系（諸如4MBr-5)之細胞，於96孔平底組織培養處理盤中（Costar，#3610)，在100微升/ 孔總體積之添加10%FBS之HamfsF12K中，以每孔3xl03個細胞之密度進行平板培養。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養2小時，之後加入50微升含有待試 119679.doc -100 - 200815470 驗純化抗體之培養基。為作為缺乏調節作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c-Met抗原表位決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養1小時，之後加入單獨50微升之培養基或是含有HGF之50微升（如，0.5微克/微升至約50納克/毫升）。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養72小時，之後使用細胞增殖 ELISA，BrdU-分析（Roche) Cat No· 1 669 915 而分析 BrdU 之納入。簡言之，加入20 μΜ/孔之BrdU溶液（#1)，再在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養22小時。溫和除去培養基，再在60°C下乾燥該等試驗盤1小時。加入200微升之FixDenat (溶液#2)，再在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恆溫培養30分鐘。溫和除去該溶液，再加入100微升/孔之抗-BrDU作用溶液。在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恆溫培養90分鐘。溫和除去該溶液’再以2 5 0微升之清洗溶液清洗該等試驗孔三次。溫和除去該溶液，再加入100微升/孔之受質溶液，在A4 05 rnn測量該等試驗盤。此等結果說明，在已經拮抗性抗-c-Met抗體純系處理之細胞中，表現c-Met之細胞之HGF激發性增殖作用量可獲得抑制。拮抗劑類型抗c-Met抗體對於c-Met-依賴性細胞遷移作用之調節部分細胞系之細胞，諸如，表現c-Met之NCI-H441細 119679.doc -101 - 200815470 胞，已知可反應HGF濃度梯度而遷移。使用NCI-H441細胞進行分析，其中測量抗-c-Met抗體調節通過一多孔膜 (Boyden小室分析）而自低HGF濃度區域遷移至高HGF濃度區域之能力。使用QCMTM化學趨向性8 μΜ 96-孔細胞遷移分析而分析細胞遷移。因此，在分析前24小時，以無菌PBS清洗細胞兩次’並在5% C〇2大氣下，於37°C，在含有1% FBS之 DMEM中進行飢餓處理。接著，對該等細胞進行胰蛋白酶消化，再在適當濃度之純化抗體存在下，在37。〇下，使其以每毫升l.OxlO6個細胞之量進行再懸浮3〇分鐘。為作為缺乏調節作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與 c-Met抗原表位決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在無&條件下，除去該遷移小室盤之蓋，再在該供料盤 (下層小室）之孔中加入含有50納克/毫升HGF (R&D Cat No. 2 94-HGN)之150微升無血清培養基。將iq〇微升與抗體預共置之在含有1% FBS之DMEM中之5-l〇xl〇4個細胞溫和加入該上層小室中。蓋上該盤，再在4_6% c〇2大氣下，於37〇c 進行恆溫培養16小時。遵照製造商之指示，除去該上層小室中之細胞/培養基，再將該室置入其中已加入15〇微升/孔經預加溫之細胞剝離溶液之96 —孔供料盤中。在37〇c下進行恆溫培養30分鐘同時予以週期性之溫和攪拌以鬆脫細胞。接著，在該供料盤之各孔中加入50微升經預稀釋之cyQuam GR染劑。在室溫下對該等試驗盤進行恆溫培養i5分鐘， I19679.doc -102- 200815470 再將150微升之該混合物移至一適用於使用480/520 nm濾鏡組進行螢光測量之新96-孔盤。所得之數據顯示，一類型之拮抗性抗-c-Met抗體純系可抑制c-Met活化之生物結果，亦即，NCI-H441細胞通過微孔膜之HGF激發性遷移作用。以BIACOREtm判定抗_c_Met抗體之親和力常數Kd 使用 BIACOREtm 3000 儀器（Pharmacia Biosensor AB? Uppsala，Sweden and Piscataway，N.J·)，根據製造商之操作流程，使用表面胞質基因組共振，測定純化抗體之結合親和力，如上針對拮抗性抗體所述。以流式細胞計數法判定抗-c-Met抗體之親和力常數（KD) 使用BDTM Biosciences LSR流式細胞計數器，根據製造商之操作流程，以流式細胞計數法，測定純化抗體對於表現於人類A549肺癌細胞及獼猴肺細胞表面之c-Met之結合親和力，如上針對拮抗性抗體所述。醫藥組合物在另一範疇，本發明提供一種組合物，如，一種醫藥組合物，其含有本發明單株抗體或其抗原結合部分之一種或組合，與醫藥可接受之載體共同調配。此等組合物可包括本發明抗體或免疫共軛物或雙專一性分子之一種或組合 (如，二或多種不同者）。舉例而言，本發明之醫藥組合物可包含能夠結合目標抗原上不同抗原表位或是具有互補活性之抗體（或免疫共軛物或雙專一性分子）之組合。本發明之醫藥組合物亦可在結合療法中進行投藥，亦 119679.doc -103 - 200815470 即’結合其他試劑。舉例而言，該結合療法可包括本發明之抗-c-Met抗體結合至少—種其他抗癌或抗炎劑劑。可用於結合療法中之療劑實例進_步祥述於下文體之使用之章節。仇

在本文中，”醫藥可接受性載體"包括任何及所有生理相容性之溶劑、分散基質、塗覆物、抗g及抗真菌劑、等張及吸收延遲劑、以及其類似者。該載體應可適用於靜脈内、肌内、皮下、腸外、脊柱、或表皮之投藥（如，藉由注射或灌注）。根據投藥之途徑，該活性化合物，亦即，抗體、免疫共輛物、或雙專一性分子，可經—材料塗覆，以保護該化合物不受可使該化合物失活之酸及其他天然條件作用。、” 本發明之醫藥組合物可包括一或多種醫藥可接受之鹽。 ”醫藥可接受之鹽”係指並不會影響該母化合物之所欲^物活性，且不會造成任何非所欲之毒性作用之鹽（參見，如 Berge，S.M·，et al·，1977 J· pharm. Sci. 66:1_19)。此等言之實例包括酸加成鹽及鹼加成鹽。酸加成鹽包括衍生自無毒性無機酸者，諸如，鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸、及其類似者，以及衍生自無毒性有機酸者，諸如，脂族單及雙羧酸、苯基取代性鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸、及其類似者。鹼加成鹽包括竹生自驗土金屬者，諸如，納、卸、鎮、約、及其類似者，以及衍生自無毒性有機胺者，諸如，N，N，_ 二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氣普魯卡因、膽鹼、二乙 119679.doc -104 - 200815470 醇胺、乙二胺、普魯卡因、及其類似者。

本發明之醫藥組合物亦可包括醫藥可接受之抗氧化劑。醫藥可接受性抗氧化劑之實例至少包括：水可溶性抗氧化劑’諸如’抗壞血酸、半胱鹽酸、硫酸氫鈉、豸亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、及其類似者；油可溶性抗氧化劑，諸如，棕櫚酸抗壞血酸、丁基化羥基茴香醚（BHA)、丁基化羥基曱苯(BHT)、印磷脂、掊酸丙酯、…生育酚、及其類似者；以及金屬螯合劑，諸如，擰檬酸、四乙酸乙二胺 (EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸、及其類似者。可用於本發明醫藥組合物中之適, ^ ^ ^ 例包括水、乙醇、多元醇(諸如，甘油、丙二醇= 醇、及其類似者)、以及其適當之混合物、植物油(諸如，橄欖油）、以及可注射性有機_(諸如，油酸乙酯卜適當之流度可予維持，例如’藉由使用塗覆物質(諸如，卵磷脂）’藉著在分散液中維持所需之顆粒大小，以及藉由使用界面活性劑。此等組合物亦可含有佐劑，諸如，防腐劑、溼潤劑、乳化劑、及分散劑。微生物存在之預防可藉由滅菌流程(上 ⑹以及藉由納人各種抗g及抗真菌劑（例如，對·經苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚抗壞域、及其類似者)兩者而確保。 ?亦可能需要在該等組合物中包括等張劑’諸如，糖類、虱化鈉、及其類似者。此外，可注射性醫藥形式之延長吸收可藉由納人可延遲吸收之諸等試劑而產生，諸如，㈣脂酸銘及明膠。 119679.doc 200815470 西樂可接受性載體包括無菌水性溶液及分散液，以及用 ^即時製備無菌可注射性溶液或分散液之無菌粉末。對於西樂活性物質而使用此等基質或試劑係技藝中所已知者。除與該等活性化合物不相容之任何基質或試劑外，盆在本發明醫藥組合物中之使用係為本發明所涵括。亦可：該等組合物中納入補充性之活性化合物。 " >口療性之組合物一般而古必項或危# α 版向口义須為無囷且必須在製造及貯

存條件下為安定者。該組合物可調配為溶液、微乳液、脂質體、或Μ他適合高藥物濃度之有序結構。該載體可為溶劑或分散基f’其含有’例如，水、乙醇、多元醇(諸如，甘油、丙二醇、及液態乙二醇、及其類似者）、以及其適當之混合物。適當之流度可予維持，例如，藉由使用塗覆物（諸如’㈣脂）’藉著在分散液中維持所需之顆粒大小’以及藉由使用界面活性劑。在諸多情形下，可在嗜組合物中包括等張劑’諸如，糖類、聚醇(諸如，甘紐醇、亡梨糖醇)、或是氯化鈉。可注射性組合物之延長吸收可藉著在該組合物中包括可延遲吸收之試劑而產生，例如’單硬脂酸鋁及明膠。 *無菌可注射性容亦可藉著將所需量之活性化合物納入適當之溶劑中，如所需者結合上述組成份之—種或結合，再進行無菌微過據而製備…般而言，分散液係藉著將該活性化合物納入含有基礎分散基質以及取自上述者之所需其他成分之無菌載劑中而製備。就用以製備無菌可注射性溶液之無菌粉末而言’其製備方法係真空乾燥或冷凍乾燥 119679.doc 200815470 (凍乾）以產生取自其預經無菌過濾溶液之該活性成分加上任何其他所欲成分之粉末。可與載體物質結合以產生單―劑量形式之活性成份量將根據欲治療之對象以及投藥之特定模式而各異。可與载體物貝、、、σ α以產生單—劑量形式之活性成份量—般而言將係可產生治療功效之組合物量。―般而言，在—百個百分比中’此一含量將係自約0 01%至約99%之活性成分、自約 0.1%至約7G%、或是自約1%至約鄕之活性成分，結合醫藥可接受之載體。可調整劑量療程以提供最佳之目標反應（如，治療反應)。舉例而言，可投藥單一之大劑量，可在一段時間中投藥分離之數劑，或者，該劑量可隨該冶療狀況之緊急性所指出者而❹m少或増加。特職佳者係將該等腸外电合_配為㈣單元形式’以便於進行投藥並取得劑量之均-性。在本文中，劑量單元形式係指適合對於欲治療之 =象進行單it投劑之物理經分離單元；各個單元含有經計异而：產生所欲治療作用之預定量活性化合物，結合所需之醫藥載體。本發明劑I罝& 个〜η剎里早7L形式之說明係由該活性化合物之獨特特性以及所欲達成，思战之特疋治療作用，以及技藝中對於將此種活性化合物用 ;~療個體病患之敏感性之固有限制影響及直接決定。就桄體之投藥而言’其劑量係自約❻⑽们至⑽毫克/公斤之該宿主體重不等，Η审# 更吊見者為0.01至0毫克/公斤。牛例而言’劑量可為0.3毫克/公斤體重、i毫克/公斤體 119679.doc -107- 200815470 番宅克/公斤體重、5毫克/公斤體重、或是1〇毫克/公斤、、、或是在1-10毫克/公斤之範圍内。其中一種例示性之療程係每週投藥一次、每兩週投藥一次、每三週投藥 a :四週投藥一次、每個月投藥一次、每3個月投藥或疋每3至6個月投藥一次。本發明抗c_Met抗體之 ^療程包括以靜脈内投藥之i毫克/公斤體重或3毫克/公亇其中^亥抗體係使用下列之投劑流程之一而給藥·· φ :四週—次，投藥6劑，接著為每3個月一次；每3週一次；投藥3毫克/公斤體重一次，接著每3週投藥丨毫克/公斤體重。 Ρ刀方去中，其係同時投藥具有相同或不同結合專一性=二或多種抗體，在此情形下，其所投藥之各抗體劑量係匕括於所不之範圍中。抗體通常係以多次進行投藥。單才又劑間之間期可為，例如，每週-二欠、每月-次、每3 個月—攻、-V、& ^ 3母年一。人。該等間期亦可為不規則性者，其 # I藉由测量病患體内血液中對於該目標抗原之抗體含量而定。在部分方法中，劑量係調整，以達成約卜⑺⑽微克/毫水抗體浪度，且在部分方法中係約μ」⑼微克/毫升。苴或者抗體可以持釋調配物之形式投藥，在此情形下， =僅而#又不頻繁之投藥。劑量及頻率根據該抗體於該病患體内^半生期而各異。一般而言，人類抗體可顯示最長之 I疒/八人為人類化抗體、嵌合抗體、及非人類抗體。 Π之；里及頻率可根據該治療係預防性或治療性者而各 119679.doc 200815470 有不同。在預防性之應用中，其係在長期之時間内，以相對車乂不頻繁之間期，投藥相對較低之劑量。部分之病患終身皆持續接受治療。在治療性之應用巾，其有時需要以相 =較狀間期投藥相對較高之劑量，直到該疾病之進展減 '、或停或疋直到該病患顯示疾病症狀之部分或完全改 °之後δ亥病患可接受預防性流程之投藥。

本發明醫藥組合物中諸等活性成分之實際劑量可各有不同’'以取m針對特定病患、組合物、及投藥模式而有效 =成所欲之治療反應，同時對該病患不具毒性之活性成份量。所選之劑量將取決於各種不同之藥物動力學因子，包括所用特疋本發明組合物（或是其§旨、鹽、或醯胺）之活性 '投藥之途徑、投藥之時間、所用特定化合物之排泄速率、治療之持續期、結合所用特定組合物而使用之其他藥物化。物、及/或物質、治療病患之年齡、性別、體重、病況、-般性健康狀況、以及先前之病歷、以及醫學技藝中所熟知之類似因子。。。本^明^彻抗體η療纽劑量"可造成疾病症狀嚴重性之降低、無疾病症狀期之頻率及持續期之增加、或是因此等疾病之併發而產生之損傷或失能之預防、疾病症狀包括癌症之標準診斷標準’諸如，期別、原發性腫瘤之大小、轉移之成員及大小、或是發炎之程度。本發明之組合物可使用各種技藝中已知方法之一或多者’由—或多種投藥途徑而進行投藥。如熟習技蓺者^ 明瞭者’投藥之途徑及/或模式將根據所欲之結果而各有 119679.doc 200815470 不同。本發明抗體之投藥途徑包括靜脈内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、脊柱、或其他腸外投藥途徑，例如，藉由注射或灌注。在本文中’辭囊"腸外投藥"係意謂非腸;或局。p投藥之投藥模式，通常係由注射進行，且其包括，但不限於’靜脈内、肌内、動脈内、椎管内、囊内、眶内：心内、皮内、腹膜内、經氣管、皮下、表皮下、關節内、被膜下、蛛網膜下腔、脊柱内、硬脊膜外、及幹内 (intrastemal)之注射及灌注。或者，本發明之抗體可以非腸外之途徑投藥，諸如，局部、表皮、或黏膜投藥途徑，例如，鼻内、口服、經陰道、經直腸、舌下、或局部之投藥。該等活性化合物可與將會保護該化合物不會快速釋放之載體共同製備，諸如，控釋型調配物，包括植入物、穿皮貼布、及微膠囊傳遞系統。可使用生物可降解性、生物相谷性之聚合物，諸如，乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇 S曼、膠原、聚原酸酯 '及聚乳酸。可用以製備此等調配物之諸多方法係已獲得專利者或係為熟習技藝者一般已知者。參見，如，Sustained and Controlled Release Drug

Delivery Systems [持釋及控释型藥物傳遞系統]，JR.

Robinson，ed” Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。治療性之組合物可以技藝中已知之醫學裝置進行投藥。舉例而口 ’在一具體實例中’本發明之治療性組合物可以一種無針皮下注射裝置進行投藥，諸如，示於美國專利第 5,399，163 ; 5,383,851 ; 5,312,335 ; 5，G64,413 ; 4,941，880 ; I19679.doc -110- 200815470 4’790,824;或 4,596,556號之梦罢匕心展置。可用於本發明知之植入物及模組實例至少包鲈，J:箱-^ . •吳國專利第4,487,603 唬，、頌不一種可以受控速率分配荜物永初·^可植入性傲谨、、玄泵；美國專利第4,486，194號，就顯 ' 樂樂物之治療裝置；美國專利第4 用杈 5 號，其顯示一種可以精確灌注速率傳遞藥物、杀物雇注泵；吳國專利第 4,447,224號，其顯示一種用於 + 、進仃持績藥物傳遞之可變流速可植入性灌注裝置；美阈直：丨_ ^

衣置’吳s專㈣4,439，196號，其顯示一種具有多重艙室隔^渗透性藥物傳遞㈣；以及美國專利第4,475，196號’其顯示一種滲透性藥物傳遞系統。此等專利於此併人本文作為參考。諸多其他之植人物、傳遞系統、以及模組皆係熟習技藝者所已知者。在部分具體實例中，本發明之抗體可經調配以確保其在體内之適當分布。舉例而言，血-腦屏障（BBB)可排除諸多咼度親水丨生之化合物。為確保本發明之治療性化合物可跨越BBB (如為所欲者），可將其調配於，例如，脂質體中。就製備脂質體之方法，參見，如，美國專利第4,522,8u ; 5,374,548 ;及5,399,331號。該等脂質體可包含一或多個分子部分’其可選擇性被傳遞至特定之細胞或器官中，因此增進導向性之藥物傳遞（參見，如，V V. Ranade，1989 J.

Cline Pharmacol. 29··685)。導向性分子部分之實例包括葉酸或生物素（參見，如，美國專利第5,416,016號，予Low et al·);甘露糖甞（Umezawa et ai·，1988 Biochem· Biophys· Res· Commun· 153:1038);抗體（P.G· Bloeman et al.，1995 119679.doc • 111 - 200815470 FEBS Lett. 357:140 ； M. Owais et al.? 1995 Antimicrob. Agents Chemother. 39:1 80);界面活性 A蛋白受體（Briscoe et al.5 1995 Am. J. Physiol. 1233:134) ； pl20 (Schreier et al.，1994 J· Biol. Chem. 269:9090);亦參見K. Keinanen; M.L. Laukkanen, 1994 FEBS Lett. 346:123 ； J.J. Killion; I.J. Fidler，1994 Immunomethods 4:273 o 組合本發明尚係關於在哺乳動物體内（特別係人類）以醫藥試劑之組合而預防或治療增殖性疾病或諸等疾病（諸如癌症）之方法，該組合包含： (a) —種c-Met抗體拮抗劑組合物；以及 (b) —或多種醫藥活性劑。本發明尚係關於一種醫藥組合物，其包含： (a) —種c-Met抗體拮抗劑組合物； (b) —種醫藥活性劑；以及 (c) 一種醫藥可接受之載體。本發明尚係關於一種商業包裝或產品，其包含： (a) —種c-Met抗體拮抗劑組合物之醫藥調配物；以及 (b) —種醫藥活性劑之醫藥調配物，以用於進行同時、協同、分離、或順序使用。醫藥活性劑辭彙”醫藥活性劑”係一廣泛辭彙，其涵蓋具有不同作用機制之諸多醫藥活性劑。此等中之部分與c-Met拮抗劑抗體/組合物之組合可造成癌症療法之改良。一般而言，醫 119679.doc -112· 200815470 藥活性劑係根據苴作用播也，、乍用栈制而分類。諸多可用之試劑係各種腫瘤u返彳：之抗代謝物，或是可與腫瘤細胞之膽a反應者。亦有可抑制酶之試劑，諸如，拓撲異構酶！及拓撲異構酶II，或是係抗有絲分裂劑者。辭臬w帛活f生@ 4寺別意謂非c_Met抗體抬抗劑組合物或其衍生物之任何醫藥活性劑。其包括，但不限於： ί· 芳香化酶抑制劑； iL抗雌激素、抗雄激素、或戈那瑞林（g〇nad〇relin) 激動劑； m.拓撲異構酶I抑制劑或拓撲異構酶11抑制劑； iv.微管活性劑、烧化劑、抗腫瘤新生性抗代謝物、或顧化合物； V·可導向/降低蛋白或脂質激酶.活性或是蛋白或脂質磷酸酶活性之化合物、其他之抗血管生成化合物、或是可誘發細胞分化反應之化合物； vi. 單株抗體； vii·環加氧酶抑制劑、雙膦酸鹽、類肝素酶抑制劑、生物反應修飾劑； viii. Ras癌基因同種型之抑制劑； ix· 端粒酶抑制劑； X· 蛋白酶抑制劑、基質金屬蛋白酶抑制為】、w & Μ 甲硫胺酸胺基肽細抑制劑、或蛋白體抑制劑； xi· 用於治療血液學性惡性病之試劑，咬是可導。降低、或抑制Flt-3活性之化合物； 119679.doc -113- 200815470 xii. HSP90抑制劑； xiii. 抗增殖抗體； xiv. 組蛋白脫乙酸基酶（HDAC)抑制劑； XV. 可導向、降低、或抑制絲胺酸/羥丁胺酸mTOR激酶之活性/功能之化合物； xvi. 促生長素抑制素受體拮抗劑； xvii. 抗白血病化合物； xviii. 腫瘤細胞損傷方法； # xix. EDG結合劑； XX. 核糖核甞酸還原酶抑制劑； xxi. S-腺甞甲硫胺酸脫羧酶抑制劑； xxii. VEGF或VEGFR之單株抗體； xxiii·光動力療法； xxiv.血管抑制性類固醇； XXV. 含有皮質類固醇之植入物； xxvi· ATI受體拮抗劑；以及 xxvii. ACE抑制劑。在本文中，辭彙”芳香化酶抑制劑”係關於一種化合物，其可抑制雌激素之生產，意即，受質雄烯二酮及睪酮分別轉化成為雌酮及雌二醇之作用。該辭彙包括，但不限於，類固醇，特別係阿他美坦（atamestane)、依西美坦 (exemestane)、及福美斯坦（formestane);以及，特定言之，非類固醇，特別係胺魯米特（aminoglutethimide)、 roglethimide、外1：多米特（pyridoglutethimide)、曲洛司坦 119679.doc -114- 200815470 (trilostane)、睾内醋（testolactone)、酮康嗤（ketokonazole)、伏氣嗤（vorozole)、法倔唾（fodrozole)、阿那曲峻（8皿81：1：()2〇16)、及來曲嗤（letrozole)。依西美坦（exemestane)係以 AROMASIN 之名稱行銷；福美斯坦（formestane)為LENTARON;法倔唑（fadrozole)為 AFEMA ;阿那曲唑（anastrozole)為 ARIMIDEX ; 來曲唑（letrozole)為FEMARA或FEMAR ;且胺魯米特 (aminoglutethimide)為 ORIMETEN。包含為一芳香化酶抑制劑之醫藥活性劑之本發明組合特別可用於治療激素受體陽性腫瘤，如，乳癌。在本文中，辭彙’’抗雌激素”係關於一化合物，其可在雌激素受體之層級拮抗雌激素之作用。該辭彙包括，但不限於，他莫昔芬（tamoxifen)、氟維司群（£111¥68忟及111:)、雷洛西芬（raloxifene)、及鹽酸雷洛西芬。他莫昔芬（tamoxifen)可以其行銷之形式進行投藥，如，NOLVADEX ;且鹽酸雷洛西芬係以EVISTA之名稱行銷。氟i維司群（fulvestrant)可如美國專利第4,659,516號所述進行調配，且其係以 FASLODEX之名稱行銷。包含為一抗雌激素之醫藥活性劑之本發明組合特別可用於洽療雌激素受體陽性腫瘤，如，乳癌。在本文中，辭彙”抗雄激素”係關於任何可抑制雌激素生物作用之物質，且其包括，但不限於，必卡他胺（bicalutamide) (CASODEX)，其可如美國專利第4,636,505號所述進行調配。在本文中，辭彙f’戈那瑞林（gonadorelin)激動劑π包括， 119679.doc -115- 200815470 但不限於，阿巴瑞克（abarelix)、戈舍瑞林（goserelin)、及醋酸戈舍瑞林。戈舍瑞林（goserelin)係揭示於美國專利第 4，100,274號中，且其係以ZOLADEX之名稱行銷。阿巴瑞克（abarelix)可如，如，美國專利第5,843,901號中所揭示者而進行調配。在本文中，辭彙π拓撲異構酶I抑制劑”包括，但不限於，拓撲替康（topotecan)、gimatecan、伊立替康（irinotecan)、喜樹驗以及其類似物9-頌基喜樹驗（9-nitrocamptothecin)及巨分子喜樹鹼共軛物PNU-166148 (WO 99/17804中之化合物A1)。伊立替康（irinotecan)可以，如，其行銷之形式進行投藥，如，以CAMPTOSAR之商標名稱。拓撲替康（topotecan) 可以，如，其行銷之形式進行投藥，如，以HYCAMTIN之商標名稱。在本文中，辭彙”拓撲異構酶II抑制劑’’包括，但不限於，慈環黴素，諸如，阿黴素（doxorubicin)(包括脂質體調配物，如，CAELYX)、柔紅黴素（daunorubicin)(包括脂質體調配物，如，DAUNOSOME)、表阿黴素（epirubicin)、伊達比星（idarubicin)、及奈莫柔比星（nemorubicin);蒽酉昆類之米托蒽g昆(mitoxantrone)及洛索惠g昆（losoxantrone);鬼臼毒素類之依托泊嘗（etoposide)及替尼泊甞（teniposide)。依托泊甞（etoposide)係以ETOPOPHOS之名稱行鎖；替尼泊嘗（teniposide)為 VM 26-BRISTOL ;阿黴素（doxorubicin)為 ADRIBLASTIN 或 ADRIAMYCIN ;表阿黴素（epirubicin)為 FARMORUBICIN ;伊達比星（idarubicin)為 ZAVEDOS ;且 119679.doc -116- 200815470 米托蒽酉昆（mitoxantrone)為 NOVANTRON 〇在本文中，辭彙”微管活性劑”係關於微管安定性劑、微管去安定劑、以及微管蛋白聚合化抑制劑，其包括，但不限於，紫杉烷，如，太平洋紫杉醇及多烯紫杉醇；長春花生物驗，如，長春花驗，特別係硫酸長春花驗；長春新驗，特別係硫酸長春新鹼及長春瑞賓（vinorelbine); discodermolides ;秋水仙素（cochicine)以及埃坡黴素 (epothilones)及其衍生物，如，埃坡黴素B (epothilone B) 或其衍生物。太平洋紫杉醇係以TAXOL之名稱行銷；多烯紫杉醇為TAXOTERE ;硫酸長春花鹼為VINBLASTIN R.P ;且硫酸長春新鹼為FARMISTIN。其亦包括太平洋紫杉醇之類屬性形式以及太平洋紫杉醇之各種劑形。太平洋紫杉醇之類屬性形式包括，但不限於，鹽酸倍他洛爾 (betaxolol hydrochloride)。太平洋紫杉醇之各種劑形包括，但不限於，白蛋白奈米顆粒太平洋紫杉醇（其係以 ABRAXANE之名稱行銷）；ONXOL、CYTOTAX。Discodermolide 可以，如，美國專利第5,010,099號中所揭示者而取得。其亦包括埃坡黴素（epothilones)衍生物，其係揭示於美國專利第 6,194，181號、WO 98/10121、WO 98/25929、WO 98/08849、 WO 99/43653、WO 98/22461、及WO 00/31247。特別較佳者係埃坡黴素A及/或B。在本文中，辭彙"烷化劑π包括，但不限於，環磷醯胺、異環填醢胺（ifosfamide)、美法备（melphalan)、或硝脲 (BCNU或 Gliadel)、或是替莫唑胺（temozolamide) (TEMODAR)。 119679.doc -117- 200815470 環磷醯胺可以，如，其行銷之形式進行投藥，如，以 CYCLOSTIN之商標名稱，且異環磷醯胺（ifosfamide)為 HOLOXAN。辭彙"抗腫瘤新生性抗代謝物”包括，但不限於，5-氟尿哺°定（5-FU); 卡培他濱（capecitabine);吉西他濱 (gemcitabine) ； DNA脫曱基劑，諸如，5- 口丫胞嘗及 (decitabine);胺甲嗓呤；依達曲沙（edatrexate);以及葉酸拮抗劑，諸如，但不限於，培美曲吐（pemetrexed)。卡培他濱（capecitabine)可以，如，其行銷之形式進行投藥，如，以XELODA之商標名稱，且吉西他濱（gemcitabine)為 GEMZAR。在本文中，辭彙”鉑化合物’’包括，但不限於，卡鉑 (carboplatin)、順銘、順銘、奥沙利顧（oxaliplatin)、賽特翻（Satraplatin)、及銘試劑，諸如 ZD0473。卡翻（carboplatin) 可以，如，其行銷之形式進行投藥，如，以CARBOPLAT 之商標名稱，且奥沙利翻（oxaliplatin)為ELOXATIN。在本文中，辭彙π可導向/降低蛋白或脂質激酶活性或是蛋白或脂質磷酸酶活性之化合物；或是其他之抗血管生成化合物”包括，但不限於，蛋白酪胺酸激酶，及/或絲胺酸及/或羥丁胺酸激酶抑制劑，或是脂質激酶抑制劑，例如： i) 可導向、降低、或抑制血管内皮生長因子受體 (VEGF)活性之化合物，諸如，可導向、降低、或抑制 VEGF活性之化合物，特別係可抑制VEGF受體之化合物， 119679.doc -118- 200815470 諸如，但不限於，7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物 (AEE7 88) ; BAY 43-9006 ;揭示於 WO 00/09495 之異膽鹼化合物，諸如，（4-第三丁基-苯基）-94-吡啶-4-基甲基-異喹啉-1-基）-胺（AAL881);及 ϋ) 可導向、降低、或抑制血小板衍生性生長因子受體（PDGFR)活性之化合物，諸如，可導向、降低、或抑制 PDGFR活性之化合物，特別係可抑制PDGF受體之化合物，如，N-苯基-2-嘴咬-胺衍生物，如，伊馬替尼 Φ (imatinib)、SU101、SU6668、及 GFB-111 ; iii) 可導向、降低、或抑制纖維母細胞生長因子受體 (FGFR)活性之化合物； iv) 可導向、降低、或抑制似胰島素生長因子受體1 (IGF-1R)活性之化合物，諸如，可導向、降低、或抑制 IGF-1R活性之化合物，特別係可抑制IGF-1R受體之化合物。此等化合物包括，但不P艮於，揭示於WO 02/092599中之化合物以及其衍生物4-胺基-5-苯基-7-環丁基吡咯并 [2,3-d]嘧啶衍生物（AEW541); v) 可導向、降低、或抑制Trk受體酪胺酸激酶家族活性之化合物； vi) 可導向、降低、或抑制Axl受體酪胺酸激酶家族活性之化合物； vii) 可導向、降低、或抑制c-Met受體活性之化合物； viii) 可導向、降低、或抑制Ret受體酪胺酸激酶活性之化合物； 119679.doc -119- 200815470 ix) 可導向、降低、或抑制Kit/SCFR受體酪胺酸激酶活性之化合物； X) 可導向、降低、或抑制C-kit受體赂胺酸激酶 (PDGFR家族之部分）活性之化合物，諸如，可導向、降低、或抑制C-kit受體酪胺酸激酶家族活性之化合物，特別係可抑制C-kit受體之化合物，如，伊馬替尼（imatinib); xi) 可導向、降低、或抑制c Abl家族成員及其基因融合產物（如，BCR-Abl激酶）之活性之化合物，諸如，可導向、降低、或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產物活性之化合物，如，N-苯基-2-喷唆·胺衍生物，如，伊馬替尼 (imatinib)、PD180970、AG957、NSC 680410、或PD173955，取自 ParkeDavis ; BMS354825 ; xii) 可導向、降低、或抑制蛋白激酶C (PKC)及絲胺酸/ 羥丁胺酸激酶Raf家族成員、MEK、SRC、JAK、FAK、 PDK、及Ras/MAPK家族成員、或是PI(3)激酶家族成員、或是PI(3)激酶相關性激酶家族成員、及/或細胞週期蛋白依賴性激酶家族（CDK)成員之活性之化合物，且特別係揭示於美國專利第5,093,330號中之諸等星形孢菌素衍生物，如，米噪妥林（midostaurin);其他化合物之實例包括，如，UCN-01 ;沙芬戈（safingol) ; BAY 43-9006 ;苔蘚抑素 1 (Bryostatin 1)；旅立福新（Perifosine);伊莫福新 (Ilmofosine) ; RO 318220 及 RO 320432 ; GO 6976 ; Isis 3 521 ; LY333 531/LY379196 ;異喹啉化合物，諸如揭示於 WO 00/09495 中者；FTIs ； PD184352 ；或 QAN697，一種 119679.doc -120· 200815470 P13K抑制劑； xiii) 可導向、降低、或抑制蛋白酪胺酸激酶活性之化合物，諸如，甲磺酸伊馬替尼（imatinib)(GLEEVEC); tyrphostin或是嘧啶基胺基苯甲醯胺及其衍生物 (AMN107)。Tyrphostin較佳係一低分子量（Mr<1500)之化合物，或係其醫藥可接受之鹽，特別係選自亞苄基丙二腈類或S芳基苯丙二腈或雙受質喳啉類化合物之化合物，更特別可係選自 Tyrphostin A23/RG-50810、AG 99、 • Tyrphostin AG 213、Tyrphostin AG 1748、Tyrphostin AG 490、Tyrphostin B44、Tyrphostin B44 (+)鏡像異構物、 Tyrphostin AG 555、AG 494、Tyrphostin AG 556 ; AG957 及&(13?11〇3以11(4-{[(2,5-二羥基苯基）甲基]胺基}-苯甲酸金剛烧基酯，NSC 680410，adaphostin)之任何化合物。 xiv) 可導向、降低、或抑制受體赂胺酸激酶表皮生長因子家族（EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4，呈同源或異源二聚體形式）之活性之化合物，諸如，可導向、降低、或 ^ 抑制表皮生長因子家族活性之化合物特別係可抑制EGF受體酪胺酸激酶家族成員（如，EGF受體、ErbB2、ErbB3、 ErbB4)或是可結合EGF或EGF相關性配位體之化合物、蛋白、或抗體，且特定言之係概括及具體揭示於W0 97/02266中之該等化合物、蛋白、或單株抗體，如，實例 39化合物，或是揭示於EP 0 564 409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0 566 226、EP 0 787 722、EP 0 837 063、美國專利第 5,747,498號、WO 98/10767、WO 97/30034、W0 119679.doc -121 - 200815470 97/49688、WO 97/38983 中，且特別係 WO 96/30347 (如，稱為〇? 3 5 8774之化合物）、霄〇 96/33980 (如，化合物2〇 1839);以及 WO 95/03283 (如，化合物 ZM105 180)中者，如’曲妥珠單抗（trastuzumab) (HERCEPTIN®) '西妥昔單抗（cetuximab)、Iressa、OSI-774、CI 1033、EKB-569、 GW-2016、El.l、Ε2·4、Ε2·5、Ε6·2、Ε6·4、E2.ll、 Ε6·3、或Ε7·6·3，以及7Η-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物（其係揭示於WO 03/013 541中）、埃羅替尼（erlotinib)、及吉非替尼（gefitinib)。埃羅替尼（erlotinib)可以其行銷之形式進行投藥，如，TARCEVA，且吉非替尼（geHtinib)為IRESSA，對抗表皮生長因子受體之人類單株抗體包括ABX-EGFR ; 以及 XV) 可導向、降低、或抑制絲胺酸/羥丁胺酸mTOR激酶之活性/功能之化合物特別係可導向/抑制mTOR激酶家族成員之化合物、蛋白、或抗體，如，RAD、RAD001、 CCI-779、ABT578、SAR543、納巴徽素（rapamycin)及其衍生物/類似物、取自Ariad之AP23573及AP23841、依維莫司（everolimus)(CERTICAN)、及西羅莫司（sir〇limus)。 CERTICAN (依維莫司（everolimus)，RAD)係一種研究中之新穎增殖信號抑制劑，其可預防T細胞及血管平滑肌細胞之增殖。在指稱抗體時，其包括完整之單株抗體、奈米抗體、多株抗體、由至少2個完整抗體形成之多專一性抗體、以及抗體片段，只要其具有所欲之生物活性。 119679.doc -122- 200815470 在本文中，辭彙”可導向/降低蛋白或脂質激酶活性或是蛋白或脂質磷酸酶活性之化合物、其他之抗血管生成化合物、或是可誘發細胞分化反應之化合物"包括，但不限於，麟酸酶1、磷酸酶2A、PTEN、或CDC25，如，岡田酸 (okadaic acid)或其衍生物。在本文中，辭彙"單株抗體”包括，但不限於，貝伐單抗 (bevacizumab)、西妥昔單抗（cetuximab)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、替伊莫單抗（Ibritumomab tiuxetan)、 denosumab、抗-CD40、抗-GM-CSF、以及托西莫單抗 (tositumomab)及硤 I131。貝伐單抗（bevacizumab)可以其行銷之形式進行投藥，如，AVASTIN ;西妥昔單抗（cetuximab) 為 ERBITUX;曲妥珠單抗（trastuzumab)為 HERCEPTIN;利妥昔單抗（Rituximab)為MABTHERA ;替伊莫單抗 (Ibritumomab tiuxetan)為 ZEVULIN ;抗-RANKL 為 denosumab (AMG 162);抗-CD40 為 HCD122 (美國專利申請案2002-0106371);且托西莫單抗（tositumomab)及埃I131為 BEXXAR 〇在本文中，辭彙"其他之抗血管生成化合物”包括，但不限於，具有另一活性機制之化合物，如與蛋白或脂質激酶之抑制不相關者，如，沙利竇邁（thalidomide)(THALOMID)及 TNP-470。在本文中，辭彙"可誘發細胞分化反應之化合物”包括，但不限於，視黃酸、α-、γ-或δ-生育酴、或是α-、γ-或δ- 或-生育三烯醇。 119679.doc -123- 200815470 在本文中，辭彙"環加氧酶抑制劑”包括，但不限於，如，Cox-2抑制劑、5-烷基取代性2-芳基胺基苯基乙酸及衍生物，諸如，塞來昔布（celecoxib)(CELEBREX)、羅非昔布（rofecoxib)(VIOXX)、艾托考昔（etoricoxib)、戊地昔布 (valdecoxib)、或5-烷基_2·芳基胺基苯基乙酸，如，5-甲基-2-(2^氯-61·氣苯胺基）苯基乙酸，lumiracoxib。

在本文中，辭彙”雙膦酸鹽”包括，但不限於， etridonic、氣屈膦酸（clodronic)、替魯膦酸（tiludronic)、帕米膦酸（pamidronic)、阿崙膦酸（alendronic)、伊班膦酸 (ibandronic)、利塞膦酸（risedronic)、及嗤來膦酸（zoledronic)。 "Etridonic acid”可以，如’其行鎖之形式進行投樂’如’ DIDRONEL ; ” 氯屈膦酸（clodronic acid)"為 BONEFOS ; ” 替魯膦酸（tiludronic acid)"為 SKELID ; 帕米膦酸（pamidronic acid，，）為AREDIA;，丨阿崙膦酸（alendronic acid)1F0SAMAX; π 伊班鱗酸（ibandronic acid)"為 BONDRANAT，’’ 利塞麟酸 (risedronic acid)，’為 ACTONEL;且’’唑來膦酸（zoledronic acid)，，為 ZOMETA。在本文中，辭彙”類肝素酶抑制劑”係指可導向、降低、或抑制硫酸肝素降解作用之化合物。該辭彙包括，但不限於，PI 88 〇在本文中，辭彙”生物反應修飾劑”包括’但不限於，淋巴因子或干擾素，如，干擾素丫。在本文中，辭彙"Ras癌基因同種型之抑制劑”包括’但不限於，H-Ras、K-Ras、或N-Ras，在本文中，其係指可導向、降低、或抑制Ras癌基因活性之化合物’如’法尼 119679.doc -124- 200815470 基轉移酶抑制劑（FTI)，如，L-744832、DK8G557、或 R115777 (ZARNESTRA) 〇在本文中，辭彙”端粒酶抑制劑"包括，但不限於，可導向、降低、或抑制端粒酶活性之化合物。可導向、降低、或抑制端粒酶活性之化合物特別係可抑制端粒酶受體之化合物，如，telomestatin ° 在本文中，辭彙’’基質金屬蛋白酶抑制劑”或（MMP抑制劑）包括，但不限於，膠原肽模擬性及非肽模擬性抑制劑；四環素衍生物，如，異羥肟酸肽模擬性抑制劑巴馬司他（batimastat)，以及其口服生物可獲性類似物馬馬司他 (marimastat)(BB-2516)、prinomastat (AG3340)、metastat (NSC 68355 1) BMS 279251、BAY 12-9566、TAA211、 MMI270B、或 AAJ996。在本文中，辭彙”甲硫胺酸胺基肽酶抑制劑”包括，但不限於，可導向、降低、或抑制曱硫胺酸胺基肽酶活性之化合物。可導向、降低、或抑制甲硫胺酸胺基肽酶活性之化合物係，如，bengamide或其衍生物。在本文中，辭彙”蛋白體抑制劑π包括可導向、降低、或抑制蛋白體活性之化合物。可導向、降低、或抑制蛋白體活性之化合物包括，但不限於PS-341 ; MLN 341。硼替佐米（bortezomib)或 Veleade。在本文中，辭彙"用於治療血液學性惡性病之試劑’’包括，但不限於，似FMS絡胺酸激酶抑制劑，如，可導向、降低、或抑制似FMS酪胺酸激酶受體（Flt-3R)活性之化合 119679.doc -125- 200815470 物；干擾素；卜b-D-阿糖呋喃胞甞（ara_c)及bisulfan;以及 ALK抑制劑，如，可導向、降低、或抑制未分化性淋巴瘤激酶之化合物。在本文中，辭彙’’可導向、降低、或抑制Flt-3活性之化合物π包括，但不限於，可抑制Flt_3之化合物、蛋白、或抗體，如，N-苯曱醯基-星形孢菌素、米嗓妥林（midostaurin) (一種星形孢菌素衍生物）、SU11248、&MLN518。在本文中，辭彙nHSP90抑制劑π包括，但不限於，可導向、降低、或抑制HSP90之内源性ΑΤΡ酶活性之化合物；可绎由遍在蛋白蛋白體途徑而導向、降低、或抑制HSP90 客戶蛋白之化合物。可導向、降低、或抑制HSP90之内源性ΑΤΡ酶活性之化合物特別係可抑制HSP90之ΑΤΡ酶活性之化合物、蛋白、或抗體，如，17-烯丙基，17-去甲氧基膠達納黴素（geldanamycin)(17AAG)，一種膠達納黴素 (geldanamycin)衍生物；其他膠達納黴素（geldanamycin)相關性化合物；根赤殼菌素及HDAC抑制劑。在本文中，辭彙”抗增殖抗體"包括，但不限於，曲妥珠單抗（trastuzumab) (HERCEPTIN)、曲妥珠單抗-DM1、埃羅替尼（erlotinib) (TARCEVA)、貝伐單抗（bevacizumab) (AVASTIN)、利妥昔單抗（RitUχimab)(RITUXAN)、PR064553 (抗-CD40)、及2C4抗體。抗體意謂，如，完整之單株抗體、多株抗體、由至少2個完整抗體形成之多專一性抗體、以及抗體片段，只要其具有所欲之生物活性。在本文中，辭彙” HDAC抑制劑’’係關於可抑制組蛋白脫 119679.doc -126- 200815470 乙醯基酶且具有抗增殖活性之化合物。此種化合物包括，但不限於，揭示於WO 02/22577中之化合物，特別係N-羥基-3-[4-[[(2-羥乙基）[2-(1Η-吲哚-3-基）乙基]-胺基]甲基]苯基]-2E-2 -丙稀酿胺’以及N-說基- 3- [4-[[[2-(2-甲基-1Ηp弓丨哚-3-基）-乙基]-胺基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯醯胺，以及其醫藥可接受之鹽（LBH589)。其尚特別包括辛二醯苯胺異羥肟酸（SAHA) ; [4-(2-胺基-苯基胺基曱醯基）-芊基]-胺基甲酸吡啶-3-基甲基酯及其衍生物；丁酸、焦草醯胺 (pyroxamide) > 曲古菌素 A (trichostatin A)、Oxamflatin、 apicidin、Depsipeptide ; depudecin、及 trapoxin o 在本文中，辭彙’’可導向、降低、或抑制絲胺酸/羥丁胺酸mTOR激酶之活性/功能之化合物”包括，但不限於，可導向/抑制mTOR激酶家族成員之化合物、蛋白、或抗體，如，RAD、RAD001、CCI-779、ABT578、SAR543、納巴

黴素（rapamycin)及其衍生物/類似物、取自Ariad之 AP23573及 AP23841、依維莫司（everolimus)(CERTICAN)、及西羅莫司（sirolimus)(RAPAMUNE)、CCI-779、及 ABT578。 CERTICAN (依維莫司（everolimus)，RAD)係一種研究中之新穎增殖信號抑制劑，其可預防T細胞及血管平滑肌細胞之增殖。在本文中，辭彙’’促生長素抑制素受體枯抗劑π包括，但不限於，可導向、治療、或抑制促生長素抑制素受體之試劑，諸如，octreoride 及 SOM230。在本文中，辭彙π抗白血病化合物π包括，但不限於， 119679.doc -127- 200815470

Ara-C，一種。密咬類似物，其係去氧胞答之2’-α-經基核糖 (阿糖菩）衍生物。其亦包括次黃嘌呤之嘌呤類似物、6-魏基嗓呤（6-ΜΡ)、及填酸氣達拉濱（fludarabine phosphate) 〇在本文中，辭彙11腫瘤細胞損傷方法”係指諸等方法，諸如，離子化放射照射。在上文及後文中，辭彙”離子化放射照射”係意謂以電磁性射線（諸如，X射線及γ射線）或粒子（諸如，α、β、及γ粒子）之形式進行之離子化放射照射。離子化放射照射係提供於，但不限於，放射療法中， • 且係技藝中所已知者。參見Heilman，Cancer [癌症]，第4 版，Vol· 1，Devita et al.，Eds.，ρρ· 248-275 (1993) 〇在本文中，辭彙nEDG結合劑”包括，但不限於，一類可調控淋巴細胞再循環之免疫抑制劑，諸如，FTY720。在本文中，辭彙π核糖核苷酸還原酶抑制劑”包括，但不限於，嘧啶或嘌呤核苷類似物，其包括，但不限於，氟達拉濱（fludarabine)及/或ara-C; 6-硫代鳥嗓呤；5-FU;克拉屈濱（cladribine) ; 6-魏基嘌呤，特別係結合對抗ALL之 ara_C ;及/或喷司他丁（pentostatin)。核糖核嘗酸還原酶抑制劑特別係羥基脲或2-羥基-1H-異喇唑-1，3_二酮衍生物，諸如，PL-1、PL-2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7、或 PL 8。參見Nandy et al·，Acta Oncologica，Vol. 33，No· 8, pp· 953-961 (1994)。在本文中，辭彙nS-腺甞甲硫胺酸脫羧酶抑制劑”包括，但不限於，揭示於美國專利第5,461，076號中之化合物。在本文中，辭彙"VEGF或VEGFR之單株抗體”包括，但 119679.doc -128- 200815470 不限於，揭示於WO 98/35958中之化合物，如，1-(4-氯苯胺基）-4-(4-峨咬基甲基)二氮雜莕，或其醫藥可接受之鹽，如，琥珀酸鹽，或是揭示於WO 00/09495、WO 00/27820、 WO 00/59509、WO 98/11223、WO 00/27819、及 EP 0 769 947中者；如Prewett et al·，Cancer Res，Vol. 59，pp.5209-5218 (1999) ; Yuan et al·， Proc Natl Acad Sci USA， Vol· 93, pp. 14765-14770 (1996) ; Zhu et al·，Cancer Res，Vol· 58， pp. 3209-3214 (1998);及 Mordenti et al·，Toxicol Pathol， Vol· 27, No· 1，pp· 14-21 (1999)所述者；述於 WO 00/37502 及 WO 94/10202 中者；ANGIOSTATIN，由 O’Reilly et al.， Cell，Vol· 79, pp. 315-328 (1994)所述；ENDOSTATIN，由 O’Reilly et al·，Cell，Vol. 88, pp· 277-285 (1997)所述；胺茴酸醯胺；ZD4190 ; ZD6474 ; SU5416 ； SU6668 ;貝伐單抗（bevacizumab);或是抗-VEGF抗體或抗-VEGF受體抗體，如，rhuMAb 及 RHUFab ; VEGF適體，如，Macugon ·， FLT-4抑制劑；FLT-3抑制劑；VEGFR-2 IgGl抗體； Angiozyme (RPI 4610)；及 Avastan 〇在本文中，辭彙’’光動力療法”係指使用稱為光敏劑之特定化學物質以治療或預防癌症之療法。光動力療法之實例. 包括，但不限於，以諸等試劑，諸如，如，VISUDYNE及卟吩姆納（porflmer sodium)所進行之治療。在本文中，辭彙’’血管抑制性類固醇”包括，但不限於，可阻斷或抑制血管新生之試劑，諸如，如，阿奈可他 (anecortave)、曲安奈德（triamcinolone)、氫化可體松、11- 119679.doc -129- 200815470 α-epihydrocotisol、脫氧皮醇（cortexolone)、17α_ 經基孕酮、皮質酮、去氧皮質酮、睪酮、雌酮、及地塞米松 (dexamethasone) 〇在本文中，辭彙”含有皮質類固醇之植入物”包括，但不限於，諸等試劑，諸如，如，敗輕鬆（fluocinolone)及地塞米松（dexamethasone) 〇在本文中，辭彙"AT1受體拮抗劑”包括，但不限於，諸等試劑，諸如，DIOVAN。在本文中，辭彙’’ACE抑制劑’’包括，但不限於， CIBACEN、苯那普利（benazepril)、enazepril (LOTENSIN)、卡托普利（captopril)、依那普利（enalapril)、福辛普利 (fosinopril)、賴諾普利（lisinopril)、莫西普利（moexipril)、口奎那普利（quinapril)、雷米普利（ramipril)、培多普利 (perindopril)、及群多普利（trandolapril)。其他醫藥活性劑包括，但不限於，植物生物驗、激素試劑及拮抗劑、生物反應修飾劑（較佳為淋巴因子及干擾素）、反義寡核苷酸或募核苷酸衍生物；或是雜項試劑或是具有其他或未知作用機制之試劑。在其中提供引述專利申請案或科學出版品之各個情形中，特別係有關其分別所請之化合物以及其中實施例之終產物時，該等終產物、醫藥製備物、以及請求項之標的物於此藉由參考此等出版品而納入本申請案之中。其同樣涵括其中所揭示之對應立體異構物，以及對應之經以修飾物，如，溶劑合物及多態物。用以作為本文所揭示之組合 119679.doc -130- 200815470 之組成份之化合物可如該等引述文獻中所述者分別進備及投藥。 . '、馬數子叙性名稱、或商標名稱所辨識之該等活 f生d之結構可係取自標準全書”The Merck Index”之實際編纂内谷或係取自資料庫’如，⑽al，如， IMS World Publicati〇ns，或是上文及下文所提及之出版品。其對應之内容於此併入本文作為參考。咸將可明瞭，關於組成份⑷及(b)之參照亦欲包括任何 /舌f生物貝之醫藥可接受性鹽。如由組成份⑷及/或⑻所包含之活性物質具有，例如，至少一個鹼性中心，其可形成酸加成鹽。如需要，亦可形成具有額外存在之驗性中心之對應性酸加成鹽。具有酸性基團（如，COOH)之活性物質可/、鹼形成鹽。組成份（a)及/或（b)所包含之活性物質或其醫藥可接受之鹽亦可以水合物之形式使用，或是包括其他用於進行結晶之溶劑。 Φ 因此，在第一範疇，本發明係關於在哺乳動物體内（較佳係人類病患）預防或治療增殖性疾病或是由持續性之血管新生作用所引發疾病之方法，其包含以醫藥有效量之下列組合同時或順序治療該病患： (a) —種〇_1^^1:抗體拮抗劑組合物；以及 (b) —種醫藥活性劑。在一較佳具體實例中，本發明提供一種醫藥製備物，其包含： (a) —種c_Met抗體拮抗劑組合物；以及 119679.doc -131- 200815470 (b) —或多種醫藥活性劑，其係選自芳香化酶抑制劑；抗雌激素，抗雄激素；戈那瑞林（g〇na(j〇relin)激動劑；拓撲異構酶I抑制劑；拓撲異構酶^抑制劑；微管活性劑；烷化劑；抗腫瘤新生性抗代謝物；鉑化合物；可導向/降低蛋白或月曰貝激酶活性或是蛋白或脂質鱗酸酶活性之化合物，抗企管生成化合物；可誘發細胞分化反應之化合物；單株抗體；環加氧酶抑制劑；雙膦酸鹽；類肝素酶抑制 ’生物反應修飾劑；Ras癌基因同種型之抑制劑；端粒酶抑制劑；蛋白酶抑制劑；基質金屬蛋白酶抑制劑；甲硫胺酸胺基肽酶抑制劑；蛋白體抑制劑；可導向、降低、或抑制Flt-3活性之化合物；HSP90抑制劑；抗增殖抗體； HDAC抑制劑；可導向、降低、或抑制絲胺酸/經丁胺酸 mTOR激酶之活性/功能之化合物；促生長素抑制素受體抬抗劑；抗白血病化合物；腫瘤細胞損傷方法；EDG結合劑；核糖核菩酸還原酶抑制劑；S-腺苷甲硫胺酸脫羧酶抑制劑；VEGF或VEGFR之單株抗體；光動力療法·，血管抑制性類固醇；含有皮質類固醇之植入物；AT1受體抬抗劑；以及ACE抑制劑。組成份（a)及（b)之任何組合、包含投藥此兩種組成份之治療溫血動物之方法、包含此兩種組成份以進行同時、分離、或接續使用之醫藥組合物、使用該組合以延遲增殖性疾病之進展或對其進行治療或是製造此等目的用之醫藥製備物之用途、或是包含此種組成份0)及（1>)之組合之商業產品’其皆如上文所提及或定義，將在後文中亦稱為本發 119679.doc -132 - 200815470 ::::=因此’此一辭彙係指各個此等具體實例，其因此可在適當處取代此一辭彙）。 έIw之可’如’以二或多種活性成分之-種固定組合之形式進行，或是藉由同時疋 ^ Λ, έθ , 才仅杲一或夕種獨立調配之成伤而進行。接續性之使用（投#)& 藥-餘合中之_(❹）種組成份，並在一個不 5日守間點投藥其他組成份，盆係a f # /、係以長期父錯之方式進

丁 ‘者’其可使該組合顯示出較獨立投藥之單一化合功效（特別係顯示協同作用）。分離之使用（投藥） :广謂在不同之時間點彼此獨立投藥該組合之諸等組 :’較佳者係意謂組成份⑷及⑻之投藥係使其並無以 $方式（同時）存在之兩化合物可測量性血液含量之重疊 ί月形0 能同：：二或多種接續、分離、及同時投藥之組合亦係可 =車乂佳者，其可使該等組合組成份藥物顯示結合之治療用騎用係超過可在以極大之間期獨立使用該等組合 ^伤藥物（因而並不可在其治療功效上發現交互作用）時 t見之作用，協同作用係特別較佳者。浐广本文中，辭彙”延遲進展”意謂對該病患所進行之組合之^ ^在第次顯示具有欲治療疾病或是欲治療疾病復發、’或早翊進行，其中，病患係，如，經診斷具有對應疾病之俞-V b 7式’或者該等病患係處於，如，醫藥治療過程之狀怨或是由意外產生之狀態下，而在該等狀態下其可能發展出對應之疾病。 H9679.doc -133- 200815470 "結合治療活性"或"結合治療作用”意謂該等化八別（以長期交錯之方式，特別係序列專—性之方可刀樂’其投藥間期使其在欲治療之溫血動物體内，特類體内，較佳仍可顯示（較佳為協同性之）交互特:糸人 ^用)。其是否為此種情形特別可藉由追縱血液在二二可顯示兩種化合物至少在部分之時間期中同：存在於欲治療人類之血液中。、存 "醫藥有效性”較佳係關於對抗增殖效量’或者較廣義者亦係關於其預防有效量發展之治療有在本文中，辭彙"商業包裝"或"產品件套組"，其使上"…… 竹特別疋義-種"部、、吏文所疋義之組成份（a)及（b)可獨立批十r 或者’可藉由使用獨特量之組成份⑷及㈨之：：’ 合而進行投劑，亦即，可同時或在不同之時5疋組劑。同時，此等辭囊包含一種商業包點進行投結合）組成份从一匕έ (特別係 b作為活性成分，同時亦包含用以力遲增殖性疾病之進展或是其料上料 ^在延 (較佳者係以時間特定性之序列以長期交 γ、順序或是(較不佳者)分離使用之指式進仃)、件可，如，同砗者该邛件套組之部 y 或疋以長期交錯之方式進行投筚 =同之時間點進行，且就該部件套組二相同或不同之間期。極度較佳者兮梦了。卩件具有使該等部件之結合使用對於經治㈣經選擇，以使用組成份⑷及咐之任一者時可取:用大於可在僅標準方法所判定者)。在該組合製;之=(如可根據表爾物中，組合配對物（a) U9679.doc -134- 200815470

對物⑻之總含量比例可各有不同，如，為應付欲 >口療病患次族群之需求，或是應付單—病患之需求，該等不:之需求可係由該等病患之特定疾病、年齡、性別、體重等而造成。較佳者’丨中具有至少一種有益作用，如，互相增強組合配對物⑷及（b)之仙，特㈣大於加合性 :作用，其因此可分別使用較在無組合之情形下僅以個別樂物進行治療時所能耐受者之更低劑量之各個該等組合藥物而達成此種有益作用，同時產生額外之較佳作用，如，較低之副作用，或是以無效劑量之組合配對物（組成份）⑷ 及（b)中之-或兩者產生結合性之治療作用，且極度較佳者係產生組合配對物（a)及（!)）之強協同作用。在使用組成份（a)及（b)之組合以及使用該商業包裝兩者之情形下，任何組合之同時、順序、及分離使用皆係可能者，意謂組成份（a)及（b)可在一時間點同時投藥，接著可以長期之方式（如，超過3_4週之每日投劑）、在一較晚之時間點僅投藥具有較低宿主毒性之其中一種組成分，後續再在一又更晚之時間點投藥另一組成分或是兩種組成份之組合（在後續之藥物組合治療療程中，以取得最佳之抗腫瘤作用），或是類似者。本發明之組合亦可結合其他治療使用，如，手術干預、熱療、及/或放射療法。本發明之醫藥組合物可以習知之方法製備，且係適於對哺乳動物（包括人類）進行腸内投藥（諸如，口服或經直腸）以及腸外投藥者’其包含治療有效量之VEGF抑制劑以及 119679.doc -135- 200815470 至少一種醫藥活性劑’單獨存在或結合一或多種醫藥可接受之載體，特別係適用於腸内及腸外應用者。該等醫藥組合物特別包含自約0.00002至約ι〇〇%之活# 組成份，如，就可即時使用之灌注稀釋液而言，其係 0.0001至0.02%，或者，如，就注射或灌注濃縮液或特別係腸外調配物而言’其係自約〇· P/0至約95%，較佳者係自約1%至約90%，更佳者係自約20%至約6〇%(在各情形下皆係重量對重量比）。本發明之醫藥組合物可，如，以單元劑形形式存在，諸如，以安瓶、小瓶、糖鍵袋、或膠囊之形式存在。用於本發明調配物中各組合配對物之有用之特定化合物或醫藥組合物、投藥之途徑、欲治= 況、以及該欲治療病況之嚴重性而各異。具有—般技藝之酉師、臨床醫師、或獸醫可輕易掌丨 ^易判疋欲預防、治療、或抑制該病況發展所需之各活性成份有效量。

TyrphGstins，特別_aphGstin，較佳可以約卜議毫克/天範圍之劑量而對溫血動物一動物進仃杈樂，特別係人類，更"[土係 2 5 - 5 0 0 0 毫克 / 夭，is? , 取‘係5〇-4〇〇〇毫克/天。除非在本文中另外指明’化合物較係自1-4次。甘大杈桌自1至5次，特別用以進行腸内或腸外投筚如，以i + 柰之、、'σ合療法之醫藥製備物係，如以早το劑形存在者，劑，且尚可盔忠郎如，糖衣錠劑、膠囊、或栓尚了為女瓿。如未指明以習知方式製備，如H:、月形’此等調配物係精由省知之混合、成粒、糖衣蜜 H9679.doc -136- 200815470 旻'合解、或凍乾方法。咸將可明瞭，勹人劑中之組合配對物單元含量本身並不需2於各劑形之各為所需之有效量可藉由投藥複數之劑成有效量，因技藝t具有判定組合組成份之適當醫藥有：?：熟習車“土者，該等化合物或其醫藥可接受％囊、或糖漿形式之口服殺筚，耐& 现係以錠劑、膠 4之口服酉樂调配物而進行投為適當，可仅+，或者，如、田了以知外注射之形式進行投藥。在製備口服投藥用之組合物時，使之基質，諸如，水、甘法^ 了使用任何醫藥可接受南，、類、醇類、調味劑、防腐 :去者色劑。醫藥可接受之載體包括i粉、糖類、微曰纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、連結劑、崩解劑義、夜==之溶液’亦包括懸浮液’且特別係等張水性溶液或芯汙液，可用於進行該 f A分之腸外投藥，此等溶液戍㈤汁液特別可在使用前為武社人殺# 予1備，如，就包含單獨存在或、、、口 a西樂可接香^►截麟/, + J接又之載體(如’甘露糖醇)之該活性成分之滚乾性組合物而言。兮笪較 μ等百▲組合物可經滅菌及/或可包含賦形劑，如，H大廢兔丨 _ 方腐Μ、女錠劑、溼潤劑、及/或乳化劑、助溶劑、用以調節渗透屢之鹽、及/或緩衝液，且其係亦其已知之方式掣傷 ^ 、裏備如’耩由習知之溶解或凍乾方法。該等溶液或懸浮液可包含黏性增加性物質，諸如，羧曱基纖維素納、m甲基纖維素、葡聚糖、聚乙料略咬酮、或明膠。在油中之懸浮液可以慣常用於注射目的之植物油σ成n或是半合成性油作為其油組成份。等張劑可選自技藝t所已知之任_者，如，甘露糖醇、 119679.doc -137- 200815470 可以水性基質稀所欲在該灌注溶 >谷液可含有其他，諸如，抗氧化右旋糖、葡萄糖、及氯化鈉。灌注調配物釋。作為稀釋劑之所用水性基質量係根據液中取得之活性組成份濃度而選擇。灌注常用於欲經靜脈投藥之調配物中之賦形劑。 =明尚係關於"結合製備物"，其在本文中係特別定義 p件套組"，其使上文所定義之組合配對物⑷及（b) :獨立投劑，或者，可藉由使用獨特量之組 (，不同固定組合而進行投劑’亦即，可同 ) ^點進行投劑。接著，該部件套組之部件可，如，同時杈樂，或是以長期交錯之方式進行投藥，亦即，在不同之時間點進行投藥，且就該部件套組之任何部件具有相同或不同之間期。在該組合製備物中所投藥之組合配對物⑷對 =合配對物（b)之總含量比例可各有不同，如，為應付欲治療病u群之需求，或是應付單一病患之需求，根據該病患所經驗之任何副作用之嚴重性而定。本發明之用途及方法本發明之抗體（以及免疫共輛物及雙專一性分子）具有體外及體内之诊斷及治療用途。舉例而言，此等分子可對培養之細胞進行投藥，如，體外或體内，或是在一對象體内投藥，如，體内，以治疼、 /、預防、或移斷各種疾病。在本文中，辭彙"對象，，係意欲包括人類及非人類之動物。非人類之動物包括所有脊椎動物，如，哺乳動物，諸如，非人類之靈長類、羊、狗、猶、牛、馬、雞，及㈣㈣物， 119679.doc -138- 200815470 諸如’鳥類、兩棲類、及減類。該等方法特別適用於治療具有與異常之c-Met表現相關之疾病之人類病患。當對於c-Met之抗體係結合其他試劑投藥時，該兩者可以順序或同時之方式進行投藥。在一具體實例中，本發明之抗體（以及免疫共輛物及雙專一性分子）可用於偵測c_Met之含量，或是含有c_Met之細胞之含量。此種偵測可藉由，例如，使一樣本（諸如，一體外樣本）及一控制組樣本接觸該抗c_Met抗體，其接觸條件可使其在該抗體及C-Met間形成一複合物。偵測在該抗體及c-Met間所形成之任何複合物，並比較該樣本及該控制組。舉例而言，可使用本發明之組合物而進行技藝中所熟知之標準偵測方法，諸如，ELISA及流式細胞計數分析。因此，在一範疇中，本發明尚提供用以偵測樣本中 c-Met(如，人類c_Met抗原）存在之方法，或是測量^%“含里之方法，其包含使該樣本、以及一控制組樣本，接觸本發明之抗體，或其抗原結合部分，其可專一結合c-Met，其接觸條件使其可在該抗體或其部分與c_Met間形成複合物。接著偵測複合物之形成，其中，在比較該樣本與該控制組樣本之複合物形成時所取得之差異即可指出c-Met存在於該樣本中。亦涵括於本發明範圍中者係套組，其包含本發明之組合物（如，抗體、人類抗體、免疫共軛物、及雙專一性分 )以及使用之指示。該套組尚可含有至少一種其他試 119679.doc -139- 200815470 劑，或是一或多種其他本發明之抗體（如，具有互補活性而可結合目標抗原上迥異於該第一抗體之抗原表位之抗體）。套組一般而言包括指明該套組内容之目標用途之標籤。辭彙標籤包括任何提供於該套組上或是其中，或是以其他方式附隨該抗體之文字或記錄物質。本發明已經完整敘述，且其由下例之實例及請求項再做進一步之說明，其僅係用以說明而非進一步提供限制。熟習技藝者將可在不使用超出慣常實驗之情形下明瞭或可確認本文所述特定流程之諸多同等物。此等同等物係屬於本發明及請求項之範圍。在此申請案中索引述之所有參考文獻之内容，包括既經核准之專利及既經公開之專利申請案，皆於此併入本文作為參考。實例實例1 :自HuCALGOLD®庫產生人類c-Met-專一性抗體對抗人類c-Met蛋白之治療性抗體係藉由使用一種商業可取得之噬菌體展示庫MorphoSys之HuCAL GOLD®庫中之抗體變體蛋白之來源，選擇具有高結合親和力之純系而產生。HuCAL GOLD⑧係一種 Fab庫（Knappik et al·，2000 J. Mol. Biol. 296:57-86 Ϊ Krebs et al., 2001 J Immunol. Methods 254:67-84 ； Rauchenberger et al.? 2003 J Biol Chem. 278(40)··38194_38205)，其中所有之 CDRs 皆經適當之突變而衍化，且其係使用術而使Fab片段與噬菌體之表面連結（WO 01/05950 L5hning 2001)。一般性流程：噬菌質體拯救、噬菌體擴增、以及純化 119679.doc -140- 200815470

HuCAL GOLD⑧庫係在含有34微克/毫升氯黴素及1%葡萄糖（2xYT-CG)之標準豐富細菌培養基（2xYT)中進行擴增。在以VCSM13輔助噬菌體感染ODeoGnm值為〇.5之細胞之後 (在無震盪之情形下使該細胞與噬菌體之混合物在37°C下進行恆溫共置30分鐘，接著再以250 rpm進行震盪而在37 °C下進行恆溫共置30分鐘），離心細胞（4120 g ; 5 min ; 4 °C)，使其再懸浮於2xYT/34微克/毫升氯黴素/50微克/毫升卡那黴素（kanamycin)/0.25 mM IPTG中，並使其在22°C下進行生長。在此期間之終點，離心以除去細胞，再自上清液中對噬菌體進行兩次PEG-沈澱，使其再懸浮於PBS/20% 甘油中，並貯存於-80°C。如下進行兩淘選循環間之噬菌體擴增：以噬菌體感染中對數相之大腸桿菌TG1菌株細胞，其在以c-Met蛋白進行選擇後予以溶析，再使其在添加1°/❻葡萄糖及34微克/毫升氯黴素之LB-瓊脂上（LB-CG盤）進行塗盤。使該等培養盤在30 °C下隔夜進行恆溫培養後，將細菌菌落自該瓊脂之表面刮下，並用於接種2xYT-CG液態培養基，以取得0.5之OD6()() nm 值，接著加入VCSM13輔助噬菌體以取得如上所述之生產性感染。使用Str6p-Tactin磁珠之溶液淘選預實驗

Strep-tag II已經報告具有對於Strep-Tactin基質之低親和力（KD〜1 μΜ，根據（Voss and Skerra，1997 Protein Eng. 10:975-982)，因此，可進行一項預實驗，以評估在抗體選擇之過程中使用Strep-Tactin-塗覆性MagStrep珠捕捉抗原 119679.doc -141 - 200815470 之適當性，且亦避免淘選過程中之抗原流失。為此，在室溫下，使8毫克之MagStrep珠與46微克之His-Strep-標記性c-Met進行恆溫共置1小時，接著將該樣本分裝至4個經預阻斷之微量離心管.中。其中一管係作為陽性控制組（不經清洗），而另外三管則以根據HuCAL GOLD®手冊淘選部分之不同嚴格性而進行清洗。His-Strep·標記性 c-Met 與MagStrep 珠（Strep-Tactin塗覆性磁珠，取自 IBA， Gottingen，Germany)之結合積測係在BioVeris中以羊抗-c_Met抗體及铷標記性抗羊偵測抗體而進行。如本文圖式所示，在比較未經清洗之珠與經不同 HuCAL®嚴格性清洗之珠時，並未偵測到Stfep-Tactin塗覆性珠之顯著His-Strep-標記性c-Met流失。因此，該His-Strep-標記性c-Met似乎適用於以Strep-Tactin塗覆性磁珠 (MagStrep珠）所進行之溶液淘選。自該庫中藉由e-Met-專一性抗體之淘選而進行選擇為選擇可辨識人類c-Met之抗體，應用兩種淘選策略。概略言之，其將諸等HuCAL GOLD®噬菌體-抗體分為四種包含不同VH主基因組合之集合物（集合物1含有VH1/5 λκ;集合物2含有VH3 λκ;集合物3含有VH2/4/6 λκ;且集合物4含有VHl-6 λκ)。對此等集合物分別進行兩循環之溶液淘選，使用捕捉於StrepTactin磁珠上（Mega Strep珠； IBA)之His-Strep-標記性c-Met，且僅就第三選擇循環，使用捕捉至StrepTactin磁珠上之His-Strep·標記性c-Met，或是使用捕捉至具有生物素化抗-APP抗體之鏈黴親和素珠 119679.doc -142- 200815470 (Dynabeads®M-280鏈黴親和素；Dynal)上之APP-標記性人類c-Met蛋白。特定言之，就使用偶合StrepTactin磁珠之His-Strep·標記性c_Met之溶液淘選而言，應用下列流程：在4°C下，以經 PBS進行1:1稀釋之1.5毫升2x ChemiBLOCKER進行隔夜處理以製備預阻斷管（1·5毫升微量離心管）。如下處理而製備預阻斷珠：以580微升之PBS清洗580微升（28毫克之珠）之 StrepTactin磁珠一次，再使其再懸浮於580微升之lx ChemiBLOCKER (經1倍體積之lx PBS稀釋）中。在4°C下，於該等預阻斷管中隔夜進行珠之阻斷。就各個淘選條件，使以PBS稀釋至500微升終體積之噬菌體顆粒與500微升之2x ChemiBLOCKER/O· 1% Tween混合，再在轉輪上置於室溫下1小時。進行兩次噬菌體顆粒之預吸收，以除去StrepTactin或是珠結合性嗤菌體：將160 微升經阻斷之StrepTactin磁珠（4毫克）加入經阻斷之噬菌體顆粒中，再在轉輪上於室溫下進行恆溫共置30分鐘。在以磁性裝置（Dynal MPC-E)分離該等珠後，將該噬菌體上清液（〜1.1毫升）移置至新的經阻斷反應管中，再使用160微升之經阻斷珠重複進行預吸收30分鐘。接著，將His-Strep-標記性c-Met (其可為400 nM或100 nM)加入置於新的經阻斷1.5毫升反應管中之經阻斷嗟菌體顆粒中，再在轉輪上於室溫下對該混合物進行恆溫共置60分鐘。分別使用加入該400 nM或100 nM噬菌體淘選集合物中之 320微升或160微升之經阻斷StrepTactin磁珠而捕捉嗟菌體- 119679.doc -143 - 200815470 抗原複合物，接著在轉輪上於室溫下對其進行恆溫共置20 分鐘。以該磁性顆粒分離器再次收集連結於該等 StrepTactin磁珠上之嗤菌體顆粒。接著，以PBS/0.05% Tween (PBST)清洗該等珠七次，再僅以PBS清洗三次。在各管中加入200微升於10 mM Tris-HC1，pH 8.0中之20 mM DTT處理10分鐘，以自該等 StrepTactin磁珠上溶析嗤菌體顆粒。收集該溶析液，再以 200微升之PBS清洗該等珠一次，並將該PBS溶析液加入該 Φ DTT溶析液中。使用此溶析液樣本以感染14毫升已於先前生長至0060〇謂值0.6-0.8之大腸桿菌TG-1培養物。在進行感染並接著以5000 rpm離心10分鐘後，使各個細菌沈澱物再懸浮於500微升之2xYT培養基中，使其在 2xYT-CG瓊脂盤上進行塗盤，再在30°C下隔夜進行恆溫培養。第二天早上，將所得之菌落自該等培養盤上刮下，再如上所述以拯救及擴增製備噬菌體。第二循環之His-Strep-標記性c-Met溶液淘選係根據第一 ® 循環之流程進行，惟其係使用漸減含量之抗原（50 nM，及 10 nM)，且該清洗流程之嚴格性亦經適當變更。使用兩種不同之淘選策略以進行該第三選擇循環：將第二淘選循環之擴增噬菌體結果分為兩半並接受兩種不同之淘選條件處理。第一半之噬菌體結果係用於如上所述進行使用捕捉至StrepTactin珠上之人類His-Strep-標記性c-Met 之標準淘選策略（抗原量分別係1 0 nM或1 nM)。第三選擇循環之第二種淘選變化係以人類APP-標記性Ο- ΐ 19679.doc -144- 200815470

Met進行。使終濃度為50 nM或10nM之APP-標記性c-Met 蛋白與1毫升預經澄清之第二循環噬菌體顆粒混合，再使該混合物在轉輪上於室溫下進行恆溫共置1小時。同樣的，使8毫克之預阻斷Dynabeads M-280鏈黴親和素（Dynal) 與40微克之生物素化小鼠抗-APP抗體在轉輪上於室溫下進行恆溫共置30分鐘，接著再進行兩步驟之PBST清洗。在室溫下，以該抗-APP塗覆性M-280鏈黴親和素磁珠捕捉由連結APP-標記性c-Met之噬菌體-抗體所構成之預形成性複 ® 合物3 0分鐘。如上所述進行嗟菌體之溶析及擴增。可溶性Fab片段之次選殖及表現將該所選HuCAL GOLD®噬菌質體中之Fab-編碼性插入物次選殖至表現載體pMORPH®X9—Fab_FH中（參見圖式），以協助可溶性Fabs之快速及有效表現。就此目的，以限制酶核酸内切酶ΧδαΙ及五coRI對該等所選純系之質體DNA進行酶切消化，因而切出該Fab-編碼性插入物（ompA-VLCL 及phoA-Fd)。接著將此插入物選殖至經五coRI酶切消 ^ 化之表現載體pMORPH®X9—Fab 一 FH中。自此載體表現Fab蛋白，且其因此帶有兩個C-端標記（分別為FLAG™及6xHis)而可進行偵測及純化。

HuCAL GOLD® Fab抗體於大腸桿菌中之微表現為取得足夠量之由各個如上取得之純系編碼之蛋白，在將該所選之Fabs次選殖至pMORPH®X9^Fab—FH表現載體中後，選擇氣黴素抗性之單一細菌菌落。接著使用各個此等菌落接種一無菌96孔微滴定盤之各孔，其中各孔含有每孔 119679.doc -145- 200815470 100微升之2xYT-CG培養基，並使該等細菌在37°C下隔夜進行生長。將各大腸桿菌TG-1培養物之樣本（5微升）移置至一新的無菌96孔微滴定盤中，該盤已經預充填有每孔 100微升之添加34微克/毫升氯黴素及0.1%葡萄糖之2χΥΤ培養基。在微試驗盤振盪器上以400 rpm進行震盪而使該等微滴定盤在30T：下進行恆溫共置，直到該等培養物呈輕微混濁（〜2-4小時）而具有約〇·5之OD60Q nm值為止。就以此等試驗盤形式所進行之表現而言，在各孔中加入 20微升之添加34微克/毫升氯黴素及3 mM IPTG (異丙基-β-D-硫代半乳糖哌喃糖苷）之2χΥΤ培養基（終濃度0·5 mM IPTG)，以透氣膠帶密封該等微滴定盤，接著在400 rpm之震盪下於30°C隔夜進行恆溫共置。全細胞裂解物（BEL萃取物）之產生在該等表現盤之各孔中，加入40 μΐ微升之含有2.5毫克/ 毫升溶菌酶之BEL緩衝液（2xBBS/EDTA : 24.7克/升硼酸、 18·7克NaCl/升、1.49克EDTA/升，pH 8.0)，再使該等盤在微滴定盤振盪器上（400 rpm)於22°C下進行恆溫共置1小時。使用該等BEL萃取物而進行FMAT結合分析（參見實例 2)。微克量之HuCAL GOLD® Fab抗體於大腸桿菌中之表現及純化在50毫升之塑膠管中進行由ρΜΟΪΙΡΗ®Χ9 JFab_FH所編碼之Fab片段在大腸桿菌TGI F-細胞中之表現。就此目的，使經單一純系接種之預培養物在30°C下於2xYT-CG培 119679.doc -146 - 200815470 養基中隔夜進行生長。第二天早上，使用50微升之各個預培養物接種置於無菌50毫升塑膠管中之25毫升之添加34微克/毫升氯黴素、1 mM IPTG、及0.1%葡萄糖之2xYT培養基，再在30°C下隔夜進行恆溫培養。收集大腸桿菌細胞，冷凍該等細胞沈澱物，最後再以Bug Buster (Novagen)進行破壞。使用 Ni-NTA瓊脂糖（Qiagen，Hilden，Germany)而分離該等Fab片段。毫克量之HuCAL GOLD® Fab抗體於大腸桿菌中之表現及純化在搖瓶培養物中，使用750毫升之添加34微克/毫升氯黴素之2xYT培養基，進行由pMORPH®X9_Fab_FH所編碼之 Fab片段在TGI F·細胞中之表現。在30°C下震盪該等培養物，直到OD6〇〇nm值到達〇·5為止。加入0.75 mM IPTG而誘發表現，再在30°C下進行恆溫培養20小時。使用溶菌酶以破壞細胞，再以Ni-NTA 層析（Qiagen，Hilden，Germany)而分離該等Fab片段。以UV-分光光度計測定蛋白濃度（Krebs et al·，2001) 〇實例2 : c-Met-專一性HuCAL®抗艘之辨識以 Fluorometric Microvolume Assay Technology [螢光測定性微體積分析技術](FMATTM，8200 Cellular Detection System analyzer，Applied Biosystems)，分析由上述之淘選策略選擇之個別大腸桿菌純系BEL萃取物，以辨識編碼c-Met-專一性Fabs之純系。用以偵測取自細菌裂解物之c-Met-結合性Fabs之螢光測定 119679.doc -147- 200815470 性微體積分析技術基礎性分析（FMAT) 為偵測取自大腸桿菌裂解物（BEL萃取物）之c-Met-結合性Fab抗體，以FMAT 8200細胞偵測系統（Applied Bio systems)分析結合。為使His-Strep·標記性c-Met偶合至 M-450環氧珠（Dynal)上，將300微升之M-450環氧珠 (1.2xl08個珠）樣本移置至一反應管中，再以磁性顆粒分離器捕捉。除去該上清液，再以1毫升之100 mM磷酸鈉緩衝液（pH 7·4)清洗四次。為進行抗原塗覆，將60微克之His-Strep-標記性c-Met加入該珠於1 50微升1 00 mM磷酸納緩衝液（pH 7.4)中之懸浮液中。使該抗原-珠懸浮液在轉輪上於室溫下進行恆溫共置16小時。接著以PBS清洗該等經塗覆之珠三次，並使其再懸浮於終體積250微升之PBS中。就各個384·孔試驗盤，製備含有3% BSA、0.005% Tween-20、4微升c-Met-塗覆性珠（1·9χ1 06個珠）、及4微升 Cy5TM偵測抗體之20毫升PBS混合物。將每孔45微升之此溶液樣本分配至一 384•孔之FMAT黑色/透明底試驗盤 (Applied Biosystems)中。在各孔中加入含Fab之BEL萃取物（5微升）。使該等FMAT盤在室溫下隔夜進行恆溫共置。第二天早上，以8200細胞摘測系統（Applied Biosystems)分析該等試驗盤。取得陽性純系，並針對在FMAT中可產生陽性、專一性信號之純系之重及輕鏈序列進行分析。其辨識出獨特（非豐餘性）之抗-c-Met純系，其顯示具有對於人類-c-Met之足夠強性結合。使此等純系進行表現、純化，再在功能分析 119679.doc -148- 200815470 中試驗其親和力。使用表面胞質基因組共振測定納莫耳濃度單位之親和力

使用此等純系，在已使用標準之EDC-NHS胺偶合化學而經10 mM醋酸鈉（pH 4.5)中之〜400 RU密度之重組人類 c-Met塗覆之CM5晶片（Biacore，Sweden)上，進行動力學 SPR分析。在該參照流動池上固定相當量之人類血清白蛋白（HSA)。使用 PBS (136 mM NaCn、2.7 mM KCn、10 mM Na2HPO4、1.76 mM KH2P04 pH 7.4)作為運作緩衝液。以 20微升/分鐘之流速，加入16-5 00 nM濃度系列之Fab製備物。締合相係設定為60秒，而解離相設定為120秒。對於人類c-Met之nM單位親和力摘要示於本文之表1中。表1 ·所選Fabs對於人類c-Met之親和力抗體 KD [nM]人類 c-Met BlAcore 4536 1.4 4537 1.7 4541 2.6 4682 11.2 4687 0.8 4690 66.0 實例3 :結合親和力之量性分析：可結合全長c-Met之抗人類c-Met Fab候選者之判定親和力之測定為進一步定性諸等抗-c-Met抗體，測定其對於全長人類及獼猴c-Met之親和力。對GTL16、過表現獼猴c-Met之 119679.doc -149· 200815470 CHO細胞、或恆河猴4MBr-5細胞進行清洗、胰蛋白酶處理、再懸浮於4°C之含有3% FCS之PBS (3% FCS/PBS)中。將2-5x105個細胞/樣本再懸浮於140微升含有5微克/毫升純化抗-c-Met Fabs或其系列稀釋物之3% FCS/PBS中。作，陽性控制組，使用5微克/毫升之D024(小鼠IgG2a)抗-人類 c-Met抗體。在4°C下，對該等細胞進行恆温培養30-60分鐘，之後再在4°C下以2000 rpm (716g)離心2分鐘以進行沈澱，並以200微升之冰3% FCS/PBS清洗。藉由離心再次沈澱此等細胞，再溫和除去該PBS。將細胞再懸浮於100微升以3% FCS/0.02% NaN3/PBS進行1:200稀釋之山羊抗人類 IgG(H+L)PE 共軛物（Jackson Cat No· 109-116-088);為作為陽性控制組，使用以3% FCS/PBS進行1:200稀釋之山羊抗小鼠 IgG (H+L)-PE共軛物（Jackson Cat No. 115-116-146) 〇在4°C下，對樣本進行遮光恆溫培養30-60分鐘。在進行離心並以200微升之3%FCS/0.02%NaN3/PBS清洗後，將該等細胞再懸浮於100微升之3% FCS/PBS中，並使用FACS-陣列或FACS-Calibur進行分析。對於人類及獼猴c-Met之摘要親和力數據示於本文之表 2。示於表2之全部六種試驗Fabs皆發現對於人類c-Met具有低於100 nM之親和力。同時，九種純系可產生具有低於 10 nM親和力之抗體。在所有之試驗情形中，對於獼猴及小鼠c-Met之親和力皆幾乎與其對於人類c-Met之親和力相同0 119679.doc -150- 200815470 表2.所選Fabs對於人類、恆河猴、及獼猴c-Met之親和力數據 \ 抗體 -—-.. KD[nM] 人類c-Met GTL-16 KD [nM]獼猴 c-Met CHO-cMet 獼猴 KD[nM]恆河猴 c-Met 4MBr-5 4536 0.4 0.5 0.1 4537 2.6 ND 0.1 4541 0.5 ,ND 0.1 4682 12 0.3 0.3 4687 5.7 1.1 1.2 4690 1.1 ND 0.1 • 實例4 : HuCAL®免疫球蛋白之製備轉化成為IgG形式抗體中介性二聚化作用可造成酪胺酸激酶活性之激動性活化作用。因此，將Fabs (根據結合經純化c-Met而選擇）轉化成為IgG形式。為表現全長免疫球蛋白（Ig) ’自 pMORPH⑧X9—FH Fab表現載體，將重（VH)及輕鏈（VL)之可變區域片段次選殖至pMORPH®_h_Ig或pMORPH$2—h_Ig載體系列中，以產生人類IgGl及人類IgG4。使用限制酶 • EcoRI、M/el、及而進行 VH域片段進入pMORPH ⑧—h—IgGl 及pMORPH®_h_IgG4之次選殖。使用限制酶M/el及5//71而進行 VH域片段進入 pMORPH®2JiJgGlf及 pMORPH®2—h—IgG4之次選殖。Vl域片段進入pMORPH'h—IgK 及 pMORPHhji—IgK 之次選殖係使用五coRV及位點進行，而進入 pMORPH®_h—IgX及pMORPH®2—h—IgX2之次選殖貝丨J係使用 EcoRV反Hpal而完成。人類IgG之瞬時表現及純化 119679.doc -151- 200815470 以等莫耳濃度K之IgG重及輕鏈表現載體轉染HEK29Ws 胞。在轉染後之第4或5天，收集細胞培養物之上清液。在將該上清液之pH值調整至8·〇並進行無菌過濾後，對該溶液進行標準之Α蛋白管柱層拚（p〇r〇s 2〇A，pE Bi〇systems)。將母Fabs轉化成為IgGl及IgG4形气與親和力熟化之起點相η %问，將插入物選殖進入 pMORPH® h IgGl pMORptr® W、h_IgG4表現載體中。以 HEK293細胞之瞬時轉染進杆，丨θ 订小量之表現，再自該細胞培養物上清液中純化該等全長免疫球蛋白。辨識可調節e-Met依賴性増殖作用之抗_人類卜Met igG候選者接著將選自HuCAL GOLM庠之所得不同c_Met_專一性抗體轉化成為IgG形式，並試殮其抑制HGF驅動性增殖作用之強度。使用4MBr-5細胞在HGF激發下之Brdu納入分析而評估各個所選純系之功能活性。於96孔平底組織培養處理盤中 (Costar，#3610)’在100微升/孔總體積之添加1〇%

Ham’s F12K中’以每孔3xl03個細胞之密度，對4mb卜5細胞進行平板培養。在5% C〇2大氣下，於37t對該等試驗盤進行恆溫培養2小時，之後加入5〇微升含有待試驗純化抗體之培養基。作為缺乏調節作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c-Met抗原表仅決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在5% C〇2大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養1小時，之後加入單獨50微升之 119679.doc -152- 200815470 培養基或是含有HGF之50微升（如，0.5微克/微升至約50納克/毫升）。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養72小時，之後使用細胞增殖ELISA，BrdU-分析 (Roche) Cat No· 1 669 915而分析BrdU之納入。簡言之，加入20 μΜ/孔之BrdU溶液（#1)，再在5% C02大氣下，於37 °C對該等試驗盤進行恆溫培養22小時。溫和除去培養基，再在60 °C下乾燥該等試驗盤1小時。加入200微升之 FixDenat (溶液#2)，再在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恆溫培養30分鐘。溫和除去該溶液，再加入 100微升/孔之抗-BrDU作用溶液。在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恆溫培養90分鐘。溫和除去該溶液，再以250微升之清洗溶液清洗該等試驗孔三次。溫和除去該溶液，再加入100微升/孔之受質溶液，在A405 nm 測量該等試驗盤。 EC50之測定顯示可對具有最高c-Met親和力之抗體純系產生對於 HGF激發性增殖作用之50%抑制之有效濃度之數據示於本文之表3中。該數據顯示該有效濃度EC5G係自4 nM起不等，其中數值係介於6及150 nM之間。辨識可調節c-Met依賴性遷移作用之抗-人類c-Met IgG候選者使用NCI-H441細胞，以QCM™化學趨向性8 μΜ 96_孔細胞遷移分析，分析反應HGF激發之細胞遷移。如上所述，在分析前24小時，以無菌PBS清洗細胞兩次，並在5% C〇2 119679.doc -153 - 200815470 大氣下’於37°C ’在含有1% FBrdmem中進行仇餓處理。接著，對該等細胞進行胰蛋白酶消化，再在適當濃度之純化抗體存在下’在3rc下，使其騎毫升i gxi〇6個^ 胞之量進行再懸浮30分鐘。為作為缺乏調節作μ陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有“Met抗原表位決定區無關孓已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在無菌條件下，除去該遷移小室盤之蓋，再在該供料盤 (下層小室）之孔中加入含有50納克/毫升HGF (r&d n〇 294-HGNk15G微升無▲清培養基。心⑼微升與抗體預共置之在含有1% FBS之DMEM中之5_1〇χ1〇4個細胞溫和加广該上層小室中。蓋上該盤’再在4_6% c〇2大氣下，於37 C進行恆溫培養16小時。遵照製造商之指示，除去該上層小室中之細胞/培養基，再將該室置人其中已加入15〇微升/ 孔經預加溫之細胞剝離溶液之96_孔供料盤中。在π。〇下進行怪溫培養3〇分鐘同時予以週期性之溫㈣拌以鬆脫細胞。接著’在該供料盤之各孔中加入50微升經預稀釋之 CyQuam GR染劑。在室溫下對該等試驗盤進行恒溫培養15 分鐘，再將15〇微升之該混合物移至一適用於使用響52〇 nm濾鏡組進行螢光測量之新96-孔盤。顯示可對具有最高c-Met親和力之抗體純系產生對於 HGF激發性遷移作用之5〇%抑制之有效濃度之數據示於本文之表3中。該數據顯示該有效濃度ECs〇係自〇 i4 nM起不等，其中數值係介於0.27及0·61 nM之間。 119679.doc -154- 200815470 表3·所選Fabs之50%抑制有效濃度 EC50 [nM] HGF 驅動性增殖作用之抑制 4MBr-5 EC50 [nM] HGF 驅動性增殖作用之抑制 NCI-H441

1.68 實例5 :由LCDR3及HCDR2盒之平行交換而進行所選抗 Met Fabs之親和力熟化作用為針對母Fab片段之集合物而進行本文所述抗體親和力之最適化，使用处ζ·Ι及办/J除去各母Fab輕鍵之 LCDR3、框架4、及恒定區域（405 bp)，並以經衍化之 LCDR3s結合框架4及該恒定區域之集合組進行取代。使〇.5 微克之該結合集合載體樣本與3倍莫耳過量之帶有該等經衍化LCDR3S之插入物片段進行嫁接。以類似之方法，使用Z/zoI及ΒπΗΙΙ位點衍化HCDR2，並使其連結之框架區域維持恆定。為增加選殖效率，在插入該經衍化之HCDR2盒之前，先以一 590 bp之填充序列取代該母HCDR2。使不同序列庫之嫁接混合物藉由電穿孔而進入4毫升之大腸桿菌 ΤΌΡ10 P 細胞中（Invitrogen，Carlsbad，CA， USA)，因而產生自2x107至2x1 〇8個獨立之純系。如前文所述進行該等序列庫之擴增（Rauchenberger et al·，2003 J Biol Chem. 278(40):38194-38205)。為進行品質管制，對各序列庫隨機挑選數個純系並使用引子CFR84 (VL)及 119679.doc -155- 200815470 OCAL SeqJHp (VH)而進行定序（SequiServe，Vaterstetten， Germany) o 選擇進行親和力熟化之候選者使用下列之特性，選擇六種經選擇之熟化候選者Γ母 Fabs"):對於人類c-Met之親和力低於10 nM，與獼猴c-Met 具有顯著之交叉反應性，EC5〇低於250 nM，在大腸桿菌中具有良好至中度之Fab表現量，及IgG形式在c-Met驅動性增殖作用及遷移分析中之活性。此等候選者之特性列於本文之表4中。表4.所選F ab s之特性抗體 KD [nM]人類 c-Met BIAcore KD [nM]人類 c-Met GTL-16 KD [nM]獼猴 c-Met CHO-獼猴 c-Met Fab表現 [mg/1] EC50 [nM] 4Mbr-5 增殖 IgG EC50 [nM] NCI-H441 遷移 IgG 4536 1.4 1.7 229.1 6.3 4 0.61 4537 1.7 1.5 12.7 7.4 150 0.14 4541 2.6 1.7 0.6 5.3 200 0.27 4687 0.8 4.0 1.3 1·4 6 1.68 產生所選Fab之序列庫以進行親和力熟化為取得具有較高親和力及抑制活性之抗-c-Met抗體純系，對於前一實例所示之所選Fab純系進行進一步之衍化及選擇，此係稱為親和力熟化之過程。就此目的，使用由三核甞酸誘變所重構之對應LCDR3及HCDR2熟化盒而衍化 CDR 區域（\^1*1^1<:&8 6{&1.51994 1^11〇1{1〇人(^(18^^8.22:560()-5607 ; Nagy et al·，2002 Nature Medicine 8:801-807) 〇將取自表現載體pMORPH㊣X9_Fab JFH之Fab片段次選殖 119679.doc -156 - 200815470 至噬菌質體載體pMORPH®25 (參見美國專利第6,753，136 號）中。此種載體可提供在N端融合一半胱胺酸殘基之噬菌體蛋白pill，同時在該Fd抗體鏈上融合一 C端半胱胺酸殘基’因而可使個別之Fab片段在該噬菌體之表面進行雙硫連結性之展示。平行使用兩種不同之策略，以對該等母 Fabs之親和力及功效同時進行最適化。共產生五種噬菌體抗體Fab庫，其中該六種母純系中之五者之LCDR3經由個別輕鏈CDR3序列之集合組置換。（並未進行其中一種純系之LCDR3熟化，因此純系在該等cdR 區域中具有一個額外之办/1限制位點，而5户/1限制酶係用於進行該庫選殖流程。）同樣的，將各個母純系之HCDR2區域以個別重鏈CDR2 序列之集合組置換。其先對各母Fab進行切除並以一 590 bP之填充序列取代。此種DNA填充序列可協助分離經單一酶切消化以及經雙重酶切消化之載體條帶，並在熟化之淘 k過程中降低高親和力母F ab之背景值。在一後續步驟中’可自各個母純系之Fab-編碼性質體中切除該填充序列，並以經高度衍化之HCDR2熟化盒取代。以標準之選殖流程產生具有超過2x107個成員之大型親和力戒化庫’再將該等經衍化之純系轉形進入電感受態之大腸桿菌TOP10F，細胞中（Invitrogen)。如上文所述製備 Fab-呈遞性嗤菌體。建立熟化集合物以協助後續之選擇流程：集合物la係由LCDR3-1庫構成；集合物lb係由HCDR2-1庫 119679.doc -157- 200815470 構成；集合物2a係由LCDR3-2庫構成；且集合物2b係由 HCDR2-2庫構成。針對各組集合物，在溶液中使用由Strep-Tactin珠所捕捉之漸減含量His-Strep-標記性c-Met及嗟菌體-抗原進行淘選。同樣的，在使用捕捉於Neutravidin-塗覆盤上之漸減含量生物素化c-Met所進行之淘選中應用各集合物。為降低淘選嚴格性，並選擇具有較佳分離速率者，其在延長之恆溫共置期中進行與經純化母Fabs以及未經標記抗原之競鲁爭。在進行淘選後，立刻將該等富集性之噬菌質體集合物次選殖至pMORPH®X9JFH表現載體中。挑選單一純系，並以 IPTG誘發該等Fabs中之基因表現。熟化淘選策略使用該四組抗體集合物之淘還流程係分別以His-Strep-標記性c-Met及生物素化His-Strep-標記性c-Met在溶液中實施二或三循環而進行。就各個淘選策略而言，可使用與經 ^ 純化母Fab蛋白以及與未經標記之APP-標記性c-Met之競爭，以及低抗原濃度及大量之清洗而增加嚴格性。以未經標記之His-Strep-彳票記性c-Met所進行之溶液淘選係以兩個選擇循環進行，主要係根據實例1中所述之標準流程。不同於此等流程之例外情形係使用較低量之抗原 (自5 nM漸減至1 nM)，在使用或不使用競爭者之情形下進行高嚴格性之清洗流程，以及抗體-噬菌體與抗原之延長恆溫共置期。 119679.doc -158- 200815470 就使用生物素化c-Met之第一選擇循環而言，其係以300 微升之PBS清洗Neutravidin盤之試驗孔兩次。以經PBS進行 1:1 稀釋之 2x ChemiBLOCKER (Chemicon，Temecula，CA) (阻斷緩衝液）以阻斷該等試驗孔。在進行選擇之前，亦在室溫下以含有0.1% Tween-20之一份體積阻斷緩衝液對該等HuCAL GOLD®噬菌體進行阻斷30分鐘。在室溫下，將該經阻斷之噬菌體製備物以100微升之小份移置至 Neutravidin盤之試驗孔中30分鐘。重複此一預吸收步驟一次。使經阻斷及預澄清之噬菌體製備物與5 nM之生物素化 c-Met在轉輪上於22°C下進行恆溫共置2小時。加入含有母 Fab及APP-c-Met之樣本，或是不含競爭者之陽性控制組，再使該等樣本在轉輪上於4°C下隔夜進行恆溫共置。在室溫下，於Neutravidin盤之試驗孔中捕捉抗原·嗤菌體複合物20分鐘。在大量之清洗步驟後，於各孔中加入 200微升於10 mM Tris pH 8.0中之20 mM DTT在室溫下處理10分鐘，以溶析連結之噬菌體顆粒。取出該溶析液，再將其加入14毫升已生長至OD6〇() 11〇1值0.6-0.8之大腸桿菌TG1 細胞中。以200微升之PBS沖洗該等試驗孔一次，，並將此溶液亦加入該大腸桿菌TG1細胞中。在無震盪之情形下，於37°C進行大腸桿菌之噬菌體感染45分鐘。在以5000 rpm 離心10分鐘後，使該等細菌沈澱物各再懸浮於500微升之 2xYT培養基中，使其在2xYT-CG瓊脂盤上進行塗盤，再在 30°C下隔夜進行怪溫培養。自該等培養盤之表面刮下而收集菌落，再如上所述而對該等噬菌體顆粒進行拯救及擴 119679.doc -159- 200815470 增。第二及第三循環之選擇係如上之第一循環選擇所述進行，為其清洗條件更為嚴格，且該抗原濃度分別係1及〇·1 nM 〇 e-Met結合Fabs之電化學發光（BioVeris)基礎性結合分析使用 BioVeris Μ·384 SERIES⑧工作站（BioVeris Europe， Witney，Oxfordshire，UK)以在大腸桿菌裂解物（BEL萃取物）中偵測經親和力改良之c-Met專一性抗體片段。該分析係在96_孔聚丙烯為滴定盤中進行，並使用添加0·5°/〇 BSA 及0.02% Tween-20之PBS作為分析緩衝液。根據供應商之指示，將生物素化之人類c-Met固定於M-280鏈黴親和素順磁珠上（Dynal)。在各孔中加入珠貯存液之1:25稀釋物。在振盪器上，使100微升之經稀釋BEL萃取物樣本與珠在室溫下隔夜進行恆溫共置。為進行偵測，使用根據供應商 (BioVeris Europe, Witney，Oxfordshire, UK)之指示而以BV-tagTM標記之抗人類（Fab)’2 (Dianova)。以上述之方法分析一組經隨機挑選之純系。選擇其中產生最高數值之諸等純系之次組，以溶液平衡滴定進行進一步之分析。使用溶液平衡滴定（SET)測定皮莫耳濃度單位之親和力使用Fab之單體級份（至少90%之單體含量，以分析性 SEC 分析；Superdex75，Amersham Pharmacia)以進行 KD 之測定。在溶液中之電化學發光（ECL)基礎性親和力測定及數據評估基本上係如Haenel et al·，2005所述進行。在溶液 119679.doc -160- 200815470 中以不同濃度（系列3n稀釋物）之人類c-Met (4 nM起始濃度）平衡定量之Fab。加入偶合順磁珠（M-280 Streptavidin， Dynal)之生物素化人類c-Met以及經BV-tag™ (BioVeris Europe，Witney，Oxfordshire，UK)標記之抗人類（Fab)’2 (Dianova)，再使該混合物進行恆溫共置30分鐘。接著，使用 MISERIES® 384分析儀（BioVeris Europe)，以£0^定量未連結Fab之濃度。為此，選擇單一純系，並以Ni-NTA瓊脂糖以微克量級進行純化。在BioVeris中，以4點溶液平衡滴定（SET)測定初始之親和力。自此等數據中，選擇顯示親和力之純系。以毫克量級純化此等Fabs。使用8點SET測量以及人類、小鼠、及獼猴c-Met，自各個Fab純系之兩獨立批次測定終親和力。對於小鼠及獼猴c-Met之親和力測定基本上係如上文所述，在溶液中使用小鼠c-Met (R&D Systems)及獼狼c-Met 取代人類c-Met作為分析物。使用偶合順磁珠之生物素化人類c-Met而偵測自由Fab。根據熟習技藝者已知之方法而計算親和力，如，Haenel et al·，2005 Anal Biochem 339.1:182-184。使用上述之分析條件，在溶液中測定該等親和力最適化抗c-Met Fabs之親和力。測定對於人類c-Met具有低於4,6 pM之KD值之抗體之親和力。進行對於表現於CHO細胞上之獼猴-c-Met之結合之FACs基礎性分析，如上所述。該等親和力摘述於本文之表5中。 119679.doc -161 - 200815470 表5 · Fabs之親和力親和力[pM]:溶液平衡滴定 KD [pM]獼猴c-Met CHO-獼猴 c-Met 抗體人類c-Met 獼猴c-Met 5091 2.4 ±0.5 90 5097 3.6 ±0.9 0.68 5098 2.1 ±0.5 0.3 ±〇.l 5185 4.6 ±3.9 0.29 實例6 :親和力最適化抗c-Met Fabs之定性 FACS飽和技術測定成熟Fabs在50%人類血清（HS)存在下之結合親和力。在50%人類血清（HS)存在下或在2.8% BSA存在下，對最適化抗c-Met Fabs之系列稀釋物進行恆溫共置。評估對於GTL-16細胞之FACS飽和結合。對GTL16細胞進行清洗、胰蛋白酶處理、再懸浮於4°C之含有3% FCS之PBS (3°/〇 FCS/PBS)中。將2-5xl05個細胞/樣本再懸浮於140微升含有5微克/毫升純化抗-c-Met Fabs或其系列稀釋物之3% FCS/PBS中。作為陽性控制組，使用5微克/毫升之D024 (小鼠IgG2a)抗-人類c-Met抗體。在4°C下，對.該等細胞進行恆溫培養30-60分鐘，之後再在4°C下以2000 rpm (716g) 離心2分鐘以進行沈澱，並以200微升之冰3% FCS/PBS清洗。藉由離心再次沈澱此等細胞，再溫和除去該PB S。將細胞再懸浮於100微升以3% FCS/PBS進行1:200稀釋之山羊抗人類IgG(H+L)PE共軛物（Jackson Cat No. 109-116-088); 為作為陽性控制組，使用以3%FCS/PBS進行1:200稀釋之 119679.doc -162- 200815470 山羊抗小鼠 IgG (H+L)-PE共輛物（Jackson Cat No· 115-116-146)。在4°C下，對樣本進行遮光恆溫培養30-60分鐘。在進行離心並以200微升之3% FCS/PBS清洗後，將該等細胞再懸浮於100微升之3% FCS/PBS中，並使用FACS-陣列或 FACS-Calibur進行分析。例示之結合曲線示於表6，其摘要在5 0%人類金清存在下最適化抗c-Met Fabs之結合活性（相較於在2.8% BSA存在下之結合活性），其係自83.3%至100%不等。其中數值係發現為90.2% ’因此發現該等抗c-Met Fabs皆可在人類血清之存在下完全結合目標。表6 · F ab s之結合活性抗體結合活性w/50%人類血清vs 2.8%BSA(%) 5091 83.8 5097 90.2 5098 100 5185 *

*5185之結合尚未就EC50而進行分析，因尚未達成飽和將最適化抗-c-Met候選Fabs轉化成為IgG形式抗體中介性二聚化作用可造成c-Met酪胺酸激酶活性之激動性活化作用。因此，將最適化Fabs (根據結合經純化 c-Met而選擇）轉化成為IgG形式。為表現全長免疫球蛋白 (Ig)，自i)MORPH®X9_FH Fab表現載體，將重（γΗ)及輕鏈 (VL)之可變區域片段次選殖至pMORPH'h—Ig或 II9679.doc -163 - 200815470 pMORPH% Ji_Ig載體系列中，以產生人類IgGl及人類 IgG4。使用限制酶五coRI、、及而進行Vh域片段進入 pMORPH'h—IgGl 及 pMORPH®Ji—IgG4之次選殖。使用限制酶M/el及則pi而進行VH域片段進入pMORPH%—h_IgGlf 及pMORPH®2_h_IgG4之次選殖。VL域片段進入pMORPH'hJgK 及pMORPH®2—h_IgK之次選殖係使用五coRV及J5WWI位點進行，而進入 pMORPH®Ji一IgX 及 pMORPH⑧2Ji一IgX2之次選殖則係使用五coRV及Fpal而完成。人類IgG之瞬時表現及純化以等莫耳濃度量之IgG重及輕鏈表現載體轉染HEK293細胞。在轉染後之第4或5天，收集細胞培養物之上清液。在將該上清液之pH值調整至8.0並進行無菌過濾後，對該溶液進行標準之A蛋白管柱層析（p〇ros 20A，PE Biosystems)。辨識可調節c-Met依賴性增殖作用之最適化抗-人類e-Met IgG候選者接著將選自HuC AL GOLD⑧庫之所得最適化c-Met-專一性抗體轉化成為IgG形式，並試驗其抑制HGF驅動性增殖作用之強度。使用4MBr-5細胞在HGF激發下之BrdU納入分析而評估各個所選純系之功能活性。於96孔平底組織培養處理盤中 (Costar，#3 610)，在1〇〇微升/孔總體積之添加1〇% FBS之 HanTs F12K中，以每孔3xl〇3個細胞之密度，對4MBp5細胞進行平板培養。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養2小時，之後加入50微升含有待試驗純化抗 119679.doc -164- 200815470 體之培養基。作為缺乏調節作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c-Met抗原表位決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養1小時，之後加入單獨5〇微升之培養基或是含有HGF之50微升（如，0.5微克/微升至約5〇納克/毫升）。在5% C〇2大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養72小時，之後使用細胞增殖ELISA，BrdU-分析 (Roche) Cat No. 1 669 915而分析BrdU之納入。簡言之，加入20 μΜ/孔之BrdU溶液（#1)，再在5% C02大氣下，於37 C對該等試驗盤進行恆溫培養22小時。溫和除去培養基，再在60 °C下乾燥該等試驗盤1小時。加入200微升之 FixDenat (溶液#2) ’再在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恆溫培養30分鐘。溫和除去該溶液，再加入 100微升/孔之抗-BrDU作用溶液。在室溫下同時加以溫和震盪，對該等試驗盤進行恒溫培養9〇分鐘。溫和除去該溶液，再以250微升之清洗溶液清洗該等試驗孔三次。溫和除去該溶液，再加入1〇〇微升/孔之受質溶液，在A4〇5 nm 測量該等試驗盤。 EC5〇之測定顯示可對具有最高c_Met親和力之抗體純系產生對於 HGF激發性增殖作用之5〇%抑制之有效濃度之數據示於本文之表7中。孩數據顯示該有效濃度係自起不等’其中數值係介於0.5及1.3 nM之間。 119679.doc -165- 200815470 表7· IgG形式之最適化抗-c-Met候選者對於HGF激發性增殖作用之抑制活性

抗體 EC50[nM]HGF驅動性增殖作用之抑制 4ΜΒΓ-5於10%血清中 5091 L3 5097 1.6 5098 0.5 5185 0.13 酶連免疫吸收分析（ELISA)技術

測定成熟Fabs在50%人類血清（HS)存在下之結合專一性。在室溫下，將人類重組生物素化抗體於TBS中之系列稀釋物塗覆在Neutravidin微滴定盤上2小時，自每孔8 ng 抗體至每孔125 ng抗體之濃度。在塗覆該抗原後，在室溫下，以添加1% BSA之TBS/0.05% Tween (TBS-T)阻斷該等試驗孔1小時。以TBS/4% BSA或TBS/50% BSA將上述之純化Fabs稀釋至1微克/毫升之終濃度，加入該等經塗覆及阻斷之孔中，再使該等試驗盤在室溫下進行恆溫共置1小時。使用抗-FLAG鹼性磷酸酶（AP)綴合性抗體（於TBST中之1:5000稀釋物）以及螢光發生性受質人1:1:〇?11〇8(11〇〇1^)而進行偵測。在各個恆溫共置期後，皆以TBST清洗該等微滴定盤之試驗孔五次，除外在以經標記次級抗體所進行之終恆溫共置步驟之後，其係清洗該等試驗孔三次。以 TECAN Spectrafluor盤視讀器測量螢光。 119679.doc -166- 200815470 辨識可調節卜Met依賴性遷移作用之抗·人類e-Met IgG候選者使用NCI-H441細胞，以QCM™化學趨向性8 μΜ 96-孔細胞遷移分析，分析反應HGF激發之細胞遷移。如上所述，在分析前24小時’以無菌PBS清洗細胞兩次·，並在5% c〇2 大氣下，於37°C，在含有1% FBS之DMEM中進行飢餓處理。接著，對該等細胞進行胰蛋白酶消化，再在適當濃度之純化抗體存在下，在37°C下，使其以每毫升^^；^6個細胞之量進行再懸浮30分鐘。為作為缺乏調節作用之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c_Met抗原表位決定區無關之已知專一性)或緩衝溶液加入指定之孔中。在無菌條件下，除去該遷移小室盤之蓋，再在該供料盤 (下層小室）之孔中加入含有5〇納克/毫升HGF (R&D Cat N〇. 294-HGN)之150微升無血清培養基。將1〇〇微升與抗體預共置之在含有1% FBS之DMEM中之5-10xl04個細胞溫和加 ^該上層小室中。蓋上該盤，再在4_6% c〇2大氣下，於37 C進行恆溫培養16小時。遵照製造商之指示，除去該上層小室中之細胞/培養基，再將該室置入其中已加入15〇微升/ 孔經預加溫之細胞剝離溶液之96_孔供料盤中。在371下進行恒温培養对㈣❹⑽純之溫㈣拌以鬆脫細胞°接著’在該供㈣之各孔中加人5Q微升經預稀釋之

CyQ_ GR㈣卜在室溫下對料試驗盤進行恆溫培養15 分鐘，再將⑽微升之該混合物移至—適用於使用侧520 nm濾鏡組進行螢光測量之新96_孔盤。 119679.doc -167. 200815470 顯示可對具有最高c-Met親和力之抗體純系產生對於 HGF激發性遷移作用之50%抑制之有效濃度之數據示於本文之表8中。該數據顯示該有效濃度EC5G係自0.61 nM起不等，其中數值係介於0.73及0.76 nM之間。表8. IgG形式之最適化抗-c-Met候選者對於HGF激發性遷移之抑制活性抗體 EC50 [nM] HGF驅動性遷移之抑制 NCI-H441於1%血清中 5091 0.61 ±0.22 5097 0.76 ±0.69 5098 0·73 士 1.1 5185 1.2 士 1.3

實例7 :由所選拮抗性抗c-Met抗體所造成之HGF激發性c-Met自體磷酸化作用調節由本發明之抗-c-Met抗體所造成之激動作用或拮抗作用係以有及無HGF激發之細胞内之c-Met碌酸化作用之活化或抑制而測量。將諸如A549細胞之細胞系之細胞，於96孔平底組織培養處理盤中（Costaf，#3595)，在100微升/孔總體積之添加10% FBS之DMEM中，以每孔3xl04個細胞之密度進行平板培養。在5% C02大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養24小時，之後自該等試驗盤之各孔中溫和抽吸出培養基，再加入100微升/孔體\積之DMEM。在5% C02 大氣下，於37°C對該等試驗盤進行恆溫培養24小時，之後將待試驗純化抗體之樣本（每孔100微升之該抗體或稀釋物）加入該等孔内以DMEM稀釋之細胞中。為作為缺乏活化作用 119679.doc •168- 200815470 之陰性控制組，將無關抗體之樣本（具有與c-Met抗原表位決定區無關之已知專一性）或緩衝溶液加入指定之孔中。在3 7 C下’對該等細胞進行短時間（如，2小時）或較長時間（如，24小時）之恆溫培養。在適當時，藉由添加終濃度為200納克/孔之無血清DMEM培養基中之HGF而激發細胞。一般而言，在分析該等抗體之激發活性時，除陽性控制組外（未經抗體處理者），自試驗樣本抗體孔中省略 HGF。一般而言，在分析該等抗體之拮抗活性時，在試驗樣本抗體孔中包括HGF。在37°C下，對該等試驗盤繼續進行恆溫培養10分鐘，之後自該等試驗盤之各孔中溫和抽吸出培養基。以含有之冰PBS清洗該等細胞，再自該等試驗盤中溫和抽吸出該溶液。以50微升裂解緩衝液（NP-40裂解緩衝液··120mMNaCn、50mMTris_HClpH7.5、l%NP 40、1 mM EDTA、6 mM EGTA、20 mM NaF、1 mM苯甲脒（含新鮮添加之0.5 mM Na3V04)、及0·1 mM PMSF)裂解該等細胞。在室溫下震盪該等試驗盤1 5分鐘，接者貯存在-80°C下，直到需要進行ELISA為止。使用ELISA以判定c-Met磷酸化作用之量。為進行ELIS A 盤之製備，以清洗缓衝液（PBS-0.05%Tween Biorad #670-653 1)清洗 Nunc-ImmunoTM 盤，MaxiSorbTM 表面（VWR International AG，Ν°391-8786)兩次，並加入 100微升於PBS 中之c-Met單株捕捉抗體（DO-24)。在4°C下，對該等試驗盤進行恆溫培養隔夜，再以PBS-0.05% Tween清洗三次。以200微升/孔之PBS-T中之3% BSA在室溫下處理2小時同時予 119679.doc •169- 200815470 以震盪，以阻斷非專一性之結合位點。在使用之前再即時除去阻斷溶液。在室溫下震盪以融化冷凍之細胞裂解物，並將40微升之裂解物加入該等Nunc-Immuno盤中，再在4°C下對該等試驗盤進行恆溫培養4小時。以PBS-T清洗該等試驗盤三次，再加入50微升/孔之於3%牛血清白蛋白-PBS-T中之0.2微克/ 毫升抗-磷酸酪胺酸抗體PY20-HRP (ZYMED，# 03-7722)。在4°C下，對該等試驗盤進行恆溫培養隔夜，再以PBS-T清洗三次。抽吸出該PB S-T，再加入90微升/孔之驗性填酸酶受質（CDR-Star，TROPIX，#MS100RY)，並在室溫下溫和震盪45分鐘之同時進行顯影。使用96孔盤視讀器對該等試驗盤進行視讀。顯示可對具有最高c-Met親和力之抗體純系產生對於 HGF激發性遷移作用之50%抑制之有效濃度之數據示於本文之表9中。該數據顯示該有效濃度EC5G係自0.166 nM起不等，其中數值係介於0.193及0·219ηΜ之間。表9. IgG形式之最適化抗-c-Met候選者對於HGF激發性受體自體磷酸化作用之抑制活性抗體 EC50 [nM] HGF激發性c-Met 自體磷酸化作用之抑制於A549中 5091 0.193 5097 0.166 5098 0.419 5185 0.219 119679. doc -170- 200815470 實例8 :經最適化以進行表現之基因之胺基酸序列及核甞酸序列為提升哺乳動物之表現，其在該等本文以“之重及輕鏈中引入變化，以為在哺乳動物細胞中之表現而進行密碼子使用之最適化。已知數種負面之順式作用之基序可降低哺礼動物體内之表現。本文之最適化流程可移除該等可負面影響表現之負面順式作用位點（諸如，剪接位點或聚（A)信號）。本文之最適化流程尚可富集GC含量以延長mRNAt •半生期。可變輕及重鏈區域係使用一種Fab純系而進行最適化，並以噬菌體展示進行選擇而分離。接著，使用此等流程而對各個編碼此一及其他純系之完整輕及重鏈之核甞酸序列各進行最適化。 vH及VL鏈之最適化流程為進行各個vL& νΗ鏈之核苷酸序列及胺基酸序列之最鲁適化，使其密碼子之使用適應成為哺乳動物（特別係人類）基因之密碼子偏好。此外，在可能之情形下，減少或除去具有極高（>80%)或極低（<3〇%) Gc含量之區域。在最適化之過程中，避免下列之順式作用序列基序：内 TATA-盒、chi_位點及核糖體進入位點、富集性或富集性序列段、RNA不安定性基序（ARE)序列元件、抑制性RNA序列元件（INS)、cAMP反應性（(^以序列元件、重複序列及RNA二級結構、剪接供體及受體位點（包括隱蔽位點）、以及分支點。除所指明者外，亦在對於％鏈核苷 119679.doc -171 - 200815470 酸序列之最適化過程中避免引入MluL^Hindm位點。除所才曰明者外，亦在對於νΗ鏈核苷酸序列之最適化過程中避免引入Mlyl及BstEII位點。經最適化以進行表現之¥][1及&鏈胺基酸序列將其密碼子之使用適應成為哺乳動物之密碼子使用而容許上述純系之所得最適化Vh& Vl鏈胺基酸序列在哺乳動物細胞中產生較高及較穩定之表現速率。可使用直方圖以分別顯示母序列及最適化基因各者之序鲁列密碼子百分比，並分析編碼該等vH及vL鏈之各核答酸序列之品質類別。在本文中，品質值係意謂其將在該目標表現系統中之特定胺基酸中最常使用之密碼子設定為100，再根據使用頻率而對其餘之密碼子進行度量。（Sharp， P.M·，Li，W.H·，TVz/Cdc A油及以.15 (3)，1987)。同時，密碼適應指數係（CAI)—數目，其敘述該核苷酸序列之密碼子與該目標微生物之密碼子使用偏好相符之程 φ 度。CAI之最大值係設為1.0，因此，>0·9之CAI值即可視為可進行高量表現。發現進行最適化前之乂鏈之CAI值為 0·73 ’且在進行最適化後，其CAI值經判定為0.95。同樣的’發現進行最適化前之VH鏈之CAI值為0·74，且在進行最適化後，經判定為0.98。

Vl鏈中之gc含量自母序列至最適化序列產生增加之情形。為表現全長輕鏈及重鏈而進行之最適化針對各母輕鏈之全長核苷酸序列以及母重鏈之全長核荅 119679.doc 172- 200815470 酸序列使用最適化之流程。使用該最適化流程以建構與該等母純系編號相關之輕鏈核苷酸序列。同時，使用該最適化流程以建構與該等母純系編號相關之重鏈核苷酸序列。表E.本發明序列之表列

Ab Ref. No.-鏈類型 SEQ ID NO: 序列 04536 VL 1 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGGCTTATGATTCTTCTATGCTTCGTGTGTTTGGCGGC GGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05087 VL 2 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGCTAATTATCATGATTCTTGGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05088 VL 3 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGCTTCTGATTATACTTCTTGGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05091 VL 4 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGCTCATTATCATGATATTTGGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05092 VL 5 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGGCTCATGATTCTCTTTATTCTCGTGTGTTTGGCGGC GGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04687 VL 6 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATTATAATCATCCT CATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG 05097 VL 7 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTTTGGTTGG ACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG 05098 VL 8 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA -173- 119679.doc 200815470

ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCGGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATTCTGATGAGCCT TGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG 05100 VL 9 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTATGAGCCT AATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG 05101 VL 10 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATGCTTTTTCTCCT TGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG 04541 VL 11 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTTCTTATTATGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT AATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGATTTTCCTTCTATTGTGTTTGGCGGCGGC ACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05093 VL 12 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTTCTTATTATGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT AATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGATTCTTATATTTTTGTGTTTGGCGGCGGC ACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05094 VL 13 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTTCTTATTATGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT AATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCTCTACTTATGATGCTTTTACTTTTGTGTTTGGCGGCGGC ACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05095 VL 14 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTTCTTATTATGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT AATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGATAAGTATGTTTTTGTGTTTGGCGGCGGC ACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04537 VL 15 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTCGTTCTTATTTTGTTTCTT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT GATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCGCTTCTTGGGATACTCTTTCTGATGTTGAGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05102 VL 16 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTCGTTCTTATTTTGTTTCTT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT GATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCGCTTCTTGGGATCCTCCTTCTGCTTTTGAGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05105 VL 17 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTCTTCGTTCTTATTTTGTTTCTT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT GATGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCGCTTCTTGGGATAATGATCATTTTGAGGTGTTTGGCGGC GGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04690 VL· 18 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC 119679.doc -174- 200815470

CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAAGCTTGGTTCTTATTTTGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT GATAATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTTTGGTATTTCTAATTTTTATGTGTTTGGCGGC GGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 05106 VL 19 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATAAGCTTGGTTCTTATTTTGTTTATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGATGAT GATAATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCGGTTCTTGGGCTTATCTTGGTGATGTGTTTGGCGGCGGC ACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04682 VL 20 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAAAG CCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTACTAATTATGGTA TTGCTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATT ATCTATCCGTCTGATAGCTATACCAATTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCA GGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAATGGA GCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTATGTCT TATGATTATCAGCATCAGGCTCCTTCTATGGATTCTTGGGGCCAAGGCAC CCTGGTGACGGTTAGCTCA 04536 VH 21 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATACCTTTACTGGTTATTATA TGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATT ATCAATCCGTGGACTGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCG GGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAACTGA GCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCT GGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATCTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACGGTTAGCTCA 05078 VH 22 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATACCTTTACTGGTTATTATA TGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATT ATTGATCCTTGGAATGGTCAGACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCG GGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAACTGA GCAGCCTGCGTAGCGAA.GATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCT GGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATCTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACGGTTAGCTCA 05079 VH 23 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATACCTTTACTGGTTATTATA TGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGTT ATTGATCCTTGGAATGGTATTACTAATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCG GGTCACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAACTGA GCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCT GGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATCTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACGGTTAGCTCA 04687 VH 24 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGT ATCGATCCGTTTGGCACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGT GACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCA GCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAG GATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 05081 VH 25 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGT ATTGATCCTATTATGGGTACTGAGTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGT GACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCA GCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAG GATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 05082 VH 26 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGAG ATTGATCCTGTTATTGGTGAGACTGATTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCG GGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGA GCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTAT CAGGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 04541 VH 27 CAGGTGCAATTGCAAGAAAGTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGGGCGAAAC CCTGAGCCTGACCTGCACCGTTTCCGGAGGTAGCATTTCTTCTTCTTCTT ATTATTGGAATTGGATTCGCCAGGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATT 119679.doc -175- 200815470

GGCGAGATCTATTTTGGCTGGACCTATTATAATCCGAGCCTGAAAGGCCG GGTGACCATTAGCGTTGATACTTCGAAAAACCAGTTTAGCCTGAAACTGA GCAGCGTGACGGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTTAT GAGTTTCATGGTTATACTACTTTTGATTATTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACGGTTAGCTCA 04537 VH 28 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGAAAG CCTGAAAATTAGCTGCAAAGGTTCCGGATATTCCTTTTCTAATTATTGGA TTGGTTGGGTGCGCCAGATGCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGATGGGCTTT ATCTTTCCGGATACTAGCTATACCCGTTATTCTCCGAGCTTTCAGGGCCA GGTGACCATTAGCGCGGATAAAAGCATTAGCACCGCGTATCTTCAATGGA GCAGCCTGAAAGCGAGCGATACGGCCATGTATTATTGCGCGCGTGTTAAG CTTATTACTGATTATTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 04690 VH 29 CAGGTGCAATTGCAACAGTCTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAAAC CCTGAGCCTGACCTGTGCGATTTCCGGAGATAGCGTGAGCTCTAATTCTG CTGCTTGGGGTTGGATTCGCCAGTCTCCTGGGCGTGGCCTCGAGTGGCTG GGCCGTATCTATTATCGTAGCAAGTGGGTTAA.CGATTATGCGGTGAGCGT GAAAAGCCGGATTACCATCAACCCGGATACTTCGAAAAACCAGTTTAGCC TGCAACTGAACAGCGTGACCCCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCG CGTCAGGGTGCTGTTTATCCTGGTCCTTATGGTTTTGATGTTTGGGGCCA AGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA 04682 VH 30 GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGTGGCGCACCAGGTCAGCG TGTGACCATCTCGTGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTTCTAATTATG TGATTTGGTACCAGCAGTTGCCCGGGACGGCGCCGAAACTTCTGATTTAT GATGATACTAATCGTCCCTCAGGCGTGCCGGATCGTTTTAGCGGATCCAA AAGCGGCACCAGCGCGAGCCTTGCGATTACGGGCCTGCAAAGCGAAGAGG AAGCGGATTATTATTGCTCTACTTATGATAATTATCAGGCTGGTTGGGTG TTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG 04536 VL 31 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQAYDSSMLRVFGG GTKLTVLGQ 05087 VL 32 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQS YANYHDSWVFG GGTKLTVLGQ 05088 VL 33 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYASDYTSWVFG GGTKLTVLGQ 05091 VL 34 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYAHYHDIWVFG GGTKLTVLGQ 05092 VL 35 ΒΙΕΙ^ΡΡενΒνΑΕΌΟΤΑΗίεαεαϋΒΙΟΝΚΥνΗνίΥζΧίΚΡΟΟΑΡνΒνΐΥΑΌ SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQAHDSLYSRVFGG GTKLTVLGQ 04687 VL 36 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYNHP HTFGQGTKVEIKRT 05097 VL 37 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYAFGW TFGQGTKVEIKRT 05098 VL 38 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYSDEP WTFGQGTKVEIKRT 05100 VL 39 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYAYEP NTFGQGTKVEIKRT 05101 VL 40 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYAFSP WTFGQGTKVEIKRT 04541 VL 41 VLDIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIY DDNDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYDFPSIVFG GGTKLTVLGQ 05093 VL 42 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDD NDRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCQS YDS YIFVFGGG TKLTVLGQ 05094 VL 43 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDD NDRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCSTYDAFTFVFGGG TKLTVLGQ 05095 VL 44 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSYYVYWYQQKPGQAPVLVIYDD NDRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCQS YDKYVFVFGGG TKLTVLGQ 119679.doc -176- 200815470

04537 VL 45 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLRSYFVSWYQQKPGQAPVLVIYDD DDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCASWDTLSDVEVFG GGTKLTVLGQ 05102 VL 46 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLRSYFVSWYQQKPGQAPVLVIYDD DDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCASWDPPSAFEVFG GGTKLTVLGQ 05105 VL 47 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSLRSYFVSWYQQKPGQAPVLVIYDD DDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCASWDNDHFEVFGG GTKLTVLGQ 04690 VL 48 ΏΙΕΙιΤΟΡΡβνβνΑΡΟΟΤΑΙ^ΟβϋϋΚΙ^ΥΡν^Υζ^ΚΙ^αΑΡνίϋνΐΥΕω DNRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCQS FGISNFYVFGG GTKLTVLGQ 05106 VL 49 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDKLGSYFVYWYQQKPGQAPVLVIYDD DNRPSGI ΡΕί^αβΝΒΟΝΤΑΤΙιΤΙ SGTQAEDEADYYCGSmYLGDWGGG TKLTVLGQ 04682 VL 50 DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVIWYQQLPGTAPKLLIY DDTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQSEDEADYYCSTYDNYQAGWV FGGGTKLTVLGQ 05174 VL 51 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCQSYANYHDSW^FG GGTKLTVLGQ 05184 VL 52 DIELTQPPSVS VAPGQTARIS CSGDSI ΘΝΚΥνΗνίΥζ^ΚΡΟΟΑΡνί^νΐ YAD SDRPSGI PERFSGSNSGNTATLTI SGTQAEDEADYYCQSYAHYHDIWVFG GGTKLTVLGQ 05185 VL 53 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK ΙιΙ»ΐ™Α8ΤΙΙΕ3ΌνΡϋϊΙΡ303σ3αΤΒΡΤΙϋΤΙ83Ι^ΑΕϋνΑνΥΥα<3〇ΥΑΥΕΪ> NTFGQGTKVEIKRT 05186 VL 54 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYAFSP WTFGQGTKVEIKRT 04536 VH 55 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI INPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05078 VH 56 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05079 VH 57 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGV IDPWNGITNYAQKFQGRVTMTRDTSI STAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 04687 VH 58 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSS 05081 VH 59 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSS 05082 VH 60 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGE IDPVIGETDYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVY QDVWGQGTLVTVSS 04541 VH 61 QVQLQESGPGLVKPGETLSLTCTVSGGSISSSSYYWNWIRQAPGKGLEWI GEIYFGWTYYNPSLKGRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAEDTAVYYCARGY EFHGYTTFDYWGQGTLVTVSS 04537 VH 62 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGF IFPDTSYTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARVK Ij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ΙΒΡΡσΤΑΝΥΑ〇ΚΡζ^νΤΙΤΜ)Ε5Τ3ΤΑΥΜΕΙι33]^5ΕϋΤΑνΥΥΟΑΚνΥ〇 DVWGQGTLVTVSS 119679.doc -177- 200815470

05098 VH 68 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSS 05174 VH 69 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05184 VH 70 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSS 05185 VH 71 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSS 05186 VH 72 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSS 05091一ig lambda 73 GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGAC CGCGCGTATCTCGTGTAGCGGCGATTCTATTGGTAATAAGTATGTTCATT GGTACCAGCAGAAACCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGCTGAT TCTGATCGTCCCTCAGGCATCCCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGG CAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGCACTCAGGCGGAAGACGAAGCGG ATTATTATTGCCAGTCTTATGCTCATTATCATGATATTTGGGTGTTTGGC GGCGGCACGAAGTTAACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGT CACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACAC TGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGG AAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTC CAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGC CTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAA GGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA 05185一ig kappa 74 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTATGAGCCT AATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACGGTGGCTGC ACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAA GTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAG TGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCC TGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAA GTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGG AGAGTGTTAG 05098__lg kappa 75 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCTTCAGTATTCTGATGAGCCT TGGACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACGGTGGCTGC ACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAA GTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAG TGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCC TGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAA GTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGG AGAGTGTTAG 05097__lg kappa 76 GATATCGTGATGACCCAGAGCCCGGATAGCCTGGCGGTGAGCCTGGGCGA ACGTGCGACCATTAACTGCAGAAGCAGCCAGTCTATTCTTTATGGTATTA ACAATAATTTTCTGGGTTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAGCCGCCGAAA CTATTAATTTATTGGGCTTCTACTCGTGAAAGCGGGGTCCCGGATCGTTT TAGCGGCTCTGGATCCGGCACTGATTTTACCCTGACCATTTCGTCCCTGC AAGCTGAAGACGTGGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGCTTTTGGTTGG ACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACGGTGGCTGCACC ATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTG CCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGT CACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTC ACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA 119679.doc -178 - 200815470

GTGTTAG 05091一工g lambda 77 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYAHYHDIWVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS 05087一工g lambda 78 DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYANYHDSWVFG α〇ΤΚΚΓνΐ^ΡΚΑΑΡ3νΤ]^ΡΡ33ΕΕΙ^ΑΝΚΑΤΙΛ^Ι80ΡΥίΌΑνΤνΑΝ KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS 05174一Ig lambda 79 DIELTQPPS VSVAPGQTARIS CSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYANYHDSWVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS 05184_Ig lambda 80 DIELTQPPSVS VAPGQTARIS CSGDSIGNKYVHWYQQKPGQAPVLVIYAD SDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYAHYHDIWVFG GGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS 05185_Ig kappa 81 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK ΙΛΙΥΗΑΒΤΚΕβΘνΡϋΙ^αΒαεΟΤϋΡΊ^ΤίεβΙιΟΑΕΒνΑνΥΥαζ^ΥΑΥΕΡ ΝΤΡΟζ^ΤΚνΕΙΚΙΙΤνΑΜ^νΡΙΡΡΡβΏΕζ^Κ^ΤΑβννα^ 丽 FYPREAK VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC 05098_Ig kappa 82 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYSDEP WTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAK VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSIjSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC 05097_Ig kappa 83 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYAFGW TFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV THQGLSSPVTKSFNRGEC 05186一Ig kappa 84 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSILYGINNNFLGWYQQKPGQPPK LLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYAFSP WTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAK VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACE VTHQGLSSPVTKSFNRGEC 05091_IgG4 85 CAGGTGCAATTGGTTCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGATATACCTTTACTGGTTATTATA TGAATTGGGTCCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCATT ATCAATCCGTGGACTGGCAATACGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCG GGTGACCATGACCCGTGATACCAGCATTAGCACCGCGTATATGGAACTGA GCAGCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGATCCT GGTTTTTTTTATTATACTCCTTCTGATCTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGT GACGGTTAGCTCAGCTTCCACCAAGGGACCATCCGTCTTCCCCCTGGCGC CCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTC AAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCT GACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAG ACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAA GAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTG AGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGT GAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGG AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACG TACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGG CAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCG AGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTAC ACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGAC CTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGA GCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAG GTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGC ACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA 05185_IgG4 86 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG 119679.doc -179- 200815470

CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGT ATTGATCCTATTATGGGTACTGAGTATGCTCAGAAGTTTCAGGGTCGGGT GACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCA GCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAG GATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGCTTCCACCAA GGGACCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGA GCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCAC AAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCC CCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCT TCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCA GTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGC CGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACC GTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG GGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAG ATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC AGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTC ATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCC TCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA 05098_IgG4 87 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGT ATCGATCCGTTTGGCACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGT GACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCA GCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAG GATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGCTTCCACCAA GGGACCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGA GCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCAC AAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCC CCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCT TCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCA GTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGC CGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACC GTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG GGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAG ATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC AGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTC ATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCC TCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA 05097_IgG4 88 CAGGTGCAATTGGTTCAGTCTGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAG CGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCCTCCGGAGGCACTTTTTCTTCTTATGCTA TTTCTTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGCAGGGTCTCGAGTGGATGGGCGGT ATCGATCCGTTTGGCACTGCGAATTACGCGCAGAAGTTTCAGGGCCGGGT GACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCA GCCTGCGTAGCGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGTTTATCAG GATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGCTTCCACCAA GGGACCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGA GCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCAC AAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCC CCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCT TCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCA GTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGC 119679.doc -180- 200815470

CGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACC GTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG GGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAG ATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC AGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTC ATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCC TCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA 05091_IgG4 89 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI INPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTK TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST YRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVY ΤΒΡΕ^ΕΕΜΤΚΝ〇ν5Ι/Γ(：ΙΛ^ΡΥΡ3ϋΙΑνΕΝΕ3ΝΟζ^ΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΐ1〇 05185_IgG4 90 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDH KPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 05098_IgG4 91 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPV Ί^ΝΝΒΟΑΙ^ανΗΤΡΡΑνί^βΟΙ^Ι^νντνϊ^βΙιΟΤΚΤΥΤΟΝνΟΗ KPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLT MTKNQVSL·TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL·Y SRLTVDKSRWQEGNVFSCS'VMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 05097__IgG4 92 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGG IDPFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ ϋνΝΟζ^ΤΙιντν33Α3ΤΚΏΡ5νΓΡΙΑί^Ι^5Τ3Ε5ΤΑΑ]^α^νΚΟΥΡΡΕΡν TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDH KPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP ΕνΤ〇νννϋν8ζ^ΕϋΡΕνζ^ΝΝΥν〇ανΕνΗΝΑΚΤΚΡΗΕΕζ^Ν3ΤΥΚνν3νΚΓ VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE ΜΤΚΝ〇ν3Ι^Τζ：ΙινκαΡΥΡ30ΙΑνΕΝΕ3Νσ(3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡν]^)3Βα3ΡΡΙίΥ SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 05087一工gG4 93 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI INPWTGNTNYAQKFQGRVTMTRDTS 工 STAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV ΐωΥΡΡΕΡντν3·3(5ΑΙϋΤ3〇νΗΤΡΡΑνΐ^3〇υΥ3Ιι33νντνΡ333Ι^ΤΚ TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST YRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 05174_IgG4 94 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELS SLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV ΚϋΥΡΡΕΡνΓ^ΝΝεΟΑΚΓβσνίΠΈΡΑνίϋζ^αίιΥβΙ^νντνΓ^ΒΙ^ΤΚ TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST YRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 05184__IgG4 95 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMNWVRQAPGQGLEWMGI IDPWNGQTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDP GFFYYTPSDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV ΚΌΥΡΡΕΡντνβΝΝβαΑΙιΤβανΗΊΈΡΑνί^ΒΟΙ^Ι^νντνί^ΒΙ^ΤΚ TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD 119679.doc -181- 200815470

TLiyilSRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST ΥΙΐνν8ν]^ΤνΐϋΗζ^ΙΜ5ΚΕΥΚΓΚν5ΝΚ^Ρ33 IEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD 05186一IgG4 96 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWRQAPGQGLEWMGG IDPIMGTEYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVYQ DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDH KPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLT νΐίΗζ^ν^ΝΟΚΕΥΚ(：Κν5ΝΚαΐιΡ35ΙΕΚΤΙ8ΚΑΚΟ〇ΡίΙΕΡζ}νΥΤΙίΡΡ8〇ΕΕ MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 【圖式簡單說明】圖1A及1B係本發明VH鏈之序列排比，進一步界定各鏈之 FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及 FR4 區域。圖2A及2B係本發明ViA鏈之序列排比，進一步界定各鏈之 FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及 FR4 區域。圖3係本發明Vlk鏈之序列排比，進一步界定各鏈之 FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及 FR4 區域。 182- 119679.doc 200815470 序列表 <iio> 瑞士商諾華公司 <120> C_MEI]抗體之組合物及使用方法

<130> ON/4-34782A <140> 096111129 <141> 2007-03-29 <150> US 60/787556 <151> 2006-03-30 <160> 96 <170〉 Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 327 <212> DNA <213>.人類 <40G> 1

gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgetgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttageggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttageggeae teaggeggaa 240 gaegaagegg attattattg ccaggcttat gattetteta tgcttcgtgt gtttggcggc 300 ggcacgaagt taaccgttct tggccag 327 <210> 2 <211> 330

<212> DNA <2!3>人類 <400> 2 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgctgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttageggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttageggeae teaggeggaa > 240 gaegaagegg attattattg ccagtcttat getaattate atgattettg ggtgtttggc 300 ggeggeaega agttaaccgt tcttggccag 330 <210> 3 <211> 330 <212> DNA <213>人類 <400> 3 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 -一、* tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgctgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttageggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttageggeae teaggeggaa 240 gaegaagegg attattattg ccagtcttat gettetgatt ataettettg ggtgtttggc 300 119679-序列表.doc 200815470 ggcggcacga agttaaccgt tcttggccag <210> 4 <211> 330 <212> DNA <213)人類 <400> 4 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgctgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg ccagtcttat gctcattatc atgatatttg ggtgtttggc ggcggcacga agttaaccgt tcttggccag <210> 5 <211> 327 <212> DNA <213>人類 <400> 5 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgctgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg ccaggctcat gattctcttt attctcgtgt gtttggcggc ggcacgaagt taaccgttct tggccag <2l〇> 6 <211> 342 <212〉 DNA <213>人類 <400> 6 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc agcagtatta taatcatcct catacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta eg <210> 7 - <211> 339 <212> DNA <213>人類 <400> 7 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg 119679-序列表.doc 330 60 120 180 240 300 330

60 120 18 0 240 300 327 60 120 180 240 300 342 60 -2 - 120 200815470 taccagcaga agcggggtcc tcgtccctgc acctttggcc aaccaggtca cggatcgttt aagctgaaga agggtacgaa gccgccgaaa tagcggctct cgtggcggtg agttgaaatt ctattaattt ggatccggca tattattgcc aaacgtacg attgggcttc ctgattttac agcagtatgc tactcgtgaa cctgaccatt ttttggttgg 180 240 300 339

<210> <211> <212> <213〉

8 342 DNA 人類 <400> 8 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc ttcagtattc tgatgagcct tggacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta eg <210> 9 <211> 342 <212> DNA <213>人類 <400> 9 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc agcagtatgc ttatgagcct aatacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta eg <210> 10 <211> 342 <212> DNA <213> 入類：： <400> 10 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc ttcagtatgc tttttctcct tggacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta eg <210> 11 <211> 324 119679-序列表.doe 60 120 180 240 300 342 60 120 180 240 300 342 60 120 180 240 300 342 200815470

<212> DNA <213>人類 <400> 11 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgataatat tggttcttat tatgtttatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat aatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa 240 gacgaagcgg attattattg ccagtcttat gattttcctt ctattgtgtt tggcggcggc 300 acgaagttaa ccgttcttgg ccag 324 <210> 12 <211> 324 <212> DNA <213> xm <400> 12 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgataatat tggttcttat tatgtttatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat aatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa 240 gacgaagcgg attattattg ccagtcttat gattcttata tttttgtgtt tggcggcggc 300 acgaagttaa ccgttcttgg ccag 324

<210> 13 <211> 324 <212> DNA <213>人類

acgaagttaa ccgttcttgg ccag 60 120 180 240 300 324 <400> 13 gatatcgaac tcgtgtagcg caggcgccag tttagcggat gacgaagcgg tgacccagcc gcgataatat ttcttgtgat ccaacagcgg attattattg gccttcagtg tggttcttat ttatgatgat caacaccgcg ctctacttat agcgttgcac tatgtttatt aatgatcgtc accctgacca gatgctttta caggtcagac ggtaccagca cctcaggcat ttagcggcac cttttgtgtt cgcgcgtatc gaaacccggg cccggaacgc tcaggcggaa tggcggcggc <210> 14 <211> 324

<212> DNA <213>人類 <400> 14 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgataatat tggttcttat tatgtttatt ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat aatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa 240 -4- 119679-序列表.doc 300 200815470 gacgaagcgg attattattg ccagtcttat gataagtatg tttttgtgtt tggcggcggc acgaagttaa ccgttcttgg ccag <210> 15 <211> 330

<212> DNA <213>人類 ' <400> 15 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctct tcgttcttat tttgtttctt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat gatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg cgcttcttgg gatactcttt ctgatgttga ggtgtttggc ggcggcacga agttaaccgt tcttggccag <210> 16 <211> 330 <212> DNA <213)人類 <400> 16 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctct tcgttcttat tttgtttctt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat gatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg cgcttcttgg gatcctcctt ctgcttttga ggtgtttggc ggcggcacga agttaaccgt tcttggccag <210> 17 <211> 327 <212> DNA <213>人類 <400> 17 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctct tcgttcttat tttgtttctt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat gatgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg cgcttcttgg gataatgatc attttgaggt gtttggcggc ggcacgaagt taaccgttct tggccag <210> 18 <211> 327 <212> DNA <213>人類 <400> 18 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 119679-序列表.doc 324 60 120 180 240 300 330

60 120 180 240 300 330 60 120 180 240 300 327 120 120

200815470 tcgtgtagcg gcgataagct tggttcttat tttgtttatt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat gataatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg ccagtctttt ggtatttcta atttttatgt gtttggcggc ggcacgaagt taaccgttct tggccag <2i0> 19 <211> 324

<212> DNA <213>人類 <400> 19 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgataagct tggttcttat tttgtttatt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgatgat gataatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg cggttcttgg gcttatcttg gtgatgtgtt tggcggcggc acgaagttaa ccgttcttgg ccag <210〉 20 <211> 369 <212> DNA <213>人類 <400> 20 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt agctgcaaag gttccggata ttcctttact aattatggta ttgcttgggt 'gcgccagatg cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atctatccgt ctgatagcta taccaattat tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtatgtct tatgattatc agcatcaggc tccttctatg gattcttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctca <210> 21 <211> 363 <212> DNA <213> 人類 <400> 21 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata tgaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt atcaatccgt ggactggcaa tacgaattac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgatcct ggtttttttt attatactcc ttctgatctt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc 119679-序列表.doc -6- 180 240 300 327 60 120 180 240 300 324 60 120 180 240 300 360 369 60 120 180 240 300 360 363 363

200815470 tea <210> 22 <211> 363 <212> DNA <213>人類 <400> 22 caggtgcaat tggttcagag eggegeggaa gtgaaaaaac egggegegag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata tgaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt attgatcctt ggaatggtca gactaattat gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagegaagat acggccgtgt attattgege gcgtgatcct ggtttttttt attatactcc ttctgatctt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc tea <210> 23 <211> 363 <212> DNA <213>人類 <400> 23 caggtgcaat tggttcagag eggegeggaa gtgaaaaaac egggegegag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata tgaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcgtt attgatcctt ggaatggtat tactaattat gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagegaagat acggccgtgt attattgege gcgtgatcct ggtttttttt attatactcc ttctgatctt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc tea <210> 24 <211> 339 <212> DNA <213 >人類 <400> 24 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggagg cactttttct tettatgeta tttcttgggt gcgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt atcgatccgt ttggcactgc gaattacgcg cagaagtttc agggccgggt gaccattacc geggatgaaa gcaccagcac egegtatatg gaactgagca gcctgcgtag egaagataeg gccgtgtatt attgegegeg tgtttatcag gatgtttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagetea <210> 25 <211> 339 <212> DNA <213>人類 119679-序列表.doc 60 120 180 240 3 00 360 363 60 120 180 240 300 360 363 60 120 180 240 300 339 200815470 <400> 25 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatgcta tttcttgggt gcgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt attgatccta ttatgggtac tgagtatgct cagaagtttc agggtcgggt gaccattacc gcggatgaaa gcaccagcac cgcgtatatg gaactgagca gcctgcgtag cgaagatacg gccgtgtatt attgcgcgcg tgtttatcag gatgtttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctca 60 120 180 240 300 33 9

<210> 26 <211> 342 <212> DNA <213>人類 <400> 26 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatgcta tttcttgggt gcgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcgag attgatcctg ttattggtga gactgattat gctcagaagt ttcagggtcg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgtttat caggatgttt ggggccaagg caccctggtg acggttagct ca 60 120 180 240 300 342

<210> 27 <211> 363 <212> DNA <213>人類 <400> 27 caggtgcaat tgcaagaaag tggtccgggc ctggtgaaac cgggcgaaac cctgagcctg acctgcaccg tttccggagg tagcatttct tcttcttctt attattggaa ttggattcgc caggcccctg ggaagggtct cgagtggatt ggcgagatct attttggctg gacctattat aatccgagcc tgaaaggccg ggtgaccatt agcgttgata cttcgaaaaa ccagtttagc ctgaaactga gcagcgtgac ggcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggttat gagtttcatg gttatactac ttttgattat tggggccaag gcaccctggt gacggttagc tea 60 120 180 240 3 00 360 363 <210> 28 <211> 348 <212> DNA <213>人類 <400> 28 caggtgcaat agctgcaaag cctgggaagg tggttcagag gttccggata gtctcgagtg eggegeggaa ttccttttct gatgggcttt gtgaaaaaac aattattgga atctttccgg cgggcgaaag ttggttgggt atactagcta cctgaaaatt gcgccagatg tacccgttat tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agegeggata aaageattag caccgcgtat 60 120 180 240 11%79·序列表.doe 300 200815470 348 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtgttaag cttattactg attattgggg ccaaggcacc ctggtgacgg ttagctca <210> 29 <211> 375 <212> DMA <213>人類 <400> 29 caggtgcaat tgcaacagtc acctgtgcga tttccggaga cagtctcctg ggcgtggcct aacgattatg cggtgagcgt cagtttagcc tgcaactgaa cgtcagggtg ctgtttatcc gtgacggtta gctca tggtccgggc ctggtgaaac tagcgtgagc tctaattctg cgagtggctg ggccgtatct gaaaagccgg attaccatca cagcgtgacc ccggaagata tggtccttat ggttttgatg cgagccaaac cctgagcctg ctgcttgggg ttggattcgc attatcgtag caagtgggtt acccggatac ttcgaaaaac cggccgtgta ttattgcgcg tttggggcca aggcaccctg 60 120 180 240 300 360 375 <210> 30 <211> 336 <212> DNA <213>人類 <400> 30 gatatcgtgc tgacccagcc gccttcagtg agtggcgcac caggtcagcg tgtgaccatc tcgtgtagcg gcagcagcag caacattggt tctaattatg tgatttggta ccagcagttg cccgggacgg cgccgaaact tctgatttat gatgatacta atcgtccctc aggcgtgccg gatcgtttta gcggatccaa aagcggcacc agcgcgagcc ttgcgattac gggcctgcaa agcgaagacg aagcggatta ttattgctct acttatgata attatcaggc tggttgggtg tttggcggcg gcacgaagtt aaccgttctt ggccag

6 0 120 180 240 300 336 <210> 31 <211> 109

<212> PRT <213>人類 * <400> 31

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 119679-序列表.doc 200815470 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Tyr Asp Ser Ser Met Leu Arg 85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 32 <211> 110 <212> PRT <213> 人類 <220>

<221> MIS C一FEATURE <222> (1).7(110) <223>與亚(^101^0:51相同丨 <400> 32

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala Asn Tyr His Asp Ser 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 . 110 <210> 33 <211> 110 <212> PRT <213>人類 <400> 33

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45 •10- 119679-序列表.doc 200815470

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala Ser Asp Tyr Thr Ser 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 34 <211> 110 <212> PRT <213> 人類 <220> <221> MISC FEATURE <222> ⑴二 Γ(110) <223> 與 SEQIDAo:52 相同 <400> 34

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg 工le Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala His Tyr His Asp lie 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 35 <211> 109 <212> PRT <213>人類 <400> 35 Asp lie GlU 1

Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 5 10 15 • 11 - 119679-序列表.doc 200815470

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pr〇 Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala His Asp Ser Leu Tyr Ser Arg 85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105

<210> 36 <211> 114 <212> PRT <213> 人類 <400> 36

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr 工le Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Leu Tyr Gly 20 25 30 lie Asn Asn Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie 50

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 90 95

Tyr Asn His Pro His Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr <210> 37 <211> 113 <212> PRT <213> 人類 •12- 119679-序列表.doc 200815470 <400> 37

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Leu Tyr Gly 20 25 30 工le Asn Asn Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 90 95

Ala Phe Gly Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 110

Thr <210> 38 <211> 114 <212> PRT <213>人類 <400> 38

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Leu Tyr Gly 20 25 30 lie Asn Asn Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 工le 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr 85 90 95

Ser Asp Glu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 13- 119679-序列表.doc 200815470

Arg Thr <210> 39 <211> 114 <212> PRT <213> 人類 <220> <221> MISC 一FEATURE <222> (1).7(114) <223> 與 SEQIDNO:53 相同 <400> 39

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Leu Tyr Gly 20 25 30

lie Asn Asn Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 90 95

Ala Tyr Glu Pro Asn Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr <210> 4 0 <211> 114 <212> PRT <213> 人類 <22Ό> <221> MISC 一 FEATURE <222> (1).7(114) <223> ^SEQroNO:_54ffipI <400> 40

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Leu Tyr Gly 20 25 30 •14 119679-序列表.doc 200815470

He Asn Asn Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr 85 90 95

Ala Phe Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr

<210> 41 <211> 108 <212> PRT <213>人類 <400> 41

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn lie Gly Ser Tyr Tyr Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Phe Pro Ser lie Val 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 42 <211> 108 <212> PRT <213> 人類 <400> 42

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15 119679-序列表.doc -15- 200815470

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn lie Gly Ser Tyr Tyr Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Ser Tyr lie Phe Val 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 43 <211> 108 <212> PRT <213>人類 <400> 43

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn lie Gly Ser Tyr Tyr Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Tyr Asp Ala Phe Thr Phe Val 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 44 <211> 108 <212> PRT <213〉人類 · <400> 44 '.

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin -16- 119679-序列表.doc 200815470 1 5 10 15

Thr Ala Arg 工le Ser Cys Ser Gly Asp Asn lie Gly Ser Tyr Tyr Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Lys Tyr Val Phe Val 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 45

<211> 110 <212> PRT <213>人類 \ <400> 45

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Phe Val 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Thr Leu Ser Asp Val 85 90 95

Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 46

<211> 110 <212> PRT <213>人類 <400> 46 -17- 119679-序列表.doc 200815470

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Phe Val 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr I»eu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Pro Pro Ser Ala Phe 85 90 95

Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 47 <211> 109 <212> PRT <213>人類 <400> 47

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Sex Cys Sex Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Phe Val 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asn Asp His Phe Glu 85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 48 <211> 109 <212> PRT <213> 人類 <400> 48 •18- 119679·序列表.doc 200815470

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Tyr Phe Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val He Tyr 35 40 45

Asp Asp Asp Asn Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr He Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Phe Gly lie Ser Asn Phe Tyr 85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 49 <211> 108 <212> PRT <213>人類 <400> 49

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Tyr Phe Val 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Asp Asn Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Ala Tyr Leu Gly Asp Val 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 <210> 50 <211> 112 <212> PRT <213> 人類 -19· 119679-序列表.doc 200815470 <400> 50

Asp lie Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn 20 25 30

Tyr Val lie Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Asp Asp Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Thr Gly Leu Gin 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Tyr Asp Asn Tyr Gin 85 90 95

Ala Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 51 <211> 110 <212> PRT <213 >人類 <220> <221> MISC^FEATURE <222> (1).7(110) <223> 與3£(3 ID NO:32相同 <400> 51

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala Asn Tyr His Asp Ser 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 -20 119679·序列表.doc 200815470 <210> 52 <211> 110 <212> PRT <213> 人類 <220 > <221> MISC 一 FEATURE <222> (1).7(110) <223> 與 SEQIDNO:34 相同 <400> 52

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala His Tyr His Asp lie 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 100 105 110 <210> 53 <211> 114

<212> PRT <213>人類 <220> < 2 21> MIS C一FEATURE <222> (1) .7(114) <223> 與油(5 ID NO:39相同—一 i <400> 53

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro •21- 119679-序列表.doc 200815470 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Sex Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 90 95

Ala Tyr Glu Pro Asn Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr <210> 54 <211> 114

<212> PRT <213>人類 <220> <221>- MISC—FEATURE <222> (1).7(114) <223> 與兕(5 ID N〇:4〇相同 <400> 54

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr 85 90 95

Ala Phe Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr <210> 55 <211> 121 <212> PRT <213> 人類 -22- 119679-序列表.doc 200815470 <220> <22X> MISC 一 FEATURE <222> (1)..(121) <223> 與15£(31〇1^0:65 及 SEQIDNO:66 相同、 <400> 55

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly He lie Asn Pro Trp Thr Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 56 <211> 121 <212> PRT <213>人類 <220> < 2 21 > MISC一FEATURE <222> (1)..(121) <223 ：> 與犯〇 ID n〇:69及SEQ ID NO:70相同丨 <400> 56

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asp Pro Trp Asn Gly Gin Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60 -23- 119679-序列表.doc 200815470

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Sex Thr Ala Tyr 65 70 75 8 0

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 57 <211> 121 <212> PRT <213>人類 <400> 57

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val 工le Asp Pro Trp Asn Gly lie Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp G.ly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 58 <211> 113 <212> PRT c213>人類 <220> <221> MISC一 FEATURE —_______^ <222> {1).7(113) j <223> 與卿1〇>1〇:67 及 j <400> 58

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser -24- 119679-序列表.doc 200815470

15 10 IB

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 iio

Ser <210> 59 <211> 113 <212> PRT < 213 > 人類 <220> <221> MISC一FEATURE <222> (1).7(113) <223> 與兕(^11^0:71 及 SEQIDNO:72 相同; <400> 59

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly He Asp Pro He Met Gly Thr Glu Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser -25- 119679-序列表.doc 200815470 100 105 110

Ser <210> 60 <211> 114 <212> PRT <213> 人類 <400> 60

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu lie Asp Pro Val lie Gly Glu Thr Asp Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110

Ser Ser <210> 61 <211> 121 <212> PRT <213> 人類 <400> 61

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Ser 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Asn Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Glu lie Tyr Phe Gly Trp Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 -26- 119679-序列表.doc 200815470

Lys Gly Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser 65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Glu Phe His Gly Tyr Thr Thr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 62 <2li> 116 <212> PRT <213> 人類 <4 00〉 62

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15

Ser Leu Lys lie Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30

Trp lie Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Phe 工le Phe Pro Asp Thr Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60

Gin Gly Gin Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Val Lys Leu lie Thr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 no

Thr Val Ser Ser 115 <210> 63 <211> 125 <212> PRT <213> 人類 <400> 63

Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala lie Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 -27- 119679-序列表.doc 200815470

Ser Ala Ala Trp Gly Trp lie Arg Gin Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu 35 40 45.

Trp Leu Gly Arg lie Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Val Asn Asp Tyr Ala 50 55 60

Val Ser Val Lys Ser Arg lie Thr lie Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80

Gin Phe Ser Leu Gin Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gin Gly Ala Val Tyr Pro Gly Pro Tyr Gly Phe 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

64 123 PRT 人類 <210> <211> <212> <213> <400> 64

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15

Ser Leu Lys lie Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

Gly lie Ala Trp‘Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60

Gin Gly Gin Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Met Ser Tyr Asp Tyr Gin His Gin Ala Pro Ser Met Asp Ser 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 65 <211> 121 <212> PRT <213> 人類 -28- 119679-序列表.doc 200815470 <220> <221> MISC__FEATURE 一 <222> (1).7(121) 」 — Ί <223> 與SEQ ID NO:55 及 SEQ Π> _ ' -——— —-----— — - — - —-——----— 一—一 <400> 6 5 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asn Pro Trp Thr Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 66 <211> 121 <212> PRT <213>人類

<221> MISC一 FEATURE <222> (1).7(121) <223> 與兕(51〇1^0:55及SEQIDNO:65相同；. <400> 66

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asn Pro Trp Thr Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60 -29· 119679-序列表.doc 200815470

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 113 <212> PRT <213>人類 <220>

<221> MISC一FEATURE <222> (1).7(113) <223> 與8的 ID NO:58及SEQ ID NO:68相同 1 <400> 67

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 no

Ser <210> 68 <211> 113

<212> PRT <213>人類 <220>

< 2 21> ’ ΜIS C FEATURE 30- 119679-序列表.doc 200815470 <222> (1)..(113》 <223> 與犯(311)1^0:58及兕(51〇>^0:67 相同 | <400> 68

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala· lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Sex Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser <210> 69 <211> 121 <212> PRT <213>人類 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1).7(121) <223> 與SEQIDNO:56 及 SEQIDNO:70 相同1 ( <400> 69

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asp Pro Trp Asn Gly Gin Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 -31 - 119679-序列表.doc 200815470

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 no

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 70 <211> 121 <212> PRT <213>人類 <220> <221> MISC一 FEATURE <222> (1).7(121) <223> 與兕(3 ID NO:56 及 SEQ ID NO:69 相同 i

<400> 70

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asp Pro Trp Asn Gly Gin Th:r Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 71 <211> 113

<212> PRT <213>人類 <220〉，

<221> MISC一 FEATURE <222> (1) .7(113} --------------------- <223> —與—SEQ ID NO:72 相同 32- 119679-序列表.doc 200815470 <400> 71

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro He Met Gly Thr Giu Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Sex Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser <210> 72 <211> 113 <212> PRT <213>人類 <220>

<221> MISC一 FEATURE <222> (1).7(113) 一 <223> 與亚(5 id NO:59及SEQ ID NO:71 相呼 j <400> 72

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro lie Met Gly Thr Glu Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 33- 119679-序列表.doc

200815470

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 no

Ser <21G> 73 <211> 642 <212> DNA <213>人類 <400> 73 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc tcgtgtagcg gcgattctat tggtaataag tatgttcatt ggtaccagca gaaacccggg caggcgccag ttcttgtgat ttatgctgat tctgatcgtc cctcaggcat cccggaacgc tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa gacgaagcgg attattattg ccagtcttat gctcattatc atgatatttg ggtgtttggc ggcggcacga agttaaccgt cctaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca <210> 74 <211> 660 <212> DNA <213>人類 <400> 74 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc agcagtatgc ttatgagcct aatacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag <210> 75 119679-序列表.doc 60 120 180 240 300 360 420· 480 540 600 642 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 -34- 660 60 60

200815470 <211> 660 <212> DNA <213>人類 <400> 75 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc attaactgca gaagcagcca gtctattctt tatggtatta acaataattt tctgggttgg taccagcaga aaccaggtca gccgccgaaa ctattaattt attgggcttc tactcgtgaa agcggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ctgattttac cctgaccatt tcgtccctgc aagctgaaga cgtggcggtg tattattgcc ttcagtattc tgatgagcct tggacctttg gccagggtac gaaagttgaa attaaacgta cggtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 657 attaactgca taccagcaga agcggggtcc tcgtccctgc acctttggcc atcttcccgc aataacttct ggtaactccc agcaccctga acccatcagg tgacccagag gaagcagcca aaccaggtca cggatcgttt aagctgaaga agggtacgaa catctgatga atcccagaga aggagagtgt cgctgagcaa gcctgagctc cccggatagc gtctattctt gccgccgaaa taSfcggctct cgtggcggtg agttgaaatt gcagttgaaa ggccaaagta cacagagcag agcagactac gcccgtcaca ctggcggtga tatggtatta ctattaattt ggatccggca tattattgcc aaacgtacgg tctggaactg ca9tggaagg gacagcaagg gagaaacaca aagagcttca gcctgggcga acaataattt attgggcttc ctgattttac agcagtatgc tggctgcacc cctctgttgt tggataacgc acagcaccta aagtctacgcaca9gg9aga acgtgcgacc tctgggttgg tactcgtgaa cctgaccatt ttttggttgg atctgtcttc gtgcctgctg cctccaatcg cagcctcagc ctgcgaagtc gtgttag <210> 76 <211> 657 <212> DNA <213> 人類 <4 0 0> 76 gatatcgtga <210> 77 <211> 214 <212> PRT <213>人類 <400> 77

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val -35- 119679-序列表.doc 200815470 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asrr Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 SO

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala His Tyr His Asp lie 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 78 <211> 214 <212> PRT <213> 人類 <400> 78

Asp lie Gl\i Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45 -36 119679-序列表.doc 200815470

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala Asn Tyr His Asp Ser 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 79 <211> 214 <212> PRT <213>人類 <400> 79

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu -37- 119679-序列表.doc 200815470 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala Asn Tyr His Asp Ser 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 80 <211> 214 <212> PRT <213>人類 <400> 80

Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ser lie Gly Asn Lys Tyr Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 4 5

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Ala His Tyr His Asp lie 85 90 95 38- 119679·序列表.doc 200815470

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin. Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 81 <211> 219 <212> PRT <21.3 >人類 <400> 81

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 SO S5

Ala Tyr Glu Pro Asn Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu -39- 119679·序列表.doc 200815470 115 120 125

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 82 <211> 219 <212> PRT <213 > 人類 <400> 82

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr 85 90 95

Ser Asp Glu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125

Cys Leu Leu Asn Asn Phe 140

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val 130 135 -40- 119679-序列表.doc 200815470

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 83

<211> 218 <212> PRT <213>人類 <400> 83

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Sex Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 85 90 95

Ala Phe Gly Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 145 150 155 160

Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr -41 - 119679-序列表.doc 200815470 165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 84 <211> 219 <212> PRT <213>人類 <400> 84

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80

Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Tyr 85 90 95

Ala Phe Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Sex Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 -42 119679-序列表.doc

200815470

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 85 <211> 1347 <212> DNA <213>人類 <400> 85 … caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggata tacctttact ggttattata tgaattgggt ccgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt atcaatccgt ggactggcaa tacgaattac gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgatcct ggtttttttt attatactcc ttctgatctt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc tcagcttcca ccaagggacc atccgtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag agcctctccc tgtctctggg taaatga <210> 86 <211> 1323 <212> DNA <213>人類 <400> 86 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 119679-序列表.doc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 -43- 1347 200815470

agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatgcta tttcttgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt attgatccta ttatgggtac tgagtatgct 180 cagaagtttc agggtcgggt gaccattacc gcggatgaaa gcaccagcac cgcgtatatg 240 gaactgagca gcctgcgtag cgaagatacg gccgtgtatt attgcgcgcg tgtttatcag 300 gatgtttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctcag cttccaccaa gggaccatcc 360 gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc 420 ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 480 agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac 600 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca 660 tcatgcccag cacctgagtt cctgggggga ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc 720 aaggacactc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc 780 caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc 840 aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac agcacgtacc Qtgtggtcag cgtcctcacc 900 gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc 960 ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag 1020 gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1080 ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1140 gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1200 agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg 1260 atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 1320 tga 1323 <210> 87 <211> 1323 <212> DNA <213>人類 <400> 87 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 6 0 agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatgcta tttcttgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt atcgatccgt ttggcactgc gaattacgcg 180 cagaagtttc agggccgggt gaccattacc gcggatgaaa gcaccagcac cgcgtatatg 240 gaactgagca gcctgcgtag cgaagatacg gccgtgtatt attgcgcgcg tgtttatcag 300 gatgtttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctcag cttccaccaa gggaccatcc 360 gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc ：acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc 420 ctggtcaagg actacttccc ：cgaaccggtg i acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 480 agcggcgtgc acaccttccc ：ggctgtccta l cagtcctcag i gactctactc :cctcagcagc 54 0 119679-序列表.doc •44-

200815470 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca tcatgcccag cacctgagtt cctgggggga ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa tga <210> 88 <211> 1323 <212> DNA <213>人類 <400> 88 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg agctgcaaag cctccggagg cactttttct tcttatgcta tttcttgggt gcgccaagcc cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt atcgatccgt ttggcactgc gaattacgcg cagaagtttc agggccgggt gaccattacc gcggatgaaa gcaccagcac cgcgtatatg gaactgagca gcctgcgtag cgaagatacg gccgtgtatt attgcgcgcg tgtttatcag gatgtttggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctcag cttccaccaa gggaccatcc gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acgaagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca tcatgcccag cacctgagtt cctgggggga ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agagccacag 119679-序列表.doc -45- 600 660 720 780 840 90 0 960 1020 1080 1140 1200 126 0 1320 1323 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 200815470 gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa tga 一 <210> 89 <211> 448 <212> PRT <213>人類 <400> 89

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

1080 1140 1200 1260 1320 132-3

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asn Pro Trp Thr Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 6 5 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Sex Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 119679-序列表.doc .46- 200815470

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Ίγχ Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr 325 330 335 lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 0 12 3 1111 2 2 2 2 <<<< 040RT.M 94P人 •47 119679·序列表.doc 200815470 <400> 90

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro lie Met Gly Thr Glu Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Giu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala 210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255

Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 -48 119679-序列表.doc 200815470

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 325 330 335

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr 340 345 350

Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365

Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 420 425 430

Ser ^Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 91 <211> 440 <212> PRT <213 > 人類 <400> 91

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met •49· 119679-序列表_(1(^ 200815470 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Sex Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala 210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255

Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 325 330 335

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr 340 345 350 -50 119679·序列表.doc 200815470

Lys Asn Gin Val Sex Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365

Asp He Ala Val Glu Trp Glu Sex Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 一 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415

Ser Cys Ser Val lyiet His Glu Ala Leu Kis Asn His Tyr Thr Gin Lys 420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 92 <211> 440 <212> PRT <213>人類 <400> 92

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 -51 - 119679-序列表.doc 200815470

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp Kis Lys Fro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala 210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255

Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 325 330 335

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr 340 345 350

Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365

Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 52- 119679-序列表.doc 200815470 420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 93 <211> 448

<212> PRT <213〉人類 <400> 93

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asn Pro Trp Thr Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 -53- 119679-序列表.doc 200815470

Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 255 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr 325 330 335 工le Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350

Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 94 <211> 448 <212> PRT <213>人類 <400> 94

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr -54- 119679-序列表.doc 200815470 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asp Pro Trp Asn Gly Gin Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 115

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 130 135

Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro 260 265 270

Giu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 -55- 119679-序列表.doc 200815470

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu 'vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Giy Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Sex Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 95 <211> 448 <212> PRT <213> 人類 <400> 95

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Asp Pro Trp Asn Gly Gin Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 56- 119679-序列表.doc 200815470

Ala Arg Asp Pro Gly Phe Phe Tyr Tyr Thr Pro Ser Asp Leu Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser Ser Sex Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro 260 265 270

Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser •57- 119679-序列表.doc 200815470 370 375 380

Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415

Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Sex Val Met His Glu Ala 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 96 <211> 440 <212> PRT <213> 人類 <400> 96

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly lie Asp Pro lie Met Gly Thr Glu Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 50 55 60

Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 . 80

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Val Tyr Gin Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 58- 119679·序列表.doc 200815470

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala 210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255

Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 . 315 320

Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 325 330 335

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr 340 345 350

Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365

Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 -59 119679-序列表.doc

Claims

200815470 十、申請專利範圍： 1 · 一種經分離人類或人類化抗體或其功能性片段，其包含對於目標蛋白c-Met具專一性之抗原結合區域，其中該抗體或其功能性片段可結合c-Met。 2.根據請求項1之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗體或其功能性片段可以2.0X 10·5 Μ或以下、2·0X 1〇_6 Μ或以下、2.0Χ10-7 Μ 或以下、2·〇χ1(Τ8 Μ 或以下、及 2.0Χ10·9 Μ或以下之KD值結合目標蛋白c-Met。 # 3 ·根據請求項1或2之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗體或其功能性片段對於目標蛋白C-Met具有每秒 l.〇xl〇_2或更小、每秒1.0X10·3或更小、每秒1·〇χ1〇-4或更小、或是每秒1.0 Χΐ (Γ5或更小之分離速率（KQff)。 4·根據請求項1之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗體或其功能性片段可以2·〇χ10·5 Μ或以下、2.0x1 Ο·6 Μ或以下、2·〇χ1〇_7 μ 或以下、2·〇χ1(Τ8 Μ 或以下、及 2·〇χ1(Γ9 Μ或以下之KD值結合目標蛋白c-Met，並抑制HGF與c-Met 馨之結合。 5 ·根據請求項丨之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗體或其功能性片段可結合目標蛋白C-Met並調控C-Met磷酸化作用。 6.根據請求項5之經分離抗體或其功能性片段，其中活化卜 Met磷酸化作用可激發選自器官再生、傷口復原、及組織再生所組成之群中之至少一種活性。 7 ·根據請求項6之經分離抗體或其功能性片段，其中該器 119679.doc 200815470 B係選自腎臟、肝臟、胰臟、心、肺、腸、皮膚、胸腺、及甲狀腺所組成之群。 8·根據請求項1之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗體與c-Met之結合係以至少一種針對選自下列者之拮抗作用或激動作用里之分析而判定：c_Met信號轉導途徑酶活之配位體誘發；c_Met信號轉導途徑基因表現之配位體誘發’ SfMc-Met之電化學發光基礎性配位體結合；配位體對c Met結合之酶連免疫吸收分析；以及細胞之增殖、存活、遷移、或轉移。 9_ #根據凊求項！之抗體或其功能性片段之經分離抗原結合區域。 1-30、 1 〇· —種經分離核甞酸序列 73-76、及 85-88 〇其係選自SEQ ID NOs: 11· -種由根據請求項1G之核答酸序列所編碼之經分離胺基 I序列，以及該胺基酸序列之保守性變體。康月求員10之經分離核甞酸序列，其中SEQ ID NOs: 1-20各編碼一抗原結合性輕鏈。 13.根據請求項 21_30各編碼 10之經分離核誓酸序列，其中SEq ID n〇s: 一抗原結合性重鏈。 14·種經分離之抗原結合區域，其包含 N〇S: 1-20之核甞酸序列所編碼之輕鏈。 15· —種經分離之抗原結合區域，其包含 N〇s: 21.3G之核:y：酸序列所編碼之重鍵。 16.種I分離之抗原結合區域，其包含由選自SEQ 由選自SEQ 由選自SEQ ID ID ID 119679.doc 200815470 NOs: 1-20之核苷酸序列所編碼之輕鏈，以及由選自seq ID NOs: 21-30之核苷酸序列所編碼之重鏈。 17· —種經分離胺基酸序列，其係選自SEQ⑴n〇s: 31_72、 77-84、及89-96以及其保守性變體。 18·根據請求項17之經分離胺基酸序列，其中seq 1〇 n〇s: 3 1 - 5 4各包含一抗原結合性輕鍵。 19 ·根據明求項17之經分離胺基酸序列，其中seq id NOs: 5 5 - 7 2各包含一抗原結合性重鍵。毫I 20·種經分離之抗原結合區域，其包含具有選自jgEQ ID NOs: 3 1-54之胺基酸序列之輕鏈。 21 · —種經分離之抗原結合區域，其包含具有選自SEq工^ NOs: 55-72之胺基酸序列之重鏈。 22· —種經分離之抗原結合區域，其包含具有選自SEq ID NOs: 31-54及其保守性變體之胺基酸序列之輕鏈，以及由選自SEQ ID NOs: 55-72及其保守性變體之胺基酸序列編碼之重鍵。 23. —種經分離之胺基酸序列，其與SEq id n〇s: 31-72、 77-84、及 89-96具有至少 5〇、6〇、7〇、8〇、9〇、95、或 99百分比之相同性。 24· —種經分離之核菩酸序列，其與SEq n〇s: 1-3〇、73_ 76、及85-88中所述之序列具有至少6〇、7〇、8〇、9〇、 95、或99百分比之相同性。 25· —種經分離之抗原結合區域，其包含選自SEQ m N〇:乃之核苷酸序列所編碼之Ig；l輕鍵。 119679.doc 200815470 26. —種經分離之抗原結合區域，其包含選自SEQ id n〇s: 74-76之核苷酸序列所編碼之Ig Λ：輕鏈。 27. —種經分離之抗原結合區域，其包含選自SEQ id NQs: 77-80之胺基酸序列中所示之Ig λ輕鏈。 28· —種經分離之抗原結合區域，其包含選自SEQ iD N〇s: 8 1-84之胺基酸序列中所示之Ig/c輕鏈。 29·根據請求項1之經分離抗體或其功能性片段，其係、& IgG 〇 _ 30·根據請求項29之經分離抗體或其功能性片段，其係& IgGl、IgG2、IgG3、或 IgG4。 3 1 ·根據請求項30之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4係選自Seq ID NOs: 85-88之核苷酸序列所編碼。 32.根據請求項3丨之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4係由與選自SEQ ID NOs: 85-88之序列具有至少6〇、 70、80、90、95、或99百分比相同性之核:y：酸序列所編碼0 33·根據請求項3〇之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4係如選自SEq ID n0s: 89-96及其保守性變體之胺基酸序列中所示。 34·種經分離之人類或人類化抗體或其功能性片段，其包 s抗原結合區域，其對於一 c_Met之抗原表位具有專一性’其中該抗體或功能性片段可結合細胞上之c_Met表面又體，並可預防或改善癌症之發展或轉移或是可預防或改善炎性病況。 119679.doc 200815470 35·根據請求項！、2、4至8、及29至34中任一項之經分離抗體或功能性片段，其係Fab或scFv抗體片段。 3 6·根據請求項35之經分離抗體或其功能性片段，其係 IgG 〇 37·根據請求項36之經分離抗體或其功能性片段，其係 IgGl、IgG2、IgG3、或 IgG4。 3 8.根據請求項37之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4係由選自SEQ m N0s: 85_88之核苷酸序列所編碼。 39·根據請求項38之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4係由與選自SEQ m n〇s: 85_88之序列具有至少6〇、 70、80、9〇、95、或99百分比相同性之核苷酸序列所編、碼。 40·根據請求項37之經分離抗體或其功能性片段，其中該 IgG4包含選自SEQ m N〇s: 89-96及其保守性變體之胺基酸序列。 41·根據請求項卜2、4至8、及29至Μ中任一項之經分離抗體或功能性片段，其係Fab片段或scFv抗體片段，或係駱 .辱它奈米抗體（eamelid nanobody)。 42.根據請求項丨、2、4至8、及29至34中任一項之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗原表位係構形性之抗原表位。 43·根據請求項42之經分離抗體或其功能性片段，其中該抗原表位包含e_Met胞外域胺基酸序列之殘基。 44· 一種醫藥組合物，其包含至少一種根據請求項1至8及π 119679.doc 200815470 至34中任一項之抗體之載體或賦形劑。片'…及其醫藥可接受 45· —種轉基因動物 …馆其T有編碼根據請求項⑴及29至34 、之抗體或其功能性片段之基因。 46. —種根據請求項田… 樂組合物之用途，其係用以製造 ;~ \ c-Met相關性疾病或病況之藥物。 47. 根據請求項46之用盆〃甲4疾病或病況係癌症或炎性病況。 48·根據請求項47之用途，盆中兮、虎、 ^ T該癌症係選自下列所組成之群：腦癌、胃癌、生殖系統癌、泌尿系統癌、前列腺癌、膀胱癌（表面及肌肉侵染性）H子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤（包括神經膠質母細胞瘤、間變性星狀細胞瘤、寡星狀細胞瘤、及寡樹狀神經膠質瘤）、食道癌、胃癌、胃腸癌、肝癌、肝細胞癌 (HCC)(包括兒童HCC)、頭及頸癌（包括頭及頸鱗狀細胞癌、鼻咽癌）、許特萊氏（Hurthle)細胞癌、上皮癌、皮膚癌、黑素瘤（包括惡性黑素瘤）、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤（包括多發性骨髓瘤）、白血病、肺癌（包括非小細胞肺癌（包括所有組織學次型：腺癌鱗狀細胞癌、支氣管肺泡細胞癌、大細胞癌、及腺鱗混合型）、小細胞肺癌）、印巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎臟癌、腎細胞癌（包括遺傳性及偶發性乳頭狀腎細胞癌，第I型及第II型，以及透明細胞腎細胞癌）；肉瘤，特別係骨肉瘤、透明細胞肉瘤、及軟組織肉瘤（包括腺泡狀及胚胎型橫紋肌肉瘤、腺泡狀 119679.doc 200815470 軟組織肉瘤）；甲狀腺癌（乳頭狀及其他次型）。 49. 50. 51. 52. # 53. 54. 55. 56. 57. 58. 59. 60. 根據明求項48之用途，其中該癌症係選自肝、腎、及食道之癌。根據哨求項46之用途，其中該方法尚包含投予化療劑。根據請求項5G之用途，其中該化療劑係抗癌劑。一種根據請求項1至8及29至34中任一項之抗體或其功能片I又之用％，其係用以製造用於治療非所欲細胞之藥物。根據請求項52之用途，其中該細胞帶有卜跑。根據請求項52或53之用途’其中該藥物係結合化療劑或放射照射而投藥。 -種於活料辨識包含c_Met之細胞之方&，該方法包含使該細胞與根據請求項丨至8及29至34中任一項之抗體或抗體片奴接觸，其中該抗體或片段尚包含可偵測性之標記0 根據請求項56之方法，其中該標記係放射活性、榮光、磁性、偏磁性、或化學發光。根據明求項56之方法，其尚包含對該細胞進行顯影或分離之步驟。根據請求項卜2、4至8、及29至34中任一項之經分離抗體或抗體片段，其中該抗體係合成性之抗體。根據明求項44之醫藥組合物，其肖包含額外之療劑。根據請求項60之醫藥組合物，其中該額外之療劑係選自抗癌劑；抗生素；抗炎劑；生長因子；以及細胞因子所 119679.doc 200815470 組成之群。 61 · —種經分離之抗體，其包含第一胺基酸序列，其係重鏈’該重鏈選自SEQ ID NOs: 55-72所組成之群以及與選自SEQ ID NOs: 55-72所組成之群之序列具有至少6〇、 70、80、90、95、或99百分比序列相同性之序列；以及第二胺基酸序列，其係輕鏈，該輕鏈選自SEQ ID NOs: 3 1-54所組成之群以及與選自SEQ ID NOs: 3 1-54所組成之群之序列具有至少60、70、80、90、95、或99%序列相同性之序列。 62· —種免疫共軛物，其包含為根據請求項1至8及29至34中任一項之抗體或其片段之第一組成分。 63_根據請求項62之免疫共軛物，其中該免疫共軛物包含具有一第二胺基酸序列之第二組成分。 6 4 ·根據请求項6 3之免疫共輛物，其尚包含細胞毒素。 6 5 ·根據請求項6 3之免疫共輛物，其中該第二序列係結合蛋白或抗體，其對於不同於c-Met之目標具有結合專一性。 66·根據請求項63之免疫共軛物，其係雙專一性抗體，對於不同於c-Met之目標具有結合專一性。 67·根據請求項66之雙專一性抗體，其中該不同sc_Met之結合專一性之目彳示係位於癌細胞表面之腫瘤抗原或腫瘤相關性蛋白。 68· —種套組，其包含根據請求項1至8及29至34中任一項之抗體或其片段。 69·根據請求項68之套組，其尚包含其醫藥可接受之載體或 119679.doc 200815470 賦形劑。 70.根據請求項68之套組，其中該抗體係以單元劑量之形式存在，且其尚包含對個體進行投藥之指示。

119679.doc 200815470 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（1)圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： (無元件符號說明）八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無）

119679.doc