SK7662001A3

SK7662001A3 - Stabilization of macrolides

Info

Publication number: SK7662001A3
Application number: SK766-2001A
Authority: SK
Inventors: Francois Navarro; Samuel Petit; Guy Stone
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1998-12-07
Filing date: 1999-12-06
Publication date: 2001-12-03
Also published as: EP1137439B2; EP2269651A3; CA2732620A1; JP5165199B2; CZ302210B6; KR20060096477A; EP1743657A2; IT1319701B1; US7741338B2; HU230174B1; TW200540179A; HU228939B1; ES2288033T3; PE20001333A1; NZ527781A; NZ511936A; CA2732620C; TWI248938B; BR9915986A; ITMI992520A0

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka stabilizácie farmaceutický účinnej látky citlivej na oxidáciu, napr. polyénového makrolidu, výhodne polyénového makrolidu, ktorý má imunosupresivne vlastnosti, najmä napr. rapamycinu.

Doterajší stav techniky

Spracovanie a skladovanie, najmä vo veľkom množstve, farmaceutických účinných látok, ktoré sú citlivé na oxidáciu, je veľmi zložité. Je potrebné zvláštne zaobchádzanie a zložky citlivé na oxidáciu sa musia často skladovať vo vzduchotesných obaloch pod ochrannou atmosférou. V prípade ďalšieho spracovania takýchto farmaceutických účinných látok sa do prípravkov pridáva značné množstvo stabilizačných činidiel.

Podstata vynálezu

Polyénové makrolidy majú uspokojujúce vlastnosti čo sa týka stability. Zistilo sa však, že ich stabilita vzhľadom na kyslík sa môže výrazne zlepšiť pridaním stabilizačného činidla, napr. antioxidantu, na začiatku kroku, v ktorom sa izolujú.

Predkladaný vynález teda poskytuje:

1. Spôsob stabilizácie polyénového makrolidu, ktorý obsahuje krok, v ktorom sa pridá antioxidant k purifikovanému makrolidu, výhodne pri uskutočňovaní kroku izolácie.

Tento spôsob je obzvlášť výhodný na výrobu stabilizovaných polyénových makrolidov vo veľkom množstve. Množstvo antioxidantu ·· ···· je vhodne do 1 %, výhodnejšie 0,01 až 0,5 % (vzhľadom na hmotnosť makrolidu).

Takéto malé množstvo sa ďalej nazýva „kryštalické množstvo”.

Ako alternatívu k uvedenému predkladaný vynález ďalej poskytuje:

2. Zmes, napr. zmes s veľkým objemom, ktorá obsahuje polyénový makrolid a antioxidant, výhodne v katalytickom množstve, výhodne v pevnej forme.

Zmes je v časticovej forme, napr. v kryštalickej alebo amorfnej forme. Uchováva sa v sterilných alebo v podstate sterilných podmienkach, napr. v podmienkach vhodných na farmaceutické použitie.

3. Ďalej vynález poskytuje použitie zmesi, ktorá je definovaná v bode 2, na výrobu farmaceutickej kompozície.

K príkladom polyénových makrolidov patria napr. molekuly, ktoré obsahujú dvojité väzby, najmä konjugované dvojité väzby, napr. také, ktoré majú antibiotické a/alebo imunosupresivne účinky, napr. makrolidy, ktoré obsahujú laktámovú alebo laktónovú väzbu a ich deriváty, napr. zlúčeniny, ktoré majú biologickú aktivitu kvalitatívne podobnú ako natívne makrolidy, napr. chemicky substituované makrolidy. K vhodným príkladom patria rapamycíny a askomycíny. Výhodný polyénový makrolid je taký, ktorý obsahuje aspoň 2 konjugované dvojité väzby, napr. 3 konjugované dvojité väzby.

Rapamycín je známy laktámový makrolid pripraviteľný napr.

pomocou Streptomyces hygroscopicus. Štruktúra rapamycínu bola opísaná v publikácii Kessler, H. et al.; 1993; Helv. Chim. Acta, : 117. Rapamycín má antibiotické imunosupresivne vlastnosti.

Sú známe deriváty rapamycínu ako napr. 16-O-substituované rapamycíny, napr. opísané v medzinárodných patentových • · ·· ···· • ·

WO 94/02136 a WO 96/41807, 40-O-substituované napr. opísané

WO 94/09010, WO 92/05179, prihláškach rapamyciny, prihláškach WO 94/02385 v medzinárodných patentových

WO 95/14023, 94/02136, všetky formou odkazu deriváty rapamycinu sú vo vzorci A na str. 1 kde hydroxylová skupina v polohe 40 nahradená skupinou -OR, hydroxyalkoxya1kýlová, teda napr. 40-0-(2 a WO 96/13273, ktoré sú súčasťou predkladanej prihlášky. Výhodné také, medzinárodnej prihlášky WO 94/09010 je kde R je skupina hydroxyalkylová, acylaminoalkylová alebo aminoalkylová,

-hydroxy)etylrapamycin, 40-0-(3-hydroxy)propylrapamycin a 40-0-[2-(2-hydroxy)etoxy]etylrapamycin.

Askomycíny, z ktorých najznámejšie sú FK-506 a askomycin, predstavujú ďalšiu triedu laktámových makrolidov, z ktorých mnohé majú silný imunosupresívny a protizápalový účinok. FK-506 je laktámový makrolid tvorený Streptomyces tsukubaensis. Štruktúra FK-506 bola opísaná v Prílohe k Merck Index (Appendix to the Merck Index, 11 th ed. (1989), položka A5). Askomycin bol opísaný napr. v Patente USA č. 3,244,592. Askomycin, FK-506, ďalšie prirodzene sa vyskytujúce makrolidy, ktoré majú podobné biologické účinky, a ich deriváty, napr. syntetické analógy a deriváty, sú kolektívne nazývané „askomycíny. Príklady syntetických analógov alebo derivátov sú napr. halogénované askomycíny, ako je napr. 33-epichloro-33-deoxyaskomycín, ktorý bol opísaný v Európskom patente EP-A-427,680, deriváty tetrahydropyránu, napr. opísané v Európskom patente EP-A 626,385.

Obzvlášť výhodný makrolid je rapamycín a 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycin.

Obzvlášť výhodná zmes podía predkladaného vynálezu je zmes

Výhodné antioxidanty sú napr. 2,6-di-terc-butyl-4-metylfenol (BHT), vitamín E alebo C, pričom obzvlášť výhodný je BHT.

rapamycínu alebo 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu a 0,2 % (vzhľadom na hmotnosť makrolidu) antioxidantu, výhodne BHT.

Antioxidant sa pridáva k polyénovému makrolidu na začiatku izolačných krokov, výhodne posledného izolačného kroku, výhodnejšie práve pred posledným krokom zrážania. Makrolid je výhodne v purifikovanom stave. Rozpustí sa v inertnom rozpúšťadle, k vzniknutému roztoku sa pridá antioxidant, potom nasleduje zrážanie stabilizovaného makrolidu, napr. v amorfnej forme alebo v kryštalickej forme. Výhodne je zmes podľa vynálezu v amorfnej forme.

Výsledný stabilizovaný makrolid prejavuje prekvapivo zlepšenú stabilitu voči oxidácii a zaobchádzanie s ním a skladovanie, napr. vo veľkom objeme pred ďalším spracovaním napr. do galenickej formy, je teda oveľa ľahšie. Obzvlášť je to zaujímavé u makrolidov v amorfnej forme.

Makrolidy stabilizované podľa vynálezu sa používajú ako také na výrobu ďalších farmaceutických prípravkov. Takéto prípravky sa pripravujú metódami, ktoré sú odborníkom známe, ktoré zahŕňajú pridanie jedného alebo niekoľkých farmaceutický prijateľných riedidiel alebo nosičov, a taktiež, pokiaľ je to potrebné, pridanie ďalšieho stabilizačného činidla.

Predkladaný vynález ďalej poskytuje:

4. Farmaceutická kompozícia, ktorá ako účinnú zložku obsahuje už opísanú stabilizovanú zmes, spoločne s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými riedidlami alebo nosičmi.

Kompozícia podľa predkladaného vynálezu je upravená na perorálne, parenterálne, topické (napr. na kožu), očné, alebo nazálne podávanie a/alebo inhaláciu (napr. pľúcnu). Výhodne ide o kompozíciu na perorálne podávanie, výhodne o bezvodú kompozíciu, pokiaľ je účinnou látkou laktónový makrolid.

·· ···· • · kompozícia podľa vynálezu obsahuje ďalšie lubrikant, rozvolňujúce činidlo, surfakant, príchute apod., je v tekutej forme, ako je

Farmaceutická excipienty, napr.

nosič, riedidlo, napr. roztok, suspenzia alebo emulzia ako je mikroemulzia, napr. opísaná v Patente USA č. 5,536,729, alebo v tuhej forme, ako je tobolka, tableta, dražé, prášky (vrátane mikronizovaných granuláty napr.

alebo inak zmenšovaných častíc), tuhé disperzie, ako apod.,

WO 97/03654, boli napr.

prihláške ktorej obsah v polotuhej

Výhodne ide forme, ako sú opísané v Medzinárodnej je vložený formou odkazu, alebo napr. masti, gély, krémy a pasty.

o kompozície vhodné na perorálne kompozície forme. Farmaceutické sú v tuhej pripravujú stabilizovaného makrolidu podľa metódami, ktoré sú odborníkovi vynálezu s podávanie. Výhodne podlá vynálezu sa známe, zmiešaním ďalšími zložkami, pritom jednotlivé zložky sa môžu rozomlieť potom, pokiaľ je to potrebné, lisovať napr. do alebo rozdrviť a tabliet.

Predkladaný vynález je najmä vhodný na rapamycínové kompozície v tekutej alebo tuhej forme. Obzvlášť výhodná forma kompozície je tuhá disperzia, napr. obsahujúca stabilizovaný rapamycín podľa vynálezu a nosičové médium, napr. vo vode rozpustný polymér ako je hydroxypropylmetylcelulóza, napr. ako bolo opísané v Medzinárodnej prihláške WO 97/03654.

Kompozície podľa vynálezu sú vhodné na indikácie, aké sú známe pre makrolidy v nich obsiahnuté, a napr. v známom dávkovaní. Tak napr. ak má makrolid imunosupresívne vlastnosti, ako napr. rapamycín alebo derivát rapamycínu, kompozícia je užitočná napr. na liečenie alebo prevenciu akútnej alebo chronickej reakcie odvrhnutia allo- alebo xenotransplantátu, autoimunitných ochorení alebo zápalových stavov, astmy, proliferatívnych ochorení, napr, nádorov, alebo hyperproliferatívnych vaskulárnych ochorení, výhodne na liečenie alebo prevenciu reakcie odvrhnutia transplantátu.

·· ····

Množstvo makrolidu a kompozície, ktoré sa podáva, závisí od radu faktorov, napr. aká účinná látka sa použila, podmienok liečenia, trvania liečenia apod. Tak napr. pre rapamycín alebo

40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín je vhodná denná dávka pri perorálnom podávaní 0,1 až 10 mg, podávaná naraz alebo rozdelená na čiastkové dávky.

Ďalší aspekt predkladaného vynálezu poskytuje 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštalickej forme, najmä v podstate čistej forme. Výhodná kryštalická forma je charakterizovaná neprítomnosťou alebo v podstate neprítomnosťou akejkoľvek zložky rozpúšťadla, je v nesolvatovanej forme.

40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštalickej forme patrí do jednoklonnej sústavy. Výsledné kryštály majú teplotu topenia 146°C až 147°C, obzvlášť 146,5°C. Tu uvedená rôntgenová difrakčná analýza pomáha identifikácii novej kryštalickej formy podľa vynálezu. Podmienky, pri ktorých boli tieto dáta získané, boli nasledujúce:

Teplota	293 (2)	K
Vlnová dĺžka	1,54178	0 A
Priestorová skupina	P2i
Rozmery jednotkovej bunky
a	14,378	(2) Á
b	11,244	(D Ä
c	18,310	(2) Á
β	108,58	(D Ä
Objem	2805,8	(6) Ä³
Z	2

Hustota (vypočítaná)

Absorpčný koeficient

1,134 g/cm³

0,659 mm-1 ·· ···· ··

F (000)	1040
Veľkosť kryštálu	0,59 x 0,11 x 0,03 mm
θ pre zber dát	2,55 až 57,20 °
Zozbierané odrazy	4182
Nezávislé odrazy	4037 [R(int)=0,0341]
Intenzita útlmu	32 %
Metóda spresnenia	najmenší štvorec plnej matice na F²
Dáta/prekážky/parametre	3143/1/613
Kvalita dobrej zhody na F²	1,055
Výsledné R [I>2 sigma(I)]	Ri = 0,0574, wR₂ = 0, 1456
Najväčšia diferencia,
vrchol a minimum	0, 340 a -0,185 e/ Ä ³
40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštalickej forme sa

pripravuje rozpustením amorfnej zlúčeniny v rozpúšťadle, napr. etylacetáte, ku ktorému sa pridá alifatický uhľovodík C_nH_2n+2(n=5, 6 alebo 7). Po pridaní uhľovodíka sa vzniknutá zmes zohreje na teplotu 25°C až 50°C, teda napr. 30°C až 35°C. Vzniknutá zmes sa potom výhodne uchováva pri nízkej teplote, napr. nižšej ako 25°C, výhodne 0C° až 25°C. Kryštály sa potom filtrujú a usušia. Výhodný alifatický uhľovodík je heptán. Pokiaľ je to potrebné, proces nukleácie sa môže zahájiť napr. sonikáciou alebo očkovaním.

Predkladaný vynález ďalej poskytuje spôsob purifikácie 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu, ktorý zahŕňa kryštalizáciu 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu z média umožňujúceho kryštalizáciu, ako bolo napr. opísané pred týmto, a izoláciu takto získaných kryštálov. Kryštálotvorné médium môže obsahovať jednu alebo viac ďalších zložiek, okrem tých, ktoré boli uvedené pred týmto. Obzvlášť vhodným kryštalizačným médiom je napr. médium ·· ·· ···· ·· obsahujúce 2 diely etylacetánu a 5 dielov alifatického uhľovodíka, napr. heptánu.

Zistilo sa, že 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštálovej forme má in vitro a in vivo imunosupresívnu aktivitu porovnateľnú s aktivitou amorfnej formy. Pri lokalizovanej GvHD (rejekcia štepu) bola maximálna inhibicia (70 - 80 %) zdurenie lymfatických uzlín dosiahnutá dávkami 3 mg 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu v kryštalickej forme.

40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín je užitočný pre rovnaké indikácie, ktoré sú známe pre amorfné zlúčeniny, napr. na prevenciu alebo liečenie aktútneho a chronického odmietnutia allo- alebo xenotransplátu, autoimunitných stavov alebo zápalových ochorení, astmy, proliferatívnych porúch, napr. nádorov, alebo hyperproliferatívnych vaskulárnych porúch, ako sú opísané napr. v dokumente WO 94/09010 alebo WO 97/35575, ktoré sú vložené formou odkazu. Všeobecne možno zhrnúť, že uspokojivé výsledky sa získali pri perorálnom podávaní v dávkach 0,05 až 5 alebo až 20 mg/kg/deň, napr. 0,1 až 2 alebo až 7,5 mg/kg/deň, podávaných jedenkrát za deň a alebo vo forme čiastkových dávok 2 až 4 x denne. Vhodné denné dávky pre pacienta sú teda rádovo 10 mg., teda napr. 0,1 až 10 mg.

40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštalickej forme sa podáva akýmkoľvek obvyklým spôsobom, napr. perorálne, napr. vo forme tabliet alebo toboliek, alebo nazálnou alebo pulmonárnou cestou (inhalovaním). Môže sa podávať ako samotná účinná zložka alebo spoločne s ďalšími liečivami, napr. imunosupresívami, imunomodulátormi a/alebo protizápalovými liečivami, napr. podľa dokumentu WO 94/09010.

Predkladaný vynález sa ďalej týka:

5. Prevencie alebo liečenia akútnej alebo chronickej rejekcie allo- alebo xenotransplátu, autoimunitných stavov alebo ·· ·· ···· zápalových ochorení, astmy, proliferatívnych porúch, napr.

nádorov, alebo hyperproliferativnych vaskulárnych porúch, pacienta, ktorý takéto liečenie potrebuje, pričom toto liečenie spočíva v tom, že sa pacientovi podáva terapeuticky účinné množstvo 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu v kryštalickej forme.

6. 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu v kryštalickej forme na použitie ako liečivo, napr. pri liečení opísanom pred týmto.

7. Farmaceutickej kompozície obsahujúcej 40-0-(2-hydroxy) etylrapamycín v kryštalickej forme spoločne s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.

8. Súpravy (kit) alebo balenia na použitie na imunosupresiu alebo pri zápaloch, ktorá/é obsahuje farmaceutickú kompozíciu opísanú pred týmto a farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu imunosupresívne alebo imunomodulačné liečivo alebo protizápalové liečivo.

Nasledujúce príklady ilustrujú vynález, rozsah vynálezu však nijako neobmedzujú.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kryštalizácia

0,5 g amorfného 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu sa rozpustilo v 2 ml etylacetátu pri 40°C. Pridalo sa 5 ml heptánu a roztok sa stal „mliečnym. Po zohriatí na 30°C sa roztok opäť vyčíril. Po ochladení na 0°C a poškriabaní na banku sa z roztoku oddelila olejová fáza. Skúmavka sa uzatvorila a uložila cez noc pri teplote 10°C. Výsledná objemná biela tuhá látka sa filtrovala a premyla 0,5 ml zmesi etylacetát/hexán (1:2,5) a vzniknuté kryštály sa sušili 16 hodín pri teplote 40°C a tlaku 0,5 kPa ·· ·· •· · • · ···· · • · · · · ·· • · · · ·· ·· ·· ·· ·· ···· ·· • · ·· • ·· • · · · • ·· (5 mbar). Takto sa získal 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycin v kryštalickej forme s teplotou topenia 146,5°C.

Kryštalizácia vo väčšom meradle sa môže uskutočniť nasledujúcim spôsobom:

250 g amorfného 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu sa rozpustí v 1,0 1 etylacetátu v argónovej atmosfére pri pomalom miešaní. Tento roztok sa zohreje na 30°C a potom sa počas 45 minút po kvapkách pridá 1,5 1 heptánu. 0,25 g očkovacích kryštálov pripravených v predchádzajúcom kroku sa po častiach pridá za rovnakých podmienok. Zmes sa ďalej mieša pri 30°C 2 hodiny a potom sa kryštalizačná zmes ochladí na 25°C počas 1 hodiny a potom na 30 minút na 10°C a potom sa filtruje. Kryštály sa potom opláchnu 100 ml zmesi etylacetát/hexán (2:3). Následné sušenie sa uskutočňuje pri 50°C a 0,5 kPa (5 mbar). Teplota topenia je 146,5°C.

IR v KBr: 3452, 2931, 1746, 1717, 1617, 1453, 1376, 1241,

1191, 1163, 1094, 1072, 1010, 985, 896 cm’¹.

Jednotlivé rôntgenové štruktúry so súradnicami sú uvedené na obr. 1 až 3.

Príklad 2

Príprava stabilizovaného 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu

100 g 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu sa rozpustilo v 600 ml absolútneho etanolu. Po pridaní 0,2 g BHT sa vzniknutý roztok počas 1 hodiny za stáleho miešania po kvapkách pridal k 3 1 vody. Vzniknutá suspenzia sa miešala ďalších 30 minút. Filtráciou s následným premytím (3 x 200 ml voda/etanol v pomere (obj./obj.) 5 : 1) vznikol vlhký biely produkt, ktorý sa ďalej sušil vo vákuu (0,1 kPa (1 mbar)) pri 30°C počas 48 hodín. Výsledný suchý produkt obsahoval 0,2 % (hmotn.) BHT.

·· ·· • · · • · ··· • · · · · • · · · ·· ··

·· ····

Takto pripravený produkt vykazoval zlepšenú stabilitu pri skladovaní. Suma vedľajších produktov a degradačných produktov v % po 1 týždni skladovania bola nasledujúca:

Zlúčenina v 50°C v otvorenej fľaši

Príklad 2 (0,2 % BHT) 1,49

Bez BHT >10

Postup uvedený v príklade možno opakovať s tým, že sa ako účinná látka použije rapamycín.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Zmes, vyznačujúca že obsahuje

·· • · • · • · • ··· • · ·· ···· • · · • · · • · · · · ·· • · • · • · • t· • • • · • · • · · • · A ·· ·· ·· · ·· ···

tým, polyénový makrolid a antioxidant.

2. Zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že antioxidant je prítomný v množstve do 1 % hmotnosti makrolidu.

3. Zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že antioxidant je prítomný v množstve 0,2 % hmotnosti makrolidu.

4. Zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že antioxidant je 2,6-di-terc-butyl-4-metylfenol.

5. Zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že polyénový makrolid je rapamycín alebo 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín.

6. Zmes podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že je v tuhej forme.

7. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje ako účinnú zložku zmes podľa nároku 1 spoločne • s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo riedidlami.

8. Spôsob stabilizácie polyénových makrolidov, vyznačujúci sa tým, že sa k purifikovanému makrolidu pridá antioxidant.

9. 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycín v kryštalickej forme.

10.Zlúčenina podľa nároku 9 v kryštalickej nesolvatovanej forme.

·· ·· • · · • · ·** • · · · • · · · ·· ·· ·· ····

11.Zlúčenina podľa nároku 9, ktorá má kryštalickú mriežku s vlastnosťami: a = 14,37 Ä, b = 11,24 A, c = 18,31 Ä, objem 2805 Ä³.

12. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsa• huje zlúčeninu podía nároku 10 alebo 11 spoločne s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo riedidlami.

13. Spôsob purifikácie 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu vyznačujúci sa tým, že zahŕňa krok kryštalizácie 40-0-(2-hydroxy)etylrapamycínu z kryštalotvorného média a takto získané kryštály sa izolujú.