SK5032000A3

SK5032000A3 - A process for the preparation of aminocarbonyl derivatives of geneseroline having selective brain anticholinesterase activity, pharmaceutical composition containing the same, use thereof and intermediates

Info

Publication number: SK5032000A3
Application number: SK503-2000A
Authority: SK
Inventors: Paolo Chiesi; Paolo Ventura; Vittorino Servadio; Roberto Pighi; Fausto Pivetti; Bluetta Salsi; Maurizio Delcanale; Gabriele Amari; Claudio Pietra; Gino Villetti
Original assignee: Chiesi Farma Spa
Priority date: 1997-10-10
Filing date: 1998-10-07
Publication date: 2000-10-09
Also published as: EA200000300A1; NZ503773A; KR20010015714A; AR018511A1; CN1278264A; IL135399A0; EP1023297A1; US6297237B1; CA2274658A1; TR200000951T2; HUP0003747A2; WO1999019329A1; AU750964B2; BR9815237A; EA003192B1; TW490467B; PL339761A1; AU1151699A; HUP0003747A3

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka spôsobu výroby štrukturálnych analógov geneserolínu, najmä aminokarbonylových derivátov geneserolínu všeobecného vzorca I

kde R je lineárny alebo rozvetvený C2-C20 alkyl, C3-C7 cykloalkyl, fenyl alebo benzyl, ktorý môže byť voliteľne substituovaný C1-C4 alkylovou, halogénovou alebo C1-C4 alkoxyskupinou.

Doterajší stav techniky

Deriváty geneserolínu uvedeného vzorca I, ktoré majú anticholínesterázovú aktivitu, sú opísané v Európskom patente 0599890, pod menom Chiesi. Tieto zlúčeniny možno použiť na liečbu ochorení centrálneho nervového systému.

Príklady výroby zlúčenín všeobecného vzorca I, ako je opísané vo vyššie uvedenom patente, zahŕňajú nasledovné kroky:

a) hydrolýzu eserínu na eserolín;

-2b) O-acyláciu eserolínu s reakčnými činidlami schopnými zaviesť požadovanú funkčnú skupinu -CO-NHR, kde R bolo určené vyššie;

c) oxidáciu takto vzniknutých aminokarbonylových derivátov eserolínu, aby vznikli zodpovedajúce aminokarbonylové deriváty geneserolínu.

Podrobnejšie je v príkladoch patentu opísaná iba výroba n-heptylaminokarbonylgeneserolínu.

Pri acylačnej reakcii sú použité substituované imidazolmočoviny alebo izokyanáty.

Oxidácia eserolínových derivátov na zodpovedajúce geneserolínové deriváty sa uskutočňuje za použitia peroxykyselín alebo organických peroxidov, ako napr. kyseliny m-chlórperoxybenzoovej, kyseliny monoperoxyftálovej, kyseliny peroxyoctovej, peroxidu vodíka v inertných rozpúšťadlách, ako sú halogenované uhľovodíky, aromatické uhľovodíky, dimetylformamid, dimetylsulfoxid.

Alternatívne sú zlúčeniny všeobecného vzorca I vyrobené vychádzajúc z geneserolínu cez hydrolýzu metylaminokarbonyloxyskupiny a následnú acyláciu, uskutočňovanú vždy za použitia W-alkylimidazolmočoviny. Geneserolín je dobre známou zlúčeninou (Yu Q. S. et al., Journal of Natural Products, 52 (2), 332-336, 1989).

Spôsoby výroby tu opísané nie sú vhodné z priemyselného hľadiska, kvôli problémom s nákladmi na východzí alkaloid, s rýchlosťou reakcie, výťažkom a čistotou konečného produktu, kvôli vedľajším reakciám.

Teraz sa našiel a je predmetom predkladaného vynálezu spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I, ktorý je jednoduchý, hospodárny, bezpečný a použiteľný v priemyselnom meradle s dobrými kvantitatívnymi výťažkami.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I, z eserínu ako východzej látky, podľa nasledujúcej reakčnej schémy č. 1, za získania dobrých výťažkov, dobrého stupňa čistoty v konečnom produkte a v zrýchlení reakcie.

a) τ

c)

T

-4Spôsob podľa prvého uskutočnenia predkladaného vynálezu zahŕňa:

a) oxidáciu eserínu peroxidom vodíka v prítomnosti bázy a následnú hydrolýzu na geneserolín, bez izolovania medziproduktu geneserínu;

b) acyláciu geneserolínu izokyanátom všeobecného vzorca R-N=C=O, kde R bolo určené vyššie pre vzorec I, v prítomnosti bázického katalyzátora;

c) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.

Vyššie uvedený spôsob zahŕňajúci oxidáciu eserínu, s následnou hydrolýzou na geneserolín, bez izolovania medziproduktu geneserínu, umožňuje významné zvýšenie výťažkov, zachovanie dobrého stupňa čistoty konečného produktu.

Okrem toho, použitie lacnejších a menej nebezpečných reakčných činidiel robí spôsob vhodnejším pre priemyselné použitie.

Acylačná reakcia sa uskutočňuje za použitia izokyanátov podľa klasických spôsobov, s vhodným zásaditým katalyzátorom, vybraným z alkalických alkoholátov, uhličitanov alebo hydroxidov, ako je napríklad ŕerc-butylát draselný alebo uhličitan draselný, posledne menovaný je zvlášť vhodný pre priemyselnú výrobu.

Kvôli zrýchleniu procesu možno reakciu uskutočniť v prítomnosti malých množstiev katalyzátora fázového prenosu, ako je napríklad tetrabutylamóniumbromid alebo za použitia ultrazvuku.

Pri druhom uskutočnení vynálezu sa synté2a realizuje za použitia éterov všeobecného vzorca II ako východzích zlúčenín

(II) kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie a môže byť odstránená za kyslých podmienok bez redukcie N-oxidovej skupiny geneserínu. Príkladmi R¹skupiny sú etyl, ŕerc-butyl, metoxymetyl, metoxyetoxymetyl, n-propyl, izopropyl, tetrahydropyranyl. Toto druhé uskutočnenie predkladaného vynálezu prebieha

-5podľa nasledovnej reakčnej schémy č. 2, za vzniku zlúčenín všeobecného vzorca I v troch krokoch:

pričom tento spôsob zahŕňa:

a) oxidáciu zlúčeniny všeobecného vzorca II s peroxykyselinami alebo peroxidmi, výhodne peroxidom vodíka, v alkoholovom rozpúšťadle alebo v zmesi voda alkohol, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca III

b) hydrolýzu zlúčeniny všeobecného vzorca III na geneserolín anorganickou kyselinou alebo organickou kyselinou, ktorá neredukuje /V-oxidovú skupinu;

c) acyláciu geneserolínu izokyanátom všeobecného vzorca R-N=C=O, kde R už bolo určené vyššie a za rovnakých reakčných podmienok použitých v spôsobe v schéme 1;

d) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.

Pre potreby predkladaného vynálezu je definícia R¹ odborníkom v oblasti ľahko pochopiteľná použitím iba základných vedomostí z literatúry, ako napr. Greene, T. W., Wuts, P. G. M./‘Ochranné skupiny v organickej syntéze“, 3, 145,

-6Willey 2. Vydanie 1990; Kocienski, P. J.: Ochranné skupiny“ 2, 21, vydavateľ Thieme 1994.

Tento spôsob možno použiť pre obidva enantioméry éterov všeobecného vzorca II, čo umožňuje získanie obidvoch produktov všeobecného vzorca I ako aj ich zodpovedajúcich enantiomérov.

Pri ďalšom uskutočnení predkladaného vynálezu možno zlúčeniny vyrobiť podľa nasledovnej schémy 3:

b) —►

pričom tento spôsob zahŕňa:

a) hydrolýzu zlúčeniny všeobecného vzorca II anorganickou alebo organickou kyselinou,

(II) kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie a môže byť odstránená za kyslých podmienok, ako je napríklad etyl, ŕerc-butyl, metoxymetyl, metoxyetoxymetyl, n-propyl, izopropyl, tetrahydropyranyl; za vzniku eserolínu vzorca Ha

b) acyláciu eserolínu vzorca Ha izokyanátom vzorca R-N=C=O, kde R bolo určené vyššie a za tých istých reakčných podmienok ako boli použité v spôsobe v schéme 1;

c) oxidáciu takto vzniknutého aminokarbonylového derivátu eserolínu na zodpovedajúci aminokarbonylový derivát geneserolínu;

d) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.

Eseretol je jedným z éterov, ktoré možno použiť v tomto vynáleze a je komerčne dostupný za nízku cenu a vo vhodných množstvách.

Iné étery, ktoré sa ukázali zvlášť vhodné ako východzie zlúčeniny na výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I sú napríklad:

(II)

(III) kde R¹ je ŕerc-butyl, metoxymetyl, metoxyetoxymetyl, n-propyl, izopropyl, tetrahydropyranyl.

Tieto étery možno vyrobiť spôsobmi dostupnými v literatúre.

Eserolínové étery všeobecného vzorca II a geneserolínové étery všeobecného vzorca III, kde R¹ je izopropyl, ŕerc-butyl, metoxymetyl a geneserolínové étery všeobecného vzorca III, kde R¹ je alkyl alebo alkoxyalkyl, pričom tetrahydropyranylové sú per se nové, keďže doteraz objavené neboli. Zlúčeniny všeobecného vzorca II a III sú v zmysle predkladaného vynálezu medziproduktmi v spôsobe uvedenom vyššie.

-8Uskutočnenia predkladaného vynálezu podľa reakčných schém 2 a 3 sa vyznačujú krokom, ktorý zahŕňa hydrolýzu eserolínových éterov všeobecného vzorca II alebo geneserolínových éterov všeobecného vzorca III na eserolín alebo geneserolín.

Technická literatúra poskytuje mnoho príkladov hydrolýzy tohto druhu alkaloidov, najmä esermetolu a eseretolu: Polonovsky M., Nitzerg C., Bull. Soc. Chim. Fr., 19, 33-37 (1916); Julian p., Pikl J., J. Am. Chem. Soc. 57, 755-757 (1935); Yu Q. S., Brossi A., Heterocycles, 27, 745-750 (1988).

Avšak, vo všetkých skorších dokumentoch, vedeckých prácach a patentoch sa hydrolýza týchto éterov uskutočňuje použitím klasických dealkylačných činidiel, ako sú BBr₃, BCI₃, AICI₃ (Lewisove kyseliny), HBr alebo iné halogenovodíkové kyseliny.

Napr. US patent č. 5310935 opisuje výrobu (3aS-c/s)-eserolínu hydrolýzou jeho metyléteru (alebo podobných éterov) pomocou AICI₃ alebo BBr₃; Medzinárodná patentová prihláška WO 9427963 umožňuje konverziu eseretolu na fyzostigmín

I alebo jeho deriváty podľa publikácie Julian P., Pokl J., J. Am. Chem. Soc. 57, 755757 (1935); v Európskej patentovej prihláške č. 0253372 sa hydrolýza eserolínového éteru uskutočňuje pomocou AICI₃ alebo BBr₃.

Použitie spôsobov opísaných v literatúre citovanej vyššie s hydrolýzou éterov všeobecného vzorca III na geneserolín neposkytovalo dobré výsledky, pretože sa vyskytujú iné redukčné vedľajšie reakcie, s tvorbou nežiadúcich vedľajších produktov a následnou obtiažnou purifikáciou získaného geneserolínu a malými výťažkami. Naopak, spôsob opísaný v predkladanom vynáleze umožňuje získať geneserolín s vysokou čistotou a dobrými výťažkami. Použitie tohto spôsobu ponúka relevantné výhody z hľadiska realizácie i z hľadiska nákladov aj v prítomnosti zlúčenín všeobecného vzorca II vzhľadom na použitie Lewisovej kyseliny.

Zvláštny uskutočnenie predkladaného vynálezu sa týka použitia anorganickej alebo organickej kyseliny pri hydrolýze alkyléterov indolových derivátov, ako sú napr. eserolín, geneserolín alebo fysovenol.

Vhodnými kyselinami na hydrolýzu zlúčenín všeobecného vzorca II alebo III sú tie, ktoré nemajú redukčné vlastnosti, najmä vzhľadom na zlúčeniny vzorca III,

-9kde N-0 skupina je citlivá voči redukčným činidlám. V spôsobe podľa predkladaného vynálezu je kyselina výhodne vybraná zo skupiny pozostávajúcej z kyseliny sírovej, kyseliny fosforečnej, kyseliny chlorovodíkovej, kyseliny metánsulfónovej, kyseliny trifluóroctovej, kyseliny octovej a silno kyslej ionomeničovej živice, ako je napr. Amberlyst®.

Podmienky hydrolýzy sa určia podľa R¹ skupiny prítomnej v molekule, výber sa uskutoční najmä podľa druhu kyseliny, jej koncentrácie a teploty pri hydrolýze.

Kyselinu sírovú možno použiť v rôznych koncentráciách od 10 do 85 %, výhodne pri teplote v rozmedzí od 50 do 90 °C.

Kyselina fosforečná sa vo všeobecnosti používa v koncentrácii 85 %, horúca, výhodne pri teplote asi 90 °C.

Kyselina metánsulfónová sa používa koncentrovaná a reaguje za horúca, výhodne pri teplote si 90 °C.

Kyselina trifluóroctová sa používa koncentrovaná a 10% kyselina chlorovodíková môžu reagovať za tepla pri teplote asi 40 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I možno vhodne transformovať na ich solí s farmaceutický prijateľnými kyselinami.

Deriváty všeobecného vzorca I, podobne ako ich materská zlúčenina geneserín, ak sú vo forme voľnej bázy, majú 1,2-oxazínovú štruktúru, zatiaľ čo vo forme zodpovedajúcich solí majú N-oxidovú štruktúru (pozri schému 4).

-10Spôsob podľa predkladaného vynálezu po prvý raz a na rozdiel od spôsobu opísaného v EP 0599890 umožňuje výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I v priemyselnom meradle, najmä ak R je aromatická skupina, výhodne fenyl a benzyl, voliteľne substituovaný C1-C4 alkylom, halogénom alebo C1-C4 alkoxy.

Prekvapujúco sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde R je aromatická skupina, najmä fenyl a benzyl, voliteľne substituovaná C1-C4 alkylom, halogénom alebo C1.C4 alkoxylom, majú silnú anticholínesterázovú aktivitu, ktorá je selektívna na úrovni mozgu. Tieto zlúčeniny, ktorých farmakologické vlastnosti neboli dostatočne opísané v EP 0599890, preto predstavujú selekciu vzhľadom na skorší európsky patent a sú ďalším predmetom predkladaného vynálezu.

V skutočnosti sa európsky patent 0599890 týka aminokarbonylových derivátov geneserolínu všeobecného vzorca I \

(I) kde R je lineárny alebo rozvetvený C2-C20 alkyl, C3-C7 cykloalkyl, fenyl alebo benzyl, ktorý môže byť voliteľne substituovaný C1-C4 alkylom, halogénom alebo C1-C4 alkoxyskupinou.

Charakter tohto vynálezu uznáva farmakologické vlastnosti iba u n-heptylaminokarbonylgeneserolínu (nazvaného tiež CHF 2060), ktorý je inhibítorom mozgovej acatylcholínesterázy vyznačujúcim sa dlhodobým účinkom.

Symptomatická liečba stareckej demencie súvisiacej s Alzheimerovou chorobou môže byť uskutočnená látkami, ktoré majú anticholínesterázovú aktivitu, za účelom zvýšenia hladín acetylcholínu v mozgu a zachovania funkčnosti cholinergných neurónov. Takrín bol prvou zlúčeninou s takýmito vlastnosťami, ktorá vošla do klinickej praxe (Cognex K. L. et al., N.Engl. J. Med., 327:1253-1259,1993).

Avšak, vedľajšie účinky na pečeň a slabá selektivita tohto produktu na centrálnej úrovni stimulovali farmaceutický výskum na vyhľadávanie nových zlúčenín s vyššou aktivitou a vyššou selektivitou účinku smerom k centrálnej úrovni.

-11 Stručne povedané, je tu potreba mať dostupnú zlúčeninu s vysokou anticholínesterázovou aktivitou, dlhodobým účinkom, vyššou afinitou k enzýmu acetylcholínesteráze (AchE) vzhľadom na butylcholínesterázu (BuChE) a aby bola súčasne selektívna pri in vivo inhibícii mozgovej AchE vzhľadom na ten istý enzým prítomný v iných periférnych orgánoch, napr. v srdci.

SDZ-ENA (komerčný názov Exelon) opísaný v Enz A. et al., Progress in Brain Res., 98,431-438, 1993 možno považovať za jednu zo selektívnych anticholínesterázových látok. Táto zlúčenina je u žiadateľa patentu použitá v niektorých štúdiách na porovnanie.

Teraz sa zistilo, že zlúčeniny všeobecného vzorca la

kde R je fenylová alebo benzylová skupina, ktorá môže byť voliteľne substituovaná C1-C4 alkylom, halogénom alebo C_rC₄ alkoxyskupinou má lepšie farmakologické vlastnosti ako zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde R je lineárny alebo rozvetvený C2-C20 alkyl, C₃-C₇ cykloalkyl, najmä n-heptyl.

Na základe toho sa predkladaný vynález ďalej týka zlúčenín vzorca la ako nových zlúčenín na použitie ako liečivá.

Zlúčeniny všeobecného vzorca la a ich farmaceutický prijateľné soli sú ďalším predmetom predkladaného vynálezu.

Ešte ďalším predmetom predkladaného vynálezu je farmaceutický prípravok obsahujúci terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca la. Použitie uvedených zlúčenín ako účinnej zložky na výrobu liečiva patrí tiež pod predkladaný vynález.

Podľa tohto ďalšieho uskutočnenia predkladaného vynálezu príkladmi fenylovej alebo benzylovej skupiny substituovanej Ci-C₄ alkylovou skupinou sú 2metylfenyl, 3-metylfenyl, 4-metylfenyl, 2-metylbenzyl, 3-metylbenzyl, 4-metylbenzyl, 2-etylfenyl, 3-etylfenyl, 4-etylfenyl, 2-etylbenzyl, 3-etylbenzyl, 4-etylbenzyl, 2-propyl-12fenyl, 3-propylfenyl, 4-propylfenyl, 2-propylbenzyl, 3-propylbenzyl, 4-propylbenzyl, 2butylfenyl, 3-butylfenyl, 4-butylfenyl, 2-butylbenzyl, 3-butylbenzyl, 4-butylbenzyl, pričom termíny propyl a butyl zahŕňajú tak lineárne ako aj rozvetvené izoméry. Príklady fenylovej alebo benzylovej skupiny substituovanej atómami halogénov sú sú: 2-chlórfenyl, 3-chlórfenyl, 4-chlórfenyl, 2-chlórbenzyl, 3-chlórbenzyl, 4-chlórbenzyl, 2-brómfenyl, 3-brómfenyl, 4-brómfenyl, 2-brómbenzyl, 3-brómbenzyl, 4brómbenzyl, 2-jódfenyl, 3-jódfenyl, 4-jódfenyl, 2-jódbenzyl, 3-jódbenzyl, 4-jódbenzyl. Príklady fenylovej alebo benzylovej skupiny substituovanej C1-C4 alkoxyskupinou sú 2-metoxyfenyl, 3-metoxyfenyl, 4-metoxyfenyl, 2-metoxybenzyl, 3-metoxybenzyl, 4metoxybenzyl, 2-etoxyfenyl, 3-etoxyfenyl, 4-etoxyfenyl, 2-etoxybenzyl, 3etoxybenzyl, 4-etoxybenzyl, 2-propoxyfenyl, 3-propoxyfenyl, 4-propoxyfenyl, 2propoxybenzyl, 3-propoxybenzyl, 4-propoxybenzyl, 2-butoxyfenyl, 3-butoxyfenyl, 4butoxyfenyl, 2-butoxybenzyl, 3-butoxybenzyl, 4-butoxybenzyl, pričom termíny propoxy a butoxy zahŕňajú lineárne ako aj rozvetvené izoméry.

Výhodné zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú tie, u ktorých R je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí: 2-etylfenyl (nazvaný aj ako CHF2819), 3-metylfenyl (CHF 2957) a 2-metylfenyl (CHF 2822).

V deklarácii uloženej v Americkom úrade pre patenty a známky počas pokračovania ohľadom US patentu č. 5538968, zodpovedajúceho EP 0599890 je uvedená najmä selektivita zlúčenín podľa predkladaného vynálezu voči acetylcholínesteráze (AchE) v mozgu v porovnaní s plazmatickou ecetylcholinesterázou (AchE), preto selektivita voči mozgu je vyššia ako selektivita voči periférnemu systému.

Teraz sa zistilo, že aminokarbonylové deriváty geneserolínu všeobecného vzorca la viac inhibujú mozgovú acetylcholínesterázu (AChE) ako alkylderiváty substituované alkylovým zvyškom v tej istej pozícii, ktoré boli opísané vo vyššie citovanom európskom patente a najmä ako je n-heptylgeneserolín. Zistený zvýšený účinok sa vyskytuje v tej istej účinnosti pri enzymatickej inhibícii. Okrem toho, zlúčeniny všeobecného vzorca la zaznamenali nielen vyšší účinok, ale aj vyššiu selektivitu enzymatickej inhibície. V skutočnosti majú tieto zlúčeniny aj vyššiu selektivitu na tkanivovej úrovni (tkanivo mozgu vo vzťahu k tkanivu srdca) aj vyššiu selektivitu pre acetylcholínesterázu (AchE) ako pre butyrylcholínesterázu (BuChE).

-13Táto selektivita je lepšia ako u n-heptylgeneserolinu a referenčných zlúčenín, ako je napríklad fyzostigmín a SDZ-ENA 713.

Nasledovné príklady bližšie ilustrujú vynález.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Syntéza geneserolínu

Eserín (40 g, 0,1455 mol) sa rozpustil v 80 ml metanolu v banke ochladenej na +10 °C ľadovým kúpeľom. Za silného miešania sa pridal hydrogenuhličitan draselný (14,5 g, 0,1455 molu), potom sa počas 10 minút prikvapkával 35% (hmotnosť/objem) peroxid vodíka (21,2 ml, 0,2182 mol).

Ochladzovací kúpeľ sa odstránil a miešanie pokračovalo 2,5 hodiny.

HPLC analýza ukázala, že obsah eserínu bol nižší ako 1 %. Roztok sa znovu ochladil ľadovým kúpeľom a pridalo sa 150 ml 25 % (hmotnosť/objem) roztoku NaCI.

Metanol sa odparil za zníženého tlaku, zohrievanie prebiehalo pri maximálnej teplote 35 °C počas asi 10 minút.

Vodná fáza sa trikrát extrahovala 150 ml chloroformu a organické fázy sa odparili za zníženého tlaku, čím vznikol surový geneserín ako penivý olejovitý zvyšok.

Surový zvyšok sa rozpustil v 100 ml 62%-nej (hmotnostne) kyseliny sírovej a roztok sa rýchlo zohrial na 85 °C pri miernom toku dusíka. Zohrievanie pokračovalo 2 hodiny a HPLC analýza dokázala obsah geneserínu nižší ako 1 %.

Zmes sa ochladila na izbovú teplotu a vliala sa do 100 g ľadu.

Po kvapkách za miešania sa pridal 30%-ný (hmotnostne) hydroxid amónny vo vode (120 ml) za regulovania reakčnej teploty na menej ako 20 až 25 °C pomocou ľadového kúpeľa. Keď bolo pH 4, potom sa pridalo 250 ml etylacetátu. Keď bola vodná fáza takmer neutrálna, začala sa separácia dechtového zvyšku.

Vodná fáza bola ďalej dvakrát extrahovaná 200 ml etylacetátu, organické fázy sa spojili, premyli sa 20%-ným (hmotnosť/objem) roztokom chloridu sodného

- 14(200 ml), vysušili sa pomocou síranu sodného, prefiltrovali sa a odparili sa pri zníženom tlaku. Zvyšok bol triturovaný v hexáne (200 ml), asi 100 ml rozpúšťadla sa odparilo pri zníženom tlaku a vzniknutá suspenzia sa ochladila na 5 °C a prefiltrovala sa.

Produkt sa vysušil pri 50 °C za zníženého tlaku, s výťažkom 26,53 g (78 %) geneserolínu.

T. t. (Buchi) = 142,5 až 146 °C

Obsah (bezvodá titrácia) > 98 %

Čistota (HPLC) > 98 %

IR, hmotnostné a NMR spektrá potvrdzujú očakávaný produkt.

Príklad 2

Syntéza geneserolínu

a) Syntéza geneseretolu

Eseretol (92,5 g, 0,377 mol) sa rozpustil v metanole (185 ml), potom sa pridal hydrogenuhličitan draselný (37,7 g, 0,377 mol) a zmes sa miešala 10 minút. Potom sa počas asi 10 minút pridával 40%-ný (hmotnosť/objem) peroxid vodíka (48 ml, 0,566 mol) a 5 ml vody za chladenia banky ľadovým kúpeľom.

Zmes sa miešala 3 h, počas tejto doby sa teplota zvýšila z 20 °C na 26 °C. Konverzia eseretolu sa pravidelne kontrolovala HPLC analýzou a reakcia sa zastavila, keď zvyškový obsah eseretolu bol nižší ako 2 %.

Zmes sa za miešania vliala do 750 ml 25%-ného (hmotnosť/objem) vodného roztoku chloridu sodného, potom sa extrahovala petroléterom (1000 + 500 + 500 ml).

Žltá organická fáza sa premyla 20%-ným (hmotnosť/objem) roztokom chloridu sodného (200 ml), vysušila sa pomocou bezvodého síranu sodného, prefiltrovala sa a skoncentrovala sa v otočnom odparovači. Odparovanie sa zastavili, keď reziduálny objem bol asi 150 ml. Takto získaná suspenzia sa miešala za chladenia na ľadovom kúpeli 30 minút a potom sa prefiltrovala. Produkt bol vysušený pri 30 °C vo vákuu, čím vzniklo 72,04 g (73,2 %) geneseretolu.

T. t. (Buchi) = 78 až 80 °C

-15Obsah (bezvodá titrácia) > 96 %

Čistota (HPLC) > 98 % [a]_D ²⁰'^c (0,5 % v etanole) = -177°.

b) Syntéza geneserolínu

Geneseretol (71,9 g, 0,274 mol) sa rozpustil v 87,5%-nej (hmotnostné) kyselien sírovej a červenkastý roztok sa miešal a zohrial na 90 °C.

Konverzia geneseretolu sa kontrolovala HPLC analýzou a reakcia sa zastavila po 3 hodinách, kedy zvyškový obsah geneseretolu bol asi 3 %.

Zmes sa ochladila ľadovým kúpeľom a vliala sa do ľadu (800 g) za miešania.

Potom sa pomaly prikvapkával 30%-ný (hmotnosť/objem) hydroxid amónny, aby sa zvýšilo pH na 7,5, za udržiavania teploty < 30 °C pridaním malého množstva ľadu. Keď bolo pH asi 5-6, pridal sa etylacetát (1000 ml), aby sa oddelený geneserolín rozpustil.

Vodná fáza sa extrahovala ďalším etylacetátom (500 + 500 ml) a organické fázy sa spojili, premyli 20%-ným (hmotnosť/objem) roztokom chloridu sodného (500 ml), vysušili sa pomocou bezvodého síranu sodného a prefiltrovali sa.

Roztok sa skoncentroval v otočnom odparovači a keď začala tuhá látka precipitovať, pridalo sa 600 ml n-heptánu v dvoch dostatočných dávkach a odparovanie pokračovalo, až kým sa dosiahol reziduálny objem rozpúšťadla asi 200 ml, aby sa odstránil etylacetát.

Takto vzniknutá suspenzia sa miešala za chladenia pri 5 °C počas 30 minút a potom sa prefiltrovala a premyla petroléterom. Po vysušení pri 50 °C vo vákuu vzniklo 54,5 g (84,7 %) geneserolínu.

T. t. (Buchi) =-143,5 až 145 °C

Čistota (HPLC) > 98 % [a]_D ^20C (0,5 % v etanole) = -180°

Príklad 3

Hydrolýza geneserolínových éterov

-16Postupom podobným ako v príklade 2b sa geneserolínové étery všeobecného vzorca III podrobili hydrolýze.

V nasledujúcej tabuľke sú uvedené použité kyseliny, teploty a reakčné časy, spolu s výťažkom geneserollnu, stanoveným ako percentuálna oblasť získaného surového produktu v HPLC chromatograme.

Tabuľka

R¹	Koncentrácia kyseliny (hmotn.)	Teplota (°C)	Reakčný čas (min)	Výťažok Geneserolínu (%)
ŕ-butyl	H2SO4 87,5%	90 °C	10	99,3 %
/'-propyl	H2SO4 87,5%	90 °C	10	73,9 %
n-propyl	H2SO4 87,5%	90 °C	10	76,7 %
ŕ-butyl	H2SO4 62%	90 °C	5	100%
/-propyl	H2SO4 62%	90 °C	15	96,3 %
MOM	H2SO4 16%	90 °C	15	69,8 %
MEM	H2SO4 16%	90 °C	15	71,7%
ŕ-butyl	H2SO4 16%	90 °C	15	92,4 %
THP	H2SO4 16%	90 °C	5	77,9 %
MOM	H3PO4 85%	90 °C	15	79,4 %
MEM	H₃PO₄ 85%	90 °C	15	75,4 %
ŕ-butyl	H3PO4 85%	90 °C	15	100%
/-propyl	H3PO4 85%	90 °C	150	99,4 %
THP	H3PO4 85%	90 °C	5	84,5 %
ŕ-butyl	MES	90°C	15	100%
/'-propyl	MES	90°C	15	92,7 %
ŕ-butyl	TFA	40 °C	15	95,5 %
MOM	TFA	40 °C	60	88,7 %
MEM	TFA	40 °C	60	96,6 %
THP	TFA	40 °C	5	83,0 %
ŕ-butyl	HCI 10%	40 °C	30	94,6 %

MOM	HC110%	40 °C	30	91,3%
MEM	HC110%	40 °C	30	89,5 %
THP	HCI 10%	40 °C	30	81,2 %
THP	AcOH 90%	40 °C	120	80,0 %

kde: MOM: metoxymetyl, MEM: metoxyetoxymetyl, MES: kyselina metánsulfónová, TFA: kyselina trifluóroctová, THP: tetrahydropyranyl, AcOH: kyselina octová.

Príklad 4

Syntéza eserolínu cez hydrolýzu eseretolu

Eseretol (5 g, 0,0203 mol) sa rozpustil v 87,5%-nej kyseline sírovej (hmotn.) (25 ml) a roztok sa miešal pri 90 °C až do úplnej konverzie (75 min). Zmes sa ochladila a vliala do ľadu. Pomaly sa pridal 30% amoniak (55 ml) za chladenia a udržiavania pod dusíkovou atmosférou po pH = 8. Vodná fáza bola nasýtená NaCI a bola extrahovaná etyléterom (100 + 75 +75 ml).

Po premytí 20% (hmotnosť/objem) roztokom chloridu sodného, vysušení pomocou Na₂SO₄ bola organická fáza prefiltrovaná a odparená. Vznikol žltý olej, ktorý za státia tuhol. Po vysušení vo vákuu bola hmotnosť eserolínu 3,04 g (70,6 % výťažok) a jeho čistota zistená HPLC bola 97 %.

Ďalšie étery eserolínu všeobecného vzorca I možno podrobiť hydrolýze spôsobmi podobnými na získanie eserolínu. Keď sa získa eserolín, deriváty geneserolínu všeobecného vzorca I možno získať podľa príkladov 1 a 6 európskeho patentu 0599890.

Príklad 5

Syntéza n-heptylaminokarbonylgeneserolínu

Geneserolín (73 g, 0,31 mol) sa rozpustil v etylacetáte (1100 ml) pri 37 °C.

K číremu roztoku sa pridal uhličitan draselný (11 g) a suspenzia sa miešala minút.

-18Potom sa počas 3 až 5 min vkvapkal heptylizokyanát (48 g). Zaznamenal sa mierny vzostup tepla a teplota sa zvýšila na 47 °C.

Reakčná zmes sa miešala 3 hodiny, potom sa pridal 1 g tetrabutylamóniumbromidu; ďalším pridaním heptylizokyanátu (4,3 g) sa obsah geneserolínu znížil pod 2%.

Reakčná zmes sa ochladila, prefiltrovala cez buničitú vatu a číry roztok sa za zníženého tlaku odparil.

K vzniknutému hnedému oleju sa dvakrát pridal toluén (400 ml) a roztok sa odparil za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustil v 600 ml zohriatého hexánu a vzniknutý roztok sa ochladil na 15 °C za miešania.

Precipitovaný n-heptylaminokarbonylgeneserolín sa prefiltroval, premyl hexánom a vysušil sa pri 50 °C vo vákuu za vzniku 102,7 g surového produktu. Surový produkt bol suspendovaný v 820 ml vody pri izbovej teplote 30 min za silného miešania, potom bol prefiltrovaný, premytý hexánom a vysušený pri 60 °C pri zníženom tlaku, aby vzniklo 98,6 g (84,5 %) n-heptylaminokarbonylgeneserolínu.

Príklad 6

Syntéza hydrochloridu n-heptylaminokarbonylgeneserolínu n-/-/eptylaminokarbonylgeneserolín (34,8 g, 0,093 mol) sa rozpustil v etylacetáte (100 ml) pri 40 °C, potom sa pridal roztok 22,5 ml 4,25M HCI v etylacetáte zriedený na 40 ml tým istým rozpúšťadlom. Roztok sa pomaly ochladil na 5 °C, produkt precipitoval ako biela tuhá látka, ktorá sa prefiltrovala a vysušila pri 60 °C za zníženého tlaku za výťažku 33,0 g surového produktu.

Surový produkt suspendoval v 165 ml toluénu pri 40 °C a udržiaval sa zohriatý po dobu 30 min za miešania. Zohriatá suspenzia sa prefiltrovala, tuhá látka sa premyla toluénom a dietyléterom, potom sa vysušila pri 60 °C za zníženého tlaku, čím vzniklo 31,7 g (84 %) hydrochloridu n-heptylaminokarbonylgeneserolínu.

T. t. (Buchi) = 147 až 148 °C

Obsah (bezvodá titrácia) > 99 %

Čistota (HPLC) > 99 %

-19Postupy podľa predkladaného vynálezu umožňujú získať dobré výťažky aj u zlúčenín všeobecného vzorca I, kde R je voliteľne substituovaná fenylová alebo benzylová skupina, vychádzajúc z geneserolínu a za použitia vhodne substituovaného izokyanátu ako acylačného činidla.

Príklad 7

Syntéza hydrochloridu n-(2-etylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu

7erc-butylát draselný (112 mg, 1 mmol) sa pridal k roztoku geneserolínu opracovanému ultrazvukom (2,34 g, 10 mmol) a k 2-etylfenylizokyanátu (1,61 g, 11 mmol). Po 3 minútach opracovania ultrazvukom sa pridalo za miešania magnetom 11 mmolov kyseliny chlorovodíkovej v etylacetáte, zmes sa naočkovala malým množstvom produktu a miešanie pokračovalo 2 hodiny. Získaný kryštalický produkt sa prefiltroval, premyl sa etyléterom a vysušil sa vo vákuu pri 40 °C. Získalo sa 3,4 g (81,3 %) bieleho prášku.

T. t. = 179 až181 °C [a]_D ^20C (c= 1, voda) = -135°.

Alternatívne možno hydrochlorid n-(2-etylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu získať spôsobom uvedeným v nasledovnom príklade.

Príklad 8

Syntéza hydrochloridu n-(2-etylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu (CHF2819)

Geneserolín (75g, 0,3 mol) sa rozpustil v acetóne (750 ml), pridal sa bezvodý uhličitan draselný (2 g) a zmes sa miešala 10 minút.

Potom sa pomaly pridával roztok 2-etylfenylizokyanátu (47,8 g, 0,324 mol) v acetóne (100 ml) asi 60 min pri udržiavaní teploty t = 20 °C. Po 30 minútach miešania sa suspenzia prefiltrovala cez vatu, premyla sa malým množstvom acetónu. Číry roztok sa skoncentroval na asi 500 ml. K roztoku sa pridalo 73 ml roztoku 4,75 M kyseliny chlorovodíkovej v etylacetáte, za udržiavania teploty pod 25 °C.

-20Po pridaní sa teplota znížila na 5 °C a po 120 min sa suspenzia prefiltrovala a premyla acetónom (100 ml).

Takto získaná tuhá látka sa vysušila pri 50 °C vo vákuu na konštantnú hmotnosť, za získania 106,04 g surového produktu, po kryštalizácii ktorého z absolútneho etanolu vzniklo 86,94 g (70,2 %) suchého hydrochloridu n-(2etylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu ako biela kryštalická tuhá látka.

Teplota topenia: 179 až 181 °C.

Analogickým spôsobom a reakciou geneserolínu s vhodným izokyanátom boli vyrobené nasledovné zlúčeniny:

hydrochlorid n-(3-metylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu (CHF2957) teplota topenia: 178,5 až 179,5 °C hydrochlorid n-(2-metylfenyl)aminokarbonylgeneserolínu (CHF2822) teplota topenia: 172 až 174 °C (za rozkladu)

Súčasťou predkladaného vynálezu bolo hodnotenie zlúčenín CHF 2819, CHF 2957, CHF 2822 na účinnosť ich enzymatickej inhibície a selektivitu účinku prostredníctvom série parametrov v porovnaní s hydrochloridom n-heptylaminokarbonylgeneserolínu (CHF2060).

Samci SD potkanov s hmotnosťou 150 až 200 g boli rozdelení do skupín po 8 zvierat, v závislosti od liečby rôznymi látkami, ktoré sa podávali perorálne v destilovanej vode, v objeme 2 ml/kg. Po 2 hodinách od podania sa zvieratá usmrtili, aby sa im odobrali mozgy. Mozgové tkanivo bolo homogenizované v 11% roztoku Tritonu 100 v 0,1 M fosforečnanovom pufre pri pH 8. Po 15 minútach centrifugácie pri 4 °C sa supernatant odseparoval a AChE v ňom sa stanovili spôsobom opísaným v Ellman G. L. et al. (Biochem. Pharmacol. 7, 88-95, 1961). Pre každý spôsob liečby inhibujúcej enzým sa stanovilo percento oproti kontrolám (zvieratá liečené iba destilovanou vodou).

Ďalšia séria experimentov sa uskutočnila kvôli stanoveniu inhibičnej kinetiky mozgovej a srdcovej AchE po 1, 4 a 16 hodinách po podaní každej testovanej látky. Enzým sa stanovil v tkanivových homogenátoch podobne, ako bolo opísané vyššie. Dávka každého podaného produktu zodpovedala 1/7 jeho smrteľnej dávky (LD₅o)· Oblasť pod krivkou (AUC) sa vypočítala pomocou enzymatickej inhibičnej krivky, pre mozgové a srdcové tkanivo, vo vzťahu 3 testovacím časom.

-21 Porovnávacie výsledky sú uvedené v nasledujúcej tabuľke 1.

Tabuľka 1

zlúčenina	Dávka mg/kg p. 0.	Inhibícia mozgovej AchE (%)	ed₆₀ Mg/kg p. 0.	Poradie účinnosti (*)
CHF 2060	3 10 30	8 29 60	(C. L. 95 %) 13,2 (5,9-26,6)	1
CHF 2819	0,4 1,3 3,7	9 34 55	1,5 (0,4 - 3,5)	8
CHF 2822	0,8 2.5 7.5	25 46 68	1,6 (0,6-3,1)	7
CHF 2957	3 6 9	21 56 67	4,1 (1,4-9,5)	3

(*)ED₅₀CHF 2060 n = 10 C. L. = konfidenčné limity

ED50 zlúčeniny

Z posúdenia vypočítaných ED₅₀ (dávka zlúčeniny na inhibovanie 50 % enzýmu) hodnôt je zrejmé, že aryiové deriváty sú pri inhibícii AchE po perorálnom podaní potkanovi účinnejšie ako referenčná zlúčenina CHF 2060. Najmä zlúčenina CHF 2819 sa ukázala ako 8-násobne účinnejšia ako CHF 2060, zatiaľ čo zlúčeniny CHF 2822 a CHF 2957 boli 7 a 3-krát účinnejšie. Analýza kinetiky enzymatickej inhibicie mozgového tkaniva a homogenátov srdca je uvedená v nasledovnej tabuľke 2.

-22Tabuľka 2

Zlúčenina	Dávka mg/kg p. 0.	Inhibícia mozgovej AchE (%)	Maxim. srdcová AChE	Mozgová AUC (= inhib. x h)	Srdcové AUC (= inhib. x h)	Index selektivity
CHF 2060	10	20	41	252	450	0,6
CHF 2819	1,3	32	4	348	36	9,7
CHF 2822	2,5	45	9	379	96	3,9
CHF 2957	9	62	13	585	125	4,7

(*) mozgová AUC/srdcová AUC n = 10

Výsledky ukazujú, že arylové deriváty geneserolínu, na rozdiel od alkylových derivátov, majú vyššiu selektivitu voči mozgu v porovnaní so srdcovým tkanivom.

V ďalšej sérii pokusov sa zlúčeniny CHF 2819, CHF 2957 a CHF 2822 hodnotili in vitro inhibíciou erytrocytárnej AChE a ľudskej plazmatickej BuChE, v porovnaní s n-heptylaminokarbonylgeneserolínom (CHF 2060) a bežnými inhibítormi cholínesterázy, fýzostigmínom a SDZ-ENA 713. Použitý bol podobný spôsob, ako je citované vyššie, Ellman G. L. et al. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3.

Tabuľka 3

zlúčenina	AChE IC50 (μΜ) ± s. e.	BuChE IC50 (μΜ) ± s. e.	S. I.
Fyzostigmín	0,18 ±0,01	0,05 ± 0,004	0,27
SDZ-ENA 713	57,9 ±2,48	0,45 ± 0,02	0,007
CHF2060	0,85 ±0,08	0,005 ± 0,0007	0,005
CHF 2819	0,48 ± 0,06	55,2 ± 6,43	115
CHF 2822	2,01 ±0,08	0,18 ±0,01	0,09
CHF 2957	4,20 ± 0,29	133,8 ±9,70	32

S. I. = index selektivity (IC50 BuChE/IC₅o AchE) n = 4 - 8

-23Všetky testované zlúčeniny vykazujú afinitu (hodnotené ako IC₅₀, menovite koncentrácia zlúčeniny inhibujúca 50 % enzýmu) pri mikromolárnej hladine k AchE. Spomedzi týchto zlúčenín je SDZ-ENA 713 menej účinná ako iné produkty. Významné rozdiely sa vyskytli v inhibícii BuChE. V skutočnosti CHF 2060, fyzostigmín a SDZ-ENA 713 sú nepochybne účinnejšie pri inhibícii BuChE ako AChE. Na základe vypočítaných indexov selektivity sa zlúčenina CHF 2819 ukázala ako 115-krát selektívnejšia pre AChE. Aj CHF 2957 má dobrú selektivitu, zatiaľ čo CHF 2822 je mierne menej selektívna.

Je dobre známe, že BuChE sa distribuuje do periférneho tkaniva a v menšej miere do mozgu na úrovni mikroglie. Preto afinita preukázaná u niektorých testovaných zlúčenín pre túto formu enzýmu by mohla vysvetľovať in vivo periférnu inhibičnú aktivitu.

Z vysvetlenia v tomto vynáleze vyplýva, že zlúčeniny všeobecného vzorca la sú vhodné na výrobu liečiva s inhibičným účinkom voči acetylcholínesteráze. Najmä CHF 2819 je vzhľadom na iné zlúčeniny, o ktorých tu bolo pojednané, výhodnou in vitro selektivitou voči AChE v porovnaní s BuChE, s dobrým trvaním účinku a in vivo selektivitou pri inhibícii mozgovej AchE.

Podľa predkladaného vynálezu je uvedené liečivo vhodné na liečbu Alzheimerovej choroby iných neurodegeneratívnych patologických stavov.

Je výhodou, že toto liečivo nemá vedľajšie periférne účinky a toto je uvedené v nárokoch predkladaného vynálezu.

Liečivo bude v liekových formách a dávkovaniach, ktoré určí klinický odborník v tejto oblasti, v závislosti od povahy patologického stavu, jeho závažnosti a od stavu pacienta.

Pokiaľ ide o priemyselné využitie vynálezu, predkladaný vynález tiež poskytuje farmaceutické prípravky obsahujúce terapeuticky účinné množstvo aktívnej zložky v zmesi s nosičmi a pomocnými látkami bežnými vo farmácii.

Spomenuté prípravky možno vyrobiť dobre známymi spôsobmi, napr., ako to uvádza Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub., New York, USA.

-24Príkladmi farmaceutických prípravkov sú perorálne formy, tuhé alebo tekuté, ako sú tablety, kapsle, roztoky, suspenzie, sirupy; injekčné formy, ako sú roztoky, suspenzie, emulzie; prípravky s regulovaným uvoľňovaním.

Denná dávka účinnej zložky, ktorá sa má podať v týchto prípravkoch bude v rozmedzí od 1 do 50 mg a výhodne od 5 do 20 mg.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob výroby aminokarbonylových derivátov geneserolínu všeobecného vzorca I \

(D kde R je lineárny alebo rozvetvený C₂-C₂o alkyl, C3-C7 cykloalkyl, fenyl alebo benzyl, ktorý môže byť voliteľne substituovaný CrC4 alkylovou skupinou, atómom halogénu alebo C1-C4 alkoxyskupinou, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa:

a) oxidáciu eserínu peroxidom vodíka v prítomnosti bázy a následnú hydrolýzu na geneserolín, bez izolovania medziproduktu geneserínu;

b) acyláciu geneserolínu izokyanátom všeobecného vzorca R-N=C=O, kde R bolo určené vyššie, v prítomnosti bázického katalyzátora;

c) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.
2. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že katalyzátor v kroku b) je vybraný zo skupiny obsahujúcej terc-butylát draselný a uhličitan draselný.
3. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúc i sa tým, že v kroku b) sa pridáva katalyzátor fázového prenosu.
4. Spôsob podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že katalyzátorom fázového prenosu je tetrabutylamóniumbromid.
5. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že v kroku b) sa použije ultrazvukový zdroj.

-266. Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I kde R je lineárny alebo rozvetvený C₂-C₂o alkyl, C3-C7 cykloalkyl, fenyl alebo benzyl, ktorý môže byť voliteľne substituovaný C1-C4 alkylom, halogénom alebo C1-C4 alkoxyskupinou, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa:

a) oxidáciu zlúčeniny všeobecného vzorca II s peroxykyselinami alebo peroxidmi kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie, a môže byť odstránená za kyslých podmienok bez redukcie ΛΖ-oxidovej skupiny geneserínu, v alkoholovom rozpúšťadle alebo v zmesi voda-alkohol, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca

b) hydrolýzu zlúčeniny všeobecného vzorca III na geneserolín s anorganickou kyselinou alebo organickou kyselinou, ktorá neredukuje N-oxidovú skupinu;

c) acyláciu geneserolínu izokyanátom všeobecného vzorca R-N=C=O, kde R bolo už definované, v prítomnosti zásaditého katalyzátora vybraného zo skupiny obsahujúcej alkoholáty, uhličitany alebo hydroxidy;

-27(I)

a) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.
7. Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I

R kde R je lineárny alebo rozvetvený C₂-C₂o alkyl, C₃-C₇ cykloalkyl, fenyl alebo benzyl, ktorý môže byť voliteľne substituovaný C1-C4 alkylovou, halogénovou alebo C1-C4 alkoxyskupinou, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

a) hydrolýzu zlúčeniny vzorca II kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie a môže byť odstránená za kyslých podmienok, za vzniku eserolínu všeobecného vzorca Ha

b) acyláciu eserolínu Ha izokyanátom všeobecného vzorca R-N=C=O, kde R bolo určené vyššie, v prítomnosti zásaditého katalyzátora vybraného zo skupiny pozostávajúcej z alkalických alkoholátov, uhličitanov alebo hydroxidov;

-28c) oxidáciu takto vzniknutého aminokarbonylového derivátu eserolínu na zodpovedajúci aminokarbonylový derivát geneserolínu;

d) voliteľnú transformáciu na farmaceutický prijateľnú soľ.
8. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza zlúčeniny všeobecného vzorca II alebo III sa uskutočňuje kyselinou vybranou zo skupiny pozostávajúcej z kyseliny sírovej, kyseliny fosforečnej, kyseliny chlorovodíkovej, kyseliny metánsulfónovej, kyseliny trifluóroctovej, kyseliny octovej a silno kyslej ionomeničovej živice.
9. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza sa uskutočňuje kyselinou sírovou s koncentráciou v rozmedzí od 10 do 85 % hmotn.
10. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza sa uskutočňuje horúcou kyselinou fosforečnou s koncentráciou 85 % hmotn.
11. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza sa uskutočňuje kyselinou metánsulfónovou pri 90 °C.
12. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza sa uskutočňuje horúcou kyselinou trifluóroctovou alebo 10% kyselinou chlorovodíkovou pri 40 °C.
13. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že hydrolýza sa uskutočňuje silno kyslou ionomeničovou živicou.
14. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že v acylačnom kroku sa pridá zásaditý katalyzátor s katalyzátorom fázového prenosu alebo sa použije ultrazvukový zdroj.

-2915. Zlúčeniny všeobecného vzorca II

R¹ o (II) kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie a môže byť odstránená za kyslých podmienok ako medziprodukty na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I spôsobom podľa nárokov 6 alebo 7.
16. Zlúčeniny všeobecného vzorca II podľa nároku 15, kde R¹ je izopropyl, ŕerc-butyl alebo metoxymetyl.
17. Zlúčeniny všeobecného vzorca III

R (III) kde R¹ je ochranná skupina hydroxylu fenolu, ktorá musí byť stabilná v zásaditom prostredí a za podmienok silne redukčnej reakcie a môže byť odstránená za kyslých podmienok, ako medziprodukty na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I v spôsobe podľa nárokov 6 alebo 7.
18. Zlúčeniny všeobecného vzorca III podľa nároku 17, kde R¹ je alkyl, alkoxyalkyl alebo tetrahydropyranyl.
19. Použitie organickej alebo anorganickej kyseliny na hydrolýzu alkyléterov indolových derivátov.

-3020. Použitie podľa nároku 19, kde indolový derivát je vybraný z eserolínu a geneserolínu.
21. Aminokarbonylové deriváty geneserolínu všeobecného vzorca la (la) kde R je fenylová alebo benzylová skupina, ktorá môže byť voliteľne substituovaná C1-C4 alkylovou, halogénom alebo C_rC4 alkoxyskupinou a ich farmaceutický prijateľné soli.
22. Aminokarbonylové deriváty geneserolínu podľa nároku 21, kde R je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z 2-etylfenylu, 3-metylfenylu, 2-metylfenylu.
23. Farmaceutické prípravky, vyznačujúce sa tým, že obsahujú účinné množstvo aminokarbonylových derivátov geneserolínu podľa nároku 21 a farmaceutický prijateľný nosič.
24. Použitie aminokarbonylových derivátov geneserolínu podľa nároku 21 na výrobu liečiva s inhibičným účinkom na acetylcholínesterázu.
25. Použitie podľa nároku 24, kde liečivo je selektívne voči mozgovej acetylcholínesteráze.
26. Použitie podľa nároku 25, kde liečivo je vhodné na liečbu Alzheimerovej choroby a iných neurovegetatívnych patologických stavov.
27. Použitie podľa nároku 26, kde liečivo nemá vedľajšie periférne účinky.