CZ20001294A3 - Způsob výroby aminokarbonylových derivátů geneserolinu - Google Patents

Abstract

Způsob výroby sloučenin vzorce (I), kde Rje C2-C2o přímá nebo rozvětvená alkylová skupina, C3-C7 cykloalkylová skupina, fenylová nebo benzylová skupina, které mohou být popřípadě substituovány skupinami C1-C4 alkyl, halogen nebo C1-C4 alkoxy, který zahrnuje následující kroky: a) provede se oxidace eserinu peroxidem vodíku v přítomnosti báze a následná hydrolýza na geneserolin, aniž by se izoloval meziprodukt geneserin; b) provede se acylace geneserolinu isokyanátem vzorce R-N=C=O, kde Rje jak definováno výše v přítomnosti bazického katalyzátoru; c) v případě potřeby se provede převedení získané sloučeniny na farmaceuticky přijatelnou sůl. Sloučeniny vzorce (I), kde Rje fenyl nebo benzyl, které mohou být popřípadě substituovány skupinami alkyl, halogen nebo alkoxy, jsou selektivní a účinné mozkové anticholinesterázové inhibitory.

Description

Způsob výroby aminokarbonylových derivátů geneseroiinu

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká způsobu výroby strukturních 5 analogů geneseroiinu, zvláště aminokarbonylových derivátů

kde R je C2-C20 přímý nebo rozvětvený alkyl, Ca-C/cykloalkyl, fenyl nebo benzyl, které mohou být popřípadě substituovány skupinou C₁-C₄alkyl, halogen nebo C₁-C₄alkoxy.

¹⁵ Dosavadní stav techniky

Deriváty geneseroiinu výše uvedeného vzorce (I), které mají anticholinesterázovou aktivitu, se popisují v evropském patentu 0599890, Chiesi. Tyto sloučeniny mohou být použity při léčení poruch centrální nervové soustavy.

Příklady způsobu výroby sloučenin vzorce (I) jak se popisuje ve výše uvedeném patentu, zahrnují následující kroky:

a) hydrolýza eserinu na eserolin;

25W

• tt ··· · • tt · ··· · · * · • · · ···· · ·· · • tttttt tttt ··· ·· · • tttt · · · · 9 9 9 9 • tttttt tttt tttt tttt tttt ··

-2 b) O-acylace eserolinu činidly schopnými zavést do molekuly požadovanou funkční skupinu -CO-NHR, kde R je jak definováno výše;

c) oxidace takto získaných aminokarbonylových derivátů eserolinu za získání . odpovídajících aminokarbonylových derivátů geneserolinu.

V příkladech výše uvedeného patentu se konkrétněji popisuje pouze výroba n-heptylaminokarbonylgeneserolinu.

Pro provádění acylační reakce se používají substituované imidazolmočoviny nebo isokyanáty.

ío Oxidace derivátů eserolinu na odpovídající deriváty geneserolinu se provádí použitím perkyselin nebo organických peroxidů, jako je například kyselina m-chlorperbenzoová, kyselina monoperftalová, kyselina peroctová, peroxid vodíku, v inertních rozpouštědlech jako jsou halogenované uhlovodíky, aromatické uhlovodíky, dimethylformamid a dimethylsulfoxid.

Alternativně byly sloučeniny vzorce (I) vyráběny z geneserolinu jako výchozí látky pomocí hydrolýzy methylaminokarbonyloxyskupiny a následnou acylací, která byla vždy prováděna s použitím Nalkylimidazolmočoviny. Geneserolin je dobře známá sloučenina (Yu Q.

S. a další, Journal of Natural Products, 52(2), 332 - 336, 1989).

Popisované způsoby jsou nevhodné pro průmyslové měřítko z důvodů potíží spojených s cenou výchozího alkaloidu, rychlostí reakce, výtěžkem a čistotou konečného produktu v důsledku vedlejších reakcí.

Nyní byl objeven způsob výroby sloučenin vzorce (I), který je jednoduchý, ekonomický, bezpečný a použitelný v průmyslovém měřítku s dobrými kvantitativními výtěžky, který bude předmětem předkládaného vynálezu.

- 3 “ ···· ··

Podstata vynálezu

V prvním provedení předkládaného vynálezu mohou být vyrobeny sloučeniny vzorce (I) z eserinu jako výchozí látky podle následujícího reakčního schématu 1, přičemž se dosahuje dobrých výtěžků, dobrého stupně čistoty konečného produktu a zkrácení doby reakce.

T

N \

o • · · · · · • ·

ío Způsob podle tohoto prvního provedení předkládaného vynálezu zahrnuje následující kroky:

a) provede se oxidace eserinu peroxidem vodíku v přítomnosti báze a následná hydrolýza na geneserolin, aniž by se izoloval meziprodukt geneserin;

b) provede se acylace geneserolinu isokyanátem vzorce R-N=C=O, kde R je jak definováno ve výše uvedeném vzorci (I), v přítomností bazického katalyzátoru;

c) v případě potřeby se provede převedení získané sloučeniny na farmaceuticky přijatelnou sůl.

Výše uvedený způsob, který zahrnuje oxidaci eserinu s následnou hydrolýzou na geneserolin bez izolace meziproduktu geneserinu umožňuje podstatné zvýšení výtěžků při zachování dobré čistoty konečného produktu.

Použití lacinějších a méně nebezpečných činidel kromě toho umožňuje lepší vhodnost tohoto postupu pro použití v průmyslovém měřítku.

Acylační reakce se provádí použitím isokyanátů klasickými způsoby v přítomnosti vhodného bazického katalyzátoru zvoleného

- 5 z alkalických alkoholátů, uhličitanů nebo hydroxidů, jako je terc-butylát draselný nebo uhličitan draselný, přičemž pro použití pro průmyslovou výrobu je zvláště výhodný uhličitan draselný.

Pro urychlení způsobu je možno reakci provádět v přítomnosti 5 malých množství katalyzátoru přenosu fází, jako je tetrabutyíamoniumbromid, nebo použitím zdroje ultrazvuku.

Ve druhém provedení předkládaného vynálezu se syntéza provádí použitím etherů vzorce (II) jako výchozích sloučenin

(Π) kde Ri je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která is musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a která může být odstraněna v kyselých podmínkách bez redukce skupiny N-oxidu podobné geneserinu. Příklady skupiny Ri jsou ethyl, terc-butyl, methoxymethyl, methoxyethoxymethyl, n-propyl, isopropyl, tetrahydropyranyl. Toto druhé provedení předkládaného vynálezu se provádí podle následujícího reakčního schématu 2 za získání sloučenin vzorce (I) ve třech stupních:

>φ φφφφ • · φ ·

- 6 - '·

b)

c)

H t	\/ N
	o h—
0	N
\
Uvedený způsob zahrnuje následující kroky:

a) provede se oxidace sloučeniny vzorce (II) perkyselinami nebo 15 peroxidy, s výhodou peroxidem vodíku, v alkoholovém rozpouštědle nebo ve směsi voda-aíkohol za získání sloučeniny vzorce (líí);

b) provede se hydrolýza sloučeniny vzorce (III) na geneserolin minerální kyselinou nebo organickou kyselinou, která neredukuje skupinu N-oxidu;

c) provede se acylace geneserolinu isokyanátem vzorce R25 -N=C=O, kde R je jak definováno výše, přičemž se použije stejných reakčních podmínek, jaké se popisují pro způsob znázorněný na schématu 1 výše;

• · «* · «

- 7 d) provede se případné převedení získané sloučeniny na farmaceuticky přijatelnou sůl.

Pro účely předkládaného vynálezu bude definice skupiny Ri odborníkům v oboru zřejmá s použitím pouze běžných znalostí dostupných v odborné literatuře, jako je například Greene, T. W., Wuts, P. G. M., „Protective Groups in Organic Synthesis“, 3, 145, Wiley, 2. vydání, 1990; Kocienski, P. J., „Protecting Groups“ 2, 21, ed. Thieme 1994.

Uvedený způsob je možno použít na oba enantiomery etherů ío vzorce (II), čímž je umožněno získání jak produktů se strukturou vzorce (l), tak i odpovídajících enantiomerů.

V dalším provedení předkládaného vynálezu mohou být sloučeniny vzorce (i) vyrobeny podle následujícího schématu 3

(II) ·· totototo

přičemž uvedený způsob zahrnuje následující kroky:

a) provede se hydrolýza sloučeniny vzorce (II) minerální nebo 15 organickou kyselinou

kde Ri je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a může být odstraněna za kyselých podmínek, jako je například skupina ethyl, terc-butyl, methoxymethyl, methoxyethoxymethyl, npropyl, isopropyl, tetrahydropyranyl; za získání eserolinu (Ila)

(Ila)

- 9 • 0 9 • «999 « 9 9

9 9

9 99 » 99 • «0 9 ·9 9 • 9 9 9 • 9 9 9 ♦· 09

b) provede se acylace eserolinu (Ila) isokyanátem vzorce R-N=C=O, kde R je jak definováno výše a za stejných reakčních podmínek, které byly popsány pro způsob uvedený ve schématu 1 výše;

c) provede se oxidace takto získaného aminokarbonylového derivátu eserolinu na odpovídající aminokarbonylový derivát geneserolinu;

d) provede se případné převedení na farmaceuticky přijatelnou sůl.

Jedním z etherů, které mohou být v předkládaném vynálezu použity, je eseretol, který je komerčně dostupný za nízkou cenu a ve vhodných množstvích.

Další ethery, které se ukázaly jako zvláště vhodné jako výchozí sloučeniny při výrobě sloučenin vzorce (i) jsou například:

(II)

(III) kde Ri je terc-butyl, methoxymethyl, methoxyethoxymethyl, npropyl, isopropyl, tetrahydropyranyl.

Tyto ethery mohou být vyrobeny způsoby popsanými v literatuře.

Ethery eserolinu vzorce (II) a ethery geneserolinu vzorce (lil), kde Ri je isopropyl, terc-butyl, methoxymethyi a ethery geneserolinu

00 0000 000 0 •000 00 00 00 00 00

- 10 vzorce (III), kde Ri je alky! nebo alkoxyalkyl, mezi jinými tetrahydropyranyl, jsou nové sloučeniny, protože nebyly dosud popsány. Sloučeniny (II) a (III) patří do rozsahu předkládaného vynálezu jako meziprodukty při provádění výše popsaných způsobů.

Provedení podle předkládaného vynálezu podle reakčních schémat 2 a 3 jsou charakterizována krokem zahrnujícím hydrolýzu etherů eserolinu vzorce (II) nebo etherů geneserolinu vzorce (III) na eserolin, popřípadě geneserolin.

Technická literatura poskytuje mnoho příkladů hydrolýzy tohoto ío typu alkaloidů, zvláště esermetolu a eseretolu: Polonovsky, M., Nitzerg, C., Bull. Soc. Chim. Fr., 19, 33 - 37 (1916); Julian, P., Pikl, J., J. Am. Chem. Soc., 57, 755 - 757 (1935); Yz, Q. S., Brossi, A.,

Heterocycles, 27, 745 - 750 (1988).

Ve všech těchto dřívějších dokumentech, vědeckých článcích 15 a patentech se však provádí hydrolýza těchto etherů klasickými dealkyiačními činidly jako jsou BBr₃, BCI₃, AICI₃ (Lewisovy kyseliny),

HBr nebo jiné halogenovodíkové kyseliny.

Například US patent No. 5310935 popisuje výrobu (3aS-cis)-eserolinu hydrolýzou jeho methyletheru (nebo podobných etherů)

2o AICI₃ nebo BBr₃; mezinárodní patentová přihláška WO 9427963 popisuje přeměnu eseretolu na fysostigmin nebo jeho deriváty, podle práce Julian, P., Pikl, J., J. Am. Chem. Soc., 57, 755 - 757 (1935); v evropské patentové přihlášce No. 0253372 se provádí hydrolýza etheru eserolinu pomocí AICI₃ nebo BBr₃.

Použití způsobů popsaných ve výše uvedených odkazech pro hydrolýzu etherů vzorce (III) na geneserolin neposkytovalo dobré výsledky, protože dochází k jiným redukčním vedlejším reakcím za vytváření nežádoucích vedlejších produktů, přičemž je nutné následné obtížné čištění získaného geneserolinu a dosahuje se malých výtěžků.

Naopak způsob popsaný v předkládaném vynálezu umožňuje získání vysoce čistého geneserolinu s dobrými výtěžky. Použití způsobu podle • to tototo to • · totototo * to to to • · · to··· ···* • ··· ·· ··* toto · • ·♦ ·♦·· ♦·♦· tototo· ·· ·· ·· to* »t

- 11 předkládaného vynálezu nabízí výhody z hlediska pracovních postupů a nákladů i v přítomnosti sloučenin vzorce (II) s ohledem na použití Lewisovy kyseliny.

Další provedení předkládaného vynálezu se týká použití 5 minerální nebo organické kyseliny pro hydrolýzu alkyletherů nebo derivátů indolu, jako je například eserolin, geneserolin nebo fysovenol.

Vhodné kyseliny použitelné pro hydrolýzu sloučenin (II) nebo (III) jsou kyseliny s neredukujícími vlastnostmi, zvláště vzhledem ke sloučeninám vzorce (III), ve kterých je na redukční činidla citlivá w skupina N-O. Při způsobu podle předkládaného vynálezu se kyselina s výhodou volí ze skupiny: kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina chlorovodíková, kyselina methansulfonová, kyselina trifluoroctová, kyselina octová a silně kyselá iontoměničová pryskyřice, jako je Amberlyst®.

Podmínky hydrolýzy se budou volit podle skupiny přítomné v molekule, přičemž volit se bude zvláště druh kyseliny, její koncentrace a teplota při hydrolýze.

Kyselinu sírovou je možno používat v různých koncentracích od 10 do 85 %, s výhodou při teplotě v rozmezí od 50 do 90 °C.

Kyselina fosforečná je obecně použitelná při koncentraci 85 %, horká, s výhodou při teplotě přibližně 90 °C.

Kyselina methansulfonová se používá jako taková a do reakce se přidává horká, s výhodou při teplotě přibližně 90 °C.

Kyselina trifluoroctová jako taková a 10% kyselina chlorovodíková se mohou přidávat do reakce horké při teplotě přibližně 40 °C.

Sloučeniny vzorce (I) mohou být vhodně převáděny na své soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami.

Deriváty sloučenin vzorce (I), podobně jako jejich rodičovská

3o sloučenina geneserin, mají ve formě volné báze 1,2-oxazinovou • · · ·

- 12 strukturu, zatímco odpovídající solné formy mají strukturu N-oxidu (viz schéma 4).

HCI

T

Způsob podle předkládaného vynálezu umožňuje poprvé a na rozdíl od způsobu popsaného v EP 0599890 vyrábět v průmyslovém měřítku sloučeniny vzorce (I), zvláště v případě, kdy je R aromatická

2o skupina, s výhodou fenyl a benzyl, popřípadě substituovaná skupinou Ci-C₄alkyl, halogen nebo Ci-C₄alkoxy.

Překvapivě bylo zjištěno, že sloučeniny vzorce (i), ve kterých R je aromatická skupina, zvláště fenyl a benzyl, popřípadě substituovaná skupinou C-i-C₄alkyl, halogen nebo C₁-C₄aikoxy, mají silný anticholinesterázový účinek, který je selektivní na mozkové úrovni. Tyto sloučeniny, jejichž farmakologické vlastnosti nebyly v EP 0599890 úplně popsány, proto představují vybrané výhodné •fe 9··· • fefe· • fefefe • fefefefe •fe· fefe • fefefe • · ♦ ♦ • · • · sloučeniny vzhledem k dřívějšímu evropskému patentu a jsou tedy dalším předmětem předkládaného vynálezu.

Evropský patent EP 0599890 se týká ve skutečnosti aminokarbonylových derivátů geneserolinu vzorce (I) \

ío kde R je C₂-C₂o přímý nebo rozvětvený alkyl, Ca-Czcykloalkyl, fenyl nebo benzyl, které mohou být popřípadě substituovány skupinou C₁-C₄alkyl, halogen nebo Ci-C₄alkoxy.

Uvedený patent dostatečně popisuje pouze farmakologické vlastnosti n-heptylaminokarbonylgeneserolinu (označovaného také

CHF 2060), který je inhibitorem mozkové acetylcholinesterázy a vyznačuje se dlouhým působením.

Symptomatická terapie senilní demence spojené s Alzheimerovou chorobou může být prováděna látkami s anticholinesterázovými účinky s účelem zvýšit hladiny mozkového

2o acetylcholinu a obnovit cholinergní funkci neuronů. První sloučeninou s těmito vlastnostmi, která přišla do klinické praxe, byi tacrin (Cognex; Davis, K. L. a další, N. Engl. J. Med., 327: 1253 - 1259, 1993).

Vedlejší účinky na játra a malá selektivita tohoto produktu na centrální úrovni stimulovaly farmakologický výzkum pro nalezení nových sloučenin, které by měly vyšší účinnost a vyšší selektivitu působení na centrální úrovni. Stručně řečeno, je zapotřebí získat sloučeninu s vysokou anticholinesterázovou aktivitou, dlouhým trváním působením, vysokou afinitou k enzymu acetylcholinesteráze (AChE) proti butyrylcholinesteráze (BuChE) a současnou selektivitou „in vivo“

- 14 ·· «··<· • · · • · • · • · · ♦ · ·* 9 9 ·· 99 » » · • · ·*· * · · · • · · 9 ♦ · *» • * · • · · • ♦ * • · · ·· ·· při inhibici mozkové AChE vzhledem ke stejnému enzymu přítomnému v jiných periferních orgánech, napříkfad v srdci.

Za jednu ze selektivních anticholinesterázových látek může být považována SDZ-ENA 713 (obchodní název Exelon), popsaná v Enz, 5 A. a další, Progress in Brain Res. 98, 431 - 438, 1993. Tato sloučenina byla používána přihlašovateli předkládaného vynálezu v některých studiích jako srovnávací látka.

Nyní bylo zjištěno, že sloučeniny vzorce (la)

Cla) kde R je fenylová nebo benzylová skupina, která může být popřípadě substituovaná skupinou Ci-C₄alkyl, halogen nebo C-iC₄alkoxy, mají lepší farmakologické vlastnosti než sloučeniny vzorce (I), kde R je C₂-C₂o přímý nebo rozvětvený alkyl, C₃-C₇cykloalkyl, zvláště n-heptyl.

Předkládaný vynález se tedy dále týká sloučenin vzorce (la) jako

2o nových sloučenin při jejich použití jako léčiv.

Dalším předmětem předkládaného vynálezu jsou sloučeniny vzorce (la) a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ještě dalším předmětem předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství alespoň jedné sloučeniny vzorce (la). Použití uvedených sloučenin jako účinné složky pro výrobu farmaceutického prostředku patří také do rozsahu předkládaného vynálezu.

Podle dalšího provedení předkládaného vynálezu jsou příklady fenylové nebo benzylové skupiny substituované skupinou Ci-C₄alkyl • tt «··· tttt ·· ·· ·« • · · tttttt · « · · • tt · · tttttt · tttt · • tttttt · · tttttt tttt · • tttt tttttttt ····

15.......... ·· ·· skupiny 2-methylfenyl, 3-methylfenyl, 4-methylfenyl, 2-methylbenzyl, 3methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-ethylfenyl, 3-ethylfenyl, 4-ethylfenyl, 2-ethylbenzyl, 3-ethylbenzyl, 4-ethylbenzyl. 2-propylfenyl, 3propylfenyl, 4-propylfenyl, 2-propylbenzyl, 3-propylbenzyl, 45 propylbenzyl, 2-butylfenyl, 3-butylfenyl, 4-butylfenyl, 2-butylbenzyl, 3butylbenzyl, 4-butylbenzyl, přičemž názvy propyl a butyl zahrnují jak přímé, tak i rozvětvené izomery. Příklady fenylové nebo benzylové skupiny substituované atomy halogenu jsou 2-chlorfenyl, 3-chlorfenyl, 4-chlorfenyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2-bromfenyl, ío 3-bromfenyl, 4-bromfenyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl,

2-jodfenyl, 3-jodfenyl, 4-jodfenyl, 2-jodbenzyl, 3-jodbenzyl a 4jodbenzyl. Příklady fenylové nebo benzylové skupiny substituované skupinou Ci-C₄alkoxy jsou 2-methoxyfenyl, 3-methoxyfenyl, 4methoxyfenyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl,

2-ethoxyfenyl, 3-ethoxyfenyl, 4-ethoxyfenyl, 2-ethoxybenzyl, 3ethoxybenzyl, 4-ethoxybenzyl, 2-propoxyfenyl, 3-propoxyfenyl, 4propoxyfenyl, 2-propoxybenzyl, 3-propoxybenzyl, 4-propoxybenzyl, 2butoxyfenyl, 3-butoxyfenyl, 4-butoxyfenyl, 2-butoxybenzyl, 3butoxybenzyl, 4-butoxybenzyl, přičemž skupiny propoxy a butoxy zahrnují jak přímo, tak i rozvětvené izomery.

Výhodné sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou látky, ve kterých R je zvoleno ze skupiny 2-ethylfenyl (označovaný také CHF 2819), 3-methylfenyl (CHF 2957) a 2-methylfenyl (CHF 2822).

V prohlášení podaném u úřadu United States Patent and 25 Trademark Office v průběhu řízení týkajícího se US patentu No. 5538968 odpovídajícího EP 059980, bylo ukázáno, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu mají zvláštní selektivitu vzhledem k mozkové acetylcholinesteráze (AChE) ve srovnání s acetylcholinesterázou (AChE) plazmy a proto se vyznačuje vyšší

3o selektivitou k mozkové tkáni než k perifernímu systému.

4444

Nyní bylo zjištěno, že aminokarbonylové deriváty geneseroiinu vzorce (la) mají vyšší inhibiční schopnost proti mozkové acetylcholinesteráze (AChE) ve srovnání s deriváty substituovanými alkylovým zbytkem ve stejné poloze, které se popisují ve výše uvedeném evropském patentu a zvláště vzhledem k nheptyigeneserolinu. Toto pozorované zvýšení účinnosti probíhá při stejné účinnosti inhibice enzymu. Kromě toho prokázaly sloučeniny vzorce (la) nejen vyšší účinnost, ale také vyšší selektivitu enzymatické inhibice. Tyto sloučeniny ve skutečnosti mají jak vyšší selektivitu na tkáňové úrovni (mozková tkáň proti srdeční tkáni), tak i vyšší selektivitu vůči acetylcholinesteráze (AChE) ve srovnání s butyrylcholinesterázou (BuChE).

Tato selektivita je lepší než je tomu v případě nheptylgeneserolinu a v případě referenčních sloučenin, jako je fysostigmin a SDZ-ENA 713.

Vynález bude dále ilustrován následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza geneseroiinu

Eserin (40 g, 0,1455 mol) byl rozpuštěn v 80 ml methanolu v baňce ochlazené na +10 °C v ledové lázni. Byl přidán hydrogenuhličitan draselný (14,5 g, 0,1455 mol), přičemž byla směs důkladně míchána a potom byl po kapkách přidán 35 % (hmotnost/objem) peroxid vodíku (21,2 ml, 0,2182 mol) v průběhu 10 min.

Chladicí lázeň byla odstraněna a míchání probíhalo ještě

2,5 hod.

• 9 ···· • 9 · 9 · · · · · ·

9 99999 9 9·· • 999 99 999 9 · 9 · 9- « » ♦ « · 9 · «

999· ·9 ·· 99 ·· <«

- 17 Analýza HPLC ukázala, že obsah eserinu je nižší než 1 %. Roztok byl znovu ochlazen na ledové lázni a bylo přidáno 150 ml 25% roztoku (hmotnost/objem) NaCl.

Za sníženého tlaku byl odpařen methanol, přičemž směs byla 5 zahřívána maximálně na 35 °C během přibližně 10 min.

Vodná fáze byla extrahována třikrát 150 ml chloroformu a organické fáze byly odpařeny za sníženého tlaku za získání surového geneserinu jako pěnivého olejového zbytku.

Surový zbytek byl rozpuštěn ve 100 ml kyseliny sírové io s koncentrací 62 % hmotnostních a roztok byl rychle zahřát na 85 °C za mírného průtoku dusíku. Zahřívání pokračovalo 2 hod a analýza

HPLC ukázala obsah geneserolinu menší než 1 %.

Směs byla ochlazena na pokojovou teplotu a vlita do 100 g ledu.

Po kapkách byl za míchání přidán hydroxid amonný is s koncentrací 30 % hmotnostních ve vodě (120 ml), přičemž teplota reakční směsi byla udržována v rozmezí 20 až 25 °C pomocí vodní lázně. Když hodnota pH dosáhla 4, bylo přidáno 250 ml ethylacetátu. Při téměř neutrálním pH vodné fáze se začal oddělovat dehtovitý zbytek.

Vodná fáze byla dále dvakrát extrahována 200 ml ethylacetátu, organické fáze byly spojeny, promyty roztokem chloridu sodného 20 % hmotnost/objem, sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl rozetřen v hexanu (200 ml), přibližně 100 ml rozpouštědla bylo odpařeno za sníženého tlaku a získaná suspenze byla ochlazena na 5 °C a zfiltrována.

Produkt byl sušen při 50 °C za sníženého tlaku, bylo získáno 26,53 g (78 %) geneserolinu.

Teplota tání (Buchi) = 142,5 - 146 °C Obsah (titrace na bezvodou látku) >98 %

3o Čistota (HPLC) >98 %

H 9 « « 9 ♦ · 99

- 18 Analýza IR, hmotnostní spektrometrií a NMR potvrdila očekávaný produkt.

9999

99 9*9 <9 * * 9 9

0 9 9 * «0 ·

9· 99

Příklad 2

Syntéza geneserolinu

a) Syntéza geneseretolu

Eseretol (92,5 g, 0,377 mol) byl rozpuštěn v methanolu (185 ml), potom byl přidán hydrogenuhličitan sodný (37,7 g, 0,377 mol) a směs byla míchána 10 min. Potom byl v průběhu přibližně 10 min přidán io peroxid vodíku s koncentrací 40 % hmotnost/objem (48 ml, 0,566 mol) a 5 ml vody za chlazení baňky ve vodní lázni.

Směs byla míchána 3 hod, přičemž došlo ke zvýšení teploty z 20 °C na 26 °C. Konverze eseretolu byla pravidelně sledována analýzou HPLC a reakce byla zastavena, když bylo dosaženo zbytkového množství eseretolu méně než 2 %.

Směs byla za míchání vlita do 750 ml vodného roztoku chloridu sodného s koncentrací 25 % (hmotn./obj.), potom byla extrahována petroletherem (1000 + 500 + 500 ml).

Žlutá organická fáze byla promyta. roztokem chloridu sodného 20 s koncentrací 20 % hmotn./obj (200 ml), sušena nad bezvodým síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována v rotační odparce. Odpaření bylo zastaveno při dosažení zbytkového objemu rozpouštědla přibližně 150 ml. Takto získaná suspenze byla za chlazení na ledové lázni míchána 30 min a potom byla zfiltrována.

Produkt byl sušen při 30 °C ve vakuu, za získání 72,04 g (73,2 %) geneseretolu.

Teplota tání (Buchi) = 78 - 80 °C Obsah (titrace na bezvodou látku) = 96 %

Čistota (HPLC) >98 %

- 19 fe· ··*« «· ·« • · · • · ··♦ • ••fe ·· ♦ · · · • fe «fe e* ·· • · · * • fefe fe • · « fe • fe « · ·· ·· [cí]d²° °^C (0,5 % v ethanolu) = -177°

b) Syntéza geneserolinu

Geneseretol (71,9 g, 0,274 mol) byl rozpuštěn v kyselině sírové 5 s koncentrací 87,5 % hmotnostních (250 ml) a červenavý roztok byl míchán a zahříván na 90 °C.

Konverze geneseretolu byla sledována analýzou HPLC a reakce byla zastavena po 3 hodinách, když dosáhl obsah zbytkového geneseretolu přibližně 3 %.

ío Směs byla ochlazena v ledové lázni a vlita za míchání do ledu (800 g).

Potom byl pomalu přikapáván hydroxid amonný s koncentrací 30 % hmotnost/objem (500 ml) pro zvýšení pH na 7,5, přičemž teplota byla udržována přidáváním určitého množství ledu na <30 °C. Když bylo dosaženo hodnoty pH přibližně 5 až 6, byl přidán ethylacetát (1000 ml) pro rozpuštění oddělení odděleného geneserolinu.

Vodná fáze byla extrahována dalším ethylacetátem (500 + 500 ml) a organické fáze byly spojeny, promyty roztokem chloridu sodného s koncentrací 20 % hmotn./obj. (500 ml), sušeny nad bezvodým síranem sodným a zfiitrovány.

Roztok byl zakoncentrován na rotační odparce a když se začal srážet pevný produkt, bylo ve dvou podílech postupně přidáno 600 ml n-heptanu a odpařování pokračovalo až do dosažení objemu zbytkového rozpouštědla přibližně 200 ml, aby bylo dosaženo úplného odpaření ethylacetátu.

Takto získaná suspenze byla za míchání ochlazena na 5 °C během 30 min, potom byla zfiltrována a promyta petroletherem. Po usušení při 50 °C ve vakuu bylo získáno 54,5 g (84,7 %) geneserolinu. Teplota tání (Buchi) = 143,5 - 145,5 °C

9· #··· • ··· t · ··· *· · « ·· · * · · · · 9 · ··«· ·♦ 99 99 «· «9

- 20 Čistota (HPLC) >98 % [α]ο^2θ (0,5 % v ethanolu) = -180°

Příklad 3

Hydrolýza etherů geneserolinu

Podobným způsobem jako v příkladu 2b byly hydrolyzovány ethery geneserolinu vzorce (III).

V následující tabulce se uvádějí použité kyseliny, teploty a doby reakce spolu s výtěžkem geneserolinu odhadnutým jako procento ío plochy na chromatogramu HPLC získaného surového produktu.

Tabulka

Ri	Koncentrace kyseliny (hmotn.)	Teplota (°C)	Doba reakce (min)	Výtěžek geneserolinu (%)
t-butyl	H2SO4 87,5 %	90 °C	10	99,3 %
i-propyl	H2SO4 87,5 %	90 °C	10	73,9 %
n-propyl	H2SO4 87,5 %	90 °C	10	76,7 %
t-butyl	H2SO4 62 %	90 °C	5	100 %
i-propyl	H2SO4 62 %	90 °C	15	96,3 %
MOM	H2SO4 16 %	90 °C	15	69,8 %
MEM	H2SO4 16 %	90 °C	15	71,7 %
t-butyl	H2SO4 16 %	90 °C	15	92,4 %
THP	H2SO4 16 %	90 °C	5	77,9 %
MOM	H3PO4 85 %	90 °C	15	79,4 %

- 21 Tabulka - pokračování

Ri	Koncentrace	Teplota	Doba	Výtěžek
	kyseliny	(°C)	reakce	geneseroiinu
	(hmotn.)		(min)	(%)
MEM	H3PO4 85 %	90 °C	15	75,4 %
t-butyl	H3PO4 85 %	90 °C	15	100 %
i-propyl	H3PO4 85 %	90 °C	150	99,4 %
THP	H3PO4 85 %	90 °C	5	84,5 %
t-butyl	MES	90 °C	15	100 %
i-propyl	MES	90 °C	15	92,7 %
t-butyl	TFA	40 °C	15	95,5 %
MOM	TFA	40 °C	60	88,7 %
MEM	TFA	40 °C	60	96,6 %
THP	TFA	40 °C	5	83,0 %
t-butyl	HCI 10 %	40 °C	30	94,6 %
MOM	HCI 10 %	40 °C	30	91,3 %
MEM	HCI 10 %	40 °C	30	89,5 %
THP	HCI 10 %	40 °C	5	81,2 %
THP	AcOH 90 %	40 °C	120	80,0 %
Kde:
MOM	= methoxymethyl
MEM	= methoxyethoxymethyl
MES	= kyselina methansulfonová
TFA	= kyselina trifluoroctová

• · · · · ·

- 22 ΤΗΡ = tetrahydropyranyl

AcOH = kyselina octová

Příklad 4

Syntéza eserolinu hydrolýzou eseretolu

Eseretol (5 g, 0,0203 mol) byl rozpuštěn v kyselině sírové

87,5 % hmotnostních (25 ml) a roztok byl míchán při 90 °C až do dosažení úplné přeměny (75 min). Směs byla ochlazena a vlita do ledu. Za chlazení byi pomalu přidáván v atmosféře dusíku 30% ío amoniak (55 ml) až do dosažení pH 8. Vodná fáze byla nasycena NaCI a extrahována ethyletherem (100 + 75 + 75 ml).

Organická fáze byla po promytí roztokem chloridu sodného s koncentrací 20 % hmotnost/objem sušena nad Na2SO4, zfíltrována a odpařena. Byl získán žlutý olej, který stáním ztuhl. Po usušení ve vakuu při pokojové teplotě bylo získáno 3,04 g eserolinu (70,6 % výtěžek) a jeho čistota HPLC byla 97 %,

Podobnými způsoby je možno provádět hydrolýzu jiných etherů eserolinu vzorce (II) za získání eserolinu. Jakmile se získá eserolin, mohou být získány deriváty geneserolinu vzorce (i) podle příkladů 1 a

6 evropského patentu 0599890.

Příklad 5

Syntéza n-heptyiaminokarbonylqeneserolinu

Geneserolin (73 g, 0,31 mol) byl rozpuštěn v ethylacetátu 25 (1100 ml) při 37 °C.

K čirému roztoku byl přidán uhličitan draselný (11 g) a suspenze byla míchána 10 min.

······ ·· ·· ·· ·· ·· · ·♦· · · · ί • · ····· ·«·· • · · · ·· ··· ·· · • · · · · · · ···· __ ···· ·· ·· ·· ·· ··

- 23 Potom byl rychle přikapán heptylisokyanát (48 g) v průběhu 3 až 5 min. Byl pozorován mírný vývoj tepla a teplota se zvýšila na 47 °C.

Reakční směs byla míchána 3 hod, potom byl přidán 1 g tetrabutyiamoniumbromidu; další přidání heptylisokyanátu (4,3 g) snížilo obsah geneserolinu pod 2 %.

Reakční směs byla ochlazena, zfiltrována přes lože celitu a čirý roztok byl odpařen za sníženého tlaku.

K získanému hnědému oleji byl dvakrát přidán toluen (400 ml) a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn ío v 600 ml horkého hexanu a získaný roztok byl za míchání ochlazen na °C.

Vysrážený n-heptylaminokarbonylgeneserolin byl zfiltrován, promyt hexanem a sušen při 50 °C ve vakuu za získání 102,7 g surového produktu. Surová látka byla suspendována v 820 ml vody při is pokojové teplotě 30 min za důkladného míchání, potom zfiltrována, promyta hexanem a sušena při 60 °C za sníženého tlaku, za poskytnutí 98,6 g (84,5 %) n-heptylaminokarbonylgeneserolinu.

Příklad 6

Syntéza hvdrochloridu n-heptylaminokarbonylqeneserolinu n-heptylaminokarbonylgeneserolin (34,8 g, 0,093 mol) byl rozpuštěn v ethylacetátu (100 ml) při 40 °C, a potom byl přikapán roztok 22,5 ml HCI 4,25 M v ethylacetátu zředěný na 40 ml stejným rozpouštědlem. Roztok byl pomalu ochlazen na 5 °C, produkt se vysrážel jako bílá pevná látka, která byla zfiltrována a sušena při 60 °C za sníženího tlaku, za poskytnutí 33,0 g surového produktu.

Surový produkt byl suspendován ve 165 ml toluenu při 40 °C a udržován zahřátý 30 min za míchání. Teplá suspenze byla zfiltrována, pevná látka byla promyta toluenem a diethyletherem,

-24 potom sušena při 60 °C za sníženého tlaku, za poskytnutí 31,7 g (84 %) hydrochloridu n-heptylaminokarbonylgeneserolinu.

Teplota tání (Buchi) = 147 - 148 °C

Obsah (titrace na bezvodou látku) >99 %

Čistota (HPLC) >99 %

Způsoby podle předkládaného vynálezu umožňují získání dobrých výtěžků také u sloučenin vzorce (I), ve kterých je skupina R popřípadě substituovaná fenylová nebo benzylová skupina, přičemž se ío vychází z geneserolinu a používá se vhodně substituovaného isokyanátu jako acylačního činidla.

Příklad 7

Syntéza hydrochloridu n-(2-ethvlfenvl)aminokarbonylqeneserolinu is Terc-butylát draselný (112,mg, 1 mmol) se přidá k roztoku geneserolinu (2,34 g, 10 mmol) a 2-ethylfenylisokyanátu (1,61 g, 11 mmol) vystavenému působení ultrazvuku. Po 3 min působení ultrazvuku se za míchání magnetickým míchadlem přidá 11 mmol kyseliny chlorovodíkové v ethylacetátu, směs se zaočkuje malým množstvím produktu a míchání pokračuje 2 hodiny. Takto získaný krystalický produkt se zfiltruje, promyje ethyletherem a suší ve vakuu při 40 °C.

Získá se 3,4 g (81,3 %) bílého prášku.

Teplota tání = 179 - 181 °C [ct]_D ²⁰ (c=1), voda) = -135°

Alternativně může být hydrochlorid n-(2-ethylfenyl)aminokarbonylgeneserolinu získán postupem podle následujícího příkladu.

- 25 • · • 9 · 9

·

Příklad 8

Syntéza hydrochloridu n-(2-ethylfenvl)aminokarbonvlqeneserolinu (CHF2819)

Geneserolín (75 g, 0,3 mol) byl rozpuštěn v acetonu (750 ml), 5 byl přidán bezvodý uhličitan draselný (2 g) a směs byla míchána min.

Potom byl pomalu přikapáván roztok 2-ethylfenylisokyanátu (47,8 g, 0,324 mol) v acetonu (100 ml) v průběhu přibližně 60 min pří udržování teploty 20 °C. Po 30 min míchání byla suspenze zfiltrována io přes celitové lože a promyta malým množstvím acetonu. Čirý roztok byl zakoncentrován na přibližně 500 ml. K roztoku bylo přidáno 73 ml roztoku 4,75 M kyseliny chlorovodíkové v ethylacetátu, přičemž teplota byla udržována nižší než 25 °C.

Po ukončení přidávání byla teplota snížena na 5 °C a po 15 120 min byla suspenze zfiltrována a promyta acetonem (100 ml).

Takto získaná pevná látka byla sušena při 50 °C ve vakuu do konstantní hmotnosti za získání 106,04 g surového produktu, který po krystalizací z absolutního ethanolu poskytl 86,94 g (70,2 %) suchého hydrochloridu n-(2-ethylfenyl)aminokarbonylgeneserolinu jako bílé krystalické pevné látky.

Teplota tání 179 - 181 °C.

Analogicky, reakcí geneserolinu s vhodným isokyanátem, byly připraveny následující sloučeniny:

hydrochlorid n-(3-methylfenyl)aminokarbonylgeneserolinu (CHF2957) teplota tání: 178,5 - 179,5 °C hydrochlorid n-(2-methylfenyl)aminokarbonylgeneserolinu (CHF2822) teplota tání: 172 - 174 °C (rozklad).

Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu byly 30 hodnoceny sloučeniny CHF 2819, CHF 2957 a CHF 2822 na • »

- 26 schopnost enzymatické inhibice a selektivitu působení pomocí řady parametrů ve srovnání s hydrochloridem n-heptylaminokarbonylgeneserolinu (CHF 2060).

Samci krys SD o hmotnosti 150 až 200 g byli rozdělení do 5 skupin po osmi zvířatech podle působení různými látkami, které byly podávány orálně v destilované vodě v objemu 2 ml/kg. Po 2 hod od podání byla zvířata usmrcena a byly jim vyjmuty mozky. Mozková tkáň byla homogenizována v 11% roztoku Triton 100 v 0,1 M fosfátovém pufru při pH 8. Po 15 min centrifugace při 4 °C byl supernatant io oddělen a AChE byla stanovena způsobem popsaným v Ellman, G. L. a další (Biochem. Pharmacol. 7, 88 - 95, 1961). Pro každou koncentraci bylo stanoveno procento inhibice enzymu ve srovnání s kontrolami (zvířata, kterým byla podána pouze destilovaná voda).

Další řada experimentů byla prováděna pro zjištění kinetiky 15 inhibice mozkové a srdeční AChE po 1, 4 a 16 hod od podání každé testované látky. Enzym byl stanoven na homogenátech mozkové tkáně získaných podobně jako bylo popsáno výše. Dávka každého podaného produktu odpovídala 1/7 jeho letální dávky (LD50)· Byla vypočtena oblast pod křivkou (Area Under Curve, AUC) pomocí křivky inhibice enzymu pro srdeční a mozkovou tkáň pro tři časy testování.

Srovnávací výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 1.

• · · ·

- 27 Tabulka 1

Sloučenina	Dávkování mg/kg p.o.	Inhibice mozkové AChE(%)	ED50 mg/kg p.o.	Násobek zesílení účinnosti (*)
			(C.L. 95 %)
CHF 2060	3	8	13,2	1
	10	29	(5,9 - 26,6)
	30	60
CHF 2819	0,4	9	1,5	8
	1,3	34	(0,4-3,5)
	3,7	55
CHF 2822	0,8	25	1,6	7
	2,5	46	(0,6 - 3,1)
	7,5	68
CHF 2957	3	21	4,1	3
	6	56	(1,4-9,5)
	9	67

(*) EDgo CHF 2060 n = 10 C.L. = interval spolehlivosti ED50 sloučenina

Jestliže vezmeme v úvahu vypočtené hodnoty ED50 (dávka sloučeniny potřebná pro 50% inhibici enzymu), je zřejmé, že arylové deriváty jsou při ihnibici AChE po orálním podání kryse účinnější než referenční sloučenina CHF 2060. Konkrétně se ukázalo, že sloučenina

CHF 2819 je osmkrát účinnější než sloučenina CHF 2060, zatímco sloučeniny CHF 2822 a CHF 2957 jsou sedmkrát, popřípadě třikrát • · · · • · • · • * · ···· * · · ··»· ·· ·· ·· ··

- 28 účinnější. Analýza kinetiky inhibice enzymu na mozkové tkáni a homogenátech srdeční tkáně se uvádí v následující tabulce 2.

Tabulka 2
Sloučenina	Dávkování	Mozková	Maximum	AUC	AUC	Index
	(mg/kg	AChE	srdeční	mozek	srdce	selektivity
	p.o.)	% inhibice	AChE	(% inhib.	(% inhib.	(*)
				xh)	xh)

CHF 2060	10	20	41	252	450	0,6
CHF 2819	1,3	32	4	348	36	9,7
CHF 2822	2,5	45	9	379	96	3,9
CHF 2957	9	62	13	585	125	4,7

(*) AUC mozek/AUC srdce n = 10

Výsledky ukazují, že arylové deriváty geneserolinu mají na rozdíl od alkylových derivátů vyšší selektivitu pro mozkovou tkáň vzhledem k srdeční tkáni.

ίο V další řadě experimentů byla vyhodnocována u sloučenin CHF

2819, CHF 2957 a CHF 2822 inhibice erytrocytové AChE a lidské plazmatické BuChE „in vitro“ v porovnání s n-heptylaminokarbonylgeneserolinem (CHF 2060) a běžnými inhibitory cholinesterázy fysostigminem a SDZ-ENA 713. Bylo použito podobného způsobu, jaký byl uveden výše, viz Ellman G. L. a další. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

- 29 Tabulka 3

Sloučenina	AChE IC5o (pm) ± s.e.	BuChE IC5o (pm) ± s.e.	S.l.
Fysostigmin	0,18 ± 0,01	0,05 ± 0,004	0,27
SDZ-ENA 713	57,9 ±2,48	0,45 ± 0,02	0,007
CHF 2060	0,85 ± 0,08	0,005 ± 0,0007	0,005
CHF 2819	0,48 ± 0,06	55,2 ± 6,43	115
CHF 2822	2,01 ± 0,08	0,18 ± 0,01	0,09
CHF 2957	4,20 ± 0,29	133,8 ± 9,70	32

S.l. = index selektivity (IC₅₀ BuChE/IC₅o AChE) n = 4 - 8

Všechny testované sloučeniny mají pro AChE afinitu 5 (vyhodnocenou jako IC₅o, tedy koncentraci sloučeniny potřebnou pro 50% inhibici enzymu) na mikromolární úrovni. Mezi uvedenými sloučeninami je SDZ-ENA 713 méně účinná než další produkty. Výraznější rozdíly se vyskytují při inhibici BuChE. Látka CHF 2060, fysostigmin a SDZ-ENA 713 jsou daleko účinnější při inhibici BuChE, ío proti AChE. Na základě vypočtených indexů selektivity vychází, že sloučenina CHF 2819 je 115 krát selektivnější vzhledem k AChE. Také látka CHF 2957 má dobrou selektivitu, zatímco látka CHF 2822 má selektivitu mírně nižší.

Je známo, že BuChE je přítomna zejména v periferní tkáni 15 a v menší míře v mozku na úrovni mikroglií. Proto by mohla afinita ukázaná u některých z testovaných sloučenin k této formě enzymu vysvětlit jejich periferní inhibiční účinek „in vivo“.

Jak vyplývá ze skutečností popisovaných v předkládaném vynálezu, sloučeniny obecného vzorce (la) jsou použitelné pro výrobu farmaceutického prostředku s inhibiční aktivitou na • « · t« · • · · • 9 • * · ·

94 4 44

- 30 acetylcholinesterázu. Zvláště látka CHF 2819 je charakterizována, oproti jiným zde diskutovaným sloučeninám, výhodnou selektivitou vůči AChE vzhledem k BuChE „in vitro“, dobrým trváním působení a selektivitou „in vivo“ při inhibici mozkové AChE.

Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu je uvedený farmaceutický prostředek použitelný pro léčení Alzheimerovy choroby a jiných neurodegenerativních patologických stavů.

Farmaceutický prostředek nemá s výhodou periferní vedlejší účinky, což je dalším výhodným znakem nárokovaným v předkládaném io vynálezu.

Farmaceutický prostředek bude formulován ve formách a dávkách, které může stanovit odborník v oboru v závislosti na druhu patologického stavu, jeho vážnosti a stavu pacienta.

Co se týče průmyslové použitelnosti, předkládaný vynález také 15 poskytuje farmaceutické prostředky obsahující terapeuticky účinné množství účinné látky ve směsi s nosiči a pomocnými látkami běžnými v oboru farmacie.

Tyto prostředky je možno připravovat dobře známými způsoby, například jak se popisuje v „Remingtonů Pharmaceutiacal Sciences

Handbook“, Mack Pub., New York, USA.

Příklady farmaceutických prostředků jsou orální formy, pevné nebo kapalné, jako jsou tablety, kapsle, roztoky, suspenze, sirupy; formy určené pro injekční podání, jako jsou roztoky, suspenze a emulze; a prostředky s řízeným uvolňováním.

Denní dávka účinné složky podávaná pomocí těchto prostředků se bude pohybovat v rozmezí od 1 do 50 mg a s výhodou od 5 do 20 mg.

Claims (27)

1. PATENTOVÉ NÁROKY
2. 2/¾

   Způsob výroby sloučenin vzorce (!) io kde R je C₂-C₂o přímá nebo rozvětvená alkylová skupina, C3-C7 cykloalkylová skupina, fenylová nebo benzylová skupina, které mohou být popřípadě substituovány skupinami C1-C4 alkyl, halogen nebo C1-C4 alkoxy, vyznačující se tím, ž e zahrnuje následující kroky:

   15 a) provede se oxidace eserinu peroxidem vodíku v přítomnosti báze a následná hydrolýza na geneserolin, aniž by se izoloval meziprodukt geneserin;

   b) provede se acylace geneserolinu isokyanátem vzorce R_N=C=O, kde R je jak definováno výše v přítomnosti bazického

   20 katalyzátoru;

   c) popřípadě se provede převedení získané sloučeniny na farmaceuticky přijatelnou sůl.

   2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, 25 že jako katalyzátor v kroku b) se použije látka zvolená ze skupiny terc-butylát draselný a uhličitan draselný.

   • 9 ·· ·· 99 • « 9 9 9 9 9 9 9 9

   9 9 9 9 999 9 9 9 9

   9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

   9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

   9«·· 99 9 · · 9 9 · 99

   - 32 9 9 Μ»·
3. 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že v kroku b) se přidá katalyzátor přenosu fází.
4. 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, ž e jako katalyzátor přenosu fází se použije tetrabutylamoniumbromid.
5. 5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že v kroku b) se použije zdroj ultrazvuku.
6. 6. Způsob výroby sloučenin vzorce (I):

   kde R je C2-C20 přímá nebo rozvětvená alkylová skupina, C3O7 cykloalkylová skupina, fenylová nebo benzylová skupina, které mohou být popřípadě substituovány skupinami C1-C4 alkyl, halogen nebo C1-C4 alkoxy, vyznačující se tím, ž e zahrnuje následující kroky:

   a) provede se oxidace sloučeniny vzorce (il) perkyselinami nebo peroxidy

   RjO (II)

   N \

   • · to··· «· to··· • · • to kde R-ι je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a která může být odstraněna v kyselých podmínkách, aniž by došlo k redukci N-oxtdové skupiny podobné geneserinu, v alkoholovém rozpouštědle nebo ve směsi voda-alkohol za poskytnutí sloučeniny vzorce (III);

   \

   b) provede se hydrolýza sloučeniny vzorce (III) na geneserolin minerální kyselinou nebo organickou kyselinou, která neredukuje skupinu N-oxidu;

   c) provede se acylace geneserolinu isokyanátem vzorce R-N=C=O, kde R je jak definováno výše v přítomnosti bazického katalyzátoru zvoleného ze skupiny alkalických alkoholátů, uhličitanů nebo hydroxidů;

   d) provede se případné převedení získané sloučeniny na farmaceuticky přijatelnou sůl.
7. 7. Způsob výroby sloučenin vzorce (I):

   \ fe • · · • · ·

   - 34 ♦· ···« ·« • · · · · · · fe. · ♦ fefe fefe kde R je C2-C20 přímá nebo rozvětvená alkylová skupina, C3-C7 cykloalkylová skupina, fenylová nebo benzylová skupina, které mohou být popřípadě substituovány skupinami C1-C4 alkyl, halogen nebo C1-C4 alkoxy, vyznačující se tím, ž e zahrnuje následující kroky:

   a) provede se hydrolýza sloučeniny vzorce (II) kde R1 je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a může být odstraněna za kyselých podmínek, za získání eserolinu vzorce (lla);

   b) provede se acylace eserolinu (lla) isokyanátem vzorce R-N=C=O, kde R je jak definováno výše v přítomnosti bazického katalyzátoru zvoleného ze skupiny alkalických alkoholátů, uhličitanů nebo hydroxidů;

   c) provede se oxidace takto získaného aminokarbonylového derivátu eserolinu na odpovídající aminokarbonyfový derivát geneserolinu;

   • » ·*· ·

   - 35 d) provede se případné převedení na farmaceuticky přijatelnou sůl.
8. 8. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se 5 tím, že hydrolýza sloučeniny vzorce (II) nebo (III) se provede kyselinou zvolenou ze skupiny kyselina sírová, fosforečná, chlorovodíková, methansulfonová, trifluoroctové a octová a silně kyselá iontoměničová pryskyřice.

   io
9. 9. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že hydrolýza se provádí kyselinou sírovou při koncentraci v rozmezí od 10 do 85 % hmotnostních.
10. 10. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se

    15 tím, že hydrolýza se provádí horkou kyselinou fosforečnou s koncentrací 85 % hmotnostních.
11. 11. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že hydrolýza se provádí kyselinou methansulfonovou

    20 při 90 °C.
12. 12. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že hydrolýza se provádí horkou kyselinou trifluoroctovou nebo 10% kyselinou chlorovodíkovou při 40 °C.
13. 13. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že hydrolýza se provádí silně kyselou iontoměničovou pryskyřicí.
14. 14. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že při kroku acylace se přidává bazický katalyzátor s katalyzátorem přenosu fází nebo se použije zdroje ultrazvuku.
15. 15. Sloučeniny vzorce (II) kde Ri je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a která může být odstraněna v kyselém prostředí jako meziprodukty při způsobu podle nároku 6 nebo 7.
16. 16. Sloučeniny vzorce (II) podle nároku 15, kde Ri je isopropyl, terc-butyl nebo methoxymethyl.
17. 17. Sloučeniny vzorce (III) » φ »φ»« • <

    •φ φ· φφ * φ * · · · φ • φφφφ φ φφ φ φ · φ · > * φ · φ φ φφ φ φ φφ φ φφ ·φ φφ φ· kde R-ι je ochranná skupina fenolové hydroxylové skupiny, která musí být stabilní v bazickém prostředí a za podmínek silné redukční reakce a která může být odstraněna v kyselém prostředí jako meziprodukty při způsobu podle nároku 6.
18. 18. Sloučeniny vzorce (III) podle nároku 17, kde Ri je alkyl, alkoxyalkyl nebo tetrahydropyranyl.
19. 19. Použití organické nebo minerální kyseliny pro hydrolýzu alkyletherů nebo indolových derivátů.
20. 20. Použití podle nároku 19, vyznačující se tím, ž e indolové deriváty jsou zvoleny z eserolinu a geneserolinu.
21. 21. Sloučeniny vzorce (la) kde R je fenylová nebo benzylová skupina, která může být popřípadě substituována skupinou Ci-C₄ alkyl, halogen nebo C-|-C₄ alkoxy a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
22. 22. Sloučeniny podle nároku 21, kde skupina R je zvolena ze skupiny 2-ethylfenyl, 3-methylfenyl a 2-methylfenyl.

    00 000*

    04 ··

    0 0 0 « · 0 ·· « 0 0 0

    0 0 0 ·

    40 ·· • * · • · • * ·

    0 0 0

    0 · 0 0

    - 38
23. 23. Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, ž e obsahují účinné množství sloučeniny podle nároku 21 ve směsi s farmaceuticky přijateinými nosiči a pomocnými látkami.
24. 24. Použití sloučenin podle nároku 21 pro výrobu farmaceutického prostředku s inhibičními účinky na acetylcholinesterázu.
25. 25. Použití podle nároku 24, kde uvedený farmaceutický prostředek je selektivní vůči mozkové acetylcholinesteráze.
26. 26. Použití podle nároku 25, kde uvedený farmaceutický prostředek je použitelný pro léčení Alzheimerovy choroby a jiných neurovegetativních patologických stavů.
27. 27. Použití podle nároku 26, kde uvedený farmaceutický prostředek nemá periferní vedlejší účinky.