RU2825747C1 - Method for skin integrity restoration in case of extensive deep burns - Google Patents
Method for skin integrity restoration in case of extensive deep burns Download PDFInfo
- Publication number
- RU2825747C1 RU2825747C1 RU2024104921A RU2024104921A RU2825747C1 RU 2825747 C1 RU2825747 C1 RU 2825747C1 RU 2024104921 A RU2024104921 A RU 2024104921A RU 2024104921 A RU2024104921 A RU 2024104921A RU 2825747 C1 RU2825747 C1 RU 2825747C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- adipose tissue
- stromal
- solution
- wound
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 41
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 10
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 claims description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 5
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 4
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 54
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 46
- 208000035965 Postoperative Complications Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 231100000075 skin burn Toxicity 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 61
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 34
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001856 aerosol method Methods 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 2
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 2
- VAZJLPXFVQHDFB-UHFFFAOYSA-N 1-(diaminomethylidene)-2-hexylguanidine Chemical compound CCCCCCN=C(N)N=C(N)N VAZJLPXFVQHDFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010047139 Vasoconstriction Diseases 0.000 description 1
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000002293 adipogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000015323 positive regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеField of technology to which the invention relates
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии (комбустиологии) и может быть использовано для биотехнологического восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи III степени. The invention relates to medicine, namely to surgery (combustiology) and can be used for biotechnological restoration of the skin in case of extensive deep third-degree skin burns.
Заявленный способ предусматривает выполнение аутодермопластики расщепленным сетчатым кожным трансплантатом с перфорацией ячеек 1:6 и более, с комбинированной трансплантацией минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (СВФ ЖТ) после предварительной ультразвуковой обработки (УЗО) ожоговой (раневой) поверхности. Изобретение направлено на повышение эффективности хирургического лечения глубоких, обширных ожогов за счет оптимизации приживления пересаженных кожных аутотрансплантатов, иммунных и репаративных процессов в дерме, включая восстановление поврежденной в результате травмы сосудистой сети.The claimed method involves performing autodermoplasty with a split mesh skin graft with a perforation of cells of 1:6 or more, with a combined transplantation of minimally manipulated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue (SVF AT) after preliminary ultrasonic treatment (USO) of the burn (wound) surface. The invention is aimed at increasing the effectiveness of surgical treatment of deep, extensive burns by optimizing the engraftment of transplanted skin autografts, immune and reparative processes in the dermis, including restoration of the vascular network damaged as a result of injury.
Уровень техникиState of the art
Актуальность предлагаемого способа определяется сложностью и длительностью лечения пациентов с обширными глубокими ожогами и выраженным дефицитом неповрежденной кожи, которую можно использовать в качестве донорских участков, большим процентом осложнений и высокой летальностью в данной группе пациентов. Одним из важных факторов лечения данных пациентов является эффективное пластическое восстановление целостности кожного покрова при дефиците неповрежденной кожи, улучшение функциональных и эстетических результатов лечения тяжелообожженных.The relevance of the proposed method is determined by the complexity and duration of treatment of patients with extensive deep burns and a pronounced deficiency of intact skin that can be used as donor sites, a high percentage of complications and high mortality in this group of patients. One of the important factors in the treatment of these patients is effective plastic restoration of the integrity of the skin with a deficiency of intact skin, improving the functional and aesthetic results of treating severely burned patients.
В настоящее время основным методом оперативного лечения является некрэктомия с одномоментной или отсроченной аутодермопластикой свободным, расщепленным кожным трансплантатом, как правило, перфорированным (патент RU 2434595). Однако при выполнении аутодермопластики в комбинации с перфорированным трансплантатом 1:6 отмечается высокий процент послеоперационных осложнений (до 40%) в виде регресса трансплантата (Алексеев А.А., Попов С.В. Комбустиология, М, 1999), а травматичность операций, кроме того, не позволяет выполнять одномоментное иссечение некротизированных тканей и аутодермопластику на площади более 15% поверхности тела, что, в свою очередь, ведет к многоэтапным хирургическим вмешательствам. Currently, the main method of surgical treatment is necrectomy with one-stage or delayed autodermoplasty with a free, split skin graft, usually perforated (patent RU 2434595). However, when performing autodermoplasty in combination with a perforated graft 1:6, a high percentage of postoperative complications (up to 40%) is noted in the form of graft regression (Alekseev A.A., Popov S.V. Combustiology, M, 1999), and the traumatic nature of the operations, in addition, does not allow for one-stage excision of necrotic tissue and autodermoplasty on an area of more than 15% of the body surface, which, in turn, leads to multi-stage surgical interventions.
Известен способ лечения раны (RU 2023424), основанный на том, что после хирургической обработки раны на ее поверхность наносят готовый трансплантат культуры клеток фибробластов человека. После приживления клеток фибробластов - образования монослоя на ране - производят аутодермопластику, для чего используют расщепленный сетчатый аутотрансплантат с перфорацией 1:6 и более. Несмотря на эффективность, данная методика имеет ограничения для применения, которые сопряжены с необходимостью культивирования клеток в течение длительного времени и невозможностью их применения в широкой клинической практике в настоящее время (ФЗ от 23.06.2016 № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах»).A method of wound treatment is known (RU 2023424), based on the fact that after surgical treatment of the wound, a ready-made transplant of human fibroblast cell culture is applied to its surface. After the engraftment of fibroblast cells - the formation of a monolayer on the wound - autodermoplasty is performed, for which a split mesh autograft with a perforation of 1:6 or more is used. Despite its effectiveness, this technique has limitations for use, which are associated with the need to cultivate cells for a long time and the impossibility of their use in widespread clinical practice at the present time (Federal Law of 23.06.2016 No. 180-FZ "On Biomedical Cell Products").
Известен способ восстановления кожного покрова (RU 2148970), предусматривающий выделение и последующее культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке из оптического прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D=0,01-3,0 мкм и плотностью пор N=(103-109)1/см2 до формирования монослоя кератиноцитов. Недостатками данного способа являются его сложность, необходимость культивирования клеточной культуры, высокий процент послеоперационных осложнений.A method for skin restoration is known (RU 2148970), which involves the isolation and subsequent cultivation of keratinocytes on a polymer porous substrate made of an optically transparent polymer with through pores of diameter D=0.01-3.0 μm and pore density N=(103-109)1/ cm2 until a keratinocyte monolayer is formed. The disadvantages of this method are its complexity, the need for cell culture cultivation, and a high percentage of postoperative complications.
Одним из перспективных направлений в современной медицине является применение минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани для стимуляции процессов регенерации и восстановления целостности кожного покрова. Клетки СВФ ЖТ, располагающиеся вдоль капилляров, являются мультипотентными мезенхимальными (стромальными) стволовыми клетками ADSC (Adipose Derived Stem Cells). Повышенный регенераторный потенциал обеспечивается за счет многообразия клеточных форм с возможностью высокой степени их дифференцировки и пролиферации: One of the promising areas in modern medicine is the use of minimally manipulated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue to stimulate regeneration processes and restore the integrity of the skin. SVF cells of adipose tissue, located along the capillaries, are multipotent mesenchymal (stromal) stem cells ADSC (Adipose Derived Stem Cells). Increased regenerative potential is provided by the diversity of cell forms with the possibility of a high degree of their differentiation and proliferation:
- преадипоциты <10% (дифференцирование адипоцитов);- preadipocytes <10% (adipocyte differentiation);
- эндотелиальные клетки <10% (ангиогенез);- endothelial cells <10% (angiogenesis);
- жировые стволовые клетки <10% (дифференцирование в различные виды клеток);- adipose stem cells <10% (differentiation into different types of cells);
- фибробласты <5% (формирование экстрацеллюлярного матрикса);- fibroblasts <5% (formation of extracellular matrix);
- перициты <5% (стабилизация кровеносных сосудов);- pericytes <5% (stabilization of blood vessels);
- моноциты, макрофаги <40%;- monocytes, macrophages <40%;
- другие клетки – 20%.- other cells – 20%.
Установлено, что in vitro ADSC могут дифференцироваться непосредственно в эпителиальные клетки или в фибробласты и могут секретировать факторы роста, которые вызывают пролиферацию и миграцию кератиноцитов, фибробластов и эндотелиальных клеток. (Купша Е.И., Кочина Е.В., Гордейко Т.А. Актуальные аспекты применения стволовых клеток жировой ткани в регенеративной медицине; Медицинская Академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО КФУ им. В. И. Вернадского, 2018).It has been established that in vitro ADSCs can differentiate directly into epithelial cells or fibroblasts and can secrete growth factors that cause proliferation and migration of keratinocytes, fibroblasts and endothelial cells. (Kupsha E.I., Kochina E.V., Gordeyko T.A. Current aspects of the use of adipose tissue stem cells in regenerative medicine; S.I. Georgievsky Medical Academy of V.I. Vernadsky Kazan Federal University, 2018).
Известен способ биотехнологического восстановления кожного покрова аллогенными стволовыми клетками человека при обширных глубоких ожогах кожи (RU 2687007). Пациенту проводят первичную обработку раны (ожога), инфузионно-трансфузионную, антибактериальную, десенсибилизирующую терапию. При стабилизации состояния пациента выполняют некрэктомию раны с одновременным забором отрезка здоровой кожи пациента нужного размера. Субфасциально, внутримышечно и по периметру ожога в зону глубокого ожога кожи вводят суспензию мезенхимальных стволовых клеток и проводят аутодермопластику раны. Суспензию, содержащую 1 млн клеток в 1 мл суспензии, вводят инъекционно внутрикожно и внутримышечно после выполнения ранней некрэктомии и одномоментной аутодермопластики (на 2-3 сутки после травмы), дозировка составляет до 0,5 мл на 1 см2. Инъекции осуществляют по периметру раны и субфасциально под пересаженный трансплантат. Предлагаемый способ может быть воспроизведен с применением суспензии аллогенных мезенхимальных стволовых клеток, полученной из жировой ткани доноров.A method of biotechnological restoration of the skin with allogeneic human stem cells in case of extensive deep skin burns is known (RU 2687007). The patient undergoes primary wound (burn) treatment, infusion-transfusion, antibacterial, and desensitizing therapy. When the patient's condition is stabilized, necrectomy of the wound is performed with simultaneous collection of a piece of the patient's healthy skin of the required size. A suspension of mesenchymal stem cells is injected subfascially, intramuscularly, and along the burn perimeter into the area of the deep skin burn, and autodermoplasty of the wound is performed. A suspension containing 1 million cells in 1 ml of suspension is injected intradermally and intramuscularly after early necrectomy and one-stage autodermoplasty (on the 2nd-3rd day after the injury), the dosage is up to 0.5 ml per 1 cm 2 . Injections are performed along the perimeter of the wound and subfascially under the transplanted graft. The proposed method can be reproduced using a suspension of allogeneic mesenchymal stem cells obtained from donor adipose tissue.
Однако использование аллогенного материала может сопровождаться развитием иммунологических реакций и потребовать проведения иммуносупрессивной терапии, что зачастую недопустимо у пациентов с тяжелой ожоговой травмой. Кроме того, получение и использование тканевой суспензии сопряжено с действующим Российским законодательством, которое ограничивает применение аллогенных клеток. С целью возможности создания безопасной клеточной суспензии из аллогенного материала необходимо проведение культивирования клеток, что также в настоящее время ограниченно действующим законодательством (ФЗ от 23.06.2016 № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах»). Кроме того, субфасциальное и внутримышечное введение предложенной суспензии с содержанием аллогенных адипогенных мезенхимальных стволовых клеток в большей степени оказывает паракринный эффект в области введения (мышечная ткань и субфасциальное пространство) и не объясняет, каким образом качественное и количественное содержание клеток влияет на стимуляцию репаративных процессов в зоне пересаженных аутотрансплантатов у больных с обширными глубокими ожогами.However, the use of allogeneic material may be accompanied by the development of immunological reactions and require immunosuppressive therapy, which is often unacceptable in patients with severe burn injury. In addition, the production and use of tissue suspension is associated with the current Russian legislation, which limits the use of allogeneic cells. In order to be able to create a safe cell suspension from allogeneic material, it is necessary to culture the cells, which is also currently limited by the current legislation (Federal Law of 23.06.2016 No. 180-FZ "On Biomedical Cell Products"). In addition, subfascial and intramuscular administration of the proposed suspension containing allogeneic adipogenic mesenchymal stem cells has a greater paracrine effect in the area of administration (muscle tissue and subfascial space) and does not explain how the qualitative and quantitative content of cells affects the stimulation of reparative processes in the area of transplanted autografts in patients with extensive deep burns.
Наиболее близким к заявленному решению является способ лечения пациентов с глубокими термическими ожогами в комплексной терапии (RU 2668801), включающий использование клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани. Во время проведения плановых хирургических обработок ожоговых поверхностей проводят забор жировой ткани в нижней трети передней брюшной стенки шприцевой липосакцией, из полученного липоаспирата выделяют стромально-васкулярную фракцию жировой ткани путем ферментативной обработки и непосредственно во время хирургической процедуры (аутодермопластики) полученную суспензию в количестве 15×106 или 10×106 в объеме 2-4 мл жизнеспособных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани вводят в 10-15 точек вокруг каждой раневой поверхности, что улучшает результат операции. Однако данный способ основан на использовании для аутодермопластики неперфорированных кожных трансплантатов, что делает его неприменимым для лечения пациентов с обширными глубокими термическими ожогами и выраженным дефицитом донорских участков (неповрежденной кожи). Ферментативное выделение аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции из липоаспирата требует добавления дорогостоящих специальных ферментативных растворов с необходимостью их последующей деактивации, что увеличивает длительность процесса выделения клеток. Кроме того, обкалывание раневых дефектов по периферии при обширных ожогах не позволяет добиться стимуляции репаративного процесса, ангиогенеза на всей площади раневой (ожоговой) поверхности, где была выполнена аутодермопластика. The closest to the claimed solution is a method for treating patients with deep thermal burns in complex therapy (RU 2668801), including the use of cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue. During planned surgical treatments of burn surfaces, adipose tissue is collected from the lower third of the anterior abdominal wall using syringe liposuction, the stromal-vascular fraction of adipose tissue is isolated from the resulting lipoaspirate using enzymatic treatment and directly during the surgical procedure (autodermoplasty), the resulting suspension in the amount of 15×10 6 or 10×10 6 in a volume of 2-4 ml of viable cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue is injected into 10-15 points around each wound surface, which improves the outcome of the operation. However, this method is based on the use of non-perforated skin grafts for autodermoplasty, which makes it inapplicable for treating patients with extensive deep thermal burns and a pronounced shortage of donor sites (intact skin). Enzymatic isolation of autologous cells of the stromal-vascular fraction from lipoaspirate requires the addition of expensive special enzymatic solutions with the need for their subsequent deactivation, which increases the duration of the cell isolation process. In addition, injecting wound defects along the periphery in case of extensive burns does not allow for stimulation of the reparative process, angiogenesis over the entire area of the wound (burn) surface where autodermoplasty was performed.
Таким образом, поиск новых способов лечения обширных и глубоких ожогов, в т.ч. с использованием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани, с разработкой комплекса параметров и характеристик, включая количество, формы и режимы введения клеток, обеспечивающих максимальный лечебный эффект, остается актуальной задачей. Thus, the search for new methods of treating extensive and deep burns, including using autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue, with the development of a set of parameters and characteristics, including the number, forms and modes of administration of cells that provide the maximum therapeutic effect, remains an urgent task.
Технической проблемой, решаемой заявленным изобретением, является разработка высокоэффективного способа биотехнологического восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи с достижением адекватного косметического и функционального результата.The technical problem solved by the claimed invention is the development of a highly effective method for biotechnological restoration of the skin in cases of extensive deep skin burns with the achievement of an adequate cosmetic and functional result.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the essence of the invention
Техническим результатом является сокращение сроков эпителизации пересаженных перфорированных аутотрансплантатов при введении в ожоговую рану аутологичных клеток СВФ ЖТ в процессе выполнения аутодермопластики в количестве от 15 млн. жизнеспособных клеток в 10-20 мл раствора с обработкой до 20% поверхности тела (до 3600 см2 площади ожоговой раны). The technical result is a reduction in the time of epithelialization of transplanted perforated autografts when introducing autologous SVF ZH cells into a burn wound during autodermoplasty in an amount of 15 million viable cells in 10-20 ml of solution with treatment of up to 20% of the body surface (up to 3600 cm2 of burn wound area).
Изобретение позволяет значительно сократить сроки восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными ожогами и дефицитом донорских участков: начало эпителизации в перфорированных ячейках кожных трансплантатов в соотношении 1:6 и более отмечается к 3,4±1,6 суткам, а окончательное приживление трансплантата – к 9,8±1,4 суткам после операции. The invention allows to significantly reduce the time for restoration of the integrity of the skin in patients with extensive burns and a shortage of donor sites: the onset of epithelialization in the perforated cells of skin grafts in a ratio of 1:6 or more is noted by 3.4±1.6 days, and the final engraftment of the graft is noted by 9.8±1.4 days after surgery.
Аутодермопластика расщепленным кожным трансплантатом перфорированным в соотношении 1:6 и более с комбинированным использованием аутологичных минимально манипулированных клеток жировой ткани с предварительной ультразвуковой обработкой ожоговых ран позволяет сократить сроки эпителизации пересаженных кожных трансплантатов, уменьшить число выполняемых аутодермопластик и процент послеоперационных осложнений, улучшить функциональные и эстетические результаты операции.Autodermoplasty with a split skin graft perforated in a ratio of 1:6 or more with the combined use of autologous minimally manipulated adipose tissue cells with preliminary ultrasonic treatment of burn wounds allows to reduce the time of epithelialization of transplanted skin grafts, reduce the number of autodermoplasties performed and the percentage of postoperative complications, and improve the functional and aesthetic results of the operation.
Технический результат достигается способом биотехнологического восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными глубокими ожогами, включающим хирургическую обработку ожоговой раны с использованием ультразвукового воздействия (кавитации), аутодермопластику расщепленным перфорированным кожным трансплантатом и трансплантацию выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции (СВФ) жировой ткани (ЖТ). The technical result is achieved by a method of biotechnological restoration of the integrity of the skin in patients with extensive deep burns, including surgical treatment of the burn wound using ultrasound exposure (cavitation), autodermoplasty with a split perforated skin graft and transplantation of isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction (SVF) of adipose tissue (AT).
Отличием заявленного способа от наиболее близкого является:The difference between the declared method and the closest one is:
- выполнение аутодермопластики расщепленным кожным трансплантатом толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией ячеек в соотношении 1:6 и более;- performing autodermoplasty with a split skin graft 0.2-0.3 mm thick with perforation of cells in a ratio of 1:6 or more;
- получение, для трансплантации аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции, не менее 100 мл липоаспирата жировой ткани, с последующим получением раствора в объеме не менее 10 мл (предпочтительно от 10 мл до 20 мл) с содержанием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве не менее 10×106 (предпочтительно более 50×106) и жизнеспособностью не менее 80%,- obtaining, for transplantation of autologous cells of the stromal-vascular fraction, at least 100 ml of adipose tissue lipoaspirate, followed by obtaining a solution in a volume of at least 10 ml (preferably from 10 ml to 20 ml) containing autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue in an amount of at least 10×10 6 (preferably more than 50×10 6 ) and a viability of at least 80%,
- последовательность обработки раневой поверхности раствором, содержащим аутологичные клетки СВФ ЖТ: сначала вводят часть раствора (примерно 1/2) в ожоговую рану посредством обкалывания раневой поверхности непосредственно через перфорационные ячейки расщепленного кожного трансплантата в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5-1,0 мм с частотой не менее 1 инъекции на 2-3 см2, объемом каждой инъекции не менее 0,05мл; и аэрозольное распыление оставшейся части раствора поверх пересаженного расщепленного перфорированного аутотрансплантата перед закрытием пересаженных аутотрансплантатов атравматическими повязками. - the sequence of treating the wound surface with a solution containing autologous SVF ZH cells: first , part of the solution (approximately 1/2 ) is introduced into the burn wound by injecting the wound surface directly through the perforation cells of the split skin graft within the granulation tissue to a depth of 0.5-1.0 mm with a frequency of at least 1 injection per 2-3 cm2 , with a volume of each injection of at least 0.05 ml; and aerosol spraying of the remaining part of the solution over the transplanted split perforated autograft before covering the transplanted autografts with atraumatic dressings.
Ультразвуковое воздействие на ожоговую рану проводят с частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц в течение времени из расчета: 30 сек воздействия на раневую поверхность площадью 350 см2. Обкалывание раневой поверхности через перфорационные ячейки расщепленного аутотрансплантата производят инсулиновым шприцем с иглой 0,45 мм*12 мм 26 Gx1/2. Аэрозольное распыление раствора производят с использованием «флакона пульверизатора» с покрытием площади раневой поверхности до 3600 см2.Ultrasonic impact on the burn wound is carried out with an ultrasonic vibration frequency of 25 kHz for a time calculated as follows: 30 sec impact on a wound surface with an area of 350 cm 2 . Injection of the wound surface through the perforation cells of the split autograft is carried out with an insulin syringe with a 0.45 mm * 12 mm 26 G x 1 / 2 needle. Aerosol spraying of the solution is carried out using a "spray bottle" with a wound surface area coverage of up to 3600 cm 2 .
Способ предусматривает выполнение аутодермопластики расщепленным кожным трансплантатом с перфорацией 1:6 и более с комбинированной трансплантацией минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани после ультразвуковой обработки (УЗО) ожоговой (раневой) поверхности. The method involves performing autodermoplasty with a split skin graft with a perforation of 1:6 or more with a combined transplantation of minimally manipulated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue after ultrasonic treatment (UT) of the burn (wound) surface.
Согласно заявленному способу хирургическую обработку ожоговых ран (реципиентных участков), в качестве подготовительного этапа перед оперативным лечением - пересадкой аутотрансплантатов, проводят с использованием ультразвуковой кавитации при определенных режимах. В частности, при использовании ультразвукового аппарата SONOCA® выбирают режимы 2-3, соответствующие 60-80% мощности, и частоту ультразвуковых колебаний 25 кГц. Использование данных режимов является необходимым и достаточным для очищения раневых поверхностей от сохранившихся фокусов некроза, фибрина, удаления гипертрофически измененной грануляции, улучшения микроциркуляции в ране и окружающих тканях, при этом достигается декантаминация ожоговых поверхностей и профилактика развития в послеоперационном периоде инфекционных осложнений пересаженных аутотрансплантатов с перфорацией 1:6 и более (лизис, отторжение, ишемия аутотрансплантатов). За счет непосредственного бактерицидного эффекта удается добиться значимого уменьшения микробной обсемененности ожоговых ран. Воздействие низкочастотного ультразвука механически разрушает некротизированные ткани, дезинтегрирует и инактивирует макромолекулы протеаз на поверхности язв и гнойных ран, разрушает клетки микроорганизмов, улучшает микроциркуляцию посредством микромассажа тканей в зоне воздействия. Эффект ультразвуковой обработки обеспечивается за счет улучшения микроциркуляции, снижения бактериальной обсемененности и повышения местных защитных сил (активация фагоцитоза). According to the claimed method, surgical treatment of burn wounds (recipient sites), as a preparatory stage before surgical treatment - transplantation of autografts, is carried out using ultrasonic cavitation in certain modes. In particular, when using the SONOCA® ultrasound device, modes 2-3 are selected, corresponding to 60-80% of the power, and an ultrasonic vibration frequency of 25 kHz. The use of these modes is necessary and sufficient for cleaning wound surfaces from remaining foci of necrosis, fibrin, removing hypertrophically altered granulation, improving microcirculation in the wound and surrounding tissues, thereby achieving decantation of burn surfaces and prevention of the development of infectious complications of transplanted autografts with perforation of 1:6 or more (lysis, rejection, ischemia of autografts) in the postoperative period. Due to the direct bactericidal effect, it is possible to achieve a significant decrease in the microbial contamination of burn wounds. The effect of low-frequency ultrasound mechanically destroys necrotic tissues, disintegrates and inactivates protease macromolecules on the surface of ulcers and purulent wounds, destroys microorganism cells, improves microcirculation through micromassage of tissues in the affected area. The effect of ultrasound treatment is provided by improving microcirculation, reducing bacterial contamination and increasing local defenses (activation of phagocytosis).
Кроме того, во время выполнения аутодермопластики расщепленным, перфорированным кожным трансплантатом в соотношении 1:6 и более, производят комбинированную трансплантацию выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани: сначала инъекционным методом - через перфорационные ячейки интрадермально вводят от 0,05 до 0,1 мл раствора СВФ на 2-3 см² в объеме от 5 мл, и методом аэрозольного распыления минимально манипулированных аутологичных клеток СВФ ЖТ подготовленным раствором в объеме от 5 мл, содержащим не менее 10х106 жизнеспособных клеток, что дает возможность произвести покрытие (обработку) до 20% п.т. ожоговых ран (приблизительно 3000 - 3600 см2). Соблюдение последовательности выполнения трансплантации аутологичных клеток СВФ ЖТ обеспечивает возможность предварительной адаптации и первичного моделирования пересаженного кожного трансплантата относительно раневого дефекта и здоровых тканей с фиксацией последнего к подлежащим тканям, что также позволяет контролировать и оптимизировать расход аутологичных клеток СВФ ЖТ.In addition, during the performance of autodermoplasty with a split, perforated skin graft in a ratio of 1:6 or more, a combined transplantation of isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue is performed: first, by injection - through perforation cells, 0.05 to 0.1 ml of SVF solution is administered intradermally per 2-3 cm² in a volume of 5 ml, and by the method of aerosol spraying of minimally manipulated autologous SVF cells of adipose tissue with a prepared solution in a volume of 5 ml, containing at least 10x10 6 viable cells, which makes it possible to cover (treat) up to 20% of the b.t. of burn wounds (approximately 3000 - 3600 cm 2 ). Compliance with the sequence of performing the transplantation of autologous SVF ZH cells ensures the possibility of preliminary adaptation and primary modeling of the transplanted skin graft relative to the wound defect and healthy tissues with fixation of the latter to the underlying tissues, which also allows for monitoring and optimizing the consumption of autologous SVF ZH cells.
Использование комбинированной (инъекционной и аэрозольной) методики трансплантации выделенных аутологичных клеток СВФ жировой ткани в сочетании с предварительной ультразвуковой обработкой раневой поверхности и аутодермопластикой расщепленным перфорированным кожным трансплантатом толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией в соотношении 1:6 и более, позволяет добиться эффективного снижения воспалительного процесса за счет паракринного эффекта в подлежащих тканях, обеспечивает максимальную стимуляцию регеративной функции дериватов кожи, сохранившихся как в структуре раневой поверхности, так и в пересаженных кожных трансплантатах, усиливает пролиферацию эндотелиальных клеток и стимуляцию функции ангиогенеза. Перечисленные эффекты обеспечивают более эффективное приживление перфорированных аутотрансплантатов с сокращением сроков восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными глубокими ожогами при выраженном дефиците неповрежденной кожи. The use of a combined (injection and aerosol) technique of transplantation of isolated autologous SVF cells of adipose tissue in combination with preliminary ultrasound treatment of the wound surface and autodermoplasty with a split perforated skin graft 0.2-0.3 mm thick with perforation in a ratio of 1:6 or more, allows to achieve an effective reduction in the inflammatory process due to the paracrine effect in the underlying tissues, provides maximum stimulation of the regenerative function of skin derivatives preserved both in the structure of the wound surface and in the transplanted skin grafts, enhances the proliferation of endothelial cells and stimulates the angiogenesis function. The listed effects provide a more effective engraftment of perforated autografts with a reduction in the time of restoration of the integrity of the skin in patients with extensive deep burns with a pronounced deficiency of intact skin.
Осуществление изобретенияImplementation of the invention
Способ реализуют следующим образом.The method is implemented as follows.
Лечение заявленным способом начинают с момента стабилизации пациента и выхода из ожогового шока. Не более чем за 24 часа до запланированного оперативного лечения (аутодермопластики) производят забор жировой ткани путем шприцевой липосакции. Данная манипуляция может быть выполнена под местной анестезией в условиях перевязочной, либо под внутривенным наркозом. Выполняют небольшой (не более 0,5 см) разрез или прокол через анестезированную кожу и в подкожное пространство вводят увлажняющий раствор (раствор Кляйна, с добавлением лидокаина для местной анестезии и адреналина для сужения сосудов). Через 10 минут посредством 3-миллиметровой аспирационной канюли производят вакуумную (шприцевую) липоаспирацию. Объем аспирируемой жировой ткани составляет от 100 мл до 300 мл.Treatment by the stated method begins from the moment the patient is stabilized and recovers from burn shock. No more than 24 hours before the planned surgical treatment (autodermoplasty), adipose tissue is collected by syringe liposuction. This manipulation can be performed under local anesthesia in a dressing room, or under intravenous anesthesia. A small (no more than 0.5 cm) incision or puncture is made through the anesthetized skin and a moisturizing solution (Klein's solution, with the addition of lidocaine for local anesthesia and adrenaline for vasoconstriction) is injected into the subcutaneous space. After 10 minutes, vacuum (syringe) lipoaspiration is performed using a 3-mm aspiration cannula. The volume of aspirated adipose tissue ranges from 100 ml to 300 ml.
С целью выделения аутологичных регенеративных клеток из жировой ткани применялся механический (капиллярный) способ «очистки». Выделенную жировую ткань (липоаспират) подвергают первичному центрифугированию в течение пяти минут при 680g (2407 об/мин). В результате в шприцах образуется три фракции верхняя – представлена фрагментами разрушенных адипоцитов, средняя – жизнеспособными, интактными жировыми клетками, и нижняя – инфильтрационным раствором. Первую и третью фракции удаляют, а вторую пропускают через эмульсификатор. Для достижения гомогенной субстанции, между двумя шприцами объемом 10 мл или 20 мл устанавливают специальный капиллярный коннектор диаметром 1,4 мм и далее со скоростью примерно 10 мл/с осуществляют порядка 20 перегонов жира из одного шприца в другой. Полученную взвесь вновь центрифугируют при 2000g (4128 об/мин) оборотов в минуту в течение пяти минут. В результате повторного центрифугирования удается сформировать две фракции – верхнюю, представленную разрушенными адипоцитами, и нижнюю, представленную СВФ жировой ткани, которую переносят в отдельный шприц для дальнейшего применения. In order to isolate autologous regenerative cells from adipose tissue, a mechanical (capillary) method of "purification" was used. The isolated adipose tissue (lipoaspirate) is subjected to primary centrifugation for five minutes at 680 g (2407 rpm). As a result, three fractions are formed in the syringes: the upper fraction is represented by fragments of destroyed adipocytes, the middle fraction is viable, intact fat cells, and the lower fraction is an infiltration solution. The first and third fractions are removed, and the second is passed through an emulsifier. To achieve a homogeneous substance, a special capillary connector with a diameter of 1.4 mm is installed between two syringes with a volume of 10 ml or 20 ml, and then about 20 distillations of fat from one syringe to another are carried out at a speed of approximately 10 ml/s. The resulting suspension is again centrifuged at 2000 g (4128 rpm) revolutions per minute for five minutes. As a result of repeated centrifugation, it is possible to form two fractions: the upper one, represented by destroyed adipocytes, and the lower one, represented by the SVF of adipose tissue, which is transferred to a separate syringe for further use.
В условиях операционной под наркозом первым этапом осуществляют ультразвуковую обработку ожоговых ран контактным методом (ультразвуковая кавитация), например, с применением ультразвукового аппарата SONOCA®. Выбирают режимы, соответствующие 60-80% мощности, с частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц. Среднее время воздействия на 350 см2 раневой поверхности составляет 30 сек. Таким образом, общая длительность процедуры при обработке глубоких обширных ожоговых ран не превышает 15-20 мин. При ультразвуковой обработке предпочтительным является использование насадки «копытце» со скоростью орошения рабочего раствора 1-2 капля в секунду. Данный режим обеспечивает очищение раневых поверхностей от сохранившихся фокусов некроза, фибрина, удаление гипертрофически измененной грануляции и стимулирование регенерационных процессов. При этом расход рабочего раствора антисептика (0,02% лавасепта) на 100 см2 раневой поверхности составляет 5-10 мл (1-2 капли в сек.). In the operating room under general anesthesia, the first stage is ultrasonic treatment of burn wounds using the contact method (ultrasonic cavitation), for example, using the SONOCA® ultrasound device. Modes corresponding to 60-80% of the power are selected, with an ultrasonic vibration frequency of 25 kHz. The average exposure time is 350 cm2wound surface is 30 sec. Thus, the total duration of the procedure for treating deep extensive burn wounds does not exceed 15-20 minutes. For ultrasonic treatment, it is preferable to use the "hoof" attachment with an irrigation rate of the working solution of 1-2 drops per second. This mode ensures the cleansing of wound surfaces from remaining foci of necrosis, fibrin, removal of hypertrophically altered granulation and stimulation of regenerative processes. In this case, the consumption of the working solution of the antiseptic (0.02% lavasept) per 100 cm2wound surface is 5-10 ml (1-2 drops per second).
Вторым этапом производят закрытие раневой поверхности расщепленным (толщиной 0,2-0,3 мм) кожным аутотрансплантантом перфорированным в соотношении 1:6 и более с расправлением и адаптацией аутотрансплантата относительно краев раневого дефекта и последующей его фиксацией к подлежащим тканям, например, кожным степлером или подшиванием. После фиксации аутотрансплантата производят обкалывание раневой поверхности непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5-1,0 мм с частотой 1 инъекция на 2-3 см2. Объем каждой инъекции составляет 0,05-0,1 мл. Инъекции производятся инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx1/2, с помощью которой вводят раствор с содержанием жизнеспособных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани от 10х106 до 200х106. Следующий этап - трансплантация выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани аэрозольным методом при помощи флакона с пульверизатором поверх пересаженного аутотрансплантата не менее 5 мл (5-10 мл). С целью закрытия расщепленного трансплантата используют атравматические раневые повязки. После чего накладывают фиксирующую повязку.The second stage involves closing the wound surface with a split (0.2-0.3 mm thick) skin autograft perforated in a ratio of 1:6 or more with straightening and adaptation of the autograft relative to the edges of the wound defect and its subsequent fixation to the underlying tissues, for example, with a skin stapler or suturing. After fixing the autograft, the wound surface is injected directly through the perforation cells within the granulation tissue to a depth of 0.5-1.0 mm with a frequency of 1 injection per 2-3 cm 2 . The volume of each injection is 0.05-0.1 ml. Injections are made with an insulin syringe with a 0.45mm* 12mm 26 Gx 1/2 needle, with which a solution containing viable autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue from 10x10 6 to 200x10 6 is administered. The next stage is transplantation of the isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue by the aerosol method using a spray bottle over the transplanted autograft of at least 5 ml (5-10 ml). Atraumatic wound dressings are used to close the split transplant. After that, a fixing bandage is applied.
ПРИМЕР № 1EXAMPLE #1
Пострадавший Ш. 36 лет. Через 24 дня от момента травмы переведен в ожоговый центр ФГБУ «НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского» с диагнозом: Ожоги пламенем волосистой части головы, шеи, туловища и верхних конечностей I-II-III степени 55% поверхности тела (III ст – 18% п.т.). Общее состояние пациента при поступлении тяжелое. Проведено комплексное обследование и назначена плановая терапия (антибактериальная, инфузионно-трансфузионная терапия, десенсибилизирующая терапия, антикоагулянты, дезогреганты, витаминотерапия). На 3 сутки после поступления (на 27 после травмы) пациенту в условиях перевязочной под внутривенным наркозом произведен забор липоаспирата в объеме 230 мл путем вакуумной (шприцевой) липоаспирации с целью последующей ферментативной обработки и выделения аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани с получением раствора аутологичных клеток СВФ ЖТ в объеме 60 мл, содержащего жизнеспособные (87%) аутологичные клетки стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве 63,4×106. Подсчет количества клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани проводили с помощью автоматического счетчика клеток Counterss Invitrogen. Иммунологическую оценку (иммунофенотип) и жизнеспособность определяли методом проточной цитофлюориметрии. На 4 сутки после поступления в стационар (на 28 после травмы) в условиях операционной под наркозом произведена ультразвуковая обработка ожоговых ран (рабочий раствор 0,02% раствор левасепта) затем выполнена аутодермопластика расщепленным аутотрансплантатом толщиной 0,3 мм с перфорацией ячеек 1:6 на площади 19% (3500 см2) поверхности тела. Следующим этапом произведена инъекционная трансплантация выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (в растворе объемом 55 мл) - произведено обкалывание раневой поверхности (общей площадью 3400 см2) непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5 мм с частотой 1 инъекция на 3 см2. Объем каждой инъекции составил 0,05 мл. Инъекция производилась инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx1/2. Далее была произведена аэрозольная трансплантация оставшейся части выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани поверх пересаженного аутотрансплантата на площади 19% поверхности тела (объем раствора для аэрозольной трансплантации составил 5мл). Проведено закрытие аутотрансплантата атравматическим покрытием (гразолинд), наложение фиксирующей повязки. На первой перевязке на 3 сутки отмечалась фиксация пересаженного аутотрансплантата с признаками краевой эпителизации в ячейках. На 6 сутки отмечена эпителизация пересаженного аутотрансплантата на 60%, на 9 сутки - восстановление целостности кожного покрова на 97%. Victim Sh., 36 years old. 24 days after the injury, he was transferred to the burn center of the Federal State Budgetary Institution "A.V. Vishnevsky National Medical Research Center of Surgery" with the diagnosis: Flame burns of the scalp, neck, trunk and upper limbs of I-II-III degree, 55% of the body surface (III degree - 18% of body surface). The patient's general condition upon admission is severe. A comprehensive examination was performed and planned therapy was prescribed (antibacterial, infusion-transfusion therapy, desensitizing therapy, anticoagulants, antiplatelet agents, vitamin therapy). On the 3rd day after admission (on the 27th day after the injury), 230 ml of lipoaspirate was collected from the patient in the dressing room under intravenous anesthesia using vacuum (syringe) lipoaspiration for subsequent enzymatic processing and isolation of autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue to obtain a solution of autologous SVF AT cells in a volume of 60 ml containing viable (87%) autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue in the amount of 63.4×10 6 . The number of cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue was counted using an automatic Counterss Invitrogen cell counter. Immunological assessment (immunophenotype) and viability were determined by flow cytofluorometry. On the 4th day after admission to the hospital (on the 28th day after the injury), ultrasonic treatment of the burn wounds was performed in the operating room under general anesthesia (working solution - 0.02% levasept solution), then autodermoplasty was performed with a split autograft 0.3 mm thick with cell perforation 1:6 over an area of 19% (3500 cm 2 ) of the body surface. The next stage was injection transplantation of the isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue (in a solution of 55 ml) - injection of the wound surface (with a total area of 3400 cm 2 ) was performed directly through the perforation cells within the granulation tissue to a depth of 0.5 mm with a frequency of 1 injection per 3 cm 2 . The volume of each injection was 0.05 ml. The injection was performed using an insulin syringe with a 0.45mm*12mm 26 G x 1/2 needle. Then , aerosol transplantation of the remaining portion of the isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue was performed over the transplanted autograft over an area of 19% of the body surface (the volume of the solution for aerosol transplantation was 5 ml). The autograft was closed with an atraumatic coating (grazolind), and a fixing bandage was applied. At the first dressing on the 3rd day, fixation of the transplanted autograft with signs of marginal epithelialization in the cells was noted. On the 6th day, epithelialization of the transplanted autograft was noted by 60%, on the 9th day - restoration of the integrity of the skin by 97%.
ПРИМЕР № 2EXAMPLE #2
Пациент Г, 27 лет с ожогом левой и нижней конечностей пламенем I-II-III степени 40% п.т. (III ст. – 30% п.т.) На 14-е сутки после травмы, на фоне комплексного лечения выполнена хирургическая некрэктомия ожоговых ран. На 30-е сутки после травмы произведен забор липоаспирата в объеме 145 мл для получения стромально-васкулярной фракции. На 31-е сутки произведена ультразвуковая обработка гранулирующих ран нижних конечностей с одномоментной аутодермопластикой расщепленным трансплантатом толщиной 0,2 мм с коэффициентом перфорации 1:6 на площади 16% п.т. При этом на левой нижней конечности выполнялась аутодермопластика с комбинированным инъекционным и аэрозольным методом трансплантации аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции (содержащиеся в 25 мл раствора, жизнеспособные 87%, в количестве 86,8 млн клеток в 25 мл) на площади 8% п.т.: инъекционная трансплантация выделенных аутологичных клеток СВФ ЖТ (в растворе объемом 20 мл) - произведено обкалывание раневой поверхности (общей площадью 1440 см2) непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5 мм с частотой 1 инъекция на 3 см2. Объем каждой инъекции составил 0,05 мл. Инъекция производилась инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx1/2. Далее была произведена аэрозольная трансплантация оставшейся части выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани поверх пересаженного аутотрансплантата на площади 8% поверхности тела (объем раствора для аэрозольной трансплантации составил 5 мл). На правой нижней конечности для сравнительного изучения также на площади 8% п.т. выполнена традиционная аутодермопластика расщепленным кожным трансплантатом 1:6 без введения СВФ ЖТ. В первом случае, появление эпителизации в ячейках зафиксировано на 3-е сутки, тогда как на сравнительном участке начало эпителизации отмечалось на 4-е сутки. Полное приживление аутотрансплантата с эпителизацией перфорированных ячеек на участке с комбинированной трансплантацией СВФ отмечалась на 7-е сутки, тогда как во втором случае - на 11-е сутки. Послеоперационных осложнений (инфицирования и лизиса) отмечено не было.Patient G, 27 years old, with a flame burn of the left and lower extremities of I-II-III degree, 40% of the body surface area (III degree - 30% of the body surface area). On the 14th day after the injury, surgical necrectomy of the burn wounds was performed against the background of complex treatment. On the 30th day after the injury, 145 ml of lipoaspirate was collected to obtain the stromal-vascular fraction. On the 31st day, ultrasonic treatment of granulating wounds of the lower extremities was performed with one-stage autodermoplasty with a split graft 0.2 mm thick with a perforation ratio of 1:6 over an area of 16% of the body surface area. In this case, autodermoplasty was performed on the left lower limb with a combined injection and aerosol method of transplantation of autologous cells of the stromal-vascular fraction (contained in 25 ml of solution, viable 87%, in the amount of 86.8 million cells in 25 ml) on an area of 8% of the b.t.: injection transplantation of isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction (in a solution of 20 ml) - injection of the wound surface (total area of 1440 cm 2 ) was performed directly through the perforation cells within the granulation tissue to a depth of 0.5 mm with a frequency of 1 injection per 3 cm 2 . The volume of each injection was 0.05 ml. The injection was performed with an insulin syringe with a 0.45 mm * 12 mm 26 G x 1 / 2 needle. Next, aerosol transplantation of the remaining portion of the isolated autologous cells of the stromal-vascular fraction of adipose tissue was performed over the transplanted autograft on an area of 8% of the body surface (the volume of the solution for aerosol transplantation was 5 ml). On the right lower limb, for a comparative study, traditional autodermoplasty with a split skin graft 1:6 without the introduction of SVF of the adipose tissue was performed on an area of 8% of the b.t. In the first case, the appearance of epithelialization in the cells was recorded on the 3rd day, whereas in the comparative area the onset of epithelialization was noted on the 4th day. Complete engraftment of the autograft with epithelialization of the perforated cells in the area with combined SVF transplantation was noted on the 7th day, whereas in the second case - on the 11th day. No postoperative complications (infection and lysis) were noted.
Claims (7)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2825747C1 true RU2825747C1 (en) | 2024-08-28 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2845970C1 (en) * | 2024-12-25 | 2025-08-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for temporary isolation with adipose tissue of subfascial anatomical structures in case of deep wounds of shin |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014015229A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Intellicell Biosciences Inc. | Isolation of stromal vascular fraction from adipose tissue obtained from postmortem source using ultrasonic cavitation |
| RU2526814C1 (en) * | 2013-06-17 | 2014-08-27 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) |
| RU2726322C2 (en) * | 2018-12-25 | 2020-07-14 | Государственное Бюджетное Учреждение "Санкт-Петербургский Научно-Исследовательский Институт Скорой Помощи Им. И.И. Джанелидзе" | Method for surgical recovery of skin integrity |
| RU2753136C1 (en) * | 2020-10-15 | 2021-08-11 | Оксана Владимировна Владимирова | Method for autodermoplasty with split-thickness graft for restoration of skin after burns |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014015229A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Intellicell Biosciences Inc. | Isolation of stromal vascular fraction from adipose tissue obtained from postmortem source using ultrasonic cavitation |
| RU2526814C1 (en) * | 2013-06-17 | 2014-08-27 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) |
| RU2726322C2 (en) * | 2018-12-25 | 2020-07-14 | Государственное Бюджетное Учреждение "Санкт-Петербургский Научно-Исследовательский Институт Скорой Помощи Им. И.И. Джанелидзе" | Method for surgical recovery of skin integrity |
| RU2753136C1 (en) * | 2020-10-15 | 2021-08-11 | Оксана Владимировна Владимирова | Method for autodermoplasty with split-thickness graft for restoration of skin after burns |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| РЯБКОВ М.Г. и др. Использование стромально-васкулярной фракции жировой ткани для лечения пациентов с термическими ожогами // Гены и клетки. 2022, N 3, стр. 201. АРЕФЬЕВ И.Ю. и др. Аутологичные некультивированные клетки кожи в сочетании с сетчатым трансплантатом 1:6 при лечении ожогов // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2019. - N 8. - стр. 38-43. МЕНЗУЛ В.А. и др. Инновационная технология свободной пересадки кожи ращепленным перфорированным трансплантатом с добавочной линией эпителизации (по В.А. Мензулу) // Журнал "Неотложная хирургия им. И.И. Джанелидзе". - 2021. - N 1. - стр. 67-76. ЛИПАТОВ К.В. и др. Особенности аутодермопластики расщепленным лоскутом в гнойной хирургии // Альманах клинической медицины. 2007. N 16, стр. 96-97. FOUBERT P. et al. "Adipose-Derived Regenerative Cell Therapy for Burn Wound Healing: A Comparison of Two Delivery Methods." Advances in wound care, vol. 5,7 (2016): p. 288-298. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2845970C1 (en) * | 2024-12-25 | 2025-08-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for temporary isolation with adipose tissue of subfascial anatomical structures in case of deep wounds of shin |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| You et al. | Cell therapy for wound healing | |
| Momeni et al. | A randomized, double-blind, phase I clinical trial of fetal cell-based skin substitutes on healing of donor sites in burn patients | |
| KR20130067247A (en) | Process, tube and device for the preparation of wound healant composition | |
| AU2014259787A1 (en) | Skin substitutes and methods for hair follicle neogenesis | |
| Klama-Baryła et al. | Autologous and allogeneic skin cell grafts in the treatment of severely burned patients: retrospective clinical study | |
| Scherer‑Pietramaggiori et al. | Skin graft | |
| Middelkoop et al. | Skin substitutes and ‘the next level’ | |
| Nuñez-Gutiérrez et al. | Combined use of allograft and autograft epidermal cultures in therapy of burns | |
| RU2825747C1 (en) | Method for skin integrity restoration in case of extensive deep burns | |
| RU2512681C2 (en) | Chronic wound and/or wound chamber healing technique | |
| Altmeyer et al. | Wound healing and skin physiology | |
| Singampalli et al. | The efficacy of platelet-rich fibrin in the management of chronic nonhealing ulcers of the lower limb | |
| CN115554478A (en) | A kind of autologous living cell preparation for biological tissue repair and its preparation method and application | |
| JPS6289622A (en) | Epidermal cell extract and method for treating wounds and promoting epidermal regeneration | |
| RU2848096C1 (en) | Method of autodermoplasty with split skin graft | |
| RU2805189C1 (en) | Method of autodermoplasty | |
| RU2727867C1 (en) | Treatment method of purulent-necrotic wounds | |
| RU2803946C1 (en) | Method of treatment of long-term non-healing wounds | |
| RU2754383C1 (en) | Method for treatment of uninfected postoperative wound defect of the foot in the absence of signs of critical limb ischemia in patients with neuropathic and neuroischemic forms of diabetic foot syndrome | |
| RU2526814C1 (en) | Method for skin restoration in patients with vast wounds with soft tissue defects (versions) | |
| van Dongen et al. | Lipofilling. An Evidence-Based Approach | |
| CN111449698A (en) | Preparation and application of scar-removing autologous skin tissue cells and PRP (platelet-rich plasma) polymer | |
| Woodroof et al. | Path to ‘One and Done’ | |
| RU2671642C1 (en) | Method of recovery of the skin with extensive deep burns | |
| Mawsouf et al. | Ozone therapy in moderate and severe burns |