RU2619858C1 - Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome - Google Patents
Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome Download PDFInfo
- Publication number
- RU2619858C1 RU2619858C1 RU2016105502A RU2016105502A RU2619858C1 RU 2619858 C1 RU2619858 C1 RU 2619858C1 RU 2016105502 A RU2016105502 A RU 2016105502A RU 2016105502 A RU2016105502 A RU 2016105502A RU 2619858 C1 RU2619858 C1 RU 2619858C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aggregation
- adp
- amplitude
- maximum
- curve
- Prior art date
Links
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 title abstract description 38
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims abstract description 3
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 claims description 48
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 21
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 33
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- 238000013176 antiplatelet therapy Methods 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 7
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 4
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 3
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 230000007214 atherothrombosis Effects 0.000 description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 2
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 2
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- 206010003211 Arteriosclerosis coronary artery Diseases 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011091 Coronary artery thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 208000026758 coronary atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000002528 coronary thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011977 dual antiplatelet therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000192 social effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к практической медицине и клинико-лабораторной диагностике. Способ предназначен для оценки функциональной активности тромбоцитов у больных с острым коронарным синдромом (ОКС), в том числе на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной (антитромбоцитарной) терапии, и позволяет более точно оценивать функциональную активность тромбоцитов в условиях медикаментозной ингибиции их агрегационной активности, а также вероятность формирования интракоронарного тромба, т.е. риск развития повторных кардиоваскулярных тромботических событий (инфаркта миокарда с подъемом и без подъема сегмента ST, нестабильной стенокардии) для стратификации риска наступления острого коронарного события и индивидуальной оптимизации антитромбоцитарной терапии.The invention relates to practical medicine and clinical laboratory diagnostics. The method is intended to assess the functional activity of platelets in patients with acute coronary syndrome (ACS), including on the background of ongoing drug antiplatelet (antiplatelet) therapy, and allows a more accurate assessment of the functional activity of platelets under conditions of drug inhibition of their aggregation activity, as well as the likelihood of formation of intracoronary thrombus, i.e. the risk of developing repeated cardiovascular thrombotic events (myocardial infarction with and without ST segment elevation, unstable angina) to stratify the risk of acute coronary event and individual optimization of antiplatelet therapy.
Известен «Способ оценки агрегационного статуса тромбоцитов» [патент RU на изобретение №2390027], заключающийся в том, что после взятия крови, ее стабилизации цитратом натрия 3,8%, разделения крови на плазму и эритроциты путем центрифугирования проводят тест на агрегацию тромбоцитов с добавлением одновременно, по меньшей мере, трех индукторов агрегации, выбранных из группы АДФ (аденозина дифосфат), адреналин, коллаген, тромбин. Регистрируют время возникновения агрегатов при добавлении индукторов агрегации и вычисляют среднее значение агрегации в зоне повреждения (СЗАЗП). При значении СЗАЗП 20,0-23,75 с агрегационный статус тромбоцитов считают нормальным; при 12,1-19,9 с отмечают риск развития гиперагрегации; при значения 12,0 с и менее отмечают нарастание агрегационного статуса тромбоцитов с возможностью в ближайшее время возникновения тромбозов; при 23,76-29,9 с существует риск гипоагрегации; при значениях 30,0 с и выше отмечается гипоагрегация с развитием кровоточивости в ближайшее время.The well-known "Method for assessing platelet aggregation status" [RU patent for invention No. 2390027], which consists in the fact that after taking blood, stabilizing it with sodium citrate 3.8%, separating blood into plasma and red blood cells by centrifugation, a platelet aggregation test is carried out with the addition of at least three aggregation inducers simultaneously selected from the group of ADP (adenosine diphosphate), adrenaline, collagen, thrombin. Register the time of occurrence of aggregates when adding aggregation inducers and calculate the average value of aggregation in the damage zone (SZAZP). With a value of SZAZP 20,0-23,75 s the aggregation status of platelets is considered normal; at 12.1-19.9 s, there is a risk of hyperaggregation; at a value of 12.0 s or less, an increase in the aggregation status of platelets is noted with the possibility of thrombosis in the near future; at 23.76-29.9 s there is a risk of hypoaggregation; at values of 30.0 s and above, hypoaggregation with the development of bleeding in the near future is noted.
Достоинствами данного способа являются - возможность диагностировать гипо- и гиперагрегацию тромбоцитов в малом объеме плазмы, возможность диагностики гипо- и гиперагрегации тромбоцитов при физиологических и патологических состояниях у людей.The advantages of this method are the ability to diagnose hypo- and hyperaggregation of platelets in a small plasma volume, the ability to diagnose hypo- and hyperaggregation of platelets in physiological and pathological conditions in humans.
Существенными недостатками данного способа являются проведение теста на предметном стекле, использование богатой тромбоцитами плазмы, одномоментное внесение индукторов, отсутствие четких критериев визуальной оценки агрегации. Критически важным фактором физиологической активации тромбоцитов является определенное значение напряжения сдвига, т.е. наличие течения среды, в которой находятся тромбоциты. Предметное стекло без специальной обработки (например, силиконами) имеет на своей поверхности слабый отрицательный электрический заряд, который способен непрогнозируемо изменять функциональную активность тромбоцитов. В данном способе используется образец богатой тромбоцитами плазмы как субъект исследования, что, с одной стороны, удлиняет преданалитический период способа, а с другой стороны, является значимо менее прогностически точным, так как не учитывает влияние на процесс агрегации других форменных элементов крови, эритроцитов и лейкоцитов. Визуальный способ оценки является субъективным, при его использовании крайне затруднено получение количественных параметров, объективной оценки и сравнения, не позволяет оценивать динамику агрегации тромбоцитов, сопоставлять степень агрегационной активности. Агрегация тромбоцитов является важным компонентом ранних этапов интракоронарного тромбообразования, течение которого характеризуется определенной стадийностью, при этом каждой стадии присущ свой спектр индукторов агрегации. Одномоментное внесение трех индукторов агрегации в минимальных дозах, предлагаемое в данном способе, не вполне физиологично, и не отражает ранние этапы интракоронарного тромбоза, на коррекцию которых и нацелена аграгрегантная терапия.Significant disadvantages of this method are the test on a glass slide, the use of platelet-rich plasma, the simultaneous introduction of inducers, the absence of clear criteria for visual assessment of aggregation. A critical factor in the physiological activation of platelets is the specific shear stress, i.e. the presence of the flow of the medium in which the platelets are located. A slide without special treatment (for example, with silicones) has a weak negative electric charge on its surface, which is capable of unpredictably changing the functional activity of platelets. This method uses a platelet-rich plasma sample as a subject of study, which, on the one hand, prolongs the preanalytical period of the method, and on the other hand, is significantly less prognostically accurate, since it does not take into account the effect on the aggregation of other blood cells, red blood cells and white blood cells . The visual method of assessment is subjective, when using it it is extremely difficult to obtain quantitative parameters, objective assessment and comparison, it does not allow to evaluate the dynamics of platelet aggregation, to compare the degree of aggregation activity. Platelet aggregation is an important component of the early stages of intracoronary thrombosis, the course of which is characterized by a certain staging, with each stage having its own spectrum of aggregation inducers. The simultaneous introduction of three aggregation inducers in minimum doses, proposed in this method, is not completely physiological, and does not reflect the early stages of intracoronary thrombosis, which correction is aimed at by aggregation therapy.
Существует также «Способ определения агрегационной активности тромбоцитов и устройство для его осуществления» [патент RU на изобретение №2391665], включающий получение обогащенной тромбоцитами плазмы из крови, разбавление плазмы солевой средой не менее чем в 10 раз с последующей регистрацией интенсивности светорассеяния в малых углах в условиях однократного светорассеяния. При этом определяют параметры агрегационной активности тромбоцитов, включая начальную скорость агрегации, определяемую по начальной скорости уменьшения светорассеяния отдельными тромбоцитами и увеличения светорассеяния их димерами после действия агонистов, степень прохождения агрегации, определяемую по величине максимальной амплитуды интенсивности рассеяния, и концентрацию клеток, определяемую по разнице сигналов интенсивности светорассеяния, полученных при фотометрировании кюветы со средой до и после добавления обогащенной тромбоцитами плазмы. Предложено устройство, создающее гидродинамический режим с развитой турбулентностью без образования пузырей воздуха, которое обеспечивает при концентрации тромбоцитов в диапазоне 1⋅105-5⋅107 кл/мл и их полной активации прохождение полной агрегации в течение не более 20 минут.There is also a "Method for determining platelet aggregation activity and a device for its implementation" [RU patent No. 2391665], including the production of platelet-rich plasma from blood, dilution of the plasma with saline medium at least 10 times, followed by registration of light scattering intensity at small angles in conditions of single light scattering. In this case, the parameters of platelet aggregation activity are determined, including the initial rate of aggregation, determined by the initial rate of decrease in light scattering by individual platelets and the increase in light scattering by their dimers after the action of agonists, the degree of passage of aggregation, determined by the maximum amplitude of scattering intensity, and the concentration of cells, determined by the difference in signals light scattering intensities obtained by photometry of the cell with the medium before and after the addition of enriched plasma platelets. A device is proposed that creates a hydrodynamic regime with developed turbulence without the formation of air bubbles, which, when the platelet concentration is in the range of 1 × 10 5 -5 × 10 7 cells / ml and their full activation, undergoes complete aggregation for no more than 20 minutes.
Достоинствами данного способа являются возможность более точно количественно характеризовать функциональный статус тромбоцитов по сравнению с традиционными диагностическими методами (например, метод Борна). Это достигается за счет тестирования тромбоцитов при физиологической концентрации ионов кальция и значения рН в среде. Используемая для тестирования концентрация АДФ (агониста агрегации) находится в физиологическом диапазоне концентраций, что позволяет характеризовать функциональную чувствительность тромбоцитов обоснованными количественными параметрами. Это особенно важно при сложных патологических состояниях, в которых угроза тромбообразования очень высока.The advantages of this method are the ability to more accurately quantify the functional status of platelets in comparison with traditional diagnostic methods (for example, the Born method). This is achieved by testing platelets at a physiological concentration of calcium ions and pH in the medium. The concentration of ADP (aggregation agonist) used for testing is in the physiological concentration range, which allows us to characterize the functional sensitivity of platelets with reasonable quantitative parameters. This is especially important in complex pathological conditions in which the risk of thrombosis is very high.
К недостаткам данного метода следует отнести следующие. Первое, использование обогащенной тромбоцитами плазмы, а не цельной крови не позволяет оценивать агрегационную активность тромбоцитов в физиологических условиях, обусловленных многочисленными межклеточными взаимодействиями в потоке крови, в том числе влиянием эритроцитов и лейкоцитов. Более того, авторами данного способа используется разведение образца богатой тромбоцитами плазмы солевым раствором в 10 раз, что приводит также к существенному снижению концентраций биологически активных веществ плазмы крови, имеющих регуляторное значение для агрегационной активности тромбоцитов, в том числе факторы и кофакторы свертывающей системы, гепарин, компоненты калликреинкининовой системы, системы комплемента и т.п. Более того, при столь значимом разведении неминуемо нарушается соотношение белков грубо- и мелкодисперсной фазы, в частности снижение концентрации фибриногена, являющегося альтернативным инициаторов агрегации тромбоцитов в условиях низкой скорости сдвига.The disadvantages of this method include the following. First, the use of platelet-rich plasma rather than whole blood does not allow the assessment of platelet aggregation activity under physiological conditions due to numerous intercellular interactions in the blood stream, including the effect of red blood cells and white blood cells. Moreover, the authors of this method use dilution of a sample of platelet-rich plasma with saline by 10 times, which also leads to a significant decrease in the concentration of biologically active substances of blood plasma, which have regulatory significance for platelet aggregation activity, including factors and co-factors of the coagulation system, heparin, components of the kallikreinkinin system, complement system, etc. Moreover, with such a significant dilution, the ratio of the proteins of the coarse and finely dispersed phase is inevitably violated, in particular, a decrease in the concentration of fibrinogen, which is an alternative to initiators of platelet aggregation under conditions of a low shear rate.
Наиболее близкой к заявляемому способу является метод мониторирования агрегации тромбоцитов в цельной крови [патент на изобретение US 4319194 A, номер патента 4,319,194 от 9 марта 1982 г.] с помощью аппарата для импедансной агрегатометрии. Этот метод позволяет оценивать агрегационную активность тромбоцитов в динамике в образце разбавленной цельной крови в ответ на внесение индуктора агрегации.Closest to the claimed method is a method for monitoring platelet aggregation in whole blood [patent for invention US 4319194 A, patent number 4,319,194 dated March 9, 1982] using an apparatus for impedance aggregometry. This method allows you to evaluate the aggregation activity of platelets in dynamics in a sample of diluted whole blood in response to the introduction of an aggregation inducer.
Принцип метода заключается в регистрации времени изменения общего электрического сопротивления во времени после формирования монослоя тромбоцитов на открытых частях электрода и стимуляции агрегации тромбоцитов на сформировавшемся монослое при добавлении в него индуктора агрегации. Достоинствами этого метода являются: 1) отсутствие длительной преданалитической подготовки, 2) количественная регистрация в динамике физического параметра, позволяющего оценивать степень агрегационной активности тромбоцитов, 3) использование образца цельной крови, что является более физиологичным, так как учитывает влияние всех форменных элементов крови и регуляторных факторов плазмы крови.The principle of the method is to record the time that the total electrical resistance changes in time after the formation of a platelet monolayer on the exposed parts of the electrode and stimulates platelet aggregation on the formed monolayer when an aggregation inductor is added to it. The advantages of this method are: 1) the lack of lengthy preanalytical preparation, 2) the quantitative registration in the dynamics of a physical parameter that allows us to assess the degree of platelet aggregation activity, 3) the use of a whole blood sample, which is more physiological, since it takes into account the influence of all formed blood elements and regulatory blood plasma factors.
К существенным недостаткам метода следует отнести следующие: 1) использование этого метода при всех его достоинствах не позволяет оценивать динамику высвобождения АДФ из тромбоцитов в процессе из активации и агрегации; 2) определяемые данным методом параметры, характеризующие изменение общего электрического сопротивления цельной крови - импеданса, у больных (в том числе острым коронарным синдромом) обладают высокой вариабельностью, определяемой многими факторами, в том числе проводимой антиагрегантной терапией; 3) оценка агрегационой активности тромбоцитов этим методом у пациентов с ОКС, которые в обязательном порядке получают медикаментозную антиагрегантную терапию, в том числе и на догоспитальном этапе, приводит к тому, что при изучении функциональной активности тромбоцитов с использованием одного индуктора агрегации (за исключением случаев истинной резистентности к антиагрегантам) получают крайне низкие значения, находящиеся на пределе погрешности измерений агрегометра, т.е. недостаточная для клинических методов чувствительность; 4) до настоящего времени для этого метода отсутствуют стандартизованные параметры оценки для использования в различных лабораториях, практически не изучена их предсказывающая сила у больных острым коронарным синдромом.Significant disadvantages of the method include the following: 1) the use of this method for all its advantages does not allow us to evaluate the dynamics of the release of ADP from platelets in the process of activation and aggregation; 2) the parameters determined by this method, characterizing the change in the total electrical resistance of whole blood - impedance, in patients (including acute coronary syndrome) have high variability, determined by many factors, including antiaggregant therapy; 3) assessment of platelet aggregation activity by this method in patients with ACS who are required to receive drug antiplatelet therapy, including at the prehospital stage, leads to the fact that when studying the functional activity of platelets using a single aggregation inducer (with the exception of true resistance to antiplatelet agents) receive extremely low values that are at the limit of the measurement error of the aggregometer, i.e. insufficient sensitivity for clinical methods; 4) until now, for this method there are no standardized assessment parameters for use in various laboratories, their predictive power in patients with acute coronary syndrome has not been studied.
Задачей заявляемого изобретения является разработка высокочувствительного метода оценки агрегационной активности тромбоцитов у больных острым коронарным синдромом на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной терапии (двойная антиагрегантная терапия), доступного для использования в клинической практике, в том числе для оценки вероятности формирования интракоронарного тромба, стратификации риска наступления острого коронарного события и индивидуальной оптимизации антитромбоцитарной терапии.The objective of the invention is the development of a highly sensitive method for assessing platelet aggregation activity in patients with acute coronary syndrome during ongoing drug antiplatelet therapy (double antiplatelet therapy), available for use in clinical practice, including to assess the likelihood of the formation of intracoronary thrombus, stratification of the risk of acute coronary attack events and individual optimization of antiplatelet therapy.
Для решения поставленной задачи предлагается способ определения агрегационной активности тромбоцитов, включающий в себя определение параметров общего электрического сопротивления (импеданса) во времени после формирования монослоя тромбоцитов на открытых частях электрода и стимуляции агрегации тромбоцитов на сформировавшемся монослое при добавлении к одному исследуемому образцу цельной крови двух индукторов агрегации: раствора аденозиндифосфата (АДФ) и суспензии коллагена в определенной временной последовательности, определяемой индивидуально, а также параметров реакции высвобождения АДФ тромбоцитами во времени путем оценки биолюминесценции АТФ (аденозинтрифосфат, образующийся в в ходе транформации АДФ).To solve this problem, we propose a method for determining platelet aggregation activity, which includes determining the parameters of total electrical resistance (impedance) in time after the formation of a monolayer of platelets on the open parts of the electrode and stimulating platelet aggregation on the formed monolayer by adding two aggregation inductors to one test sample of whole blood : adenosine diphosphate (ADP) solution and a collagen suspension in a specific time sequence, determined individually, as well as the parameters of the reaction of ADP release by platelets over time by evaluating the bioluminescence of ATP (adenosine triphosphate formed during the transformation of ADP).
Сущность заявляемого изобретения характеризуется тем, что проводят импедансную и люминесцентную агрегатометрию образца цельной крови с использованием фиксированной комбинации индукторов агрегации тромбоцитов (коллаген и АДФ), вносимых последовательно с временной задержкой, определяемой индивидуально по параметрам импедансной агрегатограммы.The essence of the claimed invention is characterized by the fact that impedance and luminescent aggregometry of a whole blood sample is carried out using a fixed combination of platelet aggregation inducers (collagen and ADP), introduced sequentially with a time delay determined individually by the parameters of the impedance aggregogram.
Агрегатограмма проиллюстрирована на фигуре 1, позиции на которой обозначают следующее:The aggregate is illustrated in figure 1, the positions on which indicate the following:
1 - внесение рабочей суспензии коллагена, 2 - плато агрегации, 3 - внесение раствора АДФ, 4 - максимальная амплитуда импеданса, Ом (Ω), 5 - максимальная амплитуда кривой высвобождения АДФ, нмоль.1 - application of a working collagen suspension, 2 - aggregation plateau, 3 - introduction of an ADP solution, 4 - maximum impedance amplitude, Ohm (Ω), 5 - maximum amplitude of the ADP release curve, nmol.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом. У пациентов с ОКС производят взятие образца венозной крови и стабилизируют его раствором цитрата натрия 3,8% в соотношении 1:9. Взятие образца крови осуществляется путем венепункции с наложением жгута не более чем на 60 секунд с использованием вакуумной системы или самотеком, не допуская вспенивания образца. Полученный образец цельной крови используют для оценки агрегационной активности тромбоцитов методом импедансометрии с параллельным определением динамики реакции высвобождения АТФ методом биолюминесцентной агрегации:The inventive method is as follows. In patients with ACS, a venous blood sample is taken and stabilized with a solution of sodium citrate 3.8% in a ratio of 1: 9. A blood sample is taken by venipuncture with a tourniquet applied for no more than 60 seconds using a vacuum system or by gravity, preventing the sample from foaming. The obtained whole blood sample is used to assess platelet aggregation activity by impedancemetry with a parallel determination of the dynamics of the ATP release reaction by bioluminescent aggregation:
1. Включают и прогревают агрегометр до состояния поддержания стабильной температуры в ячейках 37°C при стандартной скорости вращения магнитной мешалки;1. Turn on and warm the aggregometer to the state of maintaining a stable temperature in the cells of 37 ° C at a standard speed of rotation of the magnetic stirrer;
2. Для повышения точности измерения рекомендуется проведение исследования в дублях;2. To increase the accuracy of the measurement, it is recommended to conduct a study in duplicates;
3. Вносят в каждую измерительную кювету по 0,45 мл физраствора и магнитную мешалку;3. Contribute 0.45 ml of saline solution and a magnetic stir bar to each measuring cell;
4. Вносят в кювету по 0,45 мл цельной крови пациента, после чего болюсом (одномоментно) вносится 0,1 мл люминофора (CHRONOLOG LUME);4. Add 0.45 ml of the patient’s whole blood to the cuvette, after which 0.1 ml of the phosphor (CHRONOLOG LUME) is introduced by bolus (simultaneously);
5. После юстирования прибора по стандартному раствору АТФ и уровню базового импеданса, согласно с инструкцией по применению агрегометра, болюсным способом вносится рабочая суспензия коллагена (конечная концентрация 2 μg/mL);5. After adjusting the device according to the standard ATP solution and the level of basic impedance, according to the instructions for using the aggregometer, a working suspension of collagen (final concentration of 2 μg / mL) is introduced in a bolus way;
6. Запускается запись агрегатограммы и кривой высвобождения АДФ (происходит высвобождение АДФ, которая в условиях постановки пробы максимально быстро трансформируется в АТФ, определение биолюминесценции которой является технически более простым);6. A recording of the aggregatogram and the ADP release curve is started (ADP is released, which, under the conditions of the sample formulation, transforms as quickly as possible into ATP, the determination of the bioluminescence of which is technically simpler);
7. Во время выхода агрегатограммы (максимальной амплитуды импеданса) на плато (отсутствие значимых колебаний агрегатограммы менее 1 Ω/30 сек, но не дольше чем 5 минут (среднее максимальное время свертывания крови) с момента внесения в кювету суспензии коллагена, фигура 1) в кювету болюсным способом вносится раствор АДФ с конечной концентрацией 10 μМ (см. фиг. 1);7. When the aggregatogram (maximum amplitude of the impedance) reaches a plateau (the absence of significant fluctuations in the aggregatogram is less than 1 Ω / 30 sec, but not longer than 5 minutes (average maximum coagulation time) from the moment of adding collagen suspension to the cuvette, figure 1) an ADP solution with a final concentration of 10 μM is introduced in a bolus manner to the cuvette (see Fig. 1);
8. После чего осуществляется запись агрегатограммы и кривой высвобождения АДФ в течение времени, необходимого для выхода максимальной амплитуды импеданса на плато.8. After that, the aggregatogram and the ADP release curve are recorded for the time necessary for the maximum impedance amplitude to reach the plateau.
9. С использованием стандартного программного обеспечения агрегометра рассчитываются следующие параметры для каждого измерения: максимальная амплитуда кривой агрегации (импеданс) на фоне использования двух индукторов агрегации тромбоцитов, а также при использовании АДФ как индуктора агрегации на фоне стимуляции коллагеном, максимальная амплитуда кривой высвобождения АДФ (люминесцентная агрегатометрия) на фоне использования двух индукторов агрегации тромбоцитов, а также при использовании АДФ как индуктора агрегации на фоне стимуляции коллагеном.9. Using the standard aggregometer software, the following parameters are calculated for each measurement: the maximum amplitude of the aggregation curve (impedance) when using two platelet aggregation inductors, as well as when using ADP as an aggregation inducer against collagen stimulation, the maximum amplitude of the ADP release curve (luminescent aggregatometry) during the use of two platelet aggregation inducers, as well as when using ADP as an aggregation inducer against the background of the stimulus ii collagen.
10. При определении в дублях проводится расчет среднего арифметического для одноименных параметров.10. When determining in duplicates, the arithmetic mean is calculated for the parameters of the same name.
Способ может быть реализован с использованием любого агрегометра, в котором заложена возможность проведения импедансной и люминесцентной агрегатометрии и который позволяет довносить индукторы агрегации после запуска регистрации агрегации тромбоцитов.The method can be implemented using any aggregometer, which implies the possibility of impedance and luminescent aggregometry and which allows you to add aggregation inducers after starting platelet aggregation registration.
Технический результат заявляемого изобретения и отличия заявляемого способа Техническим результатом проведенного исследования является новый комплекс параметров, характеризующих агрегационную активность тромбоцитов в условиях текущего интракоронарного атеротромбоза, позволяющий более точно оценивать агрегационную способность тромбоцитов у больных ОКС на фоне медикаментозной антиагрегантной терапии (двойной антитромбоцитарной терапии).The technical result of the claimed invention and the differences of the proposed method The technical result of the study is a new set of parameters characterizing the aggregation activity of platelets in the current intracoronary atherothrombosis, which allows more accurately assess the aggregation ability of platelets in patients with ACS on the background of drug antiplatelet therapy (double antiplatelet therapy).
Заявляемый способ отличается от своих аналогов и способа-прототипа большей точностью. Использование двух последовательно вносимых индукторов позволяет добиться более выраженного агрегационного ответа, сопровождающегося более значимыми изменениями, как импеданса, так и биолюминесценции, лучше фиксируемых агрегометром, так как получаемые значения оказываются существенно выше погрешности измерения.The inventive method differs from its counterparts and the prototype method in greater accuracy. The use of two sequentially introduced inductors allows one to achieve a more pronounced aggregation response, accompanied by more significant changes in both impedance and bioluminescence, which are better recorded by an aggregometer, since the obtained values are significantly higher than the measurement error.
Заявляемый способ является более физиологичным для оценки функциональной активности тромбоцитов у больных ОКС, так как использование комплекса последовательно вносимых индукторов агрегации позволяет искусственно смоделировать начальные этапы интракоронарного атеротромбоза и оценить скорость образования интракоронарного тромба у конкретного пациента с ОКС, находящегося на медикаментозной антиагрегантной поддержке (двойная антитромбоцитарная терапия).The inventive method is more physiological for assessing the functional activity of platelets in patients with ACS, since the use of a complex of sequentially introduced aggregation inducers allows you to artificially simulate the initial stages of intracoronary atherothrombosis and to evaluate the rate of formation of intracoronary thrombus in a specific patient with ACS undergoing drug antiplatelet therapy (double )
Совместное использование двух индукторов агрегации в последовательности, обусловленной патофизиологией коронарного атеротромбоза с комплексной оценкой импедансной и люминесцентной агрегации тромбоцитов, ранее не использовалось для оценки агрегационной активности тромбоцитов. В этом также заключается отличие способа. При этом принципиальной является последовательность внесения индукторов. Согласно современным представлениям о стадийности атеротромбоза при ОКС, на начальных этапах происходит экспонирование субэндотелиальных структур, в том числе волокна коллагена, обладающего мощной способностью индуцировать агрегацию тромбоцитов. «Подключение» других индукторов происходит с некоторой задержкой по времени. Такой способ индукции агрегационной активности тромбоцитов ранее не использовался.The combined use of two aggregation inducers in the sequence determined by the pathophysiology of coronary atherosclerosis with a comprehensive assessment of the impedance and luminescent platelet aggregation has not been previously used to evaluate platelet aggregation activity. This is also the difference between the method. In this case, the sequence of introducing inductors is fundamental. According to modern ideas about the staged nature of atherothrombosis in ACS, subendothelial structures, including collagen fibers, which have a powerful ability to induce platelet aggregation, are exposed at the initial stages. The “connection” of other inductors occurs with a certain delay in time. This method of inducing platelet aggregation activity has not been previously used.
Предлагаемый авторами комплекс параметров агрегационной активности тромбоцитов также ранее не использовался, поскольку параметры мультииндуцированной агрегации тромбоцитов, интервалы значений, характерных для больных с ОКС, показателей, отражающих готовность к коронарному тромбообразованию на фоне проводимой двойной антитромбоцитарной терапии, не были известны до настоящей заявки.The set of parameters of platelet aggregation activity proposed by the authors was also not previously used, since the parameters of multi-induced platelet aggregation, ranges of values characteristic of patients with ACS, indicators reflecting readiness for coronary thrombosis against the background of double antiplatelet therapy were not known before this application.
В отличие от применяемых в настоящее время способов для оценки функциональных свойств тромбоцитов в сходных клинических ситуациях в данном способе комплексно используются следующие атрибуты технологичности (направленной на оптимизацию затрат времени, средств, при повышении диагностической и прогностической ценности): использование цельной крови, использование комплекса из двух индукторов агрегации, индивидуально определяемая временная задержка при внесении индукторов агрегации.In contrast to the currently used methods for assessing the functional properties of platelets in similar clinical situations, this method comprehensively uses the following attributes of manufacturability (aimed at optimizing the cost of time, money, while increasing the diagnostic and prognostic value): using whole blood, using a complex of two aggregation inducers, individually defined time delay when introducing aggregation inducers.
Способ техничен и технологичен с первой манипуляции и до последней операции - обработки полученных данных, поскольку все манипуляции: забор крови, приготовление проб, воздействие реактивами на пробы, время инкубации, порядок действий в заявляемом способе - признаки технически осуществляемого действия.The method is technical and technological from the first manipulation to the last operation — processing the obtained data, since all manipulations: blood sampling, preparation of samples, exposure to reagents on the samples, incubation time, procedure in the present method are signs of a technically feasible action.
Статистическое и математическое обоснование способа. В отделении интенсивной терапии Саратовского НИИ кардиологии и Саратовского областного клинического кардиологического диспансера обследованы в соответствии с вышеописанной методикой группа клинически здоровых лиц (n=10) и группа пациентов с острым коронарным синдромом (n=317), включающим в себя нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда с подъемом и без подъема сегмента ST. У больных с ОКС результаты теста сопоставляли с результатами исследования агрегационной активности тромбоцитов методом оптической лазерной агрегатометрии (агрегометр BIOLA, Россия), результатами оценки ингибирующего влияния аспирина и блокаторов P2Y12 рецепторов тромбоцитов с использованием тест-систем VerifyNow, а также клиническим исходом заболевания - смертью, развитием осложнений, рецидивов заболевания в течение 30-ти дней с момента манифестации ОКС.Statistical and mathematical justification of the method. In the intensive care unit of the Saratov Research Institute of Cardiology and the Saratov Regional Clinical Cardiology Dispensary, a group of clinically healthy individuals (n = 10) and a group of patients with acute coronary syndrome (n = 317), including unstable angina, myocardial infarction, were examined in accordance with the above procedure. lifting and without lifting the ST segment. In patients with ACS, the test results were compared with the results of a study of platelet aggregation activity by optical laser aggregatometry (BIOLA aggregometer, Russia), the results of evaluating the inhibitory effect of aspirin and P2Y12 platelet receptor blockers using VerifyNow test systems, as well as the clinical outcome of the disease - death, development complications, relapses of the disease within 30 days from the manifestation of ACS.
Максимальная амплитуда импеданса как при использовании одного индуктора агрегации (АДФ или коллаген), так и при использовании двух (коллаген + АДФ) коррелировала со степенью индуцированной агрегации, определяемой методом оптической лазерной агрегатометрии, при этом корреляционная зависимость была прямой и коэффициент корреляции варьировал от 0,59 до 0,86 у различных групп обследованных (практически здоровые лица, пациенты с нестабильной стенокардией, пациенты с инфарктом миокарда), что позволило классифицировать наличие средней и высокой силы корреляционных отношений. Также параметры импедансной и люминесцентной агрегации, определяемой у пациентов с ОКС, находящихся на двойной антитромбоцитарной терапии, были ассоциированы с единицами аспириновой реактивности (ARU) и единицами P2Y12 реактивности (PRU), определяемыми при помощи тест-системы VerifyNow: R=0,59…0,69, p<0,05.The maximum impedance amplitude both when using one aggregation inducer (ADP or collagen) and when using two (collagen + ADP) correlated with the degree of induced aggregation determined by optical laser aggregation, the correlation dependence was direct and the correlation coefficient varied from 0, 59 to 0.86 in various groups of patients (practically healthy individuals, patients with unstable angina, patients with myocardial infarction), which allowed us to classify the presence of medium and high the strength of correlation relationships. Also, the impedance and luminescent aggregation parameters determined in patients with ACS undergoing double antiplatelet therapy were associated with units of aspirin reactivity (ARU) and units of P2Y12 reactivity (PRU), determined using the VerifyNow test system: R = 0.59 ... 0.69, p <0.05.
Как видно из данных, представленных в таблице 1, у пациентов с ОКС, находящихся на двойной антитромбоцитарной терапии, при сопоставлении параметров агрегационной активности тромбоцитов с использованием одного индуктора агрегации (АДФ) значимых различий выявлено не было, в то время как применение заявляемого метода оценки агрегационной активности тромбоцитов позволило объективизировать статистически значимую динамику агрегационной активности тромбоцитов.As can be seen from the data presented in table 1, in patients with ACS undergoing dual antiplatelet therapy, when comparing the parameters of platelet aggregation activity using a single aggregation inducer (ADP), there were no significant differences, while the application of the proposed method for assessing aggregation platelet activity allowed to objectify the statistically significant dynamics of platelet aggregation activity.
При определении значимости изучаемых параметров функциональной активности тромбоцитов в плане прогнозирования 30-ти дневного наступления неблагоприятного кардиоваскулярного события установлена наибольшая чувствительность (Sn, на 24,3%) и специфичность (Sp, на 23,8%) параметра максимальной амплитуды кривой импедансной агрегатометрии с использованием двух индукторов агрегации, по сравнению с аналогичным параметром агрегатометрии с использованием одного индуктора агрегации. Установлена статистически значимая ассоциация между максимальными амплитудами кривых агрегатограмм как импедансной, так и люминесцентной агрегатометрии с вероятностью развития повторного тромботического события у пациентов с ОКС.When determining the significance of the studied parameters of the functional activity of platelets in terms of predicting a 30-day occurrence of an adverse cardiovascular event, the highest sensitivity (Sn, by 24.3%) and specificity (Sp, by 23.8%) of the parameter of the maximum amplitude of the impedance aggregometry curve using two aggregation inductors, compared with the same parameter of aggregation using one aggregation inductor. A statistically significant association was established between the maximum amplitudes of aggregatogram curves of both impedance and luminescent aggregometry with the likelihood of a recurring thrombotic event in patients with ACS.
Описанная индивидуальная задержка во времени внесения индукторов агрегации позволила снизить индивидуальную вариабельность оцениваемых параметров агрегационной активности тромбоцитов: например, для максимальной амплитуды импеданса 0,76 vs 0,23.The described individual delay in the time of introducing aggregation inducers allowed us to reduce the individual variability of the estimated parameters of platelet aggregation activity: for example, for a maximum impedance amplitude of 0.76 vs 0.23.
Клинический пример 1: пациент, 49 лет, поступил в клинику с диагнозом: ИБС, Q-инфаркт миокарда передней стенки левого желудочка, артериальная гипертензия III стадия. Проводилась стандартизованная терапия согласно рекомендациям Комитета экспертов Всероссийского научного общества кардиологов. В первые сутки с момента манифестации ОКС максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов только АДФ была 1Ω, в то время как максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов АДФ (на фоне стимуляции коллагеном) была 6Ω.Clinical example 1: a patient, 49 years old, was admitted to the hospital with a diagnosis of coronary heart disease, Q-myocardial infarction of the anterior wall of the left ventricle, stage III arterial hypertension. Conducted standardized therapy in accordance with the recommendations of the Committee of Experts of the All-Russian Scientific Society of Cardiology. On the first day after the manifestation of ACS, the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation of ADP alone was 1Ω, while the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation of ADP (against collagen stimulation) was 6Ω.
Клинический пример 2: пациент, 52 лет, поступил в клинику с диагнозом: ИБС, не Q-инфаркт миокарда переднебоковой стенки левого желудочка, артериальная гипертензия III стадия. Проводилась стандартизованная терапия согласно рекомендациям Комитета экспертов Всероссийского научного общества кардиологов. В первые сутки с момента манифестации ОКС максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов только АДФ была 0Ω, в то время как максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов АДФ на фоне стимуляции коллагеном была 4Ω; максимальная амплитуда люминесценции при индукции агрегации тромбоцитов только АДФ была 0,14 нмоль, в то время как максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов АДФ на фоне стимуляции коллагеном была 0,28 нмоль. К седьмым суткам течения ОКС максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов только АДФ осталась 0Ω, в то время как максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов АДФ на фоне стимуляции коллагеном стала 1Ω; максимальная амплитуда люминесценции при индукции агрегации тромбоцитов только АДФ стала 0,11Ω, в то время как максимальная амплитуда импеданса при индукции агрегации тромбоцитов АДФ на фоне стимуляции коллагеном стала 0,18Ω. Проведенное исследование позволило оценить динамику агрегационной активности тромбоцитов на фоне проводимой медикаментозной терапии, невозможной с использованием моноиндуцированной агрегатометрии тромбоцитов.Clinical example 2: a patient, 52 years old, was admitted to the hospital with a diagnosis of coronary heart disease, not Q-myocardial infarction of the anterolateral wall of the left ventricle, stage III arterial hypertension. Conducted standardized therapy in accordance with the recommendations of the Committee of Experts of the All-Russian Scientific Society of Cardiology. On the first day after the manifestation of ACS, the maximum amplitude of the impedance upon induction of platelet aggregation only ADP was 0Ω, while the maximum amplitude of the impedance upon induction of platelet aggregation ADP on the background of collagen stimulation was 4Ω; the maximum luminescence amplitude upon induction of platelet aggregation of ADP alone was 0.14 nmol, while the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation of ADP on the background of collagen stimulation was 0.28 nmol. By the seventh day of the ACS course, the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation only ADP remained 0Ω, while the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation ADP on the background of collagen stimulation became 1Ω; the maximum luminescence amplitude upon induction of platelet aggregation only by ADP became 0.11Ω, while the maximum impedance amplitude upon induction of platelet aggregation by ADP on the background of collagen stimulation became 0.18Ω. The study made it possible to evaluate the dynamics of platelet aggregation activity against the background of ongoing drug therapy, impossible using mono-induced platelet aggregometry.
Вышеизложенное свидетельствует об адекватности, высокой точности и клинической пользе заявляемого способа для оценки агрегационной активности тромбоцитов у пациентов с ОКС на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной терапии. Медико-социальный эффект предлагаемого способа заключается в патогенетически обоснованной оптимизации способа оценки функциональной активности тромбоцитов у пациентов с ОКС на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной терапии.The above indicates the adequacy, high accuracy and clinical benefit of the proposed method for assessing the aggregation activity of platelets in patients with ACS on the background of ongoing drug antiplatelet therapy. The medical and social effect of the proposed method consists in pathogenetically substantiated optimization of the method for assessing the functional activity of platelets in patients with ACS against the background of ongoing drug antiplatelet therapy.
Впервые предложен способ оценки агрегационной активности тромбоцитов у больных острым коронарным синдромом на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной терапии, включающий в себя определение параметров общего электрического сопротивления (импеданса) во времени после формирования монослоя тромбоцитов на открытых частях электрода и стимуляции агрегации тромбоцитов на сформировавшемся монослое при добавлении к одному исследуемому образцу цельной крови двух индукторов агрегации: раствора аденозиндифосфата (АДФ) и суспензии коллагена в определенной временной последовательности, определяемой индивидуально, а также параметров реакции высвобождения тромбоцитов во времени путем оценки биолюминесценции АТФ.For the first time, a method for assessing platelet aggregation activity in patients with acute coronary syndrome on the background of ongoing drug antiplatelet therapy, which includes determining the parameters of the total electrical resistance (impedance) in time after the formation of a platelet monolayer on the open parts of the electrode and stimulating platelet aggregation on the formed monolayer one test sample of whole blood of two aggregation inducers: adenosine diphosphate solution (ADP) and a suspension of lagen in a specific time sequence, determined individually, as well as the parameters of the reaction of platelet release in time by assessing the bioluminescence of ATP.
Разработанная технология по заявляемому способу расширяет арсенал средств объективного контроля агрегационной активности тромбоцитов больных с ОКС и может быть использована для стратификации риска неблагоприятных кардиоваскулярных событий у больных с ОКС на фоне проводимой медикаментозной антиагрегантной терапии (двойная антитромбоцитарная терапия).The developed technology according to the claimed method expands the arsenal of means of objective control of platelet aggregation activity of patients with ACS and can be used to stratify the risk of adverse cardiovascular events in patients with ACS against the background of ongoing drug antiplatelet therapy (double antiplatelet therapy).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016105502A RU2619858C1 (en) | 2016-02-17 | 2016-02-17 | Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016105502A RU2619858C1 (en) | 2016-02-17 | 2016-02-17 | Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2619858C1 true RU2619858C1 (en) | 2017-05-18 |
Family
ID=58715823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016105502A RU2619858C1 (en) | 2016-02-17 | 2016-02-17 | Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2619858C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213976C2 (en) * | 2001-02-20 | 2003-10-10 | Нижегородский государственный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии | Method for evaluating aggregation properties of blood platelets |
| RU2391665C1 (en) * | 2008-12-29 | 2010-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИНТЕЛ" | Method of determining agregative activity of platelets and device for its realisation |
| RU2393485C1 (en) * | 2009-02-18 | 2010-06-27 | Илья Николаевич Медведев | Method of detecting disturbance of thrombocyte aggregation |
-
2016
- 2016-02-17 RU RU2016105502A patent/RU2619858C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213976C2 (en) * | 2001-02-20 | 2003-10-10 | Нижегородский государственный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии | Method for evaluating aggregation properties of blood platelets |
| RU2391665C1 (en) * | 2008-12-29 | 2010-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИНТЕЛ" | Method of determining agregative activity of platelets and device for its realisation |
| RU2393485C1 (en) * | 2009-02-18 | 2010-06-27 | Илья Николаевич Медведев | Method of detecting disturbance of thrombocyte aggregation |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| К.Б. Мирзаев и др. Оценка агрегации тромбоцитов в клинической практике / Рациональная Фармакотерапия в Кардиологии, 2015;11(1), стр. 85-91. A. Dyszkiewicz-Korpanty et al. Clopidogrel anti-platelet effect: An evaluation by optical aggregometry, impedance aggregometry, and the Platelet Functional Analyzer (PFA-100) / Platelets, 2007, 18(7), pages 491-496. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Philippe et al. | Circulating Von Willebrand factor and high molecular weight multimers as markers of endothelial injury predict COVID-19 in-hospital mortality | |
| BR112016002668B1 (en) | Methods for identifying an individual at risk of developing a recurrent cardiovascular event or at risk of death occurring after a cardiovascular event and a method for monitoring the effectiveness of therapy administered to an individual suffering or having suffered from a cardiovascular event | |
| CN106461677A (en) | Method of testing for pulmonary hypertension | |
| CN109328303A (en) | Circulating angiopoietin-2 (Ang-2) for predicting recurrence of atrial fibrillation | |
| Mattila et al. | Levels of the cancer biomarker CA 19-9 are associated with thrombin generation in plasma from treatment-naïve pancreatic cancer patients | |
| Tala et al. | Protein biomarkers for incident deep venous thrombosis in critically ill adolescents: an exploratory study | |
| Ahmad et al. | An update of new/potential cardiovascular markers: A narrative review | |
| Ekman et al. | Plasma concentrations of Gas6 and soluble Axl correlate with disease and predict mortality in patients with critical limb ischemia | |
| Usta Atmaca et al. | Relationship between circulating microparticles and hypertension and other cardiac disease biomarkers in the elderly | |
| RU2619858C1 (en) | Method for thrombocyte aggregation activity determination for patients with acute coronary syndrome | |
| Gad et al. | Evaluation of the role of ischemia modified albumin as a new biochemical marker for differentiation between ischemic and hemorrhagic stroke | |
| RU2486523C1 (en) | Method for estimating clinical effectiveness of antiaggregant therapy in patients with acute coronary syndrome | |
| Popova et al. | Assessment of TNF-α expression in unstable atherosclerotic plaques, serum IL-6 and TNF-α levels in patients with acute coronary syndrome and rheumatoid arthritis | |
| RU2379684C2 (en) | Method of determining anti-thrombotic effect of acetylsalicylic acid | |
| RU2538219C2 (en) | Method of determining platelet resistance to acetylsalicylic acid | |
| RU2686700C1 (en) | Method for determining thrombocyte resistance to antiaggregant preparations in patients with ischemic heart disease | |
| Malarczyk et al. | Light transmission aggregometry in the diagnosis of thrombocytopathy | |
| JP5698835B2 (en) | Method and apparatus for measuring immune system and oxygen system, and method and apparatus for screening drugs | |
| RU2419800C1 (en) | Method of assessing risk of recurrent thrombotic events in patients with acute coronary syndrome | |
| Aucar et al. | The effect of red blood cell age on coagulation | |
| RU2639772C1 (en) | Method of individual prognosis of clinical effectiveness of dual antiplatelet therapy in patients with acute coronary syndrome | |
| ES2733359T3 (en) | Risk stratification of patients suspected of AMI | |
| RU2188419C2 (en) | Method for studying anti-aggregation action of preparations by determining blood platelet aggregation in vitro | |
| RU2699569C1 (en) | Method of determining thrombocyte sensitivity to acetylsalicylic acid | |
| Mei et al. | Experimental Investigation on the Factors Affecting VWF Damage Based on an In Vitro Blood‐Shearing Platform |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180218 |