RU2686107C1 - Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes - Google Patents
Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686107C1 RU2686107C1 RU2018101580A RU2018101580A RU2686107C1 RU 2686107 C1 RU2686107 C1 RU 2686107C1 RU 2018101580 A RU2018101580 A RU 2018101580A RU 2018101580 A RU2018101580 A RU 2018101580A RU 2686107 C1 RU2686107 C1 RU 2686107C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cryoprotector
- optimal
- blood
- ccs
- glycogen
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 title claims abstract description 19
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 title claims abstract description 19
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 11
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 11
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Natural products O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 229940031575 hydroxyethyl urea Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно цитохимической лабораторной диагностике, и может быть использовано для подбора in vitro оптимального (наилучшего, наиболее благоприятного в данных условиях) криопротектора на доклиническом этапе гемотрансфузионной терапии и предупреждения постгрансфузионных осложнений криопротекторного генеза. Для осуществления способа у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба (КП) крови не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП); пробирки герметизируют пробками, содержимое перемешивают на шейкере при температуре плюс 37°C в течение 4 ч, капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, быстро высушивают на воздухе при комнатной температуре, фиксируют в 10% спирт - формалиновой смеси, окрашивают на гликоген по методу Шабадаша, лейкоциты микроскопируют в проходящем свете, проводят сравнительное исследование среднего цитохимического коэффициента (СЦК) сегментоядерных (с/я) нейтрофилов и лимфоцитов ОП и КП по Кэплоу (1955) в модификации Астальди и Верга (1957); при равности показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию (ПКИ); при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. Способ прост и доступен врачу по клинической лабораторной диагностике современного лечебно-профилактического учреждения (ЛПУ).The invention relates to medicine, namely cytochemical laboratory diagnostics, and can be used for the selection in vitro of the optimal (best, most favorable in these conditions) cryoprotectant at the preclinical stage of blood transfusion therapy and the prevention of post-transfusion complications of cryoprotective genesis. For the implementation of the method in a patient prior to the start of cryohemotransfusion therapy, a portion of venous blood is obtained, divided into equal parts into test tubes, in one of which the control sample (CP) of blood does not contain a cryoprotectant, to others add one equal dose of the tested cryoprotectants - experimental samples (OP) ; the tubes are sealed with stoppers, the contents are mixed on a shaker at a temperature of + 37 ° C for 4 hours, drops of OP and KP are applied in a volume of 4 μl on slides, 2-3 strokes are made, dried quickly in air at room temperature, fixed at 10% alcohol - formalin mixture, stained for glycogen by the method of Shabadash, leukocytes microscopically in transmitted light, conduct a comparative study of the mean cytochemical coefficient (CCS) of segmented (c / i) neutrophils and OP and KP lymphocytes (Kaplow) (1955) in modification of Astaldi and Ver ha (1957); with equal indicators, the CCS OP and CCS KP test cryoprotectant is assessed as optimal for a particular patient and usable (CRP); when the values of the CCS OP, other than the CCS KP, conclude as unfit to use cryoprotector. The method is simple and available to the doctor for the clinical laboratory diagnosis of modern medical and preventive treatment facilities.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике по подбору оптимального криопротектора на доклиническом этапе гемотрансфузионной терапии и предупреждению посттрансфузионных осложнений криопротекторного генеза.The invention relates to medicine, namely to laboratory diagnosis for the selection of the optimal cryoprotectant at the preclinical stage of blood transfusion therapy and the prevention of post-transfusion complications of cryoprotective genesis.
Уровень техники.The level of technology.
В современной клинической медицине посттрансфузионные реакции и осложнения рассматривают как один из универсальных механизмов патогенеза различных заболеваний, характеризующихся накоплением в тканях организма избытка токсических продуктов обмена веществ или клеточного реагирования, маркерами которых служат качественные и полуколичественные характеристики определенных цитохимических ферментативных реакций в лейкоцитах крови до и после смешивания с криопротекторами. Эти процессы могут развиваться как по типу яркой многосимптомной реакции, так и скрытно развивающихся труднокупируемых в последующем посттрансфузионных осложнений (Цитохимия замороженной клетки / Обозная Э.И., Пушкарь Н.С.. Маркова О.П.. Панков Е.Я. - Киев: Наук. Думка, 1981. - 176 с.). Поэтому возникает проблема выявления ранних признаков вредного влияния токсичных криопротекторов на организм и эффективного предупреждения посттрансфузионных осложнений криопротекторного генеза.In modern clinical medicine, posttransfusion reactions and complications are considered as one of the universal mechanisms of pathogenesis of various diseases characterized by accumulation in the body tissues of an excess of toxic metabolic products or cellular response, which are qualitative and semi-quantitative characteristics of certain cytochemical enzymatic reactions in blood leukocytes before and after mixing. with cryoprotectants. These processes can develop both by the type of bright multi-symptom reaction and by covertly developing posttransfusion complications that are difficult to be successfully recaptured later (Cytochemistry of a frozen cell / Oznaya E.I., Pushkar N.S. Markova O.Pankov E.Ya. - Kiev : Science. Dumka, 1981. - 176 p.). Therefore, there is the problem of identifying early signs of the harmful effects of toxic cryoprotectants on the body and effectively preventing the post-transfusion complications of cryoprotective genesis.
Известные методы биологического и биохимического исследования сыворотки крови (определение концентрации молекул средней массы, продуктов перекисного окисления липидов, билирубина и т.д.) имеют ряд недостатков:The known methods of biological and biochemical studies of blood serum (determination of the concentration of molecules of average weight, products of lipid peroxidation, bilirubin, etc.) have several disadvantages:
- необходимость вводить криопротектор или гемоконсервант на его основе в сосудистое русло больного, то есть производить инвазивную манипуляцию, которая может быть сопряжена с техническими трудностями, осложнениями технического характера или непереносимостью субъектом лекарственного препарата;- the need to introduce a cryoprotectant or hemoconservative on its basis into the patient’s vascular bed, that is, to produce invasive manipulation, which may be associated with technical difficulties, technical complications or intolerance to the subject of the medicinal product;
- необходимость использования лабораторных технологий и специальной биохимической лаборатории, оснащенной сложным оборудованием и реактивами, что делает анализы не всегда доступными и дорогими как для лечебно-профилактических учреждений, так и для пациентов.- the need to use laboratory technologies and a special biochemical laboratory equipped with sophisticated equipment and reagents, which makes the analyzes not always available and expensive for both treatment-and-prophylactic institutions and patients.
Эти недостатки ограничивают количество и частоту необходимых исследований.These shortcomings limit the number and frequency of research needed.
На основании предложенных в литературе лабораторных модификаций для оценки полноценности ядерных клеток крови на этапах низкотемпературного консервирования и прогнозирования предполагаемых результатов криогемотрансфузионной терапии широко используются методы клинической и полуколичественной оценки цитохимических показателей активаторов жизненно важных клеточных ферментов в периферической крови пациентов.Based on laboratory modifications proposed in the literature, clinical and semi-quantitative assessment of cytochemical indicators of activators of vital cellular enzymes in the peripheral blood of patients is widely used to evaluate the usefulness of nuclear blood cells during low-temperature preservation and predict the expected results of cryohemotransfusion therapy.
Известен метод цитохимического обнаружения гликогена для оценки нормальных и патологических процессов (Углеводы и углеводный обмен: Материалы Второй Всесоюз. конф. по пробл. «Химия и обмен углеводов». 24-27 янв. 1961 г. М.: Изд-во АН СССР, 1962. - С. 157-163).Known method of cytochemical detection of glycogen for the evaluation of normal and pathological processes (Carbohydrates and carbohydrate metabolism: Materials of the Second All-Union. Conf. On prob. "Chemistry and carbohydrate metabolism." Jan. 24-27, 1961 M .: Publishing House of the USSR Academy of Sciences, 1962. - pp. 157-163).
За прототип предлагаемого изобретения выбран способ, позволяющий выявить содержание гликогена в лейкоцитах высушенных мазков донорской крови (Архагов Ю.Ф. Изменение морфологии и функционально-метаболической активности лейкоцитов в процессе хранения донорской крови и под влиянием различных лучей: Автореф. дис. … канд. мед. наук. М., 2003. - 155 с.). Основным недостатком способа - прототипа является отсутствие сравнительных исследований СЦК лейкоцитов на гликоген в мазках проб венозной крови, смешанных с 15% раствором гексаметиленбистетра-оксиэтилмочевины (15% ГМБТОЭМ). 3,3% раствором глицерола (3,3% Гл). 10% раствором диметилсульфоксида (10% ДМСО), гемоконсервантом Тромбокриодмац (ТКД) или гемоконсервантом на основе 55% раствора диметилацетамида (ДМАЦ) с 5% раствором гидроксиэтилкрахмал (ГЭК) (55% ДМАЦ+5% ГЭК). со значениями СЦК КП. Вместе с тем, подбор оптимального криопротектора на этапе. предшествующем криогемотрансфузионной терапии, очень важен для больного, так как позволяет снизить риск посттрансфузионных осложнений криопротекгорного генеза.For the prototype of the present invention, a method was chosen that allows revealing the glycogen content in leukocytes of dried donor blood smears (Arkhagov Y.F. Changing the morphology and functional-metabolic activity of leukocytes during storage of donor blood and under the influence of various rays: Abstract of thesis ... Cand. Honey Sciences. M., 2003. - 155 p.). The main disadvantage of the prototype method is the lack of comparative studies of glycogen leucocyte CCS in smears of venous blood samples mixed with a 15% solution of hexamethylenbistetra-hydroxyethyl urea (15% GMBTOEM). 3.3% glycerol solution (3.3% Gl). 10% solution of dimethyl sulfoxide (10% DMSO), hemoconservative Thrombokriodmats (TKD) or hemoconservative based on a 55% solution of dimethylacetamide (DMAC) with 5% solution of hydroxyethyl starch (HES) (55% DMAC + 5% HES). with the values of CCS KP. However, the selection of the optimal cryoprotector at the stage. prior cryohemotransfusion therapy is very important for the patient, as it allows to reduce the risk of posttransfusion complications of cryoprotectin genesis.
Целью изобретения является устранение отмеченного недостатка и создание такого способа, который бы позволял подобрать in vitro для конкретного больного оптимальный криопротектор на этапе, предшествующем плановой криогемотрансфузионной терапии.The aim of the invention is to eliminate the noted deficiency and the creation of such a method that would allow to select the optimal cryoprotector in vitro for a particular patient at the stage preceding the planned cryohemotransfusion therapy.
Раскрытие изобретения.Disclosure of the invention.
Техническим результатом изобретения является доступность, простота подбора оптимального криопротектора на доклиническом этапе криогемотрансфузионной терапии.The technical result of the invention is the availability, ease of selection of the optimal cryoprotector at the preclinical stage of cryohemotransfusion therapy.
Технический результат в заявляемом способе подбора оптимального криопротектора по содержанию гликогена в лейкоцитах консервированной крови достигается тем, что, как и в способе-прототипе, анализ содержания гликогена в лейкоцитах осуществляют по методу Шабодаша.The technical result in the claimed method of selecting the optimal cryoprotectant on the content of glycogen in leukocytes of canned blood is achieved by the fact that, as in the method prototype, the analysis of the content of glycogen in leukocytes is carried out according to the Shabodash method.
Новым в способе является то, что подбор оптимального криопротектора проводят путем сравнительных исследований СЦК ОП на гликоген с 15% ГМБТОЭМ, 3,3 Гл, 10% ДМСО, гемоконсервантом ТКД или комбинированным гемоконсервантом 55% ДМАЦ с 5% ГЭК со значениями СЦК КП. При этом: об оптимальности криопротектора и его пригодности к использованию судят в случаях аналогичности значений показателей СЦК ОП и СЦК КП.New in the method is that the selection of the optimal cryoprotectant is carried out through comparative studies of SCS OP on glycogen with 15% GMBTOEM, 3.3 Gl, 10% DMSO, TCD hemoconservative or 55% DMAC with hemoconservative with values of SCC KP. In this case: the optimality of the cryoprotectant and its suitability for use are judged in cases of similarity of the values of the parameters of the CCS OP and the CCS KP.
Необходимое оборудование:Necessary equipment:
1. Предметные стекла.1. Slides.
2. Пробирки для крови на 20 мл с винтовой герметичной пробкой.2. Test tubes for blood on 20 ml with a screw tight stopper.
3. Световой микроскоп с проходящим светом.3. Light microscope with transmitted light.
4. Набор тест-доз различных криопротекторов или гемоконсервантов на их основе, разрешенных к клиническому применению М3 России.4. A set of test doses of various cryoprotectants or hemoconservatives based on them allowed for clinical use by M3 of Russia.
5. Набор реагентов для цитохимического определения гликогена в лейкоцитах.5. Reagent kit for the cytochemical determination of glycogen in leukocytes.
Заявляемый способ имеет основное преимущество в сравнении с прототипом - проведение подбора оптимального криопротектора путем сравнительных исследований значений СЦК ОП аутологичной крови на гликоген, смешанных с тест-дозами 15% ГМБТОЭМ, 3.3% Гл, ТКД. 10% ДМСО или 55% ДМАЦ +5% ГЭК, со значениями СЦК КП.The inventive method has the main advantage in comparison with the prototype - the selection of the optimal cryoprotectant by comparative studies of the values of the CCS OP of autologous blood for glycogen, mixed with test doses of 15% GMBTOEM, 3.3% Gl, TKD. 10% DMSO or 55% DMAC + 5% HES, with values of CCS KP.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом. У обследуемого натощак до начала внутривенных трансфузий криоконсервированных компонентов крови (криогемотрансфузионной терапии) готовят в пробирках «линейку» из тест-доз с 15% ГМБТОЭМ, 3,3% глицерола, гемоконсервантом ТКД, 10% ДМСО или комбинированным гемоконсервантом на основе 55% ДМАЦ и 5% ГЭК по 1,5 мл в каждой; эксфузируют 25 мл аутологичной венозной крови на стабилизирующем растворе цитрата натрия и фасуют с помощью дозаторной пипетки в 6 помеченных маркером пробирок по 4,0 мл в каждую; затем в пробирку №1 вносят 0,25 мл тест-дозы 15% ГМБТОЭМ, в пробирку №2 - 0,25 мл тест-дозы 3,3% Гл, в пробирку №3 - 0,25 мл тест-дозы ТКД, в пробирку №4 - 0,25 мл тест-дозы 10% ДМСО, в пробирку №5 - 0,25 мл тест-дозы гемоконсерванта на основе 55% ДМАЦ +5% ГЭК, в пробирку №6 с контрольной пробой крови (КП) криопротектор не вносят; компоненты в пробирках №№1-6 герметизируют пробками, содержимое перемешивают на шейкере при температуре плюс 37°C в течение 4 ч (модель трансфузии); из каждой пробирки биопробы раскапывают с помощью дозаторной пипетки на чистые предметные стекла, из них готовят по 2-3 тонких мазка, высушивают на воздухе при комнатной температуре, фиксируют в 10% растворе спирт-формалина и окрашивают по методу Шабодаша (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е.А. Кост. Москва "Медицина" 1975 г.); окрашенные и высушенные мазки микроскопируют в проходящем свете, производят качественный и полуколичественный анализ содержания гликогена в с/я нейтрифилах и лимфоцитах с подсчетом значений СЦК лимфоцитов по Кэплоу (1955) в модификации Астальди и Верга (1957). При этом: об оптимальности криопротектора и его пригодности к использованию с лечебной целью конкретному пациенту судят в случаях аналогичности значений показателей СЦК ОП и СЦК КП. При значениях СЦК ОП, отличающихся от СЦК КП, делают заключение о биопробах с высоким клиническим риском и непригодными для криогемотрансфузии.The inventive method is as follows. In the subject on an empty stomach prior to the start of intravenous transfusions of cryoconserved blood components (cryohemotransfusion therapy), a “line” of test doses with 15% HMBTOEM, 3.3% glycerol, TKD hemoconservative, 10% DMSO or a combined hemoconservative on a 55% hemoconservative is prepared in test tubes 5% HES 1.5 ml each; 25 ml of autologous venous blood are excreted in a stabilizing solution of sodium citrate and packaged with a dosing pipette into 6 4.0 ml labeled test tubes each; then 0.25 ml of the test dose of 15% HMBTOEM is introduced into the test tube No. 1, 0.25 ml of the test dose of 3.3% Gl into the test tube No. 2, 0.25 ml of the test dose of TCD in the test tube No. 3, test tube No. 4 - 0.25 ml test dose of 10% DMSO, in test tube No. 5 - 0.25 ml test dose of hemoconservative based on 55% DMAC + 5% HES, in test tube No. 6 with a control blood sample (CP) cryoprotector do not contribute; components in test tubes Nos. 1-6 are sealed with stoppers, the contents are mixed on a shaker at a temperature of + 37 ° C for 4 hours (transfusion model); From each tube, the bioassays are excavated using a dosing pipette on clean slides, 2-3 of them are prepared for thin smears, dried in air at room temperature, fixed in a 10% alcohol-formalin solution and stained according to the Shabodash method. studies under the editorship of E.A. Cost. Moscow "Medicine" 1975); stained and dried smears microscopically in transmitted light, produce a qualitative and semi-quantitative analysis of the content of glycogen in c / I neutrifiles and lymphocytes with counting the values of SCS lymphocytes according to Caploo (1955) in the modification of Astaldi and Verga (1957). At the same time: the optimality of the cryoprotectant and its suitability for use for therapeutic purposes to a specific patient is judged in cases of similarity of the values of the parameters of the CCS OP and the CCS KP. When the values of the CCS OP, different from the CCS KP, make a conclusion about the biological samples with high clinical risk and unsuitable for cryohemotransfusion.
Необходимое оборудование: предметные стекла, пробирки для крови на 5 и 20 мл с винтовой герметичной пробкой, световой микроскоп с проходящим светом, набор тест- доз различных криопротекторов или гемоконеервантов на их основе, разрешенных к клиническому применению М3 России, набор реагентов для цитохимического определения гликогена в лейкоцитах in vitro диагностики фирмы Диахим-ЦитоСтейн - ПАС (Россия).Necessary equipment: slides, 5 and 20 ml blood tubes with a screw-tight plug, a light microscope with transmitted light, a set of test doses of various cryoprotectants or hemoconverting agents based on them allowed for clinical use by the M3 of Russia, a set of cytochemical glycogen reagents in white blood cells in vitro diagnostics company Diachim-CytoStein - PAS (Russia).
В качестве иллюстрации работоспособности заявляемого способа подбора оптимального криопротектора по содержанию гликогена в лейкоцитах консервированной крови приводим 3 примера (Табл. 1), которые подтверждают практическое применение данного способа.To illustrate the efficiency of the proposed method of selecting the optimal cryoprotectant on the glycogen content in leukocytes of canned blood, we give 3 examples (Table 1), which confirm the practical application of this method.
Примечание: жирным шрифтом обозначены оптимальные значения СЦК ОП и СЦК КП.Note: bold type indicates optimal values of the CCS OP and SCK KP.
Пример №1. Результаты исследования крови донора П-ва 45 лет показывают, что из числа исследованных тест-доз криопротекторов оптимальным является 3,3% раствор Глицерола (СЦК с/я нейтрофилов 2,42% (в КП 2,42%); СЦК лимфоцитов 0,92% (в КП 0,92%). Заключение: ПКИ является криопротектор 3,3% Глицерол, а НКИ являются 15% ГМБТОЭМ, ТКД, 10% ДМСО и комбинированный криопротектор на основе 55% ДМАЦ и 5% ГЭК, которые несут риски посттрансфузионных осложнений.Example number 1. The results of a 45-year-old donor blood donor test show that, among the tested test doses of cryoprotectants, a 3.3% Glycerol solution is optimal (BCC of a neutrophilic 2.42% (KP 2.42%); Lymphocyte СЦК 0, 92% (in KP 0.92%). Conclusion: PKI is a cryoprotectant 3.3% Glycerol, and NCI are 15% GMBTOEM, TKD, 10% DMSO and a combined cryoprotectant based on 55% DMAC and 5% HES that carry risks posttransfusion complications.
Пример №2. Результаты исследования крови донора Н-н 33 лет показывают, что из числа исследованных тест-доз криопротекторов оптимальными являются комбинированный криопротектор, содержащий 55% ДМАЦ +5% ГЭК и 3,3% Глицерол, у которых СЦК с/я нейтрофилов 2,00% (в КП 2,00%). Согласно СЦК лимфоцитов в ОП и КП оптимальным также является криопротектор, содержащий 55% ДМАЦ +5% ГЭК 0,76%. Заключение: ПКИ является криопротектор на основе 55% ДМАЦ +5% ГЭК и 3,3% Глицерола, а НКИ являются 15% ГМБТОЭМ, ТКД и 10% ДМСО, которые несут риски посттрансфузионных осложнений.Example number 2. The results of the blood test of the donor N 33 years old show that among the tested test doses of cryoprotectants, the combined cryoprotectant containing 55% DMAC + 5% HES and 3.3% Glycerol, in which the neutrophil SCs with 2.00% is optimal (in KP 2.00%). According to the SCS of lymphocytes in the OP and KP, the cryoprotector containing 55% DMAC + 5% HES 0.76% is also optimal. Conclusion: PKI is a cryoprotectant based on 55% DMAC + 5% HES and 3.3% Glycerol, and NCI are 15% GMBTOEM, TKD and 10% DMSO, which carry the risks of post-transfusion complications.
Пример №3. Результаты исследования крови донора С-ва 47 лет показывают, что из числа исследованных тест-доз криопротекторов оптимальным является 3,3% раствор Глицерола (СЦК с/я нейтрофилов в КП и ОП составляет 2,41%, а СЦК лимфоцитов - по 0,94%. Заключение: ПКИ является криопротектор 3,3% Глицерол, а НКИ являются 15% ГМБТОЭМ, ТКД, 10% ДМСО и комбинированный криопротектор на основе 55% ДМАЦ и 5% ГЭК, которые несут риски посттрансфузионных осложнений.Example number 3. The results of a 47-year-old donor C-va donor blood test show that among the tested test doses of cryoprotectants, a 3.3% Glycerol solution is optimal (SCR of neutrophilic c / i in CP and OP is 2.41%, and SCK of lymphocytes is 0, 94%. Conclusion: PKI is a cryoprotector of 3.3% Glycerol, and NCI are 15% of GMBTOEM, TKD, 10% DMSO, and a combined cryoprotectant based on 55% DMAC and 5% HES that carry the risks of post-transfusion complications.
Представленные примеры иллюстрируют применимость предлагаемого способа подбора оптимального криопротектора по содержанию гликогена в лейкоцитах консервированной крови. Способ дешев и может быть внедрен в практику гематологического центра, использующего трансфузии криоконсервированных компонентов крови или костного мозга.The presented examples illustrate the applicability of the proposed method of selecting the optimal cryoprotectant on the content of glycogen in leukocytes of canned blood. The method is cheap and can be implemented in the practice of a hematology center using transfusions of cryoconserved components of the blood or bone marrow.
Таким образом, благодаря использованию более чувствительного способа диагностики оптимального криопротектора по содержанию гликогена в лейкоцитах консервированной крови удается оценить эффективность и снизить риски планируемой криогемотрансфузионной терапии криопротекторного генеза.Thus, due to the use of a more sensitive method of diagnosing the optimal cryoprotectant on the glycogen content in the preserved blood leukocytes, it is possible to evaluate the effectiveness and reduce the risks of the planned cryohemotransfusion therapy of cryoprotective genesis.
Предлагаемое изобретение отвечает критериям «новизна» и «изобретательский уровень», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников патентной и научно-технической литературы, которые бы порочили новизну предлагаемого способа, равно как и известных способов с существенными признаками предлагаемого технического решения. Техническим результатом использования является возможность проведения индивидуального скрининга криопротекторов на доклиническом этапе их применения.The present invention meets the criteria of "novelty" and "inventive step", since the conducted patent information research did not reveal sources of patent and scientific literature that would slander the novelty of the proposed method, as well as the known methods with the essential features of the proposed technical solution. The technical result of the use is the possibility of conducting an individual screening of cryoprotectants at the preclinical stage of their use.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018101580A RU2686107C1 (en) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018101580A RU2686107C1 (en) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2686107C1 true RU2686107C1 (en) | 2019-04-24 |
Family
ID=66314790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018101580A RU2686107C1 (en) | 2018-01-16 | 2018-01-16 | Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2686107C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236466C2 (en) * | 2002-11-25 | 2004-09-20 | Государственное унитарное предприятие Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства | Method for selection of cryoprotecting agents for cryopreserving biological samples (variants) |
| RU2563117C1 (en) * | 2014-12-24 | 2015-09-20 | Татьяна Алексеевна Астрелина | Combination cryoprotector "dimethyl sulphoxide/rheopolyglucin" for stem cell cryopreservation and method for cryopreservation thereof for clinical applications |
| US20180185081A1 (en) * | 2014-01-31 | 2018-07-05 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Compositions, treatment systems and methods for improved cooling of lipid-rich tissue |
-
2018
- 2018-01-16 RU RU2018101580A patent/RU2686107C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236466C2 (en) * | 2002-11-25 | 2004-09-20 | Государственное унитарное предприятие Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства | Method for selection of cryoprotecting agents for cryopreserving biological samples (variants) |
| US20180185081A1 (en) * | 2014-01-31 | 2018-07-05 | Zeltiq Aesthetics, Inc. | Compositions, treatment systems and methods for improved cooling of lipid-rich tissue |
| RU2563117C1 (en) * | 2014-12-24 | 2015-09-20 | Татьяна Алексеевна Астрелина | Combination cryoprotector "dimethyl sulphoxide/rheopolyglucin" for stem cell cryopreservation and method for cryopreservation thereof for clinical applications |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KOZLOWSKA-SKRZYPCZAK M., et al.Analysis of the effect of cryoprotectant medium composition to viability of autologous hematopoietic cells collected by leukapheresis//Transplantation Proceedings 2014 46:8 (2535-2538). * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Grisendi et al. | Detection of microparticles from human red blood cells by multiparametric flow cytometry | |
| Fry et al. | Effects of time, initial composition, and stabilizing agents on the results of canine cerebrospinal fluid analysis | |
| Kemal | Laboratory manual and review on clinical pathology | |
| Parida et al. | Hematological and plasma biochemistry in Psammophilus blanfordanus (Sauria: Agamidae) | |
| Kunstling et al. | Erythrocyte acetylcholinesterase deficiency in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)—a comparison of the complement-sensitive and insensitive populations | |
| Ledderose et al. | Optimized flow cytometry assays to monitor neutrophil activation in human and mouse whole blood samples | |
| de Graaf et al. | Addition of serum-containing medium to cerebrospinal fluid prevents cellular loss over time | |
| Hakala et al. | Cell mediated cytotoxicity against human transitional cell carcinomas of the genitourinary tract | |
| RU2686107C1 (en) | Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes | |
| RU2689328C1 (en) | Method for determining an optimal cryoprotector according to a cytochemical indicator of content of succinate dehydrogenase in blood plasma leukocytes | |
| RU2676674C1 (en) | Method for identifying an effective cryoprotector by cytochemical index of the content of leukocyte alkaline phosphatase of autologous blood | |
| RU2689334C1 (en) | Method for determining a personalized cryoprotector by leukocyte acid phosphatase of preserved blood | |
| Dukic et al. | Dark brown serum and plasma samples: a case report | |
| RU2491552C1 (en) | Diagnosticum for identifying donor-specific major histocompatibility complex antibodies and method for preparing it | |
| RU2728601C1 (en) | Method for testing substances which affect aging processes by blood analysis | |
| Sasamoto et al. | Fetal and neonatal anemia associated with anti‐Jra: A case report showing a poorly hemolytic mechanism | |
| RU2758064C1 (en) | Method for determining posttransplantation chimerism in course of study of abo system erythrocyte antigens | |
| Eze et al. | Changes in plasma haemoglobin concentration in citrate phosphate dextrose adenine-1 (CPDA-1) stored blood | |
| RU2790833C1 (en) | Method for determining antierythrocytic alloantibodies in patients with multiple myeloma | |
| Pederzoli et al. | Evaluation of blood cell count using an automatic hematology analyzer to optimize collection of peripheral blood progenitor cells by leukapheresis | |
| RU2717313C1 (en) | Method of determining erythrocyte resistance | |
| Abd El-Fatah | Research Project | |
| Raval | Basic Instrumentation required for blood sample | |
| Roldão | Hospital practice report: hospital pharmacy | |
| GUPTA | MASTER OF VETERINARY SCIENCES IN VETERINARY MEDICINE |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200117 |