RU2666730C2

RU2666730C2 - Диазольные лактамы

Info

Publication number: RU2666730C2
Application number: RU2015127027A
Authority: RU
Inventors: Си Чэнь; Пинчэнь Фан; Яньдун Ли; Джей П. Пауэрс; Виенгкхам МАЛАТОНГ; Сринивас Пунна; Хироко Танака; Пэнли ЧЖАН; Дин ДРАГОЛИ
Original assignee: Кемосентрикс, Инк.
Priority date: 2012-12-07
Filing date: 2013-12-06
Publication date: 2018-09-12
Also published as: EP2928474A1; CA2893597C; HK1216017A1; US20160303084A1; KR20150092289A; KR102196366B1; EP2928474B1; ES2707323T3; ZA201504122B; US11759454B2; EP2928474A4; CN104902898A; MX2015007051A; IL239119A0; US10744118B2; AU2013355054A1; US9328116B2; CN104902898B; AU2013355054B2; CA2893597A1

Abstract

Описаны соединения формулы I, где n представляет собой целое число от 0 до 3; каждый A независимо выбран из группы, состоящей из N и CH; Aпредставляет собой N или C(R); Aпредставляет собой N или C(R); Rи Rкаждый независимо выбраны из группы, состоящей из H, галогена и -OR; Rявляется представителем, выбранным из группы, состоящей из H, Cалкила, Cциклоалкила, Cалкенила, Cгалогеналкила, -OR, -NRR, фенила и 5- или 6-членного гетероарила; Rявляется представителем, выбранным из группы, состоящей из H и Cалкила; R, R, Rи Rкаждый независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, Cалкила, Cгалогеналкила, Cгидроксиалкила и 5- или 6-членного гетероарила; Rявляется представителем, выбранным из группы, состоящей из H и Cалкила; и каждый Rи Rнезависимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, Cалкила; где каждый гетероарил имеет от одного до пяти гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, O и S, или их фармацевтически приемлемые соли. Соединения выступают в роли потенциальных антагонистов CCR1 рецептора и обладают in vivo противовоспалительной активностью. Описаны также фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I, а также способ лечения заболеваний путем введения соединения формулы I. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 2 табл., 46 пр.Формула I

Description

Область техники, к которой относится изобретение

В настоящем изобретении описаны соединения, фармацевтические композиции, содержащие одно или больше из описанных соединений или их фармацевтически приемлемые соли, которые эффективно подавляют связывание различных хемокинов, таких как MIP-1α, лейкотактин, MPIF-1 и RANTES, с CCR1 рецептором. В качестве антагонистов или модуляторов CCR1 рецептора, описанные соединения и композиции могут применяться в лечении воспалительных и иммунных заболеваний и нарушений.

Уровень техники

Здоровье человека зависит от способности тела обнаруживать и уничтожать чуждые патогены, которые могут отбирать ценные ресурсы у человека и/или вызывать заболевания. Иммунная система, включающая лейкоциты (белые кровяные тельца (БКТ): Т- и В-лимфоциты, моноциты, макрофаги, гранулоциты, нормальные клетки-киллеры, лаброциты, дендритные клетки и клетки, являющиеся производными клеток иммунной системы (например, остеокласты)), лимфоидные ткани и сосуды, является защитной системой организма. В целях борьбы с инфекцией белые кровяные тельца циркулируют по организму, обнаруживая патогены. При обнаружении патогена, врожденные иммунные клетки, и в особенности цитотоксичные Т-клетки, поступают к инфицированному сайту для уничтожения патогена. Хемокины играют роль молекулярных маяков для привлечения и активации иммунных клеток, таких как лимфоциты, моноциты и гранулоциты, идентифицируя места наличия патогенов.

Несмотря на контроль за патогенами со стороны иммунной системы, может развиваться неправильная подача сигналов хемокинами, что приписывают возникновению и развитию воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, рассеянный склероз и другие. Например, при ревматоидном артрите неконтролируемое накопление хемокинов в суставах привлекает и активирует инфильтрующиеся макрофаги и Т-клетки. Активность этих клеток индуцирует разрастание синовиальных клеток, которое приводит, по меньшей мере частично, к воспалению и, в конечном итоге, к разрушению костей и суставов (см. DeVries, М.Е., et al., Semin Immunol 11(2): 95-104 (1999)). Отличительной чертой некоторых демиелинизирующих заболеваний, таких как рассеянный склероз, является осуществляемое с участием хемокинов привлечение моноцитов/макрофагов и Т-клеток в центральную нервную систему (см. Kennedy, et al., J. Clin. Immunol. 19(5): 273-279 (1999)). Привлечение хемокинами разрушительных белых кровяных телец в трансплантаты приводит к их последующему отторжению. Смотри статью DeVries, М.Е., et al., ibid. Поскольку хемокины играют жизненно-важную роль в процессах воспаления и развития лимфоцитов, возможность точно управлять их активностью оказывает огромное влияние на смягчение и лечение заболеваний, для которых в настоящее время не существует удовлетворительных методов лечения. Кроме того, можно минимизировать отторжение трансплантата, избегая общих и тяжелых побочных эффектов дорогих иммуносупрессантов.

Хемокины, группа из более чем 40 небольших пептидов (7-10 кДа), связываются с рецепторами, экспрессированными главным образом на белых кровных тельцах или клетках, являющихся производными иммунной системы, и генерируют сигналы посредством GPSR-каскадов, для осуществления своих хемоаттрактантных и хемостимулирующих функций. Рецепторы могут связываться с более чем одним лигандом; например, рецептор CCR1 связывается с RANTES (regulated on activation normal T cell expressed, регуляция активации, экспрессии и секреции нормальных Т-клеток), MIP-1α (macrophage inflammatory protein, воспалительный белок макрофагов), MPIF-1/CKβ8 и лейкотактином (среди других, обладающих меньшим сродством). В настоящий момент известно 24 хемокиновых рецептора. Огромное количество хемокинов, рецепторов, связывающихся с несколькими лигандами, и разные профили рецепторов на иммунных клетках делают возможным тонко управляемые и специфичные иммунные ответы. См. Rossi, et al., Ann. Rev. Immunol. 18(1): 217-242 (2000). Активностью хемокинов можно управлять путем модулирования их соответствующих рецепторов, вылечивая зависимые от них воспалительные и иммунологические заболевания и обеспечивая возможность пересадки органов и тканей.

Рецептор CCR1 и его хемокиновые лиганды, включая, например, MIP-1α, MPIF-1/CKβ8, лейкотактин и RANTES, представляют собой важные терапевтические мишени (см. Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9: 1201-1208 (2003)), поскольку они участвуют в развитии ревматоидного артрита, отторжении трансплантата (см. DeVries, М.Е., et al., ibid.) и рассеянного склероза (см. Fischer, et al., J Neuroimmunol. 110(1-2): 195-208 (2000); Izikson, et al., J. Exp. Med. 192(7): 1075-1080 (2000); и Rottman, et al., Eur. J. Immunol. 30(8): 2372-2377 (2000). На самом деле, были открыты антитела, блокирующие работу хемокинов, модифицированные лиганды и низкомолекулярные органические молекулы для хемокиновых рецепторов, некоторые из которых показали успешное лечение или профилактику некоторых хемокин-опосредованных заболеваний (см. обзор Rossi, et al., ibid.). Следует отметить, что в экспериментальной модели ревматоидного артрита развитие заболевания замедляется при введении модифицированного RANTES-лиганда, блокирующего проведение сигнала (см. Plater-Zyberk, et al., Immunol Lett. 57(1-3): 117-120 (1997)). Хотя терапия блокирующими работу антителами и низкомолекулярными пептидами является многообещающей, их недостатками является риск разрушения, очень короткие времена полужизни после введения и фактически запретительные затраты на разработку и производство, что характерно для большинства белков. Низкомолекулярные органические соединения предпочтительны, поскольку они часто имеют большие времена полужизни in vivo, требуют более низких дозировок для достижения эффективности, часто могут вводиться перорально и менее дорогие. Некоторые органические антагонисты CCR1 были описаны раньше (см. Hesselgesser, et al., J. Biol Chem. 273(25): 15687-15692 (1998); Ng, et al., J. Med. Chem. 42(22): 4680-4694 (1999); Liang, et al., J. Biol. Chem. 275(25): 19000-19008 (2000); и Liang, et al., Eur. J. Pharmacol. 389(1): 41-49 (2000)). В свете эффективности, продемонстрированной в лечении заболевания на животных моделях (см. Liang, et al., J. Biol. Chem. 275(25): 19000-19008 (2000)), продолжается поиск, направленный на выявление дополнительных соединений, которые могут применяться для лечения заболеваний, опосредованных CCR1-сигнальной системой.

Раскрытие изобретения

Настоящее изобретение касается соединений, имеющих формулу I:

или их фармацевтически приемлемых солей, гидратов, сольватов, N-оксидов или ротамеров. В формуле I буква n представляет собой целое число от 0 до 3;

каждый А независимо выбран из группы, состоящей из N и СН;

X и Z каждый независимо выбраны из группы, состоящей из

(i) моноциклического или конденсированного бициклического арила и гетероарила, где гетероарильная группа содержит 1-4 гетероатомов, выбранных из N, О и S, в качестве членов цикла;

(ii) моноциклического 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца, выбранного из группы, состоящей из циклоалкана и гетероциклоалкана, где гетероциклоалкановые кольца содержат 1-3 гетероатомов, выбранных из N, О и S, в качестве членов цикла;

где каждое кольцо в (i) и (ii) необязательно имеет 1-5 заместителей, выбранных из галогена, CN, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, арила, 5- или 6-членного гетероарила, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероциклоалкана, где гетероатомы, присутствующие в качестве членов кольца в гетероарильном и гетероциклоалкановом кольце, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные, арильные, гетероарильные и гетероциклоалкановые фрагменты заместителей необязательно дополнительно имеют 1-3 заместителей R^a; и, необязательно, два заместителя в соседних положениях в цикле соединены с образованием дополнительного 5- или 6-членного кольца, которое является насыщенным, ненасыщенным или ароматическим, при этом члены цикла выбраны из С, О, N и S;

R³ выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, арила, 5- или 6-членного гетероарила, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероцикла, где гетероатомы, присутствующие в качестве членов кольца в гетероарильных и гетероциклических кольцах, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные, арильные, гетероарильные и гетероциклические фрагменты в R³необязательно дополнительно имеют 1-3 заместителей R^a;

R⁴ выбран из группы, состоящей из Н, -OR^a и С_1-8 алкила, необязательно имеющего заместитель -OR^a;

R⁹ выбран из группы, состоящей из Н и C_1-8 алкила, необязательно имеющего заместитель -OR^a;

каждый R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из атома водорода, гидроксила, галогена, циано-группы, C_1-8 алкила, C_1-8 алкокси, C_1-8 галогеналкила, С_3-6 циклоалкила, С_3-6 циклоалкилалкила, амино-группы, C_1-8 алкиламино-группы, ди С_1-8 алкиламино-группы, карбоксамида, карбокси С_1-4 алкилового эфира, карбоксильной группы и -SO₂-С_1-8 алкила.

Помимо описанных в настоящем тексте соединений, в настоящем изобретении дополнительно описаны фармацевтические композиции, содержащие одно или больше из указанных соединений, а также способы применения указанных соединений, в первую очередь для лечения заболеваний, связанных с CCR1 сигнальной активностью.

Осуществление изобретения

I. Сокращения и определения

Термин "алкил", сам по себе и как часть другого заместителя, означает, если не указано иное, линейный или разветвленный углеводородный радикал, имеющий обозначенное число атомов углерода (например, C_1-8 означает 1-8 атомов углерода). Примеры алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, изобутил, втор-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил и т.п. Термин "алкенил" означает ненасыщенную алкильную группу, содержащую одну или больше двойных связей. Аналогично, термин «алкинил» означает ненасыщенную алкильную группу, содержащую одну или больше тройных связей. Примеры таких ненасыщенных алкильных групп включают винил, 2-пропенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3-(1,4-пентадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и их высшие гомологи и изомеры. Термин "циклоалкил" относится к углеводородным циклам, имеющим указанное число атомов в цикле (например, С_3-6циклоалкил) и являющимся полностью насыщенными или имеющими не более одной двойной связи между вершинами цикла. "Циклоалкил" относится также к бициклическим и полициклическим углеводородным кольцам, таким как, например, бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.2]октан и т.д. Термин "гетероциклоалкил" относится к циклоалкильной группе, содержащей 1-5 гетероатомов, выбранных из N, О, и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом(ы) азота необязательно кватернизован(ы). Гетероциклоалкил может представлять собой моноциклическую, бициклическую или полициклическую кольцевую систему. Неограничивающие примеры гетероциклоалкильных групп включают пирролидин, пиперидинил, имидазолидин, пиразолидин, бутиролактам, валеролактам, имидазолидинон, гидантоин, фталимид, пиперидин, 1,4-диоксан, морфолин, тиоморфолин, тиоморфолин-S-оксид, тиоморфолин-S,S-оксид, пиперазин, пиран, пиридон, 3-пирролин, тиопиран, пирон, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, хинуклидин и т.п. Гетероциклоалкильная группа может быть присоединена к остальной части молекулы через атом углерода в цикле или гетероатом в цикле.

Термин "алкилен" сам по себе и как часть другого заместителя означает двухвалентный радикал, являющийся производным алкана, примером которого может служить -СН₂СН₂СН₂СН₂-. В типичном случае, алкильная (или алкиленовая) группа содержит от 1 до 24 атомов углерода, при этом группы с 10 атомами углерода или меньше являются предпочтительными по настоящему изобретению. "Низший алкил" или "низший алкилен" представляет собой алкильную или алкиленовую группу с более короткой цепочкой, обычно содержащую четыре или меньше атомов углерода. Аналогично, «алкенилен» или «алкинилен» относится к ненасыщенным формам «алкилена», содержащим двойные или тройные связи, соответственно.

При использовании в настоящем тексте, волнистая линия ʺ

ʺ пересекающая простую, двойную или тройную связь в любой изображенной в настоящем тексте химической структуре, означает точку присоединения простой, двойной или тройной связи к остальной части молекулы.

Термины "алкокси", "алкиламино" и "алкилтио" (или тиоалкокси) применяются в их обычном смысле и относятся к алкильным группам, присоединенным к остальной части молекулы через атом кислорода, аминогруппу или атом серы, соответственно. Кроме того, для диалкиламино-групп, алкильные фрагменты могут быть одинаковыми или разными, а также могут объединяться с формированием 3-7-членного цикла с атомом азота, к которому они присоединены. Соответственно, группа, изображаемая как -NR^aR^b, включает пиперидинил, пирролидинил, морфолинил, азетидинил и т.п.

Термин "ди-(С_1-4 алкил)амино-С_1-4 алкил" означает амино-группу, несущую две С_1-4 алкильные группы, которые могут быть одинаковыми или разными (например, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил) и которые присоединены к остальной части молекулы через С_1-4 алкильную группу (алкиленовая мостиковая группа с 1-4 атомами углерода). Примеры ди-(С_1-4 алкил)амино-С_1-4 алкильных групп включают диметиламинометил, 2-(этил(метил)амино)этил, 3-(диметиламино)бутил и т.п.

Термин "галоген" сам по себе или как часть другого заместителя означает, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или иода. Кроме того, такие термины как "галогеналкил" включают моногалогеналкил и полигалогеналкил. Например, термин "С_1-4 галогеналкил" включает трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3-бромпропил и т.п.

Термин "арил" означает, если не указано иное, полиненасыщенную, в типичном случае ароматическую углеводородную группу, которая может представлять собой один цикл или несколько циклов (до трех циклов), сопряженные или связанные ковалентно. Термин «гетероарил» относится к арильным группам (или циклам), содержащим от одного до пяти гетероатомов, выбранных из N, О, и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом(ы) азота необязательно кватернизован(ы). Гетероарильная группа может быть присоединена к остальной части молекулы через гетероатом. Неограничивающие примеры арильных групп включают фенил, нафтил и бифенил, в то время как неограничивающие примеры гетероарильных групп включают пиридил, пиридазинил, пиразинил, пиримидинил, триазинил, хинолинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолил, фталазинил, бензотриазинил, пуринил, бензоимидазолил, бензопиразолил, бензотриазолил, бензизоксазалил, изобензофурил, изоиндолил, индолизинил, бензотриазинил, тиенопиридинил, тиенопиримидинил, пиразолопиримидинил, имидазопиридины, бензотиаксолил, бензофуранил, бензотиенил, индолил, хинолил, изохинолил, изотиазолил, пиразолил, индазолил, птеридинил, имидазолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, пирролил, тиазолил, фурил, тиенил и т.п. Заместители в каждом из перечисленных выше арильных или гетероарильных циклических систем выбраны из группы приемлемых заместителей, описанных выше.

Термин "арилалкил" охватывает радикалы, в которых арильная группа присоединена к алкильной группе (например, бензил, фенетил и т.п.). Аналогично, термин "гетероарил-алкил" охватывает радикалы, в которых гетероарильная группа присоединена к алкильной группе (например, пиридилметил, тиазолилэтил и т.п.).

Указанные выше термины (например, "алкил", "арил" и "гетероарил") в некоторых вариантах осуществления включают как замещенные, так и незамещенные формы указанного радикала. Предпочтительные заместители для каждого типа радикала перечислены ниже.

Заместителями в алкильных радикалах (включая группы, которые часто именуются алкилен, алкенил, алкинил и циклоалкил) могут быть различные группы, выбранные из: -галоген, -OR', -NR'R'', -SR', -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)₂R', -NH-C(NH₂)=NH, -NR'C(NH₂)=NH, -NH-C(NH₂)=NR', -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R'', -NR'S(O)₂R'', -CN и -NO₂, в количестве от нуля до (2m'+1), где m' это общее число атомов углерода в таком радикале. R', R'' и R''' каждый независимо означают атом водорода, незамещенный C_1-8 алкил, незамещенный гетероалкил, незамещенный арил, арил, замещенный 1-3 галогенами, незамещенный С_1-8 алкил, C_1-8 алкокси или C_1-8 тиоалкокси группу, или незамещенные арил-С_1-4 алкильные группы. Когда R' и R'' присоединены к одному и тому же атому азота, они могут объединяться с атомом азота с образованием 3-, 4-, 5-, 6- или 7-членного цикла. Например, -NR'R'' включает 1-пирролидинил и 4-морфолинил.

Аналогично, заместители в арильных и гетероарильных группах варьируются и обычно выбраны из: -галоген, -OR', -OC(O)R', -NR'R'', -SR', -R', -CN, -NO₂, -CO₂R', -CONR'R'', -C(O)R', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR''C(O)₂R', -NR'-C(O)NR''R''', -NH-C(NH₂)=NH, -NR'C(NH₂)=NH, -NH-C(NH₂)=NR', -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R'', -NR'S(O)₂R'', -N₃, перфтор(С₁-С₄)алкокси, и перфтор(С₁-С₄)алкил, в количестве от нуля до общего числа незанятых валентностей в ароматической циклической системе; и где R', R'' и R''' независимо выбраны из атома водорода, C_1-8 алкила, С_3-6 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, незамещенного арила и гетероарила, (незамещенный арил)-С_1-4 алкила и незамещенный арилокси-С_1-4 алкила. Другие подходящие заместители включают каждый из перечисленных выше заместителей для арила, присоединенных к атому в цикле алкиленовым мостиком из 1-4 атомов углерода.

Два из заместителей у соседних атомов арильного или гетероарильного кольца могут опционально быть замещены заместителем формулы -T-C(O)-(CH₂)_q-U-, где Т и U независимо представляют собой -NH-, -О-, -CH₂- или одинарную связь, и q представляет собой целое число от 0 до 2. Альтернативно, два из заместителей у соседних атомов арильного или гетероарильного кольца могут опционально быть замещены заместителем формулы -А-(СН₂)_r-В-, где А и В независимо представляют собой -CH₂-, -О-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)₂-, -S(O)₂NR'- или одинарную связь, и r представляет собой целое число от 1 до 3. Одна из простых связей в новом цикле, образующемся таким образом, может опционально быть заменена на двойную связь. Альтернативно, два из заместителей у соседних атомов арильного или гетероарильного кольца могут опционально быть замещены заместителем формулы -(CH₂)_s-X-(CH₂)_t-, где s и t независимо представляют собой целые числа от 0 до 3, и X представляет собой -О-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)₂- или -S(O)₂NR'-. Заместитель R' в -NR'- и -S(O)₂NR'- выбран из атома водорода или незамещенного С_1-6 алкила.

При использовании в настоящем тексте, термин "гетероатом" включает в себя кислород (О), азот (N), серу (S) и кремний (Si).

Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает соли действующих веществ, полученные с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей в описанных в настоящем тексте соединениях. Когда соединения по настоящему изобретению содержат относительно кислые функциональные группы, можно получить основно-аддитивные соли путем взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количество желаемого основания, даже без растворителя или в подходящем инертном растворителе. Примеры солей, являющихся производными фармацевтически приемлемых неорганических оснований, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа (II), железа (III), лития, магния, марганца, калия, натрия, цинка и т.д. Соли, являющиеся производными фармацевтически приемлемых органических оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, включая замещенные амины, циклические амины, природные амины и т.д., такие как аргинин, бетаин, кофеин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метил глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, тиэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п. Когда соединения по настоящему изобретению содержат относительно основные функциональные группы, можно получить кислотно-аддитивные соли путем взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, без растворителя или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей включают соли с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная, бромистоводородная азотная, угольная, моногидроугольная, фосфорная, моногидрофосфорная, дигидрофосфорная, серная, моногидросерная, иодистоводородная или фосфористая кислота и т.п., а также соли с относительно нетоксичными органическим кислотами, такими как уксусная, пропионовая, изомасляная, малоновая, бензойная, янтарная, субериновая, фумаровая, миндальная, фталевая, бензолсульфоновая, паратолуолсульфоновая, лимонная, винная, метансульфоновая и т.п. Также охватываются соли с аминокислотами, такие как аргинаты и т.п., и соли таких органических кислот, как глюкуроновая или галактуроновая кислоты и т.п. (см, например, Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Некоторые частные соединения по настоящему изобретению содержат и основные, и кислотные функциональные группы, что позволяет таким соединениям образовывать как основно-аддитивные, так и кислотно-аддитивные соли.

Нейтральные формы соединений можно регенерировать путем взаимодействия соли с основанием или кислотой и выделения материнского соединения обычным способом. Материнская форма соединения отличается от различных солевых форм определенными физическими характеристиками, такими как растворимость в полярных растворителях, но во всем остальном соли эквивалентны материнским соединениям, в терминах настоящего изобретения.

Помимо солевых форм, в настоящем изобретении описаны соединения, представляющие собой пролекарственные формы. Пролекарства описанных в настоящем тексте соединений представляют собой соединения, которые легко претерпевают химические изменения в физиологических условиях, давая соединения по настоящему изобретению. Кроме того, пролекарства можно превратить в соединения по настоящему изобретению химическими или биохимическими методами в ex vivo условиях. Например, пролекарства можно медленно превратить в соединения по настоящему изобретению при помещении их в резервуар пластыря для чрескожного введения с подходящим ферментативным или химическим реагентом.

Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратированные формы. В целом, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам, и все они охватываются настоящим изобретением. Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в нескольких кристаллических или аморфных формах. В целом, все физические формы эквивалентны для областей применения, охватываемых настоящим изобретением, и входят в объем настоящего изобретения.

Некоторые соединения по настоящему изобретению имеют асимметрические атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; все рацематы, диастереомеры, геометрические изомеры, региоизомеры и индивидуальные изомеры (например, отдельные энантиомеры) входят в объем настоящего изобретения. Соединения по настоящему изобретению могут также иметь неприродные соотношения изотопов по одному или больше атомов, составляющих эти соединения. Неприродные соотношения изотопов можно определить как находящиеся в диапазоне от природного количества до количества рассматриваемого атома равного 100%. Например, соединения могут быть радиоактивно мечены радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (³Н), иод-125 (¹²⁵I) или углерод-14 (¹⁴С), или нерадиоактивными изотопами, такими как дейтерий (²Н) или углерод-13 (¹³С). Такие вариации изотопов могут открыть дополнительные области применения к описанным в других разделах настоящего описания. Например, изотопные модификации соединений по настоящему изобретению могут найти дополнительное применение, включая (но не ограничиваясь только ими) применение в качестве диагностических и/или визуализирующих реагентов, или в качестве цитотоксических/радиотоксических терапевтических средств. Кроме того, изотопные варианты соединений по настоящему изобретению могут иметь измененные фармакокинетические и фармакодинамические характеристики, которые могут вносить свой вклад в улучшение характеристик безопасности, переносимости или эффективности при лечении. Все изотопные вариации соединений по настоящему изобретению, радиоактивные и нерадиоактивные, входят в объем настоящего изобретения.

Термин «и изостеры кислоты» означает, если не указано иное, группу, которая может заменить карбоновую кислоту, имеющую кислотную функциональность и стерические и электронные характеристики, обеспечивающие уровень активности (или другие характеристики соединения, такие как растворимость) аналогичный карбоновой кислоте. Репрезентативные изостеры кислот включают гидроксамовые кислоты, сульфоновые кислоты, сульфиновые кислоты, сульфонамиды, ацил-сульфонамиды, фосфоновые кислоты, фосфиновые кислоты, фосфорные кислоты, тетразолы и оксо-оксадиазолы.

Соединения по настоящему изобретению, имеющие формулу I, могут существовать в разных изомерных формах. При использовании в настоящем тексте, термины цис или транс используются в их обычном химическом смысле, т.е. означают расположение заместителей по отношению друг к другу относительно условной плоскости, например двойной связи или циклической системы, такой как циклическая система декалинового типа или гидрохиноновая циклическая система: в цис-изомере заместители находятся по одну сторону от условной плоскости, в транс-изомере заместители находятся на противоположных сторонах. Кроме того, настоящее изобретение охватывает различные конформеры, а также различающиеся ротамеры. Конформеры представляют собой конформационные изомеры, которые могут различаться из-за затрудненного вращения вкруг одной или более σ связей. Ротамеры представляют собой конформеры, различающиеся вращением вокруг только одной σ связи.

I. Общие замечания

Настоящее изобретение имеет в своей основе открытие, состоящее в том, что соединения формулы I работают как сильные антагонисты CCR1 рецептора. Соединения обладают противовоспалительной активностью in vivo и обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами. Соответственно, описанные в настоящем тексте соединения могут применяться в фармацевтических композициях, способах лечения CCR1-опосредуемых заболеваний, и в качестве контрольных соединений в тестах на идентификацию конкурентоспособных CCR1-антагонистов.

II. Соединения

В одном аспекте, в настоящем изобретении описано соединение формулы I:

или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, сольват, N-оксид или ротамер. В формуле I буква n представляет собой целое число от 0 до 3;

(i) моноциклического или сопряженно-бициклического арила и гетероарила, где гетероарильная группа содержит 1-4 гетероатомов в качестве членов цикла, выбранных из N, О и S;

(ii) моноциклического 4-, 5-, 6- или 5-членного кольца, выбранного из группы, состоящей из циклоалкана и гетероциклоалкана, где гетероциклоалкановые кольца содержат 1-3 гетероатомов в качестве членов цикла, выбранных из N, О и S;

где каждое из колец в (i) и (ii) необязательно содержит 1-5 заместителей, выбранных из галогена, CN, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, С_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, арила, 5- или 6-членного гетероарила, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероциклоалкана, где гетероатомы, присутствующие в качестве членов кольца в гетероарильном и гетероциклоалкановом кольце, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные, арильные, гетероарильные и гетероциклоалкановые фрагменты заместителей необязательно дополнительно замещены 1-3 заместителями R^a; и необязательно два заместителя на соседних атомах кольца соединены с образованием дополнительного 5- или 6-членного кольца, которое является насыщенным, ненасыщенным или ароматическим, и члены этого цикла выбраны из С, О, N и S;

R³ является представителем, выбранным из группы, состоящей из Н, галогена, CN, С_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, арила, 5- или 6-членного гетероарила, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероцикла, где гетроатомы, присутствующие в качестве членов цикла в гетероарильном и гетероциклическом кольце, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные, арильные, гетероарильные и гетероциклические фрагменты в R³ необязательно дополнительно замещены 1-3 заместителями R^a;

R⁴ является представителем, выбранным из группы, состоящей из Н, -OR^a и C_1-8 алкила, необязательно имеющего заместитель -OR^a;

R⁹ является представителем, выбранным из группы, состоящей из Н и C_1-8 алкила, необязательно имеющего заместитель -OR^a;

каждый R^a и R^b независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, гидроксила, галогена, циано-группы, С_1-8 алкила, C_1-8 алкокси, C_1-8 галогеналкила, С_3-6 циклоалкила, С_3-6 циклоалкилалкила, амино-группы, C_1-8 алкиламино, ди C_1-8 алкиламино, карбоксамида, карбокси С_1-4 алкилового эфира, карбоновой кислоты и -SO₂-C_1-8 алкила.

В некоторых частных вариантах осуществления, соединения формулы I представлены формулой Ia:

где А¹ представляет собой N или C(R⁵); А² представляет собой N или C(R⁷); и R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ каждый независимо выбраны из Н, галогена, CN, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, арила, 5- или 6-членного гетероарила, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероциклоалкана, где гетероатомы, присутствующие в качестве членов кольца в гетероарильном и гетероциклоалкановом кольце, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные, арильные, гетероарильные и гетероциклоалкановые фрагменты R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ необязательно дополнительно замещены 1-3 заместителями R^a; и опционально, соседние фрагменты в R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ соединены с образованием дополнительного 5- или 6-членного кольца, которое является насыщенным, ненасыщенным или ароматическим и содержит члены циклов, выбранные из С, О, N и S; или их фармацевтически приемлемые соли, гидраты, сольваты, ротамеры или N-оксиды.

В других частных вариантах осуществления, соединения формулы Ia представляют собой такие соединения, где R⁸ отличается от Н.

В других частных вариантах осуществления, соединения формулы Ia представлены формулой Ib:

где R¹ и R² каждый независимо выбраны из Н, галогена, CN, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила, С_2-8 алкенила, С_2-8 алкинила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила, -OR^a, -CO₂R^a, -SO₂R^a, -NR^aR^b, -CONR^aR^b, и 3-, 4-, 5- или 6-членного гетероциклоалкана, где гетероатомы, являющиеся членами цикла в гетероциклоалкановом кольце, выбраны из N, О и S, и где алкильные, циклоалкильные и гетероциклоалкановые фрагменты в R¹ и R² необязательно дополнительно замещены 1-3 заместителями R^a.

В частных вариантах осуществления формулы Ib, каждый R¹ и R² независимо выбран из Н, галогена, CN, C_1-8 алкила, C_1-8 галогеналкила, -CO₂R^a и -SO₂R^a.

В других частных вариантах соединения формулы Ib, циклические фрагменты, содержащие N, А¹ и А² в качестве членов цикла, выбраны из:

В других частных вариантах соединений формулы Ib, циклические фрагменты, содержащие N, А¹ и А² в качестве членов цикла, выбраны из:

где R⁷ представляет собой Н или Cl, и R⁸ представляет собой C_1-8 алкил, необязательно имеющий 1 или 2 заместителя R^a.

В других частных вариантах формулы Ib, R⁹ представляет собой Н или СН₃.

Возвращаясь к формуле I, некоторыми частными вариантами осуществления являются соединения, отвечающие формуле Ic:

где буква n означает 1, 2 или 3. Другими частными вариантами осуществления являются варианты, в которых n равно 1.

В других частных вариантах осуществления, соединения формулы Ib представляют собой соединения, отвечающие формуле Ib1:

где R¹ представляет собой Cl или F.

В других частных вариантах осуществления, соединения формулы Ib1 представлены формулами Ib1a, Ib1b и Ib1c.

В некоторых частных вариантах формулы Ib, указанные соединения представлены формулой Ib2:

где R¹ представляет собой Cl или F.

В некоторых частных вариантах формулы Ib, указанные соединения представлены формулами Ib3a, Ib3b и Ib3c.

В частных вариантах осуществления любых из формул I, Ia, Ib, Ic, Ib1, Ib1a, Ib1b, Ib1c, Ib2, Ib3a, Ib3b и Ib3c, R³ выбран из H, C_1-8 алкила, С_3-8 циклоалкила и С_2-8 алкенила.

Получение соединений

Схемы в приведенных далее Примерах описывают некоторые синтетические пути, которые могут использоваться для получения некоторых соединений по настоящему изобретению. Другие пути или модификации путей, описанных ниже, будут понятны квалифицированному специалисту в данной области и находятся в рамках объема настоящего изобретения.

II. Фармацевтические композиции

Помимо описанных выше соединений, композиции для модулирования активности CCR1, CCR2 и CCR3 у человека и животных в типичном случае содержат фармацевтический носитель или разбавитель.

Термин "композиция" при использовании в настоящем тексте охватывает продукт, содержащий указанные ингредиенты в указанных количествах, а также любой продукт, получающийся напрямую или косвенно при комбинации указанных ингредиентов в указанных количествах. Термин «фармацевтически приемлемый» означает, что носитель, разбавитель или вспомогательное вещество должны быть совместимы с другими ингредиентами в препарате и не наносить вреда пациенту, принимающему препарат.

Фармацевтические композиции для введения соединений по настоящему изобретению удобно выпускать в единичной лекарственной форме, и их можно приготовить любым из методов, хорошо известных в области фармацевтики и введения лекарственных средств. Все методы включают стадию соединения действующего вещества с носителем, который содержит один или несколько вспомогательных ингредиентов. В целом, фармацевтические композиции готовят путем однородного и равномерного смешивания действующего вещества с жидким носителем или тонко измельченным твердым носителем, или с обоими, и затем, при необходимости, формования продукта в желаемый препарат. В фармацевтическую композицию действующее вещество включают в количестве, достаточном для достижения желаемого эффекта при болезненном процессе или состоянии.

Фармацевтические композиции, содержащие действующее вещество, могут иметь форму, подходящую для перорального применения, например форму таблеток, пастилок, ромбовидных таблеток, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул, эмульсий и самоэмульгирующихся составов, как описано в патенте США 6451339, твердых или мягких капсул, сиропов, эликсиров, растворов, буккальных пластырей, гелей для перорального применения, жевательной резинки, жевательных таблеток, шипучих порошков и шипучих таблеток. Композиции для перорального применения можно приготовить согласно любым методам, известным в области производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать одно или больше средств, выбранных из группы, состоящей из подсластителей, ароматизаторов, красителей, антиоксидантов и консервантов, для создания фармацевтически удачных и приятных на вид препаратов. Таблетки содержат действующее вещество в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, которые подходят для производства таблеток. Такими вспомогательными веществами могут быть, например, инертные разбавители, такие как целлюлоза, диоксид кремния, оксид алюминия, карбонат кальция, карбонат натрия, глюкоза, маннит, сорбит, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия, гранулирующие средства и разрыхлители, например кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие средства, например поливинилпирролидон, целлюлоза, ПЭГ, крахмал, желатин или камедь акации, и лубриканты, например стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут не иметь покрытия или могут иметь нанесенное покрытие, которое растворяется в кишечнике или другим известным образом замедляет распад и всасывание в желудочно-кишечном тракте, тем самым обеспечивая продолжительное действие в течение длительного периода времени. Например, можно применять замедляющее вещество, такое как глицерил моностеарат или глицерил дистеарат. Также таблетки могут иметь покрытие, нанесенное по методике, описанной в патенте США 4256108; 4166452 и 4265874, с формированием осмотических терапевтических таблеток с замедленным высвобождением.

Препараты для перорального применения могут также иметь вид твердых желатиновых капсул, в которых действующее вещество смешано с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или вид мягких желатиновых капсул, в которых действующее вещество смешано с водной или масляной средой, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом. Кроме того, эмульсии могут быть приготовлены с несмешивающимся с водой ингредиентом, таким как масло, и стабилизированы поверхностно-активными веществами, такими как моно-диглицериды, ПЭГ-эфиры и т.п.

Водные суспензии содержат действующие вещества в смеси со вспомогательными веществами, подходящими для производства водных суспензий. Такими вспомогательными веществами являются суспендирующие средства, например натрия карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидрокси-пропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и смола акации; диспергирующие и смачивающие средства, которые могут представлять собой природные фосфатиды, например лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтилен стеарат, продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гекситола, такие как полиоксиэтилен сорбитол моноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гекситол-ангидридами, например полиэтилен сорбитан моноолеат. Водные суспензии могут также содержать один или больше консервантов, например этил или н-пропил парагидроксибензоат, один или больше красителей, один или больше ароматизаторов, и один или больше подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Масляные суспензии можно приготовить суспендированием действующего вещества в растительном масле, например в арахисовом масле, оливковом масле, сезамовом масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Можно добавлять подсластители, такие как описанные выше, и ароматизаторы для получения приятного препарат для перорального приема. Такие композиции можно консервировать добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для приготовления водных суспензий путем добавления воды, содержат действующее вещество в смеси с диспергирующим или смачивающим средством, суспендирующим средством и одним или больше консервантами. Примерами подходящих диспергирующих и смачивающих средств могут являться вещества, уже упомянутые выше. Также могут присутствовать дополнительные вспомогательные вещества, например подсластители, ароматизаторы и красители.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также иметь форму эмульсий типа масло-в-воде. Масляной фазой может служить растительное масло, например оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, например жидкий парафин, или их смесь. Подходящими эмульгаторами могут быть природные смолы, например смола акации или трагакантовая камедь, природные фосфатиды, например соевое масло, лецитин, и сложные эфиры или неполные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и гекситол-ангидридов, например сорбитан моноолеат, и продукты конденсации указанных неполных сложных эфиров с этиленоксидом, например полиоксиэтилен сорбитан моноолеат. Эмульсии могут также содержать подсластители и ароматизаторы.

В сиропы и эликсиры можно добавлять подсластители, например глицерин, пропиленгликоль, сорбит и сахарозу. Такие препараты могут также содержать мягчитель, консервант, ароматизатор и краситель. Композиции для перорального приема можно готовить в комбинации с циклодекстрином, ПЭГ и поверхностно-активными веществами.

Фармацевтические композиции могут иметь форму стерильных инъецируемых водных или масляных суспензий. Такую суспензию можно готовить согласно методам из существующего уровня техники, применяя перечисленные выше подходящие диспергирующие или смачивающие средства, а также суспендирующие средства. Стерильный инъецируемый препарат может также представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле. Среди подходящих носителей и растворителей, которые могут применяться, можно упомянуть воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла широко применяются в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно применять любую марку жирного масла, включая синтетические моно- и диглицериды. Кроме того, в препаратах для инъекций нашли применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Соединения по настоящему изобретению можно также вводить в форме суппозиториев для ректального введения лекарственных препаратов. Такие композиции можно готовить смешиванием лекарственного средства с подходящим нераздражающим вспомогательным веществом, которое является твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре, и поэтому плавится в заднем проходе, высвобождая лекарственное средство. Такие вещества включают масло какао и полиэтиленгликоли. Кроме того, соединения можно вводить через глаза посредством растворов или мазей. Кроме того, можно осуществлять чрескожное введение рассматриваемых соединений посредством ионофоретических пластырей и т.п. Для местного нанесения применяют кремы, мази, гели, растворы или суспензии и т.д., содержащие соединения по настоящем изобретению. При использовании в настоящем тексте, местное нанесение включает применение жидкостей для промывания и полоскания для рта.

Соединения по настоящему изобретению можно депонировать в медицинском устройстве, которое может включать любые общеизвестные имплантаты, стенты, стент-графты, катетеры, баллоны, кассеты или другие устройства, которые можно расправлять или перманентно имплантировать в полости тела. В частности, было бы желательно получить устройства и методы, которые позволяют доставлять соединения по настоящему изобретению в участок тела, который подвергался хирургическому вмешательству.

В частном варианте осуществления, ингибирующее средство по настоящему изобретению можно депонировать в медицинском устройстве, таком как стент, и доставлять в определенную часть тела для лекарственного воздействия на определенный участок тела.

Стенты применяют как средство доставки терапевтических средств (например, лекарственных средств). Внутрисосудистые стенты обычно перманентно имплантируют в коронарные или периферические сосуды. Конструкция стента включает описанную в патенте США №4733655 (Palmaz), 4800882 (Gianturco) или 4886062 (Wiktor). Такие конструкции включают и металлические, и полимерные стенты, а также саморасширяющиеся и баллон-расширяющиеся стенты. Стенты можно также использовать для доставки лекарственных средств в месте контакта с сосудистой системой, как описано в патенте США №5102417 (Palmaz) и в международной заявке на патент WO 91/12779 (Medtronic, Inc.) и WO 90/13332 (Cedars-Sanai Medical Center), патенте США №5419760 (Narciso, Jr.) и патенте США №5429634 (Narciso, Jr.), например. Стенты также применялись для доставки вирусов в стенки полости тела с целью доставки генов, как описано в заявке на патент США 5833651 (Donovan et al.).

Термин «депонированный» означает, что ингибирующее средство покрыто покрытием, адсорбировано, размещено или каким-либо иным образом введено в устройство известными в данной области техники способами. Например, ингибирующее средство может быть введено в состав полимерного материала и высвобождаться из него («матриксный тип») или окружено полимерным материалом, который покрывает или ограничивает медицинское устройство, и высвобождаться через него («резервуарный тип»). Во втором случае, ингибирующее средство может быть заключено в полимерные материалы или объединено с полимерными материалами посредством одного или более методов получения таких материалов, известных в данной области. В других препаратах, ингибирующее средство может быть связано с поверхностью медицинского устройства, без необходимости нанесения покрытия, посредством разрушаемых связей и высвобождаются с течением времени, и могут быть удалены в результате активных механических или химических процессов, или находятся в перманентно иммобилизованной форме, которая доставляет ингибирующее средство в место имплантирования.

В одном варианте осуществления, ингибирующее вещество может включаться в состав полимерной композиции во время формирования биосовместимых покрытий для медицинских устройств, таких как стенты. Покрытия, получаемые из таких компонентов, обычно гомогенные и могут применяться в качестве покрытий во многих устройствах, предназначенных для имплантирования.

Полимер может быть биоустойчивым или биоабсорбируемым полимером, в зависимости от целевой скорости высвобождения целевой степени стабильности полимера, но биоабсорбируемый полимер предпочтителен для данного варианта осуществления, поскольку, в отличие от биоустойчивого полимера, он не будет существовать в течение долгого времени после имплантирования и не будет вызывать какой-либо нежелательной хронической локальной реакции. Биоабсорбируемый полимер, подходящий для применения, включает (но не ограничивается только ими) поли(L-молочную кислоту), поликапролактон, полигликолид (PGA), поли(лактид-со-гликолид) (PLLA/PGA), поли(гидроксибутират), поли(гидроксибутират-со-валерат, полидиоксанон, полиортоэфир, полиангидрид, поли(гликолевую кислоту), поли(D-молочную кислоту), поли(L-молочную кислоту), поли(D,L-молочную кислоту), поли(D,L-лактид) (PLA), поли(L-лактид) (PLLA), поли(гликолевая кислота-со-триметиленкабонат) (PGA/PTMC), полиэтиленоксид (РЕО), полидиоксанон (PDS), полифосфоэфир, полифосфоэфир уретан, поли(аминокислоты), цианоакрилаты, поли(триметиленкарбонат), поли(иминокарбонат), сополи(эфир-эфиры) (например, PEO/PLA), полиалкилен оксалаты, полифосфазены и биомолекулы, такие как фибрин, фибриноген, целлюлоза, крахмал, коллаген и гиалуроновая кислота, полиэпсилон-акпролактон, полигидроксибутановая кислота, полиортоэфиры, полиацетали, полидигидропираны, полицианоакрилаты, сшитые или амфипатические блок-сополимеры гидрогелей, и другие подходящие биоабсорбируемые полимеры, известные в данной области. Кроме того, могут применяться биоустойчивые полимеры с относительно слабым хронической тканевой реакцией, такие как полиуретаны, силиконы и полиэфиры, а также могут применяться другие полимеры, если они растворяются и затвердевают или полимеризуются на медицинских устройствах, такие как полиолефины, полиизобутилен и этилен-альфа-олефиновые сополимеры; акриловые полимеры и сополимеры, винилгалогенидные полимеры и сополимеры, такие как поливинилхлорид; поливинилпирролидон; поливиниловые эфиры, такие как поливинилметиловый эфир; поливинилиденгалогениды, такие как поливинилиден фторид и поливинилиденхлорид; полиакрилонитрил, поливинилкетоны; поливинил-ароматические соединения, такие как полистирол, поливиниловые эфиры, такие как поливинилацетат; сополимеры виниловых мономеров друг с другом и с олефинами, такие как этилен-метил метакрилат сополимеры, акрилонитрил-стирольные сополимеры, ABS-полимеры, и этилен-винилацетатные сополимеры; сополимеры пирана; полигидрокси-пропил-метакриламид-фенол; полигидроксиэтил-аспартамид-фенол; полиэтиленоксид-полилизин, замещенный польмитоиловыми остатками; полиамиды, такие как Nylon 66 и поликапролактам; алкидные смолы, поликарбонаты, полиоксиметилены; полиимиды; полипростые эфиры; эпоксидные смолы, полиуретаны; район; район-триацетат; целлюлоза, ацетат целлюлозы, бутират целлюлозы; ацетат-бутират целлюлозы; целлофан; нитрат целлюлозы; пропионат целлюлозы; простые эфиры целлюлозы и карбоксиметил целлюлоза.

Полимеры и полупроницаемые полимерные матриксы можно формовать с получением формованных изделий, таких как клапаны, стенты, трубки, протезы и т.п.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, ингибирующее средство по настоящему изобретению связано с полимером или полупроницаемым полимерным матриксом, сформованным в виде стента или стент-графта.

В типичном случае полимеры наносят на поверхность имплантируемого устройства методом центрифугирования, погружения или распыления. Для этой цели можно применять также другие известные в данной области методы. Методы распыления включают традиционные методы, а также методики микродепонирования с привлечением диспенсера по типу сопла. Кроме того, полимер можно наносить на имплантируемое устройство с применением фотолитографии, для нанесения полимера только на определенные участки устройства. Такое нанесение покрытия на устройство дает однородный слой на устройстве, что улучшает диффузию различных аналитов через покрытие устройства.

В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения, ингибирующее средство вводят в состав препаратов для высвобождения из полимерного покрытия в среду, в которую помещено медицинское устройство. Предпочтительно, ингибирующее средство контролируемо высвобождается в течение продолжительного времени (например, месяцев), с помощью по меньшей мере одной из хорошо известных методик, включающих применение полимерных носителей или слоев для контролируемого вымывания. Некоторые из этих методик были ранее описаны в заявке на патент США 20040243225 А1.

Кроме того, как описано, например, в патенте США №6770729, реагенты и условия реакции для полимерных композиций можно изменять таким образом, что появляется возможность управлять высвобождением ингибирующего средства из полимерного покрытия. Например, можно модулировать коэффициент диффузии для одного или более полимерных покрытий для управления высвобождением ингибирующего средства из полимерного покрытия. Как вариация данной темы, можно управлять коэффициентом диффузии для одного или более полимерных покрытий для модулирования способности аналита, присутствующего в среде, окружающей медицинское устройство (например, аналит, который облегчает распад или гидролиз части полимера), для доступа к одному или более компонентам в полимерной композиции (и, например, для модулирования таким образом высвобождения ингибирующего средства из полимерного покрытия). Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает устройство, имеющее несколько полимерных покрытий, каждое из которых имеет несколько коэффициентов диффузии. В таких вариантах осуществления настоящего изобретения, высвобождение ингибирующего средства из полимерного покрытия можно модулировать несколькими полимерными покрытиями.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, высвобождением ингибирующего средства из полимерного покрытия управляют посредством модулирования одного или более свойств полимерной композиции, таких как наличие одного или больше эндогенных или экзогенных соединений, или альтернативно, pH полимерной композиции. Например, некоторые полимерные композиции можно создавать таким образом, чтобы ингибирующее средство высвобождалось в ответ на понижение pH полимерной композиции. Альтернативно, некоторые полимерные композиции можно создавать таким образом, чтобы ингибирующее средство высвобождалось в ответ на появление пероксида водорода.

III. Способы лечения заболеваний, модулируемых CCR1

В другом аспекте, в настоящем изобретении описаны способы лечения CCR1-опосредуемых состояний или заболеваний путем введения субъекту, страдающему таким заболеванием или состоянием, терапевтически эффективного количества соединения, соответствующего приведенной выше формуле I. Термин "субъект" в настоящем тексте включает животных, таких как млекопитающие, включая (но не ограничиваясь только ими) приматов (например, человека), коров, овец, коз, лошадей, собак, кошек, кроликов, крыс, мышей и т.п.

CCR1 представляет собой мишень для вмешательства в работу или промотирования частных аспектов функций иммунных клеток, или, в более общем смысле, для вмешательства в работу функций, связанных с экспрессированием CCR1 на широком наборе типов клеток млекопитающих, таких как человек. Соединения, ингибирующие CCR1, особенно подходят для модулирования работы моноцитов, макрофагов, лимфоцитов, гранулоцитов, NK клеток, тучных клеток, дендритных клеток и определенных клеток, являющихся производным иммунных (например, остеокласты), в терапевтических целях. Соответственно, настоящее изобретение касается соединений, которые могут применяться для профилактики и/или лечения широкого ряда воспалительных и иммунорегуляторных заболеваний и нарушений (смотри Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9: 1201-1208 (2003)).

Например, быстродействующее соединение, которое ингибирует одну или больше функций CCR1, можно вводить для ингибирования (т.е. уменьшения или профилактики) воспаления или инфильтрации клеток, связанной с иммунным нарушением. В результате можно подавлять один или больше воспалительных процессов, таких как эмиграция или инфильтрация лейкоцитов, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождение медиаторов воспаления. Например, по настоящему способу можно подавлять инфильтрацию моноцитов в место воспаления (например, в поврежденный сустав при артрите, или в ЦНС при рассеянном склерозе).

Аналогично, быстродействующее соединение, промотирующее одну или больше функций CCR1, вводят для стимулирования (индуцирования или усиления) воспалительного ответа, такого как миграция лейкоцитов, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождения медиаторов воспаления, что приводит к благоприятному стимулированию воспалительных процессов. Например, моноциты могут привлекаться для борьбы с бактериальными инфекциями.

Заболевания и состояния, вызванные воспалением, иммунными нарушениями и инфекцией, можно лечить способом по настоящему изобретению. В предпочтительном варианте осуществления, заболевание или состояние является таким, при котором действие иммунных клеток, таких как моноциты, макрофаги, лимфоциты, гранулоциты, NK клетки, тучные клетки, дендритные клетки или некоторые клетки, являющиеся производными иммунных клеток (например, остеокласты), необходимо подавлять или промотировать, для модулирования воспалительного или аутоиммунного ответа.

В одной группе вариантов осуществления, заболевания или состояния, включая хронические заболевания, человека или других видов, можно лечить модуляторами работы CCR1. Такие заболевания или состояния включают: (1) аллергические заболевания, такие как системные анафилактические или гиперсензитивные ответы, аллергия на лекарственные препараты, аллергия на укусы насекомых и пищевые аллергии, (2) воспалительное заболевание кишечника, такое как болезнь Крона, язвенный колит, илеит и энтерит, (3) вагинит, (4) псориаз и воспалительный дерматоз, такой как дерматит, экзема, атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, крапивница и зуд, (5) васкулит, (6) спондилоортропатия, (7) склеродермия, (8) астма и аллергические респираторные заболевания, такие как астма, аллергическая астма, аллергический ринит, гиперчувствительность легких и т.п., (9) аутоиммунные заболевания, такие как фибромиалгия, склеродермия, анкилозирующий спондилоартрит, юношеский ревматоидный артрит, синдром Стилла, многосуставный юношеский ревматоидный артрит, олигосуставный юношеский ревматоидный артрит, ревматическая полимиалгия, артрит Такуясу, ревматоидный артрит, псориазный артрит, остеоартрит, многосуставный артрит, множественный склероз, системная красная волчанка, диабет I типа, диабет II типа, диабет I типа (ранние стадии), неврит зрительного нерва, гломерулонефрит и т.п., (10) отторжение трансплантата, включая отторжение аллотрансплантата и острая и хроническая реакция «трансплантат против хозяина»), и (11) фиброз (например, фиброз легких (идиопатический фиброз легких, интерстициальный фиброз легких), фиброз на терминальной стадии почечной недостаточности, фиброз вследствие радиационного воздействия, тубулоинтерстициальный фиброз, субэпительиальный фиброз, склеродермия (прогрессирующий системный склероз), фиброз печени (включая вызванный алкогольным или вирусным гепатитом), первичный и вторичный цирроз), (12) острое и хроническое воспаление легких (хроническое обструктивное заболевание легких, хронический бронхит, синдром расстройства дыхания у взрослых, синдром острой дыхательной недостаточности у детей, комплексный иммунный альвеолит) и (13) другие заболевания, при которых необходимо подавить нежелательные воспалительные ответы или иммунные нарушения, такие как сердечно-сосудистые заболевания, включая атеросклероз, васкулярное воспаление вследствие пересадки тканей или во время рестеноза (включая, но не ограничиваясь: рестеноз после ангиопластики и/или стентирования), другие острые и хронические воспалительные состояния, такие как миозит, нейродегенеративные заболевания (например, болезнь Альцгеймера), энцефалит, менингит, гепатит, нефрит, сепсис, саркоидоз, аллергический конъюнктивит, отит, синусит, синовиальное воспаление вследствие артроскопии, гиперуремия, травма, ишемическое реперфузионное повреждение, назальный полиоз, преэклампсия, красный плоский лишай ротовой полости, синдром Гийена-Барре, грануломатоз, состояния, связанные с выработкой лептина, синдром Бехчета и подагра, и в области заживления ран, (14) иммунно-опосредованные пищевые аллергии, такие как глютеновая болезнь, и (15) заболевания, связанные с дисрегуляцией остеокластов, включая остеопороз и остеолитическое заболевание костей, вызванное раковыми заболеваниями, такими как множественная миелома.

В другой группе вариантов осуществления, заболевания или состояния можно лечить добавлением модуляторов работы CCR1. Примеры заболеваний, которые лечат модуляторами работы CCR1, включают раковые заболевания (первичные и метастатические) (например, множественная миелома; Hata, Н., Leukemia & Lymphoma, 2005, 46(7); 967-972), сердечно-сосудистые заболевания, заболевания, при которых играют определенную роль ангиогенез и образование новых сосудов (неопластические заболевания, ретинопатия и мышечная дегенерация), инфекционные заболевания (вирусные инфекции, например инфекции ВИЧ и PC-вирус, бактериальные инфекции) и иммунодепрессивные заболевания, такие как состояние после пересадки органа и состояние после пересадки кожи. Термин «состояние после пересадки органа» включает состояния после пересадки костного мозга и состояния после пересадки солидного органа (например, почки, печени, легкого, сердца, поджелудочной железы или их комбинации).

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также подавлять выработку металлопротеиназ и цитокинов в местах воспаления, напрямую или косвенно (как следствие пониженной инфильтрации клеток), обеспечивая таким образом преимущество при борьбе с заболеваниями или состояниями, связанными с этими цитокинами.

Соединения по настоящему изобретению, соответственно, могут применяться в профилактике и лечении широкого ряда воспалительных и иммуннорегуляторных состояний и заболеваний.

В зависимости от заболевания, которое необходимо вылечить, и от состояния пациента, соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально, парентерально (например, внутримышечно, интраперитонеально, внутривенно, интрацеребрально, интрацистерниальными инъекциями или инфузиями, подкожной инъекцией или в виде имплантата), в виде спрея для ингаляций, назально, вагинально, ректально, сублингвально, или местно, и их можно вводить в состав препаратов индивидуально или совместно, в составе подходящих дозированных лекарственных форм, содержащих общеупотребимые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и растворители, подходящие для каждого способа введения.

Квалифицированным специалистам в данной области будет понятно, что средства, которые модулируют активность CCR1, можно комбинировать в режимах лечения с другими терапевтическими средствами и/или с хемотерапевтическими средствами или с облучением. В некоторых случаях, количество хемотерапевтического средства или облучения является количеством, которое было бы субтерапевтическим, если бы оно применялось не в комбинации с композицией по настоящему изобретению. Квалифицированным специалистам в данной области будет понятно, что «комбинации» могут включать комбинации при лечении (т.е. два или более лекарственных средств могут вводиться в виде смеси, или по меньшей мере одновременно, или по меньшей мере вводиться пациенту в разное время, но таким образом, что оба средства находятся в кровотоке пациента в одно и то же время). Кроме того, композиции по настоящему изобретению можно вводить до или после второго режима дозирования, например до или после применения дозы химиотерапии или облучения.

При лечении или профилактике состояний, требующих модулирования хемокинового рецептора, подходящий уровень дозировок в целом составляет примерно от 0,001 до 100 мг на килограмм веса тела пациента в день, которые можно вводить в виде одной или нескольких доз. Предпочтительно, уровень дозировки составляет от примерно 0,01 до примерно 25 мг/кг в день; более предпочтительно от примерно 0,05 до примерно 10 мг/кг в день. Подходящий уровень дозировки может составлять примерно от 0,01 до 25 мг/кг в день, примерно от 0,05 до 10 мг/кг в день, или примерно от 0,1 до 5 мг/кг в день. В указанном диапазоне, дозировка может составлять от 0,005 до 0,05, от 0,05 до 0,5 или от 0,5 до 5,0 мг/кг в день. При пероральном введении, композиции предпочтительно выпускаются в форме таблеток, содержащих от 1,0 до 1000 миллиграммов действующего вещества, в частности 1,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 и 1000,0 миллиграммов действующего вещества, для симптоматического регулирования дозировки для пациента, проходящего лечение. Соединения можно вводить в режиме от 1 до 4 раз в день, предпочтительно один или два раза в день.

Однако следует понимать, что конкретная дозировка и частота введения для каждого конкретного пациента могут варьироваться и зависят от различных факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, метаболическую стабильность и длительность действия соединения, возраст, вес тела, наследственность, общее состояние здоровья, пол и диету пациента, а также путь и время введения, скорость выведения, комбинацию с другими лекарственными средствами и тяжесть конкретного заболевания у пациента, проходящего терапию.

Описанными соединениями, композициями и способами можно лечить заболевания и состояния, связанные с воспалением, иммунным нарушением, инфекцией и раковым заболеванием.

Соединения и композиции по настоящему изобретению можно комбинировать с другими соединениями и композициями, имеющими соответствующее применение в целях профилактики и лечения интересующих состояний или заболеваний, таких как воспалительные или аутоиммунные нарушения, состояния и заболевания, включая воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, остеоартрит, псориазный артрит, многосуставный артрит, множественный склероз, аллергические заболевания, псориаз, атопический дерматит и астма, а также перечисленные выше патологии.

Например, при лечении или профилактике воспаления или аутоиммунных заболеваний, или, например, артрита в комбинации с дегенерацией костной ткани, описанные соединения и композиции можно применять в комбинации с противовоспалительным средством или анальгетиком, такими как опиатный агонист, ингибитор липоксигеназы, такой как ингибитор 5-липоксигеназы, ингибитор циклооксигеназы, такой как ингибитор циклооксигеназы-2, ингибитор интерлейкина, такой как ингибитор интерлейкина-1, NMDA антагонист, ингибитор оксида азота или ингибитор синтеза оксида азота, нестероидное противовоспалительное средство или цитокин-супрессирующее противовоспалительное средство, например, с таким соединением как ацетаминофен, аспирин, кодеин, фентанил, ибупрофен, индометацин, кеторолак, морфин, напроксен, фенацетин, пироксикам, стероидный анальгетик, суфентанил, сунлиндак, тенидап и т.п. Аналогично, описанные соединения и композиции можно вводить совместно с перечисленными выше анальгетиками: потенциатором, таким как кофеин, Н2 антагонистом (например, ранитидином), симетиконом, гидроксидом алюминия или магния, противоотечным средством, таким как фенилэфрин, фенилпропаноламин, псевдоэфедрин, оксиметазолин, эпинефрин, нафазолин, ксилометазолин, пропилгекседрин или лево-дезоксиэфедрин; противокашлевыми средствами, такими как кодеин, гидрокодон, карамифен, карбетапентан или декстрометорфан; диуретиками; и седативными или неседативными антигистаминными средствами.

Сходным образом, соединения и композиции по настоящему изобретению можно применять в комбинации с другими лекарственными средствами, которые используются для лечения, профилактики, приостановки или облегчения тяжести заболеваний или состояний, при которых применяются соединения и композиции по настоящему изобретению. Эти другие лекарственные соединения можно вводить обычно применяющимися способами и в обычно применяющихся дозировках, одновременно или последовательно с соединением или композицией по настоящему изобретению. Когда соединение или композиция по настоящему изобретению применяется одновременно с одним или больше другими лекарственными средствами, предпочтительна фармацевтическая композиция, содержащая такие другие лекарственные средства в дополнение к соединению или композиции по настоящему изобретению. Соответственно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают композиции, которые содержат также одно или больше других действующих веществ или терапевтических средств, помимо соединения или композиции по настоящему изобретению. Примеры других терапевтических средств, которые можно комбинировать с соединением или композицией по настоящему изобретению, при введении по отдельности или в составе одной и той же фармацевтической композиции, включают (но не ограничиваются только ими): (a) VLA-4 антагонисты, (b) кортикостероиды, такие как беклометазон, метилпреднизолон, бетаметазон, преднизон, преднизолон, дексаметазон, флутиказон, гидрокортизон, бутезонид, триамцинолон, сальметерол, сальбутамол, форметерол; (с) иммуносупрессанты, такие как циклоспорин (циклоспорин А, Sandimmune®, Neoral®), такролимус (FK-506, Prograf®), рапамицин (сиролимус, Rapamune®), тофацитиниб (Xeljanz®) и другие иммуносупрессанты типа FK-506, и микофенолят, например микофенолят мофетил (CellCept®); (d) антигистаминные средства (антагонисты H1-гистамина), такие как бромфенирамин, хлорфенирамин, дексхлорфенирамин, триплоидин, клемастин, дифенгидрамин, дифенилпиралин, трипеленнамин, гидроксизин, метдилазин, прометазин, тримепразин, азатидин, ципрогептадин, антазолин, фенирамин пириламин, астемизол, терфенадин, лоратадин, цетиризин, фексофенадин, дезкарбоэтоксилоратидин и т.п.; (е) нестероидные антиастматические средства (например, тербуталин, метапротеренол, фенотерол, изоэтарин, альбутерол, битолтерол и пирбутерол), теофиллин, кромолин натрия, атропин, ипратория бромид, лейкотриеновые антагонисты (например, зафирлукаст, монтелукаст, пранлукаст, иралукаст, побилукаст и SKB-106,203), ингибиторы синтеза лейкотриена (зилеутон, BAY-1005); (f) нестероидные противовоспалительные средства (НСПВ), такие как производные пропионовой кислоты (например, алминопрофен, беноксапрофен, буклоксовая кислота, карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флупрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, рниропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен), производные уксусной кислоты (например, индометацин, ацеметацин, алклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозовая кислота, фетиазак, фурофенак, ибуфенак, озоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомепирак), производные фенамовой кислоты (например, флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота, мефенамовая кислота, нифлумовая кислота и толфенамовая кислота), производные бифенилкарбоновой кислоты (например, дифлунизал и флуфенизал), оксикамы (например, изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам), салицилаты (например, ацетилсалициловая кислота и сульфазалазин) и пиразолоны (например, апазон, бензпиперилон, фепразон, мофебутазон, оксифенбутазон и фенилбутазон); (g) ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2), такие как целекоксиб (Celebrex®) и рофекоксиб (Vioxx®); (h) ингибиторы фосфодиэстеразы IV типа (PDE IV); (i) соединения золота, такие как ауранофин и ауротиоглюкоза, (j) этанерцепт (Enbrel®), (k) средства терапии антителами, такие как ортоклон (OKT3), даклизумаб (Zenapax®), базиликсимаб (Simulect®) и инфликсимаб (Remicade®), адалимумаб (Humira®), голимумаб (Simponi®), ритуксимаб (Rituxan®), тоцилизумаб (Actemra®), (l) другие антагонисты хемокиновых рецепторов, в особенности CCR5, CXCR2, CXCR3, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CX₃CR1 и CXCR6; (m) лубриканты или мягчители, такие как петролатум и ланолин, (n) кератолитические средства (например, тазаротен), (o) производные витамина D₃, например, кальципотриен или кальципотриол (Dovonex®), (p) PUVA, (q) антралин (Drithrocreme®), (r) этретинат (Tegison®) и изотретиноин, и (s) средства терапии множественного склероза, такие как интерферон β-1β (Betaseron®), интерферон (β-1α (Avonex®), азатиоприн (Imurek®, Imuran®), глатирамер ацетат (Capoxone®), глюкокортикоид (например, преднизолон) и циклорфосфамид (t) DMARDS, такие как метотрексат, (u) другие соединения, такие как 5-аминосалициловая кислота и ее пролекарства; гидроксихлорохин; D-пеницилламин; антиметаболиты, такие как азатиоприн, 6-меркаптопурин и метотрексат; ингибиторы синтеза ДНК, такие как гидроксимочевина, и вещества, нарушающие работу микротрубочек, такие как колхицин и ингибиторы протеасом, такие как бортезомиб (Velcade®). Весовое соотношение соединения по настоящему изобретению и второго действующего вещества может варьироваться и зависит от эффективной дозировки каждого ингредиента. Обычно применяют эффективную дозировку каждого соединения. Так, например, когда соединение по настоящему изобретению комбинируют с НСПВ, весовое соотношение соединения по настоящему изобретению и НСПВ обычно находится в диапазоне от примерно 1000:1 до примерно 1:1000, предпочтительно от примерно 200:1 до примерно 1:200. Комбинации соединения по настоящему изобретению и других действующих веществ также обычно находятся в указанном выше диапазоне, но в каждом случае должна применяться эффективная дозировка каждого действующего вещества.

IV. Примеры

Приведенные далее примеры предназначены для иллюстрации, а не для ограничения заявленного изобретения.

Реагенты и растворители, использовавшиеся в описанных ниже примерах, можно получить из коммерческих источников, таких как Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, USA). ¹Н-ЯМР спектры записывали на ЯМР-спектрометре Varian Mercury 400 МГц. Химические сдвиги приведены относительно ТМС и табулированы в таком порядке: мультиплетность (с, синглет; д, дублет; т, триплет; кв, квартет; м, мультиплет) и число протонов. Результаты масс-спектрометрии выражены как соотношение массы к заряду, с последующим указанием относительной интенсивности каждого иона (в скобках). В таблицах приведено одно значение m/е для иона М+Н (или если указано, М-Н), содержащего наиболее распространенные изотопы атомов. Во всех случаях картина распределения изотопных пиков соответствует ожидаемой формуле. Масс-спектральный анализ методом электроспрея (ESI) проводили на электроспреевом масс-спектрометре Hewlett-Packard MSD с применением ВЭЖХ HP1100, оснащенного колонкой Agilent Zorbax SB-C18, 2,1×50 мм, 5 мкм, для ввода образца. Обычно аналит растворяли в метаноле в концентрации 0,1 мг/мл, и 1 мкл вводили с растворителем в масс-спектрометр, сканирующий в интервале от 100 до 1500 дальтон. Все соединения можно исследовать методом ESI с детектированием положительных ионов, используя смесь ацетонитрил/вода с 1% муравьиной кислоты в качестве раствора для ввода. Описанные ниже соединения можно также анализировать методом ESI с детектированием отрицательных ионов, используя 2 мМ раствор NH₄OAc в смеси ацетонитрил/вода в качестве раствора для ввода.

Перечисленные далее сокращения используются в Примерах и в остальной части описания настоящего изобретения:

ВЭЖХ, высокоэффективная жидкостная хроматография; ДМФА, диметилформамид; ТФУК, трифторуксусная кислота; ТГФ, тетрагидрофуран; EtOAc, этилацетат; ВОС₂О, ди-третбутил дикарбонат или ВОС-ангидрид; ВЭЖХ, высокоэффективная жидкостная хроматография; DIPEA, диизопропилэтиламин; HBTU, O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат; dppf, 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен; Pd₂(dba)₃, трис(дибензилиденцетон)дипалладий(0); DIPEA, диизопропилэтиламин; DMP, диметилфталат; Me, метил; Et, этил; ДХМ, дихлорметан.

Соединения, входящие в объем настоящего изобретения, можно синтезировать как описано ниже, используя различные реакции, известные квалифицированным специалистам в данной области. Квалифицированному специалисту в данной области будет также понятно, что для синтеза целевых соединений по настоящему изобретению можно применять альтернативные методы, и что описанные в настоящем тексте подходы не являются исчерпывающими, но описывают широко применимые и практичные способы синтеза рассматриваемых соединений.

Некоторые молекулы, заявленные в настоящем патенте, могут существовать в различных энантиомерных и диастереомерных формах, и все такие варианты указанных соединений входят в объем настоящего изобретения.

Подробное описание экспериментальных методик, использованных для синтеза ключевых соединений в настоящем тексте, приводит к молекулам, которые описаны характеризующими их физическими данными, а также относящимися к ним структурными изображениями.

Квалифицированным специалистам в данной области также будет понятно, что в стандартных методиках обработки реакционных смесей часто используются кислоты и основания. В ходе экспериментальных методик, описанных в настоящем патенте, иногда образуются соли материнских соединений, если эти соединения обладают необходимой кислотностью или основностью.

Пример 1. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]-3-[5-метил-3-(трифторметил)-1,2,4-триазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Нитрония тетрафторборат (110 мг, 0,84 ммоль) добавляли в раствор 1-(4-фторфенил)-5-метил-1H-пиразола (120 мг, 0,70 ммоль) в безводном ацетонитриле (5,0 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре. После перемешивания в течение 12 часов, смесь упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20% EtOAc/гексан, получая целевой продукт (53 мг, 0,24 ммоль, 34%) в виде бесцветного масла.

b) Толстостенную стеклянную колбу, содержащую 1-(4-фторфенил)-5-метил-4-нитро-пиразол (50 мг, 0,23 ммоль) со стадии а и 10% Pd/C (10 мг, 20 вес. %) в МеОН (5 мл) помещали в аппарат Парра и интенсивно перемешивали в атмосфере H₂ под давлением 45 фунт/кв. дюйм. Через 1 час реакционную смесь фильтровали через слой целита и полученный фильтрат упаривали в вакууме, получая целевой продукт (240 мг, 1,2 ммоль, 99%) в виде оранжевого масла. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

c) Триметилалюминий (0,25 мл, 2 М раствор в толуоле, 0,50 ммоль) медленно добавляли в раствор 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амина (47 мг, 0,25 ммоль) со стадии b и 3-[5-метил-3-(трифторметил)-1,2,4-триазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (58 мг, 0,25 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (5 мл) в атмосфере азота. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 20 минут, после чего реакцию осторожно гасили добавлением 1-2 капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли дополнительным количеством 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (3×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

d) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (примерное количество 0,25 ммоль) со стадии с и триэтиламина (0,14 мл, 1,0 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (0,040 мл, 0,50 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 15 минут, после чего разбавляли добавлением CH₂Cl₂ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученное неочищенное желтое масло использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

e) К неочищенному мезилатному интермедиату (примерное количество 0,25 ммоль) со стадии d в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли гидрид натрия (40 мг, 60% в минеральном масле, 1,0 ммоль) в один прием при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 минут, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой остаток от упаривания очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (35 мг, 0,086 ммоль, 34% за три стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.65 (с, 1Н), 7,42 (дд, J=9,0, 5,1 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=8,8, 8,0 Гц, 2Н), 5,11 (дд, J=8,6, 6,4 Гц, 1Н), 4,07 (ддд, J=9,8, 8,6, 5,8 Гц, 1Н), 3,92 (ддд, J=9,8, 7,8, 5,8 Гц, 1Н), 2,80-2,88 (м, 2Н), 2,66 (с, 3Н), 2,22 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₈H₁₆F₄N₆O [М+Н]⁺ 409.1, найдено 409.1.

Пример 2. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Триметилалюминий (0,16 мл, 2М раствор в толуоле, 0,32 ммоль) медленно добавляли в атмосфере азота в раствор 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амина (40 мг, 0,21 ммоль) и 3-[5-метил-3-(трифторметил)-1,2,4-триазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (58 мг, 0,25 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 30 минут, после чего реакцию осторожно гасили добавлением нескольких капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли дополнительным количеством 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

b) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (примерное количество 0,21 ммоль) со стадии а и триэтиламина (0,10 мл, 0,63 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (0,025 мл, 0,32 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 15 минут, после чего разбавляли добавлением CH₂Cl₂ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

c) К неочищенному мезилатному интермедиату (примерное количество 0,21 ммоль) со стадии b в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли гидрид натрия (40 мг, 60% в минеральном масле, 1,0 ммоль) в один прием при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 минут, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой остаток от упаривания очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (20 мг, 0,045 ммоль, 22% за три стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,66 (с, 1Н), 7,42 (дд, J=8,8, 4,8 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 5,06 (дд, J=9,1, 6,0 Гц, 1 Н), 4,05 (ддд, J=9,6, 8,4, 5,3 Гц, 1 Н), 3,90 (ддд, J=9,6, 8,0, 5,5 Гц, 1Н), 2,85 (дддд, J=13,6, 8,0, 5,6, 5,6 Гц, 1Н), 2,75 (дддд, J=13,6, 8,0, 8,0, 5,2 Гц, 1Н), 2,42 (с, 3Н), 2,21 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₆ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 442.1, найдено 442.1.

Пример 3. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Триметилалюминий (0,26 мл, 2М раствор в толуоле, 0,52 ммоль) медленно добавляли в атмосфере азота в раствор 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амина (50 мг, 0,26 ммоль) и α-бром-γ-бутиролактона (85 мг, 0,52 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 1 час, после чего реакцию осторожно гасили добавлением нескольких капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли дополнительным количеством 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

b) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (примерное количество 0,26 ммоль) со стадии а и триэтиламина (0,11 мл, 0,78 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (0,030 мл, 0,39 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 15 минут, после чего разбавляли добавлением CH₂Cl₂ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

c) К неочищенному мезилатному интермедиату (примерное количество 0,61 ммоль) со стадии b в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли гидрид натрия (40 мг, 60% в минеральном масле, 1,0 ммоль) в один прием при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 минут, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

d) Смесь неочищенного бромидного интермедиата (примерное количество 0,26 ммоль) со стадии с, 2-метил-4-трифторметилимидазола (40 мг, 0,26 ммоль) и карбоната калия (40 мг, 0,29 ммоль) в ДМФА (2 мл) перемешивали при 65°С в течение 12 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли добавлением EtOAc (20 мл) и промывали водой. Водный слой еще раз экстрагировали EtOAc (1×10 мл) и CH₂Cl₂ (1×10 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) дала трифторацетатную соль указанного в заголовке соединения (28 мг, 0,0054 ммоль, 21% за четыре стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,69 (с, 1Н), 7,43 (дд, J=8,8, 4,8 Гц, 2Н), 7,30-7,28 (м, 1Н), 7,21 (дд, J=8,0, 8,0 Гц, 2Н), 5,07 (дд, J=10,4, 8,8 Гц, 1Н), 3,98 (ддд, J=10,0, 10,0, 6,8 Гц, 1Н), 3,89 (ддд, J=10,8, 9,2, 2,0 Гц, 1Н), 2,94-2,88 (м, 1Н), 2,61 (с, 3Н), 2,48-2,39 (м, 1Н), 2,27 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₇F₄N₅O [М+Н]⁺ 408.1, найдено 408.1.

Пример 4. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пиперидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 3, заменяя α-бром-γ-бутиролактон на 3-бромтетрагидропиран-2-он на стадии 3а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.66 (с, 1Н), 7,40 (дд, J=9,2, 4,8 Гц, 2Н), 7,29-7,26 (м, 1Н), 7,19 (т, J=8,0 Гц, 2Н), 4,89 (дд, J=11,2, 5,6 Гц, 1Н), 3,88 (J=12,4, 10,4, 4,8 Гц, 1Н), 3,80-3,73 (м, 1Н), 2,60 (с, 3Н). 2,60-2,53 (м, 1Н), 2,40-2,23 (м, 3Н), 2,15 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₀H₁₉F₄N₅O [М+Н]⁺ 422.2, найдено 422.1.

Пример 5. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил)пирролидин-2-она

a) Раствор 4-фторфенилбороновой кислоты (5,02 г, 35,4 ммоль), 4-нитро-1H-пиразола (2,00 г, 17,7 ммоль), ацетата меди (3,50 г, 19,5 ммоль) и пиридина (7,00 мл, 88,5 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл) оставляли перемешиваться на воздухе при комнатной температуре в течение 12 часов. Смесь затем фильтровали через слой целита, и полученный фильтрат упаривали в вакууме. Полученный сырой остаток от упаривания очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 30% EtOAc/гексан), получая целевой продукт в виде белого твердого вещества.

b) Толстостенную стеклянную колбу, содержащую 1-(4-фторфенил)-4-нитропиразол (примерное количество 17,7 ммоль) со стадии а и 10% Pd/C (0,30 г) в EtOH (50 мл) и EtOAc (10 мл), помещали в аппарат Парра и интенсивно перемешивали в атмосфере Н₂ под давлением 40 фунт/кв. дюйм. Через 1 час реакционную смесь фильтровали через слой целита, и полученный фильтрат упаривали в вакууме, получая целевой продукт в виде красного твердого вещества (4,0 г, 22,6 ммоль, 63% за две стадии). Полученный продукт использовали без дополнительной очистки.

c) В раствор 2-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-4-гидрокси-бутановой кислоты (0,77 г, 2,7 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,9 мл, 11 ммоль) в CH₂Cl₂ (30 мл) добавляли триметилсилилхлорид (0,85 мл, 6,8 ммоль) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 5 минут, после чего добавляли метансульфонилхлорид (0,52 мл, 6,8 мл). После перемешивания в течение еще 10 минут, бикарбонат натрия (0,45 г, 5,4 ммоль) и 1-(4-фторфенил)пиразол-4-амин (0,32 г, 1,8 ммоль) со стадии а добавляли в виде твердых веществ. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакцию гасили добавлением 1 н. раствора HCl (30 мл) и экстрагировали CH₂Cl₂ (1×50 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20%-50% EtOAc/гексан) давала целевой продукт в виде оранжевого масла (140 мг, 0,31 ммоль, 18%).

d) Диэтил азодикарбоксилат (75 мкл, 0,47 ммоль) медленно добавляли в раствор трифенилфосфина (124 мг, 0,47 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) в атмосфере азота. Полученный желтый раствор оставляли перемешиваться на 20 минут при комнатной температуре, после чего добавляли спиртовой интермедиат (140 мг, 0,30 ммоль) со стадии с в виде раствора в тетрагидрофуране (3 мл). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NaHCO₃, и экстрагировали полученную смесь CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20-50% EtOAc/гексан) и методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (10 мг, 0,023 ммоль, 8%) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,46 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,64 (дд, J=9,2, 4,8 Гц, 2Н), 7,15 (дд, J=8,8, 8,0 Гц, 2Н), 5,12 (дд, J=9,3, 7,5 Гц, 1Н), 4,12 (ддд, J=9,2, 9,2, 3,9 Гц, 1Н), 3,97-3,86 (м, 1Н), 3,10 (дддд, J=14,0, 8,8, 6,8, 0,4 Гц, 1Н), 2,77 (дддд, J=13,2, 9,6, 7,6, 3,6 Гц, 1Н), 2,44 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₈H₁₄ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 428.1, найдено 428.1.

Пример 6. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Триметилалюминий (1,4 мл, 2М раствор в толуоле, 2,8 ммоль) медленно добавляли в атмосфере азота в раствор 1-(4-фторфенил)пиразол-4-амина (0,24 г, 1,4 ммоль) и 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (0,32 г, 1,4 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 30 минут, после чего реакцию осторожно гасили добавлением нескольких капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли дополнительным количеством 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (3×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

b) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (89 мг, 0,21 ммоль) со стадии а и триэтиламина (90 мкл, 0,65 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (25 мкл, 0,31 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 1 час, после чего разбавляли добавлением CH₂Cl₂ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

c) К неочищенному мезилатному интермедиату (примерное количество 0,21 ммоль) со стадии b в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли гидрид натрия (30 мг, 60% в минеральном масле, 0,65 ммоль) в один прием при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 минут, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая трифторацетатную соль указанного в заголовке соединения (24 мг, 0,047 ммоль, 20% за две стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,53 (с, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,66 (дд, J=9,0, 4,5 Гц, 2Н), 7,27-7,25 (м, 2Н), 7,15 (дд, J=9,2, 8,4 Гц, 2Н), 5,07 (дд, J=9,5, 9,5 Гц, 1Н), 4,05-3,91 (м, 1Н), 2,97 (дддд, J=13,6, 8,4, 6,8, 2,0 Гц, 1Н), 2,59 (с, 3Н), 2,42 (дддд, J=13,6, 9,6, 3,6, 3,6 Гц, 1Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₈H₁₅ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 394.1, найдено 394.1.

Пример 7. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3-[5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]пирролидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 6, заменяя 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-он на 3-[5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]тетрагидрофуран-2-он на стадии 6а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,46 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,64 (дд, J=8,8, 4,4 Гц, 2Н), 7,14 (дд, J=9,2, 8,4 Гц, 2Н), 6,35 (с, 1Н), 5,11 9 (дд, J=8,8, 4,4 Гц, 1Н), 4,13 (ддд, J=9,2, 9,2, 4,0 Гц, 1Н), 3,90 (ддд, J=9,6, 8,0, 6,8 Гц, 1Н), 3,10 (дддд, J=13,2, 8,8, 7,2, 7,2 Гц, 1Н), 2,78 (дддд, J=13,2, 9,2, 8,0, 3,6 Гц, 1 Н), 2,46 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₅F₄N₅O [М+Н]⁺ 394.1, найдено 394.1.

Пример 8. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]пиперидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 6, заменяя 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-он на 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]тетрагидропиран-2-он на стадии 6а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,40 (с, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,61 (дд, J=9,0, 4,5 Гц, 2Н), 7,12 (дд, J=8,0, 8,0 Гц, 2Н), 4,92 (дд, J=11,2, 5,8 Гц, 1Н), 3,98-3,85 (м, 2Н), 2,88-2,72 (м, 1Н), 2,46-2,35 (м, 1Н), 2,38 (с, 3Н), 2,23-2,10 (м, 2Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₆ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 442.1, найдено 442.1.

Пример 9. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пиперидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 6, заменяя 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-он на 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидропиран-2-он на стадии 6а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,54 (с, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,63 (дд, J=8,8, 4,8 Гц, 2Н), 7,25-7,22 (м, 1Н), 7,15 (дд, J=8,0, 8,0 Гц, 2Н), 4,87 (дд, J=11,5, 5,7 Гц, 1Н), 4,00-3,88 (м, 2Н), 2,61 (с, 3Н), 2,56-2,50 (м, 1Н), 2,46-2,37 (м, 1Н), 2,37-2,20 (м, 2Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₇F₄N₅O [М+Н]⁺ 408.1, найдено 408.1.

Пример 10. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3-[5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]пиперидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 6, заменяя 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-он на 3-[5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]тетрагидропиран-2-он на стадии 6а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,55 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,61 (ддд, J=9,2, 4,8, 2,0 Гц, 2Н), 7,12 (дд, J=9,2, 8,0 Гц, 2Н), 6,34 (с, 1Н), 4,93 (дд, J=11,2, 5,7 Гц, 1Н), 3,99-3,84 (м, 2Н), 2,81 (дддд, J=13,6, 11,6, 10,4, 2,8 Гц, 1Н), 2,46-2,35 (м, 2Н), 2,42 (с, 3Н), 2,17 (дддд, J=13,6, 10,4, 6,8, 2,8 Гц, 1Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₁₇F₄N₅O [М+Н]⁺ 408.1, найдено 408.1.

Пример 11. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[5-этил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 2-бутанона (1,10 г, 15,3 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (2,20 г, 18,3 ммоль) нагревали при 110°С в течение 1 дня. После охлаждения неочищенную реакционную смесь напрямую использовали в следующей стадии.

b) Раствор 4-фторфенилгидразина гидрохлорида (2,50 г, 15,3 ммоль) и 1-(диметиламино)пент-1-ен-3-она (примерное количество 15,3 ммоль) со стадии а в тетрагидрофуране (5 мл) нагревали при 85°С в течение 1 дня. После охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл) и промывали водой. Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-20% EtOAc/гексан) давала целевой продукт (1,1 г, 5,8 ммоль, 37%) в виде красного масла.

c) Нитрония тетрафторборат (500 мг, 2,3 ммоль) добавляли в раствор 5-этил-1-(4-фторфенил)пиразола (420 мг, 3,2 ммоль) со стадии b в безводном ацетонитриле (10 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре. После перемешивания в течение 12 часов, смесь упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 50% EtOAc/гексан, получая целевой продукт (53 мг, 0,023 ммоль, 9%) в виде желтого масла.

d) Толстостенную стеклянную колбу, содержащую продукт (53 мг, 0,023 ммоль) со стадии с и 10%) Pd/C (11 мг, 20 вес. %) в МеОН (1 мл) и EtOAc (2 мл), помещали в аппарат Парра и интенсивно перемешивали в атмосфере Н₂ под давлением 45 фунт/кв. дюйм. Через 1,5 часа реакционную смесь фильтровали через слой целита, и полученный фильтрат упаривали в вакууме, получая целевой продукт (45 мг, 0,023 ммоль, 99%) в виде желтого твердого вещества. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

e) Триметилалюминий (0,2 мл, 2М раствор в толуоле, 0,39 ммоль) медленно добавляли в атмосфере азота в раствор 5-этил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-амина (45 мг, 0,023 ммоль) со стадии d и 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (76 мг, 0,28 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (3 мл) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 30 минут, после чего реакцию осторожно гасили добавлением нескольких капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли добавлением дополнительного количества 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (3×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

f) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (примерное количество 0,23 ммоль) со стадии е и триэтиламина (110 мкл, 0,78 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (25 мкл, 0,31 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 1 час, после чего разбавляли добавлением CH₂Cl₂ и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

g) К неочищенному мезилатному интермедиату (примерное количество 0,23 ммоль) со стадии f в тетрагидрофуране (2 мл) добавляли гидрид натрия (30 мг, 60% в минеральном масле, 0,65 ммоль) в один прием при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 минут, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (51 мг, 0,11 ммоль, 48% за три стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,60 (с, 1Н), 7,40 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 2Н), 7,17 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 5,04 (дд, J=9,1, 5,8 Гц, 1Н), 4,06 (ддд, J=9,8, 8,4, 5,4 Гц, 1Н), 3,87 (ддд, J=9,7, 8,2, 5,3 Гц, 1Н), 2,86 (дддд, J=14,0, 84, 8,4, 6,0 Гц, 1Н), 2,74 (дддд, J=14,4, 9,2, 8,8, 5,6 Гц, 1Н), 2,65 (дддд, J=15,2, 7,6, 7,6, 1,2 Гц, 2Н), 2,43 (с, 3Н). 0,97 (т, J=7,6 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₀H₁₈ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 456.1, найдено 456.1.

Пример 12. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 2, заменяя 1-(4-фторфенил)-5-метил-пиразол-4-амин на 1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-амин на стадии 2а. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,55 (с, 1Н), 7,38 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=8,5, 8,5 Гц, 2Н), 5,04 (дд, J=9,3, 5,9 Гц, 1Н), 4,04 (ддд, J=10,0, 8,8, 5,2 Гц, 1Н), 3,82 (ддд, J=10,0, 8,4, 5,6 Гц, 1Н), 3,01-2,92 (м, 1 Н), 2,92-2,84 (м, 1Н), 2,80-2,69 (м, 1Н), 2,42 (с, 3Н), 1,21 (д, J=6,8, 3Н), 1,11 (д, J=6,8, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₀ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 470.1, найдено 470.1.

Пример 13. Синтез 1-[5-трет-бутил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь метилового эфира пивалоилуксусной кислоты (5,80 г, 36,7 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (5,24 г, 44,0 ммоль) нагревали при 110°С в течение 1 дня. После охлаждения реакционную смесь упаривали в вакууме для удаления всех летучих органических жидкостей, и полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Раствор 4-фторфенилгидразина гидрохлорида (5,97 г, 36,7 ммоль) и метил-2-(диметиламинометилен)-4,4-диметил-3-оксопентаноата (примерное количество 36,7 ммоль) со стадии а в тетрагидрофуране (15 мл) нагревали при 85°С 1 час. После охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл) и промывали водой. Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-20% EtOAc/гексан) давала целевой продукт (5,0 г, 18,1 ммоль, 50% за две стадии) в виде красного масла.

c) Двухфазный раствор метил 5-трет-бутил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-карбоксилата (5,00 г, 18,1 ммоль) со стадии b, моногидрата гидроксида лития (2,77 г, 66,0 ммоль) в диоксане (20 мл) и воде (20 мл) нагревали при 80°С при перемешивании в течение 1,5 часов. После охлаждения смесь разбавляли 1 н. раствором HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (1×100 мл). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученное неочищенное твердое коричневое вещество использовали без дополнительной очистки

d) Раствор 5-трет-бутил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-карбоновой кислоты (0,67 г, 2,6 ммоль) со стадии с в тионилхлориде (2,0 мл) кипятили при перемешивании 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт осушали азеотропной отгонкой с толуолом (2×10 мл) и помещали в высокий вакуум на несколько часов перед использованием в следующей стадии.

e) В раствор 5-трет-бутил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-карбонилхлорида (примерное количество 2,6 ммоль) со стадии d в ацетоне (15 мл) быстро добавляли раствор азида натрия (0,50 г, 7,7 ммоль) в воде (2 мл). Смесь интенсивно перемешивали 5 минут при комнатной температуре, после чего выпадал осадок. Фильтрование смеси давало целевой продукт (0,49 г, 1,7 ммоль) в виде серого твердого вещества.

f) Раствор ацилазидного интермедиата (86 мг, 0,030 ммоль) со стадии е в толуоле (0,5 мл) нагревали при 110°С 10 минут, после чего добавляли 1 н. раствор HCl (0,7 мл), и полученную двухфазную смесь нагревали при 110°С в течение ночи. После охлаждения смесь экстрагировали хлороформом (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 5% МеОН/CH₂Cl₂) давала целевой продукт (40 мг, 0,017 ммоль, 57%) в виде коричневого полутвердого вещества.

g) Продукт со стадии f использовали в методе, аналогичном описанному в Примере 2, заменяя 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амин на 5-трет-бутил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-амин на стадии 2а, получая указанное в заголовке соединение. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,54 (с, 1Н), 7,38 (дд, J=9,2, 4,8 Гц, 2Н), 7,16 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 5,09-5,00 (м, 1Н), 4,08-3,99 (м, 1Н), 3,83 (д.кв., J=8,0, 8,0, 6,0 Гц, 1Н), 3,04-2,87 (м, 1Н), 2,80-2,67 (м, 1Н), 2,42 (с, 3Н), 1,17 (с, 9Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₂ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 484.1, найдено 484.1.

Пример 14. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-[(E)-1-метилпроп-1-енил]пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Исходное вещество 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-иод-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он получали по методике, аналогичной описанной в Примере 2, заменяя 1-(4-фторфенил)-5-метил-пиразол-4-амин на 1-(4-фторфенил)-5-иод-пиразол-4-амин на стадии 2а. Раствор, содержащий 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-иод-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (90 мг, 0,16 ммоль), калия (2Z)-2-butene-2-илтрифторборат (32 мг, 0,20 ммоль), PdCl₂(dppf) (6,0 мг, 0.0080 ммоль) и 2М водный раствор карбоната натрия (0,25 мл, 0,49 ммоль) в диоксане (5 мл) нагревали до 80°С 2 часа. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20-50% EtOAc/гексан) давала указанное в заголовке соединение (33 мг, 0,070 ммоль) в виде не совсем белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.69 (с, 1Н), 7,45 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 2Н), 7,11 (дд, J=8,0, 8,0 Гц, 2Н), 5,73 (дддд, J=8,4, 6,8, 6,8, 1,6 Гц, 1Н), 5,02 (дд, J=9,2, 6,9 Гц, 1Н), 3,94 (ддд, J=9,6, 8,8, 4,8 Гц, 1 Н), 3,76 (ддд, J=9,6, 7,9, 6,2 Гц, 1Н), 2,92 (дддд, J=13,6, 13,6, 8,8, 6,4 Гц, 1Н), 2,67 (дддд, J=13,6, 9,2, 8,0, 4,4 Гц, 1Н), 2,41 (с, 3Н), 1,69 (дд, J=6,8, 1,2 Гц, 3Н), 1,60 (дд, J=1,2, 1,2 Гц, 3 Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₀ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 482.1, найдено 482.1.

Пример 15. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[5-циклопропил-1-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Раствор, содержащий 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-иод-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (34 мг, 0,061 ммоль), циклопропилбороновую кислоту (7 мг, 0,08 ммоль), ацетат палладия (1,0 мг, 0,003 ммоль), трициклогексилфосфин (2,0 мг, 0,006 ммоль) и фосфат калия (45 мг, 0,21 ммоль), в толуоле (1,5 мл) и воде (100 мкл) нагревали до 100°С в течение 1 дня. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (1,0 мг, 0,002 ммоль, 3%) в виде бесцветного остатка. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (с, 1Н), 7,54 (дд, J=9,0, 4,8 Гц, 2Н), 7,16 (дд, J=9,0, 8,2 Гц, 2Н), 5,06 (дд, J=9,2, 6,3 Гц, 1Н), 4,11 (ддд, J=9,6, 8,4, 4,8 Гц, 1Н), 3,91 (ддд, J=9,6, 8,0, 4,8 Гц, 1Н), 2,98 (дддд, J=12,0, 9,6, 8,4, 6,4, 6,0 Гц, 1Н), 2,74 (дддд, J=13,2, 9,2, 8,0, 4,8 Гц, 1Н), 2,45 (с, 3Н), 1,77 (дддд, J=8,4, 8,4, 5,6, 5,6 Гц, 1Н), 0,78-0,64 (м, 2Н), 0,43-0,30 (м, 2Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₁₈ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 468.1, найдено 468.1.

Пример 16. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-втор-бутил-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Толстостенную стеклянную колбу, содержащую продукт (27 мг, 0,056 ммоль) из Примера 14, оксид платины (25 мг, 0,11 ммоль) и концентрированную соляную кислоту (3 капли) в МеОН (5 мл) помещали в аппарат Парра и интенсивно перемешивали в атмосфере Н₂ под давлением 45 фунт/кв. дюйм. Через 2 часа реакционную смесь фильтровали через слой целита, и полученный фильтрат упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20-50% EtOAc/гексан) давала указанное в заголовке соединение (6 мг, 0,012 ммоль, 22%) в виде смеси диастереомеров. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,53 (с, 1Н), 7,35 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 2Н), 7,17 (дд, J=8,8, 8,2 Гц, 2Н), 5,02 (дд, J=9,2, 5,8 Гц, 1Н), 4,02 (дддд, J=10,0, 9,2, 6,0, 5,6 Гц, 1Н), 3,79 (дддд, J=10,0, 8,8, 5,6 Гц, 1Н), 2,93-2,92 (м, 1Н), 2,79-2,60 (м, 2Н), 2,42 (с, 3Н), 1,56-1,42 (м, 1Н), 1,20 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 1,10 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 0,77 (т, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₂ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 484.1, найдено 484.1.

Пример 17. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-пропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он

a) Смесь метил бутирилацетата (5,00 г, 34,7 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (5,00 г, 41,6 ммоль) нагревали при 110°С в течение 1 дня. После охлаждения реакционную смесь упаривали в вакууме для удаления всех летучих органических жидкостей, и полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Раствор 4-фторфенилгидразина гидрохлорида (5,64 г, 34,7 ммоль) и метил-2-(диметиламинометилен)-4,4-диметил-3-оксо-гексаноата (примерное количество 34,7 ммоль) со стадии а в тетрагидрофуране (25 мл) нагревали при 85°С 1 час. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл) и промывали 1 н. раствором HCl (1×50 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO₃ (1×50 мл). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

c) Двухфазный раствор метил 1-(4-фторфенил)-5-пропилпиразол-4-карбоксилата (примерное количество 34,7 ммоль) со стадии b и моногидрата гидроксида лития (7,3 г, 173 ммоль) в диоксане (40 мл) и воде (20 мл) нагревали при 80°С при перемешивании 3 часа. После охлаждения смесь подкисляли 1 н. раствором HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×40 мл) и EtOAc (2×40 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20-50% EtOAc/гексан), получая целевой продукт (6,65 г, 26,5 ммоль, 76%) в виде красного масла.

d) В раствор 1-(4-фторфенил)-5-пропилпиразол-4-карбоновой кислоты (0,76 г, 3,1 ммоль) со стадии с в диоксане (8 мл) добавляли триэтиламин (0,47 ммоль, 3,4 ммоль) и дифенилфосфорил азид (0,65 мл, 3,1 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться на 2 часа при комнатной температуре, после чего нагревали до 90°С и перемешивали 30 минут. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли бензиловый спирт (0,63 мл, 6,1 ммоль). Смесь снова нагревали до 90°С и перемешивали при этой температуре в течение ночи. После охлаждения смесь разбавляли диэтиловым эфиром (50 мл) и промывали водой. Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20-50%) EtOAc/гексан) давала целевой продукт (0,91 г, 2,6 ммоль, 84%) в виде коричневого масла.

e) Толстостенную стеклянную колбу, содержащую карбобензилокси-защищенный амин (0,91 г, 2,6 ммоль) со стадии d, концентрированную соляную кислоту (5 капель) и 10% Pd/C (90 мг, 10 вес. %) в МеОН (2 мл) и EtOAc (20 мл), помещали в аппарат Парра и интенсивно перемешивали в атмосфере H₂ под давлением 45 фунт/кв. дюйм. Через 3 часа реакционную смесь фильтровали через слой целита, и полученный фильтрат упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт разбавляли EtOAc (40 мл) и промывали насыщенный водный раствор NaHCO₃ (1×30 мл), получая целевой продукт в виде темного масла (0,34 г, 1,5 ммоль, 60%).

f) Продукт со стадии е использовали в методе, аналогичном описанному в Примере 2, заменяя 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амин на 1-(4-фторфенил)-5-пропилпиразол-4-амин на стадии 2а, получая указанное в заголовке соединение. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (с, 1Н), 7,39 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=8,5, 8,5 Гц, 2Н), 5,05 (дд, J=9,2, 5,9 Гц, 1Н), 4,04 (дддд, J=9,2, 8,8, 4,8 Гц, 1,2, 1Н), 3,89 (ддд, J=9,6, 8,0, 5,2 Гц, 1Н), 2,90 (дддд, J=11,6, 8,8, 6,0, 6,0 Гц, 1Н), 2,76 (дддд, J=13,6, 9,6, 8,4, 5,2 Гц, 1Н), 2,66-2,51 (м, 2Н), 2,42 (с, 3Н), 1,35 (дддд, J=14,8, 8,8, 6,8, 6,8 Гц, 2Н), 0,75 (т, J=7,4 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₀ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 470.1, найдено 470.1.

Пример 18. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]оксепан-2-она

a) В раствор 2-бромциклогексанона (4 г, 22,6 ммоль) в дихлорметане (38 мл) добавляли m-СРВА (5,10 г, 29,5 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 14 часов, реакционную смесь охлаждали в морозильнике на 6 часов. Твердый осадок отфильтровывали и промывали дихлорметаном (15 мл) два раза. Фильтрат затем гасили насыщенным водным раствором тиосульфата натрия (40 мл). Органические слои промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (SiO₂, 20% EtOAc/гексан) дала продукт в виде белого твердого вещества (3 г, 15,5 ммоль, 69%).

b) В раствор 3-бромоксепан-2-она (1 г, 5,18 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавляли 4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол (0,956 г, 5,18 ммоль), затем добавляли карбонат калия (1,07 г, 7,74 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при 65°С 8 часов. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разделяли между водой (20 мл) и этилацетатом (30 мл). Органические слои промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (SiO₂, 25% EtOAc/гексан) дала указанный в заголовке продукт в виде белого твердого вещества (0,3 г, 1,01 ммоль, 20%).

Пример 19

Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]азепан-2-она

a) В раствор 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]оксепан-2-она (0,05 г, 0,168 ммоль) в дихлорэтане (1,0 мл) добавляли триметилалюминий (126 мкл, 2,0 М, 0,25 ммоль) в атмосфере азота, затем 1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-амин (0,032 г, 0,168 ммоль) в дихлорэтане (0,7 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться на 1 час, после чего осторожно гасили 1 н. раствором HCl (2 мл). Водный слой подщелачивали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2×5 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Метансульфонилхлорид (0,029 г, 0,25 ммоль) добавляли в раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии а и триэтиламина (0,034 г, 0,34 ммоль) в дихлорметане (1 мл) при комнатной температуре. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа, реакцию гасили водой. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2×5 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

c) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии b в тетрагидрофуране (1 мл) добавляли гидрид натрия (0,01 г, 60%, 0,25 ммоль), затем иодид натрия (0,003 г, 0,02 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали при этой температуре 30 минут. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь гасили водой, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×25 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,011 г, 0,025 ммоль, 15% за 3 стадии). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,55 (с, 1 Н), 7,49-7,39 (м, 2Н), 7,22-7,13 (м, 2Н), 4,5-4,40 (м, 1Н), 4,16-4,01 (м, 1Н), 3,68-3,51 (м, 2Н), 2,92-2,84 (м, 1Н), 2,45-2,38 (м, 1Н), 2,35 (с, 3Н), 2,26-2,18 (м, 1 Н), 2,20 (с, 3Н), 1,98-1,85 (м, 1Н), 0,95-0,77 (м, 1Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₀ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 470.1, найдено 470.1.

Пример 20. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]пиперидин-2-она

В раствор 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-метилпиразол-4-ил]пиперидин-2-она (0,05 г, 0,14 ммоль) в ДМФА (1,0 мл) добавляли 4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол (0,031 г, 0,17 ммоль), затем карбонат калия (0,029 г, 0,21 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа, реакцию гасили водой. Водный слой затем экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,015 г, 0,025 ммоль, 23%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,65 (с, 1Н), 7,44-7,35 (м, 2Н), 7,22-7,13 (м, 2Н), 4,94 (дд, J=9,9, 6,3 Гц, 1Н), 3,90-3,70 (м, 2Н), 2,73 (дддд, J=13,2, 11,5, 9,8, 3,3 Гц, 1Н), 2,47-2,38 (м, 1Н), 2,36 (с, 3Н), 2,31 (ддд, J=10,6, 5,4, 2,4 Гц, 1Н), 2,17-2,12 (м, 1Н), 2,13 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₀H₁₈ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 456.1, найдено 456.1.

Пример 21. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-фенилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

a) В раствор 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (0,063 г, 0,236 ммоль) в дихлорэтане (1,0 мл) добавляли триметилалюминий (177 мкл, 2,0 М, 0,354 ммоль) в атмосфере азота, затем 1-(4-фторфенил)-5-фенил-пиразол-4-амин (0,06 г, 0,236 ммоль) в дихлорэтане (0,7 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться на 1 час, после чего осторожно гасили 1 н. раствором HCl (2 мл). Водный слой затем подщелачивали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2 мл) и экстрагировали дихлорметаном (5 мл ×2). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Метансульфонилхлорид (0,041 г, 0,36 ммоль) добавляли в раствор остатка от упаривания со стадии а и триэтиламина (0,049 г, 0,49 ммоль) в дихлорметане (1 мл) при комнатной температуре. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа, реакцию гасили водой. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2×5 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

с) Гидрид натрия (0,014 г, 60%, 0,35 ммоль) добавляли в раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии b в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали при этой температуре 30 минут. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь гасили водой, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×5 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,025 г, 0,050 ммоль, 21% за 3 стадии). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,89 (д, J=0,6 Гц, 1Н), 7,42-7,28 (м, 3Н), 7,25-7,14 (м, 4Н), 7,04-6,94 (м, 2Н), 4,99 (дд, J=9,2, 6,8 Гц, 1Н), 3,74-3,63 (м, 1Н), 3,56-3,45 (м, 1Н), 2,78 (ддт, J=13,2, 8,7, 6,6 Гц, 1Н), 2,55 (т.кв., J=13,4, 4,5 Гц, 1Н), 2,38 (д, J=0,7 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₄H₁₈ClF₄N₅O [М+Н]⁺ 504.1, найдено 503.9.

Пример 22. 1-[1-(4-Хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-метил-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-он

В раствор 1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она (50 мг, 0,11 ммоль) медленно добавляли ДМФА (2 мл) и NaH (60% в минеральном масле, 16 мг, 0,33 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. После перемешивания в течение 10 минут при комнатной температуре, добавляли MeI (34 мкл, 0,55 ммоль) и перемешивали еще 2 часа. Затем медленно добавляли в реакционную смесь насыщенный раствор NH₄Cl (10 мл) при 0°С, после чего экстрагировали EtOAc (2×25 мл). Объединенные этилацетатные слои сушили (MgSO₄), упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая 1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]-3-метил-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-он (17 мг, 0,029 ммоль, 27% выход) в виде соли с трифторуксусной кислотой. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d₄) δ 7,88 (с, 1Н), 7,70 (с, 1Н), 7,59 (д, J=11,76 Гц, 2Н), 7,42 (д, J=11,76 Гц, 2Н), 3,86-3,95 (м, 2Н), 2,99-3,08 (м, 1Н), 2,58-2,80 (м, 2Н), 2,52 (с, 3Н), 1,96 (с, 3Н), 1,22 (д, J=23,4 Гц, 3Н), 1,20 (д, J=23,4 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃ClF₃N₅O [М+Н]+ 466.9, найдено 466.1.

Пример 23. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-(фуран-3-ил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Этил (этоксиэтилен)цианоацетат (2,37 г, 14,0 ммоль) и 3-фторфенилгидразина гидрохлорид (2,28 г, 14,0 ммоль) суспендировали в этаноле (50 мл). Реакционную смесь нагревали при 80°С три дня, затем удаляли этанол при пониженном давлении. Реакционную смесь без очистки суспендировали в дихлорметане и отфильтровывали нерастворенные частицы. Фильтрат упаривали при пониженном давлении и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (5-20%) этилацетат в гексане), получая этил 5-амино-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (930 мг, 3,73 ммоль, 27% выход).

b) Этил 5-амино-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (518 мг, 2,08 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (5 мл) при комнатной температуре. Добавляли дииодметан (675 мкл, 8,38 ммоль), затем изопентилнитрит (565 мкл, 4,21 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 50°С 1 час, и затем разделяли между водой и этилацетатом. Водный слой экстрагировали еще два раза этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителей при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (10-25% этилацетата в гексане), получая этил 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (589 мг, 1,64 ммоль, 79% выход).

c) Этил 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоксилат (589 мг, 1,64 ммоль) растворяли в смеси тетрагидрофурана (5 мл), 1,5 н. раствора LiOH (1,6 мл) и метанола (1,5 мл), и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Большую часть тетрагидрофурана удаляли путем осторожного пропускания тока азота над реакционной смесью. Добавляли воду и 1 н. раствор HCl (2,4 мл), и смесь интенсивно обрабатывали ультразвуком для высаживания карбоновой кислоты. Карбоновую кислоту отфильтровывали и промывали водой. После сушки в вакууме получали 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (488 мг, 1,47 ммоль, 90% выход). Полученное вещество использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

d) Трет-бутиловый спирт (3,5 мл) сначала сушили путем перемешивания в течение ночи при 50°С в присутствии 4А молекулярных сит. В полученный растворитель добавляли 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-карбоновую кислоту (488 мг, 1,47 ммоль), затем триэтиламин (204 мкл, 1,46 ммоль) и дифенилфосфорил азид (334 мкл, 1,54 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь затем разбавляли этилацетатом. Добавляли в реакционную смесь силикагель, и удаляли растворители при пониженном давлении для осаждения полученных неочищенных продуктов на силикагель. Затем проводили очистку методом колоночной хроматографии на силикагеле (6-20% этилацетата в гексане), получая 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил-карбаминовой кислоты 1,1-диметилэтиловый эфир (482 мг, 1,20 ммоль, 81% выход).

e) В виалу, содержащую 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил-карбаминовой кислоты 1,1-диметилэтиловый эфир (150 мг, 0,372 ммоль), добавляли 2-(2,5-дигидро-3-фуранил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3-2-диоксаборолан (100 мг, 0,512 ммоль) в толуоле (2,5 мл). Добавляли диоксан (0,56 мл), затем водный раствор карбоната калия (2 М, 560 мкл, 1,12 ммоль). Виалу продували азотом, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин) палладий (20,1 мг, 0,0174 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли этилацетатом и водой. Слои разделяли, и водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (5-33% этилацетата в гексане), получая продукт реакции Сузуки (55,4 мг, 0,160 ммоль, 43% выход). Полученное вещество обрабатывали хлороводородом в диоксане (4 н., 1 мл) при комнатной температуре в течение двух часов. После удаления избытка хлороводорода и диоксана при пониженном давлении, полученный сырой продукт растворяли в этилацетате и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт, главным компонентом которого является 5-(3-фуранил)-1-(3-фторфенил)-4-амино-1H-пиразол (48,4 мг).

f) Полученный сырой продукт с предыдущей стадии (48,4 мг) и 3-(3-трифторметил-4-хлор-5-метил-1H-пиразол-1-ил)дигидро-2(3H)-фуранон (47 мг, 0,18 ммоль) растворяли в дихлорэтане (0,5 мл). В полученную смесь добавляли триметилалюминий (2М раствор в толуоле, 0,12 мл, 0,24 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух часов. Добавляли соляную кислоту (1 н.) и дихлорметан, и разделяли слои. Водный слой экстрагировали дихлорметаном еще два раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт (62,0 мг), который растворяли в дихлорметане (1 мл). При комнатной температуре добавляли триэтиламин (84 мкл, 0,60 ммоль) затем прикапывали метансульфонилхлорид (19 мкл, 0,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре тридцать минут. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и экстрагировали продукт дихлорметаном три раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, сырой продукт растворяли в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре. Гидрид натрия (60% дисперсия в масле) добавляли небольшими порциями до прекращения выделения пузырьков газа. Реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение ночи. Добавляли в реакционную смесь воду и этилацетат, и разделяли слои. Водный слой экстрагировали этилацетатом еще два раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Полученный раствор пропускали через слой силикагеля и хорошо промывали этилацетатом для удаления примесей. Полученное вещество затем упаривали при пониженном давлении и дополнительно очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, 20-95% ацетонитрила в воде с 0,1% трифторуксусной кислоты), получая 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-(фуран-3-ил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (2,7 мг, 0,0055 ммоль, 3% выход за 4 стадии). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,80 (с, 1Н), 7,31-7,47 (м, 3Н), 7,33 (дд, J=8,0, 6,4 Гц, 1Н), 7,14 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 7,04-7,10 (м, 1Н), 6,45 (с, 1Н), 5,03 (дд, J=9,6, 6,8 Гц, 1Н), 3,88 (ддд, J=9,4, 9,4, 5,1 Гц, 1Н), 3,67 (ддд, J=10,0, 8,4, 6,4 Гц, 1Н), 2,78-2,87 (м, 1Н), 2,66 (дддд, J=17,2, 8,2, 4,3, 4,3 Гц, 1Н), 2,40 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₁₆N₅O₂ClF₄ [М+Н]⁺ 494.1, найдено 494.0.

Пример 24. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[5-циклопропил-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) В виалу помещали 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил)-карбаминовой кислоты 1,1-диметилэтиловый эфир (150 мг, 0,372 ммоль), циклопропилбороновую кислоту (43,0 мг, 0,504 ммоль), трициклогексилфосфин (10,0 мг, 0,0357 ммоль) и фосфат калия (276 мг, 1,30 ммоль). Добавляли толуол (1,7 мл) и воду (85 мкл). Реакционную смесь продували азотом, затем добавляли ацетат палладия (4,2 мг, 0,019 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение двух часов. Добавляли еще трициклогексилфосфин (10,3 мг, 0,0367 ммоль) и ацетат палладия (4,5 мг, 0,020 ммоль) и продолжали перемешивание при 100°С еще пять часов. Добавляли BrettPhos (2-(дициклогексилфосфино)3,6-диметокси-2',4',6'-триизопропил-1,1'-бифенил, 10,7 мг, 0,0199 ммоль) и ацетат палладия (3,9 мг, 0,0174 ммоль), и реакционную смесь дополнительно перемешивали при 100°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры, добавляли воду и этилацетат и разделяли слои. Водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителей при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (7-80% этилацетата в гексане), получая продукт реакции Сузуки (41,4 мг, 0,130 ммоль, 35% выход). В это вещество добавляли раствор хлороводорода в диоксане (4 н., 1 мл), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 4 часа. После удаления растворителя при пониженном давлении, реакционную смесь разделяли между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Слои разделяли, и водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Удаление растворителя при пониженном давлении дало 5-(3-циклопропил)-1-(3-фторфенил)-4-амино-1H-пиразол (25,6 мг, 0,118 ммоль, 91% выход), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

b) Продукт с предыдущей стадии (25,6 мг, 0,118 ммоль) и 3-(3-трифторметил-4-хлор-5-метил-1H-пиразол-1-ил)дигидро-2(3H)-фуранон (49,0 мг, 0,182 ммоль) растворяли в дихлорэтане (0,5 мл). В полученную смесь добавляли триметилалюминий (2М раствор в толуоле, 0,12 мл, 0,24 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух часов. Добавляли еще триметилалюминий (2 М раствор в толуоле, 0,7 мл, 1,4 ммоль), и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре еще 2 часа. Добавляли соляную кислоту (1 н.) и дихлорметан, и разделяли слои. Водный слой экстрагировали дихлорметаном еще два раза. Объединенные органические слои промывали один раз насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт (73,2 мг), который растворяли в дихлорметане (1 мл). При комнатной температуре добавляли метансульфонилхлорид (23 мкл, 0,30 ммоль) и триэтиламин (105 мкл, 0,753 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение двух часов. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и продукт экстрагировали дихлорметаном три раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, сырой продукт растворяли в тетрагидрофуране (1 мл) при комнатной температуре. Гидрид натрия (60% дисперсия в масле) добавляли небольшими порциями до прекращения выделения пузырьков газа. Реакционную смесь перемешивали при той же температуре 1 час. Насыщенный раствор хлорида аммония и этилацетат добавляли в реакционную смесь и разделяли слои. Водный слой затем экстрагировали этилацетатом еще два раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, к сырому продукту добавляли 2-метил-4-трифторметил-1H-имидазол (16,7 мг, 0.111 ммоль) и карбонат калия (90,2 мг, 0,653 ммоль) в диметилформамиде (0,5 мл) при 55°С на 3 часа. Затем в реакционную смесь добавляли этилацетат и воду. Слои разделяли, и водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителей при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (50-60% этилацетата в гексане), получая 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-(циклопроп-3-ил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он, который далее очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, 20-95% ацетонитрила в воде с 0,1% трифторуксусной кислоты) (15,0 мг, 0,0346 ммоль, 29% выход за три стадии). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (с, 1Н), 7,37-7,44 (м, 2Н), 7,33 (ддд, J=9,6, 2,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,04-7,09 (м, 1Н), 5,04 (дд, J=9,6, 6,8 Гц, 1Н), 4,10 (ддд, J=9,6, 9,6, 4,8 Гц, 1Н), 3,89 (ддд, J=9,0, 8,0, 5,6 Гц, 1Н), 2,97 (дддд, J=14,8, 8,4, 8,4, 5,6 Гц, 1Н), 2,73 (дддд, J=17,2, 8,4, 5,2, 5,2 Гц, 1Н), 2,42 (с, 3 Н), 1,79 (тт, J=10,4, 5,6 Гц, 1Н), 0,71-0,82 (м, 2Н), 0,36-0,40 (м, 2Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₁₈N₅OClF₄ [М+Н]⁺ 468.2, найдено 468.1.

Пример 25. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-иод-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

a) Хлороводород в диоксане (4 н., 3 мл) добавляли к 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил-карбаминовой кислоты 1,1-диметилэтиловому эфиру (348 мг, 0,864 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при той же температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный сырой продукт растворяли в этилацетате и насыщенном водном растворе бикарбоната натрия. Слои разделяли, и водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (20-60% этилацетата в гексане), получая 5-иод-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол (210 мг, 0,695 ммоль, 80% выход).

b) Свободный амин с предыдущей стадии (211 мг, 0,695 ммоль) и 3-(3-трифторметил-4-хлор-5-метил-1H-пиразол-1-ил)дигидро-2(3H)-фуранон (229 мг, 0,853 ммоль) растворяли в дихлорэтане (2,3 мл). В полученную смесь добавляли триметилалюминий (2М раствор в толуоле, 0,7 мл, 1,4 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух часов. Добавляли еще триметилалюминий (2М раствор в толуоле, 0,3 мл, 0,6 ммоль), и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре еще 2 часа. Добавляли хлороводород (1 н.) и дихлорметан, и смесь пропускали через слой целита. Разделяли слои, и водный слой экстрагировали дихлорметаном еще два раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт, который растворяли в дихлорметане (2 мл). При комнатной температуре добавляли метансульфонилхлорид (81 мкл, 1,04 ммоль) и триэтиламин (483 мкл, 3,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре тридцать минут. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и продукт экстрагировали дихлорметаном три раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, сырой продукт растворяли в тетрагидрофуране (7,5 мл) при комнатной температуре. Гидрид натрия (60% дисперсия в масле) добавляли небольшими порциями до прекращения выделения пузырьков газа (примерно 54 мг, 1,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре 1 час. Добавляли в реакционную смесь насыщенный раствор хлорида аммония и этилацетат, и разделяли слои. Водный слой экстрагировали этилацетатом еще два раза. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (20-40% этилацетата в гексане), получая 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-иод-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (126 мг, 0,227 ммоль, 33%) выход за три стадии). Полученное вещество растирали в метаноле для дополнительной очистки (выход 42,5 мг). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,80 (с, 1Н), 7,45 (ддд, J=8,2, 8,2, 5,9 Гц, 1Н), 7,34 (дд, J=8,2, 2,0 Гц, 1Н), 7,28 (ддд, J=9,4, 2,0, 2,0 Гц, 1Н), 7,16 (ддд, J=8,2, 8,2, 2,4 Гц, 1Н), 5,06 (дд, J=9,6, 6,8 Гц, 1Н), 4,08 (ддд, J=9,6, 9,6, 4,8 Гц, 1Н), 3,94 (ддд, J=9,6, 8,0, 6,4 Гц, 1Н), 3,00 (дддд, J=15,6, 8,4, 8,4, 6,4 Гц, 1Н), 2,73 (дддд, J=17,2, 8,0, 4,8, 4,8 Гц, 1Н), 2,42 (с, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₁₈H₁₃N₅OClF₄I [М+Н]⁺ 554.0, найдено 554.0.

Пример 26. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[5-пропил-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она

а) Карбонат калия (43,1 мг, 0,312 ммоль) добавляли в колбу, содержащую 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[1-(3-фторфенил)-5-иод-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (83,0 мг, 0,150 ммоль), затем добавляли толуол (0,5 мл) и диоксан (0,1 мл). В полученную смесь добавляли 4,4,5,5-тетраметил-2-(1-метилэтенил)-1,3-2-диоксаборолан (56 мкл, 0,30 ммоль), затем воду (25 мкл), 2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенил (SPhos, 6,2 мг, 0,015 ммоль) и ацетат палладия (3,3 мг, 0,015 ммоль). Реакционную смесь продували азотом и перемешивали при 100°С в течение ночи. После охлаждения добавляли воду и этилацетат. Слои разделяли, и водный слой еще два раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (30-100% этилацетата в гексане), получая продукт реакции Сузуки (24,4 мг, 0,0522 ммоль, 35% выход). Выделяли также некоторое количество исходного иод-содержащего соединения, а также некоторое количество побочного деиодированного продукта. Продукт реакции Сузуки растворяли в смеси этилацетата (5 мл) и метанола (5 мл). Добавляли палладий на угле (10%, влажный, 9,7 мг). Смесь гидрировали в аппарате Парра при давлении водорода 35 фунт/кв. дюйм в течение одного часа, и затем под давлением водорода 45 фунт/кв. дюйм в течение одного часа. После продувки реакционной смеси азотом, Добавляли еще палладий на угле (10%, влажный, 10,3 мг) и растворители (этилацетат : метанол = 1:1,8 мл), и реакционную смесь гидрировали далее под давлением 45 фунт/кв. дюйм в течение 1 часа. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и тщательно промывали остаток на фильтре смесью этилацетат: метанол (1:1, 10 мл). После удаления растворителя при пониженном давлении, полученный сырой продукт очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, 20-95% ацетонитрила в воде с 0,1% трифторуксусной кислоты), получая 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]-1-[5-пропил-1-(3-фторфенил)-1H-пиразол-4-ил]пирролидин-2-он (14,4 мг, 0,0306 ммоль, 59% выход). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,60 (с, 1Н), 7,43 (ддд, J=8,0, 8,0, 6,0 Гц, 1Н), 7,14-7,22 (м, 3Н), 5,02 (дд, J=9,2, 5,6 Гц, 1Н), 4,02 (ддд, J=9,2, 5,2, 5,2 Гц, 1Н), 3,86 (ддд, J=9,6, 8,0, 5,6 Гц, 1Н), 2,88 (дддд, J=14,4, 8,8, 8,8, 6,0 Гц, 1Н), 2,73 (дддд, J=17,2, 8,4, 5,6, 5,6 Гц, 1Н), 2,57-2,68 (м, 2Н), 2,41 (с, 3Н), 1,35 (кв.т., J=9,6, 9,6 Гц, 2Н), 0,74 (т, J=7,6 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₀N₅OClF₄ [М+Н]⁺ 470.1, найдено 470.1.

Пример 27. Синтез 3-(4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил)-1-(1-(4-фторфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-ил)-5-метилпирролидин-2-она

а) Триметилалюминий (1,0 мл, 2 ммоль, 2М раствор в толуоле) добавляли порциями в раствор 1-(4-фторфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-амина (219 мг, 1 ммоль) и цис/транс-α-бром-γ-валеролактона (358 мг, 2 ммоль) в безводном дихлорэтане (5 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре. После перемешивания в течение 2 часов, реакцию гасили водой, и смесь разбавляли добавлением 10 мл EtOAc и 0,5 мл 6 н. HCl. Органический слой промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в CH₂Cl₂ (6 мл) и Et₃N (0,25 мл, 1,8 ммоль) и добавляли метансульфонилхлорид (0,13 мл, 1,65 ммоль). После перемешивания в течение 1 часа, реакционную смесь промывали 1М раствором NaHSO₄, и органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме, получая желтое масло. Остаток от упаривания растворяли в ТГФ (10 мл) и добавляли NaI (30-40 мг). Затем добавляли в реакционную суспензию гидрид натрия (90 мг, 2,3 ммоль). После перемешивания в течение 16 часов, реакционную смесь гасили насыщенным раствором NH₄Cl и упаривали при пониженном давлении для удаления ТГФ. Смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали EtOAc (3×5 мл). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали, упаривали и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 5-90% EtOAc/гексан, получая целевой продукт (219 мг, 0,38 ммоль, 38%) в виде бесцветного масла.

b) В раствор продукта со стадии а (57 мг, 0,15 ммоль) и 4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразола (138 мг, 0,75 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавляли K₂CO₃ (104 мг, 0,75 ммоль). Полученную суспензию нагревали до 60°С на 1 час и затем разбавляли EtOAc (4 мл). Смесь промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия и упаривали в вакууме. Полученный сырой остаток от упаривания очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая а цис/транс смесь целевого соединения (40 мг, 0,083 ммоль) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР цис/транс смеси (400 МГц, CDCl₃) δ 7,46 (с, 0,54Н), 7,43 (с, 0,46Н), 7,42-7,36 (м, 2Н), 7,20-7,15 (м, 2Н), 5,11 (м, 1Н), 4,35-4,27 (м, 0,46Н), 4,10-4,01 (м, 0,54Н), 3,06-2,84 (м, 2Н), 2,68-2,60 (м, 0,46Н), 2,43 (с, 1,38Н), 2,40 (с, 1,62Н), 2,34-2,25 (м, 0,54Н), 1,40 (д, J=6,3 Гц, 1,62Н), 2,34-2,25 (м, 0,54Н), 1,40 (д, J=6,3 Гц, 1,62 Гц), 1,37 (д, J=6,6 Гц, 1,38Н), 1,17 (д, J=7,1 Гц, 1,38Н), 1,16 (д, J=7,0 Гц, 1,62Н), 1,12 (д, J=7,1 Гц, 1,62Н), 1,04 (д, J=7,4 Гц, 1,38Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃ClF₄N₆O [М+Н]⁺ 484.1, найдено 483.9.

Пример 28. Синтез 1-(1-(4-фторфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-ил)-5-метил-3-(2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазол-1-ил)пирролидин-2-она гидрохлорида

Указанное в заголовке соединение получали по методике, описанной выше для Примера 27, заменяя 4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол на 2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазол на стадии b. ¹Н ЯМР цис/транс смеси (400 МГц, CD₃OD) δ 8,50 (с, 0,64Н), 8,43 (с, 0,36Н), 7,64 (с, 1Н), 7,52-7,49 (м, 2Н), 7,32 (т, J=8,2 Гц, 2Н), 5,82-5,76 (м, 1Н), 4,26-4,20 (м, 1Н), 3,16-2,96 (м, 2Н), 2,82-2,79 (м, 3Н), 1,48 (м, 1Н), 2,29 (м, 1Н), 1,37 (м, 2Н), 1,19-1,15 (м, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃F₄N₅O [М+Н]⁺ 450.2, найдено 450.0.

Пример 29. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропоксипиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 4-иод-фторбензола (2,42 г, 11 ммоль), 4-нитро-1H-пиразола (1,00 г, 10 ммоль), 8-гидроксихинолина (0,15 г, 1 ммоль), CuI (0,192 г, 1 ммоль) и карбоната калия (2,78 г, 20 ммоль) в ДМСО (20 мл) нагревали при 135°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли 30 мл воды и экстрагировали этилацетатом. Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (SiO₂, 10%-20% EtOAc в гексане) дала 1,02 г целевого продукта (4,9 ммоль, 49%).

b) В раствор 1-(4-фторфенил)-4-нитро-пиразола (1,02 г, 4,9 ммоль) в 10 мл ТГФ добавляли LiHMDS (1М раствор в ТГФ, 5,8 мл, 5,8 ммоль) при -78°С в атмосфере азота. Через 30 минут прикапывали 1,1,1,2,2,2-гексахлорэтан (1,31 г, 5,5 ммоль) в 6 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивали еще 1 час, затем гасили добавлением 20 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония. После нагревания до комнатной температуры, смесь экстрагировали EtOAc. Органический слой сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 5%-15% EtOAc в гексане), получая 0,61 г продукта (2,5 ммоль, 52%).

c) В раствор изопропанола (0,12 г, 2 ммоль) в 1 мл NMP добавляли NaH (0,085 г, 2 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. После нагревания до комнатной температуры добавляли 5-хлор-1-(4-фторфенил)-4-нитро-пиразол (0,24 г, 1 ммоль). Полученную смесь нагревали при 100°С 3 часа. После охлаждения до комнатной температуры, реакцию гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Органический слой сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

d) Смесь сырого остатка от упаривания со стадии с, порошка железа (0,23 г, 4 ммоль) и 100 мкл водного 6н. раствора HCl в 2 мл EtOH нагревали при 80°С в течение 20 минут. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли добавлением 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Полученную суспензию перемешивали 10 минут, затем фильтровали через целит. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

e) В смесь сырого остатка от упаривания со стадии d (0,042 г, 0,17 ммоль) и 2,5-бис[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]циклопентанона (0,053 г, 0,22 ммоль) в 1 мл дихлорэтана добавляли Me₃Al (2 н. раствор в толуоле, 180 мкл, 0,36 ммоль) при 0°С. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь разбавляли 30 мл воды и экстрагировали EtOAc. Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

f) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии е и Et₃N (0,1 мл) в 1 мл CH₂Cl₂ добавляли MsCl (28 мкл, 0,36 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь разбавляли 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Органический слой последовательно отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии

g) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии f в 1 мл ТГФ добавляли NaH (0,019 г, 0,46 ммоль) при 0°С. После 5 минут при комнатной температуре, смесь нагревали при 60°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Органический слой последовательно отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (SiO₂, 60%-100%) EtOAc в гексане) дала указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,026 г, 0,056 ммоль, 8,4% за 7 стадий). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,81 (с, 1Н), 7,70-7,61 (м, 2Н), 7,20-7,14 (м, 2Н), 4,96 (т, J=9,3 Гц, 1Н), 4,15 (п, J=8,0 Гц, 1Н), 3,98 (т, J=7,8 Гц, 1Н), 3,89 (кв, J=7,8 Гц, 1Н), 2,93-2,80 (м, 1Н), 2,51 (с, 3Н), 2,41-2,26 (м, 1Н), 1,20 (м, 6Н). MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₂₀F₄N₆O₁ [М+Н]⁺ 452.1, найдено 452.3.

Пример 30. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-диметиламинопиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 5-хлор-1-(4-фторфенил)-4-нитро-пиразола (0,20 г, 0,8 ммоль) и диметиламина (2М в воде, 0,80 мл, 1,6 ммоль) в 1 мл ДМФА нагревали при 80°С 2 часа. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли 20 мл воды и экстрагировали EtOAc. Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Смесь неочищенного продукта со стадии а, порошка железа (0,14 г, 2,5 ммоль) и 100 мкл 6 н. водной HCl в 1 мл EtOH нагревали при 80°С в течение 20 минут. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли добавлением 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Полученную суспензию перемешивали 10 минут, затем фильтровали через целит. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии

c) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии b (0,053 г, 0,23 ммоль) и 2,5-бис[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]циклопентанона (0,064 г, 0,27 ммоль) в 1 мл дихлорэтана добавляли Me₃Al (2 н. раствор в толуоле, 130 мкл, 0,27 ммоль) при 0°С. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь разбавляли 30 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали EtOAc. Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

d) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии с и Et₃N в 1 мл of CH₂Cl₂ добавляли MsCl (36 мкл, 0,46 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь разбавляли 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Органический слой последовательно отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии

e) В раствор неочищенного остатка от упаривания со стадии d в 1 мл ТГФ добавляли NaH (0,019 г, 0,46 ммоль) при 0°С. После 5 минут при комнатной температуре, смесь нагревали при 60°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь разбавляли 20 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 40 мл EtOAc. Органический слой последовательно отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (SiO₂, 60%-100% EtOAc в гексане) дала указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,015 г, 0,034 ммоль, 15% за 3 стадии). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,62-7,58 (м, 2Н), 7,53 (с, 1Н), 7,23 (с, 1Н), 7,18-7,11 (м, 2Н), 4,98 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 4,12 (кв, J=7,2 Гц, 1Н), 3,94-3,78 (м, 1Н), 2,90-2,83 (м, 1Н), 2,66 (с, 6Н), 2,51 (с, 1Н), 2,39-2,33 (м, 1Н). MS: (ES) m/z вычислено для C₁₉H₂₀F₄N₆O₁ [М+Н]⁺ 437.2, найдено 437.2.

Пример 31. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-амина (0,070 г, 0,32 ммоль), 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (0,070 г, 0,30 ммоль) и AlMe₃ (0,50 мл, 1,0 ммоль, 2 М/толуол) нагревали при 55°С в течение 1,5 часов. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водным раствором гидроксида аммония и экстрагировали EtOAc. Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~20% МеОН/CH₂Cl₂ градиент), получая 3-[[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]амино]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пропан-1-ол (0,030 г, 24%).

b) Смесь 3-[[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]амино]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пропан-1-ола (0,030 г, 0,070 ммоль), метансульфонилхлорида (0,040 мл, 0,51 ммоль) и NEt₃ (0,10 мл, 0,71 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл) перемешивали при комнатной температуре 10 минут. Смесь затем упаривали в вакуум, получая целевой мезилат.

c) Смесь описанного выше мезилата (~0,070 ммоль) перемешивали с NaH (0,050 г, 1,25 ммоль, 60%) в минеральном масле) в ТГФ (4 мл) при комнатной температуре 10 минут. Затем смесь гасили добавлением воды (20 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (0,022 г, 57%, соль с трифторуксусной кислотой) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (с, 1Н), 7,39 (дд, J=8,4, 4,8 Гц, 2Н), 7,28 (с, 1Н), 7,20 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 5,05 (дд, J=10,6, 9,0 Гц, 1Н), 3,90 (м, 1Н), 3,82 (дд, J=9,0, 9,0 Гц, 1Н), 3,01 (гептет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,90 (м, 1Н), 2,60 (с, 3Н), 2,41 (м, 1Н), 1,222 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 1,218 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₁F₄N₅O (свободная форма) [М+Н]⁺ 436.2, найдено 436.2.

Пример 32. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-амина (1,0 г, 4,54 ммоль), 3-бромтетрагидрофуран-2-она (0,462 мл, 5,0 ммоль) и AlMe₃ (3,4 мл, 6,8 ммоль, 2М раствор в толуоле) в ДХЭ (50 мл) перемешивали 2 часа при комнатной температуре, затем 45 минут при 50°С. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили 1 н. раствором HCl (50 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~100% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая 2-бром-N-[l-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-4-гидрокси-бутанамид (1,38 г, 79%).

b) Смесь 2-бром-N-[1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]-4-гидрокси-бутанамида (1,38 г, 3,59 ммоль), метансульфонилхлорида (0,36 мл, 4,65 ммоль) и NEt₃ (0,75 мл, 5,35 ммоль) в CH₂Cl₂ (50 мл) перемешивали при 0°С 40 минут. Смесь затем гасили водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая целевой мезилат (1,65 г, 99%).

c) Смесь описанного выше мезилата (0,350 г, 0,75 ммоль) перемешивали с NaH (0,200 г, 5,0 ммоль, 60% в минеральном масле) в ТГФ (7 мл) при 50°С 30 минут. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~80% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он (0,160 г, 58%).

d) Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,023 г, 0,063 ммоль), 5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразола (0,040 г, 0,27 ммоль) и K₂CO₃ (0,060 г, 0,43 ммоль) в ДМФА (1 мл) перемешивали при 60°С в течение 1 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~100%) EtOAc/гексан градиент), получая указанное в заголовке соединение (0,022 г, 80%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,52 (с, 1H), 7,37 (дд, J=9,2, 4,8 Гц, 2Н), 7,17 (дд, J=8,6, 8,6 Гц, 2Н), 6,32 (с, 1Н), 5,05 (дд, J=9,2, 5,6 Гц, 1Н), 4,07 (м, 1Н), 3,80 (м, 1Н), 2,84-3,02 (м, 2Н), 2,74 (м, 1Н), 2,45 (с, 3Н), 1,21 (д, J=7,6 Гц, 3Н), 1,11 (д, J=6,8 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₁F₄N₅O [М+Н]⁺ 436.1, найдено 436.1.

Пример 33. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[3-(1H-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-b]пиридин-1-ил]пирролидин-2-она

а) Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,080 г, 0,22 ммоль), 1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-карбонитрила (0,045 г, 0,31 ммоль) и K₂CO₃ (0,070 г, 0,50 ммоль) в ДМФА (2,5 мл) перемешивали при 60°С в течение 1 часа. Затем ее охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~100% EtOAc/гексан градиент), получая 1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]пиразоло[3,4-b]пиридин-3-карбонитрил (0,085 г, 88%).

b) Смесь 1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]пиразоло[3,4-b]пиридин-3-карбонитрила (0,082 г, 0,19 ммоль) в этан-1,2-диамине (1 мл), HOАс (0,1 мл) и EtOH (2,5 мл) перемешивали при 100°С в течение 1 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая 3-[3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-b]пиридин-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он (0,085 г, 94%).

c) Смесь 3-[3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-b]пиридин-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,085 г, 0,18 ммоль) и периодинана Десс-Мартина (0,153 г, 0,36 ммоль) в ДМСО (2,5 мл) перемешивали при 80°С в течение 1 часа. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~7% MeOH/EtOAc градиент), получая указанное в заголовке соединение (0,070 г, 82%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 10,42 (с, 1Н, ушир.), 8,74 (дд, J=8,4, 1,6 Гц, 1Н), 8,54 (дд, J=4,8, 1,6 Гц, 1Н), 7,64 (с, 1Н), 7,40 (дд, J=6,8, 4,6 Гц, 2Н), 7,23 (м, 1Н), 7,18 (дд, J=8,6 Гц, 2Н), 6,94 (с, 1Н, ушир.), 5,94 (дд, J=9,2, 9,2 Гц, 1Н), 3,94 (м, 3Н), 3,07 (гептет, J=6,8, 1Н), 2,75-2,95 (м, 2Н), 1,33 (д, J=7,6 Гц, 3Н), 1,28 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₅H₂₃FN₈O [М+Н]⁺ 471.2, найдено 471.2.

Пример 34. Синтез 3-[4-хлор-3-(1-гидрокси-1-метилэтил)-5-метил-пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она и 3-[4-хлор-5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-3-метил-пиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,045 г, 0,20 ммоль), 2-(4-хлор-5-метил-1Н-пиразол-3-ил)пропан-2-ола (0,070 г, 0,40 ммоль) и K₂CO₃ (0,05 г, 0,40 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) перемешивали при 60°С 1,5 часа. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента, получая две чистые фракции. Первая фракция соответствовала 3-[4-Хлор-3-(1-гидрокси-1-метилэтил)-5-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-ону (0,012 г, 13%). Вторая фракция соответствовала 3-[4-Хлор-5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-3-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-ону (0,012 г, 13%). ¹Н ЯМР 3-[4-Хлор-3-(1-гидрокси-1-метилэтил)-5-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (400 МГц, CDCl₃): δ 7,59 (с, 1Н), 7,38 (дд, J=9,0, 4,8 Гц, 2Н), 7,19 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 5,02 (дд, J=9,6, 7,2 Гц, 1Н), 4,68 (с, 1Н, ушир.), 3,98 (м, 1Н), 3,82 (м, 1Н), 2,97 (гептет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,85 (м, 1Н), 2,72 (м, 1Н), 2,35 (с, 3Н), 1,59 (д, J=8,4 Гц, 6Н), 1,24 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 1,16 (д, J=7,2 Гц, 3Н); ¹Н ЯМР 3-[4-Хлор-5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-3-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (400 МГц, CDCl₃) δ 7,54 (с, 1H), 7,36 (дд, J=8,8, 4,4 Гц, 2 Н), 7,17 (дд, J=8,6, 8,6 Гц, 2 Н), 6,13 (м, 1 Н), 4,08 (м, 1 Н), 3,76 (м, 1Н), 3,16 (м, 1Н), 2,91 (гептет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,88 (с, 1 Н, ушир.), 2,65 (м, 1Н), 2,18 (с, 3Н), 1,79 (с, 3Н), 1,62 (с, 3Н), 1,14 (д, J=6,8 Гц, 3Н), 1,03 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS (одинаковое значение для обоих соединений): (ES) m/z вычислено для C₂₃H₂₇ClFN₅O₂ [М+Н]⁺ 460.2, найдено 460.2.

Пример 35. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,020 г, 0,055 ммоль), 4-(трифторметил)-1H-имидазола (0,024 г, 0,17 ммоль) и K₂CO₃ (0,030 г, 0,22 ммоль) в ДМФА (0,6 мл) перемешивали при 60°С в течение 1 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (0,022 г, соль с трифторуксусной кислотой, 75%); ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 7,98 (с, 1Н), 7,59 (с, 1Н), 7,51 (с, 1Н), 7,39 (дд, J=8,4, 4,8 Гц, 2Н), 7,20 (дд, J=8,6, 8,6 Гц, 2Н), 5,06 (дд, J=10,8, 8,8 Гц, 1Н), 3,90 (м, 1Н), 3,83 (м, 1Н), 2,98 (м, 2Н), 2,54 (м, 1Н), 1,21 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 1,20 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₀H₁₉F₄N₅O (свободная форма) [М+Н]⁺ 422.1, найдено 422.1.

Пример 36. Синтез 3-[4-хлор-3-(1H-имидазол-2-ил)-5-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,055 г, 0,15 ммоль), (0,055 г, 0,23 ммоль) и K₂CO₃ (0,042 г, 0,30 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) перемешивали при 60°С в течение 1 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~100% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая 3-(4-хлор-3-иод-5-метилпиразол-1-ил)-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он (0,057 г, 72%).

b) Смесь 3-(4-хлор-3-иод-5-метилпиразол-1-ил)-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,057 г, 0,11 ммоль), Zn(CN)₂ (0,025 г, 0,21 ммоль), Pd₂(dba)₃ (0,010 г, 0,011 ммоль) и dppf (0,009 г, 0,016 ммоль) в ДМФА (2 мл) нагревали при 85°С 1 час в атмосфере азота. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным раствором NaHCO₃ (30 мл,) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~100% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая 4-хлор-1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]-5-метилпиразол-3-карбонитрил (0,042 г, 92%).

c) Смесь 4-хлор-1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]-5-метилпиразол-3-карбонитрила (0,042 г, 0,10 ммоль) в этан-1,2-диамине (1,5 мл), НОАс (0,23 мл) и EtOH (1,25 мл) перемешивали при 100°С 2,5 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая 3-[4-хлор-3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)-5-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он (0,041 г, 87%).

d) Смесь 3-[4-хлор-3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)-5-метилпиразол-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,041 г, 0,087 ммоль) и периодинана Десс-Мартина (0,150 г, 0,35 ммоль) в ДМСО (2,0 мл) перемешивали при 80°С 1,5 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,025 г, соль с трифторуксусной кислотой, 50%). ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 7,62 (с, 1Н), 7,35 (дд, J=8,4, 4,8 Гц, 2Н), 7,16 (м, 4Н), 5,15 (дд, J=8,6, 8,6 Гц, 1Н), 4,02 (м, 1Н), 3,82 (м, 1Н), 3,05 (м, 1Н), 2,97 (септет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,35 (с, 3Н), 2,70 (м, 1Н), 1,18 (д, J=6,8 Гц, 3Н), 1,14 (д, J=6,8 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₃H₂₃ClFN₇O (свободная форма) [М+Н]⁺ 468.1, найдено 468.1.

Пример 37. Синтез 3-[4-амино-3-(1Н-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,055 г, 0,15 ммоль), 4-амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбонитрила (0,050 г, 0,31 ммоль) и K₂CO₃ (0,050 г, 0,36 ммоль) в ДМФА (2,0 мл) перемешивали при 60°С в течение 1 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл) и экстрагировали смесью изопропанол: CHCl₃ (1:2 об/об, 100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~10% МеОН/EtOAc градиент), получая 4-амино-1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбонитрил (0,055 г, 82%).

b) Смесь 4-амино-1-[1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-2-оксо-пирролидин-3-ил]пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбонитрила (0,055 г, 0,12 ммоль) в этан-1,2-диамине (1,5 мл), НОАс (0,23 мл) и EtOH (2,0 мл) перемешивали при 100°С 45 минут. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали смесью изопропанол: CHCl₃ (1:2 об/об, 100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая 3-[4-амино-3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-он (0,057 г, 97%).

c) Смесь 3-[4-амино-3-(4,5-дигидро-1H-имидазол-2-ил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,057 г, 0,12 ммоль) и периодинана Десс-Мартина (0,100 г, 0,23 ммоль) в ДМСО (3 мл) перемешивали при 80°С 45 минут. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,035 г, соль с трифторуксусной кислотой, 48%). ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 11,96 (с, 1Н), 11,12 (с, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 7,65 (с, 1Н), 7,40 (дд, J=8,8, 4,4 Гц, 2Н), 7,20 (дд, J=8,6, 8,6 Гц, 1Н), 7,05 (с, 2Н, ушир.), 5,74 (дд, J=9,2, 9,2 Гц, 1Н), 3,94 (дд, J=8,4, 4,4 Гц, 2Н), 3,05 (м, 1Н), 3,07 (септет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,87 (м, 2Н), 1,31 (д, J=6,8 Гц, 3Н), 1,27 (д, J=6,8 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₄H₂₃FN₁₀O (свободная форма) [М+Н]⁺ 487.2, найдено 487.2.

Пример 38. Синтез 1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[3-(трифторметил)пиразол-1-ил] пирролидин-2-она

Смесь 3-бром-1-[1-(4-фторфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,015 г, 0,041 ммоль), 5-(трифторметил)-1H-пиразола (0,030 г, 0,22 ммоль) и K₂CO₃ (0,030 г, 0,22 ммоль) в ДМФА (0,5 мл) перемешивали при 60°С 40 минут. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл), экстрагировали EtOAc (50 мл) и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,014 г, 81%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,70 (д, J=1,6 Гц, 1Н), 7,57 (с, 1Н), 7,38 (дд, J=8,8, 4,8 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2Н), 6,58 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 5,07 (дд, J=8,8, 7,2 Гц, 1Н), 4,03 (м, 1Н), 3,82 (м, 1Н), 2,97 (гептет, J=7,6 Гц, 1Н), 2,84 (м, 2Н), 1,20 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 1,12 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₀H₁₉F₄N₅O [М+Н]⁺ 422.1, найдено 422.1.

Пример 39. Синтез 3-[4-хлор-5-метил-3-(трифторметил)пиразол-1-ил]-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она

Смесь 3-бром-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,035 г, 0,095 ммоль), 4-хлор-3-метил-5-(трифторметил)-1H-пиразола (0,050 г, 0,27 ммоль) и K₂CO₃ (0,050 г, 0,36 ммоль) в ДМФА (0,8 мл) перемешивали при 60°С 40 минут. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл), экстрагировали EtOAc (50 мл) и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,036 г, 78%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,57 (с, 1Н), 7,47 (м, 2Н), 7,34 (м, 2Н), 5,05 (дд, J=9,2, 6,0 Гц, 1Н), 4,04 (м, 1Н), 3,81 (м, 1Н), 2,99 (гептет, J=6,8 Гц, 1Н), 2,87 (м, 1Н), 2,76 (м, 1Н), 2,42 (с, 3Н), 1,22 (д, J=7,2 Гц, 3Н), 1,12 (д, J=7,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₀Cl₂F₃N₅O [М+Н]⁺ 486.1, найдено 486.1.

Пример 40. Синтез 1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

Смесь 3-бром-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,110 г, 0,29 ммоль), 2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазола (0,080 г, 0,53 ммоль) и K₂CO₃ (0,080 г, 0,58 ммоль) в ДМФА (1,8 мл) перемешивали при 65°С 2 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл), экстрагировали EtOAc (50 мл) и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1%) ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,035 г, соль с трифторуксусной кислотой, 21%). ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (с, 1Н), 7,49 (м, 2Н), 7,35 (м, 2Н), 7,27 (с, 1Н), 5,03 (дд, J=10,4, 8,8 Гц, 1Н), 3,89 (м, 1Н), 3,81 (м, 1Н), 3,04 (гептет, J=6,8 Гц, 1Н), 2,88 (м, 1Н), 2,58 (с, 3Н), 2,40 (м, 1Н), 1,23 (м, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₁ClF₃N₅O [М+Н]⁺ 452.1, найдено 452.1.

Пример 41. Синтез 1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]-3-[2-этил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь 3,3-дибром-1,1,1-трифтор-пропан-2-она (5,40 г, 20 ммоль) и тригидрата ацетата натрия (5,44 г, 40 ммоль) в воде (40 мл) кипятили 30 минут и охлаждали до комнатной температуры. Раствор пропаналя (1,04 г, 18 ммоль) и концентрированного гидроксида аммония (1,2 мл) в МеОН (100 мл) медленно добавляли в описанную смесь. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре 3 дня. Смесь затем упаривали в вакууме и экстрагировали смесью изопропанол: CHCl₃ (1:2 об/об, 200 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0~6% MeOH/EtOAc и 0~0,6% NH₄OH градиент), получая 2-этил-4-(трифторметил)-1H-имидазол (0,070 г, 2,3%).

b) Смесь 3-бром-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропилпиразол-4-ил]пирролидин-2-она (0,200 г, 0,52 ммоль), 2-этил-4-(трифторметил)-1H-имидазола (0,060 г, 0,36 ммоль) и K₂CO₃ (0,080 г, 0,58 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) перемешивали при 65°С 1,5 часа. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (30 мл), экстрагировали EtOAc (50 мл) и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1%) ТФУК в качестве элюента) получая указанное в заголовке соединение (0,0022 г, соль с трифторуксусной кислотой, 1,0%). ¹Н ЯМР (соль с трифторуксусной кислотой) (400 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (с, 1Н), 7,49 (м, 2Н), 7,35 (м, 2Н), 7,21 (с, 1Н), 5,03 (дд, J=10,4, 8,8 Гц, 1Н), 3,88 (м, 1Н), 3,81 (м, 1Н), 3,03 (гептет, J=7,0 Гц, 1Н), 2,88 (м, 2Н), 2,30 (м, 2Н), 1,40 (т, J=7,4 Гц, 3Н), 1,23 (м, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃ClF₃N₅O [М+Н]⁺ 466.1, найдено 466.1.

Пример 42. Синтез (S)-1-(1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-ил)-3-(2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазол-1-ил)пирролидин-2-она и (R)-1-(1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-ил)-3-(2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазол-1-ил)пирролидин-2-она

a) В раствор α-бром-γ-валеролактона (19,8 г, 120 ммоль) и 2-метил-4-(трифторметил)-1H-имидазола (4,50 г, 30 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) добавляли K₃PO₄ (19,1 г, 90 ммоль). Полученную суспензию нагревали до 80°С на 2 дня, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (200 мл), фильтровали через целит и упаривали. Остаток от упаривания очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-3,5% метанол/CH₂Cl₂, получая целевой продукт в виде пастообразного бесцветного твердого вещества.

b) Смесь лактонного интермедиата (700 мг, 5,1 ммоль) со стадии а и (S)-фенилглицинола (1,09 г, 4,64 ммоль) нагревали при 80°С 18 часов, охлаждали до комнатной температуры и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0,5-2% метанол/EtOAc), получая два диастереомерных продукта в виде бесцветных пен. Элюирующийся первым изомер (310 мг) получали с диастереомерным соотношением 99:1 (¹Н ЯМР), а элюирующийся вторым изомер (200 мг) с диастереомерным соотношением 11:1 (¹Н ЯМР). Каждый диастереомер пропускали через стадии c и d независимо.

c) В смесь продукта со стадии b (186 мг, 0,5 ммоль) в диоксане (2 мл) добавляли 6М H₂SO₄ (1,25 мл, 7,5 ммоль). Полученную суспензию нагревали при 80°С 1 час, охлаждали до комнатной температуры и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента). Полученный лактон⋅соль с трифторуксусной кислотой нейтрализовывали с получением бесцветного твердого вещества (53 мг, 0,23 ммоль), которое использовали без дополнительной очистки.

d) Смесь лактонного продукт со стадии с и 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-1H-пиразол-4-амина (50 мг, 0,21 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (1 мл) обрабатывали AlMe₃ (2М раствор в толуоле, 210 мкл, 0,42 ммоль) при комнатной температуре 30 минут. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором NH₄Cl (5 мл) и экстрагировали EtOAc (3×3 мл). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали, упаривали и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-100% EtOAc/CH₂Cl₂), получая целевой продукт (50 мг, 0,1 ммоль, 50% выход).

е) Продукт со стадии d (50 мг, 0,1 ммоль) в дихлорметане (0,5 мл) обрабатывали Et₃N (40 мкл, 0,29 ммоль) и метансульфонилхлоридом (20 мкл, 0,23 ммоль) 30 минут при комнатной температуре. Смесь затем разбавляли 1,2-дихлорэтаном (1 мл) и промывали водой (1 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄ и фильтровали. В фильтрат добавляли триэтиламин (100 мкл, 0,7 ммоль), и смесь перемешивали при 65°С 90 минут, упаривали и очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1%) ТФУК в качестве элюента). Полученную соль с трифторуксусной кислотой нейтрализовывали, получая указанное в заголовке соединение (19 мг, 0,041 ммоль) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,55 (с, 1Н), 7,48 (д, J=8,6, 2Н), 7,36 (д, J=8,6, 2Н), 7,22 (д, J=0,8 Гц, 1Н), 5,07 (дд, J=10,5, 8,9 Гц, 1Н), 3,91-3,77 (м, 2Н), 3,05 (гепт, J=7,0 Гц, 1Н), 2,90-2,82 (м, 1Н), 2,52 (с, 3Н), 2,42-2,31 (м, 1Н), 1,24 (д, J=3,2 Гц, 3Н), 1,23 (д, J=3,2 Гц, 3Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₁H₂₂ClF₃N₅O [М+Н]⁺ 452.1, найдено 451.9. Указанные в заголовке соединения анализировали методом хиральной хроматографии на нормальной фазе (Regis Cell cat #784104, 25 см ×4,6 мм, 5 микрон; элюент: 0,1% диэтиламин/изопропанол, 0,6 мл/мин). (S)-энантиомер, полученный из элюирующегося первым диастереомера со стадии b, имел время удерживания 6,8 мин (выделен с энантиомерным соотношением 8:1). (R)-энантиомер, полученный из элюирующегося вторым диастереомера со стадии b, имел время удерживания 7,3 мин (выделен с энантиомерным соотношением 78:1).

Пример 43. Синтез (3S)-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она и (3R)-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) В охлажденный (0°С) раствор метил 4-метил-3-оксо-пентаноата (1,72 г, 12 ммоль) в МеОН (10 мл) в атмосфере N₂ добавляли NaOMe (2,6 г 25 вес. %-ного раствора в МеОН, 12 ммоль) и 1-азидо-4-хлор-бензола (0,5 М в МТВЕ, 20 мл, 10 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, и МТВЕ удаляли в вакууме, получая неочищенный сложный эфир.

b) В неочищенный сложный эфир добавляли МеОН (5 мл) и 5 н. раствор NaOH (5 мл) при комнатной температуре, и полученную реакционную смесь перемешивали 1 час. После удаления МеОН в вакууме, водный остаток охлаждали в ледяной бане, и медленно добавляли 12 н. водный раствор HCl до pH 2, после чего формировался твердый желтый осадок. Выпавший желтый осадок отфильтровывали и растворяли в EtOAc (50 мл). EtOAc затем медленно удаляли в вакууме, и ближе к концу процесса начинало формироваться белое твердое вещество в виде взвеси. Смесь разбавляли добавлением Et₂O (100 мл) для дальнейшего осаждения белого кристаллического вещества, которое собирали фильтрованием, получая 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбоновую кислоту (830 мг, 3,13 ммоль, 31% выход).

c) В охлажденный (0°С) раствор 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбоновой кислоты (830 мг, 3,13 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляли ДМФА (50 мкл), затем прикапывали оксалилхлорид (546 мкл, 6,26 ммоль). Через 5 минут удаляли ледяную баню, и смесь перемешивали при комнатной температуре 1 час. CH₂Cl₂ удаляли в вакууме, получая 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбонилхлорид в виде белого твердого вещества, которое использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

d) Азид натрия (610 мг в 2,5 мл H₂O, 9,39 ммоль) добавляли в охлажденный (0°С) раствор 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбонилхлорида в ацетоне (7,5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре 30 минут, разбавляли CH₂Cl₂ (100 мл), промывали водой (50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл), сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме, получая сырой 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбонил азид (777 мг), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

e) Раствор 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-карбонил азида (777 мг, 2,67 ммоль) в толуоле (12 мл) перемешивали при 100°С 1,5 часа. Затем добавляли водный раствор HCl (8М, 2,5 мл), и смесь перемешивали при 100°С 1 час, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (75 мл). Затем медленно добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃ до pH 8. Органический слой сушили (MgSO₄), упаривали в вакууме и добавляли Et₂O (50 мл) для высаживания нежелательного 'мочевинного побочного продукта', который удаляли фильтрованием. Фильтрат упаривали в вакууме, получая 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-амин (497 мг), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

f) В раствор (3S)-3-[2-Метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (460 мг, 2,1 ммоль) и 1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-амина (497 мг, 2,1 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (15 мл) при 0°С добавляли Me₃Al (2 М раствор в толуоле, 1,6 мл, 3,15 ммоль). Смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, снова охлаждали до 0°С, гасили 2 н. раствором HCl (3 мл) и нейтрализовывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (25 мл). Добавляли EtOAc (100 мл), и смесь осторожно перемешивали. Органический слой собирали и промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл), сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом автоматической флэш-хроматографии (SiO₂, 25% МеОН в CH₂Cl₂), получая (2S)-N-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]-4-гидрокси-2-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]бутанамид (274 мг, 28%) выход).

g) В охлажденный (0°С) раствор (2S)-N-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]-4-гидрокси-2-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]бутанамида (274 мг, 0,583 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли Et₃N (162 мкл, 1,17 ммоль), затем прикапывали MsCl (60 мкл, 0,728 ммоль). Полученный раствор перемешивали при <10°С 30 минут, затем разбавляли CH₂Cl₂ (50 мл), промывали насыщенным водным раствором NH₄Cl (30 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и упаривали в вакууме, получая 350 мг неочищенного [(3S)-4-[[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]амино]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]-4-оксо-бутил]метансульфоната в виде желтой пены, который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

h) В [(3S)-4-[[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]амино]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]-4-оксо-бутил]метансульфонат (350 мг, 0,607 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (7 мл) добавляли Et₃N (500 мкл, 3,6 ммоль) при 70°С на 3 часа. После охлаждения до комнатной температуры, смесь сразу очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, EtOAc в CH₂Cl₂) и затем методом препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая (3S)-1-[1-(4-хлорфенил)-5-изопропил-триазол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-он в виде белого порошка в качестве соли с трифторуксусной кислотой (135 мг, 49%) выход). ¹Н ЯМР (400 МГц, Метанол-d₄) δ 7,71 (с, 1Н), 7,67 (д, 2Н, J=8 Гц), 7,55 (д, 2Н, J=8 Гц),5,51 (т, J=19, 9 Гц, 1Н), 4,11-3,90 (м, 2Н), 3,18-3,02 (м, 1Н), 2,92 (дддд, J=12,7, 8,6, 6,7, 1,5 Гц, 1Н), 2,74-2,59 (м, 1H), 2,50 (с, 3Н), 1,21 (ддд, J=7,0, 2,1, 0,6 Гц, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃ClF₃N₅O [М+Н]+ 453.9, найдено 453.1. Указанное в заголовке соединение и его энантиомер анализировали методом хиральной нормально-фазной хроматографии. Regis Pirkle Covalent (R,R) Whelk-O1 (Catalog 1-786201-300), 25 см ×4,6 мм, 5 микрон; элюент: 100% изопропанол, 0,6 мл/мин, 13,2 мин (R)-изомер и 15,7 мин (S)-изомер. R-энантиомер получали аналогичным образом.

Пример 44. Синтез 1-[1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Пиридин (20,46 мл, 253 ммоль) добавляли в раствор хлорангидрида циклобутанкарбоновой кислоты (10,0 г, 84,3 ммоль) и изопропилиден малоната (12,16 г, 84,3 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл) при 0°С, и смесь перемешивали при комнатной температуре 1,5 часа. Затем добавляли метанол (100 мл), и полученную смесь перемешивали при кипячении 3 часа, охлаждали до комнатной температуры и разделяли между водным раствором HCl (1М, 200 мл) и EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-20% EtOAc/гексан градиент), получая метил 3-циклобутил-3-оксо-пропаноат (11,6 г, 88% выход).

b) Смесь метил 3-циклобутил-3-оксо-пропаноата (5,8 г, 37,2 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (25 г, 210 ммоль) перемешивали при 100°С 1 час. После охлаждения до комнатной температуры, смесь упаривали в вакууме, получая маслянистый остаток, который использовали напрямую в следующей стадии.

c) Смесь интермедиата (~37,2 ммоль), полученного на стадии b, 4-хлорфенилгидразина гидрохлорида (6,67 г, 37,2 ммоль) и K₂CO₃ (10,3 г, 74,4 ммоль) в ДМФА (50 мл) перемешивали при 100°С 1 час. После охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляли водным раствором HCl (200 мл) и экстрагировали EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-10% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая метил 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-карбоксилат (8,3 г, 76% выход).

d) Смесь метил 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-карбоксилата (8,3 г, 28,5 ммоль) и моногидрата гидроксида лития (3,6 г, 85,6 ммоль) в МеОН (25 мл), ТГФ (25 мл) и Н₂О (12 мл) перемешивали при 80°С 1 час. После охлаждения до комнатной температуры смесь подкисляли 1М водным раствором HCl и экстрагировали EtOAc (400 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-карбоновую кислоту (6,92 г, 87%) выход).

e) В смесь 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-карбоновой кислоты (4,0 г, 14,4 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл) добавляли оксалилхлорид (3,78 мл, 43,4 ммоль) и ДМФА (0,06 мл). После 2 часов при комнатной температуре, реакционную смесь упаривали в вакууме, снова растворяли в 40 мл ацетоне и добавляли при 0°С раствор NaN₃ (3,75 г, 57,8 ммоль) в Н₂О (40 мл). Затем добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (150 мл) и EtOAc (350 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме. Остаток от упаривания перемешивали в 100 мл толуола при 95°С 1 час, охлаждали до комнатной температуры и затем добавляли 150 мл 6М водного раствора HCl при 110°С на 1 час. После охлаждения до комнатной температуры, смесь подщелачивали разбавленным раствором NH₄OH и экстрагировали EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали в вакууме и очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-100% EtOAc/CH₂Cl₂ градиент), получая 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-амин (2,9 г, 81% выход).

f) Смесь 1-(4-хлорфенил)-5-циклобутил-пиразол-4-амина (0,080 г, 0,32 ммоль) и 3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (0,080 г, 0,34 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) обрабатывали Me₃Al (0,32 мл, 0,64 ммоль, 2 М/толуол) при комнатной температуре 1,5 часа. Реакционную смесь затем гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая целевой спиртовой интермедиат.

g) В охлажденный до 0°С раствор спиртового интермедиата (~0,32 ммоль), полученного на стадии f, и Et₃N (0,067 мл, 0,48 ммоль) в CH₂Cl₂ (1,5 мл) добавляли метансульфонилхлорид (0,027 мл, 0,35 ммоль) на 10 минут. Смесь затем подщелачивали насыщенным водным раствором NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали в вакууме, получая целевой мезилат.

h) Смесь мезилата (~0,032 ммоль), полученного на стадии g, и Et₃N (0,15 мл, 1,07 ммоль в 1,2-дихлорэтане (3 мл) перемешивали при 75°С 3 часа. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь сразу очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 0-100% EtOAc/CH₂Cl₂), затем методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-Н₂О с добавлением 0,1% ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (0,060 г, 40% выход, свободная форма). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,57 (с, 1H), 7,43 (м, 2Н), 7,36 (м, 2Н), 7,23 (д, J=1,2 Гц, 1Н), 4,95 (дд, J=9,2, 8,4 Гц, 1Н), 3,86 (м, 2Н), 3,71 (м, 1Н), 2,84 (м, 1Н), 2,50 (с, 3Н), 2,36 (м, 1Н), 1,99 (м, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₁ClF₃N₅O [М+Н]⁺ 464.1, найдено 464.1

Пример 45 Синтез (3S)-1-[1-(4-хлор-3-метокси-фенил)-5-изопропил-пиразол-4-ил]-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]пирролидин-2-она

a) Смесь метил 4-метил-3-оксо-пентаноата (1,98 г, 13,7 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (1,95 г, 16,4 ммоль) перемешивали при 100°С в течение 1 дня. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь упаривали в вакууме для удаления летучих соединений, и полученный сырой продукт напрямую использовали в следующей стадии.

b) Раствор 4-хлор-3-метоксифенилгидразина гидрохлорида (3,0 г, 14,4 ммоль) и метил (2Z)-2-(диметиламинометилен)-4-метил-3-оксо-пентаноата (примерное количество 13,7 ммоль) со стадии а в ДМФА (15 мл) перемешивали при 100°С 8 часов. После охлаждения до комнатной температуры, в смесь добавляли лед (10 г) и перемешивали 5 часов. Смесь фильтровали и промывали водой (15 мл). Собирали твердый осадок, сушили в высоком вакууме и напрямую использовали в следующей стадии.

c) Двухфазный раствор метил 1-(4-хлор-3-метокси-фенил)-5-изопропил-пиразол-4-карбоксилата со стадии b (примерное количество 13,7 ммоль) и моногидрата гидроксида лития (1,2 г, 22,6 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) и воде (16 мл) нагревали при 60°С при перемешивании 1,5 часа. После охлаждения смесь упаривали, разбавляли 1 н. раствором HCl и экстрагировали EtOAc (2×60 мл). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученное коричневое твердое вещество растирали в смеси хлороформа и гексана (1:4), получая целевой продукт (2,83 г, 9,60 ммоль, 70% выход) в виде белого твердого вещества.

d) В раствор метил 1-(4-хлор-3-метокси-фенил)-5-изопропил-пиразол-4-карбоновой кислоты (0,8 г, 2,71 ммоль) со стадии с в дихлорметане (8,0 мл) добавляли оксалилхлорид (0,27 мл) и 5 капель ДМФА. Смесь перемешивали 3 часа и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт сушили в высоком вакууме несколько часов перед использованием в следующей стадии.

e) В раствор метил 1-(4-хлор-3-метокси-фенил)-5-изопропил-пиразол-4-карбонилхлорида (примерное количество 2,71 ммоль) со стадии d в ацетоне (7 мл) быстро добавляли раствор азида натрия (0,50 г, 7,7 ммоль) в воде (3 мл). Смесь интенсивно перемешивали 1 час при комнатной температуре. Добавляли дихлорметан (12 мл) и разделяли слои. Органический слой промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия, упаривали и использовали без дополнительной очистки.

f) Раствор ацилазидного интермедиата (примерное количество 2,71 ммоль) со стадии е в толуоле (20 мл) нагревали при 95°С 30 минут, после чего добавляли 1 н. раствор HCl (5 мл), и полученную двухфазную смесь нагревали при 95°С в течение ночи. После охлаждения в смесь добавляли раствор гидроксида натрия (2 н.) и экстрагировали хлороформом (2×20 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Очистка полученного сырого продукта методом флэш-хроматографии (SiO₂, 5% МеОН/CH₂Cl₂) давала целевой продукт (504 мг, 1,90 ммоль, 70% выход) в виде светло-коричневого твердого вещества.

g) Триметилалюминий (0,16 мл, 2М раствор в толуоле, 0,32 ммоль) медленно добавляли в атмосфере азота в раствор 1-(4-хлор-3-метокси-фенил)-5-изопропил-пиразол-4-амина (57 мг, 0,21 ммоль) и (3R)-3-[2-метил-4-(трифторметил)имидазол-1-ил]тетрагидрофуран-2-она (50 мг, 0,21 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при комнатной температуре. Смесь оставляли перемешиваться на 30 минут. Реакцию осторожно гасили добавлением нескольких капель 1 н. раствора HCl. После завершения выделения пузырьков газа, полученную густую смесь разбавляли дополнительным количеством 1 н. раствора HCl и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

h) В раствор неочищенного спиртового интремедиата (примерное количество 0,21 ммоль) со стадии g и триэтиламина (0,10 мл, 0,63 ммоль) в дихлорметане (3 мл) медленно добавляли метансульфонилхлорид (0,025 мл, 0,32 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре на 15 минут, после чего разбавляли добавлением дихлорметана и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

i) К неочищенному мезилатному интермедиату со стадии h (примерное количество 0,21 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) добавляли триэтиламин (0,059 мл, 0,42 ммоль). После перемешивания при 60°С в течение 2 часов, реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×20 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме. Полученный сырой остаток от упаривания очищали методом обращенно-фазной ВЭЖХ (С18 колонка, ацетонитрил-H₂O с добавлением 0,1%) ТФУК в качестве элюента), получая указанное в заголовке соединение (20 мг, 0,042 ммоль, 20% выход за три стадии) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,63 (д, J=0,6 Гц, 1Н), 7,49 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 7,29 (с, 1Н), 7,02-6,90 (м, 2Н), 5,06 (дд, J=9,1, 6,0 Гц, 1Н), 3,98-3,79 (м, 5Н), 3,08 (дт, J=14,1, 7,4 Гц, 1Н), 2,93 (дт, J=14,3, 7,5 Гц, 1Н), 2,63 (с, 3Н), 2,47-2,35 (м, 1Н), 1,25 (дд, J=7,1, 2,7 Гц, 6Н); MS: (ES) m/z вычислено для C₂₂H₂₃ClF₃N₅O₂ [М+Н]⁺ 482.1, найдено 481.9.

Пример 46

В данном примере проиллюстрирована оценка биологической активности соединений по настоящему изобретению

Материалы и методы

A. Клетки

1. CCR1 экспрессирующие клетки

а) ТНР-1 клетки

ТНР-1 клетки получали от АТСС (TIB-202) и выращивали в виде суспензии в среде RPMI-1640 с добавлением 2 мМ L-глютамина, 1,5 г/л бикарбоната натрия, 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия, 0,05% 2-меркаптоэтанола и 10% FBS. Клетки выращивали в атмосфере 5% СО₂/95% воздух, 100% влажности при 37°С и пересевали дважды в неделю при соотношении 1:5 (клетки выращивали при плотности от 2×10⁵ до 2×10⁶ клеток/мл) и отбирали на анализ с плотностью 1×10⁶ клеток/мл. ТНР-1 клетки экспрессируют CCR1 и могут применяться в анализе связывания с CCR1 в функциональном тесте.

2. Исследование хемотаксиса

Исследования хемотаксиса проводили с использованием поликарбонатных покрытых поливинилпирролидоном фильтров с диаметром пор 5 мкм, в 96-луночных камерах для исследования хемотаксиса (Neuroprobe; Gaithersburg, MD), применяя хемотаксис-буфер (сбалансированный солевой раствор Хэнкса (HBSS) и 1% FBS). Использовали CCR1 хемокиновые лиганды (т.е. MIP-1α, CCL15/Лейкотактин; R&D Systems; Minneapolis, MN) для оценки подавления исследуемым соединением миграции, вызываемой CCR1. Другие хемокины (т.е. SDF-1α; R&D Systems; Minneapolis, MN) использовали в качестве контроля специфичности. В нижнюю камеру помещали 29 мкл хемокина (т.е. 0,1 нМ CCL15/Лейкотактин) и различные количества соединения, верхняя камера содержала 100000 ТНР-1 или моноцитов в 20 мкл. Камеры инкубировали 1-2 часа при 37°С, и число клеток в нижней камере подсчитывали либо путем прямого подсчета клеток в пяти полях высокой мощности на лунку, либо посредством CyQuant анализа (Molecular Probes), метода флуоресцентного окрашивания, в котором замеряют содержание нуклеиновой кислоты, и наблюдения в микроскоп.

B. Идентификация ингибиторов CCR1

Одной из главных функций хемокинов является их способность опосредовать миграцию клеток, экспрессирующих хемокины, таких как белые кровяные тельца. Для подтверждения того, что рассматриваемые соединения ингибируют не только специфическое связывание CCR1 и проведение сигналов (по меньшей мере, как определено тестом на мобилизацию кальция), но также CCR1-опосредованную миграцию, использовали исследование хемотаксиса. Клетки [0001] ТНР-1 миеломоноцитарного лейкоза, которые похожи на моноциты, а также на свежевыделенные моноциты, использовали как мишени для хемоаттракции CCR1 хемокиновых лигандов (например, MIP-1α, CCL15/лейкотактин). Клетки помещали в верхнее отделение микролуночной камеры для исследования миграции, в то время как MIP-1α (или другой сильный CCR1 хемокиновый лиганд) и увеличивающиеся концентрации исследуемого соединения помещали в нижнюю камеру. В отсутствие ингибитора, клетки мигрируют в нижнюю камеру в ответ на действие хемокинового агониста; если соединение ингибирует работу CCR1, то большая часть клеток останется в верхней камере. Для подтверждения сродства исследуемого соединения к CCR1, а также для подтверждения его способности подавлять CCR1-опосредуемую миграцию клеток, ингибирующую активность в данном исследовании хемотаксиса титровали в диапазоне концентраций соединения от 1×10^-10 до 1×10^-4 М. В данном исследовании количество соединения варьировалось, а количество клеток и концентрации хемокинового агониста оставались постоянными. После инкубирования камер для исследования хемотаксиса в течение 1-2 часов при 37°С, давшие ответ клетки в нижней камере подсчитывали с помощью меток CyQuant анализа (Molecular Probes), метода с применением флуоресцентного красителя, измеряющего содержание нуклеиновой кислоты, и путем замеров с Spectrafluor Plus (Tecan). Использовали компьютерную программу Prism от GraphPad, Inc. (San Diego, Ca) для вычисления значений IC₅₀. Значения IC₅₀ представляют собой концентрации соединения, необходимые для уменьшения числа клеток, отвечающих на CCR1 агонист, до 50%.

1. Эффективность in vivo

а) Животная модель «кролик» деструктивного воспаления сустава

LPS исследование на кроликах проводили по существу как описано в статье Podolin, et al. J. Immunol. 169(11): 6435-6444 (2002). Самкам новозеландского кролика (примерно 2 килограмма) вводили внутрисуставно в оба колена LPS (10 нг). Исследуемое соединение, например 1,016 (в 1%-ном растворе метилцеллюлозы) или растворитель (1%-ный раствор метилцеллюлозы) дозировали перорально по 5 мл/кг в два приема (за 2 часа до внутрисуставной инъекции LPS и через 4 часа после внутрисуставной инъекции LPS). Через 16 часов после инъекции LPS, проводили лаваж колена и подсчитывали число клеток. Положительный эффект лечения определяли по уменьшению числа воспалительных клеток, привлеченных в синовиальную жидкость воспаленного коленного сустава. Обработка исследуемым соединением приводила к значительному уменьшению числа привлеченных воспалительных клеток.

b) Оценка исследуемого соединения в крысиной модели коллаген-индуцируемого артрита

Проводили 17-дневное исследование развивающегося артрита от коллагена II типа для оценки действия исследуемого соединения на вызываемое артритом клиническое распухание голеностопного сустава. Коллагеновый артрит у крыс является экспериментальной моделью полиартрита, которая широко используется для доклинических испытаний многих противоревматических средств (см. Trentham, et al., J. Exp. Med. 146(3): 857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol. 27: 134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum. 42: 498-506 (1999)). Отличительными чертами данной модели являются надежное наступление симптомов и прогресс устойчивого, легко измеряемого многосуставного воспаления, выраженное разрушение хряща в комбинации с формированием паннуса, и от умеренной до средней резорбция костной ткани и разрастание околохрящевой кости.

Самок крыс Льюиса (примерно 0,2 килограмма) усыпляли изофлураном и инъецировали им неполный адъювант Фрейнда, содержащий 2 мг/мл телячьего коллагена II типа, в основание хвоста и в две точки на спине в день 0 и день 6 в ходе 17-дневного исследования. Исследуемое соединение дозировали подкожно ежедневно со дня 0 до дня 17 в эффективной дозировке. Проводили измерение диаметра голеностопного сустава, и уменьшение опухоли сустава считали мерилом эффективности.

Мышиная модель дерматологического заболевания

Соединения по настоящему изобретению можно исследовать в мышиной модели кожной гиперчувствительности замедленного типа, индуцируемой оксазолоном. Вкратце, мышей BALB/c возраста 8-10 недель сенсибилизировали местным нанесением 1%-ного раствора оксазолона в этаноле, в день 0. На 6-й день мышам, прошедшим сенсибилизацию, перорально вводили растворитель или увеличивающиеся дозировки соединения по настоящему изобретению, непосредственно перед и через 4 часа после местного нанесения 0,5%-ного раствора оксазолона в этаноле на правое ухо. На следующий день (день 7) замеряли толщину уха с помощью измерения каверномером. Животные, которым вводили исследуемое соединение, имели значительно меньшее опухание уха, в сравнении с контрольной группой, получавшей только растворитель, демонстрируя обуславливаемое соединением уменьшение оксазолон-индуцируемой кожной гиперчувствительности.

Мышиная модель астмы

Соединения по настоящему изобретению можно протестировать в мышиной модели аллергической астмы. Астму вызывают у мышей BALB/c возраста 8-10 недель посредством сенсибилизирования мышей овальбумином в алюминиевом адъюванте в дни 0 и 10. На 20-й день мышам вводили овальбумин в PBS назально, вызывая воспаление дыхательных путей. Группам мышей вводили либо носитель, либо возрастающие дозировки соединения по настоящему изобретению, начиная с 20-го дня и продолжая до 23-го дня. Животных исследовали на 23-й день после назального введения овальбумина на предмет клеточных инфильтратов в бронхоальвеолярных выделениях (BAL). Значительное уменьшение числа лейкоцитов в BAL относительно мышей, которым вводили носитель, указывает на эффективность соединения в данной модели.

Мышиная модель системной красной волчанки

В настоящем примере описана методика для оценки эффективности CCR1 антагонистов в лечении системной красной волчанки (SLE). У самок мышей NZB/W FI спонтанно развивается патология SLE-типа, начинающаяся в возрасте 6 месяцев, характеризующаяся протеинурией, аутоантителами в сыворотке, гломерулонефритом и летальным исходом. Три серии групп мышей NZB/W FI, по 20 мышей в группе, тестировали на эффективность CCR1 антагонистов следующим образом: одна группа мышей дополнительно получала фосфатно-буферный солевой раствор (PBS) и Tween 0,5% интраперитонеально, вскоре после отнятия от груди, и затем в соответствии с расписанием для различных дозировок. Вторая серия состояла из групп мышей, получавших различные дозировки CCR1 антагониста интраперитонеально, внутривенно, подкожно, внутримышечно, перорально или каким-либо другим способом введения вскоре после отнятия от груди, и затем по различным расписаниям введения дозировок. Третья группа мышей, служившая в качестве позитивного контроля, состоит из групп, которым вводили анти-IL10-антитела вскоре после отнятия от груди, и после этого отбирали образцы Развитие заболевания отслеживают по критериям случайной гибели; гистологии почек, уровню авто-антител.

Мышиная модель рака

В данном примере описана методика оценки эффективности CCR1 антагонистов в лечении злокачественных опухолей. Нормальным линиям мышей можно пересадить различные хорошо описанные линии рака мышей, включая мышиную тимому EL4, трансфицированную овальбумином, что позволяет легко оценивать опухоль-специфичные антигенные ответы после вакцинации овальбумином. Три серии групп мышей из любой из моделей опухолей тестировали на эффективность CCR1 антагонистов следующим способом: одной серии мышей дополнительно вводили PBS и Tween 0,5% интраперитонеально, вскоре после трансплантации опухоли и далее с различными режимами дозирования. Вторая серия состояла из групп мышей, которым вводили различные дозировки CCR1 антагониста интраперитонеально, внутривенно, подкожно, внутримышечно, перорально или каким-либо другим образом, вскоре после пересадки опухоли и далее с различными режимами дозирования. Третья серия мышей, выступающая в роли положительного контроля, состоит из групп, которым вводили анти-IL4 антитела, анти-IFNg антитела, IL4 или TNF, интраперитонеально, вскоре после пересадки опухоли и далее с различными режимами дозирования. Эффективность отслеживали по росту опухоли относительно регрессии. В случае OVA-трансфицированной модели EL4 тимомы, цитолитические OVA-специфические ответы можно измерить путем стимуляции клеток дренирующих лимфатических узлов овальбумином in vitro и измерения антиген-специфической цитотоксичности через 72 часа.

Мышиная модель псориаза

В данном примере описаны методики оценки эффективности CCR1 антагонистов при псориазе. Мышиную модель псориаза получали внутривенным переносом популяции очищенных Т-клеток (обозначаемых CD45Rbhi Т-клетки), выделенных из селезенки BALB/c мышей, иммунодефицитным реципиентам - мышам СВ.17 scid/scid. У мышей развивались признаки покраснения, опухолей и повреждений кожи, напоминающие признаки псориаза у человека, на их ушах, ногах и хвосте к 8-й неделе после переноса. Трем сериям групп мышей, включающим 10-15 мышей СВ.17 scid/scid на группу, инъецировали очищенные CD45Rbhi Т-клетки. Одна серия мышей дополнительно получала фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) и Tween 0,5% интраперитонеально при первичном переносе клеток и с различным режимом дозирования после переноса. Вторая серия состояла из групп мышей, получавших различные дозировки CCR1 антагониста, который вводили интраперитонеально, внутривенно, подкожно, внутримышечно, перорально или каким-либо иным путем при первичном переносе клеток и с различным режимом дозирования после переноса. Третья серия мышей, выступавшая в роли положительного контроля, состояла из групп, которым вводили антитела к IL-12, IL-4, IFNg или TNF, или цитокин IL-10 при первичном переносе клеток и с различным режимом дозирования после переноса. За животными наблюдали на предмет развития псориазных повреждений в течение 3 месяцев после переноса клеток.

Мышиная модель воспалительного заболевания кишечника

У MDR1a-нокаут мышей, не имеющих гена Р-гликопротеина, спонтанно развивался колит в условиях отсутствия специфического патогена. Патология у данных животных характеризовалась как опосредованное Т-клетками воспаление Th1-типа, сходное с язвенным колитом у человека. Заболевание обычно начинает развиваться примерно через 8-10 недель после рождения. Однако возраст, в котором данное заболевание проявляется, и максимальный уровень его распространения часто сильно различается между различными вивариями. В исследовании с использованием MDR1a-нокаут мышей, CCR1 антагонист можно оценивать с профилактической или терапевтической точки зрения, в зависимости от времени введения. Самкам мыши (n=34) ежедневно подкожно вводили тестируемое соединение в эффективной дозировке. В данном исследовании оценивали связанные с воспалительным заболеванием кишечника параметры: замедление роста, выраженность анальных выделений и раздражения. Соединение, которое уменьшает анальные выделения и раздражение или ингибирует связанное с воспалительным заболеванием кишечника замедление роста, указывает на эффективность соединения в данном показании.

Мышиная модель солидных опухолей

Мышиная модель опухоли RENCA точно имитирует развитие карциномы клеток почек у человека, в особенности в части спонтанных метастазов в легкие, и служит моделью солидных опухолей. Самкам мышей Balb/c 6-8-недельного возраста инокулировали примерно 5е5 клеток RENCA (аденокарцинома почек у мышей; АТСС cat# CRL-2947) под почечную капсулу и наблюдали рост почечной опухоли в течение 22 дней, при этом метастазы в легкие наблюдали уже на 15-й дней. Животным вводили носитель или соединение по настоящему изобретению, например, каждый день подкожно, начиная со дня пересадки опухоли, для мониторинга влияния на первичный рост, или в более позднее время (например, день 7) для мониторинга действия соединения на метастазы. Площади первичной опухоли замеряют дважды в неделю с использованием механического кавернометра. Объемы опухолей вычисляют по формуле v=pab2/6, где а это самый длинный диаметр, и b представляет собой второй по длине диаметр, перпендикулярный а. Уменьшение объема опухоли или частоты появления метастазов указывает на эффективность соединения по настоящему изобретению.

Мышиная модель воспаления

Метод индуцирования перитонеального воспаления путем введения 3% тиогликолята в брюшную полость хорошо известен в данной области. После введения тиогликолята, быстрый приток иммунных клеток к месту введения, в первую очередь CCR1-несущих нейтрофилов, приводит к локальному воспалению в течение 24 часов. Можно отбирать образцы перитонеального экссудата и определять количество клеток и его состав, для оценки противовоспалительных свойств исследуемого соединения, введенного до, во время или после введения тиогликолята. При исследовании данным методом, соединение 1,042 по настоящему изобретению показало резкое уменьшение общего числа клеток и числа нейтрофилов, продемонстрировав и эффективность, и биологический охват целевого рецептора.

В приведенной ниже таблице 2 представлены структуры и показатели активности для описанных в настоящем тексте репрезентативных соединений. Показатели активности для описанного выше теста на хемотаксис приведены в следующем формате:

+, 20 мкМ>IC₅₀>100 нМ; ++, IC₅₀≤100 нМ.

Claims

1. Соединение, имеющее структуру

,

где n представляет собой целое число от 0 до 3;

каждый A независимо выбран из группы, состоящей из N и CH;

A¹ представляет собой N или C(R⁵);

A² представляет собой N или C(R⁷);

R¹ и R² каждый независимо выбраны из группы, состоящей из H, галогена и -OR^a;

R³ является представителем, выбранным из группы, состоящей из H, C_1-8 алкила, C_3-8 циклоалкила, C_2-8 алкенила, C_1-8 галогеналкила, -OR^a, -NR^aR^b, фенила и 5- или 6-членного гетероарила;

R⁴ является представителем, выбранным из группы, состоящей из H и C_1-8 алкила;

R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ каждый независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, C_1-8 алкила, C_1-8 галогеналкила, C_1-8 гидроксиалкила и 5- или 6-членного гетероарила;

R⁹ является представителем, выбранным из группы, состоящей из H и C_1-8 алкила; и

каждый R^a и R^b независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, C_1-8алкила;

где каждый гетероарил имеет от одного до пяти гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, O и S,

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где каждый R¹ и R² независимо представляет собой H или галоген.

3. Соединение по п. 1, где R⁹ представляет собой H или CH₃.

4. Соединение по п. 1, имеющее структуру

,

где n равен 1, 2 или 3.

5. Соединение по п. 4, где n равен 1.

6. Соединение по п. 1, где циклический фрагмент, содержащий N, A¹ и A² в качестве членов цикла, выбран из группы, состоящей из:

,

где волнистая линия означает место присоединения к остальной части молекулы.

7. Соединение по п. 1, где циклический фрагмент, содержащий N, A¹ и A² в качестве членов цикла, выбран из группы, состоящей из:

,

где R⁷ представляет собой H или Cl и R⁸ представляет собой C_1-8алкил; и

8. Соединение по п. 5, имеющее структуру

,

где R¹ представляет собой Cl или F.

9. Соединение по п. 8, имеющее структуру

.

10. Соединение по п. 8, имеющее структуру

.

11. Соединение по п. 8, имеющее структуру

.

12. Соединение по п. 5, имеющее структуру

,

где R¹ представляет собой Cl или F.

13. Соединение по п. 5, имеющее структуру

.

14. Соединение по п. 5, имеющее структуру

.

15. Соединение по п. 5, имеющее структуру

.

16. Соединение по любому из пп. 7, 8, 9, 10, 13, 14 или 15, где R³ выбран из группы, состоящей из H, C_1-8 алкила, C_3-8 циклоалкила и C_2-8 алкенила.

17. Соединение по п. 1, где n равен 1;

где циклический фрагмент, содержащий N, A¹ и A² в качестве членов цикла, выбран из группы, состоящей из:

,

R³ выбран из группы, состоящей из H, C_1-8 алкила, C_3-8 циклоалкила и C_2-8 алкенила;

R⁷ представляет собой H или Cl и R⁸ представляет собой C_1-8алкил; и

R⁹ представляет собой H или CН₃.

18. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:

или его фармацевтически приемлемая соль.

19. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из:

или его фармацевтически приемлемая соль.

20. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из:

или его фармацевтически приемлемая соль.

21. Соединение по п. 1, имеющее структуру

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

22. Соединение по п. 1, имеющее структуру

,

или его фармацевтически приемлемая соль.

23. Фармацевтическая композиция в качестве антагониста или модулятора ССR1 рецептора, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-22 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель.

24. Способ лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из отторжения трансплантата, дерматита, воспалительного заболевания кишечника, астмы, болезни Альцгеймера, псориаза, энцефаломиелита, ревматоидного артрита, множественного склероза, множественной миеломы, остеопороза и лейкемии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-22.

25. Способ по п. 24, в котором указанное заболевание или состояние выбрано из группы, состоящей из отторжения трансплантата, дерматита, воспалительного заболевания кишечника, астмы, болезни Альцгеймера, псориаза и энцефаломиелита.

26. Способ по п. 24, в котором указанное заболевание или состояние выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, множественного склероза, множественной миеломы и остеопороза.

27. Способ по п. 24, в котором введение осуществляется перорально, парентерально, ректально, чрескожно, сублингвально, назально или наружно.

28. Способ по п. 24, в котором указанное соединение вводят в комбинации с противовоспалительным средством, анальгетиком, антипролиферативным средством, ингибитором метаболизма, ингибитором миграции лейкоцитов или иммуномодулятором.