[go: up one dir, main page]

RU2648153C1 - Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe - Google Patents

Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe Download PDF

Info

Publication number
RU2648153C1
RU2648153C1 RU2016150728A RU2016150728A RU2648153C1 RU 2648153 C1 RU2648153 C1 RU 2648153C1 RU 2016150728 A RU2016150728 A RU 2016150728A RU 2016150728 A RU2016150728 A RU 2016150728A RU 2648153 C1 RU2648153 C1 RU 2648153C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
water
sodium
nutrient medium
plague microbe
birds
Prior art date
Application number
RU2016150728A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Семеновна Катунина
Александр Николаевич Куличенко
Анна Алексеевна Курилова
Анастасия Анатольевна Зуенко
Людмила Дмитриевна Тимченко
Игорь Владимирович Ржепаковский
Надежда Ивановна Бондарева
Светлана Суреновна Аванесян
Валерий Николаевич Вакулин
Марина Николаевна Сизоненко
Original Assignee
Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority to RU2016150728A priority Critical patent/RU2648153C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2648153C1 publication Critical patent/RU2648153C1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: microbiology.
SUBSTANCE: invention relates to microbiology. Nutrient medium for cultivation of plague microbe contains acidic hydrolyzate of water-soluble fraction of embryonic-egg mass of birds, sodium chloride, sodium phosphate 2-substituted 12-water, sodium sulfurous, microbiological agar and distilled water at a given ratio of components.
EFFECT: invention allows to obtain a sufficient number of colonies of the plague microbe.
1 cl, 1 dwg, 3 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования чумного микроба.The invention relates to biotechnology, namely, to obtain nutrient media that create optimal conditions for the cultivation of plague microbe.

Известна питательная среда для культивирования чумного микроба, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса, содержащего аминного азота 0,12%, натрий хлористый 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный 4,0; натрий сернистокислый 0,04; кислоту соляную (1:1) 1,6; агар микробиологический 24,0; питьевую воду до 1 литра (Промышленный регламент на производство вакцины чумной живой, лиофилизата для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций. ПР 01897080-09-09. Регистрационный №2134-09. 2009 г. 253 с.).Known nutrient medium for cultivation of the plague microbe, including, g / l: hydrolyzed beef meat containing amine nitrogen 0.12%, sodium chloride 4.0; sodium phosphate 2-substituted 12-aqueous 4.0; sodium sulfide 0.04; hydrochloric acid (1: 1) 1.6; microbiological agar 24.0; drinking water up to 1 liter (Industrial regulations for the production of living plague vaccine, lyophilisate for the preparation of suspension for injection, cutaneous scarification application and inhalation. PR 01897080-09-09. Registration No. 2134-09. 2009, 253 p.).

Недостатком данной среды является ее дороговизна.The disadvantage of this environment is its high cost.

Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса, содержащего аминного азота 0,12% хлористый натрий 5,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 4,0; агар микробиологический 12,0; дистиллированную воду до 1 литра. pH среды 7,2 (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, Биргер М.О., 1982 г., с. 53).Closest to the proposed invention is a nutrient medium for the cultivation of microorganisms, including, g / l: hydrolyzed beef meat containing amine nitrogen 0.12% sodium chloride 5.0; disubstituted sodium phosphate 4.0; microbiological agar 12.0; distilled water up to 1 liter. pH of 7.2 (Handbook of microbiological and virological research methods, Birger M.O., 1982, p. 53).

Недостатком данной среды является отсутствие стимулятора роста микроорганизмов.The disadvantage of this environment is the lack of a stimulator of the growth of microorganisms.

Целью изобретения является получение качественной питательной среды плотной для культивирования чумного микроба на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, которая обеспечивает рост достаточного количества колоний на пластинках питательного агара.The aim of the invention is to obtain a high-quality nutrient medium dense for cultivation of the plague microbe based on the acid hydrolyzate of the water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds, which ensures the growth of a sufficient number of colonies on nutrient agar plates.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда плотная в качестве питательной основы содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический, дистиллированную воду, с добавлением в среду стимулирующей добавки - натрия сернистокислого, воды дистиллированной при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The essence of the invention lies in the fact that the nutrient medium is dense as a nutrient base, it contains an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds, sodium chloride, sodium phosphate 2-substituted 12-water, microbiological agar, distilled water, with the addition of a stimulating additive to the medium - sodium sulfite, distilled water in the following ratio of ingredients, g / l:

Кислотный гидролизат водорастворимойWater Soluble Acid Hydrolyzate фракции эмбрионально-яичной массыfetal egg mass fractions птицbirds 235,0-335,0235.0-335.0 Натрий хлористыйSodium Chloride 4,0-6,04.0-6.0 Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водныйSodium phosphate 2-substituted 12-aqueous 3,0-5,03.0-5.0 Натрий сернистокислыйSodium Sulphate 0,15-0,350.15-0.35 Агар микробиологическийMicrobiological agar 6,0-10,06.0-10.0 Дистиллированная водаDistilled water до 1 лup to 1 l

Кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, содержащий в среднем 9,4% белка. Благодаря высокому содержанию пептидов - 1450 мг %; белка (по Кумасси) - 106 мг %; общего белка (по Киельдалю) - 2,1%; аминного азота - 421 мг %, углеводов - 0,15%; хлоридов - 1,8%, сухого остатка - 5,25% гидролизат является хорошей питательной средой для культивирования микроорганизмов.An acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of bird embryonic egg mass, containing an average of 9.4% protein. Due to the high content of peptides - 1450 mg%; protein (according to Coomassie) - 106 mg%; total protein (according to Kieldahl) - 2.1%; amine nitrogen - 421 mg%, carbohydrates - 0.15%; chlorides - 1.8%, dry residue - 5.25%; the hydrolyzate is a good nutrient medium for the cultivation of microorganisms.

В состав питательной среды входят следующие ингредиенты.The composition of the nutrient medium includes the following ingredients.

Натрий хлористый 99,9%, хч, ГОСТ 4233-77 партия 246, срок годности 09.2019. Производитель «Нева реактив». Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей, будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке.Sodium chloride 99.9%, hh, GOST 4233-77 lot 246, expiration date 09.2019. Manufacturer Neva Reagent. Bacteria need a minimal amount of salts, being dissolved in a nutrient medium and being in a state of electrolytic decomposition, ionized mineral compounds are simultaneously catalysts of various chemical processes occurring in a microbial cell.

Включение в состав среды натрия фосфорнокислого 2-замещенного 12-водного обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне pH, они малотоксичны (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов. - М., 1989) (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 37-38).The inclusion in the medium of sodium phosphate 2-substituted 12-water is justified by the widespread use of phosphates in the preparation of nutrient media, because these are the only inorganic compounds that have a buffering effect in a physiologically important pH range, they are low toxic (Methodological recommendations for the manufacture and use of culture media and solutions for microbiological purposes, the cultivation of cells and viruses. - M., 1989) (M.S. Polyak; V . I. Sukharevich; ME Sukharevich. Nutrient media for medical and sanitary microbiology. St. Petersburg: ELBI-St. Petersburg. - 2008. - P. 37-38).

Натрий сернистокислый ГОСТ 195-77 ЧДА, дата поступления 23.12.15 г., партия №15, порошок белого цвета, растворим в воде. Выдерживает испытание п. 3.4. ГОСТ 197-77. Определение щелочности, %, не более 0,048. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,1. Дата контроля 19.01.16 г. Срок хранения 6 месяцев. Изготовитель АО «Химический завод им. Л.Я. Карпова. Натрий сернистокислый является стимулятором роста микроорганизмов, источником серы и восстановителем окислительно-восстановительного потенциала питательной среды. Сера, присутствующая в натрии сернистокислом, необходима для белка клеток микроорганизмов в количестве 1%. Для подавляющего числа микроорганизмов, в том числе и патогенных, благоприятной средой для роста и размножения является нейтральная реакция среды (pH 7,0±0,5), поэтому уровень pH среды до нужного значения необходимо контролировать, этот фактор доводят до нужного использованием сернистых солей или кислот. Этим фактором и является натрий сернистокислый. При добавлении натрия сернистокислого среда становится прозрачнее.Sodium sulfate GOST 195-77 ChDA, date of receipt 12/23/15, batch No. 15, white powder, soluble in water. Passes the test of clause 3.4. GOST 197-77. Determination of alkalinity,%, no more than 0,048. Mass fraction of the main substance,%, not less than 99.1. Control date 01/19/16. Shelf life 6 months. Manufacturer JSC "Chemical Plant named. L.Ya. Karpova. Sodium sulfite is a stimulator of the growth of microorganisms, a source of sulfur and a reducing agent of the redox potential of the nutrient medium. Sulfur, which is present in sodium sulphurous acid, is necessary for the protein of microorganism cells in an amount of 1%. For the overwhelming number of microorganisms, including pathogens, a favorable environment for growth and reproduction is a neutral reaction of the medium (pH 7.0 ± 0.5), so the pH of the medium must be controlled to the desired value, this factor is adjusted to the desired value using sulfur salts or acids. This factor is sodium sulfite. When sodium sulfite is added, the medium becomes more transparent.

Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Производитель: «Pronadisa» Испания. Партия LF 15130184. Срок годности до 10.2017 г. Дата изготовления: октябрь 2013 г. Порошок светло-кремового цвета сероватого оттенка, запах без постороннего, свойственный студню с массовой долей сухого агара 0,85%. Температура плавления студня с массовой долей сухого агара 0.85% не ниже 80°С, температура застудневания - 30-37°С, прочность студня не менее - 350±40 г. Главная особенность агара его желирующая способность при 90°С.Microbiological agar - bacteriological agar (European type). Producer: "Pronadisa" Spain. Lot LF 15130184. Shelf life until 10.2017. Production date: October 2013. Light cream powder, grayish tint, odorless, characteristic of jelly with a mass fraction of dry agar of 0.85%. The melting temperature of the jelly with a mass fraction of dry agar of 0.85% is not lower than 80 ° C, the gelation temperature is 30-37 ° C, the strength of the jelly is at least 350 ± 40 g. The main feature of agar is its gelling ability at 90 ° C.

Дистиллированная вода ГОСТ 6709-72 отвечает всем гигиеническим требованиям. Внешний вид - прозрачная жидкость, хлориды, мг/дм3 нет, нитраты, мг/дм3 нет. Удельная электропроводимость при 20°С, См/м - 0,38, pH - 6,5. Вода составляет 80-90% от клеточной массы микроорганизмов и играет важнейшую роль в их физиологических функциях, а также входит в состав структурных элементов клетки, служит средой для биохимических реакций, источником кислорода в процессах метаболизма, непосредственно участвует в метаболических реакциях, например в реакциях гидролиза.GOST 6709-72 distilled water meets all hygienic requirements. Appearance - a clear liquid, chlorides, mg / dm 3 no, nitrates, mg / dm 3 no. Electrical conductivity at 20 ° С, S / m - 0.38, pH - 6.5. Water makes up 80-90% of the cell mass of microorganisms and plays a crucial role in their physiological functions, and is also part of the structural elements of the cell, serves as a medium for biochemical reactions, a source of oxygen in metabolic processes, and is directly involved in metabolic reactions, for example, in hydrolysis reactions .

Приготовление кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц.Preparation of an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds.

Способ приготовления питательной основы для выращивания чумного микроба заключается в следующем: куриные яйца с десятисуточными эмбрионами в количестве двадцати штук помещают в холодильную камеру бытового холодильника при температуре 2-8°С на 7 суток (методика приготовления тканевых препаратов по Филатову В.П., 1946). Яйца извлекают, затем обрабатывают 5% спиртовым раствором йода. Для дополнительной стерилизации яйца подвергают облучению в стерильном боксе источником УФ-излучения в течение 60 минут на расстоянии 1 метра. Затем осуществляют гомогенизацию извлеченных куриных эмбрионов без скорлупы в размельчителе тканей в течение 10 минут до однородной жидкости желтого цвета. Полученную массу высушивают лиофильно с предварительным замораживанием при температуре минус 40,0±0,5°С в течение 72 часов при рабочем давлении в камере высушивания 8,0-9,0 Па при температуре конденсора минус 50,0±1°С, общей длительности цикла сушки 28 часов до остаточной влажности 9±1%. Затем из полученного порошка удаляют липиды при помощи петролейного эфира (ТУ 6-02-1244-83). Полученный белоксодержащий порошок впоследствии подвергают кислотному гидролизу по классической методике Козлова Ю.А. (1950) в собственной модификации, которая заключается в следующем: 40 грамм белоксодержащего порошка добавляют к 1 л 1% соляной кислоты (HCl) (х.ч. ГОСТ 3118-77) до pH 3,28 и автоклавируют при температуре плюс 125°С в течение 60 мин, затем гидролизат нейтрализуют 20% раствором натрия гидроокиси (NaOH) (ч.д.а ГОСТ 4328-77) до pH 6,6±0,1, полученный раствор центрифугируют при 4800 оборотах в мин при температуре плюс 4°С, надосадочную жидкость фильтруют через 0,2 мкм стерилизующий фильтр (Sartorius). В фильтрате (гидролизате) аминный азот составляет 421±6 мг %, сухой остаток 5,25±0,05%.A method of preparing a nutritional basis for the cultivation of a plague microbe is as follows: chicken eggs with ten-day embryos in the amount of twenty pieces are placed in the refrigerator of a household refrigerator at a temperature of 2-8 ° C for 7 days (preparation of tissue preparations according to Filatov V.P., 1946 ) The eggs are removed, then treated with 5% alcohol solution of iodine. For additional sterilization, the eggs are irradiated in a sterile box with a UV source for 60 minutes at a distance of 1 meter. Then, the extracted shell-free chicken embryos are homogenized in a tissue grinder for 10 minutes until a homogeneous yellow liquid. The resulting mass is freeze-dried with preliminary freezing at a temperature of minus 40.0 ± 0.5 ° C for 72 hours at a working pressure in the drying chamber of 8.0-9.0 Pa at a condenser temperature of minus 50.0 ± 1 ° C, total the drying cycle lasts 28 hours to a residual moisture content of 9 ± 1%. Then, lipids are removed from the obtained powder using petroleum ether (TU 6-02-1244-83). The resulting protein-containing powder is subsequently subjected to acid hydrolysis according to the classical method of Kozlov Yu.A. (1950) in its own modification, which is as follows: 40 grams of protein-containing powder is added to 1 liter of 1% hydrochloric acid (HCl) (chemically pure GOST 3118-77) to a pH of 3.28 and autoclaved at a temperature of + 125 ° C. for 60 minutes, then the hydrolyzate is neutralized with a 20% solution of sodium hydroxide (NaOH) (analytical grade GOST 4328-77) to a pH of 6.6 ± 0.1, the resulting solution is centrifuged at 4800 rpm at a temperature of + 4 ° C, the supernatant is filtered through a 0.2 μm sterilizing filter (Sartorius). Amine nitrogen in the filtrate (hydrolyzate) is 421 ± 6 mg%, and the dry residue is 5.25 ± 0.05%.

Приготовление питательной среды плотнойPreparation of a dense culture medium

Питательную среду на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц для культивирования чумного микроба готовят следующим способом: кислотный гидролизат, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 285 мл, натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водного - 4,0; агар микробиологический - 8,0; дистиллированная вода до 1 литра. Среду кипятят до полого растворения ингредиентов, затем устанавливают pH 7,2±0,1°С помощью 20% раствора натрия гидроокиси, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем в фильтрат добавляют стимулирующую добавку натрий сернистокислый - 0,25, разливают в градуированные флаконы по 200,0 мл, закрывают ватно-марлевыми пробками и бумагой Крафт, стерилизуют при 0,5 атм. в течение 30 мин. После стерилизации охлаждают до 56°С, разливают в стерильные чашки Петри по 30 мл.A nutrient medium based on an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds for cultivation of the plague microbe is prepared in the following way: an acid hydrolyzate diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.12% - 285 ml, sodium chloride - 5.0; sodium phosphate 2-substituted 12-aqueous - 4.0; microbiological agar - 8.0; distilled water up to 1 liter. The medium is boiled until the ingredients are completely dissolved, then the pH is adjusted to 7.2 ± 0.1 ° C using a 20% sodium hydroxide solution, filtered through a cotton-gauze filter, then a stimulating additive sodium sulfide - 0.25 is added to the filtrate, poured into graduated bottles 200.0 ml each, covered with cotton-gauze plugs and Kraft paper, sterilized at 0.5 atm. within 30 minutes After sterilization, cool to 56 ° C, pour into 30 ml sterile Petri dishes.

Перед приготовлением посевного материала исходную культуру чумного микроба контролируют ее культурально-морфологические и ферментативные свойства, высевают по 2 пробирки со средами Гисса с сахарозой, лактозой, рамнозой и глицерином, к которым добавляют индикатор Андреде, и высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH 7,3±0,1. Также культуру высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH 7,1±0,1, которые в дальнейшем используют для последовательного рассева с целью получения изолированных колоний. Все чашки Петри с посевами помещают на (48±2) ч для выращивания в термостате при температуре (27±1)°С. В том случае, если культура без диссоциации, т.е. морфология колоний типична для чумного микроба и стойко удерживает свой биохимический тип, исходную культуру пересевают в бактериологические пробирки. Посевы инкубируют (24±1) ч при 27±1°С. Через сутки пробирки с культурой используют для культивирования чумного микроба на чашки Петри. В качестве примера испытывают культуру чумного микроба №231 (производственный штамм, обладающий типичными культуральными, морфологическими, биохимическими и иммунологическими свойствами), выращенную на пластинках 2% агара Хоттингера, pH 7,2±0,1 при температуре (27±1)°С. Затем готовят взвесь I суточной культуры тест-штамма, соответствующую 10 ед. по оптическому стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85 П), эквивалентную 1,0×109 м.к./мл в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводят до содержания в 1 мл 1000 м.к. Из данного разведения взвеси чумного микроба высевают по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного агара, затем покачиванием распределяют взвесь по поверхности пластинки питательной среды, оставляют на 30 мин для впитывания посевного материала, затем помещают в термостат. Выращивают в течение (48±2) ч при (27±1)°С. В качестве контрольной среды используют плотную питательную среду pH 7,2±0,1, приготовленную на ферментативном гидролизате из говяжьего мяса.Before preparing the seed, the initial culture of the plague microbe is monitored by its cultural, morphological and enzymatic properties, 2 test tubes with Giss medium with sucrose, lactose, rhamnose and glycerin are added, to which Andrede indicator is added, and plated on 3 Petri dishes with Hottinger agar pH 7 , 3 ± 0.1. The culture is also seeded on 3 Petri dishes with Hottinger agar pH 7.1 ± 0.1, which are then used for sequential sieving in order to obtain isolated colonies. All Petri dishes with crops are placed for (48 ± 2) h for growing in an incubator at a temperature of (27 ± 1) ° С. In that case, if the culture without dissociation, i.e. colony morphology is typical of a plague microbe and stays firmly on its biochemical type, the initial culture is transferred to bacteriological tubes. Crops incubated (24 ± 1) h at 27 ± 1 ° C. After a day, culture tubes are used to cultivate the plague microbe on Petri dishes. As an example, a plague microbe culture No. 231 is tested (a production strain having typical cultural, morphological, biochemical and immunological properties) grown on plates of 2% Hottinger agar, pH 7.2 ± 0.1 at a temperature of (27 ± 1) ° С . Then prepare a suspension of the I daily culture of the test strain, corresponding to 10 units. according to the optical standard turbidity sample (OCO 42-28-85 P), equivalent to 1.0 × 10 9 m.k./ml in a sterile 0.9% sodium chloride solution, then ten-fold serial dilutions in physiological saline in a volume of 4.5 ml is adjusted to a content of 1 ml 1000 mk From this dilution, suspensions of the plague microbe are sown in 0.1 ml per 3 Petri dishes of the poured dried agar, then the suspension is distributed by swinging along the surface of the medium plate, left for 30 minutes to absorb the inoculum, then placed in a thermostat. Grown for (48 ± 2) h at (27 ± 1) ° C. As a control medium using a dense nutrient medium pH 7.2 ± 0.1, prepared on an enzymatic hydrolyzate from beef meat.

Учет результатов проводят через (48±2) ч.Analysis is carried out after (48 ± 2) hours

Пример 1. Тест-штамм выращивают на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 2350,0; натрий хлористый - 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 3,0; натрий сернистокислый - 0,15; агар микробиологический - 6,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 50 колоний диаметром 1 мм, что составляет 50% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агаре Хоттингера, вырастает 55 колоний диаметром 1,2 мм.Example 1. The test strain is grown on a nutrient medium dense on the basis of an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds, spilled on Petri dishes containing, g / l: acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds - 2350.0; sodium chloride - 4.0; sodium phosphate 2-substituted 12-water - 3.0; sodium sulfite - 0.15; microbiological agar - 6.0; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of grown colonies of the plague microbe is 50 colonies with a diameter of 1 mm, which is 50% of the growth of the sowing dose. Whereas on a control nutrient medium prepared on a meat basis, Hottinger agar, 55 colonies with a diameter of 1.2 mm grow.

Пример 2. Тест-штамм выращивают на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 285,0 мл; натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,25; агар микробиологический - 8,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 66,3 колоний диаметром 1,2 мм, что составляет 66,3% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агара Хоттингера, вырастает 70 колоний диаметром 1,5-1,8 мм. Фото 1. А) Рост колоний чумного микроба на плотной питательной среде, приготовленной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, выращенной через 48 ч инкубации при температуре (27±1)°С. Б) Контроль рост колоний чумного микроба на питательной среде плотной, приготовленной на ферментативном гидролизате из говяжьего мяса в аналогичных условиях через 48 ч инкубации при температуре (27±1)°С из посевной дозы 0,1 мл из разведения 106 м.к.Example 2. The test strain is grown on a nutrient medium dense on the basis of an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds, spilled on Petri dishes containing, g / l: acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds - 285.0 ml; sodium chloride - 5.0; sodium phosphate 2-substituted 12-water - 4.0; sodium sulfite - 0.25; microbiological agar - 8.0; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of plague microbe colonies grown is 66.3 colonies with a diameter of 1.2 mm, which is 66.3% of the increase in the sowing dose. Whereas on a control nutrient medium prepared on a meat basis of Hottinger agar, 70 colonies with a diameter of 1.5-1.8 mm grow. Photo 1. A) Growth of plague microbe colonies in a solid nutrient medium prepared on the basis of an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of bird embryonic egg mass, grown after 48 hours of incubation at a temperature of (27 ± 1) ° С. B) Control the growth of plague microbe colonies on a solid nutrient medium prepared on an enzymatic hydrolyzate of beef meat under similar conditions after 48 hours of incubation at a temperature of (27 ± 1) ° C from a sowing dose of 0.1 ml from a dilution of 10 6 m.k.

Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 335,0 мл; натрий хлористый - 6,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 5,0; натрий сернистокислый - 0,35; агар микробиологический - 10,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 52 диаметром 1,2 мм, что составляет 52% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агара Хоттингера, вырастает 60 колоний диаметром 1,5 мм.Example 3. The test strain was grown on a nutrient medium dense on the basis of an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds, spilled on Petri dishes containing, g / l: acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds - 335.0 ml; sodium chloride - 6.0; sodium phosphate 2-substituted 12-aqueous - 5.0; sodium sulfite - 0.35; microbiological agar - 10.0; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of plague microbe colonies grown is 52 with a diameter of 1.2 mm, which is 52% of the increase in the sowing dose. Whereas on a control nutrient medium prepared on the basis of meat from Hottinger agar, 60 colonies with a diameter of 1.5 mm grow.

Таким образом, заявленная питательная среда плотная на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц для культивирования чумного микроба (пример 2) может применяться для культивирования чумного микроба №231 (производственный штамм), которая обеспечивает достаточное количество колоний, что наглядно отражено на представленном фото 1.Thus, the claimed nutrient medium is dense based on the acid hydrolyzate of the water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds for cultivation of the plague microbe (example 2) can be used for cultivation of the plague microbe No. 231 (production strain), which provides a sufficient number of colonies, which is clearly reflected in the presented photo 1.

Claims (2)

Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба, содержащая питательную основу, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, а в качестве стимулирующей добавки используют натрий сернистокислый при следующем соотношении ингредиентов, г/л:Dense nutrient medium for cultivation of the plague microbe, containing a nutrient base, sodium chloride, sodium phosphate 2-substituted 12-water, microbiological agar, distilled water, characterized in that it contains an acid hydrolyzate of a water-soluble fraction of the embryonic egg mass of birds as a nutrient base, and sodium sulfite is used as a stimulating additive in the following ratio of ingredients, g / l: Кислотный гидролизат водорастворимойWater Soluble Acid Hydrolyzate фракции эмбрионально-яичной массыfetal egg mass fractions птицbirds 235,0-335,0235.0-335.0 Натрий хлористыйSodium Chloride 4,0-6,04.0-6.0 Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водныйSodium phosphate 2-substituted 12-aqueous 3,0-5,03.0-5.0 Натрий сернистокислыйSodium Sulphate 0,15-0,350.15-0.35 Агар микробиологическийMicrobiological agar 6,0-10,06.0-10.0 Дистиллированная водаDistilled water до 1 л.up to 1 liter
RU2016150728A 2016-12-22 2016-12-22 Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe RU2648153C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016150728A RU2648153C1 (en) 2016-12-22 2016-12-22 Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016150728A RU2648153C1 (en) 2016-12-22 2016-12-22 Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2648153C1 true RU2648153C1 (en) 2018-03-22

Family

ID=61708109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016150728A RU2648153C1 (en) 2016-12-22 2016-12-22 Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2648153C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2708029C1 (en) * 2018-12-07 2019-12-03 Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2245362C2 (en) * 2002-12-15 2005-01-27 Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain
RU2380409C1 (en) * 2008-11-25 2010-01-27 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for pestilential microbe cultivation
RU2394905C1 (en) * 2009-01-26 2010-07-20 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for cultivation of plague microbe
RU2433170C1 (en) * 2010-06-21 2011-11-10 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2245362C2 (en) * 2002-12-15 2005-01-27 Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain
RU2380409C1 (en) * 2008-11-25 2010-01-27 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for pestilential microbe cultivation
RU2394905C1 (en) * 2009-01-26 2010-07-20 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for cultivation of plague microbe
RU2433170C1 (en) * 2010-06-21 2011-11-10 Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С., Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований, 2005, М., Медицина, с. 565-567. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2708029C1 (en) * 2018-12-07 2019-12-03 Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2433170C1 (en) Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb
RU2648153C1 (en) Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe
RU2626568C1 (en) Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain
RU2412240C1 (en) Culture medium for growing legionella
RU2681499C1 (en) Nutrient medium on basis of secondary product of beef hydrolyzate for cultivation of microorganisms
RU2681285C1 (en) Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation
RU2415923C1 (en) Method for production of fermentative hydrolysate of fresh white cabbage and nutritive medium for cultivation lactobacteria based thereon
RU2688335C1 (en) Dense nutrient medium for cultivation of brucellosis agent
RU2702174C1 (en) Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev
RU2728379C1 (en) Nutrient medium dense for brucella cultivation
RU2748808C1 (en) Dense universal nutrient medium for growing brucella biomass
JP2010075145A (en) Culture medium for measuring number of general living bacteria
RU2348686C2 (en) Nutrient medium for microorganism cultivation
RU2394905C1 (en) Nutrient medium for cultivation of plague microbe
RU2767782C1 (en) Nutrient medium for obtaining listeria biomass
RU2529364C1 (en) Biphasic transport nutrient medium for isolation and growing brucellar microbe
RU2687364C2 (en) DENSE NUTRIENT MEDIUM FOR CULTIVATION OF INFECTIOUS EPIDIDYMITIS AGENT OF RAMS B.ovis
RU2410424C1 (en) Culture medium for growing microorganism
RU2525637C2 (en) Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent
RU2708029C1 (en) Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev
RU2745504C1 (en) Liquid nutritional medium for cultivation and discharge of biomass of vaccine strain of plague microbe (yersinia pestis ev)
RU2644248C2 (en) Dense nutrient medium for cultivation and growing of tularemic microbe
RU2748492C1 (en) Dense nutrient medium for monitoring the number of live microbial cells of the vaccine strain of the plague microbe y.pestis ev
RU2299238C2 (en) Nutrient medium for brucella culturing
RU2792438C1 (en) Selective nutrient medium with mannitol, bile and polymyxin to detect bacteria of the genera proteus, morganella, providencia, dry

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20181223