RU2648153C1 - Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба - Google Patents
Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба Download PDFInfo
- Publication number
- RU2648153C1 RU2648153C1 RU2016150728A RU2016150728A RU2648153C1 RU 2648153 C1 RU2648153 C1 RU 2648153C1 RU 2016150728 A RU2016150728 A RU 2016150728A RU 2016150728 A RU2016150728 A RU 2016150728A RU 2648153 C1 RU2648153 C1 RU 2648153C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- water
- sodium
- nutrient medium
- plague microbe
- birds
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims abstract description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 title description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 26
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 13
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 12
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 18
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 7
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 29
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 17
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 3
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 2
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- UKTDQTGMXUHPIF-UHFFFAOYSA-N [Na].S(O)(O)=O Chemical compound [Na].S(O)(O)=O UKTDQTGMXUHPIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006241 metabolic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования чумного микроба содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет получить достаточное количество колоний чумного микроба. 1 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования чумного микроба.
Известна питательная среда для культивирования чумного микроба, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса, содержащего аминного азота 0,12%, натрий хлористый 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный 4,0; натрий сернистокислый 0,04; кислоту соляную (1:1) 1,6; агар микробиологический 24,0; питьевую воду до 1 литра (Промышленный регламент на производство вакцины чумной живой, лиофилизата для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций. ПР 01897080-09-09. Регистрационный №2134-09. 2009 г. 253 с.).
Недостатком данной среды является ее дороговизна.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая, г/л: гидролизат говяжьего мяса, содержащего аминного азота 0,12% хлористый натрий 5,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 4,0; агар микробиологический 12,0; дистиллированную воду до 1 литра. pH среды 7,2 (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, Биргер М.О., 1982 г., с. 53).
Недостатком данной среды является отсутствие стимулятора роста микроорганизмов.
Целью изобретения является получение качественной питательной среды плотной для культивирования чумного микроба на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, которая обеспечивает рост достаточного количества колоний на пластинках питательного агара.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда плотная в качестве питательной основы содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический, дистиллированную воду, с добавлением в среду стимулирующей добавки - натрия сернистокислого, воды дистиллированной при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
| Кислотный гидролизат водорастворимой | |
| фракции эмбрионально-яичной массы | |
| птиц | 235,0-335,0 |
| Натрий хлористый | 4,0-6,0 |
| Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный | 3,0-5,0 |
| Натрий сернистокислый | 0,15-0,35 |
| Агар микробиологический | 6,0-10,0 |
| Дистиллированная вода | до 1 л |
Кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, содержащий в среднем 9,4% белка. Благодаря высокому содержанию пептидов - 1450 мг %; белка (по Кумасси) - 106 мг %; общего белка (по Киельдалю) - 2,1%; аминного азота - 421 мг %, углеводов - 0,15%; хлоридов - 1,8%, сухого остатка - 5,25% гидролизат является хорошей питательной средой для культивирования микроорганизмов.
В состав питательной среды входят следующие ингредиенты.
Натрий хлористый 99,9%, хч, ГОСТ 4233-77 партия 246, срок годности 09.2019. Производитель «Нева реактив». Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей, будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке.
Включение в состав среды натрия фосфорнокислого 2-замещенного 12-водного обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне pH, они малотоксичны (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов. - М., 1989) (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 37-38).
Натрий сернистокислый ГОСТ 195-77 ЧДА, дата поступления 23.12.15 г., партия №15, порошок белого цвета, растворим в воде. Выдерживает испытание п. 3.4. ГОСТ 197-77. Определение щелочности, %, не более 0,048. Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,1. Дата контроля 19.01.16 г. Срок хранения 6 месяцев. Изготовитель АО «Химический завод им. Л.Я. Карпова. Натрий сернистокислый является стимулятором роста микроорганизмов, источником серы и восстановителем окислительно-восстановительного потенциала питательной среды. Сера, присутствующая в натрии сернистокислом, необходима для белка клеток микроорганизмов в количестве 1%. Для подавляющего числа микроорганизмов, в том числе и патогенных, благоприятной средой для роста и размножения является нейтральная реакция среды (pH 7,0±0,5), поэтому уровень pH среды до нужного значения необходимо контролировать, этот фактор доводят до нужного использованием сернистых солей или кислот. Этим фактором и является натрий сернистокислый. При добавлении натрия сернистокислого среда становится прозрачнее.
Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Производитель: «Pronadisa» Испания. Партия LF 15130184. Срок годности до 10.2017 г. Дата изготовления: октябрь 2013 г. Порошок светло-кремового цвета сероватого оттенка, запах без постороннего, свойственный студню с массовой долей сухого агара 0,85%. Температура плавления студня с массовой долей сухого агара 0.85% не ниже 80°С, температура застудневания - 30-37°С, прочность студня не менее - 350±40 г. Главная особенность агара его желирующая способность при 90°С.
Дистиллированная вода ГОСТ 6709-72 отвечает всем гигиеническим требованиям. Внешний вид - прозрачная жидкость, хлориды, мг/дм3 нет, нитраты, мг/дм3 нет. Удельная электропроводимость при 20°С, См/м - 0,38, pH - 6,5. Вода составляет 80-90% от клеточной массы микроорганизмов и играет важнейшую роль в их физиологических функциях, а также входит в состав структурных элементов клетки, служит средой для биохимических реакций, источником кислорода в процессах метаболизма, непосредственно участвует в метаболических реакциях, например в реакциях гидролиза.
Приготовление кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц.
Способ приготовления питательной основы для выращивания чумного микроба заключается в следующем: куриные яйца с десятисуточными эмбрионами в количестве двадцати штук помещают в холодильную камеру бытового холодильника при температуре 2-8°С на 7 суток (методика приготовления тканевых препаратов по Филатову В.П., 1946). Яйца извлекают, затем обрабатывают 5% спиртовым раствором йода. Для дополнительной стерилизации яйца подвергают облучению в стерильном боксе источником УФ-излучения в течение 60 минут на расстоянии 1 метра. Затем осуществляют гомогенизацию извлеченных куриных эмбрионов без скорлупы в размельчителе тканей в течение 10 минут до однородной жидкости желтого цвета. Полученную массу высушивают лиофильно с предварительным замораживанием при температуре минус 40,0±0,5°С в течение 72 часов при рабочем давлении в камере высушивания 8,0-9,0 Па при температуре конденсора минус 50,0±1°С, общей длительности цикла сушки 28 часов до остаточной влажности 9±1%. Затем из полученного порошка удаляют липиды при помощи петролейного эфира (ТУ 6-02-1244-83). Полученный белоксодержащий порошок впоследствии подвергают кислотному гидролизу по классической методике Козлова Ю.А. (1950) в собственной модификации, которая заключается в следующем: 40 грамм белоксодержащего порошка добавляют к 1 л 1% соляной кислоты (HCl) (х.ч. ГОСТ 3118-77) до pH 3,28 и автоклавируют при температуре плюс 125°С в течение 60 мин, затем гидролизат нейтрализуют 20% раствором натрия гидроокиси (NaOH) (ч.д.а ГОСТ 4328-77) до pH 6,6±0,1, полученный раствор центрифугируют при 4800 оборотах в мин при температуре плюс 4°С, надосадочную жидкость фильтруют через 0,2 мкм стерилизующий фильтр (Sartorius). В фильтрате (гидролизате) аминный азот составляет 421±6 мг %, сухой остаток 5,25±0,05%.
Приготовление питательной среды плотной
Питательную среду на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц для культивирования чумного микроба готовят следующим способом: кислотный гидролизат, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 285 мл, натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водного - 4,0; агар микробиологический - 8,0; дистиллированная вода до 1 литра. Среду кипятят до полого растворения ингредиентов, затем устанавливают pH 7,2±0,1°С помощью 20% раствора натрия гидроокиси, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, затем в фильтрат добавляют стимулирующую добавку натрий сернистокислый - 0,25, разливают в градуированные флаконы по 200,0 мл, закрывают ватно-марлевыми пробками и бумагой Крафт, стерилизуют при 0,5 атм. в течение 30 мин. После стерилизации охлаждают до 56°С, разливают в стерильные чашки Петри по 30 мл.
Перед приготовлением посевного материала исходную культуру чумного микроба контролируют ее культурально-морфологические и ферментативные свойства, высевают по 2 пробирки со средами Гисса с сахарозой, лактозой, рамнозой и глицерином, к которым добавляют индикатор Андреде, и высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH 7,3±0,1. Также культуру высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH 7,1±0,1, которые в дальнейшем используют для последовательного рассева с целью получения изолированных колоний. Все чашки Петри с посевами помещают на (48±2) ч для выращивания в термостате при температуре (27±1)°С. В том случае, если культура без диссоциации, т.е. морфология колоний типична для чумного микроба и стойко удерживает свой биохимический тип, исходную культуру пересевают в бактериологические пробирки. Посевы инкубируют (24±1) ч при 27±1°С. Через сутки пробирки с культурой используют для культивирования чумного микроба на чашки Петри. В качестве примера испытывают культуру чумного микроба №231 (производственный штамм, обладающий типичными культуральными, морфологическими, биохимическими и иммунологическими свойствами), выращенную на пластинках 2% агара Хоттингера, pH 7,2±0,1 при температуре (27±1)°С. Затем готовят взвесь I суточной культуры тест-штамма, соответствующую 10 ед. по оптическому стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85 П), эквивалентную 1,0×109 м.к./мл в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводят до содержания в 1 мл 1000 м.к. Из данного разведения взвеси чумного микроба высевают по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного агара, затем покачиванием распределяют взвесь по поверхности пластинки питательной среды, оставляют на 30 мин для впитывания посевного материала, затем помещают в термостат. Выращивают в течение (48±2) ч при (27±1)°С. В качестве контрольной среды используют плотную питательную среду pH 7,2±0,1, приготовленную на ферментативном гидролизате из говяжьего мяса.
Учет результатов проводят через (48±2) ч.
Пример 1. Тест-штамм выращивают на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 2350,0; натрий хлористый - 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 3,0; натрий сернистокислый - 0,15; агар микробиологический - 6,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 50 колоний диаметром 1 мм, что составляет 50% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агаре Хоттингера, вырастает 55 колоний диаметром 1,2 мм.
Пример 2. Тест-штамм выращивают на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 285,0 мл; натрий хлористый - 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 4,0; натрий сернистокислый - 0,25; агар микробиологический - 8,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 66,3 колоний диаметром 1,2 мм, что составляет 66,3% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агара Хоттингера, вырастает 70 колоний диаметром 1,5-1,8 мм. Фото 1. А) Рост колоний чумного микроба на плотной питательной среде, приготовленной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, выращенной через 48 ч инкубации при температуре (27±1)°С. Б) Контроль рост колоний чумного микроба на питательной среде плотной, приготовленной на ферментативном гидролизате из говяжьего мяса в аналогичных условиях через 48 ч инкубации при температуре (27±1)°С из посевной дозы 0,1 мл из разведения 106 м.к.
Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде плотной на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, разлитой на чашки Петри, содержащей, г/л: кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц - 335,0 мл; натрий хлористый - 6,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 5,0; натрий сернистокислый - 0,35; агар микробиологический - 10,0; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний чумного микроба составляет 52 диаметром 1,2 мм, что составляет 52% роста от посевной дозы. Тогда как на контрольной питательной среде, приготовленной на мясной основе агара Хоттингера, вырастает 60 колоний диаметром 1,5 мм.
Таким образом, заявленная питательная среда плотная на основе кислотного гидролизата водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц для культивирования чумного микроба (пример 2) может применяться для культивирования чумного микроба №231 (производственный штамм), которая обеспечивает достаточное количество колоний, что наглядно отражено на представленном фото 1.
Claims (2)
- Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба, содержащая питательную основу, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы содержит кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц, а в качестве стимулирующей добавки используют натрий сернистокислый при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
-
Кислотный гидролизат водорастворимой фракции эмбрионально-яичной массы птиц 235,0-335,0 Натрий хлористый 4,0-6,0 Натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный 3,0-5,0 Натрий сернистокислый 0,15-0,35 Агар микробиологический 6,0-10,0 Дистиллированная вода до 1 л.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016150728A RU2648153C1 (ru) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016150728A RU2648153C1 (ru) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2648153C1 true RU2648153C1 (ru) | 2018-03-22 |
Family
ID=61708109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016150728A RU2648153C1 (ru) | 2016-12-22 | 2016-12-22 | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2648153C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2708029C1 (ru) * | 2018-12-07 | 2019-12-03 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2245362C2 (ru) * | 2002-12-15 | 2005-01-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба |
| RU2380409C1 (ru) * | 2008-11-25 | 2010-01-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для культивирования чумного микроба |
| RU2394905C1 (ru) * | 2009-01-26 | 2010-07-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для культивирования чумного микроба |
| RU2433170C1 (ru) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев |
-
2016
- 2016-12-22 RU RU2016150728A patent/RU2648153C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2245362C2 (ru) * | 2002-12-15 | 2005-01-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба |
| RU2380409C1 (ru) * | 2008-11-25 | 2010-01-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для культивирования чумного микроба |
| RU2394905C1 (ru) * | 2009-01-26 | 2010-07-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда для культивирования чумного микроба |
| RU2433170C1 (ru) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С., Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований, 2005, М., Медицина, с. 565-567. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2708029C1 (ru) * | 2018-12-07 | 2019-12-03 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
| RU2648153C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования чумного микроба | |
| RU2626568C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы чумного микроба вакцинного штамма Y.pestis EV | |
| RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
| RU2681499C1 (ru) | Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов | |
| RU2681285C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ ВИДА Brucella neotomae | |
| RU2415923C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты и питательная среда для культивирования лактобактерий на его основе | |
| RU2688335C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза | |
| RU2702174C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV | |
| RU2728379C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
| RU2748808C1 (ru) | Универсальная питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл | |
| JP2010075145A (ja) | 一般生菌数測定用培地 | |
| RU2348686C2 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2394905C1 (ru) | Питательная среда для культивирования чумного микроба | |
| RU2767782C1 (ru) | Питательная среда для получения биомассы листерий | |
| RU2529364C1 (ru) | Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба | |
| RU2687364C2 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ B.ovis | |
| RU2410424C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2525637C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза | |
| RU2708029C1 (ru) | Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev | |
| RU2745504C1 (ru) | Питательная среда жидкая для выращивания и сброса биомассы вакционного штамма чумного микроба yersinia pestis ev | |
| RU2644248C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба | |
| RU2748492C1 (ru) | Питательная среда плотная для контроля количества живых микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev | |
| RU2299238C2 (ru) | Питательная среда для культивирования бруцелл | |
| RU2792438C1 (ru) | Селективная питательная среда с маннитом, желчью и полимиксином для выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia сухая |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181223 |