RU2576780C2 - Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood - Google Patents
Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood Download PDFInfo
- Publication number
- RU2576780C2 RU2576780C2 RU2014116656/15A RU2014116656A RU2576780C2 RU 2576780 C2 RU2576780 C2 RU 2576780C2 RU 2014116656/15 A RU2014116656/15 A RU 2014116656/15A RU 2014116656 A RU2014116656 A RU 2014116656A RU 2576780 C2 RU2576780 C2 RU 2576780C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rhd
- primers
- kit
- gene
- tubes
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title abstract 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 101150108975 Rhd gene Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 9
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 claims 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 4
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 208000018712 Hemolytic disease due to fetomaternal alloimmunization Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010063676 Rhesus incompatibility Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001031 fetal erythroblastosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и используется для диагностики резус-фактора плода по крови резус-отрицательной беременной женщины для своевременной профилактики гемолитической болезни плода и новорожденного.The invention relates to medicine, namely to laboratory diagnostics and is used to diagnose the Rh factor of the fetus by the blood of a Rh-negative pregnant woman for the timely prevention of hemolytic disease of the fetus and newborn.
Известен «Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления» по патенту РФ №2296328 от 21.09.2005, опубликовано 27 03.2007, МПК G01N 33/50, C12Q 1/68, включающий выделение ДНК; проведение полимеразной цепной реакции для определения мутаций и/или полиморфизма гена, состоящей из начального плавления, ряда циклов из плавления, отжига и синтеза и финального синтеза; проведение гидролиза продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Hindi I и BstFNI, а также электрофорез в полиакриламидном геле.The well-known "Method for determining a predisposition to cancer and a diagnostic kit for its implementation" according to the patent of the Russian Federation No. 2296328 from 09.21.2005, published 03.03.2007, IPC G01N 33/50, C12Q 1/68, including DNA isolation; conducting a polymerase chain reaction to determine mutations and / or polymorphism of a gene, consisting of initial melting, a series of melting, annealing and synthesis cycles and final synthesis; hydrolysis of products of the polymerase chain reaction with restriction endonucleases Hindi I and BstFNI, as well as polyacrylamide gel electrophoresis.
Самым близким к заявляемому изобретению по технической сущности является способ определения ДНК гена резус-фактора и диагностический набор для его осуществления, описанный в заявке на изобретение №2010130842 от 23.07.2010 г., опубл. 27.01.2012 г., включающий диагностический набор для определения ДНК гена резус-фактора, включающий компоненты 67 мМ трис-HCl, pH 8,8 при 25°C; 16,6 мМ (NH4)2SO4; 6,7 мМ MgClg; 6,7 мкм ЭДТА; 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 0,2 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 10 ед./мкл, отличающийся тем, что все компоненты для проведения полимеразной цепной реакции (за исключением ДНК-полимеразы) смешаны в одном объеме, а в набор дополнительно включены ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции вода ампулированная и следующие олигопраймеры:The closest to the claimed invention in technical essence is a method for determining the DNA of the Rh factor gene and a diagnostic kit for its implementation, described in the application for the invention No. 20100130842 from 07.23.2010, publ. 01/27/2012, including a diagnostic kit for determining the DNA of the Rh factor gene, comprising components of 67 mM Tris-HCl, pH 8.8 at 25 ° C; 16.6 mM (NH 4 ) 2 SO 4 ; 6.7 mM MgClg; 6.7 μm EDTA; 170 μg BSA, a mixture of four basic dNTPs at a concentration of 0.2 mM each and a thermostable DNA polymerase of 10 units / μl, characterized in that all components for the polymerase chain reaction (with the exception of DNA polymerase) are mixed in one volume, and DNA is additionally included in the kit for positive control of the polymerase chain reaction, water ampoule and the following oligoprimers:
RHD-7-F: GGGTGTTGTAACCGAGTGCTGRHD-7-F: GGGTGTTGTAACCGAGTGCTG
RHD-7-R: CCGGCTCCGACGGTATCRHD-7-R: CCGGCTCCGACGGTATC
RHD-7-FAM: FAM-CCCACAGCTCCATCATGGGCTACAA-BHQ1RHD-7-FAM: FAM-CCCACAGCTCCATCATGGGCTACAA-BHQ1
RHD-5-F: CGCCCTCTTCTTGTGGATGRHD-5-F: CGCCCTCTTCTTGTGGATG
RHD-5-R: GAACACGGCATTCTTCCTTTCRHD-5-R: GAACACGGCATTCTTCCTTTC
RHD-5-FAM: FAM-TCTGGCCAAGTTTCAACTCTGCTCTGCT-BHQ1RHD-5-FAM: FAM-TCTGGCCAAGTTTCAACTCTGCTCTGCT-BHQ1
GAPDH-F: TGCTCCCACTCCTGATTTCTGGAPDH-F: TGCTCCCACTCCTGATTTCTG
GAPDH-R: TTCTCTAAGTCCCTCCTACAAAAGGAPDH-R: TTCTCTAAGTCCCTCCTACAAAAG
GAPDH-F AM: FAM-TTCCCCTCTTCCCACCCGCCCC-BHQ1GAPDH-F AM: FAM-TTCCCCTCTTCCCACCCGCCCC-BHQ1
Но данные диагностические наборы имеют ограниченный срок годности до 1 года и чувствительны к перепадам температур, поэтому требуют сохранения температурного режима при хранении и транспортировке, что затрудняет транспортировку в дальние регионы. А также поставка в виде стоковых растворов праймеров и Taq-полимеразы требует затрат времени и большого числа манипуляций при подготовке к амплификации, в частности надо произвести подсчет необходимого объема в зависимости от числа образцов, «раскапывание» по реакционным пробиркам. Важным обстоятельством является то, что фетальная ДНК сильно разбавлена и ее количества может не хватить для реакции амплификации, т.о. будет наблюдаться ложноотрицательный результат.But these diagnostic kits have a limited shelf life of up to 1 year and are sensitive to temperature extremes, therefore they require maintaining the temperature regime during storage and transportation, which makes it difficult to transport to distant regions. As well as the delivery in the form of stock solutions of primers and Taq polymerase requires time and a large number of manipulations in preparation for amplification, in particular, it is necessary to calculate the required volume depending on the number of samples, “digging out” from reaction tubes. An important circumstance is that fetal DNA is greatly diluted and its amount may not be enough for the amplification reaction, i.e. a false negative result will be observed.
Предлагаемое изобретение направлено на получение следующего технического результата: создание набора для ПЦР-диагностики гена резус-фактора развивающегося плода по крови беременной женщины, обладающего большей чувствительностью и специфичностью, с подготовленными реакционными пробирками к амплификации, с увеличенным сроком годности до 5 лет, с возможностью транспортировки набора в дальние регионы без строгого соблюдения температурного режима, при этом увеличить точность и скорость процесса постановки теста при уменьшении трудозатрат.The present invention is aimed at obtaining the following technical result: the creation of a kit for PCR diagnostics of the Rh factor gene of a developing fetus by the blood of a pregnant woman with greater sensitivity and specificity, with prepared reaction tubes for amplification, with an extended shelf life of up to 5 years, with the possibility of transportation recruitment to distant regions without strict adherence to temperature conditions, while increasing the accuracy and speed of the test setting process while reducing labor rat.
Поставленная задача решается за счет того, что набор с лиофилизированными праймерами для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины, содержащий готовые к амплификации реакционные пробирки с лиофилизированными праймерами и праймерами-зондами для экзонов RHD-5 и RHD-7 гена RHD (3 пробирки на пробу) и гена GAPDH, дополнительно пробирки с положительной контрольной ДНК, с деионизированной водой, с ПЦР-буфером, включающим компоненты 67 мМ трис-HCl, рН 8,8 при 25°С; 16,6 мМ (NH4)2SO4; 6,7 мМ MgClg; 6,7 мкм ЭДТА; 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 0,2 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 10 ед./мкл, причем все смеси в реакционных пробирках подготовлены для реакции в необходимых объемах, подвергнуты заморозке в жидком азоте, затем высушены по программе лиофилизации, которая состоит из основного режима сушки при давлении 0,770 мбар, -15°/60 мин, -10°/30 мин, -5°/30 мин, 0°/30 мин, и финальной сушки при давлении 0,040 мбар, 4°/120 мин. Основной причиной гемолитической болезни новорожденных является иммунологическая несовместимость плода и матери. Несовместимость по резус-фактору составляет до 95% клинически значимых случаев. В качестве профилактики резус-сенсибилизации используют антирезус-иммуноглобулин, что подтверждает свою эффективность в 80% случаев. Однако при беременности резус-отрицательным плодом нет необходимости введения иммуноглобулина, так как этот белковый препарат в данном случае будет бесполезным, небезопасным и затратным в финансовом плане. В связи с этим пренатальное определение резус-фактора не инвазивным методом на ранней стадии беременности (10-12 недель) решает вопрос своевременной профилактики у резус-отрицательных беременных при положительном резус-факторе плода и исключает ненужные процедуры при резус-отрицательной принадлежности плода. Основа анализа - ПЦР-реакция с флуоресцентной спектрометрией (Real-time) с помощью праймеров и праймеров-зондов. Праймеры и праймеры-зонды доводят до необходимой концентрации и ставят реакцию для проверки работоспособности и контроля контаминации на ДНК Jurkat и деионизированной воде. При ожидаемом результате стоковые растворы праймеров и праймеров-зондов аликвотируются в реакционные пробирки. Для сохранения работоспособности микрообъема праймера используется лиофилизация, что позволяет не зависеть от перепада температур при транспортировке и хранении, а также увеличить срок годности набора с одного года до пяти лет. А содержание дополнительного объема праймера для постановки ПЦР-реакции на определение гена RHD (3 пробирки, вместо стандартных 2) увеличивает чувствительность метода. Все смеси праймеров в необходимых пропорциях добавлены в амплификационные пробирки, совместимые с используемым амплификатором, что уменьшает время постановки и риск контаминации за счет уменьшения числа манипуляций, т.е. увеличивается точность и уменьшаются трудозатраты. Лиофилизация смеси праймеров и праймеров-зондов проводится в лиофильной сушке ALPHA 1-4 LSC №102041. Праймеры в необходимых концентрациях подготовлены к реакции, подвергнуты заморозке в жидком азоте, затем высушены по программе лиофилизации, которая состоит из основного режима сушки при давлении 0,770 мбар, -15°/60 мин, -10°/30 мин, -5°/30 мин, 0°/30 мин. Финальная сушка - при давлении 0,040 мбар, 4°/120 мин. Процесс лиофилизации позволяет сохранить стабильность праймера, транспортировать и хранить набор без строгого соблюдения температурного режима, также позволяет увеличить срок годности набора с одного года до 5 лет. Все смеси праймеров и праймеров-зондов в необходимых концентрациях подготовлены для реакции и добавлены в реакционные пробирки, сводя процесс подготовки образцов к амплификации к одному действию, а именно добавлению раствора ДНК, что позволяет ускорить процедуру подготовки образцов к амплификации. По результатам исследований дополнительная амплификационная пробирка, используемая в предлагаемом наборе, позволяет увеличить чувствительность с 97,2% до 98,4%, а специфичность с 94,4% до 95,2% соответственно.The problem is solved due to the fact that a kit with lyophilized primers for PCR diagnostics of the fetus Rh factor gene in the blood of a pregnant woman, containing reaction tubes with lyophilized primers and primer probes for exons RHD-5 and RHD-7 of the RHD gene, ready for amplification (3 tubes per sample) and the GAPDH gene, additionally tubes with positive control DNA, with deionized water, with PCR buffer, including components of 67 mM Tris-HCl, pH 8.8 at 25 ° C; 16.6 mM (NH 4 ) 2 SO 4 ; 6.7 mM MgClg; 6.7 μm EDTA; 170 μg BSA, a mixture of four basic dNTPs at a concentration of 0.2 mM each and thermostable DNA polymerase 10 units / μl, with all the mixtures in the reaction tubes prepared for the reaction in the required volumes, subjected to freezing in liquid nitrogen, then dried according to the lyophilization program , which consists of the main drying mode at a pressure of 0.770 mbar, -15 ° / 60 min, -10 ° / 30 min, -5 ° / 30 min, 0 ° / 30 min, and final drying at a pressure of 0.040 mbar, 4 ° / 120 minutes The main cause of hemolytic disease of the newborn is the immunological incompatibility of the fetus and mother. Rhesus incompatibility is up to 95% of clinically significant cases. As a prophylaxis of Rh sensitization, use is made of anti-Rhesus immunoglobulin, which confirms its effectiveness in 80% of cases. However, during pregnancy with a Rh-negative fetus, it is not necessary to administer immunoglobulin, since this protein preparation in this case will be useless, unsafe and costly. In this regard, the prenatal determination of the Rh factor by a non-invasive method in the early stage of pregnancy (10-12 weeks) solves the issue of timely prevention in Rh-negative pregnant women with a positive Rh factor of the fetus and eliminates unnecessary procedures for Rh-negative fetal affiliation. The basis of the analysis is a PCR reaction with fluorescence spectrometry (Real-time) using primers and probe primers. Primers and primer probes are adjusted to the required concentration and put a reaction to test the performance and control of contamination on Jurkat DNA and deionized water. With the expected result, stock solutions of primers and probe primers are aliquoted into reaction tubes. To maintain the health of the microvolume of the primer, lyophilization is used, which allows us not to depend on the temperature difference during transportation and storage, as well as to increase the shelf life of the kit from one year to five years. And the content of the additional primer volume for the PCR reaction to determine the RHD gene (3 tubes, instead of the standard 2) increases the sensitivity of the method. All primer mixtures, in the required proportions, were added to amplification tubes compatible with the used amplifier, which reduces the formulation time and the risk of contamination by reducing the number of manipulations, i.e. accuracy increases and labor costs are reduced. Lyophilization of the mixture of primers and primers probes is carried out in freeze drying ALPHA 1-4 LSC No. 102041. Primers in the required concentrations were prepared for the reaction, frozen in liquid nitrogen, then dried according to the lyophilization program, which consists of the main drying mode at a pressure of 0.770 mbar, -15 ° / 60 min, -10 ° / 30 min, -5 ° / 30 min, 0 ° / 30 min. Final drying - at a pressure of 0.040 mbar, 4 ° / 120 min. The lyophilization process allows you to preserve the stability of the primer, transport and store the kit without strict observance of the temperature regime, and also allows you to increase the shelf life of the kit from one year to 5 years. All mixtures of primers and probe primers in the required concentrations were prepared for the reaction and added to the reaction tubes, reducing the process of preparing samples for amplification to a single step, namely the addition of a DNA solution, which accelerates the preparation of samples for amplification. According to the results of the studies, the additional amplification tube used in the proposed set allows increasing the sensitivity from 97.2% to 98.4%, and specificity from 94.4% to 95.2%, respectively.
При определении гена резус-фактора сотрудник лаборатории после выделения ДНК при постановке амплификации использует тонкостенные оптически-прозрачные пробирки, совместимые с используемым амплификатором, в которых уже находится необходимый объем праймера, добавляет ПЦР-смесь в пробирку с выделенной ДНК и уже из нее аликвотирует по 20 мкл раствора в подготовленные пробирки, затем запускает программу амплификации. Определение гена резус-фактора проводится с помощью полимеразно-цепной реакции следующим образом: начальное плавление 5 мин при температуре 95°С, далее проводят цикл 60 раз, включающий плавление при 94°С в течение 15 с, отжиг и синтез при температуре 60°С в течение 1 мин, во время отжига проводят детекцию с помощью флуоресцентной спектрометрии. Регистрируется накопление специфического продукта амплификации путем изменения интенсивности флуоресцентного сигнала. Детекция флуоресцентного сигнала осуществляется непосредственно в ходе ПЦР с помощью амплификатора с системой в режиме «реального времени». По каналу, соответствующему флуорофору FAM, детектируется продукт амплификации ДНК гена RHD и гена GAPDH. В предлагаемом техническом решении используется дополнительная реакционная пробирка, т.е. для каждого образца проводится амплификация гена GAPDH, как контроль выделения ДНК, 7 экзона гена RHD и две пробирки для 5 экзона гена RHD, а смеси праймеров и праймеров-зондов для каждого экзона гена RHD и гена GAPDH, содержащиеся в амплификационных пробирках, лиофилизированны.When determining the Rh factor gene, a laboratory employee, after DNA extraction, during amplification, uses thin-walled optically transparent tubes compatible with the used amplifier, which already contain the necessary primer volume, adds the PCR mixture to the tube with the extracted DNA and aliquots 20 from it μl of the solution into prepared tubes, then starts the amplification program. The determination of the Rh factor gene is carried out using the polymerase chain reaction as follows: initial melting for 5 minutes at a temperature of 95 ° C, then a cycle of 60 times is carried out, including melting at 94 ° C for 15 s, annealing and synthesis at a temperature of 60 ° C for 1 min, during annealing, detection is performed using fluorescence spectrometry. The accumulation of a specific amplification product is recorded by changing the intensity of the fluorescent signal. Detection of a fluorescent signal is carried out directly during PCR using an amplifier with a system in the "real time" mode. The channel corresponding to the FAM fluorophore detects the amplification product of the RHD gene DNA and the GAPDH gene. The proposed technical solution uses an additional reaction tube, i.e. GAPDH gene is amplified for each sample as a control of DNA extraction, 7 exon of the RHD gene and two tubes for 5 exon of the RHD gene, and the mixture of primers and probe primers for each exon of the RHD gene and GAPDH gene contained in amplification tubes is lyophilized.
Проверка работоспособности проводилась на образцах крови 80 пациенток, срок беременности 27-35 недель. При рождении ребенка резус-фактор был определен серологическим методом. По результатам исследований набор и способ может использоваться для диагностики со следующими аналитическими характеристиками: чувствительность 98,4%, специфичность 95,2%.Performance testing was carried out on blood samples of 80 patients, gestational age 27-35 weeks. At birth, the Rh factor was determined by the serological method. According to the research results, the kit and method can be used for diagnostics with the following analytical characteristics: sensitivity 98.4%, specificity 95.2%.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014116656/15A RU2576780C2 (en) | 2014-04-25 | 2014-04-25 | Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014116656/15A RU2576780C2 (en) | 2014-04-25 | 2014-04-25 | Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014116656A RU2014116656A (en) | 2015-11-27 |
| RU2576780C2 true RU2576780C2 (en) | 2016-03-10 |
Family
ID=54753255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014116656/15A RU2576780C2 (en) | 2014-04-25 | 2014-04-25 | Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2576780C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2296328C1 (en) * | 2005-09-21 | 2007-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ГЕН" | Method for detecting the predisposition to oncological diseases and diagnostic kit for its implementation |
| WO2010009440A2 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Biocept, Inc. | Non-invasive fetal rhd genotyping from maternal whole blood |
-
2014
- 2014-04-25 RU RU2014116656/15A patent/RU2576780C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2296328C1 (en) * | 2005-09-21 | 2007-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ГЕН" | Method for detecting the predisposition to oncological diseases and diagnostic kit for its implementation |
| WO2010009440A2 (en) * | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Biocept, Inc. | Non-invasive fetal rhd genotyping from maternal whole blood |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HROMADNIKOVA I. et al. Non-invasive fetal RHD and RHCE genotyping using real-time PCR testing of maternal plasma in RhD-negative pregnancies. J Histochem Cytochem. 2005 Mar; 53(3): 301-305 [Найдено 29.01.2015] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://jhc.sagepub.com/content/53/3/301.long. GONZALEZ-GONZALEZ C. et al. Application of fetal DNA detection in maternal plasma: a prenatal diagnosis unit experience. J Histochem Cytochem. 2005 Mar; 53(3): 307-314 [Найдено 29.01.2015] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://jhc.sagepub.com/content/53/3/307.long. * |
| ZHONG L. High-throughput Testing for the Determination of the Fetal Rh Factor in Maternal Plasma. Dissertation zur Erlangung des akademischen Grades Doctor medicinae (Dr. med.). Berlin, 01.10.2008, 76 p. [Найдено 29.01.2015] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://www.diss.fu-berlin.de/diss/servlets/MCRFileNodeServlet/FUDISS_derivate_000000011299/liu.pdf. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2014116656A (en) | 2015-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | Diagnostic potential for miRNAs as biomarkers for pregnancy-specific diseases | |
| Wang et al. | Real-time PCR evaluation of cell-free DNA subjected to various storage and shipping conditions | |
| CN103710433B (en) | For detecting primer and the real-time fluorescence quantitative PCR test kit of Babesia | |
| CN107267602B (en) | Sperm piRNA marker combination related to male reproductive dysfunction and application thereof | |
| US10895572B2 (en) | Autophagy-related nourin gene-based RNA network as early biomarkers for cardiac patients | |
| CN107916289B (en) | Sperm piRNA and sperm protein MitoPLD as biomarkers for detecting and predicting male infertility | |
| CN111455094B (en) | Composition, kit, application and method for detecting deep infection fungi | |
| Asadpour et al. | Ovine fetal sex determination using circulating cell-free fetal DNA (ccffDNA) and cervical mucous secretions | |
| RU2576780C2 (en) | Kit with lyophilised primers for pcr diagnosis of foetal rhesus factor gene by pregnant woman's blood | |
| RU2474823C1 (en) | Method for prediction of embryo quality in extracorporeal fertilisation programme | |
| Lim et al. | DNA fragmentation of human sperm can be detected by ligation-mediated real-time polymerase chain reaction | |
| CN104774918A (en) | IL28B gene polymorphism detection kit based on real-time fluorescent PCR | |
| CN102776287B (en) | Kit for quantitatively detecting expression level of specific gene 1 mRNA (messenger Ribonucleic Acid) in human breast cancer | |
| RU2620561C1 (en) | Method for psoriasis diagnosing | |
| CN118979104A (en) | Early diagnostic markers for sepsis-related diseases and their uses | |
| CN103509873A (en) | PCR rapid diagnostic reagent kit for babesia bigemina disease of cattle | |
| CN110106237B (en) | DYS14 polymorphism detection primer and kit | |
| RU2554746C1 (en) | Method of obtaining overall fraction of extracellular nucleic acids from blood | |
| CN104388587A (en) | One-step detection kit for influenza B virus and influenza B virus detection method | |
| CN107190074B (en) | Application of hsa _ circRNA _103127 in diagnosis, treatment and prognosis of Down syndrome | |
| RU2474822C1 (en) | Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer | |
| Tıplamaz et al. | Presence of fetal DNA in maternal exhaled breath condensate | |
| WO2024005656A1 (en) | Non-invasive early sexing kit for paiche (arapaima gigas) using real-time pcr | |
| CN107190073B (en) | Application of hsa _ circRNA _104907 in diagnosis, treatment and prognosis of Down syndrome | |
| CN103923981A (en) | HLA-B*27 allele detection method and kit thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160426 |