RU2474822C1 - Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer - Google Patents
Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2474822C1 RU2474822C1 RU2011139004/15A RU2011139004A RU2474822C1 RU 2474822 C1 RU2474822 C1 RU 2474822C1 RU 2011139004/15 A RU2011139004/15 A RU 2011139004/15A RU 2011139004 A RU2011139004 A RU 2011139004A RU 2474822 C1 RU2474822 C1 RU 2474822C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dqa1
- dqb1
- pregnancy
- outcome
- haplotypes
- Prior art date
Links
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 238000012546 transfer Methods 0.000 title abstract description 6
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 16
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 claims description 11
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 claims description 11
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 claims description 4
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 3
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 3
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 2
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 2
- 206010049677 Salpingo-oophoritis Diseases 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010075646 HLA-B18 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 1
- 238000003744 In vitro fertilisation Methods 0.000 description 1
- 241001406857 Narosa Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 1
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940066734 peptide hydrolases Drugs 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009933 reproductive health Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, гинекологии, медицинской генетике и может быть использовано для прогнозирования исхода экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбрионов (ПЭ) у женщин с бесплодием различного генеза.The invention relates to medicine, namely to obstetrics, gynecology, medical genetics and can be used to predict the outcome of in vitro fertilization (IVF) and embryo transfer (PE) in women with infertility of various origins.
Актуальность. Согласно результатам эпидемиологических исследований частота бесплодия в браке колеблется от 8 до 29% (Кулаков В.И. Репродуктивное здоровье населения России // Акушерство и гинекология. - 2002. - №2. - С.4-7). В связи с этим в последнее время все большее распространение получают вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ), в частности метод ЭКО и ПЭ. Однако несмотря на широкое распространение и опыт в проведении данной методики частота наступления беременности после ЭКО и ПЭ остается невысокой и по данным разных авторов колеблется от 20% до 40%. При этом проведение даже одного цикла ЭКО сопряжено с существенными экономическими затратами и определенным риском для здоровья женщины, связанным с овариальной стимуляцией (Гришенко В.И., Петрушко М.П., Пиняев В.И. Результативность программы ЭКО в зависимости от количества и качества переносимых эмбрионов // Проблемы репродукции. - 2000. - №1. - С.44-47). Разработка прогностических критериев исхода ЭКО позволит существенно повысить его эффективность и избежать излишних материальных затрат за счет более тщательного отбора пациенток на этапе планирования беременности.Relevance. According to the results of epidemiological studies, the frequency of infertility in marriage varies from 8 to 29% (Kulakov V.I. Reproductive health of the population of Russia // Obstetrics and Gynecology. - 2002. - No. 2. - P.4-7). In this regard, in recent years, assisted reproductive technologies (ART), in particular the IVF and PE method, have become more widespread. However, despite the widespread use and experience in carrying out this technique, the frequency of pregnancy after IVF and PE remains low and, according to various authors, ranges from 20% to 40%. Moreover, even one cycle of IVF is associated with significant economic costs and a certain risk to a woman’s health associated with ovarian stimulation (Grishenko V.I., Petrushko M.P., Pinyaev V.I. Effectiveness of the IVF program depending on quantity and quality tolerated embryos // Problems of reproduction. - 2000. - No. 1. - P.44-47). The development of prognostic criteria for the outcome of IVF will significantly increase its effectiveness and avoid unnecessary material costs due to a more careful selection of patients at the stage of pregnancy planning.
Существует способ прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ (Патент РФ №2193777. Способ прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ / Сагамонова К.Ю., Орлов В.И., Погорелова Т.Н., Кузьмин А.В., Ломтева С.В. // Изобретения. Полезные модели. - 2002. - №33) путем качественной и количественной оценки содержимого фолликулов, отличающийся тем, что в фолликулярной жидкости, аспирированной раздельно из правого и левого яичников, исследуют активность пептид-гидролаз и при ее уровне не менее 75 мг/мл/ч в одном из яичников прогнозируют благоприятный исход.There is a method for predicting the outcome of an IVF and PE program (RF Patent No. 2193777. A method for predicting the outcome of an IVF and PE program / K.Yu. Sagamonova, V.I. Orlov, T.N. Pogorelova, A.V. Kuzmin, S.V. Lomteva // Inventions. Utility models. - 2002. - No. 33) by qualitative and quantitative assessment of the contents of the follicles, characterized in that the activity of peptide hydrolases is studied in a follicular fluid aspirated separately from the right and left ovaries and at its level not less than 75 mg / ml / h in one of the ovaries predict a favorable outcome.
У данного способа имеется ряд недостатков:This method has several disadvantages:
1. При осуществлении способа высок риск возникновения осложнений, связанных с выполнением трансвагинальной пункции фолликулов, которая проводится под общим наркозом, и может осложниться кровотечением.1. When implementing the method, there is a high risk of complications associated with performing transvaginal puncture of the follicles, which is carried out under general anesthesia, and may be complicated by bleeding.
2. Метод осуществляется на этапе пункции фолликулов, когда невозможно скорректировать тактику ведения пациентки.2. The method is carried out at the stage of follicle puncture, when it is impossible to adjust the patient management tactics.
3. Необходимость исследования двух образцов фолликулярной жидкости (из правого и левого яичников).3. The need to study two samples of follicular fluid (from the right and left ovaries).
Существует способ прогнозирования результатов лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (Патент РФ №2357673. Способ прогнозирования результатов лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения / Потехина Ю.П., Щербатюк Т.Г., Хрулева Н.В. // Изобретения. Полезные модели. - 2009. - №16), включающий проведение трансвагинальной пункции фолликулов под контролем УЗИ с последующим исследованием полученной фолликулярной жидкости, отличающийся тем, что фолликулярную жидкость подвергают хемилюминесцентному анализу по стандартной методике, определяют свободнорадикальную активность образцов и по показателю общей антиоксидантной активности дают прогноз наступления беременности: при показателях общей антиоксидантной активности 0,05 и выше дают неблагоприятный прогноз, при показателях общей антиоксидантной активности ниже 0,05 дают благоприятный прогноз - вероятность наступления беременности более 50%.There is a method for predicting the results of infertility treatment by in vitro fertilization method (RF Patent No. 2357673. A method for predicting the results of infertility treatment by in vitro fertilization method / Potekhina Yu.P., Scherbatyuk TG, Khruleva NV // Inventions. Utility models. - 2009 - No. 16), including transvaginal puncture of follicles under ultrasound control followed by examination of the obtained follicular fluid, characterized in that the follicular fluid is subjected to chemiluminescent analysis according to according to the standard method, the free radical activity of the samples is determined and they give a prognosis of pregnancy on the basis of the total antioxidant activity: when the indicators of total antioxidant activity are 0.05 and higher, they give an unfavorable prognosis, when the indicators of total antioxidant activity are less than 0.05 they give a favorable forecast - the probability of pregnancy is more than 50 %
Недостатками способа являются:The disadvantages of the method are:
1. Высок риск возникновения осложнений, связанных с выполнением трансвагинальной пункции фолликулов, которая проводится под общим наркозом, и может осложниться кровотечением.1. There is a high risk of complications associated with performing transvaginal puncture of the follicles, which is carried out under general anesthesia, and may be complicated by bleeding.
2. Метод осуществляется на этапе пункции фолликулов, когда невозможно скорректировать тактику ведения пациентки.2. The method is carried out at the stage of follicle puncture, when it is impossible to adjust the patient management tactics.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения у пациенток с аутоиммунными заболеваниями (Патент РФ №2345715. Способ прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения у пациенток с аутоиммунными заболеваниями / Ярыгина Т.В., Башмакова Н.В., Мазуров А.Д. // Изобретения. Полезные модели. - 2009. - №4), отличающийся тем, что у женщины до начала овариальной стимуляции устанавливают наличие в анамнезе аднексита, определяют наличие в фенотипе HLA-антигенов В18, Cw3, Cw4 и количество тромбоцитов в коагулограмме и вычисляют прогностический индекс F по формулеClosest to the claimed method is a method for predicting the results of in vitro fertilization in patients with autoimmune diseases (RF Patent No. 2345715. A method for predicting the results of in vitro fertilization in patients with autoimmune diseases / Yarygina T.V., Bashmakova N.V., Mazurov A.D. // Inventions. Utility models. - 2009. - No. 4), characterized in that the woman before the start of ovarian stimulation establish the presence of adnexitis in the history, determine the presence of B18, Cw3, Cw4 and K4 HLA antigens in the phenotype lichestvo platelets in coagulogram and Prognostic Index is calculated according to the formula F
F=1,4×X1-1,3×X2-2,4×X3-2,1×X4+0,019×X5-2,5,F = 1.4 × X1-1.3 × X2-2.4 × X3-2.1 × X4 + 0.019 × X5-2.5,
где X1 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена В18 (1 либо 0);where X1 is the presence (or absence) of the female phenotype of the HLA B18 antigen (1 or 0);
Х2 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw3 (1 либо 0);X2 - the presence (or absence) of the CW3 HLA antigen (1 or 0) in the female phenotype;
Х3 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw4 (1 либо 0);X3 - the presence (or absence) of the CW4 HLA antigen (1 or 0) in the female phenotype;
Х4 - наличие (либо отсутствие) в анамнезе аднексита (1 либо 0);X4 - the presence (or absence) in the history of adnexitis (1 or 0);
Х5 - количество тромбоцитов в коагулограмме (109/л);X5 - platelet count in the coagulogram (10 9 / l);
и если F больше 0, прогнозируют удачный исход проведения ЭКО и ПЭ, а при значениях F меньше 0 судят о нецелесообразности проведения ЭКО на данном этапе.and if F is greater than 0, a successful outcome of IVF and PE is predicted, and for values of F less than 0, the inexpediency of IVF at this stage is judged.
Недостатками способа являются:The disadvantages of the method are:
1. Метод может быть использован только у пациенток с аутоиммунными заболеваниями.1. The method can be used only in patients with autoimmune diseases.
2. Для анализа HLA-антигенов используется метод серологического гистотипирования, который основывается на реакции лизиса клеток с последующим микроскопированием, точность которого зависит от субъективной оценки исследователя.2. For the analysis of HLA antigens, the method of serological histotyping is used, which is based on the reaction of cell lysis with subsequent microscopy, the accuracy of which depends on the subjective assessment of the researcher.
3. Метод предполагает определение большого числа вариабельных показателей: HLA-антигенов В18, Cw3, Cw4, количество тромбоцитов в коагулограмме.3. The method involves the determination of a large number of variable indicators: HLA antigens B18, Cw3, Cw4, platelet count in a coagulogram.
4. Сложность математического расчета прогностического индекса.4. The complexity of the mathematical calculation of the prognostic index.
Технический результат направлен на упрощение (достаточно однократного исследования, результат которого будет действителен при проведении возможных повторных ЭКО) и расширение возможностей прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ у женщин с бесплодием различного генеза, что позволит значительно повысить эффективность программы ВРТ за счет более точного отбора пациенток на этапе планирования беременности.The technical result is aimed at simplifying (a single study, the result of which will be valid for possible repeated IVF) and expanding the ability to predict the outcome of the IVF and PE program in women with infertility of various genesis, which will significantly increase the effectiveness of the ART program due to more accurate patient selection for pregnancy planning stage.
Технический результат достигается тем, что у женщин с бесплодием до начала овариальной стимуляции в лейкоцитах периферической крови определяют полиморфизм генов HLA II класса и при выявлении носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 или DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют неблагоприятный исход программы ЭКО и ПЭ (ненаступление беременности), а при отсутствии носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 и DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют благоприятный исход программы ЭКО и ПЭ (наступление беременности) с точностью 81,1%.The technical result is achieved by the fact that in women with infertility, prior to the start of ovarian stimulation, peripheral blood leukocytes determine the polymorphism of class II HLA genes and, when carriage of DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 or DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 haplotypes is detected, they predict an unfavorable outcome of the IVF program and PE (non-pregnancy), and in the absence of carriage of the haplotypes DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 and DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 predict a favorable outcome of the IVF and PE program (pregnancy) with an accuracy of 81.1%.
Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать исход программы ЭКО и ПЭ у женщин с бесплодием различного генеза путем определения полиморфизма генов HLA II класса в лейкоцитах периферической крови.The novelty of the proposed method lies in the fact that for the first time it is proposed to predict the outcome of the IVF and PE program in women with infertility of various genesis by determining the polymorphism of class II HLA genes in peripheral blood leukocytes.
Ранее исследование антигенов главного комплекса гистосовместимости использовалось для прогнозирования риска развития ряда заболеваний, в патогенезе которых большое значение имеет аутоиммунный компонент. Имеются данные о значении определенных аллелей, генотипов и гаплотипов по системе HLA в формировании предрасположенности или резистентности к таким заболеваниям, как инсулинозависимый сахарный диабет (Ахмедова Ш.У., Рахимова Д.А. Полиморфизм генов HLA II класса у больных инсулинзависимым сахарным диабетом в узбекской популяции // Иммунология. - 2002. - №5. - С.298-300), анкилозирующий спондилит, ревматоидный артрит, болезнь Рейтера, рассеянный склероз, онкопатология (Коненков В.И. Медицинская и экологическая иммуногенетика. - Новосибирск, 1999. - 250 с.). Широко дискутируется проблема аллоиммунных отношений при беременности с учетом совместимости супругов и, соответственно, матери и плода по антигенам системы HLA (Иммунологическая загадка беременности / под ред. Н.Ю.Сотниковой. - Иванове: МИК, 2005. - 276 с.).Previously, the study of antigens of the main histocompatibility complex was used to predict the risk of developing a number of diseases in the pathogenesis of which the autoimmune component is of great importance. There is evidence of the importance of certain alleles, genotypes and haplotypes of the HLA system in the formation of a predisposition or resistance to diseases such as insulin-dependent diabetes mellitus (Akhmedova Sh.U., Rakhimova DA. Polymorphism of class II HLA genes in patients with insulin-dependent diabetes mellitus in Uzbek populations // Immunology. - 2002. - No. 5. - P.298-300), ankylosing spondylitis, rheumatoid arthritis, Reiter's disease, multiple sclerosis, oncopathology (Konenkov V.I. Medical and environmental immunogenetics. - Novosibirsk, 1999. - 250 s.). The problem of alloimmune relations during pregnancy is widely debated, taking into account the compatibility of spouses and, accordingly, the mother and fetus on the HLA system antigens (Immunological riddle of pregnancy / edited by N.Yu.Sotnikova. - Ivanova: MIC, 2005. - 276 p.).
Запуск экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости происходит приблизительно через 96 часов после оплодотворения: клетки развивающегося эмбриона начинают экспрессировать антигены отцовского происхождения. При этом материнская иммунная система не только не отторгает, но и защищает плод (Billington W.D. The nature and possible functions of MHC antigens on the surface of human trophoblast // Reproductive immunology. - New Delhi: Narosa Publishing House, 1999. - P.71-77). Антигены HLA эмбриона, экспрессируемые на поверхности клеток трофобласта, распознаются Т-лимфоцитами матери, и у нее формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" антиотцовские (блокирующие) аллоантитела (АРСА - antipaternal cytotoxic antibodies, Ab2 - anti-anti HLA antibodies, MLR-Bf - mixed lymphocyte reaction blocking factor), которые покрывают поверхность трофобласта. (Characterization of mixed lymphocyte reaction blocking antibodies (MLR-Bf) in human pregnancy / M.K.Pandey, V.Saxena, S.Agrawal et all. // BMC Pregnancy Childbirth. - 2003. - Vol.19. - P.2.)The start of the expression of antigens of the main histocompatibility complex occurs approximately 96 hours after fertilization: cells of the developing embryo begin to express antigens of paternal origin. Moreover, the maternal immune system not only does not reject, but also protects the fetus (Billington WD The nature and possible functions of MHC antigens on the surface of human trophoblast // Reproductive immunology. - New Delhi: Narosa Publishing House, 1999. - P.71 -77). HLA antigens of the embryo expressed on the surface of trophoblast cells are recognized by the mother's T-lymphocytes, and she forms a clone of immune cells that produces special “protective” anti-paternal (blocking) alloantibodies (ARCA - antipaternal cytotoxic antibodies, Ab2 - anti-anti HLA antibodies, MLR -Bf - mixed lymphocyte reaction blocking factor), which cover the surface of the trophoblast. (Characterization of mixed lymphocyte reaction blocking antibodies (MLR-Bf) in human pregnancy / M.K. Pandey, V. Saxena, S. Agrawal et all. // BMC Pregnancy Childbirth. - 2003. - Vol.19. - P.2.)
На сегодняшний день доказано, что большое число совпадающих антигенов HLA у супругов приводит к недостаточной иммуностимуляции организма матери, в результате чего снижается выработка блокирующих антител и происходит запуск иммунного ответа, направленного против антигенов эмбриона. Это может послужить причиной остановки развития беременности на ранних ее этапах (Beer А.Е., Kwak J.Y.H. Reproductive Medicine Program. Finch University of Health Science. - Chicago. 1999. - 132 p.).To date, it has been proven that a large number of matching HLA antigens in spouses leads to insufficient immunostimulation of the mother's body, resulting in reduced production of blocking antibodies and triggering an immune response directed against the embryo antigens. This may cause a halt in the development of pregnancy in its early stages (Beer A.E., Kwak J.Y. H. Reproductive Medicine Program. Finch University of Health Science. - Chicago. 1999. - 132 p.).
Наличие определенных аллелей, генотипов и гаплотипов по генам главного комплекса гистосовместимости ассоциируется с изменением активности гуморального иммунитета. К примеру, у носителей гаплотипа DRB1*1601-DQB1*0502-DQA1*0102 чаще выражен слабый иммунный ответ на вакцинацию HBs антигеном (The contribution of HLA-Class II antigens in humoral non-response and delayed response to HBsAG vaccination. / B.Vidan-Jeras, V.Brinovec, B.Jurca et all. // Pflugers Arch. - 2000. - Vol.440, Suppl.5. - P.188-189. 11005666 Cit:2, Blood Transfusion Centre of Slovenia, Ljubljana).The presence of certain alleles, genotypes, and haplotypes for the genes of the main histocompatibility complex is associated with a change in the activity of humoral immunity. For example, carriers of the haplotype DRB1 * 1601-DQB1 * 0502-DQA1 * 0102 more often have a weak immune response to HBs vaccination with the antigen (The contribution of HLA-Class II antigens in humoral non-response and delayed response to HBsAG vaccination. / B. Vidan-Jeras, V. Brinovec, B. Jurca et all. // Pflugers Arch. - 2000. - Vol.440, Suppl.5. - P.188-189. 11005666 Cit: 2, Blood Transfusion Center of Slovenia, Ljubljana )
Таким образом, можно предположить, что у женщин-носительниц гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501/DQA1*0102-DQB1*0502 вследствие нарушенного иммунного ответа (снижение продукции «блокирующих» аллоантител - АРСА - antipatemal cytotoxic antibodies) нарушается процесс имплантации бластоцисты, что и определяет неблагоприятные исходы процедуры ЭКО и ПЭ.Thus, it can be assumed that in women carriers of the DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 / DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 haplotypes, due to a disturbed immune response (decreased production of “blocking” alloantibodies - ARCA - antipatemal cytotoxic antibodies), the blastocyst implantation process is impaired, which determines the adverse outcomes of the IVF and PE procedure.
Заявляемый нами способ осуществляется по стандартной методике следующим образом.The inventive method is carried out according to the standard method as follows.
I. Забор крови для исследования.I. Blood sampling for research.
Кровь у пациенток получают методом венопункции локтевой вены (объем 3 мл) в одноразовые пластиковые пробирки с консервантом. В качестве консерванта используют 0,5М раствор ЭДТА в соотношении консервант: кровь - 1:10.Blood from patients is obtained by venipuncture of the ulnar vein (volume 3 ml) in disposable plastic tubes with a preservative. As a preservative, a 0.5M EDTA solution is used in a preservative: blood ratio of 1:10.
II. Выделение и очищение ДНК.II. Isolation and purification of DNA.
Выделение ДНК осуществляют из лейкоцитов периферической крови с использованием набора реактивов «Комплект реагентов для выделения ДНК из образцов крови» («ДНК-технология», Россия) по протоколу производителя.DNA is isolated from peripheral blood leukocytes using the reagent kit “Set of reagents for DNA extraction from blood samples” (“DNA-technology”, Russia) according to the manufacturer’s protocol.
III. Полимеразная цепная реакция и детекция продуктов амплификации.III. Polymerase chain reaction and detection of amplification products.
Амплификацию всех исследуемых фрагментов ДНК проводят методом ПНР на программируемом термоциклере МС2 фирмы «ДНК-технология» (Россия). Приготовление реакционной смеси, программирование термоциклера и детекция продуктов амплификации осуществляют по протоколу производителя («ДНК-технология», Россия). При выявлении носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 или DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют неблагоприятный исход программы ЭКО и ПЭ (ненаступление беременности), а при отсутствии носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 и DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют благоприятный исход программы ЭКО и ПЭ (наступление беременности).Amplification of all studied DNA fragments is carried out by the PNR method on a programmable thermal cycler MS2 of the DNA Technology company (Russia). Preparation of the reaction mixture, programming of the thermal cycler and detection of amplification products is carried out according to the manufacturer's protocol (DNA Technology, Russia). If carriers of the DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 or DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 haplotypes are identified, an unfavorable outcome of the IVF and PE program (non-occurrence of pregnancy) is predicted, and in the absence of the carrier haplotypes DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 and DQA1 * 0102-DQB1 0502 predict a favorable outcome of the IVF and PE program (pregnancy).
Отличительные признаки способа. В лейкоцитах периферической крови женщин определяют полиморфизм генов HLA II класса и при выявлении носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 или DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют неблагоприятный исход программы ЭКО и ПЭ, а при отсутствии носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 и DQA1*0102-DQB1*0502 прогнозируют благоприятный исход программы ЭКО и ПЭ.Distinctive features of the method. In the peripheral blood leukocytes of women, polymorphism of class II HLA genes is determined and, if carriage of the DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 or DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 haplotypes is detected, an unfavorable outcome of the IVF and PE program is predicted, and in the absence of the DQA1 * 0101-DQB1 haplotype carriers 0501 and DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 predict a favorable outcome of the IVF and PE program.
Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.The essence of the proposed method is illustrated by the following examples.
Пример 1. Больная С., 30 лет, проходила обследование и лечение в ФГУ «Ивановский НИИ Материнства и детства им. В.Н.Городкова» по поводу бесплодия трубно-перитонеального генеза. При анализе генов HLA II класса носительства гаплотипов DQA1*0101-DQB1*0501 и DQA1*0102-DQB1*0502 выявлено не было, дан благоприятный прогноз. Стимуляция суперовуляции проводилась по короткому протоколу. В результате трансвагинальной пункции получено 7 зрелых ооцитов. В результате стандартной процедуры экстракорпорального оплодотворения было получено 7 зигот с двумя пронуклеусами. На 3-и сутки был произведен перенос 2 эмбрионов в полость матки, назначена поддерживающая терапия. На 14-е сутки после переноса эмбрионов анализ крови на содержание хорионического гонадотропина показал наступление беременности (341 мМ ед/мл, положительный результат).Example 1. Patient S., 30 years old, underwent examination and treatment at the Federal State Institution "Ivanovo Research Institute of Motherhood and Childhood named after V.N. When analyzing HLA genes of the II class of carriage, the haplotypes DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 and DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 were not found, a favorable prognosis was given. Superovulation was stimulated using a short protocol. As a result of transvaginal puncture, 7 mature oocytes were obtained. As a result of the standard in vitro fertilization procedure, 7 zygotes with two pronuclei were obtained. On the 3rd day, 2 embryos were transferred into the uterine cavity, maintenance therapy was prescribed. On the 14th day after embryo transfer, a blood test for the content of chorionic gonadotropin showed the onset of pregnancy (341 mm U / ml, positive).
Пример 2. Больная Б., 36 лет, проходила обследование и лечение в ФГУ «Ивановский НИИ Материнства и детства им. В.Н.Городкова» по поводу бесплодия эндокринного генеза. При анализе генов HLA II класса было выявлено носительство гаплотипа DQA1*0101-DQB1*0501, дан неблагоприятный прогноз. Стимуляция суперовуляции проводилась по короткому протоколу. В результате трансвагинальной пункции получено 8 зрелых ооцитов. В результате стандартной процедуры экстракорпорального оплодотворения было получено 7 зигот с двумя пронуклеусами. На 3-и сутки был произведен перенос 2 эмбрионов в полость матки, назначена поддерживающая терапия. На 14-е сутки после переноса эмбрионов анализ крови на содержание хорионического гонадотропина показал, что беременность не наступила (1,2 мМ ед/мл, отрицательный результат).Example 2. Patient B., 36 years old, underwent examination and treatment at the Federal State Institution "Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood named after VN Gorodkova "about infertility of endocrine genesis. When analyzing class II HLA genes, the carriage of the DQA1 * 0101-DQB1 * 0501 haplotype was revealed, and an unfavorable prognosis was given. Superovulation was stimulated using a short protocol. As a result of transvaginal puncture, 8 mature oocytes were obtained. As a result of the standard in vitro fertilization procedure, 7 zygotes with two pronuclei were obtained. On the 3rd day, 2 embryos were transferred into the uterine cavity, maintenance therapy was prescribed. On the 14th day after embryo transfer, a blood test for the content of chorionic gonadotropin showed that pregnancy did not occur (1.2 mM units / ml, negative result).
Пример 3. Больная Ф., 32 года, проходила обследование и лечение в ФГУ «Ивановский НИИ Материнства и детства им. В.Н.Городкова» по поводу идиопатического бесплодия. При анализе генов HLA II класса было выявлено носительство гаплотипа DQA1*0102-DQB1*0502, дан неблагоприятный прогноз. Стимуляция суперовуляции проводилась по короткому протоколу. В результате трансвагинальной пункции получено 6 зрелых ооцитов. В результате стандартной процедуры экстракорпорального оплодотворения было получено 5 зигот с двумя пронуклеусами. На 3-и сутки был произведен перенос 2 эмбрионов в полость матки, назначена поддерживающая терапия. На 14-е сутки после переноса эмбрионов анализ крови на содержание хорионического гонадотропина показал, что беременность не наступила (1,7 мМ ед/мл, отрицательный результат).Example 3. Patient F., 32 years old, underwent examination and treatment at the Federal State Institution "Ivanovo Research Institute of Motherhood and Childhood named after VN Gorodkova "about idiopathic infertility. When analyzing class II HLA genes, the carriage of the DQA1 * 0102-DQB1 * 0502 haplotype was revealed, and an unfavorable prognosis was given. Superovulation was stimulated using a short protocol. As a result of transvaginal puncture, 6 mature oocytes were obtained. As a result of the standard in vitro fertilization procedure, 5 zygotes with two pronuclei were obtained. On the 3rd day, 2 embryos were transferred into the uterine cavity, maintenance therapy was prescribed. On the 14th day after embryo transfer, a blood test for the content of chorionic gonadotropin showed that pregnancy did not occur (1.7 mM u / ml, negative result).
Результаты клинической апробации способа представлены в таблице №1.The results of clinical testing of the method are presented in table No. 1.
Чувствительность метода: 76,9%Method sensitivity: 76.9%
Специфичность метода: 92,9%Method specificity: 92.9%
Точность метода: 81,1%Method accuracy: 81.1%
Преимущества заявляемого метода:The advantages of the proposed method:
1. Способ может быть использован для прогнозирования исходов программы ЭКО и ПЭ у женщин с бесплодием различного генеза.1. The method can be used to predict the outcome of an IVF and PE program in women with infertility of various origins.
2. Так как метод основан на оценке полиморфизма генов, то достаточно однократного исследования, результат которого будет действителен при проведении возможных повторных ЭКО.2. Since the method is based on the assessment of gene polymorphism, a single study is sufficient, the result of which will be valid when conducting possible repeated IVFs.
3. Высокая точность - 81,1%, специфичность - 92,9% и чувствительность - 76,9% метода.3. High accuracy - 81.1%, specificity - 92.9% and sensitivity - 76.9% of the method.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011139004/15A RU2474822C1 (en) | 2011-09-26 | 2011-09-26 | Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011139004/15A RU2474822C1 (en) | 2011-09-26 | 2011-09-26 | Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2474822C1 true RU2474822C1 (en) | 2013-02-10 |
Family
ID=49120522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011139004/15A RU2474822C1 (en) | 2011-09-26 | 2011-09-26 | Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2474822C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2587333C1 (en) * | 2014-12-18 | 2016-06-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Method for prediction of pregnancy in vitro fertilisation and embryo transfer |
| RU2616240C1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-04-13 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Predicting likelihood of onset of clinical pregnancy of women with bmi 28,5 and above in vitrofertilization program based on estimates of waist circumference and changes in share of peripheral blood monoclear with highly mitochondria as a result of superovulation |
| RU2773798C1 (en) * | 2021-10-12 | 2022-06-09 | Анна Александровна Кончакова | Method for predicting the degree of risk of negative results of in vitro fertilization |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2193777C2 (en) * | 2000-06-15 | 2002-11-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии | Method for predicting outcomes of extracorporeal insemination and embryo transfer program |
| RU2273031C1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-03-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ | Method for predicting ecf and et program results |
| RU2345715C2 (en) * | 2006-11-02 | 2009-02-10 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of predicting results of extracorporal fertilisation (ecf) in patients with autoimmune diseases |
| RU2357673C1 (en) * | 2007-10-01 | 2009-06-10 | Юлия Павловна Потехина | Prediction method of outcomes of infertility treatment by extracorporal impregnation method |
| RU2394495C1 (en) * | 2009-04-14 | 2010-07-20 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method for prediction of risk of early fetal loss in ivf induced pregnancies |
-
2011
- 2011-09-26 RU RU2011139004/15A patent/RU2474822C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2193777C2 (en) * | 2000-06-15 | 2002-11-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии | Method for predicting outcomes of extracorporeal insemination and embryo transfer program |
| RU2273031C1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-03-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ | Method for predicting ecf and et program results |
| RU2345715C2 (en) * | 2006-11-02 | 2009-02-10 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of predicting results of extracorporal fertilisation (ecf) in patients with autoimmune diseases |
| RU2357673C1 (en) * | 2007-10-01 | 2009-06-10 | Юлия Павловна Потехина | Prediction method of outcomes of infertility treatment by extracorporal impregnation method |
| RU2394495C1 (en) * | 2009-04-14 | 2010-07-20 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method for prediction of risk of early fetal loss in ivf induced pregnancies |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Фетисова И.Н. Наследственные факторы при различных формах нарушения репродуктивной функции супружеской пары. Автореферат диссертации на соискание ученой степени д.м.н. - М., 2007. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2587333C1 (en) * | 2014-12-18 | 2016-06-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Method for prediction of pregnancy in vitro fertilisation and embryo transfer |
| RU2616240C1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-04-13 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Predicting likelihood of onset of clinical pregnancy of women with bmi 28,5 and above in vitrofertilization program based on estimates of waist circumference and changes in share of peripheral blood monoclear with highly mitochondria as a result of superovulation |
| RU2773798C1 (en) * | 2021-10-12 | 2022-06-09 | Анна Александровна Кончакова | Method for predicting the degree of risk of negative results of in vitro fertilization |
| RU2813434C1 (en) * | 2023-02-14 | 2024-02-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of outcomes of in vitro fertilization and embryo transfer programs |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Esteves | Novel concepts in male factor infertility: clinical and laboratory perspectives | |
| Vagnini et al. | The effects of male age on sperm DNA damage in an infertile population | |
| Li et al. | miR‐21 and Pellino‐1 Expression Profiling in Autoimmune Premature Ovarian Insufficiency | |
| PT2049906E (en) | Assay and kit for predicting implantation success in assisted fertilisation | |
| Hervás et al. | Sperm deoxyribonucleic acid fragmentation (by terminal deoxynucleotidyl transferase biotin dUTP nick end labeling assay) does not impair reproductive success measured as cumulative live birth rates per donor metaphase II oocyte used | |
| Zolfaghari et al. | A new approach to the preeclampsia puzzle; MicroRNA-326 in CD4+ lymphocytes might be as a potential suspect | |
| Khorshid et al. | Early fetal gender determination using real-time PCR analysis of cell-free fetal DNA during 6th-10th weeks of gestation | |
| Block et al. | The promise of placental extracellular vesicles: models and challenges for diagnosing placental dysfunction in utero | |
| Morimune et al. | The association between chronic deciduitis and preeclampsia | |
| RU2474823C1 (en) | Method for prediction of embryo quality in extracorporeal fertilisation programme | |
| RU2474822C1 (en) | Method for prediction of clinical outcome of extracorporeal fertilisation and embryo transfer | |
| Debbarh et al. | Assessment of cell-free DNA and apoptosis in an oocyte microenvironment: promising biomarkers to predict intracytoplasmic sperm injection outcomes | |
| Cuadrado-Torroglosa et al. | Increased cytotoxic natural killer cells in the endometrium alone cannot be considered the immunological cause of recurrent miscarriage | |
| Wang et al. | The effect of sperm DNA fragmentation on in vitro fertilization outcomes for women with polycystic ovary syndrome | |
| Schettini et al. | High levels of CXCL8 and low levels of CXCL9 and CXCL10 in women with maternal RhD alloimmunization | |
| CN118979104A (en) | Early diagnostic markers for sepsis-related diseases and their uses | |
| RU2334233C1 (en) | Method for forecasting preterm labour in presence of urogenital infection | |
| Tabibnejad et al. | Assessing ICSI outcome by combining non‐invasive indicators: early time‐lapse morphokinetics and apoptosis in associated cumulus cells among women with the polycystic ovarian syndrome | |
| RU2585091C1 (en) | Method for identification of anti-allogenic hla-g antibodies | |
| Aftabsavad et al. | Interference of bisphenol a on cumulus cells development and number of retrieved mature oocytes in unexpected poor ovarian response women: a prospective cohort study | |
| WO2022251582A1 (en) | Densitometry-based sorting for embryo health classification | |
| CN110106237B (en) | DYS14 polymorphism detection primer and kit | |
| RU2651038C1 (en) | Method for detecting disorders in children of immunological reactivity in conditions of excessive exposure to strontium | |
| RU2651036C1 (en) | Method of predicting postpartum complications in cows of black and motley breed | |
| Xu et al. | Evaluation of maternal serum sHLA-G levels for trisomy 18 fetuses screening at second trimester |