RU2455363C1 - Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров - Google Patents
Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров Download PDFInfo
- Publication number
- RU2455363C1 RU2455363C1 RU2011110985/10A RU2011110985A RU2455363C1 RU 2455363 C1 RU2455363 C1 RU 2455363C1 RU 2011110985/10 A RU2011110985/10 A RU 2011110985/10A RU 2011110985 A RU2011110985 A RU 2011110985A RU 2455363 C1 RU2455363 C1 RU 2455363C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- streptococcus thermophilus
- oligonucleotide primers
- synthetic oligonucleotide
- starter cultures
- primers
- Prior art date
Links
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 235000011617 hard cheese Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 17
- 239000013615 primer Substances 0.000 claims description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710096750 Penicillin-binding protein 2B Proteins 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 101150038610 penA gene Proteins 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000392514 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к ДНК-технологиям. Предложены синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров. Предложенный способ включает проведение ПЦР. В случае выявления фрагмента ДНК размером 655 н.п. делают заключение о наличии в исследуемом биоматериале Streptococcus thermophilus. Способ может быть использован в молокоперерабатывающей промышленности для выявления и идентификации штаммов и культур Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к ДНК-технологиям, и может быть использовано в молокоперерабатывающей промышленности для генотипирования штаммов и культур Streptococcus thermophilus.
До настоящего времени основным способом типирования штаммов и изолятов Streptococcus thermophilus является способ, основанный на накоплении данных бактерий в питательной среде. Для выделения молочнокислых стрептококков 1 г пробы растирают в стерильной ступке и готовят разведение 1:10 на физиологическом растворе. Полученную суспензию засевают в стерильное молоко (0,25-0,5 см3 инокулята на 10 см3 среды). Если культуру выделяют из кисломолочных продуктов, то одну каплю продукта вносят бактериологической петлей в стерильное молоко. Посевы термостатируют при 40°С до свертывания молока. Изучение биологических и биохимических свойств и сопоставление полученных данных с данными дифференциальной таблицы (табл.17.16.) определителя микроорганизмов Берджи (Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. - Т.2. - Под ред. Дж.Хоулта, П.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльмса. - М.: Мир. - 1997. - С.560-566) позволяет провести типирование исследуемых бактерий.
К недостаткам данного способа можно отнести необходимость проведения большого числа биохимических дифференцирующих тестов, длительность процесса тестирования и высокую стоимость.
Наиболее близким решением данного изобретения являются праймеры и способ генотипирования Streptococcus thermophilus, включающий синтез олигонуклеотидных праймеров на 16S rRNA (С.Г.Ботина. Штаммы S. thermophilus, ферментирующие галактозу//Молочная промышленность. - 2008. - №4. - С.59). Осуществляется синтез и секвенирование последовательности гена 16S rRNA. Затем проводится сравнение последовательности данного гена с последовательностями, характерными для Streptococcus thermophilus из базы данных GenBank.
К недостаткам данного способа можно отнести необходимость проведения секвенирования ампликонов, сравнение каждого с базой данных GenBank, длительность процесса тестирования и высокую стоимость.
Задачей изобретения является расширение арсенала специфических олигонуклеотидных праймеров и способов выявления Streptococcus thermophilus при помощи специфических синтетических олигонуклеотидных праймеров.
Поставленная задача решается тем, что синтезируются синтетические олигонуклеотидные праймеры для выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров, согласно изобретению, праймеры имеют нуклеотидные последовательности:
Stt1F 5' - GGGCAACAGTATGTTCCAGG - 3' и
Stt2R 5' - CCATGATAGCTTTAACGGC - 3'.
Задача решается тем, что в способе выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров, включающем проведение ПЦР с синтетическими олигонуклеотидными праймерами, согласно изобретению, праймеры имеют нуклеотидную последовательность
Stt1F 5' - GGGCAACAGTATGTTCCAGG - 3' и
Stt2R 5' - CCATGATAGCTTTAACGGC - 3',
а в случае выявления фрагмента ДНК размером 655 н.п. делают заключение о наличии в исследуемом биологическом материале Streptococcus thermophilus.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Способ получения синтетических олигонуклеотидных праймеров
Поиск новых специфических праймеров осуществляют на основе выбранного фрагмента ДНК гена пенициллин-связывающего протеина 2 В (pbp2b gene), характерного только для Streptococcus thermophilus, при анализе полных геномов референтных штаммов Streptococcus thermophilus: LMG18311, CNRZ1066 и LMD9, представленных в базе данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBank Search.html). Выбранные фрагменты ДНК тестируют с помощью программы Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast).
Окончательный выбор праймеров основывается на следующих критериях: высокий уровень сходства фрагментов ДНК с ДНК различных штаммов Streptococcus thermophilus, содержание оснований GC не менее 50%, не образуют димеры, комплементарны последовательности ДНК на границах специфического фрагмента.
Химический синтез праймеров осуществляют амидофосфитным методом на автоматическом синтезаторе ASM-102U.
Концентрацию специфических олигонуклеотидных праймеров в маточном растворе определяют спектрометрическим методом.
Таким образом, указанный способ позволяет получать синтетические олигонуклеотидные праймеры, комплементарные ДНК фрагмента гена пенициллин-связывающего протеина 2 В (pbp2b gene), характерного только для Streptococcus thermophilus.
Пример 2. Способ применения синтетических олигонуклеотидных праймеров для выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров
Способ осуществляется в несколько этапов.
Этап 1. Выделение ДНК Streptococcus thermophilus.
Для выделения ДНК берут суспензии штаммов и изолятов Streptococcus thennophilus, выделенных на питательном бульоне из гидролизованного молока (БГМ), а также биоматериал от кисломолочных продуктов.
При выделении из бактериальной культуры клетки осаждают в бляшку центрифугированием 1-2 мин при 5000-7000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют 50 мкл культуры добавляют к 300 мкл подогретого до +80°С 10% СТАВ, перемешивают и инкубируют при +80°С в течение 40 минут. Затем охлаждают до комнатной температуры и добавляют 0,5 объема (300-400 мкл) смеси фенол/хлороформ/изоамиловый спирт (25:24:1), плавно перемешивают 2-3 раза в течение 1-2 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 13000 об/мин. Водную фазу переносят в другую пробирку и к ней приливают 300 мкл смеси хлороформ/изоамиловый спирт (24:1), перемешивают 1 мин и центрифугируют 6 мин при 13000 об/мин. К водной фазе прибавляют 50 мкл (1/10 объема) 3М ацетата натрия рН 4,8 и 1000 мкл этанола, перемешивают и помещают на 1 час при -20°С. Пробу центрифугируют 10 мин при 13000 об/мин, осадок промывают 70% этанолом, высушивают при наклонном положении пробирки при +37°С в течение 25-30 мин и растворяют в 30-50 мкл автоклавированной бидистиллированной воды.
Этап 2. Проведение полимеразной цепной реакции.
Состав реакционной смеси: Для каждой исследуемой пробы ДНК готовят ПЦР-смесь: 650 мМ трис-НСl рН 8,9; 160 мМ (NH)4SO4; 30 мМ MgCl; 0,5% Tvin-20; 2,5 мМ dNTP, no 0,15 мкг каждого праймера; 0,5 е.а. Taq-ДНК полимеразы; 2 мкл пробы ДНК и автоклавированной бидистиллированной воды до 25 мкл.
Температурный режим проведения ПНР: Программа амплификации состоит из следующих температурных режимов: прогревание реакционной смеси при 95°С в течение 3 мин - 1 цикл, затем денатурация при 94°С 0,2 мин, отжиг при 60°С 0,2 мин, элонгация при 72°С 0,4 мин - 35 циклов и досинтез при 72°С в течение 0,8 мин.
Этап 3. Определение размера продуктов ПЦР.
Продукты ПЦР анализируют методом электрофореза в 0,5х трис-боратном буфере, приготовленном из 5х ТБЕ буфера (0,089 М трис-борат; 0,089 М борная кислота; 0,002 М ЭДТА).
Продукты ПЦР визуализировали путем электрофореза в 1%-ном геле агарозы с бромистым этидием при силе тока 25-40 мА в течение 30-40 мин. 12,5 мкл ампликона смешивают с 3 мкл буфера для нанесения (0,25% бромфенолового синего, 30% глицерин в бидистиллированной воде) и вносят в лунки геля под электрофорезный буфер. Электрофорез проводят при напряжении 10 в/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее 2,0-2,5 см геля (примерно 35-40 минут). Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе «Трансиллюминатор».
В качестве маркера используют ДНК pSKII(+), гидролизованную Mspl на фрагменты 710, 489, 404, 328, 242, 190 н.п. или 100bр.
Результат ПЦР считают положительным, если продукт ПЦР соответствует размеру фрагмента ДНК в 655 н.п.
Пример 3. Определение специфичности ПЦР.
Результаты исследований по определению специфичности реакции с праймерами Stt1F и Stt2R представлены в таблице 1, которые показывают, что положительные анализы продуктов ПЦР получают только тогда, когда в качестве матрицы используют ДНК фрагмента гена пенициллин-связывающего протеина 2 В (pbp2b gene), характерного только для Streptococcus thermophilus. Анализы были отрицательными, когда использовали ДНК других бактерий.
| Таблица 1. | ||
| № п/п | Наименование культуры | ПЦР |
| с праймерами SttIF и Stt2R | ||
| 1 | Staphylococcus aureus | Отрицательно |
| 2 | Staphylococcus albus | Отрицательно |
| 3 | Streptococcus pyogenes | Отрицательно |
| 4 | Streptococcus epidermitis | Отрицательно |
| 5 | Escherihia coli | Отрицательно |
| 6 | Salmonella Dublin | Отрицательно |
| 7 | Proteus vulgaris | Отрицательно |
| 8 | Streptococcus thermophilus 1244 Коллекция ВНИИМС (Углич) | Положительно |
| 9 | Streptococcus thermophilus 1254 Коллекция ВНИИМС (Углич) | Положительно |
| 10 | Streptococcus thermophilus Д/И Коллекция ВНИИМС (Углич) | Положительно |
| 11 | Streptococcus thermophilus 28-2 Коллекция ГНУ СибНИИС (Барнаул) | Положительно |
| 12 | Streptococcus thermophilus 10-1 Коллекция ГНУ СибНИИС (Барнаул) | Положительно |
| 13 | ||
| 14 | Streptococcus thermophilus CK9 Коллекция ГНУ СибНИИС (Барнаул) | Положительно |
| 15 | Streptococcus thermophilus 9-1 Коллекция ГНУ СибНИИС (Барнаул) | Положительно |
| 16 | Дистиллированная вода | Отрицательно |
Для подтверждения специфичности тестируемого фрагмента гена пенициллин-связывающего протеина 2В (pbp2b gene), характерного только для Streptococcus thermophilus, наработали фрагмент на матрице ДНК штамма Streptococcus thermophilus 1244 (Коллекция ВНИИМС, Углич) и провели секвенирование. Анализ нуклеотидных последовательностей синтезируемых фрагментов провели методами выравнивания с другими опубликованными последовательностями полных геномов референтных штаммов Streptococcus thermophilus: LMG18311, CNRZ1066 и LMD9, представленных в базе данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Search.html). Установили, что рассматриваемая нуклеотидная последовательность штамма Streptococcus thermophilus 1244 (Коллекция ВНИИМС, Углич) совпадала с нуклеотидной последовательностью, когда в качестве матрицы используют ДНК фрагмента гена GenBank вышеназванных референтных штаммов Streptococcus thermophilus.
Таким образом, разработанные синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров обладают высокой специфичностью и позволяют эффективно проводить идентификацию штаммов и культур Streptococcus thermophilus, используемых в молокоперерабатывающей промышленности.
Claims (2)
1. Синтетические олигонуклеотидные праймеры для выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров, согласно изобретению, праймеры имеют нуклеотидные последовательности
Stt1F 5'-GGGCAACAGTATGTTCCAGG-3' и
Stt2R 5'-CCATGATAGCTTTAACGGC-3'
Stt1F 5'-GGGCAACAGTATGTTCCAGG-3' и
Stt2R 5'-CCATGATAGCTTTAACGGC-3'
2. Способ выявления Streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров, включающий проведение ПЦР с синтетическими олигонуклеотидными праймерами, согласно изобретению, праймеры имеют нуклеотидную последовательность
Stt1F 5'-GGGCAACAGTATGTTCCAGG-3' и
Stt2R 5'-CCATGATAGCTTTAACGGC-3',
а в случае выявления фрагмента ДНК размером 655 н.п.делают заключение о наличии в исследуемом биологическом материале Streptococcus thermophilus.
Stt1F 5'-GGGCAACAGTATGTTCCAGG-3' и
Stt2R 5'-CCATGATAGCTTTAACGGC-3',
а в случае выявления фрагмента ДНК размером 655 н.п.делают заключение о наличии в исследуемом биологическом материале Streptococcus thermophilus.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011110985/10A RU2455363C1 (ru) | 2011-03-23 | 2011-03-23 | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011110985/10A RU2455363C1 (ru) | 2011-03-23 | 2011-03-23 | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2455363C1 true RU2455363C1 (ru) | 2012-07-10 |
Family
ID=46848557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011110985/10A RU2455363C1 (ru) | 2011-03-23 | 2011-03-23 | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2455363C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2376367C2 (ru) * | 2003-03-17 | 2009-12-20 | Даниско А/С | Структурирующие молочнокислые бактерии |
-
2011
- 2011-03-23 RU RU2011110985/10A patent/RU2455363C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2376367C2 (ru) * | 2003-03-17 | 2009-12-20 | Даниско А/С | Структурирующие молочнокислые бактерии |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| http://www.ebi.ac.uk/ena/data/view/U58210. БОТИНА С.Г. Молекулярно-биологические подходы к отбору бактериальных культур при создании заквасок для биотехнологии. DisCollection.ru. 14.03.2011. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113249499B (zh) | 一种伤寒沙门氏菌的检测试剂盒、其制备方法及其应用 | |
| CN115029459A (zh) | 一种基于CRISPR-Cas12a可视化检测多杀性巴氏杆菌的试剂盒及应用 | |
| CN102947467A (zh) | 铜绿假单胞菌血清分型检测方法和试剂盒以及用于该方法和试剂盒的寡核苷酸序列 | |
| WO2010062897A1 (en) | Methods and compositions to detect clostridium difficile | |
| CN101469326B (zh) | 一种对奇异变形杆菌的its特异的核苷酸及其应用 | |
| CN112176080B (zh) | 特异性检测剑麻紫色卷叶病植原体的巢式pcr引物组、试剂盒及检测方法 | |
| RU2455363C1 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления streptococcus thermophilus в заквасочных культурах при производстве твердых сыров | |
| CN104611441A (zh) | 一种检测所有11种衣原体的定量pcr的引物、探针及试剂盒 | |
| JP2015213439A (ja) | エンテロトキシンｂ、ｃ、ｄ又はｅ遺伝子を有する黄色ブドウ球菌又は該遺伝子の検出のためのｌａｍｐ用プライマー及びこれを用いたエンテロトキシンｂ、ｃ、ｄ又はｅ遺伝子を有する黄色ブドウ球菌又は該遺伝子の検出法 | |
| KR101752274B1 (ko) | 장출혈성 대장균의 시가독소 유전자형 stx1 및 stx2를 동시에 판별하기 위한 고감도 실시간 다중 등온증폭반응용 프라이머 세트 및 이를 이용한 장출혈성 대장균의 시가독소 유전자형의 판별 방법 | |
| CN1771331B (zh) | 用于检测沙门氏菌种的stn基因寡核苷酸引物及使用该引物的检测方法 | |
| Othman et al. | Conventional and molecular detection of Pasteurella multocida in outbreak of respiratory tract infection of sheep and goats in Basrah Province | |
| RU2481400C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus В ЗАКВАСОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ | |
| RU2451751C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ Lactococcus lactis subspecies lactis В ЗАКВАСОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ МОЛОЧНОКИСЛЫХ ПРОДУКТОВ | |
| KR20090122554A (ko) | 살모넬라 티피무리움 검출용 프라이머 세트 및 프로브 | |
| RU2481402C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ Lactobacillus acidophilus В ЗАКВАСОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ | |
| RU2822737C1 (ru) | Способ идентификации значимых для сельского хозяйства представителей рода Bacillus - B. subtilis, B. megaterium и B. thuringiensis на основе рестрикционного анализа гена 165S рРНК | |
| RU2822737C9 (ru) | Способ идентификации значимых для сельского хозяйства представителей рода Bacillus - B. subtilis, B. megaterium и B. thuringiensis на основе рестрикционного анализа гена 16S рРНК | |
| RU2469097C1 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления lactococcus lastis subspecies cremoris в заквасочных культурах, используемых в сыроделии и производстве кисломолочных продуктов | |
| RU2473698C1 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления bifidobacterium longum subspecies longum в заквасочных культурах, используемых при призводстве кисломолочных продуктов | |
| CN116179570B (zh) | 一种奇异变形杆菌的病原体特异性核酸基因及检验方法 | |
| CN114196768B (zh) | 用于鉴别铜绿假单胞菌血清群的特异性分子靶标及其快速检测方法 | |
| CN113897417B (zh) | 一组检测牛结核杆菌的探针、检测试剂盒和检测方法 | |
| RU2435852C1 (ru) | ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК Mycobacterium paratuberculosis - ВОЗБУДИТЕЛЯ ПАРАТУБЕРКУЛЕЗА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР) | |
| JP2004081054A (ja) | 腸管出血性大腸菌ベロトキシン検出のためのプライマーおよびそれを用いた腸管出血性大腸菌の同定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140324 |