RU2301524C1 - Криоконсервант для лейкоцитов - Google Patents
Криоконсервант для лейкоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2301524C1 RU2301524C1 RU2006101031/15A RU2006101031A RU2301524C1 RU 2301524 C1 RU2301524 C1 RU 2301524C1 RU 2006101031/15 A RU2006101031/15 A RU 2006101031/15A RU 2006101031 A RU2006101031 A RU 2006101031A RU 2301524 C1 RU2301524 C1 RU 2301524C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agent
- cryoconserving
- leucocytes
- cryopreservative
- lemnan
- Prior art date
Links
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 9
- 239000008924 lemnan Substances 0.000 claims abstract description 9
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- DTEHAOWFPTWQFH-UHFFFAOYSA-N (2-ethylpyridin-3-yl)methanol Chemical compound CCC1=NC=CC=C1CO DTEHAOWFPTWQFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 4
- 238000003303 reheating Methods 0.000 abstract 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000000936 membranestabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и физиологии. Криоконсервант содержит в оптимальном соотношении лемнан, глицерин, оксиметилэтилпиридина сукцинат, воду для инъекций и гидроксид натрия (для доведения рН раствора до 7,0-7,4). Экспозиция лейкоконцентрата с криоконсервантом в течение 18 мин, охлаждение по экспоненциальной программе до -10°С. Изобретение обеспечивает при быстром отогреве сохранить 99,75±0,71% физиологически полноценных лейкоцитов нейтрофильных клеток. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и физиологии и касается создания криоконсерванта для лейкоцитов.
В качестве прототипа нами выбран протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°С (Патент на изобретение №2261595), который включает модежель, глицерин и оксиметилэтилпиридина сукцинат.
Существенным недостатком прототипа является то, что данный раствор не может быть реализован, т.к. модежель, входящий в него, перестал выпускаться промышленностью, кроме того, модежель не обладает стимулирующим действием на фагоциты, в частности, на нейтрофилы.
Техническим результатом настоящего изобретения является создание криоконсерванта для лейкоцитов, позволяющего сохранить лейкоциты в физиологически полноценном состоянии при температуре -10°С.
Технический результат достигается тем, что в предложенный криоконсервант для лейкоцитов включены следующие ингредиенты: растительный полисахарид - лемнан, обладающий как полисахарид (пектин) экзоцеллюлярным криопротекторным действием, что гармонично дополняет эндоцеллюлярное хладоограждающее влияние глицерина на клетки и делает комбинированный криоконсервант более полноценным, дающим при охлаждении лейкоцитов до -10°С выраженный криобиологический (технический) эффект и оказывающий стимулирующее влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов: под действием лемнана увеличивается способность нейтрофилов поглощать частицы латекса на 20-50% (Ovodov Yu.S. et.al. // XIX Intern. Carbohydr. Symp. August 9-14, 1998, San Diego, 1998 - P.DPO 41; Попов С.В. Функциональные реакции нейтрофилов и макрофагов на растительные полисахариды: Автореф....дис. канд. биол. наук; Сыктывкар, 1999-19 с.), поэтому включение лемнана в криоконсервант, не требующий отмывания после выхода нейтрофильных клеток из криогипобиоза, усиливает и активизирует их фагоцитарную способность и способствует 100% их морфологической сохранности; глицерин высшего сорта - криопротектор эндоцеллюлярного действия (Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус А.М., Калугин Ю.В. Криопротекторы: Киев: Наукова думка, 1978. - с.5-64) и производное янтарной кислоты оксиметилэтилпиридина сукцинат (кратко ОМЭПС), обладающий антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, восстанавливает нарушенные функции мембран клеток, тормозит перекисное окисление липидов. Сукцинат участвует в энергетическом обмене клетки (Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Т.2. - М.: Мир, 1980. - с.317-319 и с.321-322).
Криоконсервант имеет рН среды 7,0-7,4, самый благоприятный для клеток крови. Его ингредиенты тропны лейкоцитарным клеткам и производятся в Российской Федерации.
Пример использования средства
Консервант, содержащий лемнан в концентрации 0,3%, глицерин - 7%, оксиметилэтилпиридина сукцинат - 0,3%, воду для инъекций до 100 мл и 4 М. раствор гидроксид натрия (1-2 кап.) до рН раствора 7,0-7,4, смешивают в отношении 1:1 с концентратом лейкоцитов в полимерном контейнере «Компопласт». Смесь, выдержав 18 мин при комнатной температуре, помещают на 24 часа в электрический морозильник (в 3-литровую ванну с этиловым 96° спиртом, охлажденным до -10°С). Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38°С в течение 2-3 секунд при интенсивном покачивании контейнера (3-4 раза в сек). Температура оттаянного лейкоконцентрата в контейнере должна быть в пределах +2÷+4°С. Затем определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитарных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - N 9. - с.58-59). Расчет выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями клеток до замораживания.
Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава».
Изучены три варианта консерванта для лейкоконцентрата, различающихся по концентрации входящих в них ингредиентов. Состав вариантов представлен в таблице 1.
| Таблица 1 | ||||
| Характеристика состава различных вариантов криоконсерванта для сохранения лейкоцитов при температуре -10°С в расчете на 100 г сухого вещества (в г) | ||||
| Номер варианта криоконсерванта | Состав хладоограждающего раствора | |||
| Лемнан, в% | Глицерин, в% | ОМЭПС, в% | Вода для инъекций, в мл. | |
| 1 | 0,20 | 7,0 | 0,30 | До 100 |
| 2 | 0,30 | 7,0 | 0,30 | До 100 |
| 3 | 0,40 | 7,0 | 0,40 | До 100 |
Конечная концентрация веществ, входящих в состав вариантов криоконсерванта N1, N2 и N3, после смешивания 1:1 с лейкоконцентратом оказывалась в 2 раза ниже исходной (таблица 2), рН среды не изменялась, оставаясь в пределах 7,0-7,4.
| Таблица 2. | ||||
| Конечная концентрация ингредиентов в различных вариантах криоконсерванта после смешивания с лейкоцитным концентратом | ||||
| Номер варианта криоконсерванта | Конечная концентрация ингредиентов в различных вариантах криоконсерванта после смешивания с лейковзвесью | |||
| Лемнан, в% | Глицерин, в% | ОМЭПС, в% | Вода для инъекций, в мл. | |
| 1 | 0,10 | 0,35 | 0,15 | До 200 |
| 2 | 0,15 | 0,35 | 0,15 | До 200 |
| 3 | 0,20 | 0,35 | 0,20 | До 200 |
Исследования лейкоцитов производили на морфологическую сохранность и функциональную активность (табл.3).
| Таблица 3. | |||
| Результаты после замораживания до -10°С и оттаивания лейкоцитов с различными вариантами предложенного криоконсерванта | |||
| Вариант консервирующего раствора | Показатели, в % к исходному уровню. n=7 | ||
| Жизнеспособность лейкоцитов | Морфологическая сохранность гранулоцитов | Фагоцитарная активность нейтрофилов | |
| Верхний предел дозировок ингредиентов раствора | 83,50±12,15* | 95,50±5,75 | 98,75±2,99 |
| Оптимальное соотношение ингредиентов раствора | 97,58±1,73 | 100,00±0,00 | 99,75±0,71 |
| Нижний предел дозировок ингредиентов раствора | 81,62±15,96* | 78,86±10,54* | 86,14±5,61* |
| * - различие достоверное (р<0,05) | |||
Основным критерием оценки биологической полноценности лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов, является определение их фагоцитарной активности. Этот тест, наиболее надежно характеризующий физиологические свойства клеток, был лучшим после охлаждения - отогрева при использовании криконсерванта с оптимальным соотношением ингредиентов.
Готовый оптимальный вариант криоконсерванта прозрачен, с желтоватым оттенком, без запаха, рН 7,0-7,4, хорошо смешивается во всех соотношениях с лейкоцитным концентратом, не вызывает конгломерацию клеток и обеспечивает функциональную и морфологическую сохранность при положительной температуре до замораживания. Криоконсервант проявляет выраженное хладоограждающее свойство при охлаждении лейкоцитов до -10°С.
Таким образом, разработанный криоконсервант при замораживании лейкоконцентрата до -10°С обеспечил сохранность высокого процента физиологически активных лейкоцитарных клеток. Он может быть применен в учреждениях медицинского и биологического профиля.
Claims (1)
- Криоконсервант для лейкоцитов, характеризующийся тем, что он содержит лемнан, глицерин, оксиметилэтилпиридина сукцинат и воду для инъекций при следующем соотношении ингредиентов, %:
Лемнан 0,2-0,4 Глицерин 7,0 Оксиметилэтилпиридина сукцинат 0,3-0,4 Вода для инъекций До 100 мл Гидроксид натрия 1 М раствор До рН 7,0-7,4
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006101031/15A RU2301524C1 (ru) | 2006-01-10 | 2006-01-10 | Криоконсервант для лейкоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006101031/15A RU2301524C1 (ru) | 2006-01-10 | 2006-01-10 | Криоконсервант для лейкоцитов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2301524C1 true RU2301524C1 (ru) | 2007-06-27 |
Family
ID=38315323
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006101031/15A RU2301524C1 (ru) | 2006-01-10 | 2006-01-10 | Криоконсервант для лейкоцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2301524C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116897922A (zh) * | 2023-09-13 | 2023-10-20 | 天津外泌体科技有限公司 | 一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2261595C1 (ru) * | 2004-01-19 | 2005-10-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c |
-
2006
- 2006-01-10 RU RU2006101031/15A patent/RU2301524C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2261595C1 (ru) * | 2004-01-19 | 2005-10-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ю.С.ОВОДОВ и др. Биогликаны-иммуномодуляторы. Строение и свойства. Найдено в Интернет [он лайн] 10.08.2006. http://treskunov.narod.rn/ conference2004/report 16.html. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116897922A (zh) * | 2023-09-13 | 2023-10-20 | 天津外泌体科技有限公司 | 一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液 |
| CN116897922B (zh) * | 2023-09-13 | 2024-05-28 | 天津外泌体科技有限公司 | 一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Balint et al. | The cryopreservation protocol optimal for progenitor recovery is not optimal for preservation of marrow repopulating ability | |
| WO2009120996A1 (en) | Mehtod, system, and apparatus for hypothermic collection, storage, transport and banking of birth tissue | |
| CN102246742B (zh) | 生物组织固定剂及其制备方法 | |
| CN106342787A (zh) | 一种器官保存液及其制备方法 | |
| CN112841174A (zh) | 一种用于人脐带间充质干细胞长期保存的冻存液 | |
| SE505499C2 (sv) | Förvaringslösning för organ och vävnad eller delar därav från människor och djur innehållande kalcium och nitroglycerin, användning därav samt förfarande för förvaring därmed | |
| CN115005199B (zh) | 一种自然杀伤细胞的冻存液、冻存方法和应用 | |
| Landy et al. | An antibody-complement system in normal serum lethal to mouse tumor cells | |
| WO1998035551A1 (en) | Organ preservation solution | |
| RU2301524C1 (ru) | Криоконсервант для лейкоцитов | |
| CN113490414B (zh) | 干细胞的保存 | |
| RU2464991C1 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови | |
| Vazzana et al. | Chemiluminescence response of β-glucan stimulated leukocytes isolated from different tissues and peritoneal cavity of Dicentrarchus labrax | |
| RU2439877C2 (ru) | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) | |
| Hubel et al. | Cryopreservation of cord blood after liquid storage | |
| RU2184449C1 (ru) | Криозащитный раствор для замораживания лейкоцитов при умеренно-низкой температуре | |
| RU2261595C1 (ru) | Протекторный раствор для консервирования лейкоцитов при температуре -10°c | |
| RU2311027C1 (ru) | Раствор для консервирования лейкоцитов при околонулевой температуре | |
| RU2240000C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре | |
| RU2230454C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре | |
| RU2563117C1 (ru) | Комбинированный криопротектор "диметилсульфоксид/реополиглюкин" для криоконсервации стволовых клеток и способ их криоконсервации для клинического применения | |
| CN114539382A (zh) | 一种多肽及含有该多肽的冷冻保存液 | |
| Petrakis et al. | The dead leukocyte content of the blood in normal and leukemic patients | |
| RU2621295C2 (ru) | Раствор для консервирования клеточных взвесей | |
| CN108094410B (zh) | 一种皮肤深低温保护剂及皮肤保存方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100111 |