RU2341270C2 - Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, а также способы ее получения - Google Patents
Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, а также способы ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2341270C2 RU2341270C2 RU2006146795/15A RU2006146795A RU2341270C2 RU 2341270 C2 RU2341270 C2 RU 2341270C2 RU 2006146795/15 A RU2006146795/15 A RU 2006146795/15A RU 2006146795 A RU2006146795 A RU 2006146795A RU 2341270 C2 RU2341270 C2 RU 2341270C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- composition
- agent
- cultivation
- tissue
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 62
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 5
- 230000034918 positive regulation of cell growth Effects 0.000 title abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 81
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 57
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 40
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 35
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 35
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 9
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 6
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 6
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 4
- 239000010408 film Substances 0.000 claims 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims 2
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 16
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 abstract description 11
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 58
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 12
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 10
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 6
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 5
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 5
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 4
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 4
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 208000008964 Chemical and Drug Induced Liver Injury Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 2
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 210000001174 endocardium Anatomy 0.000 description 2
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 2
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000037020 contractile activity Effects 0.000 description 1
- 239000000490 cosmetic additive Substances 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000001258 dyslipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 150000002194 fatty esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical class CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и касается композиции, предназначенной для стимулирования роста и регенерации клеток, а также к способу ее получения. Композиция содержит разрушенные клетки лейкоцитов периферической крови и стволовые и/или прогениторные клетки в кондиционированной среде их культивирования. Способ получения данной композиции для стимуляции роста и регенерации клеток предусматривает получение композиции, состоящей из кондиционированной клеточной культуральной среды, полученной при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток, их разрушение в конденциорованной среде, объединение указанной композиции с фармацевтически приемлемым носителем. Преимущество изобретения заключается в том, что оно может быть использовано для роста и регенерации клеток. 4 н. и 16 з.п.ф-лы, 2 табл., 1 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к фармакологической композиции, содержащей кондиционированную культуральную среду, полученную при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в культуральной среде, а также разрушенные культивируемые клетки. Клетки, используемые для кондиционирования среды, могут быть генетически модифицированы в целях изменения концентрации белков, присутствующих в данной среде. В среде культивации могут содержаться белки, полученные из тканей паренхиматозных органов. Фармакологическую композицию используют для стимуляции регенерации органов и тканей. Фармакологическую композицию можно применять в качестве косметических добавок, пищевых добавок и добавок в корм животных, а также для культивирования клеток, фармацевтического применения и для стимуляции роста волос.
Предпосылками создания изобретения послужил факт, что в процессе регенерации поврежденного органа, происходит активация лейкоцитов крови веществами, образующимися при разрушении тканей и органов. В результате проведенных исследований стало известно, что резекция паренхиматозных органов у экспериментальных животных вызывает изменение метаболической активности лейкоцитов, в особенности лимфоцитов. Перенос таких активированных клеток крови в организм интактного животного вызывает увеличение митозов в паренхиме того же органа, который был резецирован у оперированного животного. В процессе разрушения паренхиматозных клеток в кровь поступают вещества, как правило, внутриклеточный матрикс, которые вызывают метаболическую перестройку в лимфоидных органах. Лимфоциты начинают продуцировать вещества, способные изменять скорость пролиферации и дифференцировки других, не лимфоидных клеток, как правило, стволовых и прогениторных клеток костного мозга, а также стволовых клеток, находящихся в паренхиматозных органах.
Очевидно, что использовать вышеуказанные механизмы переноса возможно с помощью культивирования клеток, участвующих в механизмах переноса. Питательная среда, используемая для культивации клеток обычно включает незаменимые аминокислоты, витамины, минералы, углеводы, липиды и нуклеиновые кислоты. Внесение в питательную среду гормонов и ростовых факторов обеспечивает условия для нормального роста и дифференцировки культивируемых клеток. В процессе культивирования клеточная культура начинает продуцировать медиаторы и ростовые факторы, которые, как правило, призваны обеспечить оптимальные условия для пролиферации культивируемых клеток. Спектр продуцируемых веществ напрямую зависит от фенотипического состава культивируемых клеток, а также от факторов роста, которые были исходно привнесены в культуральную среду. Таким образом, в процессе культивирования клетки модифицируют культуральную среду, обогащая ее продуктами своей жизнедеятельности. В процессе культивирования клетки секретируют ряд важных клеточных метаболитов, регулирующих пролиферацию клеток, их адгезию, дифференцировку, миграцию, определяющих спектр синтезируемых и секретируемых метаболитов. Это могут быть различные клеточные метаболиты: секреторные, включая, например, биологически активные факторы роста, медиаторы воспаления и другие внеклеточные белки. В качестве примера можно привести: VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста), FGF (фактор роста тромбоцитов) и IGF (инсулиноподобный фактор роста) (Gonzalez-Rubio, M. et al., 1996, Kidney Int. 50(1):164-73; Abramovitch, R. et al., 1997, Int. J. Exp. Pathol. 78(2):57-70; Stein I. et al., 1995, Mol. Cell. Biol. 15(10):5363-8; Yang W. et al., 1997, FEBS Lett. 403(2):139-42; West, N.R. et al. 1995, J. Neurosci. Res. 40(5):647-59). Трансформирующий фактор роста (TGF-β), индуцируется в процессе заживления ран. Было также показано, что TGF-β способствует повышению экспрессии белков внеклеточного матрикса, включая коллаген и фибронектин (Ignotz et al., 1986, J. Biol. Chem. 261:4337-4345), и ускорению заживления ран (Mustoe et al., 1987, Science 237:1333-1335). Рядом других факторов роста, обладающих способностью к индуцированию ангиогенеза и заживлению ран, являются VEGF и основный FGF. Также известно, что биологические эффекты клеточных факторов роста и цитокинов определяют не только концентрацией отдельного цитокина, но, во многом, биологический эффект определяется соотношением отдельных цитокинов, например соотношение γ-ИНФ и ИЛ-4 определяет тип развития иммунной реакции (клеточный или гуморальный).
Однако значительная часть ростовых факторов, гормонов, медиаторов и других внеклеточных белков, которые секретируются культивируемыми клетками, во внеклеточной среде быстро инактивируются, т.е. теряют свою биологическую активность. С другой стороны, в составе культивируемых клеток находятся секреторные гранулы, содержащие белки. Зачастую белки, входящие в состав секреторных гранул, находятся в неактивном состоянии в виде прогормонов. Поэтому получение композиции, состоящей из культуральной среды, обогащенной клеточными метаболитами, секретируемыми культивируемыми клетками, а также из клеточного лизата, содержащего внутриклеточные белки, в том числе белки секреторных гранул, является весьма перспективным для последующего производства препаратов, повышающих процессы регенерации.
При этом дополнительное добавление тканеспецифического антигена, состоящего из веществ, полученных при разрушении тканей и органов, в культуральную среду приводит к изменению метаболической активности культивированных клеток, что проявляется в изменении внутриклеточного синтеза и секреции клеточных метаболитов.
Прототипом предлагаемого изобретения является композиция, включающая средство для изменения скорости роста и репродукции клеток, содержащее кондиционированную клеточную культуральную среду, полученную при культивировании эукариотических клеток в трех измерениях, а также способ ее получения (Патент РФ 2280459 от 27.06.2006). Однако данная композиция не учитывает механизмов развития регенерации в ответ на действие повреждающих факторов.
Предложенное изобретение свободно от вышеуказанных недостатков, поскольку в ее основе учтен механизм переноса регенераторных свойств от поврежденного органа к регенерирующим клеткам.
Получение композиции, содержащей кондиционированную культуральную среду, полученную при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в культуральной среде, а также лизат культивируемых клеток, а также композицию, полученную после того, как к культивируемым клеткам добавляется тканеспецифический антиген, получаемый из тканей того органа, регенерацию которого надо улучшить, открывает новые возможности в получении продуктов для использования в различных целях, включающих регенерацию тканей, например, при лечении ран и других дефектов ткани, а также при лечении хронических воспалительных и дегенерационных процессов внутренних органов и кожных покровов.
Заявителями настоящего изобретения описана композиция, содержащая кондиционированную культуральную среду, полученную при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в культуральной среде и лизат культивируемых клеток, а также композицию, полученную после того, как к культивируемым клеткам добавляется тканеспецифический антиген, получаемый из тканей того органа, регенерацию клеток которого требуется простимулировать.
Композиции, могут состоять из любой известной определенной или неопределенной среды и могут быть кондиционированы с использованием любых стволовых и/или прогениторных клеток. Эта среда может быть кондиционирована стромальными клетками, паренхиматозными клетками, мезенхимными стволовыми клетками, резервными клетками печени, стволовыми нервными клетками, стволовыми клетками поджелудочной железы и/или эмбриональными стволовыми клетками.
Клеточный лизат получается из любых культивируемых клеток, которые после культивирования разрушаются с использованием физических (ультразвук, электрический разряд, замораживание оттаивание), химических (ферменты, химические реагенты), механических (растирание) и других факторов, а также их комбинации, в результате чего наступает нарушение целостности клеточных структур. В процессе разрушения культивируемых клеток возможно, но не обязательно, использовать физические (снижение температуры, использование инертных газов), химические (ингибиторы протеолитических ферментов) и другие факторы, а также их комбинацию для снижения скорости процесса разрушения клеточных метаболитов протеолитическими ферментами.
Тканеспецифический антиген, добавляемый в культуральную среду, получается из ткани органа, соответствующего тому, регенерацию которого требуется простимулировать. Тканеспецифический антиген получается при разрушении ткани органа с использованием физических (ультразвук, электрический разряд, замораживание-оттаивание), химических (ферменты, химические реагенты), механических (растирание) и других факторов, а также их комбинации, в результате чего наступает нарушение целостности клеточных структур. В процессе приготовления тканеспецифического антигена возможно, но не обязательно, использовать физические (снижение температуры, использование инертных газов), химические (ингибиторы протеолитических ферментов) и другие факторы, а также их комбинацию, для снижения скорости процесса разрушения клеточных структур протеолитическими ферментами.
Фармакологическая композиция, состоящая из кондиционированной культуральной среды, полученной при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в культуральной среде, а также лизата культивируемых клеток может быть использована в любом состоянии. Физическими вариантами этой композиции являются, но не ограничиваются ими, жидкая или твердая среда, замороженная среда, лиофилизованная среда или среда, высушенная до порошкообразного состояния. Кроме того, эта композиция может быть приготовлена в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем, используемым в качестве носителя для внутреннего введения, для введения непосредственно в пищу или пищевой продукт, для получения мази или растирания - для местного. Кроме того, указанная композиция может быть дополнительно обработана для увеличения или уменьшения концентрации одного или нескольких факторов или компонентов, содержащихся в данной композиции. Так, например, композиция может быть обогащена факторами роста с использованием иммуноаффинной хроматографии. Также композиция может быть приготовлена в сочетании с антибиотиком, противовоспалительным агентом, противовирусным агентом, противогрибковым агентом, гормоном, противоопухолевым агентом, анальгетиком, анестезирующим средством или любой их комбинации.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым фармакологическим композициям, содержащим любую кондиционированную определенную или неопределенную культуральную среду, полученную при культивировании лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в культуральной среде, а также лизат культивируемых клеток, полученный из культивированных клеток, подвергнутых разрушению с использованием химических, физических, механических факторов или их комбинации. Указанные клетки представляют собой клетки человека или животного и такими клетками являются стромальные клетки, клетки крови, клетки костного мозга, паренхиматозные клетки, мезенхимные стволовые клетки, резервные клетки печени, стволовые нервные клетки, панкреатические стволовые клетки и/или эмбриональные стволовые клетки. Фармакологическая композиция будет содержать различные естественным образом секретированные белки, а также внутриклеточные метаболиты, синтезируемые клеткой и содержащиеся преимущественно в секреторных гранулах.
Культуральная среда для культивирования клеток может быть любой средой для культивирования клеток, которая адекватно соответствует потребностям культивируемых клеток в питательных элементах. Примерами таких сред являются, но не ограничиваются ими, модифицированная по методу Дульбекко среда Игла (DMEM), среда Хэма F12, RPMI 1640, среда Исков, среда Маккой и другие композиции сред, известные специалистам, включая среды, описанные в работах Methods For Preparation of Media, Supplements and Substrate For Serum-Free Animal Cell Culture Alan R.Liss, New York (1984) и Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedures, John Wiley & Sons Ltd., Chichester, England 1996. Указанная среда может быть дополнена любыми компонентами, необходимыми для поддержания нужной клеточной или тканевой культуры. Если это необходимо, то дополнительно может быть добавлена эмбриональная телячья сыворотка, которая представляет собой комплексный раствор альбуминов, глобулинов, стимуляторов роста и гормонов. Такая сыворотка не должна содержать патогенов и должна быть тщательно проверена на загрязнение микоплазмой, бактериями, грибками и вирусами.
В данной среде могут культивироваться стромальные клетки, паренхиматозные клетки, мезенхимные стволовые клетки (клетки, коммитированные или некоммитированные в отношении направления дифференцировки), резервные клетки печени, стволовые нервные клетки, стволовые клетки поджелудочной железы и/или эмбриональные стволовые клетки. Такими клетками, среди прочих, являются, но не ограничиваются ими, клетки костного мозга, кожи, печени, поджелудочной железы, почек, нервной ткани, надпочечника, эпителия слизистой и гладких мышц. Такие ткани и/или органы могут быть получены путем соответствующей биопсии или после аутопсии.
Стволовые клетки и/или прогениторные могут быть выделены известными методами. Так, например, популяции стволовых клеток и методы их выделения и использования были недавно описаны Keller et al., Nature Med, 5:151-152 (1999), Smith Curr. Biol. 8:R802-804 (1998), Методы выделения и культивирования мезенхимных стволовых клеток известны специалистам. См., Mackay et al. Tissue Eng. 4:415-428 (1988); William et al., Am. Surg. 65:22-26 (1999). Аналогичным образом стволовые клетки нервной ткани могут быть выделены способом, описанным Flax et al., Nature Biotechnol, 16:1033-1039 (1998); и Frisen et al., Cell. Mol. Life Sci., 54:935-945 (1998).
Эти клетки могут быть культивированы любым известным способом, например, в монослое, на гранулах или в трехмерном слое и любым другим способом (т.е. в чашках для культивирования, в роллер-флаконах, в системах с непрерывным потоком и т.п.). Методы культивирования клеток и тканей хорошо известны специалистам и описаны, например, в Freshney (1987), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Techniques.
Кроме того, данная среда может быть подвергнута 10-20-кратному концентрированию с использованием концентрирующего устройства, работающего при избыточном давлении и имеющего фильтр с отсечкой 10000 мол. масс. (Amicon, Beverly, MA).
Кроме того, кондиционированная среда может быть также обработана для выделения и очистки продукта, например, в целях удаления нежелательных протеаз. Используемые методы выделения и очистки продукта, которые позволяют сохранить оптимальную активность, хорошо известны специалистам. Так, например, может оказаться желательной очистка фактора роста, регуляторного фактора, пептидного гормона, антитела и т.п. Такими методами являются, но не ограничиваются ими, гель-хроматография (с использованием матриц, таких как сефадекс), ионообменная хроматография, аффинная хроматография на хелате металла с нерастворимой матрицей, такой как перекрестно-сшитая агароза, ВЭЖХ-очистка и гидрофобная хроматография кондиционированной среды. Эти методы более подробно описаны в Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedure, см. выше. Само собой разумеется, что в зависимости от целей применения кондиционированной среды и/или полученных из нее продуктов должны быть приняты соответствующие меры для поддержания стерильности. Альтернативно может оказаться необходимой стерилизация, и она может быть осуществлена методами, известными специалистам, такими как, например, нагревание и/или стерилизация с помощью фильтра, при этом следует обеспечить сохранение нужной биологической активности.
Примеры осуществления изобретения
1 этап: Получение стволовых и прогениторных клеток для культивирования
На примере клеток костного мозга
Для забора костного мозга используют доступ из переднего гребня подвздошной кости. Забор костного мозга проводится в условиях операционной при соблюдении тех же правил асептики, как и при других оперативных вмешательствах.
После обработки кожи йодсодержащими растворами в области передних гребней делают прокол кожи и подкожно-жировой клетчатки, через который вставляют иглы для аспирации. После чего прокалывают кортикальную пластинку гребня подвздошной кости и аспирируют костный мозг из губчатого вещества кости. Для забора 50-150 мл костного мозга необходимо сделать несколько проколов кортикальной пластинки кости, для этого кожу и подкожно-жировую клетчатку перемещают аспирационной иглой. Классическая технология требует аспирировать костный мозг из каждого вкола малыми порциями (3-5) мл в 20-миллилитровый шприц.
Из аспирата костномозговой взвеси удаляют эритроциты. Для удаления эритроцитов можно использовать градиентное центрифугирование, лизис эритроцитов лизирующим раствором или комбинацию этих методов с другими, в результате чего наступает разделение эритроцитов и ядросодержащих клеток. Данные ядросодержащие клетки содержат как стволовые клетки, так и прогениторные.
На примере клеток, полученных из периферической крови
Вначале для повышения числа стволовых и прогениторных клеток в периферической крови животному перед забором клеток вводили в течение 2 дней внутривенно Г-КСФ (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор). Введение препарата позволило повысить уровень гемопоэтических стволовых клеток с 0,5% (контроль) до 3,5% от общего количества мононуклеарных клеток в периферической крови
Далее проводят забор периферической крови любым известным способом и осуществляют удаление эритроцитов. Для удаления эритроцитов можно использовать градиентное центрифугирование, лизис эритроцитов лизирующим раствором или комбинацию этих методов с другими, в результате чего наступает разделение эритроцитов и ядросодержащих клеток. Данные ядросодержащие клетки содержат как стволовые клетки, так и прогениторные.
2 этап: Получение лейкоцитов периферической крови
Проводят забор периферической крови любым известным способом, после чего осуществляют получение лейкоцитарной суспензии: для этого 2 мл гепаринизированной крови смешивают с 1 мл подогретого до 37°С 3% раствора желатина и инкубируют в термостате при 37°С в течение 30 мин. После оседания эритроцитов слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отбирают в пластиковые пробирки и отмывают 10-кратным объемом фосфатно-солевого буфера (рН=7,4). Затем лейкоциты после центрифугирования в течение 10 мин при 1000 об/мин ресуспендируют в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+. После подсчета числа лейкоцитов концентрацию клеток доводят до 106 кл.
3 этап: Культивирование клеток
Полученные клетки, а именно лейкоциты периферической крови и стволовые и/или прогениторные клетки, ресуспендируют в культуральной ростовой среде. Клетки культивируют совместно при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности, в течение 1-60 суток.
4 этап: Получение композиции
После культивирования клетки вместе с культуральной средой переносят в пробирки, в которых клетки подвергаются разрушению с использованием физических (ультразвук, замораживание-оттаивание, электрический импульс и др.), и/или химических (ферменты, химические реагенты и др.), и/или механических (растирание и др.) методов или их комбинации, приводящих к нарушению клеточных структур. Полученную композицию, состоящую из культуральной среды и разрушенных культивированных клеток, можно использовать для приготовления инъекционных форм, таблетированных лекарственных форм, применять в виде пищевых добавок или высушивать, лиофилизировать, замораживать и т.д.
Мази готовятся с использованием в качестве основы медицинского вазелина. Фармакологическую композицию помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до мелкодисперсного состояния. Затем к полученному порошку добавляют медицинский вазелин и тщательно перетирают до получения однородной (гомогенной) субстанции. Мазь наносилась на поверхность кожи.
Инъекционные формы готовились: Стерильную фармакологическую композицию растворяли в дистиллированной воде. Раствор вводили внутрибрюшинно, внутримышечно, внутривенно или подкожно.
Жидкие препараты для перорального введения могут быть изготовлены, например, в виде растворов, сиропов или суспензий. Такие жидкие препараты могут быть получены стандартными способами с использованием фармацевтически приемлемых добавок, таких как суспендирующие агенты (например, сорбитный сироп, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры); эмульгирующие агенты (например, лецитин или камедь акации); безводные носители (например, миндальное масло, жирные сложные эфиры, этиловый спирт или фракционированные растительные масла); и консерванты (например, метил- или пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота).
Дополнительно композиция может быть получена с добавлением антибиотика, противовоспалительного агента, противовирусного агента, противогрибкового агента, гормона, противоопухолевого агента, анальгетика, анестезирующего средства или любой их комбинации. При этом добавление того или иного агента производится с учетом необходимого терапевтического эффекта определяемого специалистом.
Дополнительно композиция может быть получена с добавлением к культивируемым клеткам тканеспецифичного антигена.
В данном примере композиции 1 и 2 проводятся согласно вышеизложенному примеру.
3 этап: Получение тканеспецифичного антигена
Для получения тканеспецифичекого антигена брали свежевыделенную ткань органа. В качестве источника может быть использована аллогенная или ксеногенная ткань, при возможности используется биопсийный материал.
Для получения тканеспецифического антигена клетки органа или тканей разрушают, используя физические (ультразвук, замораживание-оттаивание, электрический импульс и др.), и/или химические (ферменты, химические реагенты и др.) и/или механические (растирание и др.), методы или их комбинации, приводящие к нарушению клеточных структур. Как пример: Ткань механически гомогенизируется на фрагменты не более 0,5 мм3. Полученный гомогенат заливается раствором Хенкса 1:1 и помещается в морозильную камеру на 1 час, затем ткань размораживают, данный цикл повторяют 3 раза. Затем гомогенат центрифугируют при 2000 об/мин 10 мин. Супернатант отбирают и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм для обеспечения стерильности раствора. Концентрация белка в растворе определяется методом Лоури и должна находиться в диапазоне от 0,5 до 1 мг/мл.
При этом отмечено, что в основе метода получения тканеспецифичного антигена (ТА) лежит разрушение клеточных структур и оно может осуществляться:
1. Механически - растирание ткани паренхиматозных органов (например, в фарфоровой ступке с использованием фарфорового пестика или в стеклянном гомогенизаторе).
2. С использованием физических методов (например, проведение циклов замораживания-оттаивания или обработка суспензии клеток ультразвуком).
3. С использованием химических методов (например, обработка клеточной суспензии детергентами, которые разрушают липидный бислой клеточных и внутриклеточных мембран).
4. Сочетанием вышеперечисленных методов (механическое перетирание ткани с последующем проведением циклов замораживания-оттаивания).
В нашей работе мы изучали разные способы приготовления ТА и остановились на сочетании механического истирания с последующим проведением циклов замораживания-оттаивания. Мы выбрали данный метод как наиболее простой и быстро выполнимый. Однако проведенные нами исследования показали, что другие (вышеперечисленные методы) позволяют добиться такого же результата (изменяется время манипуляции, ряд методов требует дополнительного оборудования). В своей работе мы определяли уровень активности внутрилизосомальных ферментов (в частности, кислой фосфатазы) в супернатанте после разрушения тканей различными методами. Нами не было зафиксировано достоверных отличий при использовании разных методов разрушения тканей. Таким образом, данный «тканеспецифичный антиген», по нашему мнению, может быть получен любым известным способом.
В нашей работе мы также изучали разные способы получения тканеспецифического антигена, тканеспецифический антиген, может быть получен не только при помощи центрифугирования и последующего фильтрования, но и он может быть в виде гомогената или супернанатата. Основным условием при этом является то, что он является тканеспецифическим антигеном ткани органа, «соответствующего поврежденному».
4 этап: Культивирование с использованием тканеспецифического антигена
Полученные клетки, а именно лейкоциты периферической крови и стволовые и/или прогениторные клетки, ресуспендируют в культуральной ростовой среде. В среду для культивирования клеток также добавляется тканеспецифический антиген, полученный из ткани того органа, регенерацию клеток которого требуется простимулировать. Клетки и тканеспецифический антиген культивируют совместно при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности, в течение 1-60 суток. Супернатант тканеспецифического антигена добавлялся в культуральную среду в соотношении в среднем 1:30 (проверялся диапазон от 1:10 до 1:80).
5 этап: Получение композиции проводят вышеуказанным способом
Примеры, подтверждающие эффективность предложенной композиции.
Пример 1. Эффективность применения субстрата, полученного из культивированных клеток костного мозга, была изучена в опытах с моделированием дислипидемического повреждения печени у морских свинок.
У морских свинок с хронической дислипидемией в течение 4 месяцев развивается жировая дистрофия печени и резко нарушается морфометрическая характеристика гепатоцитов (таблица 1). Для ускорения восстановительных процессов в печени животным была введена вышеописанная композиция - СККМ. В качестве 1 дозы принимали количество белка, полученное при разрушении 106 клеток культивированных в 5 мл культуральной среды, а также белок, содержащийся в культуральной среде, в которой клетки культивировались в среднем в течение 5 дней. В состав полученных из костного мозга клеток входили: стволовые мезенхимальные клетки (подтверждено культивированием), гемопоэтические прогениторные клетки (CD34+) и лимфоидные клетки. В качестве контроля был использован субстрат, полученный из мононуклеарных клеток периферической крови животных - СПК. Содержание белка в контрольном и опытном субстрате не отличалось друг от друга.
Как видно из представленных данных (табл.1), введение СПК повышало регенерационную способность гепатоцитов при жировой дистрофии печени. Однако данный эффект был недостаточно выражен. Введение СККМ приводит к достоверному повышению процессов регенерации гепатоцитов в печени экспериментальных животных.
Пример 2. Получения фармакологической композиции при использовании в процессе культивирования тканеспецифического антигена.
Использование композиции на модели повреждения миокарда крыс методом криодеструкции (КД). На 30 сутки в зоне повреждения ЛЖ происходило формирование рубцовой ткани округлой формы диаметром 6-7 мм со стороны эпикарда и 3 мм со стороны эндокарда; толщина стенки ЛЖ в центре рубца не превышала 1 мм. Как видно из таблицы 2, убыль относительной массы ЛЖ (на единицу массы тела) после криодеструкции составила примерно 13%, а для свободной стенки ЛЖ этот показатель составил 17%.
Площадь некроза после криодеструкции по отношению к общей площади свободной стенки ЛЖ составила со стороны эпикарда 25.1±3.6%, со стороны эндокарда - 23.0±4.2%. Площадь трансмурального некроза после криодеструкции по отношению к общей площади свободной стенки ЛЖ составила со стороны эпикарда 11.4±0.7%, со стороны эндокарда - 6.4±2.5%.
Таким образом, проведенная морфометрия макропрепаратов поврежденного сердца позволила установить достоверное снижение мышечной массы ЛЖ, что неизбежно должно было бы привести к снижению его сократительной активности.
Основные этапы:
а) Получение стволовых и прогениторных клеток.
Стволовые клетки и прогениторные клетки получали от интактного животного той же линии. Костный мозг забирали у животного, находящегося под общим эфирным наркозом, из бедренной кости, пунктируя кость и промывая ее раствором Хенкса. Эритроциты удаляли, добавляя к полученной суспензии лизирующий раствор в соотношении 1:10. После добавления лизирующего раствора клетки центрифугировали и полученный осадок ресуспендировали раствором Хенкса.
б) Лейкоциты периферической крови получали: 2 мл гепаринизированной крови смешивают с 1 мл подогретого до 37°С 3% раствора желатина и инкубируют в термостате при 37°С в течение 30 мин. После оседания эритроцитов слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отбирают в пластиковые пробирки и отмывали 10-кратным объемом фосфатно-солевого буфера (рН=7,4). Затем лейкоциты после центрифугирования в течение 10 мин при 1000 об/мин ресуспендируют в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+. После подсчета числа лейкоцитов концентрацию клеток доводят до 106 кл.
в) Получение тканеспецифического антигена (ТА):
ТА получали из сердца интактных крыс. Ткань сердца массой 500 мг тщательно механически измельчали ножницами (размер отдельных фрагментов не превышал 0,5 мм) при температуре 4°С. Затем ткань заливали раствором Хенкса в соотношении 1:1 и помещали в морозильную камеру на 1 час, затем ткань размораживали, данный цикл повторяли 3 раза. Гомогенат ткани сердца центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант отбирают и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм для обеспечения стерильности раствора. Концентрация белка в растворе находилась в диапазоне от 0,5 до 1 мг/мл (по методу Лоури).
г) Полученные стволовые клетки и прогениторные клетки, а также лейкоциты периферической крови помещали в культуральную среду, состоящую из среды культивирования DMEM, 10% бычьей фетальной сыворотки. Одновременно с внесением клеток в культуральную среду вносили супернатант, содержащий тканеспецифический антиген. Супернатант тканеспецифического антигена добавлялся в культуральную среду в соотношении в среднем 1:30. Клетки культивировали в среднем в течение 7 суток (от 1 до 15 суток) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности.
В состав культивированных клеток входили: стволовые мезенхимальные клетки (подтверждено культивированием), гемопоэтические прогениторные клетки (CD34+) и лимфоидные клетки.
д) Разрушение культивируемых клеток в культуральной среде после их культивирования.
После культивирования клетки в культуральной среде подвергали разрушению - 2 цикла замораживания-оттаивания и обработка ультразвуком.
е) Из полученной композиции готовили инъекционные препараты, которые вводили животному внутрибрюшинно в течение 7 дней (опытная группа). В качестве 1-го контроля использовали композицию, состоящую из культуральной среды и разрушенных культивированных клеток, которые культивировались без добавления тканеспецифичного антигена. В качестве 1-й дозы принимали количества белка получаемое из 106 клеток, которые культивировались в 10 мл культуральной среды. В качестве 2-го контроля использовали композицию, состоящую из культуральной среды и разрушенных клеток, которые не культивировались (106 клеток и 10 мл культуральной среды).
При введении животным с криодеструкцией (КД) контрольной (2-я контрольная группа) композиции, которая получалась из некультивированных клеток, нами было отмечено увеличение массы миокарда, улучшение сократительной способности сердца, однако ни в одном из проведенных опытов не было получено полного восстановления сердечной мышцы. В 1-й контрольной группе животных с КД, которым вводили композицию, которая получалась из культивированных клеток, но без добавления тканеспецифичного антигена, нами была отмечена достоверно более полная регенерация поврежденного органа. Следует отметить, что масса левого желудочка у крыс (опытная группа) с КД, которым в композицию, получаемую из культивированных клеток, к которым в процессе культивации был добавлен тканеспецифический антиген, достоверно не отличалась от массы миокарда интактных животных (таблица 2) и была достоверно выше по сравнению с 1-м и 2-м контролем. Уровень митозов в опытной группе был достоверно выше по сравнению с 1-й и 2-й группой.
Пример 3.
Эффективность применения композиции, полученной из лимфоидных, стволовых и прогениторных клеток, полученных из периферической крови животных, для лечения острого токсического гепатита.
В работе использовали крыс с моделью острого токсического гепатита (введение п/кожно 0,1 мл 40% масляного раствора CCL4 в течение 14 дней).
Фармакологическую композицию готовили из культивированных лимфоидных, стволовых и прогениторных клеток, полученных из периферической крови. Для повышения числа стволовых и прогениторных клеток в периферической крови животному перед забором клеток вводили в течение 2 дней в/в Г-КСФ (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор). Ведение препарата позволило повысить уровень гемопоэтических стволовых клеток с 0,5% (контроль) до 3,5% от общего количества мононуклеарных клеток в периферической крови. В состав полученных из периферической крови клеток входили: гемопоэтические прогениторные клетки (CD34+) и лимфоидные клетки. Среди полученных для дальнейшего культивирования клеток отсутствовали мезенхимальные стволовые клетки, что было подтверждено в процессе культивирования.
а) Получение прогениторных клеток и лейкоцитов из периферической крови.
2 мл гепаринизированной крови смешивали с 1 мл подогретого до 37°С 3% раствора желатина и инкубировали в термостате при 37°С в течение 30 мин. После оседания эритроцитов слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отбирали в пластиковые пробирки и отмывали 10-кратным объемом фосфатно-солевого буфера (рН=7,4). Затем лейкоциты после центрифугирования в течение 10 мин при 1000 об/мин ресуспендировали в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+ После подсчета числа лейкоцитов концентрацию клеток доводили до 106 кл. Присутствие среди выделенных лейкоцитов гемопоэтических прогениторных клеток (CD34+) подтверждено с использованием проточного цитофлюориметра.
б) Тканеспецифичесий антиген (ТА) получали из печени интактных крыс. Ткань печени массой 500 мг тщательно механически измельчали ножницами (размер отдельных фрагментов не превышал 0,5 мм) при температуре 4°С. Затем ткань заливали раствором Хенкса в соотношении 1:1 и помещали в морозильную камеру на 1 час, затем ткань размораживали, данный цикл повторяли 3 раза. Полученный гомогенат подвергали обработке ультразвуком. Гомогенат ткани печени центрифугировали при 2000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант отбирали и фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм для обеспечения стерильности раствора. Концентрация белка в растворе находилась в диапазоне от 0,5 до 1 мг/мл (по методу Лоури).
в) Полученные прогениторные клетки, а также лейкоциты помещали в культуральную среду, состоящую из среды культивирования DMEM, 10% бычьей фетальной сыворотки. Одновременно с внесением клеток в культуральную среду вносили супернатант, содержащий тканеспецифический антиген. Супернатант тканеспецифического антигена добавлялся в культуральную среду в соотношении в среднем 1:30. Клетки культивировали в среднем в течение 10 суток (от 5 до 30 суток) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности.
В состав культивированных клеток входили: гемопоэтические прогениторные клетки (CD34+) и лимфоидные клетки.
г) Культивированные клетки вместе с культуральной средой разрушали (механически истирались, озвучивались ультразвуком, подвергались нескольким циклам замораживания-оттаивания).
За дозу вводимой композиции принимали количество белка, получаемого при разрушении 106 клеток, а также белок, содержащийся в 5 мл куьтуральной среды, в которой содержались эти клетки в течение 5 суток. В качестве контроля использовали разрушенные некультивированные клетки периферической крови и культуральную среду, в которой клетки не культивировали.
Полученную композицию вводили животным подкожно ежедневно в течение 7 дней.
Эффективность лечения оценивали по данным биохимии крови.
Как видно из данных, представленных чертеже, через 1 неделю после начала введения CCL4 в крови животных наблюдается резкий (в 2,5 раза) подъем уровня трансаминаз (АсТ), что свидетельствует о цитолитическом действии токсина. Ведение композиции, полученной из разрушенных, культивированных клеток периферической крови и культуральной среды, в которой эти клетки культивировались, приводит к выраженному и достоверному лечебному эффекту, который проявляется нормализацией уровня трансаминаз. (За 100% процентов принят уровень фермента в крови интактных крыс.)
Проведенные нами эксперименты на животных продемонстрировали, что композиция, полученная из кондиционированной культуральной среды и разрушенных культивированных клеток, увеличивает процесс регенерации клеток в поврежденном органе. Композиция, состоящая из кондиционированной культуральной среды и разрушенных культивированных клеток, которые были культивированы с добавлением в культуральную среду тканеспецифичного антигена, также достоверно повышает процесс регенерации в поврежденном органе и может быть использована для лечения острых и хронических воспалительных и дегенеративных заболеваний внутренних органов и кожных покровов.
| Таблица 1. | ||||||
| Влияние введения СПК и СККМ на регенерацию гепатоцитов, поврежденной печени. | ||||||
| Группа животных | Кол-во норм. гепатоцитов (НГ), % | Кол-во дегенеративных. гепатотицов (ДГ), % | НГ/ДГ | Объемная доля ядер, % | Двуядерные гепатоциты, % | Ядра с двумя и более ядрышками, % |
| Интактные (n=5) | 88 | 12 | 8 | 19 | 2 | 5 |
| Хр. Дислипидемия (n=11) | 65 | 36 | 1,7±0,2 | 11 | 2,1±0,4 | 13 |
| Хр. Дислипидемия + СПК (n=8) | 71 | 27 | 2,9±0,5 | 13 | 5,0±0,3 | 15 |
| Хр. Дислипидемия + СККМ (n=8) | 88 | 14 | 6,9±0,4 | 22 | 11,4±0,4 | 24 |
| Таблица 2. | ||
| Сравнение массы интактных сердец и сердец после КД у животных, которым внутрибрюшинно вводили композицию, полученную из некультивированных клеток (2-й контроль), культивированных клеток (1-й контроль) и клеток к которым во время культивирования был добавлен тканеспецифический антиген (опытная группа). | ||
| Масса животного, г | Масса свободной стенки ЛЖ, (мг)/масса животного(г) | Масса ЛЖ (мг)/масса животного (г) |
| Интакные животные | ||
| 356.7±5.8 | 1.701±0.031 | 2.298±0.062 |
| Животные после криодеструкции и введения композиции, полученной из некультивированных клеток (2-й контроль) | ||
| 361.1±27.8 | 1.402±0.12* | 2.01±0.01* |
| Животные после криодеструкции и введения композиции, полученной из культивированных клеток (1-й контроль) | ||
| 361.2±10.1 | 1.56±0.01*# | 2.10±0.02*# |
| Животные после криодеструкции и введения композиции, полученной из культивированных клеток, к которым во время культивирования добавлялся тканеспецифический антиген, полученный из миокарда интактных животных. (Опытная группа) | ||
| 351.1±11.1 | 1.66±0.04+ | 2.17±0.09+ |
| - * - достоверны по отношению к группе интактных животных, р<0.05 | ||
| - # - достоверно по отношению к 2-му контролю, р<0.05 | ||
| - + - достоверно по отношению к 1-му и 2-му контролю, р<0.05 | ||
Claims (20)
1. Композиция для стимуляции роста и регенерации клеток, характеризующаяся тем, что содержит разрушенные клетки лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток в конденционированной среде их культивирования и фармацевтически приемлемый носитель.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представлена в форме жидкости, в твердой форме, в лиофилизованной форме, в форме порошка, геля или пленки.
3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что клетками являются клетки человека.
4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что клетками являются клетки животного.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит антибиотик, противовоспалительный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, гормон, противоопухолевый агент, анальгетик, анестезирующее средство или любую их комбинацию.
6. Композиция для стимуляции роста и регенерации клеток, характеризующаяся тем, что она содержит разрушенные клетки лейкоцитов периферической крови и стволовых и/или прогениторных клеток, в конденционированной среде их культивирования с тканеспецифическим антигеном, соответствующим поврежденному органу, регенерацию которого следует осуществить, и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что она представлена в форме жидкости, в твердой форме, в лиофилизованной форме, в форме порошка, геля или пленки.
8. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что клетками являются клетки человека.
9. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что клетками являются клетки животного.
10. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что дополнительно содержит антибиотик, противовоспалительный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, гормон, противоопухолевый агент, анальгетик, анестезирующее средство или любую их комбинацию.
11. Способ получения композиции для стимуляции роста и регенерации клеток, включающий
а) получение стволовых и/или прогениторных клеток;
в) получение лейкоцитов периферической крови;
б) совместное их культивирование;
в) разрушение культивируемых клеток в культуральной среде после их культивирования;
г) объединение указанной композиции с фармацевтически приемлемым носителем.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что дополнительно производят переработку указанной композиции для получения ее в форме жидкости, твердого продукта, лиофилизированного продукта, порошка, геля или пленки.
13. Способ по п.11, отличающийся тем, что дополнительно производят переработку указанной композиции для увеличения или снижения концентрации одного или нескольких продуктов, содержащихся в данной среде.
14. Способ по п.11, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в течение от 1 до 60 сут.
15. Способ по п.11, отличающийся тем, что дополнительно добавляют к указанному средству антибиотик, противовоспалительный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, гормон, противоопухолевый агент, анальгетик, анестезирующее средство или в любой их комбинации.
16. Способ получения композиции для стимуляции роста и регенерации клеток, включающий
а) получение стволовых и/или прогениторных клеток;
б) получение лейкоцитов периферической крови;
в) получение супернатанта тканеспецифического антигена, соответствующего поврежденному органу, регенерацию которого требуется простимулировать;
г) совместное культивирование клеток с тканеспецифичным антигеном;
д) разрушение клеток в культуральной среде после их культивирования;
е) объединение указанной композиции с фармацевтически приемлемым носителем.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что дополнительно производят переработку указанной композиции для получения ее в форме жидкости, твердого продукта, лиофилизированного продукта, порошка, геля или пленки.
18. Способ по п.16, отличающийся тем, что дополнительно производят переработку указанной композиции для увеличения или снижения концентрации одного или нескольких продуктов, содержащихся в данной среде.
19. Способ по п.16, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в течение то 1 до 60 сут.
20. Способ по п.16, отличающийся тем, что дополнительно добавляют к указанному средству антибиотик, противовоспалительный агент, противовирусный агент, противогрибковый агент, гормон, противоопухолевый агент, анальгетик, анестезирующее средство или в любой их комбинации.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006146795/15A RU2341270C2 (ru) | 2006-12-28 | 2006-12-28 | Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, а также способы ее получения |
| PCT/RU2007/000717 WO2008082323A1 (en) | 2006-12-28 | 2007-12-19 | Growth stimulating and cell regenerating composition and a method for the production thereof. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006146795/15A RU2341270C2 (ru) | 2006-12-28 | 2006-12-28 | Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, а также способы ее получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006146795A RU2006146795A (ru) | 2008-07-10 |
| RU2341270C2 true RU2341270C2 (ru) | 2008-12-20 |
Family
ID=39588851
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006146795/15A RU2341270C2 (ru) | 2006-12-28 | 2006-12-28 | Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, а также способы ее получения |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2341270C2 (ru) |
| WO (1) | WO2008082323A1 (ru) |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2455354C1 (ru) * | 2010-12-29 | 2012-07-10 | Антонина Ивановна Колесникова | Композиция для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек |
| RU2512681C2 (ru) * | 2012-08-22 | 2014-04-10 | Антонина Ивановна Колесникова | Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости |
| RU2574017C1 (ru) * | 2014-09-30 | 2016-01-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Средство для лечения ожогов и ран на основе цитокинов и факторов роста, секретируемых мезенхимными клетками человека, способ получения средства и способ лечения ожогов и ран |
| US9289459B2 (en) | 2009-03-27 | 2016-03-22 | Moleac Pte. Ltd. | Therapy for promoting cell growth |
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
| RU2620342C1 (ru) * | 2016-05-11 | 2017-05-24 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Генная И Клеточная Терапия" (Ооо "Генная И Клеточная Терапия") | Косметическое средство на основе продуктов секреции мезенхимных стволовых/стромальных клеток жировой ткани человека и способ его получения |
| RU2621867C1 (ru) * | 2016-04-27 | 2017-06-07 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Инновационные клеточные технологии" | Композиция для регенерации кожи и слизистых оболочек |
| RU2637407C1 (ru) * | 2016-06-01 | 2017-12-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" (НИИФКИ) | Способ получения кондиционной среды, обладающей регенераторным потенциалом, для интраназального введения при лечении заболеваний центральной нервной системы |
| WO2017209658A1 (en) * | 2016-05-31 | 2017-12-07 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material, compositions, and methods of use |
| RU2646793C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для собак, обладающее регенеративной активностью |
| RU2646792C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для лошадей, обладающее регенеративной активностью |
| RU2646791C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для кошек, обладающее регенеративной активностью |
| RU2662172C2 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-07-24 | Акаев Ислам Умарович | Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды |
| EA032369B1 (ru) * | 2016-07-11 | 2019-05-31 | Махир Мамед оглы Алиев | Способ лечения воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта на фоне сопутствующей хронической патологии |
| US10744160B2 (en) | 2014-12-01 | 2020-08-18 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material and method of manufacturing |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6642048B2 (en) * | 2000-01-11 | 2003-11-04 | Geron Corporation | Conditioned media for propagating human pluripotent stem cells |
| US6800480B1 (en) * | 1997-10-23 | 2004-10-05 | Geron Corporation | Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells in feeder-free culture |
| US7011828B2 (en) * | 2000-03-14 | 2006-03-14 | Es Cell International Pte. Ltd. | Implanting neural progenitor cells derived for human embryonic stem cells |
| RU2280459C2 (ru) * | 1999-05-14 | 2006-07-27 | Скинмедика, Инк. | Средство для изменения скорости роста или репродукции клеток, способ его получения, способ стимуляции заживления ран или лечения ожогов, способ коррекции косметического дефекта, способ ингибирования старения кожи и способ стимуляции роста волос |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60243018A (ja) * | 1984-05-17 | 1985-12-03 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | ヒト内来性癌制御因子 |
| US20060234375A1 (en) * | 2004-09-30 | 2006-10-19 | Doronin Sergey V | Use of human stem cells and/or factors they produce to promote adult mammalian cardiac repair through cardiomyocyte cell division |
-
2006
- 2006-12-28 RU RU2006146795/15A patent/RU2341270C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-12-19 WO PCT/RU2007/000717 patent/WO2008082323A1/ru not_active Ceased
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6800480B1 (en) * | 1997-10-23 | 2004-10-05 | Geron Corporation | Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells in feeder-free culture |
| RU2280459C2 (ru) * | 1999-05-14 | 2006-07-27 | Скинмедика, Инк. | Средство для изменения скорости роста или репродукции клеток, способ его получения, способ стимуляции заживления ран или лечения ожогов, способ коррекции косметического дефекта, способ ингибирования старения кожи и способ стимуляции роста волос |
| US6642048B2 (en) * | 2000-01-11 | 2003-11-04 | Geron Corporation | Conditioned media for propagating human pluripotent stem cells |
| US7011828B2 (en) * | 2000-03-14 | 2006-03-14 | Es Cell International Pte. Ltd. | Implanting neural progenitor cells derived for human embryonic stem cells |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10188688B2 (en) | 2009-03-27 | 2019-01-29 | Moleac Pte. Ltd. | Therapy for promoting cell growth |
| US9289459B2 (en) | 2009-03-27 | 2016-03-22 | Moleac Pte. Ltd. | Therapy for promoting cell growth |
| RU2455354C1 (ru) * | 2010-12-29 | 2012-07-10 | Антонина Ивановна Колесникова | Композиция для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек |
| RU2512681C2 (ru) * | 2012-08-22 | 2014-04-10 | Антонина Ивановна Колесникова | Способ лечения длительно незаживающей раны и/или раневой полости |
| RU2574017C1 (ru) * | 2014-09-30 | 2016-01-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Средство для лечения ожогов и ран на основе цитокинов и факторов роста, секретируемых мезенхимными клетками человека, способ получения средства и способ лечения ожогов и ран |
| US10744160B2 (en) | 2014-12-01 | 2020-08-18 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material and method of manufacturing |
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
| RU2621867C1 (ru) * | 2016-04-27 | 2017-06-07 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Инновационные клеточные технологии" | Композиция для регенерации кожи и слизистых оболочек |
| RU2620342C1 (ru) * | 2016-05-11 | 2017-05-24 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Генная И Клеточная Терапия" (Ооо "Генная И Клеточная Терапия") | Косметическое средство на основе продуктов секреции мезенхимных стволовых/стромальных клеток жировой ткани человека и способ его получения |
| WO2017209658A1 (en) * | 2016-05-31 | 2017-12-07 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material, compositions, and methods of use |
| RU2708329C2 (ru) * | 2016-05-31 | 2019-12-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Т-Хелпер Клеточные Технологии" | Материал стволовых клеток, композиции и способы применения |
| US11376283B2 (en) | 2016-05-31 | 2022-07-05 | T-Helper Cell Technologies, Llc | Stem cell material, compositions, and methods of use |
| RU2637407C1 (ru) * | 2016-06-01 | 2017-12-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" (НИИФКИ) | Способ получения кондиционной среды, обладающей регенераторным потенциалом, для интраназального введения при лечении заболеваний центральной нервной системы |
| EA032369B1 (ru) * | 2016-07-11 | 2019-05-31 | Махир Мамед оглы Алиев | Способ лечения воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта на фоне сопутствующей хронической патологии |
| RU2646792C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для лошадей, обладающее регенеративной активностью |
| RU2646791C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для кошек, обладающее регенеративной активностью |
| RU2662172C2 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-07-24 | Акаев Ислам Умарович | Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды |
| RU2646793C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-03-07 | Акаев Ислам Умарович | Средство для собак, обладающее регенеративной активностью |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2008082323A1 (en) | 2008-07-10 |
| RU2006146795A (ru) | 2008-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2008082323A1 (en) | Growth stimulating and cell regenerating composition and a method for the production thereof. | |
| Liu et al. | Exosomes derived from platelet-rich plasma present a novel potential in alleviating knee osteoarthritis by promoting proliferation and inhibiting apoptosis of chondrocyte via Wnt/β-catenin signaling pathway | |
| AU2014238305B2 (en) | Methods and non-immunogenic compositions for treating inflammatory disorders | |
| KR101629151B1 (ko) | 줄기세포 유래 엑소좀을 포함하는 지방세포 분화유도 및 지방조직 재생용 조성물 | |
| AU2015206236A1 (en) | Method for inducing angiogenesis | |
| CN104324053B (zh) | 一种快速愈合犬创伤组织的犬干细胞分泌因子修复液 | |
| CN108478600B (zh) | 间充质干细胞外泌体在制备防治骨质疏松症药物中的应用 | |
| JP2025503296A (ja) | 細胞修復タンパク質抽出物及びその製造方法とその使用 | |
| CN106727649A (zh) | 一种多组分注射液 | |
| CN113930392B (zh) | 一种间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用 | |
| CN118557604A (zh) | 线粒体用于作为促进组织再生或纤维母细胞迁移的组合物的用途 | |
| Zocchi et al. | New perspectives in regenerative medicine and surgery: The bioactive composite therapies (BACTs) | |
| CN118320022A (zh) | 一种含有槲皮素且可对酒精性肝损伤起保护作用的金线莲源性纳米囊泡及其制备和应用 | |
| CN114672456A (zh) | 利用超声刺激提高脂肪干细胞分泌胞外囊泡效率的方法及应用 | |
| JP2024504263A (ja) | 敗血症を治療するための薬物組成物及びその使用 | |
| RU2391990C1 (ru) | Композиция для стимулирования роста и регенерации клеток, (варианты), а также способ ее получения (варианты) | |
| CN117064981A (zh) | 石斛来源纳米囊泡在制备促进伤口愈合药物中的应用 | |
| CN117122614A (zh) | 凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用 | |
| CN116396935A (zh) | 一种m2型巨噬细胞外泌体及其应用 | |
| CN115025137A (zh) | 一种外用促进创面愈合的中药提取物及其提取方法和应用 | |
| KR101336386B1 (ko) | 림프관 생성 유도제 | |
| WO2008121027A1 (en) | Growth stimulating and cell regenerating composition and a method for carrying out said method | |
| CN111265550A (zh) | 一种修复损伤组织的干细胞因子脂质体及其制备方法 | |
| EP0142109B1 (en) | Macromolecules extracted from cultured mesenchymal cells for the treatment of degenerative diseases | |
| CN117582460B (zh) | 鸦胆子外泌体在制备抗乳腺癌药物和抑制肿瘤血管生成药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171229 |