RU2296328C1 - Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления - Google Patents
Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2296328C1 RU2296328C1 RU2005130476/15A RU2005130476A RU2296328C1 RU 2296328 C1 RU2296328 C1 RU 2296328C1 RU 2005130476/15 A RU2005130476/15 A RU 2005130476/15A RU 2005130476 A RU2005130476 A RU 2005130476A RU 2296328 C1 RU2296328 C1 RU 2296328C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chain reaction
- polymerase chain
- temperature
- carried out
- dna
- Prior art date
Links
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 5
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 14
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 14
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 14
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 claims description 10
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 9
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 5
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 2-bromophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Br VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011837 N,N-methylenebisacrylamide Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, молекулярно-биологическим исследованиям в области диагностики онкологических заболеваний. Заявленный способ и универсальный диагностический набор (ДН) предназначены для проведения медико-генетического анализа сразу нескольких мутаций (полиморфизмов) разных генов, в том числе генов, ассоциированных с некоторыми частыми мультифакториальными заболеваниями. Вследствие использования стандартных компонент смеси и стандартных олигопраймеров, оптимизации условий постановки полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) скорость анализа сокращается до 2-3 дней. Изобретение обеспечивает упрощение, удешевление анализа и делает его пригодным для проведения молекулярных исследований как в специализированных центрах, так и в лабораториях широкого спектра. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.
Description
Изобретение имеет отношение к медицине, молекулярно-биологическим исследованиям предрасположенности в области диагностики онкологических заболеваний.
Одним из наиболее перспективных и успешно развивающихся направлений мировой науки являются молекулярно-биологические технологии - основа для проведения опосредованного медико-генетического анализа. Данные технологии представляют собой широкий спектр методов, предназначенных для исследования и анализа генома организмов (от бактерии до человека), выявления и идентификации вариаций в структуре исследуемого участка нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) вплоть до расшифровки и установления первичной последовательности его оснований. Основой молекулярно-биологических методов диагностики являются различной степени сложности технологические манипуляции с нуклеиновыми кислотами, предварительно выделенными из клеток и тканей организма.
Расшифровка генома человека, идентификация тысяч новых генов и их полиморфизмов послужили концептуальной и методической основой молекулярной медицины, характерные особенности которой - профилактическая направленность и индивидуальный подход к человеку. Последний заключается, прежде всего, в выборе специфических молекулярных маркеров, необходимых для анализа аллельных вариантов набора генов (генной сети), вовлеченных в ту или иную патологию. В практической реализации такого подхода большое значение имеет совершенствование и упрощение методов анализа биологического материала. С этой целью создаются специальные диагностические наборы, опирающиеся на современные технологии и направленные на максимальное упрощение и автоматизацию молекулярных исследований без потери качества и точности анализа (http://www.clinlab.ru/win/LIBRARY/JOURNLAB/lab4/j4ct1.htm).
Стандартный способ диагностики предрасположенности к онкозаболеваниям включает выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови, проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР), ферментативного гидролиза эндонуклеазами, электрофорез. Температурный режим ПЦР состоит из следующих этапов: начальное плавление, ряд последовательных циклов из плавления, отжига и синтеза, а также финального синтеза. Используются следующие реагенты: 67 мМ трис-HCl, рН 8.8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4; 6.7 мМ MgCl2; 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанол, 170 мкг БСА, смесь четырех dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и термостабильная ДНК-полимераза 0,2 ед./мкл (Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, p.5.3-5.31, 6.36-6.45, 9.14-9.23, 14.14-14.19).
Недостатком этого способа является то, что с помощью его можно анализировать только одну мутацию или полиморфизм. Он не позволяет осуществить одновременный анализ сразу нескольких генов, что приводит к замедлению процесса диагностики, увеличению трудозатрат и усложнению рабочего протокола.
В основу изобретения положена задача создания универсального диагностического набора (ДН) для проведения медико-генетического анализа сразу нескольких мутаций (полиморфизмов) разных генов, в том числе генов, ассоциированных с некоторыми частыми мультифакториальными заболеваниями. Вследствие использования стандартных компонент смеси и стандартных олигопраймеров, оптимизации условий постановки полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) скорость анализа сокращается до 2-3 дней, поэтому применение способа определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностического набора приводит к упрощению, удешевлению анализа и делает его пригодным для проведения молекулярных исследований как в специализированных центрах, так и в лабораториях широкого спектра.
Решение этих технических задач обеспечивается описанной ниже модификацией общепринятого способа диагностики мультифакториальных заболеваний. После выделения ДНК проводят одну мультиплексную и одну стандартную полимеразную цепную реакцию с использованием 3 пар праймеров для мультиплексной ПЦР. Далее проводится гидролиз продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Hindll (для мультиплексной ПЦР) и BstFNI (для стандартной ПЦР) и электрофорез продуктов гидролиза в 6% полиакриламидном геле до выхода маркера из геля (в качестве маркера используют бромфенол).
В диагностическом наборе, включающем компоненты 67 мМ трис-HCl, рН 8.8 при 25°С; 16.6 мМ (NH4)2SO4; 6.7 мМ MgCl2; 6.7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1.0 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 0,2 ед./мкл, все компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции (за исключением ДНК-полимеразы) смешаны в одном объеме, все компоненты для проведения стандартной полимеразной цепной реакции (за исключением ДНК-полимеразы) и энзиматической рестрикции смешаны в других объемах, а в набор дополнительно включены ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, вода ампулированная и олигопраймеры.
Наличие смеси компонент, дополнительное введение ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, воды ампулированной и олигопраймеров в диагностический набор позволяет значительно ускорить процесс анализа, удешевить процедуру диагностики, сделать ее более доступной независимо от условий проведения.
Предложенные условия проведения анализа позволяют с помощью диагностического набора быстро, дешево и точно осуществить диагностику предрасположенности к онкологическим заболеваниям.
Состав набора можно представить в виде следующей схемы, которая показана на чертеже. В состав набора входит 1 - упаковочная коробка для набора; 2 - комплект №1 для проведения ПЦР и энзиматической реакции (смесь для мультиплексной ПЦР, термостабильная ДНК полимераза, буфер для эндонуклеазы рестрикции, эндонуклеаза рестрикции Hindll и контроль для ПЦР и энзиматической реакции); 3 - комплект №2 для проведения ПЦР и энзиматической реакции (смесь для стандартной ПЦР, термостабильная ДНК полимераза, буфер для эндонуклеазы рестрикции, эндонуклеаза рестрикции BstFNI и контроль для ПЦР и энзиматической реакции); 4 - вода ампулированная.
В заявляемом изобретении предлагается новый модифицированный вариант идентификации аллелей генов, ассоциированных с онкозаболеваниями, путем использования набора олигопраймеров и температурного режима, позволяющих проводить мультиплексную полимеразную цепную реакцию и стандартную полимеразную реакцию для определения сразу 2-х полиморфизмов одного гена, причем модифицированную таким образом, что появляется возможность проводить анализ гаплотипов по данному гену (ген р53).
Варианты генов и последовательности олигопраймеров приведены в таблице 1.
Способ состоит из 8 этапов и осуществляется следующим образом.
Этап I. Выделение ДНК по стандартному протоколу.
Этап II. Проведение мультиплексной полимеразной цепной реакции с использованием 3 пар праймеров с помощью диагностического набора. При этом начальное плавление проводят в течение 4-7 минут при температуре 95°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий плавление при 94-96°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, отжиг при температуре от 60 до 62°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, синтез при температуре 72°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, финальный синтез в течение 3-5 минут при температуре 72°С (Таблица 2). Для амплификации использовали программируемый термоциклер фирмы «Perkin Elmer» (USA).
Этап III. Проведение стандартной полимеразной цепной реакции с помощью диагностического набора. При этом начальное плавление проводят в течение 4-7 минут при температуре 94°С, далее проводят цикл от 30 до 35 раз, включающий плавление при 94-96°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, отжиг при температуре от 53 до 56°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, синтез при температуре 72°С в течение от 40 секунд до 1 минуты, финальный синтез в течение 5-7 минут при температуре 72°С (Таблица 2). Для амплификации использовали программируемый термоциклер фирмы «Perkin Elmer» (USA).
Этап IV. Проверка специфичности амплификации и количества амплификата (после окончания ПЦР) методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) по стандартному протоколу.
Этап V. Гидролиз амплифицированных фрагментов ДНК эндонуклеазами рестрикции Hindll (для мультиплексной ПЦР) и BstFNI (для стандартной ПЦР) по стандартному протоколу.
| Таблица 2. | ||||
| Условия проведения ПЦР. | ||||
| Начальное плавление | Плавление | Отжиг | Синтез | Финальный синтез |
| Стандартная ПЦР | ||||
| 30-35 циклов | ||||
| 94°С 4-7 мин | 94-96°С 40 с - 1 мин | 53-56°С 40 с - 1 мин | 72°С 40 с - 1 мин | 72°С 5-7 мин |
| Мультиплексная ПЦР | ||||
| 28-32 цикла | ||||
| 95°С 4-7 мин | 94-96°С 40 с - 1 мин | 60-62°С 40 с - 1 мин | 72°С 40 с - 1 мин | 72°С 3-5 мин |
Этап VI. Разделение продуктов гидролиза в 7,5% полиакриламидном геле, приготовленном на трис-боратном буфере (ТБЕ) в аппарате для вертикального электрофореза с длиной стекла 20 см. Для получения 30% раствора акриламида смешивали 29 г акриламида с 1 г N,N-метилен-бис-акриламида и растворяли смесь в 100 мл дистиллированной воды, 10-кратный раствор ТБЕ готовили, растворяя 54 г триса, 27,5 г борной кислоты и 20 мл 0,5 М ЭДТА (рН 8,0) в 0,5 л дистиллированной воды. Для приготовления 40 мл 7,5% полиакриламидного геля смешивали 10 мл 30% акриламида, 4 мл 10-кратного ТБЕ, 26 мл дистиллированной воды, 400 мкл 10% раствора персульфата аммония и 50 мкл тетраметилэтилендиамина. Перед заливкой раствор тщательно перемешивали. Пробы (образцы) наносили в гель в полном полученном после рестрикции объеме для каждого продукта гидролиза в отдельную лунку. Электрофорез проводили в 1-кратном ТБЕ при напряжении электрического поля 100 В, пока образцы не входили в гель и не проходили около 1 см от лунок. После этого напряжение увеличивали до 180-200 В. Останавливали электрофоретическое разделение после выхода бромфенола из геля.
Этап VII. Окрашивание геля водным раствором бромистого этидия (0,5 мкг/мл), просмотр в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе и фотографирование на системе видео-гель-документации.
Этап VIII. Анализ полученных результатов по заданному протоколу.
Использование данного подхода и диагностического набора начато в НИИ Цитологии РАН. Данный способ позволил существенно ускорить и удешевить тестирование заявленных генов более чем в 3 раза.
Предлагаемое изобретение может найти применение в диагностике различных онкологических заболеваний, таких как рак легких, рак груди, рак толстого кишечника, рак мочевого пузыря, рак желудка и некоторых других, связанных с исследованием ДНК.
Claims (2)
1. Способ определения наследственной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, включающий выделение ДНК; проведение полимеразной цепной реакции для определения мутаций и/или полиморфизма гена, состоящей из начального плавления, ряда циклов из плавления, отжига и синтеза и финального синтеза; проведение гидролиза продуктов полимеразной цепной реакции эндонуклеазами рестрикции Hindi I и BstFNI, а также электрофорез в полиакриламидном геле, отличающийся тем, что проводят мультиплексную полимеразную цепную реакцию с использованием 3 пар праймеров при следующих условиях:
начальное плавление проводят в течение 4-7 мин при температуре 95°С, далее проводят цикл от 28 до 32 раз, включающий плавление при 94-96°С в течение от 40 с до 1 мин, отжиг при температуре от 60 до 62°С в течение от 40 с до 1 мин, синтез при температуре 72°С в течение от 40 с до 1 мин, финальный синтез в течение 3-5 мин при температуре 72°С;
затем проводят модифицированную полимеразную цепную реакцию при следующих условиях:
начальное плавление проводят в течение 4-7 мин при температуре 94°С, далее проводят цикл от 30 до 35 раз, включающий плавление при 94-96°C в течение от 40 с до 1 мин, отжиг при температуре от 53 до 56°С в течение от 40 с до 1 мин, синтез при температуре 72°С в течение от 40 с до 1 мин, финальный синтез в течение 5-7 мин при температуре 72°С, а электрофорез продуктов гидролиза проводят в 7,5%-ном полиакриламидном геле до выхода маркера из геля.
2. Диагностический набор для определения наследственной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, включающий компоненты 67 мМ трис-HCl, рН 8,8 при 25°С; 16,6 мМ (NH4)2SO4; 6,7 мМ MgClg; 6,7 мкм ЭДТА; 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 1,0 мМ каждого и термостабильную ДНК-полимеразу 0,2 ед./мкл, отличающийся тем, что все компоненты для проведения мультиплексной полимеразной цепной реакции (за исключением ДНК-полимеразы) смешаны в одном объеме, все компоненты для проведения модифицированной полимеразной цепной реакции (за исключением ДНК-полимеразы) и энзиматической рестрикции смешаны в других объемах, а в набор дополнительно включены ДНК для проведения положительного контроля полимеразной цепной реакции и энзиматической рестрикции, вода ампулированная и следующие олигопраймеры:
F:5'-CGTTCTGGTAAGGACAAGGGTTGG-3'
R:5'-CGTAGCTGCCCTGGTAGGTTT-3'
F:5'-TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC-3'
R:5'-TCACCGGATCATGGCCAGCA-3'
F:5'-GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC-3'
R:5'-GTTGGGCTCAAATATACGGTGG-3'
F:5'-GAACTGCCACTTCAGCTGTCT-3'
R:5'-GAAAGACCTCCCAGCGGTCA-3'
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005130476/15A RU2296328C1 (ru) | 2005-09-21 | 2005-09-21 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005130476/15A RU2296328C1 (ru) | 2005-09-21 | 2005-09-21 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2296328C1 true RU2296328C1 (ru) | 2007-03-27 |
Family
ID=37999250
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005130476/15A RU2296328C1 (ru) | 2005-09-21 | 2005-09-21 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2296328C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475184C2 (ru) * | 2010-06-25 | 2013-02-20 | Марина Юрьевна Якушева | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям |
| RU2529797C2 (ru) * | 2007-09-18 | 2014-09-27 | Кэнсер Рисёч Текнолоджи Лтд | Раковый маркер и терапевтическая мишень |
| RU2576780C2 (ru) * | 2014-04-25 | 2016-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Ген-технология" | Набор с лиофилизированными праймерами для пцр-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2145078C1 (ru) * | 1999-07-13 | 2000-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная фирма "АТГ-Биотех" | Многоканальный капиллярный генетический анализатор |
| RU2161309C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2000-12-27 | Исследовательский Фонд Университета Юты, | Мутации гена мтs в зародышевой линии и способ выявления предрасположенности к злокачественным опухолям в гене мтs |
| US6939675B2 (en) * | 1996-03-15 | 2005-09-06 | The Penn State Research Foundation | Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays |
| RU2260799C1 (ru) * | 2004-01-26 | 2005-09-20 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ прогнозирования предрасположенности к раку легкого у лиц, проживающих в экологически неблагополучных условиях |
-
2005
- 2005-09-21 RU RU2005130476/15A patent/RU2296328C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161309C2 (ru) * | 1994-03-18 | 2000-12-27 | Исследовательский Фонд Университета Юты, | Мутации гена мтs в зародышевой линии и способ выявления предрасположенности к злокачественным опухолям в гене мтs |
| US6939675B2 (en) * | 1996-03-15 | 2005-09-06 | The Penn State Research Foundation | Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays |
| RU2145078C1 (ru) * | 1999-07-13 | 2000-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная фирма "АТГ-Биотех" | Многоканальный капиллярный генетический анализатор |
| RU2260799C1 (ru) * | 2004-01-26 | 2005-09-20 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ прогнозирования предрасположенности к раку легкого у лиц, проживающих в экологически неблагополучных условиях |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Sambrook J et al. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989, p.5.3-5.31, 6.36-6.45, 9.14-9.23, 14.14-14.19. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2529797C2 (ru) * | 2007-09-18 | 2014-09-27 | Кэнсер Рисёч Текнолоджи Лтд | Раковый маркер и терапевтическая мишень |
| RU2475184C2 (ru) * | 2010-06-25 | 2013-02-20 | Марина Юрьевна Якушева | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям |
| RU2576780C2 (ru) * | 2014-04-25 | 2016-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Ген-технология" | Набор с лиофилизированными праймерами для пцр-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2850073T3 (es) | Cebadores universales de ARN ribosómico 16S y su uso en análisis y diagnóstico microbiológico | |
| JP2802125B2 (ja) | 核酸の検出方法 | |
| US9624542B2 (en) | Telomere length measurement in formalin-fixed, paraffin embedded (FFPE) samples by quantitative PCR | |
| RU2003126575A (ru) | Высокочувствительный метод обнаружения структур метилирования цитозина | |
| WO2001002094A1 (de) | Microchip-matrix-vorrichtung zur vervielfältigung und charakterisierung von nukleinsäuren | |
| Kosuta et al. | High-throughput DNA extraction and genotyping of 3dpf zebrafish larvae by fin clipping | |
| CN104357578A (zh) | 新的耳聋相关基因突变多位点检测体系及试剂盒 | |
| US20070072212A1 (en) | Use of markers including nucleotide sequence based codes to monitor methods of detection and identification of genetic material | |
| RU2296328C1 (ru) | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям и диагностический набор для его осуществления | |
| RU2413774C1 (ru) | Биологический днк маркер для определения сортов картофеля, набор и способ сортовой идентификации картофеля | |
| RU2304775C2 (ru) | Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления | |
| KR102219895B1 (ko) | 쯔쯔가무시병 진단용 조성물 및 이를 포함하는 키트 | |
| CN108517357B (zh) | 一种检测心源性猝死相关scn5a基因上心源性猝死相关snp的试剂盒及其检测方法 | |
| RU2200323C1 (ru) | Способ диагностики чувствительности штаммов mycobacterium tuberculosis к изониазиду с помощью полимеразной цепной реакции - конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов | |
| KR20150059672A (ko) | 닭의 성별을 감별하기 위한 등온증폭반응용 프라이머 조성물 및 이를 이용하여 닭의 성별을 감별하는 방법 | |
| WO2024005656A1 (es) | Kit de sexado temprano no invasivo mediante pcr en tiempo real para paiche (arapaima gigas) | |
| CN107630095B (zh) | 与绵羊羊毛弯曲数性状相关的分子标记及其特异性引物对和应用 | |
| JP2023020631A (ja) | 全身性エリテマトーデスを検査する方法 | |
| RU2528742C2 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления генотипов для идентификации личности с помощью системы микросателлитных днк-маркеров y-хромосомы | |
| KR20070100531A (ko) | 쌍이온 화합물을 이용한 핵산 혼성화 특이성을 증가시키는방법 | |
| RU2490642C1 (ru) | Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза | |
| RU2800084C2 (ru) | Способ получения молекулярных STR-маркеров Х-хромосомы для идентификации неизвестного индивида и определения биологического родства для работы с образцами малых количеств ДНК и набор олигонуклеотидов для его осуществления | |
| RU2282852C1 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы | |
| KR101997134B1 (ko) | Str 마커를 포함하는 pcr용 프리믹스 조성물 및 이를 이용한 과학수사 교육용 유전자 분석 키트 | |
| RU2556808C2 (ru) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОТИПА ЧЕЛОВЕКА ПО ПОЛИМОРФНОЙ ПОЗИЦИИ rs1613662 В ГЕНЕ GP6, КОДИРУЮЩЕМ ГЛИКОПРОТЕИН VI |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090922 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20110520 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120922 |