RU2129016C1 - Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals - Google Patents
Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2129016C1 RU2129016C1 RU96119743/13A RU96119743A RU2129016C1 RU 2129016 C1 RU2129016 C1 RU 2129016C1 RU 96119743/13 A RU96119743/13 A RU 96119743/13A RU 96119743 A RU96119743 A RU 96119743A RU 2129016 C1 RU2129016 C1 RU 2129016C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- salmonella
- glucose
- potassium phosphate
- culture
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 title claims abstract description 8
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 7
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims abstract description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 16
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 15
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 25
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical class [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 7
- -1 monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 150000003109 potassium Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 11
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 7
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 abstract description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 241000392514 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004886 process control Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных. The invention relates to biotechnology and can be used in the industrial production of dry live vaccines against salmonellosis of farm animals.
Известен способ получения сухой живой вакцины против сальмонеллеза свиней (патент РФ N 1577116 A 61 K 39/112, С 12 N 1/20, 14.09.98). A known method of obtaining a dry live vaccine against salmonellosis of pigs (RF patent N 1577116 A 61 K 39/112, C 12 N 1/20, 09/14/98).
Существующий способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных обладает рядом недостатков: процесс культивирования довольно продолжителен (12-14 ч), не позволяет использовать современное оборудование и приборы, защитная среда для лиофильного высушивания не обеспечивает стабильности вакцины при длительном хранении, что сказывается на качестве препарата, а также на эффективности производства. The existing method of manufacturing a vaccine against salmonellosis of farm animals has several disadvantages: the cultivation process is quite lengthy (12-14 hours), it does not allow the use of modern equipment and instruments, the protective environment for freeze drying does not ensure the stability of the vaccine during prolonged storage, which affects the quality of the drug, as well as production efficiency.
При анализе патентной документации и научно-технической литературы нами не обнаружено достаточно эффективного способа изготовления живых сухих вакцин против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, приближающегося к современному уровню производства биопрепаратов. In the analysis of patent documentation and scientific and technical literature, we did not find a sufficiently effective method for the manufacture of live dry vaccines against salmonellosis of farm animals, approaching the current level of production of biological products.
Целью заявляемого изобретения является сокращение времени выращивания культуры, снижение себестоимости препарата, а также повышение качества, стабильности в процессе хранения и стандартности биологических свойств вакцины. The aim of the invention is to reduce the time of growing the culture, reducing the cost of the drug, as well as improving the quality, stability during storage and standard biological properties of the vaccine.
Поставленная цель достигается за счет того, что периодическое глубинное культивирование сальмонелл проводят в питательной среде в течение 6-8 ч в соответствии с разработанным алгоритмом управления процессом, концентрируют полученную культуру, бактериальную массу ресуспендируют в разработанной защитной среде и высушивают. This goal is achieved due to the fact that periodic deep cultivation of Salmonella is carried out in a nutrient medium for 6-8 hours in accordance with the developed process control algorithm, the resulting culture is concentrated, the bacterial mass is resuspended in the developed protective medium and dried.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. A liquid nutrient medium based on the Hottinger reagent is loaded into a sterile fermenter.
Питательную среду в ферментере засевают культурой сальмонелл (Salmonella choleralsuis или Salmonella dublin), выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и выращивают при температуре (37±1)oC в течение 6-8 часов.The nutrient medium in the fermenter is seeded with a culture of Salmonella (Salmonella choleralsuis or Salmonella dublin) grown in a liquid nutrient medium of a similar composition and grown at a temperature of (37 ± 1) o C for 6-8 hours.
После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-110) - (-130) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и при минимальной скорости вращения мешалки, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости регулируют 10%-ным раствором NaOH, поддерживают на уровне 7,6 - 7,8 ед. pH, дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05 - 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при постоянных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Полученную культуру концентрируют, разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калий-фосфатном буферном растворе, фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to (-110) - (-130) mV by holding the culture without supplying air for aeration and at a minimum speed of rotation of the stirrer, after which until the end of the cultivation process using changes in air flow for aeration and stirrer rotation speeds maintain the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at a level of 15-25% of the oxygen saturation of the air, the pH of the culture fluid is controlled with a 10% NaOH solution, maintained at not 7.6 - 7.8 units. pH, fractional supply of glucose is carried out in doses up to a concentration of 0.05 - 0.15% with limitation of the growth of salmonella glucose, characterized by a sharp increase in pO 2 with constant air flow and revolutions of the stirrer and stopping the decrease in pH of the culture fluid. The resulting culture is concentrated, diluted with a sucrose-gelatin thiourea protective medium in a potassium phosphate buffer solution, Packed in bottles and freeze-dried.
Пример 1. Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров. Example 1. A method of manufacturing a vaccine with minimum parameter values.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. For the cultivation of salmonella, a liquid nutrient medium based on the Hottinger pass is used.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)o в течение 6 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -110 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости на уровне 7,6 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 составляет 22.6 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 8,0
Желатин - 0,4
Тиомочевина - 0,4
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.The medium is inoculated with a salmonella culture grown in a liquid nutrient medium of a similar composition. Cultivate at (37 ± 1) o for 6 hours. After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to -110 mV by holding the culture without supplying air to the aeration and the mixer turned off, after which, until the end of the cultivation process, the partial pressure of the dissolved in the culture fluid is maintained by changing the air flow to aeration and the rotation speed of the mixer. oxygen at the level of 15% of saturation with oxygen of the air, pH of the culture fluid at the level of 7.6 units. pH by supplying a 10% NaOH solution, and fractional glucose delivery is carried out in doses up to a concentration of 0.05% while limiting the growth of salmonella glucose, which is characterized by a sharp increase in pO 2 with constant air flow and stirrer speed and stopping the decrease in pH of the culture fluid. The accumulation of biomass in 1 cm 3 is 22.6 billion. The resulting culture is concentrated and diluted with sucrose-gelatin with thiourea protective medium in a potassium phosphate buffer solution prepared according to the following recipe, wt.%:
Sucrose - 8.0
Gelatin - 0.4
Thiourea - 0.4
Potassium Phosphate Disubstituted - 0.4
Monosubstituted potassium phosphate - 0.14
Distilled water - Up to 100.0
The diluted culture is Packed in bottles and freeze-dried.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 15,0 млрд, после сушки - 7,3 млрд, через 12 мес. хранения - 2,9 млрд.The number of living cells in the vaccine before drying in 1 cm 3 is 15.0 billion, after drying - 7.3 billion, after 12 months. storage - 2.9 billion
Пример 2. Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров. Example 2. A method of manufacturing a vaccine with optimal parameter values.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. For the cultivation of salmonella, a liquid nutrient medium based on the Hottinger pass is used.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 7 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -120 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 20% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,7 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 40,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 10,0
Желатин - 0,5
Тиомочевина - 05
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,5
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,17
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.The medium is inoculated with a salmonella culture grown in a nutrient medium of a similar composition. Cultivate at (37 ± 1) o C for 7 hours. After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to -120 mV by holding the culture without air supply to aeration and the mixer turned off, and then until the end of the cultivation process using flow changes air aeration and rotation speeds of the stirrer support the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at 20% of the oxygen saturation of the air, the pH of the culture fluid is maintained at 7.7 units. pH by supplying a 10% solution of NaOH, and fractional supply of glucose is carried out in doses up to a concentration of 0.1% while limiting the growth of salmonella glucose, which is characterized by a sharp increase in pO 2 at constant air flow and stirrer speed and stopping the decrease in pH of the culture fluid. The accumulation of biomass in 1 cm 3 of the medium is 40.0 billion. The resulting culture is concentrated and diluted with sucrose-gelatin with thiourea protective medium in a potassium phosphate buffer solution prepared according to the following recipe, wt.%:
Sucrose - 10.0
Gelatin - 0.5
Thiourea - 05
Disubstituted potassium phosphate - 0.5
Monosubstituted potassium phosphate - 0.17
Distilled water - Up to 100.0
The diluted culture is Packed in bottles and freeze-dried.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 30,0 млрд, после сушки - 28,0 млрд, через 12 мес. хранения - 24,0 млрд.The number of living cells in the vaccine before drying in 1 cm 3 is 30.0 billion, after drying - 28.0 billion, after 12 months. storage - 24.0 billion
Пример 3. Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров. Example 3. A method of manufacturing a vaccine with maximum parameter values.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. For the cultivation of salmonella, a liquid nutrient medium based on the Hottinger pass is used.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -130 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,8 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 25,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 12,0
Желатин - 0,6
Тиомочевина - 0,6
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,6
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,2
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.The medium is inoculated with a salmonella culture grown in a liquid nutrient medium of a similar composition. Cultivate at (37 ± 1) o C for 8 h. After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to -130 mV by holding the culture without air supply to aeration and the mixer turned off, and then until the end of the cultivation process using flow changes air aeration and rotation speeds of the stirrer support the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at 25% of the oxygen saturation of the air, the pH of the culture fluid is maintained at 7.8 units. pH by supplying a 10% NaOH solution, and fractional glucose delivery is carried out in doses up to a concentration of 0.15% while limiting the growth of salmonella glucose, which is characterized by a sharp increase in pO 2 with constant air flow and stirrer speed and stopping the decrease in pH of the culture fluid. The accumulation of biomass in 1 cm 3 of the medium is 25.0 billion. The resulting culture is concentrated and diluted with sucrose-gelatin with thiourea protective medium in a potassium phosphate buffer solution prepared according to the following recipe, wt.%:
Sucrose - 12.0
Gelatin - 0.6
Thiourea - 0.6
Potassium Phosphate Disubstituted - 0.6
Monosubstituted potassium phosphate - 0.2
Distilled water - Up to 100.0
The diluted culture is Packed in bottles and freeze-dried.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 20,0 млрд, после сушки - 14,0 млрд через 12 мес. хранения - 8,0 млрд.The number of living cells in the vaccine before drying in 1 cm 3 is 20.0 billion, after drying - 14.0 billion after 12 months. storage - 8.0 billion
Пример 4. Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных. Example 4. A method of manufacturing a vaccine with parameter values below the minimum.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. For the cultivation of salmonella, a liquid nutrient medium based on the Hottinger pass is used.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 5 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до - 100 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 10% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,5 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а подачу глюкозы не осуществляют. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 1,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 6,0
Желатин - 0,3
Тиомочевина - 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,3
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,11
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.The medium is inoculated with a salmonella culture grown in a liquid nutrient medium of a similar composition. Cultivate at (37 ± 1) o C for 5 h. After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to - 100 mV by holding the culture without air supply and the mixer turned off, after which until the end of the cultivation process using changes in air flow to aeration and rotation speeds of the stirrer support the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at a level of 10% of atmospheric oxygen saturation, the pH of the culture fluid is maintained at 7.5 units. pH by feeding a 10% solution of NaOH, and glucose is not supplied. The accumulation of biomass in 1 cm 3 of the medium is 1.0 billion. The resulting culture is concentrated and diluted with sucrose-gelatin with thiourea protective medium in a potassium phosphate solution prepared according to the following recipe, wt.%:
Sucrose - 6.0
Gelatin - 0.3
Thiourea - 0.3
Potassium Phosphate Disubstituted - 0.3
Monosubstituted potassium phosphate - 0.11
Distilled water - Up to 100.0
The diluted culture is Packed in bottles and freeze-dried.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 2,0 млрд, после сушки - 0,9 млрд, через 12 мес. хранения - 0,03 млрд.The number of living cells in the vaccine before drying in 1 cm 3 is 2.0 billion, after drying - 0.9 billion, after 12 months. storage - 0.03 billion
Пример 5. Способ изготовления вакцины со значениями параметров выше максимальных. Example 5. A method of manufacturing a vaccine with parameter values above the maximum.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера. For the cultivation of salmonella, a liquid nutrient medium based on the Hottinger pass is used.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при температуре (37±1)oC в течение 9 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -140 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 30% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,9 ед. pH с помощью 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,20% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 10,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 14,0
Желатин - 0,7
Тиомочевина - 0,7
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,7
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,23
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.The medium is inoculated with a salmonella culture grown in a liquid nutrient medium of a similar composition. Cultivate at a temperature of (37 ± 1) o C for 9 hours. After inoculation of the fermenter, the redox potential of the culture fluid is reduced to -140 mV by holding the culture without air supply to aeration and the mixer turned off, and then until the end of the cultivation process using changes air flow rate and rotational speed of the mixer maintain the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at 30% of the oxygen saturation of the air, the pH of the culture fluid is maintained at 7.9 units. pH with a 10% solution of NaOH, and fractional glucose supply is carried out in doses up to a concentration of 0.20% while limiting the growth of salmonella glucose, characterized by a sharp increase in pO 2 with constant air flow and stirrer speed and stopping the decrease in pH of the culture fluid. The accumulation of biomass in 1 cm 3 of the medium is 10.0 billion. The resulting culture is concentrated and diluted with sucrose-gelatin with thiourea medium in a potassium phosphate buffer solution prepared according to the following recipe, wt.%:
Sucrose - 14.0
Gelatin - 0.7
Thiourea - 0.7
Potassium Phosphate Disubstituted - 0.7
Monosubstituted potassium phosphate - 0.23
Distilled water - Up to 100.0
The diluted culture is Packed in bottles and freeze-dried.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 5,0 млрд, после сушки - 1,8 млрд, через 12 мес. Хранения - 0,2 млрд.The number of living cells in the vaccine before drying in 1 cm 3 is 5.0 billion, after drying - 1.8 billion, after 12 months. Storage - 0.2 billion
Технологические параметры изготовления сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, указанные в примерах, приведены в табл. The technological parameters of the manufacture of a dry live vaccine against salmonellosis of farm animals, indicated in the examples, are given in table.
Преимущества заявленного способа перед известным:
1. Применение интенсифицированного способа культивирования позволяет повысить накопление жизнеспособных бактерий при сокращении времени выращивания с 12- 14 до 6-8 часов.The advantages of the claimed method over the well-known:
1. The use of an intensified method of cultivation can increase the accumulation of viable bacteria while reducing the growing time from 12-14 to 6-8 hours.
2. Вакцина, полученная этим способом, более стабильна по биологическим свойствам, в том числе и по иммуногенности. 2. The vaccine obtained by this method is more stable in biological properties, including immunogenicity.
Claims (1)
Сахароза - 8,0 - 12,0
Желатин - 0,40 - 0,60
Тиомочевина - 0,40 - 0,60
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,40 - 0,60
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14 - 0,20
Вода дистиллированная - До 100,0A method of manufacturing a vaccine against salmonellosis of farm animals, comprising inoculating a vaccine strain of salmonella, culturing in a liquid nutrient medium based on a Hottinger digest with fractional glucose delivery, followed by concentration and lyophilization of the resulting bacterial suspension in a protective medium containing sucrose and gelatin, characterized in that the cultivation is carried out within 6 to 8 hours, and after seeding, the redox potential is reduced to (-110) - (-130) mV, after which until the end of the process cultivation cassettes maintain the partial pressure of oxygen dissolved in the culture fluid at a level of 15 - 25% of the oxygen saturation of the air, the pH of the culture fluid is maintained at 7.6 - 7.8 units. pH, and fractional supply of glucose is carried out in doses up to a concentration of 0.05 - 0.15% when limiting the growth of salmonella glucose, freeze drying is carried out in a protective medium additionally containing thiourea, monosubstituted potassium phosphate and disubstituted potassium, in the following ratio, wt. %:
Sucrose - 8.0 - 12.0
Gelatin - 0.40 - 0.60
Thiourea - 0.40 - 0.60
Disubstituted potassium phosphate - 0.40 - 0.60
Monosubstituted potassium phosphate - 0.14 - 0.20
Distilled water - Up to 100.0
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96119743/13A RU2129016C1 (en) | 1996-10-01 | 1996-10-01 | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96119743/13A RU2129016C1 (en) | 1996-10-01 | 1996-10-01 | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU96119743A RU96119743A (en) | 1999-01-27 |
| RU2129016C1 true RU2129016C1 (en) | 1999-04-20 |
Family
ID=20186234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96119743/13A RU2129016C1 (en) | 1996-10-01 | 1996-10-01 | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2129016C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2220743C2 (en) * | 2002-01-23 | 2004-01-10 | Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности | Method for manufacturing associated vaccine against salmonellosis, pasteurellosis and enterococcal infection in piglets |
| RU2292914C1 (en) * | 2005-08-02 | 2007-02-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and enterococcal infection in nutrias |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU172961A (en) * | ||||
| SU549470A1 (en) * | 1971-08-20 | 1977-03-05 | Московский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток Им. И.И. Мечникова | Method for preparing live typhoid vaccine |
| WO1989009063A1 (en) * | 1988-03-21 | 1989-10-05 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junio | Novel non-reverting shigella live vaccines |
| RU1577116C (en) * | 1988-09-14 | 1995-11-20 | Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов | Vaccine against pig salmonellosis, method of its preparing and a method of pig salmonellosis prophylaxis |
-
1996
- 1996-10-01 RU RU96119743/13A patent/RU2129016C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU172961A (en) * | ||||
| SU549470A1 (en) * | 1971-08-20 | 1977-03-05 | Московский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток Им. И.И. Мечникова | Method for preparing live typhoid vaccine |
| WO1989009063A1 (en) * | 1988-03-21 | 1989-10-05 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junio | Novel non-reverting shigella live vaccines |
| RU1577116C (en) * | 1988-09-14 | 1995-11-20 | Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов | Vaccine against pig salmonellosis, method of its preparing and a method of pig salmonellosis prophylaxis |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2220743C2 (en) * | 2002-01-23 | 2004-01-10 | Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности | Method for manufacturing associated vaccine against salmonellosis, pasteurellosis and enterococcal infection in piglets |
| RU2292914C1 (en) * | 2005-08-02 | 2007-02-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and enterococcal infection in nutrias |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2012235794A (en) | Improved shelf life and on seed stabilization of liquid bacterium inoculant | |
| Sizonenko et al. | The New Efficiency of the «SRMP»–Listerias Growth-Promoting Factor During Factory Cultivation | |
| RU2129016C1 (en) | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals | |
| RU2522811C2 (en) | METHOD OF PREPARING SYMBIOTIC BACTERIA OF GENUS Xenorhabdus, ISOLATED FROM NEMATODES OF GENUS Steinernema feltiae protense, FOR STORAGE | |
| RU2124366C1 (en) | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals and poultry | |
| RU2053790C1 (en) | Method of preparing vaccine against listeriosis in agriculture animals | |
| RU2136141C1 (en) | Method of meadow mushroom sowing material growth stimulating | |
| RU2246316C1 (en) | Mixed inactivated aluminum hydroxide-containing vaccine against infectious pneumonia and salmonellosis in pigs and method for it preparing | |
| US3449209A (en) | Method of preparing brucella abortus vaccines | |
| Farid et al. | Production of oxytetracycline by immobilized Streptomyces rimosus cells in calcium alginate gels | |
| RU2138291C1 (en) | Method of preparing vaccine against smallpox in sheep | |
| RU2160992C1 (en) | Dry biopreparation and method of its preparing | |
| RU2053294C1 (en) | Method of cultivation of bifidobacteria | |
| RU2129015C1 (en) | Method of preparing vaccine against pasteurellosis in agriculture animals and poultry | |
| RU2723580C1 (en) | Method for producing salmon fish vibriosis adsorbed vaccine | |
| RU2764118C1 (en) | Polyvalent vaccine against salmonellosis of productive animals | |
| RU2129440C1 (en) | Method of preparing vaccines against pasteurellosis in animals and poultry | |
| RU2774963C1 (en) | Method for cultivation of purple non-sulfur bacteria with a high content of bacteriochlorophyll a | |
| RU2774962C1 (en) | Purple non-sulfur bacterium cereibacter sphaeroides: a producer of bacteriochlorophyll a | |
| RU2405567C1 (en) | Method of obtaining vaccine against animal pasteurellosis | |
| RU2849181C1 (en) | Method for increasing the shelf life of gram-negative bacteria | |
| RU2849182C1 (en) | Nutritional medium for growing cultures of gram-negative bacteria with increased cell viability retention periods | |
| SU770174A1 (en) | Method of culturing methanotrophic bacteria | |
| RU2431664C1 (en) | Method for preparing fish aeromonosis vaccine | |
| RU2088258C1 (en) | Method of preparing vaccine for leptospirosis control in animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20041002 |