[go: up one dir, main page]

RU2129016C1 - Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных - Google Patents

Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных Download PDF

Info

Publication number
RU2129016C1
RU2129016C1 RU96119743/13A RU96119743A RU2129016C1 RU 2129016 C1 RU2129016 C1 RU 2129016C1 RU 96119743/13 A RU96119743/13 A RU 96119743/13A RU 96119743 A RU96119743 A RU 96119743A RU 2129016 C1 RU2129016 C1 RU 2129016C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
vaccine
salmonella
glucose
potassium phosphate
culture
Prior art date
Application number
RU96119743/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU96119743A (ru
Inventor
М.Я. Ярцев
А.А. Раевский
Л.В. Анисимова
И.В. Павленко
М.Л. Александрова
Original Assignee
Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности filed Critical Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Priority to RU96119743/13A priority Critical patent/RU2129016C1/ru
Publication of RU96119743A publication Critical patent/RU96119743A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2129016C1 publication Critical patent/RU2129016C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в промышленном производстве сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных. Для этого глубинное культивирование проводят в течение 6-8 ч при (37±1)oС со снижением окислительно-восстановительного потенциала среды после засева, поддержанием парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода и дозированной подачей глюкозы при лимитировании роста сальмонелл глюкозой. Полученную культуру концентрируют, разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, фасуют во флаконы и лиофильно высушивают. Использование данного режима культивирования сальмонелл и защитной среды позволяет удешевить вакцину и повысить накопление жизнеспособных бактерий, качество, стабильность и стандартность биологических свойств вакцины. 1 табл.

Description

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных.
Известен способ получения сухой живой вакцины против сальмонеллеза свиней (патент РФ N 1577116 A 61 K 39/112, С 12 N 1/20, 14.09.98).
Существующий способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных обладает рядом недостатков: процесс культивирования довольно продолжителен (12-14 ч), не позволяет использовать современное оборудование и приборы, защитная среда для лиофильного высушивания не обеспечивает стабильности вакцины при длительном хранении, что сказывается на качестве препарата, а также на эффективности производства.
При анализе патентной документации и научно-технической литературы нами не обнаружено достаточно эффективного способа изготовления живых сухих вакцин против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, приближающегося к современному уровню производства биопрепаратов.
Целью заявляемого изобретения является сокращение времени выращивания культуры, снижение себестоимости препарата, а также повышение качества, стабильности в процессе хранения и стандартности биологических свойств вакцины.
Поставленная цель достигается за счет того, что периодическое глубинное культивирование сальмонелл проводят в питательной среде в течение 6-8 ч в соответствии с разработанным алгоритмом управления процессом, концентрируют полученную культуру, бактериальную массу ресуспендируют в разработанной защитной среде и высушивают.
Способ осуществляется следующим образом.
В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Питательную среду в ферментере засевают культурой сальмонелл (Salmonella choleralsuis или Salmonella dublin), выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и выращивают при температуре (37±1)oC в течение 6-8 часов.
После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-110) - (-130) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и при минимальной скорости вращения мешалки, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости регулируют 10%-ным раствором NaOH, поддерживают на уровне 7,6 - 7,8 ед. pH, дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05 - 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при постоянных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Полученную культуру концентрируют, разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калий-фосфатном буферном растворе, фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Пример 1. Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)o в течение 6 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -110 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости на уровне 7,6 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 составляет 22.6 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 8,0
Желатин - 0,4
Тиомочевина - 0,4
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 15,0 млрд, после сушки - 7,3 млрд, через 12 мес. хранения - 2,9 млрд.
Пример 2. Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 7 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -120 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 20% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,7 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 40,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 10,0
Желатин - 0,5
Тиомочевина - 05
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,5
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,17
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 30,0 млрд, после сушки - 28,0 млрд, через 12 мес. хранения - 24,0 млрд.
Пример 3. Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -130 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,8 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 25,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 12,0
Желатин - 0,6
Тиомочевина - 0,6
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,6
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,2
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 20,0 млрд, после сушки - 14,0 млрд через 12 мес. хранения - 8,0 млрд.
Пример 4. Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 5 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до - 100 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 10% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,5 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а подачу глюкозы не осуществляют. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 1,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 6,0
Желатин - 0,3
Тиомочевина - 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,3
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,11
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 2,0 млрд, после сушки - 0,9 млрд, через 12 мес. хранения - 0,03 млрд.
Пример 5. Способ изготовления вакцины со значениями параметров выше максимальных.
Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.
Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при температуре (37±1)oC в течение 9 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -140 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 30% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,9 ед. pH с помощью 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,20% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 10,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 14,0
Желатин - 0,7
Тиомочевина - 0,7
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,7
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,23
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.
Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 5,0 млрд, после сушки - 1,8 млрд, через 12 мес. Хранения - 0,2 млрд.
Технологические параметры изготовления сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, указанные в примерах, приведены в табл.
Преимущества заявленного способа перед известным:
1. Применение интенсифицированного способа культивирования позволяет повысить накопление жизнеспособных бактерий при сокращении времени выращивания с 12- 14 до 6-8 часов.
2. Вакцина, полученная этим способом, более стабильна по биологическим свойствам, в том числе и по иммуногенности.

Claims (1)

  1. Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, включающий засев вакцинного штамма сальмонелл, культивирование в жидкой питательной среде на основе перевара Хоттингера с дробной подачей глюкозы с последующим концентрированием и лиофилизацией полученной бактериальной суспензии в защитной среде, содержащей сахарозу и желатин, отличающийся тем, что культивирование проводят в течение 6 - 8 ч, причем после засева окислительно-восстановительный потенциал снижают до (-110) - (-130) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15 - 25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,6 - 7,8 ед. pH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05 - 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, лиофильное высушивание ведут в защитной среде, дополнительно содержащей тиомочевину, калий фосфорнокислый однозамещенный и калий фосфорнокислый двузамещенный, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
    Сахароза - 8,0 - 12,0
    Желатин - 0,40 - 0,60
    Тиомочевина - 0,40 - 0,60
    Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,40 - 0,60
    Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14 - 0,20
    Вода дистиллированная - До 100,0
RU96119743/13A 1996-10-01 1996-10-01 Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных RU2129016C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU96119743/13A RU2129016C1 (ru) 1996-10-01 1996-10-01 Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU96119743/13A RU2129016C1 (ru) 1996-10-01 1996-10-01 Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU96119743A RU96119743A (ru) 1999-01-27
RU2129016C1 true RU2129016C1 (ru) 1999-04-20

Family

ID=20186234

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU96119743/13A RU2129016C1 (ru) 1996-10-01 1996-10-01 Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2129016C1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2220743C2 (ru) * 2002-01-23 2004-01-10 Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Способ изготовления ассоциированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят
RU2292914C1 (ru) * 2005-08-02 2007-02-10 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU172961A (ru) *
SU549470A1 (ru) * 1971-08-20 1977-03-05 Московский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток Им. И.И. Мечникова Способ получени живой брюшнотифозной вакцины
WO1989009063A1 (en) * 1988-03-21 1989-10-05 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junio Novel non-reverting shigella live vaccines
RU1577116C (ru) * 1988-09-14 1995-11-20 Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Вакцина против сальмонеллеза свиней, способ ее изготовления и способ профилактики сальмонеллеза свиней

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU172961A (ru) *
SU549470A1 (ru) * 1971-08-20 1977-03-05 Московский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток Им. И.И. Мечникова Способ получени живой брюшнотифозной вакцины
WO1989009063A1 (en) * 1988-03-21 1989-10-05 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junio Novel non-reverting shigella live vaccines
RU1577116C (ru) * 1988-09-14 1995-11-20 Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Вакцина против сальмонеллеза свиней, способ ее изготовления и способ профилактики сальмонеллеза свиней

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2220743C2 (ru) * 2002-01-23 2004-01-10 Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Способ изготовления ассоциированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят
RU2292914C1 (ru) * 2005-08-02 2007-02-10 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2012235794A (ja) 液体細菌接種材料の保存期間及び種子上での安定性の改良
Sizonenko et al. The New Efficiency of the «SRMP»–Listerias‎ Growth-Promoting Factor During Factory Cultivation
RU2129016C1 (ru) Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных
RU2522811C2 (ru) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ СИМБИОТИЧЕСКИХ БАКТЕРИЙ РОДА Xenorhabdus, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ НЕМАТОД ВИДА Steinernema feltiae protense, К ХРАНЕНИЮ
RU2124366C1 (ru) Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных и птиц
RU2053790C1 (ru) Способ изготовления вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных
RU2136141C1 (ru) Способ стимулирования роста посевного мицелия шампиньона
RU2246316C1 (ru) Вакцина ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая против инфекционной пневмонии и сальмонеллеза свиней и способ ее изготовления
US3449209A (en) Method of preparing brucella abortus vaccines
Farid et al. Production of oxytetracycline by immobilized Streptomyces rimosus cells in calcium alginate gels
RU2160992C1 (ru) Сухой биопрепарат и способ его получения
RU2053294C1 (ru) Способ культивирования бифидобактерий
RU2129015C1 (ru) Способ изготовления вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных и птиц
RU2723580C1 (ru) Способ получения адсорбированной вакцины против вибриоза лососевых рыб
RU2764118C1 (ru) Вакцина поливалентная против сальмонеллеза продуктивных животных
RU2129440C1 (ru) Способ изготовления вакцин против пастереллеза животных и птиц
RU2774963C1 (ru) Способ культивирования пурпурных несерных бактерий с высоким содержанием бактериохлорофилла а
RU2774962C1 (ru) Пурпурная несерная бактерия cereibacter sphaeroides - продуцент бактериохлорофилла а
RU2405567C1 (ru) Способ получения вакцины против пастереллеза животных
RU2849181C1 (ru) Способ повышения сроков сохранения жизнеспособности грамотрицательных бактерий
RU2849182C1 (ru) Питательная среда для выращивания культур грамотрицательных бактерий с повышенным сроком сохранения жизнеспособности клеток
SU770174A1 (ru) Способ культивировани метанотрофных бактерий
RU2431664C1 (ru) Способ получения вакцины против аэромоноза рыб
RU2088258C1 (ru) Способ изготовления вакцины против лептоспироза животных
SU1076443A1 (ru) Способ приготовлени посевного материала дл выращивани бактерий

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20041002