RU2166950C1 - Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition - Google Patents
Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition Download PDFInfo
- Publication number
- RU2166950C1 RU2166950C1 RU2000117001/14A RU2000117001A RU2166950C1 RU 2166950 C1 RU2166950 C1 RU 2166950C1 RU 2000117001/14 A RU2000117001/14 A RU 2000117001/14A RU 2000117001 A RU2000117001 A RU 2000117001A RU 2166950 C1 RU2166950 C1 RU 2166950C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- collagenase
- wound
- wounds
- composition
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 10
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- JQQZCIIDNVIQKO-UHFFFAOYSA-N benzyl-dimethyl-[3-(tetradecanoylamino)propyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 JQQZCIIDNVIQKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 241000187389 Streptomyces lavendulae Species 0.000 claims description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 102000011722 Matrix Metalloproteinase 13 Human genes 0.000 claims 1
- 108010076503 Matrix Metalloproteinase 13 Proteins 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 36
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000035876 healing Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940041022 streptomycins Drugs 0.000 abstract 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 74
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 73
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 27
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 27
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 9
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 241000193159 Hathewaya histolytica Species 0.000 description 5
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 5
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 5
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 208000001034 Frostbite Diseases 0.000 description 4
- 108010013295 Microbial collagenase Proteins 0.000 description 4
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 4
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 4
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 108010009772 methuracol Proteins 0.000 description 4
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 4
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 4
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 4
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 3
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 3
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000003366 colagenolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 3
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 3
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 3
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 3
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 201000000628 Gas Gangrene Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- -1 Kolotsil Substances 0.000 description 2
- 241000607632 Vibrio alginolyticus chemovar iophagus Species 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 108010012151 iruxol Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 description 2
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N nitrofural Chemical compound NC(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 208000012313 wound discharge Diseases 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 101710105199 Collagenolytic protease Proteins 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000257174 Hypoderma lineatum Species 0.000 description 1
- 241000238114 Leptuca pugilator Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000334216 Proteus sp. Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 108010077465 Tropocollagen Proteins 0.000 description 1
- 208000000558 Varicose Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000963 caseinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 231100000075 skin burn Toxicity 0.000 description 1
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к созданию новой фармацевтической композиции, содержащей протеолитические ферменты для очищения ран и других повреждений кожи, а именно микробную коллагеназу. The invention relates to medicine, in particular to the creation of a new pharmaceutical composition containing proteolytic enzymes for cleansing wounds and other skin lesions, namely microbial collagenase.
Известны фармацевтические композиции, способствующие заживлению ран и других повреждений, снижению числа осложнений патологического процесса и оптимизации регенерации кожи, содержащие антиоксиданты, иммуномодуляторы, пептидазы (Кузина М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. - М., 1981; Методические рекомендации Фармакологического Комитета по экспериментальному изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран, М., 1989 г.; RU 2005488, 15.01.94, RU 2106877, 20.03.98.; Возможности ферментативного очищения и лечения ран. // Симпозиум М. 1977 г.). Known pharmaceutical compositions that promote healing of wounds and other injuries, reduce the number of complications of the pathological process and optimize skin regeneration, containing antioxidants, immunomodulators, peptidases (Kuzina MI, Kostyuchenok BM Wounds and wound infection. - M., 1981; Methodological recommendations of the Pharmacological Committee for the experimental study of drugs for local treatment of purulent wounds, M., 1989; RU 2005488, 01/15/94, RU 2106877, 03/20/98; Enzymatic cleansing and treatment of wounds. // Symposium M. 1977 g.) .
Для лечения повреждений кожи (ран, ожогов, отморожений и т.д.) используют фармацевтические композиции, содержащие коллаген. Известны такие препараты, как "Метуракол", "Колоцил", коллагеновые губки. For the treatment of skin lesions (wounds, burns, frostbite, etc.), pharmaceutical compositions containing collagen are used. Known drugs such as Meturakol, Kolotsil, collagen sponges.
"Метуракол" одобрен Фармакологическим комитетом МЗ СССР (Рег. N 87/637/3) - комбинированный препарат, состоящий из коллагена, полученного из гольевого спилка крупного рогатого скота и метилурацила, представляет собой мелкопористые сухие пластины белого цвета со специфическим запахом. "Метуракол" применяют в качестве местного средства при комплексном лечении трофических язв, пролежней, глубоких и длительно не заживающих ран, поверхностных ожогов кожи. Препарат оказывает противовоспалительное действие, стимулирует репаративные процессы в ранах, ускоряя рост и созревание грануляционной ткани и эпителизацию. При наложении на рану "Метуракол" плотно прилегает к ее поверхности, впитывает раневое отделяемое, набухает и постепенно лизируется, освобождая входящий в его состав метилурацил. "Meturakol" is approved by the Pharmacological Committee of the Ministry of Health of the USSR (Reg. N 87/637/3) - a combined preparation consisting of collagen obtained from a bovine split split of cattle and methyluracil is a finely porous dry white plate with a specific odor. "Meturakol" is used as a local remedy for the complex treatment of trophic ulcers, pressure sores, deep and non-healing wounds, superficial skin burns. The drug has an anti-inflammatory effect, stimulates reparative processes in wounds, accelerating the growth and maturation of granulation tissue and epithelization. When applied to the wound, “Meturakol” fits snugly to its surface, absorbs the wound, swells and gradually lyses, releasing its methyluracil.
Губка "Колоцил", Приказ МЗ СССР N 1353 от 30.11.1984 года (Регистрационный N 8/353/9), является комбинированным препаратом, содержит коллаген, получаемый из гольевого спилка крупного рогатого скота, фурацилин, борную кислоту, новокаин, хонсурид, представляет собой трехслойные мелкопористые пластины желтого и белого цвета со слабым специфическим запахом. "Колоцил" применяют как местное средство для лечения термических ожогов II-III степени в начальной стадии их эпителизации и для временного закрытия гранулирующих ран при ожогах IIIб-IV степени. Препарат также назначают при лечении донорских участков кожи, трофических язв, пролежней, глубоких ран. "Колоцил" оказывает стимулирующее действие на репаративные процессы в ранах, ускоряя рост грануляционной ткани и эпителизацию, обладает противовоспалительным, гемостатическим и анестезирующим свойствами, а также препятствует плазмопотере через раневую поверхность. Sponge "Kolotsil", Order of the Ministry of Health of the USSR N 1353 dated 11/30/1984 (Registration N 8/353/9), is a combined preparation, contains collagen obtained from the bovine split hair split, furatsilin, boric acid, novocaine, honsurid, represents a three-layer finely porous plate of yellow and white with a slight specific smell. "Kolotsil" is used as a local remedy for the treatment of thermal burns of the II-III degree in the initial stage of their epithelization and for the temporary closure of granulating wounds for burns of IIIb-IV degree. The drug is also prescribed in the treatment of donor skin, trophic ulcers, pressure sores, deep wounds. "Kolotsil" has a stimulating effect on reparative processes in wounds, accelerating the growth of granulation tissue and epithelization, has anti-inflammatory, hemostatic and anesthetic properties, and also prevents plasma loss through the wound surface.
Губку гемостатическую коллагеновую (Регистрационный N 78/860/7) готовят из раствора коллагена, полученного из гольевого спилка крупного рогатого скота. В состав губки входят борная кислота и фурацилин. Она представляет собой сухую пористую массу желтого цвета со слабым запахом уксусной кислоты, хорошо впитывает жидкость, при этом слегка набухает. Губка оказывает гемостатические и антисептическое действие, стимулирует регенерацию тканей. A hemostatic collagen sponge (Registration N 78/860/7) is prepared from a collagen solution obtained from a bovine cleft split. The composition of the sponge includes boric acid and furatsilin. It is a dry porous mass of yellow color with a slight smell of acetic acid, absorbs liquid well, and slightly swells. The sponge has hemostatic and antiseptic effects, stimulates tissue regeneration.
Губка коллагеновая с сангвиритрином (Регистрационный N 96/399/3) содержит 0,005 г сангвиритрина и раствор коллагена 2% (50 г) и представляет собой пластины желтовато-оранжевого цвета, она оказывает антимикробное и противовоспалительное действие, стимулирует восстановительные процессы, заживляет раны, хорошо впитывает раневое отделяемое. Коллагеновую губку с сангвиритрином применяют для лечения инфицированных ран, в том числе нагноившихся послеоперационных гнойных ран в 1 и 2 фазах раневого процесса, открытых инфицированных переломах, ожоговых и длительно не заживающих ран и трофических язв. Collagen sponge with sanguine retrin (Registration N 96/399/3) contains 0.005 g of sanguine and a collagen solution of 2% (50 g) and is a yellowish-orange plate, it has an antimicrobial and anti-inflammatory effect, stimulates recovery processes, heals wounds, well absorbs wound discharge. A collagen sponge with sanguirytrin is used to treat infected wounds, including festering postoperative purulent wounds in
"Дигиспон" (Московский ВНИИМП и Институт хирургии им. А.В. Вишневского) - повязка гелевинколлагеновая антимикробная на основе раствора коллагена, содержит гелевин, диоксидин, глутаровый альдегид, представляет собой мягкие пористые пластины. "Дигиспон" предназначен для лечения и подготовки к аутодермопластике ожогов IIIa, IIIб и IV степени с осложненным течением, после удаления струпа, лечения плоских инфицированных, вялотекущих длительно незаживающих ран, трофических язв, пролежней. Покрытие сорбирует 40+3 г/г биологических жидкостей, паровоздухопроницаемо, пластично, обеспечивает пролонгированный дозированный выход диоксидина в рану, стимулирует репаративные процессы в условиях инфицированных ран, рост грануляционной ткани, ускоряет краевую и островковую эпителизацию, способствует снижению риска образования грубой рубцовой ткани. "Digispon" (Moscow VNIIMP and A.V. Vishnevsky Institute of Surgery) - a dressing gel antimicrobial collagen based on a collagen solution, contains gelatin, dioxidine, glutaraldehyde, is a soft porous plate. Digispon is intended for the treatment and preparation for autodermoplasty of IIIa, IIIb and IV degree burns with a complicated course, after removal of the scab, treatment of flat infected, sluggish, long-healing wounds, trophic ulcers, bedsores. The coating absorbs 40 + 3 g / g of biological fluids, vapor-permeable, plastic, provides a prolonged dosed output of dioxidine into the wound, stimulates reparative processes in conditions of infected wounds, growth of granulation tissue, accelerates marginal and islet epithelization, and helps reduce the risk of formation of coarse scar tissue.
Препараты, содержащие коллаген, обладая рядом преимуществ, имеют и некоторые недостатки, в частности каждый из названных препаратов может быть использован только на определенной стадии раневого процесса, иногда только для тяжелых ранений и других тяжелых повреждений кожи и близлежащих тканей, не обеспечивает очищение ран от некротизированных тканей. Collagen-containing preparations, having a number of advantages, have some drawbacks, in particular, each of these drugs can be used only at a certain stage of the wound healing process, sometimes only for severe wounds and other severe injuries of the skin and nearby tissues, and it does not cleanse wounds from necrotic tissues.
Наиболее известный препарат широкого применения "Солкосерил" (Инструкция по применению. Специальная информация "Солко", 1990 г.) для заживления ран, возникающих от порезов, ожогов и отморожений, не разрушает коллагеновые некротические ткани и требует сложного индивидуального терапевтического подхода при использовании. The most well-known general-use preparation Solcoseryl (Instructions for use. Special information Solko, 1990) for healing wounds arising from cuts, burns and frostbite does not destroy collagen necrotic tissues and requires a complex individual therapeutic approach when used.
Недостатком большинства применяемых в настоящее время препаратов, заживляющих кожные повреждения, является обусловленная их составом узкая направленность действия, неспособность к функционированию на разных стадиях патологического процесса, а также к воспроизведению травмированного нарастающего эпителия и стимулированию регенерации кожи и близлежащих тканей. Кроме того, с их помощью не удается достичь оптимального очищения раны, так как они не содержат коллагеназу и не способны к разложению коллагена в нативном состоянии. The disadvantage of the majority of currently used preparations that heal skin lesions is the narrow focus of the action, their inability to function at different stages of the pathological process, as well as the reproduction of injured growing epithelium and stimulation of regeneration of the skin and nearby tissues. In addition, with their help, it is not possible to achieve optimal wound cleansing, since they do not contain collagenase and are not capable of decomposing collagen in the native state.
Коллагеназа - фермент, обладающий протеолитической активностью с узко специфической направленностью к расщеплению коллагена с выделением свободной аминокислоты - оксипролина. По международной классификации ферментов коллагеназа имеет номер 3.4.24.3 (3-гидролаза, 3.4.-действует на пептидные связи, 3.4.24. - металлопротеиназа (содержит кальций). Collagenase is an enzyme with proteolytic activity with a narrowly specific focus on the breakdown of collagen with the release of a free amino acid - hydroxyproline. According to the international classification of collagenase enzymes, it has number 3.4.24.3 (3-hydrolase, 3.4.-acts on peptide bonds, 3.4.24. - metalloproteinase (contains calcium).
Известны два типа коллагеназ:
1. Коллагеназы, синтезируемые некоторыми микроорганизмами. Так. Clostridium histolyticum (возбудитель газовой гангрены) продуцирует коллагеназу, расщепляющую полипептидную цепь коллагена более чем в 200 участках. Эта коллагеназа, разрушающая соединительнотканные барьеры организма-хозяина, способствует проникновению (инвазии) высокопатогенного клостридия в организм. Сама бактерия не содержит коллагена и поэтому не подвергается действию коллагеназы. (Proteolytic enzymes/ Eds. Colowick S.P., Kaplan N.O./ Methods in enzymology. 1970. V. 14. Part В, P. 861-872; Машковский М.Д. // Лекарственные средства. М.: Медицина, 1988, ч. 11. с. 55
2. Коллагеназы, которые обнаруживаются у земноводных и млекопитающих в растущих или подвергающихся метаморфозу тканях. (Adv. Enzymol. Collagenases and elastases // Ed. Nord F.F. N.Y. Acad. Press. 1961. V. 23, P. 163-264; Nordwing A. collagenolytic enzymes. N.Y. Acad. Press. 1971. P. 155-206). Впервые коллагенолитическая активность была выявлена в хвостовом плавнике головастиков в период метаморфоза, когда в течение нескольких дней происходит резорбция больших количеств коллагена в ткани.Two types of collagenases are known:
1. Collagenases synthesized by certain microorganisms. So. Clostridium histolyticum (a causative agent of gas gangrene) produces collagenase, which breaks down the collagen polypeptide chain in more than 200 sites. This collagenase, which destroys the connective tissue barriers of the host organism, facilitates the penetration (invasion) of highly pathogenic clostridia into the body. The bacterium itself does not contain collagen and therefore is not exposed to collagenase. (Proteolytic enzymes / Eds. Colowick SP, Kaplan NO / Methods in enzymology. 1970. V. 14. Part B, P. 861-872; Mashkovsky M.D. // Medicines. M: Medicine, 1988, p. 11. p. 55
2. Collagenases that are found in amphibians and mammals in tissues growing or undergoing metamorphosis. (Adv. Enzymol. Collagenases and elastases // Ed. Nord FFNY Acad. Press. 1961. V. 23, P. 163-264; Nordwing A. collagenolytic enzymes. NY Acad. Press. 1971. P. 155-206). Collagenolytic activity was first detected in the caudal fin of the tadpoles during metamorphosis, when large amounts of collagen are resorbed in the tissue within a few days.
В качестве исходного материала для выделения коллагеназы использовали среду, в которой культивировали эксплантаты ткани кожи и хвостового плавника головастиков. После очистки был получен препарат фермента, содержащий в небольшом количестве (5%) примеси других протеиназ, обладающих казеинолитической активностью. Коллагеназа животных тканей имеет меньший молекулярный вес, чем бактериальная и отличается от последней по ряду других свойств. Было установлено, что фермент инактивируется цистеином и после прогревания при 50-60o в течение 10 минут имеет оптимум действия при pH 7,0-8,0.As a starting material for the isolation of collagenase, a medium was used in which explants of skin tissue and tadpole caudal fin were cultured. After purification, an enzyme preparation was obtained containing in a small amount (5%) impurities of other proteinases with caseinolytic activity. Collagenase of animal tissues has a lower molecular weight than bacterial and differs from the latter in a number of other properties. It was found that the enzyme is inactivated by cysteine and after heating at 50-60 o for 10 minutes has an optimum effect at pH 7.0-8.0.
Коллагеназа является уникальным ферментом, который способен избирательно гидролизовать нерастворимый белок - коллаген, входящий в состав соединительной ткани живого организма. Расщепляя крайне устойчивые к действию других протеаз коллагеновые волокна с образованием высокомолекулярных фрагментов, коллагеназа выполняет в организме человека и животных важнейшие функции, участвует в превращениях соединительной ткани при росте и морфогенезе, а также в устранении некоторых патологических процессах при артритах, опухолевых метастазах и т.д. Collagenase is a unique enzyme that can selectively hydrolyze an insoluble protein - collagen, which is part of the connective tissue of a living organism. By breaking down collagen fibers extremely resistant to the action of other proteases with the formation of high molecular weight fragments, collagenase performs the most important functions in the human and animal body, is involved in the transformation of connective tissue during growth and morphogenesis, as well as in the elimination of certain pathological processes in arthritis, tumor metastases, etc. .
Коллагеназы, действующие на коллагены разных типов, выделены из тканей позвоночных, крабов, личинок мух, экскретов насекомых, а также из микроскопических бактерий, грибов и актиномицетов. Collagenases acting on different types of collagen are isolated from tissues of vertebrates, crabs, larvae of flies, insect excreta, as well as from microscopic bacteria, fungi and actinomycetes.
Известная в настоящее время группа микробных коллагеназ, отличающаяся большим разнообразием свойств, может быть использована в фундаментальных научных исследованиях, а также в биотехнологии, когда необходим эффективный, специфический и быстрый гидролиз нативных и денатурированных коллагеновых волокон различных типов. Важная область применения - при терапии грыжи интервертебрального диска позвоночника, ожоговых ран, отморожений для ускорения отторжения струпов и некротических язв, для очищения гнойно-некротических налетов. Кроме того, они необходимы для получения и культивирования клеточных культур человеческих и животных тканей, являющихся источником активаторов плазминогенеза в тромболитической терапии. Выделенные с помощью микробных коллагеназ жизнеспособные клетки островков Лангерганца применяют в новой методике лечения диабета (В.И. Мазуров Биохимия коллагеновых белков. - М.: Медицина, 1974). The currently known group of microbial collagenases, characterized by a wide variety of properties, can be used in basic scientific research, as well as in biotechnology, when effective, specific and rapid hydrolysis of native and denatured collagen fibers of various types is required. An important area of application is in the treatment of a hernia of the intervertebral disc of the spine, burn wounds, frostbite to accelerate the rejection of scabs and necrotic ulcers, to cleanse purulent-necrotic plaques. In addition, they are necessary for the production and cultivation of cell cultures of human and animal tissues, which are a source of plasminogenesis activators in thrombolytic therapy. Viable cells of islets of Langerhans isolated using microbial collagenases are used in a new method for the treatment of diabetes (V.I. Mazurov Biochemistry of collagen proteins. - M .: Medicine, 1974).
Среди коллагеназ микробного происхождения наиболее изученными и хорошо известными являются коллагеназы, синтезируемые бактерией Clostridium histolyticum. Клостридиальные коллагеназы характеризуются высокой специфичностью действия на коллагеновые волокна и могут быть отнесены к "истинным" коллагеназам. Они широко используются в биотехнологии и для лабораторных целей. Однако для культивирования Cl. histolyticum и массовой продукции коллагеназы необходимы сложные меры предосторожности, так как эта бактерия является анаэробным патогеном, вызывающим газовую гангрену и продуцирующим токсины. Для оптимального биосинтеза коллагеназ культурой Cl. Histolyticum использовалась сложная питательная среда. Among collagenases of microbial origin, the most studied and well-known are collagenases synthesized by the bacterium Clostridium histolyticum. Clostridial collagenases are characterized by high specificity of action on collagen fibers and can be referred to as “true” collagenases. They are widely used in biotechnology and for laboratory purposes. However, for the cultivation of Cl. histolyticum and mass production of collagenase require complex precautions, as this bacterium is an anaerobic pathogen that causes gas gangrene and produces toxins. For optimal biosynthesis of collagenases by Cl. Histolyticum used a complex nutrient medium.
Высокоочищенные клостридиальные коллагеназы проявляют активность против нативного и денатурированного коллагена и не действуют на другие белки, в то время как неочищенные препараты, содержащие и другие протеазы. способны расщепить не только коллаген, но и другой внеклеточный материал, в связи с чем широко используются для изоляции клеток в различных типах животных тканей. Как и коллагеназы амфибий, очищенные клостридиальные коллагеназы могут гидролизовать коллаген для полного его растворения, действуя как на волокнистый нативный коллаген, так и на трехспиральные тропоколлагеновые частицы. Highly purified clostridial collagenases are active against native and denatured collagen and do not affect other proteins, while crude preparations containing other proteases. able to break down not only collagen, but also other extracellular material, and therefore are widely used to isolate cells in various types of animal tissues. Like amphibian collagenases, purified clostridial collagenases can hydrolyze collagen to completely dissolve it, acting on both fibrous native collagen and three-helical tropocollagen particles.
Очищенная коллагеназа из Achromobacter iophagus проявляла высокую специфичность действия, гидролизуя только коллаген и не действуя на другие субстраты. Активность ее была в 6 раз более высокой, чем активность клостридилпептидазы. Свойства коллагеназ из A. iophagus и Cl. histolyticum оказались сходными. На их активность не влиял парахлормеркурийбензоат. Установлено, что оба препарата являются металлоферментами, содержащими Zn в активном центре и сохраняющими активность в присутствии ионов Ca2+.Purified collagenase from Achromobacter iophagus exhibited a high specificity of action, hydrolyzing only collagen and not acting on other substrates. Its activity was 6 times higher than the activity of clostridyl peptidase. Properties of collagenases from A. iophagus and Cl. histolyticum were similar. Their activity was not affected by parachloremercurium benzoate. It was established that both drugs are metalloenzymes containing Zn in the active center and retaining activity in the presence of Ca 2+ ions .
У некоторых штаммов микроорганизмов обнаружена способность к биосинтезу внеклеточных низкомолекулярных коллагенолитических протеаз нового серинового типа, отличающихся от "истинных" коллагеназ в первую очередь строением активного центра. Такие же коллагеназы выделены из насекомых Hypoderma lineatum и краба Uca pugilator. In some strains of microorganisms, the ability to biosynthesize extracellular low molecular weight collagenolytic proteases of a new serine type, which differ from the “true” collagenases primarily in the structure of the active center, was found. The same collagenases were isolated from the insects Hypoderma lineatum and crab Uca pugilator.
В последние годы появились ранозаживляющие композиции, содержащие коллагеназу. In recent years, wound healing compositions containing collagenase have appeared.
В частности патент RU 2033805, 30.04.95 описывает способ получения пористого ранозаживляющего материала, содержащего раствор коллагеназы. Микробиальный полисахарид маннан растворяют в воде до концентрации 6-8 маc.%, а затем смешивают с равным объемом коллагеназы. Этот лекарственный препарат выполняет только одну функцию - очистку раневой поверхности от некротической ткани, не обладает антисептическими свойствами, не освобождает раны от гноя и экссудата. In particular, patent RU 2033805, 04/30/95 describes a method for producing a porous wound healing material containing a collagenase solution. The microbial polysaccharide mannan is dissolved in water to a concentration of 6-8 wt.%, And then mixed with an equal volume of collagenase. This drug performs only one function - cleaning the wound surface from necrotic tissue, does not have antiseptic properties, does not relieve wounds from pus and exudate.
Наиболее близким к предлагаемой композиции является препарат "Ируксол" (Германия, фирма Кнолл АГ Д-67008 Людвигскафен) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988 г.), который содержит коллагеназу в смеси с протеазами, выделенными из бактериальной культуры Clostridium histolyticum (справочник "Sigma", 2000, с. 274). Closest to the proposed composition is the drug "Iruksol" (Germany, the company Knoll AG D-67008 Ludwigskafen) (Mashkovsky MD Medicines. - M .: Medicine, 1988), which contains collagenase mixed with proteases isolated from the bacterial culture of Clostridium histolyticum (Sigma Handbook, 2000, p. 274).
1 г мази содержит клостридиопептидазы A 0,6 ЕД, хлорамфеникола 10 мг, сопутствующие энзимы в липофильной безводной мазевой основе. 1 g of ointment contains clostridiopeptidase A 0.6 U, 10 mg chloramphenicol, concomitant enzymes in a lipophilic anhydrous ointment base.
"Ируксол" является комбинированным препаратом с протеолитическим и противомикробным действием для наружного применения. Коллагеназа - протеолитический фермент, выделенный из Clostridium histolyticum, вызывает лизис некротических тканей, тем самым способствуя энзиматическому, безболезненному очищению раны. Кроме того, коллагеназа стимулирует процесс грануляции и не угнетает эпителизацию. Коллагеназа не оказывает действия на неповрежденный эпителий, грануляционную, жировую и мышечные ткани. Хлорамфеникол является антибиотиком широкого спектра действия, активен в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий. Очищающее действие мази "Ируксол" на рану у 97% больных начинается с 1 дня или не позже 14-го дня, при этом более чем у 50% больных эффект мази проявляется уже в течение первых 6-ти дней. "Iruksol" is a combined drug with proteolytic and antimicrobial effects for external use. Collagenase, a proteolytic enzyme isolated from Clostridium histolyticum, causes lysis of necrotic tissues, thereby contributing to the enzymatic, painless cleansing of the wound. In addition, collagenase stimulates the granulation process and does not inhibit epithelization. Collagenase has no effect on intact epithelium, granulation, adipose and muscle tissues. Chloramphenicol is a broad-spectrum antibiotic, active against gram-negative and gram-positive bacteria. The cleansing effect of the Iruxol ointment on the wound in 97% of patients begins from 1 day or no later than the 14th day, while in more than 50% of patients the effect of the ointment is already apparent within the first 6 days.
"Ируксол" применяется для энзиматического очищения ран, в том числе при варикозных язвах, пролежнях, при гангрене конечностей, в особенности у больных сахарным диабетом, а также при отморожениях, при длительно незаживающих послеоперационных ранах, после лучевой терапии, при подготовке к трансплантации кожи. Iruksol is used for enzymatic cleansing of wounds, including varicose ulcers, bedsores, gangrene of the extremities, especially in patients with diabetes mellitus, as well as frostbite, long-term non-healing postoperative wounds, after radiation therapy, and in preparation for skin transplantation.
Недостатком аналога - "Ируксола" является содержание в его составе антибиотика левомицетина, который может вызывать аллергическую реакцию и в настоящее время слабо действует на адаптировавшуюся к нему патогенную микрофлору. Кроме того, основой "Ируксола" является высушивающий ткани вазелин. Содержащаяся в "Ируксоле" коллагеназа получена из патогенного анаэробного штамма бактерии, а выделение ее осуществляется с помощью сложной дорогостоящей технологии (Susagawara R., Harper Е. Publication and characterization of three forms of collagenase from Clostridium histolyticum // Biochemistry. 1984. V. 23. P. 5175-5182). The disadvantage of the analogue "Iruksol" is the content in its composition of the antibiotic chloramphenicol, which can cause an allergic reaction and currently has little effect on the pathogenic microflora adapted to it. In addition, the basis of "Iruksol" is a fabric-drying vaseline. The collagenase contained in Iruksol was obtained from a pathogenic anaerobic strain of the bacterium, and its isolation is carried out using complex and expensive technology (Susagawara R., Harper E. Publication and characterization of three forms of collagenase from Clostridium histolyticum // Biochemistry. 1984. V. 23 P. 5175-5182).
Технической задачей данного изобретения является создание новой более эффективной и экономически выгодной ранозаживляющей композиции, которая характеризуется разносторонней направленностью действия, многофункциональностью, способностью удалять некротические ткани, гной и экссудат из ран, осуществлять быстрое их заживление, не пересушивать ткани, активно удалять струпы, улучшать качественный состав рубцовой ткани, оптимизировать процессы репарации, подавлять патогенную микрофлору, не вызывая аллергических реакций, и тем самым создать возможность использования одного препарата для многовекторного воздействия на раневой процесс в разных стадиях его течения. The technical task of this invention is the creation of a new more effective and cost-effective wound healing composition, which is characterized by versatile action, versatility, the ability to remove necrotic tissue, pus and exudate from wounds, to carry out their rapid healing, not to overdry the tissue, actively remove scabs, improve the quality of the composition scar tissue, optimize repair processes, suppress pathogenic microflora, without causing allergic reactions, and thereby create amb the use of one drug for the multi-faceted impact on wound process in the different stages of its course.
Указанная цель достигается тем, что новая фармацевтическая композиция содержит коллагеназу из Streptomyces lavendulae из расчета 3-10 Ед на 100 г продукта. This goal is achieved in that the new pharmaceutical composition contains collagenase from Streptomyces lavendulae at the rate of 3-10 Units per 100 g of product.
Композиция может содержать вспомогательные вещества, такие как антисептики, различные мазевые наполнители и фармацевтически приемлемые добавки. В частности нами изучена композиция, состоящая из следующих компонентов:
Коллагеназа из Streptomyces lavendulae - 3-10 ЕД
Мирамистин - 0,1-0,5 г
Проксанол - 22,0 - 30,0 г
Полиэтиленгликоль - Остальное до 100 г
В качестве активного начала композиции выбрана коллагеназа, которая действует избирательно только на коллагеновые волокна, осуществляет щадящее и бескровное оптимальное очищение ран от некротизированных тканей. Этот фермент выделен из непатогенного штамма Streptomyces lavendulae (патент RU N 2075219, 10.03.97). В патенте описана коллагеназа, выделенная из культуральной жидкости штамма Streptomyces lavendulae, обладающая коллагенолитической и общей протеолитической активностью, расщепляет бета-цепь нативного коллагена до 84-86 кДа+26-28кДа, имеет М.м. 110-120 кДа. Кроме того, в фармацевтическую композицию введен мирамистин (ФС 42-3498-98), являющийся антисептиком широкого спектра действия, не вызывающим аллергию. Далее композиция содержит проксанол (НТУ-6-14-164-87), обладающий способностью оттягивать экссудат и гной из ран.The composition may contain excipients, such as antiseptics, various ointment excipients and pharmaceutically acceptable additives. In particular, we studied a composition consisting of the following components:
Collagenase from Streptomyces lavendulae - 3-10 units
Miramistin - 0.1-0.5 g
Proxanol - 22.0 - 30.0 g
Polyethylene Glycol - Remaining up to 100 g
Collagenase was chosen as the active principle of the composition, which acts selectively only on collagen fibers, provides gentle and bloodless optimal cleansing of wounds from necrotic tissues. This enzyme is isolated from a non-pathogenic strain of Streptomyces lavendulae (patent RU N 2075219, 03/10/97). The patent describes collagenase isolated from the culture fluid of the strain Streptomyces lavendulae, which has collagenolytic and general proteolytic activity, cleaves the beta chain of native collagen to 84-86 kDa + 26-28kDa, has M.m. 110-120 kDa. In addition, miramistin (FS 42-3498-98) is introduced into the pharmaceutical composition, which is a broad-spectrum antiseptic that does not cause allergies. Further, the composition contains proxanol (NTU-6-14-164-87), which has the ability to delay exudate and pus from the wounds.
В качестве основы композиция включает фармацевтически приемлемый полиэтиленгликоль. As a basis, the composition includes pharmaceutically acceptable polyethylene glycol.
Было проведено разностороннее изучение ранозаживляющего действия заявленной композиции: исследование влияния композиции на скорость регенерации повреждения кожи в асептических условиях, влияние на такую скорость при инфицировании раны, влияние композиции на качество образования рубца. Для проведения перечисленных исследований были выбраны следующие адекватные поставленным целям экспериментальные модели. A comprehensive study of the wound healing effect of the claimed composition was carried out: a study of the effect of the composition on the rate of regeneration of skin damage under aseptic conditions, the effect on this rate during wound infection, the effect of the composition on the quality of scar formation. To conduct the above studies, the following experimental models were selected that were adequate for the set goals.
Модель плоскостной асептической раны кожи. Model of planar aseptic skin wounds.
Модель линейной раны кожи. Linear skin wound model.
Модель инфицированной (гнойной) раны. Model of an infected (purulent) wound.
Модель ожоговой раны. Model of a burn wound.
Для получения модели и оценки результатов использовали известные методы. (Турищев С.Н., Фармакология 4/5, 25-36, 1996)
Модель плоскостной асептической раны кожи была получена следующим образом.Known methods were used to obtain the model and evaluate the results. (Turishchev S.N.,
A model of planar aseptic skin wounds was obtained as follows.
Опыты проведены на белых неинбредных мышах самцах массой 20-30 г. У животных в стерильных условиях под наркозом (этаминал натрия 50 мг/г) в межлопаточной области спины после предварительного удаления волос вырезали полнослойный лоскут кожи таким образом, чтобы получалась овальная рана площадь которой составляла 80-100 мм. Для сравнительного изучения динамики и заживления ран проводили визуальное наблюдение и измерение площади ран в течение 2-3 недель ежедневно, оценивая состояние краев раны, ее отделяемое, формирование рубца. The experiments were carried out on male non-inbred white mice weighing 20-30 g. In animals under sterile conditions under anesthesia (sodium etaminal 50 mg / g) in the interscapular region of the back after preliminary hair removal, a full-layer skin flap was cut so that an oval wound with an area of 80-100 mm. For a comparative study of the dynamics and healing of wounds, visual observation and measurement of the area of wounds was carried out for 2-3 weeks daily, assessing the condition of the edges of the wound, its discharge, and the formation of a scar.
Лечение животных начинали сразу же после операции: на рану наносили испытуемое вещество в виде мази. Контрольные животные получали плацебо. В качестве препарата сравнения использовано известное ранозаживляющее средство - "Ируксол" (Машковский). Скорость заживления ран оценивали по уменьшению площади раневой поверхности. Площадь овала рассчитывали по математической формуле:
где d1 - больший диаметр овала;
d2 - меньший диаметр овала;
S - площадь раны.Treatment of animals began immediately after surgery: the test substance was applied to the wound in the form of an ointment. Control animals received a placebo. As a comparison drug used the well-known wound healing agent - "Iruksol" (Mashkovsky). The rate of wound healing was evaluated by reducing the area of the wound surface. The oval area was calculated by the mathematical formula:
where d 1 is the larger diameter of the oval;
d 2 is the smaller diameter of the oval;
S is the area of the wound.
Модель линейной раны кожи получена в эксперименте следующим образом. A model of a linear skin wound was obtained in the experiment as follows.
Опыты проведены на белых неинбредных крысах-самцах массой 300 г. У животных под наркозом (этаминал натрия 40 мг/кг) в межлопаточной области спины после предварительного удаления волос наносили 2 линейных разреза через все слои кожи длиной 1 см по одному справа и слева от позвоночника (примерно на расстоянии 2 см от него). На рану накладывали один узловой шов (стерильный шелк). Для сравнительного изучения динамики и заживления ран проводили визуальное наблюдение в течение 2-3 недель ежедневно, оценивая состояние краев раны, ее отделяемое, формирование рубца. Качество заживления оценивали при микроскопическом исследовании регенератов. Для этого ткани из области дефекта и прилежащую к нему кожу фиксировали в жидкости Карнуа, заливали в парафин и готовили срезы (толщиной 8-10 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. The experiments were carried out on white non-inbred male rats weighing 300 g. In animals under anesthesia (sodium ethaminol 40 mg / kg) in the interscapular region of the back after preliminary hair removal, 2 linear incisions were made through all
Лечение животных начинали сразу же после операции. На рану справа наносили испытуемую композицию в форме мази. Левая рана того же животного служила контролем - на нее наносили основу мази. Препарат сравнения - "Ируксол". Treatment of animals began immediately after surgery. A test composition in the form of an ointment was applied to the right wound. The left wound of the same animal served as a control - the ointment base was applied to it. The comparison drug is Iruxol.
Модель инфицированной (гнойной) раны была получена экспериментальным путем
В опытах использованы белые неинбредные крысы массой 300-320 г. Под общим наркозом на тыльной стороне шейной области крыс выстригали волосы и в асептических условиях удаляли участок кожи с подкожной клетчаткой и поверхностной фасцией. В рану вставляли тефлоновое кольцо (диаметр 8 мм), покрытое сверху перфорированной пленкой. Края и дно раны дополнительно травмировали зубчатым зажимом. В раневую поверхность внутрь кольца вводили 0,5 мл взвеси суточной культуры патогенного стафилококка, штамм 209 (1.5 млрд. микробных клеток в 1 мл физ. р-ра). Кольца снимали через 2 суток и проводили стандартную первичную хирургическую обработку раны, после чего начинали лечение испытуемым веществом. Контрольные животные получали плацебо (основу мази).A model of an infected (purulent) wound was obtained experimentally
White non-inbred rats weighing 300-320 g were used in the experiments. Under general anesthesia, the hair was cut off on the back of the cervical region of the rats and, under aseptic conditions, a skin site with subcutaneous tissue and superficial fascia was removed. A teflon ring (diameter 8 mm), coated on top with a perforated film, was inserted into the wound. The edges and bottom of the wound were additionally injured with a toothed forceps. 0.5 ml of a suspension of daily culture of pathogenic staphylococcus, strain 209 (1.5 billion microbial cells in 1 ml of physical solution) was injected into the wound surface inside the ring. The rings were removed after 2 days and the standard primary surgical treatment of the wound was performed, after which treatment with the test substance was started. Control animals received a placebo (ointment base).
В качестве методов оценки скорости и полноты заживления ран использованы следующие методы. The following methods were used as methods for assessing the speed and completeness of wound healing.
Цитологическое исследование раневого процесса
Мазок-отпечаток с поверхности раны позволяет судить о характере раневого отделяемого и клеточном составе грануляций. Такой мазок получают путем прикосновения специально обработанного предметного стекла к поверхности раны, предварительно очищенной от гноя. Препараты сушат на воздухе, фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе. В каждом мазке подсчитывают не менее 400 клеток: нейтрофильные лейкоциты, мононуклеары, макрофаги, фибробласты, а также их процентное содержание.Cytological examination of the wound process
A smear imprint from the surface of the wound allows us to judge the nature of the wound discharge and the cellular composition of the granulations. Such a smear is obtained by touching a specially treated glass slide to the surface of the wound, previously purified from pus. The preparations are dried in air, fixed with methyl alcohol and stained according to Romanovsky-Giemsa. At least 400 cells are counted in each smear: neutrophilic leukocytes, mononuclear cells, macrophages, fibroblasts, as well as their percentage.
Микробиологическое исследование инфицированной раны
Микробиологический контроль эффективности лечения ран проводится в динамике (каждые 3 дня) по сравнению с исходными показателями (до начала лечения). Изучается качественный состав микрофлоры раны и количественная динамика микробных тел в ране.Microbiological examination of an infected wound
Microbiological monitoring of the effectiveness of the treatment of wounds is carried out in dynamics (every 3 days) compared with baseline (before treatment). The qualitative composition of the microflora of the wound and the quantitative dynamics of microbial bodies in the wound are studied.
Гистологические исследования в динамике заживления ран дают представление о качественных изменениях в ране под воздействием препарата. Использована окраска гематоксилином и эозином
Морфометрическое исследование рубцовой ткани
Кусочки кожи, взятые на 13 сутки после операции для гистологического исследования, фиксировали в жидкости Карнуа, изготовляли ступенчатые парафиновые срезы, окрашивали гематоксилином и эозином и просматривали в световом микроскопе. Проводили морфометрическое исследование рубцовой ткани: в серийных препаратах с помощью сетки Автандилова Г.Г. методом точечного счета определяли объемную плотность соединительной ткани и клеточных элементов. Подсчитывали процентное содержание фибробластов на 500 клеток.Histological studies in the dynamics of wound healing give an idea of the qualitative changes in the wound under the influence of the drug. Used staining with hematoxylin and eosin
Morphometric examination of scar tissue
Pieces of skin taken on the 13th day after surgery for histological examination were fixed in Carnoy fluid, stepwise paraffin sections were made, stained with hematoxylin and eosin and examined under a light microscope. A morphometric study of scar tissue was carried out: in serial preparations using a grid of Avtandilova G.G. the method of point counting was used to determine the bulk density of connective tissue and cellular elements. The percentage of fibroblasts per 500 cells was counted.
Полученные результаты обрабатывали с помощью статистических методов: определяли среднее арифметическое значение, ошибку средней арифметической, достоверность различий между группами определяли с использованием критерия Стъюдента. The results were processed using statistical methods: the arithmetic mean value was determined, the arithmetic mean error, the significance of differences between the groups was determined using Student's criterion.
Для проведения сравнительных исследований использовали 3 группы животных. For comparative studies used 3 groups of animals.
Первая группа животных получала лечение мазью на основе заявленной композиции при содержании активного компонента 3 ед., вторая группа животных получала лечение мазью на основе заявленной композиции с содержанием активного компонента 7 ед. Третья группа животных получала лечение мазью "Ируксол". В качестве контроля во всех трех группах использовали плацебо. The first group of animals received ointment treatment based on the claimed composition with an active ingredient content of 3 units, the second group of animals received ointment treatment based on the claimed composition with an active component content of 7 units. The third group of animals received treatment with ointment "Iruksol". Placebo was used as a control in all three groups.
Результаты исследования приведены в таблицах 1 и 2. The results of the study are shown in tables 1 and 2.
В таблице 1 приведены показатели динамики заживления ран кожи спины у мышей (площадь плоскостных ран (эллипса) в мм2 под влиянием заявленной композиции.Table 1 shows the dynamics of healing of wounds of the skin of the back in mice (area of planar wounds (ellipse) in mm 2 under the influence of the claimed composition.
В таблице 2 приведены морфометрические показатели, характеризующие заживление линейных ран кожи у крыс в контроле и при воздействии заявленной композиции. Table 2 shows the morphometric indicators characterizing the healing of linear skin wounds in rats in the control and when exposed to the claimed composition.
Результаты исследований, проведенных на моделях линейных и плоскостных ран, показали, что заявленная композиция обладает ранозаживляющими свойствами и, кроме того, положительно влияет на качественный состав рубцовой ткани, образующейся при заживлении асептических ран, о чем свидетельствует соотношение фибробластов и фиброцитов в соединительной ткани рубца ран, леченных мазью. The results of studies conducted on models of linear and planar wounds showed that the claimed composition has wound healing properties and, in addition, has a positive effect on the qualitative composition of the scar tissue formed during the healing of aseptic wounds, as evidenced by the ratio of fibroblasts and fibrocytes in the connective tissue of the wound scar treated with ointment.
Изобретение поясняется следующими примерами рецептур. The invention is illustrated by the following examples of formulations.
Пример 1. Коллагеназа из Streptomyces lavendulae - 3 ЕД
Мирамистин - 0,1 г
Проксанол - 22,0 г
Полиэтиленгликоль - остальное до 100 г
Пример 2.Example 1. Collagenase from Streptomyces lavendulae - 3 PIECES
Miramistin - 0.1 g
Proxanol - 22.0 g
Polyethylene glycol - the rest is up to 100 g
Example 2
Колагеназа из Streptomyces lavendulae - 10 ЕД
Мирамистин - 0,5 г
Проксанол - 30,0 г
Полиэтиленгликоль - остальное до 100 г
Для токсикологического исследования использован активный ингредиент композиции, т.е. содержащий ферментативные компоненты, этот ингредиент имеет коричневый цвет, специфический запах, pH = 5,0-7,0.Collagenase from Streptomyces lavendulae - 10 PIECES
Miramistin - 0.5 g
Proxanol - 30.0 g
Polyethylene glycol - the rest is up to 100 g
For toxicological studies, the active ingredient of the composition, i.e. containing enzymatic components, this ingredient has a brown color, a specific odor, pH = 5.0-7.0.
Изучение острой токсичности субстанции проводилось на белых мышах (самцы и самки с массой тела 19-21 г). The study of acute toxicity of the substance was carried out on white mice (males and females with a body weight of 19-21 g).
Эксперименты выполнены в соответствии с "Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия (фармакологических средств" (1997). The experiments were carried out in accordance with the "Methodological recommendations for the study of general toxic effects (pharmacological agents" (1997).
Субстанцию активного ингредиента вводили животным (мышам) внутривенно, однократно, в объеме 0,2-0,5 мл, со скоростью 0,1 мл/с. The substance of the active ingredient was administered to animals (mice) intravenously, once, in a volume of 0.2-0.5 ml, at a rate of 0.1 ml / s.
Длительность наблюдения за мышами составляла 10-15 дней. В ходе эксперимента следили за поведением, внешним видом, двигательной активностью, реакцией животных на внешние раздражители. В случаях летального исхода фиксировались клиническая картина и проводилось вскрытие погибших мышей. The duration of observation of mice was 10-15 days. During the experiment, we monitored the behavior, appearance, motor activity, and the reaction of animals to external stimuli. In cases of death, the clinical picture was recorded and an autopsy was performed on dead mice.
При внутривенном введении препарата мышам в дозах до 3500-4000 ЕД/кг признаков интоксикации не наблюдалось. Животные оставались подвижными, нормально реагировали на окружающую среду. При дальнейшем увеличении дозы введенного вещества отмечалась гибель отдельных животных. Были установлены среднесмертельные дозы (LD50) для мышей при однократном внутривенном введении субстанции: LD50=12400±2500 ЕД/кг.With the intravenous administration of the drug to mice in doses up to 3500-4000 U / kg, no signs of intoxication were observed. Animals remained motile, reacted normally to the environment. With a further increase in the dose of the administered substance, the death of individual animals was noted. Medium lethal doses (LD 50 ) were established for mice with a single intravenous administration of a substance: LD 50 = 12400 ± 2500 U / kg.
Максимально переносимая доза вещества при внутривенном введении мышам составляла ≈4500 ЕД/кг. В этих случаях при наблюдении за животными в течение 2 недель гибели не отмечено. The maximum tolerated dose of the substance upon intravenous administration to mice was ≈4500 U / kg. In these cases, when observing animals for 2 weeks, death was not observed.
Были также проведены исследования на микробиологическую чистоту и пирогенность заявленной композиции. Studies have also been conducted on the microbiological purity and pyrogenicity of the claimed composition.
Были проведены исследования на наличие пирогенных примесей в препарате. Испытание проводили на кроликах породы Шиншилла, содержащихся на стандартном рационе вивария. Studies have been conducted for the presence of pyrogenic impurities in the drug. The test was carried out on chinchilla rabbits, kept on a standard diet of vivarium.
Так как данный препарат применяется только наружно в качестве мази, установить четкую терапевтическую дозу сложно. Поэтому для подбора тест-дозы для испытания на пирогенность мы использовали дозу на коллагеназный препарат - 5 ЕД/кг. Since this drug is used only externally as an ointment, it is difficult to establish a clear therapeutic dose. Therefore, to select a test dose for the pyrogenicity test, we used a dose for a collagenase preparation - 5 U / kg.
Установлено, что этот препарат в тест-дозе 5 ЕД на кг массы животного - пирогенен. It was found that this drug in a test dose of 5 PIECES per kg of animal weight is pyrogenic.
Отмечена тенденция снижения пирогенной реакции с уменьшением вводимого объема. A tendency toward a decrease in the pyrogenic reaction with a decrease in the input volume was noted.
Установление четкой терапевтической дозы позволит более надежно подобрать тест-дозу на пирогенность. Проведение дополнительных испытаний с новыми образцами препарата, в минимальном объеме разбавителя, в обоснованной тест-дозе, возможно, позволит получить результаты, свидетельствующие об отсутствии пирогенности. The establishment of a clear therapeutic dose will make it possible to more reliably select a test dose for pyrogenicity. Conducting additional tests with new samples of the drug, in a minimum volume of diluent, in a reasonable test dose, may allow you to get results indicating the absence of pyrogenicity.
Сравнительное изучение антимикробной активности нашей композиции и мази "Ируксол" проводилось методом "колодцев" (Методические рекомендации по экспериментальному - доклиническому изучению лекарственных препаратов для местного лечения ран. - М., 1989), для чего использовались среды N 3 и N 6 (рецептуры названных сред приведены в указанных рекомендациях). В качестве тест-культур были использованы клинические свежевыделенные штаммы микроорганизмов (S. aureus, S. epidermidis, Е. Coli., Proteus sp., P. aeruginosa), от больных с гнойными ранами мягких тканей. A comparative study of the antimicrobial activity of our composition and Iruksol ointment was carried out using the "wells" method (Methodological recommendations for experimental - preclinical study of drugs for local treatment of wounds. - M., 1989), for which
Выделение и идентификация чистой культуры проводилось методом, изложенным в методических рекомендациях "Бактериологическая диагностика раневой инфекции" (М., 1984). Микроорганизмы выращивали на плотной питательной среде - на мясо-пептонном агаре. Isolation and identification of pure culture was carried out by the method described in the methodological recommendations "Bacteriological diagnosis of wound infection" (M., 1984). Microorganisms were grown on solid nutrient medium - on meat-peptone agar.
Микробная взвесь тест-культур готовили в соответствии со стандартом мутности Государственного института санитарного контроля (ГИСК) им. Л.А. Тарасевича. Концентрация опытной взвеси составляла 108 микробных клеток в 1 мл.Microbial suspension of test cultures was prepared in accordance with the turbidity standard of the State Institute of Sanitary Control (GISK) them. L.A. Tarasevich. The concentration of the experimental suspension was 10 8 microbial cells in 1 ml
Опытные и контрольные микроорганизмы культивировали в термостате при температуре - 37oC в течение 24 - 48 часов. По зоне задержки роста микроорганизмов учитывали результаты.The experimental and control microorganisms were cultured in a thermostat at a temperature of -37 o C for 24 to 48 hours. For the zone of growth inhibition of microorganisms, the results were taken into account.
Изучена антимикробная активность:
- основы композиции (комбинация проксанола и полиэтиленгликоля);
- мазевой композиции без мирамистина (коллагеназа + проксанол + полиэтиленгликоль);
- заявленной композиции, в составе которой вышеуказанная основа, мирамистин и коллгеназа.The antimicrobial activity was studied:
- the basics of the composition (a combination of proxanol and polyethylene glycol);
- ointment composition without miramistin (collagenase + proxanol + polyethylene glycol);
- the claimed composition, in which the above basis, miramistin and collgenase.
Контрольным препаратом был "Ируксол" - комбинированный препарат, в составе которого - жировая основа, коллагеназа и хлорамфеникол. The control drug was Iruksol, a combination drug containing fat base, collagenase and chloramphenicol.
Результаты изучения антимикробной активности представлены в таблице 4. The results of the study of antimicrobial activity are presented in table 4.
Результаты свидетельствуют, что разработанная композиция мази является активным препаратом и в отношении грамположительной и грамотрицательной флоры. Учитывая, что в группу Staphylococcus входили коагулазонегативные и метициллинрезистентные штаммы (25%), результаты можно считать положительными. The results indicate that the developed ointment composition is an active drug in relation to gram-positive and gram-negative flora. Given that the Staphylococcus group included coagulase-negative and methicillin-resistant strains (25%), the results can be considered positive.
Положительные результаты получены и в отношении P. aeruginosa, зона задержки роста 15,8 мм указывает на чувствительность синегнойной палочки к испытываемой мази, хотя известно, что P. aeruginosa часто оказывается полирезистентной к антибактериальным средствам. Positive results were also obtained for P. aeruginosa, a growth inhibition zone of 15.8 mm indicates the susceptibility of Pseudomonas aeruginosa to the test ointment, although P. aeruginosa is often known to be multiresistant to antibacterial agents.
Меньшую активность заявленная композиция оказывает в отношении бактерий семейства Enterobacteriaceae - E. coli, Proteus, их чувствительность можно сравнивать как среднюю, но здесь необходимо учитывать, что компоненты, составляющие мазевую основу, относят к полупроницаемым. The claimed composition has less activity against bacteria of the Enterobacteriaceae family - E. coli, Proteus, their sensitivity can be compared as average, but it must be borne in mind that the components that make up the ointment base are classified as semipermeable.
В соответствии с современными представлениями сочетание полупроникающих и непроникающих компонентов внутрь клеток предохраняет здоровые ткани раны от осмотического шока и делает их применение безвредным. In accordance with modern concepts, the combination of semi-penetrating and non-penetrating components inside the cells protects healthy wound tissues from osmotic shock and makes their use harmless.
Как видно из представленной таблицы, все изучаемые штаммы микроорганизмов были резистентны к мази "Ируксол". As can be seen from the table, all studied strains of microorganisms were resistant to ointment "Iruksol".
Проведенные исследования мази на стерильность показали отсутствие микроорганизмов в заявленной композиции. Conducted studies of ointments for sterility showed the absence of microorganisms in the claimed composition.
Таким образом, проведенные исследования по изучению новой композиции на основе коллагеназы, выделенной из Streptomyces lavendulae, показали, что предлагаемый новый препарат является высокоэффективным, нетоксичным, неаллергенным средством для заживления раневых, ожоговых и других повреждений кожи. Thus, studies on a new composition based on collagenase isolated from Streptomyces lavendulae showed that the proposed new drug is a highly effective, non-toxic, non-allergenic agent for healing wound, burn and other skin lesions.
Claims (2)
Коллагеназа - 3 - 10 ЕД
Мирамистин - 0,1 - 0,5 г
Проксанол - 22,0 - 30,0 г
ПЭГ - Остальное до 100 г2. The pharmaceutical composition according to claim 1, characterized in that it contains miramistin as an antiseptic, additionally contains proxanol, and a pharmaceutically acceptable polyethylene glycol (PEG) as an ointment excipient in the following ratio of components:
Collagenase - 3 - 10 units
Miramistin - 0.1 - 0.5 g
Proxanol - 22.0 - 30.0 g
PEG - The rest is up to 100 g
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000117001/14A RU2166950C1 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000117001/14A RU2166950C1 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2166950C1 true RU2166950C1 (en) | 2001-05-20 |
Family
ID=20237007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000117001/14A RU2166950C1 (en) | 2000-06-30 | 2000-06-30 | Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2166950C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2235324C1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-08-27 | Государственное учреждение Тверская государственная медицинская академия | Method for assay of caseinolytic activity of microorganisms in express-diagnosis of intestine dysbacteriosis |
| WO2006075932A3 (en) * | 2005-01-13 | 2006-12-14 | Otkrytoe Akzionernoe Obschestv | Remedy to accelerate healing of wound and burn |
| RU2340371C1 (en) * | 2007-06-19 | 2008-12-10 | Открытое акционерное общество "Московский комитет по науке и технологиям" ОАО "МКНТ" | Substance for dermatological medical products on basis of collagenase of microbic parentage ultralysine |
| RU2349348C1 (en) * | 2007-07-04 | 2009-03-20 | Андрей Геннадиевич Петропавловский | Wound dressing |
| EP1539225A4 (en) * | 2002-04-23 | 2010-12-08 | Mediwound Ltd | Apparatus and methods for enzymatic escharotomy in burn induced compartment syndrome |
| WO2012028340A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-03-08 | Closed Stock Company "Institute Of Applied Nanotechnology" | Preventive ointment for diabetic foot |
| RU2728468C1 (en) * | 2020-01-22 | 2020-07-29 | Общество с ограниченной ответственностью "ХАЙПРО" | Method for production of a protein food additive from meat and bone raw material |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2033805C1 (en) * | 1991-02-12 | 1995-04-30 | Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | Method of preparing of porous wound-healing material |
| RU2075219C1 (en) * | 1995-03-23 | 1997-03-10 | Нина Сергеевна Демина | COLLAGENASE |
-
2000
- 2000-06-30 RU RU2000117001/14A patent/RU2166950C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2033805C1 (en) * | 1991-02-12 | 1995-04-30 | Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | Method of preparing of porous wound-healing material |
| RU2075219C1 (en) * | 1995-03-23 | 1997-03-10 | Нина Сергеевна Демина | COLLAGENASE |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Соловьева Н.И. Коллагеназы различного происхождения и их роль в деструкции коллагена в норме и патологии. автореферат докторской диссертации. - М., 1991, Мадай Д.Ю. Лечение гнойной инфекции мягких тканей иммобилизованной коллагеназой в условиях регулируемой активности раневых протеолитических энзимов. С.-Пб., 1993. * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1539225A4 (en) * | 2002-04-23 | 2010-12-08 | Mediwound Ltd | Apparatus and methods for enzymatic escharotomy in burn induced compartment syndrome |
| RU2235324C1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-08-27 | Государственное учреждение Тверская государственная медицинская академия | Method for assay of caseinolytic activity of microorganisms in express-diagnosis of intestine dysbacteriosis |
| WO2006075932A3 (en) * | 2005-01-13 | 2006-12-14 | Otkrytoe Akzionernoe Obschestv | Remedy to accelerate healing of wound and burn |
| RU2340371C1 (en) * | 2007-06-19 | 2008-12-10 | Открытое акционерное общество "Московский комитет по науке и технологиям" ОАО "МКНТ" | Substance for dermatological medical products on basis of collagenase of microbic parentage ultralysine |
| WO2009002209A1 (en) * | 2007-06-19 | 2008-12-31 | Otkrytoe Akzionernoe Obschestvo 'moscow Committee Of Science And Technologies' | Substance for dermatological medicinal agents based on microbiotic collagenase 'ultra-lisin' |
| RU2349348C1 (en) * | 2007-07-04 | 2009-03-20 | Андрей Геннадиевич Петропавловский | Wound dressing |
| WO2012028340A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-03-08 | Closed Stock Company "Institute Of Applied Nanotechnology" | Preventive ointment for diabetic foot |
| RU2728468C1 (en) * | 2020-01-22 | 2020-07-29 | Общество с ограниченной ответственностью "ХАЙПРО" | Method for production of a protein food additive from meat and bone raw material |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Molan | Why honey is effective as a medicine: 2. The scientific explanation of its effects | |
| Klasen | A review on the nonoperative removal of necrotic tissue from burn wounds | |
| Sherman | Maggot therapy for foot and leg wounds | |
| US8540983B2 (en) | Debriding composition from bromelain and methods of production thereof | |
| Wollina et al. | Biosurgery in wound healing–the renaissance of maggot therapy | |
| DE69019141T2 (en) | COMPOSITION AND METHOD FOR TREATING GOOD PROSTATE HYPERTROPHY. | |
| SU1723116A1 (en) | Strain of bacteria bacillus subtilis, used for producing of preparation for prophylaxis and treatment of inflammatory process and allergic diseases | |
| RU2166950C1 (en) | Bacterial collagenase-base pharmaceutical composition | |
| Ries et al. | Matrix metalloproteinase-9 expression and release from skin fibroblasts interacting with keratinocytes: Upregulation in response to sulphur mustard | |
| Stewart | The role of Lucilia sericata Meig. larvae in osteomyelitis wounds | |
| Valachova et al. | Lucilia sericata medicinal maggots: a new source of antimicrobial compounds | |
| JP3980088B2 (en) | Use of a formulation consisting of a plasminogen activator to improve wound healing | |
| RU2191574C2 (en) | Medicinal agent showing regenerating and wound-healing action | |
| RU2176513C1 (en) | Wound-healing plate | |
| Brkich et al. | Miramistin as an antimicrobial component in the innovative substance of Chitosan-Miramistin Complex (CMC) for the treatment of infected wounds of various genesis | |
| Levenson et al. | Chemical debridement of burns | |
| Rutter et al. | Varidase: the science behind the medicament | |
| BORKOWF | Bacterial gangrene associated with pelvic surgery | |
| RU2401116C2 (en) | Wound healing probiotic | |
| RU2414228C1 (en) | Method of patient-specific immunotherapy | |
| EP4265245A1 (en) | New composition for use in the treatment of wounds | |
| RU2484811C2 (en) | Enzymatic wound healing medication | |
| RU2323748C2 (en) | Medical bandage containing exzyme complex from hepatopancreas of crab, and method of its preparation | |
| Nikitenko | Can translocated bacteria reduce wound infection? | |
| NAIM | DEVELOPMENT OF CHICKEN EGG WHITE AND MUPIROCIN LOADED HYDROGEL DRESSING MATERIAL FOR INHIBITION OF BACTERIAL GROWTH |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20070219 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110701 |