RU2008125815A - Теломеразная обратная транскриптаза птиц - Google Patents

Abstract

1. Изолированный или рекомбинантный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID №:1. ! 2. Изолированная или рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по п.1. ! 3. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты по п.2, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеиново-кислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности нуклеотидной последовательности с SEQ ID №:2. ! 4. Вектор, несущий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из п.2 или 3. ! 5. Вектор по п.4, где указанный вектор содержит две последовательности, гомологичные последовательности ДНК-мишени. ! 6. Вектор по п.5, где указанная молекула нуклеиновой кислоты окружена указанными гомологичными последовательностями. ! 7. Вектор по п.5, где указанный вектор дополнительно содержит первый селективный маркер, где указанный первый селективный маркер представляет собой маркер положительной селекции, и где указанный первый селективный маркер окружен указанными гомологичными последовательностями. ! 8. Вектор по п.7, где указанный первый селективный маркер окружен последовательностями, дающими возможность его супрессии. ! 9. Вектор по п.5, где указанный вектор содержит второй селективный маркер, который не окружен указанными гомологичными последовательностями, и где указанный селективный маркер представляет собой маркер отрицательной селекции. ! 10. Вектор по любому из пп.7-9, где указанный вектор содержит третий селективный маркер, где указанный третий селективный маркер представляет собой маркер отрицательной сел�

Claims (27)

1. Изолированный или рекомбинантный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности аминокислотной последовательности с SEQ ID №:1.

2. Изолированная или рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по п.1.

3. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты по п.2, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеиново-кислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 90% идентичности нуклеотидной последовательности с SEQ ID №:2.

4. Вектор, несущий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из п.2 или 3.

5. Вектор по п.4, где указанный вектор содержит две последовательности, гомологичные последовательности ДНК-мишени.

6. Вектор по п.5, где указанная молекула нуклеиновой кислоты окружена указанными гомологичными последовательностями.

7. Вектор по п.5, где указанный вектор дополнительно содержит первый селективный маркер, где указанный первый селективный маркер представляет собой маркер положительной селекции, и где указанный первый селективный маркер окружен указанными гомологичными последовательностями.

8. Вектор по п.7, где указанный первый селективный маркер окружен последовательностями, дающими возможность его супрессии.

9. Вектор по п.5, где указанный вектор содержит второй селективный маркер, который не окружен указанными гомологичными последовательностями, и где указанный селективный маркер представляет собой маркер отрицательной селекции.

10. Вектор по любому из пп.7-9, где указанный вектор содержит третий селективный маркер, где указанный третий селективный маркер представляет собой маркер отрицательной селекции и где указанный третий селективный маркер расположен между последовательностями, дающими возможность супрессии первого селективного маркера.

11. Клетка, трансфицированная молекулой нуклеиновой кислоты по любому из п.2 или 3.

12. Клетка по п.11, где указанная молекула нуклеиновой кислоты встроена в ген HPRT указанной первичной клетки.

13. Клетка по п.11, где указанная клетка имеет происхождение от животного, принадлежащего к семейству Anatidae, предпочтительно видам Cairina moschata или Anas platyrhynchos.

14. Клеточная линия по п.11, где она дополнительно содержит нуклеиново-кислотную последовательность, кодирующую интересующее вещество.

15. Клетка по любому из пп.11-14, где она дополнительно содержит кассету комплементации, позволяющую размножаться дефектному вирусу.

16. Применение полипептида по п.1, молекулы нуклеиновой кислоты по любому из п.2 или 3 или вектора по любому из пп.4-10 для иммортализации клетки.

17. Применение клетки по любому из пп.11-14 для репликации вируса, предпочтительно выбранного из группы, состоящей из вируса коровьей оспы, вируса оспы мышей, вируса оспы обезьян, вируса вакцинии, вируса натуральной оспы и MVA.

18. Применение клетки по п.14 для продуцирования интересующего вещества.

19. Применение клетки по любому из пп.11-15 для продуцирования вируса, предпочтительно поксвируса или вируса вакцинии, в частности вируса MVA.

20. Применение клетки по любому из пп.11-14 для продуцирования рекомбинантного вируса.

21. Способ иммортализации клетки, включающий стадию трансфекции указанной клетки вектором по любому из пп.4-10.

22. Способ по п.21, характеризующийся тем, что он дополнительно включает стадию, где указанные клетки культивируют в среде, которая позволяет расти только клеткам, которые включили первый селективный маркер.

23. Способ по п.21, характеризующийся тем, что он дополнительно включает стадию, где указанные клетки культивируют в среде, которая не позволяет расти клеткам, которые включили второй селективный маркер.

24. Способ по п.21, характеризующийся тем, что он дополнительно включает стадию, состоящую в исключении первого селективного маркера из генома указанной клетки.

25. Способ по п.24, где клетки, полученные после указанной стадии, состоящей в исключении первого селективного маркера из генома указанных клеток, культивируют в среде, которая не позволяет расти клеткам, которые включили третий селективный маркер.

26. Способ по любому из пп.21-25, где указанная клетка взята от организма, принадлежащего к семейству Anatidae, предпочтительно вида Cairina moschata или Anas platyrhynchos.

27. Способ по любому из пп.21-25, где указанная молекула нуклеиновой кислоты встроена в последовательность ДНК-мишени указанной клетки, предпочтительно в ген HPRT.