RU2007114956A - Вирусоподобные частицы, включающие гибридный белок белка оболочки бактериофага ар205 и антигенного полипептида - Google Patents
Вирусоподобные частицы, включающие гибридный белок белка оболочки бактериофага ар205 и антигенного полипептида Download PDFInfo
- Publication number
- RU2007114956A RU2007114956A RU2007114956/13A RU2007114956A RU2007114956A RU 2007114956 A RU2007114956 A RU 2007114956A RU 2007114956/13 A RU2007114956/13 A RU 2007114956/13A RU 2007114956 A RU2007114956 A RU 2007114956A RU 2007114956 A RU2007114956 A RU 2007114956A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polypeptide
- seq
- modified hpv
- modified
- antigen
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract 58
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract 52
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract 8
- 241001672158 Acinetobacter phage AP205 Species 0.000 title claims abstract 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract 6
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims abstract 3
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 claims abstract 3
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 claims abstract 3
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims abstract 3
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 claims abstract 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims abstract 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 4
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 claims 3
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 claims 3
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 claims 3
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 claims 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims 3
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 claims 3
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 claims 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims 3
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 claims 2
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 claims 2
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 claims 2
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 claims 2
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 claims 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 claims 2
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 claims 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 claims 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims 2
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims 2
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 claims 2
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 claims 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims 2
- 229940124676 vascular endothelial growth factor receptor Drugs 0.000 claims 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 claims 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 claims 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 claims 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 claims 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 claims 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 claims 1
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 claims 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 claims 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 claims 1
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 claims 1
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 claims 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 claims 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims 1
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 claims 1
- 108010061629 Dermatophagoides pteronyssinus antigen p 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 claims 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 claims 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 claims 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims 1
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 claims 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 claims 1
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 claims 1
- 101001005719 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 3 Proteins 0.000 claims 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100026011 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims 1
- 102000011718 Interleukin-23 Subunit p19 Human genes 0.000 claims 1
- 108010076561 Interleukin-23 Subunit p19 Proteins 0.000 claims 1
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 102000003959 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 claims 1
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 claims 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100025082 Melanoma-associated antigen 3 Human genes 0.000 claims 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 claims 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 claims 1
- 101000899004 Phasmahyla jandaia Des-Arg9-bradykinin Proteins 0.000 claims 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 claims 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 claims 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims 1
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 claims 1
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 claims 1
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 claims 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 101100225046 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ecl2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 108010004164 hepatitis B surface antigen presurface protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims 1
- 108700010900 influenza virus proteins Proteins 0.000 claims 1
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 claims 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 claims 1
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 claims 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5258—Virus-like particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6075—Viral proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/18011—Details ssRNA Bacteriophages positive-sense
- C12N2795/18111—Leviviridae
- C12N2795/18123—Virus like particles [VLP]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Модифицированная вирусоподобная частица (ВПЧ), включающая по меньшей мере один гибридный белок, в которой указанный по меньшей мере один гибридный белок включает:(а) первый полипептид,(б) второй полипептид,причем указанный первый полипептид является белком оболочки бактериофага АР205 или его мутеином, а второй полипептид гибридизируют с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.2. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген.3. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид состоит из 124-138 аминокислот.4. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный белок оболочки бактериофага АР205 или его мутеин выбран из группы, включающей:(а) SEQ ID NO: 1,(б) SEQ ID NO: 2,(в) SEQ ID NO: 42,(г) SEQ ID NO: 67;(д) SEQ ID NO: 68,(e) SEQ ID NO: 69 и(ж) мутеин последовательностей SEQ ID NO:1 или 67.5. Модифицированная ВПЧ по п.4, в которой указанный мутеин имеет указанную выше аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 или 67, причем не более трех аминокислотных остатков последовательности SEQ ID NO:1 или 67 делегировано, добавлено внутрь или замещено.6. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный гибридный белок дополнительно включает спейсер, причем указанный спейсер расположен между указанным первым полипептидом и указанным вторым полипептидом.7. Модифицированная ВПЧ по п.6, в которой указанный спейсер содержит не более 15 аминокислот.8. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, выбранный из группы, включающей:(а) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении раковых клеток,(б) антиген, �
Claims (23)
1. Модифицированная вирусоподобная частица (ВПЧ), включающая по меньшей мере один гибридный белок, в которой указанный по меньшей мере один гибридный белок включает:
(а) первый полипептид,
(б) второй полипептид,
причем указанный первый полипептид является белком оболочки бактериофага АР205 или его мутеином, а второй полипептид гибридизируют с указанным первым полипептидом либо с N-, либо с С-конца указанного первого полипептида.
2. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген.
3. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный первый полипептид состоит из 124-138 аминокислот.
4. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный белок оболочки бактериофага АР205 или его мутеин выбран из группы, включающей:
(а) SEQ ID NO: 1,
(б) SEQ ID NO: 2,
(в) SEQ ID NO: 42,
(г) SEQ ID NO: 67;
(д) SEQ ID NO: 68,
(e) SEQ ID NO: 69 и
(ж) мутеин последовательностей SEQ ID NO:1 или 67.
5. Модифицированная ВПЧ по п.4, в которой указанный мутеин имеет указанную выше аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 или 67, причем не более трех аминокислотных остатков последовательности SEQ ID NO:1 или 67 делегировано, добавлено внутрь или замещено.
6. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный гибридный белок дополнительно включает спейсер, причем указанный спейсер расположен между указанным первым полипептидом и указанным вторым полипептидом.
7. Модифицированная ВПЧ по п.6, в которой указанный спейсер содержит не более 15 аминокислот.
8. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает по меньшей мере один антиген, выбранный из группы, включающей:
(а) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении раковых клеток,
(б) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного микробного патогена,
(в) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аллергена,
(г) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении по меньшей мере одного аутоантигена,
(д) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа у сельскохозяйственных и комнатных животных, и
(е) антиген, пригодный для индукции иммунного ответа в отношении полипептидного токсина или полипептидного гормона.
9. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей:
(а) полипептид ВИЧ,
(б) полипептид вируса гепатита В,
(в) полипептид вируса гриппа,
(г) полипептид вируса гепатита С,
(д) полипептид Toxoplasma,
(е) полипептид Plasmodium falciparum,
(ж) полипептид Plasmodium vivax,
(з) полипептид Plasmodium ovale,
(и) полипептид Plasmodium malariae,
(к) полипептид Chlamydia,
(л) полипептид клеток рака груди,
(м) полипептид клеток рака почки,
(н) полипептид клеток рака простаты,
(о) полипептид клеток рака кожи,
(п) полипептид клеток рака мозга,
(р) полипептид лейкозных клеток,
(с) рекомбинантный профиль,
(т) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на пчелиный яд,
(у) полипептид, вовлеченный в выработку аллергической реакции на орехи,
(ф) полипептид, вовлеченный в выработку пищевой аллергической реакции,
(х) полипептид, вовлеченный в выработку астматической реакции,
(ц) Her2,
(ч) GD2,
(ш) EGF-R,
(щ) СЕА,
(э) CD52,
(ю) gp100 меланомы человека,
(я) меланА меланомы человека,
(аа) тирозиназу,
(66) NA17-A nt,
(вв) MAGE3,
(гг) Р53,
(дд) СD21,
(ее) HPV16E7,
(жж) белок фосфолипазы А2,
(зз) пептид Der p I,
(ии) белок вируса гриппа М2,
(кк) фрагмент указанного по меньшей мере одного антигена (а)-(я) и (аа)-(ии), и
(лл) вариант указанного по меньшей мере одного антигена (а)-(я) и (аа)-(ии).
10. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный по меньшей мере один антиген является аутоантигеном.
11. Модифицированная ВПЧ по п.10, в которой указанный аутоантиген является полипептидом, выбранным из группы, включающей:
(а) лимфотоксины (предпочтительно лимфотоксин α (LT α), лимфотоксин β (LT β)),
(б) рецепторы лимфотоксинов,
(в) лиганд рецепторного активатора ядерного фактора kB (РАЯФкВ -Л),
(г) фактор роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ),
(д) рецептор фактора роста сосудистого эндотелия (ФРСЭ-Р),
(е) интерлейкин -5,
(ж) интерлейкин -17,
(з) интерлейкин -13,
(и) IL-23 р19,
(к) грелин,
(л) CCL21,
(м) CXCL12,
(h) SDF-1,
(о) M-CSF,
(п) МСР-1,
(р) эндоглин,
(с) GnRH,
(t) TRH,
(у) эотаксин,
(ф) брадикинин,
(х) BLC,
(ц) фактор некроза опухоли а,
(ч) амилоидный бета-пептид (Aβ1-Аβ42),
(ш) Aβ1-Aβ6,
(щ) ангиотензин,
(э) внеклеточный домен CCR5,
(ю) внеклеточный домен CXCR4,
(я) гастрин,
(аа) СЕТР,
(бб) С5а,
(вв)брадикинин,
(гг) дез-Arg-брадикинин,
(дд) фрагмент (а)-(гг) и
(ее) вариант (а)-(гг).
12. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид состоит из 5-30 аминокислот.
13. Модифицированная ВПЧ по п.1, в которой указанный второй полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
(а) пептид вируса гриппа М2 (SEQ ID NO:43),
(б) пептид Pre S1 вируса гепатита В (SEQ ID NO:62),
(в) полиэпитопы Nef ВИЧ (SEQ ID NO:23),
(г) GnRH (SEQ ID NO: 20),
(д) гастрин G17 (SEQ ID NO:47),
(e) кошачий грелин (SEQ ID NO:59),
(ж) собачий грелин (SEQ ID NO:58),
(з) пептид 1 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:98),
(и) пептид 2 оболочки ВИЧ (SEQ ID NO:99),
(к) CCR5 PNt (SEQ ID NO:45) и
(л) CCR5 ECL2 (SEQ ID NO:91).
14. Модифицированная ВПЧ по п.1, дополнительно включающая по меньшей мере одну иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, причем указанная иммуностимулирующая нуклеиновая кислота упакована внутрь указанной модифицированной ВПЧ.
15. Модифицированная ВПЧ по п.14, в которой указанная нуклеиновая кислота, включающая по меньшей мере один неметилированный мотив CpG, содержит последовательность GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:71).
16. Фармацевтическая композиция, включающая:
(а) модифицированную ВПЧ по одному из предшествующих пунктов, и
(б) приемлемый фармацевтический носитель.
17. Композиция вакцины, включающая иммунологически эффективное количество модифицированной ВПЧ по одному из пп.1-15.
18. Композиция вакцины по п.17, дополнительно включающая адъювант.
19. Способ иммунизации, предусматривающий введение композиции вакцины по п.17 в организм животного или человека.
20. Гибридный белок, включающий полипептид, в котором указанный полипептид гибридизуют либо по N-концу, либо по С-концу, либо по обоим концам белка оболочки бактериофага АР205 или его мутеина, причем указанный полипептид состоит из 3-10 аминокислот, а указанный гибридный белок способен формировать ВПЧ.
21. Нуклеотидная последовательность, кодирующая указанный гибридный белок по п.20.
22. Способ получения модифицированной ВПЧ по одному из пп.1-15, предусматривающий стадии:
(а) необязательного лигирования в составе рамки считывания нуклеотидной последовательности, кодирующей спейсер, либо с первой нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый полипептид, либо со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй полипептид,
(б) лигирования в составе рамки считывания второй нуклеотидной последовательности с указанной первой нуклеотидной последовательностью с образованием третьей нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный гибридный белок,
(в) необязательного внедрения с 3'-конца первой нуклеотидной последовательности стоп-кодона для супрессии,
(г) экспрессии указанной третьей нуклеотидной последовательности в организме хозяина, предпочтительно при условии, что образующиеся экспрессируемые белки способны формировать указанные модифицированные ВПЧ,
(д) очистки указанных модифицированных ВПЧ, полученных на стадии (г).
23. Способ лечения или предупреждения заболевания, расстройства или физиологических состояний индивидуума, предусматривающий введение в организм животного или человека модифицированных ВПЧ по пп.1-15.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61130804P | 2004-09-21 | 2004-09-21 | |
| US60/611,308 | 2004-09-21 | ||
| EP05105229 | 2005-06-14 | ||
| EP05105229.8 | 2005-06-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007114956A true RU2007114956A (ru) | 2008-10-27 |
| RU2409667C2 RU2409667C2 (ru) | 2011-01-20 |
Family
ID=46307785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007114956/10A RU2409667C2 (ru) | 2004-09-21 | 2005-09-21 | Вирусоподобные частицы, включающие гибридный белок белка оболочки бактериофага ар205 и антигенного полипептида |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20080292652A1 (ru) |
| EP (1) | EP1791870A1 (ru) |
| JP (1) | JP2008513035A (ru) |
| AU (1) | AU2005286475A1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0516953A (ru) |
| CA (1) | CA2580208A1 (ru) |
| MX (1) | MX2007003171A (ru) |
| NZ (1) | NZ554387A (ru) |
| RU (1) | RU2409667C2 (ru) |
| WO (1) | WO2006032674A1 (ru) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7320793B2 (en) * | 2001-01-19 | 2008-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
| EP2196217A1 (en) | 2001-09-14 | 2010-06-16 | Cytos Biotechnology AG | Packaging of immunostimulatory substances into virus-like particles: method of preparation and use |
| DK1524994T3 (da) * | 2002-07-19 | 2011-08-15 | Cytos Biotechnology Ag | Vaccinesammensætninger indeholdende amyloid beta 1-6-antigen-arrays |
| CN101948835A (zh) | 2002-10-29 | 2011-01-19 | 科勒制药集团股份有限公司 | Cpg寡核苷酸在治疗丙型肝炎病毒感染中的应用 |
| CN100560719C (zh) * | 2003-03-26 | 2009-11-18 | 赛托斯生物技术公司 | Melan-a肽类似物-病毒样颗粒偶联物 |
| KR20070059207A (ko) | 2004-10-05 | 2007-06-11 | 사이토스 바이오테크놀로지 아게 | Ｖｌｐ-항원 컨쥬게이트 및 백신으로서 그의 용도 |
| EP1809335A2 (en) | 2004-10-25 | 2007-07-25 | Cytos Biotechnology AG | Gastric inhibitory polypeptide (gip) antigen arrays and uses thereof |
| EP1896068A1 (en) * | 2005-06-14 | 2008-03-12 | Cytos Biotechnology AG | Antigen conjugates and uses thereof |
| ES2310062B1 (es) | 2005-07-15 | 2009-11-13 | Bionostra, S.L. | Particulas pseudovirales vacias quimericas derivadas del virus causante de la enfermedad de la bursitis infecciosa (ibdv), procedimiento de obtencion y aplicaciones. |
| JP5312028B2 (ja) | 2005-09-28 | 2013-10-09 | サイトス バイオテクノロジー アーゲー | インターロイキン−１コンジュゲート及びその使用 |
| JP5484732B2 (ja) * | 2005-12-14 | 2014-05-07 | サイトス バイオテクノロジー アーゲー | 過敏症の治療のための免疫賦活性核酸パッケージ粒子 |
| AT503690A1 (de) * | 2006-06-09 | 2007-12-15 | Biomay Ag | Hypoallergene moleküle |
| KR101552227B1 (ko) | 2006-06-12 | 2015-09-10 | 사이토스 바이오테크놀로지 아게 | 올리고뉴클레오티드를 ｒｎａ 박테리오파지의 바이러스-유사 입자로 패키징하는 방법 |
| AU2013204383B2 (en) * | 2006-06-12 | 2016-09-22 | Kuros Us Llc | Processes for packaging oligonucleotides into virus-like particles of RNA bacteriophages |
| WO2008057529A2 (en) * | 2006-11-06 | 2008-05-15 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (cetp) |
| AU2007333147B2 (en) | 2006-12-12 | 2013-12-19 | Kuros Us Llc | Oligonucleotides containing high concentrations of guanine monomers |
| CA2672826A1 (en) * | 2006-12-21 | 2008-06-26 | Cytos Biotechnology Ag | Circular ccr5 peptide conjugates and uses thereof |
| CN101245110B (zh) * | 2007-02-16 | 2010-09-15 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 重组中性粒细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白及其药物组合物 |
| US20110262472A1 (en) * | 2008-04-22 | 2011-10-27 | Cytos Biotechnology Ag | Vaccine compositions for the treatment of dengue fever and uses thereof |
| WO2010122164A1 (en) | 2009-04-23 | 2010-10-28 | Cytos Biotechnology Ag | VIRUS-LIKE PARTICLES OF BACTERIOPHAGE φCB5 |
| JP2012525134A (ja) * | 2009-04-30 | 2012-10-22 | サイトス バイオテクノロジー アーゲー | インフルエンザ赤血球凝集素の組成物とその使用 |
| BR112012024708A2 (pt) * | 2010-03-29 | 2016-06-07 | Novartis Ag | composição de compostos orgânicos |
| GB201121571D0 (en) * | 2011-12-15 | 2012-01-25 | Astrimmune Ltd | Compounds and uses thereof |
| BR112014013035A2 (pt) | 2011-12-22 | 2018-10-09 | Hoffmann La Roche | métodos de seleção de células, conjuntos de expressão bicistrônica, células eucarióticas, vetores lentivirais, uso de vetor lentiviral, bibliotecas de ventores lentivirais e de células eucarióticas, métodos de seleção de células, fluxos de trabalho e uso de célula |
| WO2013122262A1 (en) * | 2012-02-16 | 2013-08-22 | Vlp Therapeutics, Llc | Virus like particle composition |
| WO2015193143A1 (en) * | 2014-06-18 | 2015-12-23 | Morphosys Ag | Fusion proteins and uses thereof |
| CN104255335B (zh) * | 2014-08-24 | 2016-08-31 | 苗建军 | 一种吊放蔓用钳 |
| RU2568872C1 (ru) * | 2014-10-15 | 2015-11-20 | Игорь Геннадьевич Сивов | Лекарственное средство для лечения вирусного гепатита с |
| MA40824A (fr) | 2014-10-22 | 2017-08-29 | Saiba Gmbh | Particules de cmv de type virus modifié |
| AU2016207099C1 (en) | 2015-01-15 | 2021-02-04 | University Of Copenhagen | Virus-like particle with efficient epitope display |
| DK3368068T3 (da) | 2015-10-30 | 2021-02-22 | Univ Copenhagen | Viruslignende partikler med effektiv epitopdisplay |
| US10588953B2 (en) | 2015-12-18 | 2020-03-17 | Agilvax, Inc. | Compositions and methods related to xCT peptides |
| KR102469478B1 (ko) * | 2016-04-27 | 2022-11-23 | 벤치마크 애니멀 헬스 엘티디. | 개 아토피성 피부염의 치료 |
| CN112500456B (zh) * | 2020-12-02 | 2022-10-28 | 深圳赫兹生命科学技术有限公司 | 一种去势ap205病毒样颗粒亚单位疫苗 |
| CN117202926A (zh) * | 2021-02-02 | 2023-12-08 | 普罗瓦克萨斯股份有限公司 | 新型免疫调节平台及其使用方法 |
| BR112023020640A2 (pt) | 2021-04-12 | 2023-12-05 | Saiba AG | Partículas similares a vírus de bacteriófago ap205 modificadas |
| US20240156937A1 (en) * | 2021-04-23 | 2024-05-16 | Unm Rainforest Innovations | Baceriophage virus-like particles vaccines for chlamydia trachomatis infections |
| CN114933639B (zh) * | 2022-05-05 | 2023-12-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白及其制备方法和用途 |
| CN115819623A (zh) * | 2022-12-12 | 2023-03-21 | 长春百克生物科技股份公司 | 一种重组病毒样颗粒疫苗组合物的制备及应用 |
| CN118684781A (zh) * | 2023-03-21 | 2024-09-24 | 深圳赫兹生命科学技术有限公司 | GnRH-VLP重组去势疫苗及其制备方法 |
| WO2025000310A1 (zh) * | 2023-06-29 | 2025-01-02 | 深圳赫兹生命科学技术有限公司 | 去势ap205病毒样颗粒亚单位疫苗的制备方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020193565A1 (en) * | 1998-03-27 | 2002-12-19 | Stanley Margaret Anne | Antigen preparation and use |
| WO2003031466A2 (en) * | 2001-10-05 | 2003-04-17 | Cytos Biotechnology Ag | Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof |
| US7128911B2 (en) * | 2001-01-19 | 2006-10-31 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of bone disease |
| US7320793B2 (en) * | 2001-01-19 | 2008-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
| EP2196217A1 (en) * | 2001-09-14 | 2010-06-16 | Cytos Biotechnology AG | Packaging of immunostimulatory substances into virus-like particles: method of preparation and use |
| CA2492823A1 (en) * | 2001-09-14 | 2003-03-27 | Martin F. Bachmann | In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles |
| ES2316628T3 (es) * | 2001-11-07 | 2009-04-16 | Cytos Biotechnology Ag | Disposicion ordenada de antigenos que comprende rankl para el tratamiento de enfermedades oseas. |
| PL369863A1 (en) * | 2001-11-07 | 2005-05-02 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of allergic eosinophilic diseases |
| ATE489969T1 (de) * | 2002-06-20 | 2010-12-15 | Cytos Biotechnology Ag | Verpackte virusartige partikel in kombination mit cpg zur verwendung als adjuvantien mit allergenen. herstellungsverfahren und verwendung |
| CN1665528B (zh) * | 2002-07-05 | 2013-05-15 | 弗利亚生物技术公司 | 佐剂病毒颗粒 |
| WO2004007538A2 (en) * | 2002-07-17 | 2004-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen arrays using a virus like particle derived from the ap205 coat protein |
-
2005
- 2005-09-21 MX MX2007003171A patent/MX2007003171A/es not_active Application Discontinuation
- 2005-09-21 BR BRPI0516953-4A patent/BRPI0516953A/pt not_active IP Right Cessation
- 2005-09-21 AU AU2005286475A patent/AU2005286475A1/en not_active Abandoned
- 2005-09-21 EP EP05786887A patent/EP1791870A1/en not_active Withdrawn
- 2005-09-21 JP JP2007532893A patent/JP2008513035A/ja active Pending
- 2005-09-21 US US11/663,350 patent/US20080292652A1/en not_active Abandoned
- 2005-09-21 NZ NZ554387A patent/NZ554387A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-09-21 WO PCT/EP2005/054721 patent/WO2006032674A1/en not_active Ceased
- 2005-09-21 RU RU2007114956/10A patent/RU2409667C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-09-21 CA CA002580208A patent/CA2580208A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2007003171A (es) | 2007-05-23 |
| EP1791870A1 (en) | 2007-06-06 |
| NZ554387A (en) | 2009-09-25 |
| WO2006032674A1 (en) | 2006-03-30 |
| BRPI0516953A (pt) | 2008-09-30 |
| RU2409667C2 (ru) | 2011-01-20 |
| JP2008513035A (ja) | 2008-05-01 |
| US20080292652A1 (en) | 2008-11-27 |
| AU2005286475A1 (en) | 2006-03-30 |
| CA2580208A1 (en) | 2006-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2007114956A (ru) | Вирусоподобные частицы, включающие гибридный белок белка оболочки бактериофага ар205 и антигенного полипептида | |
| JP2008513035A5 (ru) | ||
| RU2006141850A (ru) | Композиция и способ для иммунизации, способ продуцирования неприродного, упорядоченного и повторяющегося массива антигенов | |
| JP2004522735A5 (ru) | ||
| RU2005104235A (ru) | Молекулярные массивы антигенов | |
| RU2630652C2 (ru) | Гибридные белки-носители пептидов в качестве вакцин от аллергии | |
| KR102775741B1 (ko) | Cmv의 변형된 바이러스-유사 입자 | |
| US20090004194A1 (en) | Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity | |
| RU2001118274A (ru) | Композиция (варианты), способ получения не природной упорядоченной и содержащей повторы антигенной матрицы, выделенный рекомбинантный альфавирус, клетка-хозяин, способ терапевтического лечения и способ иммунизации | |
| CN1662253A (zh) | 用作佐剂的包装的病毒样颗粒:制备方法与用途 | |
| JP2005539025A5 (ru) | ||
| US20070248617A1 (en) | Medical Uses of Carrier Conjugates of Non-Human Tnf -Peptides | |
| RU2007138265A (ru) | Белки, слитые с кошачьим аллергеном, и их применение | |
| JP2005539025A (ja) | アミロイドベータ１−６抗原アレイを含むワクチン組成物 | |
| JP7623282B2 (ja) | 融合によって修飾されたｃｍｖのウイルス様粒子 | |
| US12161710B2 (en) | Malaria immunogen and methods for using same | |
| JP7146926B2 (ja) | Ｃｄ４ヘルパーｔ細胞エピトープの融合ペプチドおよびそのワクチン | |
| US20080019991A1 (en) | Carrier Conjugates Of Tnf-Peptides | |
| JP2007518762A (ja) | グレリン−担体結合体 | |
| Oosterhuis et al. | Preclinical development of highly effective and safe DNA vaccines directed against HPV 16 E6 and E7 | |
| WO2024047090A2 (en) | Modified virus-like particles of cmv | |
| CN118576725A (zh) | 一种以arc蛋白为载体的纳米颗粒及其制备方法和应用 | |
| KR101953374B1 (ko) | 단백질 나노입자 기반의 복합백신 | |
| CN1440812A (zh) | 一种使用cd137结合激动剂增强免疫应答的方法 | |
| WO2014171913A2 (en) | Immunoglobulin fc fragment tagging activation of endogenous cd4 and cd8 t cells and enhancement of antitumor effects of lentivector immunization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120922 |