Claims (37)
1. Одноцепочечный Т-клеточный рецептор (scTCR), содержащий α сегмент, образованный последовательностью вариабельной области α цепи TCR, соединенной с N-концом внеклеточной последовательности константной области а цепи TCR, β сегмент, образованный последовательностью вариабельной области β цепи TCR, соединенной с N-концом внеклеточной последовательности константной области β цепи TCR, и линкерную последовательность, связывающую С конец α сегмента с N концом β сегмента, или наоборот, при этом внеклеточные последовательности константных областей α и β сегментов связаны дисульфидной связью, протяженность линкерной последовательности и положение дисульфидной связи таковы, что последовательности вариабельных областей α и β сегментов имеют практические такую же взаимную ориентацию, что и в нативных αβ Т-клеточных рецепторах.1. A single-stranded T-cell receptor (scTCR) containing an α segment formed by a variable region sequence of a TCR α chain connected to the N-end of the extracellular sequence of a TCR chain constant region a, β segment formed by a variable region sequence of a TCR chain β connected to N the end of the extracellular sequence of the constant region β of the TCR chain, and the linker sequence connecting the C end of the α segment with the N end of the β segment, or vice versa, the extracellular sequence of the constant regions of α β segments are linked by a disulfide bond, the length of the linker sequence and the position of a disulfide bond such that the sequences of the α and β segments have substantially the same relative orientation as in native αβ T cell receptors.
2. scTCR по п.1, отличающийся тем, что дисульфидная связь, связывающая внеклеточные последовательности константных областей α и β сегментов представляет собой такую дисульфидную связь, которая не эквивалентна связям в нативных αβ Т-клеточных рецепторах.2. scTCR according to claim 1, characterized in that the disulfide bond connecting the extracellular sequences of the constant regions of the α and β segments is such a disulfide bond that is not equivalent to the bonds in native αβ T-cell receptors.
3. scTCR по пп.1 или 2, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки в субпоследовательностях α и β сегментов, соответствующих последовательностям внеклеточных константных Ig доменов α и β цепей TCR.3. scTCR according to claims 1 or 2, characterized in that the disulfide bond binds amino acid residues in the subsequences of α and β segments corresponding to sequences of extracellular constant Ig domains of α and β TCR chains.
4. scTCR по п.3, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки, являющиеся заменами цистеиновых остатков, причем расстояние между β углеродными атомами этих замен в соответствующих последовательностях внеклеточных константных Ig доменов α и β цепей TCR составляет менее 0,6 нм.4. scTCR according to claim 3, characterized in that the disulfide bond binds amino acid residues that are substitutions of cysteine residues, the distance between the β carbon atoms of these substitutions in the corresponding sequences of the extracellular constant Ig domains of α and β TCR chains being less than 0.6 nm.
5. scTCR по п.3, отличающийся тем, что внеклеточная последовательность константной области, имеющаяся в а сегменте, включает последовательность, соответствующую внеклеточному константному Ig домену α цепи TCR, и/или внеклеточная последовательность константной области, имеющаяся в β сегментах, включает последовательность, соответствующую внеклеточному константному Ig домену β цепи TCR.5. scTCR according to claim 3, characterized in that the extracellular constant region sequence present in the a segment includes a sequence corresponding to the extracellular constant Ig domain of the TCR α chain and / or the extracellular constant region sequence present in β segments includes a sequence corresponding to the extracellular constant Ig domain of the β TCR chain.
6. scTCR по п.1, отличающийся тем, что (а) α сегмент представляет собой вариабельную область α цепи TCR, соединенную с N концом внеклеточного домена константной области α цепи TCR; и/или (б) β сегмент представляет собой вариабельную область β цепи TCR, соединенную с N концом внеклеточного домена константной области β цепи TCR.6. scTCR according to claim 1, characterized in that (a) the α segment is the variable region of the α TCR chain connected to the N end of the extracellular domain of the constant region of the α region of the TCR chain; and / or (b) the β segment is the variable region β of the TCR chain connected to the N end of the extracellular domain of the constant region β of the TCR chain.
7. scTCR no п.1, отличающийся тем, что внеклеточные последовательности константных областей, имеющиеся в α и β сегментах, соответствуют константным областям α и β цепей нативного TCR, усеченным по их С-концам таким образом, что цистеиновые остатки, которые образуют межцепную нативную дисульфидную связь TCR, исключаются.7. scTCR no. 1, characterized in that the extracellular sequences of constant regions present in the α and β segments correspond to the constant regions of α and β of the native TCR chains truncated at their C-ends so that the cysteine residues that form the interchain native TCR disulfide bonds are excluded.
8. scTCR по п.1, отличающийся тем, что внеклеточные последовательности константных областей, имеющиеся в α и β сегментах, соответствуют константным областям α и β цепей нативного TCR, в которых цистеиновые остатки, которые образуют нативную межцепную дисульфидную связь, заменяются на другой аминокислотный остаток.8. scTCR according to claim 1, characterized in that the extracellular sequences of the constant regions present in the α and β segments correspond to the constant regions of the α and β chains of the native TCR, in which the cysteine residues that form the native interchain disulfide bond are replaced by another amino acid the remainder.
9. scTCR по п.8, отличающийся тем, что указанные цистеиновые остатки заменяются на серин или аланин.9. scTCR according to claim 8, characterized in that said cysteine residues are replaced with serine or alanine.
10. scTCR по п.1, отличающийся тем, что линкерная последовательность имеет формулу - Р- АА- Р-, где Р обозначает пролин, а АА обозначает аминокислотную последовательность, в которой аминокислоты представляют собой глицин и серин.10. scTCR according to claim 1, characterized in that the linker sequence has the formula - P-AA-P-, where P is proline, and AA is the amino acid sequence in which the amino acids are glycine and serine.
11. scTCR по п.1, отличающийся тем, что линкерная последовательность связывает С конец α домена с N концом β домена.11. scTCR according to claim 1, characterized in that the linker sequence binds the C end of the α domain to the N end of the β domain.
12. scTCR по п.11, отличающийся тем, что линкерная последовательность состоит из 26 аминокислот-41 аминокислоты.12. scTCR according to claim 11, characterized in that the linker sequence consists of 26 amino acids-41 amino acids.
13. scTCR по п.11, отличающийся тем, что линкерная последовательность состоит из 29, 30, 31 или 32 аминокислот.13. scTCR according to claim 11, characterized in that the linker sequence consists of 29, 30, 31 or 32 amino acids.
14. scTCR по п.11, отличающийся тем, что линкерная последовательность состоит из 33, 34, 35 или 36 аминокислот.14. scTCR according to claim 11, characterized in that the linker sequence consists of 33, 34, 35 or 36 amino acids.
15. scTCR по п.11, отличающийся тем, что линкерная последовательность представляет собой - PGGG- (SGGGG)5- P-, где Р обозначает пролин, G обозначает глицин и S обозначает серин.15. scTCR according to claim 11, characterized in that the linker sequence is - PGGG- (SGGGG) 5 - P-, where P is proline, G is glycine and S is serine.
16. scTCR по п.11, отличающийся тем, что линкерная последовательность представляет собой - PGGG- (SGGGG)6- P-, где Р обозначает пролин, G обозначает глицин и S обозначает серин.16. scTCR according to claim 11, characterized in that the linker sequence is - PGGG- (SGGGG) 6 - P-, where P is proline, G is glycine and S is serine.
17. scTCR по п.1, в котором отсутствует неспаренный цистеиновый остаток, имеющийся в β цепи нативного TCR.17. scTCR according to claim 1, in which there is no unpaired cysteine residue present in the β chain of the native TCR.
18. scTCR по п.1, отличающийся тем, что внеклеточная последовательность константного домена α сегмента включает последовательность, соответствующую TRAC*01, а β сегмент включает последовательность, соответствующую TRBC1*01 или TRBC2*01, и указанная ненативная дисульфидная связь находится между заменившими цистеиновые остатки Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01.18. scTCR according to claim 1, characterized in that the extracellular sequence of the constant domain of the α segment includes a sequence corresponding to TRAC * 01, and the β segment includes a sequence corresponding to TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01, and the specified non-native disulfide bond is between the substituting cysteine residues of Thr 48 exon 1 TRAC * 01 and Ser 57 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01.
19. scTCR по п.1, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает заменившие цистеиновые остатки Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Ser 77 экзона 1 TRBC1*01 илиТРВС2*01.19. scTCR according to claim 1, characterized in that the disulfide bond binds Thr 45 exon 1 TRAC * 01 and Ser 77 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01 substituting cysteine residues.
20. scTCR по п.1, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает заменившие цистеиновые остатки Tyr 10 экзона 1 TRAC*01 и Ser 17 экзона 1 TRBC1*01 илиТРВС2*01.20. scTCR according to claim 1, characterized in that the disulfide bond binds the replaced cysteine residues of Tyr 10 exon 1 TRAC * 01 and Ser 17 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01.
21. scTCR по п.1, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает заменившие цистеиновые остатки Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Asp 59 экзона 1 TRBC1*01 илиТКВС2*01.21. scTCR according to claim 1, characterized in that the disulfide bond binds Thr 45 exon 1 TRAC * 01 and Asp 59 exon 1 TRBC1 * 01 or TKBC2 * 01 substituting cysteine residues.
22. scTCR по п.1, отличающийся тем, что дисульфидная связь связывает заменившие цистеиновые остатки Ser 15 экзона 1 TRAC*01 и Glu 15 экзона 1 TRBC1*01 илиТКВС2*01.22. scTCR according to claim 1, characterized in that the disulfide bond binds the substituted cysteine residues Ser 15 of exon 1 TRAC * 01 and Glu 15 of exon 1 TRBC1 * 01 or TKBC2 * 01.
23. scTCR по п.1, отличающийся тем, что последовательности вариабельной области α и β цепей TCR, имеющиеся в α и β сегментах, вместе соответствуют функциональному вариабельному домену первого TCR, а внеклеточные последовательности константных областей α и β цепей TCR, имеющиеся в сегментах α и β, соответствуют внеклеточным последовательностям константного домена второго TCR, причем первый и второй TCR относятся к одному виду.23. scTCR according to claim 1, characterized in that the variable region sequences of the α and β TCR chains present in the α and β segments together correspond to the functional variable domain of the first TCR, and the extracellular sequences of the constant regions of α and β TCR chains present in the segments α and β correspond to the extracellular sequences of the constant domain of the second TCR, the first and second TCR being of the same type.
24. scTCR по п.1, отличающийся тем, что последовательности вариабельной области α и β цепей, имеющиеся в α и β сегментах, вместе соответствуют функциональному вариабельному домену первого TCR, а внеклеточные последовательности константных областей α и β цепей TCR, имеющиеся в сегментах α и β, соответствуют внеклеточным последовательностям константного домена второго TCR, причем первый и второй TCR относятся к разным видам.24. scTCR according to claim 1, characterized in that the variable region sequences of the α and β chains present in the α and β segments together correspond to the functional variable domain of the first TCR, and the extracellular sequences of the constant regions of the α and β TCR chains present in the α segments and β correspond to the extracellular sequences of the constant domain of the second TCR, the first and second TCR being of different types.
25. scTCR по п.24, отличающийся тем, что последовательности вариабельной области α и β цепей TCR, имеющиеся в α и β сегментах, вместе соответствуют функциональному вариабельному домену человеческого TCR, а внеклеточные последовательности константных областей α и β цепей TCR, имеющиеся в сегментах α и β, соответствуют внеклеточным последовательностям константного домена мышиного TCR.25. scTCR according to claim 24, wherein the variable region sequences of the α and β TCR chains present in the α and β segments together correspond to the functional variable domain of human TCR, and the extracellular sequences of the constant regions of α and β TCR chains present in the segments α and β correspond to the extracellular sequences of the constant domain of murine TCR.
26. scTCR по п.1, отличающийся тем, что этот TCR связывается с МНС-пептидным комплексом.26. scTCR according to claim 1, characterized in that this TCR binds to the MHC peptide complex.
27. scTCR по п.25, отличающийся тем, что этот TCR связывается с комплексом CD1-антиген.27. scTCR according to claim 25, wherein the TCR binds to the CD1 antigen complex.
28. scTCR по п.1, отличающийся тем, что этот TCR связывается с суперантигеном или с комплексом пептид- МНС/суперантиген.28. scTCR according to claim 1, characterized in that this TCR binds to a superantigen or to a peptide-MHC / superantigen complex.
29. Поливалентный комплекс Т-клеточного рецептора (TCR), содержащий множество TCR по любому из пп.1-28.29. A multivalent complex of a T-cell receptor (TCR) containing many TCR according to any one of claims 1 to 28.
30. scTCR по п.1 или комплекс по п.29, который связывается ковалентной связью с терапевтическим агентом.30. scTCR according to claim 1 or the complex according to clause 29, which binds covalently with a therapeutic agent.
31. scTCR по п.1, связанный с частицей или гранулой (сферой, бусиной).31. scTCR according to claim 1, associated with a particle or granule (sphere, bead).
32. Композиция, содержащая scTCR по любому из пп.1-31 и фармацевтически приемлемый носитель.32. A composition comprising scTCR according to any one of claims 1 to 31 and a pharmaceutically acceptable carrier.
33. Способ детектирования лиганда TCR, выбранного из МНС- пептидных комплексов, комплексов С1-антиген, суперантигенов и комплексов МНС-пептид/суперантиген, заключающийся в получении scTCR по любому из пп.1-29, контактировании scTCR с лигандом TCR; и в детектировании связывания scTCR с лигандом.33. A method for detecting a TCR ligand selected from MHC peptide complexes, C1 antigen complexes, superantigens and MHC peptide / superantigen complexes, which comprises obtaining scTCR according to any one of claims 1 to 29, contacting scTCR with a TCR ligand; and in detecting binding of scTCR to the ligand.
34. Способ идентификации ингибитора взаимодействия между scTCR по любому из пп.1-28, и лигандом TCR, выбранным из МНС-пептидных комплексов, комлексов С1-антиген, суперантигенов и комплексов МНС-пептид/суперантиген, заключающийся в контактировании scTCR с лигандом, партнером scTCR по связыванию, в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения, и в определении, уменьшается ли связывание scTCR с scTCR лигандом в присутствии тестируемого соединения, причем такое уменьшение принимают как идентификацию ингибитора.34. A method of identifying an inhibitor of the interaction between scTCR according to any one of claims 1 to 28, and a TCR ligand selected from MHC peptide complexes, C1 antigen complexes, superantigens and MHC-peptide / superantigen complexes, which comprises contacting scTCR with a ligand, a partner scTCR by binding, in the presence or absence of a test compound, and determining whether binding of scTCR to the scTCR ligand in the presence of the test compound is reduced, and this reduction is taken as the identification of an inhibitor.
35. Способ идентификации потенциального ингибитора взаимодействия между scTCR по любому из пп.1-28, или по нескольким пунктам, и лигандом TCR, выбранным из МНС-пептидных комплексов, комлексов С1-антиген, суперантигенов и комплексов МНС-пептид/суперантиген, заключающийся в контактировании scTCR или лиганда-партнера scTCR по связыванию, с тестируемым соединением, и в определении, связывается ли тестируемое соединение с scTCR и/или с TCR лигандом, причем такое связывание принимают как идентификацию потенциального ингибитора.35. A method for identifying a potential inhibitor of the interaction between scTCR according to any one of claims 1 to 28, or several points, and a TCR ligand selected from MHC peptide complexes, C1 antigen complexes, superantigens and MHC-peptide / superantigen complexes, comprising contacting the scTCR or scTCR binding partner ligand with the test compound, and determining whether the test compound binds to scTCR and / or the TCR ligand, such binding being taken as the identification of a potential inhibitor.
36. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, кодирующую scTCR по любому из пп.1-28, или последовательность, комплементарную ей.36. A nucleic acid molecule containing a sequence encoding scTCR according to any one of claims 1 to 28, or a sequence complementary to it.
37. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.36.37. A vector containing the nucleic acid molecule according to clause 36.