Claims (85)
1. Протеиновая частица, экспонирующая на своей поверхности Т-клеточный рецептор (TCR), характеризующаяся тем, что1. A protein particle exhibiting on its surface a T-cell receptor (TCR), characterized in that
(i) протеиновая частица представляет собой рибосому, а TCR представляет собой одноцепочечный полипептид TCR (scTCR), или димерную полипептидную пару TCR (dTCR), или(i) the protein particle is a ribosome, and the TCR is a single chain TCR polypeptide (scTCR), or a dimeric TCR polypeptide pair (dTCR), or
(ii) протеиновая частица представляет собой фаговую частицу или клетку, имеющую поверхностный белок или полипептидную молекулу, с которой ковалентно связан TCR, a TCR представляет собой scTCR человека или полипептидную пару dTCR человека, или(ii) the protein particle is a phage particle or cell having a surface protein or polypeptide molecule to which a TCR is covalently linked, and the TCR is a human scTCR or a human dTCR polypeptide pair, or
(iii) протеиновая частица представляет собой фаговую частицу или клетку, имеющую поверхностный белок или полипептидную молекулу, с которой ковалентно связан TCR, a TCR представляет собой полипептидную пару dTCR не человека, или(iii) the protein particle is a phage particle or cell having a surface protein or polypeptide molecule to which TCR is covalently linked, and TCR is a non-human dTCR polypeptide pair, or
(iv) протеиновая частица представляет собой фаговую частицу или клетку, имеющую поверхностный белок или полипептидную молекулу с которой ковалентно связан TCR, a TCR представляет собой scTCR полипептид, имеющий аминокислотные последовательности TCR, соответствующие последовательностям внеклеточного константного и вариабельного домена, присутствующим в нативных цепях TCR, и линкерную последовательность, которая связывает последовательность вариабельного домена, соответствующей таковой одной цепи нативного TCR, с последовательностью константного домена, соответствующую последовательности константного домена другой цепи нативного TCR, а дисульфидная связь, которая не имеет эквивалента в нативных Т-клеточных рецепторах, связывает остатки последовательностей константного домена.(iv) a protein particle is a phage particle or cell having a surface protein or polypeptide molecule to which TCR is covalently linked, and TCR is a scTCR polypeptide having TCR amino acid sequences corresponding to sequences of an extracellular constant and variable domain present in native TCR chains, and a linker sequence that binds the sequence of the variable domain corresponding to that of a single chain of native TCR, with a sequence of constant domain corresponding to the sequence of the constant domain of another chain of the native TCR, and a disulfide bond that is not equivalent in native T-cell receptors binds residues of the sequences of the constant domain.
2. Протеиновая частица, экспонирующая на своей поверхности димерный Т-клеточный рецептор (dTCR) в виде полипептидной пары или одноцепочечный полипептид Т-клеточного рецептора (scTCR), где полипептидная пара dTCR составлена аминокислотной последовательностью TCR, соответствующей последовательностям внеклеточных константных и вариабельных доменов, присутствующих в нативных цепях TCR, и scTCR составлен аминокислотной последовательностью TCR, соответствующей последовательностям внеклеточных вариабельных и константных доменов, присутствующим в нативных цепях TCR, и линкерной последовательностью, которая связывает последовательность вариабельного домена, соответствующую таковой одной цепи нативного TCR, с последовательностью константного домена, соответствующей последовательности константного домена другой цепи нативного TCR, при этом последовательности вариабельного домена полипептидной пары dTCR или полипептида scTCR взаимно ориентированы в основном, как и в нативных TCRs, и в случае полипептида scTCR, дисульфидная связь, которая не имеет эквивалента в нативных Т-клеточных рецепторах, связывает остатки полипептида.2. A protein particle exhibiting on its surface a dimeric T-cell receptor (dTCR) as a polypeptide pair or a single-stranded T-cell receptor polypeptide (scTCR), where the dTCR polypeptide pair is composed of a TCR amino acid sequence corresponding to sequences of extracellular constant and variable domains present in native TCR chains, and scTCR is composed of the TCR amino acid sequence corresponding to the extracellular variable and constant domain sequences present in the native distinct TCR chains, and a linker sequence that links the variable domain sequence corresponding to that of one native TCR chain to the constant domain sequence corresponding to the constant domain sequence of another native TCR chain, the variable domain sequences of the dTCR polypeptide pair or scTCR polypeptide are mutually oriented as in native TCRs, and in the case of scTCR polypeptide, a disulfide bond that is not equivalent in native T cell receptors binds residues of the polypeptide.
3. Протеиновая частица по п.1 или 2, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу.3. The protein particle according to claim 1 or 2, which is a filamentous phage particle.
4. Протеиновая частица по п.1 или 2, которая представляет собой клетку, имеющую поверхностный белок или полипептидную молекулу, с которой ковалентно связан TCR.4. The protein particle according to claim 1 or 2, which is a cell having a surface protein or polypeptide molecule with which TCR is covalently linked.
5. Протеиновая частица по п.1 или 2, которая представляет собой рибосому.5. The protein particle according to claim 1 or 2, which is a ribosome.
6. Протеиновая частица по п.1 или 2, у которой С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец scTCR полипептида связан пептидной связью с остатком, экспонированным на поверхности протеиновой частицы.6. The protein particle according to claim 1 or 2, in which the C-end of one component of the dTCR polypeptide pair or the C-end of the scTCR polypeptide is linked by a peptide bond to a residue exposed on the surface of the protein particle.
7. Протеиновая частица по п.1 или 2, у которой С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец полипептида scTCR связан дисульфидной связью с цистеиновым остатком, экспонированным на поверхности протеиновой частицы.7. The protein particle according to claim 1 or 2, in which the C-end of one component of the dTCR polypeptide pair or the C-terminus of the scTCR polypeptide is disulfide linked to a cysteine residue exposed on the surface of the protein particle.
8. Протеиновая частица по п.1 или 2, экспонирующая полипептид scTCR, который включает первый сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей α или β цепи вариабельного домена TCR, второй сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности β или γ цепи вариабельного домена TCR, соединенной с N-концом аминокислотной последовательности, соответствующей последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, и линкерную последовательность, связывающую С-конец первого сегмента с N-концом второго сегмента, причем когда протеиновая частица представляет собой фаг, scTCR соответствует TCR человека.8. The protein particle according to claim 1 or 2, exposing the scTCR polypeptide, which includes the first segment composed of the amino acid sequence corresponding to the α or β chain of the TCR variable domain, the second segment composed of the amino acid sequence corresponding to the sequence of β or γ chain of the TCR variable domain, connected to the N-end of the amino acid sequence corresponding to the sequence of the β chain of the extracellular constant domain of TCR, and a linker sequence linking the C-end of the first c gmenta with the N-end of the second segment, wherein when the protein particle is a phage, scTCR corresponds to human TCR.
9. Протеиновая частица по п.1 или 2, экспонирующая полипептид scTCR, который включает первый сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей β или γ цепи вариабельного домена TCR, второй сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности а или 5 цепи вариабельного домена TCR, соединенной с N-концом аминокислотной последовательности, соответствующей последовательности а цепи внеклеточного константного домена TCR, и линкерную последовательность, которая связывает С-конец первого сегмента с N-концом второго сегмента, причем когда протеиновая частица представляет собой нитевидный фаг, scTCR соответствует TCR человека.9. The protein particle according to claim 1 or 2, exposing the scTCR polypeptide, which includes the first segment composed of the amino acid sequence corresponding to the β or γ chain of the TCR variable domain, the second segment composed of the amino acid sequence corresponding to the sequence a or 5 of the TCR variable domain, connected to the N-end of the amino acid sequence corresponding to the sequence of the a chain of the extracellular constant domain of TCR, and a linker sequence that binds the C-end of the first a segment with an N-terminus of a second segment, wherein when the protein particle is a filamentous phage, scTCR corresponds to human TCR.
10. Протеиновая частица по п.1 или 2, экспонирующая полипептид scTCR, который включает первый сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности α или δ цепи вариабельного домена TCR, соединенной с N-концом аминокислотной последовательности, соответствующей последовательности а цепи внеклеточного константного домена TCR, второй сегмент, составленный аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности β или γ цепи вариабельного домена TCR, соединенной с N-концом аминокислотной последовательности, соответствующей последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, линкерную последовательность, связывающую С-конец первого сегмента и N-конец второго сегмента, или наоборот, и дисульфидную связь между первой и второй цепями, причем указанная дисульфидная связь не имеет эквивалента в нативных αβ или γδ Т-клеточных рецепторах, а длина линкерной последовательности и положение дисульфидной связи являются такими, что последовательности вариабельного домена первого и второго сегментов взаимно ориентированы, в основном, как в нативных αβ или γδ Т-клеточных рецепторах.10. The protein particle according to claim 1 or 2, exposing the scTCR polypeptide, which comprises a first segment composed of the amino acid sequence corresponding to the sequence of the α or δ chain of the TCR variable domain connected to the N-terminus of the amino acid sequence corresponding to the sequence of the chain of the extracellular constant domain TCR , the second segment, composed of the amino acid sequence corresponding to the sequence of the β or γ chain of the TCR variable domain connected to the N-terminus of the amino acid pos a sequence corresponding to the β chain of the TCR extracellular constant domain, a linker sequence linking the C-terminus of the first segment and the N-terminus of the second segment, or vice versa, and a disulfide bond between the first and second chains, said disulfide bond having no equivalent in native αβ or γδ T-cell receptors, and the length of the linker sequence and the position of the disulfide bond are such that the variable domain sequences of the first and second segments are mutually oriented, mainly as in native αβ or γδ T-cell receptors.
11. Протеиновая частица по п.10, где линкерная последовательность имеет формулу -Р-АА-Р-, где Р - это пролин, а АА представляет собой аминокислотную последовательность, в которой аминокислотами являются глицин и серин.11. The protein particle of claim 10, where the linker sequence has the formula -P-AA-P-, where P is proline, and AA is an amino acid sequence in which the amino acids are glycine and serine.
12. Протеиновая частица по п.10 или 11, где линкерная последовательность связывает С-конец первого сегмента с N-концом второго сегмента.12. The protein particle of claim 10 or 11, where the linker sequence connects the C-end of the first segment with the N-end of the second segment.
13. Протеиновая частица по п.12, где линкерная последовательность включает от 26 до 41 аминокислот.13. The protein particle of claim 12, wherein the linker sequence comprises from 26 to 41 amino acids.
14. Протеиновая частица по п.13, где линкерная последовательность включает 29, 30 31 или 32 аминокислоты.14. The protein particle of claim 13, wherein the linker sequence comprises 29, 30, 31, or 32 amino acids.
15. Протеиновая частица по п.13, где линкерная последовательность включает 33, 34, 35 или 36 аминокислоты.15. The protein particle of claim 13, wherein the linker sequence comprises 33, 34, 35, or 36 amino acids.
16. Протеиновая частица по п.13, где линкерная последовательность имеет формулу -PGGG-(SGGGG)5-P-, где Р - это пролин, G - глицин и S - серин.16. The protein particle according to item 13, where the linker sequence has the formula -PGGG- (SGGGG) 5 -P-, where P is proline, G is glycine and S is serine.
17. Протеиновая частица по п.13, где линкерная последовательность имеет формулу -PGGG-(SGGGG)6-P-, где Р - это пролин, G - глицин и S - серин.17. The protein particle according to item 13, where the linker sequence has the formula -PGGG- (SGGGG) 6 -P-, where P is proline, G is glycine and S is serine.
18. Протеиновая частица по п.1 или 2, экспонирующая полилептидную пару dTCR, которая включает первый полипептид, в котором последовательность, соответствующая последовательности α или δ цепи вариабельного домена TCR, соединена с N-концом последовательности, соответствующей последовательности α цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность, соответствующая последовательности β или γ цепи вариабельного домена TCR, соединена с N-концом последовательности, соответствующей последовательности 3 цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, которая не имеет эквивалента в нативных αβ или γδ Т-клеточных рецепторах.18. The protein particle according to claim 1 or 2, exhibiting a dTCR polypeptide pair, which comprises a first polypeptide in which the sequence corresponding to the sequence of the α or δ chain of the TCR variable domain is connected to the N-terminus of the sequence corresponding to the sequence of the α chain of the extracellular constant domain of TCR and a second polypeptide in which the sequence corresponding to the sequence of the β or γ chain of the TCR variable domain is connected to the N-terminus of the sequence corresponding to sequence 3 of the chain in ekletochnogo TCR constant domain, wherein the first and second polypeptides linked by a disulfide bond which has no equivalent in native αβ or γδ T cell receptors.
19. Протеиновая частица по п.1 или 2, где экспонируемая полипептидная пара dTCR или полипептид scTCR имеют аминокислотные последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного и вариабельного домена αβ TCR.19. The protein particle according to claim 1 or 2, where the exposed dTCR polypeptide pair or scTCR polypeptide have amino acid sequences corresponding to the sequences of the extracellular constant and variable domain of αβ TCR.
20. Протеиновая частица по п.1 или 2, где экспонируемая полипептидная пара dTCR или полипептид scTCR имеют аминокислотные последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного домена αβ TCR и последовательностям вариабельного домена γδ TCR.20. The protein particle according to claim 1 or 2, where the exposed dTCR polypeptide pair or scTCR polypeptide have amino acid sequences corresponding to the sequences of the extracellular constant domain αβ TCR and the sequences of the variable domain γδ TCR.
21. Протеиновая частица по п.1 или 2, где экспонируемая полипептидная пара dTCR или полипептид scTCR имеют аминокислотные последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного домена αβ TCR не человека и последовательностям вариабельного домена TCR человека.21. The protein particle of claim 1 or 2, wherein the exposed dTCR polypeptide pair or scTCR polypeptide has amino acid sequences corresponding to non-human αβ TCR extracellular constant domain sequences and human TCR variable domain sequences.
22. Протеиновая частица по п.1 или 2, где аминокислотная последовательность одного составляющего экспонируемой полипептидной пары dTCR или аминокислотная последовательность экспонируемого scTCR соответствует последовательности внеклеточного константного Ig домена нативного TCR.22. The protein particle according to claim 1 or 2, where the amino acid sequence of one component of the exposed polypeptide pair dTCR or the amino acid sequence of the exposed scTCR corresponds to the sequence of the extracellular constant Ig domain of the native TCR.
23. Протеиновая частица по п.1 или 2, где экспонируемая полипептидная пара dTCR или экспонируемый scTCR включают последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного Ig домена нативного TCR.23. The protein particle according to claim 1 or 2, where the exposed dTCR polypeptide pair or the exposed scTCR include sequences corresponding to sequences of the extracellular constant Ig domain of the native TCR.
24. Протеиновая частица по п.23, где дисульфидная связь соединяет аминокислотные остатки указанной последовательности внеклеточного константного Ig домена и эта дисульфидная связь не имеет эквивалента в нативных TCRs.24. The protein particle according to item 23, where the disulfide bond connects the amino acid residues of the indicated sequence of the extracellular constant Ig domain and this disulfide bond has no equivalent in native TCRs.
25. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, соответствующими аминокислотным остаткам, β углеродные атомы которых в нативных TCRs находятся на расстоянии менее 0,6 нм.25. The protein particle according to paragraph 24, where the specified disulfide bond is between cysteine residues corresponding to amino acid residues, β carbon atoms of which in native TCRs are at a distance of less than 0.6 nm.
26. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.26. The protein particle of claim 24, wherein said disulfide bond is between cysteine residues to which Thr 48 exon 1 TRAC * 01 and Ser 57 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01 are substituted, or their equivalents are non-human.
27. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Ser 77 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.27. The protein particle according to paragraph 24, where the specified disulfide bond is between cysteine residues, which are replaced by Thr 45 exon 1 TRAC * 01 and Ser 77 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01, or their equivalents of non-human origin.
28. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены Tyr 10 экзона 1 TRAC*01 и Ser 17 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.28. The protein particle of claim 24, wherein said disulfide bond is between cysteine residues to which Tyr 10 exon 1 TRAC * 01 and Ser 17 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01 are substituted, or their equivalents are non-human.
29. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Asp 59 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.29. The protein particle according to paragraph 24, where the specified disulfide bond is between cysteine residues, which are replaced by Thr 45 exon 1 TRAC * 01 and Asp 59 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01, or their equivalents of non-human origin.
30. Протеиновая частица по п.24, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены Ser15 экзона 1 TRAC*01 и Glu 15 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.30. The protein particle of claim 24, wherein said disulfide bond is between cysteine residues to which Ser15 exon 1 TRAC * 01 and Glu 15 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01 are substituted, or their equivalents are non-human.
31. Протеиновая частица по п.23, где последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.31. The protein particle of claim 23, wherein the sequences corresponding to the sequences of the extracellular constant Ig domain of the native TCR are truncated at their C-ends corresponding to those of the native sequences, so that cysteine residues forming the native interchain disulfide bond are excluded.
32. Протеиновая частица по п.23, где в последовательностях, соответствующих последовательностям внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, замещены нецистеиновыми остатками.32. The protein particle of claim 23, wherein in the sequences corresponding to the sequences of the extracellular constant Ig domain of the native TCR, the cysteine residues forming the native interchain disulfide bond are replaced by non-cysteine residues.
33. Протеиновая частица по п.32, где цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, замещены на серии и аланин.33. The protein particle of claim 32, wherein the cysteine residues forming the native interchain disulfide bond are replaced by series and alanine.
34. Протеиновая частица по п.1 или 2, где в экспонируемых dTCR или scTCR, отсутствуют непарные цистеиновые остатки, соответствующие непарным цистеиновым остаткам в нативном TCR.34. The protein particle according to claim 1 or 2, where in the exposed dTCR or scTCR, there are no unpaired cysteine residues corresponding to unpaired cysteine residues in the native TCR.
35. Протеиновая частица по п.23, где последовательности, соответствующие последовательностям внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, усечены на своих N-концах до остатков, соответствующих таковым, которые формируют ненативную межцепочечную дисульфидную связь.35. The protein particle of claim 23, wherein the sequences corresponding to the sequences of the extracellular constant Ig domain of the native TCR are truncated at their N-ends to residues corresponding to those that form a non-native interchain disulfide bond.
36. Протеиновая частица по п.1, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу, экспонирующую на своей поверхности димерную полипептидную пару Т-клеточного рецептора (dTCR), которая включает первый полипептид, в котором последовательность, соответствующая последовательности а цепи вариабельного домена TCR, соединена с N-концом последовательности, соответствующей а цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность, соответствующая последовательности β цепи вариабельного домена TCR, соединена с N-концом последовательности, соответствующей последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, находящейся между двумя цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения, а С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR связан пептидной связью с белком оболочки фага.36. The protein particle according to claim 1, which is a filamentous phage particle, exposing on its surface a dimeric polypeptide pair of the T cell receptor (dTCR), which includes the first polypeptide in which the sequence corresponding to the sequence a chain of the variable domain TCR is connected to The N-terminus of the sequence corresponding to the TCR chain of the extracellular constant domain, and a second polypeptide in which the sequence corresponding to the sequence of the β chain of the TCR variable domain is connected with the N-terminus of the sequence corresponding to the β chain of the extracellular constant domain of TCR, the first and second polypeptides being linked by a disulfide bond between two cysteine residues replaced by Thr 48 exon 1 TRAC * 01 and Ser 57 exon 1 TRBC1 * 01 or TRBC2 * 01, or their equivalents of non-human origin, and the C-terminus of one component of the dTCR polypeptide pair is linked by a peptide bond to the phage coat protein.
37. Библиотека различных полипептидных пар dTCR или полипептидов scTCR, экспонируемых на поверхности протеиновых частиц, причем указанные полипептидные пары dTCR или полипептиды scTCR имеют структурные особенности, в соответствии с любым из пп.8-36.37. A library of various dTCR polypeptide pairs or scTCR polypeptides exposed on the surface of protein particles, said dTCR polypeptide pairs or scTCR polypeptides having structural features, in accordance with any one of claims 8-36.
38. Библиотека по п.37, в которой различия находятся в вариабельном домене (доменах) dTCR или полипептидов scTCR.38. The library according to clause 37, in which the differences are in the variable domain (s) of dTCR or scTCR polypeptides.
39. Библиотека по пп.37 или 38, в которой протеиновые частицы являются нитевидными фаговыми частицами.39. The library of claims 37 or 38, wherein the protein particles are filamentous phage particles.
40. Библиотека по п.39, в которой различия находятся в одной или более области, определяющей комплементарность вариабельного домена (доменов) dTCR или полипептидов scTCR и/или в одном или более каркасных участках областей, определяющих комплементарность, экспонируемых dTCR или полипептидов scTCR.40. The library according to § 39, in which the differences are in one or more regions determining the complementarity of the variable domain (s) of dTCR or scTCR polypeptides and / or in one or more frame regions of the regions determining complementarity of the exposed dTCR or scTCR polypeptides.
41. Нуклеиновая кислота, кодирующая (а) одну цепь полипептидной пары dTCR и (b) другую цепь полипептидной пары dTCR, слитая с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок, обладающий способностью формировать часть поверхности протеиновой частицы; или нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид scTCR, слитая с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок, обладающий способностью формировать часть поверхности протеиновой частицы, причем полипептидная пара dTCR или scTCR имеют структурные особенности, в соответствии в любым из пп.8-36.41. A nucleic acid encoding (a) one strand of a dTCR polypeptide pair and (b) another strand of a dTCR polypeptide pair fused to a nucleic acid encoding a protein capable of forming part of the surface of a protein particle; or a nucleic acid encoding an scTCR polypeptide fused to a nucleic acid encoding a protein capable of forming part of the surface of a protein particle, the dTCR or scTCR polypeptide pair having structural features, according to any one of claims 8 to 36.
42. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.41, или композиция, включающая первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту (а) по п.42, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту (b) по п.42.42. An expression vector containing the nucleic acid according to paragraph 41, or a composition comprising a first vector containing the nucleic acid (a) according to paragraph 42, and a second vector containing the nucleic acid (b) according to paragraph 42.
43. Система экспрессии, включающая фагемиду или векторы, основанные на фаговом геноме, экспрессирующие нуклеиновую кислоту по п.41.43. An expression system comprising a phagemid or phage genome based vectors expressing the nucleic acid of claim 41.
44. Система экспрессии по п.43, где фагемида или векторы, основанные на фаговом геноме, получены из нитевидного фага.44. The expression system of claim 43, wherein the phagemid or vectors based on the phage genome are derived from a filamentous phage.
45. Система экспрессии по п.44, где фагемида или векторы, основанные на фаговом геноме, кодируют белки оболочки бактериофага gp III или gVIII.45. The expression system of claim 44, wherein the phagemid or vectors based on the phage genome encode bacteriophage coat proteins gp III or gVIII.
46. Система экспрессии по любому из пп.43-45, где вектор содержит последовательность или последовательности, которые конститутивно или индуцибельно ограничивают количество полипептида TCR, экспрессируемого вектором, до определенного уровня.46. The expression system according to any one of paragraphs 43-45, where the vector contains a sequence or sequences that constitutively or inducibly limit the amount of TCR polypeptide expressed by the vector to a certain level.
47. Система экспрессии по п.46, где указанная последовательность (последовательности) представляет(ют) собой слабую промоторную последовательность (последовательности).47. The expression system of claim 46, wherein said sequence (s) is (are) a weak promoter sequence (s).
48. Система экспрессии по п.46, где указанная последовательность (последовательности) представляет(ют) собой мутированный(ые) сайт(ы) связывания рибосом.48. The expression system of claim 46, wherein said sequence (s) are (are) mutated ribosome binding site (s).
49. Система экспрессии по п.46, где указанная последовательность (последовательности) представляет(ют) собой миссенс-супрессированный(ые) стоп-кодон(ы).49. The expression system of claim 46, wherein said sequence (s) are (are) missense suppressed stop codon (s).
50. Система экспрессии по п.46, где указанная последовательность (последовательности) представляет(ют) собой мутированный(ые) стартовый(ые) кодон(ы).50. The expression system according to item 46, where the specified sequence (s) is (are) a mutated (s) start (s) codon (s).
51. Система экспрессии по п.46, где указанная последовательность (последовательности) представляет(ют) собой промоторную последовательность (последовательности), в которых модификация силы промотора может быть опосредована метаболитами.51. The expression system of claim 46, wherein said sequence (s) is (are) a promoter sequence (s) in which a modification of the strength of the promoter can be mediated by metabolites.
52. Система экспрессии по п.46, где указананая последовательность (последовательности) включает(ют) ряд кодонов, менее "предпочтительных" для используемой системы экспрессии.52. The expression system of claim 46, wherein said sequence (s) includes (are) a number of codons that are less than “preferred” for the expression system used.
53. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.41, вектор экспрессии по п.42 или систему экспрессии по любому из пп.43-52.53. A host cell containing the nucleic acid according to paragraph 41, the expression vector according to claim 42, or the expression system according to any one of claims 43-52.
54. Клетка-хозяин, содержащая фагемидную систему экспрессии по любому из пп.43-52 и хелперный фаг.54. A host cell containing the phagemid expression system according to any one of claims 43-52 and a helper phage.
55. Способ идентификации TCRs со специфическими характеристиками, который заключается в том, что разнообразная библиотека TCRs, экспонированных протеиновыми частицами по любому из пп.37-40, подвергается процессу отбора по указанным специфическим характеристикам, после чего протеиновые частицы, экспонирующие TCR с указанными характеристиками, выделяют и необязательно подвергают амплификации для увеличения их количества и/или процессу скрининга, который позволяет измерить указанные характеристики, идентифицировать протеиновые частицы, экспонирующие TCR с желаемыми характеристиками, и выделить их, после чего их необязательно подвергают амплификации для увеличения их количества.55. A method for identifying TCRs with specific characteristics, which consists in the fact that a diverse library of TCRs exposed to protein particles according to any one of claims 37-40 is subjected to a selection process according to the specified specific characteristics, after which the protein particles exhibiting TCRs with the specified characteristics, isolated and optionally amplified to increase their number and / or screening process, which allows you to measure these characteristics, identify protein particles, expo iruyuschie TCR with the desired characteristics, and highlight them, after which they are optionally subjected to amplification to increase their number.
56. Способ по п.55, в котором специфической характеристикой является повышенная аффинность TCR по отношению к лиганду.56. The method according to clause 55, in which the specific characteristic is the increased affinity of TCR with respect to the ligand.
57. Способ обнаружения комлексов TCR-лиганд, который включает (i) создание протеиновой частицы (частиц), экспонирующей(их) TCR, по любому из пп.1-41;57. A method for detecting TCR ligand complexes, which comprises (i) creating a protein particle (s) exhibiting TCR (s) thereof according to any one of claims 1 to 41;
(i) обеспечение контактирования протеиновой частицы (частиц), экспонирующей(их) TCR, и предполагаемого лигандного комплекса; и(i) contacting the protein particle (s) exhibiting (their) TCR and the putative ligand complex; and
(ii) обнаружение связывания протеиновой частицы (частиц), экспонирующей(их) TCR, с предполагаемыми лигандными комплексами.(ii) detecting the binding of the protein particle (s) exhibiting (their) TCR to the putative ligand complexes.
58. Способ по п.57, где предполагаемыми лигандными комлексами являются пептидные МНС комплексы.58. The method according to clause 57, where the alleged ligand complexes are peptide MHC complexes.
59. Способ идентификации ингибитора взаимодействия протеиновой частицы, экспонирующей TCR, по любому из пп.1-41, с TCR-связывающим лигандом, который заключается в обеспечении контактирования протеиновой частицы, экспонирующей TCR с TCR-связывающим лигандом в присутствии тестируемого соединения, а также без него, с последующим определением, приводит ли присутствие тестируемого соединения к снижению связывания протеиновой частицы, экспонирующей TCR, с TCR-связывающим лигандом, причем такое снижение считается признаком идентификации ингибитора.59. A method of identifying an inhibitor of the interaction of a protein particle exhibiting TCR, according to any one of claims 1 to 41, with a TCR-binding ligand, which consists in contacting the protein particle exhibiting TCR with a TCR-binding ligand in the presence of the test compound, as well as without him, with the subsequent determination of whether the presence of the test compound leads to a decrease in the binding of the protein particle exhibiting TCR to the TCR-binding ligand, and this decrease is considered a sign of the identification of the inhibitor.
60. TCR, специфичный по отношению к заданному лиганду, имеющий (i) структурные особенности по любому из пп.8-36, (ii) мутированный в вариабельном(ых) домене(ах) по отношению к нативному TCR, специфичному по отношению к заданному лиганду, и имеющий (iii) значение Kd для указанного лиганда меньшее, чем таковое у нативного TCR.60. TCR specific for a given ligand, having (i) structural features according to any one of claims 8-36, (ii) mutated in the variable domain (s) relative to a native TCR specific for a given ligand, and having (iii) a Kd value for said ligand is less than that of the native TCR.
61. TCR, специфичный по отношению к заданному лиганду, имеющий (i) структурные особенности по любому из пп.8-36, (ii) мутированный в вариабельном(ых) домене(ах) по отношению к нативному TCR, специфичному по отношению к заданному лиганду, и имеющий (iii) значение Kd для указанного лиганда измеренное с помощью поверхностного плазмонного резонанса меньшее, чем таковое у нативного TCR.61. TCR specific for a given ligand, having (i) structural features according to any one of claims 8-36, (ii) mutated in the variable domain (s) with respect to a native TCR specific for a given ligand, and having (iii) a Kd value for said ligand measured by surface plasmon resonance is less than that of the native TCR.
62. TCR специфичный по отношению к заданному лиганду, имеющий (i) структурные особенности по любому из пп.8-36, (ii) мутированный в вариабельном(ых) домене(ах) по отношению к нативному TCR, специфичному по отношению к заданному лиганду, и имеющий (iii) меньшее обратное значение (koff) для указанного лиганда по сравнению с таковым соответствующего нативного TCR.62. A TCR specific for a given ligand, having (i) structural features according to any one of claims 8-36, (ii) mutated in the variable domain (s) with respect to a native TCR specific for a given ligand , and having (iii) a lower inverse value (k off ) for the indicated ligand compared to that of the corresponding native TCR.
63. TCR, специфичный по отношению к заданному лиганду, имеющий (i) структурные особенности по любому из пп.8-36, (ii) мутированный в вариабельном(ых) домене(ах) по отношению к нативному TCR, специфичному по отношению к заданному лиганду, и имеющий (iii) меньшее обратное значение (koff) измеренное с помощью поверхностного плазмонного резонанса для указанного лиганда по сравнению с таковым соответствующего нативного TCR.63. TCR specific for a given ligand, having (i) structural features according to any one of claims 8-36, (ii) mutated in the variable domain (s) with respect to a native TCR specific for a given ligand, and having (iii) a lower inverse value (k off ) measured by surface plasmon resonance for the specified ligand compared to that of the corresponding native TCR.
64. TCR по любому из пп.60-63, имеющий структурные особенности а 3 гетеродимерного TCR по любому из пп.18-36.64. TCR according to any one of paragraphs 60-63, having the structural features of a 3 heterodimeric TCR according to any one of paragraphs 18-36.
65. TCR по любому из пп.60-63, мутированный по отношению к нативному TCR по крайней мере в одной области, определяющей комплементарность, и/или каркасном участке.65. The TCR according to any one of claims 60 to 63, mutated with respect to the native TCR in at least one complementarity determining region and / or frame region.
66. TCR по любому из пп.60-63, специфичный по отношению к заданному антигену МНС различных типов.66. TCR according to any one of claims 60 to 63, specific for a given MHC antigen of various types.
67. TCR по любому из пп.60-63, специфичный по отношению к заданному рМНС.67. TCR according to any one of claims 60 to 63, specific to a given pMHC.
68. TCR по любому из пп.60-65 или 67, специфичный по отношению к HLA-A2-Tax пептидному (LLFGYPVYV) (SEQ ID 21) комплексу.68. TCR according to any one of paragraphs 60-65 or 67, specific for the HLA-A2-Tax peptide (LLFGYPVYV) (SEQ ID 21) complex.
69. TCR по п.68, содержащий в аминокислотной последовательности бета-цепи вариабельного домена аминокислоты, показанные в SEQ IDs 172, 173, 174 или 175.69. The TCR of claim 68, comprising the amino acid sequence of the beta chain of the variable domain of the amino acid shown in SEQ IDs 172, 173, 174 or 175.
70. TCR по п.68, содержащий в аминокислотной последовательности бета цепи вариабельного домена одну или более аминокислоту 99М, 99V, 100S, 100Р, 101А, 102Е, 102Q, 104Н, 105D и 106Q, причем нумерация соответствует SEQ ID 171.70. The TCR of claim 68, comprising one or more amino acids 99M, 99V, 100S, 100P, 101A, 102E, 102Q, 104H, 105D, and 106Q in the amino acid sequence of the beta chain of the variable domain, the numbering corresponding to SEQ ID 171.
71. TCR по п.68, включающий в бета цепи вариабельного домена аминокислоты 99М, 100S и 101 А, причем нумерация соответствует SEQ ID 171.71. The TCR of claim 68, comprising the beta chains of the variable domain of amino acid 99M, 100S, and 101A, the numbering corresponding to SEQ ID 171.
72. TCR по п.68, включающий в бета цепи вариабельного домена аминокислоту 105D, причем нумерация соответствует SEQ ID 171.72. The TCR of claim 68, comprising the amino acid 105D in the beta chain of the variable domain, the numbering corresponding to SEQ ID 171.
73. TCR no п.68, включающий в бета цепи вариабельного домена аминокислоты 99 V и 100Р, причем нумерация соответствует SEQ ID 171.73. TCR no p, including in the beta chain of the variable domain of amino acids 99 V and 100P, and the numbering corresponds to SEQ ID 171.
74. TCR по п.68, включающий в бета цепи вариабельного домена аминокислоты 104Н и 105Р, причем нумерация соответствует SEQ ID 171.74. The TCR of claim 68, comprising the beta chains of the variable domain of amino acid 104H and 105P, the numbering corresponding to SEQ ID 171.
75. TCR по любому из пунктов 60-63, специфичный по отношению к HLA-А2 NY-ESO пептидному (SLLMITQC) (SEQ ID 22) комплексу.75. TCR according to any one of paragraphs 60-63, specific for the HLA-A2 NY-ESO peptide (SLLMITQC) (SEQ ID 22) complex.
76. Нуклеиновая кислота, кодирующая TCR по любому из пп.60-75.76. A nucleic acid encoding a TCR according to any one of claims 60-75.
77. TCR по любому из пп.60-75, связанный с лекарственным соединением.77. TCR according to any one of paragraphs 60-75, associated with a medicinal compound.
78. TCR по любому из пп.60-75, связанный с создающим изображение соединением.78. TCR according to any one of paragraphs 60-75, associated with creating an image connection.
79. TCR по любому из пп.60-75, связанный с цитотоксическим соединением.79. The TCR according to any one of paragraphs 60-75, associated with a cytotoxic compound.
80. TCR по любому из пп.77-79, специфичный по отношению к HLA-A2 Tax пептидному (LLFGYPVYV) (SEQ ID 21) комплексу.80. TCR according to any one of claims 77 to 79, specific for the HLA-A2 Tax peptide (LLFGYPVYV) (SEQ ID 21) complex.
81. TCR по любому из пп.77 или 79, специфичный по отношению HLA-A2 NY-ESO пептидному (SLLMITQC) (SEQ ID 22) комплексу.81. TCR according to any one of paragraphs.77 or 79, specific for the HLA-A2 NY-ESO peptide (SLLMITQC) (SEQ ID 22) complex.
82. Способ лечения HTLV-1 инфекции, заключающийся во введении субъекту, страдающему указанным заболеванием, эффективного количества TCR по любому из пп.68-74, или 79.82. A method of treating HTLV-1 infection, comprising administering to a subject suffering from said disease an effective amount of TCR according to any one of claims 68-74, or 79.
83. Применение TCR по любому из пп.68-74 или 79 для получения композиции, предназначенной для лечения HTLV-1 инфекции.83. The use of TCR according to any one of p-74 or 79 to obtain a composition intended for the treatment of HTLV-1 infection.
84. Способ лечения рака, заключающийся во введении субъекту, страдающему указанным заболеванием, эффективного количества TCR по п.75 или 81.84. A method of treating cancer, comprising administering to a subject suffering from said disease an effective amount of TCR according to claim 75 or 81.
85. Применение TCR по п.75 или 81 для получения композиции, предназначенной для лечения рака.85. The use of TCR according to item 75 or 81 to obtain a composition intended for the treatment of cancer.