RU2000786C1

RU2000786C1 - Antiviral drug against influenza infection

Info

Publication number: RU2000786C1
Authority: RU
Inventors: к Рут Яковлевна Пол; Лариса Ивановна Иноземцева; Лариса Кивевна Четверикова; Генрих Иванович Разоренов; Тать на Анатольевна Крамска; Александр Владимирович Смирнов; Александр Бениаминович Томчин
Original assignee: Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН
Priority date: 1989-07-25
Filing date: 1989-07-25
Publication date: 1993-10-15

Abstract

Изобретение относитс к медицине, в частности к лечению вирусной (гриппозной) инфекции Цель - создание химиотерзпевтического средства, обладающего противогриппозным лечебным действием Дл этого предлагаетс использовать сук- цинат - 3-5-диамино-12,4-тиадмазоп, у которого вы влена прогивогриппозна актизность 1 табаThe invention relates to medicine, in particular to the treatment of a viral (influenza) infection. The purpose is to create a chemotherapeutic drug with an anti-influenza therapeutic effect. For this purpose, it is proposed to use succinate, 3-5-diamino-12,4-thiadmazop, in which proinfluenza activity has been detected 1 tab

Description

Изобретение относитс к медицине, а именно к лекарственным препаратам, и может найти применение дл профилактики и лечении вирусных заболеваний, в первую очередь гриппозной этиологии.The invention relates to medicine, namely to medicines, and may find application for the prevention and treatment of viral diseases, especially influenza etiology.

Борьба с вирусными заболевани ми крайне затруднена в св зи с особенност ми биологии этих возбудителей, их облигатным внутриклеточным паразитизмом. Одним из самых распространенных возбудителей вирусных заболеваний современного человечества , вызывающих регул рные эпидемии и даже пандемии, вл етс вирус гриппа. До насто щего времени не существует эффективных и надежных средств профилактики и лечени гриппозной инфекции.The fight against viral diseases is extremely difficult due to the biology of these pathogens, their obligate intracellular parasitism. One of the most common causative agents of viral diseases of modern mankind, causing regular epidemics and even pandemics, is the influenza virus. To date, there are no effective and reliable means of preventing and treating influenza infection.

Широким антивирусным спектром действи обладают различные интерфероны. Имеютс сведени об их противогриппозном эффекте. Трудность производства этих биологических препаратов ограничивает возможность их широкого применени , кроме того изучением системы интерферонов показало, что они вл етс гормоноподоб- ными веществами, что служит существенным показанием дл ограничени их применени в качестве противовирусных средств. Наиболее широко примен емым средством профилактики гриппа вл ютс живые и убитые вакцины. Однако главным недостатком вакцин вл етс необходимость регул рного приготовлени новых вакцинных штаммов вируса по мере возникновени в циркул ции новых антигенных вариантов вируса.A wide antiviral spectrum of action is exerted by various interferons. There is evidence of their anti-influenza effect. The difficulty in the production of these biological preparations limits the possibility of their widespread use; moreover, the study of the system of interferons has shown that they are hormone-like substances, which serves as an important indication for limiting their use as antiviral agents. The most widely used means of preventing influenza are live and dead vaccines. However, the main disadvantage of vaccines is the need for the regular preparation of new vaccine strains of the virus as new antigenic variants of the virus appear in the circulation.

Другим специфическим противогриппозным средством вл етс ремантадин. Этот препарат обладает в основном профилактическим действием в отношении гриппа А, в св зи с чем остаетс актуальной проблем поиска лечебных противовирусных средств.Another specific anti-influenza agent is remantadine. This drug has mainly a prophylactic effect against influenza A, and therefore the search for therapeutic antiviral agents remains relevant.

Целью изобретени вл етс использование в качестве противовирусного средства сукцината 3,5-динамино-1-2,4-тиадиазола.An object of the invention is the use of 3,5-dynamically-1-2,4-thiadiazole succinate as an antiviral agent.

3,5-Диамино-1,2,4-тиадиазол Сэмтизол) описан в химической литературе в качестве промежуточного продукта органического синтеза. Известны радиопротекторна активность амтизола и его п-толуолсульфона- та, а также антигипоксическое действие амтизола. Амтизол разрешен дл клинического изучени в качестве антигипоксиче- ского средства.3,5-Diamino-1,2,4-thiadiazole Samtizol) is described in the chemical literature as an intermediate product of organic synthesis. The radioprotective activity of amtisol and its p-toluenesulfonate, as well as the antihypoxic effect of amtisol are known. Amtizol is approved for clinical study as an antihypoxic agent.

Из антигипоксических свойств амтизола никак не вытекает обнаруженна противогриппозна активность, тем более, что известен очень широкий круг антигипоксан- тов, однако ни у одного из них ант ивирусна активность не вы влена. Противогриппозна активность амтизола обнаружена в экспериментах , посв щенных поиску средств предотвращени постстрессорного усугублени гриппозной инфекции у мышей. Обнаруженное антигриппозное свойство амтизола послужило основанием дл проведени целенаправленного исследовани , которое наиболее полно выполнено с использованием его солисукцината 3,5-диамино-1 ,2,4-тиадиазола,названногоNo anti-influenza activity was detected from the antihypoxic properties of amtisol, especially since a very wide range of antihypoxic drugs are known, but none of them showed antiviral activity. The anti-influenza activity of amtizol was found in experiments to find means of preventing post-stress exacerbation of influenza infection in mice. The discovered anti-influenza property of amtisol served as the basis for a focused study, which was most fully performed using its solisuccinate 3,5-diamino-1, 2,4-thiadiazole, named

сунамолом. Это вещество получено смешиванием эквимол рных количеств амтизола и нтарной кислоты.sunamol. This material was prepared by mixing equimolar amounts of amtisol and succinic acid.

Эксперименты выполнены на беспородных белых мышах самцах, массой 16-18 г, полученных из питомника Рэпполово. В работе использован патогенный дл мышэй вирус гриппа A/PR/8/34 с антигенной структурой H1N1.The experiments were performed on outbred white mice, males weighing 16-18 g, obtained from the Rappolovo nursery. Influenza virus A / PR / 8/34 with the antigenic structure H1N1 was used in the study.

Вирус получали заражением развивающихс 10-дневных куриных эмбрионов (КЭ). Инфекционную активность вируса определ ли стандартным титрованием 10-кратных разведений вируссодержащего материалаThe virus was obtained by infection of developing 10-day-old chicken embryos (CEs). Infectious activity of the virus was determined by standard titration of 10-fold dilutions of virus-containing material

на развивающихс КЭ и рассчитывали по известной методике и выражали в Ig эмбриональных инфицирующих доз (Ig ЭИДю). Определение летальной дл мышей дозы ал- лантоисного вируса проводили путем их интраназального заражени под легких эфирным наркозом соответствующими разведени ми вируссодержащего материала (в объеме 0,05 мл), использу на каждую точку определени не менее1|10 мышей. За однуon developing CEs and was calculated by a known method and expressed in Ig embryonic infectious doses (Ig EIDyu). The lethal dose of the allantoic virus for mice was determined by intranasal infection under lungs with ether anesthesia by appropriate dilutions of virus-containing material (in a volume of 0.05 ml) using at least 1 x 10 mice for each detection point. For one

летальную дозу принимали разведение вируссодержащего материала, обеспечивающее гибель 50% животных (LDso).a lethal dose was taken dilution of virus-containing material, ensuring the death of 50% of animals (LDso).

В соответствии с поставленными задачами экспериментальную гриппозную инфекцию моделировали интраназальным заражением мышей известными дозами вируса гриппа, обеспечивающими заданный уровень гибели животных. Дл оценки эффективности противовирусной защиты исследуемого препарата использовали метод математического планировани эксперимента с последующей обработкой на ЭВМ по разработанной программе.In accordance with the objectives, an experimental influenza infection was simulated by intranasal infection of mice with known doses of the influenza virus, which provide a given level of animal death. To assess the effectiveness of the antiviral protection of the studied drug, the method of mathematical design of the experiment was used, followed by computer processing according to the developed program.

В результате проведенных исследований установлен нар ду с профилактическим и лечебный эффект сунамола с отношении гриппа мышей, Отработаны оптимальные дозы и схема введени препарата.As a result of the studies, along with the prophylactic and therapeutic effect of sunamol with respect to the flu of mice, the optimal doses and the schedule of drug administration were developed.

Схема получени и физико-химическиеScheme of production and physicochemical

свойства сунамона.properties of sunamon.

П р и м е р 1. Амтизол получаетс в результате окислени 2-амидинотиомочеви- ны перекисью водорода и идентичен по свойствам известному.Example 1. Amtisol is obtained by oxidation of 2-amidinothiourea with hydrogen peroxide and is identical in properties to the known.

10 г амтизола и 10 г нтарной кислоты в измельченном состо нии смешивают с 80 г безводного этилового спирта, кип т т с обратным холодильником 10 мин и выпаривают под вакуумом досуха. Получают с почти количественным выходом сукцинатЗ,5-диа- мино-1,2,4-тиадиазола в виде блест щих белых кристаллов, т.пл. 150°С. Строение за вл емого соединени подтверждено данными элементарного анализа и ПМР- спектром.10 g of amtisol and 10 g of succinic acid in a crushed state are mixed with 80 g of anhydrous ethyl alcohol, refluxed for 10 minutes and evaporated to dryness in vacuo. Succinate 3, 5-diamino-1,2,4-thiadiazole is obtained in almost quantitative yield as brilliant white crystals, mp. 150 ° C. The structure of the claimed compound is confirmed by the data of elemental analysis and PMR spectrum.

Нэйдено.%: С30.61; Н 4,19; N 23.97. СбНюМ043.Unknown.%: C30.61; H 4.19; N, 23.97. SbNUM043.

Вычислено, %: С 30,77; Н 4,30; N 23,92. Calculated,%: C 30.77; H 4.30; N, 23.92.

Спектр ПМР. 100 МГц, д , м.д., в Д20: 3,93 с (NH), с ДМФА: d 7 8,26 с (NH), 10,00 с (NH).PMR spectrum. 100 MHz, d, ppm, in D20: 3.93 s (NH), with DMF: d 7 8.26 s (NH), 10.00 s (NH).

Результаты биологического исследовани сунамола.Results from a biological study of sunamol.

Критерием оценки противогриппозного действи препарата служило снижение гибели животных (мышей) при гриппозной инфекции . В результате проделанной работы установили противогриппозное действие су намола, выражающеес в снижении гибе- ли мышей при гриппе. С помощью метода математического планировани эксперимента найдены оптимальна доза и схема введени препарата, Показано, что максимальный защитный эффект сунамола при гриппе мышей развиваетс при его использовании в диапазоне 3-13 мг/кг массы мышей в случае как профилактического, так и лечебного применени сунамола.The criterion for evaluating the anti-influenza effect of the drug was the reduction in the death of animals (mice) during influenza infection. As a result of the work done, the anti-influenza effect of sumenol, which is expressed in a decrease in the death of mice during the flu, was established. Using the method of mathematical planning of the experiment, the optimal dose and regimen of the drug administration were found. It was shown that the maximum protective effect of Sunamol in mouse flu develops when used in the range of 3-13 mg / kg of mouse weight in case of both prophylactic and therapeutic use of Sunamol.

В таблице представлены данные не- скольких типичных опытов, иллюстрирующие профилактическое и лечебное противогриппозное действие сунамола при внутрибрюшинном и пероральном способах введени препарата.The table presents the data of several typical experiments illustrating the prophylactic and therapeutic anti-influenza effect of sunamol with intraperitoneal and oral methods of drug administration.

Установлено, что использование сунамола оказывает выраженный защитный эффект - снижает гибель животных приIt has been established that the use of sunamol has a pronounced protective effect - it reduces the death of animals with

гриппозной инфекции на 30-60% (см таблица , графа 6).influenza infection by 30-60% (see table, column 6).

Наибольшего внимани заслуживают два экспериментальных факта. Во-первых, сведени о наличии лечебного эффекта у исследуемого препарата, поскольку в насто щее врем не существует химиот р певти- ческих противогриппозных средств, обладающих лечебными свойствами. Во- вторых, существенно, чго способность сунамола снижать гибель мышей при гриппе про вл етс независимо от способа введени препарата интроперитонеально или пз- рорально. Последнее вл етс иенным свойством при разработке в дальнейшем широкодоступных и удобных лечебных форм.Two experimental facts deserve the greatest attention. Firstly, information about the presence of a therapeutic effect in the studied drug, since at present there is no chemotherapy for anti-influenza drugs with therapeutic properties. Secondly, it is essential that the ability of Sunamol to reduce the death of mice with influenza is manifested regardless of the method of administration of the drug introperitoneally or pozrorally. The latter is an important property in the development of further widely available and convenient therapeutic forms.

Сведени о токсичности сунамола.Sunamol toxicity information.

Определение токсичности сунамола при внутрибрюшинном введении проводили по Беренсу. Величина LDso составила 160 мг/кг. LDso сунамола при пероральном введении беспородным белым мышам составила 1120 мг/кг. Данный показатель определ ли по методике Прозоровского.The determination of toxicity of sunamol with intraperitoneal administration was carried out according to Behrens. The LDso value was 160 mg / kg. Sunamol LDso when administered orally to outbred white mice was 1120 mg / kg. This indicator was determined by the method of Prozorovsky.

По сравнению с известными противогриппозными средствами предлагаемое имеет р д существенных преимуществ.Compared with known anti-influenza agents, the present invention has a number of significant advantages.

Основное достоинство сунамола заключаетс в том, что в отличие от известных противогриппозных средств, он вл етс единственным химиотерапевтическим препаратом лечебного действи . По сравнению с протигриппозными препаратами биологической природы, какими вл ютс ингерфе- роны и вакцины, сунамол как синтетический продукт более доступен дл промышленного производства и стабилен при хранении.The main advantage of sunamol is that, unlike the known anti-influenza drugs, it is the only chemotherapeutic drug with therapeutic effect. Compared with protigripps of a biological nature, such as ingferferons and vaccines, Sunamol as a synthetic product is more available for industrial production and is stable during storage.

(56) М.Д.Машковский, Лекарс ненные средства. М.: 1988, ч. 2, с. 380.(56) M.D. Mashkovsky, Medicines. M .: 1988, part 2, p. 380.

K.Stratton et al. - Intern J Radiation Biolog, 1962, v. 5, p. 105-121.K. Stratton et al. - Intern J Radiation Biolog, 1962, v. 5, p. 105-121.

720007868720007868

Снижение гибели беспородных мышей при гриппозной инфекции под вли нием сунамолаDecreased death of outbred mice with influenza infection under the influence of Sunamol

Доза препарата 5 мг/кг или 10 мг/кг. соответственно при введении внутрибрюшинно и пероральноThe dose of the drug is 5 mg / kg or 10 mg / kg. respectively, when administered intraperitoneally and orally

Примечание. Сведени , содержащиес в графах таблицы: 1 - пор дковый номер эксперимента;Note. The information contained in the columns of the table: 1 - the serial number of the experiment;

2- группа зараженных вирусом животных нелеченных (контроль) и леченных (опыт);2- group of virus-infected animals untreated (control) and treated (experience);

3и 4 способ введени препарата, соответственно, внутрибрюшинно или перораль (лечебна или проифлактическа схема);3 and 4 the route of administration of the drug, respectively, intraperitoneally or orally (therapeutic or pro-prophylactic regimen);

5- гибель мышей в каждой группе животных на 14-е сут. после заражени , %; 5 - the death of mice in each group of animals on the 14th day. after infection,%;

6- разница в гибели мышей в каждом отдельном опыте между контрольной или опытной группами животных.6 - the difference in the death of mice in each individual experiment between the control or experimental groups of animals.

Claims

SUMMARY OF THE INVENTION Use of succinate 3,5-diamino-1,2,4 antiviral agent for influenza-thiadiazole as an antiviral

Drugs for influenza infection.

NO INFECTIONS