[go: up one dir, main page]

RS63572B1 - Urat1 inhibitor i njegova upotreba - Google Patents

Urat1 inhibitor i njegova upotreba

Info

Publication number
RS63572B1
RS63572B1 RS20220866A RSP20220866A RS63572B1 RS 63572 B1 RS63572 B1 RS 63572B1 RS 20220866 A RS20220866 A RS 20220866A RS P20220866 A RSP20220866 A RS P20220866A RS 63572 B1 RS63572 B1 RS 63572B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
ethylimidazo
compound
group
dibromo
mixture
Prior art date
Application number
RS20220866A
Other languages
English (en)
Inventor
Dongfang Shi
Changjin Fu
Xi Cheng
Jianghua Zhu
Jie Gu
Original Assignee
Jiangsu Atom Bioscience And Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=62172162&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS63572(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Jiangsu Atom Bioscience And Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Jiangsu Atom Bioscience And Pharmaceutical Co Ltd
Priority claimed from PCT/CN2017/111013 external-priority patent/WO2018090921A1/zh
Publication of RS63572B1 publication Critical patent/RS63572B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
    • C07D307/79—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D307/80—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/048—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being five-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
Polje tehnike pronalaska
[0001] Pronalazak je iz oblasti medicinske hemije i posebno se odnosi na klasu jedinjenja inhibitora URAT1 i njihovu primenu u medicini.
Osnova pronalaska
[0002] Mokraćna kiselina je finalni produkt metabolizma purina u ljudskom organizmu. Zbog odsustva rasburikaze u ljudskom organizmu, serum mokraćne kiseline (sUA) ne može dalje da se razgradi i višak sUA treba da se izluči iz organizma preko bubrega i crevnog trakta. Bubrezi su glavni organ preko koga se približno 70% mokraćne kiseline izluči iz ljudskog organizma. Prema tome, kapacitet transporta mokraćne kiseline u bubrezima može direktno da reguliše sUA. Zbog poremećaja metabolizma purina koji dovodi do povećanja sUA ili prekomernog unosa hrane sa visokim sadržajem purina i nedovoljne renalne eliminacije mokraćne kiseline, akumulira se velika količina sUA što dovodi do hiperurikemije.
Generalno, hiperurikemija se definiše kao koncentracija sUA veća od 7 mg/dL za muškarce i 6 mg/dL za žene. Kod približno 80% do 85% pacijenata, hiperurikemija je izazvana nedovoljnom eliminacijom mokraćne kiseline preko bubrega što dovodi do akumulacije sUA (Cheeseman C. Solute carrier family 2, member 9 and uric acid homeostasis. Current Opinion in Nephrology and Hypertension, 2009, 18(5):428-432). Kada je koncentracija sUA zasićena, kristali urata se talože u zglobovima, tetivama, bubrezima i drugim tkivima ljudi, što dovodi do gihta (Richette P, Bardin T. Gout. Lancet.2010, 375(9711):318-328). Giht će da dovede do uratne nefropatije i nefrolitiaza mokraćne kiseline, što vodi ka renalnoj insuficijenciji. Međutim, giht i hiperurikemija su značajno i pozitivno u korelaciji sa bolestima kao što su hiperlipidemija, hipertenzija, dijabetes i ateroskleroza (Rho YH, Woo JH, Choi SJ, i saradnici.
Association between serum uric acid and adult treatment panel III-defined metabolic syndrome: results from single hospital database. Metabolism. 2008, 57:(1)71-76). Giht i hiperurikemija ozbiljno pogađaju zdaravlje ljudi i kvalitet života.
[0003] Giht je druga najveća metabolička bolest posle dijabetesa i od strane Ujedinjenih Nacija je naveden kao jedna od 20 upornih bolesti u 21. veku. Sa poboljšanjem životnog standarda ljudi i produžetkom prosečnog životnog veka ljudi, incidence hiperurikemije i gihta su u porastu. Giht se javlja kod približno 1%-2% ljudi u svetu. Pojava je relativno visoka u razvijenim zemljama, po istraživanju iz 2007-2008., bilo je približno 8.3 miliona pacijenata sa gihtom u US. Slučajevi gihta u Velikoj Britaniji i Nemačkoj su dostigli 1.4% u 2000 do 2005. (Annemans L, Spaepen E, Gaskin M, i saradnici. Gout in UK and Germany: prevalence, comorbidities, and management in general practice 2000-2005. Annals of Rheumatic Diseases, 2008, 67(7): 960-966). U Kini, incidenca gihta je dramatično porasla u poslednjoj dekadi. Objavljeno je da je broj pacijenata sa gihtom u Kini premašio 50 miliona, a broj muškaraca sa gihtom je mnogo veći nego kod žena. Epidemiološka studija na 3978 osoba starosti od 40 do 74 godine u urbanoj oblasti Šangaja, izvedena 2010. godine, pokazala je da približno 25% muškaraca boluje od hiperurikemije (Raquel Villegas, Xiang YB, Cai QY, i saradnici. Prevalence and determinants of hyperuricemia in middle-aged, urban Chinese men. Metabolic Syndrome and Related Disorders, 2010, 8(3): 263-270). Kod približno 5% do 12% pacijenata sa hiperurikemijom će eventualno da se razvije giht (Peng Jianbiao, Sun Piaoyang. Cycloalkyl acid derivative, preparation method thereof, and pharmaceutical application thereof. Shanghai Hengrui Pharm Co., Ltd. WO2014183555A1).
[0004] Lekovi za tretman akutnog napada gihta uglavnom uključuju kolhicin, ne-steroidne antiinflamatorne lekove (NSAIDs), adrenokortikotropni hormon i glukokortikoide. Kolhicin ima dobru efikasnost za lečenje akutnog napada gihta, ali ima ozbiljne neželjene reakcije, kao što su dijareja, povraćanje i bolni grčevi abdomena. Mnogi NSAIDi imaju ozbiljne gastrointestinalne neželjene reakcije. Ovi lekovi mogu samo privremeno da ublaže bol kod pacijenata, a ne mogu da smanje koncentraciju sUA i da eliminišu naslage urata u organizmu.
[0005] Za fundamentalno lečenje gihta, sUA mora da bude kontrolisana na normalnoj vrednosti lekovima koji snižavaju sUA. Regulisanje vrednosti sUA je dugotrajni tretman i uglavnom obuhvata sledeća dva pristupa: inhibiciju produkcije mokraćne kiseline i poboljšanje izlučivanja mokraćne kiseline.
[0006] Ksantin oksidaza, kao enzim za metabolizam nukleotida u organizmu, je ključni enzim za generisanje mokraćne kiseline. Inhibitori produkcije mokraćne kiseline mogu efikasno da smanje vrednosti sUA inhibicijom funkcije ksantin oksidaze čime se redukuje produkcija mokraćne kiseline. Najčešće korišćeni lekovi su alopurinol i ulorik. Alopurinol je jedan od inhibitora ksantin oksidaze. Treba da se uzima u velikoj dozi, a kod nekih ljudi može da izazove ozbiljne multiformne eriteme na koži, koji su ponekad fatalni. Ovo je često praćeno oštećenjem jetre i drugim neželjenim efektima. Drugi inhibitor ksantin oksidaze je pod nazivom ulorik (febuksostat), koji je u upotrebi u Evropi i US od 2009. Ulorik takođe ima veoma ozbiljne neželjene efekte kao što su kardiovaskularni problem i gastrointestinalni poremećaj, a može da izazove glavobolje i oštećenje jetre. Pacijenti sa gihtom ne mogu da postignu normalne vrednosti sUA primenom febuksostata u dužem vremenskom periodu.
[0007] Naredni glavni pristup za lečenje gihta je da se podstakne izlučivanje mokraćne kiseline. Mehanizam uključuje inhibiciju transporta mokraćne kiseline preko humanog transportera 1 anjona urata (hURAT1) smeštenog u proksimalnoj tubularnoj epitelijalnoj ćelijskoj membrani da se smanji reapsorpcija mokraćne kiseline u bubrezima i poveća renalno izlučivanje mokraćne kiseline. Kao najvažniji protein reapsorpcije mokraćne kiseline u ljudskom organizmu, hURAT1 se specifično ekspresuje na ivičnim membranama epitelijalnih ćelija humanih bubrežnih proksimalno uvijenih tubula i kontroliše više od približno 90% reapsorpcije mokraćne kiseline nakon glomerularne filtracije (Wempe MF, Jutabha P, Quade B, i saradnici. Developing potent human uric acid transporter 1 (hURAT1) inhibitors. Journal of Medicinal Chemistry. 2011, 54: 2701-2713). hURAT1 je enkodiran SLC22A12 genom koji ima više mutacija koje izazivaju nenormalni metabolizam mokraćne kiseline. Meta-analize pokazuju da ovaj gen ima 0.13% promenljivih koje utiču na vrednost sUA (So A, Thorens B. Uric acid transport and disease. Journal of Clinical Investigation, 2010, 120(6): 1791-1799).
[0008] Trenutno, na tržištu prisutni urikosurični lekovi za tretman gihta su inhibitori URAT1, uključujući Benzbromaron, Zurampic, probenecid i sulfinpirazon. Zurampic proizvođača AstraZeneca je odobren za lečenje gihta u kombinaciji sa alopurinolom u dozi od 200 mg/dan u Sjedinjenim Državama u decembru 2015. a u Evropi u februaru 2016. godine. Ali, njegova efikasnost je mnogo manja nego efikasnost benzbromarona. Pored toga, FDA zahteva da njegova ozbiljna bubrežna toksičnost treba da se naznači upozorenjem crnim uokvirenim delom u specifikaciji. Ovaj lek takođe ima veoma ozbiljnu kardiovaskularnu toksičnost i druga neželjena dejstva. I probenecid i sulfinpirazon su urikosurična sredstva koja se primenjuju u velikim dozama uz malu efikasnost i lošim neželjenim efektima.
[0009] Benzbromaron kao URAT1 inhibitor je i dalje široko korišćen na tržištu za tretman gihta. Njegov hemijski naziv je (3,5-dibromo-4-hidroksi-fenil) (2-etilbenzofuran-3-il)metanon, i razvila ga je francuska Snaofi-Synthelabo kompanija i pokrenula proizvodnju 1976. Međutim upotreba benzbromarona nije bila odobrena u US i povučena je sa tržišta u najvećem broju evropskih zemalja 2003. godine zbog svoje ozbiljne toksičnosti na jetru. (Jansen TL, Reinders MK, van Roon EN, i saradnici. Benzbromaron withdrawn from European market: another case of "absence of evidence is evidence of absence". Clinical Experimental Rheumatology, 2004, 22(5):651). Naredni nedostatak ovog leka je taj što ima jak inhibitorni efekat na CYP2C9 P450a enzim, što za rezultat ima oštećenje jetre i interakcije lek-lek. Međutim, više od 20 zemalja, kao što su Kina, Nemačka, Japan, Brazil i Novi Zeland ga još uvek široko koriste zbog nedostatka dobrih lekova na tržištu.
[0010] Studije su pokazale da je fulminant ili fatalno oštećenje jetre zbog upotrebe benzbromarona povezano sa njegovim reaktivnim metabolitima. Mogući mehanizam toksičnosti za jetru može da uključi bioaktivaciju benzbromarona preko sekvencijalne hidroksilacije benzofuran prstena da se sa CYP2C9 formira 6-hidroksibenzbromaron i katehol, koji može dalje da oksidiše sa P450s enzimima u reaktivni hinon metabolit sposoban da pripoji tiol reagense/cistein ostatke. (Matthew G. McDonald MG, Rettie AE. Sequential metabolism and bioactivation of hepatotoxin benzbromarone: formation of glutatione adducts from catechol intermediate. Chemical Research in Toxicology.2007, 20 (12):1833-1842). Benzbromaron takođe ima druge neželjene efekte, kao što su dijareja, poremećaji u želucu, mučnina, pege, crvenilo, svrab i tako dalje.
[0011] Trenutno, jedinjenja za tretman gihta u kliničkom ispitivanju uključuju URAT1 inhibitor RDEA-3170 od AstraZeneca u fazi II kliničkih ispitivanja a produkti od Pfizer, BioCryst Pharmaceutical Company, LG life Sciences in Korea, Korea, Cymabay Theraoeutics, JW Pharmaceutical, Chugai Pharmaceutical, Fuji Yakuhin and Sanwa Kagaku su takođe u fazi I ili II kliničkih ispitivanja. URAT1 inhibitor razvijen od strane Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Company je ušao u fazu I kliničkih ispitivanja u Kini, a njegova hemijska struktura ima veliku sličnost sa dva jedinjenja AstraZeneca. Međutim, najveći broj ovih jedinjenja još uvek pokazuje malu efikasnost a ozbiljnu toksičnost.
[0012] Trenutno, širom sveta postoji samo nekoliko lekova za tretman gihta, a ovi lekovi generalno imaju nedostatke zbog male efikasnosti i ozbiljnih neželjenih efekata. Prema tome, veoma je važno da se razviju lekovi za giht koji su visoko efikasni a imaju malu toksičnost.
Kratak sadržaj pronalaska
[0013] Namera ovog pronalaska je da obezbedi serije novih jedinjenja zasnovanih na postojećim tehnologijama, sa ciljem da se obezbedi URAT1 inhibitor koji ima malu toksičnost i dobru efikasnost za tretman hiperurikemije i gihta. Rezultati testova pokazuju da jedinjenja obezbeđena ovim pronalaskom imaju veoma dobar inhibitorni efekat na hURAT1 transport mokraćne kiseline u HEK293 transfektovanim ćelijama, što ukazuje da jedinjenja imaju dobar prospekt primene u tretmanu hiperurikemije ili gihta.
[0014] Predmet pronalaska može da se postigne sledećim merama:
pronalazak se odnosi na jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu je jedinjenje izabrano od jedinjenja pokazanih niže opisanim strukturama:
pri čemu:
Y je karbonil, sumpor, sulfon, sulfoksid, opciono supstituisana metilen ili imino grupa;
R<1>je vodonik, deuterijum, hidroksi, halogen, nitro, amino, cijano, C1-3alkil, supstituisana C1-3alkil, supstituisana C1-3amino, C1-3alkoksi ili supstituisana C1-3alkoksi grupa;
R<2>je vodonik, halogen, nitro, cijano, C1-3alkil ili C1-3haloalkil grupa;
R<3>je C1-4alkil, supstituisana C1-4alkil grupa ili halogen;
m je ceo broj od 0 do 3;
n je 1 ili 2;
supstituent na grupi Y je izabran iz grupe koja se sastoji od hidroksil, amino, cijano, karboksil, C1-3alkoksi ili C1-3alkil grupe, supstituent u grupi R<1>, R<2>ili R<3>je izabran iz grupe koja se sastoji od hidroksil, halogen, nitro, amino ili cijano grupe;
u formuli (II-D) i formuli (III-A), Y nije karbonil grupa;
pod uslovom da jedinjenje nije 2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)-(4-hidroksifenil)-metanon.
[0015] U preferiranom ostvarenju, u gore datim formulama, Y je CH-OH, CH-NH2, CH-CN, NH (imino), NCH3ili CO (karbonil) grupa, a R<3>je C2-3alkil grupa; u formuli (II-D) i formuli (III-A), Y nije karbonil grupa.
[0016] U preferiranom ostvarenju, R<1>je vodonik, deuterijum, hidroksi, halogen, nitro, amino, cijano, C1-3alkil, C1-3haloalkil, C1-3alkoksi ili C1-3haloalkoksi grupa, m je 0, 1 ili 2.
[0017] U preferiranom ostvarenju, R<2>je vodonik, halogen, nitro, cijano, C1-3alkil, C1-3haloalkil grupa, n je 1 ili 2.
[0018] U još poželjnijem ostvarenju, obezbeđena su jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli u skladu sa ovim pronalaskom, pri čemu su jedinjenja izabrana iz grupe koja se sastoji od:
(3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-alpirimidin-3-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanona;
3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila;
5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila;
2,6-dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)hidroksimetil]fenola;
2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)hidroksimetil]fenola;
2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-6-fluorofenola; 2,6-dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroksimetil]fenola;
2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]fenola;
2,6-dibromo-4-{[(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridin-3-il)]hidroksimetil}-fenola; 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metil]fenola;
(3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(6-etilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiodiazol-5-il)metanona;
2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil-6-metilfenola;
2,6-dibromo-4-{(2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil}fenola.
[0019] Niže je dat postupak za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska:
[0020] U formuli, amino prsten A (piridin, pirimidin, tiazol, pirazin, itd.) jedinjenja prelazi u amid (ili hidrazin) jedinjenje a nakon toga reaguje sa supstituisanim bromoacetofenonom da se dobije odgovarajući imidazo prsten A (piridin, pirimidin, tiazol, pirazin ili slično) jedinjenje koje se podvrgava reakciji demetilacije, halogenacije i/ili reakciji redukcije ili nekoj drugoj reakciji da se dobije odgovarajući ciljani produkt.
[0021] U formuli, so amino prstena A (piridin, pirimidin, pirazin, itd.) se podvrgava reakciji zatvaranja prstena sa alkinom da se dobije odgovarajući pirazolo prsten A (piridin, pirimidin, pirazin, itd.) jedinjenja, jedinjenje dobijeno nakon hidrolize i dekarboksilacije reaguje sa acil hloridom uz Luisovu kiselinu kao katalizator, da se dobije diaril keton jedinjenje, koje se podvrgava demetilaciji, halogenaciji i/ili redukciji ili drugoj reakciji da se dobije odgovarajući ciljani produkt.
[0022] Definicija svake grupe u postupku sinteze je prethodno opisana.
[0023] Ukoliko nije drugačije navedeno, naredni nazivi korišćeni u patentnim zahtevima i specifikacijama imaju sledeća značenja:
"petočlani aromatični prsten" se odnosi na grupu konjugovanog, osnovnog prstenastrukturisanog spojenog prstena sastavljenog od pet atoma u prstenu, koji je aromatičan a atom prstena može da bude atom različit od atoma ugljenika, to jest, hetero atom. Kada petočlani aromatični prsten sadrži hetero atom, hetero atom može da bude N, S ili O, a broj hetero atoma nije ograničen na jedan, i može da bude dva, tri ili slično. Petočlani aromatični prsten koji sadrži hetero atom(e) u ovom pronalasku uključuje, ali bez ograničenja na, triazol prsten, imidazol prsten, tiazol prsten, oksazol prsten, oksadiazol prsten ili tiadiazol prsten, itd.
[0024] "šestočlani aromatični prsten" se odnosi na grupu konjugovanog, osnovnog prstenastrukturisanog spojenog prstena sastavljenog od šest atoma u prstenu, koji je aromatičan a atom prstena može da bude atom različit od atoma ugljenika, to jest, hetero atom. Kada šestočlani aromatični prsten sadrži hetero atom, hetero atom može da bude N, S ili O, a broj hetero atoma nije ograničen na jedan, i može da bude dva, tri ili slično. Šestočlani aromatični prsten koji sadrži hetero atom(e) u ovom pronalasku uključuje, ali bez ograničenja na, piridin prsten, pirimidin prsten, pirazin prsten, itd.
[0025] "Vodonik" označava protijum (1H), koji je glavni stabilni izotop vodonika.
[0026] "Deuterijum" označava stabilni morfološki izotop vodonika, takođe poznat kao teški vodonik, a njegov osnovni simbol je D.
[0027] "Halogen" označava atom fluora, atom hlora, atom broma ili atom joda.
[0028] "Alkil" označavaju zasićenu C1-20alifatičnu ugljovodoničnu grupu, uključujući i grupe ravnog lanca i račvastog lanca (numerički opsezi zabeleženi u ovoj prijavi, kao što je "1-20", označava da grupa, kada je to alkil grupa, može da sadrži 1 atom ugljenika, 2 atoma ugljenika, 3 atoma ugljenika, itd. do 20 atoma ugljenika). Alkil grupa koja ima 1 do 4 atoma ugljenika je označena kao niža alkil grupa. Kada niža alkil grupa nema supstituent, označena je kao nesupstituisana niža alkil grupa. Još poželjnijie, alkil grupa je alkil grupa srednje veličine koja ima 2 do 5 atoma ugljenika. Alkil grupa u ovom pronalasku je, na primer, metil, etil, propil, 2-propil, n-butil, izobutil, t-butil ili pentil. Poželjno je, alkil grupa je niža alkil grupa koja ima 1 do 4 atoma ugljenika, kao što su metil, etil, propil, 2- propil, n-butil, izobutil ili t-butil. Alkil grupa množe da bude supstituisana ili nesupstituisana.
[0029] "Alkoksi" označava -O- (nesupstituisana alkil). Reprezentativni primeri uključuju, ali bez ograničenja na, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, i slično.
"Karbonil" označava C=O.
"Sulfon grupa" označava -S(O)2-.
"Tionilen grupa" označava -S(O)-.
"Metilen" označava -CH2-.
"Imino" označava -NH-.
"Hidroksi" označava -OH.
"Nitro" označava -NO2.
"Amino" označava -NH2.
"Karboksi" označava -COOH.
"Cijano" označava -CN.
[0030] "Farmaceutski prihvatljiva so" je so koja uključuje jedinjenje kako je prethodno definisano sa organskom ili neorganskom kiselinom, uključujući one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i osobine osnovnog jedinjenja. Ovakve soli uključuju:
1
(1) so nastalu dodavanjem kiseline dobijenu reakcijom slobodne baze osnovnog jedinjenja sa neorganskom ili organskom kiselinom, kao što su, ali bez ograničenja na, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina, metafosforna kiselina, sumporna kiselina, sumporasta kiselina i perhlorna kiselina, itd., organska kiselina, kao što su, ali bez ograničenja na, sirćetna kiselina, propionska kiselina, akrilna kiselina, oksalna kiselina, (D) ili (L) jabučna kiselina, fumarna kiselina, maleinska kiselina, hidroksibenzoeva kiselina, γ-hidroksibuterna kiselina, metoksibenzoeva kiselina, ftalna kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, naftalen-1-sulfonska kiselina, naftalen-2-sulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina, salicilna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, mlečna kiselina, mandelinska kiselina, sukcinska kiselina ili malonska kiselina.
(2) so dobijena zamenom kiselog protona u osnovnom jedinjenju sa jonom metala ili stvaranjem kompleksa sa organskom bazom, jon metala je, kao što je jon alkalnog metala, jon zemno alkalnog metala ili jon aluminijuma, organska baza je, na primer, etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metilglukamin, i slično.
[0031] "Farmaceutska kompozicija" označava smešu jednog ili više ovde opisanih jednjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli ili prolekova sa drugim hemijskim sastojcima, kao što su farmaceutski prihvatljivi nosači i podloge. Svrha farmaceutske kompozicije je da omogući primenu jedinjenja u organizam.
[0032] U daljem tekstu, ukoliko nije drugačije navedeno, treba da se razume da su jedinjenja, kako je prethodno definisano, kao aktivni sastojci terapeutskih sredstava uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli, obuhvaćena okvirom pronalaska. U datoj specifikaciji, ovakva jedinjenja su jednostavno označena kao "jedinjenja kako je prethodno definisano" samo iz praktičnih razloga.
[0033] Ovaj pronalazak obuhvata farmaceutsku kompoziciju koja uključuje bilo koje jedinjenje iz ovog pronalaska kao aktivni sastojak, njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao i farmaceutski prihvatljivu podlogu.
[0034] Svako jedinjenje iz ovog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ima malu toksičnost i dobar medicinski efekat i može da se koristi za proizvodnju medikamenta za povećanje izlučivanja mokraćne kiseline, preciznije, za tretman ili prevenciju hiperurikemije ili gihta. Eksperimenti pokazuju da jedinjenja obezbeđena u ovom pronalasku imaju veoma dobar inhibitorni efekat na hURAT1 transport mokraćna kiselina u HEK293 transfektovanim ćelijama, što ukazuje da jedinjenja imaju dobre izglede za primenu u tretmanu hiperurikemije ili gihta.
Detaljan opis pronalaska
[0035] Ovaj pronalazak će dalje biti opisan u nastavku pomoću ostvarenja.
Ostvarenje 1: Sinteza (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-pirimidin-3-il)metanona (4)
[0036]
[0037] Faza A: Smeša 2-aminopirimidina (570 mg, 6.0 mmol), fosfor oksihlorida (4.6 g, 30.0 mmol), N,N-dimetilpropionamida (910 mg, 9.0 mmol) i metilbenzena (15 mL) se meša 2 h na 110°C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu, nakon toga sipa u ledenu vodu (60 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida dok se ne postigne pH vrednost 8-9. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx5) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200-300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar = 1:1 do 20:1) da se dobije N,N-dimetil- N’-(pirimidin-2-il)-propanimidamid (1) (250 mg). Prinos je 23.4%. Faza B: smeša jedinjenja 1 (240 mg, 1.35 mmol), 2-bromo-1-(4-metoksifenil)etanona (308 mg, 1.35 mmol) i DMF (10 mL) se meša 2 h na sobnoj temperaturi, nakon toga zagreje na 60°C i kontinuirano meša 1.5 h. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (40 mL), podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata do vrednosti pH 7 - 8 i ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3). Kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL), a nakon toga suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200-300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:4 do 2:5) da se dobije (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-metoksifenil)metanon (2) (190 mg). Prinos je 50.0%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.45-9.43 (m, 1H), 8.77-8.75 (m, 1H),7.74 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 7.31-7.29 (m,1H), 7.12 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.52-2.51 (m, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0038] Faza C: Rastvor 1.0 M bor tribromida u metilbenzenu (1.7 mL) se u kapima doda u rastvor jedinjenja 2 (120 mg, 0.427 mmol) u anhidrovanom dihlormetanu (10 mL) u ledenom kupatilu, a dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se sipa u ledenu vodu (20 mL) i podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti pH 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar: THF=1:5:1 do 5:5:1) da se dobije (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-hidroksifenil)metanon (3) (101 mg). Prinos je 88.5%.
[0039] Faza D: Rastvor broma (66 mg, 0.413 mmol) u sirćetnoj kiselini (2 mL) se u kapima doda u rastvor jedinjenja 3 (50 mg, 0.187 mmol) i natrijum acetata (46 mg, 0.561 mmol) u sirćetnoj kiselini (5 mL) i dobijena smeša se meša 0.5 h na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se u kapima dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogen sulfita dok boja ne izbledi. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i u reaktivnu smešu se doda voda (30 mL) i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx2) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt rekristališe sa smešom etil acetat/petrol etar da se dobije (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)metanon (4).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.42 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 1H), 8.78 (dd, J = 2.0, 7.6 Hz, 1H), 7.91 (s, 2H), 7.34-7.31 (m, 1H), 2.51-2.48 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 426.0 [M+H]<+>.
Ostvarenje 2: Sinteza (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(6-etilimidazo[2,1-b]-tiazol-5-il)metanona (8)
1
[0041] Faza A: Smeša 2-aminotiazola (600 mg, 6.0 mmol), fosfor oksihlorida (4.6 g, 30.0 mmol), N,N-dimetilpropionamida (910 mg, 9.0 mmol) i metilbenzena (15 mL) se meša 2 h na 110°C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu, nakon toga sipa u ledenu vodu (60 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3), a kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom.
Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije N,N-dimetil-N’-(tiazol-2-il)propanimidamid (5) (890 mg). Prinos je 80.9%. Faza B: Smeša jedinjenja 5 (439 mg, 2.40 mmol), 2-bromo-1-(4-metoksifenil)etanona (604 mg, 2.64 mmol) i DMF (10 mL) se meša 1 h na sobnoj temperaturi, nakon toga zagreje na 60°C i kontinuirano meša 5 h, a nakon toga zagreje na 130°C i meša u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (40 mL), pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata do vrednosti 7 - 8 i ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3). Kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL), a nakon toga suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:30 do 1:20) da se dobije (6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il) -(4-metoksifenil)metanon (6) (311 mg). Prinos je 45.3%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.14 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.45 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0042] Faza C: Rastvor 1.0 M bor tribromida u metilbenzenu (1.6 mL) se u kapima doda u rastvor jedinjenja 6 (113 mg, 0.395 mmol) u anhidrovanom dihlormetanu (10 mL) u ledenom kupatilu i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se sipa u ledenu vodu (20 mL) i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: dihlormetan =1:2) da se dobije (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-hidroksifenil)-metanon (7) (39 mg). Prinos je 36.3%.
[0043] Faza D: NBS (48 mg, 0.270 mmol) se doda u rastvor jedinjenja 7 (37 mg, 0.136 mmol) u DMF (3 mL) i dobijena smeša se meša 0.5 h na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (20 mL) i filtrira. Filter pogača se ispere sa velikom količinom vode, a dobijeni čvrsti ostatak se rastvori sa smešom rastvarača THF/etil acetat i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Smeša se filtrira preko ploče silika gela da se dobije (3,5-dibromo-4-hidroksifenil) (2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)-metanon (8) (40 mg). Prinos je 68.4%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.14 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.86 (s, 2H), 7.46 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 2.43 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 430.9 [M+H]<+>.
Ostvarenje 3: Sinteza (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-pirazin-3-il)metanona (12)
[0044]
[0045] Faza A: Trietilamin (4.68 g, 46.2 mmol) se u kapima doda u smešu 2-aminopirazina (2.0 g, 21.0 mmol), fosfor oksihlorida (4.84 g, 31.6 mmol), N,N-dimetilpropionamida (2.34 g, 23.1 mmol) i hlorforma (20 mL) u ledenom kupatilu, a dobijena smeša se refluksuje i meša u toku noći. Reaktivna smeša se sipa u ledenu vodu (60 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (50
1
mL35), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Nakon toga, smeša se filtrira na kratkoj koloni silika gela, a rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije N,N-dimetil-N’-(pirazin-2-il)propanimidamid (9) (1.82 g). Jedinjenje se direktno koristi u sledećoj reakciji bez prečišćavanja.
[0046] Faza B: Smeša sirovog jedinjenja 9 (900 mg), 2-bromo-1-(4-metoksifenil)-etanona (1.27 g, 5.54 mmol) i THF (25 mL) se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (50 mL), pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata do vrednosti 7 - 8, i ekstrahuje sa etil acetatom (50 mLx3). Kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:4 do 2:5) da se dobije (2- etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)(4-metoksifenil)metanon (10) (160 mg). Ukupan prinos reakcija u fazama A i B je 5.5%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.23 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.93-8.91 (m, 1H), 8.14 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 7.12 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.57 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0047] Eksperimentalne operacije u fazama C i D su povezane sa fazama C i D u ostvarenju 1 da se dobije (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanon (12).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.59-8.58 (m, 1H), 7.98-7.97 (m, 1H), 7.72 (s, 2H), 2.71 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.27 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 426.0 [M+H]<+>.
Ostvarenje 4: Sinteza 3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila (20)
[0048]
1
[0049] Faza A: 2-aminopiridin (2.0 g, 21.3 mmol) i trietilamin (2.58 g, 25.5 mmol) se rastvore u dihlormetanu (20 mL) i u kapima se u ledenom kupatilu doda propionil hlorid (2.07 g, 22.4 mmol), a dobijena smeša se automatski zagreje na sobnu temperaturu i meša u toku noći. U smešu se doda voda (40 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (40 mLx3), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar = 1:15 do 1:10) da se dobije N-(piridin-2-il)-propionamid (13) (2.74 g). Prinos je 85.6%.
[0050] Faza B: 4-metoksiacetofenon (44 g, 293 mmol) se u ledenom kupatilu doda u smešu 1-hlormetil-4-fluoro-1,4- diazabiciklo[2.2.2]oktan bis(tetrafluoroborata) (104 g, 294 mmol), joda (38.6 g, 152 mmol) i acetonitrila (440 mL). Nakon dodavanja, dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se doda voda (1350 mL) i izdvoji se velika količina čvrste supstance. Smeša se filtrira i suši da se dobije 3-jod-4-metoksiacetofenon (14) (70.0 g). Prinos je 86.5%.
[0051] Faza C: Smeša jedinjenja 14 (70.0 g, 254 mmol), bakar cijanida (34.0 g, 380 mmol) i DMF (400 mL) se meša u toku noći na 130°C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz celite, doda se voda (1600 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (800 mLx3). Kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (400 mLx2) i slanim rastvorom (400 mL), a nakon
1
toga suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije 5-acetil-2-metoksibenzonitril (15) (50.0 g). Jedinjenje se direktno koristi u sledećoj reakciji bez dodantog tretmana.
[0052] Faza D: Rastvor broma (49.0 g, 307 mmol) u metanolu (50 mL) se u kapima doda u rastvor sirovog jedinjenja 15 (45.0 g) u metanolu (250 mL) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (900 mL), filtrira i suši da se dobije 5-(2-bromo-acetil)-2-hidroksi-3-metilbenzonitril (16) (41.0 g). Ukupan prinos reakcija u fazama B i C je 70.6%.
[0053] Faza E: Smeša jedinjenja 16 (41.0 g, 161 mmol), jedinjenja 13 (24.0 g, 161 mmol) i metil-benzena (600 mL) se refluksuje i meša 48 h. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (400 mL) i pH podesi sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (600 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200- 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:30 do 2:1) da se dobije 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-karbonil)-2-metoksibenzonitril (17) (25.7 g). Prinos je 52.3%.
[0054] Faza F: 60% natrijum hidrid (4.8 g, 120 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor etantiola (8.4 mL) u THF (30 mL), smeša se meša približno 5 min i nakon toga filtrira i filter pogača se sakupi. Nakon toga, filter pogača se doda u smešu koja sadrži jedinjenje 17 (9.0 g, 29.5 mmol) i DMF (25 mL), i dobijena smeša se meša 2 h na 60°C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz celite, doda se voda (100 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom limunske kiseline do vrednosti 5 - 6. Smeša se filtrira i filter pogača kristališe sa acetonitrilom da se dobije 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-karbonil)-2- hidroksibenzonitril (18) (7.2 g). Prinos je 83.8%.
[0055] Faza G: NBS (5.28 g, 29.7 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor jedinjenja 18 (7.2 g, 24.7 mmol) u DMF (70 mL) i dobijena smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (210 mL) i filtrira, a filter pogača se ispere sa vodom (100 mLx3) i rekristališe sa acetonitrilom da se dobije 3-bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-karbonil)-2-hidroksibenzonitril (19) (7.0 g). Prinos je 76.8%.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9.01 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.78-7.75 (m, 1H), 7.65-7.59 (m, 1H), 7.22-7.17 (m, 1H), 2.58-2.50 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 368.0 [M-H]-.
[0056] Faza H: natrijum borhidrid (50 mg, 1.32 mmol) se doda u rastvor jedinjenja 19 (50 mg, 0.135 mmol) u metanolu (5 mL) i dobijena smeša se meša 0.5 h na sobnoj temperaturi a
1
nakon toga doda natrijum borhidrid (50 mg, 1.32 mmol). Smeša se meša 0.5 h, doda se voda (20 mL), pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom limunske kiseline do vrednosti 5 - 6, ekstrahuje sa smešom etil acetat/THF (7V/1V, 30 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 30 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar: THF=10:30:1 do 20:10:1) da se dobije 3-bromo-5-[(2-etilimidazo-[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitril (20).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.18 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 7.24-7.20 (m, 1H), 6.84-6.82 (m, 1H), 6.33 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 2.71 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 372.1 [M+H]<+>.
Ostvarenje 5: Sinteza 5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila (21)
[0057]
[0058] Jedinjenje 18 se koristi kao sirovi materijal, a postupak za izradu jedinjenja 21 je isti kao u fazi H u ostvarenju 4.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.14 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.48-7.45 (m, 2H), 7.25-7.22 (m, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 6.85-6.83 (m, 1H), 6.78-6.74 (m, 1H), 6.16 (s, 1H), 2.71 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 294.1 [M+H]<+>.
Ostvarenje 6: Sinteza 2,6-dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)-hidroksimetil]fenola (22)
[0059]
1
[0060] Jedinjenje 8 se koristi kao sirovi materijal, a postupak za izradu jedinjenja 22 je isti kao u fazi H u ostvarenju 4.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.93 (s, 1H), 7.52 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 7.12 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 6.02 (s, 1H), 2.59 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 432.9 [M+H]<+>.
Ostvarenje 7: Sinteza 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)-hidroksimetil]fenola (23)
[0061]
[0062] Jedinjenje 12 se koristi kao sirovi materijal, a postupak za izradu jedinjenja 23 je isti kao u fazi H u ostvarenju 4.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.98 (s, 1H), 8.97 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.27-8.26 (m, 1H), 7.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.47 (s, 2H), 6.46 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.75 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 425.9 [M-H]-.
Ostvarenje 8: Sinteza 2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-6-fluorofenola (28)
[0063]
2
[0064] Faza A: 2-amino-5-fluoropiridin (2.5 g, 22.3 mmol) i trietilamin (2.71 g, 26.8 mmol) se rastvore u dihlormetanu (25 mL) i u kapima se dodaje propionil hlorid (2.17 g, 23.5 mmol) u ledenom kupatilu i dobijena smeša se automatski zagreje na sobnu temperaturu i meša u toku noći. U smešu se doda voda (40 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (40 mLx3), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:5) da se dobije N-(5-fluoropiridin-2-il)-propionamid (24) (3.04 g). Prinos je 81.1%.
[0065] Faza B: NBS (977 mg, 5.49 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor 3-fluoro-4-hidroksiacetofenona (806 mg, 5.23 mmol) u DMF (10 mL) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (50 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (50 mLx3), a kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (30 mLx3) i slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt rekristališe sa smešom petrol etar/etil acetat da se dobije 3-bromo-5-fluoro-4-hidroksiacetofenon (25) (1.0 g). Prinos je 82.0%.
[0066] Faza C: rastvor broma (824 mg, 5.16 mmol) u metanolu (5 mL) se u kapima dodaje u rastvor jedinjenja 25 (1.0 g, 4.29 mmol) u metanolu (20 mL) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (60 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (60 mLx3), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar = 1:5) da se dobije 2-bromo-1-(3-bromo-5-fluoro-hidroksifenil)etanon (26) (940 mg). Prinos je 70.2%. Faza D: Smeša jedinjenja 24 (210 mg, 1.25 mmol), jedinjenja 26 (300 mg, 0.962 mmol) i N-metilpirolidina (10 mL) se meša u toku noći na 150°C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (50 mL), pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8 i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom limunske kiseline do vrednosti 5 - 6. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (50 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:25 do 1:5) da se dobije (3-bromo-5-fluoro-4-hidroksifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanon (27).<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 9.24-9.22 (m, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.75-7.71 (m, 2H), 7.63-7.60 (m, 1H), 2.47 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.18 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 379.0 [M-H]-.
[0067] Faza E: natrijum borhidrid (80 mg, 2.11 mmol) i litijum hlorid (14 mg, 0.330 mmol) se dodaju u rastvor jedinjenja 27 (80 mg, 0.210 mmol) u metanolu (10 mL) i dobijena smeša se meša 2.5 h na 35°C. U smešu se doda voda (20 mL), pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom limunske kiseline do vrednosti 5 - 6 i ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Smeša se filtrira kroz kratku ploču silika gela, rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt rekristališe sa smešom etil acetat/petrol etar da se dobije 2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroksimetil]-6-fluorofenol (28).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.43 (s, 1H), 8.27-8.25 (m, 1H), 7.59-7.56 (m, 1H), 7.31-7.25 (m, 2H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.33 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.66 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 383.0 [M+H]<+>.
Ostvarenje 9: Sinteza 2,6-dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-hidroksimetil]fenola (35)
[0068]
[0069] Faza A: Smeša 1-aminopiridinijum jodida (15.54 g, 70.0 mmol), etil 2-pentinoata (9.72 g, 77.1 mmol), kalijum karbonata (21.26 g, 154 mmol) i DMF (150 mL) se meša 4.5 h na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (450 mL) i filtrira, a filter pogača se ispere sa vodom (100 mL) da se dobije etil 2- etilpirazolo[1,5-a]-piridin-3-format (29) (12.25 g).
Jedinjenje se direktno koristi u sledećoj reakciji bez sušenja.
[0070] Faza B: Smeša vlažnog jedinjenja 29 (12.25 g), etanola (30 mL), THF (30 mL) i 2 M vodenog rastvora natrijum hidroksida (70 mL) se meša u toku noći na 60°C. Približno pola rastvarača se upari pod sniženim pritiskom i u smešu se doda voda (150 mL) i pH podesi sa 2 M rastvorom hlorovodonične kiseline do vrednosti 5 - 6. Smeša se filtrira da se dobije 2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-mravlja kiselina (30) (10.0 g). Jedinjenje se direktno koristi u sledećoj reakciji bez sušenja.
[0071] Faza C: Vlažno jedinjenje 30 (5.60 g) se suspenduje u vodi (100 mL) i doda se koncentrovana sumporna kiselina (4 mL) i dobijena smeša se meša 3 h na 80°C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3), a kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (30 mL) i slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije 2-etilpirazolo[1,5-a]piridin (31) (3.18 g). Ukupan prinos reakcija u fazama A, B i C je 47.7%.
[0072] Faza D: Smeša jedinjenja 31 (584 mg, 3.99 mmol), 4-metoksibenzoil hlorida (680 mg, 3.99 mmol) i aluminijum trihlorida (800 mg, 6.0 mmol) se meša u toku noći na 100°C. Smeša se malo ohladi, dodaju se etil acetat (30 mL) i voda (30 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim
2
rastvorom natrijum hidroksida do vrednosti 9 - 10. Slojevi smeše se razdvoje i organski sloj se sakupi. Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (30 mL32), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:30 do 1:10) da se dobije (2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)(4-metoksifenil)metanon (32) (305 mg). Prinos je 27.3%.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 8.79 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, 1H), 7.33-7.30 (m, 1H), 7.08-7.03 (m, 3H), 3.86 (s, 3H), 2.84 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
[0073] Faza E: 60% natrijum hidrid (218 mg, 5.45 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor etantiola (338 mg, 5.44 mmol) u DMF (3 mL), reaktivna smeša se meša približno 5 min i nakon toga se doda rastvor jedinjenja 32 (305 mg, 1.09 mmol) u DMF (3 mL) i dobijena smeša se meša 2 h na 120°C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (30 mL) i pH podesi sa razblaženom hlorovodoničnom kiselinom do vrednosti 7 - 8. Nakon toga se smeša ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3), a kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (20 mLx3) i slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije (2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)(4-hidroksifenil)metanon (33) (420 mg). Jedinjenje se direktno koristi u sledećoj reakciji bez prečišćavanja.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10.22 (s, 1H), 8.76 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.42-7.31 (m, 2H), 7.05-7.01 (m, 1H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.84 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 265.1 [M-H]-.
[0074] Faza F: Rastvor broma (67 mg, 0.419 mmol) u sirćetnoj kiselini (1 mL) se u kapima dodaje u rastvor jedinjenja 33 (73 mg) i anhidrovanog natrijum acetata (46.3 mg, 0.564 mmol) u sirćetnoj kiselini (5 mL) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se u kapima dodaje razblaženi vodeni rastvor natrijum hidrogen sulfita dok boja ne izbledi. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i u reaktivnu smešu se doda odgovarajuća količina vode i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx2) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:20 do 1:1) da se dobije (3,5-dibromo-4-hidroksifenil) (2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)metanon (34) (60 mg). Ukupan prinos reakcija u fazama A i B je 75.4%.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10.77 (s, 1H), 8.81 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.80 (s, 2H), 7.50-7.40 (m, 2H), 7.12-7.07 (m, 1H), 2.82 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 420.9 [M-H]-.
[0075] Faza G: natrijum borhidrid (143 mg, 3.78 mmol) se doda u smešu jedinjenja 34 (160 mg, 0.377 mmol), metanola (15 mL) i koncentrovanog vodenog rastvora amonijaka (5 mL). Dobijena smeša se refluksuje i meša 0.5 h, doda se natrijum borhidrid (143 mg, 3.78 mmol) i kontinuirano meša 0.5 h, doda se natrijum borhidrid (143 mg, 3.78 mmol) i kontinuirano meša 1 h na ovoj temperaturi. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (20 mL), pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom limunske kiseline do vrednosti 5 - 6 i ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:5) da se dobije 2,6-dibromo- 4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-fenol (35).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.84 (s, 1H), 8.55-8.54 (m, 1H), 7.46-7.43 (m, 3H), 7.14-7.10 (m, 1H), 6.79-6.76 (m, 1H), 5.98 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.72 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.18 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 425.0 [M-H]-.
Ostvarenje 10: Sinteza 2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]-piridin-3-il)hidroksimetil]fenola (40)
[0076]
[0077] Faza A: 60% natrijum hidrid (1.68 g, 42 mmol) se u porcijama na -10°C do 0°C dodaje u rastvor p-metoksiacetofenona (3.0 g, 20.0 mmol) u DMF (15 mL). Nakon dodavanja,
2
smeša se kontinuirano meša 40 min na ovoj temperaturi i nakon toga se u kapima dodaje etil propionat (2.04 g, 20 mmol). Nešto kasnije, smeša se zagreje na sobnu temperaturu i meša u toku noći. U smešu se doda voda (60 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (20 mLx2) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:30) da se dobije 1-(4-metoksifenil)pentan-1,3-dion (36) (3.16 g). Prinos je 76.6%.
[0078] Faza B: 2-amino-5-bromopiridin (1.3 g, 7.51 mmol) i jedinjenje 36 (1.86 g, 9.02 mmol) se rastvore u THF (26 mL) i u smešu se u ledenom kupatilu po redu dodaju jodobenzendiacetat (2.9 g, 9.00 mmol) i bor trifluorid dietil eterat (220 mg, 1.55 mmol), nakon toga se smeša zagreje na sobnu temperaturu i meša u toku noći. U smešu se doda voda (30 mL), pH podesi sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8 i ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (20 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar = 1:30) da se dobije (6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-metoksifenil)metanon (37) (575 mg). Prinos je 21.3%.
[0079] Eksperimentalni postupci u fazama C i D su isti sa fazama C i D u ostvarenju 1.
Eksperimentalni postupci u fazi E su isti sa fazom H u ostvarenju 4 i dobija se 2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin- 3-il)hidroksimetil]fenol (40).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.98 (s, 1H), 8.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.55-7.48 (m, 1H), 7.45 (s, 2H), 7.35-7.32 (m, 1H), 6.38 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.60 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.18 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 502.9 [M-H]-.
Ostvarenje 11: Sinteza 2,6-dibromo-4-{[2-etil-7-(trifluorometil)-imidazo[1,2-a]piridin-3-il]hidroksimetil}fenola (41)
[0080]
2
[0081] Postupak za izradu jedinjenja 41 je isti kao u Ostvarenju 10, osim što je 2-amino-3-bromopiridin u fazi B u ostvarenju 10 zamenjen sa 2-amino-4-trifluorometilpiridinom.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.39 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.44 (s, 2H), 7.12-7.10 (m, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 2.76 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 494.9 [M+H]<+>.
Ostvarenje 13: Sinteza 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-metil]fenola (47)
[0082]
[0083] Faza A: smeša jedinjenja 13 (300 mg, 2.0 mmol), 2-bromo-1-(4-metoksifenil)etanona (460 mg, 2.0 mmol) i metilbenzena (10 mL) se refluksuje i meša 48 h. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (30 mL) i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom kalijum karbonata do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 do 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:30 do 1:1) da se dobije (2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il) (4-metoksifenil)-metanon (43) (254 mg). Prinos je 45.3%.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.18 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.58-7.55 (m, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 7.09 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.45 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.11 (t, J = 7.5 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 281.1 [M+H]<+>.
[0084] Faza B: natrijum borhidrid (267 mg, 7.06 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor
2
jedinjenja 43 (1.32 g, 4.71 mmol) u metanolu (20 mL). Nakon dodavanja, smeša se kontinuirano meša 20 min. U smešu se doda voda (100 mL) i izdvoji se velika količina čvrste supstance. Smeša se filtrira i filter pogača se rastvori sa etil acetatom (120 mL). Dobijeni rastvor se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije (2-etilimidazo[1,2-a]piridin -3-il)(4-metoksifenil)metanon (44) (1.29 g). Prinos je 97.0%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.14-8.12 (m, 1H), 7.48-7.45 (m, 1H), 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.16-7.12 (m, 1H), 6.90-6.88 (m, 2H), 6.74-6.72 (m, 1H), 6.23 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.74 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.26(t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0085] Faza C: trietilsilikan (1.31 g, 11.3 mmol) se doda u rastvor jedinjenja 44 (1.06 g, 3.75 mmol) i bor trifluorid dietil eterata (2.66 g, 18.7 mmol) u dihlormetanu (40 mL) i dobijena smeša se meša 3 h na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (40 mL) i pH podesi sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Slojevi smeše se razdvoje, vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (40 mLx2), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt rekristališe sa smešom dihlormetan/petrol etar da se dobije 2-etil-3-(4-metoksibenzil)imidazo[1,2-a]piridin (45) (896 mg). Prinos je 89.7%.
Eksperimentalni postupci u fazama D i E su isti sa fazama C i D u ostvarenju 1 da se dobije 2,6-dibromo- 4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metil]fenol (47).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.84 (s, 1H), 8.15 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.29 (s, 2H), 7.20-7.16 (m, 1H), 6.86-6.83 (m, 1H), 4.25 (s, 2H), 2.75 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 409.0 [M-H]-.
Ostvarenje 14: Sinteza (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(6-etilimidazo-[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5- il)metanona (49)
[0086]
2
[0087] Postupak za izradu jedinjenja 49 dat je u fazama A i B u ostvarenju 2, pri čemu je 2-aminotiazol u fazi A u ostvarenju 2 zamenjen sa 2-amino-1,3,4-tiadiazolom a 2-bromo-1(4-metoksifenil)etanon je zamenjen sa 2-bromo-1-(3,5-dibromo-4-metoksifenil)etanonom.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.23 (s, 1H), 7.84 (s, 2H), 2.69 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 429.8 [M-H]-.
Ostvarenje 15: Sinteza 2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroksimetil-6-metilfenola (54)
[0088]
[0089] Faza A: rastvor bromoacetil bromida (9.9 g, 49.0 mmol) u dihlormetanu (10 mL) se u kapima dodaje u rastvor 2-metilanizola (5.0 g, 40.9 mmol) i aluminijum trihlorida (6.0 g, 45.0 mmol) u dihlormetanu (40 mL) u toku približno 20 min na 0°C do 5°C. Nakon dodavanja, dobijena smeša se kontinuirano meša 2.0 h na ovoj temperaturi. Reaktivni rastvor se u serijama sipa u odgovarajuću količinu ledene vode i ekstrahuje sa dihlormetanom (60 mLx3). Kombinovana organska faza se po redu ispere sa vodom (30 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mLx2), vodom (30 mL) i slanim rastvorom (30 mL) i nakon toga suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Organska faza se filtrira na kratkoj koloni silika gela. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:100 do 1:30) da se dobije 2-bromo-1-(3-metil-4-metoksifenil)etanon (50) (3.0 g). Prinos je 30.2%.
[0090] Faza B: smeša jedinjenja 13 (1.85 g, 12.3 mmol), jedinjenja 50 (3.0 g, 12.3 mmol) i metil-benzena (30 mL) se refluksuje i meša u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu
2
temperaturu, doda se voda (50 mL) i pH podesi sa 2 M vodenim rastvorom kalijum karbonata do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (60 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Produkt se prečisti flash hromatografijom (200 do 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:10 do 1:5) da se dobije (3- metil-4-metoksifenil) (2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-metanon (51) (1.7 g). Prinos je 47.0%.
[0091] Faza C: rastvor 1.0 M bor tribromida u metilbenzenu (6.8 mL) se u kapima u ledenom kupatilu dodaje u rastvor jedinjenja 51 (800 mg, 2.72 mmol) u anhidrovanom dihlormetanu (20 mL) i dobijena smeša se meša 6 h u ledenom kupatilu. Reaktivna smeša se sipa u odgovarajuću količinu ledene vode i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx2) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:5 do 2:1) da se dobije (3-metil-4-hidroksifenil) (2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanon (52) (630 mg). Prinos je 82.6%.
[0092] Faza D: NBS (440 mg, 2.47 mmol) se u porcijama dodaje u rastvor jedinjenja 52 (630 mg, 2.25 mmol) u DMF (10 mL) i dobijena smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (40 mL), ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:3 do 1:1) da se dobije (3-bromo-4-hidroksi-5-metilfenil)-(2-etilimimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanon (53) (625 mg). Prinos je 77.3%.
[0093] Eksperimentalni postupci u fazi E su isti sa fazi H u ostvarenju 4 da se dobije 2-bromo-4-(2-etilimimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil-6-metilfenol (54).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.07 (s, 1H), 8.04 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.26-7.17 (m, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.80-6.77 (m, 1H), 5.86 (s, 1H), 2.77 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 360.0 [M-H]-.
Ostvarenje 17: Sinteza 2,6-dibromo-4-{(2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a]-piridin-3-il)hidroksimetil} fenola (64)
[0094]
[0095] Faza A: 2-amino-4-metoksipiridin (4.9 g, 39.5 mmol) i trietilamin (4.4 g, 43.5 mmol) se rastvore u tetrahidrofuranu (30 mL), u kapima se u ledenom kupatilu dodaje propionil hlorid (4.0 g, 43.5 mmol) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. U smešu se doda voda (100 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (60 mLx3), kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (30 mL) i rastvarač se upari pod sniženim pritiskom. U produkt se dodaju kalijum karbonat (4.1 g, 29.7 mmol), metanol (50 mL) i voda (12 mL) i dobijena smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, u smešu se doda voda (20 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (30 mLx3), a kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom (15 mL) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije N-(4-metoksipiridin-2-il)-propionamid (59) (4.85 g). Prinos je 68.2%.
[0096] Faza B: smeša jedinjenja 59 (4.85 g, 26.9 mmol), 2-bromo-1-(4-metoksifenil)etanona (6.14 g, 26.9 mmol) i metilbenzena (50 mL) se refluksuje i meša u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, doda se voda (50 mL) i pH podesi sa 2 M rastvorom kalijum karbonata do vrednosti 8 - 9. Smeša se ekstrahuje sa dihlormetanom (70 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa smešom etil acetat: petrol etar=1:5 do 2:3) da se dobije (2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a] piridin-3-il)(4-metoksifenil)metanon (60) (900 mg). Prinos je 10.8%.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.88-6.86
1
(m, 1H), 3.91(s, 3H), 3.87 (s, 3H), 2.38 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.10 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
[0097] Faza C: rastvor 1.0 M bor tribromida u metilbenzenu (9 mL) se u kapima u ledenom kupatilu dodaje u rastvor jedinjenja 60 (900 mg, 2.9 mmol) u anhidrovanom dihlormetanu (25 mL) i dobijena smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Reaktivni rastvor se sipa u ledenu vodu (50 mL) i pH podesi sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata do vrednosti 7 - 8. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (40 mLx3) i suši sa anhidrovanim natrijum sulfatom. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, a produkt se prečisti flash hromatografijom (200 - 300 meša silika gela, uz eluiranje sa metanol: dihlormetan=1:50 do 1:20) da se dobiju (2-etil-7-hidroksiimidazo[1,2-a]piridin-3-il) (4-hidroksifenil)metanon (61) (477 mg) i (2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a] piridin-3-il)(4-hidroksifenil)-metanon (62) (277 mg). Prinosi su 58.3% i 32.2%, tim redom. Jedinjenje 61:<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.83 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 9.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.89-6.84 (m, 3H), 6.77-6.75 (m, 1H), 2.37 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.08 (t, J = 7.6 Hz, 3H). Jedinjenje 62:<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.25 (s, 1H), 9.03 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.91-6.83 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 2.45 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.11 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
[0098] Eksperimentalni postupci u fazama D i E su isti sa fazama F i G u ostvarenju 9 da se dobije 6-dibromo- 4-{(2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil}fenol (64).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (s, 2H), 6.87 (s, 1H), 6.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.63 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.6 Hz, 3H). MS (EI, m/z): 453.0 [M-H]-.
Ostvarenje 19: ispitivanje jedinjenja na inhibiciju transporta mokraćne kiseline u HEK293-hURAT1 transfekcionoj ćelijskoj liniji
I. Materijali
[0099] HEK293 ćelijska linija je nabavljena od Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences of Chinese Academy of Sciences. Plasmid pCMV6-hURAT1 je nabavljen od Origene Technologies, Inc. Geneticin (G418) je nabavljen od Sangon Biotech Co., Ltd. Poly-lizin je nabavljen od Sigma-Aldrich Co. LLC.<14>C-mokraćna kiselina je nabavljena od American Radiolabeled Chemicals, Inc. Natrijum glukonat, kalijum glukonat, kalcijum glukonat, KH2PO4, MgSO4, glukoza i HEPES su nabavljeni od Sinopharm Chemical
2
Reagent Co., Ltd. DMEM medijum za kulturu i serum fetusa govečeta su nabavljeni od Thermo Fisher Scientific Inc. Benzbromaron je nabavljen od Sigma-Aldrich Co. LLC.
II. Eksperimentalni postupci
[0100]
1. Sklapanje HEK293 ćelijske linije sa visokom ekspresijom hURAT1:
plasmid pCMV6-hURAT1 se transfektuje u HEK293 ćelije nakon čega se pomoću G418 (finalna koncentracija 500 µg/mL) skriningom rezistencije dobija stabilan soj proteina membrane u kome je visoka ekspresija hURAT1 transportera. On može da se koristi za in vitro ispitivanje inhibicije hURAT1 transportera mokraćne kiseline (Weaver YM, Ehresman DJ, Butenhoff JL, i saradnici. Roles of rat renal organic anion transporters in transporting perfluorinated karboksilates with different chain lengths. Toxicological Sciences, 2009, 113(2):305-314). HEK293 ćelije su humane embrione ćelije bubrega sa visokom efikasnošću transfekcije i veoma često su korišćene inžinjerijske ćelijske linije za ekspresiju egzogenih gena.
2. U obloženu ploču sa 24 udubljenja se doda po 200 µl 0.1 mg/mL poli-lizina po udubljenju i ploča se ostavi u toku noći. Poli-lizin se ukloni iz udubljenja. Udubljenja se dobro očiste sa sterilnom vodom i suše za upotrebu.
3. U prethodno obloženu ploču sa 24 udubljenja se dodaju HEK293-hURAT1 stabilne ćelije (2x10<5>ćelija po udubljenju). Ćelije se uzgajaju 3 dana na 37°C uz 5% CO2.
4. Izrada HBSS pufera: izmere se sledeći reagensi da se dobije finalna koncentracija od 125 mM natrijum glukonata, 4.8 mM kalijum glukonata, 1.3 mM kalcijum glukonata, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 5.6 mM glukoze i 25 mM HEPES sa dejonizovanom vodom. Rastvor se dobro izmeša da se dobije HBSS (pH vrednost: 7.4). Pufer se čuva na -20°C. 5. HBSS pufer se zagreje na 37°C u vodenom kupatilu. Ploče sa 24 udubljenja sa HEK293-hURAT1 stabilnim ćelijama se izvade, medijum za kulturu se ukloni a ćelije isperu sa HBSS, nakon toga se doda 160 µL HBSS i 20 µL test jedinjenje po udubljenju. Finalna koncentracija testiranog jedinjenja po udubljenju je 500 nM. Udubljenja slepe probe sadrže samo 180 µL HBSS bez test jedinjenja. Ploča se ostavi 10 minuta na sobnoj temperaturi.
6. U svako udubljenje se doda po 20 µL 50 µM<14>C-mokraćne kiseline. Ploča sa 24 udubljenja se ostavi 20 minuta na sobnoj temperaturi.
7. Rastvor iz svakog udubljenja se ukloni i ćelije se isperu sa prethodno ohlađenim HBSS puferom. U svako udubljenje se doda 0.2 M NaOH da se ćelije rastvore. Rastvor koji sadrži fragmente ćelija se sakupi i doda se odgovarajuća količina scintilacione tečnosti. Intenzitet radioizotopa<14>C-mokraćna kiselina (CPM vrednost) se nakon toga detektuje pomoću PerkinElmer MicroBeta Trilux 1450 analajzera scintilacije tečnosti.
8. Formula za izračunavanje stepena inhibicije transporta mokraćne kiseline za jedinjenja je kako je niže pokazano (Tabela 1), CPM vrednost testiranih jedinjenja je predstavljena sa CPM (testirano jedinjenje) a CPM vrednost slepe probe je predstavljena sa CPM (slepa proba). Svi testovi su ponovljeni tri puta, i rezultati su uprosečeni a izračunata je standardna devijacija (SD:
Stepen inhibicije (%)(500 nM koncentracija jedinjenja)= (CPM(slepa proba)-CPM(testirano jedinjenje)/CPM(slepa
proba)x 100%
III. Eksperimentalni rezultati
[0101] Rezultati pokazuju da u poređenju sa benzbromaronom kao kontrolnim lekom u koncentraciji od 500 nM, jedinjenja 8, 12, 20, 23 i 40 imaju veoma dobre inhibitorne efekte na transport mokraćne kiseline u HEK293-hURAT1 transfektovanoj ćelijskoj liniji.
Tabela 1: stepen inhibicije transporta mokraćne kiseline za test jedinjenja i benzbromaron na 500 nM u HEK293-hURAT1 transfektovanoj ćelijskoj liniji
4
(nastavlja se)

Claims (6)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je jedinjenje izabrano od jedinjenja pokazanih niže datim strukturama,
    pri čemu Y je karbonil, sumpor, sulfon, sulfoksid, opciono supstituisana metilen ili imino grupa; R<1>je vodonik, deuterijum, hidroksi, halogen, nitro, amino, cijano, C1-3alkil, supstituisana C1-3alkil, supstituisana C1-3amino, C1-3alkoksi ili supstituisana C1-3alkoksi grupa; R<2>je vodonik, halogen, nitro, cijano, C1-3alkil ili C1-3haloalkil grupa; R<3>je C1-4alkil, supstituisana C1-4alkil grupa ili halogen; m ceo broj od 0 do 3; n je 1 ili 2; supstituent u grupi Y je izabran iz grupe koja se sastoji od hidroksil, amino, cijano, karboksil, C1-3alkoksi ili C1-3alkil grupe, supstituent u grupi R<1>, R<2>ili R<3>je izabran iz grupe koja se sastoji od hidroksi, halogen, nitro, amino ili cijano grupe; u formuli (II-D) i formuli (III-A), Y nije karbonil grupa; pod uslovom da jedinjenje nije 2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)-(4-hidroksifenil)metanon.
  2. 2. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je Y CH-OH, CH-NH2, CH-CN, NH, NCH3ili CO grupa, a R<3>je C2-3alkil grupa; u formuli (II-D) i formuli (III-A), Y nije karbonil grupa.
  3. 3. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je R<1>vodonik, deuterijum, hidroksi, halogen, nitro, amino, cijano, C1-3alkil, C1-3haloalkil, C1-3alkoksi ili C1-3haloalkoksi grupa, a m je 0, 1 ili 2.
  4. 4. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od: (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)metanona; (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)metanona; (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanona; 3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-alpiridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila; 5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-2-hidroksibenzonitrila; 2,6-dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)hidroksimetil]fenola; 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)hidroksimetil]fenola; 2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]-6-fluorofenola; 2,6-dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroksimetil]fenola; 2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil]fenola; 2,6-dibromo-4-{[(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridin-3-il)]hidroksimetil}fenola; 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metil]fenola; (3,5-dibromo-4-hidroksifenil)(6-etilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiodiazol-5-il)metanona; 2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil-6-metilfenola; 2,6-dibromo-4-{(2-etil-7-metoksiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroksimetil}fenola.
  5. 5. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što kao aktivni sastojak ili glavni aktivni sastojak uključuje jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu za poboljšanje izlučivanja mokraćne kiseline, preciznije, za lečenje ili prevenciju hiperurikemije ili gihta. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20220866A 2016-11-16 2017-11-15 Urat1 inhibitor i njegova upotreba RS63572B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611008935 2016-11-16
CN201711115037.9A CN108084186B (zh) 2016-11-16 2017-11-13 Urat1抑制剂及其应用
PCT/CN2017/111013 WO2018090921A1 (zh) 2016-11-16 2017-11-15 Urat1抑制剂及其应用
EP17872538.8A EP3543240B1 (en) 2016-11-16 2017-11-15 Urat1 inhibitor and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63572B1 true RS63572B1 (sr) 2022-10-31

Family

ID=62172162

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220866A RS63572B1 (sr) 2016-11-16 2017-11-15 Urat1 inhibitor i njegova upotreba

Country Status (18)

Country Link
US (2) USRE50083E1 (sr)
EP (1) EP3543240B1 (sr)
JP (1) JP6925054B2 (sr)
KR (1) KR102263441B1 (sr)
CN (1) CN108084186B (sr)
AU (1) AU2017360465B2 (sr)
CA (1) CA3043942C (sr)
DK (1) DK3543240T3 (sr)
ES (1) ES2923177T3 (sr)
HR (1) HRP20221151T1 (sr)
HU (1) HUE059778T2 (sr)
IL (1) IL266587B2 (sr)
MX (1) MX2019005565A (sr)
MY (1) MY197564A (sr)
PL (1) PL3543240T3 (sr)
PT (1) PT3543240T (sr)
RS (1) RS63572B1 (sr)
TW (1) TWI668213B (sr)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3632904B1 (en) * 2017-05-26 2022-04-20 Jiangsu Atom Bioscience and Pharmaceutical Co., Ltd. Urat1 inhibitors for promoting uric acid excretion
WO2019141259A1 (zh) * 2018-01-19 2019-07-25 苏州信诺维医药科技有限公司 杂环化合物、制备方法及其在医药上的应用
CN108623586B (zh) * 2018-07-16 2021-03-16 广东工业大学 一种咪唑并含氮杂环类化合物的合成方法与应用
CN109432079B (zh) * 2018-09-07 2021-06-22 江苏康缘药业股份有限公司 一种化合物在制备用于痛风的药物中的应用
CN111763180B (zh) * 2019-04-02 2023-06-09 中国医学科学院药物研究所 苯并氮杂环类化合物及其制法和药物用途
CN111943957B (zh) * 2019-05-17 2023-01-06 中国医学科学院药物研究所 喹啉甲酰胺类化合物及其制备方法和用途
CN111533718B (zh) * 2020-05-12 2022-05-17 浙江海洲制药有限公司 一种制备苯溴马隆的方法
CN112250688B (zh) * 2020-10-15 2022-11-04 天津科技大学 一类7-氮杂苯并呋喃衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用
CN112877295A (zh) * 2021-02-26 2021-06-01 华南理工大学 一种urat1抑制剂体外活性筛选的细胞模型及其构建方法与筛选方法
WO2023221078A1 (en) * 2022-05-20 2023-11-23 Jiangsu Atom Bioscience And Pharmaceutical Co., Ltd. Solid forms of a compound for treating or preventing hyperuricemia or gout
CN116189808A (zh) * 2023-01-17 2023-05-30 中国海洋大学 一种hURAT1抑制剂的筛选方法、筛选的化合物及其应用
CN119241538A (zh) * 2024-09-30 2025-01-03 陕西科技大学 一类三唑并吡啶结构的化合物、合成方法及其应用

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4117128A (en) * 1976-08-03 1978-09-26 Smithkline Corporation Sulfonyl benzofurans and benzothiophenes having coronary vasodilator activity
NZ193926A (en) 1979-07-06 1984-05-31 Labaz Sanofi Nv 2-(alkyl or phenyl)-3(4-hydroxybenzoyl)indolizines
FR2502622A1 (fr) * 1981-03-25 1982-10-01 Synthelabo Derives d'imidazo (1,2-a) pyrimidines, leur preparation et leur application en therapeutique
US5175184A (en) * 1982-10-19 1992-12-29 Kotobuki Seiyaku Company Limited Benzothiophene derivatives and antihyperuricemia thereof
JPS5973579A (ja) * 1982-10-19 1984-04-25 Kotobuki Seiyaku Kk ベンゾフラン又はベンゾチオフェン誘導体，この化合物を有効成分とする尿酸排泄剤及びその製造方法
FR2594438B1 (fr) * 1986-02-14 1990-01-26 Labaz Sanofi Nv Derives d'indolizine, leur procede de preparation ainsi que les compositions en contenant
GB8820231D0 (en) * 1988-08-25 1988-09-28 Fujisawa Pharmaceutical Co New benzazole compounds processes for preparation thereof & pharmaceutical composition comprising same
US6166069A (en) * 1998-05-12 2000-12-26 American Home Products Corporation Phenyl oxo-acetic acids useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
EP1077965A1 (en) * 1998-05-12 2001-02-28 American Home Products Corporation Phenyl oxo-acetic acids useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
KR20040030818A (ko) * 2001-07-20 2004-04-09 카로 바이오 아베 심방 세동의 치료에 있어서의 벤조 퓨란 및 이들의 용도
JP2009227599A (ja) * 2008-03-21 2009-10-08 Daiichi Sankyo Co Ltd イミダゾピリダジン誘導体
KR101250297B1 (ko) 2008-03-31 2013-04-03 주식회사 씨앤드씨신약연구소 헤테로사이클 유도체
US8748435B2 (en) * 2011-04-01 2014-06-10 Novartis Ag Pyrazolo pyrimidine derivatives
WO2014049514A1 (en) * 2012-09-25 2014-04-03 Novartis Ag Compounds for use in gastric complication
US10173990B2 (en) * 2014-12-29 2019-01-08 Nippon Chemiphar Co., Ltd. URAT1 inhibitor
CN108516958B (zh) * 2015-03-24 2020-07-17 上海璎黎药业有限公司 稠环衍生物、其制备方法、中间体、药物组合物及应用
CN106065010B (zh) * 2015-04-23 2019-01-01 镇江新元素医药科技有限公司 用于治疗或预防高尿酸血症或痛风的化合物
KR102109061B1 (ko) * 2015-09-10 2020-05-11 쟝쑤 애텀 바이오사이언스 앤드 파머수티컬 컴퍼니 리미티드 고요산혈증 또는 통풍을 치료 또는 예방하는 화합물
CN114213331B (zh) * 2017-05-26 2024-06-21 江苏新元素医药科技有限公司 一类urat1抑制剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190077083A (ko) 2019-07-02
USRE50083E1 (en) 2024-08-20
CA3043942A1 (en) 2018-05-24
EP3543240B1 (en) 2022-07-06
AU2017360465A1 (en) 2019-06-06
EP3543240A4 (en) 2020-05-06
HRP20221151T1 (hr) 2022-11-25
PL3543240T3 (pl) 2022-10-24
TW201819364A (zh) 2018-06-01
MY197564A (en) 2023-06-23
MX2019005565A (es) 2019-10-30
TWI668213B (zh) 2019-08-11
IL266587B2 (en) 2023-06-01
PT3543240T (pt) 2022-08-25
IL266587A (en) 2019-07-31
DK3543240T3 (da) 2022-10-10
AU2017360465B2 (en) 2021-02-04
EP3543240A1 (en) 2019-09-25
US10875865B2 (en) 2020-12-29
JP2020503263A (ja) 2020-01-30
HUE059778T2 (hu) 2022-12-28
CA3043942C (en) 2021-11-02
US20200062763A1 (en) 2020-02-27
JP6925054B2 (ja) 2021-08-25
CN108084186B (zh) 2021-06-25
CN108084186A (zh) 2018-05-29
ES2923177T3 (es) 2022-09-26
KR102263441B1 (ko) 2021-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS63572B1 (sr) Urat1 inhibitor i njegova upotreba
CN101466714B (zh) 作为hm74a激动剂的嘌呤酮衍生物
AU2016320073B2 (en) Compound for treating or preventing hyperuricemia or gout
WO2018090921A1 (zh) Urat1抑制剂及其应用
KR101492308B1 (ko) 벤젠 유도체를 포함하는 지단백 지방 분해 효소 활성화 조성물
US11597725B2 (en) URAT1 inhibitor for promoting uric acid excretion
CN107683282B (zh) Urat1抑制剂及其在医药上的应用
CA2685599A1 (en) Compounds for treating duchenne muscular dystrophy
HK1154777B (en) Lipoprotein lipase-activating compositions comprising benzene derivatives
HK1188442A1 (en) (aza)indolizine derivative and pharmaceutical use thereof
HK1188442B (en) (aza)indolizine derivative and pharmaceutical use thereof