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ES2923177T3 - Inhibidor de URAT1 y uso del mismo - Google Patents

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ES2923177T3
ES2923177T3 ES17872538T ES17872538T ES2923177T3 ES 2923177 T3 ES2923177 T3 ES 2923177T3 ES 17872538 T ES17872538 T ES 17872538T ES 17872538 T ES17872538 T ES 17872538T ES 2923177 T3 ES2923177 T3 ES 2923177T3
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dibromo
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mmol
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Dongfang Shi
Changjin Fu
Xi Cheng
Jianghua Zhu
Jie Gu
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Jiangsu Atom Bioscience and Pharmaceutical Co Ltd
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Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidor de URAT1 y uso del mismo
Campo técnico de la invención
La invención pertenece al campo de la química médica y se refiere en particular a una clase de compuestos inhibidores de URAT1 y a aplicaciones en medicina.
Antecedentes de la invención
El ácido úrico es el producto final del metabolismo de las purinas en el organismo humano. Debido a la ausencia de rasburicasa en el organismo humano, el ácido úrico sérico (AUs) no puede degradarse más y el exceso de AUs debe excretarse fuera del organismo humano a través del riñón y el tracto intestinal. El riñón es el órgano principal para aproximadamente el 70% de la excreción de ácido úrico fuera del organismo humano. Por lo tanto, la capacidad de transporte de ácido úrico en el riñón puede gestionar directamente el AUs. Debido al trastorno del metabolismo de las purinas que provoca el aumento de AUs o la ingesta excesiva de alimentos ricos en purinas y la eliminación renal insuficiente de ácido úrico, se acumula una gran cantidad de AUs, lo que conduce a la hiperuricemia. En general, la hiperuricemia se define como una concentración de AUs superior a 7 mg/dL para hombres y 6 mg/dL para mujeres. Aproximadamente de 80% a 85% de los pacientes con hiperuricemia son causados por una eliminación renal insuficiente de ácido úrico que conduce a la acumulación de AUs (Cheeseman C. Solute carrier family 2, member 9 and uric acid homeostasis. Current Opinion in Nefrology and hypertension, 2009, 18(5):428-432). Cuando la concentración de AUs está saturada, los cristales de urato se depositan en las articulaciones, los tendones, los riñones y otros tejidos humanos, en los que se encuentra la gota (Richette P, Bardin T. Gout. Lancet. 2010, 375(9711):318-328). La gota causará nefropatía por urato y nefrolitiasis por ácido úrico, lo que provocará insuficiencia renal. Por su parte, la gota y la hiperuricemia se correlacionan significativa y positivamente con enfermedades tales como hiperlipidemia, hipertensión, diabetes y aterosclerosis. Rho YH, Woo JH, Choi SJ, et al. Association between serum uric acid and the adult treatment panel III-defined metabolic syndrome: results from a single hospital database. Metabolism. 2008, 57:(1)71-76). La gota y la hiperuricemia afectan gravemente a la salud y a la calidad de vida de las personas.
La gota es la segunda enfermedad metabólica más extendida después de la diabetes y ha sido catalogada como una de las 20 enfermedades persistentes en el siglo XXI por las Naciones Unidas. Con la mejora del nivel de vida de las personas y la extensión del promedio de vida de las personas, la incidencia de hiperuricemia y gota está en aumento. La gota tiene una incidencia de aproximadamente 1%-2% en todo el mundo. La incidencia en los países desarrollados es relativamente alta, ya que una encuesta de 2007-2008 informó de que había aproximadamente 8,3 millones de pacientes con gota en los EE. UU. La incidencia de gota en el Reino Unido y Alemania había alcanzado 1,4% entre 2000 y 2005 (Annemans L, Spaepen E, Gaskin M, et al. Gout in the UK and Germany: prevalence, comorbidities, and management in general practice 2000-2005. Annals of the Rheumatic Diseases, 2008, 67(7): 960­ 966). En China, la incidencia de la gota ha aumentado drásticamente en la última década. Se informa de que la cantidad de pacientes con gota en China ha superado los 50 millones, y la cantidad de hombres con gota es mucho mayor que la de mujeres. Un estudio epidemiológico en 3978 personas de 40 a 74 años en áreas urbanas de Shanghai, realizado en 2010, mostró que aproximadamentel 25% de los hombres sufren de hiperuricemia (Raquel Villegas, Xiang YB, Cai QY, et al. Prevalence and determinants of hyperuricemia in middle-aged, urban Chinese men. Metabolic Syndrome and Related Disorders, 2010, 8(3): 263-270). Aproximadamente de 5% a 12% de los pacientes con hiperuricemia eventualmente desarrollarían gota (Peng Jianbiao, Sun Piaoyang. Cycloalkyl acid derivative, preparation method thereof, and pharmaceutical application thereof. Shanghai Hengrui Pharm Co., Ltd. WO2014183555A1).
Los medicamentos para el tratamiento del ataque agudo de gota incluyen principalmente colchicina, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), hormona adrenocorticotrópica y glucocorticoides. La colchicina tiene una buena eficacia para tratar el ataque agudo de gota, pero tiene reacciones adversas graves, tales como diarrea, vómitos y dolor abdominal espasmódico. Muchos AINE tienen reacciones adversas gastrointestinales graves. Estos fármacos solo pueden aliviar temporalmente el dolor de los pacientes y no pueden reducir la concentración de AUs ni eliminar el depósito de urato en el organismo.
Para tratar la gota fundamentalmente, el AUs debe controlarse al nivel normal con medicamentos reductores del AUs. La gestión del nivel de AUs es un tratamiento a largo plazo e incluye principalmente los siguientes dos enfoques: inhibir la producción de ácido úrico y promover la excreción de ácido úrico.
La xantina oxidasa, como enzima para el metabolismo de los nucleótidos en el organismo, es una enzima clave para la generación de ácido úrico. Los inhibidores de la producción de ácido úrico pueden reducir eficazmente el nivel de AUs al inhibir la función de la xantina oxidasa para reducir la producción de ácido úrico. Los fármacos más utilizados son alopurinol y Uloric. El alopurinol es uno de los inhibidores de la xantina oxidasa. Debe usarse en dosis altas y, en algunas personas, puede causar un eritema multiforme severo en la piel, que en ocasiones es fatal. A menudo se acompaña de daño hepático y otros efectos secundarios. Otro inhibidor de la xantina oxidasa se llama Uloric (febuxostat), que se lanzó en Europa y EE. UU. en 2009. Uloric también tiene efectos secundarios muy graves, tales como problemas cardiovasculares y molestias gastrointestinales, y puede causar dolores de cabeza y lesiones hepáticas. Los pacientes con gota no pueden alcanzar el nivel normal de AUs por febuxostat para un tratamiento a largo plazo.
Otro enfoque importante para tratar la gota es promover la excreción de ácido úrico. El mecanismo implica la inhibición del transporte de ácido úrico por el transportador de anión urato humano 1 (hURAT1) ubicado en la membrana de la célula epitelial tubular proximal para reducir la reabsorción de ácido úrico en los riñones y aumentar la excreción renal de ácido úrico. Como proteína de reabsorción de ácido úrico más importante en el organismo humano, hURAT1 se expresa específicamente en las membranas del borde en cepillo de las células epiteliales del túbulo contorneado proximal renal humano y controla más de aproximadamente 90% de la reabsorción de ácido úrico después de la filtración glomerular. Wempe MF, Jutabha P, Quade B, et al. Developing potent human uric acid transporter 1 (hURAT1) inhibitors. Journal of Medicinal Chemistry. 2011, 54: 2701-2713). hURAT1 está codificada por el gen SLC22A12 que tiene varias mutaciones que causan que el metabolismo del ácido úrico sea anormal. Un metaanálisis mostró que este gen tiene 0,13% de variables que contribuyen al nivel de AUs (So A, Thorens B. Uric acid transport and disease. Journal of Clinical Investigation, 2010, 120(6): 1791-1799).
Actualmente, los medicamentos uricosúricos comercializados para el tratamiento de la gota son inhibidores de URAT1, incluidos Benzbromarona, Zurampic, probenecida y sulfinpirazona. Zurampic de AstraZeneca había sido aprobado para tratar la gota con una combinación de alopurinol a una dosis de 200 mg/día por Estados Unidos en diciembre de 2015 y Europa en febrero de 2016, respectivamente. Pero su eficacia es mucho menor que la de la benzbromarona. Además, la FDA exige que su toxicidad renal grave se destaque con una advertencia de recuadro negro en las especificaciones. Este medicamento también tiene una toxicidad cardiovascular muy grave y otros efectos secundarios. Tanto la probenecida como la sulfinpirazona son agentes uricosúricos con altas dosis de administración con poca eficacia y malos efectos secundarios.
La benzbromarona como inhibidor de URAT1 todavía se usa ampliamente en el mercado para el tratamiento de la gota. Su nombre químico es (3,5-dibromo-4-hidroxi-fenil)(2-etilbenzofuran-3-il)-metanona, que fue desarrollada por la empresa France Sanofi-Synthelabo y lanzado en 1976. Pero el uso de benzbromarona no ha sido aprobado en los EE. UU. y se retiró del mercado en la mayoría de los países europeos en 2003 debido a su grave toxicidad hepática. (Jansen TL, Reinders MK, van Roon EN, et al. Benzbromarone withdrawn from the European market: another case of "absence of evidence is evidence of absence". Clinical Experimental Rheumatology, 2004, 22(5):651). Otra desventaja de este fármaco es que tiene un fuerte efecto inhibidor sobre las enzimas CYP2C9 de P450, lo que provoca daño hepático e interacciones farmacológicas. Sin embargo, más de 20 países, como China, Alemania, Japón, Brasil y Nueva Zelanda todavía lo usan ampliamente debido a la falta de buenos fármacos para la gota en el mercado.
Los estudios han demostrado que la lesión hepática fulminante o fatal de la benzbromarona se ha asociado con sus metabolitos reactivos. Un posible mecanismo de toxicidad hepática puede implicar la bioactivación de la benzbromarona a través de la hidroxilación secuencial del anillo de benzofurano para formar 6-hidroxibenzobromarona y un catecol por CYP2C9, que puede ser oxidado adicionalmente por las enzimas P450 a un metabolito de quinona reactivo capaz de formar aductos de reactivos de tiol/restos cisteína. (Matthew G. McDonald MG, Rettie AE. Sequential metabolism and bioactivation of the hepatotoxin benzbromarone: formation of glutathione adducts from a catechol intermediate. Chemical Research in Toxicology. 2007, 20 (12):1833-1842). La benzbromarona también tiene otros efectos secundarios, tales como diarrea, malestar estomacal, náuseas, mácula, rubor, picazón, etc.
Actualmente, los compuestos para el tratamiento de la gota en ensayos clínicos incluyen el inhibidor de URAT1 RDEA-3170 de AstraZeneca en ensayos clínicos de fase II y los productos de Pfizer, BioCryst Pharmaceutical Company, LG life Sciences en Corea, Cymabay Therapeutics, JW Pharmaceutical, Chugai Pharmaceutical, Fuji Yakuhin y Sanwa Kagaku también se encuentran en ensayos clínicos de Fase I o II. El inhibidor de URAT1 desarrollado por Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Company ha entrado en ensayos clínicos de Fase I en China, y su estructura química tiene cierta similitud con los dos compuestos de AstraZeneca. Sin embargo, la mayoría de estos compuestos todavía muestra poca eficacia y toxicidad severa.
Actualmente, solo hay unos pocos fármacos para el tratamiento de la gota en todo el mundo, y estos fármacos generalmente tienen las desventajas de una eficacia deficiente y efectos secundarios graves. Por lo tanto, es muy importante desarrollar fármacos para la gota que sean altamente efectivos y tengan baja toxicidad.
Compendio de la invención
El objetivo de la presente invención es proporcionar una serie de nuevos compuestos basados en las tecnologías actuales, con el objetivo de obtener un inhibidor de URAT1 de baja toxicidad y buena eficacia para el tratamiento de la hiperuricemia o la gota. El resultado de las pruebas mostró que los compuestos proporcionados por esta invención tienen un muy buen efecto inhibidor sobre el transporte de ácido úrico por hURAT1 en células transfectadas con HEK293, lo que indica que los compuestos tienen una buena perspectiva de aplicación en el tratamiento de la hiperuricemia o la gota.
El objeto de la invención puede lograrse mediante las siguientes medidas:
La invención se refiere a un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, cuyo compuesto se selecciona entre los compuestos mostrados por las estructuras descritas a continuación:
Figure imgf000004_0001
en donde:
Y es carbonilo, azufre, sulfona, sulfóxido, metileno opcionalmente sustituido o imino;
R1 es hidrógeno, deuterio, hidroxi, halógeno, nitro, amino, ciano, alquilo C1-C3, alquilo C1-C3 sustituido, amino C1-C3 sustituido, alcoxi C1-C3 o alcoxi C1-C3 sustituido;
R2 es hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo C1-C3 o haloalquilo C1-C3;
R3 es alquilo C1-C4, alquilo C1-C4 sustituido o halógeno;
m es un número entero de 0 a 3;
n es 1 o 2;
el sustituyente en el grupo Y se selecciona del grupo que consiste en hidroxilo, amino, ciano, carboxilo, alcoxi C1-C3 o alquilo C1-C3, el sustituyente en el grupo R1, R2 o R3 se selecciona del grupo que consiste en hidroxilo, halógeno, nitro, amino o ciano;
en la fórmula (II-D) y la fórmula (III-A), Y no es un grupo carbonilo;
con la condición de que el compuesto no sea 2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)-(4-hidroxifenil)-metanona. En una realización preferida, en las fórmulas anteriores, Y es un grupo CH-OH, CH-NH2, CH-CN, NH (imino), NCH3 o CO (carbonilo), y R3 es alquilo C2-C3; en la fórmula (II-D) y la fórmula (III-A), Y no es un grupo carbonilo. En una realización preferida, R1 es hidrógeno, deuterio, hidroxi, halógeno, nitro, amino, ciano, alquilo C1-C3, haloalquilo C1-C3, alcoxi C1-C3 o haloalcoxi C1-C3, y m es 0, 1 o 2.
En una realización preferida, R2 es hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo C1-C3, haloalquilo C1-C3, y n es 1 o 2. En una realización más preferida, se proporcionan los compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables según la presente invención, en donde los compuestos se seleccionan del grupo que consiste en:
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-alpirimidin-3-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[2,1-b]tiozol-5-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanona;
3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo;
5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo;
2.6- dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiozol-5-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-aípirazin-3-il)hidroximetil]fenol;
2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-6-fluorofenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-{[(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]iridin-3-il)]hidroximetil}-fenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridme-3-il)metil]fenol;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(6-etilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiodiazol-5-il)metanona;
2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil-6-metilfenol;
2.6- dibromo-4-{(2-etil-7-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil}fenol.
El método de preparación del compuesto de la presente invención se proporciona a continuación:
Fórmula 1:
Figure imgf000005_0001
En la fórmula, un compuesto anular amínico A (piridina, pirimidina, tiazol, pirazina, etc.) se transforma en un compuesto de amida (o hidrazina) y a continuación, se hace reaccionar con una bromoacetofenona sustituida para proporcionar un compuesto anular de imidazo A correspondiente (piridina, pirimidina, tiazol, pirazina o similares) que experimenta una desmetilación, una reacción de halogenación y/o una reacción de reducción u otra reacción para proporcionar un producto objetivo correspondiente.
Fórmula 2:
Figure imgf000005_0002
En la fórmula, la sal anular amínica A (piridina, pirimidina, pirazina, etc.) se somete a una reacción de cierre del anillo con alquino para proporcionar un compuesto anular A de pirazolo correspondiente (piridina, pirimidina, pirazina, etc.), el compuesto obtenido después de la hidrólisis y descarboxilación se hace reaccionar con un cloruro de acilo bajo catálisis con ácido de Lewis para proporcionar un compuesto de diarilcetona, que se somete a desmetilación, halogenación y/o reducción u otra reacción para proporcionar el producto objetivo correspondiente.
La definición de cada grupo en el método de síntesis se describe anteriormente.
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos utilizados en las reivindicaciones y la memoria descriptiva tienen los siguientes significados:
El "anillo aromático de cinco miembros" se refiere a un grupo anular fusionado con estructura anular planar, conjugado compuesto por cinco átomos anulares, que es aromático y el átomo anular puede ser un átomo distinto de un átomo de carbono, es decir, un heteroátomo. Cuando el anillo aromático de cinco miembros contiene un heteroátomo, el heteroátomo puede ser N, S u O, y el número de heteroátomos no está limitado a uno, y puede ser dos, tres o similares. El anillo aromático de cinco miembros que contiene uno o varios heteroátomos en la presente invención incluye, pero sin limitarse a, un anillo de triazol, un anillo de imidazol, un anillo de tiazol, un anillo de oxazol, un anillo de oxadiazol o un anillo de tiadiazol, etc.
El "anillo aromático de seis miembros" se refiere a un grupo anular fusionado con estructura de anillo planar, conjugado compuesto por seis átomos anulares, que es aromático y el átomo anular puede ser un átomo distinto de un átomo de carbono, es decir, un heteroátomo. Cuando el anillo aromático de seis miembros contiene un heteroátomo, el heteroátomo puede ser N, S u O, y el número de heteroátomos no está limitado a uno, y puede ser dos, tres o similares. El anillo aromático de seis miembros que contiene uno o varios heteroátomos en la presente invención incluye, pero sin limitarse a, un anillo de piridina, un anillo de pirimidina, un anillo de pirazina, etc.
"Hidrógeno" significa protio (1H), que es el principal isótopo estable de hidrógeno.
"Deuterio" significa un isótopo morfológico estable de hidrógeno, también conocido como hidrógeno pesado, y su símbolo elemental es D.
Halógeno significa átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo o átomo de yodo.
"Alquilo" significa un grupo hidrocarbonado alifático C1-C20 saturado, incluidos los grupos de cadena lineal y de cadena ramificada (los rangos numéricos registrados en esta solicitud, como "1-20", significan que el grupo, cuando es un grupo alquilo, puede contener 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. hasta 20 átomos de carbono). Un grupo alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono se denomina grupo alquilo inferior. Cuando el grupo alquilo inferior no tiene sustituyentes, se denomina grupo alquilo inferior no sustituido. Más preferiblemente, el grupo alquilo es un grupo alquilo de tamaño medio que tiene de 2 a 5 átomos de carbono. El grupo alquilo en la presente invención es, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo o pentilo. Preferiblemente, el grupo alquilo es un grupo alquilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, isobutilo o t-butilo. El grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido. "Alcoxi" denota -O-(alquilo no sustituido). Los ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y similares.
"Carbonilo" significa C=O.
"Grupo sulfona" significa -S(O)2-.
“Grupo tionileno” significa -S(O)-.
"Metileno" significa -CH2-.
"Imino" significa -NH-.
"Hidroxi" significa -OH.
"Nitro" significa -NO2.
"Amino" significa -NH2.
"Carboxi" significa -COOH.
"Ciano" significa -CN.
Una "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal que comprende un compuesto como se define anteriormente con un ácido orgánico o inorgánico, es decir, aquellas sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades del compuesto original. Tales sales incluyen: 1
(1) una sal de adición de ácido obtenida por reacción de una base libre de un compuesto parental con un ácido inorgánico u orgánico como, pero sin limitarse a, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metafosfórico, ácido sulfúrico, ácido sulfuroso y ácido perclórico, etc., ácido orgánico como, pero sin limitarse a, ácido acético, ácido propiónico, ácido acrílico, ácido oxálico, ácido (D) o (L) málico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido hidroxibenzoico, Y-hidroxibutírico ácido, ácido metoxibenzoico, ácido ftálico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido naftaleno-1-sulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido succínico o ácido malónico.
(2) una sal obtenida reemplazando un protón ácido en un compuesto original por un ion metálico o formando un complejo con una base orgánica, el ion metálico es, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion de metal alcalinotérreo o un ion de aluminio, la base orgánica es, por ejemplo, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina y similares.
Una "composición farmacéutica" significa una mezcla de uno o más de los compuestos descritos en el presente documento o sus sales y profármacos farmacéuticamente aceptables con otros ingredientes químicos, tales como portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables. El propósito de la composición farmacéutica es facilitar la administración del compuesto al organismo.
En lo sucesivo, a menos que se especifique lo contrario, se entiende que los compuestos definidos anteriormente como ingredientes activos de los agentes terapéuticos, incluidas todas sus sales farmacéuticamente aceptables, están incluidos dentro del alcance de la invención. En la presente memoria descriptiva, son referidos simplemente como “compuestos como se define anteriormente sólo por conveniencia.
La presente invención incluye una composición farmacéutica que comprende un compuesto entre uno cualquiera de la presente invención como ingrediente activo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y también un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Cada compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tiene baja toxicidad y buen efecto medicinal, y se puede utilizar para la fabricación de un medicamento para promover la excreción de ácido úrico, en particular, para el tratamiento o prevención de la hiperuricemia o la gota. Los experimentos muestran que los compuestos proporcionados por la presente invención tienen un efecto inhibidor muy bueno sobre el transporte de ácido úrico por hURATI en células transfectadas con HEK293, lo que indica que los compuestos tienen una buena perspectiva de aplicación en el tratamiento de la hiperuricemia o la gota.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se describirá adicionalmente a continuación mediante realizaciones.
Realización 1: Síntesis de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-pirimidin-3-il)metanona (4)
Figure imgf000007_0001
Etapa A: Una mezcla de 2-aminopirimidina (570 mg, 6,0 mmoles), oxicloruro de fósforo (4,6 g, 30,0 mmoles), N,N-dimetilpropionamida (910 mg, 9,0 mmoles) y metilbenceno (15 mL) se agitó durante 2 h a 110°C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, a continuación, se vertió en agua con hielo (60 mL) y se ajustó con solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8-9. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 5) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo:éter de petróleo = 1:1 a 20:1) para obtener N,N-dimetil-N'-(pirimidin-2-il)-propanimidamida (1) (250 mg). El rendimiento fue de 23,4%. Etapa B: Una mezcla del compuesto 1 (240 mg, 1,35 mmoles), 2-bromo-1-(4-metoxifenil)etanona (308 mg, 1,35 mmoles) y DMF (10 mL) se agitó durante 2 h a temperatura ambiente, a continuación, se calentó a 60°C y se agitó continuamente durante 1,5 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (40 mL), se ajustó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8, y se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) y a continuación, se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo:éter de petróleo = 1:4 a 2:5) para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (2) (190 mg). El rendimiento fue de 50,0%. RMN H1 (DMSO-C6,400 MHz) 59,45-9,43 (m, 1H), 8,77-8,75 (m, 1H), 7,74 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 2H), 7,31-7,29 (m, 1H), 7,12 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,52-2,51 (m, 2H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Etapa C: Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de boro 1,0 M en metilbenceno (1,7 mL) a una solución del compuesto 2 (120 mg, 0,427 mmoles) en diclorometano anhidro (10 mL) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (20 mL) y se ajustó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 -8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 -300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo: THF=1:5:1 a 5:5:1) para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-hidroxifenil)metanona (3) (101 mg). El rendimiento fue de 88,5%.
Etapa D: Se añadió gota a gota una solución de bromo (66 mg, 0,413 mmoles) en ácido acético (2 mL) a una solución del compuesto 3 (50 mg, 0,187 mmoles) y acetato de sodio (46 mg, 0,561 mmoles) en ácido acético (5 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 0,5 ha temperatura ambiente. Se añadió gota a gota solución acuosa saturada de hidrogenosulfito de sodio a la mezcla de reacción hasta que desapareció el color. El disolvente se evaporó a presión reducida y a la mezcla de reacción se le añadió agua (30 mL) y se ajustó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 2). y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se recristalizó con acetato de etilo/éter de petróleo para obtener (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)metanona (4). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,42 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 1H), 8,78 (dd, J = 2,0, 7,6 Hz, 1H), 7,91 (s, 2H), 7,34­ 7,31 (m, 1H), 2,51-2,48 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 426,0 [M+H]+.
Realización 2: Síntesis de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(6-etilimidazo[2,1-b]-tiazol-5-il)metanona (8)
Figure imgf000008_0001
Etapa A: Una mezcla de 2-aminotiazol (600 mg, 6,0 mmoles), oxicloruro de fósforo (4,6 g, 30,0 mmoles), N,N-dimetilpropionamida (910 mg, 9,0 mmoles) y metilbenceno (15 mL) se agitó durante 2 h a 110°C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, a continuación, se vertió en agua con hielo (60 mL) y se ajustó con solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener N,N-dimetil-N'-(tiazol-2-il)propanimidamida (5) (890 mg). El rendimiento fue de 80,9%. Etapa B: Una mezcla del compuesto 5 (439 mg, 2,40 mmoles), 2-bromo-1-(4-metoxifenil)etanona (604 mg, 2,64 mmoles) y DMF (10 mL) se agitó durante 1 h a temperatura ambiente, a continuación, se calentó a 60°C y se agitó continuamente durante 5 h, y a continuación, se calentó a 130°C y se agitó durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (40 mL), se ajustó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8 y se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) y a continuación, se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:30 a 1:20) para obtener (6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)-(4-metoxifenil)metanona (6) (311 mg). El rendimiento fue de 45,3%. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 58,14 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,45 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,10 (t, J = 7,6 Hz, 3H). Etapa C: Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de boro 1,0 M en metilbenceno (1,6 mL) a una solución del compuesto 6 (113 mg, 0,395 mmoles) en diclorometano anhidro (10 mL) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (20 mL) y se ajustó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 -8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 -300, eluyendo con acetato de etilo: diclorometano = 1:2) para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)(4-hidroxifenil)-metanona (7) (39 mg). El rendimiento fue de 36,3%.
Etapa D: Se añadió NBS (48 mg, 0,270 mmoles) a una solución del compuesto 7 (37 mg, 0,136 mmoles) en DMF (3 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante 0,5 h a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (20 mL) y se filtró. La torta del filtro se lavó con una gran cantidad de agua y el sólido obtenido se disolvió con una mezcla disolvente de THF/acetato de etilo y se secó con sulfato sódico anhidro. La mezcla se filtró con una almohadilla de gel de sílice para obtener (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)-metanona (8) (40 mg). El rendimiento fue de 68,4%. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 58,14 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,86 (s, 2H), 7,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 2,43 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 430,9 [M+H]+.
Realización 3: Síntesis de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]-pirazin-3-il)metanona (12)
Figure imgf000009_0001
Etapa A: Se añadió gota a gota trietilamina (4,68 g, 46,2 mmoles) a una mezcla de 2-aminopirazina (2,0 g, 21,0 mmoles), oxicloruro de fósforo (4,84 g, 31,6 mmoles), N,N-dimetilpropionamida (2,34 g, 23,1 mmoles) y cloroformo (20 mL) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua con hielo (60 mL) y se ajustó con solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con diclorometano (50 mL x 5) y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. Posteriormente, la mezcla se filtró en una columna corta de gel de sílice y el disolvente se evaporó a presión reducida para obtener N,N-dimetil-N'-(pirazin-2-il)propanimidamida (9) (1,82 g). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin purificación.
Etapa B: Una mezcla del compuesto bruto 9 (900 mg), 2-bromo-1-(4-metoxifenil)-etanona (1,27 g, 5,54 mmoles) y THF (25 mL) se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (50 mL), se ajustó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8 y se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo:éter de petróleo = 1:4 a 2:5) para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (10) (160 mg). El rendimiento total de las reacciones en las etapas A y B fue de 5,5%. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,23 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,93-8,91 (m, 1H), 8,14 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 2H), 7,12 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,57 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Las operaciones experimentales en las etapas C y D se remitieron a las etapas C y D en la Realización 1 para obtener (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanona (12). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz): 5 9,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,59-8,58 (m, 1H), 7,98-7,97 (m, 1H), 7,72 (s, 2H), 2,71 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,27 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 426,0 [M+H]+.
Realización 4: Síntesis de 3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo (20)
Figure imgf000009_0002
Etapa A: Se disolvieron 2-aminopiridina (2,0 g, 21,3 mmoles) y trietilamina (2,58 g, 25,5 mmoles) en diclorometano (20 mL) y se añadieron gota a gota cloruro de propionilo (2,07 g, 22,4 mmoles) en un baño de agua con hielo y la mezcla obtenida se calentó automáticamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A la mezcla se le añadió agua (40 mL) y se extrajo con diclorometano (40 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:15 a 1:10) para obtener N-(piridin-2-il)-propionamida (13) (2,74 g). El rendimiento fue de 85,6%.
Etapa B: Se añadió 4-metoxiacetofenona (44 g, 293 mmoles) a una mezcla de bis(tetrafluoroborato) de 1-clorometil-4-fluoro-1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano (104 g, 294 mmoles), yodo (38,6 g, 152 mmoles) y acetonitrilo (440 mL) en un baño de agua con hielo. Después de la adición, la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le añadió agua (1350 mL) y se separó una gran cantidad de sólido. La mezcla se filtró y se secó para obtener 3-yodo-4-metoxiacetofenona (14) (70,0 g). El rendimiento fue de 86,5%.
Etapa C: Una mezcla del compuesto 14 (70,0 g, 254 mmoles), cianuro cuproso (34,0 g, 380 mmoles) y DMF (400 mL) se agitó durante la noche a 130°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se filtró con celite, se le añadió agua (1600 mL) y se extrajo con acetato de etilo (800 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (400 mL x 2) y salmuera (400 mL) y a continuación, se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener 5-acetil-2-metoxibenzonitrilo (15) (50,0 g). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin tratamiento adicional.
Etapa D: Se añadió gota a gota una solución de bromo (49,0 g, 307 mmoles) en metanol (50 mL) a una solución del compuesto bruto 15 (45,0 g) en metanol (250 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (900 mL), se filtró y se secó para obtener 5-(2-bromo-acetil)-2-hidroxi-3-metilbenzonitrilo (16) (41,0 g). El rendimiento total de las reacciones en las etapas B y C fue de 70,6%.
Etapa E: Una mezcla del compuesto 16 (41,0 g, 161 mmoles), el compuesto 13 (24,0 g, 161 mmoles) y metilbenceno (600 mL) se calentó a reflujo y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (400 mL) y se ajustó con solución saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (600 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:30 a 2:1) para obtener 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridino-3-carbonil)-2-metoxibenzonitrilo (17) (25,7 g). El rendimiento fue de 52,3%.
Etapa F: se añadió en porciones hidruro de sodio al 60% (4,8 g, 120 mmoles) a una solución de etanotiol (8,4 mL) en THF (30 mL), la mezcla se agitó durante aproximadamente 5 min y a continuación, se filtró, y la torta del filtro se recogió. Posteriormente, la torta del filtro se añadió a una mezcla que contenía el compuesto 17 (9,0 g, 29,5 mmoles) y DMF (25 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 2 ha 60°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se filtró con celite, se le añadió agua (100 mL) y se ajustó con una solución acuosa de ácido cítrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 - 6. La mezcla se filtró y la torta del filtro se recristalizó con acetonitrilo para obtener 5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridino-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrilo (18) (7,2 g). El rendimiento fue de 83,8%. Etapa G: se añadió en porciones NBS (5,28 g, 29,7 mmoles) a una solución del compuesto 18 (7,2 g, 24,7 mmoles) en DMF (70 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (210 mL) y se filtró, y la torta del filtro se lavó con agua (100 mL x 3) y se recristalizó con acetonitrilo para obtener 3-bromo-5-(2-etilimidazo[1,2-a]piridino-3-carbonil)-2-hidroxibenzonitrilo (19) (7,0 g). El rendimiento fue de 76,8%. RMN H1 (DMSO-d6, 300 MHz) 59,01 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,65­ 7,59 (m, 1H), 7,22-7,17 (m, 1H), 2,58-2,50 (m, 2H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 368,0 [M-H]-.
Etapa H: Se añadió borohidruro de sodio (50 mg, 1,32 mmoles) a una solución del compuesto 19 (50 mg, 0,135 mmoles) en metanol (5 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 0,5 ha temperatura ambiente y se le añadió borohidruro de sodio (50 mg, 1,32 mmoles). La mezcla se agitó durante 0,5 h, se añadió agua (20 mL), se ajustó con solución acuosa de ácido cítrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 - 6, se extrajo con acetato de etilo/THF (7 V/1 V, 30 mL x 3), y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 30, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo: THF = 10:30:1 a 20:10:1) para obtener 3-bromo-5-[(2-etilimidazo-[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo (20). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 58,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,52-7,50 (m, 2H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,84-6,82 (m, 1H), 6,33 (s, 1H), 6,23 (s, 1H), 2,71 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 372,1 [M+H]+.
Realización 5: Síntesis de 5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo (21)
Figure imgf000010_0001
El compuesto 18 se utilizó como materia prima y el método para preparar el compuesto 21 se remitió a la etapa H en la Realización 4. RMN H1 (DMSO-CÍ6, 400 MHz) 58,14 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,48-7,45 (m, 2H), 7,25-7,22 (m, 1H), 7,18-7,14 (m, 1H), 6,85-6,83 (m, 1H), 6,78-6,74 (m, 1H), 6,16 (s, 1H), 2,71 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 294,1 [M+H]+.
Realización 6: Síntesis de 2,6-dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiazol-5-il)-hidroximetil]fenol (22)
Figure imgf000011_0001
El compuesto 8 se utilizó como materia prima y el método para preparar el compuesto 22 se remitió a la etapa H en la Realización 4. 1RMN H (DMSO-CÍ6, 400 MHz) 59,93 (s, 1H), 7,52 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,46 (s, 2H), 7,12 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,24 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 2,59 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 432,9 [M+H]+. Realización 7: Síntesis de 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)-hidroximetil]fenol (23)
Figure imgf000011_0002
El compuesto 12 se utilizó como materia prima, y el método para preparar el compuesto 23 se remitió a la etapa H en la Realización 4. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,98 (s, 1H), 8,97 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,27-8,26 (m, 1H), 7,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,47 (s, 2H), 6,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,75 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 425,9 [M-H]-.
Realización 8: Síntesis de 2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-6-fluorofenol (28)
Figure imgf000011_0003
Etapa A: Se disolvieron 2-amino-5-fluoropiridina (2,5 g, 22,3 mmoles) y trietilamina (2,71 g, 26,8 mmoles) en diclorometano (25 mL) y se añadió gota a gota cloruro de propionilo (2,17 g, 23,5 mmoles) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se calentó automáticamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A la mezcla se le añadió agua (40 mL) y se extrajo con diclorometano (40 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:5) para obtener N-(5-fluoropiridin-2-il)-propionamida (24) (3,04 g). El rendimiento fue de 81,1%.
Etapa B: Se añadió en porciones NBS (977 mg, 5,49 mmoles) a una solución de 3-fluoro-4-hidroxiacetofenona (806 mg, 5,23 mmoles) en Dm F (10 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (30 mL x 3) y salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se recristalizó con éter de petróleo/acetato de etilo para obtener 3-bromo-5-fluoro-4-hidroxiacetofenona (25) (1,0 g). El rendimiento fue de 82,0%.
Etapa C: Se añadió gota a gota una solución de bromo (824 mg, 5,16 mmoles) en metanol (5 mL) a una solución del compuesto 25 (1,0 g, 4,29 mmoles) en metanol (20 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (60 mL) y se extrajo con acetato de etilo (60 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:5) para obtener 2-bromo-1-(3-bromo-5-fluoro-hidroxifenil)etanona (26) (940 mg). El rendimiento fue de 70,2%. Etapa D: Una mezcla del compuesto 24 (210 mg, 1,25 mmoles), el compuesto 26 (300 mg, 0,962 mmoles) y N-metilpirrolidona (10 mL) se agitó durante la noche a 150°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (50 mL), se ajustó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8 y se ajustó con solución acuosa de ácido cítrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 - 6. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:25 a 1:5) para obtener (3-bromo-5-fluoro-4-hidroxifenil)(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona (27). RMN H1 (DMSO-d6, 500 MHz) 5 11,44 (s, 1H), 9,24-9,22 (m, 1H), 7,88-7,85 (m, 1H), 7,75-7,71 (m, 2H), 7,63-7,60 (m, 1H), 2,47 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 379,0 [M-H]-.
Etapa E: Se añadieron borohidruro de sodio (80 mg, 2,11 mmoles) y cloruro de litio (14 mg, 0,330 mmoles) a una solución del compuesto 27 (80 mg, 0,210 mmoles) en metanol (10 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 2,5 h a 35°C. A la mezcla se le añadió agua (20 mL), se ajustó con solución acuosa de ácido cítrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 - 6 y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. La mezcla se filtró con una almohadilla corta de gel de sílice, el disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se recristalizó con acetato de etilo/éter de petróleo para obtener 2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroximetil]-6-fluorofenol (28). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 510,43 (s, 1H), 8,27-8,25 (m, 1H), 7,59-7,56 (m, 1H), 7,31-7,25 (m, 2H), 7,15-7,12 (m, 1H), 6,33 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,21 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,66 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 383,0 [M+H]+.
Realización 9: Síntesis de 2,6-dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-hidroximetil]fenol (35)
Figure imgf000012_0001
Etapa A: Una mezcla de yoduro de 1-aminopiridinio (15,54 g, 70,0 mmoles), 2-pentinoato de etilo (9,72 g, 77,1 mmoles), carbonato de potasio (21,26 g, 154 mmoles) y DMF (150 mL) se agitó durante 4,5 h a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (450 mL) y se filtró, y la torta del filtro se lavó con agua (100 mL) para obtener 2-etilpirazolo[1,5-a]-piridin-3-formiato de etilo (29) (12,25 g). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin secado.
Etapa B: Una mezcla del compuesto húmedo 29 (12,25 g), etanol (30 mL), THF (30 mL) y solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M (70 mL) se agitó durante la noche a 60°C. Aproximadamente la mitad del disolvente se evaporó a presión reducida y la mezcla se agregó con agua (150 mL) y se ajustó con ácido clorhídrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 a 6. La mezcla se filtró para obtener ácido 2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-fórmico (30) (10,0 g). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin secado.
Etapa C: El compuesto húmedo 30 (5,60 g) se suspendió en agua (100 mL) y se le añadió ácido sulfúrico concentrado (4 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 3 ha 80°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se ajustó con solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3) y la fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (30 mL) y salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener 2-etilpirazolo[1,5-a]piridina (31) (3,18 g). El rendimiento total de las reacciones en las etapas A, B y C fue de 47,7%. Etapa D: Una mezcla del compuesto 31 (584 mg, 3,99 mmoles), cloruro de 4-metoxibenzoílo (680 mg, 3,99 mmoles) y tricloruro de aluminio (800 mg, 6,0 mmoles) se agitó durante la noche a 100°C. La mezcla se enfrió ligeramente, se le añadió acetato de etilo (30 mL) y agua (30 mL) y se ajustó con solución acuosa de hidróxido de sodio 2 M hasta que el valor de pH fue de 9 - 10. La mezcla se dispuso en capas y la capa orgánica se recogió. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (30 m Lx 2) y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:30 a 1:10) para obtener (2-etilpirazol[1,5-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (32) (305 mg). El rendimiento fue de 27,3%. RMN H1 (DMSO-d6, 300 MHz) 58,79 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,44-7,39 (m, 1H), 7,33­ 7,30 (m, 1H), 7,08-7,03 (m, 3H), 3,86 (s, 3H), 2,84 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Etapa E: Se añadió en porciones hidruro de sodio al 60 % (218 mg, 5,45 mmoles) a una solución de etanotiol (338 mg, 5,44 mmoles) en DMF (3 mL), la mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 5 min y a continuación, se le añadió una solución del compuesto 32 (305 mg, 1,09 mmoles) en d Mf (3 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante 2 h a 120°C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (30 mL) y se ajustó con ácido clorhídrico diluido hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. Posteriormente, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 m Lx 3) y la fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (20 mL x 3) y salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener (2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)(4-hidroxifenil)metanona (33) (420 mg). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin purificación. RMN H1 (DMSO-d6, 300 MHz) 510,22 (s, 1H), 8,76 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,42­ 7,31 (m, 2H), 7,05-7,01 (m, 1H), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,84 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 265,1 [M-H]-.
Etapa F: Se añadió gota a gota una solución de bromo (67 mg, 0,419 mmoles) en ácido acético (1 mL) a una solución del compuesto 33 (73 mg) y acetato de sodio anhidro (46,3 mg, 0,564 mmoles) en ácido acético (5 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota solución acuosa diluida de hidrogenosulfito de sodio a la mezcla de reacción hasta que desapareció el color. El disolvente se evaporó a presión reducida y a la mezcla de reacción se le añadió una cantidad adecuada de agua y se ajustó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mLx 2) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:20 a 1:1) para obtener (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)metanona (34) (60 mg). El rendimiento total de las reacciones en las etapas A y B fue de 75,4%. Rm N H1 (DMSO-d6, 300 MHz) 5 10,77 (s, 1H), 8,81 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,80 (s, 2H), 7,50-7,40 (m, 2H), 7,12-7,07 (m, 1H), 2,82 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,23 (t, J = 7,5 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 420,9 [M-H]-.
Etapa G: Se añadió borohidruro de sodio (143 mg, 3,78 mmoles) a una mezcla del compuesto 34 (160 mg, 0,377 mmoles), metanol (15 mL) y agua amoniacal concentrada (5 mL). La mezcla obtenida se calentó a reflujo y se agitó durante 0,5 h, se añadió borohidruro de sodio (143 mg, 3,78 mmoles) y se agitó continuamente durante 0,5 h, se añadió borohidruro de sodio (143 mg, 3,78 mmoles) y se agitó continuamente durante 1 h a esta temperatura. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (20 mL), se ajustó con solución acuosa de ácido cítrico 2 M hasta que el valor de pH fue de 5 - 6 y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:5) para obtener 2,6-dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroximetil]-fenol (35). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,84 (s, 1H), 8,55-8,54 (m, 1H), 7,46-7,43 (m, 3H), 7,14-7,10 (m, 1H), 6,79-6,76 (m, 1H), 5,98 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,72 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,18 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 425,0 [M-H]-.
Realización 10: Síntesis de 2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]-piridin-3-il)hidroximetil]fenol (40)
Figure imgf000013_0001
Etapa A: Se añadió en porciones hidruro de sodio al 60% (1,68 g, 42 mmoles) a una solución de pmetoxiacetofenona (3,0 g, 20,0 mmoles) en DMF (15 mL) de -10°C a 0°C. Después de la adición, la mezcla se agitó continuamente durante 40 min a esta temperatura y a continuación, se añadió gota a gota propionato de etilo (2,04 g, 20 mmoles). Después de un tiempo, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A la mezcla se le añadió agua (60 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL x 2) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:30) para obtener 1-(4-metoxifenil)pentano-1,3-diona (36) (3,16 g). El rendimiento fue de 76,6%.
Etapa B: Se disolvieron 2-amino-5-bromopiridina (1,3 g, 7,51 mmoles) y el compuesto 36 (1,86 g, 9,02 mmoles) en THF (26 mL) y se añadió sucesivamente a la mezcla diacetato de yodobenceno (2,9 g, 9,00 mmoles). mmoles) y dietil eterato de trifluoruro de boro (220 mg, 1,55 mmoles) en un baño de agua con hielo, a continuación, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. A la mezcla se le añadió agua (30 mL), se ajustó con solución saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8 y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 -300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:30) para obtener (6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (37) (575 mg). El rendimiento fue de 21,3%.
Las operaciones experimentales en las etapas C y D se remitieron a las etapas C y D en la Realización 1. Las operaciones experimentales en la etapa E se remitieron a la etapa H en la Realización 4, y se obtuvo 2,6-dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]fenol (40). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,98 (s, 1H), 8,40 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,55-7,48 (m, 1H), 7,45 (s, 2H), 7,35-7,32 (m, 1H), 6,38 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,26 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,60 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,18 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 502,9 [M-H]-.
Realización 11: Síntesis de 2,6-dibromo-4-{[2-etil-7-(trifluorometil)-imidazo[1,2-a]piridin-3-il]hidroximetil}fenol (41)
Figure imgf000014_0001
El método para preparar el compuesto 41 se remite a la Realización 10, en donde la 2-amino-3-bromopiridina en la etapa B de la Realización 10 se reemplazó por 2-amino-4-trifluorometilpiridina. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 5 8,39 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,44 (s, 2H), 7,12-7,10 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 2,76 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 494,9 [M+H]+.
Realización 13: Síntesis de 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-metil]fenol (47)
Figure imgf000014_0002
Etapa A: Una mezcla del compuesto 13 (300 mg, 2,0 mmoles), 2-bromo-1-(4-metoxifenil)etanona (460 mg, 2,0 mmoles) y metilbenceno (10 mL) se calentó a reflujo y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (30 mL) y se ajustó con solución acuosa saturada de carbonato de potasio hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 a 300, eluyendo con acetato de etilo:éter de petróleo = 1:30 a 1:1) para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)-metanona (43) (254 mg). El rendimiento fue de 45,3%. RMN H1 (DMSO-d6, 500 MHz) 59,18 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,74-7,69 (m, 3H), 7,58-7,55 (m, 1H), 7,17-7,14 (m, 1H), 7,09 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,45 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,11 (t, J = 7,5 Hz, 3H). EM (IE, m/z): 281,1 [M+H]+.
Etapa B: Se añadió en porciones borohidruro de sodio (267 mg, 7,06 mmoles) a una solución del compuesto 43 (1,32 g, 4,71 mmoles) en metanol (20 mL). Después de la adición, la mezcla se agitó continuamente durante 20 min. A la mezcla se le añadió agua (100 mL) y se separó una gran cantidad de sólido. La mezcla se filtró y la torta del filtro se disolvió con acetato de etilo (120 mL). La solución resultante se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener (2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (44) (1,29 g). El rendimiento fue de 97,0%. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 58,14-8,12 (m, 1H), 7,48-7,45 (m, 1H), 7,24 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,16-7,12 (m, 1H), 6,90-6,88 (m, 2H), 6,74-6,72 (m, 1H), 6,23 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,74 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,26 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Etapa C: Se añadió trietilsilicano (1,31 g, 11,3 mmoles) a una solución del compuesto 44 (1,06 g, 3,75 mmoles) y dietil eterato de trifluoruro de boro (2,66 g, 18,7 mmoles) en diclorometano (40 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (40 mL) y se ajustó con una solución saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se dispuso en capas, la fase acuosa se extrajo con diclorometano (40 mL x 2) y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se recristalizó con diclorometano/éter de petróleo para obtener 2-etil-3-(4-metoxibencil)imidazo[1,2-a]piridina (45) (896 mg). El rendimiento fue de 89,7%. Las operaciones experimentales en las etapas D y E se remitieron a las etapas C y D en la Realización 1 para obtener 2,6-dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metil]fenol (47). RMN H1 (DMSO-CÍ6, 400 MHz) 59,84 (s, 1H), 8,15 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,29 (s, 2H), 7,20-7,16 (m, 1H), 6,86-6,83 (m, 1H), 4,25 (s, 2H), 2,75 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 409,0 [M-H]-.
Realización 14: Síntesis de (3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(6-etilimidazo-[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il)metanona (49)
Figure imgf000015_0001
El método para preparar el compuesto 49 se remitió a las etapas A y B en la Realización 2, en donde el 2-aminotiazol en la etapa A en la Realización 2 se reemplazó por 2-amino-1,3,4-tiadiazol y la 2-bromo-1(4-metoxifenil)etanona se reemplazó por 2-bromo-1-(3,5-dibromo-4-metoxifenil)etanona. RMN H1 (DMSO-CÍ6, 400 MHz) 59,23 (s, 1H), 7,84 (s, 2H), 2,69 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,22 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 429,8 [M-H]-.
Realización 15: Síntesis de 2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-hidroximetil-6-metilfenol (54)
Figure imgf000015_0002
Etapa A: Se añadió gota a gota una solución de bromuro de bromoacetilo (9,9 g, 49,0 mmoles) en diclorometano (10 mL) a una solución de 2-metilanisol (5,0 g, 40,9 mmoles) y tricloruro de aluminio (6,0 g, 45,0 mmoles) en diclorometano (40 mL) durante aproximadamente 20 min de 0°C a 5°C. Después de la adición, la mezcla obtenida se agitó continuamente durante 2,0 horas a esta temperatura. La solución de reacción se vertió en una cantidad adecuada de agua con hielo por lotes y se extrajo con diclorometano (60 mL x 3). La fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua (30 mL), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 mL x 2), agua (30 mL) y salmuera (30 mL) y a continuación, se secó con sulfato de sodio anhidro. La fase orgánica se filtró mediante una columna corta de gel de sílice. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:100 a 1:30) para obtener 2-bromo-1-(3-metil-4-metoxifenil)etanona (50) (3,0 g). El rendimiento fue de 30,2%.
Etapa B: Una mezcla del compuesto 13 (1,85 g, 12,3 mmoles), el compuesto 50 (3,0 g, 12,3 mmoles) y metilbenceno (30 mL) se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (50 mL) y se ajustó con solución acuosa de carbonato de potasio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con diclorometano (60 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 a 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:10 a 1:5) para obtener (3-metil-4-metoxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)-metanona (51) (1,7 g). El rendimiento fue de 47,0%.
Etapa C: Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de boro 1,0 M en metilbenceno (6,8 mL) a una solución del compuesto 51 (800 mg, 2,72 mmoles) en diclorometano anhidro (20 mL) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se agitó durante 6 h en un baño de agua con hielo. La mezcla de reacción se vertió en una cantidad apropiada de agua con hielo y se ajustó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 2) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:5 a 2:1) para obtener (3-metil-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona (52) (630 mg). El rendimiento fue de 82,6%.
Etapa D: Se añadió en porciones NBS (440 mg, 2,47 mmoles) a una solución del compuesto 52 (630 mg, 2,25 mmoles) en DMF (10 mL) y la mezcla obtenida se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (40 mL), se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:3 a 1:1) para obtener (3-bromo-4-hidroxi-5-metilfenil)-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metanona (53) (625 mg). El rendimiento fue de 77,3%.
Las operaciones experimentales en la etapa E se remitieron a la etapa H en la Realización 4 para obtener 2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil-6-metilfenol (54). RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,07 (s, 1H), 8,04 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,26-7,17 (m, 2H), 6,97 (s, 1H), 6,80-6,77 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 2,77 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 360,0 [M-H]-.
Realización 17: Síntesis de 2,6-dibromo-4-{(2-etil-7-metoxiimidazo[1,2-a]-piridin-3-il)hidroximetil}fenol (64)
Figure imgf000016_0001
Etapa A: Se disolvieron 2-amino-4-metoxipiridina (4,9 g, 39,5 mmoles) y trietilamina (4,4 g, 43,5 mmoles) en tetrahidrofurano (30 mL) y se añadió gota a gota cloruro de propionilo (4,0 g, 43,5 mmoles) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadió agua (100 mL) y se extrajo con acetato de etilo (60 mL x 3), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL) y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se añadieron al producto carbonato de potasio (4,1 g, 29,7 mmoles), metanol (50 mL) y agua (12 mL), y la mezcla obtenida se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó a presión reducida, a la mezcla se le añadió agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (15 mL) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida para obtener N-(4-metoxipiridin-2-il)-propionamida (59) (4,85 g). El rendimiento fue de 68,2%.
Etapa B: Una mezcla del compuesto 59 (4,85 g, 26,9 mmoles), 2-bromo-1-(4-metoxifenil)etanona (6,14 g, 26,9 mmoles) y metilbenceno (50 mL) se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (50 mL) y se ajustó con una solución de carbonato de potasio 2 M hasta que el valor de pH fue de 8 - 9. La mezcla se extrajo con diclorometano (70 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con acetato de etilo: éter de petróleo = 1:5 a 2:3) para obtener (2-etil-7-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-metoxifenil)metanona (60) (900 mg). El rendimiento fue de 10,8%. RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 59,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,08 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,88­ 6,86 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 2,38 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,10 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa C: Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de boro 1,0 M en metilbenceno (9 mL) a una solución del compuesto 60 (900 mg, 2,9 mmoles) en diclorometano anhidro (25 mL) en un baño de agua con hielo, y la mezcla obtenida se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en agua con hielo (50 mL) y se ajustó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio hasta que el valor de pH fue de 7 - 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 mL x 3) y se secó con sulfato de sodio anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de malla 200 - 300, eluyendo con metanol: diclorometano = 1:50 a 1:20) para obtener (2-etil-7-hidroxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-hidroxifenil)metanona (61) (477 mg) y (2-etil-7-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)(4-hidroxifenil)-metanona (62) (277 mg). Los rendimientos fueron 58,3% y 32,2% respectivamente. Compuesto 61: RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 5 10,83 (s, 1H), 10,22 (s, 1H), 9,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,89-6,84 (m, 3H), 6,77-6,75 (m, 1H), 2,37 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,08 (t, J = 7,6 Hz, 3H). Compuesto 62: RMN H1 (DMSO-d6, 400 MHz) 810,25 (s, 1H), 9,03 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 2,0, 6,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,91-6,83 (m, 3H), 3,91 (s, 3H), 2,45 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,11 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
Las operaciones experimentales en las etapas D y E se remitieron a las etapas F y G en la Realización 9 para obtener,6-dibromo-4-{(2-etil-7-metoxümidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil}fenol (64). RMN H1 (DMSO-d6, 400 Mhz) 8 7,95 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,40 (s, 2H), 6,87 (s, 1H), 6,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,22 (t, J = 7,6 Hz, 3H). EM (EI, m/z): 453,0 [M-H]-.
Realización 19: Ensayo de inhibición del transporte de ácido úrico para compuestos en la línea celular de transfección HEK293-hURAT1
I. Materiales
La línea de células HEK293 se adquirió del Centro de Recursos Celulares de los Institutos de Ciencias Biológicas de Shanghai de la Academia de Ciencias de China. El plásmido pCMV6-hURAT1 se adquirió de Origene Technologies, Inc. La geneticina (G418) se adquirió de Sangon Biotech Co., Ltd. La polilisina se adquirió de Sigma-Aldrich Co. LLC. El ácido 14C-úrico se adquirió de American Radiolabeled Chemicals, Inc. El gluconato de sodio, el gluconato de potasio, el gluconato de calcio, el KH2SO4, el MgSO4, la glucosa y el HEPES se adquirieron de Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. El medio de cultivo DMEM y el suero bovino fetal se adquirieron de Thermo Fisher Scientific Inc. La benzobromarona se adquirió de Sigma-Aldrich Co. LLC.
II. Métodos experimentales
1. Construcción de una línea celular HEK293 con alta expresión de hURAT1:
El plásmido pCMV6-hURAT1 se transfectó a células HEK293 y a continuación, se obtuvo la cepa estable mediante el escrutinio de resistencia a G418 (concentración final de 500 pg/mL), que es la alta expresión de la proteína de membrana transportadora hURAT1. Se puede utilizar para el ensayo de inhibición in vitro del transportador de ácido úrico hURAT1 (Weaver YM, Ehresman DJ, Butenhoff JL, et al. Funciones Roles of rat renal organic anion transporters in transporting perfluorinated carboxylates with different chain lengths. Toxicological Sciences, 2009, 113(2):305-314). Las células HEK293 son células de riñón embrionario humano con alta eficiencia de transfección y son una línea celular modificada mediante ingeniería genética muy utilizada para expresar genes exógenos.
2. A una placa de 24 pocillos recubierta se le añadieron 200 pl de polilisina de 0,1 mg/ml por pocillo y la placa se dejó durante la noche. Se eliminó la polilisina de los pocillos. Los pocillos se limpiaron minuciosamente con agua estéril y se secaron para su uso.
3. A la placa de 24 pocillos recubierta anterior se le añadieron células estables HEK293-hURAT1 (2x105 células por pocillo). Las células se cultivaron a 37°C bajo CO2 al 5% durante 3 días.
4. Preparación de un tampón HBSS: pesar los siguientes reactivos según la concentración final de gluconato de sodio 125 mM, gluconato de potasio 4,8 mM, gluconato de calcio 1,3 mM, KH2PO41,2 mM, MgSO4 1,2 mM, glucosa 5,6 mM y HEPES 25 mM con agua desionizada. La solución se mezcló por completo para proporcionar HBSS (valor de pH: 7,4). El tampón se almacenó a -20°C.
5. El tampón HBSS se calentó a 37°C en un baño de agua. Se sacó la placa de 24 pocillos con células estables HEK293-hURAT1, se retiró el medio de cultivo y las células se lavaron con HBSS, a continuación, se añadieron 160 pl de HBSS y 20 pl de compuesto de prueba por pocillo. La concentración final del compuesto probado por pocillo es de 500 nM. El pocillo de control en blanco contiene solo 180 pL de HBSS sin el compuesto probado. La placa se colocó a temperatura ambiente durante 10 min.
6. A cada pocillo se le añadieron 20 pL de Ácido 14C-úrico 50 pM. La placa de 24 pocillos se colocó a temperatura ambiente durante 20 min.
7. Se eliminó la solución de cada pocillo y se lavaron las células con el tampón HBSS preenfriado. A cada pocillo se le añadió NaOH 0,2 M para disolver las células. Se recogió la solución que contenía fragmentos de células y se añadió la cantidad correcta de líquido de centelleo. A continuación, se detectó la intensidad del radioisótopo de Ácido C14-úrico (valor de CPM) utilizando el analizador de centelleo líquido PerkinElmer MicroBeta Trilux 1450.
8. La fórmula para calcular la tasa de inhibición del transporte de ácido úrico para los compuestos se muestra a continuación (Tabla 1), el valor de CPM de los compuestos probados se representó mediante CPM (compuesto probado y el valor de CPM del control en blanco se representó mediante CPM (control blanco). Todas las pruebas se repitieron tres veces, se promediaron los resultados y se calculó la desviación típica (DT): Tasas de inhibición (%)(concentración de compuesto 500 nM) = (CPM(control blanco)-CPM(compuesto probado)/(CPM(control blanco) x 100%
III. Resultados experimentales
Los resultados mostraron que, en comparación con el fármaco de control benzbromarona a la concentración de 500 nM, los compuestos 8, 12, 20, 23 y 40 tienen muy buenos efectos inhibidores del transporte de ácido úrico en la línea celular de transfección HEK293-hURAT1.
Tabla 1: Tasas de inhibición del transporte de ácido úrico para los compuestos de prueba\ y benzbromarona a 500 nM en la línea celular de transfección HEK293-hURAT1
Figure imgf000018_0001

Claims (6)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecciona entre los compuestos mostrados por las siguientes estructuras,
Figure imgf000019_0001
en donde
Y es carbonilo, azufre, sulfona, sulfóxido, metileno opcionalmente sustituido o imino;
R1 es hidrógeno, deuterio, hidroxi, halógeno, nitro, amino, ciano, alquilo C1-C3, alquilo C1-C3 sustituido, amino C1-C3 sustituido, alcoxi C1-C3 o alcoxi C1-C3 sustituido;
R2 es hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo C1-C3 o haloalquilo C1-C3;
R3 es alquilo C1-C4, alquilo C1-C4 sustituido o halógeno;
m es un número entero de 0 a 3;
n es 1 o 2;
el sustituyente en el grupo Y se selecciona del grupo que consiste en hidroxilo, amino, ciano, carboxilo, alcoxi C1-C3 o alquilo C1-C3, el sustituyente en el grupo R1, R o R3 se selecciona del grupo que consiste en hidroxilo, halógeno, nitro, amino o ciano;
en la fórmula (II-D) y la fórmula (III-A), Y no es un grupo carbonilo;
con la condición de que el compuesto no sea 2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)-(4-hidroxifenil)metanona.
2. El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la reivindicación 1, en donde Y es un grupo CH-OH, CH-NH2, CH-CN, NH, NCH3 o CO, y R3 es un alquilo C2-C3; en la fórmula (II-D) y la fórmula (III-A), Y no es un grupo carbonilo.
3. El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la reivindicación 1, en donde R es hidrógeno, deuterio, hidroxi, halógeno, nitro, amino, ciano, alquilo C1-C3, haloalquilo C1-C3, alcoxi C1-C3 o haloalcoxi C1-C3, y m es 0, 1 o 2.
4. El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirimidin-3-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[2,1-b]tiozol-5-il)metanona;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)metanona;
3-bromo-5-[(2-etilimidazo[1,2-alpiridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo;
5-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-2-hidroxibenzonitrilo;
2.6- dibromo-4-[(6-etilimidazo[2,1-b]tiozol-5-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]pirazin-3-il)hidroximetil]fenol;
2-bromo-4-[(2-etil-6-fluoroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]-6-fluorofenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilpirazolo[1,5-a]piridin-3-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-[(6-bromo-2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil]fenol;
2.6- dibromo-4-{[(2-etil-7-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridin-3-il)]hidroximetil}fenol;
2.6- dibromo-4-[(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)metil]fenol;
(3,5-dibromo-4-hidroxifenil)(6-etilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiodiazol-5-il)metanona;
2-bromo-4-(2-etilimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil-6-metilfenol;
2.6- dibromo-4-{(2-etil-7-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-3-il)hidroximetil}fenol.
5. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como ingrediente activo o ingrediente activo principal, y un portador farmacéuticamente aceptable.
6. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para su uso para promover la excreción de ácido úrico, en particular, para tratar o prevenir la hiperuricemia o la gota.
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