PL153706B1 - Method of obtaining quinoline diethyldithiocarbamate - Google Patents

Description

RZECZPOSPOLITA OPIS PATENTOWY 153 706

POLSKA

URZĄD

PATENTOWY

RP

Patent dodatkowy do patentu nr-Zgłoszono: 88 09 16 (P. 274705)

Pierwszeństwo: 87 09 18 Francja

Zgłoszenie ogłoszono: 89 05 16

Opis patentowy opublikowano: 1991 11 29

Int. Cl.⁵ C07C 333/l<>

cnnien

C C e t H

Twórca wynalazku---Uprawniony z patentu: Lafon Pharma S. A., Fribourg (Szwajcaria)

Sposób wytwarzania dwuetylodwutiokarbaminianu choliny

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowej pochodnej kwasu dwuetylodwutiokarbaminowego, to jest dwuetylodwutiokarbaminianu choliny.

Nowa pochodna otrzymana sposobem według wynalazku ma wzór sumaryczny C10H24N2OS2 i odpowiada wzorowi strukturalnemu 1. Pochodna ta ma ciężar cząsteczkowy 252,40. Ta nowa sól choliny ma postać drobnych kryształów bezbarwnych lub lekko żółtawych, o temperaturze topnienia 96-97°C, łatwo rozpuszczalnych w wodzie, w alkoholach i glikolach i znacznie mniej rozpuszczalnych w rozpuszczalnikach organicznych.

Kryształy dwuetylodwutiokarbaminianu choliny są bardzo higroskopijne i muszą zatem być przechowywane w pomieszczeniach hermetycznych i zimnych.

Procentowa analiza elementarna produktu dała następujące wyniki:

	Obliczone	Oznaczone	Przeciętne
węgiel	48,85%	48,18-48,47	48,33%
wodór	9,64%	9,37- 9,54	9,45%
azot	11,12%	11,59-11,51	11,55%
siarka	25,55%	24,94-24,75	24,85%
tlen	6,35%

Widma IR, UV, NMR i masowe dobrze wykazały pasma charakterystyczne cząsteczki nowego produktu otrzymanego sposobem według wynalazku.

Sposobem według wynalazku dwuetylodwutiokarbaminian choliny sporządza się przez reakcję trójwodzianu dwuetylodwutiokarbaminianu sodu o wzorze 2 z chlorkiem choliny o wzorze 3 tak jak przedstawiono na załączonym schemacie.

Oznaczono własności terapeutyczne nowej soli choliny otrzymanej sposobem według wynalazku i przeprowadzono bardzo kompletne badanie jej toksyczności.

Badania toksykologiczne przeprowadzono na maszynach rasy SWISS. Na zwierzętach tych można było przebadać toksyczność ostrą, toksyczność przewlekłą, wpływ na płodność, powstawa2

153 706 nie nieprawidłowości płodu w macicy, zapładnianie i długowieczność, wpływ na skuteczność reakcji odpornościowej dwuetylodwutiokarbaminianu choliny. Do wszystkich tych prób zwierzęta wybrano przypadkowo, rozdzielono według płci, podzielono na partie po 30, samice ciężarne oddzielono do osobnych klatek. Zwierzęta żywiono odpowiednim pełnym pożywieniem, które mogły spożywać do woli, aby uniknąć jakiegokolwiek niedoboru w trakcie doświadczenia. Jako napój stosowano zwykłą wodę z dodatkiem lub bez dodatku badanego produktu to jest dwuetylodwutiokarbaminianu choliny. Stosowane pełne pożywienie zawierało zboże, białko roślinne, białko zwierzęce, sole mineralne i witaminy.

Pomiar toksyczności ostrej nowych związków według wynalazku podawanych drogą pozajelitowy Lnodskórną wykazał, że związki te mają bardzo słabą toksyczność ostrą: poniżej 1 g/kg nie wykazwą śmiertelności, zaś DL 50 zawarte jest w granicach 1,4 do 1,7 g/kg. Wyniki te ilustruje wykrćsu na załączonym rysunku, na którym na osi odciętych podano ilość dwuetylodwutiokarbaminianu choliny podawanej śródotrzewnowo lub podskórnie w g/kg, zaś na osi rzędnych % martwych myszy padłych w próbie toksyczności ostrej.

W celu oznaczenia toksyczności przewlekłej nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku podawano drogą doustną w wodzie do picia dawką 20 mg/kg na dzień nowego związku 4 partiom po 30 myszy przez 100 dni. Nie można było zanotować żadnego działania szkodzącego zdrowiu zwierząt.

Przeprowadzono badania nad działaniem nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku na płodność i powstawanie nieprawidłowości płodu w macicy myszy białych rasy SWISS. Próby prowadzono kolejno przez 4 generacje zwierząt i wykazały one, że partie otrzymujące nowe związki o wzorze 1 miały w sumie o 15% więcej potomstwa niż próba kontrolna, przy stosunku myszek urodzonych martwo poniżej połowy.

Wyniki przedstawiono w tabeli 1.

Tabela 1

Próby na płodność i powstywanie nieprawidłości płodu w macicy 4-miesięcznych samic białych myszy rasy SWISS prowadzone przez 4 generacje

Generacja	Ilość kontrolowanych myszy ciężarnych w każdej generacji	Ilość żywo urodzonych myszek i	Ilość nartwo urodzonych myszek	Liczba wchłoniętych płodów
T	G	T	G	T	G	T	G
I	30	30	255	249	7		15	2
II	30	30	242	316	5	2	9	2
m	30	30	258	324	8	-	8	-
IV	30	30	263	308	3	-	11	-
Razem	120	120	1018	1197	23	2	43	4

T - próba kontrolna

G - 1% dwuetylodwutiokarbaminian choliny w wodzie do picia

Również ocena płodności samic myszy w zależności od wieku wykazała, że podawanie nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku wydłuża zasadniczo okres płodności samic myszy jak przedstawiono w tabeli 2.

Tabela 2

Próby na płodność samic myszy rasy SWISS w zależności od wieku

	% płodnych samic myszy	przeciętna liczba myszek na płodną samicę
T	G	T	G
myszy 4-miesięczne	97	97	8.5	9,8
myszy 8-miesięczne	62	92	6.9	8,0
myszy 15-miesięczne	23	60	5,2	7,5

T - próba kontrolna

G-1% dwuetylodwutiokarbaminian choliny w wodzie do picia

153 706

W końcu, w odniesieniu do wzrastania i długowieczności zwierząt można zaznaczyć, że nowe związki otrzymane sposobem według wynalazku nie mają negatywnego wpływu na wzrastanie, mimo obniżenia o około 25% dawki wody i o około 5% dawki pożywienia. Przeciwnie, stwierdzono, że podawanie nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku znacznie opóźnia starzenie się. To ostatnie działanie jest szczególnie spektakularne u samic myszy i wydaje się pochodzić ze zmiany charakterów i zachowań dających zmniejszenie wrażliwości, co powoduje zwykle bardzo silną agresję. Samce z próby kontrolnej biły się znacznie częściej, wyczerpując się, raniąc i zabijając się.

Na wykresie 2 w badaniach długowieczności przedstawiono krzywe śmiertelności samców i samic myszy pojonych zwykłą wodą dla próby kontrolnej i zwykłą wodą z dodatkiem 1% dwuetylodwutiokarbaminianu choliny dla próby z doświadczalnymi partiami myszy. Na wykresie tym, na osi odciętych podano wiek myszy w miesiącach, a na osi rzędnych % martwych myszy. Każda krzywa przedstawia średnicą z prób prowadzonych w 10 partiach po 30 myszy w każdej partii. Krzywa (1) ilustruje wyniki doświadczenia prowadzonego na samcach myszy stanowiących próbę kontrolną, krzywa (2) - na samcach myszy, którym podawano dwuetylodwutiokarbaminian choliny, krzywa (3) -próbę kontrolną na samcach myszy, a krzywa (4) na samcach myszy, którym podawano dwuetylodwutiokarbaminian choliny.

Badano również wpływ nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku na skuteczność reakcji odpornościowych u białych myszy rasy SWISS.

Ochronę zwierząt wyższych przed agresjami zapewnia układ odpornościowy w stosunku do antygenów wyższego kompleksu wykazującego zgodność tkankową. Skuteczność reakcji odpornościowej zależy od mechanizmów i równowag sprzężonych co determinuje główne parametry kompetencji (wrażliwość, dokładność, intensywność, czas trwania). W ten sposób liczne i różne agresje są zwykle szybko opanowywane nie będąc zauważone przez obiekt agresji. Ale gdy reakcje niewłaściwe i błędne są często, pochodzą one od licznych chorób zapaleniowych trudnych do opanowania, a które na ogół są wzmagane w miarę starzenia się. W takich przypadkach konieczne jest postępowanie higieniczne i interwencje terapeutyczne dla skorygowania błędów odpornościowych, opanowania zapalenia i dla przywrócenia funkcjonowania tkanek i miejsc dotkniętych.

Tabela 3 ilustruje potencjalizację kompetencji odpornościowej dwuetylodwutiokarbaminianu choliny. W tablicy pokazano, że dla uzyskania tej samej ochrony odpornościowej potrzeba 100 mg szczepionki specyficznej dla próby kontrolnej i jedynie 20 mcg dla myszy traktowanych związkiem otrzymanym sposobem według wynalazku.

Tabe 1 a 3

Wpływ dwuetylodwutiokarbaminianu choliny u myszy na skuteczność reakcji odpornościowej na zaszczepioną podskórnie chorobotwórczą Escherichia coli

Dawka śmiertelna	Ilość wstrzykniętej szczepionki drogą podskórną (mcg/mysz 0 wadze 25 g)
(DL) w % inokulum chorobotwórczego w _ zależności od dawki 0 uzc7r7<*pinnpj	3	10	8 dni przed próbą patogenną 20 50		70	100 150
szczepionki T G	T G	T G	T G	T G	T	G	T G T G
DLo			+	+		+	+ + + +
DLao		+
DLso					+
DL70	+		+	+
DL100 + +	+	+

T - próba kontrolna,

G - partie pojonowe od 21 dni wodą do picia zawierającą 1% dwuetylodwutiokarbaminianu choliny

Ze wszystkich tych wyżej przedstawionych prób wynika, że toksyczność nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku jest prawie żadna. Wydaje się również, że podawanie tej nowej soli choliny myszom białym rasy SWISS pociąga za sobą działania bardzo korzystne w odniesieniu do płodności, długowieczności, zachowań i skuteczności reakcji odpornościowej.

153 706

Badania farmakologiczne nowych związków otrzymanych sposobem według wynalazku wykazały, że mają one działanie chelatujące metale ciężkie i przejściowe, działanie immunostymulujące, działanie anty-zwyradniające i działanie na przenoszenie neuronowe i w rezultacie wykazały bardzo interesujące własności terapeutyczne w dziedzinie chorób degenerujących mózgowych takich jak otępienie starcze, choroba Alzheimera i otępienie typu Alzheimera. Wiadomo, że w tych chorobach neurony ośrodków cholinergicznych są pierwszymi dotkniętymi chorobą zwyrodnieniową, czy to na poziomie syntezy neurożywiciela pośredniego, acetylocholiny, czy na poziomie błony, co zmusza cholinę do syntezowania siebie.

Z terapeutycznego punktu widzenia, nie można podawać pośrednio acetylocholiny, która nie przenika przez błony i wyniki otrzymane przez podawanie samej choliny w postaci chlorku są całkowicie niezadawalające.

Nowe związki otrzymane sposobem według wynalazku stanowiły przedmiot pewnej liczby prób prowadzonych na dwóch modelach zwierząt ze zwyrodnieniem nerwowym wywołanym bądź przez destrukcję rdzeni cholinergicznych zasady, bądź przez ponawiane podawanie wodorotlenku glinu. W obu przypadkach zaobserwowano, że zdolność przyuczenia zwierząt, pomniejszona w związku z upośledzeniem została odnowiona przez podawanie drogą doustną dwuetylodwutiokarbaminianu choliny otrzymanej według wynalazku. Po trzytygodniowym leczeniu obserwowano zależność skutek - dawka, a oznaczenie dawki skutecznej wykazało, że DE50 zawarte jest w granicach 0,10 g i 0,30 g/kg wagi zwierzęcia.

Badania kliniczne dwuetylodwutiokarbaminianu choliny przeprowadzono w próbach klinicznych na pacjentach dotkniętych zwyrodnieniem mózgowym, doskonale określonym według kryteriów DSM III z MMS, z pogłębionego bilansu psychometrycznego i z radiografii SCANER.

Badania przeprowadzono w dwóch niezależnych próbach w środowisku szpitalnym przy następującym traktowaniu w ciągu sześciu do dwunastu tygodni:

- placebo,

- chlorek choliny,

- dwuetylodwutiokarbaminian choliny.

Dawki stosowanej substancji aktywnej wynosiły 125 mg na dawkę doustną trzy razy dziennie, co daje dawkę dzienną 375 mg. Wyniki wykazały, że w 70% przypadków traktowanych produktem otrzymanym sposobem według wynalazku zaobserwowano stłumienie lub znaczące zmiejszenie trudności w zachowaniu i nastrojach pacjentów, przy czym na podstawie testów psychometrycznych wyniki te były obiektywne.

W przypadku pacjentów traktowanych placebo lub chlorkiem choliny, zaobserwowano w 30% przypadków jedynie lekkie poprawy, mniej wyraźne i krócej trwające niż otrzymywane w przypadku pacjentów leczonych nowym związkiem otrzymanym sposobem według wynalazku.

Kompozycje terapeutyczne zawierające jako składnik główny dwuetylodwutiokarbaminian choliny mogą być podawane drogą doustną, doodbytniczą lub w zastrzykach, w zależności od stanu fizjopatologicznego przewodu pokarmowego chorych branych pod uwagę.

W przypadku podawania doustnego kompozycje farmaceutyczne według wynalazku sporządza się w postaci kapsułek lub tabletek, w których związek aktywny jest połączony z odpowiednią zaróbką, korzystnie zawierającą żel krzemionkowy dla utrzymania silnie higroskopijnego charakteru dwuetylodwutiokarbaminianu choliny. Poza tym, dla uniknięcia przedwczesnej hydrolizy tej ostatniej na poziomie żołądka, konieczne jest powlekanie galenowe tych preparatów do podawania doustnego, na przykład o charakterze jelitowym (np. przez mikrokapsułkowanie).

W przypadku podawania drogą doodbytniczą, można sporządzić ze związków otrzymanych sposobem według wynalazku czopki z wykorzystaniem kompozycji klasycznej.

W przypadku podawania zastrzyków należy przewidzieć warunek rozdzielania się dwuetylodwutiokarbaminianu choliny i wodnego roztworu fizjologicznego, który trzeba będzie dodać w chwili podawania.

Stwierdzone dawkowanie nowych kompozycji farmaceutycznych przy podawaniu dziennym wynosi od 250 mg do 2,5 g związku aktywnego, mając na uwadze, że do podawania doustnego kapsułki lub tabletki korzystnie zawierają 125 mg związku aktywnego i mogą być podawane w miarę potrzeby w ilości od 2 do 20 kapsułek lub tabletek na dzień, a przy podawaniu doodbytniczym czopki mają dawki 250-500 mg związku aktywnego na 3 g.

153 706

Poniższy przykład ilustruje bliżej sposób według wynalazku, nie ograniczając jego zakresu.

Przykład.W dwóch erlenmayerkach lub zlewkach o odpowiedniej wielkości rozpuszczono oddzielnie:

—56 g (0,40 mola) chlorku choliny w 100 ml etanolu absolutnego utrzymując chłodną temperaturę za pomocą płytki elektrycznej lub łaźni wodnej i mieszając roztwór w celu przyśpieszenia rozpuszczenia, —90g (0,40 mola) trójwodzianu dwuetylodwutiokarbaminianu sodu w lOOml absolutnego etanolu*

Gdy oba roztwory stały się przezroczyste, powoli wprowadzono cienkim strumieniem alkoholowy roztwór choliny do roztworu soli sodowej energicznie mieszając i chłodząc zewnętrznie, ponieważ reakcja jest silnie egzotermiczna. Po dodaniu około jednej trzeciej zaczął wytrącać się osad. Dodawanie kontynuowano utrzymując bardzo energiczne mieszanie. Dodawanie roztworu alkoholowego choliny do soli sodowej trwało około 15 minut. Mieszanie kontynuowano jeszcze przez 30 minut, po czym pozostawiono na noc do ochłodzenia. Pojemnik zawierający masę reakcyjną pozostawiono zamknięty. Nazajutrz usunięto chlorek sodu przez wyciśnięcie i przemyto na filtrze dwukrotnie za pomocą 50 ml absolutnego alkoholu. Odebrano około 23 g chlorku sodu.

Alkoholowy roztwór macierzysty (zawierający dwuetylodwutiokarbaminian rozpuszczony w etanolu) zatężono na łaźni wodnej pod próżnią wytworzoną przez strumieniową pompę wodną w celu odpędzenia całego nadmiaru etanolu. Następnie bardzo lepką pozostałość przelano szybko do zlewki lub moździerza szklanego lub porcelanowego. Suszono w eksykatorze pod dobrą próżnią z pięciotlenkiem fosforu jako środkiem suszącym.

Produkt otrzymano w postaci bloku, który rozdrobniono do drobnych kryształów lub miałkiego proszku mikrokrystalicznego bezbarwnego lub bardzo lekko żółtawego. Uzyskana wydajność ilościowa dwuetylodwutiokarbaminianu choliny wynosiła około 100 g. Tak otrzymany dwuetylodwutiokarbaminian choliny musi być przechowywany w pomieszczeniu hermetycznym z uwagi na higroskopijność.

Claims (1)

1. Zastrzeżenie patentowe

   Sposób wytwarzania dwuetylodwutiokarbaminianu choliny przedstawionego wzorem 1, znamienny tym, że poddaje się reakcji chlorek choliny o wzorze 3 z trójwodzianem dwuetylodwutiokarbaminianu sodu o wzorze 2.

   N-C / θ2^5 θ ch₃-n-ch₂-ch₂oh

   CH3

   Wzór 1

   Wykres 1

   Wykres 2 c₂h_5x jN-ę-S-Na ♦ C2H5 s

   Wzór 2 ch₃ ch₃-n-ch₂- ch₂oh Ćh₃

   Cl

   Wzór 3 ^C2^H5

   4¾

   Vc-s⁰ ch₃

   CI^-N-CH^CHjOH ch₃ * NaCl

   Wzór 1

   Schemat

   Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 100 egz. Cena 3000 zł