KR20080023317A

KR20080023317A - Ｔｗｅａｋ 결합 항체

Info

Publication number: KR20080023317A
Application number: KR1020077030638A
Authority: KR
Inventors: 린다 씨 버클리; 엘렌 가버; 알렉시 루고브스코이
Original assignee: 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드
Priority date: 2005-05-27
Filing date: 2006-05-25
Publication date: 2008-03-13
Also published as: IL187585A; BRPI0611414B8; EA200702643A1; BRPI0611414B1; NZ564092A; US8048422B2; WO2006130374A3; AU2006252830B2; JP2014221837A; KR20130140230A; PT1888113E; EP2460831A3; CN101247830A; PT2460831T; JP2017025105A; JP2008542278A; SG162728A1; EP2460832A2; MX339015B; DK2460831T3

Abstract

항-TWEAK 항체를 개시한다.

TWEAK, 단백질, 항체

Description

ＴＷＥＡＫ 결합 항체{TWEAK BINDING ANTIBODIES}

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 전체가 참조로서 본 명세서에 결부된 문헌인, 2005년 5월 27일에 출원된 미국 특허 제60/685,149호에 우선권을 주장한다.

종양 괴사 인자(TNF)와 관련된 사이토카인은 면역 조절 및 아폽토시스 조절과 관련된 것을 포함하여 일련의 기능을 갖는 단백질의 상위집단이다. TWEAK(TNF-유사 아폽토시스의 약한 유도체)은 이러한 상위집단의 하나의 구성원이다.

요약

항-TWEAK 항체는 다양한 상태 및 질환, 예를 들어, 염증성 질환, 신경 질환 또는 기타 본 명세서에 기재된 질환의 치료에 사용될 수 있다. 인간 개체를 치료하는데 사용되는 경우, 상기 항체는 바람직하게는 인간의, 인간화된 또는 기타의 유효한 인간 항체이다.

일 양상에서, 본원은 제1 및 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 함유하고 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK에 결합하는 단백질을 나타낸다. 상기 단백질은 예를 들어, 10^-7 M 미만의 K_D에 상응하는 결합력, 예를 들어, 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11 M 또는 이보다 양호한 결합력으로 TWEAK에 결합할 수 있다. 상기 단백질은 또한 본 명세서에서 "항-TWEAK 항체"로 나타낸다. 제1 및 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 TWEAK에 결합하는 항원 결합 부위를 형성할 수 있도록 면역글로불린 가변 도메인의 적어도 충분한 부분을 함유할 수 있다. 일반적으로, 제1 및 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 각각 중쇄 및 경쇄의, 예를 들어, 쌍을 이루거나 또는 다른 양립할 수 있는 중쇄 및 경쇄의 면역글로불린 가변 도메인 서열에 상응한다.

항체는 P2D10에 의해 인식되는 TWEAK 위의 에피토프로부터의 1, 2, 3 또는 4개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 TWEAK 위의 에피토프, P2D10에 의해 결합되는 TWEAK으로부터의 펩티드(예를 들어, 25, 20, 또는 15개 아미노산 미만의 길이의 펩티드) 또는 P2D10에 의해 인식되는 TWEAK의 영역에 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체는 TWEAK, 특히 인간 TWEAK, 예를 들어, TWEAK의 가용성 영역의 에피토프, 예를 들어, 선형 또는 입체배좌 에피토프에 특별히 결합한다. 상기 항체는 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK과의 결합에 있어 P2D10과 경쟁할 수 있다. 항체는 P2D10의 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK에의 결합을 경쟁적으로 저해할 수 있다. 한 구체예에서, 상기 항체는 P2D10의 에피토프와 중복되는 에피토프, 예를 들어, P2D10의 에피토프와 공통되는 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산을 포함하는 에피토프, 또는 결합하는 경우 TWEAK가 P2D10과 상호작용하는 것을 입체적으로 방지할 수 있는 에피토프에 결합할 수 있다.

예를 들어, 항-TWEAK 항체는 TWEAK 결합할 수 있고, TWEAK과 TWEAK 수용체, 예를 들어, Fn14 (예를 들어, 인간 Fn14)간의 상호작용(예를 들어, 결합)을 조절, 예를 들어 저해할 수 있다. 항체는 또한 TWEAK 수용체의 신호전달 활성을 감소시킬 수 있다. 항체는 TWEAK를 타겟으로 할 수 있고, TWEAK를 격리(sequester)시킬 수 있고, 및/또는 TWEAK의 생체 내 안정성을 조절할 수 있다.

일 양상에서, 항체는 Fn14(예를 들어, 인간 Fn14)와 접촉하는 TWEAK 위의 상호작용 부위의 적어도 일부에 특별히 결합한다. 항체는 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK와의 결합에 있어 Fn14와 경쟁할 수 있다. 항체는 Fn14가 TWEAK에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해할 수 있다. 항체는 결합하는 경우 TWEAK과 Fn14 간의(예를 들어, 인간 TWEAK와 인간 Fn14 간의) 상호작용을 입체적으로 방지하는 TWEAK 위의 에피토프와 상호작용할 수 있다.

일 양상에서, 항체는 약 50 nM 내지 5 pM, 일반적으로 약 100 내지 250 pM 이하의 IC₅₀으로 하나 이상의 TWEAK-관련 활성을 저해할 수 있다. 예를 들어, 항체는 내피 세포 증식 또는 혈관신생을 촉진하는 TWEAK의 능력을 저해할 수 있다. 일 구체예에서, 항-TWEAK 항체는 하나 이상의 TWEAK-관련 활성을 감소시켜, 예를 들어, 항체가 개체에게 투여되는 경우 염증 상태를 조절할 수 있게 한다.

다른 구체예에서, 항체는 10³ 내지 10⁸ M^-1s^-1, 일반적으로 10⁴ 내지 10⁷ M^-1s^-1범위의 속도론으로 TWEAK와 결합할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체는 10^-2 내지 10^-6 s^-1, 일반적으로 10^-2 내지 10^-5　s^-1범위의 분리 속도론을 갖는다. 일 구체예에서, 상기 항체는 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK에 모노클로날 항체 P2D10, 또는 이의 변형된 형태, 예를 들어, 이의 키메릭 형태 또는 인간화된 형태(예를 들어, 본 명세서에서 기술하는 인간화된 형태)와 (예를 들어, 5 또는 10 인자 내에서) 유사한 결합력 및/또는 속도론으로 결합한다. 항-TWEAK 항체의 결합력 및 결합 속도론은 예를 들어, 바이오센서 기법(BIACORE^TM)을 사용하여 시험될 수 있다.

일 구체예에서, 항체는 전장(full length) 항체의 항원-결합 프레그먼트, 예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 프레그먼트이다. 일반적으로, 항체는 전장 항체이다. 항체는 모노클로날 항체 또는 모노-특이성 항체(mono-specific antibody)일 수 있다. 예를 들어, 항체는 20 미만의 다른 종의 항-TWEAK 항체를 포함하는 조성물 내에, 예를 들어, 또 다른 종의 항-TWEAK 항체를 포함하지 않는 조성물 내에 존재한다.

항체는 효과적 인간 항체일 수 있다. "효과적 인간" 항체는 충분한 수의 인간 아미노산 위치를 포함하여 항체가 보통 사람에서 면역 반응을 일으키지 않는 항체이다. 바람직하게는, 단백질은 중성화 항체 반응, 예를 들어, 인간 항-쥐 항체(HAMA) 반응을 야기하지 않는다. HAMA는 예를 들어, 만성 또는 재발성 질병 상태의 치료에서, 예를 들어, 항체가 반복적으로 투여되는 것이 바람직한 경우, 다양한 환경에서 문제가 될 수 있다. 혈청으로부터의 증가된 항체 소실(예를 들어, Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990) 참조) 및 또한 가능성 있는 알러지 반응(예를 들어, LoBuglio et al. (1986) Hybridoma, 5:5117-5123 참조) 때문에, HAMA 반응은 반복된 항체 투여를 효과가 없게 만들 가능성이 있다.

예를 들어, 항체는 인간, 인간화, CDR-이식, 키메릭, 돌연변이, 결합력 성숙, 비면역화된, 합성 또는 기타의 생체 외(in vitro) 제조 항체, 및 이들의 조합일 수 있다. 일 구체예에서, 항-TWEAK 항체는 인간화된 항체이다.

항-TWEAK 항체의 중쇄 및 경쇄는 실질적으로 전장일 수 있다. 단백질은 하나 이상, 바람직하게는 둘의 완전한 중쇄, 및 하나 이상, 바람직하게는 둘의 완전한 경쇄를 포함할 수 있고 또는 항원-결합 프레그먼트(예를 들어, a Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 프레그먼트)를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항체는 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE로부터 선택된; 특히, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3,및 IgG4로부터 선택된, 더욱 특히, IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1)의 중쇄 불변 영역을 갖는다. 일반적으로, 중쇄 불변 영역은 인간 형태 또는 인간 불변 영역의 변형된 형태이다. 다른 구체예에서, 항체는 예를 들어, 카파 또는 람다, 특히 카파(예를 들어, 인간 카파)로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다.

일 구체예에서, 단백질은 본 명세서에 개시된 항체, 예를 들어, P2D10의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역으로부터의 1, 2 이상, 및 바람직하게는 3개의 CDR을 포함한다. 이러한 문맥에서, CDR은 코티아의 초가변성 루프(Chothia's hypervariable loops)에 의해 정의된 CDR을 나타낸다. 예를 들어, 단백질은 중쇄 가변 도메인 서열 내에, CDR 영역 내에 하기 서열의 1, 2, 또는 3 이상을 포함한다:

GFTFSRYAMS (CDR1) (서열번호 1),

EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (서열번호 2),

VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (서열번호 3), 또는 상기 열거한 서열에 대해 10개의 아미노산 당 4, 3, 2.5, 2, 1.5, 1, 또는 0.5 이하의 변경(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)에 의해 다른 아미노산 서열을 갖는 CDR(예를 들어, 다른 숫자는 CDR 길이에 대해 비례함), 예를 들어, CDR 당 하나 이상의 변경이 있으나, 2, 3, 또는 4개 이하인 CDR. 중쇄 가변 도메인 서열은 이러한 CDR 서열을 특히 CDR3 내에, 또는 2 이상의 CDR 내, 예를 들어, CDR1 및 CDR3, CDR2 및 CDR3, 또는 모든 3개의 CDR 내에 포함할 수 있다.

단백질은 중쇄 가변 도메인 서열 내에, CDR 영역 내에 하기 서열의 1, 2, 또는 3 이상을 포함할 수 있다(괄호안의 아미노산은 각 위치에 대한 대안을 나타냄):

(i) G-(YF)-(NT)-F-(STDN)-(RY)-Y-A-(MIL)-(HS); (서열번호 4), 또는

(ii) Y-Y-(PV)-D-(TS)-V-(TK)-G; (서열번호 5) 및

(iii) (VL)-(IL)-(YF)-(YF)-D-(YF)-D; (서열번호 6) 또는 (DE)-(RK)-(ILVM)-(EQD)-(VAL)-M-(DE); (서열번호 7).

단백질은 경쇄 가변 도메인 서열 내에, CDR 영역 내에 하기 서열의 1, 2, 또는 3 이상을 포함할 수 있다:

RSSQSLVSSKGNTYLH; (CDR1) (서열번호 8),

KVSNRFS; (CDR2) (서열번호 9), 및

SQSTHFPRT; (CDR3) (서열번호 10), 또는 상기 열거한 서열에 대해 10개의 아미노산 당 4, 3, 2.5, 2, 1.5, 1, 또는 0.5 이하의 변경(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)에 의해 다른 아미노산 서열을 갖는 CDR(예를 들어, 다른 숫자는 CDR 길이에 대해 비례함), 예를 들어, CDR 당 하나 이상의 변경이 있으나, 2, 3, 또는 4개 이하인 CDR. 경쇄 가변 도메인 서열은 이러한 CDR 서열을 특히 CDR3 내에, 또는 2 이상의 CDR 내, 예를 들어, CDR1 및 CDR3, CDR2 및 CDR3, 또는 모든 3개의 CDR 내에 포함할 수 있다.

단백질은 경쇄 가변 도메인 서열 내에, CDR 영역 내에 하기 서열의 1, 2, 또는 3 이상을 포함할 수 있다(괄호안의 아미노산은 각 위치에 대한 대안을 나타냄):

(i) (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-(EHDNQY); (서열번호 11), 또는 (RK)-S-S-Q-S-(LI)-V-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-H; (서열번호 12)

(ii) (KE)-(LVI)-S-(NYS)-(RW)-(FAD)-S; (서열번호 13), 또는 K(LVI)-S-(NYS)-R-(FAD)-S; (서열번호 14), 및

(iii) (SM)-Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-(FWL)-P; (서열번호 15) 또는 S-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-F-P; (서열번호 16).

바람직한 일 구체예에서, 단백질은 P2D10로부터의 모든 6개의 CDR을 포함하거나 또는 매우 관련된 CDR, 예를 들어, 동일하거나 하나 이상의 아미노산 변경을 갖지만, 2, 3 또는 4개 이하의 변경(예를 들어, 치환, 결실 또는 삽입)을 갖는 CDR, 또는 다른 본 명세서에서 기술하는 CDR을 포함한다.

또 다른 예에서, 단백질은 동일한 정규 구조(canonical structure) 및 P2D10의 상응하는 크로티아 CDR 영역을 갖는, 예를 들어, P2D10의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 적어도 CDR1 및/또는 CDR2과 같은 동일한 정규 구조를 갖는 1, 2, 또는 3 이상의 CDR 영역을 포함한다.

단백질은 하기 서열 중 하나를 포함할 수 있다:

또는 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2보다 적은 변경(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환 또는 P2D10, huP2D10-L1, 또는 huP2D10-L2 내의 상응하는 위치에서 아미노산 잔기 치환)을 갖는 서열. 예를 들어 치환은 하기 카밧 위치(Kabat positions) 중 어느 하나에서 일어난다 : 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 101, 및 102. 치환은 예를 들어, 프레임워크 영역, 예를 들어, 인간 프레임워크 영역, 예를 들어 FR2(예를 들어, 연속 넘버링에 따라 46 위치에서 Phe로) 및 FR3(예를 들어, 87 위치에서 Phe로) 내의 상응하는 위치 내로 P2D10로부터의 하나 이상의 아미노산이 치환될 수 있다.

단백질은 중쇄 가변 도메인 내에 하기 서열 중 하나를 포함할 수 있다:

또는 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2보다 적은 변경(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실, 예를 들어, 보존적 치환 또는 P2D10 내의 상응하는 위치에서 아미노산 잔기 치환)을 갖는 서열. 예를 들어 치환은 하기 카밧 위치 중 어느 하나에서 일어난다 : 2, 4, 6, 25, 36, 37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106 및 107. 치환은 예를 들어, 프레임워크 영역, 예를 들어, 인간 프레임워크 영역 내의 상응하는 위치 내로 P2D10로부터의 하나 이상의 아미노산이 치환될 수 있다.

일 구체예에서, 중쇄 프레임워트(예를 들어, FR1, FR2, FR3, 각각, 또는 FR1, FR2, 및 FR3를 포함하나 CDR은 포함하지 않는 서열)는 하기 생식선(germline) V 단편 서열 중 어느 하나의 중쇄 프레임워크에 대해 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다: DP-25, DP-1, DP-12, DP-9, DP-7, DP-31, DP-32, DP-33, DP-58, DP-54, 다른 VH I 하위그룹 생식선 서열, 다른 VH III 하위그룹 생식선 서열, 또는 정규 구조 클래스 1-3과 양립가능한 다른 V 유전자(예를 들어, Chothia et al. (1992) J. Mol . Biol . 227:799-817; Tomlinson et al. (1992) J. Mol . Biol . 227:776-798 참조). 정규 구조 클래스 1-3과 양립가능한 다른 프레임워크는 카밧 넘버링에 따른 하나 이상의 하기 잔기를 갖는 프레임워크를 포함한다: 26 위치에서 Ala, Gly, Thr, 또는 Val; 26 위치에서 Gly; 27 위치에서 Tyr, Phe, 또는 Gly; 29 위치에서 Phe, Val, Ile, 또는 Leu; 34 위치에서 Met, Ile, Leu, Val, Thr, Trp, 또는 Ile; 94 위치에서 Arg, Thr, Ala, Lys ; 54 위치에서 Gly, Ser, Asn, 또는 Asp; 및 71 위치에서 Arg.

일 구체예에서, 경쇄 프레임워트(예를 들어, FR1, FR2, FR3, 각각, 또는 FR1, FR2, 및 FR3를 포함하나 CDR은 포함하지 않는 서열)는 Vκ II 하위그룹 생식선 서열 또는 하기 생식선 V 단편 서열 중 어느 하나의 경쇄 프레임워크에 대해 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다: A17, A1, A18, A2, A19/A3, A23, Vκ　I 하위그룹 생식선 서열 (예를 들어, DPK9 서열), 또는 정규 구조 클래스 4-1과 양립가능한 다른 다른 V 유전자(예를 들어, Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628 참조). 정규 구조 클래스 4-1과 양립가능한 다른 프레임워크는 카밧 넘버링에 따른 하나 이상의 하기 잔기를 갖는 프레임워크를 포함한다: 2 위치에서 Val 또는 Leu 또는 Ile; 25 위치에서 Ser 또는 Pro; 27b 위치에서 Ile 또는 Leu; 29 위치에서 Gly; 33 위치에서 Phe 또는 Leu; 및 71 위치에서 Phe. 또한, 카밧 넘버링에 따라, 48 위치가 Ile 또는 Val일 수 있다.

다른 구체예에서, 경쇄 프레임워크(예를 들어, FR1, FR2, FR3, 각각, 또는 FR1, FR2, 및 FR3를 포함하나 CDR은 포함하지 않는 서열)는 Vκ I 하위그룹 생식선 서열, 예를 들어, DPK9 서열의 경쇄 프레임워크에 대해 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일 구체예에서, 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워트(예를 들어, 적어도 FR1, FR2, FR3를 포함하고, 그리고 필요에 따라 FR4를 포함하는 영역)는 하기로부터 선택될 수 있다: (a) 인간 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크로부터의 아미노산 잔기, 예를 들어, 인간 성숙 항체, 인간 생식선 서열, 인간 컨센서스 서열, 또는 본 명세서에 기술되는 인간 항체로부터의 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크 잔기를 80%, 90%, 95% 이상, 또는 바람직하게는 100% 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크; (b) 인간 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크로부터의 아미노산 잔기, 예를 들어, 인간 성숙 항체, 인간 생식선 서열, 인간 컨센서스 서열로부터의 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크 잔기를 20% 내지 80%, 40% 내지 60%, 60% 내지 90%, 또는 70% 내지 95% 포함하는 경쇄 또는 중쇄 가변 프레임워크; (c) 비인간 프레임워크(예를 들어, 설치류 프레임워크); 또는 (d) 예를 들어, 항원성 또는 세포독성 결정자(determinant)가 제거되도록 변형된, 예를 들어, 비면역화되거나, 또는 부분적으로 인간화된 비인간 프레임워크. 일 구체예에서, 중쇄 가변 도메인 서열은 하나 이상의 하기 위치에서(바람직하게는 5, 10, 12 또는 모두에서) 인간 잔기 또는 인간 컨센서스 서열 잔기를 포함한다: (경쇄의 가변 도메인의 FR 내에서) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L, 및/또는 (중쇄의 가변 도메인의 FR 내에서) 2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H, 92H, 93H, 및/또는 103H (카밧 넘버링에 따름).

일 구체예에서, 단백질은 하나 이상의 비인간 CDR, 예를 들어, 쥐 CDR, 예를 들어, P2D10로부터의 CDR, 또는 이의 변이체, 및 하나 이상의 아미노산, 예를 들어, 5, 8, 10, 12, 15, 또는 18 이상의 아미노산에 의해 P2D10의 프레임워크와 다른 하나 이상의 프레임워크를 포함한다. 예를 들어, 단백질은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 이러한 비인간 CDR을 포함하고, HC FR1, HC FR2, HC FR3, LC FR1, LC FR2, 및 LC　FR3의 3개 이상에서 하나 이상의 아미노산 차이를 포함한다.

일 구체예에서, 단백질의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열은 본 명세서에서 기술하는 항체, 예를 들어, P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2의 가변 도메인 서열과 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열; 또는 본 명세서에서 기술하는 항체의 가변 도메인 서열, 예를 들어, P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2로부터 1 또는 5 잔기 이상, 그러나 40, 30, 20, 또는 10 잔기 미만이 다른 아미노산 서열을 포함한다.

일 구체예에서, 하나 또는 둘 모두의 가변 도메인은 쥐 항체(예를 들어, P2D10) 및 인간화된 항체 (예를 들어, 56-84m 및 K107) 또는 생식선 서열 모두로부터 다양하게 유래된 프레임워크 영역 내의 아미노산 위치를 포함한다. 예를 들어, 가변 도메인은 아미노산이 쥐 항체 및 인간 항체(또는 생식선 서열) 모두와 동일한 몇몇 위치를 포함할 것이고, 이는 두개가 그 위치에서 동일하기 때문이다. 쥐 및 인간에서 서로 다른 남은 프레임워크 위치 중, 가변 도메인의 50, 60, 70, 80, 또는 90% 이상의 위치가 바람직하게는 쥐의 항체보다 인간 항체(또는 생식선 서열)와 동일하다. 이러한 남은 프레임워크 위치의 0 또는 1, 2, 3, 또는 4 이상이 인간 항체보다는 쥐 항체와 동일할 것이다. 예를 들어, HC FR1에서, 1 또는 2의 이러한 위치는 쥐의 것일 수 있고; HC FR2에서, 1 또는 2의 이러한 위치는 쥐의 것일 수 있고; FR3에서, 1, 2, 3, 또는 4의 이러한 위치가 쥐의 것일 수 있고; LC FR1에서, 1, 2, 3, 또는 4의 이러한 위치가 쥐의 것일 수 있고; LC FR2에서, 1 또는 2의 이러한 위치가 쥐의 것일 수 있고; LC FR3에서, 1 또는 2의 이러한 위치가 쥐의 것일 수 있다.

일 구체예에서, 단백질의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 서열은 예를 들어, 낮은 엄격성(stringency), 중간 엄격성, 높은 엄격성, 또는 매우 높은 엄격성 조건 하에서, 본 명세서에서 기술하는 핵산 서열 또는 본 명세서에서 기술하는 핵산 서열(예를 들어, 특정 핵산 서열 또는 본 명세서에서 기술하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열)에 혼성화되는 핵산 또는 이의 상보체(complement)에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다.

항-TWEAK 항체는 다른 기능성 분자, 예를 들어, 다른 펩티드, 단백질, 또는 화합물에 결합되거나 유도될 수 있다. 예를 들어, 항체는 (예를 들어, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 결합 등에 의해) 하나 이상의 다른 분자 물질, 예를 들어, 다른 것들 중 다른 항체(예를 들어, 이중특이서 항체 또는 다중특이성 항체), 독소, 방사선동위원소, 폴리머, 세포독성 물질 또는 세포증식억제 물질에 기능적으로 결합될 수 있다.

다른 양상에서, 본원은 약학적으로 허용가능한 담체 및 항-TWEAK 항체, 예를 들어, 본 명세서에서 기술하는 항-TWEAK 항체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학적 조성물을 제공한다.

또 다른 구체예에서, 항-TWEAK 항체(예를 들어, 이의 약학적 조성물)는 항-TWEAK 항체 치료를 필요로 하거나 항체에 의해 상태가 개량될 수 있는 개체에게 투여된다. 예를 들어, 항-TWEAK 항체는 염증 질환, 면역 질환, 자가면역 질환, 신경 질환, 종양 질환, 또는 본 명세서에서 기술하는 다른 질환을 갖거나 이의 위험이 있는 개체에게 투여될 수 있다. 일 구체예에서, 본 명세서에 기술하는 항-TWEAK 항체는 염증 질환, 면역 질환, 자가면역 질환, 신경 질환, 종양 질환, 또는 본 명세서에서 기술하는 다른 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 사용된다.

다른 양상에서, 본원은 개체에서 TWEAK-관련 질환의 치료 방법을 개시한다. 상기 방법은 개체에게 항-TWEAK 항체를 TWEAK-관련 질환 치료(예를 들어, 증진 또는 예방)에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 항-TWEAK 항체는 단독으로 또는 본 명세서에 기술하는 다른 치료 양식과 함께 개체에게 투여될 수 있다. 일 구체예에서, 개체는 포유류, 예를 들어, 인간, 예를 들어, TWEAK-관련 질환, 예를 들어, 본 명세서에 기술되는 질환을 갖는 인간이다. 항체는 이러한 질환의 하나 이상의 증상을 개선하는데 사용될 수 있다. 용어 "치료"는 통계적으로 유의한 정도 또는 당업자에세 검출 가능한 정도로, 상태, 증상, 또는 질환(예를 들어, 본 명세서에서 기술하는 질환)과 관련된 파라미터들의 개선하거나 예방하기 위해 또는 질환의 발생, 증식, 또는 악화를 방지하기 위해 유효한 양, 방식, 및/또는 모드로 치료제를 투여하는 것을 나타낸다. 따라서, 치료는 치료적 및/또는 예방적 이점을 달성할 수 있다. 유효한 양, 방식, 또는 모드는 개체에 따라 달라질 수 있고, 개체에게 맞추어질 수 있다. 일 구체예에서, 본 명세서에서 기술하는 항-TWEAK 항체는 TWEAK-관련 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 사용된다.

다른 양상에서, 본원은 TWEAK과 TWEAK 수용체 단백질 간의 상호작용을 조절하는 방법을 나타낸다. 예를 들어, 항-TWEAK 항체는 TWEAK과 TWEAK 수용체, 예를 들어, Fn14 간의 결합을 감소시키거나 저해하는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 TWEAK 또는 TWEAK을 포함하는 복합체를 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 방법은 생체 외, 예를 들어, 배양에서, 예를 들어, 생체 외(in vitro) 또는 생체 밖(ex-vivo)에서 세포에 사용될 수 있다. 예를 들어, TWEAK 수용체-발현 세포는 배양 배지에서 생체 외에서 배양될 수 있고, 접촉 단계는 항-TWEAK 항체의 배양 배지로의 첨가에 의해 수행될 수 있다. 대안으로, 상기 방법은 개체 내에 존재하는 세포에서, 예를 들어, 생체 내 (예를 들어, 치료적 또는 예방적) 프로토콜의 일부로서 수행될 수 있다. 예를 들어, 항-TWEAK 항체는 국소적으로 또는 전신적으로 전달될 수 있다. 일 구체예에서, 본 명세서에서 기술하는 항-TWEAK 항체는 TWEAK 및 TWEAK 수용체 단백질 간의 상호작용을 조절하기 위한 약제의 제조에 사용된다.

상기 방법은 TWEAK 및 TWEAK 수용체 복합체, 또는 이의 하위단위 간의 상호작용을 가능하게 하는 조건 하에서, TWEAK를 TWEAK 수용체 복합체, 또는 이의 하위단위와 접촉시켜서, 이로써 TWEAK/TWEAK 수용체 혼합물을 형성시키는 단계를 포함할 수 있다. 일반적으로, 항-TWEAK 항체는 예를 들어, TWEAK/TWEAK 수용체 혼합물을 항-TWEAK 항체와 접촉시키는 단계가, TWEAK와 수용체 단백질 간의 상호작용 또는 TWEAK의 하나 이상의 기능, 예를 들어, TWEAK 매개 신호전달을 조절, 예를 들어, 방해(예를 들어, 저해, 차단 또는 기타 감소)할 수 있는 유효량이 제공된다.

본원은 또한 예를 들어, 본 명세서에 기술하는 것과 같은 항-TWEAK 항체의 중쇄 및 경쇄 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 나타낸다. 예를 들어, 본원은 특히, P2D10의 제1 및 제2 핵산 암호화 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 각각 나타낸다. 다른 양상에서, 본원은 본 명세서에서 기술하는 핵산을 함유하는 숙주 세포 및 벡터를 나타낸다.

본원은 또한 P2D10에 의해 인식되는 TWEAK, 예를 들어, 인간 TWEAK의 에피토프 및 상기 에피토프와 상호작용할 수 있는 단백질을 나타낸다. 예를 들어, 상기 에피토프를 포함하는 단백질 및 펩티드는 에피토프와 상호작용하는 다른 결합 화합물, 예를 들어, 항체와 같은 단백질 또는 소분자의 제조 또는 스크린에 사용될 수 있다. 예를 들어, 에피토프를 포함하는 펩티드는 면역원으로서 또는 발현 라이브러리를 스크린하는 타겟으로서 사용될 수 있다. 또한, 예를 들어, 성숙된 TWEAK의 문맥에서, 에피토프와 상호작용하는 화합물의 능력을 평가하기 위하여, 펩티드와 상호작용하는 능력에 대해 또는 맵핑 또는 구조 결정에 의해 화합물을 평가하는 것이 가능하다. 평가의 예는 경쟁하는 P2D10 항체의 존재 하에서 화합물이 TWEAK와 상호작용할 있는지를 측정하는 것을 포함한다.

항-TWEAK 항체(예를 들어, P2D10 또는 본 명세서에 기술하는 다른 항체)와 함께, 물질, 예를 들어, 치료제(유전적 물질 포함) 또는 세포독성제를 생체 내의 TWEAK-발현 세포 또는 구조로 전달하거나 타겟팅하는 방법을 또한 개시한다.

본 명세서에서, 용어 "항체"는 하나 이상의 면역 글로불린 가변 영역, 예를 들어, 면역글로불린 가변 도메인을 제공하는 아미노산 서열 또는 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 나타낸다. 예를 들어, 항체는 중(H)쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH로 약칭함), 및 경(L)쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL로 약칭함)을 포함할 수 있다. 다른 예에서, 항체는 2개의 중(H)쇄 가변 영역 및 2개의 경(L)쇄 가변 영역을 포함한다. 용어 "항체"는 항체의 전장, 예를 들어, IgA, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgE, IgD, IgM (뿐만 아니라 이들의 하위형태) 형태의 면역 글로불린의 전장뿐만 아니라 항체의 항원 결합 프레그먼트(예를 들어, 단일쇄 항체, Fab 프레그먼트, F(ab')₂ 프레그먼트, Fd 프레그먼트, Fv 프레그먼트, 및 dAb 프레그먼트)을 포괄한다. 용어 "전장 항체"는 프로세싱되어 임의의 신호 서열이 제거되는 자연 항체의 96% 이상의 길이를 갖는 항체를 나타낸다. 전장 항체는 자연 항체의 완전한 길이, 예를 들어, 자연 항체(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)의 아미노 말단 잔기로부터 카르복시 말단 잔기까지의 잔기를 포함할 수 있다.

"면역 글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 나타낸다. 예를 들어, 서열은 자연 발생 가변 도메인의 모두 또는 아미노산 서열의 일부를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열은 1, 2 이상의 N- 또는 C-말단 아미노산을 포함하거나 포함하지 않을 수 있고, 또는 단백질 구조의 형성과 양립되는 기타 변경을 포함할 수 있다.

"분리된 조성물"은 분리된 조성물이 얻어질 수 있는 자연 시료의 하나 이상의 성분의 90% 이상이 제거되는 조성물을 나타낸다. 관심되는 종 또는 종의 군이 중량-중량 기초로 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 95, 98, 또는 99% 이상의 순도인 경우, 인공적으로 또는 천연적으로 제조되는 조성물은 일정 정도의 순도 "이상의 조성물"일 수 있다.

"에피토프"는 항체에 의해 결합되는 목적 화합물 부위를 나타낸다. 목적 화합물이 단백질인 경우, 예를 들어, 에피토프는 항체에 의해 결합되는 아미노산(특히 아미노산 측쇄)을 나타낼 수 있다. 중복된 에피토프는 하나 이상의 일반적 아미노산 잔기, 예를 들어, 2, 3, 4 또는 5 이상의 일반적 아미노산 잔기를 포함한다.

본 명세서에서, 용어 "낮은 엄격성, 중간 엄격성, 높은 엄격성, 또는 매우 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화한다"는 것은 혼성화 및 세척을 위한 조건을 나타낸다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 지침은 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6에서 찾아볼 수 있다. 수용성 및 비수용성 방법이 상기 참조문헌에 기술되고, 또한 사용될 수 있다. 특별한 혼성화 조건은 하기와 같이 본 명세서에 나타낸다: 1) 약 45℃에서 6X 소듐 클로라이드/소듐 시트레이트 (SSC) 이후, 이어서 50 ℃ 이상(세척 온도는 낮은 염격성 조건에서 55℃까지 증가될 수 있음)에서 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 2회 세척하는 낮은 엄격성 혼성화 조건; 2) 약 45℃에서 6X SSC 이후, 이어서 60℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS로 1회 이상 세척하는 중간 엄격성 혼성화 조건; 3) 약 45℃에서 6X SSC 이후, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS로 1회 이상 세척하는 높은 엄격성 혼성화 조건; 그리고 바람직하게는 4) 매우 높은 엄격성 혼성화 조건은 약 65℃에서 0.5M 소듐 포스페이트, 7% SDS 이후, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS로 1회 이상 세척하는 것이다. 높은 엄격성 조건 (3)은 다른 특별한 조건이 없는 한 사용될 수 있는 바람직한 조건이다.

"TWEAK-관련 질환"은 TWEAK가 병인으로 공헌하는 임의의 질환 또는 상태, 증상 또는 발생 위험이 TWEAK 차단 물질의 공급에 의해 변경되는 질환이다.

다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미가 있다. 비록 본 명세서에서 기술하는 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질이 실시에 또는 본 명세서에 기재하는 시험에 사용될 수 있지만, 적절한 방법 및 물질을 하기한다. 또한, 크로티아 CDR과 관련하여 기술하는 본 발명의 구체예는 또한 카밧 CDR을 사용하여 이행될 수 있다.

본 명세서에서 언급되는 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 기타 참조문헌들은 그 전체가 참조로서 결부된다. 상충이 있는 경우, 정의를 포함한 본 상세한 설명이 조절한다. 또한, 물질, 방법, 및 실시예는 설명을 위한 것이지 한정하기 위한 것이 아니다.

상세한 설명

P2D10는 인간 TWEAK에 특이적으로 결합하고 TWEAK 기능을 저해하는 쥐 항체의 예이다. 인간화된 변종을 포함하여 P2D10 항체의 변종이 또한 개시된다. 이러한 항체, 다른 항-TWEAK 항체, 및 다른 TWEAK 차단 물질이 TWEAK-매개 질환, 예를 들어, 염증 질환 및 본 명세서에서 개시되는 다른 질환의 치료 또는 예방에 사용가능하다.

항-TWEAK 항체

본원은 항-TWEAK 항체, 예를 들어, P2D10, huP2D10-1, 및 huP2D10-2의 특정예의 서열을 포함한다. 특히 이와 같은 항체는 예를 들어, 지정된 아미노산 서열을 암호화하는 합성 유전자의 제조 및 발현에 의해 또는 지정된 아미노산 서열을 암호화하는 유전자를 제공하는 돌연변이 인간 생식선 유전자 의해 제조가능하다. 그러나, 이러한 항체 및 다른 항-TWEAK 항체는 예를 들어, 하나 이상의 하기 방법을 사용하여 제조가능하다.

많은 방법이 항체, 특히 인간 항체를 얻는데 사용가능하다. 방법이 한가지 예는 단백질 발현 라이브러리, 예를 들어, 파지 또는 리보솜 디스플레이 라이브러리를 스크리닝하는 것을 포함한다. 파지 디스플레이는 예를 들어, U.S. 5,223,409; Smith (1985) Science 228:1315-1317; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; 및 WO 90/02809에 기술된다. Fab 파지의 디스플레이는 예를 들어, 미국특허 제5,658,727호;　제5,667,988호; 및 제5,885,793호에 기술된다.

디스플레이 라이브러리이의 사용과 함께, TWEAK-관련 항체를 얻기 위해 다른 방법이 사용될 수도 있다. 예를 들어, TWEAK 단백질 또는 이의 펩티드는 비인간 동물, 예를 들어, 설치류, 예를 들어, 마우스, 햄스터, 또는 랫트에서의 항원으로서 사용될 수 있다.

일 구체예에서, 비인간 동물은 적어도 일부의 인간 면역글로불린 유전자를 포함한다. 예를 들어, 인간 Ig 위치의 큰 단편으로의 마우스 항체 제조에서 결함된 마우스 균주를 엔지니어하는 것이 가능할 것이다. 하이브리도마 기술을 사용하여, 목적하는 특이성을 갖는 유전자로부터 얻어진 항원-특이성 모노클로날 항체가 제조되고 선택될 수 있다. 예를 들어, XenoMouse^TM Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21, U.S. 2003-0070185, WO 96/34096, 및 WO 96/33735를 참조할 것.

다른 구체예에서, 모노클로날 항체는 비인간 동물로부터 얻어지고, 그 후 변형, 예를 들어, 인간화 또는 비면역화된다. 윈터는 본 명세서에서 기술된 인간화된 항체를 제조하는데 사용될 수 있는 CDR-이식 방법의 예를 기술한다(U.S. 5,225,539). 특히 인간 항체의 CDR의 전체 또는 일부가 비인간 항체의 적어도 일부로 치환될 수 있다. TWEAK에 결합하는 유용한 인간화된 항체가 될 수 있도록 이러한 CDR의 결합 또는 결합 결정자를 위해 요구되는 CDR을 치환하는 것만이 필요할 수도 있다.

인간화된 항체는 인간 Fv 가변 영역으로부터의 동등한 서열의 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않는 Fv 가변 영역의 서열을 치환함으로써 제조될 수 있다. 인간화된 항체를 제조하는 일반적 방법은 Morrison, S. L. (1985) Science 229:1202-1207, Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214, 및 US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,693,762; US 5,859,205; 및 US 6,407,213에 의해 제공된다. 이러한 방법은 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄로부터의 면역글로불린 Fv 가변 영역의 전체 또는 일부를 암호화하는 핵산 서열을 분리하는 단계, 조작하는 단계, 및 발현하는 단계를 포함한다. 이러한 핵산의 소스는 당업자에게 공지되었고, 예를 들어, 생식선 면역글로불린 유전자, 또는 합성 구조물로부터의 상기한 바와 같은 미리결정된 타겟에 대한 항체의 하이브리도마 제조로부터 얻어질 수 있다. 재조합 DNA 암호화 인간화된 항체는 그 후 적절한 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있다.

인간 생식선 서열, 예를 들어, Tomlinson, I.A. et al. (1992) J. Mol . Biol. 227:776-798; Cook, G. P. et al. (1995) Immunol . Today 16: 237-242; Chothia, D. et al. (1992) J. Mol . Bio. 227:799-817; 및 Tomlinson et al. (1995) EMBO J 14:4628-4638에 개시된다. V BASE 디렉토리는 인간 면역글로불린 가변 영역 서열(Tomlinson, I.A. et al . MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK에 따름)의 포괄 디렉토리를 제공한다. 이러한 서열은 예를 들어, 프레임워크 영역 및 CDR을 위한 인간 서열의 소스로 사용될 수 있다. 컨센서스 인간 프레임워크 영역은 또한 예를 들어, 미국특허 제6,300,064호에 기술된 바와 같이 사용될 수 있다.

비인간 TWEAK-관련 항체는 WO 98/52976 및 WO 00/34317에서 기술된 방법에 의해 인간 T 세포 에피토프의 특이적 결실 또는 "비면역화"에 의해 변형될 수도 있다. 간략히 말해, 항체의 중쇄 도는 경쇄 가변 영역은 MHC 클래스 II에 결합하는 펩티드를 위해 분석될 수 있고; (WO 98/52976 및 WO 00/34317에 정의된 바와 같이)이러한 펩티드는 가능성있는 T-세포 에피토프를 나타낸다. 가능성있는 T-세포 에피토프의 검출을 위해, "컴퓨터 스레딩(computer threading)"이라고 부르는 컴퓨터 모델링 접근이 사용될 수 있고, 또한 WO 98/52976 및 WO 00/34317에 기술된 바와 같이 인간 MHC 클래스 II 결합 펩티드의 데이터베이스가 V_H 및 V_L 서열에 존재하는 모티프를 위해 조사될 수 있다. 이러한 모티프는 임의의 18개의 주요한 MHC 클래스 II DR 앨러타입과 결합하고, 따라서 가능성있는 T 세포 에피토프를 구성한다. 검출된 가능성있는 T-세포 에피토프는 가변 영역 내의 적은 수의 아미노산 잔기를 치환함으로써, 또는 단일 아미노산 치환에 의해 제거될 수 있다. 가능한 한, 보존적 치환이 이루어진다. 종종, 그러나 배타적이지는 않게, 인간 생식선 항체 서열 내의 위치에 공통된 아미노산이 사용될 수 있다. 비면역화 변화가 확인된 후에, V_H 및 V_L을 암호화하는 핵산이 돌연변이 생성 또는 다른 합성 방법(예를 들어, 드 노보 합성, 카세트 치환 등)에 의해 제조될 수 있다. 돌연변이된 가변 서열은 선택적으로 인간 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG1 또는 카파 불변 영역에 융합될 수 있다.

일부 경우에, 가능성 있는 T 세포 에피토프는 항체 기능에 중요한 것으로 알려진 또는 예측된 잔기를 포함할 것이다. 예를 들어, 가능성있는 T 세포 에피토프는 일반적으로 CDR로 기울게 된다. 또한, 가능성있는 T 세포 에피토프는 항체 구조 및 결합에 중요한 프레임워크 잔기 내에 발생할 수 있다. 이러한 가능성있는 에피토프를 제거하기 위한 변화는 일부 경우에 더욱 정밀한 조사, 예를 들어, 변화가 있고 없이 사슬을 제조하고 시험하는 것에 의한 더욱 정밀한 조사가 요구될 것이다. 가능하면, CDR이 중복되는 가능성있는 T 세포 에피토프가 CDR 외부의 치환에 의해 제거될 수 있다. 일부 경우에, CDR 내의 변경은 선택일 뿐이고, 따라서 이러한 치환이 있고 그리고 없는 변이가 시험될 수 있다. 다른 경우에, 가능성있는 T 세포 에피토프의 제거가 요구되는 치환은 항체 결합에 중요할 수 있는 프레임워크 내의 잔기 위치에서이다. 일부 경우에서, 이러한 치환이 있고 없는 변이가 시험될 수 있다. 따라서, 일부 경우에서 몇몇의 변이 비면역화 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 디자인되고, 다양한 중쇄/경쇄 조합이 최적의 비면역화 항체를 확인하기 위해 시험된다. 그 후 최종 비면역화 항체의 선택은 비면역화의 정도, 특히, 가변 영역 내에 남아있는 가능성있는 T 세포 에피토프의 수와 함께 다른 변이의 결합 결합력의 고려에 의해 이루어질 수 있다. 비면역화는 임의의 항체, 예를 들어, 비인간 서열을 포함하는 항체, 예를 들어, 합성 항체, 쥐 항체, 기타 비인간 모노클로날 항체, 또는 디스플레이 라이브러리로부터 분리된 항체를 변형하는데 사용될 수 있다.

인간화 항체를 위한 다른 방법이 사용될 수도 있다. 예를 들어, 다른 방법은 항체의 3차 구조, 결합 결정자에 3차원적으로 접근되는 프레임워크 위치, 및 면역성 펩타이드 서열을 고려할 수 있다. 예를 들어, WO 90/07861; U.S. Pat. Nos. 5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; 5,530,101; 및 6,407,213; Tempest et al. (1991) Biotechnology 9:266-271를 참조할 것. 또한 다른 방법은 "인간 공학(humaneering)"으로 불리고, 예를 들어, U.S.　2005-008625에 기술된다.

항체는 인간 Fc 영역, 예를 들어, 야생형 Fc 영역 또는 하나 이상의 변경을 포함하는 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 불변 영역은 변경, 예를 들어, 변이되어, 항체의 특성을 변형시킨다(예를 들어, 하나 이상의 Fc 수용체 결합, 항체의 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과 세포 기능, 또는 보체 기능을 증가시키거나 감소시킨다). 예를 들어, 인간 IgG1 불변 영역은 하나 이상의 잔기, 예를 들어, 하나 이상의 잔기 234 및 237에서 변이될 수 있다. 항체는 이펙터 기능, 예를 들어, Fc 수용체 결합 및 보체 활성을 감소 또는 변형시키는 중쇄의 CH2 영역 내에 변이를 가질 수 있다. 예를 들어, 항체는 미국특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 기술된 것과 같은 변이를 가질 수 있다. 항체는 면역글로불린의 2개의 중쇄 사이의 디설파이드 결합을 안정화하는 변이, 예를 들어, 당업계에서 기술된 것(예를 들어, Angal et al. (1993) Mol . Immunol . 30:105-08)과 같은 IgG4의 힌지 영역 내의 변이를 가질 수도 있다. 또한, U.S. 2005-0037000를 참조할 것.

결합력 성숙. 일 구체예에서, 항-TWEAK 항체는 예를 들어, 돌연변이화에 의해 변형되어, 변형된 항체의 풀을 제공한다. 그 후 변형된 항체는 변경된 기능 특성(예를 들어, 향상된 결합, 향상된 안정성, 감소된 항원성, 또는 생체 내의 증가된 안정성)을 갖는 하나 이상의 항체를 확인하기 위해 평가된다. 일 이행에서, 디스플레이 라이브러리 기법이 변형된 항체의 풀을 선택하거나 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 더 높은 결합력 항체는 그 후 예를 들어, 더 높은 엄격성 또는 더 경쟁적인 결합 및 세척 조건의 사용에 의해 제2 라이브러리로부터 확인된다. 다른 스크리닝 기법이 또한 사용될 수 있다.

일 이행에서, 돌연변이화는 결합 경계면으로 공지되거나 예상되는 영역을 목표로 한다. 예를 들어, 확인된 결합 단백질이 항체인 경우, 그 후 돌연변이화는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄의 CDR 영역과 관련될 수 있다. 또한, 돌연변이화는 CDR 근처 또는 근접의 프레임워크 영역, 예를 들어, 특히 CDR 연결의 10, 5, 또는 3 아미노산 내의 프레임워크 영역에 관련될 수 있다. 항체의 경우, 예를 들어, 단계별 향상을 위해, 돌연변이화는 또한 하나 또는 몇 개의 CDR로 제한될 수도 있다.

일 구체예에서, 돌연변이화는 하나 이상의 생식선 서열과 더욱 유사한 항체를 만드는데 사용될 수 있다. 생식선화 방법의 한가지 예는 분리된 항체의 서열과 유사한(예를 들어, 특히 데이타베이스 내에서 가장 유사한) 하나 이상의 생식선 서열을 확인하는 단계를 포함한다. 돌연변이(아미노산 레벨에서)는 분리된 항체, 점차 조합으로, 또는 양자 모두에서 이루어질 수 있다. 예를 들어, 일부 또는 전부의 가능한 생식선 돌연변이를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산 라이브러리가 만들어진다. 돌연변이딘 항체는 그 후 예를 들어, 분리된 항체에 대해 하나 이상의 추가 생식선 잔기를 갖고 여전히 유용한(예를 들어, 기능 활성을 갖는) 항체를 확인하기 위해 평가된다. 일 구체예에서, 가능한 많은 생식선 잔기가 분리된 항체 내로 도입된다.

일 구체예에서, 돌연변이화는 하나 이상의 생식선 잔기의 CDR 영역 내로의 치환 또는 삽입에 사용된다. 예를 들어, 생식선 CDR 잔기는 변형된 가변 영역에 대해 유사한(예를 들어, 가장 유사한) 생식선 서열로부터일 수 있다. 돌연변이 후에, 항체의 활성(예를 들어, 결합 또는 다른 기능 활성)이 생식선 잔기 또는 잔기가 내성이 있는지 여부를 측정하기 위해 평가될 수 있다. 유사한 돌연변이 생성이 프레임워크 영역에서 수행될 수 있다.

생식선 서열을 선택하는 단계는 다른 방식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 생식선 서열은 선택성 또는 유사성에 대해 미리결정된 가설, 예를 들어, 공여자 비인간 항체에 대해 특정 퍼센트 동일성 이상, 예를 들어, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 99.5% 이상의 동일성을 만족하는 경우 선택될 수 있다. 선택은 2, 3, 5, 또는 10 이상의 생식선 서열을 사용하여 수행될 수 있다. CDR1 및 CDR2의 경우, 유사한 생식선 서열을 확인하는 단계는 이러한 서열을 선택하는 단계를 포함할 수 있다. CDR3의 경우, 유사한 생식선 서열을 확인하는 단계는 이러한 서열을 선택하는 단계를 포함할 수 있지만, 아미노-말단 부분 및 카르복시-말단 부분에 별도로 기여하는 2개의 생식선 서열을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 다른 이행에서, 예를 들어, 컨센서스 서열을 형성하기 위해 하나 또는 둘 이상의 생식선 서열이 사용된다.

다른 구체예에서, 항체는 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록(즉, 원래의 또는 천연의 글리코실화 패턴으로부터 변경되도록) 변형될 수 있다. 이러한 문맥에서 사용되듯이, "변경된"은 결실된 하나 이상의 탄수화물 모이어티(carbohydrate moieties)을 갖는 것, 및/또는 원래의 항체에 첨가된 하나 이상의 글리코실화 부위를 갖는 것을 의미한다. 본원 항체에 대해 글리코실화 부위를 첨가하는 것은 글리코실화 부위 컨센서스 서열을 함유할 수 있도록 아미노산 서열을 변경함으로써 달성될 수 있고; 이러한 기법은 당업계에 공지되었다. 항체에 탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 다른 방법은 항체의 아미노산 잔기에 글리코사이드를 화학적 또는 효소적으로 커플링하는 것이다. 이러한 방법은 예를 들어, WO 87/05330, 및 Aplin and Wriston (1981) CRC Crit . Rev . Biochem . 22:259-306에 기술된다. 항체에 존재하는 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는 기술 분야에 알려진 바와 같이 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다(Hakimuddin et al. (1987) Arch . Biochem. Biophys . 259:52; Edge et al. (1981) Anal . Biochem . 118:131; and Thotakura et al. (1987) Meth . Enzymol . 138:350). 구제 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프를 제공함으로써 생체 내에서 반감기를 증가시키는 변형에 있어, 예를 들어, 미국특허 제5,869,046호를 참조할 것.

일 구체예에서, 항체는 P2D10의 것으로부터 비실질적으로만 다른 다른 CDR 서열을 갖는다. 비실질적 차이는 적은 아미노산 변화, 예를 들어, CDR, 예를 들어, 크로티아 또는 카밧 CDR의 서열 내의 임의의 일반적 5-7 아미노산 중 1 또는 2의 치환을 포함한다. 일반적으로 아미노산은 유사한 전하, 소수성, 또는 입체화학적 특성을 갖는 관련 아미노산에 의해 치환된다. 이러한 치환은 당업자의 일반적 기술 내일 것이다. CDR에서와 달리, 구조 프레임워크 영역(FR) 내의 더욱 실질적인 변화는 항체의 결합 특성에 유해한 효과 없이 이루어질 수 있다. FR에의 변화는, 비인간 유래의 프레임워크를 인간화하는 것 또는 항원 접촉 또는 결합 부위의 안정화에 중요한 특정 프레임워크 잔기를 엔지니어링 하는 것, 예를 들어, 불변 영역의 클래스 또는 하위클래스를 변화시키는 것, Fc 수용체 결합과 같은 이펙터 기능을 변경할 수 있는 특정 아미노산 잔기를 변화시키는 것(Lund et al. (1991) J. Immun . 147:2657-62; Morgan et al. (1995) Immunology 86:319-24), 또는 불변 영역이 유래되는 종을 변화시키는 것을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

항-TWEAK 항체는 전장 항체 형태로, 또는 항체의 프레그먼트의 형태, 예를 들어, Fab, F(ab')₂, Fd, dAb, 및 scFv 프레그먼트로 존재할 수 있다. 추가 형태는 단일 변형 도메인, 예를 들어, 카멜 또는 카멜화 도메인을 포함하는 단백질을 포함한다. 예를 들어, U.S. 2005-0079574 및 Davies et al. (1996) Protein Eng. 9(6):531-7를 참조할 것.

항체 제조. 일부 항체, 예를 들어, Fab'은 박테리아 세포, 예를 들어, E. coli 세포 내에서 제조될 수 있다. 항체는 또한 진핵 세포 내에서 제조될 수 있다. 일 구체예에서, 항체(예를 들어, scFv)는 효모 세포, 예를 들어, Pichia (예를 들어, Powers et al. (2001) J Immunol Methods. 251:123-35를 참조), Hanseula , 또는 Saccharomyces 내에서 발현된다.

바람직한 구체예에서, 항체는 포유류 세포 내에서 제조된다. 항체를 발현시키는 포유류 숙주 세포의 예는 중국 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, Kaufman and Sharp (1982) Mol . Biol . 159:601-621에 기술된 바와 같은, DHFR 선별 마커로 사용되는 Urlaub and Chasin (1980) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-4220에서 기술된 dhfr ^- CHO 세포 포함), 림프성 세포 라인, 예를 들어, NSO 골수종 세포 및 SP2 세포, COS 세포, 및 트랜스제닉 동물로부터의 세포, 예를 들어, 트랜스제닉 포유류를 포함한다. 예를 들어, 상기 세포는 유방 내피 세포이다.

다양화된 면역글로불린 도메인을 암호화하는 핵산 서열과 함께, 재조합 발현 벡터는 추가 서열, 예를 들어, 숙주 세포(예를 들어, 복제 원점) 내에 벡터의 복제를 조절하는 서열 및 선별 마커 유전자를 함유할 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입되는 숙주 세포의 선별을 촉진한다(예를 들어, 미국특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호를 참조). 예를 들어, 일반적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입되는 숙주 세포에서 약물, 예를 들어, G418, 히그로마이신, 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다.

항체 발현을 위한 시스템의 예에서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄를 암호화하는 재조합 발현 벡터는 칼슘 포스페이트 매개 트랜스펙션에 의해 dhfr ^- CHO 세포 내로 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 유전자 전사의 높은 레벨을 가져오기 위해 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들어, SV40, CMV, 아데노바이러스 등에서 유래되는 것, 예를 들어, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소)에 각각 조작적으로 결합된다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선별/확대를 사용하여 벡터로 트랜스펙션된 CHO 세포의 선택을 가능하게하는 DHFR 유전자를 포함한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 항체 중쇄 및 경쇄의 발현이 가능하도록 배양되고, 항체는 배양 배지로부터 회수된다. 표준 분자 생물학 기법이 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 트랜스펙션하고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고 그리고 배양 배지로부터 항체를 회수하는데 사용된다. 예를 들어, 일부 항체는 단백질 A 또는 단백질 G 커플된 매트릭스로 결합 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다.

Fc 도메인을 포함하는 항체에서, 항체 제조 시스템은 바람직하게는 Fc 영역이 글리코실화된 항체를 합성한다. 예를 들어, IgG 분자의 Fc 도메인은 CH2 도메인 내의 아스파라긴 297에서 글리코실화된다. 이러한 아스파라긴은 바이안테너리 형태(biantennary-type)의 올리고사카라이드로 변형되는 부위이다. 이러한 글리코실화가 Fcγ 수용체 및 보체 C1q (Burton and Woof (1992) Adv . Immunol . 51:1-84; Jefferis et al. (1998) Immunol . Rev . 163:59-76)에 의해 매개되는 이펙터 기능을 위해 필요하다는 것이 증명되었다. 일 구체예에서, 아스파라긴 297에 상응하는 잔기를 적절하게 글리코실화하는 포유류 발현 시스템에서 Fc 도메인이 제조된다. 항체의 Fc 도메인 또는 다른 영역은 또한 다른 진핵 후번역 변형을 포함할 수 있다.

항체는 또한 트랜스제닉 동물에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국특허 제5,849,992호는 트랜스제닉 포유류의 유선에서 항체를 발현하는 방법을 기술한다. 트랜스유전자는 목적하는 항체를 암호화하는 우유 특이성 프로모터 및 핵산 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하도록 제조된다. 이러한 트랜스제닉 포유류의 암컷에 의해 생성되는 우유는 여기에 분비된 목적 항체를 포함한다. 항체는 우유로부터 정제될 수 있고, 또는 일부 사용에서 직접 사용될 수 있다.

특성화

항체의 결합 특성은 임의의 표준 방법, 예를 들어, 하기 방법 중 하나에 의해 측정될 수 있다: BIACORE^TM 분석, 효소 결합 면역흡수 분석법(ELISA), 형광 공명 에너지 전달(FRET), x-선 결정분석법, 서열 분석 및 스캐닝 돌연변이 유발. TWEAK의 하나 이상의 활성을 저해하는 단백질의 능력은 시험관 내에서 또는 질환, 예를 들어, 본 명세서에 기술되는 질환의 동물 모델에서 평가될 수 있다. 바람직하게는, 상기 항체는 항체가 TWEAK의 하나 이상의 활성을 저해한다는 것을 나타내는 통계학적으로 유의한 효과를 갖는다.

일 구체예에서, 피부 섬유아세포 내에서 IL-8, MMP-1, PGE2, IL-6, IP-10 및 RANTES의 제조를 촉진하는 TWEAK 능력의 저해에 관하여 항체가 평가된다. 적절한 분석 조건에 대해 Chicheportiche et al. (2002) Arthritis Res. 4(2):126-133를 참조할 것.

다른 구체예에서, TWEAK가 내피 세포의 증식을 촉진하는 것을 저해하는 능력에 관하여 항체가 평가된다. 예를 들어, 하기와 같은 증식 분석법 (뿐만 아니라 다른 유용한 분석법)을 기술하는 U.S. 2003-0211993를 참조할 것: HVEC를 꽉 차지 않도록 96-웰 마이크로량 플레이트에 플레이팅하고(웰 당 4000개의 세포), 공급 성장 보충물의 첨가 없이 CS-C 배지에서 밤새도록 배양한다. 배지를 완전 배지, 또는 기본 배지로 교체한다. 세포를 기본 배지에서 TWEAK(100 ng/ml), 1/500 내지 1/1000로 희석한 bFGF 성장 보충물(Clonetics) 또는 1 ng/ml(R&D Systems)을 사용하는 bFGF, VEGF (10 ng/ml) 또는 이러한 요소들의 조합이 있거나 없도록 하여 배양한다. 지시가 있는 경우, 시험할 10 ㎍/ml의 항체 또는 컨트롤 항체를 또한 첨가한다. 세포를 37℃에서 5% CO₂로 3일간 배양하고, 배양의 마지막 10시간 동안 ³H-티미딘으로 펄스화하여 증식을 측정하였다. 세포-결합 방사성활성을 BETAPLATE^TM(EG&G Wallac, Gaithersburg, Md.)로 측정하였다. TWEAK 또는 TWEAK 및 bFGF의 조합에 의해 매개되는 증식의 감소는 항체가 TWEAK 활성을 막는데 효과적이라는 것을 나타낸다.

표면 플라스몬 공명( SPR ). 관심이 있고 목적하는 단백질(예를 들어, TWEAK)의 결합 상호작용은 SPR을 사용하여 분석될 수 있다. SPR 또는 생분자 상호작용 부석(BIA)은 임의의 상호작용자(interactant)의 표지화(labeling) 없이 실시간으로 생특이성 상호작용을 검출한다. BIA 칩의 결합 표면에서 질량의 변화(결합 사건의 지표)는 표면 근처의 광 굴절율의 변경(표면 플라스몬 공명(SPR)의 광현상)을 가져온다. 굴절도의 변화는 생물학적 분자 간의 실시간 반응의 지표로서 측정되는 검출가능한 신호를 형성한다. SPR을 사용하는 방법은 예를 들어, 미국특허 제5,641,640호; Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal . Chem . 63:2338-2345; Szabo et al. (1995) Curr . Opin . Struct . Biol. 5:699-705 및 IAcore International AB에 의해 제공되는 온라인 공급원(Uppsala, Sweden)에 기술된다. SPR로부터의 정보는 목적을 위한 생분자의 결합을 위한 평형 분해 상수(K_d), 및 K_on 및 K_off를 포함한 속도론 파라미터의 정확하고 정량적 측정을 제공하는데 사용될 수 있다.

에피토프는 또한 BIAcore 크로마토그래피 기법을 사용하여 TWEAK(예를 들어, 인간 TWEAK, 특히 가용성 인간 TWEAK)에 결합하기 위해 서로 경쟁하는 다른 항체들의 능력을 평가함으로써 직접 맵핑될 수 있다(Pharmacia BIAtechnology Handbook, "에피토프 맵핑(mapping)", Section 6.3.2, (May 1994); 또한 Johne et al. (1993) J. Immunol . Methods, 160:191-198를 참조). 항체 평가, 예를 들어, 웨스턴 블롯 및 면역침강법을 위한 추가적 일반 가이드는 Antibodies : A Laboratory Manual, ed. by Harlow and Lane, Cold Spring Harbor press (1988)에서 찾을 수 있다.

TWEAK -관련 질환

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에 기술되는 항체)는 다양한 질환, 예를 들어, TWEAK-관련 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체는 개체의 염증, 면역, 또는 자가면역 질환뿐만 아니라, 종양 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 염증성 TWEAK-관련 질환의 예는 류마티스 관절염, 건선 관절염, 강직 척추염, 염증 장 질환(궤양성 대장염 및 크론병 포함), 건선, 또는 염증성 근육염을 포함한다. 치료될 수 있는 염증 질환의 다른 예는 랑게르한스 세포 조직구증, 성인성 호흡곤란 증후군/폐쇄성 세기관지염, 베게너 육아종증, 혈관염, 악액질, 구내염, 특발성폐섬유증, 피부근육염 또는 다발근육염, 비감염성 공막염, 폐와 관련이 있는 만성 사르코이드증, 과량의 모세포를 갖는 골수형성이상 증후군/불응성 빈혈, 궤양성 대장염, 중간 내지 심각한 만성 폐쇄성 폐질환, 및 거세포 동맥염을 포함한다.

이러한 질환 중 하나를 가지거나 진단상 위험이 있는 개체는 전체 치료 효과를 제공할 수 있는 양으로 그리고 시간 동안 항-TWEAK 항체가 투여될 수 있다. 항-TWEAK 항체는 단독으로 또는 다른 물질과 조합으로 투여될 수 있다. 예를 들어, USSN 60/679,518는 TNF-차단 물질과 조합으로 TWEAK 차단 물질을 투여하는 방법을 기술한다. 조합 치료의 경우, 투여량 및 투여 시간은 예를 들어, 상승 치료 효과가 제공되는 것일 수 있다. 또한, (제2 물질과 함께 또는 제2 물질 없이) TWEAK 차단 물질을 투여하는 것은 제1, 예를 들어, 첫번째 라인 치료, 또는 예를 들어, 이전의 투여 치료에 대해 비적절한 반응을 갖는 개체에게의 제2 치료(즉, TWEAK 차단 물질로의 하나의 치료와 다른 치료)로 사용될 수 있다.

류마티스 관절염( RA )

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에 기술하는 항체)는 류마티스 관절염 및 관련 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 류마티스 관절염("RA")은 일차적으로 관절에 통증, 부종, 경직 및 기능 손실을 야기하는 만성 염증성 질환이다. RA는 종종 윤활막, 보호낭을 만드는 관절을 둘러싸는 막에서 시작된다. RA로 고통받는 많은 개체에서, 백혈구가 순환으로부터 계속되는 비정상 염증(예를 들어, 윤활막염)을 일으키는 윤활막 내로 침윤된다. 이어서, 윤활막은 열감, 발진, 부종 및 통증을 야기하는 염증이 일어난다. 연골 내의 콜라겐은 차츰 파괴되고, 관절 공간이 좁아지고, 결국 뼈가 손상된다. 염증은 영향을 미치는 공간 내에서 침식성 뼈 손상을 야기한다. 이러한 과정 중에, 윤활막의 세포는 자라서 비정상적으로 분배되어, 정상적 얇은 윤활막을 두껍게 만들고, 부은 그리고 접촉에 대해 부풀어 오르는 관절을 가져온다.

RA가 진행됨에 따라, 비정상 윤활막 세포가 침투하여 연골 및 관절 내의 뼈를 손상시킨다. 관절을 지지하고 안정화하는 주위의 근육, 인대, 및 힘줄이 약해지고 정상적으로 작동하지 않을 수 있다. RA는 또한 골다공증을 가져오고, 뼈의 취약하게 만들고 그리고 쉽게 골절되는 경향을 가져오는, 더욱 일반화된 뼈 손실을 야기할 수 있다. 이러한 효과 모두는 RA와 관련된 통증, 손상 및 변형을 야기한다. 영향을 줄 수 있는 영역은 손목, 손가락 관절, 무릎 및 발의 볼(ball of the foot)을 포함한다. 종종, 많은 관절이 관계될 수 있고, 심지어 척추가 영향을 받을 수 있다. RA인 약 25%의 사람에서, 작은 혈관의 염증은 종종 관절 가까이에 형성되는 피부 밑의 류마티스 소결절, 또는 덩어리를 야기할 수 있다. 질환이 진행됨에 따라, 용액이 또한 특히 발목에 축적될 수 있다. 많은 RA 개체들은 또한 빈혈이 발생하거나, 또는 적혈구의 정상 수가 감소된다.

RA는 몇몇 질환 하위타입, 예를 들어, 펠티 증후군, 혈청반응음성 RA, "전형적" RA, 진행성 및/또는 재발성 RA, 및 혈관염을 갖는 RA를 포함한다. 일부 전문가는 질환을 타입 1 또는 타입 2로 분류한다. 타입 1, 덜 일반적인 형태는 최대 몇 달간 지속되고, 영구적 장애를 남기지 않는다. 타입 2는 만성적이고, 몇 년간 지속되고, 때로는 평생 지속된다. RA는 또한 피하 류마티스성 소결절, 내장 소결절, 다리 궤양을 야기하는 혈관염 및 다발성 단신경염, 또는 늑막 또는 심막 삼출, 림프절병증, 펠티 증후군, 쇼그렌 증후군, 및 상공막염으로서 명백해진다. 이러한 질병 하위타입 및 또한 하나 이상의 상기 증상을 보이는 개체는 본 명세서에서 기술하는 항체를 사용하여 치료될 수 있다.

RA는 다양한 임상적 측정법으로 평가될 수 있다. 징후의 일부 예는 총 샤프 스코어(TSS: total Sharp score), 샤프 침식 스코어(Sharp erosion score), 및 HAQ 장애 지수를 포함한다. 본 명세서의 방법은 하나 이상의 이러한 징후를 향상시키는데 사용될 수 있다. RA의 치료를 위한 항-TWEAK 항체의 치료 특성은 동물 모델에서, 예를 들어, 마우스 콜라겐 유도 관절염(mCIA) 모델을 사용하여 평가될 수 있다(예를 들어, Stuart et al., J. Clin . Invest. 69:673-683 (1982) 참조).

다발 경화증

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에 기술되는 항체)는 다발 경화증(MS)을 및 관련 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. MS는 염증 및 수초(myelin sheath) 손실을 특징으로 하는 중추 신경계 질환이다.

MS를 갖는 개체는 MS의 진단에 대한 워크샵에 의해 정의된 바와 같이 임상적으로 정해진 MS의 진단 설정 기준에 의해 확인될 수 있다(Poser et al., Ann . Neurol. (1983) 13:227). 간략히, 임상적으로 정해진 MS를 갖는 개체는 2가지 공격 및 2개의 병변의 임상적 증거 또는 1개의 병변의 임상적 증거 및 다른, 개별 병변의 잠복기 증거의 임상적 증거를 갖는다. 정해진 MS는 또한 2가지 공격의 증거 및 뇌척수액 내의 IgG의 올리고클론 밴드에 의해, 또는 공격, 2가지 병변의 임상적 증거 및 뇌척수액 내의 IgG의 올리고클론 밴드의 조합에 의해 진단될 수 있다.

다발 경화증의 효과적 치료는 여러 다른 방법으로 조사될 수 있다. 하기 파라미터들이 치료의 효과를 평가하는데 사용될 수 있다. 3가지 주요한 기준이 사용된다: EDSS(연장된 장애 상태 스케일), 악화 발현 또는 MRI(자기 공명 영상법). EDSS는 MS로 인한 임상적 손상을 등급화하는 수단이다(Kurtzke (1983) Neurology 33:1444). 8개의 기능 시스템이 신경 손상의 형태 및 심각성에 대해 평가된다. 간략하게 말해, 치료 전에, 개체는 하기 시스템에서 손상에 대하여 평가된다: 피라미드, 소뇌, 뇌줄기, 감각, 장 및 방광, 시각, 뇌동맥, 및 기타. 팔로우업이 정해진 간격에서 수행된다. 스케일 범위는 0 (정상) 내지 10 (MS로 인한 죽음)이다. EDSS의 감소는 치료 효과를 나타낸다(Kurtzke (1994) Ann . Neurol. 36:573-79).

다발 경화증을 위한 동물 모델의 예는 실험적 자가면역 뇌염(EAE) 마우스 모델, 예를 들어, Tuohy et al. (J. Immunol . (1988) 141: 1126-1130), Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401), 및 Traugott (Cell Immunol. (1989) 119: 114-129)에 기술된 것과 같은 것이다. 마우스는 본 명세서에 기술하는 항체가 EAE유발 전에 투여될 수 있다. 마우스는 항체의 효과를 측정하기 위한 특성 기준에 대해 평가된다.

뇌졸중

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에서 기술하는 항체)는 뇌졸중, 예를 들어, 혈전색전성 또는 출혈성 뇌졸중(예를 들어, 최후 48, 24, 12, 8, 또는 2 시간 내)을 경험한 개체를 치료하거나 예를 들어, 뇌졸중의 위험이 있는 개체에서 뇌졸중을 예방하는데 사용될 수 있다. 방법의 예는 USSN 60/653,811에 개시된다. 뇌졸중은 혈관 질환으로부터 기인한 급성 뇌 손상에 대한 일반적 용어이다. 뇌졸중은 2 이상의 카테고리로 분류될 수 있다: 출혈성 뇌졸중(정상 혈관 밖으로의 혈액의 누출에 기인함) 및 허혈성 뇌졸중(혈액 공급 결핍으로 인한 대뇌 허혈). 허혈성 뇌졸중을 야기하는 일부 사건은 혈전증, 색전증, 및 (결과적으로 허혈 및 저산소증과 함께) 전신 관류저하를 포함한다.

뇌졸중은 일반적으로 산소 결핍으로 인한 뇌 내의 신경 사멸 및 손상 및 2차 사건을 야기한다. 혈액 공급의 부족 또는 다른 손상의 결과로 죽은 뇌의 부분을 경색이라고 부른다. 일부 경우, 본 명세서에서 기술되는 치료는 예를 들어, 신경 사멸 또는 손상을 야기하는 2차 사건을 감소시킴으로써, 경색의 크기를 감소시키거나 또는 최소화하는데 사용될 수 있다.

뇌 동맥벽에 형성되는 혈전으로부터 기인하는 대뇌동맥의 장애는 일반적으로 대뇌 혈전증으로 불린다. 대뇌 색전에서, 대뇌 동맥을 차단하는 폐색 물질은 순환의 다운스트림에서 일어난다(예를 들어, 색전은 심장으로부터 대뇌 동맥으로 이동함). 뇌졸중이 혈전증에 의한 것인지 색전증에 의한 것인지 구분하는 것이 어렵기 때문에, 용어 혈전색전증이 이러한 두 종류의 뇌졸중을 포괄하기 위해 사용된다. 전신 관류저하는 감소된 혈액 수치, 감소한 헤마토크릿, 낮은 혈압 또는 심장의 적절한 혈액 펌핑의 장애의 결과로서 일어날 수 있다.

또한, 항-TWEAK 항체는 뇌졸중의 예방 치료제, 또는 이의 성분으로서 투여될 수 있는데, 예를 들어, 일과성 허혈 발작(TIA)을 경험하거나 TIA의 증상을 나타내는 개체에게 투여될 수 있다.

신경 질환

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에 기술되는 항체)가 신경 질환, 예를 들어, 신경 트라우마 및 신경변성 질환을 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 기계적 신경 트라우마의 예는 척수 손상(SCI) 및 트라우마 뇌 손상(TBI)을 포함한다. 신경변성 질환의 예는 근위축성 측삭 경화증(ALS), 진행성 구마비(PBP), 원발성 측삭 경화증(PLS), 진행성 근 위축(PMA), 파킨슨병, 헌팅턴병(HD), 및 알츠하이머병을 포함한다. 예를 들어, USSN 60/653,813를 참조할 것, 일 구체예에서, 신경 질환은 신경 세포, 예를 들어, 운동 신경세포(예를 들어, ALS), 기저핵의 선조 신경세포 및/또는 피질 신경세포(헌팅턴병), 흑색질 신경세포(예를 들어, 파킨슨병)의 파괴 또는 소면에 의해 주로 특징지어진다.

암

TWEAK 및 이의 수용체는 적어도 일부의 암, 예를 들어, 췌장암의 발생에 관여할 수 있다. 항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에 기술되는 항체)는 암(예를 들어, 샘암종) 및 다른 종양 질환의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 예를 들어, 2005년 5월 27일에 출원된 "암의 치료(TREATMENT OF CANCER)", USSN 60/685,465를 참조할 것.

약학적 조성물

항-TWEAK 항체(예를 들어, 본 명세서에서 기술되는 항체)는 예를 들어, 본 명세서에 기술되는 질환을 치료하기 위한 개체에게 투여하기 위한 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 일반적으로, 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 약학적으로 허용가능한 담체는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제, 및 기타 생리학적으로 허용가능한 것을 포함한다. 조성물은 약학적으로 허용가능한 염, 예를 들어, 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다(예를 들어, Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm . Sci. 66:1-19를 참조).

약학적 조성물은 기술분야에서 잘 정립되었고, 예를 들어, Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th Ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727); 및 Kibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3^rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)에 더욱 기술된다.

약학적 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이는 예를 들어, 액상, 반액상 및 고체 제형, 예를 들어, 액상 용액(예를 들어, 주사가능한 용액 및 주입가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 바람직한 형태는 의도하는 투여 모드 및 치료적 적용에 의존할 수 있다. 일반적으로 본 명세서에 기술하는 물질을 위한 조성물은 주사가능하거나 주입가능한 용액의 형태이다.

일 구체예에서, 항-TWEAK 항체는 부형제, 예를 들어, 소듐 클로라이드, 소듐 디베이직 포스페이트 헵타하이드레이트, 소듐 모노베이직 포스페이트, 및 안정제와 제형화된다. 이는 예를 들어, 적절한 농도의 버퍼 용액으로 제공될 수 있고, 2-8℃ 에 보관될 수 있다.

이러한 조성물은 비경구적 모드(예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 또는 근육내 주사)로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "비경구적 투여" 및 "비경구적으로 투여함"은 장관 및 국소적 투여 이외의 투여 모드, 일반적으로 주사에 의한 것을 의미하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 피막내, 안와내, 심장내, 피부내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 거미막하, 척수내, 경질막외 및 복장내 주사 및 주입을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포솜, 또는 고농도에서 보관하기에 적절한 다른 차원의 구조로 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 용액은 필요한 양의 본 명세서에서 기술하는 물질을 필요에 따라, 하나 또는 상기 열거한 성분의 조합과 적절한 용매 내에 혼입하고, 멸균 여과함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 본 명세서에 기술되는 물질을 기본 분산 매질 및 필요한 상기 열거한 것들로부터의 기타 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이미 멸균 여과된 용액으로부터 본 명세서에서 기술하는 물질 및 임의의 추가 목적 성분의 분말을 수득하게 해주는 진공 건조 및 냉동 건조이다. 용액의 적당한 유동성이 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용함으로써, 분산액의 경우 필요한 입자 크기를 유지함으로써, 그리고 계면 활성제를 사용함으로써 유지될 수 있다. 주사용 조성물의 지속된 흡수는 조성물 내에 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들어, 모노스테아레이트염 및 젤라틴을 대략 포함시킴으로써 가능하다.

일정 구체예에서, 항-TWEAK 항체는 빠른 방출에 대해 화합물을 보호할 담체로, 예를 들어, 이식, 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형으로 제조가능하다. 생분해성, 생체적합성 폴리머, 예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리언하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조를 위한 많은 방법이 특허받았거나 일반적으로 공지되었다. 예를 들어, ustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978)를 참조할 것.

항-TWEAK 항체는 예를 들어, 순환 내, 예를 들어, 혈액, 혈청, 또는 다른 조직 내의 안정성 및/또는 보유력을 예를 들어, 1.5, 2, 5, 10, 또는 50배 이상으로 향상시키는 모이어티로 변형될 수 있다. 변형된 항체는 염증 부위, 예를 들어, 관절에 도달할 수 있는지 여부가 평가될 수 있다.

예를 들어, 항-TWEAK 항체는 폴리머, 예를 들어, 실질적으로 비항원성 폴리머, 예를 들어, 폴리알킬렌 옥사이드 또는 폴리에틸렌 옥사이드에 연결(예를 들어, 결합)될 수 있다. 적절한 폴리머는 실질적으로 다양한 중량일 것이다. 약 200 내지 약 35,000 달톤 (또는 약 1,000 내지 약 15,000, 및 2,000 내지 약 12,500) 범위의 수 평균 분자량을 갖는 폴리머가 사용될 수 있다.

예를 들어, 항-TWEAK 항체는 수용성 폴리머, 예를 들어, 친수성 폴리비닐 폴리머, 예를 들어, 폴리비닐알코올 또는 폴리비닐 피롤리돈에 결합될 수 있다. 이러한 폴리머의 예는 폴리알킬렌 옥사이드 호모폴리머, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이의 코폴리머 및 블록 코폴리머의 수용성이 유지되도록 하는 블록 코폴리머를 포함한다. 다른 유용한 폴리머는 폴리알킬렌, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 및 폴리에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 블록 코폴리머; 폴리메타크릴레이트; 카보머; 및 분지형 또는 비분지형 폴리사카라이드를 포함한다.

일부 이행에서, 항-TWEAK 항체는 비록 많은 구체예에서, 이러한 구성이 불필요하기는 하지만, 표지 또는 다른 물질, 예를 들어, 다른 치료제, 예를 들어, 세포독성 물질 또는 세포증식억제 물질과 커플링되거나 또는 기타 연결될 수도 있다. 세포독성 물질 또는 세포증식억제 물질은 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 빈블라스틴, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드(maytansinoid)(예를 들어, 메이탄시놀 또는 DM1 메이탄시놀, 메이탄신의 설프히드릴 함유 유도체), 미토산트론, 미스라마이신, 액티노마이신 D, 1-디히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 탁산, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀올, 및 퓨로마이신 및 이들의 유사체 또는 동종체를 포함한다.

항-TWEAK 항체가 제2 물질(예를 들어, 항-TNF-α 항체 또는 다른 물질)과 조합으로 사용되는 경우, 2가지 물질은 별도로 또는 함께 제형화될 수 있다. 상기 물질들은 제형화되거나 상승적 유효량으로 사용될 수 있다. 물질의 하나 또는 모두를 단독 치료에서 사용되는 경우보다 더 적은 양으로 사용하는 것도 가능하다. 예를 들어, 각각의 약학적 조성물은 예를 들어, 투여 바로 전에 혼합될 수 있고, 예를 들어, 같은 시간에 또는 다른 시간에, 함께 투여되거나 별도로 투여될 수 있다.

다른 TWEAK 차단제, 예를 들어, USSN 60/679,518에서 기술되는 물질을 사용하는 것도 가능하다. 물질은 개체에게 투여될 수 있는 임의의 형태의 화합물(예를 들어, 작은 유기 또는 무기 분자, 핵산, 단백질, 또는 펩티드 모방체)일 수 있다. 일 구체예에서, 차단제는 생물학적, 예를 들어, 5-300 kDa 사이의 분자량을 갖는 단백질이다. 예를 들어, TWEAK 차단제는 TWEAK의 TWEAK 수용체에의 결합을 저해할 수 있다. TWEAK에 결합하는 항체 이외의 TWEAK 차단제의 예는 TWEAK-R 및 TWEAK-R의 가용성 형태(예를 들어, Fn14)에 결합하는 항체를 포함한다. 본 명세서에 기술하는 다른 치료제가 또한 예를 들어, 표준법 또는 본 명세서에 기술하는 방법에 의해 약학적 조성물로서 제공될 수 있다.

투여

항-TWEAK 항체는 개체, 예를 들어, 인간 개체에게 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 많은 적용에 있어, 투여 경로는 하기 중의 하나이다: 정맥 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내 주사(IP), 또는 근육내 주사. 관절내 전달을 사용하는 것도 가능하다. 비경구적 투여의 다른 모드가 사용될 수도 있다. 이러한 모드의 예는 하기의 것들을 포함한다: 동맥내, 경막내, 피막내, 안와내, 심장내, 피부내, 경기관, 표피하, 관절내, 피막하, 거미막하, 척수내, 및 경질막외 및 복장내 주입. 일부 경우, 투여는 염증 부위, 예를 들어, 관절 또는 다른 염증 부위에 직접 이루어지는 것도 가능하다.

항체 투여의 경로 및/또는 모드는 또한 각 경우마다, 예를 들어, 단층촬영 이미지, 신경학적 조사, 및 특정 질환에 관계하는 표준 파라미터, 예를 들어, 류마티스 관절염 평가 기준을 사용하여, 예를 들어, 개체를 모니터링함으로써 맞추어질 수 있다.

항체는 고정된 양으로, 또는 mg/kg의 양으로 투여될 수 있다. 투여량은 항-TWEAK 항체에 대한 항체의 생성을 감소시키거나 피할 수 있도록 선택될 수도 있다. 투여 계획은 목적하는 반응, 예를 들어, 치료 반응 또는 복합적 치료 효과가 제공되도록 조절된다. 일반적으로, 항-TWEAK 항체의 투여량(및 필요에 따라 제2 물질)은 개체에게 생물학적 유효량의 물질을 제공하도록 사용될 수 있다. 예를 들어, 0.1-100 mg/kg, 0.5-100 mg/kg, 1　mg/kg-100 mg/kg, 0.5-20 mg/kg, 0.1-10 mg/kg, 또는 1-10 mg/kg의 범위의 투여량이 투여될 수 있다. 다른 투여량이 사용될 수도 있다.

본 명세서에서 사용되는 투여량 단위 형태 또는 "고정 투여량"은 치료할 개체에게 단일 투여로서 적당한 신체적 분리 단위를 나타내고; 각 단위는 요구되는 약학적 담체 및 필요에 따라 다른 물질과 함께 목적하는 치료 효과를 나타내도록 계산된 예정된 양의 활성 화합물을 포함한다. 단일 또는 복수 투여가 이루어질 수 있다. 대안으로, 또는 이와 함께, 항체가 지속적 주입을 통해 투여될 수 있다.

항-TWEAK 항체 투여는 예를 들어, 2회 투여, 3회 투여, 5회 투여, 10회 투여 이상, 예를 들어, 1일 2 또는 3회, 또는 주당 약 1 내지 4회, 또는 바람직하게는 1주마다, 2주마다, 1달마다, 예를 들어, 약 1 내지 12 주간, 바람직하게는 2 내지 8 주간, 더욱 바람직하게는 약 3 내지 7 주간, 및 보다 더욱 바람직하게는 약 4, 5, 또는 6 주간을 포괄하기에 충분한 일정 시간의 주기적 간격(치료 과정)으로 투여될 수 있다. 개체를 효과적으로 치료하는데 요구되는 투여량 및 시간에 영향을 줄 수 있는 인자는 예를 들어, 질병 또는 질환의 심각성, 제형, 전달 경로, 이전 처리, 개체의 일반적 건강 및/또는 나이, 및 다른 질병의 존재 여부를 포함한다. 게다가, 치료학상 유효량의 화합물로 개체를 치료하는 것은 단일 치료 또는 바람직하게는 일련의 치료를 포함할 수 있다. 동물 모델이 또한 유효량, 예를 들어, 초기 투여량 또는 계획을 결정하는데 사용될 수 있다.

개체가 염증 질환 또는 본 명세서에 기술하는 다른 질환이 발병할 위험이 있는 경우, 항체는 질환의 완전한 발현 전에, 예를 들어, 예방적 측량으로 투여될 수 있다. 이러한 예방적 처치의 기간은 항체의 단일 투여일 수 있고, 치료가 계속될 수도 있다(예를 들어, 다회 투여). 예를 들어, 질환의 위험이 있거나 질환이 예측되는 개체는 질환의 발생 또는 확산을 예방하기 위하여 항체로 며칠, 몇주, 몇달, 도는 몇년 동안 치료할 수 있다.

약학적 조성물은 "치료학적 유효량"의 본 명세서에서 기술하는 물질을 포함할 수 있다. 이러한 효과적량은 투여 물질의 효과, 또는 하나 이상의 물질이 사용되는 경우는 물질의 조합 효과에 기초하여 결정될 수 있다. 물질의 치료학적 유효량은 또한 질병 상태, 나이, 성별, 및 개체의 몸무게, 및 목적하는 반응을 개체 내에서 이끌어내는 화합물의 능력, 예를 들어, 하나 이상의 질환 파라미터의 개선 또는 하나 이상의 질환 증상의 개선과 같은 인자에 따라 변화될 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 조성물의 임의의 독성 또는 해로운 효과보다 치료학적으로 이로운 효과가 훨씬 큰 것이다.

치료용 장치 및 키트

항-TWEAK 항체를 포함하는 약학적 조성물은 의학적 장치로 투여될 수 있다. 상기 장치는 예를 들어, 의학 설비 및 기타 의학 도구로부터 떨어진 현장에서의 응급 개체에 의해 또는 능숙하지 않은 개체에 의해, 응급 상황에서 사용될 수 있도록, 휴대성, 실온 보관, 및 사용의 편리함과 같은 양상으로 고안될 수 있다. 상기 장치는 예를 들어, 항-TWEAK 항체를 포함하는 약학적 제제의 보관을 위한 하나 이상의 하우징을 포함할 수 있고, 항체의 하나 이상의 단위 투여량을 전달할 수 있도록 구성될 수 있다. 상기 장치는 또한 항-TWEAK 항체 또한 포함하는 단일 약학적 조성물로서 또는 2개의 별도의 약학적 조성물로서, 제2 물질, 예를 들어, 항-TNF-α 항체를 투여하도록 구성될 수 있다.

예를 들어, 약학적 조성물은 바늘이 없는 피하 주사 장치, 예를 들어, US 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; 또는 4,596,556에 기술되는 장치로 투여될 수 있다. 잘 알려진 이식 및 모듈의 예는 하기를 포함한다: 제어된 속도로 약제를 분배할 수 있는 이식가능한 마이크로주입 펌프를 개시하는 US 4,487,603; 피부를 통해 약제를 투여하는 치료 장치를 개시하는 US 4,486,194; 정확한 주입 속도로 약제를 전달하기 위한 약제 주입 펌프를 개시하는 US 4,447,233; 계속된 약물 전달을 위한 다양한 유동 이식가능 주입 기구를 개시하는 US 4,447,224; 다중 챔버 부분을 갖는 삼투압 약물 전달 시스템을 개시하는 US 4,439,196; 및 삼투압 약물 전달 시스템을 개시하는 US 4,475,196. 많은 다른 장치, 이식기, 전달 시스템, 및 모듈이 또한 알려졌다.

항-TWEAK 항체는 키트 내로 제공될 수 있다. 일 구체예에서, 키트는 (a) 항-TWEAK 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 용기, 및 필요에 따라, (b) 정보 물질을 포함한다. 정보 물질은 본 명세서에서 기술하는 방법과 관련된 다른 물질 및/또는 유효한 치료를 위한 물질의 사용과 관련된 설명, 지시, 마케팅 또는 다른 물질일 수 있다.

구체예에서, 키트는 또한 염증 질환의 치료를 위한 제2 물질, 예를 들어, 항-TNF-α 항체를 포함한다. 예를 들어, 키트는 항-TWEAK 항체를 포함하는 조성물을 함유하는 제1 용기, 및 제2 물질을 포함하는 제2 용기를 포함한다.

키트의 정보 물질은 그 형태가 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 정보 물질은 화합물의 제조, 화합물의 분자량, 농도, 만기 일자, 베치 또는 제조 위치 정보 등에 관한 정보를 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 정보 물질은 염증 질환, 또는 본 명세서에서 기술하는 다른 질환을 가지고 있거나 위험이 있는 개체를 치료하기 위한 항-TWEAK 항체의 투여 방법, 예를 들어, 적절한 투여량, 투여 형태, 또는 투여 모드(예를 들어, 본 명세서에 기술하는 투여의 투여량, 투여 형태, 또는 투여 모드)와 관련된다. 정보는 프린트된 문헌, 컴퓨터로 읽을 수 있는 물질, 비디오 레코드, 또는 오디오 레코드, 또는 예를 들어, 인터넷에서, 실질적 물질에 대한 링크 또는 주소를 제공하는 정보를 포함하여 다양한 포맷으로 제공될 수 있다.

항체와 함께, 키트 내의 조성물은 다른 성분, 예를 들어, 용매 또는 버퍼, 안정제, 또는 방부제를 포함할 수 있다. 항체는 임의의 형태로, 예를 들어, 액상, 건조 또는 냉동건조된 형태, 바람직하게는 실질적으로 순수하고 그리고/또는 멸균된 것이 제공될 수 있다. 물질이 액상 용액으로 제공되는 경우, 액상 용액은 바람직하게는 수용액이다. 물질이 건조 형태로 제공되는 경우, 재구성은 일반적으로 적절한 용매에 의한다. 용매, 예를 들어, 멸균수 또는 멸균 버퍼는 필요에 따라 키트로 제공될 수 있다.

상기 키트는 조성물 또는 물질을 함유하는 조성물을 위한 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 키트는 조성물 및 정보 물질을 위한 분리된 용기, 분배기 또는 부분을 함유한다. 예를 들어, 조성물은 병, 바이알, 또는 주사기 내에 함유될 수 있고, 정보 물질은 플라스틱 슬리브 또는 패킷에 함유될 수 있다. 다른 구체예에서, 키트의 분리된 요소는 단일의, 분배되지 않은 용기 내에 함유된다. 예를 들어, 상기 조성물이 라벨의 형태로 정보 물질이 부착된 병, 바이알, 또는 주사기 내에 함유될 수 있다. 일부 구체예에서, 키트는 개별 용기의 다수(예를 들어, 팩)를 포함하고, 각각은 물질의 하나 이상의 단위 투여 형태(예를 들어, 본 명세서에서 기술하는 투여 형태)를 함유한다. 용기는 조합 단위 투여, 예를 들어, 항-TWEAK 항체 및 제2 물질 양쪽을 예를 들어, 목적하는 비율로 포함하는 단위를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 다수의 주사기, 앰플, 호일 패킷, 블리스터 팩, 또는 의학적 장치, 예를 들어, 각각 단일 조합 단위 투여량을 포함하는 것을 포함한다. 키트의 용기는 공기가 통하지 않고, 방수(예를 들어, 습기 또는 증발의 변화에 대해 불투과성)이고, 및/또는 빛이 통하지 않을 수 있다.

키트는 선택적으로 조성물의 투여에 적절한 장치, 예를 들어, 주사기 도는 다른 적절한 전달 장치를 포함한다. 상기 장치는 물질의 하나 또는 모두가 미리 로딩되어 제공할되거나, 비어있지만 로딩하기에 적절하게 제공될 수 있다.

TWEAK -발현 세포의 타겟팅

본 명세서에서 기술되는 항-TWEAK 항체가 TWEAK-발현 세포로 또는 TWEAK와 관련된 조직 또는 다른 구조로 하중되어 타겟화하는데 사용될 수 있다. 예를 들어,항체는 (예를 들어, 유전자 치료를 위해) 외부 유전자를 전달할 수 있는 바이러스 또는 바이러스 유사 입자에 또는 리포솜, 예를 들어, 치료제 또는 외부 유전자를 캡슐화하는 리포솜에 부착될 수 있다. 바이러스를 타겟하기 위한 항체를 사용하는 방법의 예는 Roux et al. (1989) Proc Natl Acad Sci USA (1989) 86:9079-9083에 기술된다. 예를 들어, Curr Gene Ther. (2005) 5:63-70 and Hum Gene Ther. (2004) 15:1034-1044를 참조할 것.

본 발명의 항-TWEAK Ab는 또한 항암치료제와 같은 치료제를 포함하는 리포솜에 부착될 수 있다. 항체의 리포솜에의 부착은 임의의 공지된 교차결합제, 예를 들어, 독소 또는 항암치료제를 목적하는 전달을 위해 항체에 커플링하는데 널리 사용되는 헤테로이기능성 교차결합제에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 리포솜에의 결합은 탄수화물 관련 교차결합 시약 4-(4-말레이미도페닐)부티르산 하이드라지드(MPBH) (Duzgunes et al. (1992) J. Cell . Biochem . Abst. Suppl. 16E 77)를 사용하여 달성될 수 있다. 항체를 함유하는 리포솜은 또한 잘 알려진 방법으로 제조가능하다(예를 들어 DE 3,218,121; Epstein et al. (1985) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 82:3688-92 ; Hwang et al. (1980) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 77:4030-34; U.S. 4,485,045 and 4,544,545 참조).

진단적 용도

항-TWEAK 항체는 생체 외(예를 들어, 생물학적 시료, 예를 들어, 조직, 생체 조직) 또는 생체 내(예를 들어, 개체의 생체 이미지)에서 TWEAK의 존재를 검출하기 위한 진단 방법으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간 또는 효과적 인간 항-TWEAK 항체는 개체 내의 TWEAK를 검출하기 위해 개체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체는 예를 들어, MRI 검출가능한 표지 또는 방사선표지로 표지될 수 있다. 개체는 검출가능한 표지를 검출하기 위한 수단을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 개체는 개체 내의 항체의 위치를 평가하기 위해 스캐닝될 수 있다. 예를 들어, 개체는 예를 들어, NMR 또는 다른 단층촬영 수단에 의해 이미지화된다.

진단 이미지를 위해 유용한 표지의 예는 방사선표지, 예를 들어, ¹³¹I, ¹¹¹In, ¹²³I, ⁹⁹ ^mTc, ³²P, ³³P, ¹²⁵I, ³H, ¹⁴C, 및 ¹⁸⁸Rh, 형광 표지, 예를 들어, 플루오레세인 및 로다민, 핵 자기 공명 활성 표지, 양전자 방출 단층촬영("PET") 스캐너에 의해 검출가능한 양전자 방출 동위원소, 화학발광제, 예를 들어, 루시페린, 및 효소 마커, 예를 들어, 퍼옥시다제 또는 포스파타제를 포함한다. 좁은 범위의 방사 방출제, 예를 들어, 좁은 범위 검출 프로브에 의해 검출가능한 동위원소가 사용될 수도 있다. 단백질 리간드가 공지된 기법을 사용하여 이러한 시약으로 표지될 수 있다. 예를 들어, 항체의 방사선표지와 관련된 기법을 위한 Wensel and Meares (1983) Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York 및 Colcher et al. (1986) Meth . Enzymol. 121: 802-816를 참조할 것.

개체는 예를 들어, 감마 카메라 또는 방출 단층촬영술을 사용하여 방사선핵 스캐닝과 같은 공지된 기법을 사용하여 생체 내 "이미지화"될 수 있다. 예를 들어, A.R. Bradwell et al., "Developments in Antibody Imaging", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al., (eds.), pp 65-85 (Academic Press 1985)를 참조할 것. 대안으로, 양성자 방출 횡축 단층촬영 스캐너, 예를 들어, Brookhaven National Laboratory에 위치한 Pet VI으로 나타내는 것이 방사선표지가 양성자(예를 들어, ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O, 및 ¹³N)를 방출하는 경우 사용될 수 있다.

MRI 조영제. 자기 공명 이미지(MRI)는 살아있는 개체의 내부 양상을 보여주기 위해 NMR을 사용하고, 예후, 진단, 치료, 및 수술에 유용하다. MRI는 명백한 이점으로서 방사성 추적자 화합물 없이 사용될 수 있다. 일부 MRI 기법은 EP0 502 814 A에 요약된다. 일반적으로, 다른 환경에서 물 양자의 완화 시간 정수 T1 및 T2와 관련된 차이는 이미지를 생성하는데 사용된다. 그러나, 이러한 차이는 날카로운 높은 해상도 화상을 제공하기에 불충분할 수 있다.

이러한 완화 시간 정수의 차이는 조영제에 의해 강화될 수 있다. 이러한 조영제는 몇몇의 자기 물질, 상자성 물질(주로 T1을 변화시킴) 및 강자성 물질 또는 초상자성 물질(주로 T2 반응을 변화시킨)을 포함한다. 킬레이트(예를 들어, EDTA, DTPA 및 NTA 킬레이트)가 일부 상자성 물질(예를 들어, Fe³ ⁺, Mn² ⁺, Gd³ ⁺)을 부착하는데(및 독성을 감소하는데) 사용될 수 있다. 다른 물질은 입자, 예를 들어, 10 ㎛ 미만 내지 약 10 nm 지름의 입자 형태일 수 있다. 입자는 강자성, 항-강자성 또는 초상자성 특성을 갖는다. 입자는 예를 들어, 마그네타이트(Fe₃O₄), γ-Fe₂O₃, 페라이트및 전이 원소의 다른 자기 미네랄 화합물을 포함할 수 있다. 자기 입자는 하나 이상의 비자기 물질과 함께 또는 비자기 물질 없이 자기 결정을 포함할 수 있다. 비자기 물질은 합성 또는 천연 폴리머(예를 들어, 세파로오스, 덱스트란, 덱스트린, 전분 등)를 포함할 수 있다.

항-TWEAK 항체는 또한 NMR-활성 하기 만큼 ¹⁹F 원자, 또는 다수의 이러한 원자를 포함하는 표지기로 표지될 수 있다: (i) 실질적으로 모든 천연적 많은 불소 원자가 ¹⁹F동위원소이고, 따라서, 실질적으로 모든 불소 함유 화합물이 NMR-활성이고; (ii) 많은 화학적 활성 다불소화 화합물, 예를 들어, 트리플루오로아세트산 무수물이 비교적 낮은 비용으로 상업적으로 구입가능하고; 그리고 (iii) 인간에서의 용도가 발견된 많은 불소화 화합물, 예를 들어, 과불소화 폴리에테르가 헤모글로빈 대체로서 산소를 보유하도록 사용된다. 이러한 배양을 위한 시간을 허용한 후에, TWEAK 분포를 나타내고 이미지화하기 위해, 전체 MRI가 Pykett (1982) Scientific American, 246:78-88에서 기술되는 것과 같은 기구를 사용하여 수행된다.

다른 양상에서, 본원은 생체 외 시료(예를 들어, 생물학적 시료, 예를 들어, 혈청, 혈장, 조직, 생체조직) 내의 TWEAK의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 개체 방법이 질환, 예를 들어, 면역 세포 관련 질환을 진단하는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 (i) 시료 또는 대조 시료를 항-TWEAK 항체와 접촉시키는 단계; 및 (ii) 예를 들어, 항-TWEAK 항체 및 TWEAK 간의 복합체 형성의 검출에 의해, 또는 항체 또는 TWEAK의 존재의 검출에 의해 TWEAK의 존재에 관해 시료를 평가하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 항체는 예를 들어, 지지체 위에 부동화될 수 있고, 지짖체 위의 항원의 보유가 검출되거나, 및/또는 거꾸로 이루어진다. 대조 시료가 포함될 수 있다. 대조 시료에 대하여 시료 내의 복합체 형성에 있어서의 통계학적으로 유의한 변화는 시료 내의 TWEAK의 존재의 지표가 될 수 있다. 일반적으로, 항-TWEAK 항체는 형광 분극화, 현미경법, ELISA, 원심분리, 크로마토그래피, 및 세포 분류(예를 들어, 형광 활성 세포 분류)를 포함하는 사용에서 사용될 수 있다.

실시예 1

밑줄친 CDR을 갖는 쥐 P2D10 중쇄 가변 도메인의 서열은 하기와 같다:

이는 쥐 하위그룹 3D 중쇄 가변 도메인이다.

밑줄친 CDR을 갖는 쥐 P2D10 경쇄 가변 도메인의 서열은 하기와 같다:

이는 쥐 하위그룹 2 카파 경쇄이다.

하기 인간 수용체 프레임워크가 huP2D10를 위해 선택되었다: 인간 56-84m 하위그룹 3 중쇄 가변 도메인(NCBI 베이터베이스 승인 번호 GI:33318898, Scamurra et al., 직접 제출). 밑줄친 CDR을 갖는 서열은 하기와 같다:

밑줄친 CDR을 갖는 인간 K107 하위그룹 2 경쇄 가변 도메인의 서열은 하기와 같다(NCBI 베이터베이스 승인 번호 GI:21669075, Akahori et al., 직접 제출):

나타낸 인간 수용체 서열에서, CDR(밑줄로 표시)은 muP2D10 가변 도메인에서와 같은 동일한 길이 및 정규 클래스이다.

하기하는 것은 쥐 P2D10(위) 및 인간 수용체 56-84m (아래) 중쇄 가변 도메인의 배열이다(68.8% 동일성):

하기하는 것은 쥐 P2D10(위) 및 인간 수용체 K107(아래) 경쇄 가변 도메인의 배열이다(75.9% % 동일성):

huP2D10 경쇄의 2개의 버전(L1 및 L2)이 있다. 항체 huP2D10-1은 huP2D10 H1 및 huP2D10 L1을 포함하는 항체를 나타낸다. 항체 huP2D10-2는 huP2D10 H1 및huP2D10 L2를 포함하는 항체를 나타낸다.

하기하는 것은 56-84m 인간 수용체(위) 및 huP2D10 H1 중쇄(아래) 가변 도메인의 배열이다:

CDR은 밑줄부분이다. huP2D10 중쇄는 곧은 CDR 이식(straight CDR graft)이다(즉, 프레임워크 내에 역 돌연변이가 존재하지 않는다).

하기하는 것은 K107 인간 카파 수용체(위) 및 huP2D10 L1 경쇄(아래) 가변 도메인의 배열이다:

CDR은 밑줄부분이다. huP2D10 L1 경쇄는 하기하는 프레임워크 내에 적은 경우에 나타나는 2개의 역 돌연변이를 갖는다: FR2 내의 L46F 및 FR3 내의 Y87F.

하기하는 것은 K107 인간 수용체(위) 및 huP2D10 L2 경쇄(아래) 가변 도메인 의 배열이다:

CDR은 밑줄부분이다. huP2D10 L2 경쇄는 곧은 CDR 이식이다(프레임워크 내에 역 돌연변이 없음).

하기하는 것은 성숙한 huP2D10 H1 IgG1 경쇄의 아미노산 서열의 예이다:

중쇄 가변 도메인의 V_H 단편을 위한 카밧 넘버링은 하기와 같다(서열번호 65):

하기하는 것은 성숙한 huP2D10 L1 경쇄의 아미노산 서열의 예이다:

V_L 단편을 위한 카밧 넘버링은 하기와 같다(서열번호 67):

하기하는 것은 성숙한 huP2D10 L2 경쇄의 아미노산 서열의 예이다:

V_L 단편을 위한 카밧 넘버링은 하기와 같다(서열번호 69):

실시예 2

TWEAK, mP2D10에 대한 차단 모노클로날 항체는 다발 경화증, 뇌졸중, 및 류마티스 관절염 모델에서 임상적 심각성을 유의하게 감소시킨다. 정맥(IV) 투여에 따른 항-TWEAK 모노클로날 항체, mP2D10의 약물속도론(PK)을 모델로 하였다.

1, 10 또는 100 mg/kg의 mP2D10를 IV 주사를 통해 쥐에 투여하였다. mP2D10의 혈청 농도를 ELISA를 사용하여 측정하였다. 농도-시간 PK 프로파일을 V1의 부피를 갖는 중심 컴파트먼트로부터의 1차 소실 또는 미카엘리스-멘텐 소실로 2 컴파트먼트 모델을 사용하여 분석하였다. 2 컴파트먼트 사이의 속도 상수는 K12(컴파트먼트 1에서 2로 나감) 및 K21 (컴파트먼트 2에서 1로 나감)였다. 1차 소실 모델에서, 소실 상수는 K10이었다. 미카엘리스-멘텐 소실 모델에서, 약물은 Vm*C1/(Km+C1)의 속도로 소실되었고, 여기서 C1은 중심 컴파트먼트 내의 농도의 mP2D10이고, Vm 및 Km은 상수였다. 데이터는 최대 유사 평가 과정(Maximum Likelihood estimation procedure)을 사용하여 ADAPT II 소프트웨어(D'Argenio, D.Z. and A. Schumitzky. ADAPT II User's Guide : Pharmacokinetic / Pharmacodynamic Systems Analysis Software. Biomedical Simulations Resource, Los Angeles, 1997.)로 맞추었다.

2 컴파트먼트 선형 소실 모델에 있어, V1은 23.2 mL/kg, K10은 0.0096 h-1, K12는 2.501 그리고 K21은 1.053였다. 곡선 하 면적(AIC) 값은 298이었고, 슈와츠 값(Schwarz value)은 304.2였다. 2 컴파트먼트 비선형 소실 모델에 있어, V1은 0.0235였다. Vm은 9.22 mg/kg/hr, Km은 484.2 mg/mL였다. K12는 2.348 h-1, K21은 0.966 h-1였다. AIC 값은 269, 슈와츠 값은 276이었다. mP2D10의 PK는 선형 모델보다 비선형 모델에 의해 더 잘 예측되었다.

mP2D10의 농도-시간 프로파일은 1차 소실보다 미카엘리스-멘텐 소실로 2 컴파트먼트 모델에 의해 더 잘 예측되었다.

당업자는 평범한 실험만을 사용하여, 본 명세서에서 기술하는 특정 구체예의 많은 동등물을 인식하거나, 확신할 수 있을 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Biogen Idec MA Inc. <120> TWEAK BINDING ANTIBODIES <130> 10274-116WO1 <140> PCT/US2006/019706 <141> 2006-05-25 <150> US 60/685,149 <151> 2005-05-27 <160> 69 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Thr 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Tyr or Phe <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Asn or Thr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Ser, Thr, Asp or Asn <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Arg or Tyr <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> xaa = Met, Ile or Leu <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = His or Ser <400> 4 Gly Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Tyr Ala Xaa Xaa 1 5 10 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Pro or Val <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Thr or Ser <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Thr or Lys <400> 5 Tyr Tyr Xaa Asp Xaa Val Xaa Gly 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Val or Leu <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Ile or Leu <220> <221> VARIANT <222> 3, 4, 6 <223> Xaa = Tyr or Phe <400> 6 Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Asp 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Asp or Glu <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Ile, Leu, Val or Met <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Glu, Gln or Asp <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Val, Ala or Leu <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Asp or Glu <400> 7 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa 1 5 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Ser Gln Ser Thr His Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Lys or Val <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = Thr or Asn <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = Glu, His, Asp, Asn, Gln or Tyr <400> 11 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa Ser Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa 1 5 10 15 <210> 12 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Arg or Lys <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Lys or Arg <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = Thr or Asn <400> 12 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Val Ser Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Lys or Glu <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Asn, Tyr or Ser <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Arg or Trp <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Phe, Ala or Asp <400> 13 Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser 1 5 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Leu, Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Asn, Tyr or Ser <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Phe, Ala or Asp <400> 14 Lys Xaa Ser Xaa Arg Xaa Ser 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Ser or Met <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Ser or Thr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = His, Glu or Gln <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Phe, Trp or Leu <400> 15 Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Gly, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Ser, Ile or Thr <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = His, Glu or Gln <400> 16 Ser Gln Xaa Xaa Xaa Phe Pro 1 5 <210> 17 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 18 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 18 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 19 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 19 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 20 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 20 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 21 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 21 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 22 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 23 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 23 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 24 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 24 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 25 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 25 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 26 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu 100 105 110 <210> 28 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu 100 105 110 <210> 29 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 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Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 61 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 61 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Cys Ser Gln Ser Thr 85 90 95 His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 62 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 63 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 63 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 64 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 64 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met 100 105 110 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly 450 <210> 65 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 65 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 66 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 66 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 67 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 67 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro 100 <210> 68 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 68 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 69 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetically generated peptide <400> 69 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro 100

Claims

하나 이상의 하기 특성을 갖는, 인간 TWEAK에 결합하는 항원 결합 부위를 형성할 수 있는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 분리된 단백질:

(a) 상기 단백질은 인간 TWEAK와 결합하기 위해 P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2와 경쟁하고;

(b) 상기 단백질은 P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2에 의해 결합되는 에피토프와 중복되는, 인간 TWEAK 위의 에피토프에 결합하고;

(c) 상기 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열은 매우 엄격한 조건 하에서 P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2를 암호화하는 핵산의 상보체(complement)에 혼성화되는 핵산에 의해 암호화되고;

(d) 상기 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열은 P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2의 상응하는 가변 도메인의 아미노산 서열과 80% 이상 동일하고;

(e) 상기 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열은, CDR 영역에서 (집단으로), P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 CDR 영역과 95% 이상 동일하고; 또는

(f) 프레임워크 영역에서 (집단으로), P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 영역과 95% 이상 동일하다.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열이 CDR 영역 내에 하기 서열의 2 이상을 포함하는 것인 단백질:

GFTFSRYAMS (CDR1) (서열번호 1),

EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (서열번호 2),

VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (서열번호 3).
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열이 CDR 영역 내에 하기 서열의 1 이상을 포함하는 것인 단백질:

RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (서열번호 8),

KVSNRFS (CDR2) (서열번호 9), 및

SQSTHFPRT (CDR3) (서열번호 10).
제2항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열이 하기 CDR을 포함하고:

GFTFSRYAMS (CDR1) (서열번호 1),

EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (서열번호 2),

VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (서열번호 3); 그리고

상기 경쇄 가변 도메인 서열이 CDR 영역 내에 하기 서열의 1 이상을 포함하는 것인 단백질:

RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (서열번호 8),

KVSNRFS (CDR2) (서열번호 9), 및

SQSTHFPRT (CDR3) (서열번호 10).
제1항에 있어서, 재조합의, 전장(full length) IgG인 단백질.
제1항에 있어서, 인간 Fc 영역을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 3개 이하의 아미노산 치환을 갖는 인간 Fc 영역을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, Fab 또는 scFv인 단백질.
제1항에 있어서, 인간 생식선(germline) 프레임워크 영역과 90% 이상 동일한 프레임워크 영역을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열의 프레임워크 영역이 Vκ1 하위그룹 생식선 서열의 상기 서열과 집단으로 95% 이상 동일한 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열의 프레임워크 영역이 DP54 생식선 서열과 집단으로 95% 이상 동일한 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열의 프레임워크 영역이 DPK9 생식선 서열의 상기 서열과 집단으로 95% 이상 동일한 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열의 프레임워크 영역이 VH I 하위그룹 생식선 서열의 상기 서열과 집단으로 95% 이상 동일한 것인 단백질.
제1항에 있어서, P2D10, huP2D10-1, 또는 huP2D10-2와 같이 동일한 정규 구조(canonical structure)를 갖는 초가변성 루프를 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 65와 95% 이상 동일한 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 65를 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 67 또는 서열번호 69와 95% 이상 동일한 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항 또는 제15항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 67 또는 서열번호 69를 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 27 내지 49 중 어느 하나를 포함하거나, 이와 95% 이상 동일한 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인 서열이 서열번호 17 내지 26 중 어느 하나를 포함하거나, 이와 95% 이상 동일한 서열을 포함하는 것인 단백질.
제1항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 따른 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
제1항에 따른 단백질인, 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 발현하기 위한 재조합 핵산 서열을 함유하는 숙주 세포를 제공하는 단계; 및

상기 세포를 상기 단백질이 발현되는 조건 하에서 유지하는 단계

를 포함하는 항체를 제공하는 방법.
제22항에 있어서, 단백질을 분리하는 단계 및 상기 단백질을 약학적으로 허용가능한 담체와 제형화하는 단계를 더욱 포함하는 것인 방법.
자가면역 질환 치료에 유효한 양의 제21항의 약학적 조성물을 개체에게 투여 하는 단계를 포함하는, 개체의 자가면역질환 치료 방법.
류마티스 관절염 치료에 유효한 양의 제21항의 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 류마티스 관절염 치료 방법.
다발 경화증 치료에 유효한 양의 제21항의 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 다발 경화증 치료 방법.
뇌졸중 치료에 유효한 양의 제21항의 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 뇌졸중 치료 방법.
암 치료에 유효한 양의 제21항의 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 암 치료 방법.
제28항에 있어서, 상기 암이 췌장암인 방법.