KR102127552B1

KR102127552B1 - 인시류-활성 cry1da1 아미노산 서열 변이 단백질

Info

Publication number: KR102127552B1
Application number: KR1020177013030A
Authority: KR
Inventors: 제임스 에이. 바움; 토마스 세루티; 스타니슬라프 플라씬스키; 샤오란 푸; 알린 알. 하우; 사라 안 살바도르
Original assignee: 몬산토 테크놀로지 엘엘씨
Priority date: 2014-10-16
Filing date: 2015-10-15
Publication date: 2020-06-26
Anticipated expiration: 2035-10-15
Also published as: JP6648127B2; EP3517616A1; EA034764B9; US20200002719A1; MY189597A; NZ730634A; CN112175052A; AU2015332370A1; US10287605B2; US10059959B2; WO2016061377A2; CA2963702A1; BR112017007735A2; PE20170942A1; US20210010020A1; ECSP17029287A; US11396661B2; JP2017538397A; US10457958B2; PH12019502912A1

Abstract

자연적으로 생성되는 Cry1Da 단백질 독소에 비하여 개선된 인시류 살곤충 활성 및 향상된 인시류 범위를 나타내는 조작된 Cry1Da 아미노산 서열이 제공된다. 식물에서 개선된 단백질의 발현에 사용하기 위한 것으로 의도된 폴리뉴클레오타이드 서열이 또한 제공된다. 특정 실시형태는 조작된 단백질의 곤충 저해량을 함유하는 조성물뿐만 아니라, 개선된 조작된 단백질 중 하나 이상을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 구조체를 함유하는 재조합 식물, 식물 부위, 및 종자를 제공한다.

Description

인시류-활성 CRY1DA1 아미노산 서열 변이 단백질{LEPIDOPTERAN-ACTIVE CRY1DA1 AMINO ACID SEQUENCE VARIANT PROTEINS}

관련 출원에 대한 참조

본 출원은 2014년 10월 16일에 출원된 미국 가출원 62/064,994, 및 2014년 10월 17일에 출원된 미국 가출원 62/065,017의 이익을 주장하며, 이들 각각은 본 명세서에 전체가 참고로 포함되어 있다.

서열목록의 포함

컴퓨터로 판독가능한 형태의 서열목록이 전자 제출에 의해 본 명세서와 함께 제출된다. 서열목록은 전체가 참고로 포함되어 있으며, 파일명이 P34223WO00_SEQ_PCT.txt이고, 크기가 327,235바이트(MS-윈도우(MS-Windows)(등록상표) 운영 체계에서 측정)인, 2015년 10월 13일에 생성된 파일로 포함되어 있다.

발명의 분야

본 발명은 일반적으로 곤충 저해 단백질의 분야에 관한 것이다. 농작물 및 종자의 농업 관련 해충에 대하여 곤충 저해 활성을 나타내는 조작된 단백질의 신규 부류가 개시되어 있다. 특히, 개시된 조작된 저해 단백질의 부류는 인시목(order Lepidoptera) 곤충 해충에 대하여 살곤충 활성을 가진다. 개시된 조작된 저해 단백질 중 하나 이상을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 구조체를 포함하는 식물, 식물 부위, 및 종자가 제공된다.

헬리코베르파 지아(Helicoverpa zea)는 옥수수, 목화, 및 콩을 포함하여, 주요 농업 작물의 중요한 인시류 해충이다. 왕담배나방(corn earworm: CEW), 목화씨벌레(cotton bollworm: CBW), 및 팥나방(soy podworm: SPW)으로 알려진, 이러한 광식성(polyphagous) 곤충 종은 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis : Bt) 또는 다른 박테리아 종 유래의 살곤충 단백질로 제어하기가 특히 어렵다. 헬리코베르파 지아는, 다수의 상이한 작물을 섭식하는 능력과 현재 고용량 제어 전략의 부재 때문에, 현재 곤충 제어 특질에 대한 저항성 발달에 대한 위험이 있는 것으로 고려된다. 따라서, 헬리코베르파 지아의 섭식 피해로부터 보호받는 형질전환 식물의 내구성을 보장하기 위해 새로운 작용 양식(modes of action; MoA)이 필요하다.

Cry1Da1 단백질은 문헌[Hofte, et al . “Nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of a new Lepidoptera-specific crystal protein gene from Bacillus thuringiensis.” Nucleic Acids Res . 18(18) (1990): 5545]에 처음 기재된 인시류-활성 단백질이다. 이 단백질은, 옥수수, 목화 및 대두를 포함하여 여러 가지 줄뿌림 작물의 해충인, 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)(가을멸강충(fall armyworm); FAW)를 포함한 스포돕테라(Spodoptera) 종에 대하여 우수한 살곤충 활성을 나타낸다. 그러나, Cry1Da1은 목화다래벌레(bollworm)(예를 들어, 헬리코베르파 아르미게라(Helicoverpa armigera) 및 헬리코베르파 지아), 천공벌레(borer)(예를 들어, 오스트리니아 누빌라리스(Ostrinia nubilalis) 및 디아트라에아 그란디오셀라(Diatraea grandiosella)) 및 대두자벌레(soybean looper)(슈도플루시아 인클루덴스(Pseudoplusia includens))를 포함하여, 다양한 다른 주요 인시류 해충에 대하여 낮은 활성 내지는 중간 활성을 나타낸다. 상기 단백질의 좁은 살곤충 범위 및 다양한 중요한 인시류 농업 해충, 예컨대 CEW에 대한 상업적 수준의 보호의 제공에 실패함으로 인하여, Cry1Da1 살곤충 단백질은 형질전환 식물 곤충 제어 특질로서 한정된 가치를 가진다. 결과적으로, 현재 어떠한 곤충-보호 작물의 실용 품종도 작물보호성분(plant-incorporated protectant)으로서 Cry1Da1을 이용하지 않는다.

Cry1Da1의 좁은 살곤충 범위에도 불구하고, Cry1Da1 단백질은 특정한 인시류 해충 방제를 위한 대안적인 MoA를 사용하는 것으로 보이므로, Cry1Da1은 흥미로운 살곤충 단백질이다. 이에 대한 증거는 다수의 저항성 곤충 콜로니를 이용한 연구에서 나온다. 예를 들어, Cry1Ac 중독에 저항성이 있는 플루텔라 자일로스텔라(Plutella xylostella)(배추좀나방(diamondback moth)) 및 펙티노포라 고시피엘라(Pectinophora gossypiella)(분홍솜벌레(pink bollworm))의 현장 유래 콜로니는 Cry1Da1 단백질에 대하여 완전한 감수성을 유지한다(Tabashnik, et al. "Cross-Resistance of Pink Bollworm (Pectinophora gossypiella) to Bacillus thuringiensis toxins." Appl . Environ . Microbiol . 66 (2000): 4582-4584; Tabashnik, et al. "Cross-Resistance to Bacillus thuringiensis Toxin Cry1Ja in a Strain of Diamondback Moth Adapted to Artificial Diet." J. Invert . Pathol . 76: (2000): 81-83.). 이러한 유형의 증거는, Cry1Da1이 Cry1Ac, Cry1Ab, Cry1A.105, Cry1Fa, Cry2Ae, 및 Cry2Ab2를 포함하여, 형질전환 작물에 현재 배치된 인시류-활성 단백질에 의해 인식되는 것과 구별되는 인시류 중장(midgut) 수용체를 인식한다는 것을 나타낸다. 이러한 명백한 신규 MoA의 관점에서, 스포돕테라에 대한 살곤충 활성을 유지하거나 증가시키면서, 보다 광범위한 범위의 헬리코베르파 종에 대한 개선된 활성을 위한 Cry1Da1-유사 단백질의 최적화는 내충성 관리를 위한 고가치의 작물보호성분을 형성할 것이다.

본 발명에서, TIC844 및 Cry1Da 스캐폴드 단백질의 몇몇 아미노산 서열 변이체가, 스포돕테라 프루기페르다에 대하여 우수한 활성을 유지하면서 헬리코베르파 지아에 대하여 (Cry1Da1 천연 독소에 비하여) 현저하게 개선된 활성을 나타내는 것이 확인되었다. TIC844 및 Cry1Da의 개선된 변이체는 농작물(예를 들어, 옥수수, 대두, 목화, 사탕수수)에서 발현되도록 조작되었으며, 헬리코베르파 지아에 대한 활성에서 조작된 개선과 결합된 Cry1Da의 명백한 고유 작용 양식의 관점에서 식물체내(in - planta) 저항성 관리 및 인시류 곤충 해충 방제를 위한 신규 옵션을 제공한다.

본 명세서에 기재된 조작된 인시류 독성 단백질("조작된 독소 단백질", "조작된 독성 단백질", 또는 "조작된 살곤충 단백질"로 지칭됨)은 자연적으로 생성되는 바실러스 투린지엔시스 살곤충 독소 Cry1Da1(서열번호 2) 또는 Cry1Da1 코어 독소를 포함하지만 천연 Cry1Da1 독소전구물질 도메인이 Cry1Ab3 독소전구물질로 치환된 Cry1Da1의 키메라 동족체인 TIC844(서열번호 14)의 유도체이다. 본 발명의 조작된 살곤충 단백질 각각은, 서열번호 2 또는 서열번호 14 중 임의의 것에 제시된 스캐폴드 단백질에 비하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 하나의 아미노산 첨가, 또는 하나의 아미노산 결실을 포함한다. 본 발명의 조작된 살곤충 단백질은 헬리코베르파 지아(왕담배방나방, 팥나방, 목화씨벌레) 및 스포돕테라 프루기페르다(가을멸강충) 종의 곤충에 대하여 특히 독성이 있다. 스캐폴드 단백질인 TIC844(서열번호 14) 및 Cry1Da1(서열번호 2)은 헬리코베르파 지아에 대하여 낮은 독성을 나타내지만, 본 발명의 조작된 살곤충 단백질은 헬리코베르파 지아를 포함하여 인시류 곤충 해충에 대하여 놀랍고도 예상치 못한 개선된 살곤충 활성 및 향상된 살곤충 범위를 나타낸다.

특정 실시형태에서, 서열번호 44, 서열번호 40, 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38 또는 서열번호 42 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 조작된 살곤충 단백질, 또는 이들의 곤충 저해 단편이 개시되어 있다. 특정 실시형태에서, 조작된 살곤충 단백질은 인시목의 곤충 종에 대하여 저해 활성을 나타낸다. 본 발명의 인시류 독성 단백질에 의해 저해되는 인시류 해충 종 표적은 적어도 가을멸강충(스포돕테라 프루기페르다), 파밤나방(beet armyworm)(스포돕테라 엑시구아(Spodoptera exigua)), 거염벌레나방(bertha armyworm)(마메스트라 콘피구라타(Mamestra configurata)), 검거세미나방(black cutworm)(아그로티스 입실론(Agrotis ipsilon)), 양배추은무늬밤나방유충(cabbage looper)(트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)), 대두자벌레(크리소데이식스 인클루덴스(Chrysodeixis includens)), 벨벳빈애벌레(velvetbean caterpillar)(안티카르시아 겜마탈리스(Anticarsia gemmatalis)), 녹색클로버웜(green cloverworm)(하이페나 스카브라(Hypena scabra)), 회색담배나방(tobacco budworm)(헬리오티스 비레센스(Heliothis virescens)), 낟알야도충(granulate cutworm)(아그로티스 서브테라네아(Agrotis subterranea)), 멸강나방(armyworm)(슈달레티아 우니푼크타(Pseudaletia unipuncta)), 서양거세미(western cutworm)(아그로티스 오르토고니아(Agrotis orthogonia)), 옥수수들명나방(European corn borer)(오스트리니아 누빌라리스), 네이블오렌지나방(navel orangeworm)(아미엘로이스 트란시텔라(Amyelois transitella)), 옥수수뿌리불나방(corn root webworm)(크람부스 칼리기노셀루스(Crambus caliginosellus)), 잔디불나방(sod webworm)(헤르페토그람마 리카르시살리스(Herpetogramma licarsisalis)), 해바라기나방(sunflower moth) (호모에오소마 엘렉텔룸(Homoeosoma electellum)), 명충나방유충(lesser cornstalk borer)(엘라스모팔루스 리그노셀루스(Elasmopalpus lignosellus)), 코들링나방(codling moth)(시디아 포모넬라(Cydia pomonella)), 그레이프베리나방(grape berry moth)(엔도피자 비테아나(Endopiza viteana)), 복숭아순나방(oriental fruit moth)(그라폴리타 몰레스타(Grapholita molesta)), 해바라기눈나방(sunflower bud moth)(술레이마 헬리안타나(Suleima helianthana)), 배추좀나방(플루텔라 자일로스텔라(Plutella xylostella)), 분홍솜벌레(펙티노포라 고시피엘라(Pectinophora gossypiella)), 분홍줄기천공벌레(pink stem borer)(세사미아 인페렌스(Sesamia inferens)), 매미나방(gypsy moth)(리만트리아 디스파르(Lymantria dispar)), 목화잎벌레(cotton leaf worm)(알라바마 아르길라세아(Alabama argillacea)), 과수잎말이나방(fruit tree leaf roller)(아르칩스 아르기로스필라(Archips argyrospila)), 유럽잎말이나방(European leafroller)(아르칩스 로사나(Archips rosana)), 이화명나방(Asiatic rice borer, 또는 rice stem borer)(칠로 수프레살리스(Chilo suppressalis)), 혹명나방(rice leaf roller)(크나팔로크로시스 메디날리스(Cnaphalocrocis medinalis)), 옥수수뿌리불나방(크람부스 칼리기노셀루스), 잔디포충나방(bluegrass webworm)(크람부스 테테르렐루스(Crambus teterrellus)), 남서부옥수수좀(southwestern corn borer)(디아트라에아 그란디오셀라), 사탕수수천공벌레(surgarcane borer)(디아트라에아 사카랄리스(Diatraea saccharalis)), 가시목화다래벌레(spiny bollworm)(에아리아스 인술라나(Earias insulana)), 반점목화다래벌레(spotted bollworm)(에아리아스 비텔라(Earias vittella)), 구세계목화씨벌레(Old World cotton bollworm)(헬리코베르파 아르미게라), 왕담배방나방, 팥나방 또는 목화씨벌레(헬리코베르파 지아), 잔디불나방(헤르페토그람마 리카르시살리스), 유럽포도나무나방(European grape vine moth)(로베시아 보트라나(Lobesia botrana)), 귤굴나방(citrus leafminer)(필로크니스티스 시트렐라(Phyllocnistis citrella)), 큰흰나비(large white butterfly)(피에리스 브라시카에(Pieris brassicae)), 흰나비유충(imported cabbageworm), 또는 배추흰나비(small white butterfly)(피에리스 라파에(Pieris rapae)), 담배거세미나방(tobacco cutworm, 또는 cluster caterpillar)(스포돕테라 리투라(Spodoptera litura)), 및 토마토잎나방벌레(tomato leafminer)(투타 압솔루타(Tuta absoluta))를 포함한다.

조작된 살곤충 단백질 또는 이의 살충성 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있되, 상기 폴리뉴클레오타이드는 이종 프로모터에 작동가능하게 연결되어 있고 상기 조작된 살곤충 단백질은 서열번호 44, 서열번호 40, 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38 또는 서열번호 42 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

다른 실시형태에서, 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 개시되어 있되, 상기 폴리뉴클레오타이드는 엄격한 조건 하에서 서열번호 43, 서열번호 39, 서열번호 11, 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 37 또는 서열번호 41 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 서열의 역 상보체와 선택적으로 혼성화하거나; 또는 서열번호 44, 서열번호 40, 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38 또는 서열번호 42 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

또한 서열번호 43, 서열번호 39, 서열번호 11, 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 37 또는 서열번호 41 중 임의의 것에 제시된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에서 제공되되, 상기 숙주 세포는 박테리아 숙주 세포 또는 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 고려되는 박테리아 숙주 세포는 아그로박테리움(Agrobacterium), 리조비움(Rhizobium), 바실러스(Bacillus), 브레비바실러스(Brevibacillus), 에세리키아(Escherichia), 슈도모나스(Pseudomonas), 클렙시엘라(Klebsiella), 및 에르위니아(Erwinia)로 이루어진 군으로부터 선택되는 박테리아 숙주 세포를 포함하며, 상기 바실러스 종은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 바실러스 투린지엔시스이고, 상기 브레비바실러스는 브레비바실러스 라테로스페러스(Brevibacillus laterosperous)이며, 상기 에세리키아는 에세리키아 콜라이(Escherichia coli)이다. 또한, 고려되는 식물 숙주 세포는 외떡잎식물 또는 쌍떡잎식물을 포함한다.

또 다른 실시형태에서, 서열번호 44, 서열번호 40, 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38 또는 서열번호 42 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 조작된 살곤충 단백질 또는 이의 곤충 저해 단편을 포함하는 곤충 저해 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 이러한 곤충 저해 조성물은 조작된 살곤충 단백질과 상이한 적어도 하나의 곤충 저해제를 추가로 포함할 수 있는 것이 고려된다. 고려되는 곤충 저해제는 곤충 저해 단백질, 곤충 저해 dsRNA 분자, 및 곤충 저해 화학물질을 포함한다. 적어도 하나의 다른 살충제는 인시목(Lepidoptera), 딱정벌레목(Coleoptera), 노린재목(Hemiptera), 동시아목(Homoptera), 또는 총채벌레목(Thysanoptera) 중 하나 이상의 해충 종에 대하여 활성을 나타낼 수 있는 것이 고려된다.

또한 서열번호 44, 서열번호 40, 서열번호 12, 서열번호 26, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38 또는 서열번호 42 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 아미노산 서열; 또는 서열번호 43, 서열번호 39, 서열번호 11, 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 37 또는 서열번호 41 중 임의의 것에 제시된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조작된 살곤충 단백질의 곤충 저해 유효량을 포함하는 종자가 본 명세서에 개시되어 있다.

인시류 해충을 방제하는 방법으로서, 인시류 해충을 조작된 살곤충 단백질의 저해량과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 또한 다른 실시형태로 본 명세서에 개시되어 있다.

또 다른 실시형태에서, 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 형질전환 식물 세포, 식물 또는 식물 부위가 본 명세서에 개시되어 있다. 해충을 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 형질전환 식물 세포, 식물 또는 식물 부위에 노출시키는 단계를 포함하는, 인시류 해충을 방제하는 방법이 제공되어 있다. 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 식물 세포, 식물 또는 식물 부위로부터 유래하되 검출가능한 양의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 상품(commodity product)이 또한 고려된다, 고려되는 상품은 식물 바이오매스, 오일, 밀(meal), 동물 사료, 가루, 플레이크, 겨(bran), 린트, 깍지(hull), 및 가공된 종자를 포함한다.

본 명세서에 개시된 다른 방법은 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 종자를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 적어도 하나의 종자를 심는 단계; 상기 종자로부터 식물을 재배하는 단계; 및 상기 식물로부터 종자를 수확하되, 상기 수확한 종자는 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 단계를 포함한다.

본 출원에 개시된 또 다른 방법은 하나 이상의 아미노산 잔기(들)의 치환을 통해 서열번호 2 또는 서열번호 14의 하나 이상의 아미노산 잔기(들)를 변형시켜 변형된 서열번호 2 또는 서열번호 14를 생성하는 단계; 및 상기 농작물의 조직 내, 표면 상, 또는 근처에서 변형된 서열번호 2 또는 서열번호 14의 인시류-저해량을 이용가능하게 하는 단계를 포함하는, 인시류 해충이 농작물을 섭식하는 것을 저해하는 방법이되; 여기서 서열번호 2 또는 서열번호 14의 변형된 아미노산 잔기는 라이신 또는 발린으로 대체된 282번 위치의 세린, 세린으로 대체된 316번 위치의 타이로신, 프롤린 또는 아르기닌으로 대체된 368번 위치의 아이소류신, 아르기닌으로 대체된 374번 위치의 세린, 히스티딘으로 대체된 375번 위치의 아스파라긴, 및 류신으로 대체된 432번 위치의 아이소류신으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드 분자가 또한 제공된다. 고려되는 재조합 폴리뉴클레오타이드 분자는 서열번호 43, 서열번호 39, 서열번호 11, 서열번호 11, 서열번호 25, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 37 또는 서열번호 41로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오타이드 서열; 및 선택적으로 조작된 살곤충 단백질과 상이한 곤충 저해제를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

본 출원에 개시된 다른 방법은 스캐폴드 단백질의 인시류 활성을 증가시키고 인시류 저해 범위를 향상시키는 방법으로서, 상기 방법은 아미노산 잔기(들)의 치환을 통해 서열번호 2 또는 서열번호 14의 하나 이상의 아미노산 잔기(들)를 변형시켜 조작된 살곤충 단백질을 생성하는 단계를 포함하되, 상기 서열번호 2 또는 서열번호 14의 변형된 아미노산 잔기는 라이신 또는 발린으로 대체된 282번 위치의 세린, 세린으로 대체된 316번 위치의 타이로신, 프롤린 또는 아르기닌으로 대체된 368번 위치의 아이소류신, 아르기닌으로 대체된 374번 위치의 세린, 히스티딘으로 대체된 375번 위치의 아스파라긴, 및 류신으로 대체된 432번 위치의 아이소류신으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이러한 방법의 특정 실시형태에서, 조작된 살곤충 단백질은 헬리코베르파 지아 치사율에 있어서 스캐폴드 단백질에 비하여 적어도 8배의 증가가 있다.

본 발명의 다른 실시형태, 특성, 및 이점은 하기 상세한 설명, 실시예, 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.

도 1은 2개의 상이한 헬리코베르파 지아(CEW) 콜로니, 즉 유니언 시티 및 벤존에 대하여 조작된 살곤충 단백질 TIC844_8(서열번호 26)과 비교한 스캐폴드 단백질 TIC844(서열번호 14)의 MIC₅₀ 값을 나타낸다.

서열의 간단한 설명

서열번호 1은 Cry1Da1 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 2는 Cry1Da1 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 3은 Cry1Da1_3 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 4는 Cry1Da1_3 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 5는 Cry1Da1_4 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 6은 Cry1Da1_4 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 7은 Cry1Da1_5 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 8은 Cry1Da1_5 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 9는 Cry1Da1_6 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 10은 Cry1Da1_6 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 11은 Cry1Da1_7 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 12는 Cry1Da1_7 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 13은 TIC844 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 14는 TIC844 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 15는 TIC844_2 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 16은 TIC844_2 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 17은 TIC844_4 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 18은 TIC844_4 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 19는 TIC844_5 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 20은 TIC844_5 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 21은 TIC844_6 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 22는 TIC844_6 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 23은 TIC844_7 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 24는 TIC844_7 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 25는 TIC844_8 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 26은 TIC844_8 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 27은 식물에서 Cry1Da1 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 28은 Cry1Da1 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 29는 식물에서 Cry1Da1_2.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 30은 Cry1Da1_2.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 31은 식물에서 Cry1Da1_3.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 32는 Cry1Da1_3.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 33은 식물에서 Cry1Da1_4.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 34는 Cry1Da1_4.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 35는 식물에서 Cry1Da1_5.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 36은 Cry1Da1_5.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 37은 식물에서 Cry1Da1_6.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 38은 Cry1Da1_6.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 39는 식물에서 Cry1Da1_7.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 40은 Cry1Da1_7.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 41은 식물에서 TIC844_9.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 42는 TIC844_9.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

서열번호 43은 식물에서 TIC844_11.nno 단백질을 발현시키는 데 사용하기 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열이다.

서열번호 44는 TIC844_11.nno 단백질 독소의 아미노산 서열이다.

발명의 상세한 설명

이전에 공지된 다른 인시류 살곤충 단백질에 비하여 인시류 종에 대한 의외로 더 높은 수준의 독성 활성 및 더 광범위한 살곤충 범위를 나타내는 조작된 살곤충 단백질이 본 명세서에서 제공된다. 이러한 조작된 살곤충 단백질은 살곤충 스캐폴드 단백질로부터 유래하며, 상기 살곤충 스캐폴드 단백질은 다양한 아미노산 변형을 위한 주형으로서 작용한다. 이와 같은 살곤충 스캐폴드 단백질의 예는 Cry1Da1 및 TIC844(Cry1Da1의 동족체)를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. TIC844는 Cry1Da1 코어 독소(즉, 도메인 I, II 및 III)를 포함하지만, Cry1Ab3 독소전구물질 도메인을 이용하여 바실러스 투린지엔시스(Bt)에서 양호한 발현을 보장한다. 천연 Cry1Da1 독소전구물질을 사용할 경우, Bt에서 Cry1Da1의 발현은 불량하다. 그러나, 본 출원에서 입증된 바와 같이, Cry1Da1 코어 독소의 발현은, 천연 독소전구물질 도메인이 제거되고 Cry1Da1 코어 독소 암호화 분절이 프레임에서 Cry1Ab3 독소전구물질 도메인을 암호화하는 분절과 융합되는 경우, Bt의 무결정성(acrystalliferous) 균주에서 현저하게 개선된다. 특히, 스캐폴드 단백질 TIC844(서열번호 14) 및 Cry1Da1(서열번호 2)은 상업적으로 유용한 인시류 저해 범위 및 조작된 살곤충 단백질에서 관찰되는 개선된 인시류 저해 활성을 나타내지 않는다.

본 명세서에 개시된 조작된 살곤충 단백질은, 변형된 단백질이 모 스캐폴드 단백질, 즉 TIC844 또는 Cry1Da1에 비하여 향상된 인시류 저해 범위 및/또는 개선된 인시류 저해 활성을 나타내도록, 아미노산 변형에 의해 관련된다. 어구 "보다 활성인", "개선된 활성", "향상된 특이성", "증가된 독성 효능", "증가된 독성", "개선된 인시류 저해 활성", "보다 큰 인시류 저해 활성", 및 "향상된 인시류 저해 범위"는 인시류 곤충에 대한 스캐폴드 단백질(TIC844 또는 Cry1Da1)의 활성에 대한 조작된 살곤충 단백질의 활성의 비교를 말하며, 여기서 조작된 살곤충 단백질에 부여된 활성은 스캐폴드 단백질에 부여된 활성보다 크다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에서 제공된 조작된 살곤충 단백질은 스캐폴드 TIC844 또는 Cry1Da1 단백질의 활성과 비교할 경우 향상된 인시류 저해 범위 및/또는 개선되거나 더 큰 인시류 저해 활성을 나타내며, 여기서 인시류 해충 종은 헬리코베르파 지아 및 스포돕테라 프루기페르다를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 및 어구 "활성적" 또는 "활성"; "살충 활성" 또는 "살충"; "살곤충 활성", "곤충 저해", "살곤충", 또는 "곤충 저해량"은, 해충을 저해(성장, 섭식, 번식력 또는 생존력을 저해), 억제(성장, 섭식, 번식력 또는 생존력을 억제), 방제(해충 침입을 방제, 개시된 조작된 살곤충 단백질의 유효량을 함유하는 특정 작물에 대한 해충 섭식 활성을 통제) 또는 사멸(해충의 이환율, 사망률, 또는 감소된 번식력을 야기)에 있어서, 독성 제제, 예컨대 살곤충 단백질의 효능을 말한다. 유사하게, "인시류 저해량"은 인시류 생존력, 인시류 성장, 인시류 발달, 인시류 생식, 인시류 섭식 행동, 인시류 교배 행동의 임의의 측정가능한 저해 및/또는 인시류 섭식에 의하여 식물에 미치는 부작용의 임의의 측정가능한 감소를 초래하는, 독성 제제, 예컨대 살곤충 단백질의 양을 말한다. 이러한 용어는, 독성 제제에 대한 해충의 노출이 이환율, 사망률, 감소된 번식력, 또는 왜화(stunting)를 초래하는 경우에, 살충 효과량의 독성 제제를 해충에게 제공하는 결과를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 용어는 또한, 식물에서 또는 식물 상에서 살충 유효량의 독성 제제를 제공한 결과로서, 식물, 식물의 조직, 식물 부위, 종자, 식물 세포로부터, 또는 식물이 성장 중일 수 있는 경우에 특정 지리적 위치로부터의 해충의 반발을 포함한다. 일반적으로, 살충 활성은 성장, 발달, 생존력, 섭식 행동, 교배 행동, 번식력, 또는 이러한 단백질, 단백질 단편, 단백질 분절 또는 특정 표적 해충(인시목의 곤충을 포함하지만, 이로 제한되지는 않음)의 폴리뉴클레오타이드를 섭식하는 곤충에 의해 야기되는 부작용에서 임의의 측정가능한 감소를 저해함에 있어서 효과적인 독성 제제의 능력을 말한다. 독성 제제는 식물에 의해 생성될 수 있거나, 식물에 또는 식물이 위치한 장소 내의 환경에 적용될 수 있다.

표적 해충의 식이로 제공될 때, 독성 제제의 살충 유효량은 독성이 해충에 의해 섭취될 때 살충 활성을 나타낸다. 독성 제제는 당업계에 공지된 살충 단백질 또는 하나 이상의 화학 제제일 수 있다. 살충 또는 살곤충 화학 제제 및 살충 또는 살곤충 단백질 제제는 단독으로 또는 서로 조합하여 사용될 수 있다. 화학 제제는 표적 해충에서 억제를 위한 특이적 유전자를 표적화하는 dsRNA 분자, 오르가노클로라이드, 오르가노포스페이트, 카바메이트, 피레트로이드, 네오니코티노이드, 및 리아노이드를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 살충 또는 살곤충 단백질 제제는 본 출원에 제시된 조작된 살곤충 단백질뿐만 아니라, 인시류 해충 종을 표적화하는 것들을 포함하여 다른 단백질 독성 제제, 및 다른 식물 해충, 예컨대 딱정벌레, 반시목 및 동시류 종을 방제하는 데 있어서 사용하기 위한 당업계에서 이용가능한 Cry 단백질을 포함하는 다른 단백질을 포함한다.

용어 "분절" 또는 "단편"은 본 명세서에서 조작된 살곤충 단백질을 기재하는 완전한 아미노산 또는 핵산 서열보다 더 짧은 연속 아미노산 또는 핵산 서열을 기재하기 위해 사용된다.

해충, 특히 농작물의 해충에 대한 언급은 농작물의 곤충 해충, 특히 개시된 조작된 살곤충 단백질에 의해 방제되는 인시류 곤충 해충을 의미하는 것으로 의도된다. 그러나, 해충에 대한 언급은 또한, 이들 해충을 표적으로 하는 독성 제제는 개시된 조작된 살곤충 단백질과 함께 존재하거나 공동국부화될 때, 식물의 딱정벌레, 반시목 및 동시류뿐만 아니라 선충류 및 진균을 또한 포함할 수 있다.

개시된 조작된 살곤충 단백질은 성충, 번데기, 유충, 및 신생충을 포함하여 인시류 곤충 종 유래의 곤충 해충에 대한 살곤충 활성을 나타낸다. 인시목의 곤충은 밤나방과(Family Noctuidae)의 멸강나방, 거세미, 자벌레, 및 헬리오틴(heliothine), 예를 들어 가을멸강충(스포돕테라 프루기페르다), 파밤나방(스포돕테라 엑시구아), 거염벌레나방(마메스트라 콘피구라타), 검거세미나방(아그로티스 입실론), 양배추은무늬밤나방유충(트리코플루시아 니), 대두자벌레(슈도플루시아 인클루덴스), 벨벳빈애벌레(안티카르시아 겜마탈리스), 녹색클로버웜(하이페나 스카브라), 회색담배나방(헬리오티스 비레센스), 낟알야도충(아그로티스 서브테라네아), 멸강나방(슈달레티아 우니푼크타), 서양거세미(아그로티스 오르토고니아); 명나방과(Family Pyralidae)의 천공벌레, 보호 고치를 만드는 애벌레(casebearer), 불나방(webworm), 뿔벌레(coneworm), 배추벌레(cabbageworm) 및 인시류애벌레(skeletonizer), 예를 들어 옥수수들명나방(오스트리니아 누빌라리스), 네이블오렌지나방(아미엘로이스 트란시텔라), 옥수수뿌리불나방(크람부스 칼리기노셀루스), 잔디불나방(헤르페토그람마 리카르시살리스), 해바라기나방(호모에오소마 엘렉텔룸), 명충나방유충(엘라스모팔루스 리그노셀루스); 잎말이나방과(Family Tortricidae)의 잎말이나방(leafroller), 눈벌레(budworm), 종자충(seed worm), 및 과실 벌레(fruit worm), 예를 들어 코들링나방(codling moth)(시디아 포모넬라), 그레이프베리나방(엔도피자 비테아나), 복숭아순나방(그라폴리타 몰레스타), 해바라기눈나방(술레이마 헬리안타나); 및 다수의 다른 경제적으로 중요한 인시류, 예를 들어 배추좀나방(플루텔라 자일로스텔라), 분홍솜벌레(펙티노포라 고시피엘라) 및 매미나방(리만트리아 디스파르)을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 인시목의 다른 곤충 해충은, 예를 들어 알라바마 아르길라세아(목화잎벌레), 아르칩스 아르기로스필라(과수잎말이나방), 아르칩스 로사나(유럽잎말이나방) 및 다른 잎말이나방(Archips) 종, 칠로 수프레살리스(이화명나방(Asiatic rice borer, 또는 rice stem borer)), 크나팔로크로시스 메디날리스(혹명나방), 크람부스 칼리기노셀루스(옥수수뿌리불나방), 크람부스 테테르렐루스(잔디포충나방), 디아트라에아 그란디오셀라(남서부옥수수좀), 디아트라에아 사카랄리스(사탕수수천공벌레), 에아리아스 인술라나(가시목화다래벌레), 에아리아스 비텔라(반점목화다래벌레), 헬리코베르파 아르미게라(아메리칸목화다래벌레), 헬리코베르파 지아(왕담배방나방 또는 목화씨벌레), 헬리오티스 비레센스(회색담배나방), 헤르페토그람마 리카르시살리스(잔디불나방), 로베시아 보트라나(유럽포도나무나방), 필로크니스티스 시트렐라(귤굴나방), 피에리스 브라시카에(큰흰나비), 피에리스 라파에(흰나비유충, 또는 배추흰나비), 플루텔라 자일로스텔라(배추좀나방), 스포돕테라 엑시구아(파밤나방), 스포돕테라 리투라(담배거세미나방(tobacco cutworm, cluster caterpillar)), 및 투타 압솔루타(토마토잎나방벌레)를 포함한다.

본 출원에서 "분리된 DNA 분자"에 대한 언급, 또는 이와 동등한 용어 또는 어구는 DNA 분자가 단독으로 또는 다른 조성물과 함께 존재하지만, 자연 환경 내에서는 존재하지 않는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 유기체의 게놈 DNA 내에서 자연적으로 발견되는, 예컨대 암호화 서열, 인트론 서열, 비번역 리더 서열, 프로모터 서열, 전자 종결 서열 등과 같은 핵산 요소는 상기 요소가 유기체의 게놈 내에 존재하고 자연적으로 발견되는 게놈 내 위치에 있는 한, "분리된" 것으로 간주되지 않는다. 그러나, 이들 각각의 요소, 이들 요소의 하위 부분은, 요소가 유기체의 게놈 내에 존재하지 않고 자연적으로 발견되는 게놈 내 위치에 있지 않는 한 본 개시 내용의 범주 내에서 "분리된" 것일 것이다. 유사하게, 살곤충 단백질 또는 해당 단백질의 임의의 자연적으로 생성되는 살곤충 변이체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 뉴크레오타이드 서열이 단백질을 암호화하는 서열이 자연적으로 발견되는 박테리아의 DNA 내에 존재하지 않는 한 분리된 뉴클레오타이드 서열일 것이다. 자연적으로 생성되는 살곤충 단백질의 아미노산 서열을 암호화하는 합성 뉴클레오타이드 서열은 본 개시 내용의 목적을 위하여 분리된 것으로 간주될 것이다. 본 개시 내용의 목적을 위하여, 임의의 형질전환 뉴클레오타이드 서열, 즉 식물 또는 박테리아의 세포의 게놈 내로 삽입되거나, 염색체외 벡터에 존재하는 DNA의 뉴클레오타이드 서열은, 이것이 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 플라스미드 또는 유사한 구조 내에 존재하든지, 식물 또는 박테리아의 게놈에 존재하든지, 또는 식물 또는 박테리아로부터 유래한 조직, 자손, 생물학적 샘플 또는 상품에 검출가능한 양으로 존재하든지 분리된 뉴클레오타이드 서열인 것으로 간주될 것이다.

실시예에서 추가로 기재되는 바와 같이, TIC844 및 Cry1Da1의 2천(2000)개 초과의 아미노산 서열 변이체의 조작, 시험 및 선택의 반복 라운드로, 기준선 스캐폴드 단백질, 즉 TIC844 또는 Cry1Da1의 범위 및 활성과 비교할 때, 주어진 스캐폴드 단백질로부터 치환, 삽입 또는 결실되어, 확장된 인시류 저해 범위 및/또는 개선된 인시류 저해 활성(즉, 보다 독성이며; 동일한 수준의 사망률을 얻는 데 필요한 덜 살곤충인 단백질)을 나타내는 조작된 살곤충 단백질을 생성할 수 있는 특정 아미노산 잔기의 확인을 초래하였다. 이러한 조작, 시험 및 선택의 반복 라운드는 또한 단백질의 곤충 저해 범위 또는 활성을 변화시키지 않는 TIC844 및 Cry1Da1 스캐폴드 단백질에서 중성 아미노산 잔기 치환, 삽입 또는 결실의 확인을 초래하였다. TIC844 또는 Cry1Da1에 비하여 향상된 인시류 저해 범위 및/또는 개선된 인시류 저해 활성을 산출하도록 변형될 수 있는 TIC844 및 Cry1Da1 스캐폴드에서 특이적 아미노산 잔기가 본 명세서에 확인된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에서 제공된 조작된 살곤충 단백질은 서열번호 14(TIC844) 또는 서열번호 2(Cry1Da1)의 스캐폴드 단백질보다 인시류 해충 종에 대하여 약 8배 또는 그 이상의 인시류 저해 활성을 나타낼 수 있다.

이러한 반복 라운드에서 "조작"은 스캐폴드 단백질 중 관련 잔기를 확인하여 변형된 시험 단백질을 형성하는 것, 및 생성된 변형 시험 단백질을 클로닝 및 발현시키는 것을 포함하였다. 스캐폴드 단백질의 원자 구조는 아미노산 잔기를 선택하여 조작을 위해 변형시키는 준무작위 접근법을 안내하고 보완하는 데 사용되었다. 이러한 반복 라운드에서 "시험"은 모 스캐폴드 단백질에 대한 변형된 시험 단백질의 인시류 종 활성을 비교하는 것을 포함하였다. 이러한 반복 라운드에서 "선택"은 개선된 활성을 가지는 변형된 시험 단백질(개선된 변이체) 및 이러한 개선된 변이체를 형성하도록 조작된 관련 잔기를 확인하는 것을 포함하였다(이러한 개선된 변이체는 본 명세서에서 "조작된 살곤충 단백질"로 지칭됨).

조작된 살곤충 단백질을 시험하고 선택하는 방법의 예는 제어된 분석 조건 하에서 변형된 시험 단백질 및 스캐폴드 단백질(TIC844 또는 Cry1Da1)의 동일한 양을 곤충 해충에 투여하는 것 및 변형된 시험 및 스캐폴드 단백질의 효능을 측정 및 비교하는 것을 포함한다. 조작된 살곤충 단백질을 시험 및 선택하는 다른 방법은 제어된 분석 조건 하에서 동등한 곤충 집단 반응을 유도하는 변형된 시험 단백질 및 스캐폴드 단백질(TIC844 또는 Cry1Da1)의 단백질 용량(예를 들어, 식이 중 단백질 농도)을 결정하는 것(즉, 용량 반응 곡선을 얻는 것)을 포함한다. 비교를 위하여 사용된 통계적으로 강력한 용량 반응값은 시험 집단의 50%를 사멸하는 데 필요한 중간 치사 농도(LC₅₀) 또는 탈피 저해 농도("MIC₅₀")(50%만큼 탈피를 저해하는 데 필요한 중간 농도)일 것이다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 살곤충 단백질은 TIC844(서열번호 14) 또는 Cry1Da1(서열번호 2)의 하기 관련 위치 중 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함한다: 282번 위치에서 세린은 라이신 또는 발린으로 대체됨, 316번 위치에서 타이로신은 세린으로 대체됨, 368번 위치에서 아이소류신은 프롤린 또는 아르기닌으로 대체됨, 374번 위치에서 세린은 아르기닌으로 대체됨, 375번 위치에서 아스파라긴은 히스티딘으로 치환됨, 432번 위치에서 아이소류신은 류신으로 대체됨. 조작된 살곤충 단백질은 또한 동일한 조작된 살곤충 단백질 서열 내에서 적어도 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 이들 아미노산 치환 또는 결실을 포함할 수 있다.

이들 아미노산 변형을 포함하는 조작된 살곤충 단백질은 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 26, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38, 서열번호 40, 및 서열번호 44로서 제시된 단백질, 및 이들의 곤충 저해 단편을 포함한다. 이들 조작된 살곤충 단백질의 각각은 약 132k-달톤의 측정된 질량을 가진다. 살곤충 스캐폴드 단백질 TIC844 및 Cry1Da1 및 이들로부터 유래된 조작된 살곤충 단백질의 개별적인 특징은 표 1에 기록되어 있다.

본 명세서에 기재된 조작된 살곤충 단백질의 단편은 절단된 형태일 수 있되, 하나 이상의 아미노산이 곤충 저해 활성의 손실없이 N-말단, C-말단, 단백질의 중간, 또는 이들의 조합으로부터 결실된다. 이들 단편은 모 조작된 살곤충 단백질의 곤충 저해 활성을 유지하여야 한다.

조작된 살곤충 단백질과 유사한 단백질은 당업계에 공지된 알고리즘을 기반으로 한 다양한 컴퓨터를 사용하여 서로 비교함으로써 확인될 수 있다. 예를 들어, 조작된 살곤충 단백질과 관련된 단백질의 아미노산 서열 동일성은 이들 디폴트 매개변수를 사용하는 클러스탈(Clustal) W 정렬을 사용하여 분석될 수 있다: 중량 매트릭스: 블로섬(blosum), 갭 개방 페널티(Gap opening penalty): 10.0, 갭 연장 페널티" 0.05, 친수성 갭: 온(on), 친수성 잔기: GPSNDQERK, 잔기-특이적 갭 페널티: 온(Thompson, et al (1994) Nucleic Acids Research, 22:4673-4680). 아미노산 백분율 동일성은 (아미노산 동일성/대상 단백질의 길이)에 100%를 곱한 값으로 추가로 계산된다. 다른 정렬 알고리즘이 또한 당업계에서 이용가능하며, 클러스탈 W 정렬을 사용하여 얻은 것과 유사한 결과를 제공한다.

본 출원의 실시예에서 추가로 기재되는 바와 같이, 스캐폴드 단백질 및 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 합성 또는 인공 서열은 식물에서의 사용을 위하여 고안되었다. 식물에서의 사용을 위하여 고안된 예시적인 합성 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 27(Cry1Da1.nno), 서열번호 29(Cry1Da1_2.nno), 서열번호 31(Cry1Da1_3.nno), 서열번호 33(Cry1Da1_4.nno), 서열번호 35(Cry1Da1_5.nno), 서열번호 37(Cry1Da1_6.nno), 서열번호 39(Cry1Da1_7.nno), 서열번호 41(TIC844_9.nno) 및 서열번호 43(TIC844_11.nno)에 제시되어 있다.

이러한 합성 또는 인공 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 발현 카세트 및 벡터를 구성하여 당업계에 공지된 형질전환 방법 및 기법에 따라서 옥수수, 목화 및 대두 식물 세포로 도입하였다. 형질전환된 세포를 조작된 살곤충 단백질 또는 스캐폴드 단백질을 발현하는 것으로 관찰된 형질전환된 식물로 재생시켰다. 살충 활성을 시험하기 위하여, 형질전환된 식물로부터 얻은 식물 잎 디스크를 사용하여 인시류 해충 유충의 존재 하에서 생물학적 분석을 실행하였다.

조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 재조합 핵산 분자 조성물이 고려된다. 예를 들어, 조작된 살곤충 단백질은 재조합 DNA 구조체와 함께 발현될 수 있으며, 여기서 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 ORF를 가지는 폴리뉴클레오타이드 분자는 유전자 발현 요소, 예컨대 프로모터 및 구조체의 용도로 의도되는 시스템에서 발현에 필요한 임의의 다른 조절 요소에 작동가능하게 연결된다. 비제한적인 예는 식물에서 조작된 살곤충 단백질의 발현을 위하여 합성의 조작된 살곤충 단백질 암호화 서열에 작동가능하게 연결된 식물-기능성 프로모터 또는 Bt 박테리아 또는 다른 바실러스 종에서 단백질의 발현을 위하여 조작된 살곤충 단백질 암호화 서열에 작동가능하게 연결된 Bt-기능성 프로모터를 포함한다. 다른 요소는, 인핸서, 인트론, 비번역 리더, 암호화된 단백질 부동화 태그(HIS-태그), 전좌 펩타이드(즉, 색소체 수송 펩타이드, 신호 펩타이드), 번역후 변형 효소를 위한 폴리펩타이드 서열, 리보솜 결합 부위, 및 RNAi 표적 부위를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는, 조작된 살곤충 단백질 암호화 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 본 명세서에서 제공되는 예시적인 재조합 폴리뉴클레오타이드 분자는, 서열번호 4(Cry1Da1_3), 서열번호 6(Cry1Da1_4), 서열번호 8(Cry1Da1_5), 서열번호 10(Cry1Da1_6), 서열번호 12(Cry1Da1_7), 서열번호 16(TIC844_2), 서열번호 18(TIC844_4), 서열번호 20(TIC844_5), 서열번호 22(TIC844_6), 서열번호 24(TIC844_7), 서열번호 26(TIC844_8), 서열번호 32(Cry1Da1_3.nno), 서열번호 34(Cry1Da1_4.nno), 서열번호 36(Cry1Da1_5.nno), 서열번호 38(Cry1Da1_6.nno), 서열번호 40(Cry1Da1_7.nno) 및 서열번호 44(TIC844_11.nno)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 가지는 폴리펩타이드 또는 단백질을 암호화하는, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 37, 서열번호 39 및 서열번호 43과 같은 폴리뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결된 이종 프로모터를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 이종 프로모터는 또한 색소체 표적화 조작된 살곤충 단백질 및 비표적화 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 합성 DNA 암호화 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 본 명세서에서 개시된 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 재조합 핵산 분자의 코돈은 동의 코돈으로 치환(당업계에서 침묵 치환으로 공지됨)될 수 있음이 고려된다.

조작된 살곤충 단백질 암호화 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자 또는 구조체는 조작된 살곤충 단백질, 조작된 살곤충 단백질과 상이한 단백질, 곤충 저해 dsRNA 분자, 또는 보조 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 부수적으로 발현하거나 동시 발현하도록 구성될 수 있는 하나 이상의 독성 제제를 암호화하는 DNA의 영역을 추가로 포함할 수 있다. 보조 단백질은, 예를 들어 발현의 도움, 식물에서의 안정성에 영향을 미침, 올리고머화를 위한 자유에너지를 최적화함, 독성을 증가시킴, 그리고 활성 범위를 증가시킴으로써, 보조인자, 효소, 결합-파트너, 또는 곤충 저해 제제의 효율성을 돕는 기능을 하는 다른 제제를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 보조 단백질은, 예를 들어 하나 이상의 곤충 저해 제제의 흡수를 용이하게 하거나, 또는 독성 제제의 독성 효과를 강화시킬 수 있다.

재조합 DNA 분자 또는 구조체는 모든 단백질 또는 dsRNA 분자가 하나의 프로모터로부터 발현되거나 각각의 단백질 또는 dsRNA 분자가 별개의 프로모터 제어 또는 이의 일부 조합 하에 있도록 조립될 수 있다. 본 발명의 단백질은 다중-유전자 발현 시스템으로부터 발현될 수 있으며, 상기 시스템에서 조작된 살곤충 단백질은 또한 선택되는 발현 시스템의 유형에 따라서 다른 오픈 리딩 프레임 및 프로모터를 함유하는 공통의 뉴클레오타이드 분절로부터 발현된다. 예를 들어, 박테리아 다중-유전자 발현 시스템은 단일 오페론 내로부터 다중-연결/탠덤 오픈 리딩 프레임의 발현을 구동하는 단일 프로모터를 이용할 수 있다(즉, 다시스트론성 발현). 다른 예에서, 식물 다중-유전자 발현 시스템은 다중-비연결 발현 카세트를 이용할 수 있으며, 각각은 상이한 단백질 또는 다른 독성 제제, 예컨대 하나 이상의 dsRNA 분자를 발현할 수 있다.

조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 서열을 포함하는 재조합 핵산 분자 또는 재조합 DNA 구조체는 벡터, 예를 들어 플라스미드, 배큘로바이러스, 합성 염색체, 비리온, 코스미드, 파스미드, 파지, 또는 바이러스 벡터에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있다. 이와 같은 벡터는 숙주 세포에서 조작된 살곤충 단백질 암호화 서열의 안정적이거나 일시적인 발현, 또는 암호화된 폴리펩타이드의 후속 발현을 달성하는 데 사용될 수 있다. 조작된 살곤충 단백질 서열을 암호화하는 서열을 포함하고 숙주 세포 내로 도입되는 외인성 재조합 폴리뉴클레오타이드 또는 재조합 DNA 구조체는 본 명세서에서 "형질전환 유전자"로 지칭된다.

조작된 살곤충 단백질의 임의의 하나 이상을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 형질전환 박테리아, 형질전환 식물 세포, 형질전환 식물, 및 형질전환 식물 부위가 본 명세서에서 제공된다. 용어 "박테리아 세포" 또는 "박테리아"는 아그로박테리움, 바실러스, 에세리키아, 살모넬라(Salmonella), 슈도모나스, 또는 리조비움 세포를 포함할 수 있지만, 이로 제한되지는 않는다. 용어 "식물 세포" 또는 "식물"은 쌍떡잎 세포 또는 외떡잎 세포를 포함할 수 있지만, 이로 제한되지는 않는다. 고려되는 식물 및 식물 세포는 알팔파, 바나나, 보리, 콩, 브로콜리, 양배추, 유채속식물, 당근, 카사바, 피마자, 콜리플라워, 셀러리, 병아리콩, 배추, 감귤류과일, 코코넛, 커피, 옥수수, 클로버, 목화, 조롱박, 오이, 미송, 가지, 유칼립투스, 아마, 마늘, 포도, 홉, 리크, 상추, 로브롤리 소나무(Loblolly pine), 기장, 멜론, 견과류, 오트, 올리브, 양파, 관상용식물, 야자, 목초, 완두, 땅콩, 후추, 피젼피, 소나무, 감자, 포플러, 호박, 라디에타 파인(Radiata pine), 무, 평지씨, 벼, 근경, 호밀, 홍화, 관목, 수수, 서던 파인(Southern pine), 대두, 시금치, 스쿼시(squash), 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 단옥수수, 스위트검, 고구마, 지팽이풀(switchgrass), 차, 담배, 토마토, 트리티케일, 잔디풀, 수박, 및 밀 식물 세포 또는 식물을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 특정 실시형태에서, 형질전환 식물 세포로부터 재생된 형질전환 식물 및 형질전환 식물 부위가 제공된다. 특정 실시형태에서, 형질전환 식물은, 절단, 부러뜨림, 분쇄 또는 달리 식물로부터 부위를 분리하는 것에 의해, 형질전환 종자로부터 얻어질 수 있다. 특정 실시형태에서, 식물 부위는 종자, 꼬투리, 잎, 꽃, 줄기, 뿌리, 또는 이들의 임의의 부분, 또는 형질전환 식물 부위의 재생불가능한 부분일 수 있다. 본 내용에서 사용되는 바와 같이, 형질전환 식물 부위의 "재생불가능한" 부분은 전체 식물을 형성하도록 유도될 수 없거나 유성 및/또는 무성 생식할 수 있는 전체 식물을 형성하도록 유도될 수 없는 부분이다. 특정 실시형태에서, 식물 부위의 재생불가능한 부분은 형질전환 종자, 꼬투리, 잎, 꽃, 줄기, 또는 뿌리의 일부분이다.

인시류 저해량의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 형질전환 식물을 제조하는 방법이 제공된다. 이와 같은 식물은 본 출원에서 제공되는 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 식물 세포에 도입하고, 곤충 또는 인시류-저해량의 조작된 살곤충 단백질을 발현하는 상기 식물 세포로부터 유래한 식물을 선택함으로써 제조될 수 있다. 식물은 재생, 종자, 화분, 또는 분열조직 형질전환 기법에 의하여 식물 세포로부터 유래될 수 있다. 식물을 형질전환시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다.

조작된 살곤충 단백질을 발현하는 식물은 다른 살곤충 단백질을 발현 및/또는 다른 곤충 제어 형질, 제초제 내성 유전자, 수확량 부여 유전자 또는 스트레스 내성 형질 등과 같은 다른 형질전환 형질을 발현하는 형질전환 사건으로 재배함으로써 교배될 수 있거나, 또는 이와 같은 형질은 단일 벡터 내에서 합쳐져서 상기 형질이 모두 연관될 수 있다.

가공된 식물 생성물이 검출가능한 양의 조작된 살곤충 단백질, 곤충 저해 분절 또는 이의 단편, 또는 이들의 임의의 구별되는 부분을 포함하는 가공된 생성물이 또한 본 출원에 개시되어 있다. 특정 실시형태에서, 상기 가공된 생성물은 식물 부위, 식물 바이오매스, 오일, 밀(meal), 당, 동물 사료, 가루, 플레이크, 겨, 린트, 깍지, 및 가공된 종자로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 가공된 생성물은 재생불가능하다. 식물 생성물은 상품 또는 형질전환 식물 또는 형질전환 식물 부위로부터 유래된 다른 상거래 제품을 포함하며, 여기서 상품 또는 다른 제품은 조작된 살곤충 단백질의 구별되는 부분을 암호화 또는 포함하는 뉴클레오타이드 분절 또는 발현된 RNA 또는 단백질을 검출함으로써 상거래를 통해 추적될 수 있다.

조작된 살곤충 단백질을 이용하여 곤충, 특히 농작물의 인시류 침입을 방제하는 방법이 또한 본 출원에 개시되어 있다. 이와 같은 방법은 곤충- 또는 인시류-저해량의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 식물을 성장시키는 단계를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 이와 같은 방법은, (i) 조작된 살곤충 단백질을 포함 또는 암호화하는 임의의 조성물을 식물 또는 식물을 생성하는 종자에 적용하는 단계; 및 (ii) 식물 또는 식물을 생성하는 식물 세포를 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로 형질전환시키는 단계 중 임의의 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 일반적으로, 조작된 살곤충 단백질은 조성물로 제공되거나, 미생물로 제공되거나, 형질전환 식물로 제공되어 인시류 곤충에 대하여 곤충 저해 활성을 부여할 수 있는 것으로 고려된다.

특정 실시형태에서, 조작된 살곤충 단백질은 재조합 바실러스 또는 형질전환된 임의의 다른 재조합 박테리아 세포를 배양하여 발현에 적합한 조건 하에서 조작된 살곤충 단백질을 발현시킴으로써 제조된 곤충 저해 조성물의 살곤충 활성 성분이다. 이와 같은 조성물은, 조작된 살곤충 단백질을 발현/생성하는 이와 같은 재조합 세포의 배양물의 건조, 동결건조, 균질화, 추출, 여과, 원심분리, 침강, 또는 농축에 의해 제조될 수 있다. 이와 같은 공정으로 바실러스 또는 다른 곤충병원성 박테리아 세포 추출물, 세포 현탁액, 세포 균질액, 세포 용해물, 세포 상청액, 세포 여과물, 또는 세포 펠렛을 생성할 수 있다. 이렇게 생성된 조작된 살곤충 단백질을 얻음으로써, 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 조성물은 박테리아 세포, 박테리아 포자, 및 부아포 봉입체를 포함할 수 있으며, 농업 곤충 저해 스프레이 제품으로서 또는 식이 생물학적 분석에서의 곤충 저해 제형으로서의 용도를 포함하여, 다양한 용도를 위해 제형화될 수 있다.

일 실시형태에서, 저항성 발전 가능성을 감소시키기 위하여, 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 곤충 저해 조성물 또는 형질전환 식물은 동일한 인시류 곤충 종에 대하여 곤충 저해 활성을 나타내는 적어도 하나의 추가적인 독성 제제를 추가로 포함할 수 있지만, 이는 조작된 살곤충 단백질과 상이하다. 이와 같은 조성물에 대하여 가능한 추가적인 독성 제제는 곤충 저해 단백질 및 곤충 저해 dsRNA 분자를 포함한다. 곤충 해충을 방제하기 위한 이와 같은 리보뉴클레오타이드 서열의 용도에 대한 일례는 문헌[Baum, et al. (미국 특허 공개 2006/0021087 A1)]에 기재되어 있다. 인시류 해충의 방제를 위한 이와 같은 추가적인 폴리펩타이드(들)는 곤충 저해 단백질, 예컨대 Cry1A(미국 특허 번호 5,880,275), Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1A.105, Cry1Ae, Cry1B(미국 특허 공개 번호 10/525,318), Cry1C(미국 특허 번호 6,033,874), Cry1D, Cry1E, Cry1F, 및 Cry1A/F 키메라(미국 특허 번호 7,070,982; 6,962,705; 및 6,713,063), Cry1G, Cry1H, Cry1I, Cry1J, Cry1K, Cry1L, Cry2A, Cry2Ab(미국 특허 번호 7,064,249), Cry2Ae, Cry4B, Cry6, Cry7, Cry8, Cry9, Cry15, Cry43A, Cry43B, Cry51Aa1, ET66, TIC400, TIC800, TIC834, TIC1415, Vip3A, VIP3Ab, VIP3B, AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035, AND AXMI-045(미국 특허 공개 2013-0117884 A1), AXMI-52, AXMI-58, AXMI-88, AXMI-97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100(미국 특허 공개 2013-0310543 A1), AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005(미국 특허 공개 2013-0104259 A1), AXMI-134(미국 특허 공개 2013-0167264 A1), AXMI-150(미국 특허 공개 2010-0160231 A1), AXMI-184(미국 특허 공개 2010-0004176 A1), AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209(미국 특허 공개 2011-0030096 A1), AXMI-218, AXMI-220(미국 특허 공개 2014-0245491 A1), AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z, AXMI-225z(미국 특허 공개 2014-0196175 A1), AXMI-238(미국 특허 공개 2014-0033363 A1), AXMI-270(미국 특허 공개 2014-0223598 A1), AXMI-345(미국 특허 공개 2014-0373195 A1), DIG-3(미국 특허 공개 2013-0219570 A1), DIG-5(미국 특허 공개 2010-0317569 A1), DIG-11(미국 특허 공개 2010-0319093 A1), AfIP-1A 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2014-0033361 A1), AfIP-1B 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2014-0033361 A1), PIP-1APIP-1B(미국 특허 공개 2014-0007292 A1), PSEEN3174(미국 특허 공개 2014-0007292 A1), AECFG-592740(미국 특허 공개 2014-0007292 A1), Pput_1063(미국 특허 공개 2014-0007292 A1), Pput_1064(미국 특허 공개 2014-0007292 A1), GS-135 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2012-0233726 A1), GS153 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2012-0192310 A1), GS154 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2012-0192310 A1), GS155 및 이의 유도체(미국 특허 공개 2012-0192310 A1), 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2012-0167259 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체,　서열번호 2 및 미국 특허 공개 2012-0047606 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2011-0154536 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2011-0112013 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2와 4 및 미국 특허 공개 2010-0192256 A1에 기재된 바와 같은 이들의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2010-0077507 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2010-0077508 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 공개 2009-0313721 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 또는 4 및 미국 특허 공개 2010-0269221 A1에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 번호 7,772,465(B2)에 기재된 바와 같은 이의 유도체, CF161_0085 및 WO2014/008054 A2에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 인시류 독성 단백질 및 미국 특허 공개 US2008-0172762 A1, US2011-0055968 A1, 및 US2012-0117690 A1에 기재된 바와 같은 이들의 유도체; 서열번호 2 및 US7510878(B2)에 기재된 바와 같은 이의 유도체, 서열번호 2 및 미국 특허 번호 7812129(B1)에 기재된 바와 같은 이의 유도체; 등(이로 제한되지는 않음)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

다른 실시형태에서, 곤충 저해 조성물 또는 형질전환 식물은, 얻은 곤충 저해의 범위를 확장하기 위하여 본 발명의 조작된 살곤충 단백질에 의해 저해되지 않는 곤충 해충(예컨대, 딱정벌레, 반시목 및 동시류 해충)에 대하여 곤충 저해 활성을 나타내는 적어도 하나의 추가적인 독성 제제를 추가로 포함할 수 있다.

딱정벌레 해충의 방제를 위한 이와 같은 추가적인 독성 제제는 곤충 저해 단백질, 예컨대 Cry3Bb(미국 특허 번호 6,501,009), Cry1C 변이체, Cry3A 변이체, Cry3, Cry3B, Cry34/35, 5307, AXMI134(미국 특허 공개 2013-0167264 A1) AXMI-184(미국 특허 공개 2010-0004176 A1), AXMI-205(미국 특허 공개 2014-0298538 A1), axmi207(미국 특허 공개 2013-0303440 A1), AXMI-218, AXMI-220(미국 특허 공개 20140245491A1), AXMI-221z, AXMI-223z(미국 특허 공개 2014-0196175 A1), AXMI-279(미국 특허 공개 2014-0223599 A1), AXMI-R1 및 이의 변이체(미국 특허 공개 2010-0197592 A1, TIC407, TIC417, TIC431, TIC807, TIC853, TIC901, TIC1201, TIC3131, DIG-10(미국 특허 공개 2010-0319092 A1), eHIPs(미국 특허 출원 공개 번호 2010/0017914), IP3 및 이의 변이체(미국 특허 공개 2012-0210462 A1), 및 ω-헥사톡신(Hexatoxin)-Hv1a(미국 특허 출원 공개 US2014-0366227 A1)(이로 제한되지는 않음)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

반시목 해충의 방제를 위한 이와 같은 추가적인 독성 제제는 반시목-활성 단백질, 예컨대 TIC1415(미국 특허 공개 2013-0097735 A1), TIC807(미국 특허 번호 8609936), TIC834(미국 특허 공개 2013-0269060 A1), AXMI-036(미국 특허 공개 2010-0137216 A1), 및 AXMI-171(미국 특허 공개 2013-0055469 A1)(이로 제한되지는 않음)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 딱정벌레, 인시류, 및 반시목 곤충 해충의 방제를 위한 추가적인 폴리펩타이드는 (btnomenclature.info의 월드 와이드 웹 상에서) 닐 크릭모어(Neil Crickmore)에 의해 관리되는 바실러스 투린지엔시스 독소 명명법 웹사이트에서 찾을 수 있다.

조작된 살곤충 단백질-암호화 서열 및 조작된 살곤충 단백질과 실질적인 동일성 백분율을 가지는 서열은 당업자에게 공지된 방법, 예컨대 중합효소연쇄반응(PCR), 열증폭 및 혼성화를 사용하여 확인될 수 있다. 예를 들어, 조작된 살곤충 단백질은 관련 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 데 사용될 수 있고, 밀접하게 관련된 다른 단백질을 스크리닝하고 이러한 단백질을 발견하는 데 사용될 수 있다.

또한, 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 열-사이클 또는 등온 증폭 및 혼성화 방법을 사용하여 부류의 다른 구성원을 확인하는 데 스크리닝을 위한 프로브 및 프라이머로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 서열번호 3에 제시된 바와 같은 서열로부터 유래한 올리고뉴클레오타이드는 상품으로부터 유래된 데옥시리보핵산 샘플에서 조작된 살곤충 형질전환 유전자의 존재 또는 부재를 결정하는 데 사용될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드를 이용하는 특정 핵산 검출 방법의 감도를 고려해볼 때, 서열번호 3 중 임의의 것에 제시된 바와 같은 서열로부터 유래된 올리고뉴클레오타이드는, 단지 상품의 일부가 서열번호 3 중 임의의 것을 함유하는 형질전환 식물로부터 유래되는 통합 공급원으로부터 유래된 상품에서 각각의 조작된 살곤충 단백질을 검출하는 데 사용될 수 있는 것으로 예상된다.

본 발명의 다른 특성 및 이점은 하기 실시예 및 청구항으로부터 명백해질 것이다.

실시예

상기 내용을 고려하여, 당업자는 본 발명의 사상 및 범주를 벗어나지 않으면서 개시된 특정 양태에서 변화가 이루어질 수 있고 여전히 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 수 있음을 이해해야 한다. 따라서, 본 명세서에 개시된 특정 구조적 및 기능적 상세 내용은 제한으로서 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에 언급된 각각의 참고문헌의 전체 개시 내용은 본 출원의 개시 내용 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.

실시예 1

곤충 생물학적 분석 시험을 위한 변형된 시험 단백질 및 샘플 제조의 설계

이 실시예는 변형된 시험 단백질을 형성하기 위해 변형시키기 위한 스캐폴드 단백질에서 관련 아미노산 잔기를 확인하기 위해 수행한 방법, 및 생성된 변형된 시험 단백질의 클로닝 및 발현을 설명한다.

몇몇 분자 조작 기법을, Cry1Da1 및 TIC844의 스캐폴드 단백질, Cry1Da1의 동족체에 비하여 향상된 인시류 저해 범위 및/또는 개선된 인시류 저해 활성을 가지는 Cry1Da1의 개선된 변이체를 구성하는 다단계 접근법으로 이용하였다. 설계의 제1단계, 또는 초기 라운드를 주로 가설로 구동하였다. 제2 및 제3단계는 설계의 통계적으로 구동된 라운드이었다. 예를 들어, 설계의 제2 단계에서, 통계적으로 비유해한 돌연변이를 추정되는 유익한 돌연변이와 조합하여 정의된 통계적 기준을 만족하는 이중 돌연변이를 생성하였다. 설계의 제3 단계에서, 이전 시험으로부터의 모든 데이터를 다중 통계적 방법을 사용하여 분석하였다. 하나 초과의 통계적 방법에서 통계적으로 유의한 개선을 나타내는 돌연변이만이 돌연변이의 최종 풀로 선택되었다. 이 단계에서 설계된 변이체는 이전에 양성으로 확인된 변이체로부터의 하나 또는 둘 초과의 양성 돌연변이를 함유하였다. 따라서, 제3 단계 설계는 제1 및 제2 단계에 비하여 활성 변이체를 상당히 풍부하게 하였다. 후속 실시예에서 입증되는 바와 같이, 3 단계 설계 전략의 사용은 TIC844 및 Cry1Da1 스캐폴드에 대하여 특정한 개선된 변이체에 대한 CEW에 대하여 활성의 상당한 개선을 제공한 단일 및 시너지 돌연변이를 둘 다 확인하였다.

변형된 시험 단백질을 형성하기 위해 이용된 방법은, TIC844/Cry1Da1의 정렬에서 다른 천연 바실러스 투린지엔시스(Bt) 단백질, 및 구조/기능 연관 설계를 이용한 변화의 준무작위 변형, 유도된 변형을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 이용된 분자 조작 기법의 예는 다음을 포함한다.

수용체 결합. 인시류 해충, 구체적으로 왕담배방나방(CEW, 헬리코베르파 지아)의 Cry1Da1/TIC844 개선된 변이체에 대한 감수성은 상이한 표적화된 장내(gut) 수용체에 기인한 것일 수 있다. 장내에서 수용체에 대한 결합을 개선시키고, 따라서 독성을 증가시키기 위해 이용되는 설계는, (1) 도메인 II의 정점 루프에서 모든 위치를 모든 아미노산 유형으로 돌연변이 시키는 것; 및 (2) 도메인 II의 정점 루프의 모든 가능한 조합을 다른 Cry1Da1 동족체 유래의 것(예를 들어, Cry1Db1, Cry1Dc1) 및 CEW-활성 3개 도메인의 독소(예를 들어, Cry1Bb1, Cry1Ja1 및 Cry2Ab2)로 교환하는 것을 포함하였다.

정렬 기반 접근법. 다른 동족체(예를 들어, Cry1Db1 및 Cry1Dc1)를 이용한 Cry1Da1의 정렬은 가변성 영역을 확인하기 위해 사용하였다. 정렬 결과로, 백오십(150)개의 위치 및 이백구십오(295)개의 고유한 단일 돌연변이가 확인되었다. 이들 위치는 3개의 도메인에 걸쳐서 위치하였다. 서로 네(4)개의 아미노산 내의 위치를 함께 그룹화하였다. 동일한 모 서열 유래의 돌연변이만이 모든 그룹의 위치에 대하여 지명되었으며, 이는 백삼십이(132)개의 고유한 변이체를 제공하였다.

표면 돌연변이생성유발 접근법. 스캐폴드 단백질의 도메인 II 및 III에서 표면 위치를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 스캔에 의해 돌연변이유발하였다. 아미노산 잔기는, 알라닌이 스캐폴드 단백질에 이미 존재하는 것이 아닌 경우, 알라닌으로 변형되었다. 천연 잔기가 라이신인 경우 표면 위치에서, 아르기닌 돌연변이가 알라닌 돌연변이에 추가적으로 도입되었다. 라이신 대 아르기닌 돌연변이에 대한 합리적인 근거는 인시류-활성 독소가 매우 소수의 라이신과 다수의 아르기닌을 가지는 경향이 있다는 관찰에 기초하였으며, 따라서 도메인 II 및 III의 표면 라이신을 아르기닌으로 변화시키는 것은 변형된 시험 단백질의 인시류 활성을 증가시킬 것이라는 가설을 세웠다.

단백질분해 사건의 변화. 단백질분해 공정은 인시류 곤충 내장에서 3개 도메인 독소의 활성의 중요한 양태인 것으로 가설을 세웠다. 이를 시험하기 위하여, 몇 가지 세트의 돌연변이가 일어나 임의의 단백질분해 절단을 잠재적으로 변경시켰다. 잠재적인 절단 부위는 N-말단에 그리고 도메인 III과 독소전구물질 사이에 위치한다. 돌연변이 위치는 N-말단에서 헬릭스 4 의 개시부까지, 그리고 도메인 III의 C-말단에서 약 40개의 아미노산까지의 예측된 루프 영역을 독소전구물질에 포함시켰다. 일반적으로, 글리신 잔기는 단백질분해 부위 인식을 통해 또는 단백질 유연성을 증가시킴으로써 단백질이 단백질분해 절단에 보다 민감하게 만듦으로써 단백질분해를 촉진시킨다는 것으로 가설을 세웠다. 또한, 트립신 및 키모트립신은 인시류 중장에서 생존가능한 프로테아제로서 널리 받아들여지는 2개의 프로테아제이다. 라이신 잔기는 트립신에 대한 인식 부위를 제공하고, 티로신 잔기는 키모트립신에 대한 인식 부위를 제공한다. 따라서, 잠재적인 절단 부위에서 선택된 돌연변이 위치는 글리신, 라이신 또는 티로신으로 돌여변이되었다.

다른 CEW -활성 독소로부터의 잠재적인 핫스팟 돌연변이. 다수 세트의 단백질(키메라, 단편 및 천연 서열을 포함함)에 대한 CEW에 대한 활성 및 활성의 부재 데이터를 분석하였다. 이러한 데이터의 통계 분석으로부터 얻은 정보를 이용하여 생성된 변형된 시험 단백질에서 CEW 활성을 증가시킬 것 같은 돌연변이에 대한 잠재적인 특정 돌연변이 또는 위치를 확인하였다.

상기 기재된 분자 공학 방법으로부터 생성된 변형된 시험 단백질을 포자형성 특이 발현 프로모터의 하류에서 재조합 Bt 플라스미드 발현 벡터로 당업계에 공지된 방법을 사용하여 클로닝하고 무결정성 Bt 숙주 세포로 형질전환시켰다.

실시예 2

인시류 해충에 대한 식이 생물학적 분석에서 변형된 시험 단백질의 시험

이 실시예는 실시예 1에 기재된 조작 노력으로부터 형성된 변형된 시험 단백질의 시험을 예시한다.

실시예 1에 기재된 조작 노력으로부터, 이천삼백(2,300)가지 초과의 상이한 변형된 시험 단백질을 발현하는 약 이천오백(2,500)가지 재조합 Bt 균주를 생성하였다. 이러한 변형된 시험 단백질을 Bt에서 발현시키고 인시류의 다양한 종에 대한 독성을 분석하였다. 왕담배방나방(CEW, 헬리코베르파 지아) 및 가을멸강충(FAW, 스포돕테라 프루기페르다)을 포함하여 다양한 인시류 종의 신생충 유충(부화 후 24시간 미만)을 이용하여 식이 분석을 수행하였다. CEW 시험을 위한 곤충 알은 2개의 상이한 실험실 콜로니, 즉 벤슨 리서치(Benson Research; 미국 펜실베이니아주 칼라일 소재) 및 몬산토 컴퍼니(Monsanto Company; 미국 테네시주 유니언시티 소재)로부터 입수하였다. CEW 활성을 확인하는 추가적인 생물학적 분석을 실행하는 것에 추가적으로, 발현된 변형된 시험 단백질 모두 CEW에 대하여 시험하였고, 모 스캐폴드 단백질에 비하여 CEW에 대한 개선된 활성을 나타내는 이들 변형된 시험 단백질 중 일부는 FAW에 대하여 시험하였다.

치사율 및 왜화를 위한 생물학적 분석 및 곤충을 스코어링하기 위한 다양한 프로토콜은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대 PCT 특허 출원 공개 번호 WO 2012/139004 및 미국 특허 번호 7,927,598에 기재된 것과 같은 방법의 변형을 사용하였다.

실시예 3

개선된 CEW 활성을 나타내는 변형된 시험 단백질

이 실시예는 다수의 시험 라운드에서 스캐폴드 TIC844 또는 Cry1Da1 단백질의 활성과 비교할 때 변형된 시험 단백질의 일부에 대하여 향상된 인시류 저해 범위 및/또는 개선된 또는 더 큰 인시류 저해 활성의 발견을 예시한다.

실시예 1에 기재된 조작 노력으로부터 형성되고 실시예 2에 기재된 바와 같은 곤충 생물학적 분석에서 시험된 변형된 시험 단백질을, 변형된 시험 단백질의 인시류 종 활성을 이들 각각의 모 스캐폴드 단백질(즉, TIC844 또는 Cry1Da1)과 비교하는 각각의 라운드에서 시험하였다. 첫번째 라운드에서, 삼백칠십(370)가지의 상이한 변형된 시험 단백질은 식이 생물학적 분석에서 TIC844 또는 Cry1Da1에 비하여 CEW에 대한 독성 증가를 보여주었다. 이들 식이 생물학적 분석 각각에서, 동일한 양의 단백질(변형된 시험 단백질 또는 스캐폴드 단백질)이 제어된 단일 용량 분석 조건 하에서 CEW에 제공되었다. 변형된 시험 단백질 생물학적 분석의 각각의 관찰된 사망률 및 왜화를 측정하고 이를 모 스캐폴드 단백질 생물학적 분석의 관찰된 사망률 및 왜화와 비교함으로써 변형된 시험 단백질 및 스캐폴드 단백질의 효능을 결정하였다.

단일 용량 분석 스크린에서 스캐폴드 단백질과 비교할 때 CEW에 대하여 독성 증가를 나타낸 삼백칠십(370) 가지의 변형된 시험 단백질 중에서, 이들 중 약 백팔십(180) 가지를 변형된 시험 단백질이 모 스캐폴드 단백질에 비하여 FAW 활성 증가를 유지하거나 나타내는지 여부를 결정하기 위하여 FAW 생물학적 분석으로 추가로 시험하였다. 이들 변형된 시험 단백질 중 약 사십(40) 내지 오십(50)가지는 모 스캐폴드 단백질보다 유사하거나 더 우수한 FAW 활성을 나타내었다. 이들 추가로 스크리닝된 변형된 시험 단백질을 또한 추가적인 CEW 생물학적 분석으로 시험하여 CEW 활성을 확인하였다. FAW 활성을 유지 또는 개선시키면서 개선된 CEW 활성을 나타낸 변형된 시험 단백질을 선택하고 시험하는 이 라운드로 개선된 변이체의 최종 목록을 얻었다(본 명세서에서 "조작된 살곤충 단백질"로 지칭됨). 표 2는 각각의 조작된 살곤충 단백질에서 이들 조작된 살곤충 단백질 및 아미노산 돌연변이를 확인시킨다. 표 2는 또한 CEW 및 FAW에 대하여 스캐폴드 및 조작된 살곤충 단백질의 활성을 나타낸다(살곤충 활성은 LC₅₀ 값(고정된 노출 기간 동안 곤충 집단의 50%를 사멸시키는 데 필요한 독소 농도. LC₅₀ 값이 더 낮을수록, 독성이 더 큼) 및 MIC₅₀ 값(고정된 노출 기간 동안 유충의 50%의 특정 영(instar)으로의 탈피를 저해하는 데 필요한 농도)으로 나타낸다). 이 표는 FAW 활성을 유지 또는 개선시키면서, 조작된 살곤충 단백질이 개선된 CEW-활성을 가짐을 나타낸다.

조작된 살곤충 단백질의 향상된 인시류 저해 범위 및 개선된 인시류 저해 활성을 추가로 나타내어, 모 스캐폴드 단백질에 대한 조작된 살곤충 단백질 TIC844_8의 치사율이 도 1에 도시되어 있다. 도 1의 막대그래프는 2가지 상이한 CEW 콜로니, 즉 유니언시티 및 벤존에 대한 스캐포드 단백질 TIC844에 비교한 TIC844_8의 MIC₅₀값을 나타낸다. 도 1에 도시한 생물학적 분석 결과는 수크로스 구배-정제된 생물학적 분석 제조물로부터 계산되었다. 이러한 2차 생물학적 분석을 단백질의 포자-결정 제조물에 반대되는 단백질의 수크로스 구배-정제 제조물을 이용하여 실행된 이유는 TIC844_8의 개선된 활성이 보다 광범위한 정제로 지속되는 것을 보장하는 것이다. 또한, 유니언시티 콜로니는 시험하여 벤존 콜로니에 대하여 관찰된 개선된 활성을 확인하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이, TIC844_8(S282V_Y316S_I368P)에 대한 3개의 잔기에서 돌연변이는 유니언시티 콜로니에 있어서 TIC844에 비하여 CEW 치사율에 있어서 8배의 개선을 부여하고, 벤존 콜로니에 있어서 TIC844에 비하여 CEW 치사율에 있어서 50배의 개선을 부여한다.

조작된 살곤충 단백질의 향상된 인시류 저해 범위 및 개선된 인시류 저해 활성을 추가로 나타내어, 인시류 곤충 종의 넓은 범위에 대하여 수행한, 식이 생물학적 분석 연구로부터 TIC844 및 TIC844_8에 대한 곤충 활성 프로파일이 표 3에 나타내어져 있다. 표 3의 생물학적 분석 연구에서 시험한 곤충은 검거세미나방(BCW, 아그로티스 입실론), 왕담배방나방(CEW, 헬리코베르파 지아), 가을멸강충(FAW, 스포돕테라 프루기페르다), 남방 멸강나방(SAW, 스포돕테라 에리디아니아(Spodoptera eridiania)), 양배추은무늬밤나방유충(CLW, 트리코플루시아 니), 옥수수들명나방(ECB, 오스트리니아 누빌라리스), 남서부옥수수좀(SWC, 디아트라에아 그란디오셀라), 회색담배나방(TBW, 헬리오티스 비레센스), 벨벳빈애벌레(VBC, 안티카르시아 겜마탈리스), 대두자벌레(SBL, 크리소데이식스 인클루데스(Chrysodeixis includes)), 및 사탕수수천공벌레(SCB, 디아트라에아 사카랄리스)를 포함한다. 이 표 3은, 구체적으로 CEW 및 VBC에 대하여 개선된 활성을 가지며, 모 스캐폴드 단백질 TIC844에 비하여 TIC844_8의 향상된 인시류 저해 범위를 나타낸다.

조작된 살곤충 단백질의 향상된 인시류 저해 범위는, 식이 생물학적 분석 연구로부터 특정한 조작된 살곤충 단백질에 대한 곤충 활성 프로파일을 나타낸 표 4에 추가로 나타나 있다. 표 4의 생물학적 분석 연구에 대하여 시험된 곤충은 구세계목화씨벌레(CBW, 헬리코베르파 아르미게라), 담배거세미나방(TCW, 스포돕테라 리투라), 파밤나방(BAW, 스포돕테라 엑시구아), 분홍솜벌레(PBW, 펙티노포라 고시피엘라), 분홍줄기천공벌레(PSB, 세사미아 인페렌스) 및 반점목화다래벌레(SBW, 에아리아스 비텔라(Earias vitella))를 포함한다. 표 4에 나타낸 결과는, 구체적으로 CBW, PBW(Cry1Ac 저항성), PBW(현장 수집) 및 SBW에 대한 개선된 활성을 가지면서, 스캐폴드 단백질 Cry1Da1에 비하여 열거된 조작된 살곤충 단백질의 향상된 인시류 저해 범위를 입증한다.

실시예 4

식물에서의 발현을 위한 조작된 살곤충 단백질 및 스캐폴드 단백질을 암호화하는 유전자의 합성

이 실시예는 식물에서의 발현을 위한 조작된 살곤충 단백질 및 스캐폴드 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 합성을 예시한다.

식물에서의 발현을 위하여 스캐폴드 단백질 및 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 설계하고 일반적으로 미국 특허 번호 5,500,365에 기재된 방법에 따라서 합성하였으며, 원래의 스캐폴드 또는 조작된 살곤충 단백질의 아미노산 서열을 보존하면서, ATTTA 및 A/T 풍부 식물 폴리아데닐화 서열과 같은 특정의 불리한 문제 서열을 피하였다. 식물에서의 발현을 위하여 조작된 살곤충 단백질 및 스캐폴드 단백질을 암호화하는 이러한 유전자에 대한 뉴클레오타이드 서열은 하기 표 5에 열거되어 있다.

실시예 5

식물에서의 조작된 살곤충 단백질의 발현을 위한 발현 카세트

이 실시예는 스캐폴드 및 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 식물에서의 사용을 위하여 고안된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 카세트의 구성을 예시한다.

표 5에 제공된 식물 발현을 위해 고안된 조작된 살곤충 단백질 및 스캐폴드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 가지는 다양한 식물 발현 카세트를 구성하였다. 이와 같은 발현 카세트는 식물 원형질에서의 일시적인 발현 또는 식물 세포의 형질전환에 유용하다. 전형적인 발현 카세트는 세포 내 단백질의 궁극적인 배치에 관련하여 고안되었다. 발현 카세트 중 하나의 세트는 단백질이 번역되어 세포질 내에 남아있을 수 있도록 하는 방식으로 고안되었다. 발현 카세트의 다른 세트는 엽록체 또는 색소체와 같은 세포의 세포 기관의 표적화를 가능하게 하기 위하여 독소 단백질과 인접하는 수송 펩타이드를 갖도록 설계되었다. 모든 발현 카세트는, 다수의 프로모터 요소, 인핸서 요소, 또는 당업자에게 공지된 형질전환 유전자의 발현을 북돋우도록 작동가능하게 연결된 다른 발현 요소로 구성될 수 있는, 프로모터를 가지는 5' 말단에서 시작하도록 설계되었다. 프로모터 서열은 프로모터에 대하여 보통 하나 이상의 리더 서열 3'과 연속적으로 이어졌다. 인트론 서열은 보통 리더 서열에 대하여 3'에 제공되어 형질전환 유전자의 발현을 개선시켰다. 독소에 대하여 암호화 서열 또는 독소에 대하여 수송 펩타이드 및 암호화 서열은 보통 작동가능하게 연결된 프로모터, 리더 및 인트론 배역에 대하여 3'에 위치하였다. 3'UTR 서열은 보통 암호화 서열의 3'에서 제공되어 전사의 종결을 용이하게 하고 생성된 전사체의 폴리아데닐화에 중요한 서열을 제공하였다. 상기 기재된 요소 모두, 종종 발현 카세트의 구조에 제공된 추가적인 서열에 작동가능하게 연결되고, 순차적으로 배열된다.

실시예 6

스캐폴드 또는 조작된 살곤충 단백질 발현 카세트를 함유하는 형질전환 벡터

본 실시예는 식물 조직에서 스캐폴드 또는 조작된 살곤충 단백질의 혼입을 예시한다.

스캐폴드 단백질 또는 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 핵산 분절을 발현하는 형질전환 식물을 생성하는 방법은 당업계에 잘 공지된 방법의 변이를 이용하여 수행될 수 있다. 일반적으로, 상기 방법은 조작된 살곤충 단백질 또는 스캐폴드 단백질 중 하나 이상을 암호화하는 암호화 영역에 작동적으로 연결된 프로모터를 함유하는 DNA 분절로 적합한 숙주 세포를 형질전환하는 단계를 포함한다. 이와 같은 암호화 영역은 일반적으로 전사-종결 영역에 작동가능하게 연결되고, 이에 의하여 프로모터는 세포 내 암호화 영역의 전사를 구동할 수 있고, 그리고 따라서 생체내에서 폴리펩타이드를 생성하는 능력을 세포에게 제공한다. 이와 같은 세포를 형질전환시키는 데 사용하기 위한 벡터, 플라스미드, 코스미드, 및 DNA 분절은 일반적으로 오페론, 유전자, 또는 유전자-유래 서열, 천연 또는 합성-유래, 그리고 특히 개시된 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 것을 포함할 것이다. 이들 DNA 구조체는 프로모터, 인핸서, 폴리링커, 또는 관심 대상 특정 유전자에 대하여 조절 활성을 가질 수 있는 다른 유전자 서열과 같은 구조를 추가로 포함할 수 있다. 생성된 형질유전자 식물. 식물 부위 및 식물 세포는 암호화된 단백질의 발현 및 생물활성에 대하여 시험된다.

인시류-활성 단백질을 발현하는 형질전환 식물을 얻기 위하여 변형될 수 있는 방법의 예는, 예를 들어 Cry1A 단백질(미국 특허 번호 5,880,275), Cry1B(미국 특허 출원 번호 10/525318), Cry1C(미국 특허 번호 6,033,874), Cry1A/F 키메라(미국 특허 번호 7,070,982; 6,962,705, 및 6,713,063), 및 Cry2Ab 단백질(미국 특허 번호 7,064,249)을 포함한다.

실시예 7

안정적으로 형질전환된 옥수수에서 조작된 살곤충 단백질의 인시류 활성

이 실시예는 옥수수 식물에서 발현되고 각각의 곤충 해충에 대한 식이로서 제공될 경우 인시류 해충에 대한 조작된 살곤충 단백질에 의해 나타나는 저해 활성을 예시한다.

실시예 6에 기재된 발현 카세트를 함유하는 벡터를 사용하여 Cry1Da1 및 Cry1Da1_7.nno 단백질을 발현하는 R0 형질전환 옥수수 식물을 생성하였다. 비형질전환 야생형의 상업적 생식질(germplasm) 식물의 귀에 R0 형질전환체로부터의 화분으로 수분시킴으로써 생성된 종자로부터 F1 형질전환 옥수수 식물을 성장시켰다.

당업계에 공지된 방법에 의해 형질전환된 세포를 유도하여 식물을 형성하였다. 미국 특허 번호 8,344,207에 기재된 것과 유사한 식물 잎 디스크를 사용하는 생물학적 분석을 실행하였다. 음성 대조군을 위한 조직을 얻기 위해 비형질전환 식물을 사용하였다. 각각의 이원벡터로부터 다수의 형질전환 사건을 평가하고, 그 결과를 표로 작성하였다.

현장의 F1에서 Cry1Da1 및 Cry1Da1_7.nno 단백질을 발현하는 형질전환 옥수수 식물에 대한 활성에 추가적으로, F1 및 R0에서 Cry1Da1 및 Cry1Da1_7.nno 단백질을 발현하는 형질전환 옥수수 식물의 살곤충 활성이 표 6에 제공되어 있다. 구체적으로, 표 6은 CEW, FAW, 및 SWC에 대하여 시험할 때 모 스캐폴드 단백질 Cry1Da1에 비하여 Cry1Da1_7.nno에 대한 인시류 활성 프로파일을 나타낸다. 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, Cry1Da1과 달리, Cry1Da1_7.nno는 R0 및 F1 생물학적 분석 및 F1 현장 시험에서 CEW 및 FAW 둘 다에 대하여 활성을 나타낸다.

실시예 8

안정적으로 형질전환되는 목화에서 조작된 살곤충 단백질의 인시류 활성

이 실시예는 목화 식물에서 발현되고 각각의 곤충 해충에 대한 식이로서 제공될 경우 인시류 해충에 대한 조작된 살곤충 단백질에 의해 나타나는 저해 활성을 예시한다.

실시예 6에 기재된 발현 카세트를 함유하는 벡터를 사용하여 Cry1Da1_7.nno 및 TIC844_11.nno 단백질을 발현하는 목화 식물을 생성하였다. 당업계에 공지된 방법에 의해 형질전환된 세포를 유도하여 식물을 형성하였다. 실시예 7에 기재된 바와 같은 생물학적 분석으로 목화 잎 조직을 사용하고, CBW, FAW, 회색담배나방(TBW, 헬리오티스 비레센스), 및 SBL에 대하여 시험하였다. 표 7은 안정적으로 형질전환된 R₀ 세대 목화에서 이들 인시류 종에 대하여 관찰된 활성을 나타낸다. 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, Cry1Da1_7.nno 및 TIC844_11.nno는 안정적으로 형질전환된 R₀ 세대 목화에서 2종 이상의 인시류 해충 종에 대하여 활성을 보였다.

선택된 형질전환 사건은 R₁ 식물을 생성하는 데 사용하였다. Cry1Da1_7.nno를 발현하는 R₁ 식물을 CBW, FAW 및 SBL에 대한 저항성에 대하여 분석하였다. 잎, 스퀘어(square) 및 꼬투리 조직을 스크린하우스에서 수행되는 현장 시험에 추가적으로, 생물학적 분석에서 사용하였다. 표 8은 이 시험에서 관찰된 활성을 나타낸다. 표 8에 나타낸 바와 같이, Cry1Da1_7.nno는 생물학적 분석 및 현장 시험에서 CBW, FAW 및 SBL에 대한 활성을 보였다.

실시예 9

안정적으로 형질전환되는 대두에서 조작된 살곤충 단백질의 인시류 활성

이 실시예는 대두 식물에서 발현되고 각각의 곤충 해충에 대한 식이로서 제공될 경우 인시류 해충에 대한 조작된 살곤충 단백질에 의해 나타나는 저해 활성을 예시한다.

실시예 6에 기재된 발현 카세트를 함유하는 벡터를 사용하여 Cry1Da1_7.nno, TIC844_9.nno 및 TIC844_11.nno 단백질을 발현하는 대두 식물을 생성하였다. 실시예 7에 기재된 바와 같이 잎 조직을 수확하고 생물학적 분석에서 사용하거나, 또는 대안적으로 동결건조된 조직을 생물학적 분석을 위한 곤충 식이에서 사용하였다. SAW, SBL 및 팥나방(Soybean Pod Worm(SPW), 헬리코베르파 지아)을 포함하여, 다양한 인시류 종에 대하여 생물학적 분석을 실행하였다. 표 9는 안정적으로 형질전환된 R0 세대 대두에 있어서 이들 인시류 해충에 대하여 관찰된 활성을 나타낸다. 표 9에서 알 수 있는 바와 같이, Cry1Da1_7.nno 및 TIC844_11.nno는 SPW, SAW 및 SBL에 대한 활성을 나타낸다. TIC844_9.nno(클로닝을 위한 보너스 알라닌과 아울러 TIC844)는 SPW에 대한 활성을 보이지 않았다.

선택된 형질전환 사건은 R₁ 식물을 생성하는 데 사용하였다. Cry1Da1_7.nno를 발현하는 R₁ 식물을 SAW, SBL, SPW 및 벨벳빈애벌레(VBC, 안티카르시아 겜마탈리스)에 대한 저항성에 대하여 분석하였다. R₁ 세대 식물로부터 잎 조직을 수확하여 섭식 생물학적 분석에서 사용하였다. 표 10은 이 시험에서 관찰된 활성을 나타낸다. 표 10에 나타낸 바와 같이, Cry1Da1_7.nno는 SPW, SAW 및 SBL에 대한 활성을 보였다.

표 11은 Cry1Da1_7.nno를 발현하는 안정적으로 형질전환된 R₁ 세대 대두 식물을 이용하여 스크린하우스에서 수행한 현장 시험의 결과를 나타낸다. 스크린하우스에서 식물을 침입하는 데 사용된 종은 검정멸강나방(Black armyworm)(BLAW, 스포돕테라 코스미오이데스( Spodoptera cosmioides)), 콩순나방(Bean shoot moth)(BSM, 크로시도세마 아포레마(Crocidosema aporema)), 남아메리카나방(South American podworm)(SAPW, 헬리코베르파 겔로토포에온(Helicoverpa gelotopoeon)), 해바라기자벌레(Sunflower looper)(SFL, 라치플루시아 누(Rachiplusia nu)) 및 VBC를 포함한다. 표 11은 이 시험에서 관찰된 활성을 나타낸다. 표 11에 나타낸 바와 같이, Cry1Da1_7.nno는 BLAW, SAPW 및 SFL에 대하여 활성을 보였다.

본 명세서에 개시되고 청구된 모든 조성물 및 방법은 본 개시 내용을 고려하여 과도한 실험없이 제조되고 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 상기 예시적인 실시형태의 관점에서 기재되었지만, 본 발명의 진정한 개념, 사상, 및 범주를 벗어나지 않으면서 본 명세서에 기재된 조성물, 방법, 및 방법의 단계 또는 방법의 단계의 순서에 변이, 변화, 변형, 및 변경이 적용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 화학적 및 생리학적으로 모두 관련된 특정 제제가 본 명세서에 기재된 제제를 대체할 수 있는 한편, 동일 또는 유사한 결과가 얻어질 것이다. 당업자에게 명백한 이와 같은 유사한 대체 및 변형은 모두 첨부된 청구범위에 의해 한정되는 바와 같이 본 발명의 사상, 범주, 및 개념 내에 있는 것으로 여겨진다.

SEQUENCE LISTING <110> Monsanto Technology LLC <120> Lepidopteran-Active Cry1Da1 Amino Acid Sequence Variant Proteins <130> WO2016/061377 <140> PCT/US2015/055779 <141> 2015-10-15 <150> US 62/064994 <151> 2014-10-16 <150> US 62/065017 <151> 2014-10-17 <160> 44 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 3498 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3498) <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1. <400> 1 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 2 <211> 1165 <212> PRT <213> Bacillus thuringiensis <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1165) <223> Amino acid sequence of the protein Cry1Da1. <400> 2 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 3 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1_3. <400> 3 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgtagtgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 4 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_3. <400> 4 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 5 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1_4. <400> 5 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatc gtaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 6 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_4. <400> 6 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 7 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1_5. <400> 7 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tagaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 8 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_5. <400> 8 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Arg 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 9 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1_6. <400> 9 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaaaatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 10 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_6. <400> 10 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 11 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding Cry1Da1_7. <400> 11 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcagtatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920 gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980 ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280 gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340 gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400 gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460 acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520 cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580 gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640 acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700 tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760 catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820 atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880 attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940 gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000 gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060 aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120 ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180 aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240 gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300 aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360 tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420 aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480 ctccttatgg aggaatag 3498 <210> 12 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_7. <400> 12 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 13 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844. <400> 13 atggagatca acaaccagaa ccagtgcgtc ccgtacaact gcctgagcaa ccctaaggag 60 atcatcctgg gtgaggaacg cctggagacc ggcaacaccg tagccgacat tagcctgggc 120 ctcatcaact tcctctacag caacttcgtg cccggcggtg gcttcatcgt gggcctcctg 180 gagcttatct ggggcttcat cggcccgtcc cagtgggaca tcttcctcgc ccagatcgag 240 caactgatca gccagcggat cgaggagttc gctaggaacc aggccatctc ccgcctggag 300 ggactctcca acctctacaa ggtgtacgtg cgcgcgttca gcgactggga gaaggacccg 360 accaacccgg ccctccgcga ggaaatgcgt atccagttca acgatatgaa ctcggccctc 420 atcaccgcca tcccgctctt ccgcgtgcag aactacgagg tggccctcct gtccgtgtac 480 gttcaagccg ccaacctcca cctctccatc ctccgcgacg tgagcgtgtt cggcgagcgc 540 tggggctacg acaccgccac catcaacaac cgctactccg acctcacctc cctcatccac 600 gtttacacca accactgcgt ggacacgtac aaccagggcc tccgccgcct ggagggccgc 660 ttcctctccg actggatcgt gtacaaccgc ttccgccgcc agctcaccat ctccgtcctg 720 gacatcgtcg ccttctttcc caactacgac atccgcacct accctatcca gaccgccacc 780 cagctcaccc gcgaggtcta cctcgacctc ccgttcatca acgagaacct cagcccggcc 840 gccagctacc cgaccttctc cgccgctgag tccgccatca ttcgcagccc gcacctcgtg 900 gacttcctca actccttcac catctacacc gactccctcg cccgctacgc ctactggggc 960 ggtcacctcg tgaactcctt ccgcaccggc accactacca acctcatccg cagcccgctc 1020 tacggccgcg agggcaacac cgagcgcccg gtgaccatca ccgccagccc gagcgtgccc 1080 atcttccgca ccctcagcta catcaccggc ctggacaaca gcaaccctgt ggcgggcatc 1140 gagggcgtgg agttccagaa caccatctcc aggagcatct accgcaagag cggccctatc 1200 gacagcttca gcgagctgcc tcctcaggac gccagcgtga gccctgccat cggctacagc 1260 cacaggctgt gccacgccac cttcctggag cgcatcagcg gccctcgcat cgcgggcacc 1320 gtgttctcgt ggacccaccg cagcgcctct cctacgaacg aggtgtctcc tagtcgcatc 1380 acccagatcc cttgggtcaa ggcccacacc ctggctagtg gcgctagtgt catcaagggc 1440 cctggcttca ccggtggtga catcctgacc aggaactcta tgggcgagct gggcactctg 1500 agggtcactt tcactggccg cctgcctcag tcttactaca tccgcttccg ctacgctagt 1560 gtcgctaacc gctctggtac tttccgctac tctcagcctc cgtcttacgg tatctctttc 1620 cctaagacta tggacgctgg tgagcctctg accagtagga gcttcgctca cactactctg 1680 ttcactccta tcactttctc tagggctcag gaggagttcg acctgtacat ccagtctggt 1740 gtgtacatcg acaggatcga gttcatcccc gtgaccgcca cgttcgaggc cgagtacgac 1800 cttgagcgcg cccagaaggc tgtcaatgag ctcttcacgt ccagcaatca gatcggcctg 1860 aagaccgacg tcactgacta ccacatcgac caagtctcca acctcgtgga gtgcctctcc 1920 gatgagttct gcctcgacga gaagaaggag ctgtccgaga aggtgaagca tgccaagcgt 1980 ctcagcgacg agaggaatct cctccaggac cccaatttcc gcggcatcaa caggcagctc 2040 gaccgcggct ggcgcggcag caccgacatc acgatccagg gcggcgacga tgtgttcaag 2100 gagaactacg tgactctcct gggcactttc gacgagtgct accctaccta cttgtaccag 2160 aagatcgatg agtccaagct caaggcttac actcgctacc agctccgcgg ctacatcgaa 2220 gacagccaag acctcgagat ttacctgatc cgctacaacg ccaagcacga gaccgtcaac 2280 gtgcccggta ctggttccct ctggccgctg agcgccccca gcccgatcgg caagtgtgcc 2340 caccacagcc accacttctc cttggacatc gatgtgggct gcaccgacct gaacgaggac 2400 ctcggagtct gggtcatctt caagatcaag acccaggacg gccacgcgcg cctgggcaac 2460 ctggagttcc tcgaggagaa gcccctggtc ggtgaggctc tggccagggt caagagggct 2520 gagaagaagt ggagggacaa gcgcgagaag ctcgagtggg agaccaacat cgtttacaag 2580 gaggccaagg agagcgtcga cgccctgttc gtgaactccc agtacgaccg cctgcaggcc 2640 gacaccaaca tcgccatgat ccacgctgcc gacaagaggg tgcacagcat tcgcgaggcc 2700 tacctgcctg agctgtccgt gatccctggt gtgaacgctg ccatctttga ggagctggag 2760 ggccgcatct ttaccgcatt ctccctgtac gacgcccgca acgtgatcaa gaacggtgac 2820 ttcaacaatg gcctcagctg ctggaacgtc aagggccacg tggacgtcga ggaacagaac 2880 aaccaccgct ccgtcctggt cgtcccagag tgggaggctg aggtctccca agaggtccgc 2940 gtctgcccag gccgcggcta cattctcagg gtcaccgctt acaaggaggg ctacggtgag 3000 ggctgtgtga ccatccacga gatcgagaac aacaccgacg agcttaagtt ctccaactgc 3060 gtggaggagg aggtgtaccc aaacaacacc gttacttgca acgactacac cgccacccag 3120 gaggagtacg agggcaccta cacttccagg aacaggggct acgatggtgc ctacgagagc 3180 aacagcagcg ttcctgctga ctacgcttcc gcctacgagg agaaggccta cacggatggc 3240 cgcagggaca acccttgcga gagcaaccgc ggctacggcg actacactcc cctgcccgcc 3300 ggctacgtta ccaaggagct ggagtacttc ccggagactg acaaggtgtg gatcgagatc 3360 ggcgagaccg agggcacctt catcgtggac agcgtggagc tgctcctgat ggaggagtag 3420 <210> 14 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the chimeric protein TIC844. <400> 14 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 15 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_2. <400> 15 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt cacatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggttaagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 16 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_2. <400> 16 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser His Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Leu 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 17 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_4. <400> 17 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgtagtgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 18 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_4. <400> 18 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 19 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_5. <400> 19 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaaaatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 20 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_5. <400> 20 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 21 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_6. <400> 21 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatc gtaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 22 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_6. <400> 22 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 23 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_7. <400> 23 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tagaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 24 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_7. <400> 24 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Arg 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 25 <211> 3420 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence used for expression in a bacterial cell encoding TIC844_8. <400> 25 atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60 ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120 cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180 gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240 caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300 gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360 actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420 ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480 gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540 tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600 gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660 tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720 gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780 cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840 gcagtatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900 gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960 gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020 tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080 atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140 gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200 gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260 caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320 gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380 acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440 cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500 cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560 gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620 ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680 ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740 gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800 ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860 aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920 gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980 cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040 gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100 gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160 aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220 gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280 gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340 catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400 ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460 ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520 gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580 gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640 gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700 tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760 gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820 tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880 aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940 gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000 ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060 gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120 gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180 aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240 cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300 ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360 ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420 <210> 26 <211> 1139 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_8. <400> 26 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val 595 600 605 Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His 770 775 780 His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp 785 790 795 800 Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala 805 810 815 Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu 820 825 830 Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 835 840 845 Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu 850 855 860 Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala 865 870 875 880 Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser 885 890 895 Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn 900 905 910 Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser 915 920 925 Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly 930 935 940 Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn 945 950 955 960 Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser 965 970 975 Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr 980 985 990 Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile 995 1000 1005 Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu 1010 1015 1020 Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly 1040 1045 1050 Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1055 1060 1065 Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp 1070 1075 1080 Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1085 1090 1095 Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr 1100 1105 1110 Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile 1115 1120 1125 Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 <210> 27 <211> 3498 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1. <400> 27 atggagatca acaaccagaa ccagtgcgtc ccgtacaact gcctgagcaa ccctaaggag 60 atcatcctgg gtgaggaacg cctggagacc ggcaacaccg tagccgacat tagcctgggc 120 ctcatcaact tcctctacag caacttcgtg cccggcggtg gcttcatcgt gggcctcctg 180 gagcttatct ggggcttcat cggcccgtcc cagtgggaca tcttcctcgc ccagatcgag 240 caactgatca gccagcggat cgaggagttc gctaggaacc aggccatctc ccgcctggag 300 ggactctcca acctctacaa ggtgtacgtg cgcgcgttca gcgactggga gaaggacccg 360 accaacccgg ccctccgcga ggaaatgcgt atccagttca acgatatgaa ctcggccctc 420 atcaccgcca tcccgctctt ccgcgtgcag aactacgagg tggccctcct gtccgtgtac 480 gttcaagccg ccaacctcca cctctccatc ctccgcgacg tgagcgtgtt cggcgagcgc 540 tggggctacg acaccgccac catcaacaac cgctactccg acctcacctc cctcatccac 600 gtttacacca accactgcgt ggacacgtac aaccagggcc tccgccgcct ggagggccgc 660 ttcctctccg actggatcgt gtacaaccgc ttccgccgcc agctcaccat ctccgtcctg 720 gacatcgtcg ccttctttcc caactacgac atccgcacct accctatcca gaccgccacc 780 cagctcaccc gcgaggtcta cctcgacctc ccgttcatca acgagaacct cagcccggcc 840 gccagctacc cgaccttctc cgccgctgag tccgccatca ttcgcagccc gcacctcgtg 900 gacttcctca actccttcac catctacacc gactccctcg cccgctacgc ctactggggc 960 ggtcacctcg tgaactcctt ccgcaccggc accactacca acctcatccg cagcccgctc 1020 tacggccgcg agggcaacac cgagcgcccg gtgaccatca ccgccagccc gagcgtgccc 1080 atcttccgca ccctcagcta catcaccggc ctggacaaca gcaaccctgt ggcgggcatc 1140 gagggcgtgg agttccagaa caccatctcc aggagcatct accgcaagag cggccctatc 1200 gacagcttca gcgagctgcc tcctcaggac gccagcgtga gccctgccat cggctacagc 1260 cacaggctgt gccacgccac cttcctggag cgcatcagcg gccctcgcat cgcgggcacc 1320 gtgttctcgt ggacccaccg cagcgcctct cctacgaacg aggtgtctcc tagtcgcatc 1380 acccagatcc cttgggtcaa ggcccacacc ctggctagtg gcgctagtgt catcaagggc 1440 cctggcttca ccggtggtga catcctgacc aggaactcta tgggcgagct gggcactctg 1500 agggtcactt tcactggccg cctgcctcag tcttactaca tccgcttccg ctacgctagt 1560 gtcgctaacc gctctggtac tttccgctac tctcagcctc cgtcttacgg tatctctttc 1620 cctaagacta tggacgctgg tgagcctctg accagtagga gcttcgctca cactactctg 1680 ttcactccta tcactttctc tagggctcag gaggagttcg acctgtacat ccagtctggt 1740 gtgtacatcg acaggatcga gttcatcccc gtgaccgcca cgttcgaggc cgagtacgac 1800 cttgagcgcg cccagaaggt ggtgaacgcc ctcttcacta gcactaacca gctaggcctg 1860 aagactgacg tgaccgacta ccacatcgac caagtgagca acctagtggc ctgcctctcc 1920 gacgagttct gcctcgacga gaagcgcgag ctgtccgaga aggtgaagca cgccaagcgc 1980 ctctccgacg agcgcaacct gctccaggac cccaacttca ggggcatcaa caggcagccc 2040 gaccgcggct ggcgcggctc caccgacatc accatccagg gcggtgacga cgtattcaag 2100 gagaactacg ttaccctccc cggcaccttc gacgagtgtt accccaccta cctctaccag 2160 aagatcgacg agtccaagct gaaggcctac acccgctacc agctccgcgg ctacatcgag 2220 gactcccagg acctggaaat ctacctcatc cgctacaacg ccaagcacga gatcgtgaac 2280 gtgcctggca ccggcagcct ctggcctctc agcgtggaga accagatcgg cccttgcggc 2340 gagcctaacc gctgcgcccc tcacctcgag tggaaccctg acctccactg ctcgtgcagg 2400 gacggcgaga agtgcgccca ccatagccac cacttctctc tggacatcga cgtgggctgc 2460 accgacctga acgaggacct gggcgtgtgg gttatcttca agatcaagac ccaggacggt 2520 cacgccaggc tgggtaacct ggagttcctt gaggaaaagc ctctgctggg tgaggccctg 2580 gccagggtca agagggctga gaagaaatgg agggataaga gggagaccct gcagctggag 2640 accactatcg tctacaagga ggctaaggag tctgtcgatg ctctgttcgt caactctcag 2700 tacgatagac tgcaagctga taccaacatc gctatgatcc acgctgcgga taagcgggtc 2760 caccggatcc gggaggctta ccttccggag ctttctgtca tcccgggtgt caacgctgcg 2820 atcttcgagg aacttgagga acggatcttc actgcgttta gtctttacga tgcgcggaac 2880 atcatcaaga acggggactt caacaatggt ctgctgtgct ggaacgtcaa gggtcatgtc 2940 gaggtcgagg aacaaaacaa tcatcgtagt gtccttgtca ttcctgagtg ggaggcggag 3000 gtctctcaag aggtccgtgt ttgcccgggg cgtgggtaca ttcttcgtgt tactgcgtac 3060 aaggaggggt acggggaggg gtgcgttact attcatgaga ttgagaacaa tactgatgag 3120 cttaagttca acaattgtgt tgaggaggag gtttacccga acaatactgt tacgtgcatc 3180 aactacacgg caacgcaaga ggaatacgag gggacgtaca cctcgcgtaa tagagggtat 3240 gatgaggcgt acggaaacaa cccgtcggtt ccagcagatt atgcctcggt ttatgaggag 3300 aagtcgtaca cggatagacg acgcgagaat ccatgtgagt caaatcgagg atacggagat 3360 tacacaccat taccagcagg atacgttaca aaggagttgg aatacttccc ggaaacagat 3420 aaagtttgga ttgaaatcgg agaaacagaa ggaacattca tcgtcgactc agtagaattg 3480 ttgttgatgg aagaatga 3498 <210> 28 <211> 1165 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of Cry1Da1 encoded by a synthetic DNA sequence. <400> 28 Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn 20 25 30 Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn 35 40 45 Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp 50 55 60 Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu 65 70 75 80 Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala 100 105 110 Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu 115 120 125 Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile 130 135 140 Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr 145 150 155 160 Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val 165 170 175 Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr 180 185 190 Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp 195 200 205 Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp 210 215 220 Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu 225 230 235 240 Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile 245 250 255 Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe 260 265 270 Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala 275 280 285 Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn 290 295 300 Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly 305 310 315 320 Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile 325 330 335 Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr 340 345 350 Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile 355 360 365 Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu 370 375 380 Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile 385 390 395 400 Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala 405 410 415 Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile 420 425 430 Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser 435 440 445 Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro 450 455 460 Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly 465 470 475 480 Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu 485 490 495 Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr 500 505 510 Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe 515 520 525 Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met 530 535 540 Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu 545 550 555 560 Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr 565 570 575 Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr 580 585 590 Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val 595 600 605 Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val 610 615 620 Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser 625 630 635 640 Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys 645 650 655 His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn 660 665 670 Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr 675 680 685 Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val 690 695 700 Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln 705 710 715 720 Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg 725 730 735 Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr 740 745 750 Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp 755 760 765 Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg 770 775 780 Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg 785 790 795 800 Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile 805 810 815 Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile 820 825 830 Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu 835 840 845 Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys 850 855 860 Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu 865 870 875 880 Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe 885 890 895 Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met 900 905 910 Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu 915 920 925 Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu 930 935 940 Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn 945 950 955 960 Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val 965 970 975 Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu 980 985 990 Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys 995 1000 1005 Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1010 1015 1020 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr 1025 1030 1035 Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1040 1045 1050 Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu 1055 1060 1065 Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala 1070 1075 1080 Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr 1085 1090 1095 Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu 1100 1105 1110 Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr 1115 1120 1125 Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp 1130 1135 1140 Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val 1145 1150 1155 Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 29 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 29 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 30 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of Cry1Da1 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 30 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 31 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1_3 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 31 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 32 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_3 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 32 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 33 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1_4 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 33 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acaggaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 34 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_4 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 34 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Ile Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 35 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1_5 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 35 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctaccgcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 36 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_5 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 36 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Arg Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 37 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1_6 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 37 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccaagt acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 38 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_6 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 38 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 39 <211> 3501 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding Cry1Da1_7 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 39 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccgtct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860 ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920 tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980 cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040 cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100 aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160 cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220 gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280 aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340 ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400 agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460 tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520 ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580 ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640 gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700 cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760 gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820 gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880 aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940 gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000 gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060 tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120 gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180 atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240 tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300 gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360 gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420 gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480 ttgttgttga tggaagaatg a 3501 <210> 40 <211> 1166 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal protein Cry1Da1_7 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 40 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val 595 600 605 Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn 770 775 780 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys 785 790 795 800 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp 805 810 815 Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val 820 825 830 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu 835 840 845 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 850 855 860 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu 865 870 875 880 Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu 885 890 895 Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala 900 905 910 Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr 915 920 925 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 930 935 940 Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 945 950 955 960 Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn 965 970 975 Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val 980 985 990 Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val 995 1000 1005 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu 1010 1015 1020 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn 1025 1030 1035 Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr 1040 1045 1050 Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu 1055 1060 1065 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu 1070 1075 1080 Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val 1085 1090 1095 Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys 1100 1105 1110 Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly 1115 1120 1125 Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val 1130 1135 1140 Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser 1145 1150 1155 Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165 <210> 41 <211> 3423 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding TIC844 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 41 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggctgtcaat gagctcttca cgtccagcaa tcagatcggc 1860 ctgaagaccg acgtcactga ctaccacatc gaccaagtct ccaacctcgt ggagtgcctc 1920 tccgatgagt tctgcctcga cgagaagaag gagctgtccg agaaggtgaa gcatgccaag 1980 cgtctcagcg acgagaggaa tctcctccag gaccccaatt tccgcggcat caacaggcag 2040 ctcgaccgcg gctggcgcgg cagcaccgac atcacgatcc agggcggcga cgatgtgttc 2100 aaggagaact acgtgactct cctgggcact ttcgacgagt gctaccctac ctacttgtac 2160 cagaagatcg atgagtccaa gctcaaggct tacactcgct accagctccg cggctacatc 2220 gaagacagcc aagacctcga gatttacctg atccgctaca acgccaagca cgagaccgtc 2280 aacgtgcccg gtactggttc cctctggccg ctgagcgccc ccagcccgat cggcaagtgt 2340 gcccaccaca gccaccactt ctccttggac atcgatgtgg gctgcaccga cctgaacgag 2400 gacctcggag tctgggtcat cttcaagatc aagacccagg acggccacgc gcgcctgggc 2460 aacctggagt tcctcgagga gaagcccctg gtcggtgagg ctctggccag ggtcaagagg 2520 gctgagaaga agtggaggga caagcgcgag aagctcgagt gggagaccaa catcgtttac 2580 aaggaggcca aggagagcgt cgacgccctg ttcgtgaact cccagtacga ccgcctgcag 2640 gccgacacca acatcgccat gatccacgct gccgacaaga gggtgcacag cattcgcgag 2700 gcctacctgc ctgagctgtc cgtgatccct ggtgtgaacg ctgccatctt tgaggagctg 2760 gagggccgca tctttaccgc attctccctg tacgacgccc gcaacgtgat caagaacggt 2820 gacttcaaca atggcctcag ctgctggaac gtcaagggcc acgtggacgt cgaggaacag 2880 aacaaccacc gctccgtcct ggtcgtccca gagtgggagg ctgaggtctc ccaagaggtc 2940 cgcgtctgcc caggccgcgg ctacattctc agggtcaccg cttacaagga gggctacggt 3000 gagggctgtg tgaccatcca cgagatcgag aacaacaccg acgagcttaa gttctccaac 3060 tgcgtggagg aggaggtgta cccaaacaac accgttactt gcaacgacta caccgccacc 3120 caggaggagt acgagggcac ctacacttcc aggaacaggg gctacgatgg tgcctacgag 3180 agcaacagca gcgttcctgc tgactacgct tccgcctacg aggagaaggc ctacacggat 3240 ggccgcaggg acaacccttg cgagagcaac cgcggctacg gcgactacac tcccctgccc 3300 gccggctacg ttaccaagga gctggagtac ttcccggaga ctgacaaggt gtggatcgag 3360 atcggcgaga ccgagggcac cttcatcgtg gacagcgtgg agctgctcct gatggaggag 3420 tag 3423 <210> 42 <211> 1140 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of the chimeric protein TIC844 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 42 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala 595 600 605 Val Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser 770 775 780 His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu 785 790 795 800 Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His 805 810 815 Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly 820 825 830 Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys 835 840 845 Arg Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys 850 855 860 Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln 865 870 875 880 Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His 885 890 895 Ser Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val 900 905 910 Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe 915 920 925 Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn 930 935 940 Gly Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln 945 950 955 960 Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val 965 970 975 Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val 980 985 990 Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu 995 1000 1005 Ile Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu 1010 1015 1020 Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr 1025 1030 1035 Ala Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg 1040 1045 1050 Gly Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp 1055 1060 1065 Tyr Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg 1070 1075 1080 Asp Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro 1085 1090 1095 Leu Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu 1100 1105 1110 Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe 1115 1120 1125 Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 1140 <210> 43 <211> 3423 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic DNA sequence designed for plant expression encoding TIC844_8 with an additional Alanine residue inserted at position 2. <400> 43 atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120 ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180 ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240 gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300 gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360 ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420 ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480 tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540 cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600 cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660 cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720 ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780 acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840 gccgccgtct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900 gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960 ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020 ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080 cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140 atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200 atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260 agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320 accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380 atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440 ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500 ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560 agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620 ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680 ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740 ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800 gaccttgagc gcgcccagaa ggctgtcaat gagctcttca cgtccagcaa tcagatcggc 1860 ctgaagaccg acgtcactga ctaccacatc gaccaagtct ccaacctcgt ggagtgcctc 1920 tccgatgagt tctgcctcga cgagaagaag gagctgtccg agaaggtgaa gcatgccaag 1980 cgtctcagcg acgagaggaa tctcctccag gaccccaatt tccgcggcat caacaggcag 2040 ctcgaccgcg gctggcgcgg cagcaccgac atcacgatcc agggcggcga cgatgtgttc 2100 aaggagaact acgtgactct cctgggcact ttcgacgagt gctaccctac ctacttgtac 2160 cagaagatcg atgagtccaa gctcaaggct tacactcgct accagctccg cggctacatc 2220 gaagacagcc aagacctcga gatttacctg atccgctaca acgccaagca cgagaccgtc 2280 aacgtgcccg gtactggttc cctctggccg ctgagcgccc ccagcccgat cggcaagtgt 2340 gcccaccaca gccaccactt ctccttggac atcgatgtgg gctgcaccga cctgaacgag 2400 gacctcggag tctgggtcat cttcaagatc aagacccagg acggccacgc gcgcctgggc 2460 aacctggagt tcctcgagga gaagcccctg gtcggtgagg ctctggccag ggtcaagagg 2520 gctgagaaga agtggaggga caagcgcgag aagctcgagt gggagaccaa catcgtttac 2580 aaggaggcca aggagagcgt cgacgccctg ttcgtgaact cccagtacga ccgcctgcag 2640 gccgacacca acatcgccat gatccacgct gccgacaaga gggtgcacag cattcgcgag 2700 gcctacctgc ctgagctgtc cgtgatccct ggtgtgaacg ctgccatctt tgaggagctg 2760 gagggccgca tctttaccgc attctccctg tacgacgccc gcaacgtgat caagaacggt 2820 gacttcaaca atggcctcag ctgctggaac gtcaagggcc acgtggacgt cgaggaacag 2880 aacaaccacc gctccgtcct ggtcgtccca gagtgggagg ctgaggtctc ccaagaggtc 2940 cgcgtctgcc caggccgcgg ctacattctc agggtcaccg cttacaagga gggctacggt 3000 gagggctgtg tgaccatcca cgagatcgag aacaacaccg acgagcttaa gttctccaac 3060 tgcgtggagg aggaggtgta cccaaacaac accgttactt gcaacgacta caccgccacc 3120 caggaggagt acgagggcac ctacacttcc aggaacaggg gctacgatgg tgcctacgag 3180 agcaacagca gcgttcctgc tgactacgct tccgcctacg aggagaaggc ctacacggat 3240 ggccgcaggg acaacccttg cgagagcaac cgcggctacg gcgactacac tcccctgccc 3300 gccggctacg ttaccaagga gctggagtac ttcccggaga ctgacaaggt gtggatcgag 3360 atcggcgaga ccgagggcac cttcatcgtg gacagcgtgg agctgctcct gatggaggag 3420 tag 3423 <210> 44 <211> 1140 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acid sequence of the engineered insecticidal chimeric protein TIC844_8 encoded by a synthetic DNA sequence wherein an additional Alanine residue has been inserted at position 2. <400> 44 Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 1 5 10 15 Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly 20 25 30 Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser 35 40 45 Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile 50 55 60 Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala 85 90 95 Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg 100 105 110 Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu 115 120 125 Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala 130 135 140 Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val 145 150 155 160 Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser 165 170 175 Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg 180 185 190 Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val 195 200 205 Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser 210 215 220 Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val 225 230 235 240 Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro 245 250 255 Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro 260 265 270 Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser 275 280 285 Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu 290 295 300 Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp 305 310 315 320 Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu 325 330 335 Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr 355 360 365 Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val 370 375 380 Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro 385 390 395 400 Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro 405 410 415 Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg 420 425 430 Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg 435 440 445 Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile 450 455 460 Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys 465 470 475 480 Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly 485 490 495 Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser 500 505 510 Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr 515 520 525 Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr 530 535 540 Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr 545 550 555 560 Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu 565 570 575 Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val 580 585 590 Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala 595 600 605 Val Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp 610 615 620 Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu 625 630 635 640 Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val 645 650 655 Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro 660 665 670 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser 675 680 685 Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr 690 695 700 Val Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr 705 710 715 720 Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu 725 730 735 Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg 740 745 750 Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu 755 760 765 Trp Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser 770 775 780 His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu 785 790 795 800 Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His 805 810 815 Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly 820 825 830 Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys 835 840 845 Arg Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys 850 855 860 Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln 865 870 875 880 Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His 885 890 895 Ser Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val 900 905 910 Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe 915 920 925 Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn 930 935 940 Gly Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln 945 950 955 960 Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val 965 970 975 Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val 980 985 990 Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu 995 1000 1005 Ile Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu 1010 1015 1020 Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr 1025 1030 1035 Ala Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg 1040 1045 1050 Gly Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp 1055 1060 1065 Tyr Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg 1070 1075 1080 Asp Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro 1085 1090 1095 Leu Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu 1100 1105 1110 Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe 1115 1120 1125 Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135 1140

Claims

서열번호 44 또는 서열번호 40을 포함하는, 조작된 살곤충 단백질.
제1항에 있어서, 상기 조작된 살곤충 단백질은 인시목(order Lepidoptera)의 곤충 종에 대하여 저해 활성을 나타내는, 조작된 살곤충 단백질.
제2항에 있어서, 상기 곤충 종은 스포돕테라(Spodoptera) 및 헬리코베르파(Helicoverpa)로 이루어진 군으로부터 선택되는 속(genus)인, 조작된 살곤충 단백질.
제2항에 있어서, 상기 곤충 종은 헬리코베르파 지아(Helicoverpa Zea) 및 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조작된 살곤충 단백질.
조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 이종 프로모터에 작동가능하게 연결되고, 상기 조작된 살곤충 단백질은 서열번호 44 또는 서열번호 40을 포함하는, 폴리뉴클레오타이드.
조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 폴리뉴클레오타이드는
a. 서열번호 43 또는 서열번호 39을 포함하거나; 또는
b. 서열번호 44 또는 서열번호 40을 포함하는 조작된 살곤충 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오타이드.
서열번호 43 또는 서열번호 39를 포함하는 숙주 세포로서, 상기 숙주 세포는 박테리아 숙주 세포 또는 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 숙주 세포.
제7항에 있어서, 상기 박테리아 숙주 세포는 아그로박테리움(Agrobacterium), 리조비움(Rhizobium), 바실러스(Bacillus), 브레비바실러스(Brevibacillus), 에세리키아(Escherichia), 슈도모나스(Pseudomonas), 클렙시엘라(Klebsiella), 및 에르위니아(Erwinia)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 숙주 세포.
제7항에 있어서, 상기 식물 숙주 세포는 외떡잎식물 및 쌍떡잎식물로 이루어진 식물 군으로부터 선택되는, 숙주 세포.
서열번호 44 또는 서열번호 40을 포함하는 조작된 살곤충 단백질을 포함하는, 곤충 저해 조성물
제10항에 있어서, 조작된 살곤충 단백질과 상이한 적어도 하나의 곤충 저해제를 추가로 포함하는, 곤충 저해 조성물.
제11항에 있어서, 상기 적어도 하나의 곤충 저해제는 곤충 저해 단백질, 곤충 저해 dsRNA 분자, 및 곤충 저해 화학물질로 이루어진 군으로부터 선택되는, 곤충 저해 조성물.
제11항에 있어서, 상기 적어도 하나의 다른 살충 제제는 인시목, 딱정벌레목(Coleoptera), 노린재목(Hemiptera), 동시아목(Homoptera), 또는 총채벌레목(Thysanoptera) 중 하나 이상의 해충 종에 대하여 활성을 나타내는, 곤충 저해 조성물.
a. 서열번호 44 또는 서열번호 40을 포함하는 조작된 살곤충 단백질; 또는
b. 서열번호 43 또는 서열번호 39를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 종자.
인시류 해충을 방제하는 방법으로서, 인시류 해충을 제1항의 조작된 살곤충 단백질의 저해량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 인시류 해충을 방제하는 방법.
제1항의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 형질전환 식물 또는 식물 부위.
인시류 해충을 방제하는 방법으로서, 해충을 제16항의 형질전환 식물 또는 식물 부위에 노출시키는 단계를 포함하되, 상기 식물 또는 식물 부위는 조작된 살곤충 단백질의 인시류 저해량을 발현하는, 인시류 해충을 방제하는 방법.
제16항의 식물, 또는 식물 부위로부터 유래된 상품(commodity product)으로서, 검출가능한 양의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는, 상품.
제18항에 있어서, 상기 상품은 식물 바이오매스, 오일, 밀(meal), 동물 사료, 가루, 플레이크, 겨(bran), 린트, 깍지(hull), 및 가공된 종자로 이루어진 군으로부터 선택되는, 상품.
제5항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 종자를 생성하는 방법으로서,
a. 제5항의 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 적어도 하나의 종자를 심는 단계;
b. 상기 종자로부터 식물을 재배하는 단계; 및
c. 상기 식물로부터 종자를 수확하는 단계로서, 상기 수확한 종자는 제5항의 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 상기 수확하는 단계를 포함하는, 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 종자를 생성하는 방법.
제1항의 조작된 살곤충 단백질을 포함하는 형질전환 식물 세포.
삭제
삭제
삭제