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KR101718645B1 - Cdc7 억제제 - Google Patents

Cdc7 억제제 Download PDF

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KR101718645B1
KR101718645B1 KR1020157024644A KR20157024644A KR101718645B1 KR 101718645 B1 KR101718645 B1 KR 101718645B1 KR 1020157024644 A KR1020157024644 A KR 1020157024644A KR 20157024644 A KR20157024644 A KR 20157024644A KR 101718645 B1 KR101718645 B1 KR 101718645B1
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KR
South Korea
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methyl
fluoropyrimidin
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cancer
isoindolin
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로버트 딘 달리
티모시 앤드류 우즈
Original Assignee
일라이 릴리 앤드 캄파니
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Abstract

본 발명은 CDC7을 억제하며, 따라서 암을 치료하는데 유용할 수 있는 이소인돌리논 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

Description

CDC7 억제제 {CDC7 INHIBITORS}
본 발명은 CDC7을 억제하며 암을 치료하는데 유용할 수 있는 이소인돌리논 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
CDC7은 DNA 복제의 개시 및 S 상 세포 주기 확인점의 조절에서 주요 역할을 하는 세린/트레오닌 키나제이다. CDC7의 상향조절은 다수의 종양 세포주에서 관찰되어 왔다. 또한, 이러한 세포주에서 CDC7의 억제는 세포 주기 정지를 초래하였다. 따라서, CDC7 억제는 암 요법에 유용할 수 있다.
CDC7 억제제는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이소인돌리논 화합물은 또한 관련 기술분야에 공지되어 있다. WO 2005/100351은 니코틴성 아세틸콜린 수용체-반응성 화합물로서 특정 이소인돌리논 화합물을 개시한다.
암 치료를 위한 대안적 CDC7 억제제를 제공할 필요성이 여전히 존재한다. 따라서, 본 발명은 암을 치료하는데 유용할 수 있는 CDC7 억제제를 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
특정 실시양태로서, 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물을 제공한다. 또 다른 특정 실시양태로서, 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2인 화합물을 제공한다. 추가의 특정 실시양태로서, 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1인 화합물을 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 게다가 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 게다가 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 게다가 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 게다가 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2를 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2를 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2를 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1을 제공한다. 본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 암 치료용 의약의 제조에 있어서, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온의 용도를 제공한다.
본 발명은 암 치료용 의약의 제조에 있어서, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2의 용도를 제공한다.
본 발명은 암 치료용 의약의 제조에 있어서, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1의 용도를 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 결정질 형태의 수화물을 제공한다. 본 발명은 또한 22.27과 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 및 23.13 중 하나 이상에서 발생하는 특징적인 피크 (2θ ± 0.2)를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 결정질 형태의 수화물을 제공한다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하며, 이는 대안으로 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로서 식별된다.
본 발명은 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 1인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하며, 이는 대안으로 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로서 식별된다.
특정 실시양태로서, 본 발명은 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물을 제공한다. 추가의 특정 실시양태로서, 본 발명은 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 게다가 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 게다가 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 암의 치료에서 사용하기 위한 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 제공한다. 본 발명은 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 포함하는, 암 치료에서 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 암 치료용 의약의 제조에 있어서, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온의 용도를 제공한다.
본 발명은 암 치료용 의약의 제조에 있어서, (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 있어서 (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온의 용도를 제공한다.
본 발명은 (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 결정질 형태의 수화물을 제공한다. 본 발명은 또한 22.27과 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 및 23.13 중 하나 이상에서 발생하는 특징적인 피크 (2θ ± 0.2)를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 결정질 형태의 수화물을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 방법 및 용도의 바람직한 실시양태를 제공하며, 여기서 암은 유방암, 삼중 음성(triple negative) 유방암, 난소암, 폐암, 결장직장암(colorectal cancer), 혈액암, 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기에서 사용된 바와 같이, 그리고 본 발명의 설명 전체에 걸쳐서, 하기 용어는, 달리 명시되지 않는 한, 하기 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다:
"제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제"는 포유동물, 예를 들어, 인간에게 생물학적 활성제의 전달을 위한 관련 기술분야에서 일반적으로 허용된 매질이다.
"제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 비교적 무독성인, 무기 및 유기 염을 지칭한다.
"유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는, 조직, 시스템, 동물, 포유동물 또는 인간에 대해 목적하는 치료 효과 또는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는, 본 발명의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 본 발명의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 제약 조성물의 양을 의미한다.
용어 "치료", "치료하다", "치료하는" 등은 장애의 진행을 둔화 또는 역전시키는 것을 포함시키고자 하는 것이다. 이들 용어는 또한, 비록 장애 또는 병태가 실제로 제거되지 않더라도 그리고 비록 장애 또는 병태의 진행 자체가 둔화 또는 역전되지 않더라도, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 완화, 개선, 약화, 제거, 또는 감소시키는 것을 포함한다.
본 발명의 화합물은, 예를 들어, 다수의 무기 및 유기 산과 반응하여 제약상 허용되는 염을 형성하는 것이 가능하다. 이러한 제약상 허용되는 염 및 이들을 제조하는 통상의 방법론은 관련 기술분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)]; [S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts, "Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977] 참조.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 사용하여 제약 조성물로 제제화되고 다양한 경로에 의해 투여된다. 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 투여용이다. 이러한 제약 조성물 및 이들을 제조하는 방법은 관련 기술분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Co., 2005)] 참조.
실제로 투여되는 본 발명의 화합물의 양은 치료되는 병태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 본 발명의 화합물, 개별 환자의 연령, 체중, 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 포함한, 관련 상황 하에 의사에 의해 결정될 것이다. 1일 투여량은 통상 약 1 내지 약 1000 mg의 범위 내에 해당된다. 일부 경우에, 전술한 범위의 하한치 미만의 투여량 수준이 아주 적당할 수 있으며, 한편 다른 경우에 훨씬 더 많은 용량이 사용될 수 있다. 투여량 수준은 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차뿐만 아니라, 이하에 제조예 및 실시예에 기재된 것들에 의해서도 제조될 수 있다. 기재된 경로 각각에 대한 특정 합성 단계를 상이한 방식으로 조합하여 본 발명의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제조할 수 있다.
시약 및 출발 물질은 일반적으로 통상의 기술자에게 용이하게 입수가능하다. 다른 것들은 유기 및 헤테로시클릭 화학의 표준 기법, 통상의 기술자에게 공지된 기법, 및 임의의 신규 절차를 포함한 하기의 실시예에 기재된 절차에 의해 제조될 수 있다. 하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 추가로 예시하는 것이다. 본원에 예시된 화합물은 시믹스 드로우 버전(Symyx Draw Version) 3.2, 시믹스 드로우 버전 4.0, 또는 IUPACNAME ACDLABS를 사용하여 명명되고 번호가 매겨졌다.
개별 이성질체, 거울상이성질체, 또는 부분입체이성질체는 선택적 결정화 기법 또는 키랄 크로마토그래피와 같은 방법에 의해 화합물의 합성에서 임의의 편리한 시점에서 통상의 기술자에 의해 분리 또는 분해될 수 있다 (예를 들어 [Enantiomers, Racemates, and Resolutions (J. Jacques, et al., John Wiley and Sons, Inc., 1981)] 참조). 표기 "이성질체 1"은 키랄 크로마토그래피로부터 맨먼저 용리되는 화합물을 지칭한다. 표기 "이성질체 2"는 키랄 크로마토그래피로부터 두번째로 용리되는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 하기 용어는 명시된 의미를 갖는다: "ADP"는 아데노신 디포스페이트를 지칭하고; "ATP"는 아데노신 트리포스페이트를 지칭하고; "Balb/c"는 알비노를 지칭하고; "BCA"는 비신코닌산을 지칭하고; "DMSO"는 디메틸 술폭시드를 지칭하고; "DTT"는 디티오트레이톨을 지칭하고; "EDTA"는 에틸렌디아민테트라아세트산을 지칭하고; "ee"는 거울상이성질체 과잉률을 지칭하고; "Ex"는 실시예를 지칭하고; "FBS"는 소 태아 혈청을 지칭하고; "FP"는 형광 평광을 지칭하고; "GAPDH"는 글리세르알데히드 3-포스페이트 데히드로게나제를 지칭하고; "HEC"는 히드록실 에틸 셀룰로스를 지칭하고; "HEPES"는 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산을 지칭하고; "hr"은 시간 또는 시간들을 지칭하고; "IC50"은 작용제에 대해 가능한 최대 억제 반응의 50%를 초래하는 그 작용제의 농도를 지칭하고; "IVTI"는 생체내 표적 억제를 지칭하고; "MCM2는 미니염색체 유지 단백질을 지칭하고; "min"은 분 또는 분들을 지칭하고; "PBS"는 인산염 완충 식염수를 지칭하고; "P.O."는 경구 투여를 지칭하고; "Prep"는 제조를 지칭하고; "PVDF"는 폴리비닐리딘 디플루오라이드를 지칭하고; "RPMI"는 로즈웰 파크 메모리얼 인스티튜트(Roswell Park Memorial Institute)를 지칭하고; "RNase"는 리보뉴클레아제를 지칭하고; "RuPhos"는 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시디페닐을 지칭하고; "Rt"는 체류 시간을 지칭하고; "SDS-Page"는 소듐 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 지칭하고; "SCX"는 강한 양이온 교환을 지칭하고; "SFC"는 초임계 유체 크로마토그래피를 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭한다.
제조예 1
메틸 5-브로모-2-아이오도벤조에이트
Figure 112015087619551-pct00001
5-브로모-2-아이오도벤조산 (1998 g, 6.11 mol)을 메탄올 (13 L) 중 황산 (100 mL)의 20℃ 용액에 조금씩 첨가하였다. 현탁액을 24시간 동안 환류 하에 가열한 다음에, 20℃로 냉각하고 용매를 감압 하에 제거하였다. 메틸-tert-부틸 에테르와 얼음물의 1:1 혼합물 (20 L)에 붓고 상을 분리하였다. 수성 상을 메틸-tert-부틸 에테르 (1.5 L)로 추출하고, 유기 상을 합하고 수성 0.2 M NaOH (5 L)로 세척하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조(crude) 생성물을 40-45℃ 석유 에테르 (10 L)에 용해시키고, 규조토의 패드를 통해 여과하고 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 석유 에테르 (5 L)에 용해시키고 -50℃로 냉각하고, 제1 크롭(crop) 고체를 여과하고, 고체를 아주 차게 냉각된(ice cold) 석유 에테르로 세척하였다. 모액을 증발시키고, 고체를 석유 에테르 (1 L)에 재용해시키고, -50℃로 냉각하고, 제2 크롭을 여과하였다. 제1 및 제2 크롭을 합하고 옥외에서 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체 (1880 g, 90%)로서 수득하였다.
제조예 2
메틸 5-브로모-2-에틸벤조에이트
Figure 112015087619551-pct00002
디에틸 아연 (3050 mL, 3.05 mol, 1 M 헥산)을 3시간에 걸쳐 메틸 5-브로모-2-아이오도벤조에이트 (1876 g, 5.50 mol) 및 (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐(II) 클로라이드 (40 g, 0.05 mol)의 5℃ 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간에 걸쳐 60-65℃로 가열하고 추가의 2시간 동안 교반한 다음에, 10-15℃로 냉각하고 아주 차게 냉각된 수성 1 M HCl (10 L)에 부었다. 상을 분리하고, 수성 층을 메틸-tert-부틸 에테르 (2 × 10 L)로 추출하고, 유기 상을 합하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 에틸 아세테이트 (400 mL)에 용해시키고 석유 에테르 (8 L)를 첨가한 다음에, 16시간 동안 15-20℃에서 방치하고 실리카 겔의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트/ 석유 에테르 (1:20, 8 L)로 세척하고 여액을 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 담황색 오일 (1306 g, 96%)로서 수득하였다. ES/MS m/e: (79Br/81Br) 243/245 (M+H).
제조예 3
메틸 5-브로모-2-(1-브로모에틸)벤조에이트
Figure 112015087619551-pct00003
N-브로모숙신이미드 (1090 g, 6.12 mol) 및 2,2'-아조-비스-이소부티로니트릴 (11.4 g, 0.069 mol)을 사염화탄소 (7 L) 중 메틸 5-브로모-2-에틸벤조에이트 (1296 g, 5.33 mol)의 20℃ 용액에 첨가하였다. 4시간 동안 환류 하에 가열하고, 20-30℃로 냉각하고 물 (10 L)로 세척하고, 수성 상을 디클로로메탄 (5 L)으로 추출하고, 유기 층을 합하고, 물 (10 L), Na2SO3 (5 L) 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 담황색 고체 (1791 g, 104% 조)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 241 (M-HBr).
제조예 4
6-브로모-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00004
고체 메틸 5-브로모-2-(1-브로모에틸)벤조에이트 (1724 g, 5.35 mol)를 메탄올 (12 L) 중 시판되는 (R)-1-(4-메톡시페닐)에탄아민 (베팜(BePharm), WZG111219-071; 974 g, 6.44 mol) 및 트리에틸아민 (1710 mL, 12.26 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 67℃에서 10시간 동안 가열한 다음에 감압 하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (5 L)와 수성 1 N HCl (10 L)에 분배하고, 상을 분리하고, 유기 상을 수성 1 N HCl (5 L), 포화 중탄산나트륨, 포화 수성 염화나트륨으로 다시 세척한 다음에, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 암적색 오일을 메틸-tert-부틸 에테르 (750 mL)에 용해시키고 석유 에테르 (3 L)를 강력 교반하면서 첨가하였다. 고체를 여과하고, 메틸-tert-부틸 에테르 /석유 에테르 (1:8), 석유 에테르로 세척하고, 옥외에서 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체 (1014 g, 52%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 360 (M+H).
제조예 5
2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00005
6-브로모-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-이소인돌린-1-온 (64 g, 177 mmol), 1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (67 g, 295 mmol), 탄산칼륨 (70 g, 506 mmol), (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐(II) 클로라이드 (9 g, 11 mmol), 디옥산 (800 mL), 및 물 (212 mL)을 질소 하에 합하고 16시간 동안 70-75℃로 가열하였다. 1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (15 g, 54 mmol)을 첨가하고 2시간 동안 80-85℃로 가열하였다. 200 mL로 감압 하에 농축하고, 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (500 mL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 고체를 여과하였다. 고체과 유기 층을 합하고 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고 실리카 겔의 패드를 통해 여과하였다. 실리카겔 패드를 디클로로메탄/에틸 아세테이트 (1:0) 그리고 이어서 (2:1)로 세척하고 감압 하에 증발 건조시켰다. 고체를 25-30℃에서 30분 동안 석유 에테르/에틸 아세테이트의 2:1 혼합물 (600 mL)에서 슬러리화하고 여과하여 고체를 수집하여 표제 화합물을 회백색 고체 (68 g, 89%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 432 (M+H).
제조예 6
3-(6-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00006
소듐 비스(트리메틸실릴)아미드 (210 mL, 210 mmol, 1 M THF)를 테트라히드로푸란 (620 mL) 중 2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 (62 g, 144 mmol) 및 4,6-디클로로-5-플루오로피리미딘 (31 g, 186 mmol)의 아주 차게 냉각된 현탁액에 60분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 0℃에서 60분 교반한 다음에 혼합물을 에틸 아세테이트 (1 L) 및 물 (1 L)로 희석하였다. 유기 상을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 1:1 석유 에테르/에틸 아세테이트에 용해시키고, 실리카 겔의 패드를 통해 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 황색 발포체 (83 g, 103%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 562 (M+H).
제조예 7
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00007
트리에틸아민 (40 mL, 287 mmol) 및 탄소상 20% 수산화팔라듐 (14 g)을 에틸 아세테이트 (2.1 L) 중 3-(6-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 (80 g, 142 mmol)의 용액에 첨가하고 16시간 동안 20-25℃에서 수소 기체 (30 psi)로 수소화하였다. 5 그램 3-(6-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 이용하여 반응 조건을 반복하였다. 두 반응물을 합하고 규조토를 통해 여과하고 증발시켜 표제 화합물을 황색 발포체 (77 g, 102%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 528 (M+H).
제조예 8
6-브로모-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00008
6-브로모-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-이소인돌린-1-온 (2.814 mmol, 1.014 g)을 테트라히드로푸란 (28 mL)에 용해시켰다. 4-클로로-5-플루오로-피리미딘 (5.628 mmol, 518 μL)을 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 포타슘 헥사메틸디실라지드 (4.502 mmol, 9 mL, 톨루엔 중 0.5 M)를 7분에 걸쳐 첨가하고 1시간 동안 교반한 다음에, 주위 온도로 가온하고 90분 동안 교반하였다. 메틸-tert-부틸 에테르 및 수성 1 M HCl에 붓고, 물을 첨가하고 층을 분리하였다. 수성 1 N HCl로 세척하고, 여과하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 실리카겔의 2 cm 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 증발시켜 오일을 수득하였다. 실리카겔 상에서 20-40% 에틸 아세테이트/헥산을 이용하여 정제하여 표제 화합물을 발포체 (547 mg, 43%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 456 (M+H).
실시예 1
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00009
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 (65 g, 123 mmol)을 트리플루오로아세트산 (600 mL)에 용해시키고 16시간 동안 75-80℃로 가열하였다. 감압 하에 증발시키고 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (500 mL)로 희석하였다. 수성 층의 pH를 수성 6 N NaOH를 이용하여 8-9로 조정하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 × 500 mL)로 추출하고, 유기 층을 합하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 생성물을 실리카겔 상에서 50-100% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 이용하여 크로마토그래피하였다. 생성물 분획을 합하고 감압 하에 증발시켜 황색 발포체 (33 g, 87% 조)를 수득하였다. 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-(1-테트라히드로피란-2-일피라졸-4-일)이소인돌린-1-온을 이용하여 반응 조건을 반복하고 생성물 (10 g, 18.9 mmol)을 합하였다. 합해진 생성물을 메탄올에 용해시키고 20시간 동안 15-20℃에서 실라본드(SiliaBond)® 티올(Thiol) (실라 MetS® 티올)로 교반하고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 77% ee를 갖는 표제 화합물 (38 g, 87%)을 수득하였다.
실시예 2
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2
Figure 112015087619551-pct00010
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온의 부 거울상이성질체 (이성질체 1)로부터 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 (38 g, 123 mmol)의 주 거울상이성질체 (이성질체 2)를 제조용 키랄 HPLC 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC) (칼럼: 키랄팩(Chiralpak) OJ-H (5 μ), 30 × 250 cm; 용리액: CO2 중 15% 이소프로판올, 유량 120 g/min (UV 214 nm에서))에 의해 분리하였다. 제2 용리 이성질체 (이성질체 2)는 표제 화합물 (17 g, 45%, >98% ee)이었다. 키랄 분석 (칼럼: 키랄팩 OJ-H (5 μm) 4.6 × 250 mm, 용리액: CO2 중 20% 이소프로판올, 유량: 3 mL.min (UV 214 nm에서), Rt = 5.78분). ES/MS m/z: 310 (M+H).
실시예 3
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온
Figure 112015087619551-pct00011
RuPhos 팔라듐(II) 펜에틸아민 클로라이드 (60 μmol, 43 mg), 디옥산 (0.5 mL) 및 포타슘 tert-부톡시드 (1 M 테트라히드로푸란, 60 μmol, 60 μL)를 질소 하에 합하고, 혼합물을 0.5분 동안 초음파처리하였다. Ruphos 촉매 혼합물을 6-브로모-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-2-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-이소인돌린-1-온 (544 mg, 1.192 mmol), tert-부틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-카르복실레이트 (1.79 mmol, 526 mg), 1,4-디옥산 (6 mL), 탄산나트륨 (3.6 mmol, 2.4 mL 1.5 M 수성)을 함유하는 질소 하에 반응 용기에 첨가하고 30분 동안 150℃에서 마이크로파에서 가열하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 수성 1.5 M 탄산나트륨, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 규조토를 통해 여과하고, 증발시켜 연한 황색 잔류물을 얻었다. 잔류물을 아니솔 (1 mL) 및 트리플루오로아세트산 (7 mL)에 용해시키고 4시간 동안 80℃로 가열한 다음에, 18시간 동안 70℃로 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 메탄올에 용해시키고, 10 g SCX 칼럼 상에 로딩하고, 메탄올 (100 mL)로 세척하고, 메탄올 중 2 M 암모니아로 용리시키고 증발시켰다. 40 g 실리카겔 상에서 1-8% 메탄올/디클로로메탄의 구배를 이용하여 정제하여 표제 화합물을 백색 발포체 (279 mg, 76%)로서 수득하였다. ES/MS m/z: 310 (M+H).
실시예 4
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2, 수화물
Figure 112015087619551-pct00012
3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 이성질체 2 (9.6 g, 0.03 mol)를 물 (50 mL) 중 2% 아세톤에 현탁시키고 혼합물을 1.5시간 동안 50℃에서 교반하였다. 아세톤 (1 mL)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 65℃로 가열한 후에 12시간에 걸쳐 실온으로 서서히 냉각하였다. 고체를 여과하고 4 부피의 물로 세정하였다. 고체를 6시간 동안 50℃에서 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (8.6g, 90%)을 수득하였다.
X-선 분말 회절
결정질 고체의 XRD 패턴을 35 kV 및 50 mA에서 작동하는, CuKα 공급원 (λ=1.54060 Å) 및 반텍(Vantec) 검출기가 장착된, 브루커(Bruker) D4 인데버(Endeavor) X-선 분말 회절계 상에서 얻었다. 샘플을 2θ로 0.0087°의 단계 크기 및 0.5초/단계의 스캔 속도로, 그리고 0.6 mm 발산(divergence), 5.28 mm 고정된 항-스캐터(anti-scatter), 및 9.5 mm 검출기 슬릿으로, 2θ로 4 내지 40°로 스캔하였다. 건조 분말을 석영 샘플 홀더에 패킹하고 유리 슬라이드를 사용하여 평활면을 얻었다. 결정학 분야에서, 임의의 주어진 결정 형태의 경우, 회절 피크의 상대 강도는 결정 형태학 및 습성과 같은 인자로부터 생긴 바람직한 배향으로 인해 다를 수 있다는 것이 주지되어 있다. 바람직한 배향의 효과가 존재하는 경우, 피크 강도가 변경되지만, 다형체의 특징적인 피크 위치는 변화되지 않는다. 더욱이, 결정학 분야에서, 임의의 주어진 결정 형태의 경우 각 피크 위치가 약간 다를 수 있다는 것이 또한 주지되어 있다. 예를 들어, 피크 위치는 샘플이 분석되는 온도 또는 습도의 변화, 샘플 변위(displacement), 또는 내부 표준의 존재 또는 부재로 인해 이동할 수 있다. 본 건에서, 2θ로 ±0.2의 피크 위치 가변성은 명시된 결정 형태의 명백한 식별을 저해함이 없이 이들 가능한 변화를 감안할 것이다. 다른 것과 구별되는 피크 (° 2θ의 단위로), 전형적으로 더 현저한 피크의 임의의 독특한 조합을 기준으로 결정 형태를 확인할 수 있다. 주위 온도 및 상대 습도에서 수집된, 결정 형태 회절 패턴을 8.85 및 26.77도 2-세타에서 NIST 675 표준 피크를 기준으로 조정하였다.
실시예 4의 제조된 샘플은 이하에 표 1에 기재된 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값)를 갖는 것으로서 CuKa 방사선을 사용하는 XRD 패턴을 특징으로 한다. 구체적으로 패턴은 0.2도의 회절각을 허용하면서 22.27에서의 피크를 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 및 23.13으로 이루어진 군으로부터 선택된 피크 중 하나 이상과 조합하여 함유한다.
[표 1]
실시예 4의 X-선 분말 회절 피크
Figure 112015087619551-pct00013
실시예 5
(3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 디히드로클로라이드, 아세토니트릴 용매화물
Figure 112015087619551-pct00014
0.25 M HCl (1 mL)을 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 (실시예 3, 0.084 mg, 0.27 mmol)에 첨가하고 샘플을 초음파처리하였다. 모든 물질이 가용성이었다. 혼합물을 증발 건조시켜, 오일상 잔류물을 생성시켰다. 아세토니트릴 (2 mL)을 첨가하고 용액은 황색으로 되었고 결정이 형성되기 시작하였다. 단일 결정 X-선 회절용으로 단일 결정을 단리하였다. 샘플은 디히드로클로라이드 염의 아세토니트릴 용매화물인 것으로 측정되었다. 염소 원자는 충분한 변칙 산란을 제공하여 분자의 절대 입체화학을 단일 결정 X-선 회절에 의해 결정될 수 있도록 하였다.
C18H17Cl2FN6O의 투명 무색 프리즘-유사 견본 (근사치 차원 0.180 mm x 0.200 mm x 0.220 mm)을 X-선 결정학상 분석용으로 사용하였다. 총 3318개의 프레임을 수집하였다. 총 노출 시간은 1.84시간이었다. 프레임을 내로우-프레임(narrow-frame) 알고리즘을 사용하는 브루커(Bruker) SAINT 소프트웨어 패키지로 통합하였다. 사방정계 단위 셀(unit cell)을 사용한 데이터의 통합은 66.30°의 최대 θ각 (0.84 Å 분해)에 대한 총 13411개의 반사를 산출하였고, 그 중 3304개는 독립적 (평균 중복 4.059, 완성도 = 97.8%, Rint = 7.25%, Rsig = 6.30%)이고 2885개 (87.32%)는 2σ(F2) 초과이었다. a = 8.0583(2) Å, b = 36.3803(9) Å, c = 6.96840(10) Å, 부피 = 2042.88(8) Å3의 최종 셀 상수는, 11.24° < 2θ < 132.0°로 20 σ(I) 초과의 6295개 반사의 XYZ-무게중심의 정밀화(refinement)를 기준으로 하였다. 멀티-스캔 방법 (SADABS)을 사용하여 흡수 효과에 대해 데이터를 수집하였다. 최대 겉보기 투광에 대한 최소의 비는 0.761이었다. 계산된 최소 및 최대 투광 계수 (결정 크기 기준)는 0.5466 및 0.6033이었다.
식 단위 C18H17Cl2FN6O에 대해 Z = 4인, 공간 군 P 21 21 2를 사용하여, 브루커 SHELXTL™ 소프트웨어 패키지를 사용하여 구조를 해결하고 정밀화하였다. 255개 변수를 갖는 F2에 대한 최종 이방성 풀-매트릭스 최소-제곱법(full-matrix least-squares) 정밀화는 관찰된 데이터의 경우 R1 = 4.27%에서 그리고 모든 데이터의 경우 wR2 = 10.80%에서 수렴되었다. 적합도(goodness-of-fit)는 1.066이었다. 최종 차이 전자 밀도 합성에서의 최대 피크는 0.295 e-/Å3이고 최대 홀(hole)은 -0.204 e-/Å3이고 RMS 편차는 0.056 e-/Å3이었다. 최종 모델을 기준으로 하여, 계산된 밀도는 1.376 g/㎤ 및 F(000), 872 e-이었다. 절대 구조 파라미터는 0.0(0)로 정밀화되었고, 이는 분자의 절대 구조가 표제 화합물과 일치됨을 나타내는 것이다. 아세토니트릴 용매 분자는 다소 무질서화되고 따라서 등방적으로 정밀화되었지만, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온 및 염화물 이온은 이방적으로 정밀화되었다. 실시예 5에 대한 이러한 결과는 분자의 절대 입체화학이 R 거울상이성질체임을 확립하는 것이며, 그로 인해 또한, 실시예 5가 유래되는, 실시예 3의 입체화학을 확립하는 것이다.
게다가, 실시예 2 및 3을 동일한 조건을 사용하여 키랄 HPLC 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC)를 통해 분석하여 각각의 실시예에 대해 존재하는 거울상이성질체를 측정하였다. (칼럼: 키랄셀(Chiralcel) OJ-H 4.6 mm X 150 mm, CO2 중 20% 이소프로판올, 5 mL/min, UV 225 nm). 실시예 2 및 실시예 3의 경우, 이성질체 1은1.53'에서 용리되고 이성질체 2는 1.81-1.84'에서 용리된다. 본 분석에서, 실시예 2는 100% ee를 갖고 실시예 3은 96.4% ee를 갖는다. 이들 결과는 실시예 2 및 실시예 3 둘 다에 존재하는 거울상이성질체가 이성질체 2임을 나타내는 것이다. 실시예 3에 대한 절대 입체화학은 상기 제공된 바와 같이 R 거울상이성질체이고, 실시예 2 및 3은 둘 다 이성질체 2로서 키랄 HPLC SFC에 의해 식별되기 때문에, 따라서, 실시예 2에 대한 절대 입체화학은 또한 R 거울상이성질체이다. 더욱이, 실시예 2를 사용하여 실시예 4를 제조하기 때문에, 실시예 4에 대한 절대 입체화학은 R 거울상이성질체이다.
H1299 세포에서 인산화 MCM2의 검출을 위한 아큐멘(Acumen)® 영상화 검정
아큐멘® eX3을 사용하여 화합물이 세린53에서 내인성 인산화 MCM2 (pMCM2-S53)의 형성에 미치는 영향을 측정하였다. CDC7에 의한 MCM2의 인산화는 특이적 항-pMCM2-S53 항체를 사용하여 측정하고 아큐멘® eX3에 의해 형광 태그부착된 2차 항체로 정량화하여 세포에서 CDC7 활성을 모니터링하였다. 세린 53에서 MCM2의 인산화는 CDC7 억제와 연관성이 있는 것으로 알려져 있다.
H1299 세포 (ATCC #CRL-5803)를 10% FBS로 보충된 RPMI-1640 (히클론(Hyclone) SH30809.01) 성장 배지에서 유지하였다. 세포를 표준 세포 배양 절차를 사용하여 수확한 다음에 Vi-세포 XR 세포 생존 분석기(Vi-Cell XR Cell Viability Analyzer) (베크만 계수기(Beckman Counter))를 사용하여 계수하였다. 100 μL의 성장 배지 중 3000-6000 H1299 세포를 바이오코트(Biocoat) 폴리-D-리신 96-웰 흑색/투명 플레이트와 편평-바닥 바이오코트(BioCoat)™ 멀티웰(Multiwell) (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson)) 세포 배양 플레이트 356640의 각각의 웰에 도말하고 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다.
세포를 0.6% DMSO를 함유하는 배지에서 희석된 시험 화합물 (50 μL/웰)로 처리하고 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 각각의 웰에 37% 포름알데히드 스톡으로부터 PBS로 희석된 7.4% 포름알데히드 (150 μL)를 첨가하고 플레이트를 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 포름알데히드를 제거하고 냉각 메탄올 (100 μL)을 첨가하였다. 플레이트를 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하여 세포를 투과처리하였다. 플레이트를 100 μL/웰의 PBS로 3 × 세척하였다. 플레이트를 2% BSA로 보충된 PBS 중 50 μL/웰의 1:1000 희석된 항 pMCM2-S53 항체 (NP_004517.2 (PubMed 서열 데이터베이스 참조), 토끼 폴리클로날 항체 생산을 위한 표준 90-일 토끼 면역화 프로토콜 (써모 사이언티픽 피어스 안티바디즈(Thermo Scientific Pierce Antibodies), 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))을 통해, 말레이미드 활성화를 사용한 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin)에 대한 컨쥬게이션을 사용하여 생성)로 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS (4 × 100 μL/웰)로 세척하고 PBS 중 100 μL/웰의 1:1000 희석된 염소 항-토끼 IgG 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 2차 항체 (인비트로겐(Invitrogen) CA11304s)에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS (4 × 100 μL/웰)로 세척하였다. RNase (50 ㎍/ml)를 함유하는 PBS (50 μL/웰) 및 프로피듐 아이오다이드 (15 μM)를 첨가하고 플레이트를 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 흑색 시일(black seal)로 밀봉하고 알렉사 플루오르 488 및 프로피듐 아이오다이드 각각에 대해 광학 필터 500-530 나노미터 및 575-640 나노미터를 사용하여 아큐멘® eX3 (TTP 랩테크(LABTECH)) 상에서 판독하였다. pMCM2-S53 포지티브 세포의 수를 각각의 웰에 대한 총 세포로 정규화하고 온-플레이트(on-plate) 대조군과 비교하여 퍼센트 억제로서 계산하였다. 4 파라미터 로지스틱 방정식에 대한 10-점 화합물 농도로부터의 억제 퍼센트를 생성시켜 IC50 값을 유도하였다.
본 발명의 범주내의 화합물을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 검정에서 시험하였다. 실시예 2의 화합물은 0.261 μM ± 0.004 (n=2)의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 실시예 3의 화합물은 0.29 μM의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 실시예 4의 화합물은 0.29 μM ± 0.0813 (n=2)의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 이들 결과는 실시예 2, 3 및 4가 H1299 세포 검정에서 pMCM2-S53을 억제하고 따라서 CDC7 억제제임을 나타내는 것이다.
CDC7/DBF4 시험관내 효소 검정
트랜스크리너(Transcreener)™ 키나제 ADP-FP 검정을 사용하여 CDC7/DBF4 키나제에 대한 화합물 IC50 값을 측정하였다. 키나제 ADP-FP 검정은 키나제 반응에서 형성된 ADP의 농도를 측정함으로써 화합물 억제제의 존재 하에 CDC7/DBF4의 활성을 평가하였다. 키나제 반응은 96 웰 검정 플레이트에서 25 마이크로리터 반응 부피를 사용하여 수행하였다. ADP-FP 검정의 경우, 시약을 첨가하여 HEPES (25 mM) pH 7.5, 0.03% 트리톤(Triton)® X-100, 염화마그네슘 (10 mM), DTT (1 mM), MCM2 (400 nM) (아미노산 1-209, CDC7/DBF4의 생리학상 기질), 스페르민 (4 mM), CDC7/DBF4 (2,640 ng/mL) (곤충 세포에서 발현되는 재조합 인간 CDC7/DBF4), 4% 디메틸 술폭시드 및 화합물의 연속 희석물 (20,000 nM에서 1 nM로 1:3 희석됨)의 최종 반응 조건을 얻었다. 효소 및 기질을 화합물에 이어서 ATP에 5 μM로 첨가하여 반응을 시작하였다. 플레이트를 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ADP-FP 포맷의 경우 HEPES (52 mM) pH 7.5, EDTA (20 mM), 염화나트륨 (0.4 M), 폴리옥시에틸렌글리콜 도데실 에테르 (0.02%) (BRIJ-35™), 항-ADP 항체 (10 ㎍/mL), 및 ADP (4 nM) 트랜스크리너® ADP 알렉사 플루오르® 633 추적자를 함유하는 25 마이크로리터의 켄칭 검출 시약을 첨가하고 반응을 켄칭하였다. 플레이트를 1시간 동안 인큐베이션한 다음에, Ex620nm 및 Em688nm 파장의 편광 필터를 사용하는 형광 편광 모드에서 왈락 엔비전(Wallac EnVision)™ 2104 멀티라벨 리더(Multilabel Reader) (퍼킨엘머(PerkinElmer))에서 판독하였다. 밀리편광 (mP) 미가공(raw) 데이터는 5 μM ADP에서 시작하여 0.0025 μM ADP로 반응 완충제 중 1:1 연속 희석하여 제조된 ADP/ATP 표준 곡선을 이용하여 마이크로몰 ADP로 전환시켰다. 각각의 화합물의 IC50 값은 온-플레이트 대조군에 대한 μM ADP 반응 데이터로부터 계산된 퍼센트 억제 데이터를 사용하여 유도되었다 (DMSO 대 100 mM EDTA 억제 효소 대조군). 그 다음에 퍼센트 억제 및 10-점 화합물 농도를 4-파라미터 로지스틱 방정식으로 적합화하였다.
본 발명의 범주내의 화합물을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 검정에서 시험하였다. 실시예 2의 화합물은 3.7 nM의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 실시예 3의 화합물은 4.5 nM의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 실시예 4의 화합물은 3.3 nM ± 0.634 (n=2)의 IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 이들 결과는 실시예 2, 3 및 4가 시험관내 효소 검정에서 ADP 생산을 억제하고 따라서 CDC7 억제제임을 나타내는 것이다.
시험관내 항증식 검정
실시예 2의 시험관내 항-증식 활성을 ATCC, HSRRB, RIKEN 또는 ECACC로부터 구입한 결장직장, 유방, 폐, 및 혈액 (백혈병)의 114개 암 세포주의 패널에 대한 세포 수 계수 검정에 의해 측정하였다. 세포를 공급처의 설명서에 의해 배지에서 배양하고 유지하였다. 각각의 세포주의 세포 배가(doubling) 시간을 측정하고 모든 세포주는 마이코플라즈마 오염이 없었다. 세포를 96-웰 플레이트에서 밤새 배양한 후에 항-증식 활성 검정을 위한 화합물을 첨가하였다. 100 μL 배지 중의 4개의 상이한 세포 밀도를 갖는 세포 배양물을 시딩하고 그의 배가 시간 및 세포 크기를 고려함으로써 각각의 세포주에 대해 최적 세포 시딩 밀도를 주의 깊게 평가하였다. 그 다음에 두 배가 시간의 말미에 약 90% 전면성장을 제공한 시딩 밀도를 화합물 시험용으로 선택하였다. 스타우로스포린을 기준으로서 1:3 희석물로 사용하였다. 실시예 2를 4 mM DMSO 스톡으로서 제조하고 배양 배지에 1:2 비로 희석하였다. 화합물을 함유하는 50 μL의 배양 배지를 밤새 96-웰 배양물의 각각의 웰에 첨가하여 목적하는 최종 농도 20, 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.312, 0.156, 0.078 μM 및 DMSO 대조군을 생성시켰다. 각각의 처리 농도는 복제 웰을 가졌다. 세포를 화합물의 존재하에 두 배가 시간 동안 추가로 배양하였다. 처리 시간의 말미에, 세포를 형태학적 변화, 예컨대 세포사 또는 겉보기 세포 크기 증가에 대해 맨먼저 현미경으로 검사하였다. 각각의 복사 웰 중의 세포를 개별적으로 수집하였다. 부착 세포를 맨먼저 트립신처리에 의해 수확하였다. 수확된 세포를 성장 배지에 재-현탁시키고 세포 계수기를 사용하여 계수하였다.
본 발명의 범주내의 화합물을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 검정에서 시험하였다. 이하에 표 2에 제공된 바와 같이, 실시예 2의 화합물은 약리학상 적절한 농도 (<8 μM)에서 시험된 114개 암 세포주의 대다수에 대해 유의한 항-증식 활성을 나타냈다. 더욱이, 약 10%의 암 세포주는, 2 배가 시간 처리 기간 내에 이들 암 세포에 대해 발생하는 대규모의 세포사에 의해 입증된 바와 같이, 화합물에 대해 특정 민감도를 나타냈다. 대부분의 이들 특히 민감성 암 세포주는 결장직장암 및 백혈병 암으로부터 유래하였다. 민감도는 생체내 이종이식 종양 모델, 에컨대 Colo-205 및 SW620 (이하에 세부 사항 참조)에서 추가로 확인되었다. 이 데이터는실시예 2가 시험된 시험관내 세포주에서 광범위한 항증식 활성을 가짐을 나타내는 것이다.
[표 2]
실시예 2의 화합물의 광범위한 시험관내 항암 활성
Colo-205 이종이식 종양 모델을 이용한 MCM2-S40/41 인산화 (pMCM2-S40/41)에 대한 CDC7 생체내 표적 억제 (IVTI)
인간 colo-205 결장직장암 세포 (ATCC#CCL-222)를 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 유지하였다. 대수증식기 성장 세포를 수확하고, 세척하고, 무혈청 배지와 마트리겔(Matrigel)™ (벡톤 디킨슨)의 1:1 혼합물에 재현탁시켰다. 이들을 balb/c (nu/nu) 암컷 마우스 (체중이 20 내지 25 그램/마우스인 6-8주)에서의 피하 종양 이종이식 모델로서 뒤옆구리에 5 × 106 세포/동물/부위로 피하 주사하였다. 동물을 평균 종양 부피 150 내지 250 mm3 마우스로 무작위화하였다 (v = l x w x 0.536, 여기서 l = 더 큰 측정 직경 및 w = 더 작은 수직 직경). 표준 1% HEC w/v, P80 0.25% v/v, 소포제(Antifoam) 1510-US 0.05% v/v 제제 중 P.O.에 의해 화합물을 투여하였다. 종양을 투여-후 4시간에 수확하고 프로테아제 억제제 (로슈(Roche)) 및 포스파타제 억제제 (로슈 또는 시그마(Sigma))를 함유하는 용해 완충제 (인비트로겐) 중 균질화에 의해 파열시켰다. 종양 용해물로부터의 단백질 농도를 BCA 검정 (써모 사이언티픽)에 의해 측정하고 5 내지 10 ㎍의 단백질을 표준 SDS-PAGE (바이오라드(BioRad) 크리테리온(Criterion)™ 겔) 또는 (인비트로겐 이페이지(ePage)™ 겔)에 의해 분리하였다. 그 다음에 단백질을 PVDF 또는 니트로셀룰로스 막에 이송하고 표준 웨스턴 블롯 프로토콜 및 제조업체에 따라 pMCM2-S40/41에 대한 항체 (베틸 래보러터리즈(Bethyl Laboratories) #A300-788A) 또는 GAPDH (피츠제랄드(Fitzgerald) 10R-G109A 또는 아브캄(Abcam) ab9485)로 검출하였다. pMCM2-S40/41의 수준을 측정하고 리코르(Licor) 아니면 FUJI 영상장치(imager)에 의해 정량화하고 총 GAPDH 수준으로 정규화하였다. pMCM2-S40/41 밴드 강도의 퍼센트 변화 억제를 최대 신호전달로서 GAPDH로 정규화된 비히클 처리 대조군 종양의 평균 강도를 사용하여 계산하였다. 하기 식을 사용하여 처리 종양 군의 신호전달의 퍼센트 억제를 계산하였다: 퍼센트 억제 = (정규화 데이터 - 정규화 최대) / (제로 - 정규화 최대)*100. TED70 값은 경구 투여 후 4시간에서 생체내 이종이식 실험에서 GAPDH로 정규화된 pMCM2의 평균 CDC7/DBF4-매개 인산화를 70%에서 억제 (% 표적 억제)하는데 필요한 화합물의 정확한 용량에 관한 것이다. TEC70은 경구 투여 후 4시간에서 생체내 이종이식 실험에서 GAPDH로 정규화된 pMCM2의 평균 CDC7/DBF4-매개 인산화를 70%에서 억제 (% 표적 억제)하는데 필요한 화합물의 정확한 혈장 농도에 관한 것이다.
본 발명의 범주내의 화합물을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 검정에서 시험하였다. TED70은 pMCM2의 % 억제 및 용량의 플롯으로 생성되었고 실시예 3의 경우 2.6 mg/kg이었다. TEC70은 70% 억제에서 혈장 농도, pMCM2의 % 억제 및 용량을 사용하여 생성되었다. 실시예 3의 경우 TEC70은 1.8 μM이었다. 이 데이터는 본 발명의 범주 내의 화합물이 마우스에서 경구 투여 후 4시간에서 마우스 생체 이종이식 실험에서 pMCM2의 CDC7/DBF4-매개 인산화를 억제함을 나타내는 것이다.
인간 결장직장암종 SW620 마우스 이종이식 모델에서 항종양 효능
실시예 4의 생체내 항암 활성을 상기 기재된 시험관내 세포 계수 증식 데이트를 기준으로 민감성인 것으로 예측되는 인간 결장직장 선암 세포주 SW620 마우스 이종이식 종양 모델에서 연구하였다. SW620 세포주는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection (ATCC))으로부터 구입하고 하기 ATCC 설명서에 따라 10% 소 태아 혈청을 갖는 라이보비츠 L-15 배지(Leibovitz's L-15 Medium)에서 배양하였다. SW620 세포 현탁액 (5.0 × 106/0.2 mL)을 각각의 암컷 무흉선 Balb/c 누드 마우스의 우측 옆구리에 피하 주사하였다. 마우스 (도착시 5~6주령)를 상하이 시프르-bk 래보러터리 애니멀즈 리미티드(Shanghai Sippr-bk Laboratory Animals Ltd)로부터 구입하였다. 수령 직후 및 연구 내내, 동물을 접촉 베딩(contact bedding)을 갖는 적절한 크기의 단단한-바닥 케이지에서 케이지당 5마리로 하우징하였다. 동물을 7일 동안 순응시킨 후에 SW620 세포를 이식하였다. 동물에게 23% 단백질 함유 상하이 래보러토리 애니멀 센터(Shanghai Laboratory Animal Center) 인증된 설치류 규정식(Rodent Diet)을 무제한으로 공급하고 오토클레이브 처리된 수돗물을 무제한으로 제공하였다. 동물실을 12-시간 명/암 주기로 유지하였다. 종양 부피가 평균 154.9 mm3 (종양 이식 후 9일)에 이르렀을 때, 종양 보유 동물을 유사한 평균 종양 부피 및 체중을 갖는 9개 군 (8마리 동물/군)으로 무작위로 나누었다. 종양-보유 마우스의 평균 체중은 17.3 g이었다. 화합물을 얼음 위에서 15분 동안 검출 초음파에 의해 탈염수 중 HEC 1% w/v, P80 0.25% v/v, 및 소포제 1520-US 0.025% v/v에서 제제화하고 화합물 제제를 동물 투여용으로 매일 제조하였다. 제제화된 화합물을 2주 동안 경구 위관영양 (0.1 mL/20 g)에 의해 1일 2회 (BID) 10.4, 20.8 및 31.2 mg/kg 용량 (각각 10, 20 및 30 mg/kg 활성 제약 성분 API 함유)으로 투여하였다. BID 투여는 약 8시간 간격 (대략 오전 9시 및 오후 5시 각각)으로 수행하였다. 연구의 대조 아암으로서 비히클을 또한 BID 제공하였다. 종양 부피 및 체중을 맹검 방식으로 1주 3회 측정하였다. 종양 부피를 캘리퍼스 측정 (mm)에 의해 및 타원체구를 위한 식을 사용하여 측정하였다: 종양 부피 (mm3) = 길이 × 폭2 / 2 (여기서 길이 및 폭은 각각의 측정에서 수집된 더 큰 및 더 작은 수직 차원을 지칭한다). 동물 거동 및 동물 건강을 투여 기간 동안 1일 2회 모니터링하였다. 연구는 치료 개시 후 28일에 종료되었다.
종양 부피 데이터의 통계적 분석을 로그 눈금으로의 데이터 변환으로 시작하여 시간 및 처리 군에 걸쳐 분산을 균등화하였다. 로그 부피 데이터를 SAS 소프트웨어 (버전 9.3)에서 MIXED 절차를 사용하여 시간 및 처리에 의해 분산의 쌍방향 반복 측정 분석으로 분석하였다. 반복 측정에 대한 상관관계는 스패셜 파워(Spatial Power)이었다. 처리군을 각각의 시점에서 대조군과 비교하였다. 각각의 처리군에 대해 MIXED 절차를 또한 개별적으로 사용하여 각 시점에서 조정된 평균 및 표준 오차를 계산하였다. 두 분석 모두 대형 종양을 갖는 동물을 연구 초기에서 제거한 경우 발생하는 데이터의 손실과 각각의 동물 내에서의 자기 상관관계를 설명하는 것이다. 조정된 평균 및 표준 오차를 각각의 처리군 대 시간에 대해 플롯팅하였다. 각 시점에서 처리군을 대조군과 비교하는 분석은 로그 10 종양 부피를 사용하고 p-값을 생성하였다. p-값의 통계적 유의성에 대해, "***" = P<0.001이다.
T > T0인 경우, 델타 T/C, % 계산을 사용하였다. T < T0인 경우, 회귀, % 계산을 사용하였다:
방정식:
T = 처리군에서의 최종 종양 부피
T0 = 처리군에서의 기준선 종양 부피 (C0과 동일할 것으로 추정)
C = 대조군에서의 최종 종양 부피
C0 = 대조군에서의 기준선 종양 부피 (T0와 동일할 것으로 추정)
델타 T/C, % = 100 * (T - T0) / (C - C0)
회귀, % = 100 * (T-T0) / T0
[표 3]
SW620 마우스 이종이식 종양 모델에서 용량 의존적 항종양 활성
Figure 112015087619551-pct00016
본 발명의 범주내의 화합물을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 검정에서 시험하였다. 상기 표 3에 제공된 바와 같이, 실시예 4의 화합물은 2주 동안 BID 연속 제공한 경우 용량-의존적 방식으로 SW620 이종이식 종양에 대한 생체내 항암 활성을 나타냈다. 시험된 모든 용량에 대한 결과는 비히클에 대해서보다 상당히 작았다. 이 활성은 SW620 암 세포주로 관찰된 시험관내 활성과 일치하였다. 31.2 mg/kg의 최대 허용 용량에서, 음수값에 의해 나타낸 바와 같이, 화합물은 상당한 종양 회귀를 유발시켰다. 또한, 투여 중단 후 2주 동안 어떤 유의한 종양 성장도 관찰되지 않았다. 이 데이터는 실시예 4가 SW620 마우스 이종이식 종양 모델에서 용량 의존적 항종양 활성을 제공함을 나타내는 것이다.

Claims (16)

  1. 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물인 화합물.
  2. 제1항에 있어서, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  4. 제3항에 있어서, (3R)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, (3S)-3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온인 화합물.
  7. 제1항에 있어서, 3-(5-플루오로피리미딘-4-일)-3-메틸-6-(1H-피라졸-4-일)이소인돌린-1-온, 또는 그의 수화물인 화합물.
  8. 제7항에 있어서, 22.27과 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 및 23.13 중 하나 이상에서 발생하는 특징적인 피크 (2θ ± 0.2)를 갖는 X-선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 형태의 수화물인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 염, 및 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제를 포함하는, 유방암, 삼중 음성 유방암, 난소암, 폐암, 결장직장암, 혈액암, 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 염을 포함하는, 암의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 암이 유방암, 삼중 음성 유방암, 난소암, 폐암, 결장직장암, 혈액암, 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013333534B2 (en) * 2012-10-15 2016-04-14 Pfizer Ireland Pharmaceuticals Process for the preparation of voriconazole and analogues thereof
WO2014110574A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Incyte Corporation Bicyclic aromatic carboxamide compounds useful as pim kinase inhibitors
UA121098C2 (uk) 2013-01-15 2020-04-10 Інсайт Холдинґс Корпорейшн Тіазолкарбоксаміди і піридинкарбоксаміди, які використовуються як інгібітори рім-кінази
JP6294953B2 (ja) 2013-03-14 2018-03-14 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｐ２ｘ７調節物質
ES2689526T3 (es) 2013-03-14 2018-11-14 Janssen Pharmaceutica Nv Moduladores de P2X7
TWI644671B (zh) 2013-03-14 2018-12-21 比利時商健生藥品公司 Ｐ２ｘ７調節劑
GEP201706780B (en) 2013-03-14 2017-11-27 Boehringer Ingelheim Int Substituted 2-aza-bicyclo [2.2.1]heptane-3-carboxylic acid (benzyl-cyano-methyl)-amides inhibitors of cathepsin c
JO3509B1 (ar) 2013-03-14 2020-07-05 Janssen Pharmaceutica Nv معدلات p2x7
WO2015027124A1 (en) 2013-08-23 2015-02-26 Incyte Corporation Furo- and thieno-pyridine carboxamide compounds useful as pim kinase inhibitors
US9580418B2 (en) 2014-07-14 2017-02-28 Incyte Corporation Bicyclic aromatic carboxamide compounds useful as Pim kinase inhibitors
WO2016010897A1 (en) 2014-07-14 2016-01-21 Incyte Corporation Bicyclic heteroaromatic carboxamide compounds useful as pim kinase inhibitors
EA201790600A1 (ru) 2014-09-12 2017-07-31 Янссен Фармацевтика Нв Модулирующие p2x7 n-ацил-триазолопиразины
EA034015B1 (ru) 2014-09-12 2019-12-19 Янссен Фармацевтика Нв Модуляторы р2х7
CN107074870B (zh) 2014-09-12 2019-07-12 勃林格殷格翰国际有限公司 组织蛋白酶c的螺环化合物抑制剂
WO2016196244A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Incyte Corporation Pyridineamine compounds useful as pim kinase inhibitors
TWI734699B (zh) 2015-09-09 2021-08-01 美商英塞特公司 Ｐｉｍ激酶抑制劑之鹽
WO2017059251A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Incyte Corporation Heterocyclic compounds useful as pim kinase inhibitors
ES2845048T3 (es) * 2016-09-22 2021-07-23 Cancer Research Tech Ltd Preparación y usos de derivados de pirimidinona
AR113922A1 (es) 2017-12-08 2020-07-01 Incyte Corp Terapia de combinación de dosis baja para el tratamiento de neoplasias mieloproliferativas
CN108383771A (zh) * 2018-01-08 2018-08-10 华东师范大学 手性3,3-二取代异吲哚啉-1-酮衍生物及其合成方法和应用
GB201807147D0 (en) 2018-05-01 2018-06-13 Oncologica Uk Ltd Therapeutic combination
NL2021185B1 (en) 2018-06-26 2020-01-06 Stichting Het Nederlands Kanker Inst Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis Combination Therapy and Use Thereof for Treating Cancer
JP7413368B2 (ja) 2018-09-28 2024-01-15 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． モノアシルグリセロールリパーゼ調節因子
AU2019350624B2 (en) 2018-09-28 2025-07-24 Janssen Pharmaceutica Nv Monoacylglycerol lipase modulators
WO2020212434A1 (en) * 2019-04-16 2020-10-22 Janssen Pharmaceutica Nv Fused isoindolin-1-one derivatives useful as grk2 inhibitors
CN114555596B (zh) 2019-09-30 2025-02-25 詹森药业有限公司 放射性标记的mgl pet配体
KR20220157999A (ko) 2020-03-26 2022-11-29 얀센 파마슈티카 엔.브이. 모노아실글리세롤 리파아제 조절제

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005100351A1 (en) 2004-04-14 2005-10-27 Astrazeneca Ab NOVEL 2-(1-AZA-BICYCLO[2.2.2]OCT-3-yl)-2,3-DIHYDROISOINDOL-l-ONE/5,6-DIHYDRO-FURO[2,3-c]PYRROL-4ONE DERIVATIVES LIGANDS FOR ALPHA 7 NICOTINIC ACETYLCHOLINE RECEPTOR

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200639163A (en) * 2005-02-04 2006-11-16 Genentech Inc RAF inhibitor compounds and methods
US7576082B2 (en) * 2005-06-24 2009-08-18 Hoffman-La Roche Inc. Oxindole derivatives
BRPI0719210A2 (pt) * 2006-10-12 2015-05-05 Xenon Pharmaceuticals Inc Uso de compostos espiro-oxindol como agentes terapêuticos
US8648069B2 (en) * 2007-06-08 2014-02-11 Abbvie Inc. 5-substituted indazoles as kinase inhibitors
WO2008154241A1 (en) * 2007-06-08 2008-12-18 Abbott Laboratories 5-heteroaryl substituted indazoles as kinase inhibitors

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005100351A1 (en) 2004-04-14 2005-10-27 Astrazeneca Ab NOVEL 2-(1-AZA-BICYCLO[2.2.2]OCT-3-yl)-2,3-DIHYDROISOINDOL-l-ONE/5,6-DIHYDRO-FURO[2,3-c]PYRROL-4ONE DERIVATIVES LIGANDS FOR ALPHA 7 NICOTINIC ACETYLCHOLINE RECEPTOR

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Publication number Publication date
KR20150119101A (ko) 2015-10-23
CA2900773A1 (en) 2014-09-18
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JP2016512498A (ja) 2016-04-28
SG11201507541PA (en) 2015-10-29
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