JPH1169969A - アスタキサンチン生産性酵母細胞、その製造方法及びその使用 - Google Patents
アスタキサンチン生産性酵母細胞、その製造方法及びその使用Info
- Publication number
- JPH1169969A JPH1169969A JP10166941A JP16694198A JPH1169969A JP H1169969 A JPH1169969 A JP H1169969A JP 10166941 A JP10166941 A JP 10166941A JP 16694198 A JP16694198 A JP 16694198A JP H1169969 A JPH1169969 A JP H1169969A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- yeast
- astaxanthin
- dry matter
- cell
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS OR COOKING OILS
- A23D7/00—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines
- A23D7/005—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines characterised by ingredients other than fatty acid triglycerides
- A23D7/0053—Compositions other than spreads
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS OR COOKING OILS
- A23D7/00—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines
- A23D7/005—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines characterised by ingredients other than fatty acid triglycerides
- A23D7/0056—Spread compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/18—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from yeasts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/179—Colouring agents, e.g. pigmenting or dyeing agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L17/00—Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L17/70—Comminuted, e.g. emulsified, fish products; Processed products therefrom such as pastes, reformed or compressed products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/40—Colouring or decolouring of foods
- A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
- A23L5/43—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives
- A23L5/44—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives using carotenoids or xanthophylls
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/40—Colouring or decolouring of foods
- A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
- A23L5/46—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using dyes or pigments of microbial or algal origin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Birds (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 アスタキサンチンを生産する新規なファフィ
ア・ロドチーマの変異株の提供。 【解決手段】 アスタキサンチンを生産するファフィア
・ロドチーマ株を変異処理することにより得られる、酵
母乾物１ｇ当り６００μｇ以上のアスタキサンチンを蓄
積する変異株。
ア・ロドチーマの変異株の提供。 【解決手段】 アスタキサンチンを生産するファフィア
・ロドチーマ株を変異処理することにより得られる、酵
母乾物１ｇ当り６００μｇ以上のアスタキサンチンを蓄
積する変異株。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アスタキサンチン
生産性酵母細胞株、その製造方法、その培養方法、及び
該酵母細胞からアスタキサンチンを単離する方法に関す
る。さらに、本発明は、アスタキサンチン生産性酵母細
胞又はそれから回収されたアスタキサンチンを含有する
食品又は飼料、並びに食品又は飼料の製造方法及び該飼
料による動物の飼育方法に関する。
生産性酵母細胞株、その製造方法、その培養方法、及び
該酵母細胞からアスタキサンチンを単離する方法に関す
る。さらに、本発明は、アスタキサンチン生産性酵母細
胞又はそれから回収されたアスタキサンチンを含有する
食品又は飼料、並びに食品又は飼料の製造方法及び該飼
料による動物の飼育方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】サケ又はマスのごとき遡行魚類の肉の赤
色が、該魚類によって消費される食餌中に存在するアス
タキサンチンのごとき赤色色素に基くことが知られてい
る。天然環境において、魚はその赤色を甲殻類又は他の
アスタキサンチン含有生物から得るが、しかし養魚場で
飼育される場合、魚はこれらの天然色素源に接近せず、
そしてそれ故に赤色色素が飼料中に供給されない限り魅
力的な赤色を獲得しない。
色が、該魚類によって消費される食餌中に存在するアス
タキサンチンのごとき赤色色素に基くことが知られてい
る。天然環境において、魚はその赤色を甲殻類又は他の
アスタキサンチン含有生物から得るが、しかし養魚場で
飼育される場合、魚はこれらの天然色素源に接近せず、
そしてそれ故に赤色色素が飼料中に供給されない限り魅
力的な赤色を獲得しない。
【０００３】従って、甲殻類廃棄物から単離された又は
合成的に製造されたアスタキサンチン、及びカンタキサ
ンチンのごとき他の合成赤色色素が魚餌中の成分として
使用されてきた。しかしながら、幾つかの国においては
動物飼料中でのカンタキサンチンの使用は禁止されてお
り、そして合成的アスタキサンチン製造及び天然アスタ
キサンチンの単離方法はどちらかと言えば高価であり、
そしてしばしば季節的変動にさらされる。
合成的に製造されたアスタキサンチン、及びカンタキサ
ンチンのごとき他の合成赤色色素が魚餌中の成分として
使用されてきた。しかしながら、幾つかの国においては
動物飼料中でのカンタキサンチンの使用は禁止されてお
り、そして合成的アスタキサンチン製造及び天然アスタ
キサンチンの単離方法はどちらかと言えば高価であり、
そしてしばしば季節的変動にさらされる。
【０００４】他の天然アスタキサンチン源が知られてお
り、特に酵母ファフィア・ロドチーマ（Phaffia rhod
ozyma ）及び若干の微小藻類、例えば緑藻クラミドモナ
ス・ニバリス（Chlamydomonas nivalis ）の単細胞群
が挙げられる〔Gert Knotsonら、「Pigmentering of la
ks med astaxanthin fra mikroalger」, Norsk Fiskeo
pdraet, No３，４−６頁、５５（１９８０）〕。これら
の生物によって生産されるアスタキサンチンは遡行魚類
に好ましい赤色を付与することが示されている〔 Eric
A. Johnsonら、「Phaffia rhodozyma as an astaxan
thin source insalmonid diets 」, Aquaculture ２
０，１２３−１３４頁（１９８０）及びＪＰ−Ａ ５７
−２０６３４２〕。しかしながら、魚の栄養として大量
の酵母細胞の使用は望ましくない。なぜなら、この飼料
は効率的に変化しないからである。他方、生物により生
産されそして栄養的に許容される量の酵母細胞中に存在
するアスタキサンチンの量は所望の着色を得るためには
十分でなく、そして既知の方法による酵母からのアスタ
キサンチンの単離はどちらかと言えばコスト高である。
り、特に酵母ファフィア・ロドチーマ（Phaffia rhod
ozyma ）及び若干の微小藻類、例えば緑藻クラミドモナ
ス・ニバリス（Chlamydomonas nivalis ）の単細胞群
が挙げられる〔Gert Knotsonら、「Pigmentering of la
ks med astaxanthin fra mikroalger」, Norsk Fiskeo
pdraet, No３，４−６頁、５５（１９８０）〕。これら
の生物によって生産されるアスタキサンチンは遡行魚類
に好ましい赤色を付与することが示されている〔 Eric
A. Johnsonら、「Phaffia rhodozyma as an astaxan
thin source insalmonid diets 」, Aquaculture ２
０，１２３−１３４頁（１９８０）及びＪＰ−Ａ ５７
−２０６３４２〕。しかしながら、魚の栄養として大量
の酵母細胞の使用は望ましくない。なぜなら、この飼料
は効率的に変化しないからである。他方、生物により生
産されそして栄養的に許容される量の酵母細胞中に存在
するアスタキサンチンの量は所望の着色を得るためには
十分でなく、そして既知の方法による酵母からのアスタ
キサンチンの単離はどちらかと言えばコスト高である。
【０００５】しかしながら、もしこれらの生物からのよ
り高いアスタキサンチン生産性が得られるなら、季節条
件に依存しない有利なアスタキサンチン製造が可能であ
ろう。本発明は、動物肉の着色又は動物の生産が望まれ
る遡行魚類及び他の動物のための飼料として又は飼料中
で使用することができる程十分に高い濃度でアスタキサ
ンチンを含有する酵母細胞を提供する。本発明はさら
に、アスタキサンチン含有酵母細胞、特に高含量のアス
タキサンチンを有する前記酵母細胞からアスタキサンチ
ンを得るための魅力的な方法を提供する。本発明の重要
な観点は、アスタキサンチン生産性細胞を培養するため
の特定の方法、及び／又はアスタキサンチン生産の本来
の能力が改善されている変異株の提供に基いている。
り高いアスタキサンチン生産性が得られるなら、季節条
件に依存しない有利なアスタキサンチン製造が可能であ
ろう。本発明は、動物肉の着色又は動物の生産が望まれ
る遡行魚類及び他の動物のための飼料として又は飼料中
で使用することができる程十分に高い濃度でアスタキサ
ンチンを含有する酵母細胞を提供する。本発明はさら
に、アスタキサンチン含有酵母細胞、特に高含量のアス
タキサンチンを有する前記酵母細胞からアスタキサンチ
ンを得るための魅力的な方法を提供する。本発明の重要
な観点は、アスタキサンチン生産性細胞を培養するため
の特定の方法、及び／又はアスタキサンチン生産の本来
の能力が改善されている変異株の提供に基いている。
【０００６】従って、本発明の１つの観点は、５０mlの
培地を収容しており２枚のバッフルを有する、１５０rp
m の回転振とうにかけられた５００mlの振とうフラスコ
中で、３０mmol／ｌ／時の酸素移動速度、ディフコＹＭ
培地で２０〜２２℃にて５日間、接種量がＹＭ−培地中
４日間培養物１００μｌ、の条件下で増殖した場合に、
２０mlのメタノール中０．２ｇの酵母乾物の懸濁液を氷
水による冷却ジャケットを有する、直径０．４mmのガラ
スボール１５ｇを含むガラスボールミル中で２０℃以下
の温度で、０．５分間の間隔で５×１分行われる破砕に
かけることにより調製された酵母のメタノール抽出物に
対する、標準として純粋なアスタキサンチンを用いるＨ
ＰＬＣ分析により決定された場合に、酵母乾物ｇ当り３
００μｇ以上の量でアスタキサンチンを生産する酵母細
胞に関する。
培地を収容しており２枚のバッフルを有する、１５０rp
m の回転振とうにかけられた５００mlの振とうフラスコ
中で、３０mmol／ｌ／時の酸素移動速度、ディフコＹＭ
培地で２０〜２２℃にて５日間、接種量がＹＭ−培地中
４日間培養物１００μｌ、の条件下で増殖した場合に、
２０mlのメタノール中０．２ｇの酵母乾物の懸濁液を氷
水による冷却ジャケットを有する、直径０．４mmのガラ
スボール１５ｇを含むガラスボールミル中で２０℃以下
の温度で、０．５分間の間隔で５×１分行われる破砕に
かけることにより調製された酵母のメタノール抽出物に
対する、標準として純粋なアスタキサンチンを用いるＨ
ＰＬＣ分析により決定された場合に、酵母乾物ｇ当り３
００μｇ以上の量でアスタキサンチンを生産する酵母細
胞に関する。
【０００７】前記の増殖条件及び測定条件は、得られた
結果が問題の酵母の本来のアスタキサンチン生産能力を
反映するように増殖及び試験方法を標準化するために与
えられる。この方法は、本件出願人会社により行われた
幾つかの実験により、実施するのが容易で適切で且つ再
現性のある方法であることが見出された。この測定方法
は従来文献において使用されているそれとは同一でない
ことに注目すべきである。文献、例えば Eric A. Johns
onら、「Astaxanthin formation by the yeastPhaffia
rhodozyma 」, Journal of general microbiology １
１５，１９７９，１７３−８３頁、において今まで使用
された方法は１cmキュベットにおけるアセトン中１％
（Ｗ／Ｖ）溶液の吸収１６００に基いており、他方F.Ho
ffmann-LaRoche からのアスタキサンチン標準を測定す
ることにより得られる値は２１００である。この値は出
願人会社自身の測定及びF.Hoffmann-La Roche により提
供された情報に基いている。
結果が問題の酵母の本来のアスタキサンチン生産能力を
反映するように増殖及び試験方法を標準化するために与
えられる。この方法は、本件出願人会社により行われた
幾つかの実験により、実施するのが容易で適切で且つ再
現性のある方法であることが見出された。この測定方法
は従来文献において使用されているそれとは同一でない
ことに注目すべきである。文献、例えば Eric A. Johns
onら、「Astaxanthin formation by the yeastPhaffia
rhodozyma 」, Journal of general microbiology １
１５，１９７９，１７３−８３頁、において今まで使用
された方法は１cmキュベットにおけるアセトン中１％
（Ｗ／Ｖ）溶液の吸収１６００に基いており、他方F.Ho
ffmann-LaRoche からのアスタキサンチン標準を測定す
ることにより得られる値は２１００である。この値は出
願人会社自身の測定及びF.Hoffmann-La Roche により提
供された情報に基いている。
【０００８】さらに、既知の測定方法は酵母の全色素含
量を測定し、他方本出願において使用される前記の標準
法はアスタキサンチン含量のみを測定する。前記の標準
化された方法により得られる値を文献中に記載されてい
る値と比較する場合、文献中に記載されている値は前記
の標準化された方法により得られる真の値よりかなり高
いことを心に留めておくべきである。従って、本発明の
全色素含量を文献の記載と比較する場合、文献に記載さ
れている全色素含量を１６００／２１００で乗ずること
により吸光係数の差の補正を行うべきである。
量を測定し、他方本出願において使用される前記の標準
法はアスタキサンチン含量のみを測定する。前記の標準
化された方法により得られる値を文献中に記載されてい
る値と比較する場合、文献中に記載されている値は前記
の標準化された方法により得られる真の値よりかなり高
いことを心に留めておくべきである。従って、本発明の
全色素含量を文献の記載と比較する場合、文献に記載さ
れている全色素含量を１６００／２１００で乗ずること
により吸光係数の差の補正を行うべきである。
【０００９】前記の増殖条件は、本来のアスタキサンチ
ン生産能力の測定のために再現性があり且つ有意義であ
ることが本件出願人会社により見出されているものであ
る。酵母菌株の本来のアスタキサンチン生産能力を測定
するために使用される増殖及び測定条件のより詳細な説
明は実施例と関連させて記載する。本発明の酵母細胞は
好ましくはファフィア（Phaffia ）属に属する酵母細胞
であり、そして特に現在知られている唯一のファフィア
の種であるファフィア・ロドチーマ（Phaffia rhodoz
yma ）種に属するものである。
ン生産能力の測定のために再現性があり且つ有意義であ
ることが本件出願人会社により見出されているものであ
る。酵母菌株の本来のアスタキサンチン生産能力を測定
するために使用される増殖及び測定条件のより詳細な説
明は実施例と関連させて記載する。本発明の酵母細胞は
好ましくはファフィア（Phaffia ）属に属する酵母細胞
であり、そして特に現在知られている唯一のファフィア
の種であるファフィア・ロドチーマ（Phaffia rhodoz
yma ）種に属するものである。
【００１０】現在、ファフィア・ロドチーマはアスタキ
サンチンを生産することが知られている唯一の酵母であ
る。野性型Ｐ．ロドチーマは落葉樹の浸出物から単離さ
れ、そしてこの様な野性型株のサンプルはアメリカン・
タイプ・カルチュア・コレクション（American Type Cu
lture Collection）に寄託番号ＡＴＣＣ２４２６１とし
て寄託されている。
サンチンを生産することが知られている唯一の酵母であ
る。野性型Ｐ．ロドチーマは落葉樹の浸出物から単離さ
れ、そしてこの様な野性型株のサンプルはアメリカン・
タイプ・カルチュア・コレクション（American Type Cu
lture Collection）に寄託番号ＡＴＣＣ２４２６１とし
て寄託されている。
【００１１】Ｐ．ロドチーマの栄養細胞は異形担子菌酵
母（heterobasidiomycetous yeast）のように出芽を形
成する。厚膜胞子が出芽によって出現するが、前菌糸体
及び真の胞子形成は起らない。厚膜胞子は、栄養細胞よ
り脂質含量の多い比較的大きな球形細胞である。二核菌
糸及び冬胞子の形成を得るために種々の株を交配せしめ
る試みは成功していない。従って、Ｐ．ロドチーマはブ
ラストミセーテス (Blastomycetes ）目のドイテロミコ
チナ（Deuteromycotina ）属に分類されている（Intern
ational Journal of systematic bacteriology ２６：
２，１９７６，２８６−２９２頁、M. W. Millerら、
「Phaffia, a new yeast genus in the deuteromycotin
a (Blastomycetes) 」を参照のこと）。
母（heterobasidiomycetous yeast）のように出芽を形
成する。厚膜胞子が出芽によって出現するが、前菌糸体
及び真の胞子形成は起らない。厚膜胞子は、栄養細胞よ
り脂質含量の多い比較的大きな球形細胞である。二核菌
糸及び冬胞子の形成を得るために種々の株を交配せしめ
る試みは成功していない。従って、Ｐ．ロドチーマはブ
ラストミセーテス (Blastomycetes ）目のドイテロミコ
チナ（Deuteromycotina ）属に分類されている（Intern
ational Journal of systematic bacteriology ２６：
２，１９７６，２８６−２９２頁、M. W. Millerら、
「Phaffia, a new yeast genus in the deuteromycotin
a (Blastomycetes) 」を参照のこと）。
【００１２】栄養細胞は長円形（３．６〜７．５）×
（５．５〜１０．５）であり、そして液体培地中では個
別に、対になって、そしてある場合には短い連鎖状に、
又は小さい房状に存在する。真の菌糸は発達せず、しか
し未発達の擬菌糸が存在する場合がある。出芽は細胞上
の同じ点から数回生ずる。Ｐ．ロドチーマは多層から成
る強い細胞膜を有し、そしてカプセル物質は表面に粒状
の外観を与え、そして上記の房を形成せしめる。
（５．５〜１０．５）であり、そして液体培地中では個
別に、対になって、そしてある場合には短い連鎖状に、
又は小さい房状に存在する。真の菌糸は発達せず、しか
し未発達の擬菌糸が存在する場合がある。出芽は細胞上
の同じ点から数回生ずる。Ｐ．ロドチーマは多層から成
る強い細胞膜を有し、そしてカプセル物質は表面に粒状
の外観を与え、そして上記の房を形成せしめる。
【００１３】生活の性周期は観察されていない。厚膜胞
子の発達中、栄養細胞が出芽により形成される。これら
の細胞は、アソスポロン（Aessospron）について記載さ
れているように胞子を伴う前菌糸体と考えることはでき
ない（J. P. van der Walt,「The perfect and imperfe
ct states of Sporobolomyces salminicolor」, J.Mic
robiol. Serol. ３６，１９７０，４９−５５頁を参照
のこと）。厚膜胞子はゴノトコンター (gonotoconter)
（性的に分離された胞子）と考えることができず、そし
てその出芽は一倍体世代と考えることができない。いず
れの増殖段階においても核染色により二倍体化を証明す
ることは不可能であった。透過電子顕微鏡写真はすべて
の増殖相において１個の単一核のみを示している（M.
W. Millerら、前掲）。従って、Ｐ．ロドチーマは一倍
体のようであるが、これはまだ証明されていない。
子の発達中、栄養細胞が出芽により形成される。これら
の細胞は、アソスポロン（Aessospron）について記載さ
れているように胞子を伴う前菌糸体と考えることはでき
ない（J. P. van der Walt,「The perfect and imperfe
ct states of Sporobolomyces salminicolor」, J.Mic
robiol. Serol. ３６，１９７０，４９−５５頁を参照
のこと）。厚膜胞子はゴノトコンター (gonotoconter)
（性的に分離された胞子）と考えることができず、そし
てその出芽は一倍体世代と考えることができない。いず
れの増殖段階においても核染色により二倍体化を証明す
ることは不可能であった。透過電子顕微鏡写真はすべて
の増殖相において１個の単一核のみを示している（M.
W. Millerら、前掲）。従って、Ｐ．ロドチーマは一倍
体のようであるが、これはまだ証明されていない。
【００１４】ＹＭ寒天（ディフコ・ラボラトリース社、
ディフコマニュアル；脱水培地及び顕微鏡写真用試薬、
第１０版、デトロイト、１９８４）上での２〜４週間の
増殖の後、線状 (string）培養物は菌株に応じてオレン
ジ〜サーモンピンク色である。Ｐ．ロドチーマは、２７
℃より高温では増殖しないという特殊な性質を有する。
このものはＤ−グルコース、マルトース、シュークロー
ス及びラフィノースを発酵するが、Ｄ−ガラクトース及
びメリビオースを発酵しない。
ディフコマニュアル；脱水培地及び顕微鏡写真用試薬、
第１０版、デトロイト、１９８４）上での２〜４週間の
増殖の後、線状 (string）培養物は菌株に応じてオレン
ジ〜サーモンピンク色である。Ｐ．ロドチーマは、２７
℃より高温では増殖しないという特殊な性質を有する。
このものはＤ−グルコース、マルトース、シュークロー
ス及びラフィノースを発酵するが、Ｄ−ガラクトース及
びメリビオースを発酵しない。
【００１５】ほとんどの一般的な炭素源は資化される
が、しかしながらＤ−ガラクトース、Ｌ−ソルボース、
メリビオース、ラクトース、グリセロール及びクエン酸
塩は資化されない。この酵母はビオチンを添加しなけれ
ばビタミン不含有培地で増殖することができない（M.
W. Millerら、前掲）。尿素を含むほとんどの一般的窒
素源が資化される。硝酸カリウム及びエチルアミンは資
化されない。この酵母は５０重量％のグルコース−酸エ
キス寒天上で増殖することができず、１０重量％の塩化
ナトリウム−酵母エキス寒天上でも増殖することができ
ない。この酵母によるチョーク寒天上での酸生成は弱
く、そしてゼラチンの液化もその通りである。０．１μ
ｇ／mlのシクロヘキシミドの存在下での増殖、カゼイン
の加水分解及び解重合（depolytic ）活性は存在せず、
他方この酵母はpHに依存することなく澱粉様化合物を合
成することができる。Ｇ＋Ｃのモル％は４８．３±０．
１８と測定される（Miller等、前掲）。
が、しかしながらＤ−ガラクトース、Ｌ−ソルボース、
メリビオース、ラクトース、グリセロール及びクエン酸
塩は資化されない。この酵母はビオチンを添加しなけれ
ばビタミン不含有培地で増殖することができない（M.
W. Millerら、前掲）。尿素を含むほとんどの一般的窒
素源が資化される。硝酸カリウム及びエチルアミンは資
化されない。この酵母は５０重量％のグルコース−酸エ
キス寒天上で増殖することができず、１０重量％の塩化
ナトリウム−酵母エキス寒天上でも増殖することができ
ない。この酵母によるチョーク寒天上での酸生成は弱
く、そしてゼラチンの液化もその通りである。０．１μ
ｇ／mlのシクロヘキシミドの存在下での増殖、カゼイン
の加水分解及び解重合（depolytic ）活性は存在せず、
他方この酵母はpHに依存することなく澱粉様化合物を合
成することができる。Ｇ＋Ｃのモル％は４８．３±０．
１８と測定される（Miller等、前掲）。
【００１６】炭水化物−及び／又は窒素−制限条件下で
の増殖の間、フェド−バッチ発酵にかけられた場合、
Ｐ．ロドチーマは炭水化物蓄積物としてトレハロースを
生産する。このことは、出願人会社により行われまだ報
告されていない全く新しい観察である。文献によれば、
Ｐ．ロドチーマは多数のカロチノイドを生産し、その内
アスタキサンチンが８３〜８７％、β−カロチンが２〜
２．５％、エチネノンが２〜４％、そしてフェニコキサ
ンチンが５〜７％を占める。しかしながら実際には、
Ｐ．ロドチーマにより生産される全色素に対するアスタ
キサンチンの比率は酵母細胞の増殖条件及び色素の測定
法に依存して大きく異ることが見出され、そして５０〜
８０％の範囲にあることが見出された。
の増殖の間、フェド−バッチ発酵にかけられた場合、
Ｐ．ロドチーマは炭水化物蓄積物としてトレハロースを
生産する。このことは、出願人会社により行われまだ報
告されていない全く新しい観察である。文献によれば、
Ｐ．ロドチーマは多数のカロチノイドを生産し、その内
アスタキサンチンが８３〜８７％、β−カロチンが２〜
２．５％、エチネノンが２〜４％、そしてフェニコキサ
ンチンが５〜７％を占める。しかしながら実際には、
Ｐ．ロドチーマにより生産される全色素に対するアスタ
キサンチンの比率は酵母細胞の増殖条件及び色素の測定
法に依存して大きく異ることが見出され、そして５０〜
８０％の範囲にあることが見出された。
【００１７】
【化１】
【００１８】アスタキサンチンをはじめとするヒドロキ
シル化されたすべての色素は非結合形として記載されて
おり、エステル又は他の誘導体としては記載されていな
い（G. Andrewsら著、「Carotenoids of Phaffia rh
odozyma , a red-pigmentedfermenting yeast」, Phyto
chemistry １５，１９７６，１００３−１００７
頁）。アスタキサンチンの３つの光学異性体形（３Ｓ，
３′Ｓ）、（３Ｒ，３′Ｒ）及び（３Ｓ，３Ｒ）が存在
し、それぞれが種々のトランス−及びシス−配置で存在
する。Ｐ．ロドチーマは（３Ｒ，３′Ｒ）−アスタキサ
ンチンのみを生産することが報告されている（G. Andre
wsら、「（３Ｒ，３′Ｒ）−astaxanthin from the yea
st Phaffia rhodozyma」前掲、１００９−１０１１
頁）。この場合、「アスタキサンチン」はアスタキサン
チンのトランス−配置及びシス−配置について用いられ
る。
シル化されたすべての色素は非結合形として記載されて
おり、エステル又は他の誘導体としては記載されていな
い（G. Andrewsら著、「Carotenoids of Phaffia rh
odozyma , a red-pigmentedfermenting yeast」, Phyto
chemistry １５，１９７６，１００３−１００７
頁）。アスタキサンチンの３つの光学異性体形（３Ｓ，
３′Ｓ）、（３Ｒ，３′Ｒ）及び（３Ｓ，３Ｒ）が存在
し、それぞれが種々のトランス−及びシス−配置で存在
する。Ｐ．ロドチーマは（３Ｒ，３′Ｒ）−アスタキサ
ンチンのみを生産することが報告されている（G. Andre
wsら、「（３Ｒ，３′Ｒ）−astaxanthin from the yea
st Phaffia rhodozyma」前掲、１００９−１０１１
頁）。この場合、「アスタキサンチン」はアスタキサン
チンのトランス−配置及びシス−配置について用いられ
る。
【００１９】細胞を顕微鏡観察する場合、個々のＰ．ロ
ドチーマ細胞中の色素は見えず、このことは色素が細胞
全体に分散していることを示している。しかしながら、
色素を細胞のある部分に濃縮することも可能である。ア
スタキサンチンは酸化されたカロチノイドであり、そし
てそれ故にキサントフィル群に属する。他のカロチノイ
ドと同様に、アスタキサンチンは８個のイソプレノイド
単位から構成されている。分解物（catabolite）抑制さ
れるアスタキサンチンの生合成において、アセチル−Ｃ
ｏＡからイソペンテニルピロリン酸が次のようにして生
成する。
ドチーマ細胞中の色素は見えず、このことは色素が細胞
全体に分散していることを示している。しかしながら、
色素を細胞のある部分に濃縮することも可能である。ア
スタキサンチンは酸化されたカロチノイドであり、そし
てそれ故にキサントフィル群に属する。他のカロチノイ
ドと同様に、アスタキサンチンは８個のイソプレノイド
単位から構成されている。分解物（catabolite）抑制さ
れるアスタキサンチンの生合成において、アセチル−Ｃ
ｏＡからイソペンテニルピロリン酸が次のようにして生
成する。
【００２０】
【化２】
【００２１】３つのプレニルトランスフェラーゼ反応に
より、イソプレニルピロホスフェートはゼラニルピロホ
スフェート及びファルネシルピロホスフェートを介して
ゲラニル−ゲラニルピロホスフェートを次の様にして生
成せしめる。
より、イソプレニルピロホスフェートはゼラニルピロホ
スフェート及びファルネシルピロホスフェートを介して
ゲラニル−ゲラニルピロホスフェートを次の様にして生
成せしめる。
【００２２】
【化３】
【００２３】２分子のゲラニルゲラニルピロホスフェー
トの縮合がフィトエンを生成せしめ、これが脱水素段階
及び環形成を経てβ−カロチンからアスタキサンチンを
生成せしめる。生合成の最後の部分は明確には決定され
ていないが、 Andrewsら（前掲）はＰ．ロドチーマの色
素組成に基いて下記の代謝経路を提案している。
トの縮合がフィトエンを生成せしめ、これが脱水素段階
及び環形成を経てβ−カロチンからアスタキサンチンを
生成せしめる。生合成の最後の部分は明確には決定され
ていないが、 Andrewsら（前掲）はＰ．ロドチーマの色
素組成に基いて下記の代謝経路を提案している。
【００２４】
【化４】
【００２５】
【化５】
【００２６】実施例の表３及表７に示すように、文献に
記載されているファフィア・ロドチーマ種には、前記の
標準法により測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ
以上の本来的アスタキサンチン生産能力を有するものは
ない。しかしながら、本発明によれば、前記の標準法に
より増殖及び測定を行った場合に酵母乾物ｇ当り４５０
μｇ以上、例えば酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上、好ま
しくは酵母乾物ｇ当り７００μｇ以上、さらに好ましく
は酵母乾物ｇ当り１０００μｇ以上、特に酵母乾物ｇ当
り１５００μｇ以上、そして最も好ましくは酵母乾物ｇ
当り２０００μｇ以上の量でアスタキサンチンを製造す
ることができる酵母を得ることができることが見出され
た。
記載されているファフィア・ロドチーマ種には、前記の
標準法により測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ
以上の本来的アスタキサンチン生産能力を有するものは
ない。しかしながら、本発明によれば、前記の標準法に
より増殖及び測定を行った場合に酵母乾物ｇ当り４５０
μｇ以上、例えば酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上、好ま
しくは酵母乾物ｇ当り７００μｇ以上、さらに好ましく
は酵母乾物ｇ当り１０００μｇ以上、特に酵母乾物ｇ当
り１５００μｇ以上、そして最も好ましくは酵母乾物ｇ
当り２０００μｇ以上の量でアスタキサンチンを製造す
ることができる酵母を得ることができることが見出され
た。
【００２７】これらの酵母細胞は天然のファフィア・ロ
ドチーマから変異誘発により作られた。従って、本発明
の１つの観点は、上記の高い本来的アスタキサンチン生
産能力を示す酵母細胞を作る方法に関し、この方法は酵
母細胞を変異原により処理し、そして前記の方法により
測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量でア
スタキサンチンを生産することができる変異株を選択す
ることを含んで成る。
ドチーマから変異誘発により作られた。従って、本発明
の１つの観点は、上記の高い本来的アスタキサンチン生
産能力を示す酵母細胞を作る方法に関し、この方法は酵
母細胞を変異原により処理し、そして前記の方法により
測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量でア
スタキサンチンを生産することができる変異株を選択す
ることを含んで成る。
【００２８】変異誘発は単一の変異誘発として行うこと
ができるが、２回以上の逐次的変異誘発を行うのが好ま
しい。各変異誘発段階によりアスタキサンチンを生産す
る本来的能力が改良され得ることが見出されたからであ
る。変異誘発にかけられる出発酵母細胞は、通常は、前
記の条件下で増殖せしめ前記の方法で測定した場合に酵
母乾物ｇ当り３００μｇ未満の量でアスタキサンチンを
生産する酵母細胞であるが、変異誘発処理のための通常
の候補はできるだけ高い本来的アスタキサンチン生産性
を有する自然の酵母細胞であることが明らかである。こ
の様な酵母細胞は普通、前記のようにファフィア属に属
する酵母細胞、特にファフィア・ロドチーマ種に属する
酵母細胞である。
ができるが、２回以上の逐次的変異誘発を行うのが好ま
しい。各変異誘発段階によりアスタキサンチンを生産す
る本来的能力が改良され得ることが見出されたからであ
る。変異誘発にかけられる出発酵母細胞は、通常は、前
記の条件下で増殖せしめ前記の方法で測定した場合に酵
母乾物ｇ当り３００μｇ未満の量でアスタキサンチンを
生産する酵母細胞であるが、変異誘発処理のための通常
の候補はできるだけ高い本来的アスタキサンチン生産性
を有する自然の酵母細胞であることが明らかである。こ
の様な酵母細胞は普通、前記のようにファフィア属に属
する酵母細胞、特にファフィア・ロドチーマ種に属する
酵母細胞である。
【００２９】変異誘発処理は任意の適当な変異原を用い
て行うことができる（これに関して、「変異原」なる語
は、その広義において、例えば変異原効果を有する薬剤
のみならずＵＶ照射のごとき変異原効果を有する処理を
も含むものと理解すべきである。適当な変異原の例とし
てエチルメタンスルホネート、ＵＶ照射、Ｎ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、ブロモウラシ
ルのごときヌクレオチド塩基類似体及びアクリジン類が
挙げられるが、他の任意の効果的な変異原が処理のため
に適当であろう。
て行うことができる（これに関して、「変異原」なる語
は、その広義において、例えば変異原効果を有する薬剤
のみならずＵＶ照射のごとき変異原効果を有する処理を
も含むものと理解すべきである。適当な変異原の例とし
てエチルメタンスルホネート、ＵＶ照射、Ｎ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、ブロモウラシ
ルのごときヌクレオチド塩基類似体及びアクリジン類が
挙げられるが、他の任意の効果的な変異原が処理のため
に適当であろう。
【００３０】常用の変異誘発技法に従えば、変異誘発に
続き最高のアスタキサンチン生産性を有する細胞の適切
な選択を行う。アスタキサンチンが色素であるという事
実のため、この選択は通常の視覚的手段、例えば単一コ
ロニーの簡単な観察により行うことができる。これに代
る方法は、単一コロニーから作られた培養物の分析を、
例えば前記の標準的培養条件及び測定条件を用いて行う
ことである。本発明の変異誘発法により作られそして特
に高いアスタキサンチン生産性を有する２つの株が１９
８７年４月６日に、Centraalbureau voor Schimmelcult
ures(CBS), Oosterstraat 1, Postbus 273, NL-3740 AG
Baarn, オランダ、にそれぞれNo. ２２４−８７及び
２２５−８７として寄託されており、そしてＣＢＳ２２
５−８７の再分離株である１つの株（実施例１を参照の
こと）が１９８８年３月２３日にＣＢＳにNo. ２１５−
８８として寄託されており、そして本発明の１つの観点
はこれらの酵母株、並びにこれらの株のアスタキサンチ
ン生産能を実質的に維持しており又はさらに改良してい
る変異株又は誘導株に関する。
続き最高のアスタキサンチン生産性を有する細胞の適切
な選択を行う。アスタキサンチンが色素であるという事
実のため、この選択は通常の視覚的手段、例えば単一コ
ロニーの簡単な観察により行うことができる。これに代
る方法は、単一コロニーから作られた培養物の分析を、
例えば前記の標準的培養条件及び測定条件を用いて行う
ことである。本発明の変異誘発法により作られそして特
に高いアスタキサンチン生産性を有する２つの株が１９
８７年４月６日に、Centraalbureau voor Schimmelcult
ures(CBS), Oosterstraat 1, Postbus 273, NL-3740 AG
Baarn, オランダ、にそれぞれNo. ２２４−８７及び
２２５−８７として寄託されており、そしてＣＢＳ２２
５−８７の再分離株である１つの株（実施例１を参照の
こと）が１９８８年３月２３日にＣＢＳにNo. ２１５−
８８として寄託されており、そして本発明の１つの観点
はこれらの酵母株、並びにこれらの株のアスタキサンチ
ン生産能を実質的に維持しており又はさらに改良してい
る変異株又は誘導株に関する。
【００３１】本発明はまた、アスタキサンチン含有酵母
細胞又は細胞の部分、あるいはこれらの細胞又は細胞の
部分に由来するアスタキサンチンの製造方法に関する。
この方法は、アスタキサンチン生産性酵母細胞を好気的
条件下で、炭水化物源、資化性窒素源及びリン、微量栄
養素並びにビオチンを含有する培地中で１５〜２６℃の
範囲の温度において培養することにより、前記の方法に
より測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量
でアスタキサンチンを含有する生物体を得、そして所望
により次の工程の１つ又は幾つかを任意の順序で行うこ
とを含んで成る。
細胞又は細胞の部分、あるいはこれらの細胞又は細胞の
部分に由来するアスタキサンチンの製造方法に関する。
この方法は、アスタキサンチン生産性酵母細胞を好気的
条件下で、炭水化物源、資化性窒素源及びリン、微量栄
養素並びにビオチンを含有する培地中で１５〜２６℃の
範囲の温度において培養することにより、前記の方法に
より測定した場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量
でアスタキサンチンを含有する生物体を得、そして所望
により次の工程の１つ又は幾つかを任意の順序で行うこ
とを含んで成る。
【００３２】◎ 培養物から細胞を収得して酵母クリー
ムを得る； ◎ 機械的、化学的及び／又は酵素的処理により、及び
／又は細胞を超音波、自己消化、浸透圧溶解 (osmolysi
s ）及び／又は原形質溶解 (plasmolysis ）にかけるこ
とにより、場合によっては適当な薬剤、例えば洗浄、
酸、塩基、酵素、自己消化増強物質、浸透圧溶解剤、例
えば塩及び／又は原形質溶解剤を添加して、細胞を開
く、例えば細胞壁を破る； ◎ 細胞をホモゲナイズしてホモジネートを得る； ◎ 細胞、細胞片又はホモジネートを乾燥させて好まし
くは１２重量％以下の水含量、好ましくは１０重量％以
下の水含量にする； ◎ 細胞、細胞片又はホモジネートからアスタキサンチ
ンを抽出する。
ムを得る； ◎ 機械的、化学的及び／又は酵素的処理により、及び
／又は細胞を超音波、自己消化、浸透圧溶解 (osmolysi
s ）及び／又は原形質溶解 (plasmolysis ）にかけるこ
とにより、場合によっては適当な薬剤、例えば洗浄、
酸、塩基、酵素、自己消化増強物質、浸透圧溶解剤、例
えば塩及び／又は原形質溶解剤を添加して、細胞を開
く、例えば細胞壁を破る； ◎ 細胞をホモゲナイズしてホモジネートを得る； ◎ 細胞、細胞片又はホモジネートを乾燥させて好まし
くは１２重量％以下の水含量、好ましくは１０重量％以
下の水含量にする； ◎ 細胞、細胞片又はホモジネートからアスタキサンチ
ンを抽出する。
【００３３】前記のアスタキサンチン量、すなわち酵母
乾物ｇ当り３００μｇは文献中に報告されているいずれ
のアスタキサンチン濃度よりも高い。 Johnsonら、前
掲、は酵母乾物ｇ当り２９５μｇのアスタキサンチン含
量を報告しているが、この値はアスタキサンチン含量を
含むのみならず、酵母細胞の全色素含量を含む。さら
に、この色素含量は１cmのキュベットにおいてアセトン
中１％（ｗ／ｖ）溶液の吸収の値１６００を用いて測定
されたものであり、その値は本出願人により測定された
もの（２１００）より低いので、 Johnsonらにより報告
された値は、酵母乾物ｇ当り全色素（アスタキサンチン
のみならず）最大２９５×１６００／２１００＝２２５
μｇに相当する。文献からのこの色素含量を本発明の酵
母株の全色素含量、ＣＢＳ２２４−８７株については酵
母乾物ｇ当り８８５μｇ、ＣＢＳ２２５−８７株につい
ては酵母乾物ｇ当り１１７６μｇ、そしてＣＢＳ２１５
−８８株については酵母乾物ｇ当り約１３４０μｇ、あ
るいはさらに高い酵母乾物ｇ当り２０００μｇ以上と比
較すべきである。
乾物ｇ当り３００μｇは文献中に報告されているいずれ
のアスタキサンチン濃度よりも高い。 Johnsonら、前
掲、は酵母乾物ｇ当り２９５μｇのアスタキサンチン含
量を報告しているが、この値はアスタキサンチン含量を
含むのみならず、酵母細胞の全色素含量を含む。さら
に、この色素含量は１cmのキュベットにおいてアセトン
中１％（ｗ／ｖ）溶液の吸収の値１６００を用いて測定
されたものであり、その値は本出願人により測定された
もの（２１００）より低いので、 Johnsonらにより報告
された値は、酵母乾物ｇ当り全色素（アスタキサンチン
のみならず）最大２９５×１６００／２１００＝２２５
μｇに相当する。文献からのこの色素含量を本発明の酵
母株の全色素含量、ＣＢＳ２２４−８７株については酵
母乾物ｇ当り８８５μｇ、ＣＢＳ２２５−８７株につい
ては酵母乾物ｇ当り１１７６μｇ、そしてＣＢＳ２１５
−８８株については酵母乾物ｇ当り約１３４０μｇ、あ
るいはさらに高い酵母乾物ｇ当り２０００μｇ以上と比
較すべきである。
【００３４】本発明の酵母細胞中の高いアスタキサンチ
ン濃度は部分的には後に説明する特定の培養条件の使用
によって得られ、そして部分的には高い本来的アスタキ
サンチン生産性を有する酵母株、好ましくは上に検討し
た酵母株、の選択により得られ、そして特に特定の培養
条件と特定のアスタキサンチン生産酵母株の使用とを組
合わせるのが好ましい。培養は好ましくは、アルコール
が実質的に生成しない条件下でフェド−バッチ（fed-ba
tch ）発酵として行われる。前記のように、培養の温度
は１５〜２６℃の範囲である。１５℃未満では工業的生
産のために許容されるには低過ぎる傾向があり、そして
２８℃より高温では培養物の生存が深刻に障害される。
好ましい温度範囲は２０〜２２℃である。
ン濃度は部分的には後に説明する特定の培養条件の使用
によって得られ、そして部分的には高い本来的アスタキ
サンチン生産性を有する酵母株、好ましくは上に検討し
た酵母株、の選択により得られ、そして特に特定の培養
条件と特定のアスタキサンチン生産酵母株の使用とを組
合わせるのが好ましい。培養は好ましくは、アルコール
が実質的に生成しない条件下でフェド−バッチ（fed-ba
tch ）発酵として行われる。前記のように、培養の温度
は１５〜２６℃の範囲である。１５℃未満では工業的生
産のために許容されるには低過ぎる傾向があり、そして
２８℃より高温では培養物の生存が深刻に障害される。
好ましい温度範囲は２０〜２２℃である。
【００３５】発酵又は少なくともその部分は通常、細胞
のための適当な多量−又は微量−栄養素、例えば炭水化
物源としての糖蜜又はサッカロース、及び窒素源、例え
ばコーンスチープリカー、硫酸アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、水酸化アンモニウム又は尿素、リン源、例
えばリン酸アンモニウム及びリン酸、並びに添加された
微量栄養素又は鉱物塩、例えば硫酸マグネシウム、硫酸
亜鉛、並びにビオチン又はデスチオビオチンを含んで成
る培地中で行われる。酵母製造において使用される常法
に従えば糖蜜又はサッカロースは好ましくは他の成分か
ら分離して培地に供給される。
のための適当な多量−又は微量−栄養素、例えば炭水化
物源としての糖蜜又はサッカロース、及び窒素源、例え
ばコーンスチープリカー、硫酸アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、水酸化アンモニウム又は尿素、リン源、例
えばリン酸アンモニウム及びリン酸、並びに添加された
微量栄養素又は鉱物塩、例えば硫酸マグネシウム、硫酸
亜鉛、並びにビオチン又はデスチオビオチンを含んで成
る培地中で行われる。酵母製造において使用される常法
に従えば糖蜜又はサッカロースは好ましくは他の成分か
ら分離して培地に供給される。
【００３６】培地が糖蜜を含有する場合、酵母細胞の増
殖は発酵槽中の糖又はその中に存在する他の増殖阻害物
質の濃度により影響されることが見出された。この効果
は、培地がコーンスチープリカー又は固形物を含有する
場合に観察された。従って、発酵槽中の糖の濃度（グル
コース及びサッカロースの合計濃度として表わされる）
が８ｇ／ｌ以下、好ましくは５ｇ／ｌ以下、そして最も
好ましくは１ｇ／ｌ以下であるように発酵を制御するの
が有利であることが証明される。
殖は発酵槽中の糖又はその中に存在する他の増殖阻害物
質の濃度により影響されることが見出された。この効果
は、培地がコーンスチープリカー又は固形物を含有する
場合に観察された。従って、発酵槽中の糖の濃度（グル
コース及びサッカロースの合計濃度として表わされる）
が８ｇ／ｌ以下、好ましくは５ｇ／ｌ以下、そして最も
好ましくは１ｇ／ｌ以下であるように発酵を制御するの
が有利であることが証明される。
【００３７】培養物は全発酵期間にわたり通気される。
すなわちそれは好気的条件下で増殖される。「好気的条
件」なる語は、発酵中に酸素の制限が実質的に生じない
様に酸素の供給が十分であるべきことを意味する。前記
のように本発明の特定の観点に従えば、得られる生物体
中のアスタキサンチンの濃度は選択された条件下で培養
を行うことによって増加する。これらの条件は、実質的
にすべての増殖条件に関して実質的に十分である条件下
での増殖期及びそれに続く増殖制限期を含んで成る培養
に関する。増殖制限期は好ましくは、連続通気下での増
殖培地が少なくとも１つの増殖因子を消耗し、この結果
それに続く期間にアスタキサンチンの生産が増強される
条件を提供することにより達成される。
すなわちそれは好気的条件下で増殖される。「好気的条
件」なる語は、発酵中に酸素の制限が実質的に生じない
様に酸素の供給が十分であるべきことを意味する。前記
のように本発明の特定の観点に従えば、得られる生物体
中のアスタキサンチンの濃度は選択された条件下で培養
を行うことによって増加する。これらの条件は、実質的
にすべての増殖条件に関して実質的に十分である条件下
での増殖期及びそれに続く増殖制限期を含んで成る培養
に関する。増殖制限期は好ましくは、連続通気下での増
殖培地が少なくとも１つの増殖因子を消耗し、この結果
それに続く期間にアスタキサンチンの生産が増強される
条件を提供することにより達成される。
【００３８】増殖制限期は一般に、細胞の大部分が増殖
を停止する期間を意味すると理解されるべきである。言
うまでもなくこの期間は培地が少なくとも１つの増殖因
子を消耗する時に起こるが、発酵槽中に存在する細胞の
量が該発酵槽の通気能力を十分に超える場合に炭水化物
添加期間の最後の部分にも観察される。引き続く増殖制
限期がアスタキサンチンの生産をかなり増加せしめる驚
くべき効果を有する（例えば、後の実施例の１つにおい
て得られるように酵母乾物ｇ当り２３１〜３６９μｇ）
を有する理由は知られていないが、増殖期間中にアスタ
キサンチンの前駆体が生産されており、そしてそれに続
く増殖制限期間がアスタキサンチンの最終生産を促進す
る条件、おそらく、増殖が停止した時に得られる酸素過
剰による酸化的条件、を提供するものと予想される。
を停止する期間を意味すると理解されるべきである。言
うまでもなくこの期間は培地が少なくとも１つの増殖因
子を消耗する時に起こるが、発酵槽中に存在する細胞の
量が該発酵槽の通気能力を十分に超える場合に炭水化物
添加期間の最後の部分にも観察される。引き続く増殖制
限期がアスタキサンチンの生産をかなり増加せしめる驚
くべき効果を有する（例えば、後の実施例の１つにおい
て得られるように酵母乾物ｇ当り２３１〜３６９μｇ）
を有する理由は知られていないが、増殖期間中にアスタ
キサンチンの前駆体が生産されており、そしてそれに続
く増殖制限期間がアスタキサンチンの最終生産を促進す
る条件、おそらく、増殖が停止した時に得られる酸素過
剰による酸化的条件、を提供するものと予想される。
【００３９】いずれにしても、後に続く増殖制限期を通
じて通気が続けられるのが必須のようである。後に続く
増殖制限期の持続期間は好ましくは約１６時間以上、例
えば１６〜２４時間であり、より短い持続期間は得られ
る余分の効果を減少せしめる傾向があり、他方増殖制限
期間を約２４時間より延長することにより得られる実質
的な効果はないようである。機能的に表現すれば、増殖
制限期間の条件は、この期間なくして得られる生産の
１．２倍以上、例えばこの期間なくして得られる生産の
１．３倍以上、好ましくはこの期間なくして得られる生
産の１．４倍以上、そして最も好ましくはこの期間なく
して得られる生産の１．５倍以上にアスタキサンチンの
生産を増強するように調整されるべきである。
じて通気が続けられるのが必須のようである。後に続く
増殖制限期の持続期間は好ましくは約１６時間以上、例
えば１６〜２４時間であり、より短い持続期間は得られ
る余分の効果を減少せしめる傾向があり、他方増殖制限
期間を約２４時間より延長することにより得られる実質
的な効果はないようである。機能的に表現すれば、増殖
制限期間の条件は、この期間なくして得られる生産の
１．２倍以上、例えばこの期間なくして得られる生産の
１．３倍以上、好ましくはこの期間なくして得られる生
産の１．４倍以上、そして最も好ましくはこの期間なく
して得られる生産の１．５倍以上にアスタキサンチンの
生産を増強するように調整されるべきである。
【００４０】引き続く増殖制限期を伴う特定の培養に付
される酵母細胞は、該増殖制限段階のためにそのアスタ
キサンチン生産性が増加する野性型のアスタキサンチン
生産酵母細胞、例えばファフィア属の、特にファフィア
・ロドチーマ種の野生形酵母細胞であることができる
が、培養に付される酵母細胞はアスタキサンチンを生産
する本来の且つ改良された能力を有する酵母細胞、典型
的には前に説明したような変異誘発により得られた酵母
細胞であることが好ましい。本来の増加したアスタキサ
ンチン生産性を有するこれらの酵母細胞を用いて、増殖
制限期を含む特定の培養法を用いる場合に得られる生物
体中のアスタキサンチンの濃度は、前記のようにして測
定した場合、酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上、好ましく
は８００μｇ以上、さらに好ましくは１０００μｇ以
上、特に酵母乾物ｇ当り１５００μｇ以上、例えば酵母
乾物ｇ当り２０００μｇ以上、そして最も好ましくは酵
母乾物３０００μｇ以上である。
される酵母細胞は、該増殖制限段階のためにそのアスタ
キサンチン生産性が増加する野性型のアスタキサンチン
生産酵母細胞、例えばファフィア属の、特にファフィア
・ロドチーマ種の野生形酵母細胞であることができる
が、培養に付される酵母細胞はアスタキサンチンを生産
する本来の且つ改良された能力を有する酵母細胞、典型
的には前に説明したような変異誘発により得られた酵母
細胞であることが好ましい。本来の増加したアスタキサ
ンチン生産性を有するこれらの酵母細胞を用いて、増殖
制限期を含む特定の培養法を用いる場合に得られる生物
体中のアスタキサンチンの濃度は、前記のようにして測
定した場合、酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上、好ましく
は８００μｇ以上、さらに好ましくは１０００μｇ以
上、特に酵母乾物ｇ当り１５００μｇ以上、例えば酵母
乾物ｇ当り２０００μｇ以上、そして最も好ましくは酵
母乾物３０００μｇ以上である。
【００４１】通常、そして前記のように、酵母細胞又は
酵母細胞部分中の全色素含量及びアスタキサンチン含量
は酵母乾物ｇ当りのμｇとして記載される。しかしなが
ら、全色素及びアスタキサンチン含量を記載する他の方
法が便利であることが見出されよう。例えば、全色素含
量及びアスタキサンチン含量をそれが存在する懸濁液、
例えば増殖培地ml当りμｇとして記載するのが有用であ
ろう。従って、アスタキサンチン又は全色素がそこから
回収される酵素乾物の重量を測定する必要がない。従っ
て、酵母細胞の培養又は発酵中、酵母細胞のアスタキサ
ンチン及び／又は色素含量を容易に決定することができ
る。
酵母細胞部分中の全色素含量及びアスタキサンチン含量
は酵母乾物ｇ当りのμｇとして記載される。しかしなが
ら、全色素及びアスタキサンチン含量を記載する他の方
法が便利であることが見出されよう。例えば、全色素含
量及びアスタキサンチン含量をそれが存在する懸濁液、
例えば増殖培地ml当りμｇとして記載するのが有用であ
ろう。従って、アスタキサンチン又は全色素がそこから
回収される酵素乾物の重量を測定する必要がない。従っ
て、酵母細胞の培養又は発酵中、酵母細胞のアスタキサ
ンチン及び／又は色素含量を容易に決定することができ
る。
【００４２】高アスタキサンチン含量を有する酵母細胞
を得るための前記の培養の後、培養物をそれに続く細胞
単離のための前記の処理、及び／又はそれに続いて例え
ば細胞の破壊によりそれを使用するための処理に付し、
そして／又はアスタキサンチンを細胞から抽出すること
ができる。これらの処理の次の重要な例をさらに詳細に
検討する。細胞を上昇した圧力及び次の該圧力の開放に
かけることにより該細胞を破壊することができる。
を得るための前記の培養の後、培養物をそれに続く細胞
単離のための前記の処理、及び／又はそれに続いて例え
ば細胞の破壊によりそれを使用するための処理に付し、
そして／又はアスタキサンチンを細胞から抽出すること
ができる。これらの処理の次の重要な例をさらに詳細に
検討する。細胞を上昇した圧力及び次の該圧力の開放に
かけることにより該細胞を破壊することができる。
【００４３】細胞をバルブホモジナイザーを有する系に
通すことにより上昇した圧力及び該圧力の開放にかける
ことができ、この場合、上昇した圧力はバルブホモジナ
イザーの前で達成される。バルブホモジナイザーは、細
胞懸濁液が高圧下で通過するエアロジェット、及び該バ
ルブを通過した実質的に後にジェットがそれに当る障害
部材を有する。細胞破砕バルブの例は１９８５年３月の
APV Gaulin TechnicalBulletin (APV Gaulin Internati
onal SA, P. O. Box 58, 1200 AB Hilversum,オラン
ダ）に記載されており、引例によりこの明細書に組み入
れる。
通すことにより上昇した圧力及び該圧力の開放にかける
ことができ、この場合、上昇した圧力はバルブホモジナ
イザーの前で達成される。バルブホモジナイザーは、細
胞懸濁液が高圧下で通過するエアロジェット、及び該バ
ルブを通過した実質的に後にジェットがそれに当る障害
部材を有する。細胞破砕バルブの例は１９８５年３月の
APV Gaulin TechnicalBulletin (APV Gaulin Internati
onal SA, P. O. Box 58, 1200 AB Hilversum,オラン
ダ）に記載されており、引例によりこの明細書に組み入
れる。
【００４４】適当な細胞破壊ホモジナイザーの例として
前記刊行物に記載されているＣＲ型の細胞破壊バルブを
有するAPV Gaulin ＭＣ４ホモジナイザーを挙げること
ができる。このホモジナイザーは熱交換器に連結され、
その熱交換器中を、破壊された細胞を含有する懸濁液が
細胞破壊バルブから通過する。バルブの前での細胞懸濁
液の圧力は約４００〜１２００bar 、例えば約７００ba
r であろう。この処理は例えば３回、その間に熱交換器
中でホモジネートの冷却を行いながら反復する。
前記刊行物に記載されているＣＲ型の細胞破壊バルブを
有するAPV Gaulin ＭＣ４ホモジナイザーを挙げること
ができる。このホモジナイザーは熱交換器に連結され、
その熱交換器中を、破壊された細胞を含有する懸濁液が
細胞破壊バルブから通過する。バルブの前での細胞懸濁
液の圧力は約４００〜１２００bar 、例えば約７００ba
r であろう。この処理は例えば３回、その間に熱交換器
中でホモジネートの冷却を行いながら反復する。
【００４５】後で説明するように、アスタキサンチン含
量の利用性は問題の動物の消化系に利用され得る細胞含
量に大きく依存するから、細胞が飼料中で使用される場
合はそれが破壊されるか又は他の処理がなされなければ
ならない。破壊された酵母細胞は該破壊された細胞を濃
縮するために限外濾過又は蒸発にかけられる。限外濾過
は、例えば De Denske Sukkerfabrikkerから得られる１
ａｌユニット系、例えば、タイプＲＣ７０の０．８８ｍ
2 の全フィルター面積の限外濾過膜３枚を有するシステ
ム３７において行うことができる。破壊された細胞を濃
縮するための他の方法は、細胞の懸濁液からの水の真空
蒸発を行うことである。
量の利用性は問題の動物の消化系に利用され得る細胞含
量に大きく依存するから、細胞が飼料中で使用される場
合はそれが破壊されるか又は他の処理がなされなければ
ならない。破壊された酵母細胞は該破壊された細胞を濃
縮するために限外濾過又は蒸発にかけられる。限外濾過
は、例えば De Denske Sukkerfabrikkerから得られる１
ａｌユニット系、例えば、タイプＲＣ７０の０．８８ｍ
2 の全フィルター面積の限外濾過膜３枚を有するシステ
ム３７において行うことができる。破壊された細胞を濃
縮するための他の方法は、細胞の懸濁液からの水の真空
蒸発を行うことである。
【００４６】破壊された細胞は噴霧乾燥又はドラム乾燥
により乾燥せしめることができる。乾燥の前にキャリヤ
ー、例えばナトリウムカゼイン、酸化防止剤及び／又は
乳化剤を添加するのが好ましい。噴霧乾燥は、例えば、
破壊された細胞及び場合によっては好ましくは水溶液の
形のナトリウムカゼインのごときキャリヤーの均一に混
合されたスラリーを噴霧乾燥にかけることにより行うこ
とができる。噴霧乾燥は、ナトリウムカゼインの水溶液
と酵母スラリーと混合して約２〜１０％（ｗ／ｖ）のナ
トリウムカゼイン濃度を得ることによって好適に得られ
る。
により乾燥せしめることができる。乾燥の前にキャリヤ
ー、例えばナトリウムカゼイン、酸化防止剤及び／又は
乳化剤を添加するのが好ましい。噴霧乾燥は、例えば、
破壊された細胞及び場合によっては好ましくは水溶液の
形のナトリウムカゼインのごときキャリヤーの均一に混
合されたスラリーを噴霧乾燥にかけることにより行うこ
とができる。噴霧乾燥は、ナトリウムカゼインの水溶液
と酵母スラリーと混合して約２〜１０％（ｗ／ｖ）のナ
トリウムカゼイン濃度を得ることによって好適に得られ
る。
【００４７】次に、得られる混合物を窒素雰囲気中に撹
拌しながら置き、この後噴霧乾燥塔にポンプ輸送し、そ
の中で例えば１５０〜２３０℃、例えば約１８０℃の温
度での乾燥に付して酵母細胞材料の水含量を例えば１０
％以下に減少せしめる。次に酵母細胞材料を噴霧ホイー
ルにより霧化する。噴霧乾燥処理から得られた粉末状酵
母材料はサイクロンにより好適に回収され、そして場合
によっては次に篩別しそして包装する。適当な噴霧乾燥
装置の例は AnhydroからのタイプＥＡＫ−１の噴霧塔で
ある。あるいは、破壊された酵母細胞を、例えば密閉さ
れたドラム乾燥装置において１５０〜２００℃の温度で
ドラム乾燥にかけることができる。
拌しながら置き、この後噴霧乾燥塔にポンプ輸送し、そ
の中で例えば１５０〜２３０℃、例えば約１８０℃の温
度での乾燥に付して酵母細胞材料の水含量を例えば１０
％以下に減少せしめる。次に酵母細胞材料を噴霧ホイー
ルにより霧化する。噴霧乾燥処理から得られた粉末状酵
母材料はサイクロンにより好適に回収され、そして場合
によっては次に篩別しそして包装する。適当な噴霧乾燥
装置の例は AnhydroからのタイプＥＡＫ−１の噴霧塔で
ある。あるいは、破壊された酵母細胞を、例えば密閉さ
れたドラム乾燥装置において１５０〜２００℃の温度で
ドラム乾燥にかけることができる。
【００４８】アスタキサンチンは高温において非常に容
易に分解されるので、破壊された酵母細胞を高温にかけ
る時間を可及的に短かくすることが重要である。さら
に、アスタキサンチンは酸素に感受性であるため、乾燥
は好ましくは非酸化条件下で、例えば不活性雰囲気中、
例えば水蒸気（これは酵母懸濁液から蒸発した水蒸気で
あることができる）、窒素、及び／又は二酸化炭素中で
行うべきである。
易に分解されるので、破壊された酵母細胞を高温にかけ
る時間を可及的に短かくすることが重要である。さら
に、アスタキサンチンは酸素に感受性であるため、乾燥
は好ましくは非酸化条件下で、例えば不活性雰囲気中、
例えば水蒸気（これは酵母懸濁液から蒸発した水蒸気で
あることができる）、窒素、及び／又は二酸化炭素中で
行うべきである。
【００４９】乾燥に先立って、破壊された細胞は場合に
よっては適当な乳化剤、例えばソルビタンモノステアレ
ート又は酸化防止剤、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨ
Ｔ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ビタミ
ンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸の（II）サルフ
ェート又は（II）ホスフェートエステル、あるいはアス
コルビルパルミテートと混合される。破壊された乾燥細
胞は、例えば後で説明するように、動物飼料の成分とし
てそのまま有用である。
よっては適当な乳化剤、例えばソルビタンモノステアレ
ート又は酸化防止剤、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨ
Ｔ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ビタミ
ンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸の（II）サルフ
ェート又は（II）ホスフェートエステル、あるいはアス
コルビルパルミテートと混合される。破壊された乾燥細
胞は、例えば後で説明するように、動物飼料の成分とし
てそのまま有用である。
【００５０】酵母細胞の含有アスタキサンチンは、種々
の抽出剤及び抽出方法を用いてそこから抽出して、酵母
細胞からのアスタキサンチンの実質的な全抽出が得られ
ることを保証することができる。ほとんどの場合、抽出
は破壊された細胞材料において行われなければならな
い。すなわち、乾燥していても湿っていてもよい破壊さ
れた細胞材料は有機溶剤、例えば石油エーテルは水相か
ら分離した相を形成するので湿った細胞材料の場合に好
適に使用される石油エーテルにより抽出することができ
る。他の適当な有機溶剤はアセトン又はアルコール、例
えばメタノールもしくはエタノール、エーテル、ケトン
及び塩素化炭化水素である。抽出により、アスタキサン
チンは有機溶剤中に溶解する。
の抽出剤及び抽出方法を用いてそこから抽出して、酵母
細胞からのアスタキサンチンの実質的な全抽出が得られ
ることを保証することができる。ほとんどの場合、抽出
は破壊された細胞材料において行われなければならな
い。すなわち、乾燥していても湿っていてもよい破壊さ
れた細胞材料は有機溶剤、例えば石油エーテルは水相か
ら分離した相を形成するので湿った細胞材料の場合に好
適に使用される石油エーテルにより抽出することができ
る。他の適当な有機溶剤はアセトン又はアルコール、例
えばメタノールもしくはエタノール、エーテル、ケトン
及び塩素化炭化水素である。抽出により、アスタキサン
チンは有機溶剤中に溶解する。
【００５１】アスタキサンチンは溶液から溶剤を除去す
ることにより、例えば落下フィルム蒸発系での蒸発及び
その後の乾燥により得ることができる。しかしながら、
ある目的のためには有機溶剤中アスタキサンチンの濃縮
物が便利である。濃縮物はそれ自体飼料又は食品の製造
において使用することができ、あるいは濃縮物は稀釈
し、そして稀釈された状態で飼料又は食品の製造におい
て使用することができ、例えば飼料又は食品の構成成分
を前記溶液により含浸せしめることにより、又は油脂の
ごとき食品成分を着色するために前記溶液（又は濃縮
物）を使用することができる。
ることにより、例えば落下フィルム蒸発系での蒸発及び
その後の乾燥により得ることができる。しかしながら、
ある目的のためには有機溶剤中アスタキサンチンの濃縮
物が便利である。濃縮物はそれ自体飼料又は食品の製造
において使用することができ、あるいは濃縮物は稀釈
し、そして稀釈された状態で飼料又は食品の製造におい
て使用することができ、例えば飼料又は食品の構成成分
を前記溶液により含浸せしめることにより、又は油脂の
ごとき食品成分を着色するために前記溶液（又は濃縮
物）を使用することができる。
【００５２】アスタキサンチンはまた酵母細胞から超臨
界条件下で二酸化炭素を使用することにより抽出するこ
とができる。二酸化炭素は適当なエントレイナー、例え
ば有機溶剤、特に前記のタイプの溶剤、又はクロロホル
ムもしくはアセトニトリルのごとき溶剤、又は氷酢酸と
組み合わせて使用することができる。超臨界抽出にかけ
られる酵母細胞は湿った又は乾燥した全体酵母細胞又は
破壊された、例えばホモジナイズされた酵母細胞である
ことができる。
界条件下で二酸化炭素を使用することにより抽出するこ
とができる。二酸化炭素は適当なエントレイナー、例え
ば有機溶剤、特に前記のタイプの溶剤、又はクロロホル
ムもしくはアセトニトリルのごとき溶剤、又は氷酢酸と
組み合わせて使用することができる。超臨界抽出にかけ
られる酵母細胞は湿った又は乾燥した全体酵母細胞又は
破壊された、例えばホモジナイズされた酵母細胞である
ことができる。
【００５３】培養物からアスタキサンチン含有全体細胞
を単離するための好ましい方法は、例えばフィルタープ
レス又は回転ドラムフィルター上で酵母クリームを濾過
して約２５〜３０％の乾物含量のフィルターケーキを得
ることである。次に、フィルターケーキを好適に、孔を
有するプレートを装着した押出機においてひも状物、例
えば約０．５〜２．０mmの直径を有するひも状物にして
押出し、酵母粒子から成るひもを得ることができる。
を単離するための好ましい方法は、例えばフィルタープ
レス又は回転ドラムフィルター上で酵母クリームを濾過
して約２５〜３０％の乾物含量のフィルターケーキを得
ることである。次に、フィルターケーキを好適に、孔を
有するプレートを装着した押出機においてひも状物、例
えば約０．５〜２．０mmの直径を有するひも状物にして
押出し、酵母粒子から成るひもを得ることができる。
【００５４】ひもは好ましくは流動床中の熱空気中に直
接押出され、そこで乾燥される。流動床での蒸発は好ま
しくは、酵母粒子の温度が５０℃未満、例えば３０〜４
０℃に保持されるように調節し、そして酵素乾物量によ
り測定した水分含量（この方法は実施例に記載する）１
０重量％未満、好ましくは８重量％未満となった時にこ
の工程を停止する。あるいは、流動床におけるのと同じ
条件下トレイ乾燥器中で乾燥を行うことができる。次
に、乾燥した全体細胞材料をCoball（商標）のごときボ
ール撹拌ミル中で粉砕し、そして次に抽出にかける。
接押出され、そこで乾燥される。流動床での蒸発は好ま
しくは、酵母粒子の温度が５０℃未満、例えば３０〜４
０℃に保持されるように調節し、そして酵素乾物量によ
り測定した水分含量（この方法は実施例に記載する）１
０重量％未満、好ましくは８重量％未満となった時にこ
の工程を停止する。あるいは、流動床におけるのと同じ
条件下トレイ乾燥器中で乾燥を行うことができる。次
に、乾燥した全体細胞材料をCoball（商標）のごときボ
ール撹拌ミル中で粉砕し、そして次に抽出にかける。
【００５５】特定の方法に従えば、例えば前記のように
して得た全体細胞乾燥材料を油相、例えば可食性油脂、
例えば大豆油もしくは魚油又は他の有機溶剤、例えば前
に検討したタイプの溶剤と混合することができる。温度
は好ましくは２０〜３０℃の範囲である。細胞材料と油
相又は有機溶剤とから得られる混合物はミル、例えばボ
ールミル、例えばボール撹拌ミル、例えばCoball（商
標）ミル中で粉砕して細胞を破壊しそして細胞からアス
タキサンチンを放出せしめることができる。
して得た全体細胞乾燥材料を油相、例えば可食性油脂、
例えば大豆油もしくは魚油又は他の有機溶剤、例えば前
に検討したタイプの溶剤と混合することができる。温度
は好ましくは２０〜３０℃の範囲である。細胞材料と油
相又は有機溶剤とから得られる混合物はミル、例えばボ
ールミル、例えばボール撹拌ミル、例えばCoball（商
標）ミル中で粉砕して細胞を破壊しそして細胞からアス
タキサンチンを放出せしめることができる。
【００５６】生ずる懸濁液をそのまま飼料中に使用する
ことができ、あるいはアスタキサンチンを含有する油相
を細胞残渣から分離した後に使用することができる。麦
芽浸出液から細菌を分離するのに用いられるのと同じ原
理で、高速流 (fast running）遠心機中での遠心分離に
より、前記の分離を好適に行うことができる。言うまで
もなく、他の可能性は前記の方法により得られた破壊さ
れた乾燥細胞材料を油相と混合することであり、これは
前記の油相へのアスタキサンチンの抽出及び分離の実施
と同様にして行う。油相は前記の方法と同様にして飼料
を着色するために用いることができる。
ことができ、あるいはアスタキサンチンを含有する油相
を細胞残渣から分離した後に使用することができる。麦
芽浸出液から細菌を分離するのに用いられるのと同じ原
理で、高速流 (fast running）遠心機中での遠心分離に
より、前記の分離を好適に行うことができる。言うまで
もなく、他の可能性は前記の方法により得られた破壊さ
れた乾燥細胞材料を油相と混合することであり、これは
前記の油相へのアスタキサンチンの抽出及び分離の実施
と同様にして行う。油相は前記の方法と同様にして飼料
を着色するために用いることができる。
【００５７】破壊された細胞材料に対して行われなけれ
ばならない前記のような最も従来的な抽出方法に対し
て、破壊されていない全体酵母細胞からアスタキサンチ
ンを抽出するために氷酢酸を好結果に使用することがで
きることが見出された。すなわち、本発明の１つの観点
に従えば、アスタキサンチンは全体酵母細胞から氷酢酸
を含有する溶剤によって抽出することができ、この抽出
は好ましくは溶剤の氷点より高い温度、例えば２０〜１
００℃の範囲、好ましくは２０〜８０℃の範囲、そして
さらに好ましくは２０〜６０℃の範囲において行われ
る。抽出をより低い温度で行えばアスタキサンチンのさ
らに選択的な抽出を得ることができると考えられる。
ばならない前記のような最も従来的な抽出方法に対し
て、破壊されていない全体酵母細胞からアスタキサンチ
ンを抽出するために氷酢酸を好結果に使用することがで
きることが見出された。すなわち、本発明の１つの観点
に従えば、アスタキサンチンは全体酵母細胞から氷酢酸
を含有する溶剤によって抽出することができ、この抽出
は好ましくは溶剤の氷点より高い温度、例えば２０〜１
００℃の範囲、好ましくは２０〜８０℃の範囲、そして
さらに好ましくは２０〜６０℃の範囲において行われ
る。抽出をより低い温度で行えばアスタキサンチンのさ
らに選択的な抽出を得ることができると考えられる。
【００５８】脂肪及び他の抽出され得る成分の同時抽出
がこれらの低い温度では制限されるであろうからであ
る。溶剤中の氷酢酸の濃度は好ましくは５〜１００，１
０〜７０の範囲である。氷酢酸による抽出は、細胞の色
素の約７０〜９０％の抽出をもたらす。すなわち、酵母
細胞の実質上すべての色素及びアスタキサンチン含量が
氷酢酸抽出物中に見出される。さらに、抽出物は通常約
３０〜３５％の酵母乾物を含有する。適切には、氷酢酸
による抽出にかけられる酵母は乾燥酵母、すなわち、濾
過され、そして次に流動床に押出され、そこで乾燥され
た酵母である。
がこれらの低い温度では制限されるであろうからであ
る。溶剤中の氷酢酸の濃度は好ましくは５〜１００，１
０〜７０の範囲である。氷酢酸による抽出は、細胞の色
素の約７０〜９０％の抽出をもたらす。すなわち、酵母
細胞の実質上すべての色素及びアスタキサンチン含量が
氷酢酸抽出物中に見出される。さらに、抽出物は通常約
３０〜３５％の酵母乾物を含有する。適切には、氷酢酸
による抽出にかけられる酵母は乾燥酵母、すなわち、濾
過され、そして次に流動床に押出され、そこで乾燥され
た酵母である。
【００５９】この様に処理された酵母細胞は抽出処理に
より破壊されない（抽出処理が酵母細胞の激しい機械的
処理を伴わない限り）からである。これは、破壊され又
はホモジナイズされた細胞の抽出に比べて酵母細胞から
の色素を含む抽出物のその後の分離を促進するであろ
う。破壊又はホモジナイズされた細胞は非破壊細胞に比
べて比較的小サイズであるため、使用されるフィルター
の孔を閉塞する傾向が非常に大であるからである。氷酢
酸抽出を実施例９に例示する。氷酢酸による湿酵母の抽
出もまた有用であることが証明されよう。
より破壊されない（抽出処理が酵母細胞の激しい機械的
処理を伴わない限り）からである。これは、破壊され又
はホモジナイズされた細胞の抽出に比べて酵母細胞から
の色素を含む抽出物のその後の分離を促進するであろ
う。破壊又はホモジナイズされた細胞は非破壊細胞に比
べて比較的小サイズであるため、使用されるフィルター
の孔を閉塞する傾向が非常に大であるからである。氷酢
酸抽出を実施例９に例示する。氷酢酸による湿酵母の抽
出もまた有用であることが証明されよう。
【００６０】抽出されたアスタキサンチン及び全体乾燥
細胞材料は、アスタキサンチンを分解から保護するため
に好ましくは酸素欠乏条件下に保持される。すなわち、
アスタキサンチン含有酵母細胞又は抽出されたアスタキ
サンチンは好ましくは酸化防止剤、例えばブチルヒドロ
キシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン
（ＢＨＴ）、ビタミンＥ又はアスコルビン酸、アスコル
ビン酸の（II）サルフェート又は（II）ホスフェートエ
ステル、あるいはアスコルビルパルミテート、及び／又
は乳化剤、例えばモノグリセライド又はソルビタンエス
テルにより保持され、そして密閉条件下で保持される。
細胞材料は、アスタキサンチンを分解から保護するため
に好ましくは酸素欠乏条件下に保持される。すなわち、
アスタキサンチン含有酵母細胞又は抽出されたアスタキ
サンチンは好ましくは酸化防止剤、例えばブチルヒドロ
キシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン
（ＢＨＴ）、ビタミンＥ又はアスコルビン酸、アスコル
ビン酸の（II）サルフェート又は（II）ホスフェートエ
ステル、あるいはアスコルビルパルミテート、及び／又
は乳化剤、例えばモノグリセライド又はソルビタンエス
テルにより保持され、そして密閉条件下で保持される。
【００６１】本発明はまた、前記の方法により測定した
場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量でアスタキサ
ンチンを含有する酵母細胞又は酵母細胞部分を他の飼料
成分と組み合わせて含んで成る飼料に関する。好ましく
は、アスタキサンチン含有酵母細胞又は酵母細胞部分
は、全飼料組成物の乾物に対して１０重量％以下、好ま
しくは５％以下、そしてさらに好ましくは３％以下を占
める。これらの値は、動物に投与されるべき最終飼料に
基いて計算される。高濃度の酵母細胞を有する飼料プレ
ミックスを調製することも可能である。
場合に酵母乾物ｇ当り３００μｇ以上の量でアスタキサ
ンチンを含有する酵母細胞又は酵母細胞部分を他の飼料
成分と組み合わせて含んで成る飼料に関する。好ましく
は、アスタキサンチン含有酵母細胞又は酵母細胞部分
は、全飼料組成物の乾物に対して１０重量％以下、好ま
しくは５％以下、そしてさらに好ましくは３％以下を占
める。これらの値は、動物に投与されるべき最終飼料に
基いて計算される。高濃度の酵母細胞を有する飼料プレ
ミックスを調製することも可能である。
【００６２】酵母細胞、酵母細胞部分又はアスタキサン
チンは場合によっては、該アスタキサンチンを水中分散
性にすることができる乳化剤と混合される。さらに、ア
スタキサンチン含有酵母細胞又は酵母細胞部分は酸化防
止剤及び／又は上記の乳化剤により酸化に対して保護す
ることができ、そして／又は動物飼料を気密性のそして
場合によっては真空にした容器中に詰めることができ
る。アスタキサンチン含有酵母細胞はまた、それ自体飼
料成分として使用するために包装することができ、ある
いは酵母細胞はそれ自体、通常の又は適合された飼料混
合物が供与された動物に与えられる。
チンは場合によっては、該アスタキサンチンを水中分散
性にすることができる乳化剤と混合される。さらに、ア
スタキサンチン含有酵母細胞又は酵母細胞部分は酸化防
止剤及び／又は上記の乳化剤により酸化に対して保護す
ることができ、そして／又は動物飼料を気密性のそして
場合によっては真空にした容器中に詰めることができ
る。アスタキサンチン含有酵母細胞はまた、それ自体飼
料成分として使用するために包装することができ、ある
いは酵母細胞はそれ自体、通常の又は適合された飼料混
合物が供与された動物に与えられる。
【００６３】酵母細胞又は酵母細胞の部分は好適にはそ
して通常は、蛋白質及び炭水化物源、油脂並びに微量栄
養素、例えばビタミン及びミネラルから選択される他の
栄養素と混合される。蛋白質源の例として、カゼイン、
アルブミン、小麦グルテン、魚粉、濃縮魚類残渣（ニベ
粉末及び血粉）が挙げられる。炭水化物源の例として糊
化澱粉、押麦、糖蜜、野菜粉末、及びコーンスターチが
挙げられる。飼料中の油脂成分は例えば魚油及びタラの
肝油及び／又は植物油、例えばトウモロコシ油であるこ
とができる。ミネラルは、カルシウム、リン、ナトリウ
ム、カリウム、塩素、マグネシウム、銅、マンガン、亜
鉛、コバルト及びセレンの無機化合物又は単純な有機化
合物から選択される。ビタミンの例として、ビタミンＢ
12、プロリン、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、
ビタミンＫ、チアミン、アスコルビン酸、リボフラビ
ン、ピリドキシン、ナフトエ酸、ナイアシン、ビオチ
ン、コリン及びイノシトールが挙げられる。
して通常は、蛋白質及び炭水化物源、油脂並びに微量栄
養素、例えばビタミン及びミネラルから選択される他の
栄養素と混合される。蛋白質源の例として、カゼイン、
アルブミン、小麦グルテン、魚粉、濃縮魚類残渣（ニベ
粉末及び血粉）が挙げられる。炭水化物源の例として糊
化澱粉、押麦、糖蜜、野菜粉末、及びコーンスターチが
挙げられる。飼料中の油脂成分は例えば魚油及びタラの
肝油及び／又は植物油、例えばトウモロコシ油であるこ
とができる。ミネラルは、カルシウム、リン、ナトリウ
ム、カリウム、塩素、マグネシウム、銅、マンガン、亜
鉛、コバルト及びセレンの無機化合物又は単純な有機化
合物から選択される。ビタミンの例として、ビタミンＢ
12、プロリン、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、
ビタミンＫ、チアミン、アスコルビン酸、リボフラビ
ン、ピリドキシン、ナフトエ酸、ナイアシン、ビオチ
ン、コリン及びイノシトールが挙げられる。
【００６４】本発明はまた、酵母から、好ましくは本発
明の酵母又は本発明の方法により製造された酵母から例
えば前記の方法のいずれかにより抽出されたアスタキサ
ンチンを含んで成る食品又は飼料に関する。アスタキサ
ンチンは前記の飼料成分との混合物として、そしてさら
に他の食品又は栄養成分との混合物として、並びに他の
着色剤との混合物として使用することができる。すなわ
ち、酵母細胞から抽出されたアスタキサンチンは、可食
性油、バター、マーガリン、ショートニング、マヨネー
ズ、パテ、スープ、スタック製品、すり身製品、デザー
ト、アイスクリーム、菓子、焼製品及び飲み物中で使用
するために他の着色剤と混合して、又は単独で使用する
のに非常に適当である。
明の酵母又は本発明の方法により製造された酵母から例
えば前記の方法のいずれかにより抽出されたアスタキサ
ンチンを含んで成る食品又は飼料に関する。アスタキサ
ンチンは前記の飼料成分との混合物として、そしてさら
に他の食品又は栄養成分との混合物として、並びに他の
着色剤との混合物として使用することができる。すなわ
ち、酵母細胞から抽出されたアスタキサンチンは、可食
性油、バター、マーガリン、ショートニング、マヨネー
ズ、パテ、スープ、スタック製品、すり身製品、デザー
ト、アイスクリーム、菓子、焼製品及び飲み物中で使用
するために他の着色剤と混合して、又は単独で使用する
のに非常に適当である。
【００６５】アスタキサンチンがほとんど水又は水相か
ら成る食品に使用される場合、アスタキサンチンは好ま
しくは前記の乳化剤と混合され、この乳化剤は、結晶化
のなんらの傾向を伴わないでそしてアスタキサンチンを
溶解するのに油相の添加を必要としないでアスタキサン
チンを水相中に分散性にするものである。さらに、本発
明は動物の肉の及び／又は該動物により生産される生成
物の赤の着色を得るために動物を飼育する方法に関し、
この方法は、前記の方法により測定した場合に酵母乾物
ｇ当り３００μｇ以上の量でアスタキサンチンを含有す
る酵母細胞又は細胞部分、あるいはそのような酵母細胞
又は細胞部分から抽出したアスタキサンチンを含有する
飼料を動物に供与することを含んで成る。
ら成る食品に使用される場合、アスタキサンチンは好ま
しくは前記の乳化剤と混合され、この乳化剤は、結晶化
のなんらの傾向を伴わないでそしてアスタキサンチンを
溶解するのに油相の添加を必要としないでアスタキサン
チンを水相中に分散性にするものである。さらに、本発
明は動物の肉の及び／又は該動物により生産される生成
物の赤の着色を得るために動物を飼育する方法に関し、
この方法は、前記の方法により測定した場合に酵母乾物
ｇ当り３００μｇ以上の量でアスタキサンチンを含有す
る酵母細胞又は細胞部分、あるいはそのような酵母細胞
又は細胞部分から抽出したアスタキサンチンを含有する
飼料を動物に供与することを含んで成る。
【００６６】アスタキサンチン又はアスタキサンチン含
有酵母細胞もしくは酵母細胞部分を含有する飼料の動物
に投与する量は、問題の動物種、及びアスタキサンチン
により得ることが望まれる着色効果に依存するであろ
う。明らかに、従うべき原理は、動物が通常の推奨され
る日用量の大量−及び微量栄養素を摂取し、そしてさら
に問題の動物の肉又は動物産物の所望の着色をもたらす
であろう形態及び量のアスタキサンチンを摂取すること
である。幾つかのケースにおいて、供与されるべきアス
タキサンチンの量は季節に依存し、従って例えば、牛が
生草を摂取する時にはバターの着色は適切であると一般
に考えられるので、夏場にバターの着色を得るために牛
にアスタキサンチン又は他のカロチノイドを投与するの
は好ましくないであろう。
有酵母細胞もしくは酵母細胞部分を含有する飼料の動物
に投与する量は、問題の動物種、及びアスタキサンチン
により得ることが望まれる着色効果に依存するであろ
う。明らかに、従うべき原理は、動物が通常の推奨され
る日用量の大量−及び微量栄養素を摂取し、そしてさら
に問題の動物の肉又は動物産物の所望の着色をもたらす
であろう形態及び量のアスタキサンチンを摂取すること
である。幾つかのケースにおいて、供与されるべきアス
タキサンチンの量は季節に依存し、従って例えば、牛が
生草を摂取する時にはバターの着色は適切であると一般
に考えられるので、夏場にバターの着色を得るために牛
にアスタキサンチン又は他のカロチノイドを投与するの
は好ましくないであろう。
【００６７】さらに、アスタキサンチン又はアスタキサ
ンチン含有酵母細胞もしくは細胞の部分が動物に投与さ
れる量は幾つかの場合には季節に依存するであろう。す
なわち、例えば、サケ又はマスのごとき魚類の場合、夏
場に魚により消費される量とは対照的に冬場に魚により
消費される量は相対的に少い。しかしながら、魚に供与
される適当な量は一日当り魚体重の約１．５％であり、
これはCalifornia State Department of Fish and Game
により与えられた推奨に相当する。
ンチン含有酵母細胞もしくは細胞の部分が動物に投与さ
れる量は幾つかの場合には季節に依存するであろう。す
なわち、例えば、サケ又はマスのごとき魚類の場合、夏
場に魚により消費される量とは対照的に冬場に魚により
消費される量は相対的に少い。しかしながら、魚に供与
される適当な量は一日当り魚体重の約１．５％であり、
これはCalifornia State Department of Fish and Game
により与えられた推奨に相当する。
【００６８】家禽により生産される卵の黄味及び／又は
家禽の肉もしくは皮膚の着色のために前記の方法により
家禽を飼育する場合、飼料は常用の家禽飼料成分により
構成することができ、その例は、好ましくは蛋白質及び
炭水化物源、例えば大豆粉、大豆蛋白質、セルロース、
澱粉及び油脂源、例えば大豆油、ビタミン、例えば全ビ
タミン混合物、及びミネラル、例えば家禽のための一般
的ミネラル成分の混合物、並びに卵殻のためのカルシウ
ム源、好ましくは炭酸カルシウム及びリン酸水素カルシ
ウムを含有するものである。少量の塩化ナトリウムも存
在することができる。飼料は常用の供与量で供与するこ
とができる。次に実験例によりこの発明をさらに説明す
る。
家禽の肉もしくは皮膚の着色のために前記の方法により
家禽を飼育する場合、飼料は常用の家禽飼料成分により
構成することができ、その例は、好ましくは蛋白質及び
炭水化物源、例えば大豆粉、大豆蛋白質、セルロース、
澱粉及び油脂源、例えば大豆油、ビタミン、例えば全ビ
タミン混合物、及びミネラル、例えば家禽のための一般
的ミネラル成分の混合物、並びに卵殻のためのカルシウ
ム源、好ましくは炭酸カルシウム及びリン酸水素カルシ
ウムを含有するものである。少量の塩化ナトリウムも存
在することができる。飼料は常用の供与量で供与するこ
とができる。次に実験例によりこの発明をさらに説明す
る。
【００６９】材料及び方法 培養物の維持 ファフィア・ロドチーマの培養物を次の２つの方法によ
り維持する。 １）寒天スラント（ＹＭ−寒天）上で。スラントを２０
℃にて１週間インキュベートし、そして４℃にて１ケ月
保持し、あらたなスラントを作る前にＹＭ−液体培地中
で再培養する。 ２）−８０℃での凍結保存。凍結バイアル又はスラント
から菌株を２５０mlの振とうフラスコ中５０mlのＹＭ−
液体培地に接種する。振とうフラスコを回転振とう機
（１５０rpm ）上で２０℃にて４〜５日間インキュベー
トする。酵母細胞を沈澱せしめ、そして液をデカントす
る。沈降物をグリセロール中に２０％の濃度に混合し、
凍結バイアルに分注し、そしてディープ・フリーザー中
で−８０℃にて貯蔵する。
り維持する。 １）寒天スラント（ＹＭ−寒天）上で。スラントを２０
℃にて１週間インキュベートし、そして４℃にて１ケ月
保持し、あらたなスラントを作る前にＹＭ−液体培地中
で再培養する。 ２）−８０℃での凍結保存。凍結バイアル又はスラント
から菌株を２５０mlの振とうフラスコ中５０mlのＹＭ−
液体培地に接種する。振とうフラスコを回転振とう機
（１５０rpm ）上で２０℃にて４〜５日間インキュベー
トする。酵母細胞を沈澱せしめ、そして液をデカントす
る。沈降物をグリセロール中に２０％の濃度に混合し、
凍結バイアルに分注し、そしてディープ・フリーザー中
で−８０℃にて貯蔵する。
【００７０】酵母乾物含量の測定 ５mlの酵母細胞培養物を秤量したサルステッド (Sarste
dt）チューブ（１１０℃にて一定重量になるまで乾燥し
たもの）中で１０，０００×ｇにて５分間遠心し、そし
て脱塩水で２回洗浄する。液をデカントにより除去し、
そして１１０℃にて一定重量にまで乾燥した後、細胞を
含むチューブの重量を測定する。これにより酵母細胞の
重量（Ｙｇ）が得られる。次に、酵母乾物含量（ＹＤＭ
Ｃ）を次の様にして計算する。 ＹＤＭＣ（ｇ／ｌ）＝Ｙ／５．００×１，０００ 記載される含量は２個の測定の平均値である。
dt）チューブ（１１０℃にて一定重量になるまで乾燥し
たもの）中で１０，０００×ｇにて５分間遠心し、そし
て脱塩水で２回洗浄する。液をデカントにより除去し、
そして１１０℃にて一定重量にまで乾燥した後、細胞を
含むチューブの重量を測定する。これにより酵母細胞の
重量（Ｙｇ）が得られる。次に、酵母乾物含量（ＹＤＭ
Ｃ）を次の様にして計算する。 ＹＤＭＣ（ｇ／ｌ）＝Ｙ／５．００×１，０００ 記載される含量は２個の測定の平均値である。
【００７１】全色素の測定のための分光光度法分析 メタノール抽出物中の全色素の含量は、 B. H. Davies,
「Carotenoids 」, T.W. Goodwin （編集）, Chemistry
and Biochemistry of plant pigments, NewYork, Vol.
２, １４９頁により記載されているようにして、λmax
の平均及びベール (Beer）の法則により分光光度法によ
り測定される。使用する分光光度計は島津ＵＶ可視記録
分光光度計ＵＶ２６０である。色素含量は後記の式１，
１ａ，２，２ｂ、及び下記表１の吸光係数を用いて計算
される。
「Carotenoids 」, T.W. Goodwin （編集）, Chemistry
and Biochemistry of plant pigments, NewYork, Vol.
２, １４９頁により記載されているようにして、λmax
の平均及びベール (Beer）の法則により分光光度法によ
り測定される。使用する分光光度計は島津ＵＶ可視記録
分光光度計ＵＶ２６０である。色素含量は後記の式１，
１ａ，２，２ｂ、及び下記表１の吸光係数を用いて計算
される。
【００７２】
【表１】
【００７３】色素の抽出及び分析−方法１ 約３０mlの酵母培養物をサルステッドチューブに移し、
そして１０，０００×ｇにて５分間遠心した。酵母細胞
を脱イオン水中で洗浄し、そして約２０mlのメタノール
に懸濁した。ローターが直径０．４mmのガラスボール
（ガラスボール約１５ｇ）で覆われている Bead Beater
型ガラスボールミル (Biospec Products Inc., 米国）
にメタノール懸濁液を添加して残りの遊離ボールミル容
量をうめた。ミルを３０秒間の間隔をおいて１分間ずつ
５回運転することにより破砕処理を行い、破砕処理の温
度を２０℃未満に維持するように冷却ジャケットに氷水
を保持した。破砕処理の直後にホモジネートの一部をサ
ルステッドチューブに移し、そして前記のようにして、
但し遠心をしないで酵母乾物を測定した。既知量（bg）
のホモジネートを１０mlのメスフラスコに移し、そして
溶剤を加えて１０mlとした。この溶液の吸収を測定し
た。
そして１０，０００×ｇにて５分間遠心した。酵母細胞
を脱イオン水中で洗浄し、そして約２０mlのメタノール
に懸濁した。ローターが直径０．４mmのガラスボール
（ガラスボール約１５ｇ）で覆われている Bead Beater
型ガラスボールミル (Biospec Products Inc., 米国）
にメタノール懸濁液を添加して残りの遊離ボールミル容
量をうめた。ミルを３０秒間の間隔をおいて１分間ずつ
５回運転することにより破砕処理を行い、破砕処理の温
度を２０℃未満に維持するように冷却ジャケットに氷水
を保持した。破砕処理の直後にホモジネートの一部をサ
ルステッドチューブに移し、そして前記のようにして、
但し遠心をしないで酵母乾物を測定した。既知量（bg）
のホモジネートを１０mlのメスフラスコに移し、そして
溶剤を加えて１０mlとした。この溶液の吸収を測定し
た。
【００７４】酵母乾物ｇ当りの全色素量μｇは次の様に
して決定される。
して決定される。
【数１】
【００７５】色素の抽出及び分析−方法２ 所定量の酵母培養物（ａml）をサルステッドチューブに
移し、そして１０，０００×ｇにて５分間遠心分離す
る。酵母細胞を脱イオン水中で洗浄し、そして約２０ml
のメタノールに懸濁する。ローターが直径０．４mmのガ
ラスボールで覆われている（ガラスボール約１５ｇ） B
ead Beater型ガラスボールミル (BiospecProducts Inc.
米国）にメタノール懸濁液を加えて残りの遊離ボール
ミル容量をうめた。ミルを３０秒間の間隔をおいて１分
間ずつ５回運転することにより破砕処理を行い、破砕処
理の温度を２０℃未満に維持するように冷却ジャケット
に氷水を保持した。破砕処理の直後に液体を５０mlのメ
スフラスコに移した。
移し、そして１０，０００×ｇにて５分間遠心分離す
る。酵母細胞を脱イオン水中で洗浄し、そして約２０ml
のメタノールに懸濁する。ローターが直径０．４mmのガ
ラスボールで覆われている（ガラスボール約１５ｇ） B
ead Beater型ガラスボールミル (BiospecProducts Inc.
米国）にメタノール懸濁液を加えて残りの遊離ボール
ミル容量をうめた。ミルを３０秒間の間隔をおいて１分
間ずつ５回運転することにより破砕処理を行い、破砕処
理の温度を２０℃未満に維持するように冷却ジャケット
に氷水を保持した。破砕処理の直後に液体を５０mlのメ
スフラスコに移した。
【００７６】ミル中のガラスビーズを４×８mlのメタノ
ールで洗浄した。画分を集め、そして混合し、そしてメ
タノールを加えて５０mlとした。メタノール抽出物を濾
過した後に色素を分析する。培養物中の酵母乾物は前記
のようにして測定する。サンプルml当りの全色素含量を
次のようにして決定する。
ールで洗浄した。画分を集め、そして混合し、そしてメ
タノールを加えて５０mlとした。メタノール抽出物を濾
過した後に色素を分析する。培養物中の酵母乾物は前記
のようにして測定する。サンプルml当りの全色素含量を
次のようにして決定する。
【００７７】
【数２】 酵母乾物ｇ当り全色素含量は次のようにして決定する。
【数３】
【００７８】アスタキサンチンの測定のためのＨＰＬＣ
分析−方法１ 装置 カラム：LKB Ultropac Precolum, Lichrosorb RP18 ７μｍ、４×３０mm； LKB Ultropac Colum, Lichrosorb RP18 ５μｍ、４×２５０mm。 検出 ：ＬＫＢ２１５１可変波長モニター。 積分機： Waters ７４０ Date Module。 コントローラー：ＬＫＢ２１５２ ＨＰＬＣコントロー
ラー。 ポンプ：ＬＫＢ２１５０ ＨＰＬＣポンプ。 自動サンプラー：可変ループを有するＬＫＢ２１５７オ
ートサンプラー。 手動注入： Rheodyne ２０μｌループ。
分析−方法１ 装置 カラム：LKB Ultropac Precolum, Lichrosorb RP18 ７μｍ、４×３０mm； LKB Ultropac Colum, Lichrosorb RP18 ５μｍ、４×２５０mm。 検出 ：ＬＫＢ２１５１可変波長モニター。 積分機： Waters ７４０ Date Module。 コントローラー：ＬＫＢ２１５２ ＨＰＬＣコントロー
ラー。 ポンプ：ＬＫＢ２１５０ ＨＰＬＣポンプ。 自動サンプラー：可変ループを有するＬＫＢ２１５７オ
ートサンプラー。 手動注入： Rheodyne ２０μｌループ。
【００７９】溶剤 Ａ：８６０mlのアセトニトリル＋１００mlの水＋４０mlの蟻酸。 Ｂ：９６０mlの酢酸エチル＋４０mlの蟻酸。 すべての溶剤はＨＰＬＣグレードであった。流速 １．０ml／分。クラジエント ０−１００％ Ｂ ２０分間、直線グラジエント １００−０％ Ｂ １０分間、直線グラジエント検出器 ４７１nm。温度 周囲温度。標準溶液 ホフマン・ラ・ロシュ（Hoffmann. La Rocheにより供給される純アス タキサンチン（融点２２０−２２２℃、１cmキュベット中１％ｗ／ｖ アセトン溶液の吸収２１０００）（以後、アスタキサンチン標準と称 する）を秤量し、そして５００mlのアセトンに溶解する。 ＨＰＬＣ分析のため、問題のサンプル２０μｌをＨＰＬ
Ｃクロマトグラフィー装置に注入する。
Ｃクロマトグラフィー装置に注入する。
【００８０】アスタキサンチンの測定のためのＨＰＬＣ分析−方法２ ＨＰＬＣデータ 装置 カラム：Supelco プレカラム Supelco ＬＣ １８−ＤＢ，粒子サイズ ５μ カラム寸法 ４．５×２５０cm。 検出器：ＬＫＢ２１５１可変波長モニター。 積分機： Waters ７４０ Date Module。 コントローラー：ＬＫＢ２１５２ ＨＰＬＣコントローラー。 ポンプ：ＬＫＢ２１５０ ＨＰＬＣポンプ。 自動サンプラー：可変ループを有するＬＫＢ２１５７オートサンプラー。 手動注入： Rheodyne ２０μｌループ。溶剤 Ａ：４００ml テトラヒドロフラン ４００ml メタノール ２００ml ０．０２Ｍグリシン緩衝液pH２．６ Ｂ：１０００ml テトラヒドロフラン。
【００８１】緩衝液以外のすべての溶剤はＨＰＬＣグレ
ードである。緩衝液は使用前に０．２２μｍフィルター
を通して無菌化する。検出器 ４８０nm。温度 室温。グラジエント及び流速
ードである。緩衝液は使用前に０．２２μｍフィルター
を通して無菌化する。検出器 ４８０nm。温度 室温。グラジエント及び流速
【００８２】
【表２】
【００８３】標準溶液 ５mgのアスタキサンチン標準を
秤量し、そして５００mlのテトラヒドロフランに溶解す
る。ＨＰＬＣ分析のため、問題のサンプル２０μｌをＨ
ＰＬＣクロマトグラフィー装置に注入する。サルステッドチューブ Hounisens Laboratory, Arhus, デンマークにより供給
されるタイプ５５５３３のポリプロピレン栓を有するポ
リプロピレン遠心チューブ。
秤量し、そして５００mlのテトラヒドロフランに溶解す
る。ＨＰＬＣ分析のため、問題のサンプル２０μｌをＨ
ＰＬＣクロマトグラフィー装置に注入する。サルステッドチューブ Hounisens Laboratory, Arhus, デンマークにより供給
されるタイプ５５５３３のポリプロピレン栓を有するポ
リプロピレン遠心チューブ。
【００８４】化学物質 実験室規模で使用する化学物質は分析グレードのもので
ある。発酵に使用する化学物質は食品グレードのもので
ある。グルコース及びシュークロース濃度はベーリンガ
ー・マンハイムからのキット（Best. No. １３９０４
１）を用いて分析した。振とうフラスコ培養及び寒天プレート用培地 Difco Laboratories Incorporated により供給されるＹ
Ｍ (Yeast Morphology）培地（ディフコ・マニュアル：
Dehydrated culture media and reagents formicrobiol
ogy, 第１０版、デトロイト、１９８４）。凍結バイアル Technunc, Roskilde, デンマークにより供給されるタイ
プ３６３４０１の２．０ml容量のポリプロピレンチュー
ブ。
ある。発酵に使用する化学物質は食品グレードのもので
ある。グルコース及びシュークロース濃度はベーリンガ
ー・マンハイムからのキット（Best. No. １３９０４
１）を用いて分析した。振とうフラスコ培養及び寒天プレート用培地 Difco Laboratories Incorporated により供給されるＹ
Ｍ (Yeast Morphology）培地（ディフコ・マニュアル：
Dehydrated culture media and reagents formicrobiol
ogy, 第１０版、デトロイト、１９８４）。凍結バイアル Technunc, Roskilde, デンマークにより供給されるタイ
プ３６３４０１の２．０ml容量のポリプロピレンチュー
ブ。
【００８５】例１．変異誘発 変異誘発 各場合において、処理された培養物の生存の程度が１〜
５％であるように変異誘発処理を行った。寒天プレート
に単一コロニーとしてプレートした場合に変異株の赤色
の強さを視覚的に比較することによって適当な変異体を
選択した。ＵＶ−照射 ＹＭ培地中に２０〜２２℃にて増殖したＡＴＣＣ２４２
６１のちょうど濁っている４日培養物を０．９％ＮａＣ
ｌ溶液中に、それぞれ１０-1，１０-1.5，１０ -2，１０
-2.5及び１０-3の濃度に稀釈し、そしてこれらの稀釈物
のそれぞれの０．３mlを寒天プレート上にプレートし、
１００〜３００コロニーを含む寒天プレートを得た。次
に、これらのプレートを照射原（Vilbert Lourmat ＶＬ
３０ＬＣ）から２０cmの距離で２５４nmにて３０秒間
紫外線照射にかけ、そして次に２０〜２２℃にて１０日
間増殖せしめ、この後、生じたコロニーの色を比較し
た。
５％であるように変異誘発処理を行った。寒天プレート
に単一コロニーとしてプレートした場合に変異株の赤色
の強さを視覚的に比較することによって適当な変異体を
選択した。ＵＶ−照射 ＹＭ培地中に２０〜２２℃にて増殖したＡＴＣＣ２４２
６１のちょうど濁っている４日培養物を０．９％ＮａＣ
ｌ溶液中に、それぞれ１０-1，１０-1.5，１０ -2，１０
-2.5及び１０-3の濃度に稀釈し、そしてこれらの稀釈物
のそれぞれの０．３mlを寒天プレート上にプレートし、
１００〜３００コロニーを含む寒天プレートを得た。次
に、これらのプレートを照射原（Vilbert Lourmat ＶＬ
３０ＬＣ）から２０cmの距離で２５４nmにて３０秒間
紫外線照射にかけ、そして次に２０〜２２℃にて１０日
間増殖せしめ、この後、生じたコロニーの色を比較し
た。
【００８６】ＥＭＳ（エチル−メタン−スルホネート）
処理 振とうボード上ＹＭ培地中で２０〜２２℃にて増殖した
ＡＴＣＣ２４２６１の４日間培養物２×１５mlを、ＭＳ
Ｅ Major遠心機中で１２５０×ｇにて１５分間遠心し、
そしてペレットを２００mlの遠心チューブ中無菌０．９
％ＮａＣｌ溶液２×１５ml中に懸濁した。細胞懸濁液の
１つを対照として用いた。他の細胞懸濁液に１ｇのＥＭ
Ｓ（Serva ２８７５５）を添加した。２０℃にて３０分
間の処理の後、１５０mlの冷無菌０．９％ＮａＣｌ溶液
を加えた。酵母細胞を無菌０．９％ＮａＣｌ中で２回洗
浄し、そして０．９％ＮａＣｌに懸濁した。次に、ＵＶ
−処理について前記したのと同じ方法で酵母細胞懸濁液
を稀釈しそして寒天プレート上にプレートした。単離さ
れた変異株の１つを１９８７年４月６日にＣＢＳ（Cent
raalbureau voor Schimmelcultures）にNo. ２２４−８
７として寄託した。
処理 振とうボード上ＹＭ培地中で２０〜２２℃にて増殖した
ＡＴＣＣ２４２６１の４日間培養物２×１５mlを、ＭＳ
Ｅ Major遠心機中で１２５０×ｇにて１５分間遠心し、
そしてペレットを２００mlの遠心チューブ中無菌０．９
％ＮａＣｌ溶液２×１５ml中に懸濁した。細胞懸濁液の
１つを対照として用いた。他の細胞懸濁液に１ｇのＥＭ
Ｓ（Serva ２８７５５）を添加した。２０℃にて３０分
間の処理の後、１５０mlの冷無菌０．９％ＮａＣｌ溶液
を加えた。酵母細胞を無菌０．９％ＮａＣｌ中で２回洗
浄し、そして０．９％ＮａＣｌに懸濁した。次に、ＵＶ
−処理について前記したのと同じ方法で酵母細胞懸濁液
を稀釈しそして寒天プレート上にプレートした。単離さ
れた変異株の１つを１９８７年４月６日にＣＢＳ（Cent
raalbureau voor Schimmelcultures）にNo. ２２４−８
７として寄託した。
【００８７】Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソ
グアニジンによる処理 ２５mgのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン（Aldrich Chemie BDR）を、ガラス栓を有する１
０mlの目方を量った目盛付きシリンダーに加えた。水を
加えて全容１０mlとし、そしてその中でＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを振とうにより
溶解した。この溶液から１０×１mlのストック溶液を得
た。
グアニジンによる処理 ２５mgのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジン（Aldrich Chemie BDR）を、ガラス栓を有する１
０mlの目方を量った目盛付きシリンダーに加えた。水を
加えて全容１０mlとし、そしてその中でＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを振とうにより
溶解した。この溶液から１０×１mlのストック溶液を得
た。
【００８８】振とうボード上ＹＭ培地中で２０〜２２℃
にて増殖したＣＢＳ２２４−８７（前記ＥＭＳ処理によ
り得られた変異株）の４日培養物２×２０mlをサルステ
ッドチューブに移し、そして２回の遠心分離にかけた。
プレートを１．５mlの０．９％無菌ＮａＣｌ溶液に懸濁
し、そして上に調製した１mlのストック溶液を加えた。
２０〜２２℃にて１時間のインキュベーションの後、酵
母細胞を５回、１０mlの冷無菌０．９％ＮａＣｌ溶液中
で洗浄し、これによってＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジンを除去した。次に、ＵＶ−処理に
ついて前記したようにして酵母細胞を稀釈し、そして寒
天プレート上にプレートした。単離された変異株の１つ
を１９８７年４月６日にＣＢＳにNo. ２２５−８７とし
て寄託した。
にて増殖したＣＢＳ２２４−８７（前記ＥＭＳ処理によ
り得られた変異株）の４日培養物２×２０mlをサルステ
ッドチューブに移し、そして２回の遠心分離にかけた。
プレートを１．５mlの０．９％無菌ＮａＣｌ溶液に懸濁
し、そして上に調製した１mlのストック溶液を加えた。
２０〜２２℃にて１時間のインキュベーションの後、酵
母細胞を５回、１０mlの冷無菌０．９％ＮａＣｌ溶液中
で洗浄し、これによってＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジンを除去した。次に、ＵＶ−処理に
ついて前記したようにして酵母細胞を稀釈し、そして寒
天プレート上にプレートした。単離された変異株の１つ
を１９８７年４月６日にＣＢＳにNo. ２２５−８７とし
て寄託した。
【００８９】再単離 ＣＢＳ２２５−８７を次に記載するようにして単離に付
した。凍結乾燥したバイアルから酵母をＹＭ培地に懸濁
し、そして２０〜２２℃にて５日間インキュベートし
た。培養物をＹＭプレート上にプレートし、そして２０
〜２２℃にて１０日間インキュベートし、そして新しい
コロニーを単離した。コロニーの１つを１９８８年３月
２３日にＣＢＳにNo. ２１５−８８として寄託した。
した。凍結乾燥したバイアルから酵母をＹＭ培地に懸濁
し、そして２０〜２２℃にて５日間インキュベートし
た。培養物をＹＭプレート上にプレートし、そして２０
〜２２℃にて１０日間インキュベートし、そして新しい
コロニーを単離した。コロニーの１つを１９８８年３月
２３日にＣＢＳにNo. ２１５−８８として寄託した。
【００９０】例２．野性型ファフィア・ロドチーマ株及
び例１において調製された変異株のアスタキサンチン含
量の測定 この例において記載される酵母細胞の培養及びアスタキ
サンチンの測定は、一方において、酵母株の本来的アス
タキサンチン生産能を測定するための本件出願人の前記
標準法において酵母細胞が増殖する条件を構成し、そし
て他方においてアスタキサンチンを測定する条件を構成
する。これらは、請求の範囲に記載するのと同じ標準条
件である。
び例１において調製された変異株のアスタキサンチン含
量の測定 この例において記載される酵母細胞の培養及びアスタキ
サンチンの測定は、一方において、酵母株の本来的アス
タキサンチン生産能を測定するための本件出願人の前記
標準法において酵母細胞が増殖する条件を構成し、そし
て他方においてアスタキサンチンを測定する条件を構成
する。これらは、請求の範囲に記載するのと同じ標準条
件である。
【００９１】振とうフラスコ培養 振とうボード上ＹＭ培地中で２０〜２２℃にて増殖した
ＡＴＣＣ２４２６１の４日培養物１００μｌを２個のバ
ッフルを有する５００ml振とうフラスコ中の５０mlのＹ
Ｍ培地に接種した。この培養物を１５０rpm 、４日間、
２０〜２２℃、そして３０mmol／ｌ／時の酸素移動速度
での振とうボード上での増殖に付し、これにより０．６
％の酵母細胞培養密度を得た。
ＡＴＣＣ２４２６１の４日培養物１００μｌを２個のバ
ッフルを有する５００ml振とうフラスコ中の５０mlのＹ
Ｍ培地に接種した。この培養物を１５０rpm 、４日間、
２０〜２２℃、そして３０mmol／ｌ／時の酸素移動速度
での振とうボード上での増殖に付し、これにより０．６
％の酵母細胞培養密度を得た。
【００９２】色素の分析 抽出物中のアスタキサンチン含量を次の３つの方法によ
り決定した。 １．メタノール抽出調製物について前記した様にして調
製されたアセトン、メタノール、及びエタノール抽出物
を分光光度スキャンニングにかけ、そして表１に示すλ
max 値を得た。
り決定した。 １．メタノール抽出調製物について前記した様にして調
製されたアセトン、メタノール、及びエタノール抽出物
を分光光度スキャンニングにかけ、そして表１に示すλ
max 値を得た。
【００９３】２．前記の方法と同様にして調製した１０
mlのエタノール抽出液の半分に５０mg以上のカリウムボ
ロヒドリドを加え、そしてこの混合物を３０分間撹拌し
た。抽出物及びカリウムボロヒドリド処理したサンプル
の吸収を分光光度計上で変化する波長を用いて測定し
た。文献に記載されている値に対応して、遊離アスタキ
サンチンは４８０nmに広いピークを示し、そして還元さ
れたアスタキサンチンは４５０及び４７６nmに２個のピ
ークを示した。
mlのエタノール抽出液の半分に５０mg以上のカリウムボ
ロヒドリドを加え、そしてこの混合物を３０分間撹拌し
た。抽出物及びカリウムボロヒドリド処理したサンプル
の吸収を分光光度計上で変化する波長を用いて測定し
た。文献に記載されている値に対応して、遊離アスタキ
サンチンは４８０nmに広いピークを示し、そして還元さ
れたアスタキサンチンは４５０及び４７６nmに２個のピ
ークを示した。
【００９４】３．前記の標準的条件下ＨＰＬＣのアスタ
キサンチン含有抽出物の保持時間を前に定義した標準溶
液の保持時間と比較した。すなわち、標準的条件下での
ＨＰＬＣにおける本発明のアスタキサンチン含有サンプ
ルのピークをＨＰＬＣにおける標準溶液のピークと比較
した。保持時間が同一であることが見出された。本発明
の変異株（ＣＢＳ２２４−８７及びＣＢＳ２２５−８
７）並びに既知のすべての寄託されているアスタキサン
チン生産性Ｐ．ロドチーマ株を上記のようにして増殖せ
しめ、そして分析した。これらの株の全色素含量及びア
スタキサンチン含量を下記の表３に示す。全色素の分析
は、「色素の抽出及び分析−方法１」に従って行った。
アスタキサンチンは、「アスタキサンチンの測定のため
のＨＰＬＣ分析−方法１」に従って行った。
キサンチン含有抽出物の保持時間を前に定義した標準溶
液の保持時間と比較した。すなわち、標準的条件下での
ＨＰＬＣにおける本発明のアスタキサンチン含有サンプ
ルのピークをＨＰＬＣにおける標準溶液のピークと比較
した。保持時間が同一であることが見出された。本発明
の変異株（ＣＢＳ２２４−８７及びＣＢＳ２２５−８
７）並びに既知のすべての寄託されているアスタキサン
チン生産性Ｐ．ロドチーマ株を上記のようにして増殖せ
しめ、そして分析した。これらの株の全色素含量及びア
スタキサンチン含量を下記の表３に示す。全色素の分析
は、「色素の抽出及び分析−方法１」に従って行った。
アスタキサンチンは、「アスタキサンチンの測定のため
のＨＰＬＣ分析−方法１」に従って行った。
【００９５】
【表３】 これらの値は４個の独立した測定の平均値である。本発
明の変異株がかなり増加したアスタキサンチン含量を示
すことが注目されよう。
明の変異株がかなり増加したアスタキサンチン含量を示
すことが注目されよう。
【００９６】例３．発酵 孔を有する空気パイプから成る静止通気系を有する Bub
ble Columm型の十分に洗浄されそして殺菌された４ｍ3
の発酵槽中で炭水化物制限下でフェド−バッチ発酵とし
て発酵を行った。この発酵槽はpH電極、pH調整剤及び消
泡剤用の入口、並びに排出される空気中のアルコールを
測定するためのアルコール検出器を装着していた。発酵
槽のジャケットは温度調節した。
ble Columm型の十分に洗浄されそして殺菌された４ｍ3
の発酵槽中で炭水化物制限下でフェド−バッチ発酵とし
て発酵を行った。この発酵槽はpH電極、pH調整剤及び消
泡剤用の入口、並びに排出される空気中のアルコールを
測定するためのアルコール検出器を装着していた。発酵
槽のジャケットは温度調節した。
【００９７】出発培地は次の組成、すなわち２０ｇ／ｌ
の糖蜜、０．６ｇ／ｌの硫酸アンモニウム、０．８ｇ／
ｌのリン酸水素二アンモニウム及び０．１２５ｇ／ｌの
硫酸マグネシウムを有し、これらを適当量の水（１００
ｌの増殖発酵槽中に３０ｌ、そして４ｍ3 の生産発酵槽
中に２０００ｌ）と共に発酵槽中で３０分間煮沸した
後、発酵槽に接種した。フェド−バッチ発酵において発
酵槽にフィードされる培地は２つの異る貯槽、すなわち
１０kgの硫酸アンモニウム、５．６kgのリン酸水素二ア
ンモニウム及び８０ｌの水から成る化学貯槽、並びに４
５０kgの糖蜜及び１０００ｌの水から成るオートクレー
ブ殺菌された糖蜜貯槽から取った。培地の残りを供給す
る直前に０．１mgのデスチオビオチン及び１．６kgの硫
酸マグネシウムを発酵槽に直接供給した。すべての化学
物質は食品グレードのものであった。糖蜜は De Manske
Sukkerfabrikkerからのビート糖蜜であった。
の糖蜜、０．６ｇ／ｌの硫酸アンモニウム、０．８ｇ／
ｌのリン酸水素二アンモニウム及び０．１２５ｇ／ｌの
硫酸マグネシウムを有し、これらを適当量の水（１００
ｌの増殖発酵槽中に３０ｌ、そして４ｍ3 の生産発酵槽
中に２０００ｌ）と共に発酵槽中で３０分間煮沸した
後、発酵槽に接種した。フェド−バッチ発酵において発
酵槽にフィードされる培地は２つの異る貯槽、すなわち
１０kgの硫酸アンモニウム、５．６kgのリン酸水素二ア
ンモニウム及び８０ｌの水から成る化学貯槽、並びに４
５０kgの糖蜜及び１０００ｌの水から成るオートクレー
ブ殺菌された糖蜜貯槽から取った。培地の残りを供給す
る直前に０．１mgのデスチオビオチン及び１．６kgの硫
酸マグネシウムを発酵槽に直接供給した。すべての化学
物質は食品グレードのものであった。糖蜜は De Manske
Sukkerfabrikkerからのビート糖蜜であった。
【００９８】発酵中の通気は８．４ｍ3 ／分であった。
消泡剤として Contraspum ２１０（Zschimmer & Schwar
tz) を用い、そしてpH調整剤として硫酸を用いた。ＡＴ
ＣＣ２４２６１株の酵母細胞をスラントから５mlのＹＭ
培地を含む直径２cmの試験管に移し、この培地中で４日
間振とうボード上で十分な通気のもとで２０〜２２℃の
温度にて培養して増殖せしめ、次にこの培養物を１ｌの
ＹＭ培地を含む２ｌのエルレンマイヤーフラスコに移し
た。振とうボード上、十分な通気のもとで２０〜２２℃
の温度で３日間インキュベートした後、１ｌの培養物を
３０ｌの出発培地を含む１００ｌの発酵槽に移した。培
養物を、１ｇ／ｌの酵母乾物量が得られるまで２０〜２
２℃にてバッチ増殖せしめた。
消泡剤として Contraspum ２１０（Zschimmer & Schwar
tz) を用い、そしてpH調整剤として硫酸を用いた。ＡＴ
ＣＣ２４２６１株の酵母細胞をスラントから５mlのＹＭ
培地を含む直径２cmの試験管に移し、この培地中で４日
間振とうボード上で十分な通気のもとで２０〜２２℃の
温度にて培養して増殖せしめ、次にこの培養物を１ｌの
ＹＭ培地を含む２ｌのエルレンマイヤーフラスコに移し
た。振とうボード上、十分な通気のもとで２０〜２２℃
の温度で３日間インキュベートした後、１ｌの培養物を
３０ｌの出発培地を含む１００ｌの発酵槽に移した。培
養物を、１ｇ／ｌの酵母乾物量が得られるまで２０〜２
２℃にてバッチ増殖せしめた。
【００９９】次に、栄養の供給を開始し、そして２０〜
２２℃にてフェド−バッチ発酵を行った。２日間の増殖
の後、３０ｌの培養物を無菌条件下でペリスタルポンプ
により、２０００ｌの出発培地を含む４ｍ3 の発酵槽に
移送した。この培養物を、培養物中１ｇ／ｌの酵母乾物
含量が得られるまで２０〜２２℃でバッチ増殖せしめ
た。次に、糖蜜の供給を開始し、そして３８時間続け、
この後糖蜜貯槽は空になった。化学物質は糖蜜と並行し
て最初の２４時間供給した。フェド−バッチ発酵は２０
〜２２℃の温度にて行った。糖蜜貯槽中の糖蜜の量は、
発酵液中４％を越えない酵母乾物含量が得られるように
調整した。
２２℃にてフェド−バッチ発酵を行った。２日間の増殖
の後、３０ｌの培養物を無菌条件下でペリスタルポンプ
により、２０００ｌの出発培地を含む４ｍ3 の発酵槽に
移送した。この培養物を、培養物中１ｇ／ｌの酵母乾物
含量が得られるまで２０〜２２℃でバッチ増殖せしめ
た。次に、糖蜜の供給を開始し、そして３８時間続け、
この後糖蜜貯槽は空になった。化学物質は糖蜜と並行し
て最初の２４時間供給した。フェド−バッチ発酵は２０
〜２２℃の温度にて行った。糖蜜貯槽中の糖蜜の量は、
発酵液中４％を越えない酵母乾物含量が得られるように
調整した。
【０１００】フェド−バッチ発酵中の発酵槽への糖蜜の
供給は、μ＝０．１５時-1の酵母細胞の比増殖速度を達
成することを目標に調整し、そしてさらに発酵液中のエ
タノール濃度が０．１容量％未満となるように制御し
た。すなわち、エタノール濃度をしばしば測定し、そし
てこれが高過ぎることが見出された場合、許容されるエ
タノール濃度が再び達成されるまで糖蜜供給速度を低下
せしめた。発酵した液の通気をなんらの栄養も供給する
ことなく２０〜２２℃にて１６時間続けた。
供給は、μ＝０．１５時-1の酵母細胞の比増殖速度を達
成することを目標に調整し、そしてさらに発酵液中のエ
タノール濃度が０．１容量％未満となるように制御し
た。すなわち、エタノール濃度をしばしば測定し、そし
てこれが高過ぎることが見出された場合、許容されるエ
タノール濃度が再び達成されるまで糖蜜供給速度を低下
せしめた。発酵した液の通気をなんらの栄養も供給する
ことなく２０〜２２℃にて１６時間続けた。
【０１０１】酵母細胞の組成、並びに全色素含量及びア
スタキサンチン含量を、０時、すなわち４ｍ3 発酵槽へ
の栄養の供給を開始する直前、発酵及び増殖が停止した
時である３８時間後、並びに発酵した液の１６時間の通
気の後に測定した。全色素含量及びアスタキサンチン含
量を例２に記載したようにして測定し、そして酵母細胞
の組成を常法に従って測定した。
スタキサンチン含量を、０時、すなわち４ｍ3 発酵槽へ
の栄養の供給を開始する直前、発酵及び増殖が停止した
時である３８時間後、並びに発酵した液の１６時間の通
気の後に測定した。全色素含量及びアスタキサンチン含
量を例２に記載したようにして測定し、そして酵母細胞
の組成を常法に従って測定した。
【０１０２】すなわち、全窒素含量をキュルダール分析
により測定し、トレハロース含量をJourn. Am. Chem. S
oc. ７２，１９５０，２０５９頁に記載されているよう
にして測定し、そしてリン酸含量をWater and Wastewat
er, American Public HealthAssociation, Inc., １９
９頁（１９６０）に記載されているようにして測定し
た。エタノール分析は少量のエタノールを測定するため
のボイデン（Boidin) 法（Annal. de la brusserie et
de la distillerre, １９２４−２５，１７７頁）によ
り測定した。結果を表４に示す。全色素の分析は方法−
１に従って行った。ＨＰＬＣによるアスタキサンチンの
分析は方法−１により行った。
により測定し、トレハロース含量をJourn. Am. Chem. S
oc. ７２，１９５０，２０５９頁に記載されているよう
にして測定し、そしてリン酸含量をWater and Wastewat
er, American Public HealthAssociation, Inc., １９
９頁（１９６０）に記載されているようにして測定し
た。エタノール分析は少量のエタノールを測定するため
のボイデン（Boidin) 法（Annal. de la brusserie et
de la distillerre, １９２４−２５，１７７頁）によ
り測定した。結果を表４に示す。全色素の分析は方法−
１に従って行った。ＨＰＬＣによるアスタキサンチンの
分析は方法−１により行った。
【０１０３】
【表４】
【０１０４】例４．例３に記載した実験と同様の方法
で、ＡＴＣＣ２４２６１を用いるフェド−バッチ発酵を
行い、相違は出発培地の容量を１０００ｌとし、４ｍ3
発酵槽への接種物として前記の様にして増殖せしめたＡ
ＴＣＣ２４２６１を６×１ｌ使用し、化学貯槽が０．５
kgの硫酸アンモニウム、２．５kgのリン酸水素二アンモ
ニウム及び８０ｌの水から成り、そして糖蜜貯槽が２５
０kgの糖蜜及び１０００ｌの水から成る点のみであっ
た。フェド−バッチ発酵中栄養を発酵槽に最初に６５時
間フィードし、そしてこの後栄養の供給を停止し、そし
て培養物を７２時間の通気に付した。結果を下の表５に
示す。
で、ＡＴＣＣ２４２６１を用いるフェド−バッチ発酵を
行い、相違は出発培地の容量を１０００ｌとし、４ｍ3
発酵槽への接種物として前記の様にして増殖せしめたＡ
ＴＣＣ２４２６１を６×１ｌ使用し、化学貯槽が０．５
kgの硫酸アンモニウム、２．５kgのリン酸水素二アンモ
ニウム及び８０ｌの水から成り、そして糖蜜貯槽が２５
０kgの糖蜜及び１０００ｌの水から成る点のみであっ
た。フェド−バッチ発酵中栄養を発酵槽に最初に６５時
間フィードし、そしてこの後栄養の供給を停止し、そし
て培養物を７２時間の通気に付した。結果を下の表５に
示す。
【０１０５】
【表５】
【０１０６】例５．本発明の変異株ＣＢＳ２２５−８７
を用いる実験を例４に記載したのと同様にして行い、１
０００ｌの出発培地容量を用い、接種物として例３に記
載した方法により増殖せしめたＣＢＳ２２５−８７を６
×１ｌ用い、化学貯槽は５kgの硫酸アンモニウム、２．
８kgのリン酸水素二アンモニウム及び８０ｌの水から成
った。フェド−バッチ発酵中アルコールは生成されず、
そして栄養は０〜５７時間の間供給し、この後培養物を
栄養供給を伴わない通気にかけた。８０時間目における
酵母細胞組成は、酵母乾物中窒素６．５％酵母乾物中五
酸化リン２．５％、及び酵母乾物中トレハロース６．６
％であった。フェド−バッチ発酵中、全色素、アスタキ
サンチン及び酵母乾物を測定し、下の表６に示す値が得
られた。
を用いる実験を例４に記載したのと同様にして行い、１
０００ｌの出発培地容量を用い、接種物として例３に記
載した方法により増殖せしめたＣＢＳ２２５−８７を６
×１ｌ用い、化学貯槽は５kgの硫酸アンモニウム、２．
８kgのリン酸水素二アンモニウム及び８０ｌの水から成
った。フェド−バッチ発酵中アルコールは生成されず、
そして栄養は０〜５７時間の間供給し、この後培養物を
栄養供給を伴わない通気にかけた。８０時間目における
酵母細胞組成は、酵母乾物中窒素６．５％酵母乾物中五
酸化リン２．５％、及び酵母乾物中トレハロース６．６
％であった。フェド−バッチ発酵中、全色素、アスタキ
サンチン及び酵母乾物を測定し、下の表６に示す値が得
られた。
【０１０７】
【表６】 全色素及びアスタキサンチン含量（μｇ／ml）は分析さ
れた酵母乾物含量と全色素及びアスタキサンチンのμｇ
／ｇ値から計算した。
れた酵母乾物含量と全色素及びアスタキサンチンのμｇ
／ｇ値から計算した。
【０１０８】例６．ＣＢＳ２１５−８８並びにＰ．ロド
チーマ変異株ＤＢＴ４０６及びＤＢＴ４０３、並びに野
性型株ＣＢＳ５９０５及びＡＴＣＣ２４２６１の色素及
びアスタキサンチン含量を測定した。振とうフラスコ培養 寒天斜面から酵母細胞をＹＭ培地に接種し、そして２０
〜２２℃にて２日間インキュベートした。１mlのこの培
養物を、４個のバッフルを有する２５０mlの振とうフラ
スコ中の５０mlのＹＭ培地中に接種した。培養物を、１
５０rpm で回転する振とうボード上での２０〜２２℃に
て５日間の増殖に付した。全色素の定量測定は方法−２
に従って行った。アスタキサンチンの測定は方法−２に
従って行った。
チーマ変異株ＤＢＴ４０６及びＤＢＴ４０３、並びに野
性型株ＣＢＳ５９０５及びＡＴＣＣ２４２６１の色素及
びアスタキサンチン含量を測定した。振とうフラスコ培養 寒天斜面から酵母細胞をＹＭ培地に接種し、そして２０
〜２２℃にて２日間インキュベートした。１mlのこの培
養物を、４個のバッフルを有する２５０mlの振とうフラ
スコ中の５０mlのＹＭ培地中に接種した。培養物を、１
５０rpm で回転する振とうボード上での２０〜２２℃に
て５日間の増殖に付した。全色素の定量測定は方法−２
に従って行った。アスタキサンチンの測定は方法−２に
従って行った。
【０１０９】計算の例（ＣＢＳ２１５−８８について） メタノール抽出物中の全色素を分光光度法分析により測
定した。５０mlの抽出物の吸収マイナスメタノールの吸
収をＥ＝１．１８９であると測定した。サンプルの容量
は２９mlであった。式（２）に従って計算される酵母抽
出物中の全色素含量は次の通りである。
定した。５０mlの抽出物の吸収マイナスメタノールの吸
収をＥ＝１．１８９であると測定した。サンプルの容量
は２９mlであった。式（２）に従って計算される酵母抽
出物中の全色素含量は次の通りである。
【０１１０】Ｘ′＝１．１６０×５０／２１００／２９
×１０，０００μｇ／ml＝９．５２μｇ／ml 酵母乾物は６．７ｇ／ｌであると測定された。酵母乾物
ｇ当りの全色素含量は次の様に決定される。 Ｙ＝９．５２／７．１×１，０００μｇ／ｇ＝１３４０
μｇ／ｇ メタノール中のアスタキサンチンの濃度はＨＰＬＣ分析
により６．４μｇ／mlと決定され、これは、６．２μｇ
／７．１ｇ／ｌ＝８８０μｇアスタキサンチン／ｇ酵母
乾物に相当する。
×１０，０００μｇ／ml＝９．５２μｇ／ml 酵母乾物は６．７ｇ／ｌであると測定された。酵母乾物
ｇ当りの全色素含量は次の様に決定される。 Ｙ＝９．５２／７．１×１，０００μｇ／ｇ＝１３４０
μｇ／ｇ メタノール中のアスタキサンチンの濃度はＨＰＬＣ分析
により６．４μｇ／mlと決定され、これは、６．２μｇ
／７．１ｇ／ｌ＝８８０μｇアスタキサンチン／ｇ酵母
乾物に相当する。
【０１１１】すべての株を上記のようにして増殖せし
め、そして分析した。菌株の全色素及びアスタキサンチ
ン含量を表７に示す。
め、そして分析した。菌株の全色素及びアスタキサンチ
ン含量を表７に示す。
【表７】
【０１１２】例７．本発明の変異株ＣＢＳ２１５−８８
のフェド−バッチ発酵を、例３に記載したのと同じ４ｍ
3 発酵槽中で、炭水化物源としてのシュークロース及び
コーン・スティープ・ソリドを用いて行った。次の成
分： １０kg コーン・スティープ・ソリド １２kg シュークロース １０kg 硫酸アンモニウム ３kg リン酸二水素カリウム １kg 硫酸マグネシウム ０．０５ｇ ビオチン ３００ml 消泡剤 Contraspum ２１０ １０００ｌ 水
のフェド−バッチ発酵を、例３に記載したのと同じ４ｍ
3 発酵槽中で、炭水化物源としてのシュークロース及び
コーン・スティープ・ソリドを用いて行った。次の成
分： １０kg コーン・スティープ・ソリド １２kg シュークロース １０kg 硫酸アンモニウム ３kg リン酸二水素カリウム １kg 硫酸マグネシウム ０．０５ｇ ビオチン ３００ml 消泡剤 Contraspum ２１０ １０００ｌ 水
【０１１３】から成る出発培地をpH４．６において蒸気
の導入により９５℃にて１時間殺菌し、そして２２℃に
冷却した後、前記のようにして増殖させた６×１ｌのＣ
ＢＳ２１５−８８を接種物として加えた。３５時間の通
気（４．２ｍ3 ／分）の後、シュークロース溶液（０．
３０ｇ／ｌ）の供給を開始した。添加速度は２．３ｌ／
時であった。通気を８．２ｍ3 ／分に増加し、そしてpH
調整器をスタートさせた（セットポイント４．０）。培
地中のシュークロース濃度が２８時間後に約１ｇ／ｌに
低下した時、シュークロースの供給を７．３ｌ／時に増
加し、そしてこの速度を２４時間維持した。次にシュー
クロースの供給を停止し、そして通気速度を４．２ｍ3
／分に低下せしめて７２時間続けた。フェド−バッチ発
酵中に全色素及びアスタキサンチンを測定した。その値
を表８に示す。
の導入により９５℃にて１時間殺菌し、そして２２℃に
冷却した後、前記のようにして増殖させた６×１ｌのＣ
ＢＳ２１５−８８を接種物として加えた。３５時間の通
気（４．２ｍ3 ／分）の後、シュークロース溶液（０．
３０ｇ／ｌ）の供給を開始した。添加速度は２．３ｌ／
時であった。通気を８．２ｍ3 ／分に増加し、そしてpH
調整器をスタートさせた（セットポイント４．０）。培
地中のシュークロース濃度が２８時間後に約１ｇ／ｌに
低下した時、シュークロースの供給を７．３ｌ／時に増
加し、そしてこの速度を２４時間維持した。次にシュー
クロースの供給を停止し、そして通気速度を４．２ｍ3
／分に低下せしめて７２時間続けた。フェド−バッチ発
酵中に全色素及びアスタキサンチンを測定した。その値
を表８に示す。
【０１１４】
【表８】
【０１１５】De Laval ＯＡ５Ｍ遠心分離機中での遠心
分離により培地から酵母細胞を分離し、そして水で２回
洗浄した。ＦＩＬＴＯＲＯＸフィルター・タイプＶＡＲ
ＩＯ×４０／４０での濾過により酵母クリームから酵母
を分離し、そして２６．３％の乾物を含むフィルターケ
ーキをｌａｂ流動床乾燥機（GLATT, Haltingen-Binzen
Bd. ）中で１mm篩を通して押出し、そして３０℃にて９
０分間乾燥せしめた。乾燥酵母（乾物９１．６％）は、
酵母乾物ｇ当り１３６０μｇの全色素、及び酵母乾物ｇ
当り１０８０μｇのアスタキサンチンを含有していた。
分離により培地から酵母細胞を分離し、そして水で２回
洗浄した。ＦＩＬＴＯＲＯＸフィルター・タイプＶＡＲ
ＩＯ×４０／４０での濾過により酵母クリームから酵母
を分離し、そして２６．３％の乾物を含むフィルターケ
ーキをｌａｂ流動床乾燥機（GLATT, Haltingen-Binzen
Bd. ）中で１mm篩を通して押出し、そして３０℃にて９
０分間乾燥せしめた。乾燥酵母（乾物９１．６％）は、
酵母乾物ｇ当り１３６０μｇの全色素、及び酵母乾物ｇ
当り１０８０μｇのアスタキサンチンを含有していた。
【０１１６】例８．下流処理 例３の方法により得られた酵母細胞をDe Laval ＯＡ５
Ｍ遠心分離機中での遠心分離により発酵液から単離し
た。この細胞を水で２回洗浄し、そして１３％の酵母乾
物を含有する酵母クリームを得た。硫酸を添加して酵母
クリームpHを４．０に調整し、そしてこの酵母クリーム
に安息香酸ナトリウムを０．２％（ｗ／ｖ）の濃度に添
加した。単離された酵母細胞を処理する間、これらを窒
素のもとにおくことにより酵母細胞のアスタキサンチン
の実質的な酸化を防止し、そして温度を約１０℃に保持
した。
Ｍ遠心分離機中での遠心分離により発酵液から単離し
た。この細胞を水で２回洗浄し、そして１３％の酵母乾
物を含有する酵母クリームを得た。硫酸を添加して酵母
クリームpHを４．０に調整し、そしてこの酵母クリーム
に安息香酸ナトリウムを０．２％（ｗ／ｖ）の濃度に添
加した。単離された酵母細胞を処理する間、これらを窒
素のもとにおくことにより酵母細胞のアスタキサンチン
の実質的な酸化を防止し、そして温度を約１０℃に保持
した。
【０１１７】細胞破壊バルブ及び熱交換器を装着したAP
V-Gaulin ＭＣ４ホモジナイザーから成る系に前記酵母
クリームを３回通し、そこで酵母クリームを７００bar
の圧力の破砕に付し、これにより温度が１０〜１５℃上
昇し、次に熱交換器での冷却により１５℃の温度を得
た。この系の中で酵母クリームを２５０ｌ／時の速度で
循環せしめた。破砕された細胞中のアスタキサンチン含
量を次の様にして測定した。０．５mlのホモジナイズさ
れた酵母クリームの重量を量り、そしてサルステッドチ
ューブに移し、そして５mlのアセトンと共に振とうし
た。
V-Gaulin ＭＣ４ホモジナイザーから成る系に前記酵母
クリームを３回通し、そこで酵母クリームを７００bar
の圧力の破砕に付し、これにより温度が１０〜１５℃上
昇し、次に熱交換器での冷却により１５℃の温度を得
た。この系の中で酵母クリームを２５０ｌ／時の速度で
循環せしめた。破砕された細胞中のアスタキサンチン含
量を次の様にして測定した。０．５mlのホモジナイズさ
れた酵母クリームの重量を量り、そしてサルステッドチ
ューブに移し、そして５mlのアセトンと共に振とうし
た。
【０１１８】サンプルを遠心分離し、１０mlの目盛付シ
リンダーに移し、そして遠心分離及び定量的移送を行い
ながらアセトンにより３回洗浄した。全色素含量を方法
１により測定し、そしてアスタキサンチン含量をＨＰＬ
Ｃ−方法１により測定し、そしてこの含量を、「材料及
び方法」の項で前記した方法により測定したサンプル中
の全乾物含量と関連付けた。この例に従ってホモジナイ
ズされた酵母クリーム中の抽出可能なアスタキサンチン
含量を、細胞が完全に破砕されている方法１により測定
された酵母クリーム中の含量と比較することにより、こ
の例における破砕の程度が全細胞の９０％以上であると
決定された。
リンダーに移し、そして遠心分離及び定量的移送を行い
ながらアセトンにより３回洗浄した。全色素含量を方法
１により測定し、そしてアスタキサンチン含量をＨＰＬ
Ｃ−方法１により測定し、そしてこの含量を、「材料及
び方法」の項で前記した方法により測定したサンプル中
の全乾物含量と関連付けた。この例に従ってホモジナイ
ズされた酵母クリーム中の抽出可能なアスタキサンチン
含量を、細胞が完全に破砕されている方法１により測定
された酵母クリーム中の含量と比較することにより、こ
の例における破砕の程度が全細胞の９０％以上であると
決定された。
【０１１９】窒素で覆われているこうして破砕された細
胞に、７％のナトリウムカゼインを約４５℃の温度にお
いて撹拌しながら添加した。次に、ナトリウムカゼイン
と混合された酵母細胞ホモジネートを、入口温度が１８
０℃であるAn hydro型の噴霧塔において噴霧乾燥にかけ
た。酵母細胞材料は噴霧ホイールの使用によって霧化さ
れ、そして噴霧塔の出口の空気の温度は約９０℃であっ
た。生ずる酵母粉末をサイクロンを用いて回収した。こ
の酵母粉末の水分含量は１０重量％未満であった。
胞に、７％のナトリウムカゼインを約４５℃の温度にお
いて撹拌しながら添加した。次に、ナトリウムカゼイン
と混合された酵母細胞ホモジネートを、入口温度が１８
０℃であるAn hydro型の噴霧塔において噴霧乾燥にかけ
た。酵母細胞材料は噴霧ホイールの使用によって霧化さ
れ、そして噴霧塔の出口の空気の温度は約９０℃であっ
た。生ずる酵母粉末をサイクロンを用いて回収した。こ
の酵母粉末の水分含量は１０重量％未満であった。
【０１２０】例９．氷酢酸による全色素の抽出 ９５％の乾物含量を有しそして酵母乾物ｇ当り５２３μ
ｇのアスタキサンチンを含有する２０ｇの破砕されてい
ないファフィア・ロドチーマ酵母細胞（濾過し、そして
次に流動床に押出し、そこで乾燥させたもの）を長さ１
２cm及び内径２．４cmのカラムに導入した。このカラム
はジャケットを有し、その中に７５℃の温度の水を循環
せしめた。このカラムの底部において、少量の酸洗浄砂
（サンドフィルター）を綿層上に配置した。酵母細胞を
７５℃の温度の氷酢酸５×１００mlにより抽出し、そし
て各抽出物中の、及び抽出された酵母細胞材料（カラム
中に残留する氷酢酸約１００mlを含む）中のアスタキサ
ンチンの量を測定した。アスタキサンチンの測定を行う
前に、抽出された酵母細胞材料を蒸発乾燥せしめた（１
６．１６ｇの材料が生ずる）。結果を次の表９に示す。
ｇのアスタキサンチンを含有する２０ｇの破砕されてい
ないファフィア・ロドチーマ酵母細胞（濾過し、そして
次に流動床に押出し、そこで乾燥させたもの）を長さ１
２cm及び内径２．４cmのカラムに導入した。このカラム
はジャケットを有し、その中に７５℃の温度の水を循環
せしめた。このカラムの底部において、少量の酸洗浄砂
（サンドフィルター）を綿層上に配置した。酵母細胞を
７５℃の温度の氷酢酸５×１００mlにより抽出し、そし
て各抽出物中の、及び抽出された酵母細胞材料（カラム
中に残留する氷酢酸約１００mlを含む）中のアスタキサ
ンチンの量を測定した。アスタキサンチンの測定を行う
前に、抽出された酵母細胞材料を蒸発乾燥せしめた（１
６．１６ｇの材料が生ずる）。結果を次の表９に示す。
【０１２１】
【表９】 従って、酵母細胞のアスタキサンチン含量の７７．９％
（８１４３．６／１０４６０×１００％）が抽出により
放出された。
（８１４３．６／１０４６０×１００％）が抽出により
放出された。
【０１２２】例１０．ボールミル中でのホモゲナイゼー
ションによる酵母細胞の破砕 流動床において乾燥されそして酵母乾物ｇ当り３３６μ
ｇのアスタキサンチンを含有することが見出されたファ
フィア・ロドチーマ酵母細胞を大豆油中に４０％（ｗ／
ｗ）の濃度で懸濁した。この懸濁液を、ジルコニウムボ
ール（０．１〜１．５mm）を含みそしてビーズを７０〜
７５％満たしたボールミル（CoBall-Mill, タイプＭＳ
Ｚ−１２）にポンプ輸送した。ローターのスピードは１
３ｍ／秒であった。各試行の後にサンプルを採取し、そ
してサンプルのアスタキサンチン含量をＨＰＬＣ上で分
析した。ボールミルの温度は４０℃〜５０℃に保持し
た。
ションによる酵母細胞の破砕 流動床において乾燥されそして酵母乾物ｇ当り３３６μ
ｇのアスタキサンチンを含有することが見出されたファ
フィア・ロドチーマ酵母細胞を大豆油中に４０％（ｗ／
ｗ）の濃度で懸濁した。この懸濁液を、ジルコニウムボ
ール（０．１〜１．５mm）を含みそしてビーズを７０〜
７５％満たしたボールミル（CoBall-Mill, タイプＭＳ
Ｚ−１２）にポンプ輸送した。ローターのスピードは１
３ｍ／秒であった。各試行の後にサンプルを採取し、そ
してサンプルのアスタキサンチン含量をＨＰＬＣ上で分
析した。ボールミルの温度は４０℃〜５０℃に保持し
た。
【０１２３】同様に、７５％の水中上記乾燥酵母細胞の
懸濁液をボールミル中で処理した。この処理においてロ
ーターのスピードを１５ｍ／秒とした。結果を表１０に
示す。この表中、アスタキサンチン含量を酵母乾物ｇ当
りμｇとして示す。
懸濁液をボールミル中で処理した。この処理においてロ
ーターのスピードを１５ｍ／秒とした。結果を表１０に
示す。この表中、アスタキサンチン含量を酵母乾物ｇ当
りμｇとして示す。
【０１２４】
【表１０】
【０１２５】比較のため、乾燥酵母をホモゲナイゼーシ
ョンを伴わないで大豆油又は水で処理した場合、酵母乾
物ｇ当りわずか２３μｇのアスタキサンチンが見出され
た。酵母細胞の実質的全破砕を得るためにボールミル中
での約３回の処理で十分であることが実験により示され
た。
ョンを伴わないで大豆油又は水で処理した場合、酵母乾
物ｇ当りわずか２３μｇのアスタキサンチンが見出され
た。酵母細胞の実質的全破砕を得るためにボールミル中
での約３回の処理で十分であることが実験により示され
た。
【０１２６】例１１．魚の飼育 異るアスタキサンチン含量の魚餌を調製した。魚粉、大
豆粉、魚油、押小麦、レシチン及び混合物の形のビタミ
ンの混合物である、Dansk Orredfoder, Brande, デンマ
ーク、からの市販魚餌Ecoline １６から魚餌を調製し
た。この飼料に種々の量のアスタキサンチンを添加し
た。例３に記載したのと同じ方法で増殖せしめそして噴
霧乾燥したＰ．ロドチーマ酵母細胞からアスタキサンチ
ンを得た。５０℃にて２．７kgの水に溶解したナトリウ
ムカゼイン０．４７５kgと混合されたホモジナイズされ
た酵母クリーム２８kgから噴霧乾燥した酵母細胞を調製
した。２ｇのアスコルビルパルミテート及び大豆からの
トコフェロール１ｇを含有する０．０６８kgのＧＲＩＮ
ＤＴＥＫ ＭＯＲ５０をナトリウムカゼイン溶液中に乳
化した。
豆粉、魚油、押小麦、レシチン及び混合物の形のビタミ
ンの混合物である、Dansk Orredfoder, Brande, デンマ
ーク、からの市販魚餌Ecoline １６から魚餌を調製し
た。この飼料に種々の量のアスタキサンチンを添加し
た。例３に記載したのと同じ方法で増殖せしめそして噴
霧乾燥したＰ．ロドチーマ酵母細胞からアスタキサンチ
ンを得た。５０℃にて２．７kgの水に溶解したナトリウ
ムカゼイン０．４７５kgと混合されたホモジナイズされ
た酵母クリーム２８kgから噴霧乾燥した酵母細胞を調製
した。２ｇのアスコルビルパルミテート及び大豆からの
トコフェロール１ｇを含有する０．０６８kgのＧＲＩＮ
ＤＴＥＫ ＭＯＲ５０をナトリウムカゼイン溶液中に乳
化した。
【０１２７】ナトリウムカゼイン溶液（酸化防止剤を含
有する）をホモジナイズされた酵母クリームと混合し、
そしてこの混合物を例８に記載したようにして噴霧乾燥
した。噴霧乾燥した生成物（９２．６％乾物）は酵母乾
物ｇ当り約６７４μｇのアスタキサンチンを含有してい
た。この噴霧乾燥した生成物を前記の市販の魚餌に添加
して種々のアスタキサンチン濃度の魚餌（飼料Ａ〜Ｄ）
（下記表１１に示す）を得た。対照として合成アスタキ
サンチンを含有する魚餌（飼料Ｅ）を用いた。飼料Ｅは
合成アスタキサンチンを４０ppm に相当する量で含有し
ていた。飼料Ａ〜Ｅは次の組成を有した。
有する）をホモジナイズされた酵母クリームと混合し、
そしてこの混合物を例８に記載したようにして噴霧乾燥
した。噴霧乾燥した生成物（９２．６％乾物）は酵母乾
物ｇ当り約６７４μｇのアスタキサンチンを含有してい
た。この噴霧乾燥した生成物を前記の市販の魚餌に添加
して種々のアスタキサンチン濃度の魚餌（飼料Ａ〜Ｄ）
（下記表１１に示す）を得た。対照として合成アスタキ
サンチンを含有する魚餌（飼料Ｅ）を用いた。飼料Ｅは
合成アスタキサンチンを４０ppm に相当する量で含有し
ていた。飼料Ａ〜Ｅは次の組成を有した。
【０１２８】
【表１１】
【０１２９】それぞれが約４００ｇの体重を有する約６
０尾のニジマスを魚餌Ａ〜Ｅのそれぞれの実験において
用いた。魚をケージ中に保持し、そして飼料を自由に取
らせた。水は２．５〜１４℃の温度とし、魚飼育実験中
の後の期間では低温とした。
０尾のニジマスを魚餌Ａ〜Ｅのそれぞれの実験において
用いた。魚をケージ中に保持し、そして飼料を自由に取
らせた。水は２．５〜１４℃の温度とし、魚飼育実験中
の後の期間では低温とした。
【０１３０】魚からのアスタキサンチンの抽出 使用した装置は実験室実験において常用されている装置
である。皮膚を有しないニジマスを小片に切断し、そし
て１５ｇの肉を秤り取って遠心チューブ（１００ml）に
入れた。抽出剤として１５mlのテトラヒドロフランを加
えた。肉をＵＬＴＲＡＴＵＲＡＸミキサー中でさらに細
砕し、そして次に遠心分離した。テトラヒドロフラン抽
出物を５０mlのメスフラスコに移した。残渣を音波処理
浴中で１０mlのテトラヒドロフランにより２〜３回洗浄
し、そして遠心分離し、そしてテトラヒドロフラン相を
メスフラスコに移し、これに追加のテトラヒドロフラン
を加えて５０mlにした。この５０mlの内１０mlを窒素の
もとで４０℃の温度にて蒸発せしめた。蒸発残渣を１ml
の移動相に溶解し、そして０．４５μｍのフィルターを
通して濾過し、その後に分析した。
である。皮膚を有しないニジマスを小片に切断し、そし
て１５ｇの肉を秤り取って遠心チューブ（１００ml）に
入れた。抽出剤として１５mlのテトラヒドロフランを加
えた。肉をＵＬＴＲＡＴＵＲＡＸミキサー中でさらに細
砕し、そして次に遠心分離した。テトラヒドロフラン抽
出物を５０mlのメスフラスコに移した。残渣を音波処理
浴中で１０mlのテトラヒドロフランにより２〜３回洗浄
し、そして遠心分離し、そしてテトラヒドロフラン相を
メスフラスコに移し、これに追加のテトラヒドロフラン
を加えて５０mlにした。この５０mlの内１０mlを窒素の
もとで４０℃の温度にて蒸発せしめた。蒸発残渣を１ml
の移動相に溶解し、そして０．４５μｍのフィルターを
通して濾過し、その後に分析した。
【０１３１】ＨＰＬＣ分析 カラム：LiChrosorb ＲＰ−１８、５μｍ、２５０×
４．６mm 流速 ：１０ml／分 注入 ：２０μｌループ、 Rheodyne ７１２０ ポンプ： Waters ５１０ 検出器： Waters ４８１，ＵＶ−分光光度計、４７１nm 積分器： Waters ７４０
４．６mm 流速 ：１０ml／分 注入 ：２０μｌループ、 Rheodyne ７１２０ ポンプ： Waters ５１０ 検出器： Waters ４８１，ＵＶ−分光光度計、４７１nm 積分器： Waters ７４０
【０１３２】魚の色の決定 魚肉の色を、ミノルタカメラ・メーターIIを用いるＬ*
ａ* ｂ* −色決定法により決定した。Ｌ* −値は明度成
分を示し、ａ* −値（−６０〜＋６０）は緑／赤成分
（負の値は緑成分を示し、そして正の値は赤成分を示
す）を示し、そしてｂ* −値（−６０〜＋９０）は青／
黄成分を示す。ａ* −値のみを第１１表に示す。皮膚を
有しないニジマスの肉をブレンダーでホモジナイズして
均一材料を得、これを小ペトリ皿（高さ１cm、直径３．
５cm）に入れてその全容を占めるようにした。ペトリ皿
中の材料の表面を平らにし、ガラス板で覆い、そして次
に分析を待った。次の表に、魚飼育実験の結果を示す。
ａ* ｂ* −色決定法により決定した。Ｌ* −値は明度成
分を示し、ａ* −値（−６０〜＋６０）は緑／赤成分
（負の値は緑成分を示し、そして正の値は赤成分を示
す）を示し、そしてｂ* −値（−６０〜＋９０）は青／
黄成分を示す。ａ* −値のみを第１１表に示す。皮膚を
有しないニジマスの肉をブレンダーでホモジナイズして
均一材料を得、これを小ペトリ皿（高さ１cm、直径３．
５cm）に入れてその全容を占めるようにした。ペトリ皿
中の材料の表面を平らにし、ガラス板で覆い、そして次
に分析を待った。次の表に、魚飼育実験の結果を示す。
【０１３３】
【表１２】
【０１３４】
【表１３】
【０１３５】
【表１４】
【０１３６】
【表１５】
【０１３７】
【表１６】
【０１３８】この結果が示すところによれば、魚餌Ａ〜
Ｅのそれぞれのアスタキサンチンは魚に吸収され、そし
て魚肉は飼料中のアスタキサンチンの量の増加（飼料Ａ
−Ｄ）に従って、そして飼育期間の増加に従って増加す
る赤色の着色〔ａ* −値（色の赤成分を示す）により観
察されるように〕を含有する。さらに、上記の結果は、
飼料中のアスタキサンチンの存在が魚の成育に影響を与
えないことを示している。
Ｅのそれぞれのアスタキサンチンは魚に吸収され、そし
て魚肉は飼料中のアスタキサンチンの量の増加（飼料Ａ
−Ｄ）に従って、そして飼育期間の増加に従って増加す
る赤色の着色〔ａ* −値（色の赤成分を示す）により観
察されるように〕を含有する。さらに、上記の結果は、
飼料中のアスタキサンチンの存在が魚の成育に影響を与
えないことを示している。
【０１３９】魚を視覚実験にかけ、そして魅力的な赤色
を有することが見出された。飼育の４３日後、飼料Ｄ及
びＥ（それぞれ本発明に従って製造されたアスタキサン
チン４０ppm 及び合成アスタキサンチン４０ppm を含有
する）を供与された色の着色に実質的な差が観察されな
かった。飼育の７２時間後、飼料Ｃ，Ｄ及びＥ（それぞ
れ、本発明に従って製造されたアスタキサンチン約２０
ppm 、本発明に従って製造されたアスタキサンチン４０
ppm 、及び合成アスタキサンチン４０ppm を含有する）
により飼育された魚の着色に実験的な差が観察されなか
った。
を有することが見出された。飼育の４３日後、飼料Ｄ及
びＥ（それぞれ本発明に従って製造されたアスタキサン
チン４０ppm 及び合成アスタキサンチン４０ppm を含有
する）を供与された色の着色に実質的な差が観察されな
かった。飼育の７２時間後、飼料Ｃ，Ｄ及びＥ（それぞ
れ、本発明に従って製造されたアスタキサンチン約２０
ppm 、本発明に従って製造されたアスタキサンチン４０
ppm 、及び合成アスタキサンチン４０ppm を含有する）
により飼育された魚の着色に実験的な差が観察されなか
った。
【０１４０】例１２ ．フィッシュ・パテ (Fish pate ） タラの小片 ７１％ 油 ３％ ラスク（rusk） ４％ グリンドステッド・プロテイン１７７*) １％ 澱粉 １％ アスタキサンチン ０．００１％ 水、防腐剤及びスパイス １００％まで *) グリンドステッド・プロテインは７５％のグリンドステッド・プロテイン １００と２５％のアルギン酸ナトリウムとのブレンドである。 アスタキサンチンを油相に分散せしめた。グリンドステ
ッド・プロテイン１７７、澱粉及び他の乾燥成分を混合
し、そして魚をコロイドミルに加えた。次に、油相、乾
燥成分、及び水を加え、そしてコロイドミル中で１０分
間処理を続ける。パテを錫容器に満たし、そして熱処理
にかけた。
ッド・プロテイン１７７、澱粉及び他の乾燥成分を混合
し、そして魚をコロイドミルに加えた。次に、油相、乾
燥成分、及び水を加え、そしてコロイドミル中で１０分
間処理を続ける。パテを錫容器に満たし、そして熱処理
にかけた。
【０１４１】レッド・ドレッシング 魅力的な赤色を有するレッド・ドレッシングを次の成分
から常法に従って製造することができる。 油 ３０．０％ タラゴン酢 １２．３％ トメトペースト ８．０％ マヨダン (Mayodan ）ＤＣ*) ０．３％ 糖 ８．０％ 食塩 ０．８％ アスタキサンチン ０．０１〜０．５％ 水、防腐剤及びスパイス １００％まで *) マヨダン (Mayodan ）ＤＣ（商標）はグリンドステッド・プロダクスＡ／ Ｓからの安定剤である。
から常法に従って製造することができる。 油 ３０．０％ タラゴン酢 １２．３％ トメトペースト ８．０％ マヨダン (Mayodan ）ＤＣ*) ０．３％ 糖 ８．０％ 食塩 ０．８％ アスタキサンチン ０．０１〜０．５％ 水、防腐剤及びスパイス １００％まで *) マヨダン (Mayodan ）ＤＣ（商標）はグリンドステッド・プロダクスＡ／ Ｓからの安定剤である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ２３Ｌ 1/32 Ａ２３Ｌ 1/32 Ａ 1/325 1/325 Ｄ (Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 23/00 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 ラーセン，ロベルト デンマーク国，デーコー−2830 ビルム, ハッセルベイ 32
Claims (10)
- 【請求項１】 接種物として１００μｌの４日間ＹＭ培
養物を用い、５０mlの培地を含み２個のバッフルを有し
１５０rpm の回転振とうに付された５００mlの振とうフ
ラスコ中で２０〜２２℃にて５日間ディフコＹＭ培地
で、３０mmol／ｌ／時の酸素移動速度を用いる条件下で
培養せしめ、２０mlのメタノール中０．２ｇの酵母乾物
の懸濁液を、氷水で冷却されるジャケットを有し直径
０．４mmのガラスボール１５ｇを収容するガラスボール
ミル中で２０℃以下の温度において、０．５分間の間隔
をおいて５×１分間の破砕にかけることによって調製し
た酵母のメタノール抽出物について、標準として純粋な
アスタキサンチンを用いてＨＰＬＣにより測定した場合
に、酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上の量でアスタキサン
チンを生産する、ファフィア・ロドチーマ（Phaffia rh
odozyma ）種に属する、酵母細胞。 - 【請求項２】 寄託番号No. ２２５−８７ＣＢＳのもと
に寄託されている酵母株又は寄託番号No. ２１５−８８
ＣＢＳのもとに寄託されている酵母株に属するか、ある
いはそのアスタキサンチン生産性を有しているその変異
株である、請求項１に記載の酵母株。 - 【請求項３】 請求項１に記載された条件下で増殖しそ
して請求項１に記載した方法により測定した場合に、酵
母乾物ｇ当り７００μｇ以上、好ましくは酵母乾物ｇ当
り１０００μｇ以上、特に酵母乾物ｇ当り１５００μｇ
以上、そして最も好ましくは酵母乾物ｇ当り２０００μ
ｇ以上の量でアスタキサンチンを生産する、請求項１又
は２に記載の酵母細胞。 - 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の酵
母細胞の製造方法であって、酵母細胞を変異系で処理
し、そして請求項１に記載の条件下で増殖せしめそして
請求項１に記載の方法により測定した場合に酵母乾物ｇ
当り６００μｇ以上の量でアスタキサンチンを生産する
ことができる生じた変異株を選択することを含んで成る
方法。 - 【請求項５】 酵母細胞を引き続いての２回以上の変異
誘発処理にかける、請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 変異誘発にかけられる酵母細胞が、請求
項１に記載の条件下で増殖せしめそして請求項１に記載
の方法で測定した場合に酵母乾物ｇ当り６００μｇ以上
の量でアスタキサンチンを生産する酵母細胞である、請
求項４又は５に記載の方法。 - 【請求項７】 前記変異原がエチルメタンスルホネー
ト、ＵＶ照射及びＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジンから選択される、請求項４〜６のいずれ
か１項に記載の方法。 - 【請求項８】 請求項１に記載の酵母細胞又はその細胞
破砕物を他の飼料成分、好ましくは動物飼料と組み合わ
せて含んで成る動物飼料であって、前記アスタキサンチ
ン含有酵母細胞又はその細胞破砕物が全動物飼料組成物
乾物の１０重量％以下、好ましくは５％以下、そしてさ
らに好ましくは３％以下であり、他の成分が好ましくは
蛋白質及び炭水化物、例えば魚粉、小麦、血粉、穀粉、
脂肪、例えば魚油及び植物油、ビタミン及びミネラルか
ら選択される、動物飼料。 - 【請求項９】 前記アスタキサンチン含有酵母細胞又は
その細胞破砕物が、請求項２もしくは３に記載の酵母細
胞、又は請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法によ
り製造される酵母細胞、あるいはその破砕物である、請
求項８に記載の動物飼料。 - 【請求項１０】 動物の肉及び／又は動物により生産さ
れる生成物の赤色の着色を得るために動物を飼育する方
法であって、該動物に、請求項１〜３のいずれか１項に
記載の酵母細胞又は請求項４〜７のいずれか１項に記載
の方法により製造される酵母細胞、あるいはそれらの細
胞破砕物を含有する飼料を供与することを含んで成り、
該動物が好ましくは魚、特にサケもしくはマス、バター
に着色するためにウシ、あるいは卵黄を着色するために
家禽である、前記方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK199887A DK199887D0 (da) | 1987-04-15 | 1987-04-15 | Gaerstamme |
| DK1998/87 | 1987-04-15 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63503601A Division JPH0714340B2 (ja) | 1987-04-15 | 1988-04-15 | アスタキサンチン生産性酵母細胞，その製造方法及びその使用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1169969A true JPH1169969A (ja) | 1999-03-16 |
Family
ID=8109335
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63503601A Expired - Fee Related JPH0714340B2 (ja) | 1987-04-15 | 1988-04-15 | アスタキサンチン生産性酵母細胞，その製造方法及びその使用 |
| JP10166941A Pending JPH1169969A (ja) | 1987-04-15 | 1998-06-15 | アスタキサンチン生産性酵母細胞、その製造方法及びその使用 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63503601A Expired - Fee Related JPH0714340B2 (ja) | 1987-04-15 | 1988-04-15 | アスタキサンチン生産性酵母細胞，その製造方法及びその使用 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5972642A (ja) |
| EP (1) | EP0367765B2 (ja) |
| JP (2) | JPH0714340B2 (ja) |
| KR (1) | KR960014619B1 (ja) |
| AT (1) | ATE93537T1 (ja) |
| CA (1) | CA1334512C (ja) |
| DE (2) | DE367765T1 (ja) |
| DK (1) | DK199887D0 (ja) |
| FI (1) | FI894888A7 (ja) |
| HK (1) | HK1005464A1 (ja) |
| IE (1) | IE60606B1 (ja) |
| IS (1) | IS1580B (ja) |
| NO (1) | NO305762B1 (ja) |
| WO (1) | WO1988008025A1 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010087400A1 (ja) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | 新日本石油株式会社 | カロテノイドの分離法 |
| WO2011115099A1 (ja) | 2010-03-15 | 2011-09-22 | Ｊｘ日鉱日石エネルギー株式会社 | 発酵によるアスタキサンチン製造方法 |
| US8993282B2 (en) | 2008-10-17 | 2015-03-31 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Carotenoid fermentation method |
| KR20180072825A (ko) | 2015-12-28 | 2018-06-29 | 제이엑스티지 에네루기 가부시키가이샤 | 코발트 함유 배지에 의한 카로테노이드 산생 세균에 의한 카로테노이드의 발효 제조 방법 |
| KR20180131543A (ko) | 2016-03-31 | 2018-12-10 | 제이엑스티지 에네루기 가부시키가이샤 | 카로테노이드의 제조 방법 |
Families Citing this family (68)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0415464A3 (en) * | 1989-06-30 | 1992-03-11 | Unilever Nv | Edible fat-containing products containing carotenoids |
| NZ232366A (en) * | 1989-07-28 | 1991-08-27 | Igene Biotechnology Inc | Production of astaxanthin and the enhancement of its content in yeast |
| JPH03206880A (ja) * | 1989-10-27 | 1991-09-10 | Enzymatix Ltd | 酵母およびアスタキサンチン生産におけるその使用 |
| CA2027835A1 (en) * | 1990-01-19 | 1991-07-20 | William D. Prevatt | Strains of phaffia rhodozyma containing high levels of astaxanthin |
| CA2033666A1 (en) * | 1990-04-23 | 1991-10-24 | Robert E. Torregrossa | Process for producing astaxanthin in phaffia rhodozyma |
| CA2047000A1 (en) * | 1990-07-20 | 1992-01-21 | John W. Chapman | Astaxanthin-generating yeast cells |
| US5212088A (en) * | 1990-10-23 | 1993-05-18 | Phillips Petroleum Company | Spheroplast fusions of phaffia rhodozyma cells |
| JP3117714B2 (ja) | 1991-06-06 | 2000-12-18 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるアスタキサンチンの製造法 |
| DK115191D0 (da) * | 1991-06-14 | 1991-06-14 | Ingrid Stampe Villadsen | Fremgangsmaade til frembringelse af carotenoidproducerende, isaer astaxanthinproducerende, mikroorganismer, mikroorganismer opnaaet ved fremgangsmaaden og fremgangsmaade til fremstilling af carotenoidholdige mikroorganismeceller eller -celledele eller oprenset carotenoid |
| ES2115637T3 (es) * | 1991-12-17 | 1998-07-01 | Gist Brocades Nv | Cepas de phaffia rhodozyma que tienen una alta concentracion intracelular de astaxantina y una baja concentracion intracelular de hdco. |
| US5716655A (en) * | 1992-01-24 | 1998-02-10 | Gist-Brocades B.V. | Method for the preparation of feed pellets |
| AU657593B2 (en) * | 1992-01-29 | 1995-03-16 | Burns Philp Food Inc. | Treatment of phaffia rhodozyma |
| NZ248628A (en) * | 1992-09-11 | 1996-02-27 | Gist Brocades Nv | Transformed phaffia (yeast) strains and methods and vectors used |
| US5466599A (en) * | 1993-04-19 | 1995-11-14 | Universal Foods Corporation | Astaxanthin over-producing strains of phaffia rhodozyma |
| JPH07143864A (ja) * | 1993-11-22 | 1995-06-06 | Nichiwa Sangyo Kk | 鶏 卵 |
| FI972961A7 (fi) * | 1995-01-31 | 1997-07-31 | Neurosearch As | Astaksantiinisuspensio |
| ATE249514T1 (de) * | 1996-03-28 | 2003-09-15 | Dsm Ip Assets Bv | Verfahren zur herstellung von granulärer mikrobieller biomasse und gewinnung wertvoller komponenten aus mikrobieller biomasse |
| KR980009450A (ko) * | 1996-07-12 | 1998-04-30 | 양종석 | 파피아 로드지마에서 색소오일의 추출방법 |
| NL1007240C2 (nl) * | 1997-10-09 | 1999-04-27 | Penta Participatiemaatschappij | Werkwijze voor het vervaardigen van dierenvoer dat een kleurpigment bevat. |
| NO309386B1 (no) * | 1999-04-19 | 2001-01-22 | Norsk Hydro As | Pigment |
| EP2295595B1 (en) | 2000-01-19 | 2019-05-01 | DSM IP Assets B.V. | Solventless extraction process |
| JP4427167B2 (ja) | 2000-06-12 | 2010-03-03 | 新日本石油株式会社 | カロテノイド色素の製法 |
| EP1178118A1 (en) * | 2000-08-02 | 2002-02-06 | Dsm N.V. | Isolation of microbial oils |
| KR100411364B1 (ko) * | 2000-08-04 | 2003-12-18 | 해태제과식품주식회사 | 녹조류에서 아스타산틴 색소 추출방법 및 추출된 색소 |
| US6818424B2 (en) * | 2000-09-01 | 2004-11-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Production of cyclic terpenoids |
| US7105634B2 (en) * | 2002-02-11 | 2006-09-12 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Genetic constructs encoding carotenoid biosynthetic enzymes |
| KR100465555B1 (ko) * | 2002-05-24 | 2005-01-13 | 이은규 | 아스타산틴의 제조방법 |
| KR100465556B1 (ko) * | 2002-05-24 | 2005-01-13 | 이은규 | 초임계 유체 추출방법을 이용한 아스타산틴의 추출방법 |
| JP4486883B2 (ja) * | 2002-06-21 | 2010-06-23 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | カロテノイドを作製する方法 |
| CN1327003C (zh) * | 2002-09-27 | 2007-07-18 | Dsmip资产公司 | 利用补料分批发酵法通过Phaffia rhodozyma制备虾青素 |
| JP2006506065A (ja) * | 2002-11-14 | 2006-02-23 | アドバンスド バイオニュートリション コーポレーション | ワムシ、幼生エビおよび海産濾過食性動物の培養に適する餌料 |
| US7235270B2 (en) * | 2003-03-10 | 2007-06-26 | Mayeux Jerry V | Pain balm |
| US7098000B2 (en) * | 2003-06-04 | 2006-08-29 | E. I. Du Pont De Nemoure And Company | Method for production of C30-aldehyde carotenoids |
| EP1633335A4 (en) * | 2003-06-19 | 2009-08-19 | Advanced Bionutrition Corp | IMPROVED ABSORPTION OF LIPOSOLUBLE NUTRIENTS |
| DK1644482T4 (da) | 2003-06-30 | 2014-12-15 | Clasado Inc | Hidtil ukendt galactooligosaccharidpræparat og fremstillingen deraf |
| ITPR20040015A1 (it) * | 2004-02-24 | 2004-05-24 | Niro Soavi Spa | Procedimento e apparato per la rottura cellulare in una sospensione fluida in continuo. |
| KR100634867B1 (ko) | 2004-12-07 | 2006-10-16 | 충남대학교산학협력단 | 미생물 분쇄방법 및 이로부터 색소의 추출방법 |
| CA2602183C (en) | 2005-03-18 | 2014-05-06 | Microbia, Inc. | Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi |
| MX2007013725A (es) | 2005-05-05 | 2008-04-09 | Sensient Flavors Inc | Produccion de beta-glucanos y mananos. |
| US7217537B2 (en) * | 2005-09-15 | 2007-05-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method to increase carotenoid production in a microbial host cell by down-regulating glycogen synthase |
| GB0525857D0 (en) | 2005-12-20 | 2006-02-01 | Product and process | |
| GB0601901D0 (en) | 2006-01-31 | 2006-03-08 | Product and Process | |
| KR100708386B1 (ko) * | 2006-02-21 | 2007-04-18 | 성균관대학교산학협력단 | 녹조류에서 프리 아스타잔틴의 선택적 분리 방법 |
| JP5116994B2 (ja) * | 2006-05-30 | 2013-01-09 | Ｊｘ日鉱日石エネルギー株式会社 | カロテノイドの製造方法 |
| GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
| US8097761B2 (en) | 2006-03-28 | 2012-01-17 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Process for production of carotenoid |
| JP5459939B2 (ja) * | 2006-06-09 | 2014-04-02 | 富士フイルム株式会社 | カロチノイド含有エマルジョン組成物、その製造方法、それを含む食品及び化粧品 |
| US8691555B2 (en) | 2006-09-28 | 2014-04-08 | Dsm Ip Assests B.V. | Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi |
| US20080131515A1 (en) * | 2006-12-01 | 2008-06-05 | Fujifilm Corporation | Emulsion composition, and foods and cosmetics containing the emulsion composition |
| JP4984895B2 (ja) * | 2007-01-09 | 2012-07-25 | 東ソー株式会社 | カロテノイド類の製法 |
| JP4969370B2 (ja) | 2007-08-29 | 2012-07-04 | Ｊｘ日鉱日石エネルギー株式会社 | カロテノイドの製造方法 |
| EP2085381B1 (en) | 2008-01-30 | 2010-08-11 | Bioptik Technology, Inc. | Method for obtaining natural astaxanthin from eggs and gonads of snails |
| US20120149886A1 (en) * | 2008-04-10 | 2012-06-14 | Microbia, Inc. | Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi |
| DE102008036723A1 (de) * | 2008-08-07 | 2010-02-25 | Uhde High Pressure Technologies Gmbh | Zellaufschluss pflanzlicher oder tierischer Ausgangsmaterialien mittels Kombination von Sprühverfahren und Dekompression zur selektiven Extraktion und Abscheidung intrazellulärer Wertstoffe |
| WO2010136742A1 (en) | 2009-05-27 | 2010-12-02 | Clasado Inc. | Method of preventing diarrhoea |
| EP2576801B1 (en) | 2010-06-01 | 2019-10-02 | DSM IP Assets B.V. | Extraction of lipid from cells and products therefrom |
| MX370606B (es) | 2013-12-20 | 2019-12-18 | Dsm Ip Assets Bv | Procedimientos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas. |
| ES2984970T3 (es) | 2013-12-20 | 2024-10-31 | Mara Renewables Corp | Métodos para recuperar aceite de microorganismos |
| AU2014369046B2 (en) | 2013-12-20 | 2019-02-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| CA2934490C (en) | 2013-12-20 | 2022-05-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| CN105829539B (zh) | 2013-12-20 | 2023-11-10 | 帝斯曼营养品股份公司 | 从微生物中回收油的方法 |
| TWI646189B (zh) | 2013-12-20 | 2019-01-01 | 荷蘭商Ｄｓｍ智慧財產有限公司 | 用於從微生物細胞獲得微生物油之方法（五） |
| SG11201605052XA (en) | 2013-12-20 | 2016-07-28 | Dsm Ip Assets Bv | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| JP2016010383A (ja) * | 2014-06-30 | 2016-01-21 | Ｊｘ日鉱日石エネルギー株式会社 | カロテノイドを含有する乾燥菌体粉末およびその製造方法 |
| CN106432024A (zh) * | 2016-09-27 | 2017-02-22 | 南京工业大学 | 一种雨生红球藻细胞快速破壁偶联萃取虾青素的方法 |
| CN114431333B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-04-02 | 青岛尚德生物技术有限公司 | 一种红法夫酵母液体复合制剂及其制备方法和应用 |
| CN115044527B (zh) * | 2022-02-15 | 2023-12-15 | 昆明理工大学 | 一种肌醇在促进雨生红球藻生产虾青素中的应用 |
| CN118909689B (zh) * | 2024-08-30 | 2025-02-18 | 山东福瑞达医药集团有限公司 | 一种高含量虾青素油的制备方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3657072A (en) * | 1969-11-05 | 1972-04-18 | Merck & Co Inc | Epoxidation of cis-propenylphosphonic acid |
| US3717549A (en) * | 1971-02-09 | 1973-02-20 | Pfizer | Fermentation process for the production of citric acid |
| SU531844A1 (ru) * | 1975-07-18 | 1976-10-15 | Институт Микробиологии И Вирусологии Имени Академика Д.К.Заболотного Ан Украинской Сср | Штамм дрожжей 214, синтезирующий каротиноиды |
| US4318987A (en) * | 1979-11-16 | 1982-03-09 | Murillo Araujo Francisco J | β-Carotene producing strains of the fungus phycomyces blakesleenus |
| US4374859A (en) * | 1980-07-07 | 1983-02-22 | The Regents Of The University Of California | Method for reducing fusel oil in alcoholic beverages and yeast strain useful in that method |
| JPS57206342A (en) * | 1981-06-12 | 1982-12-17 | Sanraku Inc | Feed for red sea-bream |
| JPH0749947B2 (ja) * | 1986-09-02 | 1995-05-31 | 飯島精密工業株式会社 | 筒状物体の寸法測定装置 |
| US5356810A (en) * | 1987-04-15 | 1994-10-18 | Gist-Brocades N.V. | Astaxanthin-producing yeast cells, methods for their preparation and their use |
| US5356809A (en) * | 1988-08-08 | 1994-10-18 | Igene Biotechnology, Inc. | Processes for in vivo production of astaxanthin and phaffia rhodozyma yeast of enhanced astaxanthin content |
| US5182208A (en) * | 1988-08-08 | 1993-01-26 | Igene Biotechnology, Inc. | Processes for in vivo production of astaxanthin and phaffia rhodozyma yeast of enhanced astaxanthin content |
| CA2033666A1 (en) * | 1990-04-23 | 1991-10-24 | Robert E. Torregrossa | Process for producing astaxanthin in phaffia rhodozyma |
| DK115191D0 (da) * | 1991-06-14 | 1991-06-14 | Ingrid Stampe Villadsen | Fremgangsmaade til frembringelse af carotenoidproducerende, isaer astaxanthinproducerende, mikroorganismer, mikroorganismer opnaaet ved fremgangsmaaden og fremgangsmaade til fremstilling af carotenoidholdige mikroorganismeceller eller -celledele eller oprenset carotenoid |
-
1987
- 1987-04-15 DK DK199887A patent/DK199887D0/da not_active Application Discontinuation
-
1988
- 1988-04-15 DE DE198888903778T patent/DE367765T1/de active Pending
- 1988-04-15 EP EP88903778A patent/EP0367765B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-15 FI FI894888A patent/FI894888A7/fi unknown
- 1988-04-15 DE DE3883539T patent/DE3883539T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-04-15 JP JP63503601A patent/JPH0714340B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-04-15 IS IS3334A patent/IS1580B/is unknown
- 1988-04-15 IE IE115188A patent/IE60606B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-04-15 HK HK98104550A patent/HK1005464A1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-04-15 KR KR1019880701657A patent/KR960014619B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1988-04-15 WO PCT/DK1988/000068 patent/WO1988008025A1/en not_active Ceased
- 1988-04-15 AT AT88903778T patent/ATE93537T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-04-15 CA CA000564310A patent/CA1334512C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-14 NO NO19885560A patent/NO305762B1/no not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-12-12 US US08/989,860 patent/US5972642A/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-06-15 JP JP10166941A patent/JPH1169969A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8993282B2 (en) | 2008-10-17 | 2015-03-31 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Carotenoid fermentation method |
| WO2010087400A1 (ja) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | 新日本石油株式会社 | カロテノイドの分離法 |
| US8853460B2 (en) | 2009-01-30 | 2014-10-07 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Method for separating carotenoid |
| WO2011115099A1 (ja) | 2010-03-15 | 2011-09-22 | Ｊｘ日鉱日石エネルギー株式会社 | 発酵によるアスタキサンチン製造方法 |
| US9605323B2 (en) | 2010-03-15 | 2017-03-28 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Method for producing astaxanthin by fermentation |
| US10240215B2 (en) | 2010-03-15 | 2019-03-26 | Jx Nippon Oil & Energy Corporation | Method for producing astaxanthin by fermentation |
| KR20180072825A (ko) | 2015-12-28 | 2018-06-29 | 제이엑스티지 에네루기 가부시키가이샤 | 코발트 함유 배지에 의한 카로테노이드 산생 세균에 의한 카로테노이드의 발효 제조 방법 |
| US10947574B2 (en) | 2015-12-28 | 2021-03-16 | Eneos Corporation | Method for producing fermented carotenoid using carotenoid-producing bacteria obtained by using cobalt-containing culturing medium |
| KR20180131543A (ko) | 2016-03-31 | 2018-12-10 | 제이엑스티지 에네루기 가부시키가이샤 | 카로테노이드의 제조 방법 |
| US11268121B2 (en) | 2016-03-31 | 2022-03-08 | Eneos Corporation | Carotenoid production method |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI894888A0 (fi) | 1989-10-16 |
| DE367765T1 (de) | 1990-08-16 |
| IS3334A7 (is) | 1988-10-16 |
| EP0367765A1 (en) | 1990-05-16 |
| JPH0714340B2 (ja) | 1995-02-22 |
| NO885560L (no) | 1989-02-14 |
| IE881151L (en) | 1988-10-15 |
| KR890700658A (ko) | 1989-04-26 |
| AU620034B2 (en) | 1992-02-13 |
| DE3883539T3 (de) | 2005-02-03 |
| ATE93537T1 (de) | 1993-09-15 |
| JPH02504101A (ja) | 1990-11-29 |
| NO305762B1 (no) | 1999-07-19 |
| EP0367765B2 (en) | 2004-04-28 |
| IS1580B (is) | 1996-03-01 |
| CA1334512C (en) | 1995-02-21 |
| DE3883539D1 (de) | 1993-09-30 |
| KR960014619B1 (ko) | 1996-10-19 |
| DK199887D0 (da) | 1987-04-15 |
| EP0367765B1 (en) | 1993-08-25 |
| WO1988008025A1 (en) | 1988-10-20 |
| NO885560D0 (no) | 1988-12-14 |
| US5972642A (en) | 1999-10-26 |
| IE60606B1 (en) | 1994-07-27 |
| HK1005464A1 (en) | 1999-01-08 |
| DE3883539T2 (de) | 1994-03-17 |
| FI894888A7 (fi) | 1989-10-16 |
| AU1688988A (en) | 1988-11-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH1169969A (ja) | アスタキサンチン生産性酵母細胞、その製造方法及びその使用 | |
| US5712110A (en) | Astaxanthin-producing yeast cells methods for their preparation and their use | |
| HK1005464B (en) | Astaxanthin-producing yeast cells, methods for their preparation and their use | |
| US6413736B1 (en) | Astaxanthin over-producing strains of phaffia rhodozyma, methods for their cultivation, and their use in animal feeds | |
| EP0356499B1 (en) | Pigmentation supplements for animal feed compositions | |
| US20020015978A1 (en) | Process for production of carotenoids, xanthophylls and apo-carotenoids utilizing eukaryotic microorganisms | |
| CA2047000A1 (en) | Astaxanthin-generating yeast cells | |
| JP5706056B2 (ja) | サケ類の肉色改善方法 | |
| AU620034C (en) | Astaxanthin-producing yeast cells, methods for their preparation and their use | |
| DK168542B1 (da) | Astaxanthin-producerende Phaffia rhodozyma gærceller, fremgangsmåde til deres fremstilling og deres anvendelse | |
| KR100634867B1 (ko) | 미생물 분쇄방법 및 이로부터 색소의 추출방법 | |
| JP2014097069A (ja) | サケ類の肉色改善方法 |