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JP6991979B2 - Ｃｄ８結合物質 - Google Patents

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年２月５日に出願された米国特許仮出願第６２／２９１，７６９号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，８８０号；２０１６年１０月２４日に出願された同第６２／４１１，８０５号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７２号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７４号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９６５号；２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７６号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９６８号；２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３５，９７９号；同第２０１６年５月１３日に出願された同第６２／３３６，０３０号；２０１６年６月２３日に出願された同第６２／３５３，６０７号；および２０１６年２月５日に出願された同第６２／２９１，７７９号の利益を主張する。これら全ての特許の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、一部は、ＣＤ８を結合する結合物質（例えば、限定されないが、ＶＨＨなどの抗体）ならびに治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。
電子申請したテキストファイルの説明
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列リストのコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ－０１１ＰＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ；記録日付：２０１７年２月１日；ファイルサイズ：２６５ＫＢ）。
医学における大きな進展にもかかわらず、癌は全世界的に、死亡の主要な原因の１つとして残されたままであり、毎年１２．７百万件の症例が発生すると推定されている。効果的な抗癌療法を立案する上での大きな障害の１つは癌の免疫回避であり、癌細胞は免疫監視および免疫破壊を回避し、それにより臨床的に明らかな癌が生ずる。免疫回避の機序は免疫エフェクターに抵抗性の腫瘍バリアントの選択、および腫瘍内での免疫抑制環境の漸進的形成を含む。
ＣＤ８＋ Ｔリンパ球（細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＴＬとしても知られる）は、広範囲のウイルス、原生動物および細胞内病原菌に対する宿主防御において重要な役割を果たし、かつ抗腫瘍免疫における重要なエフェクターである。一般に、ＣＤ８＋ ＣＴＬは、インターフェロン（ＩＦＮ）－γおよび細胞毒素の産生、溶解タンパク質（例えば、パーフォリン、グランザイム）のエキソサイトーシス、およびＦＡＳ分子の受容体リガンド結合などの機序により癌発生を抑制する。しかし、腫瘍は、例えば、癌細胞それ自身によるかまたは腫瘍微小環境中に存在する非癌細胞により、免疫抑制サイトカインの産生および免疫チェックポイント阻害の関与を介して、ＣＴＬの機能を無能にすることにより免疫監視を回避できる。またさらに、癌細胞は、アポトーシスによりＣＴＬを欠失させることが示されている。
現在の癌に対する処置は、化学療法、放射線療法、免疫療法、標的療法、および手術を含み、これらは全て、限界があり、かつ有害な副作用がある。
さらに、自己免疫疾患などの、免疫系によりもたらされる多くの非腫瘍学的徴候が存在し、これらには、望ましい治療効果が得られない限定的な処置の選択肢しかない。
したがって、例えば、腫瘍回避を効果的に逸脱させかつ、例えば、ＣＴＬにより媒介される抗腫瘍免疫を強化できるものを含む、改善された免疫療法薬に対する必要性が残されている。
種々の態様では、本発明は、ＣＤ８に特異的に結合する少なくとも１つのターゲティング部分を有するＣＤ８結合物質に関する。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質
は、ＣＤ８に結合するが、ＣＤ８を機能的に調節（例えば、限定されないが、部分的にまたは完全に中和することを含む）しない。したがって、種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、例えば、ＣＤ８発現細胞を目的の部位に動員しつつ、同時にＣＤ８発現細胞にＣＤ８を介してシグナル伝達させること（すなわち、ＣＤ８結合物質の結合は、目的の部位でのＣＤ８シグナル伝達を低減または排除しない）において使用される。ある実施形態では、ターゲティング部分は単一ドメイン抗体（ＮＡＮＯＢＯＤＹまたはＶＨＨ）である。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、活性を弱めるように改変され得るシグナル伝達物質、例えば、限定されないが、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子をさらに含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的とする他の抗原に結合する追加のターゲティング部分を含む。ある実施形態では、目的とする他の抗原は、腫瘍細胞上に存在する。別の実施形態では、目的とする他の抗原は、免疫細胞上に存在する。これらの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に補充し得る。
種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、ならびに他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の処置に使用され、本発明は、種々の処置方法を包含する。
図１のパネルＡは、マウスＣＤ８に特異的な６種のＶＨＨの、ＣＤ８αを遺伝子導入したＣＨＯ細胞への結合を示すヒストグラムである。 図１のパネルＢは、マウスＣＤ８に特異的な６種のＶＨＨで染色したマウス脾細胞を示すヒストグラムである。６種のＶＨＨの相対的な結合親和性は次の通りである：Ｉ－１１２６９＞Ｉ－１１２６５およびＩ－１１２６８＞Ｉ－１１２７８およびＩ－１１２８７。 図２は、マウスＣＤ８に特異的な種々のＶＨＨの、ＯＶＡ誘導性Ｔ細胞増殖および活性化に対する効果を示すヒストグラムである。 図３は、マウスＣＤ８に特異的なＶＨＨと改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）との融合体の投与が、腫瘍サイズの減少をもたらしたことを示す。ｍＣＤ８Ｎｂ（Ｒ１）はクローンＲ１ＣＤＥ２８に対応し、ｍＣＤ８Ｎｂ（Ｒ２）はクローンＲ２ＣＤＥ７１に対応する。 図４は、マウスＣＤ８に特異的なＶＨＨと改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）との融合体の投与が、体重減少または血液毒性を生じなかったことを示す。全てのパネルで、ヒストグラムは左から右へ：未処置マウス、ＰＢＳ、非標的キメラ（すなわち、改変ＩＦＮ、Ｑ１２４Ｒ、無関係の標的に対するターゲティング部分）、および改変ヒトＩＦＮ（Ｑ１２４Ｒ）に融合された２種のＣＤ８ ＶＨＨ、である。ｍＣＤ８Ｎｂ（Ｒ１）はクローンＲ１ＣＤＥ２８に対応し、ｍＣＤ８Ｎｂ（Ｒ２）はクローンＲ２ＣＤＥ７１に対応する。 図５は、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨのＨｅｋＴ細胞に対する結合特性を示す。 図６、パネルＡ～Ｃは、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨの結合特性を示す。パネルＡは、フローサイトメトリーにより検出された細胞蛍光を示す。 パネルＢは、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を示し、これは、５種のＶＨＨ希釈に対し計算され、コントロールＶＨＨで得られた結合と比較された。 パネルＣは、ＣＤ３抗原提示細胞中の、ＣＤ８ ＶＨＨ（His＋）を結合するヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ)のパーセンテージを示す。計算は、５種のＶＨＨ希釈に対し実施され、コントロールＶＨＨで得られた結合と比較された。 図７は、マウス腫瘍増殖調査を示し、この調査ではＣ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６黒色腫腫瘍細胞を皮下接種した。腫瘍がノギスで計って特定のサイズに達したときに、示した処置物質による病変周囲の処置を開始した。グラフは、示した時間にわたる腫瘍サイズの増大を示す。 図８は、マウス腫瘍増殖調査を示し、この調査ではマウスに４Ｔ１乳房腫瘍細胞を接種した。マウスを示した物質で処置した。グラフは、示した時間にわたる腫瘍サイズの増大を示す。 図９は、マウス腫瘍増殖調査を示し、この調査ではマウスに４Ｔ１乳房腫瘍細胞を接種した。マウスをその後、ドキソルビシンを含有してまたは含有せずに示される物質で処置した。グラフは、示した時間にわたる腫瘍サイズの増大を示す。 図１０は、パネルＡ、Ｂ、およびＣで、単一特異性キメラのヒトＣＤ８ターゲティングを示す。刺激されたＰＢＭＣのＣＤ８対ｐＳＴＡＴ１染色のゼブラプロットをパネルＡに示す。パネルＢおよびＣ：ＣＤ８陽性（パネルＢ）またはＣＤ８陰性（パネルＣ）のｐＳＴＡＴ１染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）をプロットする（パネルＢおよびＣの両方において、Ｘ軸で１００の位置での曲線の順序は：抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ、抗ＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ、および抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ａである）。
本発明は、一部は、ＣＤ８を認識し、それに結合する物質（例えば、非限定的例であるが、ＶＨＨなどの抗体）の発見に基づいている。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に結合するが、ＣＤ８を機能的に調節しない。種々の実施形態では、これらのＣＤ８結合物質は、免疫細胞を結合し、直接的にまたは間接的に免疫細胞を治療作用の必要な部位（例えば、腫瘍）に動員する。本発明は、ＣＤ８結合物質を含む医薬組成物および種々の疾患の処置でのそれらの使用を提供する。
ＣＤ８結合物質
種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８の機能的な調節（例えば、部分的なまたは完全な中和）なしに、ＣＤ８に特異的に結合できるタンパク質ベースの物質である。ＣＤ８は、ヘテロダイマーＩ型膜貫通型糖タンパク質であり、そのαおよびβ鎖は両方共、伸長したＯ－グリコシル化ストークにより単回通過膜貫通ドメインに連結される免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメインおよび短い細胞質側末端から構成される（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。α鎖の細胞質領域は、ｓｒｃチロシンキナーゼｐ５６ｌｃｋ（Ｌｃｋ）のためのドッキング部位として機能する２つのシステインモチーフを含む。対照的に、このＬｃｋ結合ドメインは、β鎖には存在しないように見え、ＣＤ８のβ鎖が下流シグナル伝達に関与しないことを示唆している（Ａｒｔｙｏｍｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体に対する共受容体として機能し、その基本的な役割は、ＭＨＣへの共受容体結合の後、ＬｃｋをＴＣＲ－ｐＭＨＣ複合体に補充することである（Ｔｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｅｉｌｌｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９８８）。このキナーゼの局所濃度の増加は、ζ鎖結合プロテインキナーゼ７０（ＺＡＰ－７０）を動員し活性化するシグナル伝達カスケードを活性化し、その後、Ｔ細胞活性化信号の増幅または強化をもたらす（Ｐｕｒｂｈｏｏ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｌａｕｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００７ａ）。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ＣＤ８のαおよび／またはβ鎖上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを有する、ターゲティング部分を含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８のαおよび／またはβ鎖上の１個または複数の線形エピトープ（ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、ＣＤ８のαおよび／またはβ鎖上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、ＣＤ８のαおよび／またはβ鎖上に存在する１個または複数の立体構造エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する、１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８のαおよび／またはβ鎖の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、任意の型のヒトＣＤ８のαおよび／またはβ鎖に結合し得る。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、モノマー型のＣＤ８α鎖またはＣＤ８β鎖に結合する。別の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、２つのＣＤ８α鎖または２つのＣＤ８β鎖からなるホモダイマー型に結合する。さらなる実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つのＣＤ８α鎖および１つのＣＤ８β鎖からなるヘテロダイマー型に結合する。
ある実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８α鎖上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム１（配列番号１）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム２（配列番号２）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＧＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８α鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム３（配列番号３）
ＭＲＮＱＡＰＧＲＰＫＧＡＴＦＰＰＲＲＰＴＧＳＲＡＰＰＬＡＰＥＬＲＡＫＱＲＰＧＥＲＶＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ．
ある実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８β鎖上に存在する１個または複数のエピトープを認識する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム１（配列番号４）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＰＬＣＳＰＩＴＬＧＬＬＶＡＧＶＬＶＬＬＶＳＬＧＶＡＩＨＬＣＣＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＦＹＫ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム２（配列番号５）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＰＬＣＳＰＩＴＬＧＬＬＶＡＧＶＬＶＬＬＶＳＬＧＶＡＩＨＬＣＣＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＬＲＬＨＰＬＥＫＣＳＲＭＤＹ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム３（配列番号６）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＰＱＧＥＧＩＳＧＴＦＶＰＱＣＬＨＧＹＹＳＮＴＴＴＳＱＫＬＬＮＰＷＩＬＫＴ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム４（配列番号７）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＰＬＣＳＰＩＴＬＧＬＬＶＡＧＶＬＶＬＬＶＳＬＧＶＡＩＨＬＣＣＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＫＦＮＩＶＣＬＫＩＳＧＦＴＴＣＣＣＦＱＩＬＱＩＳＲＥＹＧＦＧＶＬＬＱＫＤＩＧＱ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム５（配列番号８）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＰＬＣＳＰＩＴＬＧＬＬＶＡＧＶＬＶＬＬＶＳＬＧＶＡＩＨＬＣＣＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＰＱＧＥＧＩＳＧＴＦＶＰＱＣＬＨＧＹＹＳＮＴＴＴＳＱＫＬＬＮＰＷＩＬＫＴ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム６（配列番号９）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＲＲＲＲＡＲＬＲＦＭＫＱＦＹＫ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム７（配列番号１０）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＤＦＴＮＫＱＲＩＧＦＷＣＰＡＴＫＲＨＲＳＶＭＳＴＭＷＫＮＥＲＲＤＴＦＮＰＧＥＦＮＧＣ．
ある実施形態では、ヒトＣＤ８β鎖は、下記のアミノ酸配列を含む：
アイソフォーム８（配列番号１１）
ＭＲＰＲＬＷＬＬＬＡＡＱＬＴＶＬＨＧＮＳＶＬＱＱＴＰＡＹＩＫＶＱＴＮＫＭＶＭＬＳＣＥＡＫＩＳＬＳＮＭＲＩＹＷＬＲＱＲＱＡＰＳＳＤＳＨＨＥＦＬＡＬＷＤＳＡＫＧＴＩＨＧＥＥＶＥＱＥＫＩＡＶＦＲＤＡＳＲＦＩＬＮＬＴＳＶＫＰＥＤＳＧＩＹＦＣＭＩＶＧＳＰＥＬＴＦＧＫＧＴＱＬＳＶＶＤＦＬＰＴＴＡＱＰＴＫＫＳＴＬＫＫＲＶＣＲＬＰＲＰＥＴＱＫＧＬＫＧＫＶＹＱＥＰＬＳＰＮＡＣＭＤＴＴＡＩＬＱＰＨＲＳＣＬＴＨＧＳ．
種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、特異的結合ができるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体またはその誘導体などの抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体であるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１つの可変領域（例えば、ＶＨ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、それぞれの軽鎖は、１つの可変領域（ＶＬ）および１つの定常領域（ＣＬ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接される、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる３つの超可変領域を含む。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、特定の抗体誘導体または抗体フォーマットであるターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、次のターゲティング部分を含む：単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；アフィマー、ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または合成分子。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体であるターゲティング部分を含む。ＶＨＨは、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来であるか、またはＶＨＨは設計されたＶＨＨであってよい。ＶＨＨは抗体由来の治療用タンパク質であり、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む。ＶＨＨ技術は、ラクダ類由来の軽鎖を欠く完全に機能的な抗体に基づいている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＹまたはＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの登録商標で市販されている。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、４つの「フレームワーク領域」またはＦＲおよび３つの「相補性決定領域」またはＣＤＲを有する単一アミノ酸鎖を含むＶＨＨである、ターゲティング部分を含む。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、ＣＤＲの間に位置する可変ドメイン中の領域を指す。本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗原性標的に特異的に結合できるアミノ酸配列を含むＶＨＨ中の可変領域を指す。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、少なくとも１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含む可変ドメインを有するＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１配列は、ＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳ（配列番号１２）またはＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧ（配列番号１３）から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ２配列は、ＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧ（配列番号１４）またはＣＩＲＶＳＤＧＳＴＹＹＡＤＰＶＫＧ（配列番号１５）から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３配列は、ＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＳ（配列番号１６）またはＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＲ（配列番号１７）またはＡＧＳＬＹＴＣＶＱＳＩＶＶＶＰＡＲＰＹＹＤＭＤＹ（配列番号１８）から選択される。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１４、および配列番号１６を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１４、および配列番号１７を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１４、および配列番号１８を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１５、および配列番号１６を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１５、および配列番号１７を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２、配列番号１５、および配列番号１８を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１６を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１７を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１８を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１５、および配列番号１６を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１５、および配列番号１７を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１３、配列番号１５、および配列番号１８を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、下記の配列から選択されるアミノ酸配列を含む：
Ｒ３ＨＣＤ２７（配列番号１９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＳＴＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ
または
Ｒ３ＨＣＤ１２９（配列番号２０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＲＴＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ
または
Ｒ２ＨＣＤ２６（配列番号２１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＲＶＳＤＧＳＴＹＹＡＤＰＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＡＡＶＹＹＣＡＡＧＳＬＹＴＣＶＱＳＩＶＶＶＰＡＲＰＹＹＤＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ．
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号に記載のアミノ酸配列を含み、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、米国特許出願公開第２０１４／０２７１４６２号の表０．１、表０．２、表０．３、および／または図１Ａ～１２Ｉに記載のアミノ酸配列を含み、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のるＨＣＤＲ１および／または配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ２および／または配列番号２２または２３のＨＣＤＲ１のＨＣＤＲ３および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ１および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ２および／または配列番号２４のＬＣＤＲ１のＬＣＤＲ３を含む。
配列番号２２：
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｓｎ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ．
配列番号２３：
Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｓｎ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ．
配列番号２４：
Ａｓｐ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ．
種々の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明のＣＤ８結合物質の任意の天然または合成類似体、変異体、バリアント、アレル、同族体およびオーソログ（本明細書では、ひとまとめにして「類似体」と呼ぶ）の使用を意図する。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質のアミノ酸配列は、アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体、または他の非古典的アミノ酸をさらに含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２～２４のいずれか１つに少なくとも６０％同一である配列を含むターゲティング部分を含む。例えば、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２～２４に少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一である配列を含むターゲティング部分を含み得る（例えば、配列番号１２～２４のいずれか１つに約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性を有する配列を含むターゲティング部分を含み得る）。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２～２４に対して１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、配列番号１２～２４に対して１個、または２個、または３個、または４個、または５個、または６個、または７個、または８個、または９個、または１０個、または１５個、または２０個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むターゲティング部分を含む。 いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、かつ保存的および／または非保存的置換を含み得る。
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性の類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸群に分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸群の同じ群内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸群（１）～（６）の異なる群中に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、β－メチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
種々の実施形態では、アミノ酸変異は、ターゲティング部分のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３領域）中であってよい。別の実施形態では、アミノ酸変化は、ターゲティング部分のフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４領域）中であってよい。
アミノ酸配列の改変は、任意の当該技術分野において周知の技術、例えば、部位特異的変異誘発またはＰＣＲベース変異誘発を用いて実現され得る。このような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に記載されている。
種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８に特異的に結合する本ＣＤ８結合物質の能力を実質的に低下させない。種々の実施形態では、変異は、ＣＤ８を機能的に調節することなしにＣＤ８に特異的に結合する本ＣＤ８結合物質の能力を実質的に低下させない。
種々の実施形態では、ヒトＣＤ８のαおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に対する本発明のＣＤ８結合物質の結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）により説明され得る。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８のαおよび／またはβ鎖の完全長および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体（モノマー、ダイマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび／または会合型を含む）に約１ｕＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満のＫＤで結合するターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的の抗原、すなわち、ＣＤ８に結合するがこれを機能的に調節しないターゲティング部分を含む。例えば、種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質のターゲティング部分は、単に抗原を標的とするが実質的に抗原を機能的に調節せず、例えばそれは、抗原が有する生物学的作用を実質的に阻害、低減、または中和しない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質のターゲティング部分は、その生物活性にとって重要な抗原部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープを結合する。
このような非機能的調節（例えば、中和しない）結合は、活性免疫細胞をエフェクター抗原を介して必要な部位に直接的にまたは間接的に補充するのに本ＣＤ８結合物質が用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く方法において、ＣＤ８を介して腫瘍細胞に細胞傷害性Ｔ細胞を直接的または間接的に補充するために使用されてよい（例えば、ＣＤ８結合物質は、抗ＣＤ８抗原認識ドメインを有するターゲティング部分および腫瘍抗原または受容体に対する認識ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を有するターゲティング部分を含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を動員するがＣＤ８活性を中和しないことが望ましい。これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を縮小させるまたは取り除く作用の重要な部分である。
本ＣＤ８結合物質を含む治療薬
シグナル伝達物質とのキメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、１種または複数のシグナル伝達物質とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、例えば、ＣＤ８に対するターゲティング部分および１種または複数のシグナル伝達物質を含むキメラまたは融合タンパク質を提供する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する親和性または活性が低減されるように改変され、それによりキメラまたは融合タンパク質の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にしおよび／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、その野生型形態で拮抗的であり、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異も有する（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）。
したがって、種々の実施形態では、シグナル伝達物質は１個または複数の改変（例えば、変異）を有する改変型（例えば、変異型）のシグナル伝達物質である。種々の実施形態では、変異は改変シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、同じシグナル伝達物質を野生型形態と改変（例えば、変異体）形態で比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の１つまたは複数などの１つまたは複数の弱められた活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低下または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、同じシグナル伝達物質を野生型形態と改変（例えば、変異体）形態で比較して）、向上した安全性、例えば低減された全身性毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
本明細書に記載のように、この物質は、１個または複数の改変、例えば変異により、向上した安全性を有し得る。種々の実施形態では、向上した安全性は、本キメラタンパク質がより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去されたオフターゲット効果；および／または拡大された治療域をもたらすことを意味する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を低減または除去する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する低減または除去された活性化作用を有する改変シグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、低減された活性化シグナルを標的細胞に送る改変されたシグナル伝達物質をもたらすか、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体に拮抗するか受容体を阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対する低減または除去された拮抗作用を有する改変シグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、低減された阻害シグナルを標的細胞に送る改変されたシグナル伝達物質をもたらすか、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因して拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され（例えば、その特許の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように）、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１個または複数のその受容体に対し、その結合親和性または活性を低減する、または１個または複数のその受容体に対し結合親和性または活性を低減または除去する、１個または複数の変異も有する。
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１つまたは複数のターゲティング部分（例えば、ＣＤ８に対するターゲティング部分）の結合により回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１つまたは複数のターゲティング部分の作用により実質的に回復可能でない。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、それらのシグナル伝達物質が受容体に対する結合親和性または活性を弱めるまたは除去する変異を有するため、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、副作用におけるこの低減が、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて観察される。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は標的細胞に対し活性である。理由は、ターゲティング部分（単数または複数）が実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または親和性）を補償するためである。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用の部位までの途中では実質的に不活性であり、特異的に標的にされる細胞型に対して実質的にその効果を有し、これは望ましくない副作用を大きく低減する。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療的受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１個または複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単数または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単数または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療的受容体に対し結合および／または活性を弱めしたがって、より制御された狙い通りの治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって、副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する、改変シグナル伝達物質を有する。
いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分（例えば、ＣＤ８に対するターゲティング部分または本明細書に記載の任意の他のターゲティング部分）により実質的に回復可能ではない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分により回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療作用の部位から離れた治療キメラタンパク質の低減または排除された隔離があるので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償する高用量の本キメラタンパク質の必要性をなくす。用量を低減するこのような能力は、副作用のより低い可能性をさらにもたらす。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、１個または複数のその受容体に対する、低減された、実質的に低減された、または除去された親和性、例えば結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。種々の実施形態では、免疫調節薬の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の受容体に対する親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。
キメラタンパク質が１つの受容体に対し結合を低減し第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または除去よりも約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質の内在性活性を、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その（それらの）受容体（単一または複数）に対するターゲティング部分（単一または複数）の結合親和性より低い、その受容体に対する低下した親和性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上の、シグナル伝達物質／受容体と、ターゲティング部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば変異シグナル伝達物質が、局在化した狙い通りの効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能とする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍である。
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定し得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）によりまたはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載されるように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えばインターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１種または複数である。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターロイキンまたは改変インターロイキンであり、例えばＩＬ-１；ＩＬ-２；ＩＬ-３；ＩＬ-４；ＩＬ-５；ＩＬ-６；ＩＬ-７；ＩＬ-８；ＩＬ-９；ＩＬ-１０；ＩＬ-１１；ＩＬ-１２；ＩＬ-１３；ＩＬ-１４；ＩＬ-１５；ＩＬ-１６；ＩＬ-１７；ＩＬ-１８；ＩＬ-１９；ＩＬ-２０；ＩＬ-２１；ＩＬ-２２；ＩＬ-２３；ＩＬ-２４；ＩＬ-２５；ＩＬ-２６；ＩＬ-２７；ＩＬ-２８；ＩＬ-２９；ＩＬ-３０；ＩＬ-３１；ＩＬ-３２；ＩＬ-３３；ＩＬ-３５；ＩＬ-３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１－２２５；ａｎｄ Ｏｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４－２０）。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンまたはインターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β、ＬＴ-β、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。
本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。したがって、種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。いくつかの実施形態では、本明細書の他の場所で記載のように、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、かつ保存的および／または非保存的置換を含み得る。
種々の実施形態では、本明細書の他の場所で記載されるように、置換は非古典的アミノ酸も含んでよい。
本明細書に記載のように、改変シグナル伝達物質は、１個または複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。任意のシグナル伝達物質の受容体は、本明細書に記載されるように、当技術分野において既知である。
受容体に対し親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。受容体に対し親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンαである。このような実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ-α物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
変異型のインターフェロンαは、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列を有するアレル型ＩＦＮ-α２ａである：
ＩＦＮ-α２ａ（配列番号２５）：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＫＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ．
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、下記のアミノ酸配列（これはアミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａと異なる）を有するＩＦＮα２ｂである：
ＩＦＮ-α２ｂ（配列番号２６）：
ＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＳＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＲＲＩＳＬＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＧＮＱＦＱＫＡＥＴＩＰＶＬＨＥＭＩＱＱＩＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＴＬＬＤＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＧＶＧＶＴＥＴＰＬＭＫＥＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＫＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＳＬＲＳＫＥ．
いくつかの実施形態では、上記のＩＦＮ-α２変異体（ＩＦＮ-α２ａまたはＩＦＮ-α２ｂ）は、位置１４４～１５４、例えばアミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３で、１個または複数のアミノ酸に変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ-α２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１個または複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５－３３に記載され、これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮ-α２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ-α２変異体は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮ-α２変異体は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮ-α２変異体は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異を含む。このような実施形態では、上記ＩＦＮ-α２変異体は、野生型ＩＦＮ-α２活性に拮抗する。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮ-α２はＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＡＲ２に対する活性は保持される。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能にする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ-α２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質は、ＩＦＮ-α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮ-α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦ-αである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞上の２つの別々の膜受容体：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２は、リンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上に選択的に発現する。受容体活性化に応答して全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なりも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦkＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身毒性であり、これは大抵の場合、ＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた多様な作用に関連し、ＴＮＦＲ１と同様に、ＴＮＦ系治療薬の開発に関連して、ＴＮＦターゲティングおよび活性に対する制御が重要であることに留意されたい。
いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現し、細胞死シグナル伝達に関与しているが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与している。したがって、癌の処置法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の処置のためのニューロン新生における細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを選択できる改変ＴＮＦ-α物質を含む。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらすのみの変異（単一または複数）を有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の処置において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってｉｎ ｖｉｖｏでＴＮＦＲ１介在性の抗腫瘍活性をさらに支援する。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型の細胞生存のより強力な活性化因子であり、それは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の処置に有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔｒｅｇ活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、例えばＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦ）。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えばＮＦkＢ経路活性／シグナル伝達の変化によりそれらのアポトーシス／生存シグナルを変化させる。いくつかの実施形態では、キメラは、細胞死（アポトーシス）／生存シグナル特性の不均衡の根底にある、ＮＦkＢ経路の損傷または変更および、場合により特定の死誘導シグナル（例えば、ＴＮＦＲ２活性化）に対する変更された感受性を有する自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースのキメラは、特に、種々の自己免疫疾患、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む、疾患における追加の治療用途を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦ-αは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＮＦ-α（配列番号２７）
ＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ．
このような実施形態では、改変ＴＮＦ-α物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦ-αをもたらす。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦ-α部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、１つまたは複数のアミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、およびＡ１４５に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ Ｇｌ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従うナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦ-α部分は、Ｒ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５ＧおよびＡ１４５Ｔから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦ-α部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦ-α部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦ-α部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。
いくつかの実施形態では、改変ＴＮＦ-α物質は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦ-α部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１６／００１６６８号に記載のように、受容体選択性をもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦ-Ｒ１選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ｒ３２、Ｓ８６、およびＥ１４６の１つまたは複数にある。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ８６Ｔ、およびＥ１４６Ｋの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ１選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ｒ３２Ｗ、Ｓ３２Ｗ／Ｓ８６Ｔ、Ｒ３２Ｗ／Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｋの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦに対する変異は、ＴＮＦ-Ｒ２選択的である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、位置Ａ１４５、Ｅ１４６、およびＳ１４７の１個または複数にある。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６Ｄ、およびＳ１４７Ｄの１個または複数である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ-Ｒ２選択的であるＴＮＦに対する変異は、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｔ／Ｓ１４７Ｄ、およびＡ１４５Ｔ／Ｅ１４６Ｄ／Ｓ１４７Ｄの１個または複数である。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＮＦ-βである。ＴＮＦ-βは、ＬＴ-β（ＬＴ-α１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦ-βは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＮＦ-β（配列番号２８）
ＬＰＧＶＧＬＴＰＳＡＡＱＴＡＲＱＨＰＫＭＨＬＡＨＳＮＬＫＰＡＡＨＬＩＧＤＰＳＫＱＮＳＬＬＷＲＡＮＴＤＲＡＦＬＱＤＧＦＳＬＳＮＮＳＬＬＶＰＴＳＧＩＹＦＶＹＳＱＶＶＦＳＧＫＡＹＳＰＫＡＴＳＳＰＬＹＬＡＨＥＶＱＬＦＳＳＱＹＰＦＨＶＰＬＬＳＳＱＫＭＶＹＰＧＬＱＥＰＷＬＨＳＭＹＨＧＡＡＦＱＬＴＱＧＤＱＬＳＴＨＴＤＧＩＰＨＬＶＬＳＰＳＴＶＦＦＧＡＦＡＬ．
このような実施形態では、改変ＴＮＦ-β物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６～１１３に変異を含み得、これはＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦ-βをもたらす。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置１０６～１１３に１個または複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、位置１０６～１１３に約１～約３個のアミノ酸の挿入を有する。
いくつかの実施形態では、改変物質はＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β）であり、これは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型であってよい。
いくつかの実施形態では、改変物質はＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質はＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β）であり、これはまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質はＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照されたい）を有する。これらの実施形態では、改変物質はＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β）であり、これはまた、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的にＴＮＦ応答を抑制する方法で使用される。いくつかの実施形態では、拮抗的ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように単鎖トリマー型である。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＴＲＡＩＬ（配列番号２９）
ＭＡＭＭＥＶＱＧＧＰＳＬＧＱＴＣＶＬＩＶＩＦＴＶＬＬＱＳＬＣＶＡＶＴＹＶＹＦＴＮＥＬＫＱＭＱＤＫＹＳＫＳＧＩＡＣＦＬＫＥＤＤＳＹＷＤＰＮＤＥＥＳＭＮＳＰＣＷＱＶＫＷＱＬＲＱＬＶＲＫＭＩＬＲＴＳＥＥＴＩＳＴＶＱＥＫＱＱＮＩＳＰＬＶＲＥＲＧＰＱＲＶＡＡＨＩＴＧＴＲＧＲＳＮＴＬＳＳＰＮＳＫＮＥＫＡＬＧＲＫＩＮＳＷＥＳＳＲＳＧＨＳＦＬＳＮＬＨＬＲＮＧＥＬＶＩＨＥＫＧＦＹＹＩＹＳＱＴＹＦＲＦＱＥＥＩＫＥＮＴＫＮＤＫＱＭＶＱＹＩＹＫＹＴＳＹＰＤＰＩＬＬＭＫＳＡＲＮＳＣＷＳＫＤＡＥＹＧＬＹＳＩＹＱＧＧＩＦＥＬＫＥＮＤＲＩＦＶＳＶＴＮＥＨＬＩＤＭＤＨＥＡＳＦＦＧＡＦＬＶＧ．
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０、Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４およびＨ２７０～Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、Ｇｌ：４５０７５９３、ヒト配列に基づくナンバリング；上記参照）。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はインターロイキンである。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１αまたはＩＬ-１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１Ｒ１および／またはＩＬ-１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１Ｒ１および／またはＩＬ-１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ-１物質は、ＩＬ-１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-１βは、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-１β（成熟型、野生型）（配列番号３０）
ＡＰＶＲＳＬＮＣＴＬＲＤＳＱＱＫＳＬＶＭＳＧＰＹＥＬＫＡＬＨＬＱＧＱＤＭＥＱＱＶＶＦＳＭＳＦＶＱＧＥＥＳＮＤＫＩＰＶＡＬＧＬＫＥＫＮＬＹＬＳＣＶＬＫＤＤＫＰＴＬＱＬＥＳＶＤＰＫＮＹＰＫＫＫＭＥＫＲＦＶＦＮＫＩＥＩＮＮＫＬＥＦＥＳＡＱＦＰＮＷＹＩＳＴＳＱＡＥＮＭＰＶＦＬＧＧＴＫＧＧＱＤＩＴＤＦＴＭＱＦＶＳＳ．
ＩＬ-１は炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それはＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、ＩＦＮγおよびＩＬ-４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ-１はまたＣＤ８＋ Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ-１受容体は、ＩＬ-１Ｒ１およびＩＬ-１Ｒ２を含む。ＩＬ-１Ｒ１への結合およびＩＬ-１Ｒ１を介したシグナル伝達は、それによってＩＬ-１が多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。ＩＬ-１Ｒ２はデコイ受容体として機能し得、それにより、ＩＬ-１Ｒ１を介する相互作用およびシグナル伝達のためのＩＬ-１の利用可能性を減らす。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ-１は、ＩＬ-１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ-１は、ＩＬ-１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、回復可能なＩＬ-１／ＩＬ-１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬ-Ｒ２に対する治療用キメラの損失の防止およびしたがって必要とされるＩＬ-１投与量の低減（例えば、野生型またはＩＬ-Ｒ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がある。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を処置する方法で使用される。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ-１は、ＩＬ-１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ-１は、ＩＬ-１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、ＩＬ-１／ＩＬ-１Ｒ１シグナル伝達は回復可能でなく、ＩＬ-Ｒ２に対する治療用キメラの損失の防止およびしたがって必要とされるＩＬ-１投与量の低減（例えば、野生型またはＩＬ-Ｒ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がある。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を処置する方法で使用される。
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質はアミノ酸５２～５４の欠失を有し、これはＩ型ＩＬ-１Ｒに対して低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ-１βを産生する。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１個または複数の置換変異（ここでＸはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ-１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、Ｇｌ：Ｇｌ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ-１β配列に基づくナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１個または複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ａを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｎを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｒを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ-１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒαおよび／またはＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば改変ＩＬ-２がＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対し作動的である場合、癌の処置に関連し得る。例えば、本構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞（これは抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化に都合がよく、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇ（これは免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）に適さない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ-２ＲαよりもＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する優先性は、肺水腫などのＩＬ-２副作用を回避する。また、ＩＬ-２ベースのキメラは、例えば、改変Ｉ-Ｌ２が、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対して拮抗的（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）である場合、自己免疫疾患の処置に有用である。例えば、本構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞の抑制の減弱化（およびしたがって免疫応答を抑制する）に都合がよく、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇに適さない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔｒｅｇの活性化、およびしたがって免疫抑制に都合がよく、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化に適さない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば自己免疫障害の処置で使用される。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞に向けられた本明細書に記載のターゲティング部分ならびに、ＩＬ-２Ｒβおよび／またはＩＬ-２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ-２Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ-２物質を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、標的とされるＣＤ８＋ Ｔ細胞活性をもたらし、かつＴｒｅｇ細胞に対して通常は不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ-２に比べて高められた免疫刺激効果（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）を有する一方で、ＩＬ-２に関連する全身毒性を除去または低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-２は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-２（成熟型、野生型）（配列番号３１）
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ．
このような実施形態では、改変ヒトＩＬ-２物質は、アミノ酸Ｌ７２（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ-２物質は、野性型ＩＬ-２と比べて、高親和性ＩＬ-２受容体に対して低減された親和性を有し、介在親和性ＩＬ-２受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられている。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ-３受容体は、共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ-３受容体は、共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ-４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ-４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ-４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ-４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ-４を特異的に結合する。２型ＩＬ-４受容体は、ＩＬ-１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ-４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ-４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-４は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-４（成熟型、野生型）（配列番号３２）
ＨＫＣＤＩＴＬＱＥＩＩＫＴＬＮＳＬＴＥＱＫＴＬＣＴＥＬＴＶＴＤＩＦＡＡＳＫＮＴＴＥＫＥＴＦＣＲＡＡＴＶＬＲＱＦＹＳＨＨＥＫＤＴＲＣＬＧＡＴＡＱＱＦＨＲＨＫＱＬＩＲＦＬＫＲＬＤＲＮＬＷＧＬＡＧＬＮＳＣＰＶＫＥＡＮＱＳＴＬＥＮＦＬＥＲＬＫＴＩＭＲＥＫＹＳＫＣＳＳ．
このような実施形態では、改変ＩＬ-４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ-４物質はＩ型受容体により媒介される活性を維持しているが、他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられている。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-６である。ＩＬ-６は、リガンド結合ＩＬ-６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ-６はまた可溶性型のＩＬ-６Ｒ（ｓＩＬ-６Ｒ）にも結合し得、これはＩＬ-６Ｒの細胞外部分である。ｓＩＬ-６Ｒ／ＩＬ-６複合体は神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し得、したがって、再ミエリン化による神経再生において重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ-６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ-６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-６は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-６（成熟型、野生型）（配列番号３３）
ＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＴＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ．
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ-６物質は、ＩＬ-６Ｒαに対する低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１０受容体１およびＩＬ-１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１０受容体１およびＩＬ-１０受容体２に対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１１Ｒαおよび／またはＩＬ-１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１１Ｒαおよび／またはＩＬ-１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１２Ｒβ１および／またはＩＬ-１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１２Ｒβ１および／またはＩＬ-１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-４受容体（ＩＬ-４Ｒα）およびＩＬ-１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-４受容体（ＩＬ-４Ｒα）またはＩＬ-１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-１３は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-１３（成熟型、野生型）（配列番号３４）
ＳＰＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＴＱＲＭＬＳＧＦＣＰＨＫＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲＤＴＫＩＥＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ．
このような実施形態では、改変ＩＬ-１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ-１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１８Ｒαおよび／またはＩＬ-１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ-１８Ｒαおよび／またはＩＬ-１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ-１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ-１８Ｒα２型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-１８は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＩＬ-１８（成熟型、野生型）（配列番号３５）
ＭＡＡＥＰＶＥＤＮＣＩＮＦＶＡＭＫＦＩＤＮＴＬＹＦＩＡＥＤＤＥＮＬＥＳＤＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤＬ．
このような実施形態では、改変ＩＬ-１８物質は、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ１２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６７９、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、Ｇｌ：５４６９６６５０、ヒトＩＬ-１８配列に基づくナンバリング）。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ-３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ-２受容体１およびＩＬ-１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ-２受容体およびＩＬ-１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ-３３は、下記のアミノ酸配列を有する：
ＡＫＥＶＣＰＭＹＦＭＫＬＲＳＧＬＭＩＫＫＥＡＣＹＦＲＲＥＴＴＫＲＰＳＬＫＴＧＲＫＨＫＲＨＬＶＬＡＡＣＱＱＱＳＴＶＥＣＦＡＦＧＩＳＧＶＱＫＹＴＲＡＬＨＤＳＳＩＴＧＩＳＰＩＴＥＹＬＡＳＬＳＴＹＮＤＱＳＩＴＦＡＬＥＤＥＳＹＥＩＹＶＥＤＬＫＫＤＥＫＫＤＫＶＬＬＳＹＹＥＳＱＨＰＳＮＥＳＧＤＧＶＤＧＫＭＬＭＶＴＬＳＰＴＫＤＦＷＬＨＡＮＮＫＥＨＳＶＥＬＨＫＣＥＫＰＬＰＤＱＡＦＦＶＬＨＮＭＨＳＮＣＶＳＦＥＣＫＴＤＰＧＶＦＩＧＶＫＤＮＨＬＡＬＩＫＶＤＳＳＥＮＬＣＴＥＮＩＬＦＫＬＳＥＴ（配列番号３６）．
このような実施形態では、改変ＩＬ-３３物質は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、Ｉ１１３～Ｙ１２２、Ｓ１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７およびＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づくナンバリング）。
一実施形態では、本キメラタンパク質は、本明細書に記載のいずれかの改変された（例えば、変異体）型のシグナル伝達物質と共に、（ｉ）ＣＤ８結合物質および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられたターゲティング部分、を有する。ある実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ８に向けられたターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられたターゲティング部分を有する。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１３５９－６５、に開示のものを含む。このような実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、細胞型特異的に細胞死を誘導するために利用され得る。このような実施形態では、毒素は改変、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載されるように、効果を弱めるために毒素の親和性および／または活性を低減し得る。
シグナル伝達物質との多重特異的キメラおよび融合体
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、本明細書に記載の１種または複数のシグナル伝達物質および／または１種または複数の追加のターゲティング部分とのキメラまたは融合体の一部である。したがって、本発明は、１種または複数のシグナル伝達物質およびＣＤ８に対するターゲティング部分および／または１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、キメラまたは融合タンパク質を提供する。
種々の実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は多重特異的であり、すなわち、ＣＤ８結合物質は、２つ以上の標的、例えば、抗原、または受容体、またはエピトープを認識し結合する認識ドメインを有する２つ以上のターゲティング部分を有する。このような実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、同じ抗原上または異なる抗原上の２個以上のエピトープを認識し結合する認識ドメインを有する２つ以上のターゲティング部分を含み得る。種々の実施形態では、このような多重特異的ＣＤ８結合物質は、向上した結合力および／または改善された選択性などの有利な性質を示す。ある実施形態では、本発明のＣＤ８結合物質は、２つのターゲティング部分を含み、二重特異性であり、すなわち、同じ抗原上または異なる抗原上の２個のエピトープを結合し認識する。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は２つ以上のターゲティング部分を含み、それぞれのターゲティング部分は本明細書に記載の抗体または抗体誘導体である。ある実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを含む少なくとも１種のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを含む１種の抗体または抗体誘導体を含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、異なる抗原または受容体を標的とする２つ以上のターゲティング部分を有し、１つのターゲティング部分は、その抗原または受容体に対し減弱化され得、例えば、ターゲティング部分はその抗原または受容体に低い親和性または結合力で結合する（例えば、他のターゲティング部分がその抗原または受容体に対して有する親和性または結合力より低い親和性または結合力で、を含み、例えば結合親和性の間の差異は、約１０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、または３００倍、または５００倍、または１０００倍、または５０００倍であってよく；例えばより低い親和性または結合力のターゲティング部分はその抗原または受容体を中～高ｎＭまたは低～中μＭの範囲ＫＤで結合し得るが、より高い親和性または結合力のターゲティング部分はその抗原または受容体を中～高ｐＭまたは低～中ｎＭの範囲のＫＤで結合し得る）。例えば、いくつかの実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、雑多な抗原または受容体に向けられた減弱化ターゲティング部分を含み、これは目的の細胞への標的化を改善し（例えば、他のターゲティング部分を介して）かつ、治療用に標的とされないものを含む、複数細胞型にまたがる効果を防止し得る（例えば、これらの実施形態で与えられるものより高い親和性で雑多な抗原または受容体を結合することによる）。
本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、当該技術分野において既知の方法を使用して構築し得る。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，０６７，９９１号、米国特許出願公開第２０１１０２６２３４８号および国際公開第２００４／０４１８６２号を参照されたい。例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、化学架橋により、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４，１５１７－１５２４および欧州特許第２９４７０３号に記載のようにアミノ酸残基を有機誘導体化試薬と反応させることにより、構築し得る。別の例示的実施形態では、２つ以上のターゲティング部分を含む多重特異的ＣＤ８結合物質は、遺伝子融合、すなわち、個別のターゲティング部分のポリペプチドを含む単一ポリペプチドを構築することにより、構築される。例えば、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨおよび腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体をコードする、単一ポリペプチド構築物を形成し得る。二価または多価性のＶＨＨポリペプチド構築物を産生する方法は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第９６／３４１０３号に開示されている。さらなる例示的実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、リンカーを用いて構築し得る。例えば、ＣＤ８に対する抗原認識ドメインを有する第１のＶＨＨのカルボキシ末端を、腫瘍抗原に対する抗原認識ドメインを有する第２の抗体または抗体誘導体のアミノ末端に連結し得る（または逆も同様）。使用し得る代表的リンカーは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質の成分は、リンカーを使用せずに、相互に直接連結される。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８および１個または複数の免疫細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識しそれらに結合する。免疫細胞は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞）、Ｂリンパ球、プラズマ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、目的の抗原に特異的に結合し、１つまたは複数の免疫細胞を効果的に、直接または間接的に動員する。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８および腫瘍細胞上に見出される１個または複数の抗原を認識しそれらに結合する。これらの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、免疫細胞を直接的にまたは間接的に腫瘍細胞にまたは腫瘍微小環境に補充し得る。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、免疫細胞、例えば、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制できる免疫細胞（例えば、ＣＴＬ）を、作用の部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に補充し得る。
いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞のバランスを変えることができ、またはそのように変えることを含む方法で使用できる。例えば、本ＣＤ８結合物質は、臨床的に重要な部位で免疫細胞の比率を、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制できる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、好中球、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変えることができる。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、エフェクターＴ細胞対制御性Ｔ細胞の比率を高めることができる。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、腫瘍細胞関連抗原に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍細胞を直接または間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１個または複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対してである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍およびＣＤ８陽性免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上でそれらのそれぞれの抗原と相互作用する２つのターゲティング部分によって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に直接または間接的に動員する。
腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御増殖および／または細胞生存および／またはアポトーシスの抑制における異常増大を指す。例えば、腫瘍細胞は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切断細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する）、およびメグズ症候群と関連する異常血管増殖の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍細胞、または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖、非分泌性、ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫、および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫）も挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの腫瘍抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＣＤ８ならびに腫瘍細胞上の抗原を認識し、それらに結合する。いくつかの実施形態では、多重特異的ＣＤ８結合物質は、腫瘍細胞または腫瘍微小環境にＣＴＬを直接的にまたは間接的に補充する。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的とするターゲティング部分を有する。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｔ細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｔ細胞を直接または間接的に動員する。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、エフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）；ＣＤ４＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）; ＣＤ８＋ エフェクーＴ細胞(e.g. αβＴＣＲ、ＣＤ３＋, ＣＤ８＋, ＣＣＲ７＋, ＣＤ６２Ｌｈｉ, ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋); ；ＣＤ８＋ エフェクーメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋）；ＣＤ６２Ｌ＋ エフェクーＴ細胞；早期エフェクーメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋ ＣＤ６２Ｌ－）および後期エフェクーメモリーＴ細胞（ＣＤ２７－ ＣＤ６２Ｌ－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋ エフェクーメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（－）ＣＤ２５（－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋およびＣＣＲ５＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ-１２Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋およびＣＣＲ８＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ-４Ｒ＋、ＩＬ-３３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、ＩＬ-１７ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ２３Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、ＩＬ１Ｒ＋）；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ-２、ＩＬ-４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。
目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメイン細胞外ドメインを含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ-２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ-２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ-４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ-６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ-７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ-ＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ-１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ-１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ-１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ-１３Ｒα１、ＩＬ-１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０ Ｌｉｇａｎｄ／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ-２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦｌＯＡ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ-１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｂ細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｂ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に補充する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示Ｂ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ナチュラルキラー細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ナチュラルキラー細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に補充する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、Ｋｉｒ１α、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示ＮＫ細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、マクロファージ／単球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、マクロファージ／単球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に補充する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、シグレック－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－ｇａｎｎｎａＲ２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ－ｌＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ ４、ＩＬ-１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ-１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌ ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ-６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ－１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示マクロファージ／単球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、樹状細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、樹状細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に補充する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ-１２／ＩＬ-２３ｐ４０、４－Ａｍｉｎｏ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ Ｒｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／シグレック－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＥＣ－２０５、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＤＥＣ２０５、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示ＤＣ抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球から選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）を特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、および好酸球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果のために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に補充する。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、巨核球および／または血小板関連標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示的な巨核球および／または血小板抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、赤血球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの例示的な赤血球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、マスト細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらのマスト細胞抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好塩基球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの好塩基球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好中球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの好中球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、好酸球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの好酸球抗原を結合するターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、当業者に既知の任意の適切な抗原または受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（αＶβ３）、Ｅ－セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１個または複数のこれらの抗原を結合するターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲの１個または複数に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、（ｉ）ＣＤ８；（ｉｉ）Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に向けられたターゲティング部分を含み、および／または（ｉｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４，米国特許第８，３５４，５０９号、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示され、これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦ
ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶ
ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹ
ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫ
ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧ
ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦ
ＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳ
ＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ－１に特異的に結合するニボルバム（クローン５Ｃ４）および他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬ ＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳ
ＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶ ＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ
ＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤ ＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴ ＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳ
ＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳ ＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣ ＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶ
ＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴ ＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬ ＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳ
ＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧ ＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨ ＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲ
ＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰ ＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ
ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ ＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷ
ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ ＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮ ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ
ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧ ＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳ
ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ ＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥ ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣ
ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ ＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷ ＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶ
ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ ＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴ ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳ
ＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ ＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱ
ＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ
ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ
ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ
ＲＧＥＣ（配列番号４０）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－Ｉヒトモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５～１８から選択される下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域：
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１５（配列番号４１）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号４２）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号４３）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＣＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号４４）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＷＩＹＲＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＣＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
および／または、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０～２４から選択される下記のアミノ酸配列を含む重鎖を含む：
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号４５）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＳＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ
ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＡＫＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号４６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ
ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＡＫＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２（配列番号４７）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ
ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号４８）：
ＱＩＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＱＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ
ＡＥＥＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＴＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号４９）：
ＱＩＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＤＳＧＥＳＴＹ
ＡＥＥＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＮＴＡＹＬＱＩＴＳＬＮＡＥＤＴＧＭＹＦＣＶＲＶＧＹＤＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２を含む重鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４を含み、これは国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示され、これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、ターゲティング部分は、下記の国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（配列番号５０）を含むターゲティングドメイン：
ＬＦＴＶＴＶＰＫＥＬＹＩＩＥＨＧＳＮＶＴＬＥＣＮＦＤＴＧＳＨＶＮＬＧＡＩＴＡＳＬＱＫＶＥＮＤＴＳＰＨＲＥＲＡＴＬＬＥＥＱ
ＬＰＬＧＫＡＳＦＨＩＰＱＶＱＶＲＤＥＧＱＹＱＣＩＩＩＹＧＶＡＷＤＹＫＹＬＴＬＫＶＫＡＳＹＲＫＩＮＴＨＩＬＫＶＰＥＴＤＥＶ
ＥＬＴＣＱＡＴＧＹＰＬＡＥＶＳＷＰＮＶＳＶＰＡＮＴＳＨＳＲＴＰＥＧＬＹＱＶＴＳＶＬＲＬＫＰＰＰＧＲＮＦＳＣＶＦＷＮＴＨＶ
ＲＥＬＴＬＡＳＩＤＬＱＳＱＭＥＰＲＴＨＰＴＷＬＬＨＩＦＩＰＦＣＩＩＡＦＩＦＩＡＴＶＩＡＬＲＫＱＬＣＱＫＬＹＳＳＫＤＴＴＫ
ＲＰＶＴＴＴＫＲＥＶＮＳＡＩ
および／または下記の国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（配列番号５１）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質を含み得る：
ＭＩＦＬＬＬＭＬＳＬＥＬＱＬＨＱＩＡＡＬＦＴＶＴＶＰＫＥＬＹＩＩＥＨＧＳＮＶＴＬＥＣＮＦＤＴＧＳＨＶＮＬＧＡＩＴＡＳＬＱ
ＫＶＥＮＤＴＳＰＨＲＥＲＡＴＬＬＥＥＱＬＰＬＧＫＡＳＦＨＩＰＱＶＱＶＲＤＥＧＱＹＱＣＩＩＩＹＧＶＡＷＤＹＫＹＬＴＬＫＶＫ
ＡＳＹＲＫＩＮＴＨＩＬＫＶＰＥＴＤＥＶＥＬＴＣＱＡＴＧＹＰＬＡＥＶＳＷＰＮＶＳＶＰＡＮＴＳＨＳＲＴＰＥＧＬＹＱＶＴＳＶＬ
ＲＬＫＰＰＰＧＲＮＦＳＣＶＦＷＮＴＨＶＲＥＬＴＬＡＳＩＤＬＱＳＱＭＥＰＲＴＨＰＴＷＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬ
ＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ
ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳ
ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ
ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のいずれかの他のペプチドを含む。例えば、ターゲティング部分は、ＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得、これは下記の配列番号５２の配列を有する：
ＳＮＴＳＥＳＦＫ（ＳＮＴＳＥＳＦ）ＦＲＶＴＱＬＡＰＫＡＱＩＫＥ－ＮＨ２
Figure 0006991979000001
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ
ＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳ ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＮ ＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹ
ＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬ ＴＶＤＫＳＳＲＴＡＹ ＭＥＩＮＳＬＴＳＥＤ
ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＲ ＩＹＤＧＳＬＤＹＷＧ ＱＧＴＡＬＴＶＳＳ（配列番号５３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳ ＬＣＡＳＱＧＧＫＶＴ ＶＴＣＫＡＳＱＤＩＮ
ＮＹＭＡＷＹＱＨＫＰ ＧＫＧＰＲＬＬＩＨＹ ＴＳＴＬＬＳＧＩＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤ ＹＳＦＳＩＳＮＬＥＰ ＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱ
ＹＤＮＬＷＴＦＧＧＧ ＴＫＬＥＩＫ（配列番号５４）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。 例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥ ＬＡＫＰＧＡＳＶＲＬ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ
ＮＹＷＭＨＷＶＫＱＲ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＨ ＩＮＰＳＳＧＦＴＴＹ
ＮＱＮＦＫＤＫＡＴＬ ＴＡＤＫＳＳＮＴＡＹ ＭＱＬＳＳＬＴＹＥＤ
ＳＡＶＹＦＣＡＲＥＤ ＹＤＶＤＹＷＧＱＧＴ ＴＬＴＶＳＳ（配列番号５５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦ ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ ＶＴＣＫＡＳＱＳＶＤ
ＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＳＰＫＡＬＩＦＳ ＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤ
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＮＳＶＱＳ ＥＤＬＡＥＹＦＣＱＱ
ＹＮＳＹＰＹＴＦＧＳ ＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５６）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ
ＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡ ＰＥＫＧＬＥＷＶＡＹ ＩＳＳＧＳＹＴＩＹＹ
ＴＤＴＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦ ＬＱＭＴＳＬＲＳＥＤ
ＴＡＭＹＹＣＡＲＲＧ ＹＧＳＦＹＥＹＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶ
ＳＳ（配列番号５７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＬ ＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴ ＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳ
ＹＭＹＷＹＱＱＫＰＲ ＳＳＰＫＰＷＩＹＬＴ ＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ ＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥ ＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷ
ＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧ ＴＫＬＥＩＫ（配列番号５８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－１抗体に向けられたＶＨＨを含む。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列番号３４７～３５１を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号５９）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＫＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡ
ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ
ＡＥＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号６０）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＡＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＶ
ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＧＤＫ
ＨＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号６１）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＳＳＩＨＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡ
ＩＴＷＳＧＧＩＴＹＹＡＤＳＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＧＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ
ＡＱＳＳＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号６２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＧＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＬ
ＩＳＷＳＧＧＳＴＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＩＹＹＣＡＡＤＲ
ＶＤＳＮＷＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号６３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＡＦＳＳＧＴＭＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡ
ＳＩＰＷＳＧＧＲＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＱＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＫ
ＥＲＳＴＧＷＤＦＡＳＷＧＱＣＴＱＶＴＶＳＳ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その特許の全内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントの任意の１つを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号２５～２９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号６４）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ
Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号６５）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹ３／ｄ１０ＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳ
Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号６６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号６７）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号６８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＨＥＶＫＱＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＡＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３０～３３から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号６９）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＴＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＥＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号７０）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号７１）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号７２）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＱＲＬＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＦＧＳＮＬＥＳ
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ．
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択される、ＰＤ－１に向けられた１種または複数の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６はＰＤ－Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ－１およびＣＤ８０受容体に対するＰＤ－Ｌ１の結合を阻止する。本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ
ＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮ
ＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧ
ＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ
ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ
ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ
ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥ ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣ
ＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧ ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫ
ＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴ ＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶ ＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮ
ＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮ ＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹ
ＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬ ＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧ ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫ
ＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩ ＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰ
ＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥ ＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴ ＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤ
ＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱ ＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰ
ＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬ ＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲ ＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳ
ＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹ ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
Ｋ（配列番号７３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴ ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳ
ＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫ ＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ
ＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴ ＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥ
ＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱ ＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧ
ＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ
ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ
ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ
ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ ＮＲＧＥＣ（配列番号７４）．
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、下記の国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号７５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または下記の国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号７６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのアベルマブまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ
ＳＹＩＭＭＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ
ＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹ ＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＩＫ
ＬＧＴＶＴＴＶＤＹＷ ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ
ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ
ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ
ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ ＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ
ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ
ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ
ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ
ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ
ＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ
ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ
ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶ ＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩ ＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧ
ＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱ ＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩ
ＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶ ＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧ ＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬ
ＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ ＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ
ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴ ＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱ
ＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩ ＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶ
ＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫ ＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫ ＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳ
ＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫ ＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴ
ＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶ ＡＰＴＥＣＳ（配列番号８０）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＴＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ
ＶＳＳ（配列番号８１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＧＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＴＡＹＮＧＮＴＮＹ
ＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＦＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号８３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＶＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８４）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＬＨＡＤＴＧＩＴＫＦ
ＳＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＩＱＬＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８６）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＨ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＧＩＡＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＤＤＹＶＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＮＳＧＮＩＧＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＶＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９０）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＲＡＨＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ
ＶＳＳ（配列番号９１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９２）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＤＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ
ＶＳＳ（配列番号９３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９４）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＳＡＮＹ
ＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＡＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＳＳＧＷＳＲＹＹＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ
Ｓ（配列番号９５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＥＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＬＦＧＩＡＨＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＮＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＳＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴ
ＶＳＳ（配列番号９７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号９８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＤＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＲＧＲＩＥＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＦＲＹＦＤＷＦＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ（配列番号９９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号１００）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ ＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬ ＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴ
ＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦ ＰＧＮＫＬＥＹＶＧＹ ＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴ ＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬ ＱＬＮＳＶＴＳＥＤＴ
ＡＴＹＹＣＡＲＹＧＧ ＷＬＳＰＦＤＹＷＧＱ ＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０１）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＬ ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ ＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧ
ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷ ＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ ＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱ
ＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡ ＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０２）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧ ＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩ ＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ
ＴＹＳＩＮＷＩＲＱＰ ＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶ ＭＷＡＧＧＧＴＮＳＮ
ＳＶＬＫＳＲＬＩＩＳ ＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬ ＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴ
ＡＲＹＹＣＡＲＹＹＧ ＮＳＰＹＹＡＩＤＹＷ ＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
（配列番号１０３）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＴＴＱＳＨＫＬ ＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳ ＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧ
ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷ ＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ
ＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳ ＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱ
ＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡ ＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０４）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ ＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬ ＴＣＳＶＴＧＹＳＩＩ
ＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦ ＰＧＮＫＬＥＹＬＧＹ ＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴ ＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬ ＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴ
ＡＴＹＹＣＡＲＲＧＧ ＷＬＬＰＦＤＹＷＧＱ ＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１０５）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳ ＬＡＶＳＶＧＥＫＶＳ ＭＧＣＫＳＳＱＳＬＬ
ＹＳＳＮＱＫＮＳＬＡ ＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰ ＫＬＬＩＤＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧ ＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴ ＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡ
ＶＹＹＣＱＱＹＹＧＹ ＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬ ＥＬＫ（配列番号１０６）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳ ＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ
ＳＹＤＩＮＷＶＫＱＲ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷ ＩＦＰＲＤＮＮＴＫＹ
ＮＥＮＦＫＧＫＡＴＬ ＴＶＤＴＳＳＴＴＡＹ ＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤ
ＳＡＶＹＦＣＴＫＥＮ ＷＶＧＤＦＤＹＷＧＱ ＧＴＴＬＴＬＳＳ（配列番号１０７）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＩ ＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴ ＭＴＣＳＡＳＳＳＩＲ
ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧ ＴＳＰＫＲＷＩＳＤＴ ＳＫＬＴＳＧＶＰＡＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ ＡＬＴＩＳＳＭＥＡＥ ＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲ
ＳＳＹＰＷＴＦＧＧＧ ＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０８）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＤ ＬＶＴＰＧＡＳＶＲＩ ＳＣＱＡＳＧＹＴＦＰ
ＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳ ＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤ ＩＤＰＮＹＧＧＴＴＹ
ＮＱＫＦＫＧＫＡＩＬ ＴＶＤＲＳＳＳＴＡＹ ＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤ
ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＡ ＬＴＤＷＧＱＧＴＳＬ ＴＶＳＳ（配列番号１０９）；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＩ ＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴ ＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳ
ＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧ ＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴ ＦＮＬＡＳＧＶＰＡＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹ ＳＬＴＩＳＲＶＥＴＥ ＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷ
ＳＮＮＰＬＴＦＧＡＧ ＴＫＬＥＬＫ（配列番号１１０）．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３４～３８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号１１１）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ
ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号１１２）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ
ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号１１３）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ
ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号１１４）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ
ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号１１５）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹ
ＮＥＭＦＫＧＲＡＴＩＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号３９～４２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号１１６）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＥＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号１１７）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号１１８）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号１１９）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳ
ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号１２０）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＧＤＹＩＹＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＶＴＳＭＶＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７（配列番号１２１）：
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＡＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＱＫＹＶＦＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＲＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＲＬＴＶＬ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号１２２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＧＥＱＹＹ
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＷＮＹＧＹＹＤＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７（配列番号１２３）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＴＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＩＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号１２４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号１２５）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＥＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号１２６）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＲＧＳＧＧＳＴＹＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＬＨＹＤＳＳＧＹＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号１２７）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＩＳＲＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号１２８）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＧＥＫＹＹ
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＱＬＹＳＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７（配列番号１２９）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＳＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＧＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＳＨＳＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号１３０）：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＳＧＳＧＧＦＴＦＳ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＳＡＶＹＳＣＡＫＶＬＶＧＦＮＮＧＣＷＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号１３１）：
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＮＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号１３２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＧＤＹＩＹＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＶＴＳＭＶＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号１３３）：
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＱＫＹＶＦＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＲＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号１３４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹ
ＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
Ｓ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号１３５）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されているいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号１３６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号１３７）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号１３８）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号１３９）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号１４０）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号１４１）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号１４２）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号１４３）：
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号１４４）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＳＧＳＴＫＹ
ＮＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＲＫＧＬＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１６／０６１１４２号の下記の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号１４５）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＩＰＡ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号１４６）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号１４７）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号１４８）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号１４９）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＩＰＰ
ＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＩＥＳＥＤＡＡＹＹＦＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号１５０）：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号１５１）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号１５２）：
ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号１５３）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されているいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号１５４）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ
ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＤＣＡＲＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＥ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号１５５）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＰ
ＤＳＶＫＧＲＦＩＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＫＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＩＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号１５６）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＶＴＴＤＹＮ
ＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号１５７）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＶＴＤＹＮ
ＡＡＦＩＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号１５８）：
ＥＶＫＬＦＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＤＦＳＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＮＰＤＳＴＴＩＮＹ
ＡＰＳＬＫＤＲＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＰＧＤＹＧＹＤＦＤＣＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号１５９）：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＩＴＳＧＹＷＮＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＹＹＮ
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＳＬＬＷＦＳＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号１６０）：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＩＴＤＹＮ
ＡＡＦＫＳＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＡＮＤＴＡＩＹＦＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号１６１）：
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＳＹＧＭＳＷＡＲＱＩＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬ
ＧＳＶＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＤＡＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＳＶＳＥ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号１６２）：
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＩＴＳＧＹＷＴＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＭＧＹＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮ
ＰＳＬＫＳＲＩＳＩＳＲＤＴＳＫＳＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＱＲＤＷＬＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号１６３）：
ＥＥＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＩＹＹＰ
ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＩＬＹＬＱＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＤＡＧＦＡＦＷＧＱＧＴＬＶＴＡＳＡ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号１６４）：
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＴＹＧＶＨＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＶＴＴＤＹＮ
ＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＮＱＶＶＬＴＭＮＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号１６５）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＲＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰ
ＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＤＣＡＲＧＹＤＳＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１６／０２２６３０号の下記の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号１６６）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号１６７）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＰＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号１６８）：
ＳＩＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＡＮＲＹＴＧＶＰＤ
ＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＩＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号１６９）：
ＳＩＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＧＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＲＹＳＧＶＰＤ
ＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号１７０）：
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＹＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＩＩＶＨＳＮＡＮＴＹＬＥＷＦＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ
ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号１７１）：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＬＴＣＳＡＳＳＳＶＳＳＳＹＬＹＷＮＱＱＫＰＧＳＳＰＫＶＷＩＹＮＴＳＮＬＡＳＧＶＰ
ＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＳＹＦＣＨＱＷＲＳＹＰＰＴＬＧＡＧＴＫＬＥＬＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号１７２）：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＮＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲ
ＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＧＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号１７３）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＮＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号１７４）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＳＬＡＶＳＬＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＮＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＳＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号１７５）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＹＳＹＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＴＡＴＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号１７６）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＡＮＲＹＴＧＶＰＤ
ＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＤＹＴＳＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号１７７）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＰＧＱＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＳＶＳＴＳＳＳＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＫＹＡＳＮＬＥＳ
ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＰＶＥＡＮＤＴＡＮＹＹＣＱＨＳＷＥＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されているいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列番号３８、５０、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号１７８）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ
ＤＥＫＦＫＮＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号１７９）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ
ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号１８０）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ
ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号１８１）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＧＴＧＧＳＮＦ
ＤＥＫＦＫＮＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＷＴＴＧＴＧＡＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；
および／または、国際公開第２０１５／１１２９００号の下記の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号１８２）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５６（配列番号１８３）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＩＰＰＲＦＳＧＳＧＹＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＩＥＳＥＤＡＡＹＹＦＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号１８４）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号１８５）：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号１８６）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号１８７）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号１８８）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号１８９）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ；
国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号１９０）：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＧＮＱＫＮＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されているいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗ＰＤ－Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、下記のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号１９１）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ；
および／または下記のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む：
国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号１９２）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されているように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－４１２２、ＣＮＣＭ Ｉ－４０８０およびＣＮＣＭ Ｉ－４０８１で入手可能なハイブリドーマから得られるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ１抗体に向けられたＶＨＨを含む。例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列番号３９４～３９９を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号１９３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＷＡＳＳ
ＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＳＣＡＡＳＱ
ＡＰＩＴＩＡＴＭＭＫＰＦＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号１９４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＫＣＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＷＶＳＣ
ＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＡＲＨ
ＧＧＰＬＴＶＥＹＦＦＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号１９５）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＡＲＥＧＶＳＣ
ＩＳＧＧＤＮＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＧ
ＷＫＹＣＳＧＹＤＰＥＹＩＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号１９６）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＱＹＤＶＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡ
ＦＳＳＳＧＧＲＴＩＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＫＩＤＷ
ＹＬＮＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号１９７）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＶＤＡＳＮＳＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＷＶＡＲ
ＩＴＧＧＧＬＩＡＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＶＹＬＱＭＮＳＬＥＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＴＩＮＳ
ＲＤＧＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号１９８）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＴＩＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＤＳＩＶＳＷＹＲＲＡＲＧＫＱＲＥＷＶＡＧ
ＩＳＮＧＧＴＴＫＹＡＥＳＶＬＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＮＶＹＬＱＭＮＧＬＮＰＥＤＴＡＶＹＬＣＫＶＲＱＹ
ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ．
種々の実施形態では、本多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２に向けられた１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する１つまたは複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、その全開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ２抗体に向けられたＶＨＨを含む。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の下記の配列番号４４９～４５５を含む：
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号１９９）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＳＴＶＬＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＳ
ＩＳＳＧＧＳＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＡＤＶＹ
ＰＱＤＹＧＬＧＹＶＥＧＫＶＹＹＧＨＤＹＷＧＴＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号２００）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＮＹＶＳＮＹＡＭＧＷＧＲＱＡＰＧＴＱ
ＲＥＬＶＡＳＩＳＮＧＤＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹ
ＣＦＥＨＱＶＡＧＬＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号２０１）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＸＡＬＫＩＸＶＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶ
ＡＡＩＴＳＧＧＲＴＮＹＳＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＡＸＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＥＤＴＡＶＹＹＣＲＥ
ＷＮＳＧＹＰＰＶＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号２０２）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＧＴＭＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＦＶ
ＡＳＩＰＷＳＧＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＱＮＴＶＦＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＦ
ＫＥＲＳＴＧＷＤＦＡＳＷＧＱＧＩＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号２０３）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＧＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳ
ＦＩＳＧＳＤＧＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＫＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤ
ＰＷＧＰＰＳＩＡＴＭＴＳＹＥＹＫＨＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号２０４）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＴＭＩＷＬＲＲＡＰＧＫＧＦＥＷＶ
ＳＴＩＤＫＤＧＮＴＮＹＶＤＳＶＫＧＲＦＡＶＳＲＤＮＴＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＴＫ
ＨＧＳＳＡＲＧＱＧＴＲＶＴＶＳＳ；
米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号２０５）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＥＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥ
ＷＶＳＴＩＮＳＧＧＧＩＴＹＲＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹ
ＣＥＮＧＧＳＳＹＲＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ．
ある実施形態では、ターゲティング部分は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号４３～４７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号２０６）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号２０７）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号２０８）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号２０９）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号２１０）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹ
ＮＱＫＦＫＤＲＴＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；
および／または、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の下記の配列番号４８～５１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む：
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号２１１）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＴＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号２１２）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号２１３）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ；
米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号２１４）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲ
ＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ．
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のいずれかの配列に少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一である（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列の任意の組み合わせを含み得る。
ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するまたは標的とする追加の抗体、抗体誘導体またはフォーマット、ポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６０６１１４２号、国際公開第２０１６ ０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００で開示され、これらの全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、例えばＤＣ上の、ＸＣＲ１に特異的に結合する抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、本発明の多重特異的ＣＤ８結合物質は、ＸＣＬ１の全体または一部を含む抗原認識ドメインを有するターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、多重特異的ＣＤ８結合物質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、完全な細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞のマーカーであり、これらは限定されないが、ＤＮＡまたはＲＮＡを含む核酸、例えば、壊死腫瘍細胞またはコレステロールなどの細胞外沈着物から放出されたＤＮＡなどを含む。
いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれに関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結フレームワークおよび支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の集積を含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に異なる成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えばタンパク質または非タンパク質、例えば多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１個または複数の共有結合されるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉しＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明のキメラタンパク質により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭ繊維の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維としては、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維が挙げられる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、それらが必要に応じ伸縮し、その後元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１個または複数のＥＣＭタンパク質を認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種のメンバー、テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシン－Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中で順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変異と関連付けられる。アイソフォームバリアントもまた、特にテネイシン－Ｃについて存在する。２７種を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒもまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン－Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン－Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンタンパク質上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能にする糖タンパク質である。インテグリンに結合すると、フィブロネクチンは折り畳みを開いて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン上の１個または複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害と関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、キメラタンパク質を癌細胞を含む疾患細胞に向けるのに使用され得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このようなターゲティング部分は、キメラタンパク質を腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞に向けるのに使用され得る。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中にしばしば見出される、もう１つのタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリンを重合させる、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成される。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは基底膜の主要成分であり、これは細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、基底膜中でラミニンとコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的（例えば、ＥＣＭタンパク質）の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然のまたは合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙に脱落する。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、アテローム斑と関連する１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維－脂質（線維－脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ－ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ－ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を含む（ｌｉｐｉｄ－ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、組織コレステロールおよびコレステロールエステル内容物、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに細胞残屑が増大した、脂質を含む細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出される）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の、内膜下にも局在化し、壁の肥厚化および拡張、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化する狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を含む細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種または複数の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、細胞残屑は、核酸、死細胞から放出される、例えばＤＮＡまたはＲＮＡである。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、アミロイド斑の主要な成分であるペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。
リンカーおよび官能基
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、１つまたは複数の官能基、残基、または部分を含み得る。種々の実施形態では、１つまたは複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質またはターゲティング部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、１つまたは複数の望ましい特性または官能基を本発明のＣＤ８結合物質に付与する。このような官能基およびそれらをＣＤ８結合物質に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、別の物質と複合化および／または融合されて、半減期を延長するか、またはさもなければ薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどの１種または複数と融合または複合化され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体フラグメントと融合または複合化され得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃドメインのＮ－末端またはＣ末端のいずれかに融合され得る。種々の実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれるＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載の１種または複数の物質に融合される。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）、を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を増大し、および／またはＣＤ８結合タンパク質の免疫原性を低減する。一般に、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの、任意の好適な形態のペグ化が用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１－５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３－４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介する、部位特異的ペグ化が使用される（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１－７７０（２００３）を参照されたい）。例えば、このために、ＰＥＧは本発明のＣＤ８結合物質中の天然のシステイン残基に結合され得る。いくつかの実施形態では、当該技術分野において既知の技術を使用して、本発明のＣＤ８結合物質が、ＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾されるか、またはＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、ＣＤ８結合物質のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１個または複数の検出可能なラベルまたは他のシグナル生成基または部分を含まれる。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識された本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（それ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよび他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイを含む）ならびにインビボ診断および画像処理の目的で使用され得る。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ＣＤ８結合物質に結合または遺伝的に融合されたタグを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、単一タグまたは複数タグを含み得る。タグは例えば、ＣＤ８または腫瘍抗原などの任意の他の目的の抗原に対するＣＤ８結合物質の結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３～５個のアミノ酸長、５～８個のアミノ酸長、８～１２個のアミノ酸長、１２～１５個のアミノ酸長、または１５～２０個のアミノ酸長である。代表的タグは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＨｉｓタグを含む。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、１種の金属または金属カチオンをキレートするための、キレート基を含む。例えば、好適なキレート基としては、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の部分である官能基を含む。このような官能基を使って本発明のＣＤ８結合物質を、結合対のもう一方の半分に結合される別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の形成を介して、連結し得る。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をビオチンに複合化し、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化された別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、このような結合ＣＤ８結合物質を、例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化される診断システムにおいて、レポーターとして用い得る。このような結合対を、例えば、医薬品目的に好適する担体を含む、担体へＣＤ８結合物質を結合するためにも使用し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。このような結合対を使用して、本発明のＣＤ８結合物質に治療的に活性な薬剤を連結してもよい。
いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は必要に応じ、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、シグナル伝達物質内にリンカーを含む（例えば、単鎖ＴＮＦの場合には、それは２つのリンカーを含みトリマーをもたらし得る）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質は、それぞれの結合領域および／またはターゲティング部分を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＣＤ８結合物質に、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分を連結するのに利用され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一のアミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。
本発明は、種々のリンカー配列の使用を意図する。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されている経験的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびその全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９ ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計され得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本ＣＤ８結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛体である。
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長超である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長超であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛体である。
種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンおよびセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、式中、ｎは約１～約８、例えば１、２、３、４、５、６、７、または８である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１５）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記の配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２１６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号２１７）、（Ｇｌｙ）８（配列番号２１８）、（Ｇｌｙ）６（配列番号２１９）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号２２０）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号２２１）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号２２２）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号２２３）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２２４）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２２５）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２６）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２２７）、および（ＸＰ）ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーはＧＧＳである。
いくつかの実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中で配列および長さの両方において変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス間で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の最初の位置を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２はＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、かつ追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性のポリプロリン二重らせんを含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、その特有の伸びたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により他のサブクラスと異なっており、６２個のアミノ酸を含み（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせんを形成する。ＩｇＧ３では、ＦａｂフラグメントはＦｃフラグメントから比較的遠くに離れており、分子により大きな可撓性を与える。ＩｇＧ３中の伸びたヒンジもまた、他のサブクラスに比べて、そのより高い分子量の原因である。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、報告によると次の順に低下する：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。
結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コアヒンジ部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、ＣＨ１のカルボキシル末端～運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部は、ＣＨ２ドメインのアミノ末端に繋がりＣＨ２中の残基を含む（同上文献）。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓを含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能し、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、本リンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１個、または２個、または３個の上部ヒンジ部、コアヒンジ部、および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは分泌性免疫グロブリンにとって有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。
必要に応じ、本ＣＤ８結合物質は抗体Ｆｃ領域に連結されてよく、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの片方または両方、および場合によりヒンジ部を含む。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃ領域に連結された本ＣＤ８結合物質をコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを調製できる。
いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。
種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳みおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本ＣＤ８結合物質の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、ＣＤ８結合物質を特定の細胞型または部位に向けるように機能し得る。
ＣＤ８結合物質の改変と産生
種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ＶＨＨであるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の調製法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの、哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたは他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製すること、それに続くこうして得られた核酸の発現により；および／または（８）前述の１つまたは複数の任意の組み合わせにより。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、ヒトＣＤ８に向けられた天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種をＣＤ８分子で適切に免疫する（すなわち、ＣＤ８に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＣＤ８に対する重鎖抗体を産生させるように）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に対する天然のＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種または複数のスクリーニング技術を使って、ＣＤ８または少なくとも１つのその部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９３７６８１号、国際公開第０１９０１９０号、国際公開第０３０２５０２０号、および国際公開第０３０３５６９４号に記載され、これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、その全内容はが参照により本明細書に組み込まれる国際公開第００４３５０７号に記載の、ランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られるＶＨＨライブラリーなどの、未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーが使用され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を得る別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫する（すなわち、ＣＤ８に対する免疫応答を生じさせる、および／またはＣＤ８に対する重鎖抗体を産生させるように）こと、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ること、および次に任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＣＤ８に対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２０８５９４５号および国際公開第０４０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、「ヒト化」された、すなわち、天然のＶＨＨ配列中の（および特に、フレームワーク配列中の）アミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ヒト由来の従来の４鎖抗体からのＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法により、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列の間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られるヒト化ＶＨＨが有利な機能特性をなお保持するように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨはより「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
ある実施形態では、ＣＤ８結合物質は、「ラクダ化」された、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１個または複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換することによる、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ－ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置で、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第９４０４６７８号を参照）で挿入される。いくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するまたは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）～（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１個または複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施できる。この核酸はその後、本発明の目的のＶＨＨをもたらすように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、本発明の所望のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのアミノ酸配列を、それぞれ設計し、その後当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて、新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、所望のヒト化またはラクダ化ＶＨＨをコードするヌクレオチド配列を、それぞれ設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨをもたらすように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るための他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１個または複数の天然のＶＨ配列（１個または複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、１個または複数の天然のＶＨＨ配列（１個または複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、および／または１個または複数の合成または半合成の配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸をもたらすように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。
本発明のＣＤ８結合物質を産生するための方法は、本明細書に記載されている。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をコードするＤＮＡ配列は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列を、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結して、目的のＣＤ８結合物質をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸を提供する。
本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を、発現ベクター中に組み込む（連結する）ことができ、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞を、宿主細胞が本発明のＣＤ８結合物質をコードする遺伝子を発現するのを可能にする条件下で増殖できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
特定の発現および精製条件は、用いる発現系に応じて変化するであろう。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中にクローン化される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。
本発明のＣＤ８結合物質は、タンパク質の発現を可能にする条件下で、ＣＤ８結合物質をコードする発現ベクターを形質導入した宿主細胞を増殖することにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、当該技術分野において周知の技術、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）などの親和性タグを用いてまたはクロマトグラフィーにより精製できる。ある実施形態では、ＣＤ８結合物質はＨｉｓタグ（これは、必要に応じ、操作されたタンパク質切断部位により切断可能である）を含む。
したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のＣＤ８結合物質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、充分に塩基性の官能基を有してよく、これは無機もしくは有機酸またはカルボキシル基と反応でき、これは無機塩基または有機塩基と反応でき、薬学的に許容可能な塩を形成する。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩は、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７）およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含み、これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
薬学的に許容可能な塩としては、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボキシレート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基は、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のＣＤ８結合物質および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。本明細書で記載の任意の医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与されてよい。このような組成物は必要に応じ、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでよい。
種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの、液体であってよい。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。さらに、助材、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用できる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液もまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載され、この文献は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適する他の任意の形態をとることができる。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態で処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態で処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。
必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含んでよい。また、薬剤は、当技術分野において既知の適切なビークルまたはデリバリー装置を使って送達できる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたはデリバリー装置で同時に送達できる。
本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製し得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種または複数の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬を液体担体、微粉化固相担体、または両方と均一に完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンドなど、続いて当該技術分野で既知の従来の方法を用いる錠剤化）により調製される。
種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。
投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的でも全身的でもよい。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任されてよく、一部には病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は、血流中への本明細書で記載のいずれかの薬剤の放出を生ずる。
一実施形態では、本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に美味な製剤を提供するために、１種または複数種の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料；ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料；着色料；および保存剤を含んでよい。さらに、タブレットまたは丸薬形態では、組成物をコートして消化管での崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたる持続作用をもたらすことができる。本明細書に記載のいずれかのＣＤ８結合物質を運ぶ浸透圧的に活性な物質を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤して、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、実質的に０次の送達プロファイルを提供できる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も有用である。経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガントなど、およびこれらの混合物、などの沈殿防止剤を含んでよい。
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてもよく、それは使用直前に、無菌の注射可能媒体中に溶解または懸濁できる。それらは、例えば、当該技術分野において既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適する製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；アセテート、シトレートまたはホスフェートなどの緩衝剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。
静脈内投与の場合、好適なキャリアとしては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。
本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）にされてよい。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの、加圧された許容され得る噴射剤に配合できる。
本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出または徐放手段によりまたは送達装置により投与可能である。例としては、これらに限定されないが、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられ、これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて１つまたは複数の有効成分の制御放出または徐放提供して様々な割合で所望の放出プロファイルを提供するのに有用であり得る。本明細書に記載されたものを含む、当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分との使用のために容易に選択できる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。
有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激されてよい。
別の実施形態では、徐放系は、処置される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、による概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。
医薬製剤は無菌であるのが好ましい。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、フィルター滅菌は凍結乾燥および再構成の前またはその後に行われてよい。
投与および投与量
本発明により投与されるＣＤ８結合物質の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わるであろうということは理解されよう。当業者なら、ＣＤ８結合物質の作用を変え得る多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮できる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１つまたは複数の別々の用量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合物質の好適な投与量は、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、対象の体重の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。
ＣＤ８結合物質の個々の用量は、例えば、単位剤形当たり約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇの有効成分、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または単位剤形当たり約５ｍｇ～約８０ｍｇを含む単位剤形で投与できる。例えば、単位剤形は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であってよい。
一実施形態では、ＣＤ８結合物質は、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、ＣＤ８結合物質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。
本発明の特定の実施形態に従って、ＣＤ８結合物質を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、６ヶ月毎に約１回、または毎年約１回投与されてよい。
併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬（単一または複数）と併せて共投与される。共投与は、同時または順次であってよい。
一実施形態では、追加の治療薬および本発明のＣＤ８結合物質は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語「同時に」は、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質が約６０分以下、例えば、約３０分以下、約２０分以下、約１０分以下、約５分以下、または約１分以下の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質を含む製剤）のまたは別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびＣＤ８結合物質を含む第２の製剤）の同時投与によってでよい。
共投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の薬理学的活性がやがて重なりあい、それにより組み合わせ治療効果が発揮されるならば、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬および結合物質は、順次に投与されてよい。本明細書で使用される場合、用語「順次に」は、追加の治療薬およびＣＤ８結合物質が約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とＣＤ８結合物質との逐次投与の間の時間間隔は約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて離れて、約２週間を超えて離れて、または約１ヶ月を越えて離れていてよい。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびＣＤ８結合物質の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはＣＤ８結合物質のいずれかが、最初に投与されてよい。
共投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与されてよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合物質は、別の治療薬と共投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、ＣＤ８結合物質および追加の治療薬は、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本ＣＤ８結合物質と化学療法剤とのこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の処置で使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；エチレンイミン、メチラメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよびトリメチロールメラミン；アセトゲニン（例えば、ブラタシンおよびブラタチノン）；カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）；ブリオスタチン；ｃａｌｌｙスタチン；ＣＣ－１０６５ （アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照））；ダイネマイシンＡを含む、ダイネマイシン；ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート；エスペラマイシン；ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドフォスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；ガリウムニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ-２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイディン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（アラ－Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、およびタキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ジェムザール（ゲムシタビン）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（キャンプトサー、ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ））および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａならびに上述のいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、処置の方法は、放射線の使用をさらに含んでよい。さらに、処置の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含んでよい。
限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、治療薬は抗菌剤であり、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。
限定されないが、自己免疫疾患適用を含む、いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は、当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例は、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルβ－メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β－メタゾンベンゾエート、β－メタゾンジプロピオネート、β－メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびそのエステルの残り、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートを含むが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）は、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンを含む。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１個または複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１個または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、ニボルバム（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つまたは複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つまたは複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の処置のために、ウレルマブと組み合わされる（必要に応じ、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブの１種または複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本ＣＤ８結合物質は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌の１種または複数の処置のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種または複数のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ８結合物質は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないような組成物への任意のタイプの分子の共有結合により、修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のいずれかを、限定されないが、特異的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、既知の技術により行うことができる。
さらに他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合物質は、例示的実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む、細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。
本明細書で記載のＣＤ８結合物質をこのように翻訳後修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。
細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；および有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。他の細胞傷害薬としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。
さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ-１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ-１２またはＩＬ-２）、ＩＬ-１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合化されて、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４１９（１９８０））。
他の細胞傷害薬は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載されている細胞傷害性リボヌクレアーゼを含む。本発明の実施形態はまた放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がＣＤ８結合物質に安定に結合される。このような放射性核種は、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８などのベータエミッター、およびアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５などのアルファエミッターを含む。
検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、これらに限定されない。
処置の方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害を処置する用途がある。
さらに、本物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の処置で、またはそれらの処置用の薬物の製造で使用され得る。
いくつかの実施形態では、癌の処置または癌の患者の処置に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る何らかの制御されない細胞増殖を指し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。それらの元の位置から移動し重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす可能性がある。転移は、原発腫瘍部位と異なり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の転移から生ずる、癌細胞または一群の癌細胞である。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。
処置され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切断細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、および メグズ症候群と関連する異常血管増殖が挙げられるが、これらに限定されない。
処置し得る癌の例としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫、および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の、またはそれらの感染症を罹患している患者の処置に関する。感染症の例としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
種々の実施形態では、本組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患；結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの、１種または複数の炎症性疾患または状態を処置するまたは予防するのに使用される。
種々の実施形態では、本組成物は、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、および他の自己免疫疾患などの、１種または複数の自己免疫疾患または状態を処置するまたは予防するのに使用される。
キット
本発明はまた、本明細書に記載のいずれかのＣＤ８結合物質の投与のためのキット（例えば、追加の治療薬を含む、または含まず）を提供する。キットは、本明細書に記載の本発明の医薬組成物の少なくとも１種を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物の少なくとも１種を含む。
キット中で設定される成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象用を処置する目的のために構成される。
使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は通常、癌を処置するなどの望まれる治療結果を達成するためにキットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する、明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。
キット中にまとめられる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管されて開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料中に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、好ましくは無菌の、混入物のない環境を与える、よく知られた方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。
定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種）または１つ（１種）を超える、を意味し得る。
さらに、参照数値表示に関連して使われる用語「約」は、その参照数値表示±参照数値表示の最大１０％を意味する。例えば、用語「約５０」は、４５～５５の範囲を含む。
「有効量」という用語は、医学的使用に関連して使用される場合、目的の疾患の測定できる処置、予防、または発病速度の低下を与えるのに効果的である量である。
本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大で少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「低減され」る。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は低減され、かついくつかの下流の出力値が低下するであろうが、他のものは増加し得る。
逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大で少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「増加され」る。
本明細書において参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であると意図され、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であると意図され、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まないこの技術の他の実施形態を排除するものではない。
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としての、オープンエンドの用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替の用語を使って、代替的に記載されてよい。
本明細書で使用される場合、用語「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、かつ本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定の目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を処置するために、望ましい生理学的効果を生み出すのに十分な量または望ましい結果を達成できる量を指す。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患の１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくす、および障害または疾患の症状を逆転させるのに十分な量を含み得る。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めることまたは遅らせることも含む。
有効量、毒性、および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の約５０％に致死である用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％で治療的に有効な用量）を測定するための、細胞培養または実験動物での標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果の間の用量比率は治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は最初に、例えば、細胞培養アッセイを含む、インビトロアッセイから推測できる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定されるＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するように動物モデルで処方できる。血漿中の記載の組成物のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定できる。任意の特定の投与量の効果を、適切なバイオアッセイによりモニターできる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察される処置の効果に適合するように調節されてよい。
特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めることまたは遅らせることも含む。
本明細書で使用される場合、「処置方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の処置のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の処置のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。
実施例
用語「ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」は、インターフェロンベースのキメラに言及するために本明細書で使われることがある。
下記の実施例では、特に断りのない限り、ＩＦＮ対する変異は、ヒトＩＦＮ-α２（配列番号２５）に対してである。
Ｑ１２４Ｒ変異は、マウスモデル中でインビボアッセイできる、減弱化ヒトＩＦＮアルファ２変異体の代表である。特に、Ｑ１２４Ｒは、マウスでの使用に好適なヒトＩＦＮ変異である（すなわち、それはマウスで機能するヒト変異体ＩＦＮである）。Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．２０１４；５：３０１６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ４０１６を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ｒ変異は、非機能性である（およびコントロールとして使用される）ヒトＩＦＮアルファ２変異体の代表である。
抗Ｂｃｌ１０ ＶＨＨは、コントロール（無関係の抗原を標的とする、すなわち「非標的化」）としてこれらの実施例で使用される。
実施例１．マウスＣＤ８に特異的なＶＨＨの構築と評価
抗原特異的ＶＨＨの単離
ＶＨＨライブラリーを、安定に遺伝子導入されたマウスＣＤ８発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞で行われる、２回の連続パニングラウンド（溶液中で）に供した。抗原特異的ファージの濃縮を、遺伝子導入された細胞から溶出されたファージミド粒子の数（出力）をパニングに使用したファージミド粒子の数（入力）と比較することにより、各パニングラウンド後に評価した。ファージ出力は、第１ラウンドの出力と比較して、第２ラウンドで約１０２倍増加した。入力ファージは常に約５ｘ１０１１であり、第１ラウンドからの出力は約１０９ファージ粒子であった。第１および第２パニングラウンドから１９０個の無作為に選択したコロニー（各ラウンドから９５個）を配列決定し、その後ＣＤＲ３配列に基づいて群に分類した。ＶＨＨを含む粗製周辺質抽出物を用いて、各群の代表物（単一または複数）を、マウスＣＤ８で安定に遺伝子導入されたＣＨＯ－Ｋ１細胞を用いてマウスＣＤ８に対する特異性についてフローサイトメトリーにより分析した。親の非遺伝子導入ＣＨＯ－Ｋ１細胞は、ネガティブコントロールとしての役割を果たした。無関係のＶＨＨを、ネガティブＶＨＨコントロールとして使用した。フローサイトメトリー実験は、７つの群に属する３４個の異なるＶＨＨがマウスＣＤ８に特異的であることを明らかにした。下の表１は、３４種の異なる抗マウスＣＤ８ ＶＨＨ遺伝子を表す３４個のクローンの説明である。抗マウスＣＤ８ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＨＥＮ４を有する大腸菌ＴＧ１を生成し、－８０℃で保存した。ベクターｐＨＥＮ４は、アンピシリン耐性をコードする。
Figure 0006991979000002
ＶＨＨの発現および精製
ＶＨＨ遺伝子をｐＨＥＮ４からｐＨＥＮ６ｃベクターに再クローニングした。具体的には、ＶＨＨ遺伝子を、テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む組換えｐＨＥＮ４を用いプライマーＡ６Ｅおよび３８を用いるＰＣＲにより増幅した。プライマーＡ６Ｅおよび３８は、それぞれ、フレームワーク１およびフレームワーク４プライマーであった。プライマー配列は以下の通りであった：
・プライマーＡ６Ｅ（５’ ＧＡＴ ＧＴＧ ＣＡＧ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＧＲ＊ ＧＧＡ ＧＧ ３’）（配列番号２２８）。
・プライマー３８（５’ ＧＧＡ ＣＴＡ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＡＣＧ ＧＴＧ ＡＣＣ ＴＧＧ ＧＴ ３’）（配列番号２２９）。
・ユニバーサル逆方向プライマー（５’ ＴＣＡ ＣＡＣ ＡＧＧ ＡＡＡ ＣＡＧ ＣＴＡ ＴＧＡ Ｃ ３’）（配列番号２３０）。
・ユニバーサル順方向プライマー（５’ ＣＧＣ ＣＡＧ ＧＧＴ ＴＴＴ ＣＣＣ ＡＧＴ ＣＡＣ ＧＡＣ ３’）（配列番号２３１）。
＊Ｒは、ＡまたはＧを表す。
増幅プロトコルは約３０サイクルのＰＣＲを含み、それぞれのサイクルは９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒と、それに続くＰＣＲの最後に７２℃で１０分間の伸長反応を含んだ。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された。
ＰＣＲ産物を精製し（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットを用いて）、ＰｓｔＩで一晩消化した。精製ＰＣＲ産物をその後ＢｓｔＥＩＩで（またはＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉで）一晩消化した。消化に用いた温度は様々であった。例えば、ＢｓｔＥＩＩによる消化は、酵素の供給業者に応じて、５０℃または６０℃で実施した。
ライゲーションのために、ＰＣＲ産物を精製した。ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２～３時間消化した。あるいは、消化をＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉを用いて実施した。消化したベクターを１％アガロースゲル上で泳動し、ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットを用いて）。ＰＣＲフラグメントをその後ベクターに連結した。
エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応で形質転換し、形質転換体を、ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１％）プレートを用いて選択した。陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いるＰＣＲによりスクリーニングした。挿入断片が存在した場合、約５５０ｂｐのフラグメントが増幅された。クローンの同一性を確認するために、それぞれのＶＨＨ当たり、少なくとも２種のクローンを、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて配列決定した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。
上記プロトコルに続き、ｐＨＥＮ６ｃベクター中にクローニングされたＶＨＨ遺伝子を生成し、これはＮ－末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ－末端にＨｉｓ６テイルを含んだ。ＰｅｌＢリーダー配列はＶＨＨを大腸菌のペリプラズム空間に向け、ＨｉｓタグはＶＨＨの精製と検出に使用された（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどで）。
ＶＨＨの発現および精製を実施した。具体的には、１日目に、１０～２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。この前培養液を３７℃で一晩、２００～２５０ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。２日目に、ＴＢ培地をＶＨＨ発現用に用いた。ＴＢ培地は、リッター当たり：２．３ｇのＫＨ２ＰＯ４、１６．４ｇのＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）を含んだ。
１リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏは、オートクレーブ処理しなかった。その代わりに、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏを調製し、フィルター滅菌した後、既にオートクレーブ処理された残りの培地に加えた。約１ｍｌの前培養液を、１００μｇのアンピシリン、３３０ｍｌの、２ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１％のグルコースを補充したＴＢに加えた後、３７℃で振盪しながら（２００～２５０ｒｐｍ）、０．６～０．９のＯＤ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）を加えてＶＨＨ発現を誘導した。この培養液を２８℃で振盪しながら一晩（約１６～１８時間）インキュベートした。一晩誘導後、ＯＤ６００は通常２５～３０であった。クローン当たり少なくとも１リットルの培養液（３つのボトル）が調製され、１～１５ｍｇ／ｌの平均収量を有した。
大腸菌のペリプラズムからのＶＨＨの抽出を、３日目に実施した。使用した溶液は、次を含んだ：ＴＥＳ：０．２Ｍ トリス ｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍショ糖、およびＴＥＳ／４：水中で４倍希釈されたＴＥＳ。
一晩の誘導培養液を、８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。１リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間震盪した。使用した各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、約１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、振盪しながら追加の１時間氷上でインキュベートし、それに続き４℃にて８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。ペリプラズム空間から抽出されたタンパク質を含む上清を、新しいファルコンチューブに移した。
ＶＨＨをその後、以下の溶液を使用するＩＭＡＣにより精製した：ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。
ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。具体的には、１リットルの培養液からのペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ－ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加えた。ＰＢＳも加えて、５０ｍｌの最終体積にし、混合した。遠心分離を２０００ｒｐｍで２分間実施し、上清を廃棄した。レジンを、上述のようにＰＢＳで２回洗浄した。ペリプラズム抽出物をレジンに加え、緩やかに振盪しながら室温で３０分～１時間インキュベートした。試料を、底部にフィルターを備えたＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０４３５－０１）に載せ、５０～１００ｍｌのＰＢＳ（使用したレジン１ｍｌ当たり、５０～１００ｍｌのＰＢＳ）で洗浄した。溶出を３回実施し、各回で使用したレジン１ｍｌ当たり１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（効率的な溶出のために、ビーズを再懸濁し、カラムの低部を閉止して、４℃で一晩放置した）。透析を、ＰＢＳに対し４℃で一晩実施（カットオフ３５００ダルトン）して、イミダゾールを除去した。効率的な透析のために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。あるいは、イミダゾールでの溶出の代わりに、結合ＶＨＨを１０ｍｌの５０ｍＭ 酢酸ナトリウムｐＨ４．６で溶出できる。５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６をＶＨＨの溶出に使用した場合、溶出されたＶＨＨをすぐに１ＭトリスｐＨ８．０で中和し、透析を必要としなかった。
タンパク質の量を、溶出した試料のＯＤ２８０測定により推定した。各クローンの消光率を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより決定した。ＶＨＨのさらなる精製は、異なる方法で達成できるであろう。例えば、試料を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０へのロード用の適切な体積が得られるまで（最大４ｍｌ）、４℃にて２０００ｒｐｍでの遠心分離（Ｖｉｖａｓｐｉｎ ５０００ＭＷカットオフ、Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）により濃縮し得る。濃縮試料を、ＰＢＳで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０カラムにロードした。ピーク画分をプールし、ＯＤ２８０測定を、定量化のために実施した。一般に、ＶＨＨは、１ｍｌ／分で稼働した場合８５～９５分後に溶出した。濃縮ＶＨＨ試料の分割量を、約１ｍｇ／ｍｌの濃度にて－２０℃で貯蔵した。
ＶＨＨの機能分析
ＶＨＨを、ＣＤ８への結合について試験した。具体的には、マウス脾細胞を１ｕｇ／ｍｌの抗ＣＤ８ ＶＨＨおよび抗Ｈｉｓ ＦＩＴＣ ｍＡｂで染色した。３１種の陽性ＶＨＨのうち、６種が脾細胞で陽性染色であった。図１、パネルＡ～Ｂは、６種のＶＨＨの、ＣＤ８αで遺伝子導入したＣＨＯ細胞へのまたは脾細胞への結合を示す。全ての実験で、６種の選択されたＶＨＨを以下の通り標識した：
Figure 0006991979000003
Ｔ細胞増殖および活性化に対するＶＨＨの効果を評価した。具体的には、ＯＴ－Ｉ Ｒａｇ－／－Ｔ細胞を、非ロードのまたはＯＶＡペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、配列番号２３２）をロードした樹状細胞を５０：１の比率で含み４８時間培養した。共培養液に、５０ｎｇのｍＣＤ８ ＶＨＨ、無関係のＶＨＨまたはＴＣＲ活性化をブロックすることが知られているモノクローナルＡｂ（ＣＴ－ＣＤ８）を補充した。ＯＶＡ誘導Ｔ細胞活性化を、ＣＦＳＥ希釈およびＣＤ２５発現を測定することにより決定した。共培養を３重で実施し、細胞をフローサイトメトリー分析用にプールした。結果を図２に示す。明確に、抗原提示プロセスを妨害することが知られているモノクローナル抗体ＣＴ－ｍＡＢとは全く対照的に、選択ＶＨＨのいずれも、ＣＴＬ活性化に影響しなかった。
腫瘍処置におけるＶＨＨの活性を特徴付けるために実験を実施した。
図３に関しては、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、５０μｌのＰＢＳ中の６ｘ１０５個のＢ１６Ｂｌ６－ｍＣＤ２０細胞を皮下注射した。７日後に、病変周囲（＝腫瘍端部の皮下）の処置を開始した；５５００ＩＵのキメラタンパク質を注射し、一方コントロールマウスは１００μｌのＰＢＳを受けた。処置を、腫瘍細胞接種後８、９、１１、１２、１４、１６および１７日目に与えた。腫瘍増殖を、デジタルノギスを用いてモニターした。平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）をプロットした。
図４に関しては、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、５０μｌのＰＢＳ中の６ｘ１０５個のＢ１６Ｂｌ６－ｍＣＤ２０細胞を皮下注射した。７日後に、病変周囲（＝腫瘍端部の皮下）の処置を開始した；５５００ＩＵのキメラタンパク質を注射し、一方コントロールマウスは１００μｌのＰＢＳを受けた。腫瘍細胞接種後８、９、１１、１２、１４、１６および１７日目に処置を与えた。最後の処置（１８日目）後１日目に、ＥＤＴＡ血液を、Ｈｅｍａｖｅｔ ９５０ＦＳ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いる血液学的パラメーターの分析のために尾静脈から集めた。平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）をプロットした。
図３に示すように、改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）に融合された、マウスＣＤ８に対するＶＨＨの投与は、腫瘍サイズを効果的に縮小した。図４は、改変ヒトインターフェロン（Ｑ１２４Ｒ変異体）に融合された、マウスＣＤ８に対するＶＨＨによる処置は、体重減少または血液毒性を生じなかったことを示す。
実施例２．ヒトＣＤ８に特異的なＶＨＨの構築と評価
抗原特異的ＶＨＨの単離
ＶＨＨライブラリーの３回の連続パニングラウンドを、Ｈｉｓ６タグ付きのヒトＣＤ８Ａの細胞外ドメイン（２００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ウエル）でコートされた固相で実施した。抗原特異的ファージの濃縮を、抗原コートウエルから溶出されたファージミド粒子の数をブロッキングしただけのウエル（ネガティブコントロールウェル）からのファージミド粒子の数と比較することにより、各パニングラウンド後に評価した。これらの実験は、ファージ集団が、第１、第２および第３のパニングラウンドの後にそれぞれ、抗原特異的ファージについて約４倍、１０２倍および１０２倍濃縮されたことを示唆した。２８５個のコロニー（第２および第３ラウンドからそれぞれ、９５個および１９０個）を無作為に選択し、それらの周辺質抽出物中の抗原特異的ＶＨＨの存在についてＥＬＩＳＡにより分析した（可溶性ＶＨＨを含む粗製周辺質抽出物を用いるＥＬＩＳＡ）。ＥＬＩＳＡスクリーニングに使用した抗原は、免疫化およびパニングに使用したものと同じであった。これらの２８５個のコロニーのうち、６４個のコロニー（第２および第３パニングラウンドからそれぞれ、３個および６１個）がこのアッセイで陽性であった。配列データに基づいて、６４個の陽性コロニーは１６種の異なるＶＨＨを表した。１６種の異なるＶＨＨは６種の異なるＣＤＲ３群に属する。下の表２は、３種の異なる抗ヒトＣＤ８Ａ ＶＨＨ遺伝子を表す３個のクローンの説明である。抗ヒトＣＤ８Ａ ＶＨＨ配列を含む組換えファージミドｐＭＥＣＳを有する大腸菌ＴＧ１を生成し、－８０℃で保存した。ベクターｐＭＥＣＳは、アンピシリン耐性をコードする。
Figure 0006991979000004
非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）の組換えｐＭＥＣＳでの形質転換
ＶＨＨ遺伝子を、Ｎ－末端にＰｅｌＢシグナル配列ならびにＣ－末端にＨＡタグおよびＨｉｓ６タグを含むｐＭＥＣＳベクター（ＰｅｌＢ リーダー－ＶＨＨ－ＨＡ－Ｈｉｓ６）中にクローニングした。ＰｅｌＢリーダー配列はＶＨＨを大腸菌のペリプラズム空間に向け、ＨＡおよびＨｉｓ６タグはＶＨＨの精製と検出に使用された（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどで）。
ｐＭＥＣＳベクター中では、Ｈｉｓ６タグにアンバー停止コドン（ＴＡＧ）が続きおよびこのアンバー停止コドンの後にＭ１３ファージのｇｅｎｅＩＩＩが続いた。サプレッサー大腸菌株（例えば、ＴＧ１）では、アンバー停止コドンがグルタミンとして読み取られ、したがってＶＨＨはファージのタンパク質ＩＩＩとの融合タンパク質として発現され、これはパニングのためのファージコート上のＶＨＨの提示を可能にした。ＴＧ１サプレッサー株では、抑制の効率は１００％ではなく、したがって抑制因子株中のＶＨＨの発現は、２種の異なるタイプのＶＨＨ分子、タンパク質ＩＩＩに融合されたものとタンパク質ＩＩＩのないもの、をもたらす。非サプレッサー大腸菌株（例えば、ＷＫ６）では、アンバー停止コドンが停止コドンとして読み取られ、したがって得られたＶＨＨはタンパク質ＩＩＩに融合されなかった。
ｐＭＥＣＳベクター中にクローニングされたＶＨＨを発現し精製するために、目的のＶＨＨの遺伝子を含むｐＭＥＣＳを作製し、プラスミドを非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）中に形質転換した。得られたクローンのＶＨＨを、ＭＰ０５７プライマー（５’－ＴＴＡＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧ－３’）（配列番号２３３）を用いて配列決定し、クローンの同一性を確認した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。ＶＨＨ遺伝子を有する組換えｐＭＥＣＳベクターを含む非サプレッサー株（例えば、ＷＫ６）を、ＶＨＨの発現と精製に使用した。
ｐＭＥＣＳベクターの場合、Ｈｉｓ６タグをＶＨＨの貯蔵時に切り離した。したがって、Ｈｉｓ６タグが検出などのために使われる場合には、ＶＨＨ遺伝子を、ｐＭＥＣＳからｐＨＥＮ６ｃベクターに再クローニングした。具体的には、ＶＨＨ遺伝子を、テンプレートとしてＶＨＨ遺伝子を含む組換えｐＭＥＣＳを用いプライマーＡ６ＥおよびＰＭＣＦを用いるＰＣＲにより増幅した。プライマーＡ６ＥおよびＰＭＣＦは、それぞれ、フレームワーク１およびフレームワーク４プライマーであった。プライマー配列は以下の通りであった：
Figure 0006991979000005
増幅プロトコルは約３０サイクルのＰＣＲを含み、それぞれのサイクルは９４℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で４５秒と、それに続くＰＣＲの最後に７２℃で１０分間の伸長反応を含んだ。約４００ｂｐのフラグメントが増幅された。
ＰＣＲ産物を精製し（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットを用いて）、ＰｓｔＩで一晩消化した。精製ＰＣＲ産物をＢｓｔＥＩＩで（またはＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉで）一晩消化した。消化に用いた温度は様々であった。例えば、ＢｓｔＥＩＩによる消化は、酵素の供給業者に応じて、５０℃または６０℃で実施した。
ライゲーションのために、ＰＣＲ産物を精製した。ｐＨＥＮ６ｃベクターをＰｓｔＩで３時間消化し、上述のように精製した後、ＢｓｔＥＩＩで２～３時間消化した。あるいは、消化をＦｅｒｍｅｎｔａｓのＥｃｏ９１Ｉを用いて実施した。消化したベクターを１％アガロースゲル上で泳動し、ベクターバンドをゲルから切り出し、精製した（例えば、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｃｋゲル抽出キットを用いて）。ＰＣＲフラグメントをその後ベクターに連結した。
エレクトロコンピテントＷＫ６細胞を連結反応で形質転換し、形質転換体を、ＬＢ／寒天／アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）／グルコース（１～２％）プレートを用いて選択した。陽性クローンを、ユニバーサル逆方向およびユニバーサル順方向プライマーを用いるＰＣＲによりスクリーニングした。挿入断片が存在した場合、約５５０ｂｐのフラグメントが増幅された。クローンの同一性を確認するために、それぞれのＶＨＨ当たり、少なくとも２種のクローンを、ユニバーサル逆方向プライマーを用いて配列決定した。抗原結合能を、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の適切なアッセイにより再試験した。
上記プロトコルに続き、ｐＨＥＮ６ｃベクター中にクローニングされたＶＨＨ遺伝子を生成し、これはＮ－末端にＰｅｌＢシグナル配列およびＣ－末端にＨｉｓ６テイルを含んだ。ＰｅｌＢリーダー配列はＶＨＨを大腸菌のペリプラズム空間に向け、ＨｉｓタグはＶＨＨの精製と検出に使用された（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどで）。
ＶＨＨの発現および精製
ＶＨＨの発現および精製を実施した。具体的には、１日目に、１０～２０ｍｌのＬＢ＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）＋グルコース（１％）に、新たに形質転換したＷＫ６コロニーを接種した。この前培養液を３７℃で一晩、２００～２５０ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。２日目に、ＴＢ培地をＶＨＨ発現用に用いた。ＴＢ培地は、リットル当たり、次記を含んだ：２．３ｇのＫＨ２ＰＯ４、１６．４ｇのＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏ、１２ｇのトリプトン（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、２４ｇの酵母（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）、および４ｍｌの１００％グリセロール（Ｄｕｃｈｅｆａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ）。
１リットルのバッフル付振とうフラスコを、３３０ｍｌのＴＢで満たし、オートクレーブ処理した。ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏは、オートクレーブ処理しなかった。その代わりに、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４.３Ｈ２Ｏを調製し、フィルター滅菌した後、既にオートクレーブ処理された残りの培地に加えた。約１ｍｌの前培養液を、１００μｇのアンピシリン、３３０ｍｌの、２ｍＭのＭｇＣｌ２および０．１％のグルコースを補充したＴＢに加えた後、３７℃で振盪しながら（２００～２５０ｒｐｍ）、０．６～０．９のＯＤ６００に達するまで増殖させた。ＩＰＴＧ（１ｍＭの最終濃度）を加えてＶＨＨ発現を誘導した。この培養液を２８℃で振盪しながら一晩（約１６～１８時間）インキュベートした。一晩誘導後、ＯＤ６００は通常２５～３０であった。クローン当たり少なくとも１リットルの培養液（３つのボトル）が調製され、１～１５ｍｇ／ｌの平均収量を有した。
大腸菌のペリプラズムからのＶＨＨの抽出を、３日目に実施した。使用した溶液は、次を含んだ：ＴＥＳ：０．２Ｍ トリス ｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍショ糖、およびＴＥＳ／４：水中で４倍希釈されたＴＥＳ。
一晩の誘導培養液を、８０００ｒｐｍで８分間遠心分離した。１リットルの培養液からの細胞ペレットを、上下のピペッティングにより１２ｍｌのＴＥＳ中に再懸濁し、氷上で１時間震盪した。使用した各１２ｍｌのＴＥＳ当たり、約１８ｍｌのＴＥＳ／４を加え、振盪しながら追加の１時間氷上でインキュベートし、それに続き４℃にて８０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。ペリプラズム空間から抽出されたタンパク質を含む上清を、新しいファルコンチューブに移した。
ＶＨＨをその後、以下の溶液を使用するＩＭＡＣにより精製した：ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔ（Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ、および５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６。
ＨＩＳ－ｓｅｌｅｃｔをＰＢＳで平衡化した。具体的には、１リットルの培養液からのペリプラズム抽出物当たり、１ｍｌのレジン（約２ｍｌのＨｉｓ－ｓｅｌｅｃｔ溶液）を５０ｍｌのファルコンチューブに加えた。ＰＢＳも加えて、５０ｍｌの最終体積にし、混合した。遠心分離を２０００ｒｐｍで２分間実施し、上清を廃棄した。レジンを、上述のようにＰＢＳで２回洗浄した。ペリプラズム抽出物をレジンに加え、緩やかに振盪しながら室温で３０分～１時間インキュベートした。試料を、底部にフィルターを備えたＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０４３５－０１）に載せ、５０～１００ｍｌのＰＢＳ（使用したレジン１ｍｌ当たり、５０～１００ｍｌのＰＢＳ）で洗浄した。溶出を３回実施し、各回で使用したレジン１ｍｌ当たり１ｍｌのＰＢＳ／０．５Ｍのイミダゾールを用いた（効率的な溶出のために、ビーズを再懸濁し、カラムの低部を閉止して、４℃で一晩放置した）。透析を、ＰＢＳに対し４℃で一晩実施（カットオフ３５００ダルトン）して、イミダゾールを除去した。効率的な透析のために、透析緩衝液（ＰＢＳ）を２、３回交換した。あるいは、イミダゾールでの溶出の代わりに、結合ＶＨＨを１０ｍｌの５０ｍＭ 酢酸ナトリウムｐＨ４．６で溶出できる。５０ｍＭの酢酸ナトリウムｐＨ４．６をＶＨＨの溶出に使用した場合、溶出されたＶＨＨをすぐに１ＭトリスｐＨ８．０で中和し、透析を必要としなかった。
タンパク質の量を、溶出した試料のＯＤ２８０測定により推定した。各クローンの消光率を、ＥｘＰＡＳｙプロテオミクスサーバーでの一次構造分析に基づいて、ｐｒｏｔＰａｒａｍツールにより決定した。ＶＨＨのさらなる精製は、異なる方法で達成できるであろう。例えば、試料を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０へのロード用の適切な体積が得られるまで（最大４ｍｌ）、４℃にて２０００ｒｐｍでの遠心分離（Ｖｉｖａｓｐｉｎ ５０００ＭＷカットオフ、Ｖｉｖａｓｃｉｅｎｃｅ）により濃縮し得る。濃縮試料を、ＰＢＳで平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １６／６０カラムにロードした。ピーク画分をプールし、ＯＤ２８０測定を、定量化のために実施した。一般に、ＶＨＨは、１ｍｌ／分で稼働した場合８５～９５分後に溶出した。濃縮ＶＨＨ試料の分割量を、約１ｍｇ／ｍｌの濃度にて－２０℃で貯蔵した
実施例３．ヒトＣＤ８結合ＶＨＨの機能特性評価
ヒトＣＤ８に対する抗原認識ドメインを含有する３種のＶＨＨを構築した。ＶＨＨを、Ｒ３ＨＣＤ２７、Ｒ３ＨＣＤ１２９、およびＲ２ＨＣＤ２６と命名した。ＶＨＨのアミノ酸配列は下の通りである：
Ｒ３ＨＣＤ２７（配列番号１９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＳＴＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ
Ｒ３ＨＣＤ１２９（配列番号２０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＲＴＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ
Ｒ２ＨＣＤ２６（配列番号２１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＲＶＳＤＧＳＴＹＹＡＤＰＶＫＧＲＦＴＩＳＳＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＡＡＶＹＹＣＡＡＧＳＬＹＴＣＶＱＳＩＶＶＶＰＡＲＰＹＹＤＭＤＹＷＧＫＧＴＱＶＴＶＳＳＡＡＡＹＰＹＤＶＰＤＹＧＳ
３種のＶＨＨの結合特性を、フローサイトメトリーにより試験した。ＨＥＫ２９３－Ｔ細胞をヒトＣＤ８α発現プラスミドで遺伝子導入し、２μｇ／ｍｌの３種のＨｉｓタグ付きＶＨＨ（すなわち、Ｒ２ＨＣＤ２６、Ｒ３ＨＣＤ２７、およびＲ３ＨＣＤ１２９）で染色し、続いて抗ＨｉｓＦＩＴＣコンジュゲート抗体で染色した。細胞蛍光を、フローサイトメトリーにより検出した。図５に示すように結果は、ＶＨＨがＣＤ８に結合することを示す。
さらに、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を１μｇ／ｍｌの３種のＨｉｓタグ付きＣＤ８ ＶＨＨ（すなわち、Ｒ２ＨＣＤ２６、Ｒ３ＨＣＤ２７、およびＲ３ＨＣＤ１２９）で染色し、続いて抗ＨｉｓＦＩＴＣコンジュゲート抗体で染色した。染色を、ＣＤ８を認識しないコントロールＶＨＨを用いても実施した。図６のパネルＡで示されるように、３種全てのＨｉｓタグ付きＣＤ８ ＶＨＨは、ヒトＰＢＭＣ中に存在するＣＤ８＋細胞への特異的な結合を示した。蛍光強度中央値（ＭＦＩ）もまた、５種のＶＨＨ希釈に対して計算し、コントロールＶＨＨで得られた結合と比較した（図６、パネルＢ）。結果は、１０ｎＭおよび１００ｎＭの濃度で、３週全てのＶＨＨがコントロール抗体よりも高いＭＦＩを有し（ＣＤ８への特異的結合を示唆する）、Ｒ２ＨＣＤ２６抗体が最高のＭＦＩを示すことを示唆する。図６のパネルＣは、ＰＢＭＣ中のＣＤ３抗原陽性細胞のかなりの部分もまた、ＣＤ８に対し陽性染色されたことを示す。
実施例４．マウスＣＤ８ベースのキメラの抗腫瘍効果
図７は、Ｂ１６黒色腫モデルを用いて分析したマウス二重特異性キメラ（「ＣＤ８－Ｑ１２４Ｒ－ＰＤ－Ｌ１」）の抗腫瘍活性を示す。図に示すように、改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への二重特異的（抗マウスＣＤ８および抗マウスＰＤ－Ｌ１）融合体は、改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への抗ＣＤ８の融合体に比べて、より良好な抗腫瘍活性をもたらした。
図８は、４Ｔ１乳房腫瘍モデル調査を示し、ここで改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への二重特異的（抗マウスＣＤ８および抗マウスＰＤ－Ｌ１）融合体は、改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への抗ＣＤ８の融合体および改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への抗ＰＤ－Ｌ１の融合体の共投与、または改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への抗ＣＤ８の融合体および抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの共投与に比べて、より良好な抗腫瘍活性を可能にした。
図９は、４Ｔ１乳房腫瘍モデルにおいて、改変ヒトＩＦＮアルファ（Ｑ１２４Ｒ）への二重特異的（抗マウスＣＤ８および抗マウスＰＤ－Ｌ１）融合体の、ドキソルビシンと一緒の使用は、６匹のマウスのうち３匹で治癒効果をもたらした（すなわち、マウスは完全に腫瘍なしになった）ことを示す。
実施例５．単一特異性ヒトキメラのヒトＣＤ８ターゲティングの効率
単一特異性ヒトキメラのヒトＣＤ８ターゲティングの効率を、ＦＡＣＳによるＣＤ８陽性およびＣＤ８陰性の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＳＴＡＴ１リン酸化の定量により調査した。
抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒト ＩＦＮＲ１４９Ａ（すなわち、ｐｍＴＷ－ＳＩｇＫ－ｈＣＤ８＿Ｒ２ＨＣＤ２６（配列番号２１）－（ＧＧＳ）２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ１４９Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）９構築物）と抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒト ＩＦＮ Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ａ（すなわち、ｐｍＴＷ－ＳＩｇＫ－ｈＣＤ８＿Ｒ２ＨＣＤ２６（配列番号２１）－（ＧＧＳ）２０－ｈＩＦＮａ２＿Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ａ－ＧＧＳ－（Ｈｉｓ）９構築物）のキメラを、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞中で産生した。細胞をフリースタイル培地中で０．６ｘ１０６細胞／ｍｌの密度まで増殖させ、標準的プロトコルに従い２５Ｋ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）を用いて遺伝子導入した。遺伝子導入の３日後、新しい培地を培養液に加え、細胞を２または３日間追加で増殖させた。培地を採取し、細胞を遠心分離により除去し濾過滅菌した。組換えタンパク質を、製造業者の説明書に従ってＮｉ Ｅｘｅｌレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製物から除去した。
健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による密度勾配遠心分離を用いて単離した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、抗ヒトＣＤ８ ＡＰＣ（クローンＲＰＥ－Ｔ８；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で４℃にて２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞を、系列希釈したＣＤ８ターゲティングキメラで３７℃にて１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄の後、細胞を、抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４．０．２ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。
単離ＰＢＭＣを、系列希釈したＣＤ８ターゲティングキメラ（抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ａ、または抗ＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａ）で刺激し、ＣＤ８（ＡＰＣ）およびｐＳＴＡＴ１（ＰＥ）について染色した。データは、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａおよび抗ＢｃＩＩ１０ ＶＨＨ－ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａの生物活性はＣＤ８陰性細胞中で同等であった（図１０、パネルＣ）が、ＣＤ８ターゲティングは、抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ１４９Ａによる、明確で顕著なＳＴＡＴ１リン酸化の増加（少なくとも５００倍）をもたらした（図１０、パネルＡおよびＢ）ことを明確に示した。抗ヒトＣＤ８ ＶＨＨ／ヒトＩＦＮ Ｒ３３Ａ／Ｅ１２０Ａキメラにおける組み合わされたＩＦＮ変異は、ＳＴＡＴ１リン酸化を完全にブロックし、ＣＤ８ターゲティングは、生物活性を回復しなかった。これは、ＳＴＡＴ１リン酸化を維持したＩＦＮ Ｒ１４９Ａ変異とは対照的であった。
等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上記に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。
当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。
参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。
本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用することができる。
参考文献
以下は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
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Claims (11)

  1. ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む少なくとも１つのターゲティング部分を含むＣＤ８結合物質であって、前記ターゲティング部分は単一ドメイン抗体であり、
    （ａ）前記ターゲティング部分は、ＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
    （ｂ）前記ターゲティング部分は、ＧＦＴＦＤＤＹＡＭＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＴＩＮＷＮＧＧＳＡＥＹＡＥＰＶＫＧ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＫＤＡＤＬＶＷＹＮＬＲ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、または
    （ｃ）前記ターゲティング部分は、ＧＦＴＦＤＤＹＡＩＧ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＩＲＶＳＤＧＳＴＹＹＡＤＰＶＫＧ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびＡＧＳＬＹＴＣＶＱＳＩＶＶＶＰＡＲＰＹＹＤＭＤＹ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、
    ＣＤ８結合物質。
  2. 前記ターゲティング部分が、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）またはヒト化ＶＨＨを含む、請求項１に記載のＣＤ８結合物質。
  3. 配列番号１９と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＤ８結合物質。
  4. 配列番号２０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＤ８結合物質。
  5. 配列番号２１と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＣＤ８結合物質。
  6. 前記ＣＤ８結合物質が、１種または複数のシグナル伝達物質を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
  7. 前記シグナル伝達物質が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、およびそれらの改変された型の１種または複数から選択される、請求項６に記載のＣＤ８結合物質。
  8. 前記ＣＤ８結合物質が、１つまたは複数の追加のターゲティング部分を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質。
  9. 前記１つまたは複数の追加のターゲティング部分が、腫瘍抗原または免疫細胞上の抗原を認識するまたは機能的に調節する、請求項８に記載のＣＤ８結合物質。
  10. 癌、感染症、免疫異常、および／または自己免疫疾患のうちの１種または複数を処置するための薬物の製造のための請求項１～９のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質の使用。
  11. 請求項１～９のいずれか１項に記載のＣＤ８結合物質および薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む医薬組成物。
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