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JP6599373B2 - 核酸の送達のための立体化学的に濃縮した組成物 - Google Patents

核酸の送達のための立体化学的に濃縮した組成物 Download PDF

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JP6599373B2
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Description

脂質を用いた核酸の送達は、種々の疾患の治療に広範に探究されてきた。効率性の高くかつ毒性の低い、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）及び伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のような核酸を送達することのできる脂質及び／または脂質組成物についての大きな需要がまだ存在する。
とりわけ、本発明は、ｍＲＮＡを送達するための立体化学的に濃縮した脂質を含む組成物を提供する。本発明は、以下の式Ｉの立体化学的に濃縮した脂質を含む組成物がｍＲＮＡを送達し及びコードされたタンパク質をインビボで生成する上で高度に有効でありかつ予期せぬ低い毒性を有するという驚くべき発見に一部基づいている。
本発明者らは、ｍＲＮＡ送達に使用した時、Ｉの立体化学的に濃縮した組成物が、立体的に濃縮していない、または立体的にほとんど濃縮していない、同じ脂質の組成物と比較して驚くべき低い毒性を有していることを、例えば劇的により低いアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の発現レベルによって発見した。表１を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とし、当該式の各々は独立して、以下に定義及び説明する。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は５０％であり、または
式Ｉ．ｂ．１
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は２５％であり、または
式Ｉ．ｂ．２
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は２５％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが
式Ｉ．ｃ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は６．２５％であり、または
式Ｉ．ｄ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は６．２５％であり、または
式Ｉ．ｅ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は２５％であり、または
式Ｉ．ｆ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は２５％であり、または
式Ｉ．ｇ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は１２．５％であり、または
式Ｉ．ｈ
の化学成分であり、この中で当該第一の閾値量は２５％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、５０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、７０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、８０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、９５％である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該組成物の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈから選択される第一の式の化学成分であり、かつ
当該組成物中の第一の式の化学成分の総量の第二の閾値量以上が、当該第一の式の同じ立体異性体の化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ａの化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ
の化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、５０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、７０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、８０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、９５％である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉの同じ立体異性体の化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉ、または式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの構造を有する。
いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉ、または式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、５０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、７０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、８０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、８５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９５％（ｗ／ｗ）である。
いくつかの実施形態において、提供される組成物はさらに、コードしたタンパク質のインビボでのｍＲＮＡ送達及び発現のための１つ以上のｍＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、ｍＲＮＡ及びコードしたタンパク質のインビボでの高度に効率的な送達及び発現のための複数の方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、送達する必要のある対象へ、ｍＲＮＡを含む提供された組成物を投与することを含む、ｍＲＮＡのインビボでの送達方法を提供する。いくつかの実施形態において、当該方法の低い毒性により、提供される組成物は、より多量の送達されるｍＲＮＡ、より高いタンパク質発現レベル及び／またはより低い投与頻度を可能にし、それにより、より強力で、より安全で、かつより特許として都合の良いｍＲＮＡ療法を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物であって、前記化学成分の各々は、式Ｉ

の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、前記組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ａ

の化学成分であり、この中で前記第一の閾値量は５０％であること、または
式Ｉ．ｂ．１

の化学成分であり、この中で前記第一の閾値量は２５％であること、または
式Ｉ．ｂ．２
の化学成分であり、この中で前記第一の閾値量は２５％であることを特徴とする、前記組成物。
（項目２）
前記第一の閾値量は７０％である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記第一の閾値量は８０％である、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記第一の閾値量は９５％である、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものは、式Ｉ．ａの化学成分である、項目１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％であることを特徴とする、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記第二の閾値量は７０％である、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記第二の閾値量は８０％である、項目６に記載の組成物。
（項目９）
前記第二の閾値量は９０％である、項目６に記載の組成物。
（項目１０）
前記第二の閾値量は９５％である、項目６に記載の組成物。
（項目１１）
前記組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％であることを特徴とする、項目５に記載の組成物。
（項目１２）
前記第二の閾値量は７０％である、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
前記第二の閾値量は８０％である、項目１１に記載の組成物。
（項目１４）
前記第二の閾値量は９０％である、項目１１に記載の組成物。
（項目１５）
前記第二の閾値量は９５％である、項目１１に記載の組成物。
（項目１６）
前記組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１の化学成分である、項目１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１７）
前記組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％であることを特徴とする、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
前記第二の閾値量は７０％である、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記第二の閾値量は８０％である、項目１７に記載の組成物。
（項目２０）
前記第二の閾値量は９０％である、項目１７に記載の組成物。
（項目２１）
前記第二の閾値量は９５％である、項目１７に記載の組成物。
（項目２２）
前記組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％である、項目１６に記載の組成物。
（項目２３）
前記第二の閾値量は７０％である、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
前記第二の閾値量は８０％である、項目２２に記載の組成物。
（項目２５）
前記第二の閾値量は９０％である、項目２２に記載の組成物。
（項目２６）
前記第二の閾値量は９５％である、項目２２に記載の組成物。
（項目２７）
前記組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２の化学成分である、項目１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２８）
前記組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％であることを特徴とする、項目２７に記載の組成物。
（項目２９）
前記第二の閾値量は７０％である、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記第二の閾値量は８０％である、項目２８に記載の組成物。
（項目３１）
前記第二の閾値量は９０％である、項目２８に記載の組成物。
（項目３２）
前記第二の閾値量は９５％である、項目２８に記載の組成物。
（項目３３）
前記組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ

の化学成分であり、この中で前記第二の閾値量は５０％であることを特徴とする、項目２７に記載の組成物。
（項目３４）
前記第二の閾値量は７０％である、項目３３に記載の組成物。
（項目３５）
前記第二の閾値量は８０％である、項目３３に記載の組成物。
（項目３６）
前記第二の閾値量は９０％である、項目３３に記載の組成物。
（項目３７）
前記第二の閾値量は９５％である、項目３３に記載の組成物。
（項目３８）
前記組成物の総量の第三の閾値量以上は、式Ｉの化学成分であり、この中で前記第三の閾値量は８５％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする、項目１〜４に記載の組成物。
（項目３９）
前記第三の閾値量は９０％である、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記第三の閾値量は９５％である、項目３８に記載の組成物。
（項目４１）
前記第三の閾値量は９８％である、項目３８に記載の組成物。
（項目４２）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ａ．ｉ

の化学成分である、項目４１に記載の組成物。
（項目４３）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉ

の化学成分である、項目４１に記載の組成物。
（項目４４）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ

の化学成分である、項目４２に記載の組成物。
（項目４５）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ

の化学成分である、項目４１に記載の組成物。
（項目４６）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ

の化学成分である、項目４１に記載の組成物。
（項目４７）
前記組成物の総量の９０％（ｗ／ｗ）以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ

の化学成分である、項目４１に記載の組成物。
（項目４８）
組成物の投与が結果的に、インビボで伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされるタンパク質の発現を生じるよう、リポソーム内に封入されたタンパク質コードｍＲＮＡを含む組成物を、送達を必要とする対象へ投与することを含む、インビボでのｍＲＮＡの送達方法であって、前記リポソームは、項目１〜４７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質化合物を含む、前記方法。
（項目４９）
前記リポソームはさらに、１個以上の非カチオン性脂質、１個以上のコレステロール系脂質及び／または１個以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記１個以上の非カチオン性脂質は、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ））ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記１個以上のコレステロール系脂質は、コレステロール及び／またはＰＥＧ化コレステロールである、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５２）
前記１個以上のＰＥＧ修飾脂質は、Ｃ ６ 〜Ｃ ２０ 長のアルキル鎖（複数可）を有する脂質へ共有結合した長さ最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目４９〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記リポソームは、約２５０ｎｍ、２００ｎｍ、１５０ｎｍ、１００ｎｍ、７５ｎｍ、または５０ｎｍ未満の大きさを有する、項目４８〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記ｍＲＮＡは、約０．５ｋｂ、１ｋｂ、１．５ｋｂ、２ｋｂ、２．５ｋｂ、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、または５ｋｂ以上の長さを有する、項目４８〜５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、細胞質ゾルタンパク質である、項目４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、分泌タンパク質であるである、項目４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、酵素である、項目４８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記ｍＲＮＡは、１個以上の修飾されたヌクレオチドを含む、項目４８〜５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記１個以上の修飾されたヌクレオチドは、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び／または２−チオシチジンを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記ｍＲＮＡは非修飾である、項目４８〜５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
項目４８〜６０のいずれか一項に記載の方法を用いて、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡを送達する工程を含む、疾患または障害の治療方法。
式Ｉの化合物を含む脂質ナノ粒子を用いた治療の際の野生型マウス肝臓におけるインビボでのヒトＡＳＳ１タンパク質産生の結果を示す。
（定義）
本発明がより容易に理解されるために、ある特定の用語をまず以下に定義する。以下の用語および他の用語についての追加の定義は、本明細書のいたるところで明らかにする。本発明の背景を説明するために及び本発明の実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で参照する公開物及び他の参照材料は、参照により本明細書により組み込まれる。
アミノ酸：本明細書で使用する場合、「アミノ酸」という用語はその最も広範な意味で、ポリペプチド鎖へ組み込むことのできる任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般的な構造ＨＥＮ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＨＯを有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は合成アミノ酸であり、いくつかの実施形態において、アミノ酸はｄ型アミノ酸であり、いくつかの実施形態において、アミノ酸はｌ型アミノ酸である。「標準的なアミノ酸」は、天然ペプチドにおいて通常認められる２０個の標準的なｌ型アミノ酸のうちのいずれかを指す。「非標準的なアミノ酸」は、それが合成で調製されようと天然源から得られようとにかかわらず、標準的なアミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。本明細書で使用する場合、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミドのような）、及び／または置換を含むがこれらに限定しない化学的に修飾されたアミノ酸を包含する。ペプチド中にカルボキシル末端アミノ酸及び／またはアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、及び／または化学基の活性に有害に影響することなくペプチドの循環半減期を変化させることのできる他の当該化学基との置換によって修飾することができる。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与し得る。アミノ酸は、１個以上の化学成分（例えば、メチル基、酢酸基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分など）との結合のような、１個の修飾または翻訳後修飾を含み得る。「アミノ酸」という用語は、「アミノ酸残基」と相互交換可能に使用され、遊離アミノ酸及び／またはペプチドのアミノ酸残基を指すことがある。当該用語を使用する脈絡から、アミノ酸が遊離アミノ酸かまたはペプチドの残基を指すかは明白であろう。
動物：本明細書で使用する場合、「動物」という用語は、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階にあるヒトを指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階の非ヒト動物を指す。ある実施形態において、当該非ヒト動物とは哺乳類である（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／またはブタ）。いくつかの実施形態において、動物には、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／または蠕虫を含むが、これらに限定しない。いくつかの実施形態において、動物とは、トランスジェニック動物、遺伝的に操作した動物、及び／またはクローンであってもよい。
およそまたは約：本明細書で使用する場合、「およそ」または「約」という用語は、関心対象の１つ以上の値に適用する場合、記載の基準値と類似の値を指す。ある実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、または脈絡から別段に明白な場合、記載の基準値のいずれかの方向で（より大きいまたはより小さい）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれより小さな数の内に収まる値の範囲を指す（このような数が可能な値の１００％を超えるであろう場合を除く）。
化学成分：本明細書で使用する場合、「化学成分」という用語には、化合物、塩、またはこれらの溶媒和物、あるいは化合物、塩、またはこれらの溶媒和物の任意の組み合わせを含む。
送達：本明細書で使用する場合、「送達」という用語は、局所送達及び全身送達の両方を包含する。例えば、ｍＲＮＡの送達は、ｍＲＮＡが標的組織へ送達され、かつコードしたタンパク質が発現して標的組織内に保有される状況、及び、ｍＲＮＡが標的組織内へ送達され、かつコードしたタンパク質が発現して患者の循環系（例えば、血清）へと分泌されて系統的に分配され、他の組織によって取り込まれる状況（「全身性分配」または「全身送達」とも呼ぶ）を包含する。
発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、ｍＲＮＡからポリペプチドへの翻訳を指し、複数のポリペプチド（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）からインタクトなタンパク質（例えば、抗体）へと及び／またはポリペプチド若しくは完全に集合したタンパク質（例えば、抗体）の翻訳後修飾を集合させる。この出願において、「発現」及び「生成」という用語ならびに文法上の等価物は、相互交換可能に使用する。
機能的な：本明細書で使用する場合、「機能的な」生体分子とは、特徴とする特性及び／または活性を呈する形態にある生体分子である。
半減期：本明細書で使用する場合、「半減期」という用語は、時間の開始時に測定した時間の値の半分に収まるための、核酸またはタンパク質の濃度または活性のような量に必要な時間である。
改善する、増大する、または減少する：本明細書で使用する場合、「改善する」、「増大する」または「減少する」という用語あるいは文法上の等価物は、本明細書に説明する治療の開始前の同じ個体における測定または本明細書に説明する治療の非存在下における対照対象（または複数の対照対象）における測定のような、基線測定に相対的な値を示す。「対照対象」とは、治療中の対象とほぼ同齢の治療中の当該対象と同じ形態の疾患に罹患している対象である。
インビトロ：本明細書で使用する場合、「インビトロ」という用語は、人工的な環境において、例えば、検査チューブまたは反応容器、例えば、多細胞生体内よりもむしろ細胞培養物において生じる事象を指す。
インビボ：本明細書で使用する場合、「インビボ」という用語は、ヒト及び非ヒト動物のような多細胞生体内で生じる事象を指す。細胞系系統の脈絡で当該用語は、生細胞内で生じる事象を指すために使用することがある（例えば、インビトロの系とは対照的）。
単離した：本明細書で使用する場合、「単離した」という用語は、（１）初期的に産生する場合（自然においてであろうと及び／もしくは実験の設定においてであろうと）、結合する構成要素のうちの少なくともいくつかから分離した、ならびに／または（２）人間の手によって生成、調製、及び／または製造された物質ならびに／あるいは実体を指す。単離した物質及び／または実体は、初期的に結合した他の構成要素の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超から分離してもよい。いくつかの実施形態において、単離した作用因子は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超純粋である。本明細書で使用する場合、物質は、他の構成要素が実質的にない場合「純粋」である。本明細書で使用する場合、単離した物質及び／または実体の％純度の計算には賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）を含むべきではない。
局所分配または送達：本明細書で使用する場合、「局所分配」、「局所送達」という用語、または文法上の等価物は、組織特異的な送達または分配を指す。典型的には、局所的な分配または送達は、細胞内でまたは患者の循環系に入るのを回避する制限された分泌で翻訳及び発現するｍＲＮＡによってコードされるタンパク質（例えば、酵素）を必要とする。
伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）：本明細書で使用する場合、「伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）」という用語は、少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用する場合のｍＲＮＡは、修飾されたＲＮＡ及び修飾されていないＲＮＡを両方包含する。ｍＲＮＡは、１つ以上のコード領域及び非コード領域を含有してもよい。ｍＲＮＡは、天然源から精製することができ、組換え発現系を用いて生成することができ、任意に精製、化学的に合成などすることができる。適宜、例えば、化学的に合成された分子の場合、ｍＲＮＡは、化学的に修飾された塩基若しくは糖、主鎖修飾などを有する類似体のようなヌクレオシド類似体を含むことができる。ｍＲＮＡ配列は、別段の記載がない限り、５’から３’の方向に呈する。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）、ヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び２−チオシチジン）、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化した塩基）、インターカレートした塩基、修飾した糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）、及び／または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオアート及び５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）であり、あるいはこれらを含む。
いくつかの実施形態において、当該ｍＲＮＡは、１個以上の非標準的なヌクレオチド残基を含む。非標準的なヌクレオチド残基には例えば、５−メチル−シチジン（「５ｍＣ」）、プソイドウリジン、及び／または２−チオ−ウリジン（「２ｓＵ」）を含むことがある。例えば、このような残基及び当該残基のｍＲＮＡへの組み込みに関する考察については、例えば、米国特許第８，２７８，０３６号またはＷＯ２０１１０１２３１６を参照されたい。当該ｍＲＮＡは、ＲＮＡであってもよく、これは、Ｕ残基の２５％が２−チオ−ウリジンであり、かつＣ残基の２５％が５−メチルシチジンであるＲＮＡとして定義される。ＲＮＡの使用についての教示については、米国特許公開ＵＳ２０１２０１９５９３６及び内部公開ＷＯ２０１１０１２３１６に開示されており、これらは両方とも、それらの内容が全体として参照により本明細書により組み込まれる。非標準的なヌクレオチド残基の存在は、同じ配列だが標準的な残基のみを含有する対照ｍＲＮＡよりもｍＲＮＡを安定で及び／またはあまり免疫原性のないものにし得る。さらなる実施形態において、当該ｍＲＮＡは、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５−ブロモウラシル、５−プロピニルウラシル、６−アミノプリン、２−アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン及び２−クロロ−６−アミノプリンシトシン、ならびにこれらの修飾物及び他の核酸塩基修飾物の組み合わせを含み得る。ある実施形態にはさらに、フラノース環または核酸塩基に対する追加の修飾を含み得る。追加の修飾には、例えば、糖修飾または糖置換（例えば、２’−Ｏ−アルキル修飾のうちの１個以上、ロックト核酸（ＬＮＡ））を含み得る。いくつかの実施形態において、当該ＲＮＡは、追加のポリヌクレオチド及び／またはペプチドポリヌクレオチド（ＰＮＡ）と複合体形成またはハイブリッド形成し得る。糖修飾が２’−Ｏ−アルキル修飾である実施形態において、このような修飾には、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾、２’−Ｏ−メチル修飾、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾及び２’−デオキシ修飾を含み得るが、これらに限定しない。ある実施形態において、これらの修飾のうちのいかなるものも、当該ヌクレオチドの０〜１００％で存在し得、例えば、ヌクレオチド成分の０％超、１％、１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または１００％で個々にまたは組み合わせで存在し得る。
核酸：本明細書で使用する場合、「核酸」という用語はその最も広範な意味において、ポリヌクレオチド鎖へと組み込まれたもしくは組み込まれることのできる任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態において、核酸は、ホスホジエステル結合を介してポリヌクレオチドへと組み込まれたまたは組み込まれることのできる化合物及び／または物質である。いくつかの実施形態において、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシド）を指す。いくつかの実施形態において、「核酸」は、個々の核酸残基を含むポリヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態において、「核酸」は、ＲＮＡ、ならびに一本鎖及び／または二本鎖のＤＮＡ及び／またはｃＤＮＡを包含する。
患者：本明細書で使用する場合、「患者」または「対象」という用語は、提供される組成物が、例えば、実験、診断、予防、化粧、及び／または治療上の目的のために投与され得る任意の生体を指す。典型的な患者には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及び／またはヒトのような哺乳類）を含む。いくつかの実施形態において、患者はヒトである。ヒトには出生前形態及び出生後形態を含む。
医薬として許容され得る：「医薬として許容され得る」という用語は本明細書で使用する場合、完全な医学的判断の範囲内で、合理的な損益比と釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題若しくは合併症なしでヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適している。
ポリマー：本明細書で使用する場合、「ポリマー」は、少なくとも３（例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、など）の反復する共有結合構造単位から構成された化合物を指す。
塩：本明細書で使用する場合、「塩」または「医薬として許容され得る塩」という用語は、完全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答及びこれらに類する事象なしでヒト及び下等動物の組織と接触して使用するのに適しており、かつ合理的な損益比と釣り合っている塩を指す。医薬として許容され得る塩は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、医薬として許容され得る塩をＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７）６６：１〜１９において詳細に説明している。本発明の化合物の医薬として許容され得る塩には、適切な無機及び有機の酸及び塩基に由来するものを含む。医薬として許容され得る非毒性の酸添加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸のような無機酸を用いて、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸若しくはマロン酸のような有機酸を用いて、あるいはイオン交換のような当該技術分野において使用される他の方法を用いることによって形成されるアミノ基の塩である。他の医薬として許容され得る塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、 グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバルサン塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、及びこれらに類するものを含む。適切な塩基由来の塩には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩及びＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩を含む。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びこれらに類するものを含む。さらなる医薬として許容され得る塩には、適宜、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、ならびにハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、スルホン酸塩及びアリールスルホン酸塩のような対イオンを用いて形成されるアミンカチオンを含む。さらなる医薬として許容され得る塩には、第四級アルキル化アミノ塩を形成するために適切な求電子試薬、例えば、ハロゲン化アルキルを用いてアミンの第四級化から形成された塩を含む。
全身分配または全身送達：本明細書で使用する場合、「全身分配」、「全身送達」という用語、または文法上の等価物は、身体全体または生体全体に影響する送達または分配の機序またはアプローチを指す。典型的には、全身分配または全身送達は、身体の循環系、例えば、血流を介して達成される。「局所分配または局所送達」に関する定義と比較されたい。
対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長類）を指す。ヒトには、出生前及び出生後の形態を含む。多くの実施形態において、対象はヒトである。対象は、疾患の診断または治療のために医療提供者に呈する人を指す患者であることができる。「対象」という用語は本明細書において、「個体」または「患者」と相互交換可能に使用する。対象は、疾患若しくは障害を罹患している可能性があり、または当該疾患若しくは障害の疑いがあるが、当該疾患または障害の症状を示していてもよくまたは示していなくてもよい。
実質的に：本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、関心対象の特徴または特性の全体的なまたはほぼ全体的な程度または度合いを呈する定性的な条件を指す。生物学の当業者は、生物学的および化学的現象がまれに、極めてまれに、完全に至り及び／若しくは完全性へと進行し、または絶対的な結果を達成若しくは回避するであろうことを理解するであろう。「実質的に」という用語はそれゆえ本明細書において、多くの生物学的及び化学的現象において固有の完全性の潜在的な欠如を捉えるために使用する。
標的組織：本明細書で使用する場合、「標的組織」という用語は、治療されることになっている疾患によって影響される任意の組織を指す。いくつかの実施形態において、標的組織には、疾患関連性の病理、症状、または特徴を示す当該組織を含む。
治療有効量：本明細書で使用する場合、治療薬の「治療有効量」という用語は、疾患、障害、及び／または容態の発症を治療、診断、予防、及び／または遅延させるために、当該疾患、障害、及び／または容態に罹患しているまたは罹患している疑いのある対象へ投与するときに、十分である量を意味する。治療有効量が典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投与計画を介して投与されることは、当業者によって認識されるであろう。
治療すること：本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」、または「治療すること」という用語は、特定の疾患、障害、及び／若しくは容態の１つ以上の症状または特徴の発症を部分的に若しくは完全に緩和し、緩解させ、解放し、阻害し、予防し、遅延させ、重症度を低下させ、ならびに／または発生率を低下させるのに使用する任意の方法を指す。治療は、疾患の徴候を呈さない対象及び／または疾患の早期の徴候のみを呈する対象へ、当該疾患と関係する病状を発達させる危険性を低下させる目的のために投与され得る。
（詳細な説明）
本発明はとりわけ、立体化学的に濃縮した脂質組成物を用いてｍＲＮＡをインビボで送達するための脂質組成物及び方法を提供する。
（脂質組成物）
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１個以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉの化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。
本明細書で使用する場合、式の「化学成分」とは、当該式の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物である。
いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、５０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、７０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、８０％である。いくつかの実施形態において、当該第一の閾値量は、９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ａの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ａの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｂ．１の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．１の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｂ．１の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｂ．２の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．２の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｂ．２の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｃの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｃの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｃの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は６．２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は１２．５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｄの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｄの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｄの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は６．２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は１２．５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｅの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｅの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｅの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｆの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｆの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｆの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｇの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｇの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｇの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は１２．５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量が、式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は２５％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は５０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は７０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は８０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９０％である。いくつかの実施形態において、第一の閾値量は９５％である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、及び式Ｉ．ｈから選択される第一の式の化学成分であり、かつ
当該組成物中の第一の式の化学成分の総量の第二の閾値量以上が、第一の式の同じ立体異性体の化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量を超えるものは、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、及び式Ｉ．ｈから選択される第一の式の化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量は、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、及び式Ｉ．ｈから選択される第一の式の化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第二の閾値量を超えるものは、第一の式の同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の第一の式の化学成分の総量の第二の閾値量は、第一の式の同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ａである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ａの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａの同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｘ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ａの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｘ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ａの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｘの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｂ．１である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１の化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１の同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．１の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．１の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｂ．２である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２の化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２の同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｂ．２の立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖｉ
の構造を有する。
いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｂ．２の化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｃである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｃの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｃの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｃの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｃの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｃの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｃの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｃの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｃの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｃの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｄである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｄの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｄの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｄの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｄの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｄの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｄの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｄの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｄの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｄの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｅである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｅの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｅの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｅの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｅの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｅの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｅの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｆである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｆの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｆの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｆの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｆの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｆの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｘの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｆの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｆの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｆの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｆの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｘの構造である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｆの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｆの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｇである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｇの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｇの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｇの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｇの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｇの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｇの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｇの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｇの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｉｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｇの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉの構造である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｇの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｇの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖの化学成分である。
いくつかの実施形態において、第一の式は、式Ｉ．ｈである。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第一の閾値量以上は、式Ｉ．ｈの化学成分であり、かつ当該組成物中の式Ｉ．ｈの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｈの同じ立体異性体の化学成分である。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｈの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｈの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉ．ｈの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｈの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ａ．ｖｉの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｈの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．１．ｖの化学成分である。いくつかの実施形態において、当該組成物中の式Ｉ．ｈの化学成分の総量の第二の閾値量以上は、式Ｉ．ｂ．２．ｖの化学成分である。
いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、５０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、７０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、８０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、８５％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、９０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、９５％である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量が式Ｉの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ａ、式Ｉ．ｂ．１、式Ｉ．ｂ．２、式Ｉ．ｃ、式Ｉ．ｄ、式Ｉ．ｅ、式Ｉ．ｆ、式Ｉ．ｇ、または式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量が、式Ｉ．ａの化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｂ．１の化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｂ．２の化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｃの化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｄの化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｅの化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｆの化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｇの化学成分であることを特徴とする。提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ｈの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉ．ａ．ｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉｉ、式Ｉ．ａ．ｉｖ、式Ｉ．ａ．ｖ、式Ｉ．ａ．ｖｉ、式Ｉ．ａ．ｖｉｉ、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉ、式Ｉ．ａ．ｉｘ、式Ｉ．ｂ．１．ｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖ、式Ｉ．ｂ．１．ｖ、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖ、式Ｉ．ｂ．２．ｖ、及び式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの化学成分であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量以上が、式Ｉの同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉの同じ立体異性体の化学成分であることを特徴とする。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量が、式Ｉの同じ立体異性体の化学成分である。
いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉ、式Ｉ．ａ．ｉｉｉ、式Ｉ．ａ．ｉｖ、式Ｉ．ａ．ｖ、式Ｉ．ａ．ｖｉ、式Ｉ．ａ．ｖｉｉ、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉ、または式Ｉ．ａ．ｉｘの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｖｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ａ．ｉｘの構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉ、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖ、式Ｉ．ｂ．１．ｖ、または式Ｉ．ｂ．１．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．１．ｖｉの構造を有する。
いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉ、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖ、式Ｉ．ｂ．２．ｖ、または式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉｉの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｉｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖの構造を有する。いくつかの実施形態において、式Ｉの立体異性体は、式Ｉ．ｂ．２．ｖｉの構造を有する。
いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、５０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、７０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、８０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、８５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９０％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９５％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９６％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９７％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９８％（ｗ／ｗ）である。いくつかの実施形態において、当該第三の閾値量は、９９％（ｗ／ｗ）である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ａ．ｉ
の化学成分であり、この中で、当該第三の閾値量は、５０％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和であり、
当該組成物は、当該組成物中に式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ａ．ｉｉ
の化学成分であり、この中で、当該第三の閾値量は、５０％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．１．ｉ
の化学成分であり、この中で当該第三の閾値量は、５０％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ
の化学成分であり、この中で当該第三の閾値量は、５０％であることを特徴とする。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．２．ｉ
の化学成分であり、この中で当該第三の閾値量、５０％である。
いくつかの実施形態において、本発明は、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を提供し、当該化学成分の各々は、式Ｉ
の化合物、その医薬として許容され得る塩、その溶媒和物、またはその医薬として許容され得る塩の溶媒和物であり、
当該組成物は、当該組成物中の式Ｉの化学成分の総量の第三の閾値量を超えるものが、式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ
の化学成分であり、この中で当該第三の閾値量は、５０％である。
いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、５０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、７０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、８０％である。いくつかの実施形態において、当該第二の閾値量は、９５％である。
（ｍＲＮＡのような作用因子の送達のためのリポソーム）
とりわけ、本発明は、治療薬の送達のための、本明細書に説明する脂質化合物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、提供する組成物は、リポソームのような脂質系ナノ粒子である。本明細書で使用する場合、「リポソーム」という用語は、任意の層状、多層、または固体の脂質ナノ粒子ベシクルを指す。典型的には、本明細書で使用するリポソームは、１個以上の脂質を混合することによって、または１個以上の脂質及びポリマー（複数可）を混合することによって形成することができる。したがって、本明細書で使用する場合の「リポソーム」という用語は、脂質及びポリマー系ナノ粒子の両方を包含する。特に、本発明によるリポソームは、本明細書に説明する脂質化合物をカチオン性脂質構成要素として組み込む。非限定例として、本発明によるリポソームには、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物を含む。適切なリポソームは、第二の若しくは追加のカチオン性脂質、ヘルパー脂質（例えば、非カチオン性脂質及び／またはコレステロール系脂質）、ＰＥＧ修飾した脂質、及び／またはポリマーも含有することがある。
いくつかの実施形態において、カチオン性脂質（複数可）（例えば、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物）は、当該リポソームの約３０〜５０％（例えば、約３０〜４５％、約３０〜４０％、約３５〜５０％、約３５〜４５％、または約３５〜４０％）のモル比を構成する。いくつかの実施形態において、当該カチオン性脂質（例えば、式Ｉの１つ以上の化学成分を含む組成物）は、当該リポソームの約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％のモル比を構成する。いくつかの実施形態において、当該リポソームは、第二の脂質または追加のカチオン性脂質を含む。
（第二のまたは追加のカチオン性脂質）
いくつかの実施形態において、リポソームは、第二のまたは追加のカチオン性脂質を含むことがある。本明細書で使用する場合、「カチオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨのような選択したｐＨで正味の正の電荷を有するいくつかの脂質種のうちのいずれかを指す。いくつかのカチオン性脂質は、文献に説明されており、その多くは市販されている。本発明の組成物及び方法において使用するのに特に適したカチオン性脂質には、その各々が全体として参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開ＷＯ２０１０／０５３５７２（及び特に段落［００２２５］において説明されているＣ１２〜２００）、ＷＯ２０１２／１７０９３０及びＷＯ２０１３０６３４６８に説明されているものを含む。ある実施形態において、本発明の組成物及び方法は、例えば、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−６−（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）テトラコサ−１５，１８−ジエン−１−アミン（ＨＧＴ５０００）、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−６−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）テトラコサ−４，１５，１８−トリエン−１−アミン（ＨＧＴ５００１）、及び（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−６−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）テトラコサ−５，１５，１８−トリエン−１−アミン（ＨＧＴ５００２）のような、２０１３年３月２９日出願の国際特許公開第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４６０２、公開番号ＷＯ２０１３／１４９１４０（参照により本明細書に組み込まれる）に説明されているイオン化可能なカチオン性脂質を含む脂質ナノ粒子を採用する。
いくつかの実施形態において、第二のまたは追加のカチオン性脂質Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリドまたは「ＤＯＴＭＡ」が使用される（Ｆｅｉｇｎｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４，７４１３（１９８７）、米国特許第４，８９７，３５５号）。ＤＯＴＭＡは、単独で製剤することができ、あるいは、中性脂質であるジオレイルホスファチジル−エタノールアミン若しくは「ＤＯＰＥ」または他のカチオン性若しくは非カチオン性脂質とともにリポソーム転移ベシクルまたは脂質ナノ粒子へと組み込むことができ、このようなリポソームは、標的細胞への核酸の送達を亢進するために使用することができる。他の適切なカチオン性脂質には、例えば、５−カルボキシスペルミルグリシンジオクタデシルアミンまたは「ＤＯＧＳ」、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミン−カルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムまたは「ＤＯＳＰＡ」（Ｂｅｈｒら．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，６９８２（１９８９）、米国特許第５，１７１，６７８号、米国特許第５，３３４，７６１号）、ｌ，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパンまたは「ＤＯＤＡＰ」、ｌ，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパンまたは「ＤＯＴＡＰ」を含む。追加の例示的なカチオン性脂質には、ｌ，２−ジステアリルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパンまたは「ＤＳＤＭＡ」、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパンまたは「ＤＯＤＭＡ」、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパンまたは「ＤＬｉｎＤＭＡ」、１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパンまたは「ＤＬｅｎＤＭＡ」、Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリドまたは「ＤＯＤＡＣ」、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミドまたは「ＤＤＡＢ」、Ｎ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミドまたは「ＤＭＲＩＥ」、３−ジメチルアミノ−２−（コレスタ−５−エン−３−ベータ−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパンまたは「ＣＬｉｎＤＭＡ」、２−[５’−（コレスタ−５−エン−３−ベータ−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−１−（シス，シス−９’，１−２’−オクタデカジエノキシ）プロパンまたは「ＣｐＬｉｎＤＭＡ」、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミンまたは「ＤＭＯＢＡ」、１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパンまたは「ＤＯｃａｒｂＤＡＰ」、２，３−ジリノレオイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピルアミンまたは「ＤＬｉｎＤＡＰ」、ｌ，２−Ｎ，Ｎ’−ジリノレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパンまたは「ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ」、ｌ，２−ジリノレオイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパンまたは「ＤＬｉｎＣＤＡＰ」、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］ジオキソランまたは「ＤＬｉｎ−−ＤＭＡ」、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［ｌ，３］−ジオキソランまたは「ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ」、及び２−（２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）−ｌ，３−ジオキソラン−４−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）（ＷＯ２０１０／０４２８７７、Ｓｅｍｐｌｅら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８：１７２〜１７６（２０１０）を参照されたい）、あるいはこれらの混合物も含む（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ．，ら，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０７：２７６〜２８７（２００５）、Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，ＤＶ．，ら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（８）：１００３〜１００７（２００５）、ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／１２１３４８Ａ１）。
いくつかの実施形態において、当該第二のまたは追加のカチオン性脂質は、ＸＴＣ（２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン）、ＭＣ３（（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）−ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノアート）、ＡＬＮＹ−１００（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，２−ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニル）テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−アミン））、ＮＣ９８−５（４，７，１３−トリス（３−オキソ−３−（ウンデシルアミノ）プロピル）−Ｎ１，Ｎ１６−ジウンデシル−４，７，１０，１３−テトラアザヘキサデカン−１，１６−ジアミド）、ＤＯＤＡＰ（１，２−ジオレイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン）、ＨＧＴ４００３（その教示が全体として参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２／１７０８８９）、ＩＣＥ（その教示が全体として参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１１／０６８８１０）、ＨＧＴ５０００（その教示が全体として参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開ＷＯ／２０１３／１４９１４０）若しくはＨＧＴ５００１（シスまたはトランス）（ＷＯ／２０１３／１４９１４０）、ＷＯ２０１０／０５３５７２において開示されるもののようなアミノアルコールリピドイド、ＤＯＴＡＰ（１，２−ジオレイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）、ＤＯＴＭＡ（１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）、ＤＬｉｎＤＭＡ（Ｈｅｙｅｓ，Ｊ．；Ｐａｌｍｅｒ，Ｌ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｋ．；ＭａｃＬａｃｈｌａｎ，Ｉ．「Ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｉｄ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ」Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．２００５，１０７，２７６〜２８７）、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ（Ｓｅｍｐｌｅ，Ｓ．Ｃ．ら．「Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｃａｔｉｏｎｉｃ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｓｉＲＮＡ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０，２８，１７２〜１７６）、Ｃ１２−２００（Ｌｏｖｅ，Ｋ．Ｔ．ら．「Ｌｉｐｉｄ−ｌｉｋｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｌｏｗ−ｄｏｓｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ」ＰＮＡＳ ２０１０，１０７，１８６４〜１８６９）から選択することがある。
（非カチオン性／ヘルパー脂質）
いくつかの実施形態において、提供するリポソームは、１個以上の非カチオン性（「ヘルパー」）脂質を含有している。本明細書で使用する場合、「非カチオン性脂質」という句は、任意の中性脂質、双性イオン性脂質またはアニオン性脂質を指す。本明細書で使用する場合、「アニオン性脂質」という句は、生理学的ｐＨのような選択したＨで正味の負の電荷を保有するいくつかの脂質種のうちのいずれかを指す。非カチオン性脂質には、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＤＯＰＥ−マル）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６−Ｏ−モノメチルＰＥ、１６−Ｏ−ジメチルＰＥ、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、またはこれらの混合物を含むが、それらに限定しない。
いくつかの実施形態において、このような非カチオン性脂質は単独で使用してもよいが、好ましくは、他の賦形剤、例えば、カチオン性脂質と併用する。いくつかの実施形態において、当該非カチオン性脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約５％〜約９０％、または約１０％〜約７０％のモル比を含むことがある。いくつかの実施形態において、非カチオン性脂質は、中性脂質、すなわち、当該組成物が製剤及び／または投与される条件下で正味の電荷を保有していない脂質である。いくつかの実施形態において、リポソーム中の非カチオン性脂質の百分率は、５％超、１０％超、２０％超、３０％超、または４０％超であることがある。
（コレステロール系脂質）
いくつかの実施形態において、提供するリポソームは、１個以上のコレステロール系脂質を含む。例えば、適切なコレステロール系カチオン性脂質には、例えば、ＤＣ−Ｃｈｏｉ（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−エチルカルボキサミドコレステロール）、１，４−ビス（３−Ｎ−オレイルアミノ−プロピル）ピペラジン（Ｇａｏら．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９，２８０（１９９１）、Ｗｏｌｆら．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２３，１３９（１９９７）、米国特許第５，７４４，３３５号）、またはＩＣＥを含む。いくつかの実施形態において、コレステロール系脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約２％〜約３０％、または約５％〜約２０％のモル定量を含むことがある。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子中のコレステロール系脂質の百分率は、５％超、１０％超、２０％超、３０％超、または４０％超であることがある。
（ＰＥＧ化脂質）
いくつかの実施形態において、提供するリポソームは、１個以上のＰＥＧ化脂質を含む。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾したリン脂質及び、Ｎ−オクタノイル−スフィンゴシン−１−［スクシニル（メトキシポリエチレングリコール）−２０００］（Ｃ８ ＰＥＧ−２０００セラミド）を含む誘導体化したセラミド（ＰＥＧ−ＣＥＲ）のような誘導体化脂質の使用も、カチオン性のうちの１個以上と組み合わせて、及びいくつかの実施形態においては、リポソームを含む他の脂質とともに、本発明によって熟慮される。熟慮したＰＥＧ修飾した脂質には、Ｃ６〜Ｃ２０の長さのアルキル鎖（複数可）を有する脂質へ共有結合した長さ最大５ｋＤａのポリエチレングリコール鎖を含むが、これに限定しない。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ修飾した脂質またはＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ化コレステロールまたはＰＥＧ−２Ｋである。このような構成要素の付加は、複合体凝集を防止することがあり、循環寿命を延長して標的細胞への脂質−核酸組成物の送達を高めるための手段も提供することがあり（Ｋｌｉｂａｎｏｖら．（１９９０）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２６８（１）：２３５〜２３７）、またはインビボでの処方から脱して迅速に交換するよう選択されることがある（米国特許第５，８８５，６１３号を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、特に有用な交換可能な脂質は、より短いアシル鎖（例えば、Ｃ１４またはＣ１８）を有するＰＥＧ−セラミドである。本発明のＰＥＧ修飾したリン脂質及び誘導体化脂質は、リポソーム中に存在する総脂質の約０％〜約１５％、約０．５％〜約１５％、約１％〜約１５％、約４％〜約１０％、または約２％のモル比を含むことがある。
種々の実施形態によると、第二のまたは追加のカチオン性脂質、非カチオン性脂質及び／または脂質ナノ粒子を含むＰＥＧ修飾した脂質の選択、ならびに互いに対するこのような脂質の相対的なモル比は、選択した脂質（複数可）の特徴、企図した標的細胞の性質、送達することになっているｍＲＮＡの特徴に基づいている。追加の考慮には、例えば、アルキル鎖の飽和、ならびに選択した脂質（複数可）の大きさ、電荷、ｐＨ、ｐＫａ、膜融合性及び毒性を含む。したがって、当該モル比は、適宜調整してもよい。いくつかの実施形態において、リポソーム中のＰＥＧ修飾した脂質の百分率は、１％超、２％超、５％超、１０％超、または１５％超であることがある。
（ポリマー）
いくつかの実施形態において、本発明による適切なリポソームにはさらに、説明したような１個以上のカチオン性脂質及び、いくつかの実施形態において、本明細書に説明する種々の脂質を含む他の担体と組み合わせたポリマーを含む。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書で使用するようなリポソーム送達ビヒクルは、ナノ粒子を含有するポリマーも包含する。適切なポリマーには、例えば、ポリアクリラート、ポリアルキルシアノアクリラート、ポリラクチド、ポリラクチド−ポリグリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、デキストラン、アルブミン、ゼラチン、アルギナート、コラーゲン、キトサン、シクロデキストリン、プロタミン、ＰＥＧ化プロタミン、ＰＬＬ、ＰＥＧ化ＰＬＬ及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を含んでもよい。ＰＥＩが存在する場合、当該ＰＥＩは、１０〜４０ｋＤａに及ぶ分子量の分枝鎖ＰＥＩ、例えば、２５ｋＤａ分枝鎖ＰＥＩ（Ｓｉｇｍａ ＃４０８７２７）であってもよい。
（治療薬）
本発明は、任意の治療薬を送達するために使用してもよい。具体的には、対象へ投与することになっている任意の治療薬は、本明細書に説明する複合体、ピコ粒子、ナノ粒子、マイクロ粒子、ミセル、またはリポソームを用いて送達してもよい。当該薬は、有機分子（例えば、治療薬、薬剤）、無機分子、核酸、タンパク質、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ターゲティング薬、同位体標識した有機分子若しくは無機分子、ワクチン、免疫学的作用因子などであってもよい。本発明のある実施形態において、送達することになっている作用因子は、作用因子の混合物であってもよい。
ある実施形態において、治療薬は、医薬活性を有する有機分子、例えば、薬剤である。ある実施形態において、当該薬剤は、抗生物質、抗ウイルス薬、麻酔薬、ステロイド薬、抗炎症薬、抗新生物薬、抗癌薬、抗原、ワクチン、抗体、うっ血除去薬、降圧薬、鎮静薬、受胎調節薬、プロゲステロン作用薬、抗コリン作用薬、鎮痛薬、抗うつ薬、抗精神病薬、Ｉ３−アドレナリン受容体遮断薬、利尿薬、心血管系賦活薬、血管作動薬、非ステロイド性抗炎症薬、栄養剤などである。
診断薬には、気体、金属、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＡＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影法、ｘ線、蛍光透視、及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において使用する市販のイメージング剤、ならびに造影剤を含む。ＭＲＩにおける造影剤としての使用に適した材料の例としては、ガドリニウムキレート剤、ならびに鉄、マグネシウム、マンガン、銅、及びクロムが挙げられる。ＣＡＴ及びｘ線撮像に有用な材料の例としては、ヨウ素系材料が挙げられる。
治療薬及び予防薬には、抗生物質、栄養補助剤、及びワクチンを含むが、これらに限定しない。ワクチンは、単離したタンパク質またはペプチド、失活した生体及びウイルス、死滅した生体及びウイルス、遺伝的に変化した生体またはウイルス、及び細胞抽出物を含むが、これらに限定しない。
（ポリヌクレオチド）
本発明は、任意のポリヌクレオチドを送達するために使用することがある。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）である。ＲＮＡｉの現象は、例えば次の参考文献、すなわち、Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５：１８８、Ｆｉｒｅら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ，３９１：８０６、Ｔａｂａｒａら，１９９９，Ｃｅｌｌ，９９：１２３、Ｈａｍｍｏｎｄら，Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０４：２９３、Ｚａｍｏｒｅら，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：２５、Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ，２００７，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，８：４６９、ならびにＭｏｒｒｉｓ及びＲｏｓｓｉ，２００６，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１３：５５３においてより詳細に考察されている。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）である。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ（短鎖干渉ＲＮＡ）である。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、ｓｈＲＮＡ（短鎖ヘアピンＲＮＡ）である。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）である。マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、特に発生中の遺伝子発現を調節するのを助ける、長さ約２１〜２３ヌクレオチドのゲノムでコードされた非コードＲＮＡである。例えば、Ｂａｒｔｅｌ，２００４，Ｃｅｌｌ，１１６：２８１、Ｎｏｖｉｎａ及びＳｈａｒｐ，２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４３０：１６１、ならびに米国特許公開２００５／００５９００５を参照されたく、また、Ｗａｎｇ及びＬｉ，２００７，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，１２：３９７５ならびにＺｈａｏ，２００７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，３２：１８９においても総説されている。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、アンチセンスＲＮＡである。
ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、アンチセンス薬またはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として提供することがある。例えば、Ｆｉｒｅら，Ｎａｔｕｒｅ ３９１：８０６〜８１１，１９９８を参照されたい。アンチセンス療法は、例えば、細胞条件下で細胞ｍＲＮＡ及び／若しくはゲノムＤＮＡ、またはこれらの突然変異体と特異的にハイブリッド形成し、例えば結合して、コードしたタンパク質の発現を、例えば、転写及び／または翻訳を阻害することによって阻害する、例えば一本鎖若しくは二本鎖のオリゴヌクレオチドまたはこれらの誘導体の投与またはインサイツ提供を含むよう意味する。例えば、Ｃｒｏｏｋｅ「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇｓ」Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４８９（１）：３１〜４４，１９９９、Ｃｒｏｏｋｅ「Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇｓ」Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．１０（２）：１２３〜１２６，考察１２７，２０００、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅｓ ３１３〜３１４，１９９９を参照されたい。当該結合は、従来の塩基対相補性によることがあり、または、例えば、二本鎖ヘリックスの主溝における特異的な相互作用を通じての、ＤＮＡ二重鎖への結合の場合におけることがある。例えば、Ｃｈａｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７５（４）：２６７〜２８２，１９９７を参照されたい。
いくつかの実施形態において、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、及び／またはＲＮＡｉは、多数の入手可能なアルゴリズムのうちの１つ以上を用いて設計及び／または予測することができる。ほんの少数に過ぎない例を与えるために、次の資源、すなわち、Ａｌｎｙｌｕｍオンライン、Ｄｈａｒｍａｃｏｎオンライン、ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅオンライン、Ｍｏｌｅｃｕｌａオンライン、Ａｍｂｉｏｎオンライン、ＢｉｏＰｒｅｄｓｉオンライン、ＲＮＡｉウェブオンライン、Ｃｈａｎｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅオンライン、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎオンライン、ＬｅｎｔｉＷｅｂオンラインＧｅｎＳｃｒｉｐｔオンライン、プロトコルオンライン、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら，２００４，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２２：３２６、Ｎａｉｔｏら，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３４：Ｗ４４８、Ｌｉら， ２００７，ＲＮＡ，１３：１７６５、Ｙｉｕら，２００５，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ, ２１：１４４、及びＪｉａら，２００６，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，７：２７１で認められるアルゴリズムを利用して、ポリヌクレオチドを設計及び／または予測することができる。
当該ポリヌクレオチドは、任意の大きさまたは配列であってもよく、一本鎖または二本鎖であってもよい。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、長さ１００塩基対超である。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、長さ１０００塩基対超であり、長さ１０，０００塩基対超であることがある。当該ポリヌクレオチドは、当該技術分野において公知の任意の手段によって提供されてもよい。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、組換え技術を用いて操作されている。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ニューヨーク，１９９９）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，及びＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：１９８９）を参照されたい。当該ポリヌクレオチドは、天然源から得て、天然に通常認められる混入している構成要素から精製することもある。当該ポリヌクレオチドは、実験室で化学的に合成することもある。ある実施形態において、当該ポリヌクレオチドは、標準的な固相化学を用いて合成する。
当該ポリヌクレオチドは、化学的または生物学的な手段によって修飾されることがある。ある実施形態において、これらの修飾は、当該ポリヌクレオチドの安定性亢進をもたらす。修飾には、メチル化、リン酸化、末端キャッピングなどを含む。
（ｍＲＮＡ）
本発明は、任意のｍＲＮＡを送達するために使用することができる。ｍＲＮＡは典型的には、ＤＮＡからリボソームへと情報を運搬するＲＮＡの種類と考えられている。ｍＲＮＡの存在は通常、非常に短時間であり、プロセシング及び翻訳に続く分解を含む。典型的には、真核生体において、ｍＲＮＡプロセシングは、Ｎ末（５’）端上にある「キャップ」及びＣ末（３’）端上にある「尾部」の付加を含む。典型的なキャップは、第一の転写されたヌクレオチドに対する５’−５’−三リン酸結合を通じて結合するグアノシンである、７−メチルグアノシンキャップである。当該キャップの存在は、たいていの真核細胞において認められるヌクレアーゼに対する耐性を提供するうえで重要である。当該尾部は典型的には、ポリアデニリル部分が当該ｍＲＮＡ分子の３’末端へ付加されるポリアデニル化事象である。この「尾部」の存在は、エキソヌクレアーゼ分解から当該ｍＲＮＡを防護するよう機能する。伝令ＲＮＡは典型的には、リボソームによって、タンパク質を構成する一連のアミノ酸へと翻訳される。
１個以上のペプチド（例えば、タンパク質）またはペプチド断片へと翻訳することのできる任意のｍＲＮＡは、本発明の範囲内として熟慮される。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、１個以上の天然ペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、１個以上の修飾されたまたは非天然のペプチドをコードする。
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞内タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞質ゾルタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、アクチン細胞骨格と会合するタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞膜と会合するタンパク質をコードする。いくつかの具体的な実施形態において、ｍＲＮＡは、膜貫通タンパク質をコードする。いくつかの具体的な実施形態において、ｍＲＮＡは、イオンチャネルタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、核周囲タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、核タンパク質をコードする。いくつかの具体的な実施形態において、ｍＲＮＡは、転写因子をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、シャペロンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞内酵素（例えば、尿素周期またはリソソーム貯蔵代謝障害と関係する酵素をコードするｍＲＮＡ）をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞機序、ＤＮＡ修復、転写及び／または翻訳に関与するタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞外タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞外マトリックスと関係するタンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、分泌タンパク質をコードする。具体的な実施形態において、本発明の組成物及び方法において使用するｍＲＮＡは、周辺の細胞外流体へと１個以上の標的細胞によって排出または分泌する機能的タンパク質または酵素を発現するために使用することがある（例えば、ホルモン及び／または神経伝達物質をコードするｍＲＮＡ）。
（ｍＲＮＡの合成）
本発明によるｍＲＮＡは、種々の公知の方法のうちのいずれかにより合成してもよい。例えば、本発明によるｍＲＮＡは、インビトロ転写（ＩＶＴ）を介して合成してもよい。簡潔には、ＩＶＴは典型的には、プロモーター、リボヌクレオチド三リン酸のプール、ＤＴＴ及びマグネシウムイオンを含んでもよい緩衝系、ならびに適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）、ＤＮアーゼＩ、ピロホスファターゼ、及び／またはＲＮアーゼ阻害薬を含有する直鎖または環状ＤＮＡテンプレートを用いて実施する。実際の条件は、具体的な応用により変化するであろう。
いくつかの実施形態において本発明によるｍＲＮＡの調製のために、ＤＮＡテンプレートは、インビトロで転写される。適切なＤＮＡテンプレートは典型的には、プロモーター、例えば、Ｔ３プロモーター、Ｔ７プロモーターまたはＳＰ６プロモーターを、インビトロでの転写に続く所望のｍＲＮＡ及び末端シグナルに所望のヌクレオチド配列のために有する。
本発明による所望のｍＲＮＡ配列（複数可）は、標準的な方法を用いて判定して、ＤＮＡテンプレートへと組み込んでもよい。例えば、所望のアミノ酸配列（例えば、酵素配列）から出発して、事実上の逆翻訳は、変性した遺伝暗号に基づいて実施する。次に、最適化アルゴリズムは、適切なコドンの選択に使用してもよい。典型的には、Ｇ／Ｃ含有量は、一方では最高の起こり得るＧ／Ｃ含有量を達成するために最適化することができ、もう一方ではコドンの使用によりｔＲＮＡの頻度を最良に可能に考慮する。最適化したＲＮＡ配列は、例えば、適切なディスプレイ装置の支援により、元の（野生型）配列と比較して、確立及び表示することができる。二次構造は、ＲＮＡの特性またはここに領域を安定化及び不安定化するのを算出するために分析することもできる。
（修飾されたｍＲＮＡ）
いくつかの実施形態において、本発明によるｍＲＮＡは、非修飾のまたは修飾されたｍＲＮＡとして合成してもよい。典型的には、ｍＲＮＡは、安定性を高めるために修飾される。ｍＲＮＡの修飾には例えば、ＲＮＡのヌクレオチドの修飾を含むことができる。本発明による修飾されたｍＲＮＡにはしたがって、例えば、骨格修飾、糖修飾または塩基修飾を含むことができる。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、プリン類（アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ））またはピリミジン類（チミジン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ））を含む天然のヌクレオチド及び／またはヌクレオチド類似体（修飾されたヌクレオチド）から、ならびに１−メチル−アデニン、２−メチル−アデニン、２−メチルチオ−Ｎ−６−イソペンテニル−アデニン、Ｎ６−メチル−アデニン、Ｎ６−イソペンテニル−アデニン、２−チオ−シトシン、３−メチル−シトシン、４−アセチル−シトシン、５−メチル−シトシン、２，６−ジアミノプリン、１−メチル−グアニン、２−メチル−グアニン、２，２−ジメチル−グアニン、７−メチル−グアニン、イノシン、１−メチル−イノシン、プソイドウラシル（５−ウラシル）、ジヒドロ−ウラシル、２−チオ−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノ−メチル−２−チオ−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−ウラシル、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウラシル、５−メチル−２−チオ−ウラシル、５−メチル−ウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、５−メチルアミノメチル−ウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５’−メトキシカルボニルメチル−ウラシル、５−メトキシ−ウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、１−メチル−プソイドウラシル、ケウオシン、β−Ｄ−マンノシル−ケウオシン、ウイブトシン、ならびにホスホルアミダート、ホスホロチオアート、ペプチドヌクレオチド、メチルホスホン酸、７−デアザグアノシン、５−メチルシトシン及びイノシンのような、修飾されたヌクレオチド類似体またはプリン類及びピリミジン類の誘導体として合成してもよい。このような類似体の調製は、当業者に、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号、米国特許第４，４０１，７９６号、米国特許第４，４１５，７３２号、米国特許第４，４５８，０６６号、米国特許第４，５００，７０７号、米国特許第４，６６８，７７７号、米国特許第４，９７３，６７９号、米国特許第５，０４７，５２４号、米国特許第５，１３２，４１８号、米国特許第５，１５３，３１９号、米国特許第５，２６２，５３０号及び米国特許第５，７００，６４２号から公知であり、それらの開示は、全体として参照により組み込まれる。
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ（例えば、酵素をコードするｍＲＮＡ）は、ＲＮＡ骨格修飾を含有してもよい。典型的には、骨格修飾は、ＲＮＡ中に含有されるヌクレオチドの骨格のリン酸が化学的に修飾される修飾である。例示的な骨格修飾としては典型的には、メチルホスホン酸、メチルホスホルアミダート、ホスホルアミダート、ホスホロチオアート（例えば、シチジン５’−Ｏ−（１−チオリン酸））、ボラノリン酸、正に帯電したグアニジニウム基などが挙げられ、これは、他のアニオン基、カチオン基または中性基によってホスホジエステル結合を置き換えることによることを意味する。
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ（例えば、酵素をコードするｍＲＮＡ）は、糖修飾を含有してもよい。典型的な糖修飾は、２’−デオキシ−２'−フルオロ−オリゴリボヌクレオチド（２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン５’−三リン酸、２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン５’−三リン酸）、２’−デオキシ−２’−デアミン−オリゴリボヌクレオチド（２’−アミノ−２’−デオキシシチジン５’−三リン酸、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン５’−三リン酸）、２’−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−Ｃ−アルキルオリゴリボヌクレオチド（２’−Ｏ−メチルシチジン５’−三リン酸、２’−メチルウリジン５’−三リン酸）、２’−Ｃ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、及びこれらの異性体（２’−アラシチジン５’−三リン酸、２’−アラウリジン５’−三リン酸）、またはアジド三リン酸（２’−アジド−２’−デオキシシチジン５’−三リン酸、２’−アジド−２’−デオキシウリジン５’−三リン酸）からなる群から選択される糖修飾を含むがこれらに限定しない糖修飾を含有するヌクレオチドの糖の化学的修飾である。
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ（例えば、酵素をコードするｍＲＮＡ）は、ヌクレオチドの塩基の修飾（塩基修飾）を含有することがある。塩基修飾を含有する修飾されたヌクレオチドは、塩基修飾されたヌクレオチドとも呼ぶ。このような塩基修飾されたヌクレオチドの例としては、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド５’−三リン酸、２−アミノアデノシン５’−三リン酸、２−チオシチジン５’−三リン酸、２−チオウリジン５’−三リン酸、４−チオウリジン５’−三リン酸、５−アミノアリルシチジン５’−三リン酸、５−アミノアリル−ウリジン５’−三リン酸、５−ブロモシチジン５’−三リン酸、５−ブロモウリジン５’−三リン酸、５−ヨードシチジン５’−三リン酸、５−ヨードウリジン５’−三リン酸、５−メチルシチジン５’−三リン酸、５−メチルウリジン５’−三リン酸、６−アザシチジン５’−三リン酸、６−アザウリジン５’−三リン酸、６−クロロプリンリボシド５’−三リン酸、７−デアザアデノシン５’−三リン酸、７−デアザグアノシン５’−三リン酸、８−アザアデノシン５’−三リン酸、８−アジドアデノシン５’−三リン酸、ベンズイミダゾールリボシド５’−三リン酸、Ｎ１−メチルアデノシン５’−三リン酸、Ｎ１−メチルグアノシン５’−三リン酸、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｏ６−メチルグアノシン５’−三リン酸、プソイドウリジン５’−三リン酸、ピューロマイシン５’−三リン酸またはキサントシン５’−三リン酸が挙げられるが、これらに限定しない。
（キャップ構造）
典型的には、ｍＲＮＡ合成には、Ｎ末（５’）端上にある「キャップ」及びＣ末（３’）端上にある「尾部」の付加を含む。当該キャップの存在は、たいていの真核細胞において認められるヌクレアーゼに対する耐性を提供するうえで重要である。「尾部」の存在は、エキソヌクレアーゼ分解から当該ｍＲＮＡを防護するよう機能する。
したがって、いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ（例えば、酵素をコードするｍＲＮＡ）には、５’キャップ構造を含む。５’キャップは典型的には、次の通り付加する。まず、ＲＮＡ末端ホスファターゼは、５’ヌクレオチドから末端リン酸基のうちの１個を除去し、２個の末端リン酸を残し、次に、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）は、グアニリルトランスフェラーゼを介して末端リン酸へ付加し、５’５’５三リン酸結合を生じ、次に、グアニンの７−窒素はメチルトランスフェラーゼによってメチル化される。キャップ構造の例としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ及びＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇが挙げられるが、これらに限定しない。
いくつかの実施形態において、天然のキャップ構造は、第一の転写されたヌクレオチドの５’−末端へ三リン酸架橋を介して結合する７−メチルグアノシンを含み、結果的に、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎのジヌクレオチドキャップを生じ、式中、Ｎは任意のヌクレオシドである。インビボで、当該キャップは酵素で付加する。当該キャップは次に、核の中で付加し、酵素グアニリルトランスフェラーゼによって触媒される。ＲＮＡの５’末端への当該キャップの付加は、転写開始直後に生じる。当該末端ヌクレオシドは典型的には、グアノシンであり、その他のヌクレオチドすべてに対して逆方向であり、すなわち、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）ＧｐＮｐＮｐである。
インビトロでの転写によって生じるｍＲＮＡについて共通のキャップは、５’末端でキャップ構造を有するＲＮＡを得るためにインビトロでＴ７またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼを用いた転写においてジヌクレオチドキャップとして使用されたｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇである。キャッピングされたｍＲＮＡのインビトロでの合成のための支配的な方法は、転写開始因子としてｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（「ｍ７ＧｐｐｐＧ」）の形態の事前に形成されたジヌクレオチドを採用する。
今日まで、インビトロ翻訳実験において使用する通常の形態の合成ジヌクレオチドキャップは、逆転防止キャップ類似体（「ＡＲＣＡ」）または修飾されたＡＲＣＡであり、これは概して、２’または３’ＯＨ基が−ＯＣＨ３と置き換えられた修飾されたキャップ類似体である。
追加のキャップ類似体には、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７ＧｐｐｐＡ、ｍ７ＧｐｐｐＣ、非メチル化キャップ類似体（例えば、ＧｐｐｐＧ）、ジメチル化キャップ類似体（例えば、ｍ２，７ＧｐｐｐＧ）、トリメチル化キャップ類似体（例えば、ｍ２，２，７ＧｐｐｐＧ）、ジメチル化対称性キャップ類似体（例えば、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ）、または逆転防止キャップ類似体（例えば、ＡＲＣＡ、ｍ７、２’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７２’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ｄＧｐｐｐＧ及びこれらの四リン酸誘導体）を含むが、これらに限定しない（例えば、Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ，Ｊ．ら，「Ｎｏｖｅｌ ‘ａｎｔｉ−ｒｅｖｅｒｓｅ’ｃａｐ ａｎａｌｏｇｓ ｗｉｔｈ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ」，ＲＮＡ，９：１１０８〜１１２２（２００３）を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、適切なキャップは、三リン酸架橋を介して第一の転写されたヌクレオチドの５’−末端へ結合した７−メチルグアニル酸（「ｍ７Ｇ」）であり、結果的にｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎを生じ、式中Ｎは、任意のヌクレオシドである。本発明の実施形態において利用するｍ７Ｇキャップの好ましい実施形態は、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇである。
いくつかの実施形態において、当該キャップは、キャップ０構造である。キャップ０構造は、塩基１及び塩基２へ結合したリボースの２’−Ｏ−メチル残基を欠失している。いくつかの実施形態において、当該キャップは、キャップ１構造である。キャップ１構造は、塩基２における２’−Ｏ−メチル残基を有する。いくつかの実施形態において、当該キャップは、キャップ２構造である。キャップ２構造は、塩基２及び塩基３の両方へ結合した２’−Ｏ−メチル残基を有する。
種々のｍ７Ｇキャップ類似体は、当該技術分野で公知であり、この多くは市販されている。当該ｍ７Ｇキャップ類似体には、先に説明したｍ７ＧｐｐｐＧ、ならびにＡＲＣＡ３’−ＯＣＨ３キャップ類似体及び２’−ＯＣＨ３キャップ類似体を含む（Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ，Ｊ．ら，ＲＮＡ，９：１１０８〜１１２２（２００３））。本発明の複数の実施形態における使用のための追加のキャップ類似体には、Ｎ７−ベンジル酸ジヌクレオシド四リン酸類似体（Ｇｒｕｄｚｉｅｎ，Ｅ．ら，ＲＮＡ，１０：１４７９〜１４８７（２００４）において説明）、ホスホロチオアートキャップ類似体（Ｇｒｕｄｚｉｅｎ−Ｎｏｇａｌｓｋａ，Ｅ．ら，ＲＮＡ，１３：１７４５〜１７５５（２００７）において説明)、ならびに参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，０９３，３６７号及び第８，３０４，５２９号に説明されているキャップ類似体（ビオチン化キャップ類似体を含む）を含む。
（尾部構造）
典型的には、「尾部」の存在は、エキソヌクレアーゼ分解からｍＲＮＡを防護するよう機能する。ポリＡ尾部は、天然のメッセンジャー及び合成センスＲＮＡを安定化すると考えられている。それゆえ、ある実施形態において、長いポリＡ尾部は、ｍＲＮＡ分子へ付加することができ、したがって、当該ＲＮＡをより安定にすることができる。ポリＡ尾部は、種々の当該技術分野において認識されている技術を用いて付加することができる。例えば、長いポリＡ尾部は、ポリＡポリメラーゼを用いて合成のまたはインビトロで転写したＲＮＡへ付加することができる（Ｙｏｋｏｅら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：１２５２〜１２５６）。転写ベクターは、長いポリＡ尾部をコードすることもできる。加えて、ポリＡ尾部は、ＰＣＲ産物から直接転写によって付加することができる。ポリＡは、センスＲＮＡの３’末端へ、ＲＮＡリガーゼを用いて結合させてもよい（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：１９９１年版）を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ（例えば、酵素をコードするｍＲＮＡ）には、３’ポリ（Ａ）尾部構造を含む。典型的には、ポリＡ尾部の長さは、少なくとも約１０、５０、１００、２００、３００、４００少なくとも５００ヌクレオチドであることができる。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡの３’末端上にあるポリＡ尾部には、約１０〜３００アデノシンヌクレオチド（例えば、約１０〜２００アデノシンヌクレオチド、約１０〜１５０アデノシンヌクレオチド、約１０〜１００アデノシンヌクレオチド、約２０〜７０アデノシンヌクレオチド、または約２０〜６０アデノシンヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡには、３’ポリ（Ｃ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端上にある適切なポリＣ尾部には典型的には、約１０〜２００シトシンヌクレオチド（例えば、約１０〜１５０シトシンヌクレオチド、約１０〜１００シトシンヌクレオチド、約２０〜７０シトシンヌクレオチド、約２０〜６０シトシンヌクレオチド、または約１０〜４０シトシンヌクレオチド）を含む。当該ポリＣ尾部は、当該ポリＡ尾部へ付加してもよく、または当該ポリＡ尾部を置換してもよい。
いくつかの実施形態において、ポリＡ尾部またはポリＣ尾部の長さは、本発明の修飾されたセンスｍＲＮＡ分子の安定性、したがってタンパク質の転写を制御するために調整される。例えば、ポリＡ尾部の長さは、センスｍＲＮＡ分子の半減期に影響することができるので、ポリＡ尾部の長さはヌクレアーゼに対するｍＲＮＡの耐性レベルを修飾して、それにより、標的細胞におけるポリヌクレオチド発現及び／またはポリペプチド精製の時間経過を制御することができるよう調整することができる。
（５’及び３’非翻訳領域）
いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡには、５’及び／または３’非翻訳領域を含む。いくつかの実施形態において、５’非翻訳領域には、ｍＲＮＡの安定性または翻訳に影響する１個以上の配列、例えば、鉄応答配列を含む。いくつかの実施形態において、５’非翻訳領域は、長さ約５０ヌクレオチドと５００ヌクレオチドのあいだであってもよい。
いくつかの実施形態において、３’非翻訳領域には、ポリアデニル化シグナル、細胞中の位置に関するｍＲＮＡの安定性に影響するタンパク質についての結合部位、またはｍｉＲＮＡについての１個以上の結合部位のうちの１個以上を含む。いくつかの実施形態において、３’非翻訳領域は、長さ５０ヌクレオチドと５００ヌクレオチドの間またはそれより長くてもよい。
例示的な３’及び／または５’ＵＴＲ配列は、センスｍＲＮＡ分子の安定性を高めるために安定であるｍＲＮＡ分子（例えば、グロビン、アクチン、ＧＡＰＤＨ、チューブリン、ヒストン、またはクエン酸回路酵素）に由来することができる。例えば、５’ＵＴＲ配列には、ＣＭＶ最初期１（ＩＥ１）遺伝子の部分配列、または当該ヌクレアーゼ耐性を改善するための及び／または当該ポリヌクレオチドの半減期を改善するためのその断片を含んでもよい。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）をコードする配列、または当該ポ居りヌクレオチドをさらに安定化させるための当該ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の３’末端若しくは非翻訳領域に対するその断片の包含も熟慮される。概して、これらの修飾は、当該ポリヌクレオチドの修飾されていない対応物に対する当該ポ居りヌクレオチドの安定性及び／または薬物動態特性（例えば、半減期）を改善し、例えば、このようなポリヌクレオチドのインビボヌクレアーゼ消化に対する耐性を改善するためになされる修飾を含む。
種々の実施形態によると、任意の大きさのｍＲＮＡは、提供するリポソームによって封入してもよい。いくつかの実施形態において、提供するリポソームは、長さ約０．５ｋｂ、１ｋｂ、１．５ｋｂ、２ｋｂ、２．５ｋｂ、３ｋｂ、３．５ｋｂ、４ｋｂ、４．５ｋｂ、または５ｋｂよりも大きなｍＲＮＡを封入してもよい。
（リポソーム）
提供する組成物における使用のためのリポソームは、当該技術分野において現に公知の種々の技術によって調製することができる。例えば、多層ベシクル（ＭＬＶ）は、適切な溶媒中に脂質を溶解した後、溶媒を蒸発させて、容器の内側に薄膜を残すことによって、または噴霧乾燥によって適切な入れ物または容器の内壁上に選択した脂質を沈着させることによってのような、従来技術により調製してもよい。次に、水相を当該容器へボルテックス動作をしながら添加して、結果的にＭＬＶの形成を生じてもよい。単層ベシクル（ＵＬＶ）は次に、多層ベシクルの均質化、超音波処理または押出成形によって形成することができる。加えて、単層ベシクルは、洗浄剤除去技術によって形成することができる。
ある実施形態において、提供する組成物は、リポソームを含み、この中で、核酸、例えば、ｍＲＮＡのような作用因子は、リポソームの両表面上に会合しており、及び同じリポソーム内に封入されている。例えば、本発明の組成物の調製中に、カチオン性リポソームは、静電相互作用を通じて、ｍＲＮＡと会合してもよい。例えば、本発明の組成物の調製中に、カチオン性リポソームは、静電相互作用を通じてｍＲＮＡと会合してもよい。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法は、リポソーム中に封入したｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態において、当該１つ以上のｍＲＮＡ種は、同じリポソーム中に封入してもよい。いくつかの実施形態において、当該１つ以上のｍＲＮＡ種は、異なるリポソーム中に封入してもよい。いくつかの実施形態において、当該ｍＲＮＡは、１つ以上のリポソーム中に封入され、当該リポソームは、その脂質組成、脂質構成要素のモル比、大きさ、電荷（ゼータ電位）、ターゲティングリガンド及び／またはこれらの組み合わせにおいて異なっている。いくつかの実施形態において、当該１つ以上のリポソームは、異なる組成のカチオン性脂質、中性脂質、ＰＥＧ修飾した脂質及び／またはこれらの組み合わせを有してもよい。いくつかの実施形態において、当該１つ以上のリポソームは、当該リポソームを作製するのに使用する異なるモル比のカチオン性脂質、中性脂質、コレステロール及びＰＥＧ修飾した脂質を有してもよい。
リポソーム中への核酸（例えば、ｍＲＮＡ）のような所望の治療薬の組み込みの過程はしばしば、「ローディング」と呼ぶ。例示的な方法は、参照により本明細書に組み込まれるＬａｓｉｃら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，３１２：２５５〜２５８，１９９２において説明されている。リポソームに組み込まれた核酸は、リポソームの内部空間中に完全に若しくは部分的に位置し、リポソームの二重膜内でまたはリポソーム膜の外面と会合していてもよい。リポソームへの核酸の組み込みは、本明細書において「封入」とも呼び、この中で、当該核酸は、リポソームの内部空間内に完全に含有される。リポソームのような転移ベシクルへとｍＲＮＡを組み込む目的はしばしば、核酸及び／若しくは系を分解する酵素若しくは化学物質を含有することがある環境、または核酸の迅速な排出を引き起こす受容体から当該核酸を防護することである。したがって、いくつかの実施形態において、適切な送達ビヒクルは、当該送達ビヒクル中に含有されるｍＲＮＡの安定性を高めることができ、及び／または標的細胞若しくは組織へのｍＲＮＡの送達を容易にする。
（リポソームの大きさ）
本発明に従った適切なリポソームは、種々の大きさで作製してもよい。いくつかの実施形態において、提供するリポソームは、既に公知のｍＲＮＡ封入リポソームよりも小さく作製してもよい。いくつかの実施形態において、大きさの減少したリポソームは、ｍＲＮＡのより効率的な送達と関係している。適切なリポソームの大きさの選択は、標的細胞または標的組織の部位及び幾分かはリポソームが作製中である応用を考慮に入れてもよい。
いくつかの実施形態において、適切な大きさのリポソームは、ｍＲＮＡによってコードされる抗体の全身分配を容易にするよう選択される。いくつかの実施形態において、ある細胞または組織へのｍＲＮＡのトランスフェクションを制限することは所望であることがある。例えば、肝細胞を標的にするために、リポソームは、その寸法が肝臓の肝類洞を裏打ちする内皮層の開窓よりも小さくなるような大きさであってもよく、このような場合、リポソームは、標的肝細胞に到達するためにこのような内皮開窓を容易に貫通し得る。
あるいはまたは加えて、リポソームは、当該リポソームの寸法がある細胞または組織への分配を制限するまたは明らかに回避するのに十分な直径であるような大きさであってもよい。例えば、リポソームは、その寸法が、肝類洞を裏打ちする内皮層の開窓よりも大きくなり、それにより肝細胞へのリポソームの分配を制限するような大きさであってもよい。
いくつかの実施形態において、適切なリポソームは、約５００ｎｍ、４５０ｎｍ、４００ｎｍ、３５０ｎｍ、３００ｎｍ、２５０ｎｍ、２００ｎｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１１０ｎｍ、１００ｎｍ、９５ｎｍ、９０ｎｍ、８５ｎｍ、８０ｎｍ、７５ｎｍ、７０ｎｍ、６５ｎｍ、６０ｎｍ、５５ｎｍ、若しくは５０ｎｍまたはそれより小さな大きさを有する。いくつかの実施形態において、適切なリポソームは、約２５０ｎｍ以下（例えば、約２２５ｎｍ、２００ｎｍ、１７５ｎｍ、１５０ｎｍ、１２５ｎｍ、１００ｎｍ、７５ｎｍ、または５０ｎｍ以下）の大きさを有する。いくつかの実施形態において、適切なリポソームは、約１０〜２５０ｎｍに及ぶ大きさを有する（例えば、約１０〜２２５ｎｍ、１０〜２００ｎｍ、１０〜１７５ｎｍ、１０〜１５０ｎｍ、１０〜１２５ｎｍ、１０〜１００ｎｍ、１０〜７５ｎｍ、または１０〜５０ｎｍに及ぶ）。いくつかの実施形態において、適切なリポソームは、約１００〜２５０ｎｍに及ぶ大きさを有する（例えば、約１００〜２２５ｎｍ、１００〜２００ｎｍ、１００〜１７５ｎｍ、１００〜１５０ｎｍに及ぶ）。いくつかの実施形態において、適切なリポソームは、約１０〜１００ｎｍに及ぶ大きさを有する（例えば、約１０〜９０ｎｍ、１０〜８０ｎｍ、１０〜７０ｎｍ、１０〜６０ｎｍ、または１０〜５０ｎｍに及ぶ）。
当該技術分野で公知の種々の代替法は、リポソームの集団の分粒に利用可能である。１つのこのような分粒法は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，７３７，３２３号において説明されている。浴またはプローブ超音波処理のいずれかによるリポソーム懸濁液の超音波処理は、直径約０．０５ミクロン未満の小さなＵＬＶまで漸次的な大きさの減少を生じる。均質化は、大きなリポソームを小さなリポソームへと断片化するために剪断エネルギーに頼る別法である。典型的な均質化手順において、ＭＬＶは、選択したリポソームの大きさ、典型的には約０．１ミクロンと０．５ミクロンの間が観察されるまで、標準的なエマルションホモジナイザーを通じて再循環する。リポソームの大きさは、参照により本明細書に組み込まれるＢｌｏｏｍｆｉｅｌｄ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１０：４２１〜１５０（１９８１）において説明されるような準電光散乱（ｑｕａｓｉ−ｅｌｅｃｔｒｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）（ＱＥＬＳ）によって測定してもよい。平均リポソーム径は、形成されたリポソームの超音波処理によって減少することがある。間欠的な超音波処理周期は、効率的なリポソーム合成を誘導するためにＱＥＬＳ評価を用いて変化させてもよい。
（医薬組成物）
核酸、例えば、ｍＲＮＡのような作用因子の送達、及び／またはｍＲＮＡのインビボでの発現を容易にするために、リポソームのような送達ビヒクルは、１つ以上の追加の核酸、担体、ターゲティングリガンド若しくは安定化試薬と組み合わせて、または当該送達ビヒクルと混合する薬理学的組成物中で製剤することができる。薬剤の製剤及び投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，ペンシルバニア州イーストン市，最新版において認められ得る。
核酸、例えば、ｍＲＮＡのような提供するリポソーム封入薬、及びこれを含有する組成物は、対象の臨床的容態、投与の部位及び方法、投与計画、対象の年齢、性別、体重及び陶業の臨床医と関連する他の因子を考慮に入れて、現行の医療実施に従って投与及び投薬してもよい。本明細書の目的のための「有効量」は、実験的臨床研究、薬理学的、臨床学的及び医学的分野における当業者に公知のような関連する考慮によって判断されてもよい。いくつかの実施形態において、投与する量は、症状の少なくともいくつかの安定化、改善または除去、及び当業者によって疾患の進行、退行または改善の適切な目安として選択される他の指標を達成するのに有効である。例えば、適切な量及び投薬計画は、少なくとも一過性タンパク質（例えば、酵素）産生を引き起こすものである。
適切な投与経路には、例えば、経口投与、直腸投与、膣投与、経粘膜投与、気管内投与若しくは吸入投与を含む肺投与、または腸投与；皮内注射、経皮（局所）注射、筋肉内注射、皮下注射、髄内注射、ならびに髄腔内投与、直接的な心室内投与、静脈内投与、腹腔内投与及び／または鼻内投与を含む非経口送達を含む。
あるいはまたは加えて、核酸、例えば、ｍＲＮＡ及び本発明の組成物のようなリポソーム封入薬は、全身様式よりも局所様式で、例えば、標的組織への好ましくは徐放製剤における医薬組成物の直接的な注射を介して投与してもよい。局所送達は、標的とされる組織に応じて種々の方法で作用することができる。例えば、本発明の組成物を含有するエアゾールは吸入することができ（鼻送達、気管送達、または気管支送達）、本発明の組成物は、例えば損傷、疾患徴候、または疼痛の部位へと注射することができ、組成物は、経口適用、気管適用、または食道適用のためのロゼンジ剤において提供することができ、胃または小腸への投与のための液剤、錠剤またはカプセル剤で供給することができ、直腸適用または膣適用のために坐剤形態供給することができ、あるいはクリーム、ドロップ、またはさらには注射の使用によって眼へ送達することさえできる。治療用の分子またはリガンドと複合体形成した提供する組成物を含有する製剤は、例えば、植え込み部位から周辺細胞へと当該組成物が拡散できるポリマーまたは他の構造若しくは物質とともに外科的に投与することさえできる。あるいは、当該製剤は、ポリマーまたは支持体の使用なしで外科的に適用することができる。
いくつかの実施形態において、提供するリポソーム及び／または組成物は、当該リポソーム及び／または組成物が、作用因子、例えば当該リポソーム及び／または組成物中に含有するｍＲＮＡの延長放出に適している。このような延長放出組成物は、対象へ延長した投与間隔で対象へ簡便に投与してもよい。例えば、一実施形態において、本発明の組成物は、対象へ、１日２回、毎日または隔日投与される。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象へ、１週間に２回、１週間に１回、１０日間ごと、２週間ごと、３週間ごと、若しくはより好ましくは４週間ごと、１か月に１回、６週間ごと、８週間ごと、隔月、３か月ごと、４か月ごと、６か月ごと、８か月ごと、９か月ごとまたは毎年投与される。ｍＲＮＡを延長して経時的に送達または放出のいずれかをするためのデポー投与（例えば、筋肉内に、皮下的に、硝子体内に）のために製剤された組成物及びリポソームも熟慮される。好ましくは、採用する延長した放出手段は、安定性を高めるためにｍＲＮＡに対してなされる修飾と組み合わされる。
本明細書に開示したリポソームのうちの１つ以上を含む凍結乾燥した医薬組成物、ならびに例えばその教示が全体として参照により本明細書に組み込まれる２０１２年６月８日出願の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０４１６６３号。公開番号ＷＯ２０１２／１７０８８９において開示されるような組成物の使用についての関連方法も本明細書において熟慮される。例えば、本発明による凍結乾燥した医薬組成物は、投与前に再構成してもよく、またはインビボで再構成することができる。例えば、凍結乾燥した医薬組成物は、適切な剤形（例えば、ディスク、ロッドまたは膜のような皮内剤形）で製剤することができ、剤形が個体の体液によってインビボで経時的に再水和するよう投与することができる。
提供するリポソーム及び組成物は、任意の所望の組織へ投与してもよい。いくつかの実施形態において、作用因子、例えば、提供するリポソームまたは組成物によって送達されるｍＲＮＡは、当該リポソーム及び／または組成物が投与された組織において発現する。いくつかの実施形態において、送達されるｍＲＮＡは、当該リポソーム及び／または組成物が投与された組織とは異なる組織において発現する。送達されたｍＲＮＡが送達及び／または発現し得る例示的な組織としては、肝臓、腎臓、心臓、脾臓、血清、脳、骨格筋、リンパ節、皮膚、及び／または脳脊髄液が挙げられるが、これらに限定しない。
種々の実施形態によると、送達される作用因子、例えば、ｍＲＮＡの発現のタイミングは、特定の医学的需要に適するよう調整することができる。いくつかの実施形態において、送達されるｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の発現は、提供するリポソームまたは組成物の単回投与後の血清または標的組織において、１、２、３、６、１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、５４、６０、６６、及び／または７２時間検出可能である。いくつかの実施形態において、当該ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の発現は、提供するリポソームまたは組成物の単回投与後に血清または標的組織において１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、及び／または７日間検出可能である。いくつかの実施形態において、当該ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の発現は、提供するリポソームまたは組成物の単回投与後に血清または標的組織において１週間、２週間、３週間、及び／または４週間検出可能である。いくつかの実施形態において、当該ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の発現は、提供するリポソームまたは組成物の単回投与後の１か月以上後に検出可能である。
（実施例）
（実施例１−式Ｉのラセミ化合物の合成）
ラセミ化合物１０は、トリフルオロ酢酸を用いたアルファ−アミノｔｅｒｔ−ブチルカルバマートの開裂及び結果として生じる遊離アミンを二量体化して３，６−ジオキソピペラジン２を形成することによって、保護されたリジン誘導体１であるＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＳｕから調製した。触媒パラジウム上での２の水素化は、第一級ジアミン３を生じ、これを４当量のエポキシド４及びトリエチルアミンで処理して、式Ｉのラセミ体である３，６−ジオキソピペラジン１０を形成する。
（ジベンジル（（（２Ｓ，５Ｓ）−３，６−ジオキソピペラジン−２，５−ジイル）ビス（ブタン−４，１−ジイル））ジカルバマート２）
氷浴を用いて冷却したＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＳｕ１（５０ｇ）へ、ＴＦＡ（６０ｍＬ）を緩徐に添加した。結果として生じる混合物を２０分間撹拌した。氷浴をはずし、撹拌を１時間続行した。ＴＦＡは回転式蒸発によって除去した。油状残渣をＤＭＦ（８０ｍＬ）中に溶解し、撹拌したピリジン（無水物，２．５Ｌ）へ緩徐に添加した。質量分析は、１時間後に反応の完了を示した。ピリジンは回転式蒸発によって除去し、残渣はＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈した。２０分間の撹拌後にこの混合物を濾過して、２をオフホワイト色の固体として得た（一晩の真空乾燥後に２０ｇ。収率：７３％）。
（（３Ｓ，６Ｓ）−３，６−ビス（４−アミノブチル）ピペラジン−２，５−ジオン−２ＨＯＡｃ３）
ＡｃＯＨ（５５０ｍＬ）及びＤＣＭ（５５０ｍＬ）からなる混合物中の化合物２へ、Ｐｄ／Ｃ（１０％、湿重量１０ｇ）を添加した。この混合物をＨ２バルーン下で４時間撹拌し、４時間後に質量分析は反応の完了を示した。この反応混合物を窒素で１０分間洗い流し、セライトで濾過した。このセライトをＭｅＯＨ（３×２５０ｍＬ）ですすいだ。組み合わせた濾液を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１．０Ｌ）で３０分間撹拌した。濾過で３を白色の固体として生じた（一晩の真空乾燥後に１６．３７ｇ。収率：１１４％。１Ｈ ＮＭＲは、清浄な生成物を示すが、試料中に余分なＨＯＡｃがある）。
（３，６−ビス（４−（ビス（２−ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン−２，５−ジオン１０）
室温で５００ｍＬの圧力フラスコ中で撹拌したＥｔＯＨ（７５ｍＬ）中の３（１５．８７ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）及び４（５７ｍＬ、２６１ｍｍｏｌ）からなる混合物へ、Ｅｔ３Ｎ（２３ｍＬ、１６５ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコを窒素で５分間さっと流し、密封した。この混合物（固体及び液体のスラリー）を室温で３０分間撹拌した後、１５０〜１５５℃（油浴温）へと加熱し、５時間撹拌した。温度が１５０℃に到達した後、透明な溶液を得た。室温へ冷却した後、この反応溶液を蒸発させて、０〜３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離剤として９回、及び０〜３０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃを溶離剤として２回用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって、残渣を精製した。ＤＣＭから５０％の７５：２２：３のＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（水溶液）の溶離剤としての使用は、ほとんど極性のない副産物をともなう生成物の同時溶出をもたらした。副産物は、展開溶媒として３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いるＴＬＣ上で生成物と密接に流れた。これを３０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃを展開溶媒として用いるＴＬＣ上で生成物から十分に分離した。カラム精製からの純粋な生成物画分をプール及び蒸発させた。子の油状残渣をＥｔ２Ｏ中に溶解して蒸発させた。真空下で一晩乾燥させて溶媒を全部除去し、ラセミ化合物１０を明黄色のゲル（９．８５ｇ、収率：２４％）として得た。ＥＬＳＤ検出を用いたＨＰＬＣは、同じ生成物塊を有する２つの類似の大きさのピークを示した。元素分析：（計算値）：Ｃ，７２．６３、Ｈ，１２．１７、Ｎ，５．６４、（実測値）：Ｃ，７２．２５、Ｈ，１２．３７、Ｎ，５．６８。質量スペクトル：９９３．８ｍ／ｚ。
７．１５ｇの３及び２５．６ｍＬの４を用いた別の試行において、粗生成物は、０〜３０％のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃを溶離剤として用いて２回精製して、２つのバッチの生成物、すなわち早期画分由来の１．５５ｇのバッチ及び後期画分由来の７．３８ｇのバッチを得た。両バッチは、１Ｈ ＮＭＲによって純粋であった。ＥＬＳＤ検出を用いるＨＰＬＣは、７．３８ｇのバッチについては同じ生成物塊を有する２つの類似の大きさのピークを示したが、１．５５ｇバッチについては単一の生成物ピークしか示さなかった。
（実施例２−式Ｉ．ｂ．１のキラル化合物（すなわち、化合物１０）の合成）
２当量のエポキシド４を用いて保護したリジン誘導体５のＮ−アルキル化を介してキラル化合物１０を合成して、ジオール６を形成した。触媒パラジウム上でのジオール６の水素化は、アルファアミノ酸７を形成し、これを２つの部分に分ける。アルファアミノ酸７の第一の部分は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバマートとして保護されたそのアルファアミノ基を有し、Ｂｏｃ無水物を用いた処理の際に、カルボン酸８を形成する。アルファアミノ酸７の第二の部分は、アミン９を形成するためにメチルエステルへ転換されたその遊離酸を有する。カルボン酸８及びアミン９は、ＤＭＦのような非プロトン性溶媒中でＨＡＴＵ及びジエタノールアミンのようなペプチドカップリング試薬を介して、アミド中間体へカップリングし、このアミド中間体のｔｅｒｔ−ブチルカルバマート基は、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸を用いて切断して、結果として生じるアミノエステル生成物をピペラジン−２，５−ジオン１０へと環化する。キラル中心全部における立体化学は、この経路を介して保存される。
以下のキラル化合物１２〜１５は、個々のキラルエポキシド出発材料を用いて、説明した合成経路を介して調製する。
（実施例３−式Ｉ．ａ．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３．１の合成）
無水Ｅｔ２Ｏ（１０００ｍＬ）中のＭｇ（６０ｇ、２．５ｍｏｌ）の懸濁液に、ヨウ素１結晶を添加した後、１−ブロモノナン（２５ｍＬ）を添加した。この反応を開始させ、この溶液は水浴を備えた反応フラスコを加熱した後に還流し始めた。残余の１−ブロモノナン（３６０ｍＬ、合計２．０ｍｏｌ）を、１．５時間で追加の漏斗を通じて添加し、還流を維持した。添加後、この反応溶液を水浴でさらに３０分間加熱還流した後、これを室温へ冷却した。この３．１のエーテル溶液を次の反応において直接使用した。
（化合物４．１の合成）
５Ｌの三つ首フラスコ中で機械的撹拌機で撹拌する−７８℃の無水ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中のＣｕＩ（３９ｇ、０．２ｍｏｌ）の懸濁液に、Ｒ−エピクロロヒドリン（１８５ｇ、２．０ｍｏｌ）（追加の漏斗）を添加した。添加後、先の３．１のエーテル溶液を１時間でカニューレを介して添加した。この混合物を−７８℃で３．５時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５００ｍＬ）で急冷した。有機層を分離した。水層をＥｔ２Ｏ（２０００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相を鹹水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４上）、真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２．５ｋｇＳｉＯ２、ヘキサン中の０〜１０％ＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、２９２ｇの４．１（収率：６６％）を明黄色の油として得た。
（化合物５．１の合成）
ＭｅＯＨ（６００ｍＬ）及びＴＨＦ（６００ｍＬ）中の４．１（２９２ｇ、１．３３ｍｏｌ）の溶液へ、追加の漏斗を通じて０℃でＮａＯＨ水溶液（１．５Ｍ、１０００ｍＬ）を添加した。添加後、この反応混合物を室温で２．５時間撹拌して、ＴＬＣは、主要な生成物、非常に微量の出発材料（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：９、Ｒｆ＝０．６）を示した。ＴＨＦ及びＭｅＯＨは、真空下で回転式蒸発によって除去した。水性残渣は、Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を鹹水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。黄色の油状残渣をカラム（ＳｉＯ２、２．５ｋｇ、ヘキサン中の０〜１０％のＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、２０５ｇ（８４％）の純粋な５．１を得た。
（化合物７．１の合成）
方法Ａ：室温で撹拌中のＤＣＭ（１０００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（７１ｍＬ）からなる混合物中の６．１（７５ｇ、０．２５ｍｏｌ）の溶液へ、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２．０Ｍ、１３５ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２５０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ（３７５ｍＬ）中に溶解した後、化合物５．１（１８５ｇ、１．０ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で４日間撹拌すると、ＭＳ及びＴＬＣは大部分が所望の生成物を示した。濃縮後、粗生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（２．０ｋｇのＳｉＯ２、ヘキサン中の０〜６０％のＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、７．１（１３１ｇ、８２％）を淡黄色の粘性のある油として得た。
方法Ｂ：ＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中の８．１（５０ｇ、０．２ｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（４５ｍＬ）を添加した後、化合物５．１（１５０ｇ、０．８１３ｍｏｌ、４．０当量）を添加した。この反応混合物を室温で７日間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をカラム（１．０ｋｇのＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ中の０〜３０％のＭｅＯＨで溶出）によって精製して、９．１を蝋状の固体（８３ｇ、６７％）として得た。０℃で撹拌したＤＭＦ（１０００ｍＬ）中の９，１（８１ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液へ、ＨＡＴＵ（５０．１ｇ、０．１３ｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（９２ｍＬ、０．５２ｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃で４０分間撹拌した後、ＭｅＯＨ（５３．２ｍＬ、１０．０当量）を添加した。結果として生じる混合物を室温で一晩撹拌した。これを次に、水（５０００ｍＬ）で希釈して、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×４）で抽出した。組み合わせた有機相を鹹水（６００ｍＬ×３）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。粗生成物をカラム（１．０ｋｇのＳｉＯ２、ヘキサン中の０〜８０％のＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、７．１（６９ｇ、２工程について５５％）を淡色の粘性のある油として得た。
（化合物１０．１の合成）
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の７．１（６９ｇ、０．１１ｍｏｌ）の溶液へ、ＴＦＡ（２００ｍＬ）を添加し、この混合物を室温で２時間撹拌し、ＭＳ検出は所望の生成物のみを示した。溶媒はすべて真空下で蒸発させ、１１５ｇの褐色の油様生成物１０．１を得、これはさらなる精製なしで次の工程に使用した。
（化合物１２．１の合成）
ＭｅＯＨ（９００ｍＬ）中の１１．１、Ｂｏｃ−Ｄ−リジン（７５ｇ、０．３０５ｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（６８ｍＬ）及び５．１（１９６ｇ、１．０６ｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で７日間撹拌した。揮発性物質を除去し、粗生成物をカラム（２．５ｋｇのＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ中の０〜４０％のＭｅＯＨで溶出）によって精製して、１１８ｇ（６３％）の純粋な化合物１２．１を得た。
（化合物１３．１の合成）
氷浴で冷却したＤＭＦ（６００ｍＬ、均質な溶液を得るために５０℃へと３０分間加温）中の１２．１（６７．５ｇ、０．１１ｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（５０ｇ、０．１２ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９５ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）を添加した。結果として生じる混合物を０℃で４５分間撹拌した後、ＤＭＦ（４００ｍＬ）中の化合物１０．１（１１５ｇ、先に得た）を追加の漏斗を用いて添加した。この混合物を室温で一晩撹拌した。エーテル（１０００ｍＬ）を添加した後、水（１０００ｍＬ）を添加した。有機相を分離し、水相をエーテル（２５０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機相を水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラム（１．０ｋｇのＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ中の０〜２０％のＭｅＯＨで溶出）によって精製して、９４．２ｇ（７６％）の化合物１３．１を得た。
（式Ｉ．ａ．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物の合成）
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の１３．１（９４ｇ、０．０８４ｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（３００ｍＬ）を添加した。この混合物を室温で２時間撹拌した。ＭＳ検出は、完全な反応を示した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をＤＣＭ（５００ｍＬ）中に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１．０Ｍ、５００ｍＬ）で洗浄した。水性洗浄物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で逆抽出した。組み合わせた有機相を無水ＮａＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。この残渣をＭｅＯＨ（１５００ｍＬ）中に溶解し、氷浴で冷却した。ＮＨ４ＯＨ水溶液（２８％、８０ｍＬ）を追加の漏斗を通じて添加した。この反応混合物を室温へと緩徐に加温させておき、大気温で２日間撹拌した。揮発性物質は、真空下で蒸発させた。粗生成物は、カラム（１．０ｋｇのＳｉＯ２、溶媒：１％ＮＨ４ＯＨ、４〜９％ＭｅＯＨ、９５〜９０％ＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、３４ｇの純粋なＲ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２及び２２ｇの不純なＲ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２を得た。不純なＲ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２は、カラムによって再精製して、１２ｇの純粋なＲ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２を得た。したがって、合計４６ｇ（５５％）の純粋なＲ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２（ゴム状固体）を得た。
（実施例４−式Ｉ．ａ．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３．１の合成）
無水Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ）中のＭｇ（３０ｇ、１．２５ｍｏｌ）の懸濁液に、１結晶のヨウ素を添加した後、１−ブロモノナン（３０ｍＬ）を添加した。この反応を開始して、溶液は、水浴を有する反応フラスコを加熱した後に還流し始めた。残余の１−ブロモノナン（１６１ｍＬ、合計２．０ｍｏｌ）を追加の漏斗を通じて１．５時間添加して、還流を維持した。添加後、この反応溶液を水浴でさらに３０分間加熱還流した後、室温へ冷却した。この３．１のエーテル溶液を次の反応において直接使用した。
（化合物４．２の合成）
５Ｌの三つ首フラスコ中で機械的撹拌機で撹拌中の−７８℃の無水ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中のＣｕＩ（１９ｇ、０．１ｍｏｌ）の懸濁液に、追加の漏斗を用いてＳ−エピクロロヒドリン（９２ｇ、１．０ｍｏｌ）を添加した。添加後、先の３．２のエーテル溶液をカニューレを介して１時間で添加した。この混合物を−７８℃で３．５時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（４００ｍＬ）で急冷した。この有機層を分離した。水層をＥｔ２Ｏ（１０００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相を鹹水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４上）、真空下で蒸発させた。粗生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（２．５ｋｇのＳｉＯ２、ヘキサン中の０〜１０％ＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、１１１．６ｇの４．２（収率：６６％）を明黄色の油として得た。
（化合物５．２の合成）
ＭｅＯＨ（２３０ｍＬ）及びＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の４．２（１１１．３ｇ、０．５０６ｍｏｌ）の溶液へ、ＮａＯＨ水溶液（１．５Ｍ、３９５ｍＬ）を、追加の漏斗を用いて０℃で添加した。添加後、この反応混合物を室温で２．５時間撹拌し、ＴＬＣは、主要な生成物及び非常に少量の出発材料（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：９、Ｒｆ＝０．６）を示した。ＴＨＦ及びＭｅＯＨは、真空下で回転式蒸発によって除去した。水性残渣は、Ｅｔ２Ｏ（２００ｍＬ×３）を用いて抽出した。組み合わせた有機相を鹹水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。黄色の油状残渣をカラム（ＳｉＯ２、１．０ｋｇ、ヘキサン中の０〜１０％のＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、８１ｇ（８７％）の純粋な５．２を得た。
（化合物７．２の合成）
室温で撹拌中のＤＣＭ（１００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）からなる混合物中の６．１（１３ｇ、０．０４４ｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２．０Ｍ、２５ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２５０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で蒸発させた。この残渣をＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中に溶解した後、化合物５．２（３２ｇ、０．１７４ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で４日間撹拌すると、ＭＳ及びＴＬＣは、大部分が所望の生成物を示した。濃縮後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（６００ｇのＳｉＯ２、ヘキサン中の０〜６０％ＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、７．２（２３ｇ、８５％）を淡色の粘性のある油として得た。
（化合物８．２の合成）
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の７．２（２３ｇ、０．０３６６ｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（６０ｍＬ）を添加し、この混合物を室温で２時間撹拌し、ＭＳ検出は所望の生成物のみを示した。溶媒はすべて真空下で蒸発させて、４０ｇの褐色の油様生成物８．２ｇを得、これをさらなる精製なしで次の工程において使用した。
（化合物１０．２の合成）
ＭｅＯＨ（９００ｍＬ）中の１１．１、Ｂｏｃ−Ｄ−リジン（１４ｇ、０．０５７ｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＥＡ（１１．６ｍＬ）及び５．２（４２ｇ、０．２２８ｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で７日間撹拌した。揮発性物質を除去し、粗生成物をカラム（１．０ｋｇのＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ中の０〜４０％のＭｅＯＨで溶出）によって精製して、２４ｇ（７０％）の純粋な化合物１０．２を得た。
（化合物１１．２の合成）
氷浴で冷却中のＤＭＦ（１２０ｍＬ）中の１０．２（９．１ｇ、１４．８２ｍｍｏｌ）の溶液へ、ＨＡＴＵ（８．４ｇ、２２．２３ｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２５ｍＬ、１４８．２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃で４５分間撹拌した後、ＤＭＦ（８０ｍＬ）中の化合物８．２は、追加の漏斗を用いて添加した。結果として生じる混合物を室温で一晩撹拌した。ＭＳ検出は、出発材料がないことを示した。エーテル（１０００ｍＬ）を添加した後、水（１０００ｍＬ）を添加した。有機相を分離し、水相をエーテル（２００ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機相を鹹水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。この残渣をカラム（３３０ｇのＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ中の０〜２０％のＭｅＯＨで溶出）によって精製して、１０．６ｇの所望の化合物１１．２を得た。
（式Ｉ．ａ．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物の合成）
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の１１．２（１０．６ｇ、０．０８４ｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（３０ｍＬ）を添加した。この混合物を室温で２時間撹拌した。ＭＳ検出は、完全な反応を示した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をＤＣＭ（１５０ｍＬ）中に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１．０Ｍ、２００ｍＬ）で洗浄した。この水性洗浄物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で逆抽出した。組み合わせた有機相を無水ＮａＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。この残渣をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中に溶解し、氷浴で冷却した。ＮＨ４ＯＨ水溶液（２８％、１０ｍＬ）を追加の漏斗を用いて添加した。この反応混合物を室温へ緩徐に加温させておき、大気温で２日間撹拌した。揮発性物質を真空下で蒸発させた。この粗生成物をカラム（６００ｇのＳｉＯ２、溶媒：１％ＮＨ４ＯＨ、４〜９％ＭｅＯＨ、９５〜９０％のＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、５．１ｇの純粋なＳ４−ＳＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２を得た。
（実施例５−式Ｉ．ｂ．１．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３．３（Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル）−Ｎ６，Ｎ６−ビス（（Ｒ）−２−ヒドロキシドデシル）−Ｌ−リジンの合成）
メタノール（８０ｍＬ）中のＲ−エポキシド（５．１、４６ｇ、２５０ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌ−リジン８．１（１５ｇ、６１ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルエチルアミン（１１ｍｌ）からなる混合物を室温で３日間撹拌した。揮発性物質を除去し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１００／０〜７０/３０、２０分）で溶出するシリカゲル（３３０ｇ）上でのクロマトグラフィーによって、黄色の油状残渣を精製して、生成物３．３を白色の固体（９．７ｇ、２６％）として得た。
（式Ｉ．ｂ．１．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２、（（３Ｓ，６Ｓ）−３，６−ビス（４−（ビス（（Ｓ）−２−ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン−２，５−ジオン））の化合物の合成）
ＤＣＭ（２８０ｍｌ）中の３．３（７．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（１．３８ｇ、１２ｍｍｏｌ）の溶液にＤＣＣ（２．９７ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。次に、この溶媒を除去し、この残渣（粗４．３）をＴＦＡ（３０ｍｌ）中に溶解した。結果として生じる混合物を室温で１時間撹拌した。次に、ＴＦＡを除去し、ＤＣＭ（３０ｍｌ）をこの残渣へ添加して、同時蒸発させ、残余のＴＦＡを除去した。粗５．３をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ２下で０℃の無水ピリジン（４８０ｍＬ）へ添加した。結果として生じる混合物を室温で一晩撹拌した。次に、ピリジンを除去し、残渣をジエチルエーテル（３００ｍＬ）で希釈した。この形成した白色固体を濾過によって除去した。濾液をＮａ２ＣＯ３水溶液（１Ｍ、１５０ｍｌ）及び鹹水（１５０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。この残渣を、３％ＮＨ４ＯＨ／７％ＭｅＯＨ／９０％ＥｔＯＡｃで溶出するカラムクロマトグラフィーによって５回精製し（１回の３３０ｇカラムの後、４回の８０ｇカラム）、１．０５ｇの純粋なＲ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２を淡色のゴムとして得た。１．０ｇのＲ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２。
（実施例６−式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３（Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ６，Ｎ６−ビス（（Ｓ）−２−ヒドロキシドデシル）−Ｌ−リジン）の合成）
メタノール（８０ｍｌ）中のＳ−エポキシド（５．２、４６ｇ、２５０ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌ−リジン８．１（１５ｇ、６１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１１ｍｌ）からなる混合物を室温で８日間撹拌した。揮発性物質を除去し、黄色の油状残渣を、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１００／０〜７０/３０、２０分）で溶出するシリカゲル（３３０ｇ）上でのクロマトグラフィーによって精製して、生成物３．４を白色の固体（２２ｇ、５９％）として得た。
（式Ｉ．ｂ．１．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２、（（３Ｓ，６Ｓ）−３，６−ビス（４−（ビス（（Ｓ）−２−ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン−２，５−ジオン）の化合物の合成）
ＤＣＭ（２８０ｍｌ）中の３．４（２４．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（４．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（９．９ｇ、４８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で３時間撹拌した。次に、この溶媒を除去し、残渣（粗４．４）を０℃のＴＦＡ（１００ｍｌ）中に溶解した。結果として生じる混合物を室温へと加温させておき、４５分間撹拌した。次に、ＴＦＡを除去し、ＤＣＭ（１２０ｍｌ）をこの残渣へ添加した後、同時蒸発させて、残余のＴＦＡを除去した。粗５．４を０℃の無水ピリジン（１．６Ｌ）中にＮ２下で溶解し、結果として生じる混合物を室温で一晩撹拌した。ピリジンを次に、回転式蒸発によって除去し、この残渣をジエチルエーテル（１Ｌ）で希釈した。形成した白色固体は濾過によって除去し、ジエチルエーテル（２００ｍｌ）で洗浄した。この濾液をＮａ２ＣＯ３水溶液（１Ｍ、５００ｍｌ）及び鹹水（５００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。この残渣を、０〜５０％（３％ＮＨ４ＯＨ／７％ＭｅＯＨ／９０％ＥｔＯＡｃ）／ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル（３３０ｇ）上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、６．８ｇのＴＬＣで純粋なＳ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２及び７．１ｇのわずかに不純なＳ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２を得た。この６．８ｇ（６．８ｍｍｏｌ）のＴＬＣで純粋なＳ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２を１２０ｍｌの酢酸エチル中に溶解した。Ｂｏｃ２Ｏ（０．２２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で２時間撹拌した。この溶媒を除去し、この残渣を、０〜５０％（３％ＮＨ４ＯＨ／７％ＭｅＯＨ／９０％ＥｔＯＡｃ）／ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル（１２０ｇ）上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、５．７ｇ（８４％）の純粋な生成物Ｓ４−ＳＳ−ｃＫＫ−Ｅ１２を得、これは、アミン副産物非含有であった。
（実施例７−式Ｉ．ｂ．２．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３．１の合成）
無水Ｅｔ２Ｏ（０．９Ｌ）中に懸濁したマグネシウム（６０ｇ）に、１−ブロモノナン２．１（２０ｍＬ）を添加した後、触媒量のヨウ素（５０ｍｇ）を添加した。結果として生じる混合物を温水浴で、Ｍｇと２．１との反応が開始するまで加熱した。この浴を取り外し、残余の１−ブロモノナン（３７９．１ｍＬ）を添加して、緩徐な還流を維持した。２．１の添加後、還流をさらに３０分間温水浴によって維持した。結果として生じる３．１のグリニヤール溶液を冷却して、次の工程において直接使用した。
（化合物４．１の合成）
−７８℃におけるＴＨＦ（１．５Ｌ）中に懸濁したＣｕＩ（３８．１ｇ）に、Ｒ−（−）−エピクロロヒドリン（１５６．８ｍＬ）を添加した。次に、先の３．１のグリニヤール溶液を、カニューレを介して添加し、その間、反応温度は−６５℃未満に維持した。結果として生じる反応混合物を−７８℃でさらに３時間撹拌した。次に、飽和塩化アンモニウム水溶液（０．８Ｌ）を注意深く添加した後、水（１．０Ｌ）を添加した。結果として生じる混合物を撹拌し、室温へ加温させておいた。有機層を分離し、水層をＥｔ２Ｏ（０．５Ｌ×２）で抽出した。有機層をＥｔ２Ｏ抽出物と組み合わせ、結果として生じる溶液を鹹水（０．５Ｌ×２）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、結果として生じる残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）上で精製して、４．１（２４３．５ｇ、５５％）を黄色の油として提供した。
（化合物５．１の合成）
０℃で撹拌した１：２．６のＭｅＯＨ−ＴＨＦ（３．６Ｌ）中の４．１（２４３．４９ｇ）の溶液に、ＮａＯＨ水溶液（１．５Ｍ、０．８９Ｌ、１．３３モル）を緩徐に添加した。結果として生じる混合物を加温させておき、室温で３時間撹拌した。ＴＬＣ分析は、４．１の完全な消失を示した。有機溶媒を蒸発させ、水層をＥｔ２Ｏ（１Ｌ＋５００ｍＬ×２）で抽出した。この有機抽出物を組み合わせ、鹹水（６００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させて、残渣を得、これをシリカゲルカラム（ヘキサン〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、エポキシド５．１（１９３．７ｇ、９５％）を明黄色の油として得た。
（化合物１２．１の合成）
ＭｅＯＨ（１．０４Ｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−リジン１１．１（４９．２ｇ、０．２モル）及びエポキシド５．１（１４７．２ｇ、０．８モル）からなる混合物を室温で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（５１．９ｇ、０．４モル）を添加した。次に、結果として生じる混合物を８日間撹拌した後、濃縮乾固させた。この残渣をシリカゲルカラム（２ｋｇ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０〜１０％）で精製して、大部分が純粋な４９．２ｇの１２．１（ＭＺ−５５０−１８０）及び５８．３ｇの不純な１２．１を得、後者を第二のカラム（１．５ｋｇ、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１０〜４０％）によって精製して、大部分が純粋な４１．４ｇの１２．１を得た。この２つの大部分が純粋なバッチを組み合わせて、ＥｔＯＡｃ（０．５Ｌ）とともに３時間撹拌した。この混合物を濾過して、４１．４ｇの純粋な１２．１を白色の固体として得た。この濾液を濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ（０．１Ｌ）とともに１時間撹拌して、濾過して、１０．６ｇの純粋な１２．１を得た。濾液を濃縮乾固し、残渣をシリカゲルカラム（３３０ｇ、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１０〜４０％）上で精製し、２６．９ｇの純粋な１２．１の第三のバッチを得た。合計７８．９ｇの純粋な１２．１を得た。収率：６４％。
（式Ｉ．ｂ．２．ｉ（すなわち、Ｒ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物の調製）
バッチ１：ＤＣＭ（７０ｍＬ）中の１２．１（６．１４ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｍｉｄｅ）（１．１５ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（２．４７ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じる混合物を室温で３時間撹拌した。揮発性物質を真空下で蒸発させて残渣（ＮＨＳエステル６．５）を得、これをＴＦＡ（２５ｍＬ）中に溶解して、０．５時間撹拌した。ＴＦＡを真空下で除去し、残渣（化合物７．５）を０℃に冷却した。ピリジン（無水物、４００ｍＬ）を添加し、この反応混合物を室温で２時間撹拌した。ピリジンを真空下で除去し、残渣をＥｔ２Ｏ（３００ｍＬ）中に懸濁した。この固体を濾過により除去した。この濾液を１ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（１５０ｍＬ）及び鹹水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮乾固した。この残渣をカラムクロマトグラフ（８０ｇ、７：３のＭｅＯＨ−ＮＨ３−Ｈ２Ｏ（ＥｔＯＡｃで４回）／ＥｔＯＡｃ、０〜５０％）によって分離して、Ｒ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２をゴム状の固体（２．２２ｇ）として得た。ＥｔＯＡｃからの複数回の沈殿及び倍散で、純粋なＲ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２（０．４６ｇ）をゴムとして得た。
（実施例８−式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物）
（化合物３．１の合成）
無水Ｅｔ２Ｏ（０．９Ｌ）中に懸濁したマグネシウム（６０ｇ）に、１−ブロモノナン２．１（２０ｍＬ）を添加した後、触媒量のヨウ素（５０ｍｇ）を添加した。結果として生じる混合物を温水浴を用いて、Ｍｇと２．１との反応が開始するまで加熱した。この浴を外して、残余の１−ブロモノナン（３７９．１ｍＬ）を添加して、緩徐な還流を維持した。２．１の添加後、還流を温水浴によってさらに３０分間維持した。結果として生じる３．１のグリニヤール溶液を冷却して、次の工程において直接使用した。
（化合物４．２の合成）
−７８℃のＴＨＦ（１．５Ｌ）中に懸濁したＣｕＩ（３８．１ｇ）に、Ｓ−（−）−エピクロロヒドリン（１５６．８ｍＬ）を添加した。次に、先の３．１のグリニヤール溶液をカニューレを介して添加し、その間、反応温度を−６５℃未満に維持した。結果として生じる反応混合物を−７８℃でさらに３時間撹拌した。次に、飽和塩化アンモニウム水溶液（０．８Ｌ）を注意深く添加した後、水（１．０Ｌ）を添加した。結果として生じる混合物を撹拌して室温へ加温させておいた。有機層を分離し、水層をＥｔ２Ｏ（０．５Ｌ×２）で抽出した。有機層をＥｔ２Ｏ抽出物と組み合わせ、結果として生じる溶液を鹹水（０．５Ｌ×２）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、４．２（２５０．８ｇ、５７％）を明黄色の油として得た。
（化合物５．２の合成）
０℃で撹拌した１：２．６のＭｅＯＨ−ＴＨＦ（３．９Ｌ）中の４．２（２５０．８ｇ）の溶液に、ＮａＯＨ水溶液（１．５Ｍ、１．３６モル、０．９０Ｌ）を緩徐に添加した。結果として生じる混合物を加温させておき、室温で３時間撹拌した。ＴＬＣ分析は、４．２の完全な消失を示した。有機溶媒を蒸発させ、水層をＥｔ２Ｏ（１Ｌ＋５００ｍＬ×２）で抽出した。有機抽出物を組み合わせ、鹹水（６００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を得、これをシリカゲルカラム（ヘキサン〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、５．２（１９５．４ｇ、９３％）を明黄色の油として提供した。
ＭｅＯＨ（１．０４Ｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−リジン１１．１（４９．２ｇ、０．２モル）及びエポキシド５．２（１４７．２ｇ、０．８モル）からなる混合物を室温で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（５１．９ｇ、０．４モル）を添加した。次に、結果として生じる混合物を８日間撹拌した後、濃縮乾固した。結果として生じる残渣を、シリカゲルカラム（２ｋｇ、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１０〜３０％）で精製して、１０．２（７９．９ｇ、６５％）を白色の固体として得た。
（式Ｉ．ｂ．２．ｉｉ（すなわち、Ｓ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２）の化合物の調製）
ＤＣＭ（８００ｍＬ）中の１０．２（６１．４ｇ、１００ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｍｉｄｅ）（１１．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＣ（２４．７ｇ、１２０ｍｍｏｌ）を添加した。結果として生じる混合物を室温で４時間撹拌した。揮発性物質を真空下で蒸発させて残渣（ＮＨＳエステル６．６）を得、これをＴＦＡ（２５ｍＬ）中に溶解して、４０分間撹拌した。ＴＦＡを真空下で除去し、残渣（化合物７．６）を０℃に冷却した。ピリジン（無水物、３．５Ｌ）を添加し、この反応混合物を室温で１９時間撹拌した。ピリジンを真空下で除去し、残渣をＥｔ２Ｏ（３．０Ｌ）中に懸濁した。この固体を濾過により除去した。この濾液を１ＭのＮａ２ＣＯ３水溶液（１．０Ｌ）及び鹹水（１．０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮乾固した。この残渣をカラムクロマトグラフ（（７％ＭｅＯＨ／３％ＮＨ３−Ｈ２Ｏ／９０％ＥｔＯＡｃ）／ＥｔＯＡｃ、０〜５０％）で溶出する４×３３０ｇシリカゲルカラム）によって精製して、Ｓ４−ＲＲ−ｃＫＫ−Ｅ１２をゴム状の固体（１５．９ｇ、１６％）として提供した。
（実施例９−製剤）
本明細書に説明する製剤は、種々の核酸系材料を封入するよう設計した１つ以上のカチオン性脂質、ヘルパー脂質、及びペグ化脂質を採用する種々の比からなる多成分脂質混合物からなった。全体を通じて利用するカチオン性脂質は、式Ｉの化合物（３，６−ビス（４−（ビス（２−ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン−２，５−ジオン）である。ヘルパー脂質には、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ））ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））、コレステロールなどを含むことができる（が、排他的ではない）。ペグ化脂質には、Ｃ６〜Ｃ２０長のアルキル鎖（複数可）を有する脂質へ共有結合した長さ最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含むことができる（が、排他的ではない）。
（伝令ＲＮＡ材料）
ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、コドンの最適化されたホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬ）、及びコドンの最適化されたヒトアルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ１）伝令ＲＮＡを、当該遺伝子をコードするプラスミドＤＮＡテンプレートからのインビトロ転写に続いて、ゲル電気泳動によって測定されるような長さおよそ２５０ヌクレオチドの５’キャップ構造（Ｃａｐ１）（Ｆｅｃｈｔｅｒ，Ｐ．、Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，Ｇ．Ｇ．“Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ ｃａｐ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｂｙ ｖｉｒａｌ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ” Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２００５，８６，１２３９〜１２４９）及び３’ポリ（Ａ）尾部の付加によって合成した。各ｍＲＮＡ産物中に存在する５’及び３’非翻訳領域は、それぞれＸ及びＹと表し、記載の通り定義する（下記参照）。
コドンの最適化されたヒトアルギニノコハク酸シンテターゼ（ＡＳＳ１）ｍＲＮＡ：
５’及び３’ＵＴＲ配列
X =
GGACAGAUCGCCUGGAGACGCCAUCCACGCUGUUUUGACCUCCAUAGAAGACACCGGGACCGAUCCAGCCUCCGCGGCCGGGAACGGUGCAUUGGAACGCGGAUUCCCCGUGCCAAGAGUGACUCACCGUCCUUGACACG

Y =

CGGGUGGCAUCCCUGUGACCCCUCCCCAGUGCCUCUCCUGGCCCUGGAAGUUGCCACUCCAGUGCCCACCAGCCUUGUCCUAAUAAAAUUAAGUUGCAUC
（製剤プロトコル）
式Ｉの１つ以上の化合物、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋの５０ｍｇ／ｍＬエタノール溶液の一定分量を混合し、３ｍＬの終容積へとエタノールで希釈した。別途、ＡＳＳ１ｍＲＮＡの緩衝水溶液（１０ｍＭクエン酸／１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ４．５）を１ｍｇ／ｍＬストックから調製した。脂質溶液をｍＲＮＡ水溶液へと迅速に注射して振盪して、２０％エタノール中の最終懸濁液を生じた。結果として生じるナノ粒子懸濁液を濾過し、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で透析濾過し、濃縮し、２〜８℃で保存した。終濃度＝０．６４ｍｇ／ｍＬ ＡＳＳ１ｍＲＮＡ（封入済み）。Ｚ平均＝７８ｎｍ（Ｄｖ（５０）＝４６ｎｍ、Ｄｖ（９０）＝９６ｎｍ）。
（実施例１０−静脈内送達されるＡＳＳ１ｍＲＮＡ搭載ナノ粒子を介して産生されるＡＳＳ１タンパク質の分析）
（注射プロトコル）
試験はすべて、核実験の開始時のおよそ６〜８週齢の雄ＣＤ−１マウスを用いて実施した。試料は、等価の合計用量１．０ｍｇ／ｋｇ（または他に指定）の封入したＡＳＳ１ｍＲＮＡの単回ボーラス尾静脈注射によって導入した。マウスは指定の時点で屠殺して、塩類溶液を還流した。
（分析用器官組織の単離）
各マウスの肝臓、脾臓、腎臓及び心臓を収集し、個別の部分へと割り当て、１０％中性緩衝ホルマリンまたは瞬時凍結のいずれかで保存し、分析のために−８０℃で保存した。
（分析用の血漿の単離）
動物はすべて、用量投与（±５％）後の指定した時点でＣＯ２窒息によって安楽死させた後、開胸して末端心血収集を行った。全血（最大入手可能容積）は、安楽死させた動物における心穿刺を介して、血清分離チューブ中へと収集し、室温で少なくとも３０分間凝血させておき、２２℃±５℃、９３００ｇで１０分間遠心分離し、血清を抽出するであろう。暫定的な血液収集のために、およそ４０〜５０μＬの全血を顔面静脈穿刺または尾部微量切断を介して収集するであろう。非処置動物から収集した試料は、試験動物との比較のために、基線ＡＳＳ１レベルとして使用した。
（酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）分析）
ヒトＡＳＳ１ ＥＬＩＳＡ：捕捉抗体としてマウス抗ＡＳＳ１ ２Ｄ１〜２Ｅ１２ＩｇＧを、二次（検出）抗体としてウサギ抗ＡＳＳ１＃３２８５ＩｇＧ（Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）とともに採用する標準的なＥＬＩＳＡ手順に従った。セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヤギ抗ウサギＩｇＧを、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質溶液の活性化に使用した。この反応は、２０分後に２ＮのＨ２ＳＯ４を用いて消光した。検出は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ機器での吸光（４５０ｎｍ）を介してモニターした。観処置のマウス血清及び器官ならびにヒトＡＳＳ１タンパク質はそれぞれ、陰性対照及び陽性対照として使用した。
（実施例１１−インビボでのヒトＡＳＳ１タンパク質産生）
式Ｉの化合物を含む、コドンの最適化されたｈＡＳＳ１ｍＲＮＡを搭載した脂質ナノ粒子を介したヒトＡＳＳ１タンパク質の産生は、先に説明した通り、単回ボーラス静脈内注射としてＣＤ−１マウスにおいて検査した。図１は、マウスヒトＡＳＳ１ｍＲＮＡ搭載脂質ナノ粒子を式Ｉの種々のラセミ化合物及びキラル化合物を１．０ｍｇ／ｋｇ用量で処置する場合、ＥＬＩＳＡを介して検出されたヒトＡＳＳ１タンパク質の量を示す。マウスは注射２４時間後に屠殺し、肝臓のような器官を収集した。
（実施例１２−毒性試験）
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の発現レベルを、式Ｉの種々のラセミ化合物及びキラル化合物について測定した。ＡＳＴ及び／またはＡＬＴの発現レベルの亢進は概して、肝臓毒性を生じる作用因子によって生じた。式Ｉのキラル化合物は概して、同じ脂質の立体化学的に濃縮されていない、または立体化学的にほとんど濃縮されていない組成物と比較して、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴの低い発現レベルを生じ、すなわち低い肝臓毒性問題と相関していた。以下の表１及び表２を参照されたい。
本発明のいくつかの実施形態は、本明細書に説明及び示されてきたが、当業者は、当該機能を実行するための、ならびに／あるいは本明細書に説明する結果を及び／または利点のうちの１つ以上を得るために種々の他の手段ならびに／あるいは構造を容易に想定するであろうし、このような変法及び／または改変の各々は、本発明の範囲内であるとみなす。より一般的には、本明細書に説明するパラメータ、寸法、材料、及び形状がすべて、例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料、ならびに／あるいは形状が、本発明の教示に使用する具体的な適用または複数の適用に依存するであろうことを容易に認識するであろう。当業者は、所定の実験法以下を用いて、本明細書に説明する本発明の具体的な実施形態と多くの等価物を認識するであろうし、または確認できるであろう。それゆえ、上述の実施形態は、例としてのみ呈されていること、ならびに添付の特許請求の範囲及びその等価物の範囲内で、本発明が具体的に説明及び請求される通り実施され得ないことは理解されることになっている。本発明は、本明細書に説明する各個々の特長、システム、物品、材料、キット、及び／または方法に向けられている。加えて、２つ以上のこのような特長、システム、物品、材料、キット、及び／または方法のうちの任意の組み合わせは、このような特長、システム、物品、材料、キット、及び／または方法が相互に一致している場合、本発明の範囲内に含まれる。

Claims (27)

  1. １つ以上の式Ｉの化学成分を含む組成物であって、前記化学成分の各々は、式Ｉ
    の化合物、またはその医薬として許容され得る塩であり、
    （１）前記組成物中の式Ｉの化学成分の総量の５０％超が、式Ｉ．ａ．ｉ
    の化学成分であることを特徴とする、組成物。
  2. 式Ｉ．ａ．ｉの前記化学成分の量が７０％超である、請求項１に記載の組成物。
  3. 式Ｉ．ａ．ｉの前記化学成分の量が８０％超である、請求項１に記載の組成物。
  4. 式Ｉ．ａ．ｉの前記化学成分の量が９０％超である、請求項１に記載の組成物。
  5. 式Ｉ．ａ．ｉの前記化学成分の量が９５％超である、請求項１に記載の組成物。
  6. １つ以上の式Ｉの化学成分を含む組成物であって、前記組成物が請求項１〜５のいずれか一項に記載されている、組成物；および
    ポリヌクレオチド
    を含む脂質ナノ粒子。
  7. 前記ポリヌクレオチドがｍＲＮＡである、請求項６に記載の脂質ナノ粒子。
  8. １個以上のカチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系脂質、ＰＥＧ修飾した脂質および／またはポリマーをさらに含む、請求項６に記載の脂質ナノ粒子。
  9. １個以上の非カチオン性脂質、コレステロール系脂質および／またはＰＥＧ修飾した脂質をさらに含む、請求項８に記載の脂質ナノ粒子。
  10. 非カチオン性脂質、コレステロール系脂質およびＰＥＧ修飾した脂質をさらに含む、請求項９に記載の脂質ナノ粒子。
  11. 前記１個以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン）、ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  12. 前記１個以上のコレステロール系脂質は、コレステロールおよび／またはＰＥＧ化コレステロールである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  13. 前記１個以上のＰＥＧ修飾した脂質は、１つ以上のＣ６〜Ｃ２０長のアルキル鎖を有する脂質へ共有結合した長さ最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  14. 前記脂質ナノ粒子は、約２５０ｎｍ未満の大きさを有する、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  15. 前記ｍＲＮＡは、約０．５ｋｂ以上の長さを有する、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  16. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、細胞質ゾルタンパク質である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  17. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、分泌タンパク質である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  18. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、酵素である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  19. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、細胞内酵素である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  20. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、尿素周期またはリソソーム貯蔵代謝障害と関係する酵素である、請求項１９に記載の脂質ナノ粒子。
  21. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、膜貫通タンパク質である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  22. 前記ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質は、イオンチャネルタンパク質である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  23. 前記ｍＲＮＡが１個以上の修飾されたヌクレオチドを含む、請求項７〜２２のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  24. 前記１個以上の修飾されたヌクレオチドは、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、および／または２−チオシチジンを含む、請求項２３に記載の脂質ナノ粒子。
  25. 前記ｍＲＮＡは非修飾である、請求項７〜２２のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  26. タンパク質コードｍＲＮＡを含む組成物の送達により疾患または障害を治療するための医薬の製造のためのリポソームの使用であって、前記リポソームはリポソーム内に封入されたタンパク質コードｍＲＮＡを含み、その結果、前記組成物の投与が、対象における前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質の発現を生じさせ、前記リポソームが請求項１〜５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質組成物を含む、使用。
  27. タンパク質コードｍＲＮＡを含む組成物の送達により疾患または障害を治療するための医薬の製造のためのリポソームの使用であって、前記リポソームはリポソーム内に封入されたタンパク質コードｍＲＮＡを含み、その結果、前記組成物の投与が、対象における前記ｍＲＮＡによってコードされる前記タンパク質の発現を生じさせ、前記リポソームが請求項６〜２５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を含む、使用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12458604B2 (en) 2020-10-14 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of lipid nanoparticle manufacture and compositions derived therefrom

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2987057T3 (es) 2011-06-08 2024-11-13 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
CN112656954A (zh) * 2013-10-22 2021-04-16 夏尔人类遗传性治疗公司 用于递送信使rna的脂质制剂
EP3587409B8 (en) 2014-05-30 2022-07-13 Translate Bio, Inc. Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids
EP3576760A2 (en) * 2017-02-01 2019-12-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating citrullenemia
IL268857B2 (en) 2017-02-27 2024-09-01 Translate Bio Inc Methods for purification of messenger rna
US10975369B2 (en) 2017-02-27 2021-04-13 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
WO2019152802A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Translate Bio, Inc. Cationic polymers
US20210220449A1 (en) * 2018-05-15 2021-07-22 Translate Bio, Inc. Subcutaneous Delivery of Messenger RNA
CN112930396B (zh) 2018-08-24 2024-05-24 川斯勒佰尔公司 用于纯化信使rna的方法
CN113166783B (zh) 2018-10-09 2024-10-11 不列颠哥伦比亚大学 包含无有机溶剂和去污剂的转染活性囊泡的组合物和系统以及与之相关的方法
CA3115119A1 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for messenger rna purification
ES2972014T3 (es) * 2019-04-22 2024-06-10 Translate Bio Inc Lípidos catiónicos de tioéster
EP4076647A1 (en) 2019-12-20 2022-10-26 CureVac AG Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
CN111658782A (zh) * 2020-06-10 2020-09-15 深圳近邻生物科技有限公司 mRNA疫苗递送载体及制备方法、mRNA疫苗及制备方法
AU2021349262A1 (en) * 2020-09-23 2023-06-08 Translate Bio, Inc. Piperazine-based cationic lipids
US11771652B2 (en) 2020-11-06 2023-10-03 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mRNA vaccines
CA3230031A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Patrick Baumhof Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
US20250027108A1 (en) 2021-10-29 2025-01-23 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
EP4531902A1 (en) 2022-05-25 2025-04-09 CureVac SE Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
DE202023106198U1 (de) 2022-10-28 2024-03-21 CureVac SE Impfstoff auf Nukleinsäurebasis
DE112024001143T5 (de) 2023-03-08 2025-12-18 CureVac SE Neue lipid-nanopartikel-formeln für die abgabe von nukleinsäuren
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases

Family Cites Families (334)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2647121A (en) 1951-02-02 1953-07-28 Ruth P Jacoby Diamine-bis-acetamides
US2819718A (en) 1953-07-16 1958-01-14 Isidore H Goldman Drainage tube
US2717909A (en) 1953-09-24 1955-09-13 Monsanto Chemicals Hydroxyethyl-keryl-alkylene-ammonium compounds
US2844629A (en) 1956-04-25 1958-07-22 American Home Prod Fatty acid amides and derivatives thereof
US3096560A (en) 1958-11-21 1963-07-09 William J Liebig Process for synthetic vascular implants
GB1072118A (en) 1962-12-01 1967-06-14 Sandoz Ag Amides of aminopropionic acid
FR1378382A (fr) 1962-12-01 1964-11-13 Sandoz Sa Amides de l'acide amino-propionique, utilisables en particulier pour le traitement des fibres textiles
JPS5141663B1 (ja) 1966-03-12 1976-11-11
JPS4822365B1 (ja) 1968-10-25 1973-07-05
NL143127B (nl) 1969-02-04 1974-09-16 Rhone Poulenc Sa Versterkingsorgaan voor een defecte hartklep.
US3614954A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Electronic standby defibrillator
US3614955A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Standby defibrillator and method of operation
JPS5024216B1 (ja) 1970-12-29 1975-08-14
JPS5012146Y2 (ja) 1971-07-27 1975-04-15
US3945052A (en) 1972-05-01 1976-03-23 Meadox Medicals, Inc. Synthetic vascular graft and method for manufacturing the same
US3805301A (en) 1972-07-28 1974-04-23 Meadox Medicals Inc Tubular grafts having indicia thereon
US4022833A (en) 1973-02-14 1977-05-10 Sterling Drug Inc. N,N'-bridged-bis[2-alkyl-2-hydroxyethylamines]
JPS49127908A (ja) 1973-04-20 1974-12-07
JPS5624664B2 (ja) 1973-06-28 1981-06-08
US4013507A (en) 1973-09-18 1977-03-22 California Institute Of Technology Ionene polymers for selectively inhibiting the vitro growth of malignant cells
JPS5123537A (ja) 1974-04-26 1976-02-25 Adeka Argus Chemical Co Ltd Kasozaisoseibutsu
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
US3995623A (en) 1974-12-23 1976-12-07 American Hospital Supply Corporation Multipurpose flow-directed catheter
JPS5813576B2 (ja) 1974-12-27 1983-03-14 アデカ ア−ガスカガク カブシキガイシヤ 安定化された合成高分子組成物
DE2520814A1 (de) 1975-05-09 1976-11-18 Bayer Ag Lichtstabilisierung von polyurethanen
US4281669A (en) 1975-05-09 1981-08-04 Macgregor David C Pacemaker electrode with porous system
JPS5210847A (en) 1975-07-16 1977-01-27 Nippon Steel Corp Pinch roll
US4096860A (en) 1975-10-08 1978-06-27 Mclaughlin William F Dual flow encatheter
CA1069652A (en) 1976-01-09 1980-01-15 Alain F. Carpentier Supported bioprosthetic heart valve with compliant orifice ring
US4134402A (en) 1976-02-11 1979-01-16 Mahurkar Sakharam D Double lumen hemodialysis catheter
US4072146A (en) 1976-09-08 1978-02-07 Howes Randolph M Venous catheter device
US4335723A (en) 1976-11-26 1982-06-22 The Kendall Company Catheter having inflatable retention means
US4099528A (en) 1977-02-17 1978-07-11 Sorenson Research Co., Inc. Double lumen cannula
US4140126A (en) 1977-02-18 1979-02-20 Choudhury M Hasan Method for performing aneurysm repair
US4265745A (en) 1977-05-25 1981-05-05 Teijin Limited Permselective membrane
US4182833A (en) 1977-12-07 1980-01-08 Celanese Polymer Specialties Company Cationic epoxide-amine reaction products
US4180068A (en) 1978-04-13 1979-12-25 Motion Control, Incorporated Bi-directional flow catheter with retractable trocar/valve structure
DE2960875D1 (en) 1978-04-19 1981-12-10 Ici Plc A method of preparing a tubular product by electrostatic spinning
US4284459A (en) 1978-07-03 1981-08-18 The Kendall Company Method for making a molded catheter
US4227533A (en) 1978-11-03 1980-10-14 Bristol-Myers Company Flushable urinary catheter
US4375817A (en) 1979-07-19 1983-03-08 Medtronic, Inc. Implantable cardioverter
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
DE3010841A1 (de) 1980-03-21 1981-10-08 Ulrich Dr.med. 6936 Haag Uthmann Katheder
US4308085A (en) 1980-07-28 1981-12-29 Jenoptik Jena Gmbh Process for the preparation of high molecular thermoplastic epoxide-amine-polyadducts
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4339369A (en) 1981-04-23 1982-07-13 Celanese Corporation Cationic epoxide-amine reaction products
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4406656A (en) 1981-06-01 1983-09-27 Brack Gillium Hattler Venous catheter having collapsible multi-lumens
US4475972A (en) 1981-10-01 1984-10-09 Ontario Research Foundation Implantable material
US4401472A (en) 1982-02-26 1983-08-30 Martin Marietta Corporation Hydraulic cement mixes and processes for improving hydraulic cement mixes
US4568329A (en) 1982-03-08 1986-02-04 Mahurkar Sakharam D Double lumen catheter
US4546499A (en) 1982-12-13 1985-10-15 Possis Medical, Inc. Method of supplying blood to blood receiving vessels
US4530113A (en) 1983-05-20 1985-07-23 Intervascular, Inc. Vascular grafts with cross-weave patterns
US4647416A (en) 1983-08-03 1987-03-03 Shiley Incorporated Method of preparing a vascular graft prosthesis
US4550447A (en) 1983-08-03 1985-11-05 Shiley Incorporated Vascular graft prosthesis
US5104399A (en) 1986-12-10 1992-04-14 Endovascular Technologies, Inc. Artificial graft and implantation method
US4710169A (en) 1983-12-16 1987-12-01 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4571241A (en) 1983-12-16 1986-02-18 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4737518A (en) 1984-04-03 1988-04-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Lipid derivatives, their production and use
US4562596A (en) 1984-04-25 1986-01-07 Elliot Kornberg Aortic graft, device and method for performing an intraluminal abdominal aortic aneurysm repair
US4782836A (en) 1984-05-24 1988-11-08 Intermedics, Inc. Rate adaptive cardiac pacemaker responsive to patient activity and temperature
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4662382A (en) 1985-01-16 1987-05-05 Intermedics, Inc. Pacemaker lead with enhanced sensitivity
US4762915A (en) 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US4860751A (en) 1985-02-04 1989-08-29 Cordis Corporation Activity sensor for pacemaker control
CA1320724C (en) 1985-07-19 1993-07-27 Koichi Kanehira Terpene amino alcohols and medicinal uses thereof
EP0211305B1 (en) 1985-08-05 1992-07-01 Miyoshi Yushi Kabushiki Kaisha Metal scavenging process
US4701162A (en) 1985-09-24 1987-10-20 The Kendall Company Foley catheter assembly
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US5153319A (en) 1986-03-31 1992-10-06 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
DE3616824A1 (de) 1986-05-17 1987-11-19 Schering Ag Verwendung von haertbaren kunstharzmischungen fuer oberflaechenbeschichtungen und druckfarben und verfahren zu ihrer herstellung
DE3780374D1 (de) 1986-07-31 1992-08-20 Irnich Werner Frequenzadaptierender herzschrittmacher.
US4960409A (en) 1986-09-11 1990-10-02 Catalano Marc L Method of using bilumen peripheral venous catheter with adapter
JPH0829776B2 (ja) 1986-10-29 1996-03-27 東燃化学株式会社 合成樹脂製容器及びその製造用金型
US4720517A (en) 1986-11-24 1988-01-19 Ciba-Geigy Corporation Compositions stabilized with N-hydroxyiminodiacetic and dipropionic acids and esters thereof
US4873370A (en) 1987-03-03 1989-10-10 Pennzoil Products Company Alkylene diamines for use in friction and wear reducing compositions
DE3728917A1 (de) 1987-08-29 1989-03-09 Roth Hermann J Neue lipide mit unsymmetrisch substituierter disulfidbruecke
US5138067A (en) 1987-12-17 1992-08-11 Shionogi & Co. Ltd. Lipid derivatives
US5047540A (en) 1987-12-17 1991-09-10 Shionogi & Co., Ltd. Lipid derivatives
US4892540A (en) 1988-04-21 1990-01-09 Sorin Biomedica S.P.A. Two-leaflet prosthetic heart valve
US5176661A (en) 1988-09-06 1993-01-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite vascular catheter
US5024671A (en) 1988-09-19 1991-06-18 Baxter International Inc. Microporous vascular graft
US5200395A (en) 1988-10-18 1993-04-06 Ajinomoto Company, Inc. Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia
CA2001401A1 (en) 1988-10-25 1990-04-25 Claude Piantadosi Quaternary amine containing ether or ester lipid derivatives and therapeutic compositions
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
US5101824A (en) 1990-04-16 1992-04-07 Siemens-Pacesetter, Inc. Rate-responsive pacemaker with circuitry for processing multiple sensor inputs
WO1992001425A1 (en) 1990-07-26 1992-02-06 Rodney James Lane Self expanding vascular endoprosthesis for aneurysms
US5693338A (en) 1994-09-29 1997-12-02 Emisphere Technologies, Inc. Diketopiperazine-based delivery systems
ES2085435T3 (es) 1990-10-09 1996-06-01 Cook Inc Dispositivo dilatador percutaneo.
EP0491082B1 (de) 1990-12-19 1995-04-12 Peter Dr. Ing. Osypka Herzschrittmacherleitung mit einem inneren Kanal und mit einem Elektrodenkopf
US5116360A (en) 1990-12-27 1992-05-26 Corvita Corporation Mesh composite graft
US5405363A (en) 1991-03-15 1995-04-11 Angelon Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5330768A (en) 1991-07-05 1994-07-19 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery using polymer/pluronic blends
US5545449A (en) 1991-10-02 1996-08-13 Weyerhaeuser Company Polyether-reinforced fiber-based materials
US5151105A (en) 1991-10-07 1992-09-29 Kwan Gett Clifford Collapsible vessel sleeve implant
US5284491A (en) 1992-02-27 1994-02-08 Medtronic, Inc. Cardiac pacemaker with hysteresis behavior
US5352461A (en) 1992-03-11 1994-10-04 Pharmaceutical Discovery Corporation Self assembling diketopiperazine drug delivery system
SE9200951D0 (sv) 1992-03-27 1992-03-27 Kabi Pharmacia Ab Pharmaceutical composition containing a defined lipid system
EP0657534A4 (en) 1992-08-04 1997-06-04 Green Cross Corp ANTIALLERGIC AGENT.
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
US5380778A (en) 1992-09-30 1995-01-10 Minnesota Mining And Manufacturing Company Fluorochemical aminoalcohols
US5461223A (en) 1992-10-09 1995-10-24 Eastman Kodak Company Bar code detecting circuitry
JPH06211978A (ja) 1992-10-28 1994-08-02 Takeda Chem Ind Ltd 新規ポリエーテルポリオール及びそれを用いる軟質ウレタンフォームの製造法
US5300022A (en) 1992-11-12 1994-04-05 Martin Klapper Urinary catheter and bladder irrigation system
US5496362A (en) 1992-11-24 1996-03-05 Cardiac Pacemakers, Inc. Implantable conformal coil patch electrode with multiple conductive elements for cardioversion and defibrillation
US5716395A (en) 1992-12-11 1998-02-10 W.L. Gore & Associates, Inc. Prosthetic vascular graft
CA2156288C (en) 1993-02-19 2005-10-18 Junichi Yano Glycerol derivative, device and pharmaceutical composition
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
US5697953A (en) 1993-03-13 1997-12-16 Angeion Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5624976A (en) 1994-03-25 1997-04-29 Dentsply Gmbh Dental filling composition and method
US5314430A (en) 1993-06-24 1994-05-24 Medtronic, Inc. Atrial defibrillator employing transvenous and subcutaneous electrodes and method of use
DE4325848A1 (de) 1993-07-31 1995-02-02 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von N-(2-Hydroxyethyl)-piperazin
DE69428057T2 (de) 1993-10-06 2002-04-18 Mitsubishi Jukogyo K.K., Tokio/Tokyo Verfahren zur Abscheidung von Kohlendioxid aus Verbrennungsabgasen
US5609624A (en) 1993-10-08 1997-03-11 Impra, Inc. Reinforced vascular graft and method of making same
SE9303481L (sv) 1993-10-22 1995-04-23 Berol Nobel Ab Hygienkomposition
WO1995013033A1 (en) 1993-11-08 1995-05-18 Lazarus Harrison M Intraluminal vascular graft and method
NZ277614A (en) 1993-11-24 1998-05-27 Megabios Corp Piperazine-containing amphiphiles and their use in liposomes for delivering genetic material intracellularly
US5464924A (en) 1994-01-07 1995-11-07 The Dow Chemical Company Flexible poly(amino ethers) for barrier packaging
US5853717A (en) 1994-07-20 1998-12-29 Cytotherapeutics, Inc. Methods and compositions of growth control for cells encapsulated within bioartificial organs
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
GB9524630D0 (en) 1994-12-24 1996-01-31 Zeneca Ltd Chemical compounds
US5965434A (en) 1994-12-29 1999-10-12 Wolff; Jon A. Amphipathic PH sensitive compounds and delivery systems for delivering biologically active compounds
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
JP2001523215A (ja) 1995-04-17 2001-11-20 イマークス ファーマシューティカル コーポレーション ハイブリッド磁気共鳴造影剤
US6428771B1 (en) 1995-05-15 2002-08-06 Pharmaceutical Discovery Corporation Method for drug delivery to the pulmonary system
US5772694A (en) 1995-05-16 1998-06-30 Medical Carbon Research Institute L.L.C. Prosthetic heart valve with improved blood flow
US5700642A (en) 1995-05-22 1997-12-23 Sri International Oligonucleotide sizing using immobilized cleavable primers
CA2222328C (en) 1995-06-07 2012-01-10 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5609629A (en) 1995-06-07 1997-03-11 Med Institute, Inc. Coated implantable medical device
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US5607385A (en) 1995-08-17 1997-03-04 Medtronic, Inc. Device and algorithm for a combined cardiomyostimulator and a cardiac pacer-carioverter-defibrillator
US5728844A (en) 1995-08-29 1998-03-17 Celgene Corporation Immunotherapeutic agents
US5744335A (en) 1995-09-19 1998-04-28 Mirus Corporation Process of transfecting a cell with a polynucleotide mixed with an amphipathic compound and a DNA-binding protein
FR2740978B1 (fr) 1995-11-10 1998-01-02 Ela Medical Sa Dispositif medical actif du type defibrillateur/cardioverteur implantable
US5874105A (en) 1996-01-31 1999-02-23 Collaborative Laboratories, Inc. Lipid vesicles formed with alkylammonium fatty acid salts
US6667053B1 (en) * 1996-02-16 2003-12-23 Elan Pharmaceuticals, Inc. D and L etherlipid stereoisomers and liposomes
US5913848A (en) 1996-06-06 1999-06-22 Luther Medical Products, Inc. Hard tip over-the-needle catheter and method of manufacturing the same
US5736573A (en) 1996-07-31 1998-04-07 Galat; Alexander Lipid and water soluble derivatives of drugs
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
US6887665B2 (en) 1996-11-14 2005-05-03 Affymetrix, Inc. Methods of array synthesis
US6204297B1 (en) 1996-11-26 2001-03-20 Rhodia Inc. Nonionic gemini surfactants
JPH10197978A (ja) 1997-01-09 1998-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd ハロゲン化銀写真感光材料
FR2760193B1 (fr) 1997-02-28 1999-05-28 Transgene Sa Lipides et complexes de lipides cationiques et de substances actives, notamment pour la transfection de cellules
US5837283A (en) 1997-03-12 1998-11-17 The Regents Of The University Of California Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells
US5945326A (en) 1997-03-20 1999-08-31 New England Biolabs, Inc. Method for cloning and producing the Spel restriction endonuclease
JP2001501975A (ja) * 1997-05-28 2001-02-13 ペーター・エー・ニールセン 亢進した細胞取り込みを有する結合ペプチド核酸
JPH115786A (ja) 1997-06-13 1999-01-12 Pola Chem Ind Inc 新規アミノヒドロキシプロピルピペラジン誘導体
US6067471A (en) 1998-08-07 2000-05-23 Cardiac Pacemakers, Inc. Atrial and ventricular implantable cardioverter-defibrillator and lead system
JPH1180142A (ja) 1997-09-05 1999-03-26 Pola Chem Ind Inc ジフェニルアルキル化合物の製造法
US6096075A (en) 1998-01-22 2000-08-01 Medical Carbon Research Institute, Llc Prosthetic heart valve
US6271209B1 (en) 1998-04-03 2001-08-07 Valentis, Inc. Cationic lipid formulation delivering nucleic acid to peritoneal tumors
US6176877B1 (en) 1998-04-20 2001-01-23 St. Jude Medical, Inc. Two piece prosthetic heart valve
DE19822602A1 (de) 1998-05-20 1999-11-25 Goldschmidt Ag Th Verfahren zur Herstellung von Polyaminosäureestern durch Veresterung von sauren Polyaminosäuren oder Umesterung von Polyaminosäureestern
NO313244B1 (no) 1998-07-08 2002-09-02 Crew Dev Corp Fremgangsmåte for isolering og produksjon av magnesitt eller magnesiumklorid
US6055454A (en) 1998-07-27 2000-04-25 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac pacemaker with automatic response optimization of a physiologic sensor based on a second sensor
WO2000010622A1 (en) 1998-08-20 2000-03-02 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US6379698B1 (en) 1999-04-06 2002-04-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Fusogenic lipids and vesicles
IL146055A0 (en) 1999-04-23 2002-07-25 Alza Corp Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome
US6169923B1 (en) 1999-04-23 2001-01-02 Pacesetter, Inc. Implantable cardioverter-defibrillator with automatic arrhythmia detection criteria adjustment
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
ES2395096T3 (es) 1999-06-29 2013-02-08 Mannkind Corporation Purificación y estabilización de agentes farmacéuticos a base de péptidos y proteínas
AU6105300A (en) 1999-07-16 2001-02-05 Purdue Research Foundation Vinyl ether lipids with cleavable hydrophilic headgroups
US6358278B1 (en) 1999-09-24 2002-03-19 St. Jude Medical, Inc. Heart valve prosthesis with rotatable cuff
US6371983B1 (en) 1999-10-04 2002-04-16 Ernest Lane Bioprosthetic heart valve
CN1433478A (zh) 1999-12-30 2003-07-30 诺瓦提斯公司 用于基因治疗的新的胶体合成载体
US6370434B1 (en) 2000-02-28 2002-04-09 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac lead and method for lead implantation
US6331381B1 (en) 2000-04-14 2001-12-18 International Business Machines Corporation Method for making a liquid crystal alignment layer
US6565960B2 (en) 2000-06-01 2003-05-20 Shriners Hospital Of Children Polymer composite compositions
EP1297169B1 (en) 2000-06-26 2012-08-08 Ethris Gmbh Method for transfecting cells using a magnetic field
IL138474A0 (en) 2000-09-14 2001-10-31 Epox Ltd Highly branched water-soluble polyamine oligomers, process for their preparation and applications thereof
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
USRE43612E1 (en) 2000-10-10 2012-08-28 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7427394B2 (en) 2000-10-10 2008-09-23 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US20020094528A1 (en) 2000-11-29 2002-07-18 Salafsky Joshua S. Method and apparatus using a surface-selective nonlinear optical technique for detection of probe-target interations
JP2002167368A (ja) 2000-12-01 2002-06-11 Nitto Denko Corp アルキル置換デンドリマーおよびその製造法
US20020192721A1 (en) 2001-03-28 2002-12-19 Engeneos, Inc. Modular molecular clasps and uses thereof
TW588032B (en) 2001-04-23 2004-05-21 Shinetsu Chemical Co New tertiary amine compound having ester structure and method for producing the same
US6656977B2 (en) 2001-07-20 2003-12-02 Air Products And Chemical, Inc. Alkyl glycidyl ether-capped polyamine foam control agents
IL161100A0 (en) 2001-09-28 2004-08-31 Max Planck Gesellschaft Identification of novel genes coding for small temporal rnas
WO2003040288A2 (de) 2001-11-09 2003-05-15 Bayer Healthcare Ag Isotopencodierte affinitätsmarker 3
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
US20030215395A1 (en) 2002-05-14 2003-11-20 Lei Yu Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier
US7601367B2 (en) 2002-05-28 2009-10-13 Mirus Bio Llc Compositions and processes using siRNA, amphipathic compounds and polycations
DK1519714T3 (da) 2002-06-28 2011-01-31 Protiva Biotherapeutics Inc Fremgangsmåde og apparat til fremstilling af liposomer
US20040028804A1 (en) 2002-08-07 2004-02-12 Anderson Daniel G. Production of polymeric microarrays
AU2003260724A1 (en) 2002-08-22 2004-03-11 Celltran Limited Cell culture surface
US7563857B2 (en) 2002-11-04 2009-07-21 Momentive Performance Materials Gmbh Linear polyamino and/or polyammonium polysiloxane copolymers I
CA2506843A1 (en) 2002-11-22 2004-06-10 Novo-Nordisk A/S 2,5-diketopiperazines for the treatment of obesity
US6998508B2 (en) 2003-03-10 2006-02-14 Air Products And Chemicals, Inc. Tertiary alkanolamines containing surface active alkyl groups
US7619017B2 (en) 2003-05-19 2009-11-17 Wacker Chemical Corporation Polymer emulsions resistant to biodeterioration
US7507859B2 (en) 2003-06-16 2009-03-24 Fifth Base Llc Functional synthetic molecules and macromolecules for gene delivery
AU2004272646B2 (en) 2003-09-15 2011-11-24 Arbutus Biopharma Corporation Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof
CA2539670A1 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Massachusetts Institute Of Technology Nanoliter-scale synthesis of arrayed biomaterials and screening thereof
US20050069590A1 (en) 2003-09-30 2005-03-31 Buehler Gail K. Stable suspensions for medicinal dosages
AU2004287652A1 (en) 2003-11-10 2005-05-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Diimonium salt compound and use thereof
US7022214B2 (en) 2004-01-21 2006-04-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Carrier ampholytes of high pH range
US7556684B2 (en) 2004-02-26 2009-07-07 Construction Research & Technology Gmbh Amine containing strength improvement admixture
US20060228404A1 (en) 2004-03-04 2006-10-12 Anderson Daniel G Compositions and methods for treatment of hypertrophic tissues
EP1737899B1 (en) 2004-04-20 2015-07-08 Dendritic Nanotechnologies, Inc. Dendritic polymers with enhanced amplification and interior functionality
CA2569645C (en) 2004-06-07 2014-10-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
JP4796062B2 (ja) 2004-06-07 2011-10-19 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 脂質封入干渉ｒｎａ
DE102004043342A1 (de) 2004-09-08 2006-03-09 Bayer Materialscience Ag Blockierte Polyurethan-Prepolymere als Klebstoffe
GB0502482D0 (en) 2005-02-07 2005-03-16 Glaxo Group Ltd Novel compounds
CA2597724A1 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
US7977452B2 (en) 2005-03-28 2011-07-12 Dendritic Nanotechnologies, Inc. Janus dendrimers and dendrons
EP1912679A4 (en) 2005-06-15 2009-07-29 Massachusetts Inst Technology AMINOUS LIPIDS AND ITS USES
ES2937245T3 (es) 2005-08-23 2023-03-27 Univ Pennsylvania ARN que contiene nucleósidos modificados y métodos de uso del mismo
KR101486829B1 (ko) 2005-09-14 2015-01-29 맨카인드 코포레이션 결정질 미립자 표면에 대한 활성제의 친화력의 증가를 기반으로 하는 약물 제제의 방법
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
US8101741B2 (en) 2005-11-02 2012-01-24 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
US20090221684A1 (en) 2005-12-22 2009-09-03 Trustees Of Boston University Molecules for Gene Delivery and Gene Therapy, and Methods of Use Thereof
CN100569877C (zh) 2005-12-30 2009-12-16 财团法人工业技术研究院 含多uv交联反应基的分枝状结构化合物及其应用
EP1986679B1 (en) 2006-02-22 2017-10-25 MannKind Corporation A method for improving the pharmaceutic properties of microparticles comprising diketopiperazine and an active agent
CA2643744A1 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Technische Universitaet Muenchen Cancer imaging and treatment
US20070275923A1 (en) 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
EP2032652A4 (en) 2006-06-05 2011-08-17 Massachusetts Inst Technology NETWORKED DEVELOPABLE POLYMERS AND ITS USE
ES2293834B1 (es) 2006-07-20 2009-02-16 Consejo Superior Investig. Cientificas Compuesto con actividad inhibidora de las interacciones ubc13-uev, composiciones farmaceuticas que lo comprenden y sus aplicaciones terapeuticas.
EP2046266A4 (en) 2006-07-21 2009-11-04 Massachusetts Inst Technology ENDMODICIFIED POLY (BETA AMINO ESTER) AND ITS USE
US8304529B2 (en) 2006-07-28 2012-11-06 Life Technologies Corporation Dinucleotide MRNA cap analogs
WO2008042973A2 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid containing formulations
WO2008113364A2 (en) 2007-03-20 2008-09-25 Recepticon Aps Amino derivatives to prevent nephrotoxicity and cancer
JP5186126B2 (ja) 2007-03-29 2013-04-17 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 新規トリアジン誘導体ならびにその製法およびそのガス分離膜としての用途
WO2008137470A1 (en) 2007-05-01 2008-11-13 Pgr-Solutions Multi-chain lipophilic polyamines
GB0716897D0 (en) 2007-08-30 2007-10-10 Univ Muenchen Tech Cancer imaging and treatment
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
JP5697450B2 (ja) 2007-10-02 2015-04-08 マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド 核酸の送達のためのリポペプチド
WO2009058911A2 (en) 2007-10-31 2009-05-07 Applied Biosystems Inc. Preparation and isolation of 5' capped mrna
WO2009082607A2 (en) 2007-12-04 2009-07-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
US9006191B2 (en) 2007-12-27 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
US8575123B2 (en) 2008-04-11 2013-11-05 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
US20090263407A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic Lipids and Uses Thereof
JP5024216B2 (ja) 2008-07-23 2012-09-12 トヨタ自動車株式会社 内燃機関の点火時期制御装置及び点火時期制御方法
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
PL2350043T3 (pl) 2008-10-09 2014-09-30 Tekmira Pharmaceuticals Corp Ulepszone aminolipidy i sposoby dostarczania kwasów nukleinowych
EP2902013A1 (en) 2008-10-16 2015-08-05 Marina Biotech, Inc. Processes and Compositions for Liposomal and Efficient Delivery of Gene Silencing Therapeutics
WO2010062322A2 (en) 2008-10-27 2010-06-03 Massachusetts Institute Of Technology Modulation of the immune response
WO2010053572A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
WO2010054406A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
WO2010083615A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
US20100222489A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Jiang Dayue D Copolymer composition, membrane article, and methods thereof
US8460696B2 (en) * 2009-03-20 2013-06-11 Egen, Inc. Polyamine derivatives
CN102334237B (zh) 2009-04-02 2015-05-13 西蒙公司 电信接线板
NZ711583A (en) 2009-05-05 2017-03-31 Arbutus Biopharma Corp Lipid compositions
WO2010132876A1 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Polymers for delivering a substance into a cell
KR102066189B1 (ko) 2009-06-10 2020-01-14 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
WO2010147992A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for increasing efficacy of lipid formulated sirna
CA2767129C (en) 2009-07-01 2015-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein b
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
NZ598125A (en) 2009-07-30 2014-05-30 Salvat Lab Sa Apaf-1 inhibitor compounds
EP3165234B1 (de) 2009-07-31 2019-04-03 ethris GmbH Rna mit einer kombination aus unmodifizierten und modifizierten nucleotiden zur proteinexpression
DE102009043342A1 (de) 2009-09-29 2011-03-31 Bayer Technology Services Gmbh Stoffe für selbstorganisierte Träger zur kontrollierten Freisetzung eines Wirkstoffs
RS58405B1 (sr) 2009-12-01 2019-04-30 Translate Bio Inc Stereoidni derivati za isporuku irnk u humanim genetskim oboljenjima
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
MX348474B (es) 2009-12-23 2017-06-14 Novartis Ag * Lipidos, composiciones de lipido, y metodos de uso de los mismos.
JP2013527856A (ja) 2010-05-12 2013-07-04 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 陽イオン性脂質およびその使用方法
CN101863544B (zh) 2010-06-29 2011-09-28 湖南科技大学 一种氰尿酸基重金属螯合絮凝剂及其制备方法
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9193827B2 (en) 2010-08-26 2015-11-24 Massachusetts Institute Of Technology Poly(beta-amino alcohols), their preparation, and uses thereof
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012075040A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA FOR USE IN TREATMENT OF HUMAN GENETIC DISEASES
CA2831392C (en) 2011-03-28 2020-04-28 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
WO2012133737A1 (ja) 2011-03-31 2012-10-04 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 架橋性アミン化合物、該化合物を用いた高分子膜及びその製造方法
US20140206752A1 (en) 2011-05-17 2014-07-24 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
EP2532649B1 (en) 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
JP6184945B2 (ja) 2011-06-08 2017-08-23 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド ｍＲＮＡ送達のための脂質ナノ粒子組成物および方法
ES2987057T3 (es) 2011-06-08 2024-11-13 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
EP2755986A4 (en) 2011-09-12 2015-05-20 Moderna Therapeutics Inc MANIPULATED NUCLEIC ACIDS AND METHOD OF APPLICATION THEREFOR
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3384938A1 (en) 2011-09-12 2018-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HRP20220250T1 (hr) * 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi i nukleinske kiseline, te njihove uporabe
EP2764007A4 (en) 2011-10-05 2015-05-06 Protiva Biotherapeutics Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR DISABLING ALDEHYDE DEHYDROGENASE
PE20181541A1 (es) 2011-10-27 2018-09-26 Massachusetts Inst Technology Derivados de aminoacidos funcionalizados en la terminal n capaces de formar microesferas encapsuladoras de farmaco
EP2791364A4 (en) 2011-12-14 2015-11-11 Moderna Therapeutics Inc PROCESS FOR RESPONSE TO A BIOLOGICAL THREAT
EP2791159A4 (en) 2011-12-14 2015-10-14 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED NUCLEIC ACIDS AND ACUTE TREATMENT USES THEREOF
SI2791160T1 (sl) 2011-12-16 2022-07-29 Modernatx, Inc. Sestave modificirane MRNA
RU2014129863A (ru) 2011-12-21 2016-02-10 Модерна Терапьютикс, Инк. Способы повышения жизнеспособности или увеличения продолжительности жизни органа или экспланта органа
WO2013101690A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 modeRNA Therapeutics Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
PT2817287T (pt) 2012-02-24 2018-12-28 Arbutus Biopharma Corp Lípidos catiónicos trialquílicos e seus métodos de utilização
DK2830595T3 (da) 2012-03-29 2019-12-02 Translate Bio Inc Ioniserbare kationiske lipider
AU2013243952A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
HK1206612A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of secreted proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
WO2014028487A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
SMT202200337T1 (it) 2012-11-26 2022-09-14 Modernatx Inc Rna modificato al livello del terminale
EP3628335B1 (en) 2012-12-07 2023-11-08 Translate Bio, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivery in the lungs
WO2014093574A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
AU2013374345A1 (en) 2013-01-17 2015-08-06 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
JP5991937B2 (ja) 2013-03-06 2016-09-14 Ｊｘエネルギー株式会社 摩擦調整剤および潤滑油組成物
WO2014158795A1 (en) 2013-03-12 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
EP2968391A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2014144767A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014144711A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
US10077439B2 (en) 2013-03-15 2018-09-18 Modernatx, Inc. Removal of DNA fragments in mRNA production process
US9315472B2 (en) 2013-05-01 2016-04-19 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
US9895443B2 (en) 2013-06-26 2018-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Multi-tailed lipids and uses thereof
HUE056760T2 (hu) 2013-07-11 2022-03-28 Modernatx Inc A CRISPR-hez kapcsolódó fehérjéket és a szintetikus SGRNS-ket kódoló szintetikus polinukleotidokat tartalmazó készítmények és felhasználási módjaik
CN105555757A (zh) 2013-07-23 2016-05-04 普洛体维生物治疗公司 用于递送信使rna的组合物和方法
AU2014315287A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
US20160264614A1 (en) 2013-10-02 2016-09-15 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
KR101355583B1 (ko) 2013-10-04 2014-01-24 한국지질자원연구원 간이 유용광물 분리 장치 및 이를 이용한 유용광물 분리 방법
WO2015058069A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
RU2017114964A (ru) 2014-10-02 2018-11-07 Протива Байотерапьютикс, Инк. Композиции и способы для подавления экспрессии гена вируса гепатита в
WO2016071857A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus expression
EP3218508A4 (en) 2014-11-10 2018-04-18 Modernatx, Inc. Multiparametric nucleic acid optimization
EP3461904A1 (en) 2014-11-10 2019-04-03 ModernaTX, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
WO2016118724A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
WO2016118725A1 (en) 2015-01-23 2016-07-28 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12458604B2 (en) 2020-10-14 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of lipid nanoparticle manufacture and compositions derived therefrom

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