JP6370264B2 - グルコシルセラミドシンターゼの阻害剤としての非晶質及び結晶型のｇｅｎｚ１１２６３８ヘミ酒石酸塩 - Google Patents

Description

関連する出願
本出願は、その全ての教示が本明細書中に援用される、２００９年１１月２７日に出願
された米国特許仮出願６１／２６４，７４８の利益を主張するものである。

本発明は、医薬用途において使用可能な化合物のヘミ酒石酸塩に関する。

スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、細胞増殖、細胞分化、細胞間又は細胞及び基質タンパ
ク質間の接着、微生物及びウイルスの細胞への結合、並びに腫瘍細胞の転移を促進する能
力を含む、多数の生物学的機能を有する天然に存在する化合物の群である。ＧＳＬは、グ
ルコシルセラミド（ＧｌｃＣｅｒ）から誘導され、これは、セラミド及びＵＤＰ−グルコ
ースから酵素ＵＤＰ−グルコース：Ｎ−アシルスフィンゴシングルコシルトランスフェラ
ーゼ（ＧｌｃＣｅｒシンターゼ）によって製造される。セラミドの構造を、以下に示す：

ＧＳＬの蓄積は多くの疾病に関連し、テイサックス、ゴーシェ、及びファブリ病が挙げ
られる（例えば、米国特許第６，０５１，５９８号を参照されたい）。ＧＳＬは、更に、
ある種の癌に関連する。例えば、ある種のＧＳＬが、腫瘍中のみに、又は腫瘍中に異常に
高い濃度で、存在すること；培養培地中の腫瘍細胞に加えた場合、腫瘍成長に顕著な刺激
性又は阻害性作用を発揮すること；及び腫瘍によって周囲の細胞外液中に流された場合、
身体の正常な免疫防御系を阻害することが見いだされている。腫瘍が次第に悪性になり、
そしてある種のＧＳＬに対する抗体が腫瘍の成長を阻害するのにしたがって、腫瘍のＧＳ
Ｌの組成は変化する。

ＧｌｃＣｅｒシンターゼを阻害する化合物は、ＧＳＬ濃度を低下することができ、そし
て前述の疾病の一つを持つ患者を治療するために有用であることが報告されている。本明
細書中で“アミノセラミド様化合物”と呼ばれる、ＧｌｃＣｅｒの多くの強力な阻害剤が
、米国特許第６，０５１，５９８号、５，９５２，３７０号、５，９４５，４４２号、５
，９１６，９１１号及び６，０３０，９９５号中に開示されている。以下に示した式（Ｉ
）の化合物は、ゴーシェ病の治療のために、現時点で臨床試験中のＧｌｃＣｅｒシンター
ゼ阻害剤である：

米国特許第６，０５１，５９８号、 米国特許第６，０５１，５９８号、 米国特許第５，９５２，３７０号、 米国特許第５，９４５，４４２号、 米国特許第５，９１６，９１１号、 米国特許第６，０３０，９９５号。

結晶質および他の状態で大規模な製造に受け入れられる物理的特性を有する、この薬物
候補の塩の形態に対する必要性が存在する。更にこの薬物候補が安定で且つ患者に有効に
供給される医薬製剤、並びにこの化合物を使用する改良された治療方法に対する必要性が
存在する。

発明の概要
式（Ｉ）の化合物のヘミ酒石酸塩（本明細書中で、以下“式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩”）
を、明確に定義された条件下で結晶化して、ある種の非吸湿性の結晶質形態を提供するこ
とができることが見いだされている。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、式（Ｉ）の他の塩と比
較して、幾つかの有利な特性を有する。実施例１で更に記載されるように、クエン酸塩、
マレイン酸塩、フマル酸塩、メチルスルホン酸塩、及び酢酸塩を含む多くの式（Ｉ）塩は
、固体の形態で得ることができなかった。式（Ｉ）の塩酸及び１：１の酒石酸塩は、固体
の形態で得られたが、どちらも結晶質でなく、そして両方とも処方のためには吸湿性過ぎ
た。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、遊離塩基及び他の塩より処方及び合成しやすい。式（Ｉ
）・ヘミ酒石酸塩は、更に結晶質で、非吸湿性で、水溶性であり、そして対応する遊離塩
基（本明細書中で、以下“式（Ｉ）遊離塩基”）及び他の塩より良好に流動する。従って
、これらの好ましい特性により、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、薬物候補としての大規模製
造に適する。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のカプセル製剤のための安定な顆粒を、規定された比の水不溶
性充填剤、水溶性充填剤、及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を使用して調製することができる
ことも更に見出されている。この発見に基づいて、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の安定な医薬
製剤が開示される。

式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）は
、肝臓によって、主としてシトクロムＰ４５０酵素によって代謝されることも更に見出さ
れている。この発見に基づいて、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（式（
Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）による、薬物／薬物の相互作用に対する潜在性を減少する治
療の方法が開示される。

組換えグルコセレブロシダーゼを、そして次いで式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を投与された
ゴーシェ病のマウスが、単独のグリコセレブロシダーゼ又は単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸
塩による治療と比較して、内臓器官中の低いレベルのＧＬ１及び肝臓中の減少したゴーシ
ェ細胞の数を示したことも更に見出されている。この発見に基づいて、式（Ｉ）の化合物
又は医薬的に受容可能なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）による組合せ治療も更
に開示される。

本出願の一つの態様は、式（Ｉ）によって表される化合物のヘミ酒石酸塩である。先に
記述したように、式（Ｉ）によって表される化合物のヘミ酒石酸塩は、本明細書中で“式
（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩”と呼ばれる。式（Ｉ）によって表される化合物は、本明細書中で
“式（Ｉ）遊離塩基”と呼ばれる。

本出願のもう一つの態様は、医薬的に受容可能な担体又は希釈剤及び式（Ｉ）・ヘミ酒
石酸塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
もう一つの態様は、そのような阻害や低下を必要とする患者において、グルコシルセラ
ミドシンターゼを阻害する、又はスフィンゴ糖脂質濃度を低下する、有効な量の式（Ｉ）
・ヘミ酒石酸塩を患者に投与することによる方法を提供する。

もう一つの態様は、そのような阻害や低下を必要とする患者において、グルコシルセラ
ミドシンターゼを阻害する、又はスフィンゴ糖脂質濃度を低下するための医薬の製造のた
めの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の使用を提供する。

もう一つの態様は、そのような阻害や低下を必要とする患者において、グルコシルセラ
ミドシンターゼを阻害する、又はスフィンゴ糖脂質濃度を低下するための式（Ｉ）・ヘミ
酒石酸塩の使用を提供する。

もう一つの態様は、ゴーシェ病に罹患する者を治療する方法である。この方法は、有効
な量の第１の治療剤を有効な量の第２の治療剤との組み合わせで患者に投与することを含
んでなる。第１の治療剤は、式（Ｉ）又は医薬的に受容可能なその塩によって表され；そ
して第２の治療剤は、ゴーシェ病の治療のために有効である。

もう一つの態様は、ファブリ病に罹患する者を治療する方法である。この方法は、有効
な量の第１の治療剤を有効な量の第２の治療剤との組み合わせで患者に投与することを含
んでなる。第１の治療剤は、式（Ｉ）又は医薬的に受容可能なその塩によって表され；そ
して第２の治療剤は、ファブリ病の治療のために有効である。

もう一つの態様は：式（Ｉ）によって表される化合物のヘミ酒石酸塩；少なくとも一つ
の水溶性充填剤；少なくとも一つの非水溶性充填剤；少なくとも一つの結合剤；及び少な
くとも一つの潤滑剤を含んでなる医薬組成物を提供する。

本発明のもう一つの態様は、ファブリ病の患者を治療する方法である。この方法は以下
の工程を含んでなる：
ａ）有効な量の式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩を患者に投与し；
ｂ）患者を試験して、患者が低、中また高／迅速Ｐ４５０代謝群のいずれであるかを決
定し；
ｃ）患者が中又は高／迅速Ｐ４５０代謝群である場合、化合物の調節された有効な量を
決定し；そして
ｄ）患者が中又は高／迅速Ｐ４５０代謝群である場合、調節された有効な量の式（Ｉ）
の化合物を患者に投与し、そして患者が低Ｐ４５０代謝群である場合、有効な量の式（Ｉ
）の化合物を患者に投与すること。

本発明のもう一つの態様は、ゴーシェ病の患者を治療する方法である。この方法は以下
の工程を含んでなる：
ａ）有効な量の式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩を患者に投与し；
ｂ）患者を試験して、患者が低、中また高／迅速Ｐ４５０代謝群のいずれであるかを決
定し；
ｃ）患者が中又は高／迅速Ｐ４５０代謝群である場合、化合物の調節された有効な量を
決定し；そして
ｄ）患者が中又は高／迅速Ｐ４５０代謝群である場合、調節された有効な量の式（Ｉ）
の化合物を患者に投与し、そして患者が低Ｐ４５０代謝群である場合、有効な量の式（Ｉ
）の化合物を患者に投与すること。

本発明のもう一つの態様は、ファブリ病の患者を治療する方法である。この方法は以下
の工程を含んでなる：
ａ）有効な量の以下の構造式：

によって表される化合物；又は医薬的に受容可能なその塩を患者に投与し；
ｂ）患者中の化合物のトラフ血漿レベルを評価し；そして
ｃ）患者に投与される化合物の量を、化合物のトラフ血漿レベルが少なくとも５ｎｇ／
ｍｌであるように調節する。別の方法として、患者中の化合物のトラフ血漿レベル及びＣ
_ｍａｘを工程ｂ）で評価し、そしてｃ）において、患者に投与される化合物の量を、患者
中の化合物のトラフ血漿レベルが少なくとも５ｎｇ／ｍｌであり、そして患者中の化合物
のＣ_ｍａｘが１００ｎｇ／ｍｌより低いように調節する。

本発明のもう一つの態様は、ゴーシェ病の患者を治療する方法である。この方法は以下
の工程を含んでなる：
ａ）有効な量の以下の構造式：

によって表される化合物；又は医薬的に受容可能なその塩を患者に投与し；
ｂ）患者中の化合物のトラフ血漿レベルを評価し；そして
ｃ）患者に投与される化合物の量を、化合物のトラフ血漿レベルが少なくとも５ｎｇ／
ｍｌであるように調節する。別の方法として、患者中の化合物のトラフ血漿レベル及びＣ
_ｍａｘを工程ｂ）で評価し、そしてｃ）において、患者に投与される化合物の量を、患者
中の化合物のトラフ血漿レベルが少なくとも５ｎｇ／ｍｌであり、そして患者中の化合物
のＣ_ｍａｘが１００ｎｇ／ｍｌより低いように調節する。

図１は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の実験的ＸＲＰＤパターン（室温）を示す。 図２は、ゴーシェ病のマウスの肝臓のグルコシルセラミドレベルを低下する酵素及び基質減少治療の効力のグラフである。肝臓のＧＬ１レベルを、未治療の生後３か月の（Ａ）、そして組換えグルコセレブロシダーゼによる２週間の治療後に（Ｂ）ゴーシェ病のマウスで測定した。組換えグルコセレブロシダーゼで治療されたマウスを、更なる治療を行わず（Ｃ）又は１５０ｍｇ／ｋｇ食物の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による療法後（Ｄ）の１０週間後に分析した。研究の全期間中、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を投与された（Ｅ）及び未治療の年齢を合わせた対照（Ｆ）マウスの肝臓中のＧＬ１レベルも更に示す。データは、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表示する（ｎ＝５）。統計的有意性は、独立ｔ検定を使用して決定した。 図３は、ゴーシェ病のマウスの脾臓のグルコシルセラミドレベルを低下する酵素及び基質減少治療の効力のグラフである。脾臓のＧＬ１レベルを、未治療の生後３か月の（Ａ）、そして組換えグルコセレブロシダーゼによる２週間の治療後に（Ｂ）ゴーシェ病のマウスで測定した。組換えグルコセレブロシダーゼで治療されたマウスを、更なる治療を行わず（Ｃ）又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による療法後（Ｄ）の１０週間後に分析した。研究の全期間中、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を投与されたマウス（Ｅ）及び未治療の年齢を合わせた対照（Ｆ）の脾臓中のＧＬ１レベルも更に示す。データは、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表示する（ｎ＝５）。統計的有意性は、独立ｔ検定を使用して決定した。 図４は、ゴーシェ病のマウスの肺のグルコシルセラミドレベルを低下する酵素及び基質減少治療の効力のグラフである。肺のＧＬ１レベルを、未治療の生後３か月の（Ａ）、そして組換えグルコセレブロシダーゼによる２週間の治療後に（Ｂ）ゴーシェ病のマウスで測定した。組換えグルコセレブロシダーゼで治療されたマウスを、更なる治療を行わず（Ｃ）又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による療法後（Ｄ）の１０週間後に分析した。研究の全期間中、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を投与されたマウス（Ｅ）及び未治療の年齢を合わせた対照（Ｆ）の肺中のＧＬ１レベルも更に示す。データは、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表示する（ｎ＝５）。統計的有意性は、独立ｔ検定を使用して決定した。 図５は、肝臓のＣＤ６８染色の程度の定量化を示すグラフである。肝臓切片のＣＤ６８陽性染色の程度を、ＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウェアを使用して定量した。示したものは、未治療の生後３か月のゴーシェ病の肝臓（Ａ）又はグルコセレブロシダーゼによる治療後のレベルである。酵素で治療され、そして次いで更なる治療的介入を行わない（Ｃ）又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による治療後（Ｄ）のマウスも更に示してある。単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を投与されたゴーシェ病のマウス（Ｅ）及び未治療の年齢を合わせた対照マウス（Ｆ）の肝臓の染色の程度も更に示してある。データは、それぞれのマウスからの切片当たり１０枚の×４００の画像の解析から収集した。統計的有意性は、独立ｔ検定を使用して決定した。 図６は、若いＤ４０９Ｖ／ヌルマウス中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の効力を示すグラフである。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、生後１０週目のＤ４０９Ｖヌルマウスに、７５又は１５０ｍｇ／ｋｇの投与量で１０週間経口強制飼養によって毎日投与した。肝臓、肺、血管及び脾臓のグルコシルセラミドのレベルを、研究の終りにＨＰ−ＴＬＣによって評価した。データを、未治療の年齢を合わせた対照マウス中のＧＬ−１のパーセントとして表示する。点線は、正常な野生型マウスにおいて観察されたグルコシルセラミドレベルを示す。^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１は、未治療の対照に対する（両側、独立ｔ検定）。データは、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として示す。７５ｍｇ／ｋｇに対してｎ＝５；１５０ｍｇ／ｋｇに対してｎ＝６である。 図７は、ファブリ病のマウスの肝臓、心臓、腎臓、脾臓、脳、及び血液中のＧＬ−３の蓄積に対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩治療の効果を示す。 図８は、ファブリ病のマウスにおける末梢神経障害の発症及び進行に対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩治療の効果のグラフを示す。 図９は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で治療されたファブリ病のマウスにおける腎機能の幾つかのマーカーの測定値のグラフを示す。 図１０は、異なった薬物治療：Ａ）ファブラザイムを隔月、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩無し；Ｂ）ファブラザイムを隔月及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を食物中；Ｃ）ファブラザイムを研究の始まり及び研究の４ヶ月目に投与並びに食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｄ）ファブラザイム無し、食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；並びにＥ）薬物治療無し；を受けているマウスの集団のＥＲＴ及びＳＲＴ研究のための時系列を示す。 マウスの六つ（ｎ＝？）の集団（Ａ−Ｅファブリ−Ｒａｇ；及びＦ野生型）の血液の血液ＧＬ−３レベルのｎｇ／ｍＬのグラフを示す；マウスの集団は、次の治療を受けた：Ａ）ファブラザイムを隔月、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩無し；Ｂ）ファブラザイムを隔月及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を食物中；Ｃ）ファブラザイムを研究の始まり及び研究の４ヶ月目に投与並びに食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｄ）ファブラザイム無し、食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｅ）薬物治療無し；並びにＦ）薬物治療無し。 図１２は、ファブリ−Ｒａｇマウスの肝臓及び腎臓中のＧＬ−３のレベルのグラフを示す；マウスの集団（ｎ＝？）は、次の治療を受けた：Ａ）ファブラザイムを隔月、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩無し；Ｂ）ファブラザイムを隔月及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を食物中；Ｃ）ファブラザイムを研究の始まり及び研究の４ヶ月目に投与並びに食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｄ）ファブラザイム無し、食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；並びにＥ）薬物治療無し。 図１３は、ファブリ−Ｒａｇマウス中の尿のＧＬ−３レベルのグラフを示す；マウスの集団（ｎ＝？）は、次の治療：Ａ）ファブラザイムを隔月、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩無し；Ｂ）ファブラザイムを隔月及び食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｃ）ファブラザイムを研究の始まり及び研究の４ヶ月目に投与並びに食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；Ｄ）ファブラザイム無し、食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；並びにＥ）薬物治療無し；を受けた。 図１４は、次の治療：ファブラザイムを隔月、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩無し；ファブラザイムを隔月及び食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；ファブラザイムを研究の始まり及び研究の４ヶ月目に投与並びに食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；ファブラザイム無し、食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩；並びに薬物治療無し；を受けたファブリ−Ｒａｇマウスの野生型マウス；及び生後３か月の未治療のマウスの熱感受性の潜時を秒で示すグラフである。 図１５は、８５℃に３日間暴露した後の、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、カプセル級ラクトース一水和物及びアビセルＰＨ３０１（微結晶セルロース）を含んでなる各種のブレンドのＨＰＬＣによる追跡の分解物の面積の全量を示すグラフである。ＨＰＬＣ追跡の分解物の面積は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩及び分解産物に対応するピークの全面積に対する分解物に対応するピークの全面積の比である。

本出願は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の独特な結晶型、及び本明細書中に記載される当該
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の結晶型を含んでなる式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の新しい医薬組成
物を提供する。本出願は、更にそれを必要とする患者においてグルコシルセラミドシンタ
ーゼを阻害するか、又はスフィンゴ糖脂質を低下する方法を提供する。更に、本出願は、
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の特異的な結晶型を調製するための方法を提供する。本出願は、
更に式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の安定な医薬製剤、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能
なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）による組合せ治療、及び式（Ｉ）の化合物又
は医薬的に受容可能なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）による、薬物／薬物相互
作用の危険度を最小にする治療の方法を提供する。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の結晶型
特別な態様において、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の少なくともある特定の重量パーセント
は、結晶質である。特定の重量パーセントは、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％
、８２％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％
、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、又は７
０％と１００％の間のあるパーセントを含む。

別の特別な態様において、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の少なくともある特定の重量パーセ
ントは、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の単一の結晶型である。特定の重量パーセントは、７０
％、７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９
％、９９．５％、９９．９％、又は７０％と１００％の間のあるパーセントを含む。

本明細書中で使用する場合、“結晶質”は、個々の分子が、高度に均一で規則的な固定
された化学的立体構造を有する結晶構造を有する固体を指す。結晶質の式（Ｉ）・ヘミ酒
石酸塩は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の単一の結晶型の結晶、又は異なった単一の結晶型の
結晶の混合物であることができる。単一の結晶型は、単一の結晶又はそれぞれの結晶が同
一結晶形を有する複数の結晶としての式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を意味する。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の特定の重量パーセントが単一の結晶型である場合、式（Ｉ）
・ヘミ酒石酸塩の残りは、非晶質の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の幾つかの組合せ、及び／又
は前記の単一の結晶型を除く、一つ又はそれより多い他の結晶型の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸
塩である。結晶質の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の一つの特定な
結晶型の規定されたパーセントと定義された場合、残りは、非晶質の形態及び／又は規定
された一つ又はそれより多い特定の形態以外の結晶型で構成される。単一の結晶型の例は
、本明細書中で考察されるような一つ又はそれより多い特性によって特徴づけられる式（
Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のＡ型を含む。

酒石酸は、二つのカルボン酸基を有するので、式（Ｉ）によって表される化合物と塩を
形成するのに、酒石酸に対する複数の異なったモル比の化合物の塩（酒石酸の共役塩基）
を形成することができる。例えば、約１対１のモル比の酒石酸と式（Ｉ）が存在する塩は
、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（酒石酸１：式（Ｉ）１）である；そして約１対２のモル比の
酒石酸と式（Ｉ）が存在する塩は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（酒石酸１：式（Ｉ）２）で
ある。

ヘミ酒石酸塩は、各種の立体異性体の形態で存在することができる。立体異性体は、そ
の空間的配置のみが異なる化合物である。鏡像異性体は、最も普通には、これらが、キラ
ル中心として作用する不斉的に置換された炭素原子を含有するために、その鏡像が重ね合
わせられない立体異性体の対である。ジアステレオ異性体は、最も普通には、これらが、
二つ又はそれより多い不斉的に置換された炭素原子を含有するために、鏡像と関係のない
立体異性体である。

立体構造が命名され（例えば、Ｌ−（＋）酒石酸のように）又は構造によって示された
（例えば、式（Ｉ）のように）場合、命名された又は示された立体異性体は、他の立体異
性体に対して、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９９％又は９９．９重量％
の純度である。単一の鏡像異性体が命名され（例えば、Ｌ−（＋）酒石酸のように）又は
構造によって示された（例えば、式（Ｉ）のように）場合、示された又は命名された鏡像
異性体は、少なくとも８０％、９０％、９９％又は９９．９重量％光学的に純粋である。
光学的純度の重量パーセントは、その鏡像異性体の重量及びその光学異性体の重量に対す
るその鏡像異性体の重量の比である。

“ラセミ体”又は“ラセミ混合物”は、等モル量の二つの鏡像異性体の化合物を意味し
、ここにおいて、このような混合物は、光学活性を示さない；即ち、これらは、偏光面を
回転しない。

酒石酸は、三つの立体異性体：Ｌ−（＋）−酒石酸又は右旋性酒石酸、及びその鏡像異
性体即ち左旋性酒石酸又はＤ−（−）−酒石酸、並びにアキラルな形態即ちメソ酒石酸を
有する。Ｌ又はＤ表示は、偏光面を回転する酸の能力は示さない。

いずれの酒石酸の立体異性体も、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を調製するために使用するこ
とができる。例えば、ヘミ酒石酸塩は、ただ一つのその立体異性体、又はそのこれらの組
み合わせから形成することができる。ヘミ酒石酸塩は、Ｄ−ヘミ酒石酸塩、Ｌ−ヘミ酒石
酸塩、ヘミメソ酒石酸又はラセミのＤ，Ｌ−ヘミ酒石酸塩から選択される。具体的な態様
において、ヘミ酒石酸塩は、Ｌ−ヘミ酒石酸塩である。“Ｌ−ヘミ酒石酸塩”は、ヘミ酒
石酸塩が、Ｌ−酒石酸から形成されたことを意味する。ラセミのＤ，Ｌ−ヘミ酒石酸塩は
、Ｄ−酒石酸及びＬ−酒石酸の両方が、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の調製において使用され
たことを意味する。ラセミのＤ，Ｌ−ヘミ酒石酸塩中のＤ−酒石酸の量は、存在するＬ−
酒石酸塩の量より多い、それに等しい、又はそれより少ないことができる。

“左旋性”は、偏光が、不斉化合物を通過した場合、左に回転されることを意味する。
左旋性を示す接頭辞は、“Ｌ”である。
“右旋性”は、偏光が、不斉化合物を通過した場合、右に回転されることを意味する。
右旋性を示す接頭辞は、“Ｄ”である。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の調製
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、式（Ｉ）を、Ｌ−酒石酸と適した溶媒中で混合することに
よって調製することができる。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の沈殿は、種結晶の添加によって
補助することができる。使用することができる溶媒は、メタノール、水、エタノール、ア
セトン、酢酸エチル、又はこれらの混合物である。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の特定の固体の形態は、例えば、緩慢蒸発、緩慢冷却、及び逆
溶媒沈殿によって調製することができる。これらの方法で使用することができる溶媒は、
水、ヘプタン、ヘキサン、トルエン、ジクロロメタン、エタノール、イソプロピルアルコ
ール、アセトニトリル、酢酸エチル、メタノール、アセトン、メチルターシャリーブチル
エーテル（本明細書中で以下“ＴＢＭＥ”と呼ぶ）、ｐ−ジオキサン、及びテトラヒドロ
フラン（本明細書中で以下“ＴＨＦ”と呼ぶ）を含む。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の固体の形態は、溶媒又は溶媒混合物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩の溶液から溶媒の蒸発によって調製することができる。適した溶媒混合物は、メタノ
ール、エタノール、アセトン、水、酢酸エチル及びジクロロメタンを含む。好ましい溶媒
混合物は、エタノール、メタノール、水及びアセトンを含む。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の固体の形態は、溶媒中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の加熱され
た溶液の緩慢冷却によって調製することができる。適した溶媒は、エタノール、メタノー
ル、水、アセトン、及び酢酸エチルを含む。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の固体の形態は、溶媒中の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の加熱され
た溶液の、溶液を冷却浴中に置くことによる急速な冷却によって調製することができる。
適した溶媒は、エタノール、メタノール、アセトン、水、酢酸エチル又はこれらの溶媒の
混合物を含む。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の固体の形態は、先に記載したような溶媒中の式（Ｉ）・ヘミ
酒石酸塩の溶液を、所定の温度で逆溶媒に加えることによって調製することができる。更
に特に、逆溶媒は、酢酸エチル、アセトン、アセトニトリル、トルエン、ＴＨＦ、ＴＢＭ
Ｅ、ｐ−ジオキサン、イソプロパノール、又はヘプタンである。特別な溶媒／逆溶媒混合
物は、メタノール／酢酸エチル、メタノール／アセトン、メタノール／ヘキサン、メタノ
ール／ヘプタン、メタノール／アセトニトリル、メタノール／トルエン、メタノール／Ｔ
ＨＦ、メタノール／ＴＢＭＥ、メタノール／ｐ−ジオキサン、エタノール／酢酸エチル、
エタノール／ヘキサン、エタノール／ヘプタン、エタノール、アセトン、エタノール／ア
セトニトリル、エタノール／トルエン、エタノール／ＴＢＭＥ、エタノール／ＴＨＦ、水
／ＴＨＦ、水／イソプロパノール、水／アセトニトリル、水／アセトン、ジクロロメタン
／ヘプタン、ジクロロメタン／アセトン、ジクロロメタン／酢酸エチル、ジクロロメタン
／アセトニトリル、ジクロロメタン／トルエン、ジクロロメタン／ＴＨＦ、ジクロロメタ
ン／ＴＢＭＥ、ジクロロメタン／ｐ−ジオキサン、及びジクロロメタン／イソプロパノー
ルを含む。

好ましい溶媒／逆溶媒混合物は、メタノール／酢酸エチル、メタノール／アセトン、メ
タノール／ＴＢＭＥ、及び水／アセトンを含む。
本明細書中で使用する場合、“逆溶媒”は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、低い溶解度を
有し、そしてヘミ酒石酸塩が、微小な粉末又は結晶の形態で溶液から沈殿することを起こ
す溶媒を指す。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の固体の形態を発生する更なる方法は、酢酸エチル／アセトン
から固体を沈殿させ、そして形成された固体を所望により室温で乾燥することを含む。も
う一つの方法において、固体は、次いで種結晶の添加を伴って、又は伴わずにアセトンか
ら再結晶することができる。別の方法として、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、酢酸エチル／
アセトン溶媒から沈殿させ、そして酢酸エチルから再結晶させることができる。別の方法
として、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、次いでイソプロパノールから再結晶することができ
る。別の方法として、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、アセトンのみを使用して更なる再結晶
化を伴わず調製することができる。別の方法として、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、アセト
ンから短時間の還流後、更なる再結晶化を伴わず、沈殿させることができる。

別の方法として、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、次いでメタノール／アセトンから種結晶
の添加を伴って、又は伴わず再結晶することができる。別の方法として、式（Ｉ）・ヘミ
酒石酸塩は、次いで水／アセトンから、種結晶の添加を伴って、又は伴わず、再結晶する
ことができる。

結晶型の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の特徴付け
特別な態様において、結晶型の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の結晶型Ａは、５．１°、６．
６°、１０．７°、１１．０°、１５．９°、及び２１．７°の２θ角における、１、２
、３、４又は５個の主要ＸＲＰＤピークによって特徴づけられる。一つのなお更に特別な
態様において、結晶型は、５．１°、６．６°、１０．７°、１１．０°、１３．３°、
１５．１°、１５．９°、１６．５°、１７．６°、１８．６°、１８．７°、１９．０
°、２０．２°、２１．７°及び２３．５°の２θ角におけるＸＲＰＤピークによって特
徴づけられる。規定された２θ角が、規定された値±０．２°を意味することは理解され
ることである。

本明細書中で使用する場合、“主要なＸＲＰＤピーク”は、２５％より大きい相対強度
を持つＸＲＰＤピークを指す。相対強度は、最大のピークのピーク強度に対する興味ある
ピークのピーク強度の比として計算される。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を使用する治療の方法
本明細書中で使用する場合、被験者は、哺乳動物、好ましくはヒトの患者であるが、し
かし伴侶動物（例えば、イヌ、ネコ、等）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、
等）又は実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、等）のような獣医学の治療を
必要とする動物であることもできる。被験者及び患者は、互換的に使用される。

本出願の一つの態様は、グルコシルセラミドシンターゼの活性を緩徐化する、例えば、
グルコシルセラミドシンターゼの活性を阻害するか低下させる、又はスフィンゴ脂質活性
を減少する方法であって、そのような治療を必要とする患者において、有効な量の、先に
記載したような結晶型を含む、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を患者に投与することによる方法
である。

治療を必要とする患者は、グルコシルセラミドシンターゼを阻害する又は細胞、特にリ
ソソーム又は細胞の膜中のスフィンゴ糖脂質濃度を低下することからの利益を得る症状又
は疾病を持つ患者である。グルコシルセラミドシンターゼの阻害剤は、テイサックス、ゴ
ーシェ又はファブリ病のようなリソソーム蓄積症を治療するために有用であることが示さ
れている（例えば、その全ての教示が、本明細書中に参考文献として援用される、米国特
許第６，５６９，８８９号；６，２５５，３３６号；５，９１６，９１１号；５，３０２
，６０９号；６，６６０，７４９号；６，６１０，７０３号；５，４７２，９６９号；５
，５２５，６１６号を参照されたい）。

症状及び疾病の例としては、多発性嚢胞腎疾患及び膜性糸球体症（その全ての教示が本
明細書中に参考文献として援用される、米国特許仮出願６１／１３０，４０１及び６１／
１０２，５４１を参照されたい）、糸球体腎炎及び糸球体硬化症（米国特許仮出願６１／
１３７，２１４を参照されたい）狼瘡（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援
用される、ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００１７７３を参照されたい）２型糖尿病を含む糖尿
病（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、ＷＯ２００６／０５３０
４３を参照されたい）；癌、膠原病性脈管疾患、アテローム性動脈硬化症、及び糖尿病患
者の腎肥大を含む細胞増殖及び分裂に関係する疾患を治療すること（その全ての教示が本
明細書中に参考文献として援用される、米国特許第６，９１６，８０２号及び５，８４９
，３２６号を参照されたい）；動脈上皮細胞の成長を阻害すること（米国特許第６，９１
６，８０２号及び５，８４９，３２６号を参照されたい）；感染に罹った患者を治療する
こと（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ，Ｍ
．ｅｔ ａｌ．，“Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｇｌｕｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ａ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａ
ｄｈｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｉｎｆｅｃｔ
．ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ．，６２：４４０４−４４１０（１９９４）を参照されたい）；腫
瘍に対する抗体を発生することから宿主、即ち患者を予防すること（その全ての教示が本
明細書中に参考文献として援用される、Ｉｎｏｋｕｃｈｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔ
ｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｍｉｃｅ ｏｆ ａｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｌｅｔｔ．，３８：２３−３０（１９８７）を参照されたい）；及び腫瘍を治療する
こと（これらの全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｈａｋｏｍｏｒｉ
，Ｓ．“Ｎｅｗ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｂａｓ
ｅｄ ｏｎ Ａｂｅｒｒａｎｔ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇ
ｏｌｉｐｉｄｓ： Ａｎｔｉ−ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｒｔｈｏ−Ｓｉｇｎａｌｉ
ｎｇ Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ３：４６１−４７０（１９９１）
，Ｉｎｏｋｕｃｈｉ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉ
ｍｅｎｔａｌ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ Ｍｕｒｉｎｅ Ｌｅｗｉｓ Ｌｏｎｇ Ｃ
ａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ａｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｇｌｕｃｏｓｙｌｃｅｒａ
ｍｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５０：６７３１−６７３７（１９９
０）及びＺｉｃｈｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｃａｎ Ｂｅ
Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｏｒ Ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｉｎ Ｖｉｖｏ ｂｙ ａ
Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ＧＭ３ ：ＧＤ３ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ Ｒａｔｉｏ，”Ｌａ
ｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，６７：７１１−７１５（１９９２）を参照されたい）が挙げられる
。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、更に癌ワクチン様製剤として使用することもできる（例え
ば、米国特許第６，５６９，８８９号；６，２５５，３３６号；５，９１６，９１１号；
５，３０２，６０９号；６，６６０，７４９号；６，６１０，７０３号；５，４７２，９
６９号；５，５２５，６１６号を参照されたい）。

式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（そのヘミ酒石酸塩を含む）は、単剤
治療として、即ち、徴候を治療するために投与される唯一の医薬的に活性な成分として、
開示された方法において使用することができる。

あるいは、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（そのヘミ酒石酸塩を含む
）は、所望の疾病又は徴候を治療するための当技術において既知の他の治療的に活性な薬
物との組合せ治療として、開示された方法において使用することができる。“同時治療”
又は“組合せ”又は“組合せ治療”又は“同時投与”は、損明細書中で互換的に使用され
、そして式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（ヘミ酒石酸塩を含む）が、一
つ又はそれより多い他の治療剤の前に、その後に、又はそれと同時に投与されることを意
味する。一つの態様において、組合せ治療は、ゴーシェ病又はファブリ病のようなリソソ
ーマル疾患を治療するために使用される。別の方法として、式（Ｉ）の化合物又は医薬的
に受容可能なその塩（ヘミ酒石酸塩を含む）は、別個の製剤又は連合製剤のいずれかとし
て同時に（例えば、同時発生的に）同時投与される。別の方法として、薬剤は、別個の組
成物として熟練した臨床医によって決定されるような適当な時間枠（例えば、治療剤の医
薬的効果の重複を可能にするために十分な時間）内に連続して投与することができる。式
（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（ヘミ酒石酸塩を含む）及び一つ又はそれ
より多い他の治療剤は、所望の治療効果を達成するために適した順序で、そしてその計画
によって一回投与又は多数回投与で投与することができる。

ゴーシェ病の治療のために有効な治療剤は、グルコセレブロシダーゼ、グルコセレブロ
シダーゼの類似体、グルコシルセラミドシンターゼの阻害剤、及びグルコセレブロシダー
ゼに結合し、そしてその正しい立体構造を回復する分子シャペロンを含む。グルコセレブ
ロシダーゼ及びその類似体は、ヒト又は哺乳動物由来であることができる。別の方法とし
て、グルコセレブロシダーゼ及びその類似体は、組換えで得ることができる。グルコセレ
ブロシダーゼの類似体は、酵素の切断型及び／又は天然の酵素の天然のアミノ酸配列に対
するアミノ酸置換を伴う酵素を含み、但し、生物学的活性が保持されていることを条件と
する。グルコセレブロシダーゼの類似体の例は、イミグルセラーゼ（セレザイム（登録商
標）の商標でＧｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって市販）、タリグルセラー
ゼアルファ（Ｕｐｌｙｓｏ（登録商標）の商標で市販、そしてＰｒｏｔａｌｉｘ Ｂｉｏ
ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．によって開発）及びヒトβ−グルコセレブロシダー
ゼの組換えＤＮＡ生産性類似体であるベラグルセラーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ ＰＬＣに
よって開発）を含む。分子シャペロンの例は、イソファゴミン（Ｐｌｉｃｅｒａ^ＴＭの商
標名でＡｍｉｃｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪによって開発
中）を含む。イソファゴミンは、更にアフェゴスタット（ａｆｅｇｏｓｔａｔ）・酒石酸
塩としても知られ、そしてイソファゴミンの酒石酸塩の形態をその活性成分として含有す
る。グルコセレブロシダーゼ阻害剤の例は、ミグルスタット（ザベスカ^ＴＭの商標でスイ
ス国のＡｃｔｅｌｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．Ａｌｌｓｃｈｗｉ
ｌによって開発）を含む。

ファブリ病の治療のために有効な治療剤は、αガラクトシダーゼＡ、αガラクトシダー
ゼＡの類似体及びαガラクトシダーゼＡに結合し、そしてその正しい立体構造を回復する
分子シャペロンを含む。αガラクトシダーゼＡ又はその類似体は、ヒト又は哺乳動物由来
であることができる。別の方法として、αガラクトシダーゼＡ及びその類似体は、組換え
で得ることができる。αガラクトシダーゼＡの類似体は、酵素の切断型及び／又は天然の
酵素の天然のアミノ酸配列に対するアミノ酸置換を伴う酵素を含み、但し、生物学的活性
が保持されていることを条件とする。αガラクトシダーゼＡの類似体の例は、アガルシダ
ーゼベータ（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって、冷凍乾燥医薬としてフ
ァブラザイム（登録商標）の商標で市販されている組換えヒトα−ガラクトシダーゼ）及
びアガルシダーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ ＰＬＣによって、リプレガル（登録商標）の商
標で市販されている組換えタンパク質）を含む。分子シャペロンの例は、ミガラスタット
（ｍｉｇａｌａｓｔａｔ）（Ａｍｉｇａｌ^ＴＭの商標名でＡｍｉｃｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓ，Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪによって、その活性成分としてミガラスタット塩酸
塩を含有する薬物として開発）を含む。

一つの態様において、ゴーシェ又はファブリ病の治療のための組合わせ治療は、二段階
で行われる。第１の段階において、ゴーシェ病又はファブリ病の治療のために有効な薬物
（典型的には、ゴーシェ病に対してグルコセレブロシダーゼのその類似体、そしてファブ
リ病に対してガラクトシダーゼＡ又はその類似体）が、患者を安定させるために使用され
る。例えば、ゴーシェ病（又はファブリ病）において、これらの薬物の一つが、肝臓、脾
臓、肺及び／又は腎臓中のような内臓器官中のＧＬ−１蓄積の負担を減少するために使用
される。これが達成された後、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（ヘミ酒
石酸塩を含む）が、第２段階において好都合な維持治療として使用される。第１の段階は
、典型的には１、２、３又は４週間まで、或いは１、２、３、４、６、９又は１２か月間
まで、或いは患者の血小板の数が１００，０００ｍｍ^３に等しいか、又はそれより多くな
るまで続けられる；ヘモグロビン濃度は、１１ｇ／ｄｌ（女性）又は１２ｇ／ｄｌ（男性
）に等しいか又はそれより多い；及び／又は患者の脾臓の体積は、正常の１０倍より少な
いか又はそれに等しく、そして肝臓の体積は、正常の１．５倍より少ないか、又はそれに
等しい。第１段階の投与は、典型的には式（Ｉ）の化合物による治療が開始された後終了
される。

本明細書中で使用される場合、“有効な量”は、患者において最小の受容不可能な副作
用を伴って、治療される患者の既存の症状を緩和するために有効な量を指す。正確な処方
、投与の経路、及び投与量は、患者の症状の観点から個々の医師によって選択される。投
与量及び間隔は、所望の治療効果を維持するために十分である活性化合物の血漿レベルを
得るために、個々に調節することができる。患者の症状及び投与の様式に加えて、投与さ
れる投与量は、患者の症状の重篤度並びに患者の年齢及び体重に依存するものである。有
効な量は、典型的には少なくとも約５ｎｇ／ｍｌより上の化合物の血漿トラフレベルをも
たらすものである。有効な量の化合物の投与後、血漿トラフレベルが５ｎｇ／ｍｌより下
の場合、その患者に投与される投与量は、化合物のトラフレベルが少なくとも５ｎｇ／ｍ
ｌであるように“調節された有効な量”に変更される。別の方法として、化合物のトラフ
レベルが５ｎｇ／ｍｌより下で、及び／又は有効な量の化合物の投与後、Ｃ_ｍａｘが１０
０ｎｇ／ｍｌより上の場合、患者に投与される投与量は、化合物のトラフ血漿レベルが少
なくとも５ｎｇ／ｍｌであり、そしてＣ_ｍａｘが１００ｎｇ／ｍｌより下であるような“
調節された有効な量”に変更される。有効な量は、０．１から５００ｍｇ／日当たりの範
囲であることができる。別の方法として、有効な量は、５０−３００ｍｇ／日の範囲であ
る。もう一つの別の方法において、有効な量は、１００−３００ｍｇ／日の範囲である。
本出願の化合物は、連続的に又は特定の時間間隔で投与することができる。例えば、本出
願の化合物は、例えば一日一回又は一日二回の処方のように一日当たり１、２、３、又は
４回投与することができる。商業的に入手可能なアッセイを、最適な投与量範囲及び／又
は投与のための計画を決定するために使用することができる。

一つの態様において、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（先に記載した
ヘミ酒石酸塩を含む）に対する有効な量は（単剤治療又は同時治療としてであるかに関わ
らず）、一日当たり、２５、５０、１００、２００又は３００ミリグラムのような、２５
ミリグラムから３００ミリグラム（別の方法において２５ミリグラムから１５０ミリグラ
ム；もう一つの別の方法において５０ミリグラムから３００ミリグラム；そしてもう一つ
の別の方法において１００ミリグラムから３００ミリグラム）の日量である。具体的な態
様において、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（先に記載したヘミ酒石酸
塩を含む）は（単剤治療又は同時治療としてであるかに関わらず）、一日二回投与の５０
ミリグラム（合計一日当たり１００ミリグラム）、１００ミリグラム（合計一日当たり２
００ミリグラム）又は１５０ミリグラム（合計一日当たり３００ミリグラム）である。別
の態様において、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩を含む）の有効な量は（単剤治療又は同時治療としてであるかに関わらず）、１００
ミリグラム／日、２００ミリグラム／日又は３００ミリグラム／日の一日一回投与として
投与される。

もう一つの態様において、有効な量は、患者が“低Ｐ４５０代謝群”であると仮定し、
そして次いでトラフ血漿レベル及びＣ_ｍａｘを評価することによって決定される。次いで
患者に投与される量は、トラフ血漿レベルが５ｎｇ／ｍｌより下の場合；又は化合物のト
ラフレベルが５ｎｇ／ｍｌより下及び／又はＣ_ｍａｘが１００ｎｇ／ｍｌより上の場合；
或いは患者が中又は高／迅速Ｐ４５０代謝群であると決定された場合、以下に記載するよ
うな調節された有効な量に変更される。低Ｐ４５０代謝群に対する有効な量は（単剤治療
又は同時治療としてであるかに関わらず）、普通一日一回投与又は一日二回投与として、
一日当たり１００−２００ミリグラム間、例えば１００又は２００ミリグラムである。

典型的には、本出願の医薬組成物は、食事の前又は後、或いは食事と共に投与すること
ができる。本明細書中で使用する場合、食事の“前”又は“後”は、典型的にはそれぞれ
、食事が始まる又は終わる、２時間以内、好ましくは１時間以内、更に好ましくは３０分
以内、最も好ましくは１０分以内である。

式（Ｉ）の化合物及び医薬的に受容可能なその塩（式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む）が
、肝臓によって、主としてシトクロムＰ４５０酵素によって代謝されることが今や見出さ
れている。シトクロムＰ４５０（“ＣＹＰ”）は、主要な肝臓の異物代謝性酵素である。
典型的なヒトの肝臓中に発現する１１種の異物代謝性シトクロムＰ４５０（即ち、ＣＹＰ
１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８／９／１８／１９、ＣＹＰ２Ｄ６、
ＣＹＰ２Ｅ１及びＣＹＰ３Ａ４／５）が存在する。ＣＹＰ２Ｄ６及びＣＹＰ３Ａ４が、式
（Ｉ）の化合物及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のようなその医薬的に活性な塩を解毒するこ
とに責任のある、主要なシトクロムＰ４５０アイソフォームであることも今や更に見出さ
れている。Ｐ４５０酵素の活性のレベルは、個体によって異なる。例えば、個体は、低、
中及び高／迅速Ｐ４５０代謝群に分類することができる。個体のＰ４５０活性の低いレベ
ルは、薬物／薬物相互作用（“ＤＤＩ”）を生じさせることができるために、本発明のも
う一つの態様は、患者が、低、中及び高／迅速Ｐ４５０代謝群のいずれであるかを決定す
ることである。患者が、中又は高／迅速代謝群である場合、この患者に投与する投与量は
、“調節された有効な投与量”、即ち、少なくとも５ｎｇ／ｍｌの化合物のトラフ血漿レ
ベルをもたらす量；又は少なくとも５ｎｇ／ｍｌの化合物のトラフレベル及び１００ｎｇ
／ｍｌより下の化合物のＣ_ｍａｘをもたらす量に上げなければならない。投与量は、漸増
的に上げることができ、そして患者は、一回、二回、三回、四回又は調節された有効な投
与量を達成するために必要な回数試験される。

ＣＹＰ２Ｄ４遺伝子に対して、四つの予測される表現型が存在する：
“低Ｐ４５０代謝群”は、酵素活性の完全な喪失をもたらす二つの対立遺伝子を保有す
る。

“中Ｐ４５０代謝群”は、一つの減少した活性の対立遺伝子及び一つのヌル対立遺伝子
を保有する。
“高Ｐ４５０代謝群”は、少なくとも一つの、そして二つより多くない正常な機能的対
立遺伝子を保有する。

“迅速Ｐ４５０代謝群”は、機能的対立遺伝子の多数のコピー（３−１３）を保有し、
そして過剰の酵素的活性を産生する。
患者は、典型的には、遺伝子型判定によるか、或いはＣＹＰ２Ｄ６又はＣＹＰ３Ａ４の
ようなＰ４５０酵素によって代謝される薬物のトラフ血漿レベルをモニターすることによ
るかのいずれかによって、低、中又は高／／迅速Ｐ４５０代謝群として評価される。普通
には、式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む医薬的に受容可能なその塩の
トラフ血漿レベル及び／又はＣ_ｍａｘは、化合物による治療の開始後、１、２、３又は４
週間まで、又は１、２、３、６、９又は１２か月或いはそれより多くまで、患者中でモニ
ターされる。投与量の調節が必要に応じて行われて、レベルを記載された限度、即ち、５
ｎｇ／ｍｌの又はそれより上のトラフ血漿レベルに維持する。

患者は、Ｐ４５０酵素阻害剤であるある種の薬物で治療された結果として、低Ｐ４５０
代謝群となることができる。このような薬物の例は、パロキセチン、フルオキセチン、キ
ニジン、又はケトコナゾールを含む。別の方法として、患者は、Ｐ４５０の低い発現の結
果として、低Ｐ４５０代謝群となる。このような場合、低い発現は、患者中のＰ４５０酵
素の発現を決定すること、即ちＰ４５０酵素に対して患者を遺伝子型判定することによっ
て評価することができる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６の発現は、普通ＰＣＲによって（ＭｃＥ
ｌｒｏｙ ｅｔ．ａｌ．“ＣＹＰ２Ｄ６ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｓ ａｎ Ａｌｔｅ
ｒｎａｔｉｖｅ ｔｏ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ａ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ
Ｓｅｔｔｉｎｇ”，ＡＡＰＳ Ｐｈａｒｍｓｉ（２０００）２（４）：ａｒｔｉｃｌｅ
３３（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｈａｒｍｓｃｉ．ｏｒｇ／））又はマイクロアレーベ
ースの薬理ゲノム学試験によって（Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｒ
ｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ“Ｔｈｅ ＣＹＰ４５０ Ｇｅｎｅ Ｆａｍｉｌｙ
ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ”，Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌ
ｔｄ．）評価され、これらの全ての教示は、本明細書中に参考文献として援用される。こ
のように、患者は、治療の開始に先立って、Ｐ４５０発現（例えば、ＣＹＰ２Ｄ６）に対
して好都合に遺伝子型判定をし、そして必要な場合、調節された有効な量を投与すること
ができる。治療の開始に先立つ遺伝子型判定の場合、化合物のトラフ血漿レベル及びＣ_ｍ
ａｘをモニターし、そして必要に応じて投与量を調節することは、なお望ましいことであ
る。

ミガラスタット、アガルシダーゼβ、イミグルセラーゼ、イソファゴミン及びミグルス
タットの有効な量は、薬物のラベルに記載してあるとおりであるか、又はそれぞれの薬物
の臨床試験において行われるとおりである。

式（Ｉ）の化合物は、医薬的に受容可能な酸と反応して、医薬的に受容可能な塩を形成
することができる。医薬的に受容可能な酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫
酸、リン酸、等のような無機酸、及びｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュ
ウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸、
等のような有機酸を含む。このような塩の例は、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸
塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン
酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩
、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩
、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マ
レイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ
安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ
安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェ
ニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒドロキシ酪酸塩
、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン
−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩、等を含む。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含む医薬組成物
式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩（そのヘミ酒石酸塩を含む）のための
適した製剤及び投与の様式は、その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される
米国特許第７，２５３，１８５号中に記載されているものを含む。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸
塩のための好ましい製剤は、以下の項に記載される。

本発明の一つの態様は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、少なくとも一つの水溶性充填剤、少
なくとも一つの水不溶性充填剤、少なくとも一つの結合剤、及び少なくとも一つの潤滑剤
を含んでなる医薬組成物である。適した水溶性充填剤は、例えば、無水のラクトース、ラ
クトース一水和物、マンニトール、塩化ナトリウム、粉末糖、ソルビトール、スクロース
、イノシトール及びアルファ化デンプンを含むことができる。適した水不溶性充填剤は、
例えば、微結晶セルロース、リン酸カルシウム及びデンプンを含むことができる。適した
結合剤は、例えば、アルファ化デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒド
ロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリド
ン、コポリビドン（ｃｏｐｏｌｙｖｉｄｏｎｅ）、ゼラチン、天然ゴム、デンプンペース
ト、スクロース、コーンシロップ、ポリエチレングリコール及びアルギン酸ナトリウムを
含むことができる。適した潤滑剤は、例えば、水素化植物油、ステアリン酸カルシウム、
及びベヘン酸グリセリルを含むことができる。医薬組成物の一つの態様において、水溶性
充填剤は、無水のラクトース、ラクトース一水和物、マンニトール、塩化ナトリウム、粉
末糖、ソルビトール、スクロース、イノシトール及びアルファ化デンプンからなる群から
選択される；水不溶性充填剤は、微結晶セルロース、リン酸カルシウム及びデンプンから
なる群から選択され、結合剤は、アルファ化デンプン、カルボキシメチルセルロースナト
リウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビ
ニルピロリドン、コポリビドン、ゼラチン、天然ゴム、デンプンペースト、スクロース、
コーンシロップ、ポリエチレングリコール及びアルギン酸ナトリウムからなる群から選択
される；そして潤滑剤は、水素化植物油、ステアリン酸カルシウム、及びベヘン酸グリセ
リルからなる群から選択される。

医薬製剤は、８重量％から３２重量％間、８重量％から２４重量％間、１２重量％から
２０重量％間又は１４重量％から１８重量％間の水不溶性充填剤を、乾燥固体基準で含ん
でなる。

医薬製剤は、２６重量％から５０重量％間、３０重量％から４６重量％間、３４重量％
から４６重量％間又は３８重量％から４４重量％間の水溶性充填剤を、乾燥固体基準で含
んでなる。

医薬製剤は、３０重量％から４５重量％間、３５重量％から４０重量％間及び３６重量
％から３９重量％間の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、乾燥固体基準で含んでなる。
医薬製剤は、典型的には、２重量％から６重量％間の結合剤を、乾燥固体基準で含んで
なる。

医薬製剤は、典型的には、０．１重量％から２重量％間の結合剤を、乾燥固体基準で含
んでなる。
具体的な態様において、医薬製剤は、８重量％から３２重量％間の水不溶性充填剤、、
２６重量％から５０重量％間の水溶性充填剤、３０重量％から４５重量％間の式（Ｉ）・
ヘミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量％間の結合
剤を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一
水和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に具体的には
、水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セルロースで
あり；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤は、ベヘン
酸グリセリルである。

具体的な態様において、医薬製剤は、８重量％から３２重量％間の水不溶性充填剤、２
６重量％から５０重量％間の水溶性充填剤、３５重量％から４０重量％間の式（Ｉ）・ヘ
ミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量％間の結合剤
を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一水
和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に具体的には、
水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セルロースであ
り；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤は、ベヘン酸
グリセリルである。

もう一つの具体的な態様において、医薬製剤は、８重量％から２４重量％間の水不溶性
充填剤、３０重量％から４６重量％間の水溶性充填剤、３５重量％から４０重量％間の式
（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量％
間の結合剤を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラク
トース一水和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に具
体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セル
ロースであり；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤は
、ベヘン酸グリセリルである。

もう一つの具体的な態様において、医薬製剤は、１２重量％から２０重量％間の水不溶
性充填剤、３４重量％から４６重量％間の水溶性充填剤、３５重量％から４０重量％間の
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量
％間の結合剤を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラ
クトース一水和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に
具体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セ
ルロースであり；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤
は、ベヘン酸グリセリルである。

もう一つの具体的な態様において、医薬製剤は、１４重量％から１８重量％間の水不溶
性充填剤、３８重量％から４４重量％間の水溶性充填剤、３５重量％から４０重量％間の
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量
％間の結合剤を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラ
クトース一水和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に
具体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セ
ルロースであり；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤
は、ベヘン酸グリセリルである。

もう一つの具体的な態様において、医薬製剤は、１４重量％から１８重量％間の水不溶
性充填剤、３８重量％から４４重量％間の水溶性充填剤、３６重量％から３９重量％間の
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、２重量％から６重量％間の結合剤及び０．１重量％から２重量
％間の結合剤を、全て乾燥固体基準で含んでなる。更に具体的には、水溶性充填剤は、ラ
クトース一水和物であり；そして水不溶性充填剤は、微結晶セルロースである。なお更に
具体的には、水溶性充填剤は、ラクトース一水和物であり；水不溶性充填剤は、微結晶セ
ルロースであり；結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり；そして潤滑剤
は、ベヘン酸グリセリルである。

本発明は、以下の実施例によって例示されるが、これらは、何らの方法でも制約するこ
とを意図するものではない。

実験
実施例１：式（Ｉ）の塩の調製
式Ｉのヘミ酒石酸塩は、容易に結晶化され、そして他の塩と比較して、多くの有益な特
性を示す。例えば、式（Ｉ）によって表される化合物の塩の調製において、次の酸：クエ
ン酸（１：１、１：２、及び１：３（塩：式Ｉ）の塩を産生）；Ｌ−リンゴ酸（１：１及
び１：２）；メタンスルホン酸（１：１）；フマル酸（１：１及び１：２）；塩酸（１：
１）；酢酸（１：１）及び酒石酸（１：１及び１：２）が使用される。塩酸（１：１）；
酒石酸（１：１）及び酒石酸（１：２）によって産生される塩のみが固体の形態である。
これらの三つの塩の塩酸（１：１）及び酒石酸（１：１）は、吸湿性であり、そして非結
晶質であることが見いだされ、そして従って、医薬産物中に使用するために、受容不可能
である。式Ｉによって表される化合物のヘミ酒石酸塩（１塩：２式Ｉ）は、結晶質であり
、そして非吸湿性であることが見いだされた。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のアセトン中の調製
Ｌ−酒石酸（６．０２ｇ、４０．１１ｍｍｏｌ、０．４９７当量）を、アセトン（１７
５ｍＬ）中に溶液を還流させることによって溶解し、そして次いで室温に冷却した。式（
Ｉ）遊離塩基（３２．６７ｇ、８０．７６ｍｍｏｌ）を、アセトン（３００ｍＬ）中に室
温で溶解した。Ｌ−酒石酸溶液を、式（Ｉ）遊離塩基の溶液に室温で１５分かけて加えた
。添加の途中から白色の沈殿物が形成した。混合物を室温で０．５時間撹拌し、そして次
いで短時間還流し、そして室温に冷却した。室温で０．５時間撹拌した後、白色の沈殿物
を濾過した。白色の固体をアセトン（２×１３０ｍＬ）で二回洗浄した。固体を空気乾燥
し、そして次いで５５−６０℃で真空乾燥した。収量は、３６．６６ｇ（９５％）であっ
た。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のアセトン中の５％メタノール中の調製
式（Ｉ）遊離塩基、１０ｇ／２４．７ｍｏｌを、１２０ｍＬ又は２４０ｍＬの５％メタ
ノール／アセトン中に溶解した。Ｌ−酒石酸、１．８５ｇ／１２．３ｍｍｏｌを、６０ｍ
Ｌ又は１２０ｍＬの５％メタノール／アセトン（Ｎ又は２Ｎ）中に４０−４５℃に温める
ことによって溶解し、そしてこの溶液を第１の溶液に加えた。沈殿物がないままの１時間
後、１ｍｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を種結晶として加えた。５分後に沈殿物が生じ、そ
して反応物を３０分間更に撹拌し続けた。次いで反応物を還流で５分間加熱（沈殿物は完
全に可溶化）し、そして次いで２０−２２℃の水浴中で室温に冷却した。沈殿物が形成し
、そして反応物を３時間撹拌し続けた。最終生成物を濾過によって収集し、そして２×４
０ｍＬのアセトンで洗浄し、そして次いで５５−６０℃の真空オーブン中で１６時間乾燥
した。生成物の重量は、８．７２ｇ／７４％収率であった。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のアセトン中の１％水中の調製。
式（Ｉ）遊離塩基（１０ｇ／２４．７ｍｍｏｌ）を、１２０ｍＬ又は２４０ｍＬの１％
水／アセトン中に室温で溶解した。Ｌ−酒石酸、１．８５ｇ／１２．３ｍｍｏｌを、６０
ｍＬ又は１２０ｍＬの１％水／アセトン中（Ｎ又は２Ｎ）に、４０−４５℃に温めること
によって溶解し、そしてこの溶液を第１の溶液の加えた。沈殿物のないままの１時間後、
１ｍｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を種結晶として加えた。５分後に沈殿物が生じ、そして
反応物を３０分間更に撹拌し続けた。次いで反応物を還流で５分間加熱（沈殿物は完全に
可溶化）し、そして次いで２０−２２℃の水浴中で室温に冷却した。沈殿物が形成し、そ
して反応物を３時間撹拌し続けた。最終生成物を濾過によって収集し、そして２×４０ｍ
Ｌのアセトンで洗浄し、そして次いで５５−６０℃の真空オーブン中で１６時間乾燥した
。生成物の重量は、８．６２ｇ、７３％収率であった。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のアセトン中の５％メタノール中の再結晶化。
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（３．０６ｇ）を、１１６ｍＬのアセトン中の５％メタノール
中に還流で溶解した。溶液を室温に冷却し、そして室温で２時間撹拌した。白色の沈殿物
を濾過し、そして１０ｍＬのアセトン中の５％メタノールで、そして次いでアセトン（１
５ｍＬ）で洗浄した。５５−６０℃で１８時間真空乾燥した後、２．３８ｇの式（Ｉ）・
ヘミ酒石酸塩（７８％回収）を得た。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のアセトン中の１％Ｈ_２Ｏ中の再結晶化。
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（３．０５ｇ）を、１２５ｍＬのアセトン中の１％Ｈ_２Ｏ中に
還流で溶解した。溶液を室温に冷却し、そして室温で２時間撹拌した。白色の沈殿物を濾
過し、そして１０ｍＬのアセトン中の１％Ｈ_２Ｏで、そして次いでアセトン（１５ｍＬ）
で洗浄した。５５−６０℃で一晩真空乾燥した後、２．３５ｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
（７７％回収）を得た。

実施例２：結晶質の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の調製
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、幾つかの方法で再結晶した。バッチ１は、酢酸エチル／ア
セトン溶媒を使用し、そして室温で乾燥して調製した。バッチ３は、酢酸エチル／アセト
ン溶媒を使用し、そして酢酸エチルから再結晶して調製した。バッチ４は、バッチ１の物
質を使用して、アセトンから再結晶した。バッチ５は、イソプロパノールから再結晶した
。バッチ７は、バッチ１と同様に酢酸エチル／アセトン溶媒を使用して、しかし大規模で
調製し、バッチ８は、アセトンのみを使用し、更なる再結晶化を伴わずに調製した。バッ
チ９は、アセトンのみを使用し、短時間の還流を伴い、再び更なる再結晶化を伴わずに調
製した。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の結晶の形態は、更に各種の溶媒中の緩慢蒸発、緩慢冷却、急
速冷却及び逆溶媒沈殿を使用して調製した。
緩慢蒸発法。 秤量した試料（通常２０ｍｇ）を、試験溶媒のアリコートで処理した。
アリコートは、典型的には１００−２００μＬであった。溶媒の添加の間、混合物を振盪
又は超音波処理した。目視検査によって判断したように、固体が溶解した時点で、溶液を
周囲条件で、ピンホールを穿孔したアルミニウムフォイルで覆われた開放バイアル中で蒸
発させた。溶解度を、透明な溶液を得るために加えた全溶媒に基づいたこれらの実験から
推定した。

緩慢／急速冷却法。 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、試験溶媒中に５０−６０℃で溶解し
た。次いで得られた溶液を、周囲温度まで冷却させた（緩慢冷却）。一日後固体が形成さ
れない場合、バイアルを冷蔵庫に入れた。急速冷却実験において、次いで得られた溶液は
冷蔵庫中で冷却した。固体を濾過によって収集し、空気乾燥した。

逆溶媒法。 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を溶媒中に溶解した。逆溶媒を溶液に加えた。形
成した固体を濾過によって収集し、空気乾燥した。

実施例３： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の物理的特性
視差走査熱量測定法（ＤＳＣ）。 ＤＳＣデータを、ＴＡＱ１００装置で、置換ガスと
して窒素を使用して収集した。概略２−５ｍｇの試料をアルミニウムのＤＳＣパン上に正
確に秤量した。パンを蓋で覆い、そしてピンセットで穿孔した。試料セルを３０℃で平衡
させ、そして毎分１０℃の速度で、２２０℃の最終温度まで加熱した。

ホットステージ顕微鏡観察法。 ホットステージ顕微鏡観察を、画像収集のためのＳｏ
ｎｙのＤＸＣ−９７０ＭＤ３ＣＣＤカメラを備えたＬｅｉｃａのＤＭ ＬＰ顕微鏡上に設
置したＬｉｎｋａｍのホットステージ（モデルＦＴＲ６００）を使用して行った。試料を
見るために、４０×の対物レンズを偏光と共に使用した。それぞれの試料を二枚のカバー
ガラス間に置いた。それぞれの試料をステージが加熱された時点で視覚的に観察した。画
像をＬｉｎｋｓバージョン２．２７（Ｌｉｎｋａｍ）を使用して獲得した。ホットステー
ジをＵＳＰ融点標準を使用して較正した。

ＤＳＣ特性で観察された吸熱性転移は、ホットステージ顕微鏡観察によって１６０−１
６３℃間の温度における溶融転移であることが確認された。
実施例４： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のＸ線粉末回折
全てのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析を、ＳＳＣＩ，Ｉｎｃ（Ｗｅｓｔ Ｌａｆａｙｅ
ｔｔｅ，ＩＮ ４７９０６）で行った。ＸＲＰＤ分析を、ＳｈｉｍａｄｚｕのＸＲＤ−６
０００Ｘ線粉末回折計を使用し、ＣｕＫα照射を使用して行った。装置は高精度焦点Ｘ線
真空管を備えている。真空管電圧及びアンペア数は、それぞれ４０ｋＶ及び４０ｍＡに設
定した。発散及び散乱スリットを１°に設定し、そして受光スリットを０．１５ｍｍに設
定した。回折された照射を、ＮａＩシンチレーション検出器で検出した。２．５から４０
°までの２θの３°／分（０．４秒／０．０２°の段階）でシータ−２シータの連続スキ
ャンを使用した。ケイ素の標準を、装置のアラインメントを検討するために分析した。デ
ータを収集し、そしてＸＲＤ−６０００ｖ４．１を使用して分析した。

実施例５： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩と式（Ｉ）遊離塩基の比較
遊離塩基及びヘミ酒石酸塩の固体の特徴を表７に要約する。式Ｉ・酒石酸塩は、式Ｉ遊
離塩基と比較して優れた特性を有する。例えば、式Ｉ・酒石酸塩は、式Ｉ遊離塩基と比較
して、より高い融点（＞１５０℃）、より高い充填エネルギー（より大きい吸熱エンタル
ピー）、より低い粒子の大きさの分散、より高い水溶解度（水中で３００ｍｇ／ｍＬを超
える）、適した結晶形状、及びより高い容積密度を有する。

実施例６： Ｉｎ ｖｉｔｒｏの活性及び特異性
Ｉｎ ｖｉｔｒｏのスフィンゴ糖脂質合成を阻害する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の活性。
二つのアッセイを、グルコシルセラミド合成に対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の阻害活
性を定量するために使用した。グルコシルセラミドは、スフィンゴ糖脂質の生合成におけ
る第１の、そして律速段階であるために、ＧＭ１及びＧＭ３の細胞表面レベルを測定する
流動細胞計測アッセイを、インタクトな細胞中の阻害剤の活性を間接的に評価するために
使用した。Ｋ５６２又はＢ１６／Ｆ１０細胞を、増加する量の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（
０．６−１０００ｎＭ）と共に７２時間インキュベートすることは、ＧＭ１及びＧＭ３の
両方の細胞表面レベルの用量依存性の減少をもたらした。Ｋ５６２細胞中のＧＭ１の細胞
表面提示を阻害するための平均ＩＣ_５０値は、２４ｎＭ（１４−３４ｎＭの範囲）（表８
）であり、そしてＢ１６／Ｆ１０細胞中のＧＭ３に対するそれは、２９ｎＭ（１２−４８
ｎＭの範囲）であった。顕性の細胞毒性は、最高の投与量で試験された場合でさえいずれ
の細胞系でも注目されなかった。

活性に対する別のアッセイで、ヒト細胞由来のミクロソームにおけるグルコシルセラミ
ド合成の阻害を測定した。このアッセイにおいて、ミクロソームを、ヒトメラノーマＡ３
７５細胞から、超音波処理及び遠心によって調製した。ミクロソーム標品を、蛍光性セラ
ミド基質（ＮＢＤ−Ｃ６−セラミド）、ＵＤＰ−グルコース、及び増加する量の式（Ｉ）
・ヘミ酒石酸塩（０−１０００ｎＭ）と共に１時間室温でインキュベートした。インキュ
ベーション後、蛍光的に標識されたグルコシルセラミド及び未反応のセラミドを分離し、
そして逆相ＨＰＬＣ及び蛍光検出によって定量した。このアッセイにおいて、グルコシル
セラミド合成を阻害するためのＩＣ_５０値は、２０から４０ｎＭの範囲であった。この値
は、上記でＧＭ１及びＧＭ３に対して得られたものと同様であり、そしてこれらの細胞表
面の糖脂質の測定値は、グルコシルセラミド合成に対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の活性
の良好な代替物であることを示唆している。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による基質合成阻害の特異性。
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の特異性を、一連のｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞ベース及び無細胞
アッセイで評価した。腸管内のグルコシダーゼ酵素を、ラットの組織ホモジネートで分析
し（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｕ．Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ
，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．５９（２０００）８２１−８２９を参照
されたい）、そしてグリコーゲン脱分枝酵素を、記載されているような無細胞アッセイで
分析した（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｕ．Ａｎｄｅｒｓ
ｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ． ６７（２００４）６９７−７０
５を参照されたい）。腸管内グリコシダーゼ（ラクターゼ、マルターゼ、スクラーゼ）、
α−グルコシダーゼＩ及びＩＩ、並びに細胞質ゾル脱分枝酵素（α−１，６−グルコシダ
ーゼ）の検出可能な阻害は、２５００μＭまでの濃度において見いだされなかった（表８
）。

非リソソームのグルコシルセラミダーゼ及びリソソームのグルコセレブロシダーゼを、
インタクトなヒト細胞中で、Ｃ_６−ＮＢＤ−グルコシルセラミドを基質として使用して分
析した（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｈ．Ｓ．Ｏｖｅｒｋ
ｌｅｅｆｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（１９９８）２６５２２−２
６５２７を参照されたい）。

コンズリトールβエポキシド（リソソームのグルコセレブロシダーゼの特異的阻害剤）
を、リソソーム対非リソソーム活性を区別するために使用した。
グルコセレブロシダーゼ活性も、更に蛍光表示式細胞分取（ＦＡＣＳ）によって測定し
た。Ｋ５６２細胞を、増加する量の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩と共に、１μＭの５−（ペン
タフルオロベンゾイルアミノ）−フルオレセンジ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＰＦＢ−
ＦＤＧｌｕ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．Ｃａｒｌｓｂ
ａｄ，ＣＡ）の存在中で３０−６０分間培養した。細胞を直ちに氷上で冷却し、そして蛍
光を上記で定量した。非リソソームのグルコシルセラミダーゼは、１６００μＭのＩＣ_５
０で弱く阻害された。ゴーシェ病において欠損している酵素であるリソソームのグルコセ
レブロシダーゼの阻害は、２５００μＭの最高濃度まで無かった（表８）。従って、試験
されたいずれもの他の酵素と比較して、概略４０，０００倍の濃度における差が、グルコ
シルセラミドシンターゼを阻害するために必要であった。

実施例７： マウスモデルにおけるリソソームのグルコシルセラミドレベルの改良され
た管理
Ａ．ファブリ病。

酵素置換治療（ＥＲＴ）及び基質減少治療（ＳＲＴ）の両方の組合せた使用が、酵素の
減量を維持するか、又は更なる利益を提供することができるか否かを決定するために、フ
ァブリ病のマウスのモデル（ファブリ−Ｒａｇ）における別個及び組合せ治療の相対的効
力を比較した。親のファブリ病のマウスは、Ｗａｎｇ，ＡＭ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｈ
ｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５９：Ａ２０８（１９９６）中に記載されている。ファブリ−Ｒａｇ
を、ＲＡＧ−１マウスと雑交させ、そして成熟したリンパ球又はＴ細胞は、発生しない（
免疫力低下）。

動物研究
単剤治療の研究のために、ファブリ病のマウスを生後１か月で研究に加えた（予防モデ
ル）。治療群は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉ
ｄｇｅ，ＭＡ）を、ペレット食品の食餌の成分として受けた。薬物を、０．１５％（重量
／重量）で標準的な５０５３マウス固形飼料（ＴｅｓｔＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｉ
Ｎ）中に処方し、そして自由に提供した。この処方は、２５ｇのマウスに一日当たり３０
０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を提供した。

組合せ治療の研究のために、ファブリ−Ｒａｇマウスを、生後３か月で研究に加えた（
治療モデル）。Ａ群のマウスは、２ヶ月毎（即ち、生後３、５、７及び９か月目）に、１
ｍｇ／ｋｇの投与量で、組換えヒトアルファ−ガラクトシダーゼＡ（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃ
ｏｒｐ．）の静脈注射を受けた。Ｂ群は、同じ静脈内の酵素の投与量を受け、そしてこれ
は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ
）をペレット食品の食餌の成分として受けた。薬物を、０．１５％（重量／重量）で、標
準的な５０５３マウス固形飼料（ＴｅｓｔＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＩＮ）中に処方
し、そして自由に提供した。処方は、２５ｇのマウスに一日当たり３００ｍｇ／ｋｇの式
（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を提供した。Ｃ群は、酵素の注射を４ヶ月毎（即ち、生後３及び７
ヶ月）に受け、そしてＢ群と同じ食品中の薬物の食餌であった。Ｄ群は、食品中の薬物の
食餌（Ｂ及びＣ群と同じ）のみを受けた。Ｅ群は、非治療のファブリ−Ｒａｇマウスであ
り、そしてＦ群は、野生型の対照であった。図１０を参照されたい。

組織のグロボトリアオシルセラミド（ＧＬ−３、Ｇｂ３）レベルの定量化
ＧＬ−３の定量化は、本質的にＧＬ−１のためのようなタンデム質量分析法によった。
ホットプレートアッセイは、先に記載したように行った（Ｚｉｅｇｌｅｒ，ＲＪ ｅｔ
ａｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒ．１５（３），４９２−５００（２００７）。

結果
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩によるファブリ病のマウスの単剤治療
ＳＲＴを、α−ガラクトシダーゼＡ活性の欠損によって起こったファブリ病のマウスモ
デルで評価した。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による治療を、生後１か月のファブリ病のマウ
スで始め、そしてマウスが生後１年に達するまで続けた。マウスに３００ｍｇ／ｋｇの式
（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、その毎日の食餌で投与した。マウスの行動試験（即ち、ホット
プレートアッセイ）及び生化学的試験（即ち、尿検査及び組織／血液／尿のＧＬ−３レベ
ル分析）を二ヶ月毎に行った。

図７に示すように、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の１１か月にわたるファブリ−Ｒａｇのマ
ウスへの投与は、体細胞性器官（肝臓、腎臓、肺及び脾臓）中のグロボトリアオシルセラ
ミド（ＧＬ−３）のリソソームの蓄積の速度を概略５０％減少する。これは、その後の非
感受性の提示によって示されるような疾病の進行を、有害な熱刺激に対するの遅延（図８
参照）及び尿分析因子、例えば、尿体積、クレアチニン及びナトリウムレベルの悪化の予
防（図９参照）に翻訳した。従って、スフィンゴ糖脂質の合成の第１段階を触媒するグル
コシルセラミドシンターゼの、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩仲介による阻害は、ゴーシェ病の
動物モデルにおける利点だけではなく、更にファブリ病も同様であり、そして更に他のス
フィンゴ糖脂質代謝異常において正の効果を有することができる。

α−ガラクトシダーゼＡ及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩によるファブリ病のマウスの組合
せ治療
単独のＥＲＴ及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を使用するＳＲＴとの組合せの効力を、五つ
の集団のファブリ−Ｒａｇマウスで評価した（ｎ＝１２／群）。生後３か月で始め、図１
０に示すように、マウスを行動試験（即ち、ホットプレートアッセイ）及び生化学試験（
即ち、組織／血液／尿中のＧＬ−３レベル分析）の計画にかけた。ＥＲＴにかけたマウス
において、１ｍｇ／ｋｇの投与量のα−ガラクトシダーゼＡを、図１０に示すような計画
で投与した。ＳＲＴにかけたマウスにおいて、３００ｍｇ／ｋｇの投与量の式（Ｉ）・ヘ
ミ酒石酸塩を、マウスの食餌中で毎日投与した。

図１１に示すように、ＥＲＴは、ファブリ−Ｒａｇマウスの血液ＧＬ−３レベルを減少
し、一方ＳＲＴは、そうではない。図１２に示すように、組合せのＥＲＴ／ＳＲＴは、フ
ァブリ−Ｒａｇマウスの肝臓及び腎臓のＧＬ−３レベルを減少することにおいて最も有効
である。

図１３に示すように、ＳＲＴは、ファブリ−Ｒａｇマウスの尿のＧＬ−３レベルを減少
し、一方ＥＲＴは、そうではない。図１４に示すように、ＳＲＴは、ファブリ−Ｒａｇマ
ウスの熱非感受性の開始を遅らせるが、しかしＥＲＴは、そうではない。

要約として、組合せのファブラザイム及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で治療されたファブ
リ−Ｒａｇマウスは、治療モデルにおける単独のＥＲＴ又はＳＲＴに対して、次のように
疾病マーカーの改良を示した：組合せ治療により、肝臓及び腎臓のＧＬ−３蓄積を有意に
減少した；ＳＲＴ群の尿のＧＬ−３を改良した；ＥＲＴ群の血液のＧＬ−３を改良した；
そしてＳＲＴ群の末梢神経障害を遅延した。

Ｂ．ゴーシェ病。 酵素置換治療（ＥＲＴ）及び基質減少治療（ＳＲＴ）の両方の連続
使用が、更なる利益を提供するか否かを決定するために、ゴーシェ病のマウスモデル（Ｄ
４０９Ｖ／ヌル）における別個及び連続治療の相対的強度を比較した。

方法
動物研究。 動物に関係する方法は、Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎにおい
て、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉ
ｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）
によって発行された指針に従って、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒ
ｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって精査及び認可された。
ゴーシェ病のマウス（Ｄ４０９Ｖ／ヌル）は、肝臓、脾臓及び肺にグルコシルセラミドの
蓄積を示すが、しかし骨又は脳の病態に欠く１型ゴーシェ病のモデルである（その全ての
教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｙ−Ｈ．Ｘｕ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ
．Ｐａｔｈｏｌ．１６３，２００３，２０９３−２１０１を参照されたい）。先の実験が
、組換えグルコセレブロシダーゼ又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩に対してオス及びメス間で
反応の差を示さなかったために、生後３ヶ月の両方の性別のマウスを実験に加えた。研究
は、六つの群のマウスを有し、Ａ群は、組織のグルコシルセラミドの基線レベルを提供す
るために２週間後に犠牲にされた。Ｂ、Ｃ、及びＤ群は、全て組換えヒトグルコセレブロ
シダーゼ（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）（１００ｍｇ／ｋ
ｇ）を、尾の静脈を経由して２日毎に合計８回の注射（１００μＬ）を静脈内に受けた。
Ｂ群は、この投与計画の終りに（Ａ群と同時に）、組織のグルコシルセラミドの酵素減少
レベルを提供するために犠牲にされた。Ｄ及びＥ群は、両方共、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、ペレット食品の食餌の
成分として給餌された。薬物を、０．０７５％（重量／重量）で標準的な５０５３マウス
固形飼料（ＴｅｓｔＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＩＮ）中に処方し、そして自由に提供
した。この処方は、２５ｇのマウスに一日当たり１５０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩を提供した。Ｆ群は、治療を受けず、そしてＣ、Ｄ及びＥ群と共に研究の開始後１２
週目に犠牲にされた。食物の消費量及びマウスの体重を、毎週三回モニターして、薬物摂
取及び全身的健康状態に対する薬物の潜在的影響を決定した。マウスを二酸化炭素吸入に
よって殺し、そしてその組織を直ちに回収した。それぞれの組織の半分をドライアイス上
で急速冷凍し、そして−８０℃で更なる加工の準備ができるまで保存した。他の半分は、
組織学的分析のために加工した。

組織のグルコシルセラミドレベルの定量化 グルコシルセラミドレベルを、以前に記載
されているように質量分析によって定量した（その全ての教示が本明細書中に参考文献と
して援用される、Ｋ．ＭｃＥａｃｈｅｒｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎｅ．Ｍｅｄ．８（
２００６）７１９−７２９；Ｔ．Ｄｏｅｒｉｎｇ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４（１
９９９）１１０３８−１１０４５を参照されたい）。既知の質量の組織を、２：１（容量
／容量）のクロロフォルム：メタノール中でホモジナイズし、そして３７℃で１５分間イ
ンキュベートした。試料を遠心し、そして上清を、０．２体積の水で一晩４℃で抽出した
。試料を遠心し、水相を捨て、そして有機相を窒素下でフィルム状まで乾燥した。エレク
トロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ／ＭＳ）分析のために、組織試料を、１ｍｌのク
ロロフォルム：メタノール（２：１、容量／容量）中で５０ｎｇの本来の組織重量の当量
に再構成し、そして５分間撹拌した。それぞれの試料のアリコート（４０μＬ）を、Ｗａ
ｔｅｒｓの全量回収バイアルに送り、そして５０μＬの１０μｇ／ｍＬのｄ３−Ｃ１６−
ＧＬ−１内部標準（Ｍａｔｒｅｙａ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｅａｓａｎｔ Ｇａｐ，ＰＡ）を加
えた。試料を窒素下で乾燥し、そして２００μＬの１：４（容量／容量）のＤＭＳＯ：メ
タノールで再構成した。異なった炭素鎖の長さのグルコシルセラミドのＥＳＩ／ＭＳ分析
を、エレクトロスプレーイオン供給源を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍ
ｉｃｒｏ装置に接続されたＷａｔｅｒｓ ａｌｌｉａｎｃｅのＨＰＬＣ（分離モジュール
２６９５）で行った。脂質抽出物試料（２０μＬ）を、Ｃ８カラム（４ｍＬ×３ｍｍ内径
；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）に４５℃で注入し、そして５０から
１００％のアセトニトリル（２ｍＭの酢酸アンモニウム、０．１％のギ酸）の勾配で、０
．５ｍＬ／分で溶出した。最初の０．５分を５０％の有機物で保ち、そして次いで最後の
３．５分間のために、急速に１００％に切り換えた。供給源温度を１５０℃で一定に保ち
、そして窒素を脱溶媒和ガスとして、６７０Ｌ／時の流速で使用した。キャピラリー電圧
を３．８０ＫＶに、コーン電圧を２３Ｖに維持し、それぞれのイオン種に対する滞留時間
は１００ｍｓであった。スペクトルを、ＭＲＭモードによって獲得して、８種の主要なア
イソフォーム（Ｃ１６：０、Ｃ１８：０、Ｃ２０：０、Ｃ２２：１、Ｃ２２：０、Ｃ２２
：１−ＯＨ、Ｃ２４：１、及びＣ２４：０）をモニターした。グルコシルセラミドの定量
化は、０．１から１０μｇ／ｍＬの範囲の補正曲線による、内部標準に対するこれらの８
種のアイソフォームの合計に基づいた。

組織診断。 組織学的分析のために、組織を、亜鉛ホルマリン（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍ
ｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡ）で室温で２４時間固
定し、次いでＰＢＳ中で４℃で、更なる加工の準備ができるまで保存した。全ての試料を
、エタノール中で脱水し、キシレン中で浄化し、Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ Ｒパラフィン（Ｓ
ｕｒｇｉｐａｔｈ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＩＬ）中に浸潤し、そして包埋した。５ミクロン
の切片を、回転式ミクロトームを使用して切断し、そして６０℃のオーブン中で乾燥して
から、染色した。切片を、Ｈｅｍｏ−Ｄｅ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓａｆｅｔｙ Ｓｏ
ｌｖｅｎｔｓ，Ｋｅｌｌｅｒ，ＴＸ）中で脱パラフィンし、そして下降する濃度のエタノ
ール中で再水和し、続いてＰＢＳで洗浄した。切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ
＆Ｅ）で染色し、そしてラット抗−マウスＣＤ６８モノクローナル抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ
，Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）を使用して標識して、マクロファージを確認した。ＰＢＳ中で
５分間洗浄した後、スライドをエタノール中で脱水和し、そしてＨｅｍｏ−Ｄｅ中で浄化
してから、ＳＨＵＲ／Ｍｏｕｎｔ^ＴＭカバーガラスマウント媒体（ＴＢＳ，Ｄｕｒｈａｍ
，ＮＣ）でマウントした。肝臓中のＣＤ６８免疫陽性の面積のパーセントを、組織切片当
たり１０枚の４００×の画像のＭｅｔａＭｏｒｐｈ（ＭＤＳ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）分析を使用して定量した。群
の名称を隠された有資格の獣医学の病理学者が、全ての切片を検査した。

結果
生後３ヶ月のゴーシェ病のマウスの肝臓、脾臓及び肺中に蓄積したＧＬ１を減量させる
ためのグルコセレブロシダーゼの投与計画。 酵素又は基質減少治療のいずれかによる組
合せ及び単剤治療の相対的利点を調査するために、ゴーシェ病のマウスの内臓器官中のＧ
Ｌ１レベルを最大に激減させる酵素の投与計画を最初に決定した。生後３ヶ月のゴーシェ
病のマウス（Ｄ４０９Ｖ／ヌル）に、１０ｍｇ／ｋｇの組換えヒトグルコセレブロシダー
ゼの２、４又は８回投与を静脈注射で投与した。２又は４回投与の酵素で治療されたマウ
スは、薬物注入を３日毎に受け、一方８回投与で治療されたものは、酵素を２日毎に受け
た。８回治療を受けたマウスの注入間の短い時間間隔の使用は、投与されたヒトの酵素に
対するいずれもの免疫反応の潜在的影響を最小にするために設計された。マウスは、最後
の酵素注入後７日目に殺され、そしてその肝臓、脾臓、及び肺中に残ったＧＬ１の量を測
定した。

２回投与のグルコセレブロシダーゼによる治療は、肝臓中のＧＬ１のレベルを、５０％
減少した。酵素注入の４又は８回への回数の増加は、予想されるように、肝臓のＧＬ１レ
ベルをより大きい程度（概略７５％）減少した。８回の投与でさえ、ＧＬ１レベルの完全
ではない低下は、ゴーシェ病の患者における経験と一致し、肝脾腫は長期の治療後にのみ
減少されることを示す（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｇ．
Ａ．Ｇｒａｂｏｗｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１２２（１９９５）
３３−３９を参照されたい）。ゴーシェ病のマウスの脾臓の基質レベルは、酵素治療に対
して更に耐性である。２回投与のグルコセレブロシダーゼの投与は、非治療の対照で注目
されるもののＧＬ１レベルを有意に変更しなかった。４又は８回への酵素注入の回数の増
加は、脾臓のＧＬ１レベルを約５０％減少した。肺において、非治療の対照の概略６０％
への減少が、８回の投与後観察された。肺の僅かに低い程度の基質の減少は、恐らく注入
された酵素の、脂質を持った肺胞のマクロファージへの不良な到達性のためである。脾臓
及び肺と比較した場合、肝臓中のより大きいＧＬ１のクリアランスの観察は、全身的注入
後の酵素の体内分布を反映している可能性がある（その全ての教示が本明細書中に参考文
献として援用される、Ｓ．Ｍ．Ｖａｎ Ｐａｔｔｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ １７（２００７）４６７−４７８を参照されたい）。これらの結果に基づき、２
日間隔で投与される、１０ｍｇ／ｋｇのグルコセレブロシダーゼの８回の連続投与からな
る投与計画を、その後の研究で使用した。

ゴーシェ病のマウスの肝臓中のＧＬ１レベルを低下するための酵素及び基質減少治療の
相対的能力。 生後３ヶ月のゴーシェ病のマウスのコホートを、組換えグルコセレブロシ
ダーゼ又は式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のいずれかで、別個に又は連続して治療した。Ｂ、Ｃ
及びＤ群のマウスに、先に記載したように（２週間の時間をかけて）８回投与の酵素を与
えて、蓄積したＧＬ１を浄化した。次いで異なった群に、普通の固形飼料又は式（Ｉ）・
ヘミ酒石酸塩（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）を含有する固形飼料のいずれかを、更に１０週間
給餌し、Ｆ群は治療を受けず、そして無処置の対照として貢献した。固形飼料の処方に関
わらず、マウスは同程度の量の食物を食し、そして体重の増加には識別可能な差はなかっ
た。概略８０％の蓄積されたＧＬ１レベルが、２週間の単独の酵素治療後に、肝臓から除
去された。これらのマウスが更なる治療なしに１０週間進行させられた場合、その肝臓の
ＧＬ１レベルは増加し、基質の再蓄積がこの介在期間中に起こったことを示した（図２、
カラムＣ）。これらのレベルは、無治療の対照のそれと有意に異なっていない（図２、カ
ラムＦ）。然しながら、マウスが酵素で、そして次いでその食物中の式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩で１０週間かけて治療された場合、その肝臓のＧＬ１レベルは、無治療の対照より有
意に低い（図２、カラムＤ及びＦ）。この結果は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による更なる
治療が、基質の再蓄積を緩慢化したことを示唆する。興味あることに、全体の研究期間中
（１２週間）、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で治療されたマウスが、無治療の年齢を合
わせた対照と比較した場合、差は有意ではないが、更により低いＧＬ−１レベルを示した
（図２、カラムＥ）。この動物モデルにおいてＧＬ１レベルを減少する単独のＳＲＴの能
力は、本出願人等の以前の報告と一致し（その全ての教示が本明細書中に参考文献として
援用される、Ｋ．Ａ．ＭｃＥａｃｈｅｒｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔ
ａｂ．９１（２００７）２５９−２６７を参照されたい）、そしてゴーシェ病のマウス（
Ｄ４０９Ｖ／ヌル）が、残留酵素活性を保持している事実を反映する可能性がある（その
全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｙ−Ｈ．Ｘｕ，ｅｔ ａｌ．，Ａ
ｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３，２００３，２０９３−２１０１を参照されたい）。

ゴーシェ病のマウスの脾臓中のＧＬ１レベルを低下するための酵素及び基質減少治療の
相対的能力。 生後３ヶ月のゴーシェ病のマウスを、単独の組換えグルコセレブロシダー
ゼで２週間治療することにより、脾臓のＧＬ１を概略６０％減少した（図３、カラムＢ）
。これらのマウスを更に１０週間更なる介入なしに加齢させた場合、基質レベルは、研究
の開始時に観察されたものに戻り（図３、カラムＣ）、そして無治療の対照と有意に異な
っていなかった（図３、カラムＦ）。これは、脾臓中のＧＬ１の再蓄積の速度が、肝臓に
おけるより高いことを示唆する。この仮定は、更に脾臓中の基質の、肝臓中（約５００ｍ
ｇ／ｇ組織、図３、カラムＡ）より高い基底レベル（約１５００ｍｇ／ｇ組織；図２、カ
ラムＡ）の観察によって支持された。酵素で、そして次いで式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で次
の１０週間治療されたマウスは、脾臓のＧＬ１レベルの最大の減少を示し（図３、カラム
Ｄ）、そしてこれらは、無治療の対照の脾臓中のものより有意に低かった（図３、カラム
Ｆ）。これは、ＳＲＴの展開が、基質の再蓄積を遅延するだけでなく、しかし更にこの器
官における蓄積の負荷の更に減少するために作用することを示した。少なくとこの場合、
残存内因性酵素の正味の効果及び基質の減少が、全体の基質レベルの更なる低下に導くこ
とは明白である。単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で１２週間治療されたマウス（図３、カ
ラムＥ）の、無治療の対照（図３、カラムＦ）より低い脾臓のＧＬ１レベルの観察は、差
は有意ではないが、この考えと一致する。従って、高い残留酵素活性を持つ軽度の１型ゴ
ーシェ病の患者において、ＥＲＴ、それに続くＳＲＴによる治療は、原因基質の除去の速
度及び恐らく程度さえ潜在的に促進することができる。

ゴーシェ病のマウスの肺中のＧＬ１レベルを低下するための酵素及び基質減少治療の相
対的能力。 先に記述したように、肺のＧＬ１レベルは、組換えグルコセレブロシダーゼ
の静脈投与によって最も効果的でなく除去される。生後３ヶ月のマウスの２週間の酵素に
よる治療は、肺中の基質レベルの３０％のみの減少をもたらした（図４、カラムＢ）。後
に続く次の１０週間、普通の固形飼料を給餌されたマウスのコホートは、予測されたよう
に、ＧＬ１の再蓄積を示し、そして無治療のレベルと有意異なっていなかった（図４、カ
ラムＣ及びＤ）。対照的に、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を含有する固形飼料を、同じ介入期
間給餌されたマウスは、単独の酵素を投与されたものより下への基質レベルの減少を示し
（図４、カラムＤ）、そして無治療の対照中のものより有意に低かった（図４、カラムＦ
）。再び、これは、肺において、脾臓のように、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（残留内因性酵
素活性の存在中で）の正味の効果は、ＧＬ１の再蓄積を遅延させるだけでなく、更にこれ
を開始時のレベルより下に、更に減少するために作用することを示唆する。他の内臓器官
と同様に、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による治療は、肺のＧＬ１レベルを低下するこ
とにおいて（図４、カラムＥ）、無治療の対照（図４、カラムＦ）と比較した場合有効で
あった。

酵素及び基質減少治療後のゴーシェ病のマウスの肝臓の組織学的分析。 肝臓における
異なった治療計画の効果を可視化するために、組織の切片をマクロファージマーカーのＣ
Ｄ６８のために染色した。無治療の生後３ヶ月のゴーシェ病のマウスからの肝臓の切片の
分析は、多数の脂質で充溢したＣＤ６８陽性ゴーシェ細胞の存在を示し、これは、１２週
間後に分析した場合、殆ど不変のまま残っていた。上記の生化学的データと一致して、２
週間の期間をかけて組換えグルコセレブロシダーゼを投与されたマウスの肝臓は、これら
の異常なマクロファージ中の脂質の実質的な除去を示した。これらのマウスが更なる治療
なしに更に１０週間加齢させられた場合、ゴーシェ細胞の出現によって示されるようにＧ
Ｌ１の再蓄積の証拠が存在した。然しながら、このゴーシェ細胞の増加は、マウスに式（
Ｉ）・ヘミ酒石酸塩による基質減少治療を同じ介入期間にわたって与えた場合、無効にさ
れる。先に記述したように、単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を受けたゴーシェ病のマウス
は、ＥＲＴ及びＳＲＴの組合せを受けたものと同じ程度ではないが、更に基質の減少した
蓄積を示した。各種の切片に対するＣＤ６８陽性の染色の程度は、更にＭｅｔａＭｏｒｐ
ｈソフトウェアを使用して定量された（図１８）。これらの切片における染色の程度は、
生化学的に決定された肝臓のＧＬ１レベルの量を反映し（図１５）、異なった治療計画の
相対的利点に対する示唆を更に支持した。

実施例８： ゴーシェ病のマウスモデルにおける式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の効力
動物研究。 動物に関係する方法は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｓｓｅｓｓ
ｍｅｎｔ ａｎｄ ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｉ
ｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）の州及び連邦の指針に従って、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏ
ｎａｌ ａｎｉｍａｌ ｃａｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）
によって精査及び認可された。ゴーシェ病のｇｂａ^{Ｄ４０９Ｖ／ｎｕｌｌ}マウス（その全
ての教示が本明細書中に参考文献として援用されるＹ．−Ｈ．Ｘｕ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ
．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３（２００３）２０９３−２１０１を参照されたい）を、研究
の必要性によって成熟させた。オス及びメス間で、表現型及び式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩に
対する反応に差が見いだせず、従って両方の性別を研究に使用した。式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩の供給は、１０ｍＬ／ｋｇの体積で一日一回の経口強制飼養によった。マウスを治療
の開始に一週間先立って、同様な体積の水で経口強制飼養に慣れさせた。式（Ｉ）・ヘミ
酒石酸塩を注射用水（ＷＦＩ；ＶＷＲ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）中に溶解し、
そして九日の経過をかけて、７５ｍｇ／ｋｇ／日から１５０ｍｇ／ｋｇ／日への、それぞ
れの投与量で三日間、そして２５ｍｇ／ｋｇ／日の増加による投与量増大で投与した。マ
ウスを週三回秤量して、その全体的健康状態に対する薬物の潜在的影響をモニターした。

マウスを二酸化炭素吸入によって殺し、そしてその組織を直ちに回収した。それぞれの
組織の半分をドライアイス上で急速冷凍し、そして−８０℃で更なる加工の準備ができる
まで保存した。他の半分は、組織学的分析のために収集した。

高性能薄層クロマトグラフィーによる組織のグルコシルセラミドレベルの定量化。 高
性能薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）分析は、記載されているとおりであった（
その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ａ．Ａｂｅ，ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．１０５（２０００）１５６３−１５７１；Ｈ．Ｚｈａｏ，ｅｔ
ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５６（２００７）１３４１−１３４９；及びＳ．Ｐ．Ｆ．Ｍｉ
ｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２７（１９９６）３５３−３
５８）。簡単には、全脂質画分を、冷ＰＢＳ中で組織をホモジナイズし、２：１（容量／
容量）のクロロホルム：メタノールで抽出し、そして水浴式超音波処理器中で超音波処理
することによって得た。試料を遠心して、相を分離し、そして上清を回収した。ペレット
を、クロロホルム：メタノール：生理食塩水中で再度超音波処理し、遠心し、そして得ら
れた第２の上清を収集し、そして最初のものと混合した。１：１（容量／容量）のクロロ
ホルム：生理食塩水混合物を、混合した上清に補助し、撹拌し、そして遠心した。上部の
水層を捨てた後、メタノール：生理食塩水を加え、撹拌し、そして再度遠心した。有機相
を採取し、そして窒素下で乾燥し、２：１（容量／容量）のクロロホルム：メタノール中
に０．１ｇの本来の組織重量当たり１ｍＬで溶解し、そして−２０℃で保存した。

脂質抽出物の一部を、全リン酸塩、即ち、内部標準として使用するリン脂質含有量を測
定する（その全ての教示が本明細書中に参考文献として援用される、Ｂ．Ｎ．Ａｍｅｓ，
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．８（１９６６）１１５−１１８を参照されたい）ため
に使用した。残りは、ＨＰ−ＴＬＣプレート上でグルコシルセラミドと共に移動したリン
脂質を除去するために、アルカリ性の加メタノール分解を受けた。当量の全リン酸塩を含
有する抽出物のアリコートを、ＨＰ−ＴＬＣ上に、既知のグルコシルセラミドの標準（Ｍ
ａｔｒｅｙａ ｉｎｃ．Ｐｌｅａｓａｎｔ Ｇａｐ，ＰＡ）と共に斑点として付けた。脂
質を溶解し、そして３％の酢酸銅一水和物（重量／容量）１５％のリン酸（容積／容積）
、それに続き１０分間１５０℃で焼くことによって可視化した。脂質のバンドを、デンシ
トメーター（ＧＳ−７００，Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）でスキャンし、
そしてＱｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で解析した。

質量分析法による組織のグルコシルセラミドレベルの定量化。 グルコシルセラミドを
、記載されているように質量分析法によって定量した（その全ての教示が本明細書中に参
考文献として援用される、Ｋ．ＭｃＥａｃｈｅｒｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ
．８（２００６）７１９−７２９；Ｔ．Ｄｏｅｒｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７４（１９９９）１１０３８−１１０４５を参照されたい）。組織を、２：
１（容量／容量）のクロロホルム：メタノール中でホモジナイズし、そして３７℃でイン
キュベートした。試料を遠心し、そして上清を０．２体積の水で一晩抽出した。試料を再
び遠心し、水相を捨て、そして有機相を窒素下でフィルム状物まで乾燥した。

エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ／ＭＳ）分析のために、組織の試料を、
１ｍＬのクロロホルム／メタノール（２：１、容量／容量）中に５０ｎｇの本来の組織重
量当量に再構成し、そして５分間撹拌した。それぞれの試料のアリコート（４０μＬ）を
、Ｗａｔｅｒｓの全量回収バイアルに移し、そして５０μＬの１０μｇ／ｍＬのｄ３−Ｃ
１６−ＧＬ−１内部標準（Ｍａｔｒｅｙａ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｅａｓａｎｔ Ｇａｐ，ＰＡ
）を加えた。試料を窒素下で乾燥し、そして２００μＬの１：４のＤＭＳＯ：メタノール
で再構成した。異なった炭素鎖の長さのグルコシルセラミドのＥＳＩ／ＭＳ分析を、エレ
クトロスプレーイオン供給源を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ
装置に接続されたＷａｔｅｒｓ ａｌｌｉａｎｃｅのＨＰＬＣ（分離モジュール２６９５
）で行った。２０マイクロリットルの脂質抽出物の試料を、Ｃ８カラム（４ｍｌ×３ｍｍ
内径；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）に４５℃で注入し、そして５０
から１００％のアセトニトリル（２ｍＭの酢酸アンモニウム、０．１％のギ酸）の勾配で
、０．５ｍＬ／分で溶出した。最初の０．５分を５０％の有機物で保ち、そして次いで最
後の３．５分間のために、急速に１００％に切り換えた。供給源温度を１５０℃で一定に
保ち、そして窒素を脱溶媒和ガスとして、６７０Ｌ／時の流速で使用した。キャピラリー
電圧を３．８０ＫＶに、コーン電圧を２３Ｖに維持し、一方それぞれのイオン種に対する
滞留時間は１００ｍｓであった。スペクトルを、ＭＲＭモードによって獲得して、８種の
主要なアイソフォーム（Ｃ１６：０、Ｃ１８：０、Ｃ２０：０、Ｃ２２：１、Ｃ２２：０
、Ｃ２２：１−ＯＨ、Ｃ２４：１、及びＣ２４：０）をモニターした。グルコシルセラミ
ドの定量化は、０．１から１０μｇ／ｍＬの範囲の補正曲線による、内部標準に対するこ
れらの８種のアイソフォームの合計に基づいた。

組織診断。 組織学的分析のために、組織を、亜鉛ホルマリン（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍ
ｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡ）で室温で２４時間固
定し、次いでＰＢＳ中で４℃で、更なる加工の準備ができるまで保存した。全ての試料を
、上昇する濃度のエタノール中で脱水し、キシレン中で浄化し、そしてＳｕｒｇｉｐａｔ
ｈ Ｒパラフィン（Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＩＬ）中に浸潤し、そして
包埋した。５ミクロンの切片を、回転式ミクロトームを使用して切断し、そして６０℃の
オーブン中で乾燥してから、染色した。切片を、キシレン中で脱パラフィンし、そして下
降する濃度のエタノール中で再水和し、続いて水で洗浄した。３％の酢酸で１分間洗浄し
た後、スライドを、ｐＨ２の３％の酢酸中の１％のアルシアンブルー８ＧＸ（Ｅｌｅｃｔ
ｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で４０分間染色した。水中で洗浄
し、そして１％の過ヨウ素酸で１分間酸化した後、スライドをシッフ試薬（Ｓｕｒｇｉｐ
ａｔｈ）で１２分間染色した。５分間熱水で洗浄した後、スライドをアルコールで脱水し
、そしてキシレンで浄化してから、ＳＨＵＲ／Ｍｏｕｎｔ^ＴＭカバーガラスマウント媒体
（ＴＢＳ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）でマウントした。形態学的に確認された肝臓中のゴーシ
ェ細胞を、１０枚の高倍率視野（ＨＰＦ、４００×）当たりの細胞数手集計を使用して定
量した。

結果
Ｄ４０９Ｖ／ヌルマウスに対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与の影響。 Ｄ４０９Ｖ
／ヌルマウスに対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与の影響を評価した。生後概略７ヶ月
のマウスに、１５０ｍｇ／ｋｇ／日の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（グルコシルセラミドシン
ターゼを阻害することにおいて有効であることが初期の研究において示された投与量）を
、経口強制飼養によって１０週間投与した。この治療は、マウスの健康な状態及び食餌の
習慣に注目すべき効果を有しなかった。研究を通してのその体重の測定は、無治療のマウ
スのものと有意な逸脱を示さず、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、このシンターゼを阻害する
ことにおいて有効であることを示す投与量において十分に耐性であることを示唆した。

若い前駆症状のゴーシェ病のマウスを治療することにおける式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の
効力。 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、若い（生後１０週間）のＤ４０９Ｖ／ヌルマウスに
おけるグルコシルセラミドのリソソームの蓄積の寛解及びゴーシェ細胞の出現に対して評
価した。これらの若いゴーシェ病のマウスは、影響された組織中の低いＧＬ１レベルを示
す。生後１０週間のマウスに、７５又は１５０ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかの式（Ｉ）・ヘ
ミ酒石酸塩を、経口強制飼養によって１０週間投与した。グルコシルセラミドレベルの測
定は、年齢を合わせたベヒクルで治療した対照と比較した場合、用量依存性の減少を示し
た。１５０ｍｇ／ｋｇ／日で治療されたコホートにおいて、グルコシルセラミドレベルは
、肝臓、肺及び脾臓において、それぞれ対照におけるものの６０、４０及び７５％であっ
た（図６）。治療されたＤ４０９Ｖ／ヌルマウスの肝臓及び肺で観察された統計的に有意
に低いグルコシルセラミドのレベルは、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、これらの組織中のこ
のスフィンゴ糖脂質の蓄積を減少することにおいて有効であったことを示した。

研究の終了（生後２０週）における無治療のＤ４０９Ｖ／ヌルマウスの肝臓の組織学的
評価は、肝臓中全体のゴーシェ細胞の存在を示した。１５０ｍｇ／ｋｇ／日の式（Ｉ）・
ヘミ酒石酸塩で１０週間治療されたマウスは、更に一定のより小さい大きさであるゴーシ
ェ細胞の稀な存在のみを示した。多くの異なった切片におけるこれらの細胞の定量化は、
ゴーシェ細胞の出現頻度が、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩で治療したマウスにおいて有意に低
かったことを確認した。まとめれば、これらの生化学的及び組織学的発見は、前駆症状の
ゴーシェ病のマウスに対する式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の毎日の経口投与が、影響された組
織中のグルコシルセラミドの蓄積、及びその後の肝臓におけるゴーシェ細胞の形成を減少
することにおいて有効であることを示唆した。

既往の病態を持つ年長のゴーシェ病のマウスに治療における式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の
効力。 年長の症候性ゴーシェ病のマウスにおける疾病の進行を停止又は逆転における式
（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の効力を、更に評価した。生後７ヶ月のＤ４０９Ｖ／ヌルマウスに
、１５０ｍｇ／ｋｇ／日の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を、経口強制飼養によって１０週間投
与した。治療後５及び１０週目における治療されたマウスの肝臓、肺及び脾臓中のグルコ
シルセラミドレベルの分析は、これらが、研究の開始時に観察したものを超えて増加して
いないことを示した。１０週間の治療後、グルコシルセラミドレベルは、ベヒクルで治療
された対照より、肝臓で６０％低く、肺で５０％低く、そして脾臓で４０％低いことが決
定された。これらの結果は、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、既存の貯蔵の病態の負荷を持つ
マウスにおけるグルコシルセラミドの更なる蓄積を阻害することにおいて有効であること
を示した。

組織切片の組織学的分析は、無治療の対照と比較した場合、治療されたＤ４０９Ｖ／ヌ
ルマウスに肝臓中の減少した数のゴーシェ細胞を示した。ゴーシェ細胞の数の定量化は、
生化学的発見を実証した；治療されたＤ４０９Ｖ／ヌルマウスは、５及び１０週目の両方
の時点で、治療の開始時のものと有意に異ならないゴーシェ細胞の計数を示した。これら
の両方の時点のゴーシェ細胞の数は、無治療のＤ４０９Ｖ／ヌルマウスのものより有意に
低かった。まとめれば、これらのデータは、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、既往の病態を持
つマウスにおける更なるグルコシルセラミドの蓄積及びゴーシェ細胞の発生を有効に阻害
することを示す。

考察
式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は、酵素グルコシルセラミドシンターゼに対する高度の特異性
を示した。更に有効な投与量においてグルコセレブロシダーゼ活性の測定可能な阻害はな
く、これは、その殆どが残留グルコセレブロシダーゼ活性を保持するゴーシェ病の１型の
患者を治療する場合、重要な特徴である。１５０ｍｇ／ｋｇ／日の有効な投与量において
、観察可能な胃腸管の問題がなく、そして治療された及び対照の治療されていない群間に
体重の差はない。ＩＣ_５０（２４−４０ｎＭ）の及びそれより上の血清濃度は、最大許容
レベルより下である経口投与量により、容易に達成可能である。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
は、更に容易に代謝され、そして除去される：親化合物及び代謝産物の両方は、ラット及
びイヌにおける１４Ｃで放射線標識した化合物による一回及び繰返し経口投与のＡＤＭＥ
研究において示すように、２４時間内に効率よく除去される。

非最適化投与量を使用して、毎日一回の経口強制飼養計画は、若い前駆症状のマウス及
びすでに貯蔵の病態を示している年長のゴーシェ病のマウスに両方のグルコシルセラミド
の蓄積を好結果で防止する。若い生後１０週間のマウスは、野生型の対照に対して高いグ
ルコシルセラミドレベルを抱えるが、ゴーシェ細胞と呼ばれる特徴的な充溢した組織のマ
クロファージをいまだ発生していない。１５０ｍｇ／ｋｇ／日の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
による治療は、全ての測定可能な疾病の進行を停止し、そしてゴーシェ細胞の発生を阻害
した。高いレベルのリソソームのグルコシルセラミド及び多くのゴーシェ細胞を示す年長
のマウスにおいて、５週間又は１０週間のいずれかの治療後、スフィンゴ糖脂質のレベル
又は貯蔵細胞の数の更なる増加はなかった。ゴーシェ細胞中のグルコシルセラミドの主要
な供給源は、起源が細胞外であることが報告され、これらの結果は、グルコシルセラミド
シンターゼの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の阻害が全身的であることを暗示している。

式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩がグルコシルセラミドの更なる蓄積を防止することにおいて有
効であるという観察は、ゴーシェ病の治療を、更に向上することができる治療戦略を示唆
する。

要約として、本明細書中に提示したデータは、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が、ゴーシェ病
のマウスモデルにおいて顕性の不都合な影響を示さないグルコシルセラミドシンターゼの
活性な、そして特異的阻害剤であることを示す。これは、前駆症状及び年長のゴーシェ病
に罹ったマウスの両方において、グルコシルセラミドの蓄積及びゴーシェ細胞の形成を阻
害することによって、疾病の進行を好結果で防止する。これらの発見は、式（Ｉ）・ヘミ
酒石酸塩が、小児及び成人の両方の１型ゴーシェ病に対する、そして潜在的に他のスフィ
ンゴ糖脂質の貯蔵疾患の、なおもう一つの治療の選択肢であることができることを示唆す
る。

実施例９： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の第２相臨床試験
方法。 この５０又は１００ｍｇを一日二回経口で与えられる式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
の臨床試験により、五か国の七つの場所で、１型ゴーシェ病（ＧＤ１）を持つ２６人の成
人（女性１６人：男性１０人；平均年齢３４歳、範囲１８−６０歳；全てコーカサス人種
）を治療した。患者は、脾腫（正常の１０倍の体積）及び血小板減少症（血小板４５，０
００−１００，００個／ｍｍ^３）又は貧血（ヘモグロビン女性８−１０ｇ／ｄｌ；男性８
−１１ｇ／ｄｌ）のいずれかを有することである。これに先立つ１２ヶ月、誰も酵素置換
又は基質減少治療を受けていなかった。複合主要有効性の終点は、５２週間の治療後のグ
ロブリンレベル（＋０．５ｇ／ｄｌ）又は血小板の数（＋１５％）である。肝臓の体積、
キトトリオシダーゼ、グルコシルセラミドも、更に評価される。患者は、長期に治療され
、そしてモニターされる。

結果。 ５２週目のデータは、２０人の患者から入手可能であった；他の４人は早期に
取り止め、そして二人は継続中であった。複合主要終点は、２０人の患者中１９人によっ
て合致された。基線に対する５２週目の平均（１ＳＤ）変化は：それぞれ、ヘモグロビン
＋１．６（１１．３５）ｇ／ｄＬ；血小板数＋４３．６％（１３７．５９％）；脾臓及び
肝臓体積（正常の倍数）４０．２％（１１０．４４％）及び１５．８％（１１０．３９％
）；そしてキトトリオシダーゼ４９．９％（１２０．７５％）であった。血漿グルコシル
セラミドレベルは、全ての患者において４週間後に正常化し、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩は
、受容可能な安全特性を伴って十分に耐性であった。６人の患者における七つの関連する
不都合な事象が、関連するとして報告され；全て軽度で、そして一時的な性質であった。

実施例１０： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の医薬組成物、１００ｍｇカプセル
１００ｍｇカプセルの調製の方法： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩、微結晶セルロース、ラ
クトース一水和物、及びヒプロメロース、Ｅ１５を、２０メッシュの篩を別個に通した。
表９に示した篩い分けした成分の量を、高剪断粒造機中で、９から１２分間混合した。

次いで成分を、造粒機のボウルへの視覚的に確認されるように完了までの、純水（２．
２ｋｇ；乾燥成分重量の１１．７％）の添加によって湿式造粒した。湿潤な造粒物を、ボ
ウルから出し、そして回転する羽根車の選別ミルを通した。次いで湿潤な造粒物を、直接
加熱の、静的な固定床式トレイ乾燥オーブン中で５０±５℃で、製造過程中の検査によっ
て確認されるように３．５％より多くないよう水分含有率迄乾燥した。次いで乾燥した顆
粒を選別ミルを通し、そして選別された顆粒をＶ型混合機に移した。ベヘン酸グリセリル
（０．２ｋｇ）をＶ型混合機に加え、そして最終混合物を、混合物がインライン又はオフ
ラインの均一性試験によって決定されるように均一になるまで、典型的には１０から２０
分間混合した。次いで最終混合物を＃２の大きさのカプセルに、半自動カプセル充填機を
使用して適当な充填重量（平均２７０ｍｇ）までカプセル化し、そして充填したカプセル
を除塵してから、包装した。

実施例１１Ａ： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の医薬組成物、１０ｍｇカプセル
１０ｍｇカプセルの調製の方法： 実施例１０の方法をカプセル化工程まで追随した。
１０ｍｇのカプセルを製造するために、最終混合物を＃４又は＃５の大きさのカプセルに
、カプセル充填機を使用して適当な充填重量（平均２７ｍｇ）までカプセル化し、そして
充填したカプセルを除塵してから、包装した。

実施例１１Ｂ： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の医薬組成物、５０ｍｇカプセル
５０ｍｇカプセルの調製の方法： 実施例１０の方法をカプセル化工程まで追随した。
５０ｍｇのカプセルを製造するために、最終混合物を＃３の大きさのカプセルに、カプセ
ル充填機を使用して適当な充填重量（平均１３５ｍｇ）までカプセル化し、そして充填し
たカプセルを除塵してから、包装した。

実施例１１Ｃ： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の医薬組成物、１５０ｍｇカプセル
１５０ｍｇカプセルの調製の方法： 実施例１０の方法をカプセル化工程まで追随した
。１５０ｍｇのカプセルを製造するために、最終混合物を＃０の大きさのカプセルに、カ
プセル充填機を使用して適当な充填重量（平均４０５ｍｇ）までカプセル化し、そして充
填したカプセルを除塵してから、包装した。

実施例１２： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の医薬組成物、２５ｍｇカプセル
２５ｍｇカプセルの調製の方法： 実施例１０の方法をカプセル化工程まで追随した。
２５ｍｇのカプセルを製造するために、最終混合物を＃４の大きさのカプセルに、カプセ
ル充填機を使用して適当な充填重量（平均６７．５ｍｇ）までカプセル化し、そして充填
したカプセルを除塵してから、包装した。

実施例１３： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩薬物の相互作用−ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤
ＣＹＰ２Ｄ６の強力な阻害剤であるパロキセチン（一日一回３０ｍｇ）を伴って及び伴
わずに投与された多数回経口投与の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（一日二回１００ｍｇ）の薬
物動力学、安全性及び耐性を評価するための研究を行った。これは、３６人の被験者（男
性１７人及び女性１９人）における非盲検の固定順序の研究であった。第２の目的は、健
康な被験者における多数回投与の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（一日二回１００ｍｇ）と組合
せたパロキセチンのＰＫを評価し、そして更に一回投与の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与
と比較した多数回投与後の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のＰＫを評価することであった。

血漿中に存在するような式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の遊離塩基の平均ＰＫパラメーターは
、非線形であり、そして一回投与の投与と比較した場合、繰返し投与（一日二回１００ｍ
ｇ）によるＡＵＣの２倍の蓄積及びＣ_ｍａｘを示した。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩及びパロ
キセチンの同時投与は、多数回投与の単独の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与と比較して、
Ｃ_ｍａｘの７倍の増加及びＡＵＣの９倍の増加をもたらした。これらの結果は、パロキセ
チンが、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の代謝を阻害し、そして薬物の血液血漿濃度を増加する
ことを示す。同様な効果は、他の強力なＣＹＰ２Ｄ６阻害剤（例えばフルオキセチン及び
キニジン）に伴って予測され、そして式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩が強力なＣＹＰ２Ｄ６阻害
剤であるとして知られた薬物と同時投与される場合、薬物の血漿レベルの注意深いモニタ
ー及び潜在的な投与量の調節が必要である。パロキセチン濃度は、予測より約１．５から
２倍高く、これは、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩又はその代謝産物の一つが、ＣＹＰ２Ｄ６の
温和な阻害剤であることができることを示唆する。

実施例１４： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩薬物の相互作用−ＣＹＰ３Ａ４阻害剤及びｐ−
糖タンパク質（ＰＧＰ）阻害剤
多数回投与のケトコナゾール（一日一回４００ｍｇ）を伴って及び伴わない多数回投与
の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（一日二回１００ｍｇ）の薬物動力学、安全性及び耐性を評価
するための研究を、健康な男性及び女性の被験者で行った。これは、１００ｍｇの一回投
与の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与、多数回投与の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩の投与、及び
４００ｍｇのケトコナゾール（一日一回）を伴う１００ｍｇの式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩（
一日二回）の同時投与を含む三つの期間からなる、３６人の健康な被験者（男性及び女性
１８人）における非盲検の固定順序の研究であった。式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩及びシトク
ロムｐ４５０３Ａ４（“ＣＹＰ３Ａ４”）及びｐ−糖タンパク質の強力な阻害剤であるケ
トコナゾールの繰返し投与は、定常状態で血漿中に存在するような式（Ｉ）・ヘミ酒石酸
塩の遊離塩基の暴露の４倍の増加をもたらした。従って、式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩を既に
受けている患者は、ＣＹＰ３Ａ４又はｐ−糖タンパク質の強力な阻害剤との同時治療の場
合、一次的な投与量の減少を必要とすることができる。

実施例１５： 式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩製剤の安定性の研究
混合物を、約２グラムの大きさのシンチレーションバイアル中の、式（Ｉ）・ヘミ酒石
酸塩及び賦形剤（カプセル級のラクトース一水和物、アビセルＰＨ３０１（微結晶セルロ
ース）及びメトセルＥ−１５ Ｐｒｅｍ ＬＶ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）
）を混合し、１５．６％の水を混合物に加え、そして湿潤な顆粒が形成するまで混合する
ことによって調製した。湿潤な顆粒を、＃１０の篩（２０００ミクロンの開口）を使用し
て選別した。次いで選別した顆粒を５０℃のオーブンで２時間乾燥した。乾燥した顆粒を
＃１８の篩（１０００ミクロンの開口）を使用して選別した。潤滑剤のベヘン酸グリセリ
ルを混合物に加え、そして混合して、最終混合物を形成した。調製した混合物を、以下の
表に示す：

先に列挙した異なったＡＰＩ（活性医薬成分）：ラクトース：アビセル比を有する七つ
の製剤の混合物を、それぞれの製剤の分解速度及び安定性を理解するために、８５℃の高
温に３日間暴露した（強制分解研究条件）。この促進条件は、２４ヶ月における５０ｍｇ
の薬物産物の分解産物の程度が、８５℃で３日間で得られたのものと同様であったという
研究結果に基づいて選択された。

強制分解研究を、Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｔ３、３μｍ、１００×４．６ｍｍ）
、０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＨＦ）を伴う水及びアセトニトリルからなる移動相、
２８０ｎｍにおけるＵＶ検出、４０℃のカラム温度、及び２ｍＬ／分の流速を使用する逆
相勾配ＨＰＬＣ法を使用して行った。勾配は、５％のＢ（アセトニトリル及び０．１％の
ＴＦＡ）を０．５分間保持して開始し、そして次いで毎分当たり４．８３％のＢで１５分
まで有機成分を増加させた。

それぞれの製剤混合物の全分解物を、合計し、そしてＡＰＩ：ラクトース：アビセル比
に対してプロットし、そして結果を図１５に示す。この研究の結果は、ＡＰＩ及びラクト
ースの比を一定にした場合、アビセルの量を減少することは、製剤の安定性を改良するこ
とを示唆する。アビセルが除去された場合、製剤は、１：２．１：０のＡＰＩ：ラクトー
ス：アビセル比を有し、これは最も安定した製剤である。ラクトースが除去された場合、
製剤は、１：０：２．１のＡＰＩ：ラクトース：アビセル比を有し、そしてこの製剤は、
他の比と比較して、最も不安定ではない。この組合せた情報は、ラクトースは製剤を安定
化し、一方アビセルは、製剤を不安定化することを示唆する。然しながら、両方の賦形剤
が存在する場合、これらは互いに相互作用する。安定した製剤を得るために、その比を調
節しなければならない。

水溶性である式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩のような活性な医薬的成分に対して、微結晶セル
ロースは、これが水不溶性であるために、湿潤顆粒化中に顆粒を形成することを援助する
。微結晶セルロースが使用されない場合、顆粒の段階からペーストの形態への急な変化が
起こる。ペーストの形態は、取扱いが困難であり、そして乾燥後に得られる粒子は、適し
た機械的強度及び粒子の大きさの分布を有しない。３７重量％の式（Ｉ）・ヘミ酒石酸塩
、４１．０重量％の水溶性充填剤；１６．７重量％の不溶性充填剤、２重量％から約６重
量％の結合剤；及び約０．１重量％から約２重量％の潤滑剤を、全て乾燥固体基準で有す
る医薬組成物は、形成される分解物の量に関して、最良の安定性の特性を有する。

本明細書中に引用される全ての特許、公開された出願及び参考文献の教示は、その全て
が参考文献として援用される。
本発明は、その実施例の態様を参照して特別に示され、そして記載されているが、形態
及び詳細における各種の変更が、特許請求の範囲によって包含される範囲から逸脱するこ
となくその中で行うことができることは当業者にとって理解されるものである。

Claims (15)

1. 低、中、又は高ＣＹＰ２Ｄ６ Ｐ４５０代謝群であると評価されたゴーシェ病の患者を治療する方法に使用するための、
   以下の構造式で表される化合物：
   
   又は医薬的に受容可能なその塩を含む医薬であって、
   前記患者が、低代謝群である場合、前記化合物は一日当たり２５ミリグラムから１５０ミリグラムの用量である第一用量の有効な量で投与され、そして
   前記患者が、中又は高代謝群である場合、前記化合物は一日当たり１００ミリグラムから３００ミリグラムの用量である第二用量の調節された有効な量で投与され、
   前記第二用量は前記第一用量よりも多い、医薬。
2. 遺伝子型判定によって、前記患者が低、中、又は高代謝群であると評価される、請求項１に記載の医薬。
3. 酵素活性の完全な喪失をもたらすＣＹＰ２Ｄ６遺伝子の二つの変異対立遺伝子を保有する結果として、前記患者が低代謝群であると評価される、請求項２に記載の医薬。
4. 前記ＣＹＰ２Ｄ６の低い発現の結果として、前記患者が低代謝群であると評価される、請求項１に記載の医薬。
5. 前記ＣＹＰ２Ｄ６の阻害剤である薬物で治療された結果として、前記患者が低代謝群であると評価される、請求項１に記載の医薬。
6. 前記患者がＣＹＰ２Ｄ６の一つの減少した活性の対立遺伝子及び一つのヌル対立遺伝子を保有するか、前記患者がＣＹＰ２Ｄ６の少なくとも一つの、そして二つより多くない正常な機能的対立遺伝子を保有する、請求項５に記載の医薬。
7. 前記薬物が、パロキセチン、フルオキセチン、又はキニジンである、請求項５又は６に記載の医薬。
8. 化合物が、一日当たり５０ミリグラムから１００ミリグラムの用量で投与される、請求項３−７のいずれか１項に記載の医薬。
9. ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子の一つの減少した活性の対立遺伝子及び一つのヌル対立遺伝子を保有する結果として、前記患者が中代謝群であると評価される、請求項２に記載の医薬。
10. ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子の少なくとも一つの、そして二つより多くない正常な機能的対立遺伝子を保有する結果として、前記患者が高代謝群であると評価される、請求項２に記載の医薬。
11. 化合物が、一日当たり１５０ミリグラムよりも多い用量、例えば一日当たり１５０ミリグラムから２００ミリグラムの用量で投与される、請求項９または１０に記載の医薬。
12. 患者がヒトの患者である、請求項１−１１のいずれか１項に記載の医薬。
13. 前記ゴーシェ病が、１型ゴーシェ病である、請求項１−１２のいずれか１項に記載の医薬。
14. 化合物が、前記構造式のヘミ酒石酸塩で表される、請求項１−１３のいずれか１項に記載の医薬。
15. 請求項１−１４のいずれか１項で定義された、ゴーシェ病の患者を治療するための医薬の製造における、以下の構造式：
    
    で表される化合物又は医薬的に受容可能なその塩の使用。