JP2013533268A - 糖尿病及び代謝障害を治療する組み合わせ医薬組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

本願は、糖尿病及び他の代謝障害に罹っている患者に投与するための医薬組成物であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含む医薬組成物を提供する。
【選択図】図１

Description

本発明は、医学の分野に関し、糖尿病及び他の代謝障害の治療及び予防に使用することができる。

糖尿病は、高血糖（血液中における糖濃度が高い）を特徴とする慢性状態である。血糖値が継続的に上昇すると、腎障害、視力喪失、心疾患、及び足部潰瘍等の糖尿病に関連する合併症のリスクが高まる。

糖尿病には、１型糖尿病と２型糖尿病の２つの主な種類がある。１型糖尿病では、膵臓がインスリンを産生できないために高血糖が生じる。この種の糖尿病は、通常、小児又は青年にみられる。２型糖尿病では、膵臓がインスリンを産生することはできるが、身体の要求を適切に満たすことができない。問題は、身体がインスリンに対して適切に応答せず、その結果、細胞によるグルコースの吸収が低下し、血糖値が異常に上昇することである。長年に亘って膵臓を酷使すると、膵臓は最終的に機能しなくなり、インスリンを産生する能力を失うこともある。こうなると、２型糖尿病の患者にインスリン療法を施すことが必要になる場合がある。

膵臓によって産生される天然のホルモンであるインスリンは、グルコースを血流から細胞内部に輸送する。したがって、インスリンの主な役割は、グルコースの細胞への輸送を調節して、血糖値を低下させることである。

インスリンの作用は、形質膜でみられるヘテロ四量体受容体の活性化を介して制御される。インスリン受容体は、ジスルフィド結合によって結合されている２つの細胞外α−サブユニットと２つの膜貫通β−サブユニットとで構成される糖タンパク質である（非特許文献１）。α−サブユニットは、インスリン結合ドメインを含み、β−サブユニットの細胞内部分は、インスリン調節型チロシンタンパク質キナーゼ（ドナー（通常、ＡＴＰ）からアクセプターへの高エネルギー基の転移を触媒する酵素）を含む。

インスリン分子が膵臓のβ細胞によって放出され、細胞に到達すると、前記インスリン分子は、大部分の細胞の表面上に存在するインスリン受容体に結合する。インスリンが結合すると、インスリン受容体β−サブユニットの固有のホスホトランスフェラーゼ機能が活性化されて、多数の細胞内タンパク質のチロシンをリン酸化する。インスリン受容体が活性化されると、リン酸化事象によってグルコースの貯蔵が増加し、結果として血糖値が低下する。

最も意欲的な患者において最も注意深くインスリン治療を行った場合でさえも、長期間に亘ってグルコース濃度を有効に制御することは困難である。したがって、疾患及び代謝障害を治療するための望ましい治療効果を有する新規医薬品が継続的に必要とされている。

一酸化窒素（ＮＯ）は、種々の生物学的プロセスのシグナル伝達において作用することが示されている気体分子である。内皮由来のＮＯは、血管緊張の調節において重要な分子であり、それと血管疾患との関連性は長く認識されてきた。ＮＯは、単球接着、血小板凝集及び血管平滑筋細胞の増殖を含めた、動脈硬化巣の形成に関与することが知られている多くのプロセスを阻害する。内皮ＮＯの別の重要な役割は、血管壁を、それ自体の代謝生成物、並びに脂質及びリポタンパク質の酸化生成物によって誘導される酸化ストレスから防御することである。アテローム性動脈硬化症の非常に早い段階で内皮の機能不全が生じる。したがって、局所的なＮＯの利用ができないことが、ヒトにおけるアテローム発生を加速する最終的な一般的な経路になり得る可能性がある。血管内皮におけるその役割に加えて、ＮＯの利用可能性によってリポタンパク質の代謝が調節されることが示されている。ＮＯ代謝生成物の血漿中濃度と、血漿中の総コレステロールレベル及び低密度リポタンパク質［ＬＤＬ］コレステロールレベルとの間には負の相関が報告されているが、高密度リポタンパク質［ＨＤＬ］は高コレステロール血症の被験体における血管の機能を改善する。ＮＯの損失は、疾患の発生にかなりの影響を及ぼす。糖尿病は、主にアテローム動脈硬化性疾患の発生が加速することによって引き起こされる罹患率及び死亡率の上昇を伴う。更に、報告により、糖尿病患者の肺機能が損なわれることが示されている。インスリン抵抗性により気道炎症が導かれることが提唱されている（非特許文献２）。

一酸化窒素は、内皮でＬ−アルギニンから一酸化窒素合成酵素（ＮＯ合成酵素）によって合成される。ＮＯ合成酵素は、構成型（ｃＮＯＳ）及び誘導型（ｉＮＯＳ）を含めた種々のアイソフォームで生じる。構成型は、正常な内皮細胞、ニューロン及びいくつかの他の組織に存在する。

ホメオパシー技術によって増強された極度に希釈された（又は超低）型の抗体の治療効果は、本特許出願の発明者、Ｄｒ．Ｏｌｅｇ Ｉ．Ｅｐｓｈｔｅｉｎによって発見された。特許文献１は、ホメオパシーによって活性化された型の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に対する抗体の投与によって、良性前立腺肥大症又は前立腺炎を治療するための医薬を開示している。特許文献２は、ホメオパシーによって増強された型の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体を開示する。ホメオパシーによって増強された型の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体は、ロシア連邦及び他の国においてＩｍｐａｚａ（登録商標）という名称で販売されている。

米国特許第７，５８２，２９４号明細書 米国特許第７，７００，０９６号明細書

Ｕｌｌｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１３：７５６−６１，１９８５ Ｈａｂｉｂ ｅｔ ａｌ．，Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｆｒｏｍ Ｂｌｏｏｄ Ｔｏ Ｌｕｎｇｓ，Ｉｓ Ｔｈｅｒｅ Ａ Ｌｉｎｋ？ Ｐａｋ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００７；３（１）

１つの態様では、本発明は、糖尿病及び他の代謝障害に罹っている患者に投与するための医薬組成物であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含む医薬組成物を提供する。

１つの態様では、本発明は、糖尿病及び他の代謝障害に罹っている患者に投与するための医薬組成物であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含む医薬組成物を提供する。

１つの変形例では、本発明のこの態様の医薬組成物は、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含み、前記インスリン受容体の分子は、少なくとも１つのα−サブユニットと少なくとも１つのβ−サブユニットとを含む。

１つの変形例では、本発明のこの態様の医薬組成物は、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態のヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体を含む。次いで、Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態の内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体を、前記固体担体に浸透させてよい。

別の変形例では、本発明のこの態様の医薬組成物は、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態の内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体を含む。次いで、Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態のヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体を、前記固体担体に浸透させてよい。

好ましくは、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然抗体であり、より好ましくは、ポリクローナル抗体である。本発明のこの態様の１つの変形例では、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される。

好ましくは、内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然抗体であり、より好ましくは、ポリクローナル抗体である。本発明のこの態様の１つの変形例では、内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される。

別の態様では、本発明は、Ｉ型糖尿病に罹っている患者を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記患者に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、Ｉ型糖尿病に罹っている患者を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記患者に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、ＩＩ型糖尿病に罹っている患者を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記患者に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、ＩＩ型糖尿病に罹っている患者を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記患者に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、哺乳類の血糖値を低下させる方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、哺乳類の血糖値を低下させる方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、哺乳類におけるインスリン抵抗性を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、哺乳類におけるインスリン抵抗性を治療する方法であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体との組み合わせを前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する。

本発明のこの態様の１つの変形例では、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体の１単位〜２単位の剤形と、内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体の１単位〜２単位の剤形との投与を提供し、前記剤形は、それぞれ、１日間に１回〜１日間に４回投与される。好ましくは、活性化増強型抗体のそれぞれの１単位〜２単位の剤形を１日間に２回投与する。

ストレプトゾトシン誘導糖尿病のラットの血漿中グルコースレベルに対する被試験調製物の効果を例示する図である。 ストレプトゾトシン誘導糖尿病のラットにおける耐糖能検査における濃度曲線下面積（ＡＵＣ）の指標に対する、注射の１４日目の被試験調製物の効果を例示する図である。 自然発症性インスリン非依存性糖尿病のラットの血漿中グルコースレベルに対する被試験調製物の効果を例示する図である。 自然発症性インスリン非依存性糖尿病のラットにおける耐糖能検査における濃度曲線下面積（ＡＵＣ）の指標に対する、注射の２８日目の被試験調製物の効果を例示する図である。 ＩＲ Ａｂ＋ＮＯＳ Ａｂ調製物を摂取したバックグラウンドに対する、１型糖尿病患者におけるグルコース及び糖化ヘモグロビンレベルの動態を例示する図である。 ＩＲ Ａｂ＋ＮＯＳ Ａｂ調製物を摂取したバックグラウンドに対する、２型糖尿病患者におけるグルコース及び糖化ヘモグロビンレベルの動態を例示する図である。

本発明は、添付の特許請求の範囲と関連して定義される。特許請求の範囲に関して、以下の用語解説によって関連する定義がもたらされる。

「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子の特定の空間的な極性の構成に特異的に結合し、それにより、それと相補的であると定義される免疫グロブリンを意味するものとする。特許請求の範囲において列挙されている抗体は、完全な免疫グロブリン又はその断片を含んでよく、天然、ポリクローナル又はモノクローナルであってよく、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３、ＩｇＭ等の種々のクラス及びアイソタイプを挙げることができる。その断片としては、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’等を挙げることができる。単数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、複数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を含む。

「活性化増強型」又は「増強型」という用語はそれぞれ、本明細書において列挙されている抗体に関しては、任意の抗体の最初の溶液のホメオパシーポテンタイゼーション（ｐｏｔｅｎｔｉｚａｔｉｏｎ）の生成物を示すために使用される。「ホメオパシーポテンタイゼーション」とは、ホメオパシーの方法を用いて最初の関連物質の溶液にホメオパシーポーテンシーを付与することを示す。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、連続した希釈を、外部からの処理、特に（機械的な）振盪と組み合わせて繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振盪する。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬまでにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００^１２倍希釈、１００^３０倍希釈及び１００^２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することであるか、或いは、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００^１２倍希釈、１００^３０倍希釈及び１００^５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。ホメオパシーポテンタイゼーションの例は、その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５７２，４４１号及び同第７，５８２，２９４号に記載されている。特許請求の範囲では「活性化増強型」という用語が使用され、実施例では「超低用量」という用語が使用される。「超低用量」という用語は、ホメオパシーにより希釈され、増強された型の物質の研究及び使用によって創出された技術分野における専門用語になった。「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ ｄｏｓｅ）」又は「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ ｄｏｓｅｓ）」という用語は、特許請求の範囲において使用される「活性化増強」型という用語を完全に支持し、それと主に同義であるものとする。

言い換えれば、抗体は、３つの因子が存在すれば、「活性化増強」型である。第１に、「活性化増強」型抗体は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている調製プロセスの生成物である。第２に、「活性化増強」型抗体は、現代薬理学において広く受け入れられている方法によって決定される生物活性を有さなければならない。第３に、「活性化増強」型抗体により示される生物活性は、ホメオパシーのプロセスの最終生成物に分子型抗体が存在することによっては説明することができない。

例えば、活性化増強型抗体は、最初の、単離された分子型抗体を、機械的な振盪等の外部からの衝撃と併せて連続して多数回希釈することによって調製することができる。濃度低下の過程における外部からの処理は、例えば、超音波、電磁気、又は他の物理的因子に曝露させることによって実現することもできる。その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれるＶ．Ｓｃｈｗａｂｅ“Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ”Ｍ．，１９６７、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号には、ホメオパシーの技術分野において広く受け入れられているホメオパシー増強の方法であるそのようなプロセスが記載されている。この手順により、最初の分子型抗体の分子濃度が均一に低下する。所望のホメオパシーポーテンシーが得られるまでこの手順を繰り返す。個々の抗体について、所要のホメオパシーポーテンシーは、中間希釈物を所望の薬理学的モデルにおいて生物学的試験に供することによって決定することができる。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振盪と組み合わせて連続した希釈を繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振盪する。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００^１２倍希釈、１００^３０倍希釈及び１００^２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００^１２倍希釈、１００^３０倍希釈及び１００^５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。所望のポーテンシーをどのように得るかの例も、例えば、明示された目的で参照により組み込まれる、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号において提供される。本明細書に記載の「活性化増強」型抗体に適用可能な手順は、下に詳しく記載されている。

ヒト被験体のホメオパシー治療に関してはかなりの量の議論がなされてきた。本発明は、「活性化増強」型抗体を得るために、受け入れられているホメオパシーのプロセスに依拠するが、本発明は、活性を証明するためにはヒト被験体におけるホメオパシー単独に依拠するのではない。驚いたことに、本出願の発明者は、認められている薬理学的モデルにおいて、出発分子型抗体を連続して多数回希釈することから最終的に得られた溶媒が、標的希釈物中に分子型抗体の痕跡が存在することとは無関係の決定的な活性を有することを発見し、十分に実証した。本明細書で提供される「活性化増強」型抗体を、生物活性について、広く受け入れられている活性の薬理学的モデルにおいて、適切なインビトロ実験において、又は適切な動物モデルにおいてインビボで試験した。更に以下に提供される実験により、そのようなモデルにおける生物活性の証拠がもたらされた。同様に以下に本明細書で提供されるヒトの臨床研究は、特に、動物モデルにおいて観察された活性が、ヒトの療法によく翻訳されるという証拠を提供する。ヒト研究によって、医科学において病的状態として広く認められている特定のヒトの疾患又は障害を治療するための、本明細書に記載の「活性化増強」型の利用可能性の証拠ももたらされる。

また、特許請求された「活性化増強」型抗体は、その生物活性が、最初の出発溶液から残っている分子型抗体が存在することによっては説明することができない溶液又は固体調製物のみを包含する。言い換えれば、「活性化増強」型抗体は、最初の分子型抗体の痕跡を含有してよいことが意図されているが、連続して希釈した後に残った分子型抗体は非常に低濃度であるので、当業者は、認められている薬理学的モデルにおいて観察される生物活性が、いかなる程度の妥当性でも残りの分子型抗体に起因すると考えることができない。本発明は特定の理論に限定されるものではないが、本発明の「活性化増強」型抗体の生物活性は、最初の分子型抗体には起因しない。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度が、認められている分析的な技法、例えば、キャピラリー電気泳動及び高速液体クロマトグラフィー等の検出限界を下回る、液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が好ましい。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度がアボガトロ数未満である液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が特に好ましい。分子型の治療用物質の薬理学において、薬理学的反応のレベルが、被験体に投与される、又はインビトロで試験される活性薬物の濃度に対してプロットされた用量反応曲線を作成することは一般的である。任意の検出可能な反応を生じる薬物の最小レベルは、閾値用量として公知である。「活性化増強」型抗体は、もしあれば、所与の生物学的モデルにおける分子型抗体の閾値用量を下回る濃度で分子抗体を含有することが具体的に意図されており、それが好ましい。

本発明は、糖尿病及び他の代謝障害に罹っている患者に投与するための医薬組成物であって、ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体又はヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含む医薬組成物を提供する。本明細書で上記で説明したように、組み合わせの個々の成分のそれぞれは、それ独自の個々の医学的使用で一般的に知られている。しかしながら、本特許出願の発明者らは、驚いたことに、組み合わせの投与が、糖尿病及びインスリン抵抗性の患者の治療に有用であり、更に血糖値を低下させることを見出した。出願人がこの理論に縛られている訳ではないが、「促進因子」仮説では、１型糖尿病（ＤＭ）及び２型糖尿病は、インスリン抵抗性を特徴とする同一の疾患であり、１型ＤＭを発現するか２型ＤＭを発現するかは、患者の遺伝子型によって決定されると考えられている。この仮説は、自己免疫プロセスの役割を否定するものではないが、その主な役割については疑問を呈している。「促進因子」仮説は、進行速度に従って１型糖尿病と２型糖尿病とを分類する。１型糖尿病は、臨床的病徴の発現の開始よりも早く、病的変化の急速な発現が認められる。前記仮説は、２００１年に最初に提唱され、現在では、６つの独立な臨床試験の結果により確認されている（Ｗｉｌｋｉｎ，Ｔ．Ｊ．Ｔｈｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｙｐｅ［Ｉ］ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｙｐｅ ＩＩ ｄｉａｂｅｔｅｓ．／／Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｏｂｅｓｉｔｙ．２００９：Ｖｏｌ．３３−ｐ．７１６−７２６を参照されたい）。両種類の糖尿病の発病には、インスリン抵抗性が重要な役割を果たしており、インスリン抵抗性を低下させると、１型糖尿病及び２型糖尿病の両方の臨床経過が緩和される（Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｗｏｒｌｄ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，２００９，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ．２０１０：Ｖｏｌ．３３，Ｎ８，ｐｐ．１０３−１０８を参照されたい）。インスリンシグナル経路におけるインスリン受容体β−サブユニットの役割は、公知である。インスリンが受容体と結合し、β−サブユニットが活性化した後、前記経路は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）又はＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰ−Ｋ）という２つの異なる方向に進行し得る。第１の経路は、インスリンの代謝作用及び抗アポトーシス作用の大部分を認識するために必要であると考えられ、もう一方の経路は、インスリンの非代謝作用、増殖作用、及び有糸分裂作用に関連している。インスリン抵抗性では、Ｐ１３−Ｋ経路に沿ったβ−サブユニットの活性化と関連している代謝インスリン抵抗性のみが、糖尿病の発現の決定において重要な役割を果たしていることが示されている（Ｍｕｎｔｏｎｉ，Ｓ．Ｍｕｎｔｏｎｉ，Ｓ．Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ａｎｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．２０１１：Ｖｏｌ．５８，Ｎ１，ｐｐ．２５−３６を参照されたい）。請求する医薬組成物は、代謝インスリン抵抗性に対する効果を保証するものである。

本発明のこの態様に従った医薬組成物は、液体形又は固体形とすることができる。医薬組成物に含まれる活性化増強型の抗体のそれぞれは、ホメオパシー分野において受け入れられているプロセスを通して、抗体の最初の分子形態から調製する。開始抗体は、例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれている、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｇ．Ｆｒｉｍｅｌ，Ｍ．，“Ｍｅｄｉｔｓｙｎａ”，１９８７，ｐ．９−３３；“Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，３０ｙｅａｒｓ ａｆｔｅｒ”ｂｙ Ｌａｆｆｌｙ Ｅ．，Ｓｏｄｏｙｅｒ Ｒ．−２００５−Ｖｏｌ．１４．−Ｎ１−２．Ｐ．３３−５５において記載されている、既知のプロセスに従って調製されるモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体とすることができる。

モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。プロセスの最初の段階は、ポリクローナル抗血清の調製の過程で既に開発された原理に基づく免疫化を含む。作業の別の段階は、同一の特異性を有する抗体のクローンを生み出すハイブリッド細胞の作製を伴う。それらの別々の単離は、ポリクローナル抗血清の調製の場合と同じ方法を使用して行う。

ポリクローナル抗体は、動物の能動免疫化を通して得ることができる。この目的で、例えば、適切な動物（例えばウサギ）に、適切な抗原、即ち、内皮ＮＯ合成酵素及びヒトインスリン受容体のβサブユニットのＣ末端断片、又は内皮ＮＯ合成酵素及びヒトインスリン受容体のいずれかの一連の注入を与える。動物の免疫系は、既知の様式で動物から採取される、対応する抗体を生み出す。この手順は、単一特異性の抗体を多量に含んだ血清の調製を可能にする。所望であれば、抗体を含有する血清は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、塩析による分画、又はイオン交換クロマトグラフィーを使用して精製することができる。得られた精製抗体濃縮血清を、活性化増強型の抗体を調製するための出発材料として使用することができる。得られた、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬまでにわたる。

各成分を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００^１２倍、１００^３０倍及び１００^２００倍に希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。固体剤形を調製するために、固体担体を、ホメオパシーのプロセスによって得られた所望の希釈物で処理する。本発明の組み合わせの固体単位剤形を得るために、担体塊に各希釈物を浸透させる。どちらの浸透の階数も、所望の組み合わせ剤形を調製するために適している。

好ましい実施形態では、本発明の組み合わせを含む活性化増強型を調製するための出発材料は、動物に産生させた、対応する抗原、即ち、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片又はヒトインスリン受容体、及び内皮ＮＯ合成酵素に対するポリクローナル抗体である。ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型のポリクローナル抗体を得るために、所望の抗原を免疫源として、実験動物、好ましくはウサギに注射することができる。特定の対象ペプチドは、配列の両側に少なくとも約３アミノ酸、通常少なくとも約１０アミノ酸を含んでよく、好ましくは、Ｃ末端側に少なくとも３アミノ酸を有する。ヒトインスリン受容体の以下の配列が、適切な抗原として特に意図されている。

ヒトインスリン受容体のα−サブユニット全体：

ヒトインスリン受容体のα−サブユニットの断片：

ヒトインスリン受容体β−サブユニット全体：

ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片の断片：

ヒトインスリン受容体の抗原としての使用も意図されている。このような抗体に適した配列は、以下の通りである。

ヒトインスリン受容体のβサブユニットのＣ末端断片に対する出発ポリクローナル抗体を調製するための例示的な手順は、以下の通り説明することができる。血液試料を採取する７日間〜９日間前に、所望の抗原を、ウサギに１回〜３回静脈内注射して、ウサギの血流中のポリクローナル抗体のレベルを上昇させる。免疫化したら、抗体レベルを検査するために血液試料を取得する。一般には、可溶性抗原の免疫応答の最大レベルは、抗原を最初に注射した後４０日間〜６０日間以内に実現される。第１の免疫化サイクルが達成されたら、ウサギを３０日間のリハビリテーション期間におき、その後、更に１回〜３回静脈内注射して再免疫化を実施する。

所望の抗体を含有する抗血清を得るために、ウサギから、免疫化されたウサギの血液を採取し、５０ｍＬの遠心管に入れる。管の側面に形成された生成物である血餅を木べらで除去し、管の中心の血餅にロッドを入れる。次いで、血液を冷蔵庫に約４０℃の温度で一晩置く。次の日に、へらの上の血餅を除去し、残りの液体を１３，０００回転で１０分間遠心分離する。上清の流体が標的抗血清である。得られた抗血清は一般には黄色である。抗血清に、２０％のＮａＮ_３（重量濃度）を最終濃度が０．０２％になるまで加え、使用する前に、−２０℃の温度で凍結した状態で（又は、ＮａＮ_３なしで−７０℃の温度で）保管する。ヒトインスリン受容体のβサブユニットのＣ末端断片に対する標的抗体を抗血清から分離するためには、以下の固相吸収の連続が適している：

ウサギの抗血清１０ｍＬを０．１５ＭのＮａＣｌで２倍希釈し、その後、６．２６ｇのＮａ_２ＳＯ_４を加え、混合し、４℃で１２時間〜１６時間インキュベートする。沈渣を遠心分離によって除去し、リン酸緩衝液１０ｍＬ中に希釈し、同じ緩衝液に対して周囲温度で一晩にわたって透析する。沈渣を除去した後、溶液をリン酸緩衝液によって平衡させたＤＥＡＥ−セルロースカラムに適用する。溶出液の２８０ｎｍにおける光学濃度を測定することによって抗体画分を決定する。

単離された粗製の抗体を、アフィニティークロマトグラフィー法を使用し、得られた抗体を、クロマトグラフィー媒体の不溶性マトリックス上にあるヒトインスリン受容体のβサブユニットのＣ末端断片に付着させることによって精製し、その後濃縮した水性塩類溶液により溶出させる。

得られた緩衝溶液を、活性化増強型の抗体を調製するために用いるホメオパシー希釈プロセスの最初の溶液として使用する。ヒトインスリン受容体のβサブユニットのＣ末端断片に対する抗原精製ポリクローナルウサギ抗体の最初のマトリックス溶液の好ましい濃度は０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは、２．０ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬである。

内皮ＮＯ合成酵素に対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用して、同様の手法によって得られる。内皮ＮＯ合成酵素に対するポリクローナル抗体を得るために、免疫源（抗原）として下記配列のウシ内皮ＮＯ合成酵素の分子全体を使用することが可能である。

ＮＯ合成酵素に対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトＮＯ合成酵素の分子全体を使用して得ることができる。

内皮ＮＯ合成酵素の以下の配列は、適切な抗体として特に意図されている。

組み合わせの各成分の活性化増強型は、最初の溶液からホメオパシーポテンタイゼーションによって、好ましくは、（最初の溶液から開始する）前の溶液のそれぞれの１部を９部（１０倍希釈）、又は９９部（１００倍希釈）、又は９９９部（１，０００倍希釈）の中性の溶媒で段階希釈することによる比例的な濃度低下の方法を外部からの衝撃方法と併せて用いて調製することができる。外部からの衝撃は、各希釈物を多数回垂直方向に振とうすること（ダイナマイゼーション）を伴うことが好ましい。その後の、所要のポーテンシーレベル、又は希釈因子に至るまでの希釈のそれぞれには別々の容器を使用することが好ましい。この方法は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている。例えば、明示された目的で参照により本明細書に組み込まれるＶ．Ｓｃｈｗａｂｅ“Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ”，Ｍ．，１９６７，ｐ．１４−２９を参照されたい。

例えば、１２−１００倍希釈物（Ｃ１２と示される）を調製するために、例えば、３．０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を、中性の、水を含む又は水−アルコールを含む溶媒（好ましくは、１５％エチルアルコール）９９部中に希釈し、次いで何回も（１０回以上）垂直方向に振とうして、第１の１００倍単位希釈物（Ｃ１と示される）を創出する。第１の１００倍希釈物Ｃ１から第２の１００倍単位希釈物（Ｃ２）を調製する。この手順を１１回繰り返して第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２を調製する。したがって、第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２は、異なる容器内で、３．０ｍｇ／ｍＬの濃度のヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を中性の溶媒９９部中に１２回段階希釈することによって得られる溶液を表し、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２に相当する。関連する希釈因子を用いて同様の手順を実施して所望の希釈物Ｃ３０及びＣ２００を得る。中間希釈物を所望の生物学的モデルにおいて試験して活性を確認することができる。本発明の組み合わせを含む両方の抗体の好ましい活性化増強型は、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００希釈物の混合物である。活性な物質の種々のホメオパシー希釈物（主に１００倍単位希釈物）の混合物を生物活性のある液体成分として使用する場合、組成物（例えば、Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０、Ｃ２００）の各成分は、上記の手順に従って、最後から二番目の希釈物が得られるまで（例えば、それぞれＣ１１、Ｃ２９、及びＣ１９９まで）別々に調製し、次いで各成分１部を、混合物の組成に従って１つの容器に加え、所要量（例えば、１００倍希釈するためには９７部）の溶媒と混合する。

活性な物質を種々のホメオパシー希釈物、例えば、１０倍希釈物及び／又は１００倍希釈物（Ｄ２０、Ｃ３０、Ｃ１００又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ５０など）の混合物として使用することが可能であり、その効率は、希釈物を適切な生物学的モデル、例えば、本明細書の実施例に記載のモデルにおいて試験することによって実験的に決定される。

増強及び濃度低下の過程では、垂直方向の振とうを、超音波、電磁場への外部からの曝露又はホメオパシーの技術分野で受け入れられている任意の同様の外部からの衝撃手順と置き換えることができる。

好ましくは、本発明の医薬組成物は、液体の形態又は固体単位剤形とすることができる。医薬組成物の好ましい液体形は、好ましくはヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体及び内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体の１：１の比率での混合物である。好ましい液体担体は、水又は水−エチルアルコール混合物である。

本発明の医薬組成物の固体単位剤形は、薬学的に許容される固体担体に、主に１：１の比率で混合し、液体剤形で用いる、活性化増強型、活性成分の水溶液又は水−アルコール溶液の混合物を浸透させることによって調製することができる。あるいは、必要な希釈物のそれぞれを継続的に担体に浸透させることができる。どちらの浸透の階数も受け入れられる。

好ましくは、固体単位剤形での医薬組成物は、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体及び内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体の水希釈物又は水−アルコール希釈物を予め染み込ませた薬学的に許容される担体の顆粒剤から調製する。固体剤形は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、及びその他を含めた製薬技術分野で公知の任意の形態であってよい。不活性な医薬成分として、医薬品の製造において使用されるグルコース、スクロース、マルトース、デンプン、イソマルトース、イソマルト及び他の単糖、オリゴ糖及び多糖、並びに上記の不活性な医薬成分と、潤滑剤、崩壊剤、結合剤及び着色料を含めた他の薬学的に許容される賦形剤、例えばイソマルト、クロスポビドン、シクラミン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、無水クエン酸など）との技術的混合物を使用することができる。好ましい担体は、ラクトース及びイソマルトである。医薬剤形は、標準の製薬用賦形剤、例えば、結晶セルロース及びステアリン酸マグネシウムをさらに含んでよい。

固体経口形態を調製するために、ラクトースの１００μｍ〜３００μｍの顆粒を、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体及び内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水−アルコール溶液に、ラクトース５ｋｇ又は１０ｋｇに対して抗体溶液１ｋｇ（１：５〜１：１０）の比率で浸透させる。浸透を行うために、ラクトース顆粒を、煮沸ベッドプラント（例えば、Ｈｕｔｔｌｉｎ ＧｍｂＨの「Ｈｕｔｔｌｉｎ Ｐｉｌｏｔｌａｂ」）中の流動煮沸ベッド中で染み込ませるための注水に曝露させ、その後、４０℃未満の加熱した空気の流れによって乾燥する。活性化増強型抗体を染み込ませた乾燥顆粒（１０重量部〜３４重量部）の推定量をミキサーに入れ、２５重量部〜４５重量部の「染み込ませていない」純粋なラクトース（処理効率を低下させることなく科学技術的なプロセスの費用を縮小し、それを単純化及び加速するために使用する）と、０．１重量部〜１重量部のステアリン酸マグネシウム、及び３重量部〜１０重量部の結晶セルロースと一緒に混合する。得られた錠剤集団を均一に混合し、（例えば、Ｋｏｒｓｃｈ−ＸＬ４００打錠機において）直接乾式プレスすることによって錠剤化して、１５０ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは、３００ｍｇの丸剤を形成する。錠剤化した後、ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体の組み合わせの水−アルコール溶液（丸剤１粒当たり３．０ｍｇ〜６．０ｍｇ）を染み込ませた丸剤３００ｍｇを得る。担体に浸透させるために使用する組み合わせの各成分は、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０、又は１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００の混合物の形態である。

本発明はいかなる特定の理論にも限定されるものではないが、本明細書に記載の活性化増強型抗体は、分子型抗体を、そのような分子型に帰する生物活性を有するのに十分な量では含有しないと考えられている。本発明の組み合わせの生物活性は、添付の実施例において十分に実証されている。

本発明の医薬組成物は、任意の種類の糖尿病に罹っている患者に投与するために用いることができる。

前記医薬組成物は、高血糖の単剤療法として糖尿病の治療において使用することができ、また、インスリン代替療法に対する付加療法として；及び／又はビグアニド（メトホルミン）、スルホニル尿素（グリベンクラミド、グリピジド、グリクラジド、グリキドン、グリメピリド）、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン）、α−グルコシダーゼ阻害剤（アカルボース）等の経口血糖降下剤と共に；及び糖尿病の合併症を予防するための糖尿病の付随療法に対する付加療法として複合療法において使用することができる。

添付の実施例に示す通り、本発明の組み合わせをかかる患者に投与すると、血糖値が改善される。

実施例１
２つの実験的試験により、最初のマトリックス溶液を１００^１２倍、１００^３０倍、１００^２００倍に超希釈することによって得られる、抗原に対してアフィニティー精製した超低用量のインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体（ＵＬＤの抗ＩＲ）、最初のマトリックス溶液を１００^１２倍、１００^３０倍、１００^２００倍に高希釈（ｈｙｐｅｒ−ｄｉｌｕｔｉｏｎ）することによって得られる、抗原に対してアフィニティー精製した超低用量の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体（ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ）、及び超低用量のインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体と超低用量の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体との組み合わせ（ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ）の効果を調査した。

世界保健機関（ＷＨＯ）の基準によれば、糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型）は、血糖値の上昇（高血糖）及び耐糖能障害を特徴とする。後者は、異常なインスリン分泌及び／又は末梢組織のインスリン感受性の低下によって引き起こされ得る。体組織がグルコースを利用する能力の動的評価に基づく耐糖能試験は、体組織の耐糖能障害を評価する高感度法である。

試験１
この試験では、雄のＷｉｓｔａｒ１５０匹（試験開始時の体重２５０ｇ〜３００ｇ、３．５ヶ月齢〜４ヶ月齢）を用いた。ラット１０匹をインタクトとした。残りのラットには、ストレプトゾトシンを５０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注射した（糖尿病の実験モデル）。ストレプトゾトシンを注射した７２時間後に、血漿中グルコースレベルが１２ｍｍｏｌ／Ｌ以上のラットを選択し、それを７群に分け（それぞれラット２０匹）、２１日間にわたり、蒸留水（１日当たり１ｋｇ当たり５ｍＬ、１日１回、胃内）、ｉｎｓｕｌｉｎ（登録商標）（１日当たり１ｋｇ当たり８ユニット、皮下）、Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ（登録商標）（１日当たり１ｋｇ当たり８ｍｇ、１日２回、胃内）、ＵＬＤの抗ＩＲ（１日当たり１ｋｇ当たり５ｍＬの容積中１日当たり１ｋｇ当たり２．５ｍＬ、１日１回、胃内）、ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ（１日当たり１ｋｇ当たり５ｍＬ、１日１回、胃内）、同様に、各調製物に対応するレジメンに従って（上記の通り）、Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ（登録商標）とｉｎｓｕｌｉｎ（登録商標）を一緒に、又はＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ及びｉｎｓｕｌｉｎ（登録商標）を与えた。インタクトなラットには、同じ体積の蒸留水を与えた。ラットへの調製物の注射の７日目、１４日目及び２１日目に、空腹時の血漿中グルコースレベルを、酵素的な方法（グルコースオキシダーゼ法）を用い、「グルコースＦＫＤ」キット（Ｒｕｓｓｉａ）を利用して測定した。

試験の１４日目（調製物の投与の１４日目）に、標準の方法（Ｄｕ Ｖｉｇｎｅａｕｄ ａｎｄ Ｋａｒｒ，１９２５）に従って経口耐糖能検査（ＯＧＴＴ）を実施した。ラットに、１８時間水を与えなかった。試験の６０分前に、ラットに最後の試験物質を与えた。インタクトなラットには、同じ体積の蒸留水を与えた。グルコースを、５０％ｗ／ｗの水グルコース溶液（ラットの体重１ｋｇ当たり１ｇ）で経口投与した。０分、３０分、６０分、９０分、１２０分の時点で、尾静脈由来の血液試料の血清中グルコースを、「Ｇｌｕｃｏｓｅ ＦＫＤ」キット（ООО 「Ｐｈａｒａｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｕｓｓｉａ、ｗｗｗ．ｆｋｄ．ｒｕ）を用いることによって測定した。ある期間にわたって血糖の平均曲線下面積（ＡＵＣ）濃度を算出した。

ストレプトゾトシンを注射することにより、ラットの血漿中グルコースが、インタクトな動物と比較して相当増加した（１８ｍｍｏｌ／Ｌ対３．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐ＜０．０５）。ＵＬＤの抗ＩＲ群では、調製物の注射の７日目、１４日目及び２１日目に、グルコースレベルは、対照群におけるレベルよりも、平均で２２％〜２８％低かったが、差異は統計的に有意なレベルには達しなかった。ＵＬＤの抗ＩＲと抗ｅＮＯＳの組み合わせはより効果的であった；実験の１４日目及び２１日目におけるグルコースレベルの低下は、それぞれ４７％及び４２％であった（対照に対してｐ＜０．０５）。参照調製物であるＲｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅによっても、実験の１４日目及び２１日目までにグルコースレベルが低減した；さらに、この効果は、実験の１４日目においてのみ統計的有意性に達した（３６％、対照に対してｐ＜０．０５）。

インスリンを有効用量（予備試験において選択された）の２分の１で注射すると、全ての観察期間においてグルコースレベルが最も有効に低減した（インタクトな対照のレベルに至るまで）（図１）。この試験では短時間作用性のインスリンを使用し、それを注射した１時間後に血漿中グルコースを測定し、それも２分の１インスリン用量の血糖値に対する効果に影響を及ぼしたことを考慮するべきである。このバックグラウンドに対して、インスリンとロシグリタゾン又はインスリンとＵＬＤの抗ＩＲ＋抗ｅＮＯＳの複合物を組み合わせて使用することの効果がいかなるものかを完全に決定することは不可能である。

耐糖能障害（体によるグルコース利用の低下）は、糖尿病の診断及び治療の最も重要な指標の１つである。経口耐糖能検査（調製物の注射の１４日目）において、インタクトな動物では、複合調製物であるＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ及びインスリンにより、単独で投与した場合の耐糖能を最も有効に増大した。ロシグリタゾンでも同様に、濃度時間曲線下面積が減少した（耐糖能が増大した）が、その有効性は、対照群に対して統計的に有意ではなかった（図２）。

試験２
この試験では、雄のＧｏｔｏ−Ｋａｋｉｚａｋｉラット３６匹（試験開始時の体重２５０ｇ〜２８０ｇ、１０週齢〜１２週齢）を用いた。この系統のラットは、インスリン非依存性糖尿病の自然発症を特徴とする。動物を３群に分け（それぞれラット１２匹）、蒸留水（５ｍＬ／ｋｇ、１日１回、胃内）、又はＵＬＤの抗ＩＲ（２．５ｍＬ／ｋｇ、１日１回、胃内）、又はＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ（５ｍＬ／ｋｇ、１日１回、胃内）のいずれかを２８日間にわたって与えた。調製物を最初に注射する前、及び調製物の注射の４日目、８日目、１２日目、１６日目、２０日目、２４日目、２８日目に、グルコース分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を利用して血漿中グルコースレベルを測定した。２８日目に、耐糖能検査を行った（グルコース、経口投与、１ｇ／ｋｇ）。

ＵＬＤの抗ＩＲを注射することにより、ラットの血漿中グルコースレベルが有意に降下した（ｐ＜０．０５）が、ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳの複合物を使用することがより効果的であった（対照に対してｐ＜０．００１）（図３）。

結果を、調製物の注射の２８日目に行った耐糖能検査のデータによって確認した（図４）。ＵＬＤの抗ＩＲを注射することにより、耐糖能が増大した（対照に対するＡＵＣの統計的に有意でない４４％の降下）。同時に、ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳの複合物を注射することによって引き起こされるこのパラメータ（ＡＵＣ）の低下は、６２％であり、これは対照に対して統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。

実施例２
各々イソマルトに浸透させたホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００の水−アルコール混合物の形態である超低用量のインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体（ＵＬＤの抗ＩＲ）と超低用量の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体（ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ）との組み合わせの臨床試験をヒトにおいて実施した。

１型糖尿病（ＤＭ）患者におけるＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳの有効性及び安全性に関する非盲検非比較試験には、重篤な大血管及び微小血管の病理学的徴候を示していない低〜中程度の重篤度の１型ＤＭであると診断された患者を組み入れた。臨床試験への参加について告知に基づく患者の自発的同意を得た後、患者が組み入れ／除外基準を満たしているかどうかを確かめる目的で、最初の調査を実施した。試験開始前に２週間の「休薬期間」を設け、その間に患者の検査を実施した（愁訴、空腹時血糖、糖化ヘモグロビン、１日血糖プロファイル、及びリポタンパク質像、並びに現在の治療の有効性及び安全性について評価した）。１２週間の試験において、重要なエンドポイントは「休薬期間」の週に測定し、次いで、治療の６週目及び１２週目に測定した。４人の患者において、「休薬期間」中及び試験の最後に、ＣＧＭＳシステムを用いて血糖値を連続的にモニタリングした。連続グルコースモニタリングシステム（ＣＧＭＳ）により、３日間に亘ってグルコースレベルを制御することが可能になる。試験結果は、インスリン療法及び生活習慣に依存して、３日間に亘ってグルコースレベルがどのように変化するかを示す。このデータは、食事、薬の服用、又は身体的負荷に依存して、高血糖又は低血糖の期間を識別するのに役立つ。システムは、グラフ形式で、最低血糖値が２．２ｍｍｏｌ／Ｌ、最高血糖値が２２．２ｍｍｏｌ／Ｌであることに加えて、平均１日血糖値を示す。

代償不全段階の低〜中程度の重篤度の１型ＤＭ患者に対して、組み入れ前及び試験中に標準的なインスリン療法を行った：
１． 平均用量１２Ｕ／日〜２６Ｕ／日の長時間作用型インスリン（Ｐｒｏｔａｐｈａｎｅ（登録商標）、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））
２． 以下の平均用量の短時間作用型インスリン（Ａｐｉｄｒａ（登録商標）、Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ（登録商標）、Ａｋｔｒｏｐｉｄ（登録商標））
・朝食時 ８Ｕ／日〜１０Ｕ／日
・昼食時 ８Ｕ／日〜１２Ｕ／日
・夕食時 ８Ｕ／日〜１３Ｕ／日

患者が参加可能であることを確認した後、患者を試験に組み入れ、１型ＤＭの標準的な療法に対する付加療法として、ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ調製物を投与した。投与レジメンは、１型ＤＭの重篤度及び代償の程度に依存していた。試験に組み入れられた患者に、異なる投与量でＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ調製物による治療を行った：
１． ４人の患者−午前８時、午後１２時、午後６時、午後１０時の１日間に４回、１錠
２． ２人の患者−午前８時、午後６時の１日間に２回、１錠

３週間目及び８週間目に、１日血糖プロファイルを制御し（８点測定）、患者に電話で連絡した（電話「来診」）。毎週、臨床的評価を実施した。合計で、患者を１４週間観察した。

６人の患者を試験に組み入れ、そのうちの５人が試験プロトコールに従って試験を完了した。ベースライン時、並びに治療の３週間、６週間、及び１２週間後に８点１日グルコースプロファイルによって血糖を評価した。ベースライン時及び治療の１２週間後に、糖化ヘモグロビンのレベルを測定した。

試験に組み入れられた１型ＤＭ患者は全て、試験薬によって６週間治療した後の１日血糖が低下する傾向があることが見出された。８点１日グルコースプロファイルによれば、１型ＤＭ患者において平均２０％の血糖降下が記録された。治療の１２週間後、糖化ヘモグロビンは、ベースライン値に比べて平均１０％〜１５％低下した。

全ての患者におけるＣＧＭＳシステムを用いた連続グルコースモニタリングの結果によれば、ＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳにより３ヶ月間治療を行うと、平均１日血糖が低下し、最低血糖と最高血糖との差がベースラインの１５％〜２０％減少した。

代償不全段階の１型ＤＭ患者１０３番では、予想外に、４８％という１日血糖の著しい低下が観察された（１週目−８．０ｍｍｏｌ／Ｌ、１２週目−４．８ｍｍｏｌ／Ｌ）、これにより、インスリン療法の修正が必要になった（短時間作用型インスリンの日用量を８Ｕ／日に減少させた）。平均血糖値及び糖化ヘモグロビンの動態を図５に示す。

試験の過程において、重篤な有害事象を含む有害事象は記録されず、これによって、調製物の安全性が証明された。

実施例３
各々イソマルトに浸透させたホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００の水−アルコール混合物の形態である超低用量のインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する抗体（ＵＬＤの抗ＩＲ）と超低用量の内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体（ＵＬＤの抗ｅＮＯＳ）との組み合わせの臨床試験をヒトにおいて実施した。

２型糖尿病（ＤＭ）患者におけるＵＬＤの抗ＩＲ＋ＵＬＤの抗ｅＮＯＳの有効性及び安全性に関する非盲検非比較試験には、平均的な治療用量のＭｅｔｆｏｒｍｉｎが投与されている、重篤な大血管及び微小血管の病理学的徴候を示していない低〜中程度の重篤度の２型ＤＭであると診断された患者が組み入れられた。臨床試験への参加について告知に基づく患者の自発的同意を得た後、患者が組み入れ／除外基準を満たしているかどうかを確かめる目的で、最初の調査を実施した。試験に参加できることを確認した際、２型ＤＭの標準的な療法に加えて、１日間に４回Ｓｕｂｂｅｔｔａを１錠患者に投与した。試験開始前に２週間の「休薬期間」を設け、その間に患者の検査を実施した（愁訴、空腹時血糖、糖化ヘモグロビン、１日血糖プロファイル、及びリポタンパク質像、インスリン抵抗指数の指標（ＨＯＭＡ−ＩＲ）、並びに現在の治療の有効性及び安全性について評価した）。１２週間の試験において、重要なエンドポイントは「休薬期間」の週に測定し、次いで、治療の６週間目及び１２週間目に測定した。４人の患者において、「休薬期間」中及び試験の最後に、ＣＧＭＳシステムを用いて血糖値を連続的にモニタリングした。３週目及び８週目に、８点血糖プロファイルを更に制御し、電話「来診」を実施した。毎週、臨床的状態を確認した。合計で、患者を１４週間観察した。

代償不全段階の２型ＤＭ患者１１人を試験に組み入れた。１人の患者は、試験中に自発的に脱落した。残りの患者は、治療を続けた。２型ＤＭ患者では、８点１日プロファイルデータによれば、６週目までに血糖が平均２０％低下すると記録された。１２週目には、糖化ヘモグロビンがベースライン値の平均１５％〜１９％低下したと記録されていた。

１２週間の過程において、全ての患者で、血液検査のパラメータ（赤血球、ヘモグロビン、白血球、血小板、白血球の割合、ＥＳＲ）、リポタンパク質像、ＥＫＧ、肝機能アッセイ（ＡＬＴ、ＡＳＴ、ビリルビン、及びその割合）は、正常範囲内に留まっていた。ＨＯＭＡ−ＩＲ試験によって測定したインスリン抵抗性は、平均して、ベースライン値の１７％〜１９％低下した。

１２週間の試験過程において、重篤な有害事象を含む有害事象は記録されなかった。これによって、調製物の安全性が証明された。肝機能活性における異常もないことが明らかになった。

平均血糖値及び糖化ヘモグロビンの動態を図６に示す。

実施例４
ＩＩ型糖尿病であると診断された患者Ｘ（男性、７４歳）に、１日間に２回５ｍｇの用量のＭａｎｉｎｉｌ（グリベンクラミド、Ｂｅｒｌｉｎ−Ｃｈｅｍｉｅ）を投与した。治療を行ったにも関わらず、３年前に踵骨における深在壊死性足部潰瘍が生じた。この患者は、外科病棟に２回入院したが、治療によって著しい改善は得られなかった。水−エタノールホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の混合物としてイソマルトに浸透させた（超低用量の）インスリン受容体β−サブユニットのＣ末端に対する抗体（Ａｂ ＲＩ）及び内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体（Ａｂ ＮＯＳ）の活性化増強型（Ａｂ ＲＩ＋Ａｂ ＮＯＳ）を含む請求する医薬組成物（２５０ｍｇの錠剤）をＭａｎｉｎｉｌ療法に付加した。１ヶ月間治療した結果、Ｍａｎｉｎｉｌ（登録商標）の用量を１日間に５ｍｇ（就寝前に１錠）に減らすことができた。血糖値は、正常値まで低下した（８ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｍｏｌ／Ｌから５ｍｍｏｌ／Ｌ〜６ｍｍｏｌ／Ｌに）。所与の療法により、足部潰瘍の発現が以前の状態に戻った。壊死性の塊の潰瘍がきれいになり、表皮化していた。潰瘍のあった箇所を検査したところ、踵骨に皮膚の剥がれた丸い白色の領域（直径３．５ｃｍ）が存在していた。

Claims (39)

1. ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含むことを特徴とする医薬組成物。
2. ａ）ヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含むことを特徴とする医薬組成物。
3. ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体と、ｂ）内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含む医薬組成物であって、前記インスリン受容体の分子が、１つのα−サブユニットと１つのβ−サブユニットとからなることを特徴とする医薬組成物。
4. 薬学的に許容される固体担体と、ａ）前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態であるヒトインスリン受容体β−サブユニットのＣ末端断片に対する活性化増強型抗体と、ｂ）前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体とを含むことを特徴とする医薬組成物。
5. ヒトインスリン受容体に対する抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然抗体である請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物。
6. ヒトインスリン受容体に対する抗体が、ポリクローナル抗体である請求項５に記載の医薬組成物。
7. ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体が、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される請求項６に記載の医薬組成物。
8. 内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然抗体である請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物。
9. 内皮ＮＯ合成酵素に対する抗体が、ポリクローナル抗体である請求項８に記載の医薬組成物。
10. 内皮ＮＯ合成酵素に対する活性化増強型抗体が、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される請求項９に記載の医薬組成物。
11. ヒトインスリン受容体が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４からなる群より選択される配列からなる請求項１に記載の医薬組成物。
12. 内皮ＮＯ合成酵素が、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２に提供される配列からなる請求項１に記載の医薬組成物。
13. ヒト患者におけるＩ型糖尿病を治療する方法であって、請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含むことを特徴とする方法。
14. 医薬組成物が、投与１回当たり１つの固体剤形で患者に投与される請求項１３に記載の方法。
15. 剤形が、錠剤である請求項１３に記載の方法。
16. 錠剤が、直接圧縮により得られる請求項１５に記載の方法。
17. 錠剤が、１日間に１回〜１日間に４回投与される請求項１５に記載の方法。
18. 錠剤が、１日間に２回投与される請求項１５に記載の方法。
19. 錠剤が、１日間に４回投与される請求項１５に記載の方法。
20. ヒト患者におけるＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含むことを特徴とする方法。
21. 医薬組成物が、投与１回当たり１つの固体剤形で患者に投与される請求項２０に記載の方法。
22. 剤形が、錠剤である請求項２１に記載の方法。
23. 錠剤が、直接圧縮により得られる請求項２２に記載の方法。
24. 錠剤が、１日間に１回〜１日間に４回投与される請求項２２に記載の方法。
25. 錠剤が、１日間に４回投与される請求項１５に記載の方法。
26. 哺乳類の血糖値を低下させる方法であって、請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物を前記哺乳類に投与することを含む方法。
27. 哺乳類が、ヒトである請求項２６に記載の方法。
28. 医薬組成物が、１単位又は２単位の剤形として患者に投与される請求項２７に記載の方法。
29. 剤形が、１日間に１回〜１日間に４回投与される請求項２８に記載の方法。
30. 剤形が、１日間に３回投与される請求項２９に記載の方法。
31. インスリン抵抗性を治療する方法であって、請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物を哺乳類に投与することを含む方法。
32. 哺乳類が、ヒトである請求項３１に記載の方法。
33. 医薬組成物が、１単位又は２単位の剤形として患者に投与される請求項３２に記載の方法。
34. 剤形が、１日間に１回〜１日間に４回投与される請求項３３に記載の方法。
35. 剤形が、１日間に３回投与される請求項３４に記載の方法。
36. インスリン又はＩ型糖尿病の治療に適した他の追加の医薬を投与することを更に含む請求項１３に記載の方法。
37. ＩＩ型糖尿病の治療に適した追加の医薬を投与することを更に含む請求項２０に記載の方法。
38. 糖尿病又は他の代謝障害に罹っている患者の治療に使用するための医薬組成物であって、ホメオパシーの技術に従って、連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回振とうすることによってそれぞれ調製される、ａ）ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体及びｂ）内皮ＮＯ合成酵素対する活性化増強型抗体を提供し；次いで、増強溶液を混合するか、或いは、担体塊に組み合わせた前記溶液を浸透させる又は別々に前記溶液を浸透させることにより組み合わせることによって得られることを特徴とする医薬組成物。
39. ヒトインスリン受容体に対する活性化増強型抗体が、ヒトインスリン受容体のＣ末端断片に対する活性化増強型抗体である請求項３８に記載の医薬組成物。