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FR3133132A1 - Procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania huxleyi essentiellement sans coccolithes, extrait ainsi obtenu, composition comprenant cet extrait, et utilisations associées. - Google Patents

Procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania huxleyi essentiellement sans coccolithes, extrait ainsi obtenu, composition comprenant cet extrait, et utilisations associées. Download PDF

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FR3133132A1
FR3133132A1 FR2201873A FR2201873A FR3133132A1 FR 3133132 A1 FR3133132 A1 FR 3133132A1 FR 2201873 A FR2201873 A FR 2201873A FR 2201873 A FR2201873 A FR 2201873A FR 3133132 A1 FR3133132 A1 FR 3133132A1
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FR
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extract
emiliania huxleyi
skin
proteins
emiliania
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Antoine Gedouin
Romuald Vallee
Pierre-Yves Morvan
Eric GASPAROTTO
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Societe de Courtage et de Diffusion SAS CODIF International
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Abstract

L’invention concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania luxleyi essentiellement sans les coccolithes habituellement produits par cette microalgue. L’invention concerne également un tel extrait d’Emiliania huxleyi obtenu par ce procédé. L’invention concerne encore les compositions comprenant cet extrait. L’invention concerne également les utilisations cosmétiques d’un tel extrait ou de telles compositions pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants venant de l’environnement extérieur, et/ou préparer la peau à maintenir son homéostasie.

Description

Procédé de production d’un extrait de la microalgueEmilianiahuxleyiessentiellement sans coccolithes, extrait ainsi obtenu, composition comprenant cet extrait, et utilisations associées.
Le domaine de l’invention est celui de la cosmétologie. Plus précisément, l’invention concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyi(récemment renomméeGephyrocapsa huxleyi), essentiellement sans les coccolithes habituellement produits par cette microalgue, un tel extrait d’Emiliania huxleyiobtenu par ce procédé, les compositions comprenant cet extrait, ainsi que les utilisations cosmétiques d’un tel extrait ou de telles compositions pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants venant de l’environnement extérieur, et/ou pour préparer la peau à maintenir son homéostasie.
Un tel extrait permet notamment de stimuler l’expression de gènes ayant un impact sur la préparation de la peau à réagir face aux agressions de l’environnement extérieur.
Art Antérieur
L’âge et les expositions chroniques aux stress extérieurs, notamment les stress environnementaux comprenant les radiations ultraviolettes (UV) ou encore des composés oxydants, tels que les dérivés réactifs de l’oxygène («reactive oxygen species », ROS), peuvent engendrer des effets délétères sur la peau. De tels effets peuvent s’illustrer par l’altération de certaines protéines, ou encore par la dégradation d’éléments de la matrice extracellulaire (MEC), par exemple le collagène ou l’élastine.
Il est connu des solutions cosmétiques pour lutter contre ces effets délétères, comme par exemple des compositions comprenant des actifs anti-âge.
Il est également connu d’utiliser des composés biominéraux, comme par exemple des coccolithes secrétées par des algues, ou des compositions les comprenant, en particulier pour protéger la peau contre les rayonnements UV tout en atténuant les aspects inesthétiques de la peau, tels que les cernes ou les rides.
Les coccolithes sont formés de calcite (CaCO3) et d'une matrice polysaccharidique, et synthétisés par des coccolithophoridés.
Les coccolithophoridés sont des microalgues unicellulaires marines se caractérisant par la présence à leur surface extérieure d'un assemblage de plaquettes calcaires les protégeant, que sont ces coccolithes.
Un objectif de la présente invention est donc de proposer des compositions cosmétiques comprenant des principes actifs destinés à préparer la peau pour mieux réagir aux agressions de l’environnement.
Il existe par ailleurs un besoin fort et constant pour des compositions cosmétiques efficaces comprenant des actifs naturels en lieu et place de composés chimiques de synthèse.
Cet objectif est atteint grâce à l’invention, qui concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyiessentiellement sans coccolithes.
Les inventeurs ont démontré de manière surprenante que l’utilisation d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyin’ayant pas produit, ou très peu, de coccolithes, permet d’obtenir des effets intéressants sur la protection de la peau et sur le maintien de son hydratation. Une telle utilisation permet notamment de préparer la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement, en stimulant les systèmes de détoxification des cellules de la peau ainsi que les défenses des cellules de la peau. L’application topique de cette microalgueEmiliania huxleyiparticulière permet donc de protéger la peau vis-à-vis des éléments extérieurs agressifs, ce qui permet de contrer les effets oxydants venant de l’extérieur, tels que les rayonnements ultraviolets, la pollution ou encore les métaux lourds.
La microalgueEmiliania huxleyi, de son nouveau nomGephyrocapsa huxleyi, est connue pour avoir un impact très important sur le climat. Elle est considérée comme étant responsable de l’homéostasie de la Terre.
Emiliania huxleyiprésente un rôle très important dans le cycle du carbone. Elle capte notamment du dioxyde de carbone (CO2). Sa faculté à produire de l’oxygène en fait un élément présentant également un rôle très important dans l’oxygénation de l’atmosphère, la formation de la couche d’ozone, et donc la vie sur Terre.
Emiliania huxleyiproduit également du diméthylsulphoniopropionate (DMSP), qui est actif dans la régulation thermique en réfléchissant les radiations du soleil : il contribue donc à réduire les effets de serre. Le DMSP produit parEmiliania huxleyise transforme en diméthylsulfure (DMS), un gaz organosulfuré connu pour avoir un impact important sur le climat, et être impliqué dans la formation des nuages. Ce composé est antioxydant et possède une structure proche des glycine-bétaïnes produites par les plantes supérieures.Emiliania huxleyipeut faire la conversion du DMSP en DMS, tout comme les bactéries marines peuvent également le faire grâce à une DMSP-lyase. Lors de la dégradation du DMSP en DMS,Emiliania huxleyirelargue aussi des acrylates qui sont antimicrobiens.
Emiliania huxleyicapte également du calcium et produit de la calcite, via la production de coccolithes.Emiliania huxleyis’adapte à son environnement, car la taille des cellules et des coccolithes est augmentée quand le taux de CO2augmente.
Emiliania huxleyis’adapte également très bien au changement de son environnement grâce à une très forte flexibilité génétique. Elle capte le sélénium de l’eau de mer et produit des sélénoprotéines qui se rapprochent dans leur structure et leur fonction des protéines antioxydantes des cellules de la peau, notamment de la thiorédoxine réductase 1 (TR1).
Ainsi, l’invention repose sur une approche originale ayant consisté à étudier l’effet de l’application topique d’extraits d’Emiliania huxleyine comprenant essentiellement pas de coccolithes sur l’expression de gènes impliqués dans la lutte contre les effets oxydants/les stress oxydants de l’environnement/de l’extérieur.
Ainsi, un premier objet concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyicomprenant :
-une étape de culture d’Emiliania huxleyien photobioréacteur, mettant en œuvre un milieu de culture comprenant de l’eau de mer, un ou plusieurs microéléments, tel que du sélénium, et préférentiellement entre 10 et 100 µM (micromoles.L-1) de phosphate, plus préférentiellement de 20 à 60 µM de phosphate. Cette étape permet la culture d’Emiliania huxleyiessentiellement sans production de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyipossèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites.
Les étapes suivantes de ce procédé sont :
-une étape de récolte de la culture ;
-une étape de congélation de la culture ;
-une étape de décongélation de la culture congelée et d’ajout de propane-1,3-diol ; et
-au moins une étape de filtration.
Ainsi, il a été démontré que l’absence, ou la quasi-absence, de coccolithes dans l’extrait obtenu d’Emiliania huxleyijoue un rôle majeur dans la préparation de la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement extérieur. De plus, ce procédé est simple à mettre en œuvre et peu coûteux.
Selon un mode de réalisation avantageux, ladite au moins une étape de filtration finale de ce procédé comprend :
-une étape de filtration tangentielle à travers un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
-une étape de filtration stérilisante.
Ainsi, l’extrait obtenu par cette méthode est apte à être utilisé en formulation cosmétique.
Un deuxième objet de l’invention consiste dans un extrait de la microalgueEmiliania huxleyiobtenu par le procédé précédemment décrit, cet extrait ne comprenant essentiellement et pratiquement pas de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyipossèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites.
Selon un aspect de l’invention, cet extrait stimule l’expression de gènes codant pour des protéines du protéosome, et/ou des métallothionéines, et/ou des protéines de stress («Heat Shock Proteins »), et/ou des protéines de la matrice extracellulaire, et/ou la production des protéines HSP et de l’ubiquitine.
La stimulation de ces gènes et l’augmentation de la production de ces protéines présentent un impact positif sur les défenses antioxydantes de la peau, afin notamment de mieux préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress et à maintenir son homéostasie.
Un troisième objet concerne une composition cosmétique pour application topique comprenant un extrait de la microalgueEmiliania huxleyitel que précédemment décrit, ainsi qu’un milieu physiologiquement acceptable.
Selon un mode de réalisation, cette composition selon l’invention comprend entre 0,01% et 10% en poids d’extrait d’Emiliania huxleyi, par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids, par rapport au poids total de la composition.
A ces concentrations d’extrait dans les compositions cosmétiques, une formulation cosmétique adéquate peut être réalisée, permettant la génération des effets cosmétiques recherchés sur la peau, sans effets secondaires.
Un quatrième objet concerne l’utilisation d’un extrait d’Emiliania huxleyitel que précédemment décrit en tant qu’ingrédient actif cosmétique.
Un cinquième objet concerne l’utilisation d’une composition selon l’invention telle que précédemment introduite en tant que composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau saine.
Selon un mode de réalisation, cette composition est utilisée en particulier pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants extérieurs, et/ou pour préparer la peau à maintenir son homéostasie.
Brève description des figures
est un histogramme représentant la quantité de protéines carbonylées, illustrant le stress oxydant, sur des zones de la peau ayant subi une exposition aux rayons UV, en comparaison avec des zones de la peau n’ayant pas subi une telle exposition.
est un histogramme illustrant la valeur de l’index de protection antioxydant lors de l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, en comparaison avec l’application d’un placébo.
est un graphe montrant l’évolution de la perte en eau transépidermique dans le temps en g/m2/h, dans le cas de l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, en comparaison avec l’application d’un placébo.
est un histogramme représentant les variations de la perte en eau transépidermique dans le temps en pourcentage, dans le cas de l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, dans le cas de l’application d’un placébo et dans le cas comparatif extrait selon l’invention/placébo.
Description détaillée de l’invention
Procédé de production d’un extrait d’ Emiliania huxleyi selon l’invention
Selon un premier aspect de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyiest produit selon le procédé général suivant :
-une première étape de culture d’Emiliania huxleyiest mise en œuvre dans un photobioréacteur, en présence d’eau de mer, d’au moins un microélément, tel que le sélénium, et préférentiellement d’une teneur en phosphate comprise entre 10 et 100 µM, plus préférentiellement entre 20 à 60 µM ;
-il s’ensuit une étape de récolte de la culture ;
-la culture récoltée est congelée ;
-une étape suivante consiste à décongeler ce milieu congelé et à y ajouter du propane-1,3-diol ; et
-une étape finale de filtration est mise en œuvre, permettant l’obtention d’un extrait d’Emiliania huxleyine comprenant pas, ou à tout le moins très peu, de coccolithes.
L’étape de culture d’Emiliania huxleyiest réalisée en photobioréacteur présentant une capacité de 30 L à 750 L, avec de l’eau de mer, éclairé par lumière artificielle.
La microalgueEmiliania huxleyiest utilisée entière, sous forme de cellules individuelles.
Un ajout de sélénium dans le milieu de culture en faible quantité, de 1 à 100 nM (nanomoles.L-1), plus préférentiellement de 2 à 10 nM, est nécessaire à la production deEmiliania huxleyi, cette microalgue étant séléno-dépendante pour sa croissance. En effet, le sélénium capté parEmiliania huxleyis’incorpore ensuite à des sélénoprotéines qui sont indispensables au fonctionnement des cellules, leur permettant de se multiplier rapidement.
En amont, le photobioréacteur est stérilisé chimiquement à l’aide d’hypochlorite de sodium NaClO, et neutralisé avec une solution de sulfite de sodium Na2SO3.
Le taux d’inoculation est d’environ 4%.
Une pré-culture est réalisée de façon préliminaire, dans une bonbonne de 10 L, dans les mêmes conditions de milieu que celles appliquées à l’étape de culture de la microalgue.
Au cours de la culture, les paramètres suivis sont la densité optique, en particulier à 750 nm, le dénombrement cellulaire, à l’aide d’une lame de Malassez (permettant de compter le nombre de cellules en suspension dans une solution), et le pH.
La culture dure entre 10 à 15 jours. Elle est récoltée lorsque le nombre de cellules est supérieur à 2x106cellules.mL-1. Cette concentration permet en effet de s’assurer de la présence d’une quantité minimale de cellules permettant la production de l’extrait d’Emiliania huxleyi. A titre d’illustration, les inventeurs ont réussi à obtenir en trois semaines 4 milliards de cellules par litre de culture.
La particularité de ce procédé de production d’Emiliania huxleyiest que les conditions de culture utilisées ne favorisent pas la production des coccolithes d’Emiliania huxleyi, contrairement aux procédés existants de production d’extraits de coccolithophoridés, et notamment à visée cosmétique. En particulier, dans le procédé selon l’invention, la souche de microalgue utilisée perd sa capacité à produire des coccolithes, à force notamment de repiquage dans le milieu de culture mis en œuvre, qui est légèrement plus riche en phosphate que les milieux habituellement utilisés pour favoriser la production de coccolithes d’algues. Ainsi, ce procédé selon l’invention permet de limiter drastiquement la production de coccolithes, de façon que, par exemple, seulement quelques pourcents, avantageusement moins de 1%, en encore plus avantageusement moins de 0,1%, des cellules d’Emiliania huxleyiproduites produise des coccolithes.
L’extrait final obtenu est un extrait hydro-glycolique, comprenant également de l’eau de mer et du propanediol.
Extrait d’Emiliania huxleyi selon l’invention
Selon un deuxième aspect de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyin’ayant pas, ou à tout le moins très peu, produit de coccolithes est obtenu.
Il a été démontré par les inventeurs qu’un tel extrait d’Emiliania huxleyisans coccolithes, ou en possédant très peu, stimule l’expression de gènes codant pour des protéines de stress («Heat Shock Proteins », HSP).
Quand les premières HSP ont été découvertes, elles ont tout d’abord été mises en évidence quand les cellules étaient exposées à un stress thermique (Ritossa, 1962). Il est désormais connu que les HSP sont de différentes tailles et qu’elles jouent des rôles divers dans les cellules, dans la réparation des protéines endommagées, dans l’aide à la synthèse de nouvelles protéines et dans l’assemblage des protéines récemment produites. Elles permettent la survie cellulaire lors de divers types de stress.
La principale fonction des HSP est de permettre aux protéines néoformées ou non correctement formées d’acquérir une forme correcte dans laquelle elles seront fonctionnelles. En l’absence de ce changement de conformation, les protéines peuvent être inactives et non fonctionnelles.
Les inventeurs ont également démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des protéines du protéasome.
Le protéasome permet de détoxifier les cellules en éliminant les protéines altérées qui s’accumulent avec l’âge.
Il a encore été démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des métallothionéines (MT).
Les métallothionéines permettent également de détoxifier les cellules, contre les métaux lourds.
Il a enfin été démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire.
Composition selon l’invention
Un troisième objet de l’invention concerne une composition cosmétique comprenant un extrait de microalgueEmiliania huxleyiselon l’invention, ne comprenant donc pas, ou très peu, de coccolithes de cette microalgue. Une telle composition comprend en outre un milieu physiologiquement acceptable.
On entend par milieu physiologiquement acceptable tout milieu convenant à un usage cosmétique, en particulier pour une application sur la peau. Par exemple, un milieu physiologiquement acceptable pourra être choisi parmi ou comprendre de l’eau ou un solvant organique hydrosoluble, des agents de texture, notamment un agent gélifiant, des parfums, des conservateurs, des colorants, des huiles essentielles de végétaux, des extraits végétaux ou des mélanges de ceux-ci. Une eau convenant à l'invention peut être une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche-Posay. Un agent gélifiant convenant à l’invention peut être choisi parmi la pectine, la gomme de guar, la cellulose, la dextrine, la maltodextrine, l'amidon, la gomme de Tara, la gomme de Caroube, l'inuline, la gomme d'acacia, la gomme arabique, les polymères riches en fucose, les carraghénanes, la gomme de Konjac, la gomme de xanthane, le dextrane, le chitosane, la gomme Adragante, la gomme de Ghatti, la gomme de Karaya, la gomme de tamarin, l'agar-agar, l'alginate, la gomme de Gellane et leurs mélanges.
Ces additifs sont bien connus pour leur utilisation dans les compositions cosmétiques, et permettent d’améliorer les caractéristiques organoleptiques de la composition et la qualité de l’expérience de l’utilisateur de la composition.
Les compositions selon l’invention peuvent également comprendre un ou plusieurs autres principes actifs, tant que ceux-ci sont compatibles avec l’extrait d’Emiliania huxleyitel que décrit ci-dessus. Ces principes actifs peuvent notamment être choisis pour leur activité hydratante, pigmentante, dépigmentante, apaisante, oxygénante, régénérante, anti-âge, anti-rides, anti-rougeurs et leurs combinaisons.
Une composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau. Elle peut alors prendre la forme d’une solution aqueuse ou huileuse, d’une lotion, d’un sérum, d'une émulsion, d’un lait, d’une crème, d’un gel, d’une pommade, d’un beurre, d’une émulsion huile-dans-eau, d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion triple, de microcapsules ou de microparticules. Ces compositions peuvent être préparées selon les méthodes connues de l’art.
Ces formulations et textures sont simples à produire, et sont compatibles avec une application sur la peau. Elles seront choisies en fonction de l’application souhaitée et du type de peaux. Par exemple, il est plus intéressant de formuler un lait plutôt qu’une crème pour une application sur le corps entier, tandis qu’un beurre se révèle être mieux adapté pour une application sur peaux sèches.
L’extrait d’Emiliania huxleyipeut également être incorporé dans des démaquillants deux-en-un ou trois-en-un, pour un nettoyage en profondeur et pour préparer la peau à mieux lutter contre les effets du stress. Cet extrait peut aussi être utilisé en complément d’actifs anti-pollution de surface dans de telles compositions cosmétiques.
Préférentiellement, l’extrait d’Emiliania huxleyide l’invention est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,01 et 10% en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,1 et 1% en poids, par rapport au poids total de la composition.
Il a été démontré qu’à ces concentrations, une composition cosmétique comprenant un tel extrait d’Emiliania huxleyiet appliquée sur la peau stimule de façon efficace et satisfaisante l’expression de gènes codant pour des HSP, et/ou des protéines du protéosome, et/ou des métallothionéines, et/ou des protéines de la matrice extracellulaire. Ces protéines sont impliquées dans la détoxification cellulaire et la protection de la peau au regard des éléments extérieurs agressifs.
Utilisation de l’extrait d’ Emiliania huxleyi et/ou d’une composition le comprenant, selon l’invention
Selon des quatrième et cinquième aspects de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyiet/ou des compositions le comprenant est/sont utilisé(es) de façon topique pour préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress oxydant, et/ou à maintenir son homéostasie.
De telles compositions selon l’invention peuvent être utilisées sur le visage ou le corps.
L’utilisation de la composition selon l’invention pourra être quotidienne ou biquotidienne. Elle pourra être moins fréquente, comme par exemple une fois par semaine, deux fois par semaine, trois fois par semaine, quatre fois par semaine, cinq fois par semaine ou six fois par semaine.
Ainsi, la fréquence d’utilisation de la composition selon l’invention pourra être adaptée en fonction de l’amélioration de la préparation de la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement.
L’invention sera maintenant illustrée par les exemples non limitatifs suivants.
Exemples
Exemple 1 : Obtention de l’extrait d’ Emiliania huxleyi selon l’invention
Cet exemple illustre l’obtention d’un extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, selon un procédé mis en œuvre selon les étapes suivantes :
-une première étape de culture d’Emiliania huxleyia été mise en œuvre dans un photobioréacteur, comprenant entre autres de l’eau de mer, une teneur comprise entre 1 à 100 nM de sélénium, et une teneur comprise entre 10 et 100 µM de phosphate, et étant éclairé par une lumière artificielle.
La particularité de cette étape de culture est basée sur le fait qu’elle permet la culture d’Emiliania huxleyiessentiellement sans production de coccolithes de microalgue, c’est-à-dire que moins de 1% des cellules d’Emiliania huxleyiprésentent un coccolithe, et plus préférentiellement moins de 0,1% ;
-une étape de récolte de cette culture a ensuite été effectuée, notamment lorsque le nombre de cellules d’Emiliania huxleyiproduites a été supérieur à 2x106cellules.mL-1;
-dans une étape suivante, la culture récoltée a été congelée ;
-ensuite, la culture congelée a subi une étape de décongélation, et du propane-1,3-diol a été ajouté au milieu ;
-une étape de filtration tangentielle a ensuite été mise en œuvre, via un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
-le milieu a subi une dernière étape de filtration stérilisante.
La mise en œuvre de l’ensemble des étapes de ce procédé a donc permis d’obtenir un extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, ne comprenant essentiellement pas de coccolithes de cette microalgue.
Exemple 2 : Effets de l’extrait d’ Emiliania huxleyi obtenu sur l’expression de gènes impliqués dans la préparation et la protection de la peau contre le stress environnemental - expérimentation in vitro
L’exemple 2 démontre les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1 sur la protection de la peau vis-à-vis du stress oxydant environnemental.
Une première expérimentation in vitro a été conduite afin de mesurer les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur l’expression de gènes codant pour des protéines de stress, pour des protéines du protéasome, pour des métallothionéines et pour des protéines de la matrice extracellulaire.
Conditions des tests
L’extrait d’Emiliania huxleyiproduit a été testé à 0,1% en poids dans le milieu de culture des cellules. Il a été mis en contact pendant 24 heures avec des fibroblastes normaux du derme humain (FNDH), isolés à partir d’un fragment de peau humaine, et utilisés après soit un faible nombre de repiquages (simulation de fibroblastes jeunes), soit après un nombre élevé de repiquages (simulation de fibroblastes âgés). Un test comparatif a été effectué avec des cellules non traitées.
Après 24 heures, l’ARNm des cellules ayant été mises en contact avec l’extrait et celui des cellules n’ayant pas subi un tel contact ont été extraits, et une analyse comparative a été effectuée dans le but de mettre en évidence les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyisur les expressions de gènes codant pour des protéines de stress, pour des protéines du protéasome, pour des métallothionéines et pour des protéines de la matrice extracellulaire.
Expression de gènes codant pour des protéines de stress (HSP)
L’analyse de l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu a démontré que l’expression des gènes suivants, codant pour des HSP, molécules chaperonnes, a été augmentée :
- le gène HFS4, codant pour un facteur de transcription qui stimule l’expressions des HSP. Ce gène est donc un régulateur de l’expression des HSP.
- le gène HSPA5, codant pour des sous-unités de la protéine HSP70. Cette protéine chaperonne est connue pour son rôle de protection contre les changements de température, permettant ainsi la thermo tolérance des cellules exposées à un stress température. C’est aussi une chaperonne importante lors du transport des protéines dans les mitochondries, qui est donc impliquée dans la fonction mitochondriale. La protéine HSP70 se lie à de nombreuses protéines et permet leur bonne conformation, augmente la survie cellulaire vis-à-vis d’un stress (Nonaka et al, Inhibitory effect of heat shock protein 70 on apoptosis induced by photodynamic therapy in vitro. Photochem Photobiol, 2004, 79(1):94-98), et aide à décider si une protéine altérée sera sélectionnée pour être réparée ou envoyée vers le système de recyclage qu’est le protéasome (Wagstaff et al, 2007).
- les 7 gènes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, DNAJC24, DNAJC16, et DNAJB9, codant pour des sous-unités des HSP, qui tendent à diminuer avec l’âge des fibroblastes.
- les 3 gènes DNAJC24, DNAJB9, DNAJC16, codants pour des sous-unités de la protéine HSP40. La protéine HSP40 est une chaperonne connue pour se fixer aux protéines HSP70 et leur conférer une spécificité d’action et de localisation (Fan et al., Mechanisms for regulation of Hsp70 function by Hsp40, Cell Stress Chaperones. 2003 Oct ; 8(4): 309–316). HSP40 est donc un régulateur de HSP70.
-les 4 gènes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, codant pour des sous-unités des petites HSP (HSP20, HSP22 et HSP27). Notamment, la protéine HSP27 est une molécule chaperonne ayant une fonction dans la survie cellulaire. HSP27 possède également un rôle important dans l’architecture et la réparation des tissus nouvellement formés, ce qui se traduit par un effet tenseur et un effet raffermissant (Hirano et al, HSP27 regulates fibroblast adhesion, motility, and matrix contraction.Cell Stress Chaperones. 2004;9(1):29-37). HSP27 est phosphorylée en présence d’une forte teneur en TGF-beta, ce qui stimule la production de collagène de type 1. HSP27 permet une meilleure adhésion des fibroblastes aux fibres de collagène. De plus, HSP27 possède une activité chaperon intrinsèque, et stimule la dégradation par le protéasome 26S des protéines altérées et marquées par l’ubiquitine, et permet ainsi de limiter l’accumulation de ces protéines altérées dans la peau, et notamment la lipofuscine (Arrigo AP, Heat Shock Proteins as molecular chaperones. Med Sci (Paris) 2005 ; 21 : 619–625).
Dès lors, en stimulant des sous-unités des HSP impliquées en particulier dans la formation des HSP27, HSP40 et HSP70, l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu n’ayant pas, ou très peu, formé de coccolithes est apte à favoriser la réponse aux stress environnementaux, la réparation des protéines ou leur dégradation par le système du protéasome, et à avoir un effet sur la matrice de collagène, notamment sur sa synthèse, sa structure et sa contraction.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 1 ci-après.
Gène Variation de l’expression du gène (en %) avec application de l’extrait d’Emiliania huxleyià 0,1%
HFS4 +46
HSPA5 +27
DNAJC24 +21
DNAJC16 +38
DNAJB9 +25
HSPB6 +22
HSPB1 +33
HSPB8 +24
HSPB3 +31
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes des HSP (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).
Expression de gènes codant pour des protéines du protéasome
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que l’expression des 8 gènes PSMA3, PSMA4, PSMA6, PSMB8, PSMB9, PSMB10, PSME1 et PSME2, codant pour des sous-unités du protéasome ou pour des activateurs du protéasome, a été augmentée, aussi bien dans les fibroblastes jeunes qu’âgés.
La stimulation de ces gènes démontre donc la capacité de l’extrait selon l’invention à éliminer les protéines altérées.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 2 ci-après.
Gène Variation de l’expression du gène (en %) avec application de l’extrait d’Emiliania huxleyià 0,1%
PSMA3 +22
PSMA4 +33
PSMA6 +37
PSMB8 +175
PSMB9 +392
PSMB10 +147
PSME1 +131
PSME2 +265
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes du protéasome (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).
Expression de gènes codant pour des métallothionéines (MT)
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que l’expression de 8 gènes (MTF1, MT1A, MT1B, MT1E, MT1F, MT1M, MT1X, MT2A) a été augmentée dans les fibroblastes jeunes. Ces gènes codent pour différentes MT.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 3 ci-après.
Gène Variation de l’expression du gène (en %) avec application de l’extrait d’Emiliania huxleyià 0,1%
MTF1 +39
MT1A +175
MT1B +268
MT1E +89
MT1F +157
MT1M +144
MT1X +208
MT2A +287
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes des métallothionéines (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).
L’extrait obtenu stimule également l’expression de gènes codant pour des sélénoprotéines, notamment le gène DIO2, qui baisse avec l’âge ; le gène GPX6 codant pour la glutathion peroxidase GPx-6 ; le gène SELENOM codant pour la sélénoprotéine M et le gène TXN codant pour la thiorédoxine 1 (+24%).
Enfin, l’extrait stimule l’expression du gène SOD2 codant pour la SuperOxyde Dismutase de type 2 (SOD mitochondriale et manganèse dépendante) sur des fibroblastes âgés (+546%).
La stimulation de ces gènes démontre également la capacité de l’extrait selon l’invention à détoxifier les cellules contre les métaux lourds.
Expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire (MEC)
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que cet extrait a un effet sur les protéines impliquées dans les interactions des cellules avec la matrice extracellulaire.
Il augmente notamment l’expression des 4 gènes ITGA3, ITGA5, FN1 et COL8A1, impliqués dans les interactions des cellules du derme avec la MEC. Il s’agit de récepteurs ou de protéines de la matrice qui diminuent avec l’âge des cellules. Leur augmentation dans les cellules âgées est donc intéressante.
De plus, il diminue de 22% l’expression du gène MMP3, codant pour la métalloprotéinase (MMP) de type 3, impliquée dans la dégradation des collagènes dans les fibroblastes âgés. Il est notamment intéressant de diminuer cette protéine car l’expression de MMP3 augmente avec l’âge des cellules (x2,2).
La stimulation de ces gènes démontre également l’action de l’application de l’extrait selon l’invention au niveau de la MEC.
Ainsi, en stimulant les défenses anti-oxydantes, par la stimulation des HSP et des MT, et en favorisant l‘élimination des protéines altérées par l’activation du protéasome, l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu selon l’invention permet de préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress et à maintenir son homéostasie.
Une seconde expérimentation in vitro a également été conduite sur des fibroblastes du derme humain, afin d’évaluer l’effet de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur la stimulation de gènes codant pour des HSP au niveau des protéines, et codant également pour l’ubiquitine.
Conditions de tests
Les cellules utilisées dans cette expérimentation étaient des fibroblastes normaux de derme humain (FNDH) d’un donneur de 51 ans, utilisées au 7ème passage. Les cellules ont été ensemencées à 1,1.106cellules en monocouche dans des flasques de culture de 75 cm² pendant 7 jours dans un milieu de culture approprié (Zen Bio). Au 7èmejour et à 80% de confluence, les cellules ont été traitées, ou non (témoin), avec l’extrait d’Emiliania huxleyià 1% (v/v) dans le milieu de culture, en trois exemplaires, pendant 24 heures. Après 24 heures, les cellules ont été traitées à la trypsine pour les détacher, puis lysées avec 350 µL d’un tampon fourni par le fournisseur du kitHuman Heat Shock Protein Antibody Array, dans lequel un cocktail d’inhibiteurs de protéases a été ajouté. La teneur totale en protéines a été mesurée avec un kit BCA assay (Pierce). Les HSP et l’ubiquitine ont été mesurées dans le lysat cellulaire avec le kit RayBio®Heat Shock Protein Antibody Array. Chaque membrane du kit a été imprimée avec des anticorps capables de reconnaître de façon spécifique 9 HSP différentes. Les lysats cellulaires des cellules traitées et des cellules non traitées avec l’extrait d’Emiliania huxleyià 1% (v/v) ont été déposés sur chaque membrane. Après un lavage intensif, les membranes ont été incubées avec un cocktail d’anticorps anti-HSP préalablement marqués à la biotine. Après une incubation avec un complexe Steptavidin-HRP, le signal a été visualisé par chimioluminescence. Cette analyse avait pour but d’évaluer les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur la stimulation de l’expression de gènes codant pour des HSP au niveau des protéines, et codant également pour l’ubiquitine.
L’analyse de l’application systémique (dans le milieu de culture) de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention à 1% (v/v) a ainsi permis de démontrer une augmentation significative (p<0,01) de la synthèse des protéines HSP, par comparaison avec le témoin ne comprenant pas l’extrait : HSP10 (+87%), HSP27 (+76%), HSP32 (+145%), HSP40 (+213%), HSP70 (+94%), et également de l’ubiquitine (+74%).
Ceci confirme donc bien la stimulation de la production des HSP au niveau des protéines, ainsi que de l’ubiquitine, par l’extrait selon l’invention.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 4 ci-après.
Gène Variation de l’expression du gène (en %) avec application de l’extrait d’Emiliania huxleyià 1%
HSP10 +87
HSP27 +76
HSP32 +145
HSP40 +213
HSP70 +94
UBIQUITIN +74
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur la synthèse des HSP et de l’ubiquitine (résultats exprimés en % d’augmentation de l’expression des gènes, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).
Exemple 3 : Effets de l’extrait d’ Emiliania huxleyi obtenu sur l’expression de gènes impliqués dans la préparation et la protection de la peau contre le stress environnemental - expérimentation in vivo
Exemple 3a : Effets de l’application de l’extrait selon l’invention sur la protection de la peau face aux agressions des rayons UV
L’exemple 3a démontre les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1 sur la peau, notamment ses propriétés de protection de la peau face aux agressions extérieurs, en particulier au regard des rayonnements UV.
Conditions des tests
De l’extrait d’Emiliania huxleyisous la forme d’une émulsion stockée à température ambiante a été appliqué sur 21 volontaires, de sexe féminin et masculin, âgés de 23 à 53 ans, au niveau de la zone du dos. 14% de ces volontaires présentaient une peau à tendance grasse, et 86% présentaient une peau considérée comme normale.
Pour cette expérimentation, quatre zones ont été délimitées au niveau du dos des volontaires :
-une zone ayant été exposée aux UV et sur laquelle a été appliqué l’extrait selon l’invention (zone 1) ;
-une zone ayant été exposée aux UV et sur laquelle a été appliqué un placébo (zone 2) ;
-une zone ayant été uniquement exposée aux UV (zone 3) ; et
-une zone n’ayant pas été exposée aux UV, et n’ayant subi aucune application de produit (zone 4).
Un prélèvement au niveau de chacune de ces quatre zones du dos a été effectué à l’aide d’une bande adhésive, pour analyse.
i) Dans un premier temps, il a été analysé le stress oxydant effectivement induit au niveau de la peau par une exposition aux UV, c’est-à-dire au niveau des zones 3 et 4. Les groupes carbonyles dustratum corneumprélevé par les bandes adhésives ont été marqués avec de la fluorescéine-5-thiosemicarbazide (FTZ). En effet, les protéines carbonylées sont induites après un stress dû aux UV, et sont donc un bon marqueur de stress oxydant. Les images de coloration de ces groupes carbonyles ont été observées par microscopie à fluorescence, et l'intensité de fluorescence moyenne dustratum corneumextraite des images a été calculée en tant que ‘niveau de protéine carbonylée du stratum corneum’ («stratum corneum carbonylated protein », SCCP).
Les résultats de cette analyse sont présentés dans le tableau 5 ci-après.
Marqueur de stress oxydant Zone Concentration du marqueur de stress oxydant Analyses statistiques
Moyenne et écart-type
(en U.I.*/mg de teneur en protéines)
Δ% [zone 3 - zone 4]
(en valeur absolue)
p Significativité
Niveau de SCCP Zone 4 (non exposée, et pas d’application topique) 15.13 +/-  8.82 65% <0,0001 oui
Zone 3 (exposée, et pas d’application topique) 24.97 +/- 10.09
Validation du stress oxydant induit par l'exposition aux UV (zones non traitées et exposées VS zones non traitées ni exposées)
* U.I. : Unité Internationale
La illustre également ces résultats, laquelle représente la quantité de protéines carbonylées en U.I. par mg de protéines totales, dans le cas d’une zone de peau n’ayant pas subi d’exposition aux UV (zone 4) et dans le cas d’une zone de peau ayant subi une telle application (zone 3), aucune de ces zones n’ayant reçu l’application de produit. Il est donc clairement visible que l’exposition aux UV induit du stress oxydant, car il est observé une augmentation de 65% de la quantité de protéines carbonylées dans la zone 3 exposée.
Il est donc clair, à la lecture de ces résultats, que l’exposition de la peau aux rayons UV induit un stress oxydant.
ii) Dans un second temps, il a été analysé l’effet protecteur de l’extrait selon l’invention contre le stress oxydant induit par l'exposition aux UV. Les résultats de cette analyse sont présentés dans le tableau 6 ci-après.
Marqueur de stress oxydant Zone Variation de la concentration du marqueur de stress oxydant Index de protection antioxydant Analyses statistiques
Δ (zone 1 ou 2 – zone 3)
(moyenne et écart-type)
Δ% (zone 1 ou 2 -zone 4) p Significativité
Niveau de SCCP Extrait selon l’invention (zone 1) -9.03 +/- 7.20 92% 0.0003 oui
Placébo (zone 2) -6.96 +/- 6.67 71% 0.0068 oui
Effet protecteur de l’extrait selon l’invention contre le stress oxydant induit par l'exposition aux UV.
La illustre également ces résultats, laquelle représente la valeur de l’index de protection antioxydant calculé à partir des quantités analysées de protéines carbonylées au niveau de zones de la peau sur lesquelles ont été appliqués l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention et le placébo, respectivement les zones 1 et 2 définies plus haut. Il est également ici clairement visible que l’application de l’extrait selon l’invention protège la peau exposée aux UV (indice de protection de 92%), et ceci de façon plus efficace qu’un placébo (indice de protection de 71%).
Dès lors, il a été démontré que l'application topique des produits testés (extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention et placébo) a réduit de manière significative l'effet du stress induit par les UV au niveau de la peau. La diminution du niveau de SCCP d’une zone exposée et ayant reçu l’application de ces produits par rapport à une zone exposée n’ayant reçu aucune application est, respectivement de 36% en moyenne pour l’extrait d’Emiliania huxleyi, et de 28% en moyenne pour le placébo.
Au vu de ces résultats, il a pu être déterminé un indice de protection antioxydant pour chaque produit, qui est de 92% pour l’extrait d’Emiliania huxleyi, et de seulement 71% pour le placébo.
Il peut être remarqué que l’effet de l’extrait d’Emiliania huxleyiest significativement meilleur que celui du placébo.
Ainsi, de par l’ensemble des résultats de cet exemple 3a, et notamment la diminution des marqueurs de stress oxydant au niveau de la peau exposée aux UV et ayant reçu une application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, c’est-à-dire ne comprenant pas, ou très peu seulement, de coccolithes, il a été démontré la réduction de la carbonylation des protéines au niveau de la peau par cet extrait, ce qui illustre bien l’effet protecteur de la peau de l’extrait selon l’invention, en particulier au regard des agressions extérieures par les rayonnements UV.
Exemple 3b : Effets de l’application de l’extrait selon l’invention sur la réparation de la peau face à une agression extérieure de type produit chimique
L’exemple 3b démontre les effets sur la peau de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1, notamment ses propriétés de réparation de la peau, en particulier après une agression par un détergent.
Conditions des tests
De l’extrait d’Emiliania huxleyisous la forme d’une émulsion stockée à température ambiante a été appliqué sur 23 volontaires de sexe féminin, âgées de 18 à 56 ans, au niveau de la zone des avant-bras.
Pour cette expérimentation, quatre zones ont été délimitées au niveau des avant-bras des volontaires. Des patchs comprenant 300 μL de 0,5% de détergent, qui est du sodium lauryl sulfate, ont été appliqués sur certaines de ces zones. Les zones sont les suivantes :
-une zone patchée sur laquelle a été appliqué de l’extrait selon l’invention (zone 1) ;
-une zone patchée sur laquelle a été appliqué un placébo (zone 2) ;
-une zone patchée n’ayant reçu aucune application de produit (zone 3) ;
-une zone non patchée et n’ayant reçu aucune application de produit (zone 4).
L’application de l’extrait selon l’invention et du placébo a été faite biquotidiennement, pendant 6 jours.
La perte en eau transépidermique («Trans Epidermal Water Loss », TEWL) a été mesurée sur les quatre zones, avec un Tewameter TM 300® (Courage & Khazaka). En effet, la barrière cutanée agit comme un régulateur de l'équilibre hydrique de la peau. Lorsque celle-ci est endommagée, le système de régulation des échanges hydriques est déstabilisé. L'eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur, ce qui augmente la TEWL. En revanche, si l'état de la barrière cutanée s'améliore, la perte en eau diminue car le mécanisme de régulation des échanges hydriques retrouve son équilibre. La mesure de la perte en eau permet donc d'évaluer l'effet barrière de la couche cornée et du film hydrolipidique.
Les résultats de cette analyse sont présentés dans les tableaux 7 à 9 ci-après :
Produit Cinétique Variations du facteur TEWL (en g.m-2.h-1) (moyenne et écart-type) Δ% (moyenne) p Signif. % de volontaires avec effet restructurant et réparateur
Extrait selon l’invention (zone 1) VS zone 3 ΔJ**3 -2.5 +/- 1.2 -10% 0.0478 oui 70%
ΔJ4 -5.9 +/- 1.5 -20% <0.0001 oui 78%
ΔJ7 -5.2 +/- 1.8 -11% 0.0014 oui 70%
ΔJ8 -4.0 +/- 2.0 -6% 0.0100 oui 70%
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant de l’extrait selon l’invention face à une zone n’ayant pas reçu d’application de produit
**J : jour
Produit Cinétique Variations du facteur TEWL (en g.m-2.h-1) (moyenne et écart-type) Δ% (moyenne) p Signif. % de volontaires avec effet restructurant et réparateur
Placébo (zone 2) VS zone 3 ΔJ3 -0.5 +/- 1.1 -1% 0.7153 non 48%
ΔJ4 -1.1 +/- 1.4 -3% 0.3868 non 56%
ΔJ7 -2.0 +/- 1.5 -4% 0.1224 non 52%
ΔJ8 -1.7 +/- 1.6 -2% 0.1943 non 52%
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant du placébo face à une zone n’ayant pas reçu d’application de produit
Produit Cinétique Variations du facteur TEWL (en g.m-2.h-1) (moyenne et écart-type) Δ% (moyenne) p Signif. % de volontaires avec effet restructurant et réparateur
Extrait selon l’invention (zone 1) VS Placébo (zone 2) ΔJ3 -2.4 +/- 0.7 -9% 0.0492 oui 78%
ΔJ4 -5.7 +/- 0.9 -17% <0.0001 oui 78%
ΔJ7 -3.2 +/- 1.4 -7% 0.0208 oui 57%
ΔJ8 -2.5 +/- 1.5 -4% 0.0740 non 57%
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant de l’extrait selon l’invention face au placébo
Les et 4 illustrent également ces résultats.
La représente la perte en eau transépidermique dans le temps en g/m2/h, au niveau des zones 1 (application de l’extrait selon l’invention) et 2 (application d’un placébo), lorsque la peau a été agressée par un produit chimique, notamment un détergent. La courbe inférieure correspond à la zone 1 et la courbe supérieure correspond à la zone 2. Il est ainsi démontré, de par la position de la courbe inférieure, que l’application de l’extrait selon l’invention permet de diminuer la perte en eau de la peau, et de façon plus efficace que pour l’application d’un placébo.
La représente également la perte en eau transépidermique, en pourcentage. Il est ici comparé ce paramètre dans le temps dans les cas des zones 1 et 2, ainsi que dans le cas de la différence entre ces deux zones, toujours lorsque la peau a été agressée par du détergent. Il est donc clairement illustré dans chaque cas que l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention permet une diminution de la perte en eau, et que celle-ci est toujours plus importante que dans le cas de l’application topique du placébo.
Dès lors, de par l’ensemble des résultats de cet exemple 3b, il a été démontré que, par rapport à une zone de peau agressée avec un détergent et sur laquelle aucune application de produit (extrait selon l’invention et placébo) n’a été effectuée, et après application topique biquotidienne à partir du jour 2, l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention a présenté un effet restructurant/réparateur du jour 3 au jour 8. Cet effet est en particulier illustré par une diminution significative de la perte en eau transépidermique (facteur TEWL) de 20 % entre les jours 2 et 4, observée chez 78% des volontaires.
A l’inverse, il a été démontré que le placébo n'a pas présenté d'effet restructurant/réparateur.
Ainsi, l’ensemble des résultats de ces deux exemples 2 et 3 viennent démontrer que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention ne comprenant essentiellement pas de coccolithes permet de préparer la peau à réagir de façon optimale aux agressions de l’environnement, et à la protéger, notamment face au stress oxydant pouvant être induit par de multiples facteurs extérieurs, tels que les rayonnements UV ou le contact avec des produits chimiques. Cet extrait permet également de la réparer en cas de telles agressions.

Claims (10)

  1. Procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania huxleyi comprenant :
    -une étape de culture d’Emiliania huxleyi en photobioréacteur, mettant en œuvre un milieu de culture comprenant de l’eau de mer, un ou plusieurs microéléments, tel que du sélénium, et entre 10 et 100 µM (micromoles.L-1) de phosphate, ladite étape permettant la culture d’Emiliania huxleyi essentiellement sans production de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyi possèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites ;
    -une étape de récolte de ladite culture ;
    -une étape de congélation de ladite culture ;
    -une étape de décongélation de ladite culture congelée et d’ajout de propane-1,3-diol ; et
    -au moins une étape de filtration.
  2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ladite au moins une étape de filtration comprend :
    -une étape de filtration tangentielle à travers un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
    -une étape de filtration stérilisante.
  3. Extrait de la microalgueEmiliania huxleyiobtenu par le procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu’il ne comprend essentiellement et pratiquement pas de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyipossèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites.
  4. Extrait selon la revendication 3 stimulant l’expression de gènes codant pour des protéines du protéasome, et/ou des métallothionéines, et/ou des protéines de stress («Heat Shock Proteins »), et/ou des protéines de la matrice extracellulaire.
  5. Extrait selon la revendication 3 ou 4 stimulant l’expression de gènes codant pour des protéines HSP et pour l’ubiquitine.
  6. Composition cosmétique pour application topique comprenant un extrait de la microalgueEmiliania huxleyiselon l’une quelconque des revendications 3 à 5, ainsi qu’un milieu physiologiquement acceptable.
  7. Composition selon la revendication 6, comprenant entre 0,01% et 10% en poids d’extrait d’Emiliania huxleyi, par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids, par rapport au poids total de ladite composition.
  8. Utilisation d’un extrait selon l’une quelconque des revendication 3 à 5 en tant qu’ingrédient actif cosmétique.
  9. Utilisation d’une composition selon la revendication 6 ou 7 en tant que composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau saine.
  10. Utilisation selon la revendication 9 pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants extérieurs, et/ou préparer la peau à maintenir son homéostasie.
FR2201873A 2022-03-03 2022-03-03 Procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania huxleyi essentiellement sans coccolithes, extrait ainsi obtenu, composition comprenant cet extrait, et utilisations associées. Active FR3133132B1 (fr)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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EP3270887B1 (fr) * 2015-03-18 2020-10-21 Pierre Fabre Dermo-Cosmétique Procede de preparation d'un extrait de matrice vegetale par extrusion avec une solution hydrotropique

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