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FR3153663A1 - Diagnostic method for skin exposed to ozone - Google Patents

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FR3153663A1
FR3153663A1 FR2310555A FR2310555A FR3153663A1 FR 3153663 A1 FR3153663 A1 FR 3153663A1 FR 2310555 A FR2310555 A FR 2310555A FR 2310555 A FR2310555 A FR 2310555A FR 3153663 A1 FR3153663 A1 FR 3153663A1
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FR
France
Prior art keywords
skin
ozone
compound
methionine sulfoxide
sample
Prior art date
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Pending
Application number
FR2310555A
Other languages
French (fr)
Inventor
Eric Arbey
Laurence DENAT
Fabien Girard
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LOreal SA
Original Assignee
LOreal SA
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Filing date
Publication date
Application filed by LOreal SA filed Critical LOreal SA
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Priority to PCT/EP2024/077830 priority patent/WO2025073825A1/en
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Pending legal-status Critical Current

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Abstract

Méthode de diagnostic d’une peau exposée à l’ozone La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition de la peau à l'ozone comprenant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde, ainsi qu'une méthode d’identification de composé actif et une méthode d'évaluation de l'efficacité d'un composé, afin de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Figure pour l'abrégé : néantMethod for diagnosing skin exposed to ozone The present invention relates to a method for diagnosing skin exposure to ozone comprising measuring the amount of methionine sulfoxide, as well as a method for identifying an active compound and a method for evaluating the effectiveness of a compound, in order to prevent and/or treat the deleterious effects of ozone on the skin. Figure for abstract: none

Description

Méthode de diagnostic d’une peau exposée à l’ozoneDiagnostic method for skin exposed to ozone

La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition de la peau à l'ozone comprenant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde, ainsi qu'une méthode d’identification de composé actif et une méthode d'évaluation de l'efficacité d'un composé, afin de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur peau.The present invention relates to a method for diagnosing skin exposure to ozone comprising measuring the amount of methionine sulfoxide, as well as a method for identifying an active compound and a method for evaluating the effectiveness of a compound, in order to prevent and/or treat the deleterious effects of ozone on the skin.

L'ozone ou trioxygène a pour formule chimique O3, c’est une variété allotropique de l'oxygène, bien moins stable que le dioxygène O2, en lequel il tend naturellement à se décomposer. L'ozone est naturellement présent dans l'atmosphère terrestre, formant dans la stratosphère une couche d'ozone qui intercepte les rayons ultraviolets du Soleil. Cependant, dans les basses couches de l'atmosphère (la troposphère) c’est un des polluants de l’air les plus dangereux pour la santé. Cet oxydant très puissant peut être produit par les feux de forêts, les fortes températures, il est aussi produit dans les zones industrielles ou les centres urbains ayant un fort ensoleillement. Ainsi certains milieux sont régulièrement soumis à des pics d’ozone. L’individu dans son environnement quotidien et particulièrement en zone urbaine, peut être soumis à de multiples agressions au niveau des matières kératiniques, et notamment la peau, par ce polluant aérien. En effet l’ozone a des effets délétères liés à l’oxydation des constituants de la peau et à la modulation de l’expression des biomarqueurs qu’il induit.Ozone or trioxygen has the chemical formula O 3 , it is an allotropic variety of oxygen, much less stable than dioxygen O 2 , into which it naturally tends to decompose. Ozone is naturally present in the Earth's atmosphere, forming an ozone layer in the stratosphere which intercepts the Sun's ultraviolet rays. However, in the lower layers of the atmosphere (the troposphere) it is one of the most dangerous air pollutants for health. This very powerful oxidant can be produced by forest fires, high temperatures, it is also produced in industrial areas or urban centers with strong sunlight. Thus certain environments are regularly subject to ozone peaks. The individual in his daily environment and particularly in urban areas, can be subjected to multiple attacks on keratinous materials, and in particular the skin, by this air pollutant. Indeed, ozone has deleterious effects linked to the oxidation of skin constituents and the modulation of the expression of biomarkers that it induces.

De ce qui précède, on comprend l'importance de trouver des biomarqueurs permettant de détecter l’exposition à l’ozone de la peau, afin de pouvoir traiter la peau de manière ciblée. La présente invention a pour objet de satisfaire à ce besoin.From the above, it is understood the importance of finding biomarkers that can detect ozone exposure of the skin, in order to be able to treat the skin in a targeted manner. The present invention aims to satisfy this need.

La demanderesse a découvert de manière surprenante un nouveau biomarqueur modulé significativement dans les peaux exposées à l'ozone. Ce biomarqueur est une forme oxydée d’un acide aminé de l'épiderme de la peau, la méthionine sulfoxyde.The applicant surprisingly discovered a new biomarker significantly modulated in skin exposed to ozone. This biomarker is an oxidized form of an amino acid in the skin epidermis, methionine sulfoxide.

Les méthodes selon l’invention sont donc basées sur la mesure de ce biomarqueur modulé de façon significative, dans des tissus reconstruits exposés à l’ozone et/ou sur des échantillons de peaux exposés à l’ozone.The methods according to the invention are therefore based on the measurement of this significantly modulated biomarker, in reconstructed tissues exposed to ozone and/or on skin samples exposed to ozone.

Ainsi, selon un premier de ses aspects, l'invention a pour objet une méthode de diagnostic, préférentiellementin vitroouex vivo ,d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau dudit sujet.Thus, according to a first of its aspects, the invention relates to a method of diagnosis, preferably in vitro or ex vivo , of exposure to ozone of the skin, in a subject, said method comprising measuring the quantity of methionine sulfoxide in a sample of skin of said subject.

Eventuellement cette méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : sur la base de la quantité mesurée de méthionine sulfoxyde, déterminer si la peau dudit sujet a été exposée à l’ozone.Optionally, this diagnostic method according to the invention further comprises the following step: based on the measured quantity of methionine sulfoxide, determining whether the skin of said subject has been exposed to ozone.

L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon étant traité avec ledit composé;
  2. comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ;
  3. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé.
The invention also relates to a method for identifying a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of a subject, said sample being treated with said compound;
  2. comparing said quantity measured in step a) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample not treated with said compound;
  3. identifying said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has not been treated with said compound.

L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé;
  2. effectuer une exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  3. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ;
  4. comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ;
  5. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ;
The invention also relates to a method for identifying a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. performing a treatment of a skin sample selected from keratinocytes, reconstructed epidermis and reconstructed skin, by bringing the skin sample into contact with said compound;
  2. carry out an ozone exposure of said skin sample;
  3. measuring the amount of methionine sulfoxide in the skin sample treated with said compound;
  4. comparing said quantity measured in step c) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample exposed to ozone and not treated with said compound;
  5. identifying said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has not been treated with said compound;

étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois.it being understood that step b can be carried out after step a and vice versa, and that steps a and b can be repeated at least twice.

L’invention concerne aussi une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau d’un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau dudit sujet avant le traitement avec ledit composé.
  2. traiter la peau dudit sujet avec ledit composé,
  3. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde, après l’étape b, dans un second échantillon de peau dudit sujet;
  4. comparer lesdites quantités mesurées à l’étape a. et à l’étape c. ;
  5. évaluer l’efficacité dudit composé candidat quant à la prévention et/ou le traitement des effets délétères de l’ozone sur la peau.
The invention also relates to a method for evaluating the effectiveness of a compound for preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin of a subject, said method comprising the following steps:
  1. measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of said subject prior to treatment with said compound.
  2. treating the skin of said subject with said compound,
  3. measuring the amount of methionine sulfoxide, after step b, in a second skin sample from said subject;
  4. compare said quantities measured in step a. and in step c.;
  5. evaluate the effectiveness of said candidate compound in preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin.

L’invention apparaîtra plus clairement à la lecture de la description qui va suivre, donnée uniquement à titre d’exemple non limitatif.The invention will appear more clearly on reading the description which follows, given solely as a non-limiting example.

DéfinitionDefinition ss généralesgeneral

Par « sujet » on comprend un être humain, de préférence âgé de 1 mois à 90 ans.By "subject" we mean a human being, preferably aged between 1 month and 90 years.

Avantageusement, le sujet est susceptible d’avoir été exposé à l’ozone, en particulier à une exposition chronique ou aigue.Advantageously, the subject is likely to have been exposed to ozone, particularly chronic or acute exposure.

Le stratum corneum est la couche la plus éloignée de l'épiderme, et comprend la surface de la peau. Elle est composée principalement de cellules mortes.The stratum corneum is the outermost layer of the epidermis, and comprises the surface of the skin. It is composed mainly of dead cells.

Par « échantillon de stratum corneum », on entend ici un échantillon prélevé dans cette couche. Par exemple un tel échantillon peut être prélevé en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame® appliquée sur la peau.A "stratum corneum sample" here means a sample taken from this layer. For example, such a sample can be taken by rubbing the surface of the skin or by using an adhesive surface such as a D-squame® disc applied to the skin.

Par « exposition à l’ozone » on entend ici une exposition chronique ou aigue à l’ozone.“Ozone exposure” here means chronic or acute exposure to ozone.

Par « exposition chronique », on entend ici une exposition régulière, en particulier journalière, pendant une période donnée, de préférence une période de plus d’un an, en particulier une période de douze mois éventuellement interrompue à une ou plusieurs reprises pendant de courtes durées, typiquement des durées de moins d’un mois, de préférence de moins d’une semaine.By "chronic exposure" is meant here regular exposure, in particular daily, over a given period, preferably a period of more than one year, in particular a period of twelve months possibly interrupted on one or more occasions for short periods, typically periods of less than one month, preferably less than one week.

Par « exposition aigue », on entend ici une exposition momentanée, en particulier de 12 heures à 5 jours, à au moins un niveau d’ozone supérieur à 0,05 ppm, de préférence supérieur à 0,07 ppm, plus préférentiellement supérieur à 0,09 ppm, encore mieux supérieur à 0,1 ppm.By "acute exposure" is meant here a momentary exposure, in particular from 12 hours to 5 days, to at least one ozone level greater than 0.05 ppm, preferably greater than 0.07 ppm, more preferably greater than 0.09 ppm, even better greater than 0.1 ppm.

La méthionine sulfoxyde ou sulfoxyde de méthionine, est un dérivé oxydé de la méthionine ayant pour formule la formule (I) suivante :
Methionine sulfoxide or methionine sulfoxide, is an oxidized derivative of methionine having the following formula (I):

Formule (I)Formula (I)

La mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier et en particulier par chromatographie liquide couplée à un détecteur UV (LC-UV) ou par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse par exemple la spectrométrie de masse à haute résolution (LC-HRMS).The measurement of the quantity of methionine sulfoxide can be carried out by any technique known to those skilled in the art and in particular by liquid chromatography coupled with a UV detector (LC-UV) or by liquid chromatography coupled with mass spectrometry, for example high-resolution mass spectrometry (LC-HRMS).

Par « effets délétères de l’ozone », on entend des irritations ou des réactions d’inconfort au niveau de la peau (incluant également la peau du cuir chevelu) qui peuvent se traduire en particulier par des rougeurs, des démangeaisons, des sensations de chaleur, de picotement et de tiraillement.By "harmful effects of ozone" we mean irritations or discomfort reactions at the skin level (including the skin of the scalp) which can result in particular in redness, itching, sensations of heat, tingling and tightness.

Méthode de diagnosticDiagnostic method d’une exposition à l’ozone de la peaufrom ozone exposure of the skin

La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau dudit sujet.The present invention relates to a method for diagnosing ozone exposure of the skin in a subject, said method comprising measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of said subject.

Préférentiellement, cette méthode de l’invention est une méthode de diagnostic d’une exposition chronique ou aigue à l’ozone.Preferably, this method of the invention is a method for diagnosing chronic or acute exposure to ozone.

La méthode de l’invention est de préférence mise en œuvrein vitroouex vivo.The method of the invention is preferably carried out in vitro or ex vivo .

L’échantillon de peau du sujet utilisée dans la méthode de diagnostic selon l’invention, est un échantillon prélevé, de préférence de manière non-invasive, sur la peau du sujet, préférentiellement sur le visage du sujet, en particulier sur la joue du sujet. Préférentiellement l’échantillon de peau une biopsie, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille, ou un échantillon de stratum corneum.The skin sample of the subject used in the diagnostic method according to the invention is a sample taken, preferably non-invasively, from the skin of the subject, preferably from the face of the subject, in particular from the cheek of the subject. Preferably, the skin sample is a biopsy, a microbiopsy, in particular carried out using a needle, or a sample of stratum corneum.

Ainsi selon un mode de réalisation, cette méthode selon l’invention comprend une étape de prélèvement de l’échantillon de peau du sujet avant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®.Thus, according to one embodiment, this method according to the invention comprises a step of taking the skin sample from the subject before measuring the quantity of methionine sulfoxide. This step is preferably carried out in a non-invasive manner, and in particular does not require local anesthesia. According to a preferred embodiment, the step of taking the sample is carried out by rubbing the surface of the skin or by using an adhesive surface such as a D-squame® disc.

Eventuellement la méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : sur la base la quantité mesurée, déterminer si la peau dudit sujet a été exposée à l’ozone. Dans un mode de réalisation particulier, cette étape est réalisée après comparaison de la quantité mesurée de méthionine sulfoxyde avec une valeur de référence. Dans un mode de réalisation, la valeur de référence est déterminée par la quantité moyenne de méthionine sulfoxyde mesurée dans une population déterminée qui n’a pas été soumise à une exposition à l’ozone, notamment à une exposition aigue ou chronique à l’ozone.Optionally, the diagnostic method according to the invention further comprises the following step: based on the measured quantity, determining whether the skin of said subject has been exposed to ozone. In a particular embodiment, this step is carried out after comparing the measured quantity of methionine sulfoxide with a reference value. In one embodiment, the reference value is determined by the average quantity of methionine sulfoxide measured in a given population which has not been subjected to exposure to ozone, in particular to acute or chronic exposure to ozone.

Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par la quantité moyenne de méthionine sulfoxyde mesurée chez des êtres humains âgés de 1 mois à 90 ans. Conformément à l’invention une valeur de référence peut être déterminée par une pluralité d'échantillons, de préférence plus de 20, 30, 50, 100, 200 ou 500 échantillons.In a particular embodiment, the reference value is determined by the average amount of methionine sulfoxide measured in humans aged from 1 month to 90 years. According to the invention, a reference value can be determined by a plurality of samples, preferably more than 20, 30, 50, 100, 200 or 500 samples.

Le terme « comparaison » ici fait référence au fait de déterminer si la quantité de méthionine sulfoxyde est essentiellement identique à une valeur de référence ou diffère de celle-ci. De préférence, la quantité de méthionine sulfoxyde est considérée comme différente d'une valeur de référence si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, la quantité de méthionine sulfoxyde et la valeur de référence sont essentiellement identiques.The term “comparison” herein refers to determining whether the amount of methionine sulfoxide is substantially the same as or differs from a reference value. Preferably, the amount of methionine sulfoxide is considered to be different from a reference value if the observed difference is statistically significant. If the difference is not statistically significant, the amount of methionine sulfoxide and the reference value are substantially the same.

Sur la base de cette comparaison, on peut déterminer si la peau a été exposée à l’ozone. Typiquement, la peau est considérée comme ayant été exposée à l’ozone lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde est significativement supérieure à la valeur de référence, et la peau n’est pas considérée comme ayant été exposée à l’ozone lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde est essentiellement identique ou significativement inférieure à la valeur de référence.Based on this comparison, it can be determined whether the skin has been exposed to ozone. Typically, skin is considered to have been exposed to ozone when the amount of methionine sulfoxide is significantly higher than the reference value, and skin is not considered to have been exposed to ozone when the amount of methionine sulfoxide is essentially the same as or significantly lower than the reference value.

Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement de l’échantillon afin de préparer la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu par une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®, du méthanol peut être ajouté à la surface puis le liquide obtenu est repris dans un tube.Preferably, the method according to the invention comprises a step of treating the sample in order to prepare the measurement of the quantity of methionine sulfoxide. For example, if the skin sample was obtained by an adhesive surface such as a D-squame® disc, methanol can be added to the surface and then the liquid obtained is taken up in a tube.

Eventuellement la méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : si la peau dudit sujet est déterminée comme ayant été exposée à l’ozone, traiter la peau dudit sujet avec une composition cosmétique permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone.Optionally, the diagnostic method according to the invention further comprises the following step: if the skin of said subject is determined to have been exposed to ozone, treating the skin of said subject with a cosmetic composition making it possible to prevent and/or treat the harmful effects of ozone.

Par « composition cosmétique permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone » on comprend toute composition cosmétique connue de l’homme du métier permettant de réduire et/ou de ralentir l’apparition des effets délétères de l’ozone tels que les irritations ou les réactions d’inconfort au niveau de la peau, les rougeurs, les démangeaisons, les sensations de chaleur, de picotement et de tiraillement provoquées par l’ozone. Dans un mode de réalisation de l’invention, la composition cosmétique comprend un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, de préférence identifié par la méthode de l’invention.By "cosmetic composition for preventing and/or treating the harmful effects of ozone" is meant any cosmetic composition known to those skilled in the art for reducing and/or slowing down the appearance of the harmful effects of ozone such as irritations or discomfort reactions in the skin, redness, itching, sensations of heat, tingling and tightness caused by ozone. In one embodiment of the invention, the cosmetic composition comprises a compound for preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin, preferably identified by the method of the invention.

MéthodeMethod ss d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou deidentification of a compound to prevent and/or traiter les effets délétères de l’ozone surtreat the deleterious effects of ozone on la peauthe skin

Les méthodes d’identification d’un composé de l’invention sont de préférence mises en œuvrein vitroouex vivo.The methods for identifying a compound of the invention are preferably carried out in vitro or ex vivo .

L’invention porte également sur une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon étant traité avec ledit composé;
  2. comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ;
  3. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, lorsque la quantité méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé.
The invention also relates to a method for identifying a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of a subject, said sample being treated with said compound;
  2. comparing said quantity measured in step a) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample not treated with said compound;
  3. identify said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has not been treated with said compound.

Selon un mode de réalisation préféré, les échantillons de peau d’un sujet utilisés dans la méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau selon l’invention sont choisis parmi un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille et un échantillon de stratum corneum.According to a preferred embodiment, the skin samples of a subject used in the method for identifying a compound for preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin according to the invention are chosen from a human skin explant, a skin biopsy, a microbiopsy in particular carried out using a needle and a sample of stratum corneum.

La méthode selon l’invention comprend au moins une étape de prélèvement d’un échantillon de peau du sujet. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau, en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®.The method according to the invention comprises at least one step of taking a skin sample from the subject. This step is preferably carried out in a non-invasive manner, and in particular does not require local anesthesia. According to a preferred embodiment, the step of taking the sample is carried out by rubbing the surface of the skin, using an adhesive surface such as a D-squame® disc.

Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement de l’échantillon afin de préparer la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®, du méthanol peut être ajouté à la surface adhésive puis le liquide obtenu repris dans un tube.Preferably, the method according to the invention comprises a step of treating the sample in order to prepare the measurement of the quantity of methionine sulfoxide. For example, if the skin sample was obtained using an adhesive surface such as a D-squame® disc, methanol can be added to the adhesive surface and then the liquid obtained taken up in a tube.

Dans un mode de réalisation particulier, la méthode selon l’invention ci-dessus comprend une étape supplémentaire d‘exposition des échantillons à l’ozone. Cette étape est préférentiellement réalisée sur les deux échantillons dans les mêmes conditions. Elle peut être réalisée avant ou après traitement de l’échantillon de peau audit composé.In a particular embodiment, the method according to the invention above comprises an additional step of exposing the samples to ozone. This step is preferably carried out on both samples under the same conditions. It can be carried out before or after treatment of the skin sample with said compound.

L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé;
  2. effectuer une exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  3. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ;
  4. comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ;
  5. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ;
The invention also relates to a method for identifying a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. performing a treatment of a skin sample selected from keratinocytes, reconstructed epidermis and reconstructed skin, by bringing the skin sample into contact with said compound;
  2. carry out an ozone exposure of said skin sample;
  3. measuring the amount of methionine sulfoxide in the skin sample treated with said compound;
  4. comparing said quantity measured in step c) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample exposed to ozone and not treated with said compound;
  5. identifying said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has not been treated with said compound;

étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois.it being understood that step b can be carried out after step a and vice versa, and that steps a and b can be repeated at least twice.

Préférentiellement, cette méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde.Preferably, this method according to the invention comprises a step of treating the samples in order to prepare the measurement of the quantity of methionine sulfoxide.

Dans un mode de réalisation préféré, la méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, comprend les étapes suivantes :

  1. effectuer un premier traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé ;
  2. effectuer une première exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  3. effectuer un second traitement de l’échantillon de peau par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé ;
  4. effectuer une seconde exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  5. effectuer un troisième traitement de l’échantillon de peau par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé ;
  6. effectuer une troisième exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  7. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ;
  8. comparer ladite quantité mesurée à l’étape g) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ;
  9. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé.
In a preferred embodiment, the method for identifying a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin comprises the following steps:
  1. carrying out a first treatment of a skin sample chosen from keratinocytes, a reconstructed epidermis and a reconstructed skin, by bringing the skin sample into contact with said compound;
  2. carry out a first exposure to ozone of said skin sample;
  3. performing a second treatment of the skin sample by contacting the skin sample with said compound;
  4. carry out a second exposure to ozone of said skin sample;
  5. performing a third treatment of the skin sample by contacting the skin sample with said compound;
  6. carry out a third exposure to ozone of said skin sample;
  7. measuring the amount of methionine sulfoxide in the skin sample treated with said compound;
  8. comparing said quantity measured in step g) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample exposed to ozone and not treated with said compound;
  9. identifying said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has not been treated with said compound.

Préférentiellement, cette méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure du niveau d’expression.Preferably, this method according to the invention comprises a step of processing the samples in order to prepare the measurement of the level of expression.

De préférence, dans les méthodes d’identification d’un composé de l’invention, la seule différence entre l’échantillon de peau traité avec ledit composé et l’échantillon de peau non traité avec ledit composé est ledit (ou lesdits) traitement(s) avec le composé.Preferably, in the methods for identifying a compound of the invention, the only difference between the skin sample treated with said compound and the skin sample not treated with said compound is said treatment(s) with the compound.

Typiquement, le traitement de l’échantillon avec ledit composé comprend la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé pendant au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes.Typically, treating the sample with said compound comprises contacting the skin sample with said compound for at least 5 minutes, at least 10 minutes or at least 20 minutes.

Typiquement, la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde est réalisée au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes après le dernier traitement de l’échantillon avec ledit composé.Typically, the measurement of the amount of methionine sulfoxide is carried out at least 5 minutes, at least 10 minutes or at least 20 minutes after the last treatment of the sample with said compound.

Les étapes b, d ou h. de comparaison des méthodes d’identification ci-dessus font référence au fait de déterminer si la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée à l’étape a. est essentiellement identique à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé. De préférence, la quantité de méthionine sulfoxyde est considérée comme différente si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, les deux quantités de méthionine sulfoxyde sont essentiellement identiques.Steps b, d or h. of comparing the above identification methods refer to determining whether the amount of methionine sulfoxide measured in step a. is essentially identical to the amount of methionine sulfoxide measured in a skin sample not treated with said compound. Preferably, the amount of methionine sulfoxide is considered different if the observed difference is statistically significant. If the difference is not statistically significant, the two amounts of methionine sulfoxide are essentially identical.

Sur la base de cette comparaison, on peut déterminer si le composé permet de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Typiquement, le composé est considéré comme permettant de prévenir et/ou de de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde est significativement inférieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé, alternativement le composé n’est pas considéré comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée est essentiellement identique ou significativement supérieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé.Based on this comparison, it can be determined whether the compound is capable of preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin. Typically, the compound is considered to be capable of preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, when the amount of methionine sulfoxide is significantly lower in the skin sample treated with said compound compared to the amount of methionine sulfoxide measured in the sample that has not been treated with said compound, alternatively the compound is not considered to be capable of preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, when the amount of methionine sulfoxide measured is essentially the same or significantly higher in the skin sample treated with said compound compared to the amount of methionine sulfoxide measured in the sample that has not been treated with said compound.

De préférence, les étapes d’exposition à l’ozone sont réalisées de manière identique sur l’échantillon traité avec ledit composé et l’échantillon qui n’est pas traité avec ledit composé.Preferably, the ozone exposure steps are carried out identically on the sample treated with said compound and the sample which is not treated with said compound.

Typiquement les échantillons sont incubés dans une atmosphère enrichie en ozone.Typically samples are incubated in an ozone-enriched atmosphere.

Dans un mode de réalisation, les étapes d’exposition à l’ozone b, d ou f durent au moins 5 heures, plus particulièrement au moins 10 heures et de manière préférée au moins 18 heures. Ces étapes peuvent également être entrecoupées par des périodes d’incubation dans une atmosphère normale, ambiante. Typiquement les échantillons sont incubés dans une atmosphère enrichie en ozone pendant 18h puis une atmosphère normale pendant les 6 heures suivantes et ensuite à nouveau dans une atmosphère enrichie en ozone pendant 18h.In one embodiment, the ozone exposure steps b, d or f last at least 5 hours, more particularly at least 10 hours and preferably at least 18 hours. These steps may also be interspersed with incubation periods in a normal, ambient atmosphere. Typically, the samples are incubated in an ozone-enriched atmosphere for 18 hours, then a normal atmosphere for the following 6 hours, and then again in an ozone-enriched atmosphere for 18 hours.

Les méthodes d’identification d’un composé selon l’invention permettent d’identifier des composés permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau suite à une exposition chronique ou aigue à l’ozone.The methods for identifying a compound according to the invention make it possible to identify compounds making it possible to prevent and/or treat the harmful effects of ozone on the skin following chronic or acute exposure to ozone.

Dans un autre mode de réalisation, les étapes d’exposition à l’ozone b, d ou f durent de 10 à 120 minutes, de préférence de 20 à 60 minutes. Ces étapes peuvent également être entrecoupées par des périodes d’incubation dans une atmosphère normale, ambiante.In another embodiment, the ozone exposure steps b, d or f last from 10 to 120 minutes, preferably from 20 to 60 minutes. These steps may also be interspersed with incubation periods in a normal, ambient atmosphere.

Par « atmosphère » dans lequel l’échantillon de peau est incubé, on entend le gaz ou mélange de gaz dans lequel l’échantillon est placé. De préférence l’échantillon est incubé dans une atmosphère similaire à l’air ambiant.By "atmosphere" in which the skin sample is incubated is meant the gas or mixture of gases in which the sample is placed. Preferably the sample is incubated in an atmosphere similar to ambient air.

Par « atmosphère enrichie en ozone », on entend une atmosphère similaire à l’air ambiant comprenant au moins 0,05 ppm (partie par million) d’ozone, de préférence au moins 0,07 ppm d’ozone, au moins 0,1 ppm d’ozone ou encore au moins 0,3 ppm d’ozone.“Ozone-enriched atmosphere” means an atmosphere similar to ambient air comprising at least 0.05 ppm (parts per million) of ozone, preferably at least 0.07 ppm of ozone, at least 0.1 ppm of ozone or at least 0.3 ppm of ozone.

Méthode d’évaluationEvaluation method de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/outhe effectiveness of a compound to prevent and/or traiter les effets délétères de l’ozone surtreat the deleterious effects of ozone on la peau d’un sujetthe skin of a subject

L’invention porte également sur une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau d’un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :

  1. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau dudit sujet avant traitement avec ledit composé.
  2. traiter la peau dudit sujet avec ledit composé,
  3. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde, après l’étape b, dans un second échantillon de peau dudit sujet;
  4. comparer lesdites quantités mesurées à l’étape a. et à l’étape c. ;
  5. évaluer l’efficacité dudit composé candidat quant à la prévention et/ou le traitement des effets délétères de l’ozone sur la peau.
The invention also relates to a method for evaluating the effectiveness of a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin of a subject, said method comprising the following steps:
  1. measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of said subject prior to treatment with said compound.
  2. treating the skin of said subject with said compound,
  3. measuring the amount of methionine sulfoxide, after step b, in a second skin sample from said subject;
  4. compare said quantities measured in step a. and in step c.;
  5. evaluate the effectiveness of said candidate compound in preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin.

La méthode de l’invention est de préférence mise en œuvrein vitroouex vivo.The method of the invention is preferably carried out in vitro or ex vivo .

Les échantillons de peau du sujet utilisés dans la méthode d’évaluation selon l’invention, sont prélevés de préférence de manière non-invasive, sur la peau du sujet, préférentiellement sur le visage du sujet, en particulier sur la joue du sujet.The skin samples of the subject used in the evaluation method according to the invention are preferably taken non-invasively, from the skin of the subject, preferably from the face of the subject, in particular from the cheek of the subject.

Préférentiellement l’échantillon de peau est une biopsie, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille, ou un échantillon de stratum corneum.Preferably, the skin sample is a biopsy, a microbiopsy in particular carried out using a needle, or a sample of stratum corneum.

Ainsi selon un mode de réalisation, cette méthode selon l’invention comprend plusieurs étapes de prélèvement d’échantillon de peau du sujet. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®.Thus, according to one embodiment, this method according to the invention comprises several steps of taking a skin sample from the subject. This step is preferably carried out in a non-invasive manner, and in particular does not require local anesthesia. According to a preferred embodiment, the step of taking the sample is carried out by rubbing the surface of the skin or by using an adhesive surface such as a D-squame® disc.

De préférence, la seule différence entre l’échantillon de peau de l’étape a. et l’échantillon de peau de l’étape c. est ledit traitement avec le composé.Preferably, the only difference between the skin sample of step a. and the skin sample of step c. is said treatment with the compound.

L’échantillon de peau de l’étape c. est prélevé après que la peau dudit sujet ait été traitée avec ledit composé. Dans un mode de réalisation, l’échantillon de peau de l’étape c. est prélevé après que la peau dudit sujet ait été traitée avec ledit composé pendant au moins 14 jours, de préférence au moins 28 jours. Typiquement, cet échantillon est prélevé au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes après le dernier traitement de l’échantillon avec ledit composé.The skin sample of step c. is taken after the skin of said subject has been treated with said compound. In one embodiment, the skin sample of step c. is taken after the skin of said subject has been treated with said compound for at least 14 days, preferably at least 28 days. Typically, this sample is taken at least 5 minutes, at least 10 minutes or at least 20 minutes after the last treatment of the sample with said compound.

Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement de l’échantillon afin de préparer la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®, du méthanol peut être ajouté à la surface adhésive puis le liquide obtenu est repris dans un tube.Preferably, the method according to the invention comprises a step of treating the sample in order to prepare the measurement of the quantity of methionine sulfoxide. For example, if the skin sample was obtained using an adhesive surface such as a D-squame® disc, methanol can be added to the adhesive surface and then the liquid obtained is taken up in a tube.

L’étape d. de comparaison ici fait référence au fait de déterminer si la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée à l’étape a. est essentiellement identique à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée à l’étape c. De préférence, la quantité de méthionine sulfoxyde est considérée comme différente si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, les deux quantités de méthionine sulfoxyde sont essentiellement identiques.Comparison step d. herein refers to determining whether the amount of methionine sulfoxide measured in step a. is substantially identical to the amount of methionine sulfoxide measured in step c. Preferably, the amount of methionine sulfoxide is considered different if the observed difference is statistically significant. If the difference is not statistically significant, the two amounts of methionine sulfoxide are substantially identical.

Sur la base de cette comparaison, on peut évaluer l’efficacité d’un composé à prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Typiquement, plus la quantité de méthionine sulfoxyde est inférieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport à la quantité méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé, plus le composé est considéré efficace pour prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Alternativement, le composé n’est pas considéré efficace pour prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée est essentiellement identique ou significativement supérieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé.Based on this comparison, the effectiveness of a compound in preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin can be evaluated. Typically, the lower the amount of methionine sulfoxide in the skin sample treated with said compound compared to the amount of methionine sulfoxide measured in the sample that was not treated with said compound, the more effective the compound is considered to be in preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin. Alternatively, the compound is not considered effective in preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin when the amount of methionine sulfoxide measured is essentially the same or significantly higher in the skin sample treated with said compound compared to the amount of methionine sulfoxide measured in the sample that was not treated with said compound.

Exemple:Example: Exemple 1 :Example 1: Matériel et méthode :Materials and methods: 1- Système d’exposition à l’ozone in vitro1- In vitro ozone exposure system 1.1-Dispositif externe à l’incubateur :1.1-Device external to the incubator:

Pour mimer une pollution à l’ozone le laboratoire utilise un analyseur/générateur d’ozone MEGATEC 49i couplé à une pompe externe, et relié également à un incubateur de culture régulé à 37°C, 5% CO2et saturé en humidité (environ 95%).To mimic ozone pollution, the laboratory uses a MEGATEC 49i ozone analyzer/generator coupled with an external pump, and also connected to a culture incubator regulated at 37°C, 5% CO2 and saturated with humidity (approximately 95%).

La pompe externe permet de prélever de l’air ambiant et d’alimenter l’analyseur/générateur d’ozone MEGATEC. L’air va alors passer devant la lampe UV de l’appareil (réglée à la longueur d’onde de 185nm) qui va transformer une partie des molécules d’oxygène (O2) de l’air en molécules d’ozone (O3). L’air est alors enrichi en ozone.The external pump draws ambient air and supplies the MEGATEC ozone analyzer/generator. The air then passes in front of the device's UV lamp (set to a wavelength of 185nm), which transforms some of the oxygen molecules (O2) in the air into ozone molecules (O3). The air is then enriched with ozone.

Cet air enrichi en ozone va pouvoir alors être transféré dans l’incubateur contenant les plaques de culture avec le modèle de peau reconstruite T-SkinTM.This ozone-enriched air can then be transferred into the incubator containing the culture plates with the T-Skin TM reconstructed skin model.

L’analyseur/générateur MEGATEC permet de régler et de contrôler :

  • Le débit d’air enrichi en ozone (alimentant l’incubateur) au moyen d’un détendeur placé en amont du circuit dans l’analyseur/générateur MEGATEC.
  • La concentration en ozone généré en réglant la puissance de la lampe UV de l’analyseur/générateur MEGATEC.
The MEGATEC analyzer/generator allows you to adjust and control:
  • The flow of ozone-enriched air (supplying the incubator) by means of a pressure regulator placed upstream of the circuit in the MEGATEC analyzer/generator.
  • The ozone concentration generated by adjusting the power of the UV lamp of the MEGATEC analyzer/generator.

Par ailleurs l’analyseur/générateur MEGATEC possède une seconde pompe et un système d’analyse en interne qui permettent de mesurer la concentration réelle en ozone : soit en sortie d’appareil (concentration générée, en amont de l’exposition dans l’incubateur), soit dans l’incubateur (concentration résiduelle, en aval de l’exposition).Furthermore, the MEGATEC analyzer/generator has a second pump and an internal analysis system which allows the actual ozone concentration to be measured: either at the device outlet (generated concentration, upstream of exposure in the incubator), or in the incubator (residual concentration, downstream of exposure).

1.2-Dispositif interne à l’incubateur :1.2-Internal device in the incubator:

Au sein de l’incubateur un système de fluidique développé au laboratoire permet de distribuer la même quantité d’ozone sur chaque insert de peau reconstruite. Ce système est semi-ouvert pour permettre à la fois : une distribution homogène de l’ozone sur le dessus des plaques, et une bonne régulation des conditions de culture des peaux reconstruites.Within the incubator, a fluidic system developed in the laboratory allows the distribution of the same amount of ozone on each reconstructed skin insert. This system is semi-open to allow both: a homogeneous distribution of ozone on the top of the plates, and good regulation of the culture conditions of the reconstructed skins.

Par ailleurs, le couvercle de chaque plaque de culture (généralement en polystyrène, matériel sensible à l’ozone) est remplacé par un couvercle spécifique pour l’exposition : il s’agit d’un couvercle en PTFE ou en PEEK percé au-dessus de chaque insert de peau reconstruite, et permettant ainsi une exposition directe de la surface des peaux reconstruites à l’air enrichi en ozone. De plus ce couvercle permet de protéger le milieu de culture pour éviter son oxydation par l’ozone, afin de ne réaliser qu’une exposition de la surface des peaux.Furthermore, the lid of each culture plate (usually made of polystyrene, a material sensitive to ozone) is replaced by a specific lid for exposure: this is a PTFE or PEEK lid pierced above each reconstructed skin insert, thus allowing direct exposure of the surface of the reconstructed skins to ozone-enriched air. In addition, this lid protects the culture medium to prevent its oxidation by ozone, in order to only expose the surface of the skins.

2-Exposition à l’ozone de peaux reconstruites2-Exposure to ozone of reconstructed skin in vitroin vitro

2.1- Réception et culture du modèle de peau reconstruite T-Skin2.1- Reception and culture of the reconstructed T-Skin skin model TMTM ..

Le modèle de peau reconstruite utilisé est le modèle de peau reconstruite T-SkinTM.produit et fourni par la société EPISKIN SA (FR-69007, Lyon).The reconstructed skin model used is the T-Skin TM reconstructed skin model produced and supplied by the company EPISKIN SA (FR-69007, Lyon).

Il s’agit d’un modèle de peau reconstruite composé :

  • D’un derme reconstruit constitué d’une lattice de collagène 1, contenant des fibroblastes d’origine humaine extraits de plasties mammaires issues de donneurs sains adultes (déchet chirurgical obtenu avec le consentement des patientes lors d’interventions de chirurgie esthétique de réductions mammaires).
  • D’un épiderme reconstruit réalisé à partir de kératinocytes d’origine humaine extraits de plasties mammaires issues de donneurs sains adultes (déchet chirurgical obtenu avec le consentement des patientes lors d’interventions de chirurgie esthétique de réductions mammaires).
This is a reconstructed skin model composed of:
  • From a reconstructed dermis consisting of a collagen 1 lattice, containing human-origin fibroblasts extracted from breast plastic surgeries from healthy adult donors (surgical waste obtained with the consent of patients during cosmetic breast reduction surgery).
  • From a reconstructed epidermis made from human-origin keratinocytes extracted from breast plastic surgeries from healthy adult donors (surgical waste obtained with the consent of patients during cosmetic breast reduction surgery).

Ce modèle est cultivé dans un insert de culture de 4,5cm² qui permet de le suspendre au-dessus du milieu de culture et de le cultiver à l’interface air liquide.This model is grown in a 4.5cm² culture insert which allows it to be suspended above the culture medium and grown at the air-liquid interface.

Dans cet insert la lattice de collagène, ou équivalent dermique, recouvre une surface qui peut varier de 2 à 2,5 cm² au centre de l’insert. L’épiderme lui recouvre généralement l’ensemble des 4,5cm² de l’insert.In this insert, the collagen lattice, or dermal equivalent, covers an area that can vary from 2 to 2.5 cm² in the center of the insert. The epidermis generally covers the entire 4.5 cm² of the insert.

Le modèle T-SkinTMest réceptionné au laboratoire après 12 jours de culture du derme (J12). L’épiderme lui est à 7 jours de culture et il est relativement immature (peu différencié). Durant le transport ces inserts sont posés sur un milieu de culture nutritif semi-solide adapté au transport.The T-Skin TM model is received at the laboratory after 12 days of dermal culture (D12). The epidermis is 7 days into culture and is relatively immature (poorly differentiated). During transport, these inserts are placed on a semi-solid nutrient culture medium suitable for transport.

A réception, les inserts sont rapidement transférés dans des nouvelles plaques de culture 6 puits dites « deep well » permettant de mettre 8,5ml de milieu de culture liquide sous chaque insert (culture à l’interface air liquide). Ces plaques peuvent être les plaques de la marque Corning référence 355467. Le milieu de culture utilisé est celui commercialisé par la société EPISKIN pour les kits T-SkinTM: milieu dénommé « Culture medium for T-Skin ».Upon receipt, the inserts are quickly transferred into new 6-well culture plates called "deep well" allowing 8.5 ml of liquid culture medium to be placed under each insert (culture at the air-liquid interface). These plates can be Corning brand plates reference 355467. The culture medium used is that marketed by the company EPISKIN for T-Skin TM kits: medium called "Culture medium for T-Skin".

Les peaux reconstruites sont placées ensuite dans un incubateur de culture régulé à 37°C, 5% CO2et avec une humidité saturée (environ 95% d’humidité).The reconstructed skins are then placed in a culture incubator regulated at 37°C, 5% CO2 and with saturated humidity (approximately 95% humidity).

Le milieu de culture est ensuite remplacé de la même manière à J13 et J15 (derme).The culture medium is then replaced in the same way on D13 and D15 (dermis).

Enfin à J18, les inserts sont placés dans des plaques de culture 6 puits standards au format SBS (type plaque de la marque COSTAR référence 3506) avec 2,5ml de milieu culture pour TSKIN sous chaque insert.Finally, on D18, the inserts are placed in standard 6-well culture plates in SBS format (COSTAR brand plate type reference 3506) with 2.5ml of culture medium for TSKIN under each insert.

Par la suite ces plaques sont remplacées avec le milieu de culture au minimum tous les jours.Subsequently, these plates are replaced with the culture medium at least every day.

2.2- Expositions répétées du modèle T-Skin2.2- Repeated exposures of the T-Skin model TMTM .à l’ozone 0,1 ppm :.at ozone 0.1 ppm:

Pour ce type d’exposition le générateur d’ozone est réglé sur des valeurs basses :

  • Ozone généré en sortie d’appareil : environ 0,130 ppm pour une concentration mesurée à l’intérieur de l’incubateur inférieure à 0,1 ppm
  • Le débit de sortie de l’air enrichi en ozone au-dessus de chaque peau reconstruite est d’environ 20 ml/min (à noter que les sorties d’ozone sont à plus de 10cm des peaux reconstruites à l’intérieur de l’incubateur pour éviter un stress direct du flux de sortie).
For this type of exposure the ozone generator is set to low values:
  • Ozone generated at the device outlet: approximately 0.130 ppm for a concentration measured inside the incubator of less than 0.1 ppm
  • The output flow rate of ozone-enriched air above each reconstructed skin is approximately 20 ml/min (note that the ozone outlets are more than 10 cm from the reconstructed skins inside the incubator to avoid direct stress from the output flow).

Les expositions sont réalisées trois fois successivement : 18h entre J18 et J19, 18h entre J19 et J20, et 18h entre J20 et J21. Entre chaque exposition le modèle est à l’incubateur sans ozone pendant un peu moins de 6h.The exposures are carried out three times successively: 18 hours between D18 and D19, 18 hours between D19 and D20, and 18 hours between D20 and D21. Between each exposure the model is in the incubator without ozone for a little less than 6 hours.

Une fois les peaux prêtes à être exposées, les couvercles standards en polystyrène sont remplacés par des couvercles percés en PEEK ou en PTFE.Once the skins are ready for display, the standard polystyrene lids are replaced with perforated PEEK or PTFE lids.

Une partie des échantillons sont traités sous ozone, et une autre partie, les témoins, sont préparés exactement de la même façon, mais incubés dans un incubateur classique sans ozone.Part of the samples are treated under ozone, and another part, the controls, are prepared in exactly the same way, but incubated in a conventional incubator without ozone.

A J22, les échantillons de peaux reconstruites ont été prélevés, l’épiderme a été séparé du derme, coupé en deux et congelé à -80°C pour les analyses.At D22, the reconstructed skin samples were taken, the epidermis was separated from the dermis, cut in two and frozen at -80°C for analysis.

2.3- Expositions répétées du modèle T-Skin2.3- Repeated exposures of the T-Skin model TMTM .à l’ozone 0,4 ppm :.at ozone 0.4 ppm:

Pour ce type d’exposition le générateur d’ozone est réglé sur des valeurs modérées en ozone mais un peu supérieures à des pics réalistes d’ozone :

  • Ozone généré en sortie d’appareil : environ 0,4ppm pour une concentration mesurée à l’intérieur de l’incubateur inférieure à 0,3ppm
  • Le débit de sortie de l’air enrichi en ozone au-dessus de chaque peau reconstruite est d’environ 20 ml/min (à noter que les sorties d’ozone sont à plus de 10cm des peaux reconstruites à l’intérieur de l’incubateur pour éviter un stress direct du flux de sortie).
For this type of exposure the ozone generator is set to moderate ozone values but slightly higher than realistic ozone peaks:
  • Ozone generated at the device outlet: approximately 0.4 ppm for a concentration measured inside the incubator of less than 0.3 ppm
  • The output flow rate of ozone-enriched air above each reconstructed skin is approximately 20 ml/min (note that the ozone outlets are more than 10 cm from the reconstructed skins inside the incubator to avoid direct stress from the output flow).

Les expositions sont réalisées deux fois successivement : 18h entre J18 et J19, et 18h entre J20 et J21. Entre J19 et J20 et entre J21 et J22 les peaux reconstruites sont placées dans un incubateur sans ozone.The exposures are carried out twice successively: 18 hours between D18 and D19, and 18 hours between D20 and D21. Between D19 and D20 and between D21 and D22 the reconstructed skins are placed in an ozone-free incubator.

Une fois les peaux prêtes à être exposées, les plaques et milieux de culture sont à nouveau remplacés (pour éviter le risque d’avoir de la solution de matière première qui soit passée dans le milieu de culture sous l’insert durant l’application), et les couvercles standards en polystyrène sont remplacés par des couvercles percés en PEEK ou en PTFE.Once the hides are ready for exposure, the plates and culture media are replaced again (to avoid the risk of raw material solution having passed into the culture medium under the insert during application), and the standard polystyrene lids are replaced with perforated PEEK or PTFE lids.

Une partie des échantillons sont traités sous ozone, et une autre partie, les témoins, sont préparés exactement de la même façon, mais incubés dans un incubateur classique sans ozone.Part of the samples are treated under ozone, and another part, the controls, are prepared in exactly the same way, but incubated in a conventional incubator without ozone.

A J22, les échantillons de peaux reconstruites ont été prélevés, l’épiderme a été séparé du derme, coupé en deux et congelé à -80°C pour les analyses.At D22, the reconstructed skin samples were taken, the epidermis was separated from the dermis, cut in two and frozen at -80°C for analysis.

3-Exposition à l’ozone de peaux reconstruites3-Exposure to ozone of reconstructed skin in vivoin vivo

L’étude clinique a inclus 10 volontaires (8 femmes et 3 hommes), ayant un âge moyen de 36,2 ans, de phototype III-IV et une quantité de sébum mesurée sur le front supérieur à 140 µg/cm2(quantité de sébum de 146 à 299 µg/cm2).The clinical study included 10 volunteers (8 women and 3 men), with a mean age of 36.2 years, phototype III-IV and a quantity of sebum measured on the forehead greater than 140 µg/cm 2 (quantity of sebum from 146 to 299 µg/cm 2 ).

Les expositions en mini-zones ont été réalisées au CIDP à l’Ile Maurice à l’aide de cloches reliées à un générateur d’ozone, d’air médical ou à l’air ambiant, posées sur la peau du dos des volontaires (Controlled Pollution Exposure System (CPES)). Le système de génération d’ozone et les cloches utilisées sont décrits dans la publication Curpen et al., 2020 – A novel method for evaluating the effect of pollution on the human skin under controlled conditions, Skin Res Technol.). Les expositions à l’ozone et à l’air médical ont été réalisées de façon aléatoire gauche-droite sur chaque volontaire. 3 conditions ont été réalisées :

  • 6 expositions à 0,3 ppm (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), trois fois par semaine pendant 2 semaines. Chaque exposition a duré 2 heures.
  • 6 expositions à de l’air médical (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), selon le même protocole.
Mini-zone exposures were carried out at the CIDP in Mauritius using bells connected to an ozone generator, medical air or ambient air, placed on the skin of the volunteers' backs (Controlled Pollution Exposure System (CPES)). The ozone generation system and the bells used are described in the publication Curpen et al., 2020 – A novel method for evaluating the effect of pollution on the human skin under controlled conditions, Skin Res Technol.). Exposures to ozone and medical air were carried out randomly left-right on each volunteer. 3 conditions were carried out:
  • 6 exposures at 0.3 ppm (gas flow rate: 0.2-0.3 l/min), three times a week for 2 weeks. Each exposure lasted 2 hours.
  • 6 exposures to medical air (gas flow: 0.2-0.3 l/min), according to the same protocol.

Des D-squames ont été prélevés avant et 1h après chaque exposition à J1 (1 exposition), J5 (3 expositions) et J12 (6 expositions).D-scales were collected before and 1 hour after each exposure on D1 (1 exposure), D5 (3 exposures) and D12 (6 exposures).

4-Analyse de la méthionine sulfoxyde sur des échantillons de peaux reconstruites4-Analysis of methionine sulfoxide on samples of reconstructed skin in vitroin vitro ou des D-squamesor D-scales in vivoin vivo

4.1- Extraction pour l’analyse de la méthionine sulfoxyde4.1- Extraction for the analysis of methionine sulfoxide

Pour extraire la méthionine sulfoxyde, du méthanol est ajouté à chaque D-squame en petit flacon (1 mL). Il est agité durant 30 minutes à 37 °C, pour être ensuite repris en tube à hémolyse et évaporé à l’aide d’un concentrateur à vide. L’extrait évaporé, est repris avec 200 µL d’un mélange méthanol:isopropanol 2:1. Les échantillons sont mis au bain à ultrasons pendant 5 min et filtrés à 0,2 µm.To extract methionine sulfoxide, methanol is added to each D-squame in a small vial (1 mL). It is shaken for 30 minutes at 37 °C, then taken up in a hemolysis tube and evaporated using a vacuum concentrator. The evaporated extract is taken up with 200 µL of a methanol:isopropanol mixture 2:1. The samples are put in an ultrasonic bath for 5 min and filtered at 0.2 µm.

4.2- Méthode chromatographique pour l’analyse de la méthionine sulfoxyde: UPLC Vanquish (Thermofischer)4.2- Chromatographic method for the analysis of methionine sulfoxide: UPLC Vanquish (Thermofischer)

ColonneColumn Four
°COven
°C EluantsEluents Débit mL/minFlow rate mL/min %B T0%B T0 % B à T x% B at T x DuréeDuration Acquity CSH Fluoro-Phenyl – 2,1 x 150 x 1,7µm – WatersAcquity CSH Fluoro-Phenyl – 2.1 x 150 x 1.7µm – Waters 5050 A : Eau +0,1% d’acide formique

B: MéthanolA: Water +0.1% formic acid

B: Methanol 0,20.2 5%
0-0,8 min5%
0-0.8 min 0,7-2 min montée à 99%
2-3min 99%
3,1-7 min 5 %0.7-2 min rise to 99%
2-3 min 99%
3.1-7 min 5% 7 min7 min

% B T0 : pourcentage du solvant B à T0 = 0-0,8 min% B T0: percentage of solvent B at T0 = 0-0.8 min

%B à Tx : pourcentage de solvant B aux différents temps indiqués dans le tableau%B at Tx: percentage of solvent B at the different times indicated in the table

4.3- Paramètres du Spectromètre de masse Orbitrap Tribrid IDX Thermofisher4.3- Thermofisher Orbitrap Tribrid IDX Mass Spectrometer Settings

La détection du composé est réalisée à l’aide du détecteur Orbitrap, avec les paramètres suivants : Mode :
Scan :
Scan range :
Résolution : Full MS ESI
Positif
65 – 400
70 000 The detection of the compound is carried out using the Orbitrap detector, with the following parameters: Fashion :
Scan:
Scan range:
Resolution : Full MS ESI
Positive
65 – 400
70,000

RESULTATSRESULTS Méthionine sulfoxyde in vitroMethionine sulfoxide in vitro

Le tableau 2 montre que la quantité de méthionine sulfoxyde augmente dans des peaux reconstruites exposées à 0,1 ou 0,4 ppm d’ozone.Table 2 shows that the amount of methionine sulfoxide increases in reconstructed skin exposed to 0.1 or 0.4 ppm ozone.

[Table 2] Tableau 2 : Méthionine sulfoxyde quantifiée en unité arbitraire in vitro sur peaux reconstruites après exposition à l’ozone à 0,1 ou 0,4 ppm. Métabolite Non exposé Ecart-type Ozone
0,4 ppm Ecart-type Ozone
0,1 ppm Ecart-type Méthionine sulfoxyde 1 0,148 23,118 0,606 10,226 0,775 [Table 2] Table 2: Methionine sulfoxide quantified in arbitrary units in vitro on reconstructed skin after exposure to ozone at 0.1 or 0.4 ppm. Metabolite Not exposed Standard deviation Ozone
0.4 ppm Standard deviation Ozone
0.1 ppm Standard deviation Methionine sulfoxide 1 0.148 23,118 0.606 10,226 0.775

Méthionine sulfoxyde in vivoMethionine sulfoxide in vivo

Le tableau 3 montre que la quantité de méthionine sulfoxyde augmente dans des D-squames prélevés sur des volontaires exposés à l’ozone par rapport à ceux exposés à de l’air médical à J12 chez 8 volontaires sur 10.Table 3 shows that the amount of methionine sulfoxide increased in D-scales taken from volunteers exposed to ozone compared to those exposed to medical air on day 12 in 8 out of 10 volunteers.

[Table 3] Tableau 3 : Méthionine sulfoxyde quantifiée en unité arbitrairein vivoà Jour 12 après 6 expositions à l’ozone. Méthionine sulfoxyde Air médical Ozone Volontaire 1 2,514 7,019 Volontaire 2 1,352 1,625 Volontaire 3 4,370 6,325 Volontaire 4 3,012 3,734 Volontaire 5 3,098 NA Volontaire 6 2,488 2,962 Volontaire 7 4,358 2,388 Volontaire 8 1,670 2,141 Volontaire 9 7,027 21,035 Volontaire 11 2,330 2,601 [Table 3] Table 3: Methionine sulfoxide quantified in arbitrary unitsin vivoat Day 12 after 6 exposures to ozone. Methionine sulfoxide Medical air Ozone Volunteer 1 2,514 7,019 Volunteer 2 1,352 1,625 Volunteer 3 4,370 6,325 Volunteer 4 3,012 3,734 Volunteer 5 3,098 N / A Volunteer 6 2,488 2,962 Volunteer 7 4,358 2,388 Volunteer 8 1,670 2,141 Volunteer 9 7,027 21,035 Volunteer 11 2,330 2,601

Claims (6)

Méthode de diagnostic d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant la mesure de la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau dudit sujet.A method for diagnosing ozone exposure of the skin in a subject, said method comprising measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample from said subject. Méthode de diagnostic selon la revendication 1, comprenant l’étape suivante : sur la base la quantité mesurée, déterminer si la peau dudit sujet a été exposée à l’ozone après comparaison de la quantité mesurée de méthionine sulfoxyde avec une valeur de référence.A diagnostic method according to claim 1, comprising the following step: based on the measured amount, determining whether the skin of said subject has been exposed to ozone after comparing the measured amount of methionine sulfoxide with a reference value. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :
  1. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon étant traité avec ledit composé;
  2. comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ;
  3. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, lorsque la quantité méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé.
Method for identifying a compound for preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. measuring the amount of methionine sulfoxide in a skin sample of a subject, said sample being treated with said compound;
  2. comparing said quantity measured in step a) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample not treated with said compound;
  3. identify said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin, when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample which has not been treated with said compound.
Méthode selon la revendication 3, dans laquelle lesdits échantillons de peau sont choisi parmi : un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, une microbiopsie et un échantillon de stratum corneum.The method of claim 3, wherein said skin samples are selected from: a human skin explant, a skin biopsy, a microbiopsy and a stratum corneum sample. Méthode selon la revendication 3 ou 4 comprenant une étape supplémentaire d’exposition desdits échantillons à l’ozone.A method according to claim 3 or 4 comprising an additional step of exposing said samples to ozone. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes :
  1. effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé;
  2. effectuer une exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ;
  3. mesurer la quantité de méthionine sulfoxyde dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ;
  4. comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité de méthionine sulfoxyde dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ;
  5. identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité de méthionine sulfoxyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ;
étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois.Method for identifying a compound for preventing and/or treating the harmful effects of ozone on the skin, said method comprising the following steps:
  1. performing a treatment of a skin sample selected from keratinocytes, reconstructed epidermis and reconstructed skin, by bringing the skin sample into contact with said compound;
  2. carry out an ozone exposure of said skin sample;
  3. measuring the amount of methionine sulfoxide in the skin sample treated with said compound;
  4. comparing said quantity measured in step c) to the quantity of methionine sulfoxide in a skin sample exposed to ozone and not treated with said compound;
  5. identifying said candidate compound as a compound for preventing and/or treating the deleterious effects of ozone on the skin when the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has been treated with said compound is less than the amount of methionine sulfoxide measured in the skin sample that has not been treated with said compound;
it being understood that step b can be carried out after step a and vice versa, and that steps a and b can be repeated at least twice.
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR69007E (en) 1954-11-25 1958-08-27 Budd Co Improvements relating to a device intended for handling sheet metal
US20100267825A1 (en) * 2009-04-15 2010-10-21 Eukarion, Inc. Treatment of skin damage

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR69007E (en) 1954-11-25 1958-08-27 Budd Co Improvements relating to a device intended for handling sheet metal
US20100267825A1 (en) * 2009-04-15 2010-10-21 Eukarion, Inc. Treatment of skin damage

Non-Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. WISTHALER ET AL: "Atmospheric Chemistry Special Feature: Reactions of ozone with human skin lipids: Sources of carbonyls, dicarbonyls, and hydroxycarbonyls in indoor air", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, vol. 107, no. 15, 13 April 2010 (2010-04-13), pages 6568 - 6575, XP055024831, ISSN: 0027-8424, DOI: 10.1073/pnas.0904498106 *
BARBARA S. BERLETT: "Comparison of the Effects of Ozone on the Modification of Amino Acid Residues in Glutamine Synthetase and Bovine Serum Albumin", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 271, no. 8, 1 February 1996 (1996-02-01), US, pages 4177 - 4182, XP093165443, ISSN: 0021-9258, DOI: 10.1074/jbc.271.8.4177 *
BREANN COFFARO: "Reactions and Products of Squalene and Ozone: A Review", ENVIRONMENTAL SCIENCE & TECHNOLOGY, vol. 56, no. 12, 21 June 2022 (2022-06-21), US, pages 7396 - 7411, XP093163147, ISSN: 0013-936X, DOI: 10.1021/acs.est.1c07611 *
CLARE L. HAWKINS ET AL: "Detection, identification, and quantification of oxidative protein modifications", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 294, no. 51, 1 December 2019 (2019-12-01), US, pages 19683 - 19708, XP055767388, ISSN: 0021-9258, DOI: 10.1074/jbc.REV119.006217 *
CURPEN ET AL.: "A novel method for evaluating the effect of pollution on the human skin under controlled conditions", SKIN RES TECHNOL, 2020
DANAY CIBRIAN: "Metabolic Pathways That Control Skin Homeostasis and Inflammation", TRENDS IN MOLECULAR MEDICINE, vol. 26, no. 11, 1 November 2020 (2020-11-01), GB, pages 975 - 986, XP093166124, ISSN: 1471-4914, DOI: 10.1016/j.molmed.2020.04.004 *
FÁBIO ALESSANDRO DE FREITAS: "Impact of Oxysterols on Cell Death, Proliferation, and Differentiation Induction: Current Status", CELLS, vol. 10, no. 9, 3 September 2021 (2021-09-03), pages 2301, XP093155972, ISSN: 2073-4409, DOI: 10.3390/cells10092301 *
JIAFA ZENG: "A Novel Insight into the Ozone-Skin Lipid Oxidation Products Observed by Secondary Electrospray Ionization High-Resolution Mass Spectrometry", ENVIRONMENTAL SCIENCE & TECHNOLOGY, vol. 54, no. 21, 21 October 2020 (2020-10-21), US, pages 13478 - 13487, XP093155592, ISSN: 0013-936X, DOI: 10.1021/acs.est.0c05100 *
KOTIAHO T ET AL: "Electrospray mass and tandem mass spectrometry identification of ozone oxidation products of amino acids and small peptides", JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY FOR MASS SPECTROMETRY, ELSEVIER SCIENCE INC, US, vol. 11, no. 6, 1 June 2000 (2000-06-01), pages 526 - 535, XP004204302, ISSN: 1044-0305, DOI: 10.1016/S1044-0305(00)00116-1 *
LAKEY P S J ET AL: "Chemical kinetics of multiphase reactions between ozone and human skin lipids: Implications for indoor air quality and health effects", INDOOR AIR, MUNKSGAARD INTERNATIONAL PUBLISHERS, COPENHAGEN, DK, vol. 27, no. 4, 2 January 2017 (2017-01-02), pages 816 - 828, XP071765635, ISSN: 0905-6947, DOI: 10.1111/INA.12360 *
LUKE F. GAMON: "Oxidative Damage of Biomolecules by the Environmental Pollutants NO 2 - and NO 3 -", ACCOUNTS OF CHEMICAL RESEARCH, vol. 49, no. 10, 26 September 2016 (2016-09-26), US, pages 2136 - 2145, XP093165438, ISSN: 0001-4842, DOI: 10.1021/acs.accounts.6b00219 *
MATHIAS ANTOINE: "Oxidation of amino acids, peptides and proteins by ozone: a review.", 14 September 2006 (2006-09-14), XP093166018, Retrieved from the Internet <URL:https://hal.univ-lorraine.fr/tel-01746971v1/file/SCD_T_2006_0169_ANTOINE.pdf> *
POIROT MARC ET AL: "Cholesterol-5,6-epoxides: Chemistry, biochemistry, metabolic fate and cancer", BIOCHIMIE, MASSON, PARIS, FR, vol. 95, no. 3, 18 May 2012 (2012-05-18), pages 622 - 631, XP028982113, ISSN: 0300-9084, DOI: 10.1016/J.BIOCHI.2012.05.006 *
SILAS ARANDAS MONTEIRO E SILVA: "An overview about oxidation in clinical practice of skin aging", ANAIS BRASILEIROS DE DERMATOLOGIA, vol. 92, no. 3, 1 June 2017 (2017-06-01), BR, pages 367 - 374, XP093165441, ISSN: 0365-0596, DOI: 10.1590/abd1806-4841.20175481 *
VALTER TRAVAGLI: "The Biological and Molecular Action of Ozone and Its Derivatives: State-of-the-Art, Enhanced Scenarios, and Quality Insights", INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, vol. 24, no. 10, 9 May 2023 (2023-05-09), Basel, CH, pages 8465, XP093166112, ISSN: 1422-0067, DOI: 10.3390/ijms24108465 *
VIRENDER K. SHARMA: "Oxidation of Amino Acids, Peptides and Proteins by Ozone: A Review", OZONE: SCIENCE AND ENGINEERING., vol. 32, no. 2, 15 April 2010 (2010-04-15), US, pages 81 - 90, XP093166004, ISSN: 0191-9512, DOI: 10.1080/01919510903510507 *

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