FR3018448A1

FR3018448A1 - ACTIVE PRINCIPLE OBTAINED FROM ALGAE HYPNEA MUSCIFORMIS AND COSMETIC USES

Info

Publication number: FR3018448A1
Application number: FR1452028A
Authority: FR
Inventors: Jean Paufique
Original assignee: Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Current assignee: Societe Industrielle Limousine dApplication Biologique SA SILAB
Priority date: 2014-03-12
Filing date: 2014-03-12
Publication date: 2015-09-18
Anticipated expiration: 2034-03-12
Also published as: FR3018448B1

Abstract

L'objet de l'invention est l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique pour raffermir la peau, ainsi qu'un principe actif particulier obtenu à partir d'Hypnea Musciformis. L'invention se rapporte également aux compositions cosmétiques incluant ce principe actif et à un procédé cosmétique de traitement de la peau.The object of the invention is the use of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis as a cosmetic active ingredient in a cosmetic composition for firming the skin, as well as a particular active ingredient obtained from Hypnea Musciformis. . The invention also relates to cosmetic compositions including this active ingredient and to a cosmetic process for treating the skin.

Description

PRINCIPE ACTIF OBTENU A PARTIR DE L'ALGUE HYPNEA MUSCIFORMIS ET UTILISATIONS COSMETIQUES La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis. L'invention concerne également un principe actif particulier obtenu à partir de Hypnea musciformis, les compositions cosmétiques l'incluant et un procédé de traitement cosmétique.FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to the cosmetic use of an active ingredient obtained from Hypnea musciformis. The invention also relates to a particular active ingredient obtained from Hypnea musciformis, the cosmetic compositions including it and a cosmetic treatment method.

Depuis quelques années, des recherches ont démontré l'implication des produits de glycation dans le vieillissement cutané tant au niveau cellulaire qu'au niveau tissulaire. Les AGE (« Advanced Glycation End Products » ou « produits de glycation avancée »), produits de la glycation, s'accumulent dans les tissus au cours du vieillissement chronologique où ils s'associent aux protéines de la matrice extracellulaire. Le collagène glyqué peut être présent dans le derme dès l'âge de 20 ans et augmente jusqu'à représenter 30 à 50% du collagène chez les individus de 80 ans. Les collagènes, la fibronectine ou encore l'élastine constituent des cibles privilégiées et leur modification joue une part importante dans la perte d'élasticité et la rigidité tissulaire qui apparaît avec l'âge. De plus, les AGE peuvent être formés en intracellulaire où ils modifient les protéines, les lipides ou encore les acides nucléiques, si bien que les interactions enzymes-substrats et les fonctions physiologiques associées sont altérées. La glycation est ainsi à l'origine de nombreux signes du vieillissement cutané, tels que les rides, le relâchement cutané, les désordres dépigmentaires ou les troubles de la cicatrisation. Ce phénomène augmente avec l'âge et contribue de ce fait à l'accélération du vieillissement. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique capable de protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et de la glycation tissulaire. Pour y répondre, l'invention vise l'utilisation d'un actif obtenu à partir de l'algue Hypnea musciformis.In recent years, research has demonstrated the involvement of glycation products in skin aging at both the cellular and tissue levels. Advanced glycation end products (AGEs), which are products of glycation, accumulate in tissues during chronological aging as they associate with extracellular matrix proteins. Glyca collagen can be present in the dermis at the age of 20 and increases to 30-50% of collagen in 80-year-olds. Collagens, fibronectin or elastin are prime targets and their modification plays an important part in the loss of elasticity and tissue stiffness that appears with age. In addition, the AGEs can be formed intracellularly where they modify the proteins, the lipids or the nucleic acids, so that the enzyme-substrate interactions and the associated physiological functions are altered. Glycation is thus at the origin of many signs of skin aging, such as wrinkles, sagging skin, depigmentary disorders or disorders of healing. This phenomenon increases with age and contributes to the acceleration of aging. The objective of the present invention is to provide a cosmetic active ingredient capable of protecting the skin from the deleterious effects of cellular glycation and tissue glycation. In order to meet them, the invention aims to use an active ingredient obtained from the alga Hypnea musciformis.

Hypnea musciformis est une algue rouge de la famille des Cystocloniacées ou Hypneacées. Elle est cultivée commercialement pour la production de kappa carraghénanes. Du fait de ces propriétés gélifiantes, épaississantes et stbilisantes, l'hypnéa musciformis est utilisée dans la charcuterie et dans la plus part des desserts lactés industriels. L'extrait de Hypnéa riche en composés antioxydants a déjà été utilisé en cosmétique, notamment dans les colorants, les capillaires, les conditionneurs, les shampoings et les produits solaires, mais jamais pour le soin de la peau. L'invention vise donc un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis pour son application comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique destinée au soin de la peau en particulier pour protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et de la glycation tissulaire.Hypnea musciformis is a red algae of the Cystocloniaceae or Hypneacea family. It is grown commercially for the production of carrageenan kappa. Because of these gelling properties, thickening and stabilizing, hypnea musciformis is used in cold cuts and in most industrial milk desserts. Hypnea extract rich in antioxidant compounds has already been used in cosmetics, especially in dyes, hair, conditioners, shampoos and sun products, but never for skin care. The invention therefore relates to an active ingredient obtained from Hypnea musciformis for its application as a cosmetic active ingredient in a cosmetic composition intended for the care of the skin, in particular for protecting the skin from the deleterious effects of cellular glycation and tissue glycation.

L'utilisation d'un actif obtenu à partir de Hypnea musciformis comme principe actif cosmétique sur la peau permet en effet en particulier de réduire la production des AGE et de limiter ainsi les dégâts induits sur les fibroblastes dermiques et leur environnement. L'invention permet ainsi de préserver l'organisation des fibres du derme pour une peau ferme et élastique, et de lutter contre les phénomènes du vieillissement prématuré.The use of an active ingredient obtained from Hypnea musciformis as a cosmetic active ingredient on the skin makes it possible in particular to reduce the production of AGEs and thus to limit the damage induced on dermal fibroblasts and their environment. The invention thus makes it possible to preserve the organization of the dermis fibers for a firm and elastic skin, and to combat the phenomena of premature aging.

L'invention vise aussi un procédé cosmétique de soin de la peau pour un effet raffermissant et/ou anti-âge comprenant l'application sur la peau d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis. L'invention a également pour objet un principe actif cosmétique particulier à savoir un principe actif cosmétique obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates, en particulier un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant des galactanes, notamment des galactanes présentant un degré de polymérisation compris entre 20 et 430 soit un poids moléculaire compris 3600 et 77000 Da. L'invention concerne également les compositions incluant un tel principe actif. La présente invention est maintenant décrite en détail.The invention also relates to a cosmetic skin care method for a firming and / or anti-aging effect comprising the application to the skin of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis. The subject of the invention is also a particular cosmetic active ingredient, namely a cosmetic active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising at least 40% by weight of carbohydrates, in particular an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising galactans. , in particular galactans having a degree of polymerization of between 20 and 430, ie a molecular weight of between 3600 and 77000 Da. The invention also relates to compositions including such an active ingredient. The present invention is now described in detail.

Selon un premier aspect, l'invention vise donc l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de l'algue Hypnea Musciformis comme principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) au soin de la peau. En particulier le principe actif selon l'invention et/ou la composition l'incluant peuvent être utilisés pour : - protéger la peau des effets délétères de la glycation cellulaire et/ou de la glycation tissulaire, - à raffermir la peau, - à augmenter l'élasticité et la fermeté de la peau, - à préserver la fonctionnalité du derme, - à lutter contre le vieillissement cutané. Au niveau intracellulaire, la formation des AGE conduit à une modification profonde de la physiologie du fibroblaste tant d'un point de vue métabolique que fonctionnel. Parmi les cibles majeures des produits de glycation, on peut citer en particulier la vimentine. La vimentine est un filament intermédiaire du cytosquelette dont la présence est nécessaire à la fonctionnalité du fibroblaste et à l'exécution de fonctions vitales telles que la migration ou la cicatrisation. Sa déstructuration est associée à l'accélération du processus de vieillissement. Or, en présence d'AGE, la distribution de la vimentine est considérablement altérée et redistribuée en agrégats péri-nucléaires appelés « aggrésomes » qui vont réduire les propriétés de prolifération, de migration et de contraction des fibroblastes. Les enzymes, protéines intracellulaires, peuvent être également la cible des AGE. Sous l'effet des AGE, ces protéines sont inactivées et perdent leur action biologique. En particulier la glycation a des effets délétères sur l'activité enzymatique de la lysyl oxidase, enzyme clé de la synthèse du collagène qui permet l'assemblage en fibrilles et la formation d'une matrice fonctionnelle. L'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis sur la peau permet de neutraliser la production des AGE dans les fibroblastes et de limiter leur accumulation, et ainsi : - de protéger le cytosquelette en maintenant l'organisation de la vimentine - de préserver les capacités de synthèse des protéines de la matrice extracellulaire en maintenant l'activité enzymatique de la lysyl oxidase. En plus de leur formation au niveau intracellulaire, la biogenèse des AGE s'effectue également dans les tissus. L'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis sur la peau permet de contrôler la glycation, en particulier de diminuer la production des AGE et consécutivement la glycation du collagène, et ainsi : - de préserver le réseau matriciel en maintenant la formation de réseau des fibres de collagène et de fibrilline - de préserver les capacités de contraction des fibroblastes.According to a first aspect, the invention therefore aims at the use of an active ingredient obtained from the alga Hypnea Musciformis as a cosmetic active ingredient in a cosmetic composition, said active ingredient and / or said composition being intended for skin care. In particular, the active ingredient according to the invention and / or the composition comprising it can be used to: - protect the skin from the deleterious effects of cellular glycation and / or tissue glycation, - to firm the skin, - to increase the elasticity and the firmness of the skin, - to preserve the functionality of the dermis, - to fight against skin aging. At the intracellular level, the formation of EFAs leads to a profound change in fibroblast physiology from both a metabolic and functional point of view. Among the major targets of the glycation products, mention may in particular be made of vimentin. Vimentin is an intermediate filament of the cytoskeleton whose presence is necessary for the functionality of the fibroblast and the performance of vital functions such as migration or scarring. Its destructuring is associated with the acceleration of the aging process. However, in the presence of AGE, the distribution of vimentin is considerably altered and redistributed into peri-nuclear aggregates called "aggrésomes" which will reduce the proliferation, migration and contraction properties of fibroblasts. Enzymes, intracellular proteins, can also be targeted by AGEs. Under the effect of EFAs, these proteins are inactivated and lose their biological action. In particular, glycation has deleterious effects on the enzymatic activity of lysyl oxidase, a key enzyme in collagen synthesis that allows assembly into fibrils and the formation of a functional matrix. The use of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis on the skin makes it possible to neutralize the production of AGEs in fibroblasts and to limit their accumulation, and thus: - to protect the cytoskeleton by maintaining the organization of the vimentin - to preserve the synthetic capacities of extracellular matrix proteins by maintaining the enzymatic activity of lysyl oxidase. In addition to their formation at the intracellular level, the biogenesis of AGEs is also carried out in tissues. The use of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis on the skin makes it possible to control the glycation, in particular to reduce the production of AGEs and consequently the glycation of the collagen, and thus: to preserve the matrix network while maintaining the network formation of collagen fibers and fibrillin - to preserve the contraction abilities of fibroblasts.

Selon l'invention, un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les phénomènes de glycation : - au niveau cellulaire : o pour prévenir l'altération du cytosquelette o pour préserver l'activité métabolique - au niveau tissulaire : o pour soutenir la formation du réseau matriciel o pour empêcher la rigidification des fibres de la matrice. En diminuant les produits de glycation et en limitant les dommages cellulaires et tissulaires induits par ces derniers, l'utilisation d'un principe actif selon invention permet de préserver la fonctionnalité des fibroblastes et l'intégrité du derme en assurant la synthèse et la protection des protéines de la matrice dermique. La peau conserve son élasticité et sa fermeté. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates, en particulier comprenant des galactanes, et encore plus particulièrement un principe actif tel que décrit en suivant. Le principe actif cosmétique utile selon l'invention est préférentiellement un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis comprenant au moins 40% en poids de carbohydrates.According to the invention, an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis can therefore be used to protect the skin against glycation phenomena: at the cellular level: to prevent alteration of the cytoskeleton to preserve the metabolic activity; tissue level: o to support the formation of the matrix network o to prevent stiffening of the fibers of the matrix. By reducing the glycation products and by limiting the cell and tissue damage induced by the latter, the use of an active ingredient according to the invention makes it possible to preserve the functionality of the fibroblasts and the integrity of the dermis by ensuring the synthesis and protection of the dermal matrix proteins. The skin retains its elasticity and firmness. According to a particularly suitable embodiment, the invention relates to the use of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising at least 40% by weight of carbohydrates, in particular comprising galactans, and even more particularly an active ingredient such as as described in following. The active cosmetic ingredient useful according to the invention is preferably an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising at least 40% by weight of carbohydrates.

Préférentiellement il comprend des galactanes et encore plus préférentiellement des galactanes présentant un degré de polymérisation compris entre 20 et 430. Ce degré de polymérisation correspond à un poids moléculaire des galactanes compris entre 3600 Da et 77000 Da. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l'invention comprend au moins 40% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matières sèches. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat d'Hypnea Musciformis, encore plus préférentiellement un hydrolysat enzymatique, en particulier un hydrolysat obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique des carbohydrates d'Hypnea 30 Musciformis. Le principe actif présente préférentiellement une couleur jaune très clair.Preferentially it comprises galactans and even more preferably galactans having a degree of polymerization of between 20 and 430. This degree of polymerization corresponds to a molecular weight of the galactans ranging between 3600 Da and 77000 Da. According to a particularly suitable embodiment, the active ingredient according to the invention comprises at least 40% of carbohydrates by weight relative to the total weight of solids. Preferentially, it is a hydrolyzate of Hypnea Musciformis, more preferably an enzymatic hydrolyzate, in particular a hydrolyzate obtained by a process comprising at least one enzymatic hydrolysis of the carbohydrates of Hypnea Musciformis. The active ingredient preferably has a very light yellow color.

Il peut se présenter sous forme liquide et peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 10 et 150 g/I, préférentiellement entre 19 et 30 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 3,0 et 5,0 préférentiellement entre 3,8 et 4,8.It can be in liquid form and can be defined by at least one of the characteristics set out below, all of them being preferred. Dry matter: The dry matter content of an active ingredient according to the invention (measured by passing in an oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of initial weight given until a constant weight is obtained ) may be between 10 and 150 g / l, preferably between 19 and 30 g / l. PH measurement: The pH (measured by the potentiometric method at room temperature) can be between 3.0 and 5.0, preferably between 3.8 and 4.8.

Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCAN®). La teneur en cendres brutes est déterminée en pourcentage de poids par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. Elle est comprise entre 15 et 29% en poids de matières sèches. Teneur en carbohydrates On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention.Crude ash content: The raw ash content is determined by the weighing of residues from incineration at 550 ° C in an electric muffle furnace (VULCAN®). The raw ash content is determined as a percentage of weight relative to the total weight of the dry matter of the active ingredient. It is between 15 and 29% by weight of solids. Carbohydrate content The DUBOIS method is used. In the presence of concentrated sulfuric acid and phenol, the reducing sugars give an orange-yellow compound. From a standard range, it is possible to determine the level of carbohydrates of an active ingredient according to the invention.

Le taux de carbohydrates d'un principe actif selon l'invention mesuré par la méthode de DUBOIS est préférentiellement supérieur à 40% en poids de matières sèches, encore plus préférentiellement supérieur à 55%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. La caractérisation par chromatographie en phase gazeuse (CPG) de la fraction glucidique du principe actif selon l'invention montre qu'il se caractérise par une fraction carbohydrates composée majoritairement de galactanes de degré de polymérisation compris entre 20 et 430 et de poids moléculaire compris entre 3600 Da et 77 000 Da.30 Identification de la fraction active Afin de déterminer la fraction active, les espèces moléculaires d'un principe actif selon l'invention ont été fractionnées : - une fraction A contenant les cendres du principe actif : La fraction cendres est obtenue par resolubilisation des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique. Le résidu est repris dans 5 mL d'eau distillée. La solution grisâtre obtenue est filtrée. La fraction récupérée contient 100% des cendres du principe actif. - une fraction B contenant les carbohydrates neutres : Les carbohydrates neutres sont purifiés par adsorption successive des composés cationiques puis anioniques sur des résines ioniques. La composition de la fraction B est déterminée par dosages spectrophotométriques ; les sucres sont dosés selon la méthode de Dubois et les protéines selon la méthode de Lowry. La fraction B contient 90% des sucres du principe actif et pas de protéines. - une fraction C correspondant à l'hydrolyse acide du principe actif. Le principe actif est soumis à une hydrolyse acide. La solution est ensuite neutralisée. La fraction C est analysée par chromatographie liquide ionique et comparée au principe actif. Cette analyse permet de quantifier les sucres présents sous forme libre et sous forme liée. La fraction C ne contient que des sucres libres.The level of carbohydrates of an active ingredient according to the invention measured by the DUBOIS method is preferably greater than 40% by weight of solids, more preferably greater than 55%. Carbohydrate Characterization The HPLC analysis of an active ingredient according to the invention makes it possible to determine the distribution of the molecular weights of the carbohydrate moiety. Characterization by gas chromatography (GC) of the carbohydrate moiety of the active ingredient according to the invention shows that it is characterized by a carbohydrate moiety predominantly composed of galactans of degree of polymerization between 20 and 430 and molecular weight between 3600 Da and 77 000 Da.30 Identification of the active fraction In order to determine the active fraction, the molecular species of an active ingredient according to the invention were fractionated: a fraction A containing the ashes of the active ingredient: the ash fraction is obtained by resolubilization of residues from incineration at 550 ° C in an electric muffle furnace. The residue is taken up in 5 mL of distilled water. The greyish solution obtained is filtered. The recovered fraction contains 100% of the ashes of the active ingredient. a fraction B containing the neutral carbohydrates: The neutral carbohydrates are purified by successive adsorption of the cationic and then anionic compounds on ionic resins. The composition of fraction B is determined by spectrophotometric assays; the sugars are determined according to the Dubois method and the proteins according to the method of Lowry. Fraction B contains 90% of the sugars of the active ingredient and no protein. a fraction C corresponding to the acid hydrolysis of the active principle. The active ingredient is subjected to acid hydrolysis. The solution is then neutralized. Fraction C is analyzed by ionic liquid chromatography and compared with the active principle. This analysis makes it possible to quantify the sugars present in free form and in bound form. Fraction C contains only free sugars.

A titre illustratif, les résultats d'analyse de la fraction C obtenus avec le principe actif de l'exemplel sont présentés dans le tableau 1 ci-dessous : Principe actif selon Fraction C du principe actif l'invention selon l'invention Sucres libres 8% 100% (Galactose libre majoritaire) Sucres liés 95% 0% (Galactose lié majoritaire) Tableau 1 L'efficacité de ces trois fractions A, B et C à limiter la réaction de glycation du collagène a été évaluée et comparée à celle du principe actif. Le protocole opératoire mis en oeuvre est celui décrit au point II.A.2.a.By way of illustration, the analysis results of the fraction C obtained with the active principle of the exemplel are shown in Table 1 below: Active principle according to Fraction C of the active principle according to the invention Free sugars 8 % 100% (Major free galactose) 95% 0% bound sugar (Major bound galactose) Table 1 The effectiveness of these three fractions A, B and C in limiting the glycation reaction of collagen was evaluated and compared to that of the principle active. The operating protocol implemented is that described in II.A.2.a.

A titre d'exemple, les résultats d'efficacité pour les fractions A, B et C du principe actif de l'exemple 1 sont présentés dans le tableau 2 ci-après : Intensité de Efficacité / Témoin fluorescence (UA) « glyqué »(%) Témoin collagène non glyqué 436 Témoin collagène glyqué 23 814 Principe actif 1,0% 13 414 -44% Fraction A 1,0`)/0 23 881 0% Fraction B 1,0% 14 133 -41% Fraction C 1,0`)/0 24 061 0% Tableau 2 La fraction B présente une efficacité comparable à celle du principe actif selon l'invention. La fraction B joue donc un rôle primordial dans l'efficacité du principe actif. D'autre part, la fraction C ne possède plus d'efficacité. Or cette fraction contient l'ensemble des sucres de l'actif mais uniquement sous forme libre. Ce sont les sucres présents dans le principe actif sous forme liée qui sont responsables de l'efficacité. Ce sont donc en particulier les galactanes de poids moléculaire compris entre 3600 Da (degré de polymérisation 20) et 77 000 Da (degré de polymérisation 430) qui jouent un rôle primordial dans l'efficacité du principe actif. Le principe actif selon l'invention est obtenu par un procédé permettant d'obtenir des galactanes de degré de polymérisation compris entre 20 et 430 à partir d'Hypnea Musciformis.By way of example, the efficacy results for fractions A, B and C of the active principle of Example 1 are shown in Table 2 below: Efficiency Intensity / Fluorescence Control (AU) "glycated" ( %) Non-glycated collagen control 436 Glycated collagen control 23,814 Active ingredient 1,0% 13,414 -44% Fraction A 1,0`) / 0 23,881 0% Fraction B 1,0% 14,133 -41% Fraction C 1 The fraction B has an efficiency comparable to that of the active principle according to the invention. The fraction B plays a key role in the effectiveness of the active ingredient. On the other hand, the fraction C no longer has any efficiency. But this fraction contains all the sugars of the active but only in free form. It is the sugars present in the active ingredient in bound form that are responsible for the effectiveness. It is therefore in particular the galactans of molecular weight between 3600 Da (degree of polymerization 20) and 77 000 Da (degree of polymerization 430) which play a key role in the effectiveness of the active ingredient. The active ingredient according to the invention is obtained by a process making it possible to obtain galactans with a degree of polymerization of between 20 and 430 from Hypnea Musciformis.

II est préférentiellement obtenu par un procédé comprenant au moins une hydrolyse enzymatique des carbohydrates. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre d'Hypnéa musciformis dans l'eau - séparation des phases solubles et insolubles par filtration - hydrolyse enzymatique des carbohydrates - traitement thermique - filtration.It is preferably obtained by a process comprising at least one enzymatic hydrolysis of the carbohydrates. A particularly suitable process comprises at least the following succession of steps: - solubilization of Hypnea musciformis powder in water - separation of soluble and insoluble phases by filtration - enzymatic hydrolysis of carbohydrates - heat treatment - filtration.

Des étapes supplémentaires de filtration et filtration stérilisante peuvent être envisagées. Des étapes de désodorisation et de décoloration ou de concentration peuvent être ajoutées. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs présentant les caractéristiques de l'invention.Additional steps of filtration and sterilizing filtration can be considered. Deodorization and bleaching or concentration steps can be added. The parameters of the various steps must be adjusted in order to obtain active ingredients having the characteristics of the invention.

Ces étapes sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes ou de levures et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis tel que décrit précédemment, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,1 et 3% de principe(s) actif(s) obtenu(s) à partir d'Hypnea Musciformis selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.These steps are usual in the field of active extractions from plants or yeasts and the skilled person is able to adjust the reaction parameters on the basis of his general knowledge. The present invention also covers cosmetic compositions including an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis as described above, in different galenic forms, adapted for topical administration to the skin. These compositions may especially be in the form of oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions (Water / Oil / Water or Oil / Water / Oil) which may be optionally microemulsions or nanoemulsions, or in the form of solutions, suspensions, hydrodispersions, aqueous gels or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form. It may be compositions comprising between 0.1 and 3% of active principle (s) obtained (s) from Hypnea Musciformis according to the present invention. These compositions comprise, in addition to the active agent, a physiologically acceptable and preferably cosmetically acceptable medium, that is to say which does not cause unacceptable sensations of discomfort for the user such as redness, tightness or tingling. The compositions according to the invention may contain as adjuvant at least one compound chosen from: oils, which may be chosen in particular from silicone oils, linear or cyclic, volatile or non-volatile; waxes, such as ozokerite, polyethylene wax, beeswax or carnauba wax; silicone elastomers; surfactants, preferably emulsifiers, whether they are nonionic, anionic, cationic or amphoteric; co-surfactants, such as linear fatty alcohols; thickeners and / or gelling agents, humectants, such as polyols such as glycerine; organic filters, inorganic filters, dyes, preservatives, fillers, tensors, sequestering agents, perfumes, and mixtures thereof, without this list being limiting.

Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour le soin de la peau humaine. En particulier, l'invention vise un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à un effet raffermissant et/ou antivieillissement de la peau, comprenant l'application topique au moins une fois par jour d'une composition renfermant un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis. Afin d'illustrer les effets cosmétiques sur la peau d'un principe actif obtenu à partir d'Hypnea Musciformis, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés.Examples of such adjuvants are cited in particular in the CTFA Dictionary (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook published by the Personal Care Product Council). Of course, those skilled in the art will take care to choose any additional compounds, active or non-active, and their amount, so that the advantageous properties of the mixture are not, or not substantially, impaired by the addition envisaged. These compositions are especially intended to be used for the care of human skin. In particular, the invention relates to a cosmetic process for the care of human skin, intended for a firming and / or anti-aging effect of the skin, comprising the topical application at least once a day of a composition containing an active principle obtained from Hypnea Musciformis. In order to illustrate the cosmetic effects on the skin of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis, the following examples with their test results are presented.

I. EXEMPLES 1.1 Exemple 1 : Principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de 50g de poudre d'Hypnéa musciformis dans 11 d'eau - séparation des phases solubles et insolubles par filtration - hydrolyse enzymatique des carbohydrates à l'aide d'une carbohydrase - traitement thermique à 80°C pendant 30mn - filtration afin de sélectionner les carbohydrates de taille entre 3600 et 77000Da. Un principe actif obtenu par ce procédé présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : jaune très clair - teneur en matières sèches : 25,0 g/I - teneur en cendres : 22% - teneur en carbohydrates : 14,7 g/I soit 59% - pH : 4,3 1.2 Exemple 2 : Principe actif selon l'invention Un autre exemple de principe actif susceptible d'être obtenu selon l'invention présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : jaune très clair - teneur en matières sèches : 28,3 g/I - teneur en cendres : 21% - teneur en carbohydrates : 18,7 g/I soit 66% - pH : 4,1 1.3 Exemple 3 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème fluide Phase A. Eau qsp 100% glycérine 10% Phase B. Montanov 202 (Seppic) 2% DUB 1632 (Stéarinerie Dubois) 3% DUB BA (Stéarinerie Dubois) 5,6% DUB MCT5545 (Stéarinerie Dubois) 5% Alcool Stéarilique 2% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.I. EXAMPLES 1.1 EXAMPLE 1 Active Principle According to the Invention An example of a process for obtaining an active ingredient according to the invention comprises the implementation of the following steps: solubilization of 50 g of Hypnea musciformis powder in 11 water - separation of soluble and insoluble phases by filtration - enzymatic hydrolysis of carbohydrates using a carbohydrase - heat treatment at 80 ° C for 30 minutes - filtration to select carbohydrates of size between 3600 and 77000Da. An active ingredient obtained by this process has the following characteristics: - appearance: clear liquid - color: very light yellow - dry matter content: 25.0 g / I - ash content: 22% - carbohydrate content: 14.7 g / I is 59% - pH: 4.3 1.2 Example 2: Active principle according to the invention Another example of active ingredient obtainable according to the invention has the following characteristics: - appearance: clear liquid - color: very light yellow - dry matter content: 28.3 g / I - ash content: 21% - carbohydrate content: 18.7 g / I, ie 66% - pH: 4.1 1.3 Example 3: Use of a active ingredient according to the invention in a fluid cream Phase A. Water qs 100% glycerine 10% Phase B. Montanov 202 (Seppic) 2% DUB 1632 (Stéarinerie Dubois) 3% DUB BA (Stéarinerie Dubois) 5.6% DUB MCT5545 (Stéarinerie Dubois) 5% Stearyl alcohol 2% Phase C. Active principle according to the invention 3% Preservative 0.7% The quantities indicated n / a Data in percent weight.

Cette émulsion, blanche, fluide et brillante, sans odeur présente un pH de 5. En application topique, elle présente une préhension aisée, un étalement souple et glissant, une pénétration assez rapide, une sensation douce, un fini doux et sec et un effet mat.This emulsion, white, fluid and shiny, without odor has a pH of 5. In topical application, it presents an easy grip, a smooth and slippery spreading, a fast penetration, a soft feeling, a soft and dry finish and an effect mast.

Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - Mélanger B. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 1500 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1500 tr/min. - Laisser agiter (à 1200 tr/min) jusqu'à refroidissement pour une homogénéisation complète. 1.4 Exemple 4 Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un baume nourrissant Phase A. Eau qsp 100% Propylene glycol 5% Phase B. DUB liquid 85 (Stéarinerie Dubois) 10% AAB2 (Aiglon) 2% DUB1632 (Stéarinerie Dubois) 5% lsopropyl palmitate 5% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion blanche très ferme avec une odeur légère présente un pH de 6. En application topique, elle présente une préhension facile, une sensation fraîche, un étalement glissant et soyeux, une pénétration immédiate et un fini sec. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Mélanger B. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 1200 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1000 tr/min. - Laisser agiter, en diminuant peu à peu la vitesse d'agitation, jusqu'à complète homogénéisation. 1.5 Exemple Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un sérum gel Phase A. Eau qsp 100% Easynov (Seppic) 3% Glycérine 5,5% Carbopol Ultrez 10 (Novéon) 1,2% Montanox 60 (Seppic) 3,5% Phase B. Beurre de karité 1% Phase C. DC5200 (Dow Corning) 5% DC200 (Dow Corning) 10% Phase D. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% Micropearl M100 (Seppic) 1,6% Phase E. NaOH qsp pH 5,3 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A. Heat in a water bath at 80 ° C. with magnetic stirring, - Mix B. Heat in a water bath at 80 ° C. with magnetic stirring. Emulsify B in A under a stator rotor at 1500 rpm. - At 30 ° C, add C, in the order indicated, under a stator rotor at 1500 rpm. - Leave to stir (at 1200 rpm) until cool for complete homogenization. 1.4 Example 4 Use of an active ingredient according to the invention in a nourishing balm Phase A. Water qs 100% Propylene glycol 5% Phase B. DUB liquid 85 (Stéarinerie Dubois) 10% AAB2 (Aiglon) 2% DUB1632 (Stéarinerie Dubois ) 5% lsopropyl palmitate 5% Phase C. Active ingredient according to the invention 3% Preservative 0.7% The amounts indicated are given as a percentage by weight. This very firm white emulsion with a slight odor has a pH of 6. In topical application, it has an easy grip, a cool feeling, a silky smooth spread, immediate penetration and a dry finish. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A. Heat in a water bath at 80 ° C. with magnetic stirring. - Mix B. Heat in a water bath at 80 ° C with magnetic stirring. Emulsify B in A under a stator rotor at 1200 rpm. - At 30 ° C., add C, in the order indicated, under a stator rotor at 1000 rpm. - Leave to stir, gradually decreasing the stirring speed, until complete homogenization. 1.5 Example Use of an active ingredient according to the invention in a serum gel Phase A. Water qs 100% Easynov (Seppic) 3% Glycerin 5.5% Carbopol Ultrez 10 (Novéon) 1.2% Montanox 60 (Seppic) 3 , 5% Phase B. 1% Shea butter Phase C. DC5200 (Dow Corning) 5% DC200 (Dow Corning) 10% Phase D. Active ingredient according to the invention 3% Preservative 0.7% Micropearl M100 (Seppic) 1 , 6% Phase E. NaOH qsp pH 5.3 The amounts given are given as a percentage by weight.

Ce gel émulsionné, écru, onctueux et brillant, sans odeur présente un pH de 5,3. En application topique il présente une préhension légère, une application souple, un étalement agréable et glissant, une pénétration rapide, un effet « eau » et un fini doux. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Chauffer B, au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 2000 tr/min. - A 60°C, ajouter C, continuer à émulsionner sous rotor stator à 1800 tr/min. - A 30 °C, ajouter D, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1500 tr/min, et ajuster aussitôt le pH avec E. - Laisser refroidir sous agitation (1500 tr/min), en vérifiant l'homogénéisation. 1.6 Exemple Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel douceur Phase A. Eau qsp 100% Satialgine US551 (Degussa) 0,6% Phase B. Sophiderm (Sophim) 2% Montanov 202 (Seppic) 2% Montanov 68 (Seppic) 3% Montanov 82 (Seppic) 1% Alcool cétéarylique 1% DUB PIS (Stéarinerie Dubois) 1% Patlac IL (Rita) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention 3% Conservateur 0,7% MGESVPH (FACI) 2% Phase D. TiO2 1% Kaolin and iron oxide (Cl R102) (Sensient) 0,4% Cl 77492 (Sensient) 1% Cl 77491 (Laboratoires Hytech) 0,24% Cl 77499 (Terres de Sienne) 0,05% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette Emulsion (gel, rose - orangée) est épaisse et onctueuse, sans odeur et présente un pH de 5,8.This emulsified, creamy, unctuous and glossy, odorless gel has a pH of 5.3. In topical application it has a light grip, a soft application, a pleasant and slippery spreading, a fast penetration, a "water" effect and a soft finish. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A. Heat in a water bath at 80 ° C. with magnetic stirring. - Heat B in a water bath at 80 ° C with magnetic stirring. Emulsify B in A under a stator rotor at 2000 rpm. - At 60 ° C, add C, continue to emulsify under a stator rotor at 1800 rpm. At 30 ° C., add D, in the order indicated, under a stator rotor at 1500 rpm, and immediately adjust the pH with E. Allow to cool with stirring (1500 rpm), checking the homogenization. 1.6 Example Use of an active ingredient according to the invention in a soft gel Phase A. Water qs 100% Satialgine US551 (Degussa) 0.6% Phase B. Sophiderm (Sophim) 2% Montanov 202 (Seppic) 2% Montanov 68 (Seppic) 3% Montanov 82 (Seppic) 1% Cetearyl alcohol 1% DUB PIS (Stéarinerie Dubois) 1% Patlac IL (Rita) 1% Phase C. Active ingredient according to the invention 3% Preservative 0.7% MGESVPH (FACI ) 2% Phase D. TiO2 1% Kaolin and iron oxide (Cl R102) (Sensient) 0.4% Cl 77492 (Sensient) 1% Cl 77491 (Hytech Laboratories) 0.24% Cl 77499 (Sienna) 0, 05% The quantities indicated are given in percentage of weight. This emulsion (gel, pink - orange) is thick and unctuous, odorless and has a pH of 5.8.

En application topique elle présente une préhension facile, une application agréable, un étalement aisé, une pénétration immédiate, une couvrance légère, un effet « bonne mine », une sensation poudrée, et un fini sec et mat. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Mélanger A, dans un bécher en veillant à bien disperser le gel sous agitation mécanique. - Mélanger B, dans un autre bécher. - Mélanger D, au mortier. - Chauffer A et B, séparément au bain-marie à 80°C, sous agitation mécanique ou magnétique selon la phase concernée. - Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 2100 tr/min. - A 30 °C, ajouter C, dans l'ordre indiqué, sous rotor stator à 1800 tr/min. - Puis ajouter D, petit à petit en évitant la coagulation des poudres. - Laisser refroidir en abaissant régulièrement la vitesse d'agitation jusqu'à complète homogénéisation.In topical application it has easy grip, pleasant application, easy spreading, immediate penetration, light coverage, good-looking effect, a powdery feel, and a dry, matte finish. It can be obtained by carrying out the following steps: - Mix A in a beaker taking care to disperse the gel with mechanical stirring. - Mix B in another beaker. - Mix D with mortar. - Heat A and B, separately in a water bath at 80 ° C, with mechanical or magnetic stirring depending on the phase concerned. Emulsify B in A under a stator rotor at 2100 rpm. At 30 ° C., add C, in the order indicated, under a stator rotor at 1800 rpm. - Then add D, little by little, avoiding the coagulation of the powders. - Cool down by lowering the stirring speed regularly until completely homogenized.

II. ÉVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION Il. A. Tests in vitro Il. A.1 - Sur la limitation de la glycation cellulaire a) Quantification des AGE L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à neutraliser la production des AGE.II. EVALUATION OF THE COSMETIC EFFECTIVENESS OF AN ACTIVE INGREDIENT ACCORDING TO THE INVENTION A. In vitro tests II. A.1 - Limitation of cellular glycation a) Quantification of AGEs The objective of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to neutralize the production of AGEs.

L'étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le méthylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C.The study is carried out by immunocytology on normal fibroblasts and on fibroblasts "glycated" with methylglyoxal. The operating protocol of the study is described following. At 0, human fibroblasts are inoculated and incubated at 37 ° C.

A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemplel à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 uM en présence ou non du principe actif de l'exemplel à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique des AGE et une coloration. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope et une analyse quantitative des images est réalisée à l'aide d'un logiciel dédié permettant de mesurer une intensité de fluorescence ramenée à un nombre de cellules. Les résultats de cette quantification exprimée en Unité Arbitraire sont présentés dans le tableau 3 ci-après : Synthèse des AGE Efficacité / Témoin (x 104 UA) « glyqué »(%) Fibroblastes normaux Témoin 76 Principe actif exemple 1 0,25% 79 Fibroblastes « glyqués » Témoin 730* Aminoguanidine 1mM 155 -79% Principe actif exemple 1 0,10% 575 -21% Principe actif exemple 1 0,25% 334 -54% Tableau 3 : Effet du principe actif selon l'invention sur la production des AGE dans des fibroblastes normaux ou « qlyqués » Ces résultats montrent que la quantité d'AGE dans les fibroblastes est augmentée lors d'un traitement répété par le méthyglyoxal, témoignant d'un phénomène de glycation cellulaire.On D1, D2 and D3 the fibroblasts are treated as follows: o normal human fibroblasts (FN): the fibroblasts are treated in the presence or absence of the active principle of the exemplel at 0.25% (V / V) o fibroblasts glycosides "(FG), ie normal fibroblasts treated with methyglyoxal: the human fibroblasts are treated with a 300 μM solution of methyglyoxal in the presence or absence of the active ingredient of the exemplel at 0.1 and 0.25% (v / v) or 1 mM aminoguanidine (positive control). Immunological labeling of the AGEs and staining are then carried out. The results are visualized using a microscope and a quantitative analysis of the images is performed using a dedicated software to measure a fluorescence intensity down to a number of cells. The results of this quantification expressed in Arbitrary unit are presented in Table 3 below: Synthesis of EFA Efficacy / Control (x 104 AU) "glycated" (%) Normal fibroblasts Control 76 Active principle Example 1 0.25% 79 Fibroblasts "Glycated" Control 730 * Aminoguanidine 1mM 155 -79% Active principle Example 1 0.10% 575 -21% Active principle Example 1 0.25% 334 -54% Table 3 Effect of the active ingredient according to the invention on the production AGEs in normal fibroblasts or "qlyques" These results show that the amount of AGE in fibroblasts is increased during repeated treatment with methyglyoxal, indicating a phenomenon of cellular glycation.

On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de réduire la formation des AGE. En particulier testé à 0,25% sur fibroblastes « glyqués » le principe actif selon l'invention réduit la formation des AGE de 54%. Cet effet est dose-dépendant. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour limiter la glycation cellulaire. b) Visualisation de l'organisation des fibres de vimentine La vimentine, filament intermédiaire du cytosquelette constitue une cible majeure des AGE. L'accumulation des AGE dans les cellules de la peau provoque une désorganisation du cytosquelette et la formation d'«aggresomes ».It is also noted that the active ingredient according to the invention makes it possible to reduce the formation of AGEs. In particular tested at 0.25% on "glycated" fibroblasts, the active principle according to the invention reduces the formation of AGEs by 54%. This effect is dose-dependent. An active ingredient obtained from Hypnea musciformis can therefore be used to limit cell glycation. b) Visualization of the organization of vimentin fibers Vimentin, the intermediate filament of the cytoskeleton, constitutes a major target of EFAs. The accumulation of AGEs in skin cells causes disruption of the cytoskeleton and the formation of "aggresomes".

L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à limiter la formation d' « aggresomes ». L'étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant.The objective of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to limit the formation of "aggresomes". The study is carried out by immunocytology on normal fibroblasts and on fibroblasts "glycated" by methylglyoxal. The operating protocol of the study is described following.

A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1.à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemplel.à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique de la vimentine et une coloration. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope. Les résultats étant qualitatifs, ils sont présentés dans le tableau 4 ci-après selon 3 niveaux d'organisation : - organisation normale +++ - organisation faiblement altérée + - organisation altérée - Organisation de la vimentine Fibroblastes normaux Témoin +++ Principe actif de l'exemple 1 0,25% +++ Fibroblastes « glyqués » Témoin - Aminoguanidine 1mM +++ Principe actif de l' exemple 1 0,10% + Principe actif de l' exemple 1 0,25% +++ Tableau 4: Effet du principe actif selon l'invention sur l'organisation des fibres de vimentine dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que l'organisation de la vimentine est profondément altérée lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués » .At 0, human fibroblasts are inoculated and incubated at 37 ° C. On D1, D2 and D3 the fibroblasts are treated as follows: normal human fibroblasts (FN): the fibroblasts are treated in the presence or absence of the active principle of example 1 at 0.25% (V / V) o "glycated" fibroblasts (FG), ie normal fibroblasts treated with methyglyoxal: the human fibroblasts are treated with a 300 μM solution of methyglyoxal in the presence or absence of the active ingredient of the exemplel. , 1 and 0.25% (V / V) or 1mM aminoguanidine (positive control) Immunological labeling of the vimentin and staining are then carried out. The results are visualized using a microscope. The results being qualitative, they are presented in table 4 below according to 3 levels of organization: - normal organization +++ - weakly altered organization + - altered organization - Organization of vimentin Normal Fibroblasts Control +++ Active principle of Example 1 0.25% +++ "Glycated" fibroblasts Control - Aminoguanidine 1mM +++ Active principle of Example 1 0.10% + Active principle of Example 1 0.25% +++ Table 4 Effect of the active ingredient according to the invention on the organization of vimentin fibers in normal or "glycated" fibroblasts These results show that the organization of vimentin is profoundly impaired when normal human fibroblasts are "glycated".

On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de maintenir l'organisation des fibres de vimentine et préserve ainsi l'intégrité du cytosquelette Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire. c) Evaluation de l'activité lysyl oxidase L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à préserver l'activité de la lysyl oxydase. L'étude est réalisée par un dosage spectrofluorimétrique sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant.It is furthermore noted that the active ingredient according to the invention makes it possible to maintain the organization of the vimentin fibers and thus preserves the integrity of the cytoskeleton. An active ingredient obtained from Hypnea musciformis can therefore be used to protect the skin against the effects. deleterious cellular glycation. c) Evaluation of lysyl oxidase activity The objective of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to preserve the activity of lysyl oxidase. The study is carried out by a spectrofluorimetric assay on normal fibroblasts and on "glycated" fibroblasts by methylglyoxal. The operating protocol of the study is described following.

A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2 et J3 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1.à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) A J4 les surnageants sont récupérés. L'activité lysyl oxydase est dosée par spectrofluorimétrie. Les résultats de cette activité exprimée en Unité Arbitraire et en pourcentage de capacité à limiter la perte d'activité de Lysyl oxydase, sont présentés dans le tableau 5 ci-après.At 0, human fibroblasts are inoculated and incubated at 37 ° C. On D1, D2 and D3 the fibroblasts are treated as follows: normal human fibroblasts (FN): the fibroblasts are treated in the presence or absence of the active principle of example 1 at 0.25% (V / V) o "glycated" fibroblasts (FG), ie normal fibroblasts treated with methyglyoxal: the human fibroblasts are treated with a solution of 300 IJM methyglyoxal in the presence or absence of the active ingredient of Example 1 to 0 , 1 and 0.25% (v / v) or aminoguanidine at 1 mM (positive control) At day 4 the supernatants are recovered. The lysyl oxidase activity is determined by spectrofluorimetry. The results of this activity, expressed as Arbitrary Unit and as a percentage of capacity to limit the loss of Lysyl oxidase activity, are presented in Table 5 below.

La capacité à limiter la perte d'activité de la lysyl oxydase est calculée selon la formule suivante : Capacité à limiter la perte d'activité de = Fibroblastes « glyqués » traités » - Fibroblastes « glyqués » témoin x100 LOX Fibroblastes normaux témoin- Fibroblastes « glyqués » témoin Activité lysyl oxydase Capacité à limiter la perte d'activité de lysyl oxydase (%) (UA) Fibroblastes normaux Témoin 35 806 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 34 150 Fibroblastes « glyqués » Témoin 28 541 Aminoguanidine 1mM 30 398 +26 % Principe actif de l'exemple 1 0,10% 30 019 +20% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 32 227 +51% Tableau 5: Effet du principe actif selon l'invention sur l'activité de la lysyl oxydase dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que l'activité lysyl oxydase est réduite lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués ».The ability to limit the loss of activity of lysyl oxidase is calculated according to the following formula: Ability to limit the loss of activity of treated "glycated" fibroblasts "-" glycated "fibroblasts control x100 LOX Normal Fibroblasts control - Fibroblasts glycylated control Lysyl oxidase activity Ability to limit the loss of lysyl oxidase activity (%) (AU) Normal Fibroblasts Control 806 Active principle of Example 1 0.25% 34 150 "Glycated" fibroblasts Control 28 541 Aminoguanidine 1mM 30 398 + 26% Active ingredient of Example 1 0.10% 30 019 + 20% Active ingredient of Example 1 0.25% 32 227 + 51% Table 5 Effect of active ingredient according to the invention on Activity of lysyl oxidase in normal or "glycated" fibroblasts These results show that lysyl oxidase activity is reduced when normal human fibroblasts are "glycated".

On constate par ailleurs que le principe actif selon l'invention permet de maintenir l'activité de la lysyl oxydase. En particulier testé à 0,25% sur fibroblastes « glyqués » le principe actif selon l'invention présente une capacité à limiter la perte d'activité de la lysyl oxydase de 51%. Cet effet est dose-dépendant. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire et préserve ainsi le métabolisme cellulaire.It is furthermore noted that the active ingredient according to the invention makes it possible to maintain the activity of lysyl oxidase. In particular tested at 0.25% on "glycated" fibroblasts, the active principle according to the invention has a capacity to limit the loss of activity of the lysyl oxidase by 51%. This effect is dose-dependent. An active ingredient obtained from Hypnea musciformis can therefore be used to protect the skin against the deleterious effects of cellular glycation and thus preserve cellular metabolism.

Il. A.2 - Sur la protection de la glycation tissulaire a) Etude de la glycation du collagène L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à limiter la réaction de glycation du collagène.He. A.2 - On the Protection of Tissue Glycation a) Study of Collagen Glycation The objective of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to limit the glycation reaction of collagen.

Le protocole opératoire de l'étude est le suivant. A J0, les échantillons à tester sont préparés dans des tubes à hémolyse stérile : o témoin collagène normal (CN) : 1mIde collagène de queue de rat 3 mg/ml o témoin collagène glyqué (CG) : 1 ml de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3 ml d'une solution de glycolaldéhyde (Le glycolaldéhyde induit la réaction de glycation) o témoin positif = Aminioguanidine à 1M : 1 ml de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3 ml d'une solution de glycolaldéhyde + 32 1.J.L aminoguanidine (L'aminoguanidine est un inhibiteur de la réaction de glycation). o Principe actif selon l'invention : 1m1 de collagène de queue de rat 3 mg/ml + 0,3m1 d'une solution de glycolaldéhyde + principe actif de l'exemple 1 à 0,5% 1,0% et 2,5% Les échantillons sont incubés dans une étuve à 37°C et à l'abri de la lumière. A J7 la fluorescence émise par les produits de glycation formés est mesurée à l'aide d'un spectrofluorimètre. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 6. Intensité de Efficacité / Témoin fluorescence (UA) « glyqué »(%) Collagène normal Témoin 436 Collagène glyqué Témoin 23 814 Aminoguanidine 1 M 1 074 -95% Principe actif de l'exemple 1 0,5% 18 927 -21% Principe actif de l'exemple 1 1,0% 13 414 -44% Principe actif de l'exemple 1 2,5% 3 260 -86% Tableau 6 : Effet du principe selon l'invention sur la glycation du collagène Ces résultats montrent que le principe actif selon l'invention inhibe la glycation du collagène. En particulier testé à 2,5% il inhibe la glycation du collagène de 86%. Cet effet est dose-dépendant. b) Visualisation des réseaux matriciels : collagène I, fibrilline Les réseaux de collagène I et de fibrilline sont altérés par la réaction de glycation. L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à maintenir un réseau matriciel fonctionnel. Cette étude est réalisée par immunocytologie sur des fibroblastes normaux et sur des fibroblastes « glyqués » par le methylglyoxal.The operating protocol of the study is as follows. On day 0, the samples to be tested are prepared in sterile haemolysis tubes: normal collagen control (CN): 1mI of rat tail collagen 3 mg / ml o collagen glycated control (CG): 1 ml of rat tail collagen 3 mg / ml + 0.3 ml of a glycolaldehyde solution (The glycolaldehyde induces the glycation reaction) o positive control = 1M Aminioguanidine: 1 ml of rat tail collagen 3 mg / ml + 0.3 ml d a solution of glycolaldehyde + 32 1.JL aminoguanidine (Aminoguanidine is an inhibitor of the glycation reaction). Active ingredient according to the invention: 1m1 of rat tail collagen 3 mg / ml + 0.3m1 of a solution of glycolaldehyde + active principle of Example 1 at 0.5% 1.0% and 2.5% Samples are incubated in an oven at 37 ° C and protected from light. At day 7, the fluorescence emitted by the glycation products formed is measured using a spectrofluorimeter. The results obtained are shown in Table 6. Efficiency Intensity / Fluorescence Control (AU) "glycated" (%) Normal Collagen Control 436 Glycated Collagen Control 23 814 Aminoguanidine 1 M 1074 -95% Active ingredient of Example 1 5% 18 927 -21% Active principle of Example 1 1.0% 13 414 -44% Active principle of Example 1 2.5% 3 260 -86% Table 6 Effect of the principle according to the invention These results show that the active ingredient according to the invention inhibits the glycation of collagen. In particular tested at 2.5% it inhibits the glycation of collagen by 86%. This effect is dose-dependent. b) Visualization of matrix networks: collagen I, fibrillin The collagen I and fibrillin networks are altered by the glycation reaction. The objective of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to maintain a functional matrix network. This study is carried out by immunocytology on normal fibroblasts and "glycated" fibroblasts by methylglyoxal.

Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. A JO des fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J1, J2, J3 et J4 les fibroblastes sont traités comme suit : o fibroblastes humains normaux (FN) : les fibroblastes sont traités en présence ou en absence du principe actif de l'exemple 1 à 0,25% (V/V) o fibroblastes « glyqués » (FG), c'est-à-dire des fibroblastes normaux traités avec du méthyglyoxal : les fibroblastes humains sont traités avec une solution de méthyglyoxal à 300 I.J.M en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,1 et 0,25% (V/V) ou de l'aminoguanidine à 1mM (témoin positif) On réalise ensuite un marquage immunologique du collagène I d'une part et de la fibrilline d'autre part. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope et une analyse quantitative des images est réalisée à l'aide d'un logiciel dédié permettant de mesurer une intensité de fluorescence ramenée. Les résultats de cette intensité pour le collagène et la fibrilline et du pourcentage de capacité à maintenir le réseau de collagène, sont présentés dans les tableaux 7 et 8 ci-après. La capacité à maintenir le réseau matriciel est calculée selon la formule suivante : Capacité à maintenir Fibroblastes « glyqués » traités » - Fibroblastes « glyqués » témoin le réseau matriciel = x100 Fibroblastes normaux témoin- Fibroblastes « glyqués » témoin30 Intensité de fluorescence Capacité à maintenir le du réseau de collagène I réseau de collagène (x 105 UA) (%) Fibroblastes normaux Témoin 460 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 498 Fibroblastes « glyqués » Témoin 36 Aminoguanidine 1mM 162 +30% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 121 +20% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 461 +100% Tableau 7: Effet du principe selon l'invention sur la synthèse de réseau de collagène I dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Intensité de fluorescence Capacité à maintenir le du réseau de fibrilline réseau de fibrilline (x 105 UA) (%) Fibroblastes normaux Témoin 331 Principe actif de l'exemple 1 0,25% 341 Fibroblastes « glyqués » Témoin 38 Aminoguanidine 1mM 211 +59% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 167 +44% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 215 +60% Tableau 8: Effet du principe selon l'invention sur la synthèse de fibrilline dans des fibroblastes normaux ou « glyqués » Ces résultats montrent que les réesaux matriciels de collagène 1 et fibrilline sont altérés lorsque les fibroblastes humains normaux sont « glyqués ». On constate également que le principe actif selon l'invention préserve le réseau de collagène I et de fibrilline. En particulier testé à 0,25% il permet de préserver le réseau de collagène I de 100% et de fibrilline de 60%.The operating protocol of the study is described following. At 0, human fibroblasts are inoculated and incubated at 37 ° C. On D1, D2, D3 and D4 the fibroblasts are treated as follows: normal human fibroblasts (FN): the fibroblasts are treated in the presence or absence of the active ingredient of Example 1 at 0.25% (V / V) o "glycated" fibroblasts (FG), ie normal fibroblasts treated with methyglyoxal: the human fibroblasts are treated with a solution of 300 IJM methyglyoxal in the presence or absence of the active principle of Example 1 to 0.1 and 0.25% (v / v) or 1 mM aminoguanidine (positive control) Immunological labeling of collagen I and fibrillin is then carried out. The results are visualized using a microscope and a quantitative analysis of the images is performed using dedicated software to measure a reduced fluorescence intensity. The results of this intensity for collagen and fibrillin and the percentage of ability to maintain the collagen network are shown in Tables 7 and 8 below. The ability to maintain the matrix network is calculated according to the following formula: Ability to maintain "glycated" treated fibroblasts - "glycated" fibroblasts control matrix lattice = x100 normal control fibroblasts- "glycated" control fibroblasts30 Fluorescence intensity Ability to maintain the collagen network I collagen network (x105 AU) (%) Normal fibroblasts Control 460 Active principle of Example 1 0.25% 498 "Glycated" fibroblasts Control 36 Aminoguanidine 1mM 162 + 30% Active principle of the example 1 0.10% 121 + 20% Active principle of Example 1 0.25% 461 + 100% Table 7 Effect of the Principle According to the Invention on Collagen I Network Synthesis in Normal or "Glycerized" Fibroblasts Fluorescence Intensity Ability to maintain Fibrillin Network Fibrillin Network (x105 AU) (%) Normal Fibroblasts Control 331 Active Principle of Example 1 0.25% 341 "Glycated" Fibroblasts Control 38 Aminoguanidine 1mM 211 + 59% Active principle of Example 1 0.10% 167 + 44% Active principle of Example 1 0.25% 215 + 60% Table 8: Effect of the principle according to the invention on the synthesis of These results show that the matrix reagents of collagen 1 and fibrillin are altered when normal human fibroblasts are "glycated". It is also found that the active ingredient according to the invention preserves the network of collagen I and fibrillin. In particular tested at 0.25% it allows to preserve the network of collagen I of 100% and fibrillin of 60%.

Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour préserver l'intégrité de l'environnement matriciel et ainsi protéger la peau de la glycation tissulaire. c) Evaluation du pouvoir contractile des fibroblastes Le but de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à stimuler le pouvoir contractile des fibroblastes humains et à préserver l'organisation du cytosquelette : élément indispensable à la contraction. L'étude a été réalisée par analyse du diamètre des lattices couplée à un immunomarquage de la vimentine sur des lattices de collagène normales et glyquées.An active ingredient obtained from Hypnea musciformis can therefore be used to preserve the integrity of the matrix environment and thus protect the skin from tissue glycation. c) Evaluation of the contractile power of fibroblasts The purpose of this study is to evaluate the ability of an active ingredient according to the invention to stimulate the contractile power of human fibroblasts and to preserve the organization of the cytoskeleton: an essential element for contraction . The study was carried out by analyzing the diameter of the lattices coupled with immunostaining of the vimentin on normal and glycated collagen lattices.

Le protocole opératoire est décrit en suivant. A JO on réalise des lattices de collagène : les fibroblastes normaux sont ajoutés dans un gel de collagène réalisé à partir de collagène I de queue de rat contenant ou non le principe actif de l'exemple 1 à 0,1% et 0,25% ou l'aminoguanidine à 1mM. L'incubation se fait dans une étuve à 37°C, contenant 5% de CO2.The operating protocol is described following. At OJ collagen lattices are produced: the normal fibroblasts are added in a collagen gel made from rat tail collagen I, whether or not containing the active ingredient of Example 1 at 0.1% and 0.25%. or aminoguanidine at 1mM. Incubation is in an oven at 37 ° C, containing 5% CO2.

Après 6 heures d'incubation, les lattices de collagène sont traitées ou non avec du méthylglyoxal (MGO) : - Lattices non traitées MGO = Lattices normales (LN) - Lattices traitées MGO = Lattices glyquées (LG) A J1 on mesure le diamètre des lattices de collagène à l'aide d'un décimètre. En parallèle on réalise le marquage immunocytologique de la vimentine. Les résultats sont visualisés à l'aide d'un microscope confocal couplé à un système d'analyse d'image. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 9. La capacité de récupération de la contraction est calculée selon la formule suivante : Capacité de Lattices « glyquées » traitées » - Lattices « glyquées » témoin x100 récupération de la = contraction Lattices normales témoin- Lattices « glyquées » témoin Diamètre à J1 Différence du diamètre diamètre JO-J1 (cm) Capacité de (cm) de la contraction (%) Lattices normales 1,82 1,78 Témoin Principe actif de l'exemple 1 0,25% 1,72 1,88 Lattices glyquées Témoin «glyqué » 2,51 1,09 Aminoguanidine 1mM 1,90 1,70 +88% Principe actif de l'exemple 1 0,10% 2,27 1,33 +35% Principe actif de l'exemple 1 0,25% 2,16 1,44 +51% Tableau 9: Effet du principe selon l'invention sur le pouvoir contractile des fibroblastes dans des lattices normales ou « qlyqués » Pour l'organisation dendritique de la vimentine, les résultats étant qualitatifs, 3 niveaux d'organisation ont été définis: - organisation dendritique normale ++ - organisation dendritique faiblement altérée + - organisation dendritique fortement altérée Les résultats sont présentés dans le tableau 10. Organisation dendritique de la vimentine Lattices normales Témoin ++ Principe actif de l'exemple 1 0,50% ++ Lattices glyquées Témoin - Aminoguanidine 1mM +++ Principe actif de l'exemple 1 0,10% + Principe actif de l'exemple 1 0,25% ++ Tableau 10 : Effet du principe actif de l'exemple 1 sur l'organisation dentritigue des fibres de vimentine dans des lattices normales ou glyguées.After 6 hours of incubation, the lattices of collagen are treated or not with methylglyoxal (MGO): - Lattices untreated MGO = Lattices normal (LN) - Lattices treated MGO = Lattices glycated (LG) A J1 is measured the diameter of lattices of collagen using a decimeter. In parallel, the immunocytological labeling of the vimentin is carried out. The results are visualized using a confocal microscope coupled to an image analysis system. The results obtained are shown in Table 9. The contraction recovery capacity is calculated according to the following formula: Capacity of "glycated" lattices treated "-" glycated "latices control x100 recovery of the contraction = Normal control lattices - Lattices glycoside control Diameter at D1 Difference in diameter diameter OJ-D1 (cm) Capacity (cm) of contraction (%) Normal latices 1.82 1.78 Control Active principle of Example 1 0.25% 1.72 1.88 Glycated lattices Glycated control 2.51 1.09 Aminoguanidine 1mM 1.90 1.70 + 88% Active principle of Example 1 0.10% 2.27 1.33 + 35% Active principle of Example 1 0.25% 2.16 1.44 + 51% TABLE 9 Effect of the principle according to the invention on the contractile power of fibroblasts in normal or "qlyque" lattices For the dendritic organization of the vimentin, the results being qualitative, 3 levels of organization were defined: - dendritic organization no +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ Aminoguanidine 1mM +++ active principle of Example 1 0.10% + Active principle of Example 1 0.25% ++ Table 10 Effect of the active principle of Example 1 on the dietary organization of the fibers of vimentin in normal or glygled lattices.

Ces résultats montrent que dans des lattices glyquées, les fibroblastes présentent des capacités de contraction réduites et des fibres de vimentine désorganisées. On constate également que le principe actif selon l'invention est capable de restaurer les capacités de contraction des fibroblastes et de maintenir l'organisation des fibres de vimentine. En particulier, testé à 0,25%, il restaure les capacités de contraction des fibroblastes de 51% et permet également le maintien de l'organisation des fibres de vimentine. Un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis peut donc être utilisé pour protéger le cytosquelette et préserver la fonctionnalité des fibroblastes et ainsi protéger la peau de la glycation tissulaire. Il. B. Tests in vivo Il. B.1 - Description du panel et des études réalisées L'objectif des études réalisées in vivo a été dans un premier temps d'examiner l'impact des AGE sur différents paramètres cutanés en comparant un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé et un groupe présentant un taux de produits d'AGE faible. Dans un deuxième temps, l'effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'amélioration des paramètres cutanés de chacun des deux groupes a été évalué. Enfin, des essais ont été réalisées sur l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la réduction des différences observées entre les deux groupes dans la première partie des 20 tests. Les volontaires pour ces études ont été sélectionnés selon un croisement de plusieurs critères et ont été répartis en deux groupes de la façon suivante : - Groupe A - AGE Elevé : groupe de 21 volontaires d'âge compris entre 54 et 74 ans, présentant un taux d'AGE moyen de 2,4 UA 25 - Groupe B - AGE Faible : groupe de 20 volontaires d'âge compris entre 52 et 70 ans, présentant un taux d'AGE moyen de 1,9 UA. Pour la mise en oeuvre des différentes études, les paramètres cutanés suivants ont été étudiés : o Niveau d'AGE mesuré à l'aide du système AGE ReaderTM (mesures réalisées au niveau de l'avant-bras interne sur une zone équivalente à 1 cm2) qui mesure l'autofluorescence cutanée o Aspect de la matrice dermique étudiée à l'aide du Vivascope 1500 trialser, microscope confocal laser in vivo ; l'aspect est évalué par un jury entraîné composé de trois experts selon l'échelle suivant : Aspect de la matrice Aspect des fibres Réseau Réseau Fibres allongées Fibres en toile grossier et fragmentées d'araignée spongieux Stade 4 ++ - ++ - Stade 3 + +/- + +/- Stade 2 +/- + +/- + Stade 1 - ++ - ++ Altération du derme 1 o Propriétés biomécaniques mesurées à l'aide d'un Cutomètre® : parmi les paramètres calculés à partir des courbes obtenues, le paramètre élasticité est retenu pour quantifier l'évolution des propriétés biomécaniques au niveau des avant-bras internes. L'élasticité de la peau est appréciée par le paramètre R5 (Elasticité nette) R5 = Ur/ Ue Si R5 augmente, l'élasticité de la peau augmente. Pour la mise en oeuvre des essais, le principe actif de l'exemple 2 est utilisé formulé en émulsion. Deux formules sont utilisés : - une formule jour lsononyl isononanoate (Dub lnin, Stérineries Dubois) 5,0% Principe actif de l'exemple 2 2,0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 1,5% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 1,0% Butylen glycol (BG) 1,0% Conservateurs 0,7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3% Eau Qsp 100% - une formule nuit Isononyl isononanoate (Dub Inin, Stérineries Dubois) 5,0% Principe actif de l'exemple 2 3,0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 2,0% Butylen glycol (BG) 2,0% Conservateurs 0,7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3% Eau Qsp 100% Il. B.2 Etude de l'impact du niveau d'AGE sur différents paramètres cutanés L'objectif de l'étude est d'évaluer, in vivo, sur des volontaires d'âge comparable, l'impact d'un niveau différent d'AGE sur les paramètres cutanés suivants : - Aspect des fibres de la matrice extracellulaire - Elasticité de la peau Les méthodes du point 11.6.1 ont été utilisées. L'étude a été réalisée sur le Groupe A et sur le Groupe B. Les résultats sont résumés dans les tableau 11 et 12. Aspect de la matrice dermique (UA) Groupe A - AGE élevé 2,2 Groupe B - AGE faible 2,6 A Groupe A / Groupe B (%) -16,8% Tableau 11 : Comparaison de l'aspect de la matrice dermique entre le groupe A et le groupe B Elasticité de la peau (mm) Groupe A - AGE élevé 0,545 Groupe B - AGE faible 0,583 A Groupe A / Groupe B (%) -6,5% Tableau 12 : Comparaison de l'élasticité de la peau (paramètre R5) entre le groupe A et le groupe B Ces résultats montrent qu'il existe une différence d'organisation du réseau matriciel et du paramètre R5 caractéristique de l'élasticité de la peau, entre un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé et un groupe de volontaires présentant un taux d'AGE faible. En effet, le groupe de volontaires ayant un taux d'AGE élevé présente une élasticité de la peau significativement moins importante que celle du groupe de volontaires ayant un taux d'AGE faible. Il. B.3 Etude de l'effet du principe actif L'objectif de cette étude a été d'investiguer l'effet d'un principe actif selon l'invention, formulé en émulsion, sur la réduction du taux d'AGE. Le niveau global d'AGE cutané a été évalué ainsi que celui du niveau de collagène glyqué et de pentosidine, marqueur spécifique des AGE. Ces derniers ont été étudiés grâce à la corrélation positive existante entre la quantité de pentosidine et de collagène glyqué et le niveau d'autofluorescence cutanée (Meerwaldt et al., 2004). Cette étude a été réalisée uniquement sur le groupe de volontaires présentant un taux élevé d'AGE.These results show that in glycated lattices, the fibroblasts have reduced contraction capacities and disorganized vimentin fibers. It is also found that the active ingredient according to the invention is capable of restoring the contraction capacity of fibroblasts and of maintaining the organization of the vimentin fibers. In particular, tested at 0.25%, it restores the contraction capacity of fibroblasts by 51% and also makes it possible to maintain the organization of the vimentin fibers. An active ingredient obtained from Hypnea musciformis can therefore be used to protect the cytoskeleton and preserve the functionality of fibroblasts and thus protect the skin from tissue glycation. He. B. In vivo tests Il. B.1 - Description of the panel and the studies carried out The objective of the studies carried out in vivo was initially to examine the impact of the EFAs on various cutaneous parameters by comparing a group of volunteers presenting a high rate of AGE and a group having a low AGE product rate. In a second step, the effect of the active ingredient according to the invention formulated in emulsion on the improvement of cutaneous parameters of each of the two groups was evaluated. Finally, tests were carried out on the effect of an active ingredient according to the invention on reducing the differences observed between the two groups in the first part of the tests. The volunteers for these studies were selected according to a cross of several criteria and were divided into two groups as follows: - Group A - AGE High: group of 21 volunteers aged between 54 and 74 years old, presenting a rate average AGE of 2.4 AU 25 - Group B - AGE Low: group of 20 volunteers aged between 52 and 70 years, with an average AGE of 1.9 AU. For the implementation of the various studies, the following skin parameters were studied: o Level of AGE measured using the AGE ReaderTM system (measurements performed at the level of the internal forearm over an area equivalent to 1 cm2 ) which measures the skin autofluorescence o Aspect of the dermal matrix studied using the Vivascope 1500 trialser, in vivo confocal laser microscope; the appearance is evaluated by a trained panel consisting of three experts according to the following scale: Appearance of the matrix Appearance of the fibers Network Network Elongated fibers Coarse web fibers and fragmented spongy spider Stage 4 ++ - ++ - Stage 3 + +/- + +/- Stage 2 +/- + +/- + Stage 1 - ++ - ++ Alteration of the dermis 1 o Biomechanical properties measured using a Cutomètre®: among the parameters calculated from From the curves obtained, the elasticity parameter is used to quantify the evolution of biomechanical properties at the level of the internal forearms. The elasticity of the skin is appreciated by the parameter R5 (Net Elasticity) R5 = Ur / Ue If R5 increases, the elasticity of the skin increases. For carrying out the tests, the active ingredient of Example 2 is used formulated in emulsion. Two formulas are used: a lononyl isononanoate day formula (Dub lnin, Dubois Sterinys) 5.0% active principle of example 2 2.0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 1.5% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 1.0% Butylen glycol (BG) 1.0% Preservatives 0.7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0.3% Water Qsp 100% - a night formula Isononyl isononanoate (Dub Inin, Dubois Sterrins) 5.0% Active principle of Example 2 3.0% Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2.0% Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 2.0% Butylen glycol (BG) 2.0% Preservatives 0.7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0.3% Water Qs 100% It. B.2 Study of the impact of the level of EFA on different cutaneous parameters The objective of the study is to evaluate, in vivo, on volunteers of comparable age, the impact of a different level of AGE on the following skin parameters: - Aspect of extracellular matrix fibers - Elasticity of the skin The methods in 11.6.1 were used. The study was conducted on Group A and Group B. The results are summarized in Table 11 and Table 12. Dermal matrix (AU) aspect Group A - High AGE 2.2 Group B - Low AGE 2, 6 A Group A / Group B (%) -16.8% Table 11: Comparison of the appearance of the dermal matrix between Group A and Group B Elasticity of the skin (mm) Group A - High AGE 0.545 Group B - Low AGE 0.583 A Group A / Group B (%) -6.5% Table 12: Comparison of skin elasticity (parameter R5) between group A and group B These results show that there is a difference organization of the matrix network and the parameter R5 characteristic of the elasticity of the skin, between a group of volunteers with a high level of AGE and a group of volunteers with a low level of AGE. In fact, the group of volunteers with a high AGE level has significantly less skin elasticity than the group of volunteers with a low AGE rate. He. B.3 Study of the effect of the active principle The objective of this study was to investigate the effect of an active ingredient according to the invention, formulated in emulsion, on the reduction of the AGE level. The overall level of cutaneous AGE was evaluated as well as the level of glycated collagen and pentosidine, a specific marker of EFAs. These have been studied thanks to the positive correlation between the amount of pentosidine and glycated collagen and the level of cutaneous autofluorescence (Meerwaldt et al., 2004). This study was conducted only on the group of volunteers with a high level of EFA.

Dans un second temps, l'effet du principe actif selon l'invention sur la matrice dermique et l'élasticité de la peau, a été évalué à la fois, sur le groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé (groupe A - AGE élevé) et le groupe de volontaires présentant un taux d'AGE faible (groupe B - AGE faible). Des acquisitions du réseau des fibres par microscopie confocale laser in vivo ainsi que des mesures d'élasticité de la peau à l'aide d'un Cutomètre® ont été réalisées avant et après 28 jours de traitement biquotidien. Le protocole opératoire de l'étude est le suivant : Entre J-14 et JO : aucune application de crème au niveau des avant-bras. A JO Localisation des zones de mesures sur les avant-bras internes Réalisation de mesures d'AGE à l'aide d'un AGE ReaderTM sur chaque zone Réalisation des mesures au Cutomètre® sur chaque zone Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale sur chaque zone Entre JO et J27 : applications biquotidiennes des produits sur les avants bras de façon randomisée en légers massages jusqu'à pénétration * le matin : la formule placebo et la formule jour contenant le principe actif * le soir : la formule placebo et la formule nuit contenant le principe actif - A J28 : Localisation des zones de mesures sur les avant-bras internes Réalisation de mesures d'AGE à l'aide d'un AGE ReaderTM sur chaque zone Réalisation des mesures au Cutomètre® sur chaque zone Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale sur chaque zone Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux 12, 13 et 14. Variation / Placebo (%) Taux d'AGE -4,5% Niveau de collagène glyqué -10,4% Niveau de Pentosidine -7,7% Tableau 13 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur le taux d'AGE, de collagène glygué et de pentosidine du groupe A après 28 jours de traitement en comparaison au placebo Variation / Placebo (%) Groupe A - AGE élevé +25,2% Groupe B - AGE faible +11,8% Tableau 14 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'aspect de la matrice dermique du groupe A et du groupe 8 après 28 jours de traitement. Comparaison au placebo respectif de chaque groupe. Variation / Placebo (%) Groupe A - AGE élevé +7,2% Groupe B - AGE faible +5,3% Tableau 15 : Effet du principe actif selon l'invention formulé en émulsion sur l'élasticité de la peau (paramètre R5) du groupe A et du groupe 8 après 28 jours de traitement. Comparaison au placebo respectif de chaque groupe.In a second step, the effect of the active ingredient according to the invention on the dermal matrix and the elasticity of the skin, was evaluated at the same time, on the group of volunteers having a high level of AGE (group A - High AGE) and the group of volunteers with low AGE (low B-AGE). Fiber network acquisitions by in vivo laser confocal microscopy as well as skin elasticity measurements using a Cutometer® were performed before and after 28 days of twice-daily treatment. The operative protocol of the study is as follows: Between D-14 and OJ: no application of cream in the forearms. A JO Locating measurement zones on the internal forearms Performing AGE measurements using a ReaderTM AGE on each zone Performing Cutometer® measurements on each zone Performing confocal microscopy acquisitions on each zone Between OJ and D27: twice-daily applications of the forearm products randomly in light massage until penetration * in the morning: the placebo formula and the formula containing the active ingredient * in the evening: the placebo formula and the night formula containing the active ingredient - A J28: Localization of measurement zones on the internal forearms Realization of AGE measurements using a ReaderTM AGE on each zone Realization of the Cutometer® measurements on each zone Realization of acquisitions by Confocal microscopy on each zone The results obtained are presented in Tables 12, 13 and 14. Variation / Placebo (%) EFA rate -4,5% Glycerol collagen level -10,4% Level of Pentosidine -7.7% Table 13: Effect of the active ingredient according to the invention formulated in emulsion on the level of AGE, collagen glygué and pentosidine group A after 28 days of treatment in comparison with placebo Variation / Placebo (% ) Group A - High AGE + 25.2% Group B - Low AGE + 11.8% Table 14: Effect of the active ingredient according to the invention formulated in emulsion on the appearance of the Group A and Group 8 dermal matrix after 28 days of treatment. Comparison with the respective placebo of each group. Variation / Placebo (%) Group A - High AGE + 7.2% Group B - Low AGE + 5.3% Table 15: Effect of the active ingredient according to the invention formulated in emulsion on the elasticity of the skin (parameter R5 ) group A and group 8 after 28 days of treatment. Comparison with the respective placebo of each group.

Ces résultats montrent que dans les conditions de cette étude, après 28 jours de traitement biquotidien et en comparaison au placebo, un principe actif selon l'invention formulé en émulsion et étudié : - sur des volontaires présentant un taux d'AGE élevé o diminue le niveau d'AGE, le niveau de collagène glyqué et le niveau de pentosidine, o améliore l'aspect de la matrice dermique (+25,2%) o améliore l'élasticité de la peau (+7,2%) - sur des volontaires présentant un niveau d'AGE faible et comparable à celui de personnes jeunes o tend à augmenter le stade d'organisation de la matrice dermique (+11,8%) o améliore l'élasticité de la peau (+5,3%). Il. B.4 Etude de l'effet du principe actif sur l'amélioration des paramètres cutanés L'objectif de cette étude est d'étudier l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la réduction des différences observées entre le groupe A présentant un niveau d'AGE élevé et 15 le groupe B présentant un niveau d'AGE faible. Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux 16 et 17. Aspect de la matrice dermique (UA) JO J28 Groupe A - AGE élevé zone principe actif selon l'invention 2,2 2,8 Groupe B - AGE faible zone placebo 2,6 2,5 p Groupe A / Groupe B 0,0075 0,8751 Tableau 16 : Evolution de l'aspect de la matrice dermique entre JO et J28 pour le groupe A, coté traité et le groupe 8 côté traité placebo. 10 Elasticité de la peau (mm) JO J28 Groupe A - AGE élevé zone principe actif selon l'invention 0,545 0,595 Groupe B - AGE faible zone placebo 0,583 0,597 p Groupe A / Groupe B 0,0034 0,4692 Tableau 17: Evolution de l'élasticité de la peau (paramètre R5) entre JO et J28 pour le groupe A, coté traité et le groupe 8 côté traité placebo. Ces résultats montrent que dans les conditions de l'étude après 28 jours de traitement biquotidien et comparé à un placebo, le principe actif selon l'invention augmente - le stade d'organisation des fibres - le paramètre R5 caractéristique de l'élasticité de la peau permettant ainsi au groupe de volontaires présentant un taux d'AGE élevé de retrouver des caractéristiques cutanées comparables à celles de personnes ayant un taux d'AGE plus faible proche de celui de personnes jeunes.These results show that under the conditions of this study, after 28 days of twice-daily treatment and in comparison with the placebo, an active principle according to the invention formulated in emulsion and studied: - on volunteers having a high AGE level o decreases the level of AGE, the level of glycated collagen and the level of pentosidine, o improves the appearance of the dermal matrix (+ 25,2%) o improves the elasticity of the skin (+ 7,2%) - on volunteers with a low level of EGE and comparable to that of young people o tends to increase the stage of organization of the dermal matrix (+ 11.8%) o improves the elasticity of the skin (+ 5.3%) . He. B.4 Study of the effect of the active ingredient on the improvement of cutaneous parameters The objective of this study is to study the effect of an active ingredient according to the invention on reducing the differences observed between group A having a high AGE level and group B having a low AGE level. The results obtained are shown in Tables 16 and 17. Appearance of the dermal matrix (UA) OJ J28 Group A - High AGE zone active principle according to the invention 2,2 2,8 Group B - AGE low placebo zone 2,6 2.5 p Group A / Group B 0.0075 0.8751 Table 16: Evolution of the appearance of the dermal matrix between OJ and D28 for group A, treated side and group 8 side treated with placebo. 10 Elasticity of the skin (mm) OJ J28 Group A - High AGE zone active principle according to the invention 0.545 0.595 Group B - AGE low placebo zone 0.583 0.597 p Group A / Group B 0.0034 0.4692 Table 17: Evolution of the elasticity of the skin (parameter R5) between OJ and J28 for group A, treated side and group 8 side treated with placebo. These results show that under the conditions of the study after 28 days of twice-daily treatment and compared to a placebo, the active principle according to the invention increases - the stage of organization of the fibers - the parameter R5 characteristic of the elasticity of the thus allowing the group of volunteers with a high EFA level to find cutaneous characteristics comparable to those of people with a lower AGE rate close to that of young people.

Le principe actif selon l'invention permet ainsi de redonner souplesse et élasticité aux peaux altérées par l'accumulation d'AGE. Ces différents essais montrent donc bien les effets cosmétiques d'un principe actif obtenu à partir de Hypnea musciformis d'une composition cosmétique l'incluant, en particulier en ce qui concerne la protection de la peau contre les effets délétères de la glycation cellulaire et/ou de la glycation tissulaire, le raffermissement de la peau et le maintien de la fonctionnalité du derme.The active ingredient according to the invention thus makes it possible to restore suppleness and elasticity to skins damaged by the accumulation of AGE. These different tests therefore clearly show the cosmetic effects of an active ingredient obtained from Hypnea musciformis of a cosmetic composition including it, in particular as regards the protection of the skin against the deleterious effects of cellular glycation and / or or tissue glycation, firming the skin and maintaining the functionality of the dermis.

Claims

REVENDICATIONS1. Cosmetic active ingredient obtained from Hypnea Musciformis characterized in that it comprises at least 40% of carbohydrates by weight relative to the total weight of dry matter.

2. Cosmetic active ingredient according to claim 1 characterized in that it comprises galactans.

3. Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it comprises galactans having a molecular weight of between 3600 and 77000 Da.

4. Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it is a hydrolyzate of Hypnea Musciformis.

5. Cosmetic active ingredient according to one of the preceding claims, characterized in that it is obtained by a process comprising at least one enzymatic hydrolysis of carbohydrates of Hypnea Musciformis.

6. Use of an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis as a cosmetic active ingredient in a cosmetic composition, said active ingredient and / or said composition being intended (s) for the care of the skin.

7. Use according to claim 6, said active ingredient and / or said composition being intended (s) to protect the skin against the deleterious effects of cellular glycation and / or tissue glycation.

8. Use according to claim 6 or 7, said active ingredient and / or said composition being intended (s) to firm the skin.

9. Use according to one of claims 6 to 8, said active ingredient and / or said composition being intended (s) to increase the elasticity and firmness of the skin.

10. Use according to one of claims 6 to 9 said active ingredient and / or said composition being intended (s) to preserve the functionality of the dermis.

11. Use according to one of claims 6 to 10 said active ingredient and / or said composition being intended (s) to fight against skin aging.

12. Use according to one of claims 6 to 11, characterized in that the active ingredient is an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising galactans.

13. Use according to claim 12, characterized in that the active ingredient is an active ingredient according to one of claims 1 to 5.

14. Cosmetic composition for topical application, characterized in that it comprises an active ingredient according to one of claims 1 to 5, present between 0.1 and 3% by total weight of the composition.

15. Cosmetic process for the care of human skin, intended for a firming effect, comprising the topical application at least once a day of a composition containing an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis.

16. A cosmetic process for the care of human skin, intended for an anti-aging effect on the skin, comprising the topical application at least once a day of a composition containing an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis.

17. A cosmetic method for the care of human skin according to one of claims 15 or 16, characterized in that the active ingredient is an active ingredient obtained from Hypnea Musciformis comprising ga lactans.

18. A cosmetic process for the care of human skin according to one of claims 15 to 17, characterized in that the active principle is an active ingredient according to one of claims 1 to 5.

19. Cosmetic process for the care of human skin according to one of claims 15 to 18, characterized in that the composition is a composition according to claim 14.