FR3061023A1 - Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant de l'amyline, un agoniste au recepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et un co-polyaminoacide - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins : a) de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ; b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante : caractérisée en ce que la composition ne comprend pas d'une insuline basale dont le point isoélectrique pI est compris entre 5,8 et 8,5. Elle concerne également une composition caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
Description
Titulaire(s) :
ADOCIA Société anonyme.
O Demande(s) d’extension :
® Mandataire(s) : CABINET TRIPOZ.
FR 3 061 023 - A1 ® COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE INJECTABLE COMPRENANT DE L'AMYLINE, UN AGONISTE AU RECEPTEUR DE L'AMYLINE OU UN ANALOGUE D'AMYLINE ET UN CO-POLYAMINOACIDE.
(® L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins:
a) de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline;
b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxy-lates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoa-cide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante:
®GpR)-f-GpA)-(Gpc) r a P Formule I caractérisée en ce que la composition ne comprend pas d'une insuline basale dont le point isoélectrique pl est compris entre 5,8 et 8,5.
Elle concerne également une composition caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE
INJECTABLE COMPRENANT DE L'AMYLINE, UN AGONISTE AU
RECEPTEUR DE L'AMYLINE OU UN ANALOGUE D'AMYLINE ET UN
CO-POLYAMINOACIDE [0001] L'invention concerne Ses thérapies par injection d'amyline, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyline pour traiter le diabète.
[0002] L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes selon l'invention et des compositions comprenant en outre une insuline (à l'exclusion des insulines basales dont le point isoélectrique pi est compris entre 5,8 et 8,5). L'invention concerne également des formulations pharmaceutiques comprenant les compositions selon l'invention. Enfin, l'invention se rapporte également à une utilisation des co-polyaminoacides porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes selon l'invention pour stabiliser des compositions d'amyline, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyline ainsi que des compositions d'amyline, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyline comprenant en outre une insuline.
[0003] Le diabète de type 1 est une maladie autoimmune conduisant à la destruction des cellules béta du pancréas. Ces cellules sont connues pour produire l'insuline dont le rôle principal est de réguler l'utilisation du glucose dans les tissus périphériques (Gerich 1993 Control of glycaemia). Par conséquent, les patients atteints de diabète de type 1 souffrent d'hyperglycémie chronique et doivent s'administrer de l'insuline exogène afin de limiter cette hyperglycémie. L'insulinothérapie a permis de changer drastiquement l'espérance de vie de ces patients. Cependant, le contrôle de la glycémie assuré par l'insuline exogène n'est pas optimal, en particulier après la prise d'un repas. Ceci est lié au fait que ces patients produisent du glucagon après la prise d'un repas, ce qui conduit au déstockage d'une partie du glucose stocké dans le foie, ce qui n'est pas le cas chez la personne saine. Cette production de glucose médiée par le glucagon aggrave le problème de régulation de la glycémie de ces patients.
[0004] Il a été démontré que l'amyline, une autre hormone produite par les cellules béta du pancréas et donc également déficiente chez les patients diabétiques de type 1, joue un rôle clé dans la régulation de la glycémie post-prandiale. L'amyline, aussi connu sous le nom de « islet amyloid polypeptide » ou IAPP, est un peptide de 37 amino acides qui est co-stocké et co-sécrété avec l'insuline (Schmitz 2004 Amylin Agonists). Ce peptide est décrit pour bloquer la production du gîucagon par les cellules alpha du pancréas. Ainsi, l'insuline et l'amyline ont des rôles complémentaires et synergétiques, puisque l'insuline permet de réduire la concentration de glucose dans le sang alors que l'amyline permet de réduire l'entrée de glucose endogène dans le sang en inhibant la production (sécrétion) du gîucagon endogène.
[0005] Cette problématique de régulation de la glycémie post-prandiale est assez similaire pour les patients atteints de diabète de type 2 traités par l'insuline dans la mesure où leur maladie a conduit à une perte très significative de leur masse de cellules béta et par conséquent, de leur capacité de production d'insuline et d'amyline.
[0006] L'amyline humaine a des propriétés qui ne sont pas compatibles avec les exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J : Polymorphie fibrillar assembîy of human amylin. J Struct Biol 119:17-27, 1997). L'amyline est connue pour former des fibres amyloïdes qui conduisent à la formation de plaques qui sont insolubles dans l'eau. Bien qu'étant l'hormone naturelle, il a été nécessaire de développer un analogue afin de résoudre ces problèmes de solubilité.
[0007] Les propriétés physico-chimiques de l'amyline rendent ainsi son utilisation impossible : l'amyline n'est stable qu'une quinzaine de minutes à pH acide, et moins d'une minute à pH neutre.
[0008] La société Amylin a développé un analogue de l'amyline, le pramlintide, pour pallier le manque de stabilité de l'amyline humaine. Ce produit commercialisé sous le nom de Symlin a été approuvé en 2005 par la FDA pour le traitement des diabétiques de type 1 et de type 2. Il doit être administré par voie sous cutanée trois fois par jour, dans l'heure précédant le repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale. Ce peptide est formulé à pH acide et est décrit pour fibriller lorsque le pH de la solution est supérieur à 5,5. Des variantes d'analogues sont décrites dans le brevet US 5,686,411.
[0009] Cet analogue n'est ainsi pas satisfaisant sur le plan de la stabilité lorsqu'une formulation à pH neutre est envisagée.
[00010] A ce jour, il n'existe aucun moyen permettant de stabiliser l'amyline humaine afin d'en faire un produit pharmaceutique. Or, il serait avantageux pour les patients d'avoir accès à la forme humaine de cette hormone physiologique. Il serait également avantageux de pouvoir formuler un analogue ou un agoniste de récepteur d'amyline à pH neutre.
[00011] De plus, il y aurait un intérêt à pouvoir mélanger en solution aqueuse l'amyline, un analogue de l'amyline, ou un agoniste de récepteur à l'amyline, avec une insuline prandiale puisque ces deux produits sont à administrer avant le repas. Cela permettrait d'ailleurs de mimer la physiologie puisque ces deux hormones sont co-sécrétées par les cellules béta en réponse à un repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale.
[00012] Or, compte tenu du fait que les solutions d'insulines prandiales ont un pH proche de la neutralité pour des raisons de stabilité chimique, il n'est pas possible d'obtenir une solution aqueuse répondant aux exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité.
[00013] Pour cette raison, la demande de brevet US2016/001002 de la société ROCHE décrit une pompe contenant deux réservoirs séparés afin de rendre possible la co-administration de ces deux hormones avec un seul dispositif médical. Cependant, ce brevet ne résout pas le problème du mélange de ces deux hormones en solution qui permettrait de les administrer avec les pompes conventionnelles déjà sur le marché qui ne contiennent qu'un réservoir.
[00014] La demande de brevet W02013067022 de la société XERIS apporte une solution au problème de stabilité de l'amyline et de sa compatibilité avec l'insuline en employant un solvant organique à la place de l'eau. L'absence d'eau semble résoudre les problèmes de stabilité mais l'utilisation d'un solvant organique pose des problèmes de sécurité d'utilisation chronique pour les patients diabétiques et également des problèmes de compatibilité avec les dispositifs médicaux usuels, au niveau des tubulures, des joints et des plastifiants employés.
[00015] La demande de brevet W02007104786 de la société NOVO NORDISK décrit une méthode permettant de stabiliser une solution de pramlintide, qui est un analogue de l'amyline, et d'insuline par l'ajout d'un phospholipide, dérivé de gîycérophosphoglycérol, en particulier le dimyristoyl glycérophosphoglycérol (DMPG). Or, cette solution requiert l'emploi de quantités importantes de DMPG qui peuvent poser un problème de tolérance locale.
A la connaissance de la demanderesse, il n'existe pas de moyen satisfaisant qui permette de combiner en solution aqueuse une insuline prandiale et l'amyline humaine, un agoniste de récepteur d'amyline ou un analogue de l'amyline afin de pouvoir être administrée avec des dispositifs conventionnels.
[00016] Le pH de formulation acide et la fibrillation rapide sont des freins pour obtenir une formulation pharmaceutique à pH neutre à base d'amyline et de pramlintide, mais aussi un frein pour combiner l'amyline ou le pramlintide à d'autres ingrédients pharmaceutiques actifs, en particulier des peptides ou des protéines.
[00017] La demanderesse a remarqué que, de manière surprenante, les co-polyaminoacides selon l'invention stabilisent des compositions d'amyline, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyline à un pH compris entre 6 et 8. En effet, des compositions comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline en combinaison avec un co-polyaminoacide selon l'invention présentent une stabilité accrue dans le temps, ce qui est d'un grand intérêt pour le développement pharmaceutique.
[00018] La demanderesse a également constaté que les co-polyaminoacides selon l'invention permettent en outre d'obtenir une composition comprenant de l'insuline prandiale et de l'amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline, ladite composition étant limpide et ayant une stabilité à la fibrillation améliorée.
[00019] Une méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer la formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation qui permettent une accélération du phénomène, le temps de latence avant la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à celui de l'amyline, d'un agoniste au récepteur de l'amyline ou d'un analogue d'amyline au pH d'intérêt.
[00020] Les compositions selon l'invention présentent une stabilité physique, et éventuellement chimique, satisfaisante au pH désiré.
[00021] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :
a) de l'amyline , un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ;
b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :
*-(gpr)-(-gpa)-(gpc) r a P Formule I dans laquelle
GpR est un radical de formules II ou ΙΓ :
H H n ou *
- GpA est un radical de formules III ou ΙΙΓ :
O HN—*
-IL/
HN—* ni ou *
H
A-N-* ni';
GpC est un radical de formule IV :
IV;
- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;
- a est un entier égal à 0 ou à 1 ;
- b est un entier égal à 0 ou à 1;
p est un entier égal à 1 ou à 2 et o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule ΙΙΓ et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formule III;
- c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2;
- d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2;
- r est un entier égal à 0 ou à 1, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au co-polyaminoacide :
• via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou * via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du co-polyaminoacide;
- R est un radical choisi dans le groupe constitué par :
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 12 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone ;
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH2, et o un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;
- A est un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 5 atomes de carbone;
- B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone;
- Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et :
o si p est égal à 1, x est compris entre 11 et 25 (11 < x < 25) :
o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15), le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre entre 0 < i < 0,5 ;
lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents, le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;
les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkalin choisi dans le groupe constitué par Na+ et K+ ;
caractérisé en ce que la composition ne comprend pas une insuline basale dont le point isoélectrique pi est compris entre 5,8 et 8,5.
[00022] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 30 atomes de carbone.
[00023] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,6 et 7,8.
[00024] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 7,0 et 7,8.
[00025] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,8 et 7,4.
[00026] Les compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable selon l'invention sont des solutions limpides. On entend par « solution limpide », des compositions qui satisfont aux critères décrits dans les pharmacopées américaines et européenne concernant les solutions injectables. Dans la pharmacopée US, les solutions sont définies dans la partie <1151> faisant référence à l'injection (<1>) (faisant référence à <788> selon USP 35 et précisé dans <788> selon USP 35 et dans <787>, <788> et <790> USP 38 (à partir du 1er août 2014), selon USP 38). Dans la pharmacopée européenne, les solutions injectables doivent remplir les critères donnés dans les sections 2.9.19 et 2.9.20.
[00027] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 et si x est inférieur ou égal à 14 (x < 14) alors r = 0 ou r = 1.
[00028] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 et si x est compris entre 15 et 16 (15 < x < 16), alors r = 1.
[00029] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 et si x est supérieur à 17 (17 < x ) alors r = 1 et R est un radical éther ou polyéther.
[00030] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 alors x est compris entre 17 et 25 (17 < x < 25).
[00031] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p = 1, représentée par la formule V suivante :
formule V
GpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment.
[00032] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle : r est égal à 1 (r=l) et a est égal à 0 (a = 0).
[00033] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle r est égal à 1 (r=l) et a est égal à 1 (a=l).
[00034] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II.
[00035] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[00036] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00037] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00038] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00039] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00040] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[00041] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.
[00042] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[00043] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à β atomes de carbone.
[00044] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00045] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II' ou 11, dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00046] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ dans laquelle R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
ίο [00047] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical R est lié au co-polyaminoacide via une fonction amide portée par le carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (CONH2).
[00048] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[00049] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical éther.
[00050] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[00051] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ dans laquelle R est un radical éther représenté par la formule
[00052] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical polyéther.
[00053] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[00054] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou II', dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les
[00055] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux
[00056] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle a est égal à 0 (a=0) et r est égal à 0 (r=0).
[00057] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le 10 radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est choisi dans le groupe constitué des radicaux représe n tés par les formules ci-dessous :
| ★ * .. | * * H3C\j ch3 | |||
| * | * | * * | * | * |
| ^ch3 | ||||
| h3c | ||||
| * | * | * * 'V | ||
| HjcZ | h,cXh3 |
[00058] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc ci-après représentées :
| * 0 Zk,'NHV | Formule IVb |
| O | Formule IVc |
[00059] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC est de 5 formule IVa.
[00060] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et IVf ci-10 après représentées :______________________________________________
| O O -Λ Vo. O | Formule IVd |
| ί r | Formule IVe |
| 0 0 | Formule IVf |
[00061] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC répond à la formule IV ou IVa dans lesquelles b = 0, et répond à la formule IVd.
[00062] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV dans laquelle b = 1 est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * * | * * | |
| ch3 | ch3 | |
| ★ * | * * | * * |
| X | b | ^ÀxCH3 ch3 |
| h3c^ | ||
| * * Y | * * | * * |
| h3Y | h3cXXh3 | |
[00063] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV ou IVa dans lesquelles b = 1, est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans le groupe constitué par les radicaux
[00064] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles linéaires.
[00065] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles ramifiés.
[00066] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 14 atomes de carbone.
[00067] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par tes radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * | = ' CH3 | x=ll |
| * | x=13 |
[00068] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans 1e groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 15 et 16 atomes de carbone.
[00069] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que 1e radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans te groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[00070] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le
radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 25 atomes de carbone.
[00072] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 18 atomes de carbone.
[00073] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le
| groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formu | es ci-dessous : |
| x=17 |
[00074] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 18 et 25 atomes de carbone.
[00075] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le constitué les radicaux les formules ci-dessous
[00076] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = 1 et p - 2, représentée par la formule VI suivante :
*4-GpR GpA—( GpC) r 2 Formule VI dans laquelle
GpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment.
[00077] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II.
[00078] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[00079] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule Π dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00080] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00081] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00082] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00083] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[00084] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.
[00085] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[00086] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.
[00087] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone, et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00088] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou II', dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00089] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ dans laquelle R est un radical choisi dans le groupe constitué par les
[00090] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle la fonction amine du radical GpR engagée dans la formation de la fonction amide qui lie ledit radical GpR au co-polyaminoacide est portée par un carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (-CONH2).
[00091] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[00092] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ dans laquelle R est un radical éther.
[00093] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical éther R est un radical comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[00094] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical éther est [00095] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical polyéther.
[00096] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formuie II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[00097] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de
formule II ou ΙΓ dans laquelle R est un radical linéaire polyéther choisi dans le groupe
[00098] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpA de formule III est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules Ilia et Illb ciaprès représentées :
| Θ : HN | Formule Ilia |
| O HN S | Formule Illb |
[00099] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpA de
[000100] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de 15 formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb et IVc ci-après représentées :
| *~Y° /0 \ θ' V | Formule IVa |
| ‘y°/o \ | Formule IVb |
| O /0 \ ΥΛΎ M | Formule IVc |
[000101] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC est de formule IVa.
[000102] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et IVf ci-après représentées : ____________________
| 0 0 *—k k~Cx O | Formule IVd |
| 0 0 \—N z | Formule IVe |
| 0 0 : | Formule IVf |
[000103] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC répond à la formule IV ou IVa dans lesquelles b = 0, et répond à la formule IVd.
[000104] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles linéaires comprenant entre 9 et 15 atomes de carbone.
[000105] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles ramifiés comprenant entre 9 et 15 atomes de carbone.
[000106] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant 9 ou 10 atomes de carbone.
[000107] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 15 atomes de carbone.
[000108] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 13 atomes de carbone.
[000109] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * | x = 9 | ||
| x — 11 | |||
| ★ | ch3 | x= 13 |
[000110] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule Vï dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant 14 ou 15 atomes de carbone.
[000111] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000112] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante :
formule VII dans laquelle, • D représente, indépendamment, soit un groupe -CH2- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique), • Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, dans lesquelles r = 1 et GpR est un radical de Formule II, • Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI dans lesquelles r=0 ou r=l et GpR est un radical de Formule ΙΓ, ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate, • R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI dans lesquelles r = 1 et GpR est un radical de Formule II, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S, • X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;
• n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de co-polyaminoacide et 5 < n + m < 250 ;
[000113] Le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule I peut également être appelé « co-polyaminoacide » dans la présente description.
[000114] On appelle « co-polyaminoacide statistique » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule Vlla.
[000115] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri = R'i et R2 = R'2, de formule Vlla suivante :
D
OX
O
R'
Hy
Formule Vlla dans laquelle,
- m, η, X, D et Hy ont les définitions données précédemment,
- R'i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyîe, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate,
- R'2 est un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S.
[000115] On appelle « co-polyaminoacide défini » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule Vllb.
[000117] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule Vllb suivante :
dans laquelle m, X, D, Ri et R2 ont les définitions données précédemment et au moins Ri ou R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000118] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule Vllb et Ri ou R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000119] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule Vllb dans laquelle Ri est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI dans lesquelles r - 0 ou r = 1 et GpR est de Formule ΙΓ.
[000120] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules Vllb dans laquelle R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI dans lesquelles r = 1 et GpR est de Formule II.
[000121] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que Ri est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à Ci0, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate.
[000122] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que R! est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en C2 à C10 ou un groupe acyle ramifié en C3 à Cio.
[000123] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vlla ou Vllb dans lesquels le groupe D est un groupe -CH2- (unité aspartique).
[000124] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vlla ou Vllb dans lesquels le groupe D est un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique).
[000125] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.
[000126] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.
[000127] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,2.
[000128] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,15.
[000129] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,1.
[000130] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.
[000131] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 9 et 10 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,03 et 0,15.
[000132] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 12 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,1.
[000133] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 12 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.
[000134] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,1.
[000135] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.
[000136] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.
[000137] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.
[000138] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,2.
[000139] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre et 14 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,1 et 0,2.
[000140] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 15 et 16 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,04 et 0,15.
[000141] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 17 et 18 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,06.
[000142] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.
[000143] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,05.
[000144] Dans un mode de caractérisée en [000145] Dans caractérisée en ce que n + un mode [000146] Dans caractérisée en ce que n + un mode [000147] Dans caractérisée en ce que n + un mode [000148] Dans caractérisée en ce que n + un mode ce que réalisation, la composition m est compris entre 10 et 250.
de réalisation, la composition m est compris entre 10 et 200.
de réalisation, la composition m est compris entre 15 et 150.
de réalisation, la composition m est compris entre 15 et 100.
de réalisation, la composition est compris entre 15 et 80.
Dans un mode de réalisation, la composition i est compris entre 15 et 65.
de réalisation, la composition m est compris entre 20 et 60.
de réalisation, la composition est compris entre 20 et 50.
de réalisation, la composition est compris entre 20 et 40.
[000149] caractérisée
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
| selon | l'invention | est |
en ce [000150] Dans caractérisée en [000151] Dans caractérisée [000152] caractérisée en que un mode ce que n + un mode ce que
Dans en ce un que mode [000153] L'amyline, ou polypeptide amyloïde d'îlot (IAPP), est une hormone peptidique à 37 résidus. Elle est co-sécrétée avec de l'insuline à partir des cellules béta pancréatiques dans le rapport d'environ 100:1. L'amyline joue un rôle dans la régulation glycémique en stoppant la sécrétion du glucagon endogène et en ralentissant la vidange gastrique et en favorisant la satiété, réduisant ainsi les excursions glycémiques post-prandiales dans les niveaux de glucose sanguin.
[000154] L'IAPP est traité à partir d'une séquence codante de 89 résidus. Le polypeptide amyloïde Proislet (proIAPP, proamyline, protéine proislet) est produit dans les cellules bêta pancréatiques (cellules béta) sous la forme d'un pro-peptide deRSO 67 acides aminés, 7404 Dalton, et subit des modifications post-traductionnelles comprenant le clivage de protéase pour produire de l'amyline.
[000155] Dans la présente demande, l'amyline telle que mentionnée fait référence aux composés décrits dans les brevets US 5,124,314 et US 5,234,906.
[000156] On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs de la séquence primaire ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50 %. Dans le cas de l'amyline, un analogue peut être par exemple dérivé de la séquence d'acide aminé primaire de l'amyline en substituant un ou plusieurs acides aminés naturels ou non naturels ou peptidomimétiques.
[000157] On entend par « dérivé », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine ou un analogue chimiquement modifié par un substituant qui n'est pas présent dans le peptide ou la protéine ou l'analogue de référence, c'est-à-dire un peptide ou une protéine qui a été modifié par création de liaisons covalentes, pour introduire des substituants de type non amino-acide.
[000158] Un agoniste au récepteur de l'amyline fait référence à un composé qui imite une ou plusieurs caractéristiques de l'activité de l'amyline.
[000159] Des dérivés d'amyline sont décrits dans l'article Yan et al., PNAS, vol.
103, no 7, p 2046-2051, 2006.
[000160] Dans un mode de réalisation, le substituant est choisi dans le groupe constitué des chaînes grasses.
[000161] Des analogues d'amyline sont décrits dans les brevets US 5,686,411, US
6,114,304 ou bien encore US 6,410,511.
[000162] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que l'analogue d'amyline est le pramlintide (Symlin®) commercialisé par la société
ASTRAZENECA AB.
[000163] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
1.5 et 75.
[000164] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 50.
[000165] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 35.
[000166] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
2.5 et 30.
[000167] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000168] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
3.5 et 30.
[000169] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000170] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000171] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 30.
[000172] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 30.
[000173] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 3 et 75.
[000174] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 7 et 50.
[000175] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 10 et 30.
[000176] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 15 et 30 [000177] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 1,5 et 75.
[000178] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 2 et 50.
[000179] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 3 et 30.
[000180] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 4 et 30.
[000181] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 5 et 30.
[000182] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 8 et 30.
[000183] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 10 et 30.
[000184] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
1.5 et 150.
[000185] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 100.
[000186] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy ! amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 70.
[000187] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
2.5 et 60.
[000188] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 60.
[000189] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
3.5 et 60.
[000190] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 60.
[000191] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 60.
[000192] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 60.
[000193] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 60.
un mode de réalisation, [000194] Dans amyline sont compris entre 5 et 60. [000195] Dans un mode de réalisation, amyline sont compris entre 10 et 60.
[000196] Dans un mode de réalisation, amyline sont compris entre 15 et 60.
[000197] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 1,5 et 60.
[000198] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 2 et 60.
[000199] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 3 et 60.
[000200] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 4 et 60.
[000201] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 5 et 60.
[000202] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 8 et 60.
[000203] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 10 et 60.
les les les ratios ratios ratios molaires molaires molaires radical radical radical les ratios molaires radical les les les les les les ratios ratios ratios ratios ratios ratios molaires molaires molaires molaires molaires molaires radical radical radical radical radical radical hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / hydrophobe Hy / [000204] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,0 et 70.
| [000205] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyli | ne ou | analogue d'amyline | |
| sont compris entre 1,2 et 45. | ||||||
| [000206] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyli | ne ou | analogue d'amyline | |
| sont compris entre 1,3 et 30. | ||||||
| [000207] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 1,7 et 27. | ||||||
| [000208] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 2,0 et 27. | ||||||
| [000209] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 2,3 et 27. | ||||||
| [000210] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 2,7 et 27. | ||||||
| [000211] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 3,3 et 27. | ||||||
| [000212] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline | ||
| sont compris entre 4,7 et 27. | ||||||
| [000213] Dans un mode | de | réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline, agoniste | au | récepteur de | l'amyline ou | analogue d'amyline |
sont compris entre 6,0 et 27.
| [000214] Dans un mode de réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline sont compris entre 2,0 et 67. | ||||
| [000215] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 4,7 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
| [000216] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 6,7 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
| [000217] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 10 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
[000218] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,0 et 67.
[000219] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,3 et 45.
[000220] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2,7 et 27.
[000221] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 3,3 et 27.
[000222] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 5,3 et 27.
[000223] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 6,7 et 27.
[000224] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce qu'elle comprend en outre de l'insuline.
[000225] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que l'insuline est une insuline prandiale. Les insulines prandiales sont solubles à pH 7.
[000226] On entend par insuline prandiale une insuline dite rapide ou « regular ».
[000227] Les insulines prandiales dites rapides sont des insulines qui doivent répondre aux besoins provoqués par l'ingestion des protéines et des glucides durant un repas, elles doivent agir en moins de 30 minutes.
[000228] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale dite « regular » est de l'insuline humaine.
[000229] Dans un mode de réaiisation, l'insuline prandiale est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée américaine.
[000230] L'insuline humaine est par exemple commercialisée sous les marques Humulin® (ELI LILLY) et Novolin® (NOVO NORDISK).
[000231] Les insulines prandiales dites rapides (fast acting) sont des insulines qui sont obtenues par recombinaison et dont la séquence primaire a été modifiée pour diminuer leur temps d'action.
[000232] Dans un mode de réalisation, les insulines prandiales dites rapides (fast acting) sont choisies dans le groupe comprenant l'insuline lispro (Humalog®), l'insuline glulisine (Apidra®) et l'insuline aspart (NovoLog®).
[000233] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline lispro.
[000234] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline glulisine.
[000235] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline aspart.
[000236] Les unités recommandées par les pharmacopées pour les insulines sont présentées dans le tableau ci-après avec leurs correspondances en mg :
| Insuline | Pharmacopée EP 8.0 (2014) | Pharmacopée US - USP38 (2015) |
| Aspart | 1U = 0,0350 mg d'insuline aspart | 1 USP = 0,0350 mg insulin aspart |
| Lispro | 1U = 0,0347 mg d'insuline lispro | 1 USP = 0,0347 mq d'insuline lispro |
| Humaine | 1UI = 0,0347 mg d'insuline humaine | 1 USP = 0,0347 mg d'insuline humaine |
[000237] Dans le cas de l'insuline gîulisine, 100U = 3,49 mg d'insuline glulisine (d'après Annex 1 - Summary of product characteristics relative à ADIPRA®).
[000238] Néanmoins dans la suite du texte U est systématiquement utilisé indifféremment pour les quantités et les concentrations en toutes les insulines. Les valeurs respectives correspondant en mg sont celles données ci-dessus pour des valeurs exprimées en U, UI ou USP.
[000239] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 240 et 3000 μΜ (40 à 500 U/mL).
[000240] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 3000 μΜ (100 à 500 U/mL).
[000241] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 2400 μΜ (100 à 400 U/mL).
[000242] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 1800 μΜ (100 à 300 U/mL).
[000243] Dans un mode de réalisation, eile concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 1200 μΜ (100 à 200 U/mL).
[000244] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 600 μΜ (100 U/mL).
[000245] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 1200 μΜ (200 U/mL).
[000246] Dans un mode de réalisation, eile concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 1800 μΜ (300 U/mL).
[000247] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 2400 μΜ (400
U/mL).
[000248] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 3000 pM (500 U/mL).
[000249] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,5 et 75.
[000250] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 50.
[000251] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2 et 35.
[000252] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2,5 et 30.
[000253] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3 et 30.
[000254] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3,5 et 30.
[000255] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 4 et 30.
[000256] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 5 et 30.
[000257] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 30.
[000258] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 30.
[000259] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 5 et 75.
[000260] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 10 et 50.
[000261] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 15 et 30.
[000262] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,5 et 75.
[000263] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2 et 50.
[000264] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 3 et 30.
[000265] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 4 et 30.
[000266] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 5 et 30.
[000267] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 8 et 30.
[000268] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 10 et 30.
[000269] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,5 et 150.
[000270] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 100.
[000271] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2 et 70.
[000272] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2,5 et 60.
[000273] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3 et 60.
[000274] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3,5 et 60.
[000275] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 4 et 60.
[000276] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 5 et 60.
[000277] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 60.
[000278] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 60.
[000279] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 5 et 60.
[000280] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 10 et 60.
[000281] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 15 et 60.
[000282] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 1,5 et 60.
[000283] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 2 et 60.
[000284] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 3 et 60.
[000285] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 4 et 60.
[000286] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 5 et 60.
[000287] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 8 et 60.
[000288] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 10 et 60.
[000289] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,0 et 70.
[000290] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de î'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 1,2 et 45.
[000291] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 1,3 et 30.
[000292] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 1,7 et 27.
[000293] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 2,0 et 27.
[000294] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 2,3 et 27.
[000295] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de Î'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 2,7 et 27.
[000296] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 3,3 et 27.
[000297] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 4,7 et 27.
[000298] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de I'amyîine ou analogue d'amyline sont compris entre 6,0 et 27.
[000299] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 3,3 et 67.
[000300] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 6,6 et 27.
[000301] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 10 et 27.
[000302] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,0 et 67.
[000303] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,2 et 45.
[000304] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 1,3 et 27.
[000305] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 1,7 et 27.
[000306] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 2,0 et 27.
[000307] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 2,3 et 27.
[000308] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 2,7 et 27.
[000309] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 3,3 et 27.
[000310] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 4,7 et 27.
[000311] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramiintide sont compris entre 6,0 et 27.
[000312] Par ailleurs, il est particulièrement intéressant de combiner l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, en combinaison ou non avec une insuline prandiale, avec des GLP-1, des analogues de GLP-1, des agonistes de récepteurs au GLP-1, ceux-ci sont couramment appelés GLP-1 RA. Cela permet notamment de potentialiser l'effet de l'insuline et est recommandé dans certains type de traitement du diabète.
[000313] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA sont dits « rapides ». On entend par « rapide », des GLP-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA, dont la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme est inférieure 8 heures, en particulier inférieure à 5 heures, de préférence inférieure à 4 heures ou bien encore inférieure à 3 heures, comme par exemple l'exenatide et le iixisenatide.
[000314] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, les analogues de GLP-1, ou les
GLP-1 RA sont choisis dans le groupe constitué par l'exenatide ou Byetta®(ASTRAZENECA), le Iixisenatide ou Lyxumia® (SANOFI), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000315] Dans un mode de réalisation, le GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est l'exenatide ou Byetta®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000316] Dans un mode de réalisation, GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est le lixisenatide ou Lyxumia®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000317] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1,0 mg pour 100 U d'insuline.
[000318] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000319] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000320] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.
[000321] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.
[000322] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.
[000323] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1 mg pour 100 U d'insuline .
[000324] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000325] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000326] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour
100 U d'insuline.
[000327] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour
100 U d'insuline.
[000328] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de de 0,04 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.
[000329] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions d'amyline et de solutions commerciales de GLP-1, d'analogue de GLP-1 ou de d'agoniste de récepteurs de GLP-1 RA en ratios volumiques compris dans un intervalle de 10/90 à 90/10 en présence d'un co-polyaminoacide.
[000330] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 500 μΜ pour 100 U d'insuiine.
[000331] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 400 μΜ pour 100 U d'insuiine.
[000332] Dans un mode de réalisation, Ses compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 300 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000333] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des seis de zinc à une concentration comprise entre 0 et 200 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000334] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des seis de zinc à une concentration comprise entre 0 et 100 pM pour 100 U d'insuline.
[000335] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des tampons.
[000336] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 0 et 100 mM.
[000337] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 15 et 50 mM.
[000338] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon phosphate, ie Tris (trishydroxyméthylaminométhane) et le citrate de sodium.
[000339] Dans un mode de réalisation, le tampon est le phosphate de sodium.
[000340] Dans un mode de réalisation, le tampon est ie Tris (trishydroxyméthylaminométhane).
[000341] Dans un mode de réalisation, le tampon est le citrate de sodium.
[000342] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs.
[000343] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol, seuls ou en mélange.
[000344] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 50 mM.
[000345] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 40 mM.
[000346] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un tensioactif.
[000347] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans le groupe constitué par le propylène glycol et le polysorbate.
[000348] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité.
[000349] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par la glycérine, le chlorure de sodium, le mannitol et la glycine.
[000350] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux pharmacopées et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage.
[000351] L'invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation.
[000352] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire.
[000353] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées.
[000354] L'invention concerne également une pompe, implantable ou transportable, comprenant une composition selon l'invention.
[000355] L'invention concerne encore l'utilisation d'une composition selon l'invention destinée à être placée dans une pompe, implantable ou transportable.
[000356] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et un co-polyaminoacide selon l'invention.
[000357] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline, un co-polyaminoacide selon l'invention et un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un GLP-1 RA, tel que définie précédemment.
[000358] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyîine et un co-polyaminoacide selon l'invention.
[000359] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyîine, un co-polyaminoacide selon l'invention et une insuline prandiale, telle que définie précédemment.
[000360] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyîine et un co-polyaminoacide selon l'invention.
[000361] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyîine, un co-polyaminoacide selon l'invention et une insuline prandiale, telle que définie précédemment.
[000362] Dans un mode de réalisation, les formulations unidoses comprennent en outre un co-polyaminoacide tel que défini précédemment.
[000363] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable.
[000354] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse de l'amyline, d'un agoniste au récepteur de l'amyline ou d'un analogue d'amyîine, et d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
[000365] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse de l'amyline, d'un agoniste au récepteur de l'amyline ou d'un analogue d'amyîine, d'insuline prandiale, et d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
[000366] Dans un mode de réalisation, le mélange d'insuline prandiale et de copolyaminoacide est concentré par ultrafiltration.
[000367] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérine, m-crésol, chlorure de zinc, et polysorbate (Tween®) par ajout de solutions concentrées de ces excipients au sein du mélange. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
[000368] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000369] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline en combinaison avec une insuline mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000370] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline en combinaison avec un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1, mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000371] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline en combinaison avec une insuline et un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1, mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000372] L'invention concerne également une utilisation d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy pour stabiliser une composition comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline.
[000373] L'invention concerne également une utilisation d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy pour stabiliser une composition comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et une insuline prandiale, et éventuellement un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1.
[000374] L'invention concerne une méthode de stabilisation de composition comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ou une méthode de stabilisation de composition comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et une insuline prandiale, et éventuellement un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1.
[000375] Les exemples suivants illustrent, de manière non-limitative, l'invention.
Partie A
AA_L_Sÿ_nth.èse des molécules hydrophobes, dans lesquelles p = 1 [000376] Les radicaux hydrophobes sont représentés dans le tableau suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le co-polyaminoacide.
| N° | Structure de la molécule hydrophobe avant greffage sur le co-polyaminoacide |
| AAI | ° cT θ15”31 |
| AA2 | H2hT -γ N ° 0/^CuH26 Î |
| AA3 | |
| AA4 | ZL/'Z A''.z ; 0 ; T 1 : |
| AA5 | o<^^nh2 Ai |
| AA6 | 0 qÎ^^Ci7H35 |
| AA7 | - \ / u19m39 |
| AA8 | C H o L zNKΎ 15 31 °' \ I |
| AA9 | h?n^X/nh x X / II N ο ΥΥ ζΝΗγ0,ιΗ21 |
Tableau ΙΑ : liste et structures des molécules hydrophobes synthétisées selon l'invention.
Exemple AAI : molécule AAI
Molécule Al : produit obtenu par la réaction entre le chlorure de palmitoyle et la L-proline.
[000377] A une solution de L-proline (10,6 g, 92,1 mmol) dans de la soude aqueuse 1 N (230 mL ; 230 mmol) est ajoutée goutte à goutte pendant 90 minutes une solution de chlorure de palmitoyle (23,0 g, 83,7 mmol) dans l'acétone (157 mL).
Après 14 h d'agitation à température ambiante, le mélange hétérogène est refroidi à 0 °C, puis filtré sur fritté pour donner un solide blanc qui est lavé avec de l'eau (2 x 100 mL) puis du diisopropyléther (100 mL). Le solide est séché sous pression réduite. Le solide est alors dissous à reflux dans 200 mL d'eau puis 8 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 37% sont ajoutés pour obtenir un pH = 1. Le milieu réactionnel 15 opalescent est alors refroidi à 0 °C. Le précipité obtenu est filtré sur fritté puis lavé avec de l'eau (5 x 50 mL) jusqu'à obtenir des filtrats de pH physiologique compris entre 6,0 et 8,0 pour être ensuite séché dans une étuve à 50 °C sous vide pendant une nuit. Le produit est purifié par recristallisation dans le diisopropyléther. Un solide blanc est obtenu.
Rendement : 22,7 g (77%).
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,45 (24H) ; 1,58-1,74 (2H) ; 1,88-2,14 (3H) ; 2,15-2,54 (3H) ; 3,47 (1H) ; 3,58 (ÎH) ; 4,41 (0,lH) ; 4,61 (0,9η) 6,60-8,60 (1H).
Molécule A2 : produit obtenu par réaction entre la molécule Al et la Boc-ethylènediamine.
[000378] A une solution de molécule Al (75,1 g, 212,4 mmol) dans 1500 mL de chloroforme sont ajoutés successivement et à température ambiante de la N,N-diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 g, 532,3 mmol), du 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (37,1 g, 274,6 mmol) puis du N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDC) (53,1 g, 277,0 mmol). Après 15 minutes d'agitation à température ambiante, une solution de Boc-ethylènediamine (Boc-éthylènediamine) (37,6 g, 234,7 mmol) dans 35 mL de chloroforme est additionnée. Après 18 h d'agitation à température ambiante, une solution de HCl 0,1 N (2,1 L), puis une solution saturée de NaCI (1 L) sont ajoutées. Les phases sont séparées puis la phase organique est lavée successivement avec une solution de HCl 0,1 N / NaCI saturée (2,1 L/l L), une solution de NaCI saturée (2 L), une solution de NaHCO3 saturée (2 L), puis une solution de NaCI saturée (2 L). La phase organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Le solide obtenu est purifié par triturations dans le diisopropyléther (3 x 400 mL), pour donner un solide après séchage sous vide à 40 °C.
Rendement : 90,4 g (86%).
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,20-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,54-1,70 (2H) ; 1,79-1,92 (1H) ; 1,92-2,04 (1H) ; 2,03-2,17 (1H) ; 2,17-2,44 (3H) ; 3,14-3,36 (4H) ; 3,43 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,29 (0,1 H) ; 4,51 (0,9 H) ; 4.82 (0,lH) ; 5,02 (0,9H) ; 6,84 (0,lH) ; 7,22 (0,9H).
Molécule AAI [000379] A une solution de molécule A2 (20,1 g, 40,5 mmol) dans 330 mL de dichlorométhane est ajoutée goutte à goutte et à 0 °C une solution d'acide chlorhydrique 4 M dans le dioxane (100 mL, 400 mmol). Après 3h30 d'agitation à température ambiante, la solution est concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane) pour donner un solide blanc de molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 16,3 g (93%).
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,07-1,40 (24H) ; 1,49-1,63 (2H) ; 1,77-2,18 (4H) ; 2,18-2,45 (2H) ; 3,14-3,32 (2H) ; 3,42-3,63 (2H) ; 3,63-3,84 (2H) ; 4,37 (O,1H) ; 4,48 (0,9H) ; 6,81-8,81 (4H).
LC/MS (ESI) : 396,5 ; (calculé ([M+H]+) : 396,4).
Exemple AA2 : molécule AA2
Molécule A3 : 15-méthylhexadécan-l-ol.
[000380] Dans un tricol sous argon est introduit du magnésium (9,46 g, 389 mmol) en copeaux. Le magnésium est recouvert de THF (40 mL) anhydre et quelques gouttes de l-bromo-3-méthylbutane sont ajoutées à température ambiante pour initier la réaction. Après l'observation d'un exotherme et un léger trouble du milieu, le reste du l-bromo-3-méthylbutane (53,87 g, 357 mmol) est ajouté au goutte à goutte en 90 min alors que la température du milieu reste stable entre 50 et 60°C. Le milieu réactionne! est ensuite chauffé à 70°C pendant 2 h.
[000381] Dans un tricol sous argon, à une solution de CuCI (482 mg, 4,86 mmol) dissous dans la NMP (62 mL) à 0°C est ajoutée au goutte à goutte une solution de 12-bromo-l-dodécanol (43 g, 162.1 mmol) dans le THF (50 mL). A cette solution est ensuite ajoutée au goutte à goutte la solution de l'organomagnésien chaude fraîchement préparée de façon à maintenir la température du milieu en dessous de 20°C. Le mélange est ensuite agité à température ambiante pendant 16 h. Le milieu est refroidi à 0°C et la réaction est stoppée par addition d'une solution aqueuse d'HCI IN jusqu'à pH 1 et le milieu est extrait à l'acétate d'éthyle. Après lavage de la phase organique avec une solution saturée en NaCI et séchage sur Na2SO4, la solution est filtrée et concentrée sous vide pour donner une huile. Après purification par DCVC sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle), une huile qui cristallise à température ambiante est obtenue.
Rendement : 32,8 g (74%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,20-1,35 (22H) ; 1,50-1,55 (3H) ; 3,64 (2H).
Molécule A4 : acide 15-méthylhexadécanoïque.
[000382] A une solution de molécule A3 (20,65 g, 80,5 mmol) et bromure de tétrabutylammonium (14,02 g, 42,5 mmol) dans un mélange d'acide acétique/dichloréthane/eau (124/400/320 mL) à température ambiante est ajouté par petites portions du permanganate de potassium (38,2 g, 241,5 mmol). Après agitation à reflux pendant 5 h et retour à température ambiante, le milieu est acidifié à pH 1 par ajout progressif de HCl 5N. Na2SO3 (44,6 g, 354,3 mmol) est ensuite ajouté progressivement jusqu'à décoloration du milieu. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane et les phases organiques combinées sont séchées sur Na2SO4, filtrées et concentrées sous vide. Après purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique), un solide blanc est obtenu. Rendement : 19,1 g (quantitatif)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,51 (1H) ; 1,63 (2H) ; 2,35 (2H).
Molécule A5 : produit obtenu par réaction entre la molécule A4 et la L-proline. [000383] A une solution de molécule A4 (10 g, 37 mmol) dans le THF (360 mL) à 0°C sont ajoutés successivement du dicyclohexyle carbodiimide (DCC) (8,01 g, 38,8 mmol) et du N-hydroxysuccinimide (NHS) (4,47 g, 38,8 mmol). Après 17 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0°C pendant 20 min, filtré sur fritté. De la L-proline (4 g, 37,7 mmol), de la triéthylamine (34 mL) et de l'eau (30 mL) sont ajoutées au filtrat. Après 20 h d'agitation à température ambiante, le milieu est traité avec une solution aqueuse d'HCI IN jusqu'à pH 1. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (2 x 125 mL). Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution aqueuse de HCl IN (2 x 100 mL), de l'eau (100 mL), puis une solution aqueuse saturée en NaCI (100 mL). Après séchage sur Na2SO4, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique)
Rendement : 9,2 g (72%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,50 (1H) ; 1,67 (2H) ; 1,95-2,10 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H). LC/MS (ESI): 368,3 ; (calculé ([M+H]+): 368,6).
Molécule A6 : produit obtenu par réaction entre la molécule A5 et la Boc-éthylènediamine.
[000384] A une solution de molécule A5 (9,22 g, 25,08 mmol) dans un mélange THF/DMF (200/50 mL) sont ajoutés de la triéthylamine (TEA) (5,23 mL) et du 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTLJ) à température ambiante. Après 10 min d'agitation, de la Boc-éthylènediamine (4,42 g, 27,6 mmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 17 h, le mélange est dilué avec de l'eau (300 mL) à 0°C et agité à froid pendant 20 min. Le précipité formé est filtré sur fritté et le filtrat est extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaHCO3, séchées sur Na2SO4, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie flash (acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 6,9 g (54%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,15 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,43 (9H) ; 1,50 (1H) ; 1,64 (4H) ; 1,85 (1H) ; 1,95 (1H) ; 2,10 (1H) ; 2,31 (2H) ; 3,20-3,35 (3H) ;
3,45 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,51 (1H) ; 5,05 (1H) ; 7,24 (1H).
LC/MS (ESI): 510,6 ; (calculé ([M+H]+): 510,8).
Molécule AA2 [000385] A une solution de la molécule A6 (5,3 g, 10,40 mmol) dans le dichlorométhane (50 mL) à 0°C est ajoutée une solution de HCI 4N dans le dioxane (13 mL). Après 5 h d'agitation à 0°C, le milieu est concentré sous vide, repris dans de l'eau et lyophilisé pour donner un solide blanc de molécule AA2 sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 4,6 g (99%)
RMN XH (D2O, ppm) : 0,91 (6H) ; 1,22 (2H) ; 1,22-1,50 (20H) ; 1,63 (3H) ; 1,98 (1H) ; 2,10 (2H) ; 2,26 (1H) ; 2,39 (1H) ; 2,43 (1H) ; 3,22 (2H) ; 3,45-3,60 (3H) ; 3,78 (1H) ; 4,42 (1H).
LC/MS (ESI): 410,4 ; (calculé ([M-CI]+): 410,7).
Exemple AA3 : molécule AA3
Molécule A7 : produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine.
[000386] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4,0 g, 11,3 mmol) et à la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine (3,1 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, toluène).
Rendement : 5,5 g (84%).
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,09-1,39 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,64 (2H) ; 1,79-2,01 (2H) ; 2,06-2,43 (4H) ; 3,23-3,68 (14H) ; 4,33 (0,2H) ; 4,56 (0,8H) ; 5,25 (1H) ; 6,49 (0,2H) ; 7,13-7,50 (0,8H).
Molécule AA3 [000387] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule
AAI appliqué à la molécule A7 (5,5 g, 9,4 mmol), un solide blanc de molécule AA3 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 4,3 g (92%).
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,40-1,52 (2H) ; 1,71-2,02 (4H) ; 2,02-2,31 (2H) ; 2,90-2,98 (2H) ; 3,15-3,47 (5H) ; 3,50-3,66 (7H) ; 4,24 (0,6H) ; 4,32 (0,4H) ; 7,83 (0,6H) ; 7,95 (3H) ; 8,17 (0,4H).
LC/MS (ESI) : 484,6 ; (calculé ([M+H] + ) : 484,4).
Exemple AA4 : molécule AA4
Molécule A8: produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane amine.
[000388] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4,5 g, 12,7 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane amine (4,5 g, 14,0 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 7,7 g (92%).
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,22-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,59-1,67 (2H) ; 1,67-2,00 (6H) ; 2,06-2,45 (4H) ; 3,18-3,76 (18H) ; 4,28 (0,2H) ; 4,52 (0,8H) ; 4,69-5,04 (1H) ; 6,77 (0,2H) ; 7,20 (0,8H).
Molécule AA4 [000389] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A8 (7,7 g, 11,8 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane). Une coévaporation avec du diisopropyléther permet d'obtenir la molécule AA4 sous forme de sel de chlorhydrate sous forme d'un solide bianc qui est séché sous vide à 50 °C. Rendement : 5,4 g (76%).
RMN TH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,49-1,65 (2H) ; 1,76-2,39 (10H) ; 3,07-3,28 (3H) ; 3,34-3,80 (15H) ; 4,34 (0,05H) ; 4,64 (0,95H) ; 7,35 (0,05H) ; 7,66-8,58 (3,95H).
LC/MS (ESI) : 556,7 ; (calculé ([M+H]+) : 556,5).
Exemple AA5 : molécule AA5 [000390] Molécule A9 : produit obtenu par réaction entre la molécule Al et l'ester méthylique de la N-Boc-L-lysine.
[000391] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule
A2 appliqué à la molécule Al (4 g, 11,3 mmol) et à l'ester méthylique de la N-Boc-Llysine (3,2 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 4,9 g (73%).
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 0,99-1,54 (37H) ; 1,54-1,75 (3H) ; 1,75-2,04 (3H) ; 2,04-2,41 (4H) ; 2,94-3,19 (2H) ; 3,19-3,81 (5H) ; 4,28-4,64 (2H) ; 4,94 (1H) ; 6,45 (O,1H) ; 7,36 (0,9H).
LC/MS (ESI) : 596,7 ; (calculé ([M + H]+) : 596,5).
Molécule A10 : produit obtenu par traitement de la molécule A9 avec de l'ammoniaque.
[000392] A une suspension de molécule A9 (4,9 g, 8,2 mmol) dans 10 mL de méthanol sont ajoutés 320 mL d'une solution d'ammoniaque 7 N dans le méthanol. Après 19 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, 100 mL supplémentaires de solution d'ammoniaque sont ajoutés. Après 24 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite. Le résidu est purifié par trituration dans le diisopropyléther à reflux (100 mL), pour donner un solide blanc qui est séché sous vide à 50 °C.
Rendement : 4,1 g (85%).
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,06-1,57 (37H) ; 1,57-1,79 (3H) ; 1,88-2,41 (7H) ; 3,09 (2H) ; 3,49 (1H) ; 3,62 (1H) ; 4,34 (1H) ; 4,51 (1H) ; 4,69-4,81 (1H) ; 5,43 (0,95H) ; 5,57 (0,05H) ; 6,25 (0,05H) ; 6,52 (0,95H) ; 6,83 (0,05H) ; 7,11 (0,95H).
Molécule AA5 [000393] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A10 (388 mg, 0,67 mmol), un solide blanc de molécule AA5 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par trituration dans le diisopropyléther.
Rendement : 292 mg (85%).
RMN XH (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,06-2,34 (38H) ; 2,61-2,81 (2H) ; 3,29-3,68 (2H) ; 4,05-4,17 (1,7H) ; 4,42 (0,3H) ; 7,00 (1H) ; 7,16 (0,7H) ; 7,43 (0,3H) ; 7,73-8,04(3,7H) ; 8,16 (0,3H).
LC/MS (ESI): 481,6 ; (calculé ([M+H]+) : 481,4).
Exemple AA6 : molécule AA6
Molécule Ail : produit obtenu par la réaction entre le chlorure de stéaroyle et la L-proline.
[000394] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Al appliqué à la L-proline (5,0 g, 43,4 mmol) et au chlorure de stéaroyle (12,0 g, 39,6 mmol), un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 5,37 g (36%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,26-1,37 (28H) ; 1,64-1,70 (2H) ; 1,88-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,54-2,58 (1H) ; 3,46 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,62 (1H).
LC/MS (ESI) : 382,6 ; (calculé ([M+H]+) : 382,3).
Molécule A12 : produit obtenu par réaction entre la molécule Ail et la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine.
[000395] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule Ail (33,81 g, 88,6 mmol) et à la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine (26,4 g, 106,3 mmol) dans le THF en utilisant la DIPEA au lieu de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 43,3 g (80%)
RMN ΧΗ (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,24 (30H) ; 1,43 (9H) ; 1,61 (2H) ; 1,82 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,25-2,45 (2H) ; 3,25-3,65 (14H) ; 4,30 (0,15H) ; 4,53 (0,85H) ; 5,25 (1H) ; 6,43 (0,15H) ; 7,25 (0,85H).
LC/MS (ESI): 612,6 ; (calculé ([M+H]+): 612,9).
Molécule AA6 [000396] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A12 (43 g, 70,3 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est trituré dans l'acétonitrile. La suspension est filtrée et le solide lavé avec de l'acétonitrile puis de l'acétone. Après séchage sous vide, un solide blanc de molécule AA6 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu.
Rendement : 31,2 g (81%)
RMN XH (DMSO-de, ppm) : 0,85 (3H) 1,23 (28H) ; 1,45 (2H) ; 1,70-2,05 (4H) 2,13 (1H) ; 2,24 (1H) ; 2,95 (2H) ; 3,10-3,25 (2H) ; 3,30-3,65 (10H) ; 4,20-4,45 (1H) ; 7,85-8,25 (4H).
LC/MS (ESI): 512,4 ; (calculé ([M-CI]+): 512,8).
Exemple AA7 : molécule AA7
Molécule A13j. produit obtenu par réaction entre l'acide arachidique et la L-proline.
[000397] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule
A5 appliqué à l'acide arachidique (15,51 g, 49,63 mmol) et à la L-proline (6 g, 52,11 mmol) en utilisant la DIPEA à la place de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique).
Rendement : 12,9 g (63%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (34H) ; 1,66 (2H) ; 1,95-2,15 (2H) ; 2,34 (2H) ; 2,45 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).
LC/MS (ESI): 410,4 ; (calculé ([M+H]+): 410,6).
Molécule A14 : produit obtenu par la réaction entre la molécule A13 et la Boc-1amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane.
[000398] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A12 appliqué à la molécule A13 (10,96 g, 26,75 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane (10,29 g, 32,11 mmol), un solide est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 14,2 g (75%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,24 (32H) ; 1,43 (9H) ; 1,51 (2H) ; 1,80 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,10-2,45 (4H) ; 3,20-3,75 (18H) ; 4,30 (0,20H) ; 4,55 (0,80H) ; 5,03 (1H) ; 6,75 (0,20H) ; 7,20 (0,80H).
LC/MS (ESI): 712,8 ; (calculé ([M+H]+): 713,1).
Molécule AA7 [000399] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A14 (14,25 g, 20,01 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissous dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l'opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule AA7 sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 12,7 g (98%)
RMN XH (DMSO-de, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,23 (32H) ; 1,45 (2H) ; 1,64 (2H) ; 1,70-2,05 (6H) ; 2,10-2,30 (2H) ; 2,82 (2H) ; 3,08 (2H) ; 3,30-3,60 (15H) ; 4,15-4,30 (1H) ; 7,73-8,13 (4H).
LC/MS (ESI): 612,7 ; (calculé ([M-CI]+): 612,9).
Exemple AA8 : molécule AA8
Molécule A15 : produit obtenu par la réaction entre la L-leucine et le chlorure de palmitoyle.
[000400] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule
Al appliqué à de la L-leucine (15,0 g, 114,4 mmol) et au chlorure de palmitoyle (34,5 g, 125 mmol), un solide blanc est obtenu par trituration dans le diisopropyléther.
Rendement : 13,0 g (31%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 0,96 (6H) ; 1,15-1,35 (24H) ; 1,55-1,77 (5H) ;
2,23 (2H) ; 4,55-4,60 (1H) ; 5,88 (1H).
Molécule A16 : produit obtenu par la réaction entre la molécule A15 et l'ester méthylique de la L-proline [000401] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A15 (6,00 g, 16,2 mmol) et à l'ester méthylique de la L-proline (3,23 g, 19,5 mmol), une huile légèrement jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 5,8 g (74%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,40-1,73 (5H) ; 1,84-2,33 (6H) ; 3,47-3,89 (2H) ; 3,70 (1,14H) ; 3,71 (1,21H) ; 3,74 (0,53H) ; 3,76 (0,12H) ; 4,40-4,56 (1H) ; 4,63-4,67 (0,04H) ; 4,84 (0,38) ; 4,90 (0,40) ; 5,06 (0,18) ; 5,99 (0,18H) ; 6,08-6,21 (0,82).
LC/MS (ESI) : 481,5 ; (calculé ([M + H]+) : 481,4).
Molécule A17 : produit obtenu par la saponification de l'ester méthylique de la molécule A16.
[000402] A une solution de molécule A16 (5,8 g, 12,06 mmol) dans 30 mL de méthanol est ajoutée de la soude 1 N (13,5 mL, 13,5 mmol). Après 20 h d'agitation à température ambiante, la solution est diluée avec de l'eau puis acidifiée par 20 mL d'acide chlorhydrique 1 N à 0 °C. Le précipité est filtré puis rincé avec de l'eau (50 mL) avant d'être solubilisé dans 50 mL de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur Na2SO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite pour donner une huile incolore.
[000403] Rendement : 4,5 g (80%)
RMN (CDCI3, ppm) : 0,85-0,99 (9H) ; 1,14-1,41 (24H) ; 1,43-1,72 (5H) ; 1,87-2,47 (7H) ; 3,48-3,55 (0,6H) ; 3,56-3,62 (0,4H) ; 3,83-3,90 (0,4H) ; 3,90-3,96 (0,6H) ; 4,52-4,56 (0,6H) ; 4,56-4,59 (0,4H) ; 4,80-4,86 (0,41-1) ; 4,86-4,91 (0,6H) ;
6,05 (0,4H) ; 6,11 (0,6H).
LC/MS (ESI) : 467,6 ; (calculé ([M+H]+) : 467,4).
Molécule A18.:. produit obtenu par la réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule A17.
[000404] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A17 (4,5 g, 9,64 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (1,70 g, 10,61 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 2,0 g (34%)
RMN (CDCI3, ppm) : 0,83-0.99 (9H) ; 1,19-1,32 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,48-2,37 (14H) ; 3,09-3,99 (4H) ; 4,28-5,01 (2H) ; 5,64-6,04 (1H) ; 6,87-7,06 (1H).
LC/MS (ESI) : 609,7 ; (calculé ([M + H]+) : 609,5).
Molécule AA8 [000405] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A18 (2 g, 3,28 mmol), un solide de molécule AA8 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 1,5 g (90%)
RMN (CDCI3, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,37-1,77 (5H) ; 1,93-2,41 (6H) ; 3,07-3,97 (6H) ; 4,44-4,77 (2H) ; 7,66-8,21 (2H).
LC/MS (ESI) : 509,6 ; (calculé ([M+H]+) : 509,4).
Exemple AA9 : molécule AA9
Molécule A19.j produit obtenu par la réaction entre l'acide laurique et la L-phénylalanine.
[000406] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A5 appliqué à l'acide laurique (8,10 g, 40,45 mmol) et à la L-phénylalanine (7 g, 42,38 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 12,7 g (98%)
RMN XH (DMSO-d6, ppm) : 0,86 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,36 (2H) ; 2,02 (2H) ; 2,82 (1H) ; 3,05 (1H) ; 4,42 (1H) ; 7,15-7,30 (5H) ; 8,05 (1H) ; 12,61 (1H).
LC/MS (ESI): 348,2 ; (calculé ([M + H]+): 348,5).
Molécule A20 : produit obtenu par la réaction entre la molécule A19 et le sel chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-proline.
[000407] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule A19 (9,98 g, 28,72 mmol) et au sel chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-proline (5,23 g, 31,59 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle).
Rendement : 5,75 g (44%)
RMN ΧΗ (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,50-1,75 (3H) ; 1,80-2,02 (3H) ; 2,17 (2H) ; 2,65 (0,5H) ; 2,95 (1H) ; 3,05-3,20 (1,5H) ; 3,50-3,65 (1H) ; 3,75 (3H) ; 4,29 (0,5H) ; 4,46 (0,5H) ; 4,70 (0,lH) ; 4,95 (0,9H) ; 6,20-6,30 (1H) ; 7,157,30 (5H).
LC/MS (ESI): 459,2 ; (calculé ([M+H]+): 459,6).
Molécule A21 : produit obtenu par saponification de la molécule A20.
[000408] A une solution de molécule A20 (5,75 g, 12,54 mmol) dans un mélange THF/méthanol/eau (40/40/40 mL) à 0°C est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (LiOH) (600,49 mg, 25,07 mmol) puis le mélange est agité à température ambiante pendant 20 h. Après évaporation des solvants organiques sous vide, la phase aqueuse est diluée dans l'eau, acidifiée avec une solution aqueuse de HCl IN jusqu'à pH 1. Le produit est alors extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur Na2SO4, filtrées et concentrées sous pression réduite pour donner une huile incolore.
Rendement : 5,7 g (quantitatif)
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,50-1,80 (3H) ; 1,67-2,02 (2H) ; 2,20 (2H) ; 2,25 (0,4H) ; 2,60 (0,6H) ; 2,85-3,10 (2,6H) } 3,55-3,65 (1,4H) ; ; 4,35 (0,6H) ; 4,55 (0,4H) ; 4,94 (1H) ; 6,28 (0,4H) ; 6,38 (0,6H) ; 7,20-7,30 (5H). LC/MS (ESI): 445,2 ; (calculé ([M+H]+): 445,6).
Molécule A22 : produit obtenu par réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule A21.
[000409] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule A21 (5,67 g, 12,75 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (2,25 g, 14,03 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol).
Rendement : 5,7 g (76%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,25 (16H) ; 1,43 (9H) ; 1,58 (2,6H) ; 1,75-1,95 (1,4H) ; 2,15-2,30 (3H) ; 2,64 (0,5H) ; 2,95-3,10 (2,5H) ; 3,20-3,40 (4H) ; 3,45 (0,5H) ; 3,55 (0,2H) ; 3,66 (1H) ; 4,44 (1H) ; 4,50 (0,2H) ; 4,60 (0,6H) ; 4,99 (0,7H) ; 5,54 (0,5H) ; 5,95 (0,2H) ; 6,17 (1H) ; 6,60 (0,5H) ; 7,07 (0,5H) ; 7,20-7,40 (5H). LC/MS (ESI): 587,4 ; (calculé ([M+H]+): 587,8).
Molécule AA9 [000410] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A22 (5,66 g, 9,65 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissous dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l'opération étant répétée 4 fois pour donner une mousse blanche de molécule AA9 sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 4,9 g (97%)
RMN (DMSO-de, 120°C, ppm) : 0,89 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,43 (2H) ; 1,68 (0,6H) ; 1,75-2,00 (3H) ; 2,05-2,25 (2,4H) ; 2,82-3,05 (5H) ; 3,38 (2H) ; 3,50-3,70 (1,4H) ; 4,25 (0,6H) ; 4,63 (0,4H) ; 4,77 (0,6H) ; 7,25-7,50 (5H) ;7,55-8,20 (4H).
LC/MS (ESI): 487,4 ; (calculé ([M-CI]+): 487,7).
AB : Synthèse des co-polyaminoacides
AB5
AB6
Ri == H ou pyroglutamate
.0
Ri = H ou pyroglutamate
AB7
AB8
Hy i = 0,03, DP (m + n) = 21 Hy =
R1=CH3-CO-, H ou pyroglutamate
ONa’
i = 0,03, DP (m + n) - 24
Hy =
Ri = H ou pyroglutamate
H^O i = 0,056, DP (m + n) = 22
Hy =
_____ Ri = H ou pyroglutamate
Tableau lb
Co-polyaminoacides définis de formule VII ou Vllb :
| n° exemple | co-polyaminoacides porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes | |||||
| AB14 | 0¾ | ONa | ||||
| ; | °X\ | |||||
| Z | C | ) \^C15H31 | ||||
| H | / | |||||
| RN | ''NT | < .N | ||||
| H | H | |||||
| L | J m | |||||
| 0 | ||||||
| i = 0,04, DP (m) = | = 25 | |||||
| R,= | H ou pyroglutamate |
Tableau le : liste des co-polyaminoacides synthétisés selon l'invention.
Partie AB : synthèse des co-polyaminoacides
Exemple AB1 : Co-polyaminoacide AB1 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2900 g/mol
Co-polyaminoacide AB1-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3861 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine [000411] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (89,9 g, 341 mmol) pendant 30 min, puis du DMF anhydre (200 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (2,05 mL 15,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte à goutte dans du diisopropyléther (3 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 200 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) (PBLG).
[000412] A une solution de PBLG (74,8 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 340 mL) à 4 °C est ajoutée goutte à goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans l'acide acétique (240 mL, 1,37 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL).
[000413] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L.
[000414] La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L.
[000415] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37% jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (2 x 340 mL) puis séché sous vide à 30°C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3861 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).
Co-polyaminoacide AB1 [000416] Le co-polyaminoacide AB1-1 (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30°C-40°C puis refroidi à 0 °C. La molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate (1,64 g, 3,8 mmol) est mise en suspension dans du DMF (23 mL) et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée et le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. A la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la N-méthylmorpholine (NMM, 7.6 g, 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,2 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0°C, la solution contenant la molécule AAI est ajoutée et le milieu maintenu à 30°C durant 2 h. Le milieu réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur 5,5 L d'eau contenant du chlorure de sodium à 15% massique et du HCI (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration et séché sous vide pendant environ 30 min. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (500 mL) et le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH IN. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8°C.
Extrait sec : 24,9 mg/g
Un degré de polymérisation moyen (DP) de 23 est estimé par RMN 2H dans D2O en comparant l'intégration des signaux provenant de l'hydrophobe greffé à celle des signaux provenant de la chaîne principale.
D'après la RMN ^:1 = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est calculée sur la base des masses molaires des radicaux Rx et R2, des résidus aspartate et/ou glutamate (y compris une liaison amide), du radical hydrophobe, du DS et du DP.
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est de 3945 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol.
Exemple AB2 : Co-polyaminoacide AB2 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3700 g/mol [000417] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacideABl appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (1,64 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de Mn relative 5200 g/mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacideABl-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI est obtenu.
Extrait sec : 14,1 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 35
D'après la RMN = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB2 est de 5972 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3700 g/mol.
Exemple AB3 : Co-polyaminoacide AB3 - poly-L-glutamate de sodium modifié par Sa molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol [000418] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (3,30 g, 7,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) relative 5200 g/mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI est obtenu.
Extrait sec : 23,4 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 4H) : 35
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB3 est de 6594 g/mol.
D'après la RMN ^:1 = 0,10
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol.
Exemple AB4 : Co-polyaminoacide AB4 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de
1800 g/mol [000419] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA2 (1,09 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne Mn - 5600 g/mol (6,3 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 mais avec une étape de déprotection des esters benzyliques utilisant l'iodure de triméthylsilane selon le protocole décrit dans la publication J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 26-34 (Subramanian G., et al·), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 est obtenu.
Extrait sec : 21,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 35
D'après la RMN XH : i = 0,052
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB4 est de 6022 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol.
Exemple AB5 : Co-polyaminoacide AB5 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000420] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1 appiiqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,06 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (9,8 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-poiyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 est obtenu.
Extrait sec : 20,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 23
D'après la RMN XH : i = 0,05
La masse molaire moyenne calcuiée du co-polyaminoacide ABS est de 4079 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 2600 g/mol.
Exemple AB6 : Co-polyaminoacide AB6 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000421] Un acide poly-L-giutamique de masse moyenne Mn = 3500 g/mol et de degré de polymérisation 22 (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 est solubilisé dans le DMF (420 mL) à
30°C-40°C puis maintenu à cette température. En parallèle, le sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,47 g, 2,3 mmol) est mis en suspension dans du DMF (12 mL) et de la triéthylamine (0,23 g, 2,3 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. A la solution de co-polyaminoacide dans le DMF, de la NMM (7,6 g, 75 mmol), la solution de AA7 puis de la /V-oxyde de 2-hydroxypyridine (HOPO, 0,84 g, 7,5 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est aiors refroidi à 0°C, puis du EDC (1,44 g, 7,5 mmol) est ajouté et le milieu est remonté à température ambiante durant 2 h. Le milieu réactionnel est filtré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 3,5 L d'eau contenant du NaCI à 15% massique et du HCl (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 37%, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 500 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 21,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 20
D'après la RMN XH : i = 0,025
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB6 est de 3369 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.
Exemple AB7 : Co-polyaminoacide AB7 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000422] Co-polyamLnoaçicLe__AB7-.l_ acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3600 g/mol et de DP 21 issu de la polymérisation du γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine et cappé à l'une de ses extrémités par un groupement acétyie [000423] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (Glu(OBn)-NCA, 100,0 g, 380 mmoi) pendant 30 minutes puis du DMF anhydre (225 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4°C, puis de l'hexylamine (1,78 g, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4°C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyléther (3,4 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissous dans 450 mL de THF. A cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (31 mL, 176 mmol) puis de l'anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L) sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (250 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle.
[000424] A une solution du co-polyaminoacide ci-dessus (72 g) dans l'acide trifîuoroacétique (TFA, 335 mL) à 4°C est ajoutée goutte à goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans l'acide acétique (235 mL). Le mélange est agité à température ambiante pendant 3 h 30, puis coulé goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL).
[000425] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10N puis une solution aqueuse de soude IN. Après solubilisation, la solution est diluée par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L.
[000426] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37% jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (330 mL) puis séché sous vide à 30°C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3600 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG), et de degré moyen de polymérisation 21.
[000427] Co-polyaminoacide AB7 : Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,43 g, 2,2 mmol) et au co-polyaminoacide AB7-1 (10,0 g), un acide poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 24,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 21
D'après la RMN XH : i = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB7 est de 3677 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.
Exemple AB8 : Co-polyaminoacide AB8 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de
3600 g/mol [000428] Çojjolyaminoacide AB8-1. 1 acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3800 g / mol et de degré de polymérisation 24 issu de la polymérisation du γ-méthyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'ammoniac [000429] Par un procédé similaire à celui décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226 appliqué au γ-méthyl-L-acide glutamique N-carboxyanhydride (25,0 g, 133,6 mmol) et à une solution d'ammoniaque 0,5N dans le dioxanne (12,1 mL, 6,05 mmol), un acide poly-L-glutamique est obtenu.
Co-polyaminoacide AB8 :
[000430] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,1 g, 3,24 mmol) et au co-polyaminoacide AB8-1 (14,3 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 25,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN *H) : 24
D'après la RMN XH : i = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB8 est de 4099 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3600 g/mol.
Exemple AB9 : Co-polyaminoacideAB9 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3200 g/mol [000431] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacideABl appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA3 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA3 est obtenu.
Extrait sec : 14,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ^) : 30
D'après la RMN ^:1 = 0,12
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB9 est de 6192 g/mol.
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3200 g/mol.
Exemple AB1O : Co-polyaminoacideABlO - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000432] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB7 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA4 et à unacide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA4 est obtenu.
Extrait sec : 18,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 25
D'après la RMN XH : i = 0,08
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB10 est de 4870 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.
Exemple ABU ; Co-polyaminoacide ABU - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA5 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2700 g/mol [000433] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA5 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA5 est obtenu.
Extrait sec : 20,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 23
D'après la RMN XH : i = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide ABU est de 4072 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2700 g/mol.
Exemple AB12 : Co-polyaminoacide AB12 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3000 g/mol [000434] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA8 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA8 est obtenu.
Extrait sec : 19,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 26
D'après la RMN ^:1 = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB12 est de 4477 g/mol.
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3000 g/mol.
Exemple AB13 : Co-polyaminoacide AB13 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA9 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000435] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA9 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 en utilisant l'isoamylamine comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA9 est obtenu. Extrait sec : 22,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ΧΗ) : 35
D'après la RMN ^:1 = 0,12
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB13 est de 7226 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.
Exemple AB21 : Co-polyaminoacide AB21 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/mol [000436] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,44 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 22,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 1H) : 22
D'après la RMN ^:1 = 0,056
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB21 est de 4090 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol.
Exemple AB14 : Co-polyaminoacide AB14 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/mol [000437] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AAI (2,03 g, 4,70 mmol), du chloroforme (5 mL), du tamis moléculaire 4Â (1,3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN
150 (1,3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène.
Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (30 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.
[000438] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (25,59 g, 97,2 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (140 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AAI préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte à goutte dans du diisopropyléther (1,7 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (140 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (160 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (62 mL, 354 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (1,9 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (280 mL) puis avec de l'eau (140 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (530 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 800 mL. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 24,1 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 25 donc i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB14 est de 3378 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol.
Exemple AB15 : Co-polyaminoacide AB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/mol [000439] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,16 g, 3,94 mmol) et à 25,58 g (97,2 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu.
Extrait sec : 45,5 mg/g
DP (estimé par RMN XH) = 30 donc i = 0,033
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB15 est de 5005 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 4100 g/mol.
Exemple AB16 : Co-polyaminoacide AB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6500 g/mol [000440] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,39 g, 4,36 mmol) et à 50,0 g (189,9 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu.
Extrait sec : 28,5 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 48 donc i = 0,021
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB16 est de 7725 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 6500 g/mol.
Exemple AB17 : Co-polyaminoacide AB17 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3500 g/mol [000441] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,9 mmol) de y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 25,2 mg/g
DP (estimé par RMN TH) - 26 donc i = 0,038
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB17 est de 4500 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3500 g/mol.
Exemple AB18 : Co-polyaminoacide AB18 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3700 g/mol [000442] Un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 est obtenu par polymérisation du γ-méthyl N-carboxyanhydride d'acide glutamique (25,0 g, 133,6 mmol) en utilisant le sel chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters méthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37% selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226.
Extrait sec : 44,3 mg/g
DP (estimé par RMN *Η) - 22 donc i - 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB18 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3700 g/mol.
Exemple AB19 : Co-polyaminoacide AB19 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000443] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (1,64 g, 2,99 mmol) et au γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (49,3 g, 187 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu.
Extrait sec : 23,4 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 65 donc i = 0,015
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB19 est de 10293 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10500 g/mol.
Exemple AB20 : Co-polyaminoacide AB20 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10400 g/mol [000444] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (0,545 g, 1,00 mmol), du chloroforme (10 mL), du tamis moléculaire 4Â (3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (10 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.
[000445] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (17,0 g, 64,6 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (30 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AA6 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis précipité dans du diisopropyléther (0,6 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (40 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissous dans 80 mL de THF. A cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (1,7 mL, 9,8 mmol) puis de l'anhydride acétique (0,9 mL, 9,5 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (480 mL) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (80 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié à l'autre de ses extrémités par la molécule AA6 sous la forme d'un solide blanc.
[000446] Le solide est dilué dans du TFA (65 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (45 mL, 257,0 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 4 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (780 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (70 mL) puis avec de l'eau (70 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (300 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 440 mL. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 21,5 mg/g
DP (estimé par RMN XH) = 60 donc i = 0,017
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB20 est de 9619 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10400 g/mol.
Partie B:
BB : synthèse des molécules hydrophobes dans lesquelles p = 2 [000447] Les radicaux sont représentés dans le tableau suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le co-polyaminoacide.
| N° | Structure de la molécule hydrophobe avant greffage sur le co-polyaminoacide | |
| BAI | ( N xC9H19 Y Y | |
| J 0 | ||
| O^NH | ||
| \ Q | ,O | |
| A \ | ||
| Η2Ν^^ΝγΥ,Λ0 | CüH19 | |
| O | ||
| BA2 | / N. zCHH23 Y Ίί | |
| _Y 0 O'^ 'NH | ||
| k | yO | |
| Y | ||
| h2n χχ^ΝΗ\γ\ι z Tri NH x-q | C11H23 | |
| 0 | ||
| BA3 | y3<^/C13H27 | |
| 0 | ||
| O^^NH | ||
| .....s çv | ||
| U ri X HîN j<xtriho | C13H27 | |
| 0 |
Tableau ld : liste des molécules hydrophobes synthétisées selon l'invention.
Part BA : synthèse des molécules hydrophobes dans lesquelles p = 2
Exemple BAI : molécule BAI
Molécule B1 : produit obtenu par la réaction entre l'acide décanoïque et la L-proline. [000448] A une solution d'acide décanoïque (14,28 g, 82,91 mmol) dans le THF (520 mL) à 0°C sont ajoutés successivement du dicyclohexyle carbodiimide (DCC) (16,29 g, 78,96 mmol) et du N-hydroxysuccinimide (NHS) (9,09 g, 78,96 mmol). Après 60 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0°C pendant 20 min, filtré sur fritté. De la L-proîine (10 g, 86,86 mmol), de la diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 mL) et de l'eau (60 mL) sont ajoutés au filtrat. Après 24 h d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec de l'eau (300 mL). La phase aqueuse est lavée avec de l'acétate d'éthyle (2 x 250 mL), acidifiée jusqu'à pH ~1 avec une solution aqueuse d'HCI IN puis extraite avec du dichlorométhane (3 x 150 mL). Les phases organiques combinées sont séchées sur Na2SO4, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle).
Rendement : 14,6 g (69%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (12H) ; 1,65 (2H) ; 2,02 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,41 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,58 (1H).
LC/MS (ESI): 270,2; (calculé ([M+H]+): 270,4).
Molécule B2 : produit obtenu par la réaction entre la molécule B1 et la L-lysine. [000449] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B1 (14,57 g, 54,07 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,39 mmol), une huile jaune est obtenue.
Rendement : 16,4 g (93%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (24H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (12H) ; 2,53 (0,2H) ; 2,90 (0,8H) ; 3,45-3,75 (5H) ; 4,50-4,70 (3H) ; 7,82 (1H).
LC/MS (ESI): 649,6; (calculé ([M+H]+): 649,9).
Molécule B3 : produit obtenu par réaction entre la molécule B2 et la Boc-éthylènediamine.
[000450] A une solution de molécule B2 (16,4 g, 25,27 mmol) dans le THF (170 mL) sont ajoutés de la D1PEA (8,80 mL) et du 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l,1,3,3-tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU, 8,52 g, 26,54 mmol) à température ambiante. Après 30 min d'agitation, de la Boc-éthylènediamine (4,45 g, 27,8 mmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 2 h, le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu est dilué avec de l'acétate d'éthyle (400 mL). La phase organique est lavée avec de l'eau (250 mL), une solution aqueuse saturée de NaHCO3 (250 ml), une solution aqueuse de 1 N HCl (250 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (250 mL) et est séchée sur Na2SO4. Après filtration et concentration sous vide, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol) pour donner une huile incolore.
Rendement : 12,8 g (54%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,25-1,60 (42H) ; 1,80-2,05 (4H) ; 2,15-2,45 (9H) ; 3,10-3,75 (10H) ; 4,30 (1H) ; 4,50 (2H) ; 5,50 (0,6H) ; 5,89 (0,2H) ; 6,15 (0,2H) ; 7,03 (1H) ; 7,47 (1H).
LC/MS (ESI): 791,8; (calculé ([M+H]+): 792,1).
Molécule BAI [000451] A une solution de la molécule B3 (12,78 g, 16,15 mmol) dans le dichlorométhane (110 mL) à 5°C est ajoutée une solution de HCl 4N dans le dioxane (20,2 mL). Après 20 h d'agitation à 5°C, le milieu est concentré sous vide. Le résidu obtenu est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BAI sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 11,4 g (97%)
RMN XH (DMSO-dg, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-1,50 (33H) ; 1,57 (1H) ; 1,70-2,40 (12H) ; 2,82 (2H) ; 3,00 (2H) ; 3,25-3,70 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,75-8,45 (6H). LC/MS (ESI): 691,6 ; (calculé ([M-CI]+): 692,0).
Exemple BA2 : molécule BAS
Molécule B4 : produit obtenu par la réaction entre l'acide laurique et la L-proline.
[000452] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à l'acide laurique (31,83 g, 157,9 mmol) et à la L-proline (20 g, 173,7 mmol), une huile jaune est obtenue.
Rendement : 34,3 g (73%)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,35 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).
LC/MS (ESI): 298,2 ; (calculé ([M+H]+): 298,4).
Molécule B5_i produit obtenu par la réaction entre la molécule B4 et la L-lysine.
[000453] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B4 (33,72 g, 113,36 mmol) et à la L-lysine (8,70 g, 59,51 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 26,2 g (66%)
RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (32H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (15H) ; 2,87 (1H) ; 3,40-3,75 (5H) ; 4,50-4,75 (3H) ; 7,87 (1H).
LC/MS (ESI): 705,6 ; (calculé ([M + H]+): 706,0).
Molécule B6 : produit obtenu par réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule B5.
[000454] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B5 (25,74 g, 36,51 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (6,43 g, 40,16 mmol), une huile incolore est obtenue.
Rendement : 30,9 g (quantitatif)
RMN XH (CDCI3, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,35-1,65 (50H) ; 1,85-2,35 (13H) ; 3,05-3,75 (10H) ; 4,25-4,65 (3H) ; 5,50 (0,4H) ; 5,88 (0,2H) ; 6,16 (0,2H) ; 7,08 (1H) ; 7,26 (1H) ; 7,49 (0,2H)
LC/MS (ESI): 847,8 ; (calculé ([M+H]+): 848,2).
Molécule BA2 [000455] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B6 (30,9 g, 36,47 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA2 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
Rendement : 27,65 g (97%)
RMN XH (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (54H) ; 2,75-3,15 (4H) ; 3,25-3,60 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,50-8,50 (6H).
LC/MS (ESI): 747,6 ; (calculé ([M-CI]+): 748,1).
Exemple BA3 : molécule BA3
Molécule 87 : produit obtenu par la réaction entre l'acide myristique et la L-proline.
[000456] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule
B1 appliqué à l'acide myristique (18,93 g, 82,91 mmol) et à la L-proline (10 g, 86,86 mmol), une huile jaunâtre est obtenue.
Rendement : 20 g (78%)
RMN (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (20H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,51 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H).
LC/MS (ESI): 326,2; (calculé ([M+H]+): 326,6).
Molécule B8 : produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et la L-lysine [000457] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B7 (20,02 g, 61,5 mmol) et à la L-îysine (4,72 g, 32,29 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 12,3 g (53%)
RMN ΤΗ (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,26 (40H) ; 1,35-1,50 (6H) ; 1,50-2,10 (10H) ; 2,10-2,25 (4H) ; 3,01 (2H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 7,68 (0,6H) ; 7,97 (1H) ; 8,27 (0,4H) ; 12,50 (1H).
LC/MS (ESI): 761,8 ; (calculé ([M+H]+): 762,1).
Molécule B9 produit obtenu par la réaction entre la Boc-éthylènediamine et la molécule B8.
[000458] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (12 g, 15,77 mmol) et à la Boc-éthylènediamine (3,03 g, 18,92 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 12,5 g (88%)
RMN (DMSO-d5, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,20-1,55 (55H) ; 1,50-2,25 (14H) ; 2,95-3,10 (6H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 6,74 (1H) ; 7,60-8,25 (3H).
LC/MS (ESI): 904,1 ; (calculé ([M+H]+): 904,3).
Molécule BA3 [000459] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B9 (12,5 g, 13,84 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA3 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
Rendement : 9,2 g (79%)
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-1,65 (48H) ; 1,70-2,35 (12H) ; 2,85 (2H) ; 3,01 (2H) ; 3,25-3,65 (6H) ; 4,10-4,50 (3H) ; 7,70-8,40 (6H).
LC/MS (ESI): 803,9 ; (calculé ([M-CI]+): 804,2).
Exemple BA4 : molécule BA4
Molécule BIP : produit obtenu par la réaction entre la molécule B8 et le Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane.
[000460] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (29,80 g, 39,15 mmol) et au Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13-tridécane (15,05 g, 46,96 mmol), une huile épaisse incolore est obtenue.
Rendement : 25,3 g (61%)
RMN XH (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-2,35 (75H) ; 2,85-3,20 (6H) ; 3,25-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 6,38 (0,lH) ; 6,72 (0,9H) ; 7,50-8,25 (3H).
LC/MS (ESI): 1064,2 ; (calculé ([M+H]+): 1064,5).
Molécule BA4 [000461] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B10 (25,3 g, 23,8 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissous dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA4 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
Rendement : 20,02 g (84%)
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,35 (66H) ; 2,80-3,20 (6H) ; 3,30-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 7,55-8,60 (6H).
LC/MS (ESI): 964,9 ; (calculé ([M-CI]+): 964,6).
BB_±_Synthèse_cLe_s_ copolya minoacides.
Çœpolyaminoacides staistaiques delormulgs VII ou Vlla
| n° | co-polyaminoacides hydrophobes | porteurs | de charges carboxylates et de radicaux | |||||
| BB1 | J | ONa | ||||||
| 0¾ | Y | |||||||
| 2 | 0 | |||||||
| H | ||||||||
| Rix | .N | \ .x\ | ||||||
| N | N x | |||||||
| H | H | |||||||
| n | ||||||||
| m | ||||||||
| 0 | ||||||||
| Hy-^ | k | |||||||
| i = 0,05, DP (m + n) | = 23 | |||||||
| ,N | Y | 11H23 | ||||||
| 0 | ||||||||
| 0^' | NH | |||||||
| 1 | ||||||||
| ,Ν-^ζζ | ||||||||
| ★ | r | Λ | ||||||
| Nh-XÆA | 'NH x | ^11^23 Ο | ||||||
| Hy = | 0 | |||||||
| Ri - | H ou pyroglutamate |
BB4
| / ç 0^ | λ ,N NI | Y 0 Ί | H 11 m23 | |||||
| xnh\^n1 J | NH^ | C11H23 | ||||||
| 0 | ||||||||
| Hy = | ||||||||
| Rl = | CH3-CO-, H ou pyroglutamate | |||||||
| BB7 | ONa | |||||||
| 0¾ | C | ) | ||||||
| H | ||||||||
| Rix | Y H | „N | H | |||||
| m | n | |||||||
| 0 | ||||||||
| Hy^ | X | |||||||
| i = 0,042, DP f m n) = 22 | 11^23 | |||||||
| 1 | 1 | |||||||
| cX | NH | |||||||
| X'NH^^Nt A. | w | θ11Η23 | ||||||
| 0 | ||||||||
| Hy = | & | |||||||
| Rj = | H ou pyroglutamate |
BB8
H<
R i II ou pyrogl utamate
BB9
O
i = 0,05, DP (m + n) = 26
| VY 0 O^XNH | 13H27 | ||||||||
| Vnh^/nh vA | Çk C13H27 NH \q | ||||||||
| Il II | 0 H ou pyroglutamate | ||||||||
| BB10 | 0¾ | ONa | |||||||
| / | C | ||||||||
| RN | H | • | H n | ||||||
| 0 | J n | Ί | |||||||
| i = 0,029, DP (m + n) = 22 | |||||||||
| V 0 NH | 13H27 | ||||||||
| ‘ΧΝΗ''Χ/ΝΗ γΛ | ( 'NH | c13hZ7 | |||||||
| Il II | & H ou pyroglutamate |
BB11
Rl = CH3-CO-, H ou pyroglutamate
BB12
Hy^O
L =0,03, DP (m + n) = 23_________
| Y : Λ | Y 0 Ί | 13H27 | ||||||
| ( | ; | |||||||
| Λ. | A NH | K | C13H27 | |||||
| V | 0 | |||||||
| Hy = | Ô | |||||||
| Rl = | CH3-CO-, H ou pyroglutamate | |||||||
| BB13 | ,ONa | |||||||
| 0¾ | C | ) | ||||||
| H | ||||||||
| R1X | H | ,N | H | |||||
| L | J | |||||||
| J m | n | |||||||
| C | ||||||||
| Hy^ | k | |||||||
| i = 0,08, DP = | = 25 r~~ | |||||||
| ç | ||||||||
| U SNH | ||||||||
| •x | v | Γ 4 | 0 | |||||
| * | Y | s' | \ | |||||
| Sîh-^ni1 | Y | CgH19 | ||||||
| il | N H | Λ | D | |||||
| Hy = | 0 | |||||||
| Ri = | H ou pyroglutamate |
Tableau le
Part BB : synthèse des co-polyaminoacides
Exemple BB1 : Co-polyaminoacide BB1 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2400 g/mol
Çojsolya m i noacjdeJBBUl. 1 acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3860 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'hexyiamine [000462] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (90,0 g, 342 mmol) pendant 30 min, puis du DMF anhydre (465 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexyiamine (1,8 mL 14 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 4 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte à goutte dans du diisopropyléther froid (6 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (500 mL puis 250 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(y-benzyl-L-glutamique) (PBLG).
[000463] A une solution de PBLG (42,1 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 325 mL) à 4 °C est ajoutée goutte à goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans l'acide acétique (135 mL, 0,77 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (1,6 L). Après 1 h 30 d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL).
[000464] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 25 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 1,5 L.
[000465] La solution est fiitrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm.
[000466] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37% jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poiy-L-glutamique de masse moiaire moyenne en nombre (Mn) 3860 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).
Co-polyaminoacide BB1 [000467] Le co-polyaminoacide BB1-1 (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30-40 °C puis refroidi à 0 °C. Le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,95 g, 3,8 mmol) est mis en suspension dans du DMF (45 mL) et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée à cette suspension puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. A la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la N-méthylmorpholine (NMM, 7,6 g, 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,1 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0 °C, la solution de molécule BA2 est ajoutée et le milieu maintenu à 30 °C durant 1 h. Le milieu réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur β L d'eau contenant du chlorure de sodium à 15% massique et du HCI (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, lavé par la solution de chlorure de sodium à pH 2 (IL) et séché sous vide pendant environ 1 h. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (600 mL) et le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N. Le volume est ajusté à 700 mL par ajout d'eau. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 19,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 23
D'après la RMN ^:1 = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB1 est de 4350 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2400 g/mol.
Exemple BB2 : co-polyaminoacide BB2 - poly-L-glutamate de sodium modifié par Sa molécule BA2 et ayant une mase molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol [000468] Un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/mol (5,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1 est solubilisé dans le DMF (205 mL) à 30-40 °C puis maintenu à cette température. En parallèle, le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (1,44 g, 1,84 mmol) est mis en suspension dans du DMF (10 mL) et de la triéthylamine (0,19 g, 1,84 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. A la solution de co-polyaminoacide dans le DMF, de la NMM (3,7 g, 36,7 mmol), la solution de molécule BA2 puis de la N-oxyde de 2-hydroxypyridine (HOPO, 0,31 g, 2,76 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (0,53 g, 2,76 mmol) est ajouté et le milieu est remonté à température ambiante durant 3 h. Le milieu réactionnel est coulé au goutte-à-goutte sur 1,55 L d'eau contenant du NaCI à 15% massique et du HCI (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 1 N, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 200 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9% puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 16,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 21
D'après la RMN XH : i = 0,047
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB2 est de 3932 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol.
Exemple BB3 : Co-polyaminoacide BB3 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6400 g/mol
Co-polyaminoacide BB3-1 : acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol issu de la polymérisation du γ-méthyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par la L-leucinamide [000469] Un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol relative à un standard polymétacrylate de méthyle (PMMA) est obtenu par polymérisation du γ-méthyl N-carboxyanhydride d'acide glutamique en utilisant la L-leucinamide comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters méthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37% selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226.
[000470] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (3,23 g, 4,1 mmol) et au co-polyaminoacie BB3-1 (11 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 27,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 34
D'après la RMN XH : li = 0,049
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB3 est de 6405 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6400 g/mol.
Exemple BB4 : co-polyaminoacide BB4 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de
10500 g/mol [000471] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (5 g, 6,35 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 10800 g / mol (21,7 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 55
D'après la RMN XH : i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB4 est de 11721 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10500 g/mol.
Exemple BB5 : Co-polyaminoacide BB5 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3600 g/mol Co-polyaminoacide BB5-1 ; acide poly-L-glutamique de Mn 3700 g/mol issu de la polymérisation du γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine et cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle [000472] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du y-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride (100,0 g, 380 mmol) pendant 30 minutes puis du DMF anhydre (250 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (2,3 mL, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyléther (3,4 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissout dans 450 mL de THF. A cette solution sont ajoutés successivement de la Ν,Ν-diisopropyléthylamine (DIPEA, 31 mL, 175 mmol) puis de l'anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (200 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(y-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle.
100 [000473] A une solution du co-poiyaminoacide cappé (72 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 335 mL) à 4°C est ajoutée goutte à goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans l'acide acétique (235 mL, 1,34 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 3 h 30, puis couié goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de i'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L. La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37% jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, ie précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (330 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3700 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).
Co-polyaminoacide BB5 [000474] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sei chlorhydrate de la molécule BA2 (6,92 g, 8,8 mmoi) et au co-poiyaminoacide BB5-1 (30,0 g), un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 29,4 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ’Ή) : 23
D'après la RMN 1H : i = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB5 est de 4302 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 3600 g/mol.
ιοί
Exemple BB6 : Co-polyaminoacide BB6 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4100 g/mol [000475] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (5,8 g, 7,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3800 g / mol (25 g) obtenu par un procédé similaire à ceiui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB5-1 en utilisant l'ammoniac à la place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 27,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 24
D'après la RMN 1H : i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB5 est de 4387 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 4100 g/mol.
Exemple BB7 : Co-polyaminoacide BB7 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000476] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (7,07 g, 9,0 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3600 g / moi (30,0 g) obtenu par un procédé simiiaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ^) : 22
D'après la RMN = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB7 est de 4039 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4200 g/mol.
Exemple BB8 : co-polyaminoacide BB8 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 5200 g/mol [000477] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (0,85 g, 1,1 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 4100 g / mol (5,0 g) obtenu par un procédé simiiaire à celui utilisé pour la préparation
102 du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule
BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ΧΗ) : 21
D'après la RMN = 0,026
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB8 est de 3620 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 5200 g/mol.
Exemple BB9 : co-polyaminoacide BB9 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol [000478] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,05 g, 3,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 4100 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 28,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 26
D'après la RMN ^:1 = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB9 est de 4982 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 4700 g/mol.
Exemple BB1O : co-polyaminoacide BB1O - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000479] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (1,90 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn -3500 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 25,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 22
D'après la RMN : i = 0,029
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB10 est de 3872 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 4200 g/mol.
103
Exemple BB11 : co-polyaminoacide BB11 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3900 g/mol [000480] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécuie BA4 (2,21 g, 2,2 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3700 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule BA4 est obtenu.
Extrait sec : 28,1 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 22
D'après la RMN XH : i = 0,032
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB11 est de 4118 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3900 g/mol.
Exemple BB12 : co-polyaminoacide BB12 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3900 g/mol [000481] Par un procédé similaire à ceiui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB2 appliqué au se! chlorhydrate de la molécule BA3 (1,9 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par la molécuie BA3 est obtenu.
Extrait sec : 25,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 23
D'après la RMN XH : i = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB12 est de 4145 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3900 g/mol.
Exemple BB13 : co-polyaminoacide BB13 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000482] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BAI (3,65 g, 5 mmol) et à un acide poiy-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn =
3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation
104 du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule
BAI est obtenu.
Extrait sec : 25,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ^) : 25
D'après la RMN ^:1 = 0,08
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB13 est de 5253 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol.
Exemple BB14 : co-polyaminoacide BB14 - poiy-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4020 g/mol [000483] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,12 g, 2,70 mmol), du chloroforme (40 mL), du tamis moléculaire 4Â (1,5 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (1,5 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (20 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.
[000484] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (18 g, 68,42 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (100 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule BA2 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte à goutte dans du diisopropyléther (1,2 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (100 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (105 mL), et une soîution d'acide bromhydrique (HBr) à 33% dans de l'acide acétique (38 mL, 220 mmol) est alors ajoutée goutte à goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte à goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (600 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL) puis avec de l'eau (100 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (450 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0.9 % puis de l'eau jusqu'à ce
105 que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de copolyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à
7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 22,3 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 29 donc i = 0,034
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB14 est de 5089 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4020 g/mol.
Exemple BB15 : co-polyaminoacide BB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3389 g/mol [000485] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,62 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,97 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 30,4 mg/g
DP (estimé par RMN XH) = 24 donc i = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB15 est de 4390 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 3389 g/mol.
Exemple BB16 : co-polyaminoacide BB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000486] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA4 (5,70 g, 5,70 mmol) et à 29,99 g (113,9 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 est obtenu.
Extrait sec : 32,3 mg/g
DP (estimé par RMN 4Η) = 23 donc i - 0,043
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB16 est de 4399 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.
106
Exemple BB17 ; co-polyaminoacide BB17 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 10700 g/mol [000487] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 52,7 g (200 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 24,5 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 65 donc i = 0,015
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB17 est de 10585 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10700 g/mol.
Exemple BB18 : co-polyaminoacide BB1S - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 6600 g/mol [000488] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 31,6 g (120 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate N-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 27,3 mg/g
DP (estimé par RMN ’Ή) = 40 donc i = 0,025
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB18 est de 6889 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6600 g/mol.
107
B. COMPOSITIONS
Exemple BV1 : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000489] Une solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/mL est préparée par dissolution d'amyline humaine sous forme de poudre achetée chez AmbioPharm. Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) de manière à obtenir a composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple BV2 : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM) et de ia glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000490] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000491] La solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/MI BV1 est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir les compositions finales BV5 à BV11 (tableau 1). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de ia solution | |
| mol/mol | mg/mL | mM | ||
| BV1 | • | ·· | • | Limpide |
| BV5 | 5 | 3 | 0,73 | Limpide |
| BV6 | 6 | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| BV7 | 7 | ... 4,2 | 1,03 | Limpide |
| BV8 | 8 | 4,8 | 1,17 | Limpide |
| BV9 | 9 | ........................5,4................ | 1,32 | Limpide |
| BV10 | 10 | 6 | 1,47 | Limpide |
| BV11 | 17 | 10,5 | 2,57 | Limpide |
Tableau 1 : Compositions et aspect visuel des solutions d'amyline humaine à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple BY1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000492] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est préparée par dissolution de pramlintide sous forme de poudre achetée chez Hybio. Cette solution
108 est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) de manière à obtenir ia composition finale visée. Le pH finai est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple BW1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4.
[000493] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple BY1, une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du phénol (30 mM), de ia glycérine (174 mM) et de ia giycyigiycine (8 mM) à pH 7,4 est obtenue.
Exemple BYO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000494] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000495] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir les compositions finales BY2 à BY8 (tableau 3). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | mg/mL | mM | ||
| BY1 | - | - | - | Limpide |
| BY2 | 2 | 1,8 | 0,44 | Limpide |
| BY3 | 3 | 2,7 | 0,66 | Limpide |
| BY4 | 4 | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| BY5 | 5 | 4,5 | 1,10 | Limpide |
| BY6 | 6 | 5,4 | 1,32 | Limpide |
| BY7 | 10 | 9 | 2,20 | Limpide |
Tableau 3 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple BWO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4.
[000496] Par un protocole similaire à celui utilisé à l'exemple BYO, à partir d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL BW1, des solutions de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4 BW2 et BW3 sont obtenues.
109
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintlde | Aspect visuel de la solution | |
| mg/mL | mM | mol/mol | ||
| BW2 | 2,4 | 0,59 | 6 | Limpide |
| BW3 | 4 | 0,98 | 10 | Limpide |
Tableau 4 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple BPO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000497] Par un protocole similaire à celui décrit à l'exemple ΒΥ0, des solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du 10 m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4 BP2 à BP12 sont obtenues.
| Solut ion | Co-polya mino acide | Concentration en co-polyaminoacide | Ratio co- poiyaminoacide/pr amlintide | Aspect visuel de la solution | |
| mg/m L | mM | mol/mol | |||
| BP2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 | 5,4 10,8 | Limpide Limpide |
| BP3 | BB14 | 5 10 | 0,98 1,96 | 4,3 8,6 | Limpide Limpide |
| BP4 | AB17 | 5 10 | 1,11 1,22 | 4,9 9,8 | Limpide Limpide |
| BP5 | AB15 | 5 10 | 0,99 1,99 | 4,4 8,8 | Limpide Limpide |
| BP6 | AB14 | 5 10 | 1,48 2,96 | 6,5 13 | Limpide Limpide |
| BP10 | BB18 | 5 | 0,72 | 3,2 | Limpide |
| 10 | 1,44 | 6,3 | Limpide | ||
| BP11 | BB9 | 5 10 | 1 2,01 | 4,4 8,8 | Limpide Limpide |
| BP12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 11,2 | Limpide Limpide |
Tableau 8 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml à pH 7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
110
Exemple BX1 : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000498] La solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/mL BV1 est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine). Une solution d'insuline humaine à 500 IU/mL est préparée par dissolution d'insuline humaine sous forme de poudre achetée chez Amphastar. Cette solution est ajoutée à la solution concentrée d'amyline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple BX2 : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4.
[000499] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000500] Une solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/mL puis une solution d'insuline humaine à 500 IU/mL sont ajoutées à la solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée (tableau 2). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000501] Les solutions BX1, BX6, BX10 et BX11 sont préparées selon le protocole ci-dessus.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | mg/MI | mM | ||
| BX1 | * | ; <· ; | Turbide | |
| BX6 | 6 | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| BX10 | 10 | 6 | 1,47 | Limpide |
| BX11 | 17 | 10,5 | 2,57 | Limpide |
Tableau 2 : Compositions et aspect visuel de solutions d'amyline humaine et d'insuline humaine à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
[000502] En présence du co-polyaminoacide BB15, une solution limpide d'amyline humaine (0,6 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) est obtenue à pH 7,4.
m
Exemple BN1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM), de la glycylglycine (8 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000503] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine, glycylglycine, chlorure de zinc). Une solution d'insuline humaine à 500 IU/mL est ajoutée à cette solution concentrée de pramlintide et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple BRI : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4.
[000504] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple BN1, une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
Exemple ΒΝ0 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM), de la glycylglycine (8 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4.
[000505] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, glycylglycine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000506] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL puis une solution d'insuline humaine à 500 IU/mL sont ajoutées à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée (tableau 9). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000507] Les solutions BN2 et BN3 sont préparées selon le protocole ci-dessus.
112
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide | Aspect visuel du mélange | |
| mg/mL | mM | mol/mol | ||
| BN1 | - | : | Turbide | |
| BN2 | 2,4 | 0,59 | 6 | Limpide |
| BN3 | 4 | 0,98 | 10 | Limpide |
Tableau 9 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en copolyaminoacide BB15.
[000508] En présence du co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,4 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) est obtenue à pH 7,4.
Exemple BRO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 ZU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000509] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple BNO, une solution de pramlintide à 0,9 mg/ml_ et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
[000510] Les solutions BR2 à BR4 et BU2 à BU8 sont préparées selon le protocole ci-dessus.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintîde mol/mol | Aspect visuel de la solution | |
| mg/mL | mM | |||
| BRI | Turbide | |||
| BR2 | 2,7 | 0,66 | 3 | Limpide |
| BR3 | 3,6 | 0,88 | 4 | Limpide |
| BR4 | 4,5 | 1,10 | 5 | Limpide |
| BU2 | 0,9 | 0,22 | 1 | Limpide |
| BU3 | 1,8 | 0,44 | 2 | Limpide |
| BU7 | 5,4 | 1,32 | 6 | Limpide |
| BU8 | 9 | -2,20. | 10 | Limpide |
Tableau 11 : Compositions et aspect des solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en copolyaminoacide BB15.
113 [000511] En présence de co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,9 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) à pH 7,4 est obtenue.
Exemple BGO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000512] Par un procédé similaire à l'exemple BNO, une solution de pramlintide à 10 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant un co-polyaminoacide de l'invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
[000513] Les solutions BG2 à BG12 sont préparées selon le protocole décrit cidessus.
| Solutio n | Co-polyaminoaci de | Concentration en co-polyaminoacid e | Ratio Co-polyaminoacide/pramlinti de | Aspect visuel de la solutio n | |
| mg/mL | mM | mol/mol | |||
| BG2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 | 5,4 10,8 | Limpide Limpide |
| BG3 | BB14 | 5 10 | 0,98 1,96 | 4,3 8,6 | Limpide |
| BG4 | AB17 | 5 10 | 1,11 1,22 | 4,9 9,8 | Limpide Limpide |
| BG5 | AB15 | 5 10 | 0,99 1,99 | 4,4 8,8 | Limpide |
| BG6 | AB14 | 5 10 | 1,48 2,96 | 6,5 13 | Limpide |
| BG10 | BB18 | 5 10 | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | Limpide Limpide |
| BG11 | BB9 | 5 10 | 1 2,01 | 4,4 8,8 | Limpide Limpide |
| BG12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 11,2 | Limpide Limpide |
Tableau 14 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacides.
114
Exemple BD1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline lispro à 100 IU/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (300 pM) à pH 7,4.
[000514] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc). Une solution d'insuline lispro à 500 IU/mL est ajoutée à cette solution concentrée de pramlintide et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à
7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple BDO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline lispro à 100 IU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (300 pM) à pH 7,4.
[000515] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000516] Une solution concentrée de pramlintide à 5 mg/mL puis une solution d'insuline lispro à 500 IU/mL sont ajoutées à la solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à pH 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000517] Les solutions BD3 à BD9 sont préparées selon le protocole décrit ci-dessus.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| BD1 | - | * | Turbide | |
| BD3 | 2 | 1,8 „ | 0,44 | Limpide |
| BD4 | 3 | 2,7 | 0,66 | Limpide |
| BD5 | 4 | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| BD6 | 5 | 4,5 | 1,10 | Limpide |
| BD7 | 6 | 5,4 | 1,32 | Limpide |
| BD8 | 10 | 9 | 2,20 | Limpide |
| BD9 | 15 | 13,5 | 3,30 | Limpide |
Tableau 15 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline lispro à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
115 [000518] En présence du co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,9 mg/mL) et d'insuline lispro (100 UI/mL) à pH 7,4 est obtenue.
C. Physico-Chimie
Résultats des observations visuelles au mélange et des mesures de fibrillation par ThT
Principe [000519] La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles amyloïdes, définies comme des structures macromoléculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement résulter à la formation de gel au sein de l'échantillon.
[000520] L'essai de suivi de la fluorescence de la thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des solutions. La Thioflavine est une petite molécule sonde ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsque se lie à des fibrilles de type amyloïdes (Naiki et al. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249 ; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284).
[000521] Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de solutions non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37°C.
Conditions expérimentales [000522] Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La Thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à induire une dilution négligeable de la composition. La concentration de Thioflavine T dans la composition est de 1, 2 ou 40 pM selon le type de composition : 40 pM dans le cas des compositions d'amyline humaine à 0,6 mg/mL, 2 pM dans le cas des compositions de pramlintide à 0,9 mg/mL et 1 pM dans les compositions de pramlintide à 0,4 mg/mL. Cette concentration est rappelée dans la légende relative au tableau de résultats des temps de latence pour chaque type de composition.
[000523] Un volume de 150 pL de la composition a été introduit au sein d'un puits d’une plaque 96 puits. Chaque composition a été analysée en en trois essais (triplicat) au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition.
[000524] Cette plaque a ensuite été placée dans l’enceinte d’un lecteur de plaques (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer). La température est réglée à 37°C, et une agitation latérale de 960 rpm avec 1 mm d’amplitude est imposée.
116 [000525] Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d'onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d'onde d'émission de 482 nm au cours du temps.
[000526] Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la fluorescence après un délai appelé temps de latence.
[000527] Pour chaque puit, ce délai a été déterminé graphiquement comme l'intersection entre la ligne de base du signa! de fluorescence et la pente de la courbe de fluorescence en fonction du temps déterminée pendant la forte augmentation initiale de fluorescence. La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des mesures de temps de latence faites sur trois puits.
[000528] Un exemple de détermination graphique est représenté à ia figure 1. [000529] Sur cette figure est représentée de façon graphique la détermination du temps de latence (LT) par suivi de la fluorescence de la Thioflavine T, sur une courbe ayant en ordonnées la valeur de la fluorescence (en u.a. unités arbitraires) et en abscisses le temps en minutes.
Exemple Cl : Stabilité de solutions d'amyline humaine à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en co-polyaminoacid e BB15 | Temps de latence (heure) | |
| mol/mol | mg/ ml | mM | ||
| BV1 | ... | < 0,02 | ||
| BV5 | 5 | 3 | 0,73 | > 1 |
| BV6 | 6 | 3,6 | 0,88 | > 5 |
| BV7 | 7 | 4,2 | 1,03 | > 30 |
| BV8 | 8 | 4,8 | 1,17 | > 54 |
| BV9 | 9 | 5r4 | 1,32 | > 54 |
| BV10 | 10 | 6 | 1,47 | > 72 |
Tableau 16 : Mesure du temps de latence par ThT (40 μΜ) des solutions BV1 à BV10.
[000530] Le temps de latence d'une solution d'amyline humaine à pH 7,4 (BV1), dépourvue de co-polyaminoacide, est inférieur à 0,02 heure ; les solutions BV5 à BV10 selon l'invention, contenant des ratios molaires BB15/amyline humaine supérieurs à 5 permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à une heure, un ratio molaire de permettant d'obtenir des temps de latence supérieurs à 72 heures.
117
Exemple C2 : Stabilité de solutions d'amyline humaine et d'insuline humaine
100 UI à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Temps de latence (heure) | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| BX1 | - | - | * | |
| BX6 | 6 | 3,6 | 0,88 | > 0,1 |
| BX10 | 10 | 6 | 1,47 | > 0,5 |
| BX11 | 17,5 | ... 10,5 | 2,57 | > 5 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide
Tableau 17 : Mesure du temps de latence parThT (40 μΜ) des solutions, BX6, BX10 et BX11.
[000531] La solution d'amyline humaine et d'insuline humaine à pH 7,4 (BX1) est turbide.. Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution limpide contenant de l'amyline humaine en présence d'insuline humaine à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 0,1 heure à partir d'un ratio molaire BB15/amyline humaine de 6, et supérieurs à 5 heures pour un ratio molaire BB15/amyline humaine de 17,5.
Exemple C3 : Stabilité de solutions à 3,4 mg/ml en pramlintide à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide | Temps de latence (heures) | |
| mg/ml | mM | mol/mol | ||
| BW1 | - | - | 0,7 | |
| BW2 | ... 2,4 | 0,59 | 6 | > 40 |
| BW3 | 4 | 0,98 | 10 | > 63 |
Tableau 19 : Mesure du temps de latence parThT (1 μΜ) des solutions BW1 à BW3.
[000532] La solution de pramlintide à pH 7,4 (BW1) dépourvu de copolyaminoacide a un temps de latence court. Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution contenant du pramlintide à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 40 heures à partir d'un ratio molaire BB15/pramlintide de 6.
118
Exemple C4 : Stabilité de solutions à 0,9 mg/mL en pramlintide à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB1S à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en BB15 | Temps de latence (heures) | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| BY1 | - | - | 0,7 | |
| BY2 | 2 | 1,8 | 0,44 | > 0,8 |
| BY3 | 3 | 2,7 | 0,66 | > 4 |
| BY4 | 4 | 3,6 | 0,88 | > 30 |
| BY5 | 5 | 4f5 | 1,10 | >63 |
| BY6 | 6 | . 5,4 | 1,22 | >63 |
| BY7 | 10 | 9 | L32........... | >63 |
Tableau 18 : Mesure du temps de latence parThT (2 pM) des solutions BY1 à BY7 [000533] La solution de pramlintide à pH 7,4 (BY1) dépourvue de co-polyaminoacide présente un temps de latence court ; les temps de latence des solutions contenant un co-polyaminoacide sont supérieurs ou égaux aux temps de latence de la composition sans co-polyaminoacide à un ratio molaire de co-10 polyaminoacide BB15/pramlintide de 2 :1.
Exemple CS : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml à pH 7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Solut ion | Co-polya mino acide | Concentration en co-polyaminoacide | Ratio œ- polyaminoacide/pra mlintide | Temps de latence (heures) | |
| mg/ mL | mM | mol/mol | |||
| BY1 | - | - | < 0,7 | ||
| BP2 | BB15 | 5 10 | 1,22 ...................2,45 | 5,4 10,8 | > 63 > 63 |
| BP3 | BB14 | 10 | 1,96 | 8,6 | > 15 |
| BP4 | AB17 | 10 | 1,22 | 9,8 | > 63 |
| BP10 | BB18 | 5 10 | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | > 63 > 63 |
| BP11 | BB9 | 5 10 | 1 2,01 | 4,4 8,8 | > 50 > 63 |
| BP12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 .............................11,2..................... , | > 10 > 63 |
Tableau 23 : Mesure du temps de latence par ThT (2 pM) des compositions BY1, BP2 à
BP12.
119 [000534] La solution de pramlintide à pH 7,4 (BY1) dépourvue de copolyaminoacide présente un temps de latence court. Les co-polyaminoacides de l'invention permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 1,9 heure dans les conditions testées.
Exemple C6 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 7,4 contenant du co-polyaminoacide BB15.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide | Temps de latence (heure) | |
| mg/mL | mM | mol/mol | ||
| BN1 | - | ; -> | * | |
| BN2 | 2,4 | 0,59 | 6 | >19 |
| BN3 | 4 | 0,98 | 10 | >19 |
♦Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 25 : Mesure du temps de latence par ThT (1 μΜ) des compositions BN1 à BN3.
[000535] La solution de pramlintide et d'insuline humaine à pH 7,4 (BN1) dépourvue de co-polyaminoacide est turbide.
[000536] Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution limpide de pramlintide à 0,4 mg/ml et d'insuline humaine 100 IU/ml à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 19 heures pour des ratios molaires BB15/pramlintide supérieurs à 6.
120
Exemple C7 : Stabilité de solutions de pramiintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine 100 IU/ml à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio ΒΒΙΞ/pramlintide | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Temps de latence (heure) | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| BRI | ; | - | * | |
| BU3 | 2 | 0,44 | > 0,5 | |
| BR2 | 3 | 2,7 | 0,66 | > 2 |
| BR3 | 4 | 3,6 | 0,88 | > 6 |
| BR4 | 5 | 4,5 | 1,10 | > 9 |
| BU7 | 6 | 5,4 | 1,32 | > 9 |
| BU8 | 10 | 9 | 2,20 | > 9 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 24 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solution BRI à BR4 et
BU3 à BU8.
[000537] Une solution de pramiintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine 100 IU/ml 10 à pH 7,4 (BRI) dépourvue de co-polyaminoacide est turbide. Les solutions limpides de pramiintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine 100 IU/ml à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent des temps de latence supérieurs à 0,5 heure à ratio molaire BB15/pramlintide de 2, pouvant être supérieurs à 9 heures pour des ratios molaires BB15/pramlintide supérieurs à 5.
121
Exemple C8 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Solut ion | Co-polya minoa eide | Concentration en co-polyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramli ntide | Temps de latence (heures) | |
| mg/m L | mM | mol/mol | |||
| BRI | • | * | |||
| BG2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 | 5,4 10,8 | > 9 > 7 |
| BG3 | BB14 | 10 | 1,96 | 8,6 | > 9 |
| BG4 | AB17 | 5 10 | 1,11 1,22 | 4,9 9,8 | > 2 > 5 |
| BG5 | AB15 | 10 | 1,99 | 8,8 | > 2 |
| BG10 | BB18 | 5 10 | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | > 1 > 4 |
| BG11 | BB9 | 5 10 | 1 2,01 | 4,4 8,8 | > 4 > 3 |
| BG12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 11,2 | > 5 > 6 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 29 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions BG1 à BG13.
[000538] La solution de pramlintide et d'insuline humaine à pH 7,4 (BRI) est turbide. Les co-polyaminoacides permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 1 heure dans les conditions testées.
122
Exemple C9 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline lispro 100 IU/ml à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Temps de latence (heures) | |
| mol/mol | mg/m! | mM | ||
| BD1 | * | |||
| BD3 | 2 | U. . | 0,44 | 0,8 |
| BD4 | 3 | 2,7 | 0,66 | > 2 |
| BD5 | 4 | 3,6 | 0,88 | > 7 |
| BD6 | 5 | 4,5 | 1,10 | > 9 |
| BD7 | 6 | 5,4 | 1,22 | > 9 |
| BD8 | 10 | 9 | 1,32 | > 9 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 30 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions BD1 et BD3 à BD8.
[000539] La solution de pramlintide et d'insuiine lispro à pH 7,4 (BD1) est turbide.
Les co-polyaminoacides permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 0,8 heure dans les conditions testées.
123
Claims (12)
- REVENDICATIONS1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :a) de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ;b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :•-[gprU-gpaWgpc) r a P Formule I dans laquelle- GpR est un radical de formules II ou ΙΓ :HH il H *—N—R—N—* π ou *——R—N—*n';- GpA est un radical de formules III ou III' :0 HN—* .JLa'HN * m ou *HA-N—* m';GpC est un radical de formule IV :- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes liés par des fonctions amides ;- a est un entier égal à 0 ou à 1 ;b est un entier égal a 0 ou a1;124 p est un entier égal à 1 ou à 2 et o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formuleIII' et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formule III;- c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2;- d est un entier égal à 0, à 1 ou à 2;- r est un entier égal à 0 ou à 1, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au co-polyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au co-polyaminoacide :• via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou • via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du co-polyaminoacide;- R est un radical choisi dans le groupe constitué par :o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 12 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone ;o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule II' de 1 à 11 atomes de carbone, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH2, et o un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;125- A est un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 6 atomes de carbone;- B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone;- Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et :o si p est égal à 1, x est compris entre 11 et 25 (11 < x < 25) :o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15),- le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre entre 0 < i < 0,5 ;lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents, le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 10 et 250 ;- les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkalin choisi dans le groupe constitué par Na+ et K+ ;caractérisée en ce que la composition ne comprend pas d'une insuline basale dont le point isoélectrique pi est compris entre 5,8 et 8,5.
- 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p = 1, représentée par la formule V suivante :-^GpR W-GpA \— GpC r a formule VGpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment.
- 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = 1 et p = 2, représentée par la formule VI suivante :^GpR —GpA—GpCj r 2 Formule VI dans laquelle126GpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment.
- 4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante formule VII dans laquelle, • D représente, indépendamment, soit un groupe -CH2- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique), • Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, dans lesquelles r = 1 et GpR est un radical de Formule II, • Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI dans lesquelles r=0 ou r = 1 et GpR est un radical de Formule II', ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate, • R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI dans lesquelles r = 1 et GpR est un radical de Formule II, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S, • X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;127 • η + m représente le degré de polymérisation DP du co-polÿaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de co-polyaminoacide et 5 < n + m < 250.
- 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri = R'i et R2 = R'2, de formule Vlla suivante :Formule Vlla dans laquelle,- m, η, X, D et Hy ont les définitions données précédemment,- R'i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate,- R'2 est un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S.
- 6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule Vllb suivante :128 dans laquelle m, X, D, Ri et R2 ont les définitions données précédemment et au moins Ri ou R2 est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
- 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ratio molaire co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est supérieur ou égal à 1.
- 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est l'amyline.
- 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.
- 10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
- 11. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que ratio molaire co-polyaminoacide/insuline est supérieur ou égal à 1.
- 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que ladite composition présente une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de l'amyline , un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
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Citations (2)
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| FR2985429A1 (fr) * | 2012-01-09 | 2013-07-12 | Adocia | Solution injectable a ph 7 comprenant au moins une insuline basale dont le pi est compris entre 5,8 et 8,5 et un polyaminoacide substitue obtenu par un procede de polymerisation controle |
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-
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| WO2013104861A1 (fr) * | 2012-01-09 | 2013-07-18 | Adocia | Solution injectable a ph 7 comprenant au moins une insuline basale dont le pi est compris entre 5,8 et 8,5 et un co-polyaminoacide substitue |
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| Title |
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| WO2020025826A1 (fr) * | 2018-08-03 | 2020-02-06 | Adocia | Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant de l'amyline, un agoniste au recepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, au moins une espece ionique et un compose amphiphile porteur de radicaux hydrophobes |
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| CN112805025A (zh) * | 2018-08-03 | 2021-05-14 | 阿道恰公司 | 包含胰淀素、胰淀素受体激动剂或胰淀素类似物、至少一种离子物质和含有疏水基团的两亲化合物的可注射水溶液形式组合物 |
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