FI94147B - Menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, in vitro-viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi - Google Patents
Menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, in vitro-viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI94147B FI94147B FI890821A FI890821A FI94147B FI 94147 B FI94147 B FI 94147B FI 890821 A FI890821 A FI 890821A FI 890821 A FI890821 A FI 890821A FI 94147 B FI94147 B FI 94147B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- epithelial membranes
- preserving
- epithelial
- membranes according
- membranes
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 210000004955 epithelial membrane Anatomy 0.000 title claims description 31
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 9
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 17
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 9
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 7
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 2
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 claims description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 35
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 10
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 9
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006803 Burns third degree Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- 206010006802 Burns second degree Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/16—Physical preservation processes
- A01N1/162—Temperature processes, e.g. following predefined temperature changes over time
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/12—Chemical aspects of preservation
- A01N1/122—Preservation or perfusion media
- A01N1/125—Freeze protecting agents, e.g. cryoprotectants or osmolarity regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/10—Hair or skin implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
94147 1 Menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, in_vitro-viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi Förfarande för konservering av transplanterbara in vitro odlade epitelhinnor 5
Keksinnön tausta IQ 1. Keksinnön ala
Oheinen keksintö kohdistuu yleisesti solukudoksen kryologiseen säilyttämiseen. Oheinen keksintö kohdistuu erityisemmin soluja viljelemällä saatujen epiteelikalvojen kryologiseen säilyttämiseen.
15 2. Tekniikan tason lvhvt kuvaus
Palaneen kudoksen (eli kudoksen, jonka tunnusomaisena piirteenä ovat riittävän suuret määrät denaturoitunutta proteiinia solujen vahin-2Q goittumisen tai kuoleman aiheuttamiseksi) hoitamisessa viime aikoina tehdyistä edistysaskeleista huolimatta palamisuhrien kuolleisuus on edelleen tarpeettoman suuri. Tällainen kuolleisuus riippuu luonnollisestikin suuresti potilaan iästä sekä kehon palaneen alueen pinta-alan suuruudesta. Kuolleisuus on todellakin dramaattisen suuri siinä 25 tapauksessa, että kehon pinta-alasta 50-60 % tai enemmän on kärsinyt kolmannen asteen palovammoja (eli kun iho on tuhoutunut koko paksuudeltaan). Erityisesti näissä tapauksissa välittömien ongelmien, joita ovat edistynyt sydän-verisuonishokki ja jonkin verran vähäisem-pänä vaaratekijänä uhkaava verenmyrkytys tai hydro-elektrolyyttinen 30 häiriötila, lisäksi törmätään (hieman myöhemmin) siihen ongelmaan, että kehon suurista alueista puuttuu ihopeite. Tällaisiin puuttuviin peitteisiin tai avoimiin alueisiin liittyvänä vaikeutena on se, etteivät tällaiset alueet parane spontaanisti, koska ne ovat vahingoittuneet täydellisesti tai tuhoutuneet koko paksuudeltaan.
35
Normaalisti sulkeutuneen epiteeliestokerroksen avautuminen ulkopuoliselle ympäristölle johtaa krooniseen patologiseen tilaan, joka 2 94147 1 yhdessä edellä mainittujen tulehduksellisten ja aineenvaihdunnallisten komplikaatioiden kanssa pahentaa vähitellen potilaan paikallista ja systeemistä tilaa. Nämä vaikeudet yhteensä ovat usein liikaa palouh-rille, joka tavallisesti kuolee.
5 Näin ollen on ilmeistä, että välttämättömän ensiavun jälkeen tärkein lääketieteellinen tehtävä on puuttuvan ihopeitteen korvaaminen niin nopeasti ja tehokkaasti kuin mahdollista. Perinteisesti hyväksytyn lääketieteellisen käytännön mukaisesti palaneet alueet peitetään •jq siirtämällä niihin terveistä palamattomista alueista saatuja kudos -kappaleita (omakudossiirteitä), jotka on halkaistu paksuutensa suhteen. Kuitenkin kun palanut alue on esimerkiksi suurempi kuin 60-70 %, niin tällöin käytettävissä on tavallisesti liian vähän luovutettavaa kudosta kudossiirroksen toteuttamiseksi. Lisäksi omakudossiir-15 teen poistamiskohta on jälleen uusi alue, josta puuttuu kokonaan ihopeite. Näiden haittojen yhteydessä on otettava huomioon ne tosiseikat, että omakudossiirteiden poistamiskohdat pyrkivät myös paranemaan hitaasti ja ne saattavat tuottaa haitallisia paranemisjäännöksiä.
20 Lääketieteellisesti hyväksyttävää on myös se, että alueet, joista iho puuttuu, peitetään siirtämällä niihin kuolleiden luovuttajien homologista ihoa, lyofilisoitua heterologista ihoa (esimerkiksi siasta), synteettistä keinotekoista ihoa tai muita vastaavia. Nämä vaihtoehtoiset materiaalit ovat allogeenisia, joten ne irtoavat 25 itsestään 1-6 kuukaudessa, ja ne on mahdollisesti korvattava autolo-gisella kudoksella ja näin ollen ne ovat parhaimmillaankin luonteeltaan väliaikaisia ratkaisuja.
Jokin aika sitten ilmestyneissä US-patenttijulkaisuissa 4 016 036; 30 4 304 866 ja 4 456 657 kuvataan menetelmiä ihmisen epiteelikalvojen viljelemiseksi, jotka kalvot ovat peräisin ihon keratinosyyteistä.
Nämä kalvot voivat luonnollisestikin olla autologisia, ja näin ollen niiden avulla palaneet alueet voitaisiin peittää ilman, että myöhemmin törmätään hylkimis- tai irtoamisongelmiin. Näiden US-patenttijulkai-
O
35 sujen mukaiset menetelmät perustuvat pienen (2-3 cm^) palan poistamiseen terveestä luovuttaja-alueesta. Tämän jälkeen luovuttajakudoksesta saatua epiteelisolujen suspensiota viljellään ja kasvatetaan primäää-
II
3 94147 1 riviljelmän myöhempien siirrostusten avulla. Sekundäärisessä ja tertiäärisessä kudoksessa olevien solujen yhteenkasvamisen jälkeen voidaan saada monikerroksisia epiteelikalvoja.
g Tällä tavalla saadaan ratkaistuksi useita vakavia ongelmia, kuten terveen jäännösihon huono saatavuus vaikeasti palaneessa potilaassa tai tarve käyttää kallista sian, kuolleen luovuttajan tai keinotekoista ihoa, joiden kaikkien saanti on vaikeata ja joiden käyttöä on valvottava tiukasti vasta-ainereaktiosta johtuen.
10
Toisaalta edellä mainittujen menetelmien mukaisesti saadut keratino-syyttiviljelmät tarvitsevat 3-4 viikkoa, kunnes ne ovat kasvaneet sopivasti siten, että voidaan saada kalvoarkkeja. Toisin sanoen palaneiden potilaiden on oltava ilman palaneiden alueiden suojaa jg ensimmäiset 3-4 viikkoa. Tämä alkuvaihe on luonnollisestikin kriittisin ja näin ollen tämän ajanjakson aikana terveestä kudoksesta saadut siirrokset olisivat erittäin edullisia.
Lisäksi näiden US-patenttijulkaisujen mukaiset viljellyt epiteeli-20 kalvot on käytettävä muutaman tunnin kuluessa niiden talteenotosta, sillä alalla ei ole ollut mahdollista kehittää sellaista säilytysme-netelmää, joka kykenee säilyttämään kasvatettuja orvaskesikudoksia siten, että niiden kuljetus kaukana sijaitseviin käyttöpisteisiin olisi mahdollista. Kirjallisuudesta on kuvattu monenlaisia yrityksiä 25 säilöä ihonäytteitä kryologisesti. Katso esimerkiksi May et ai., "Cryopreservation of Skin Using an Insulated Heat Sink Box Stored at -70 eC", Cryobiology. 22.:205-14 (1985); May et al., "Recent Developments in Skin Banking and the Clinical Use of Cryopreserved Skin", 21(4) J. Med, Assoc. Ga,. 21:233.36 (1984); Yang et al. , , 30 Growth of Human Mammary Epithelial Cells on Collagen Cell Surfaces", Cancer Research. 41(10) 4093-4100 (1981); Biagini et al., "Skin Storage in Liquid Nitrogen, An Ultrastructural Investigation", Journal of Cutaneous Pathology. 6:5-17 (1979); Taylor, "Cryopreservation of Skin: Discussion and Comments", Cryobiology. 3 (2) 1966; sekä Baxter 35 et al., "Cryopreservation of Skin: A Review", Transplantation
Proceedings. Vol. 17 (6) liite 4, 112-120 (1985). Näistä ja muista kirjallisuuslähteistä nähdään, että olennainen osa jäätyneen 94147 4 1 epiteelikudoksen soluista kykenee sulattamisen jälkeen jatkamaan aineenvaihduntansa. Kuitenkin epiteelikalvojen, joita on tarkoitus käyttää omakudossiirteinä tai vieraskudossiirteinä, ja joiden tulisi toimia palaneen alueen peitteenä, täytyy sisältää suhteellisen run-g säästi mitoottisesti toimintakykyisiä soluja kryologisen säilytyksen jälkeen. Sopivia biologisia ominaisuuksia käsittävien kalvojen tuottamisen edellytyksenä on, että ne kykenevät mitoosiin sekä kerrokselliseen erilaistumiseen. Tätä kykyä ei olla toistaiseksi voitu osoittaa jäädytetyistä ja sulatetuista viljellyistä epiteelinäytteistä.
10
Varmuudella ei voida ennustaa sitä, miten jäädyttäminen ja sulattaminen vaikuttavat solujen kohtaloon yhteenviljellyissä kalvoissa, joista puuttuu tukeva ihomateriaali. Nämä kalvot käsittävät soluja, joita pintaproteiini kytkee toisiinsa. Nämä kalvot ovat vain muutaman 15 solun paksuisia. Ne eivät ole erilaistuneet täysin kerrostuneeksi orvaskedeksi. Jäädyttämiseen ja sulattamiseen liittyy solujen sisäisten ja solujen välisten jääkiteiden muodostumista, laajenemista ja supistumista, jotka kaikki vaikuttavat arvaamattomalla tavalla erillisiin viljeltyihin sooluihin sekä koko kalvoon.
20 Jäädytettyjen viljeltyjen ihosiirremateriaalien saatavuus olisi edullista, koska tällöin varastointi ja kuljetus olisi mahdollista, sekä ajatellen erityisesti useita kudossiirtoja tarvitsevia potilaita, koska se helpottaisi viljelyn ja kirurgisten toimenpiteiden välistä 25 parempaa koordinointia. Mikäli tällaisia tuotteita kyettäisiin kehittämään, niin tällöin voitaisiin perustaa "kudospankkeja" tai muita kasvatettujen allogeenisten orvaskesikudosten talletuslaitoksia, joihin voitaisiin turvautus hätätilanteessa.
30 Helposti saatavilla olevia viljeltyjä, jäädytettyjä vieraskudossiir-teitä voidaan käyttää lukuisissa kliinisissä sovellutuksissa. Esimerkiksi oheisen keksinnön puitteissa todettiin, että syvät, toisen asteen palovammat paranevat paljon nopeammin, kun niihin siirretään viljeltyjä vieraskudossiirteitä. Rajallisissa, koko paksuuteen koh-35 distuneissa vammoissa, jotka ovat kliinisesti tarkasteltuina kolmannen asteen palovammoja, vastaanotetut keratinosyytit johtivat epiteelin muodostumiseen uudestaan, joiden keratinosyyttien kasvua ja mahdolli-
II
5 94147 1 sesti myös kulkeutumista viljellyt vieraskudossiirteet stimuiloivat voimakkaasti.
Viljeltyjä vieraskudossiirteitä voidaan käyttää myös useimmissa g luovuttajakohdissa, joista paksuudeltaan halkaistut omakudossiirteet ovat peräisin. Nämä johtavat näiden alueiden hyvään paranemiseen jopa neljässä vuorokaudessa.
Ohessa kuvattua menetelmää voidaan myös käyttää menestyksellisesti jq in vitro-kasvatutun limakalvon kryologiseen säilyttämiseen. Tähän liittyen oheisen keksinnön puitteissa ilmeni, että kasvatettua limakalvoa voidaan saada in vitro lähtemällä pienistä kudosnäytteistä, joihin sovelletaan tämän jälkeen ihon keratinosyyteistä lähtien saatavien epiteelikalvojen tuottamisen yhteydessä kuvattua menetelmää. 15 Oheisen keksinnön puitteissa todettiin samoin, että in vitro-kasva-tettua limakalvoa voidaan siirtää menestyksekkäästi potilaisiin, joiden suussa tarvitaan limakalvosiirtoa.
Oheisen keksinnön tavoitteena on saada aikaan menetelmä ihohaavojen 20 hoitamiseksi siirtämällä niihin viljeltyjä ja kryologisesti säilytettyjä epiteelikalvoja, jotka toimivat sulattamisen jälkeen pysyvänä omakudossiirteenä tai tilapäisenä, haavan parantavana vieraskudossiir-teenä; sekä saada aikaan menetelmä, joka tekee mahdolliseksi viljeltyjen orvaskesikalvojen varastoinnin, kuljetuksen ja myöhemmän asian-25 mukaisen käytön, näiden orvaskesikalvojen ollessa sellaisessa muodossa, jota lääkäri voi käsitellä vaivattomasti, ja jota voidaan käyttää palohaavojen, haavaumien ja muiden haavojen hoitamiseen. Muuna tavoitteena on saada aikaan varastointia ajatellen pysyvä, epiteelin kaltainen haavapeite, joka kykenee mitoosiin ja kerrokselliseen 30 erilaistumiseen pysyvän omakudossiirteen tai tilapäisen vieraskudos- siirteen aikaansaamiseksi. Keksinnön nämä ja muut tavoitteet ilmenevät seuraavasta kuvauksesta, piirustuksista ja patenttivaatimuksista.
Keksinnön yhteenveto 35
Oheisessa keksinnössä saadaan aikaan menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, yhteenkasvaneista epiteelisoluista muodostuneiden kalvojen 94147 6 1 säilyttämiseksi, joita soluja on viljelty in vitro. Edulliset kalvot käsittävät viljeltyjä, yhteenkasvaneita keratinosyyttisoluja, edullisimmin orvaskeden keratinosyyttejä.
g Oheinen keksintö tekee myös mahdolliseksi viljellyn ja säilytetyn orvaskesikudoksen kuljettamisen ja näin ollen kryologisesti säilytettyjä, kasvatettuja allogeenisia orvaskesikudoksia tallettavan laitoksen perustamisen.
Oheisen keksinnön mukaisesti viljeltyjä epiteelikalvoja, jotka ovat jq muuten valmiit kudossiirteinä käyttöä varten, inkuboidaan alustassa, joka sisältää perinteisiä ravinneaineita sekä kryologisesti säilyttävää ainetta. Näitä kalvoja inkuboidaan ennalta määrätty ajanjakso, minkä jälkeen ne jäädytetään lopulliseen lämpötilaan, joka on noin -100 °C. Käytetyn jäähdytysgradientin tunnusomaisena piirteenä on Ί5 hidas alkuvaihe ja nopeampi loppuvaihe.
Tällä menetelmällä saadaan säilytyksen kannalta pysyvä, epiteelisoluista muodostuva haavapeite, joka koostuu viljeltyjen epiteelisolujen jäätyneestä, yhteenkasvaneesta kalvosta, joka on tarttumattoman 20 tukevan taustan päällä. Kun tämä solukalvo sulatetaan ja sijoitetaan haavan pinnalle, sen aineenvaihdunta alkaa toimia ja se kykenee mitoosiin sekä kerrokselliseen erilaistumiseen pysyvän omakudossiir-teen tai tilapäisen vieraskudossiirteen muodostaen. Toisin sanoen, mikäli kalvot on tuotettu potilaasta peräisin olevista epiteeliso-25 luista, niiden sijoittaminen haavaan johtaa pysyvään omakudossiirtee-seen. Ihmisen epiteelisoluja viljelemällä saadut kalvot ovat erinomaisia, aineenvaihdunnallisesti toimintakykyisiä, tilapäisiä, haavaa parantavia vieraskudossiirteitä toisessa ihmispotilaassa käytettyinä.
30 Ei irustusten lvhvt kuvaus
Kuvio la on optisella mikroskoopilla saatu kuva ihmisen viljellystä epiteelikalvosta ennen sen käsittelemistä oheisen keksinnön mukaisesti; 35
Kuvio Ib on optisella mikroskoopilla saatu kuva kuvion la mukaisesta viljellystä epiteelikalvosta, joka on käsitelty oheisen keksinnön
II
7 94147 1 mukaisesti, ja joka on sitten sulatettu; sekä
Kuvio 2 on elektronimikroskoopilla saatu kuva kuvion Ib mukaisesta epiteelikalvosta.
5
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Oheisessa keksinnössä käytetään hyväksi epiteelikalvoista muodostuvia arkkeja ja muita vastaavia, jotka on tuotettu edellä mainittujen US-Ί0 patenttijulkaisujen 4 016 036; 4 304 866 ja 4 456 657 mukaisesti.
Nämä patenttijulkaisut liitetään oheen tällä viittauksella. Mainitut kalvot stabiloidaan ensin inkuboimalla niitä alustassa, edullisesti ravinnealustassa, joka sisältää kryologisesti säilyttävää ainetta.
J5 Tämän kryologisesti säilyttävän aineen pitoisuus solun sisällä on tärkeä tekijä menetelmän onnistumiselle, Kryologisesti säilyttävän aineen pitoisuus on noin 8-15 paino-%, ja se on edullisesti glyserolia tai dimetyylisulfoksidia. Kryologisesti säilyttävä aine on kaikkein edullisimmin glyserolia, jota käytetään noin 10 painoprosentin pitoi-20 suutena. Kalvoja inkuboidaan noin huoneen lämpötilassa, edullisesti korkeintaan 15 minuuttia. Inkubointiaika on todettu jossain määrin kriittiseksi, sillä oheisen keksinnön puitteissa on todettu, että näiden ajanjaksojen pituus vaikuttaa dramaattisesti solujen elinkelpoisuuteen sekä siirrettyjen keratinosyyttien kykyyn muodostaa pesäk-25 keitä. Erityisesti suoritetuissa kokeissa, joissa inkuboinnin pituutta vaihdellaan, keratinosyyttien kyky muodostaa pesäkkeitä heikkenee huomattavasti sekä hyvin lyhyiden inkubointiaikojen (vähemmän kuin noin 2 minuuttia) että pitkien inkubointiaikojen (enemmän kuin 15 minuuttia) jälkeen, kun taas kyky muodostaa pesäkkeitä suurenee 30 huomattavasti inkubointiajan ollessa 4-7 minuuttia, tämän kyvyn ollessa suurimmillaan inkuboinnin kestäessä 5-7 minuuttia. Kryologisesti säilyttävän aineen vastaaavia solun sisäisiä pitoisuuksia saadaan aikaan soluissa käyttämällä suurempia pitoisuuksia ja lyhyempiä inkubointiaikoja tai pienempiä pitoisuuksia ja pitempiä inkuboin-35 tiaikoja.
Inkuboinnin jälkeen epiteelikalvot jäädytetään tarkoin säädetyssä δ 94147 1 lämpötilassa siten, että lämpötilan laskunopeus on pienempi toimenpiteen alussa kuin sen lopussa. Hidasta jäähdytystä, esimerkiksi korkeintaan noin -2 eC/min, mielellään noin -1 °C/min, käytetään välittömästi 0 °C:n ylä- ja alapuolella, °C mukaan lukien, olevalla g lämpötila-alueella. Jäähdyttäminen edelleen jäätymispisteen alapuolella voidaan toteuttaa nopeammin. On edullista, että jäähdyttäminen pysäytetään muutamaksi minuutiksi ennen solujen jäähtymistä jäätymispisteen alapuolelle. Jäähdyttämisen päättyessä jäätyneiden kalvojen lämpötila on saavuttanut edullisesti vähintään arvon -80 °C ja edul-1 q lisemmin vähintään arvon -100 °C. Tässä tilassa olevia käsiteltyjä epiteelikalvoja voidaan säilyttää vähintään noin 3 kuukautta ilman, että niiden morfologiset tai toiminnalliset ominaisuudet muuttuisivat olennaisesti. Itse asiassa oheisen keksinnön mukaisesti käsittelemällä saadut epiteelikalvojen palat ovat verrattavissa morfologisten ominai-jg suuksiensa ja kudossiirtoon soveltuvuutensa suhteen kalvoihin, jotka on saatu muulla tavalla tuoreista viljelmistä, mutta joita ei olla säilytetty kryologisesti.
Nämä kalvot laitetaan edullisesti kosketukseen pinnat vastakkain 20 tarttumattoman taustamateriaalin kanssa ennen jäädyttämistä. Perinteinen steriili, vaseliinilla käsitelty harsokangas sopii hyvin tähän tarkoitukseen. Tämän taustan tehtävänä on helpottaa näiden helposti rikkoutuvien kalvojen käsittelyä jäädytettynä sekä niiden sulattamisen jälkeen. Tämä tausta toimii lisäksi kalvon tarkoituksen-25 mukaisena tilapäisenä peitteenä iholla olevan haavan pinnalle sijoittamisen jälkeen.
Kuvio la esittää kalvoa ennen sen käsittelemistä oheisen keksinnön mukaisella menetelmällä, kun taas kuviossa Ib nähdään kalvo, joka on 30 käsitelty oheisen keksinnön mukaisella jäädytysmenetelmällä, ja joka on sulatettu. Näin ollen kuvion Ib mukainen kalvo on valmis kudossiir-teenä käyttöä varten. Sekä kuvion la että kuvion Ib mukainen kalvo on kiinnitetty, sisällytetty, leikattu ja värjätty hematoksyliinieo-siinilla. Kuvio 2 esittää elektronimikroskoopilla saatua kuvaa kuvion 35 Ib mukaisesta in vitro-viliellvstä orvaskesikalvosta. Näiden valokuvien perusteella on ilmeistä, että oheinen keksintö johtaa peruskerroksen solujen hyvään säilymiseen sekä solujen välisen rakenteen 9 94147 1 hyvään säilymiseen.
Kun keksinnön mukaisesti käsiteltyjä kalvoja halutaan käyttää, riittää, kun niitä inkuboidaan 37 °C:n lämpötilassa muutama minuutti, g minkä jälkeen ne pestään fysiologisessa suolaliuoksessa tai sopivassa viljelyalustassa.
Sen lisäksi, että säilytetyillä orvaskesikudoksilla voidaan peittää palaneita alueita, niitä voidaan käyttää myös muiden alojen sovellu-jq tuksissa, kuten onkologisessa plastiikkakirurgiassa tai rakenteita palauttavissa kirurgisissa toimenpiteissä. Säilytettyjä, in vitro-kasvatettuja limakalvoja voidaan myös käyttää suukirurgiassa.
Seuraava esimerkki havainnollistaa edelleen oheisen keksinnön erästä jg edullista suoritusmuotoa, sen pyrkimättä kuitenkaan rajoittamaan keksintöä millään tavalla.
Esimerkki 20 Keratinosyyttien viljelmiä saatiin edellä mainittujen US-patentti-julkaisujen, jotka liitetään oheen viittauksella, mukaisilla menetelmillä. Erityisesti US-patenttijulkaisun 4 016 036 mukaisesti saadut, yhteenkasvaneiden keratinosyyttien sekundääriset viljelmät irroitettiin viljelypulloistaan, siirrettiin vaseliinilla pinnoi-25 tetulle harsokankaalle ja kiinnitettiin kirurgisilla metallisilla verisuonipihdeillä noudattaen menetelmää, joka kuvataan US-patentti-julkaisussa 4 304 866.
Sitten nämä viljellyt kudoskappaleet siirrettiin steriileissä olosuh-30 teissä steriileihin polyesteri/polyetyleeni/alumiinipusseihin (12 x 20; Gambro S.A., 18, rue de Calais, 75885 Paris). Kuhunkin pussiin laitettiin 3 kudossiirrettä ja sitten 100 ml alustaa, joka sisälsi: 35 Eagle-alustan Dulbecco-muunnos 54 paino-%
Ham:in F12 27 paino-%
Sikiöasteisen vasikan seerumi (FCS) 9 paino-% 10 94147 1 Glyseroli 10 paino-%
Glutamiini 4 mM
Adeniini 1,8 x 10'^ M
Insuliini 5 fxg/ml g Transferriini 5 Mg/ml
Trijodityroniini 2 x 10'^ M
Hydrokortisoni 0,4 /jg/ml orvaskeden kasvutekijä 10 ng/ml penisilliini-streptomysiini 50 U/ml.
10
Pussit suljettiin lämmön avulla ja niitä inkuboitiin huoneen lämpötilassa 5-7 minuuttia. Pussit laitettiin sopivaan säiliöön ja ne siirrettiin sopivaan ohjelmoitavaan pakastuslaitteeseen (eräs tällainen pakastuslaite tunnetaan nimellä Programmable Temperature jg Controller PTC-300, ja se on kaupallisesti saatavana yhtiöstä Planer
Products, Ltd.). Sitten kudoskappaleet jäädytettiin käyttäen seuraavaa pakastamisohjelmaa: Lähtölämpötila : +25 °C; 20 nopeudella lämpötilaan - 5 eC/min +3 °C; neljän minuutin pituinen tauko; - 1 °C/min - 7 eC; -25 °C/min -40 eC; 25 +15 0C/min -25 °C; - 2 ‘’C/min -40 °C; ja - 3 0C/min -100 °C.
Kun lopullinen lämpötila -100 °C oli saavutettu, muovipussit siirret-30 tiin sopivaan metalliastiaan, joka oli jäähdytetty edeltäkäsin, vähintään kaksi tuntia aikaisemmin, -80 °C:n lämpötilaan. Tämä metalliastia siirrettiin sitten nopeasti pakastimeen -80 °C:n lämpötilaan.
Jäätyneitä epiteelikalvoja sisältäviä pusseja voidaan kuljettaa 35 pitkiä matkoja, kunhan vain lämpötilan nouseminen estetään. Jäätyneitä kalvoja voidaan säilyttää -80 °C:n lämpötilassa vähintään 3 kuukautta siten, että niiden morfologiset ja toiminnalliset ominai- li 11 94147 1 suudet säilyvät.
Kun näitä jäätyneitä kalvoja halutaan käyttää, pussit poistetaan pakastimesta, ne upotetaan välittömästi vesihauteeseen, jonka lämpö -g tila on +37 °C ja niitä inkuboidaan noin 10 minuuttia. Sitten pussit upotetaan muutamaksi sekunniksi 70-prosenttiseen etanoliin. Sitten pussit avataan steriileissä olosuhteissa, epiteelikalvot poistetaan, siirretään steriileihin säiliöihin, pestään huolellisesti viljelyalus-talla tai fysiologisella suolaliuoksella ja käytetään. Käyttöön 1Q liittyi haavapetin kunnostaminen, jotta sulatetun kalvon solut pääsisivät tiiviiseen kosketukseen täten aikaansaadun sopivan substraatin kanssa. Kalvot asetetaan paikoilleen sijoittamalla ne pinnat vastakkain haava-alueen kanssa, taustan jäädessä ulospäin, minkä jälkeen kalvoa painetaan varovaisesti taustan läpi sen mukauttamiseksi haava-•|g pinnan muotoon. Suurempien alueiden tapauksessa voidaan käyttää useita kalvoja.
Luonnollisestikin on selvää, että edellä esitettyjen menettelytapojen monet muunnokset ovat selviä alan asiantuntijalle, ja että seuraavien 20 patenttivaatimusten on tarkoitus kattaa tällaiset muunnokset sekä muut vastaavat.
25 30 35
Claims (11)
- 94147
- 1. Menetelmä in-vitro viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi, jonka menetelmän käsittämissä vaiheissa: 5 a) epiteelikalvoja inkuboidaan noin huoneen lämpötilassa alustassa, joka sisältää kryologisesti säilyttävää ainetta; ja b) mainitut epiteelikalvot jäädytetään, joka menetelmä on tunnettu siitä, että vaiheen a) inkubointi 10 kestää 2-15 minuuttia ja että vaiheessa b) jäähdyttämisnopeus ei ole korkeampi kuin -2°C/min lämpötila-alueella juuri yli ja juuri alle 0°C.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että alku- ja jäähdytyksen myöhemmässä 15 vaiheessa jäähdytysnopeus on suurempi kuin ennalta määrätty alkunopeus.
- 3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että mainitut epiteelikalvot on saatu soluviljelmästä. 20
- 4. Patenttivaatimusten 1-3 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että mainitut kalvot pakastetaan korkeintaan noin -80 °C:n lämpötilaan.
- 5. Patenttivaatimusten 1-4 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttä miseksi, tunnettu siitä, että mainittu kryologisesti säilyttävä aine on glyserolia tai dimetyylisulfoksidia.
- 6. Patenttivaatimusten 1-5 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttä-30 miseksi, tunnettu siitä, että mainittua kryologisesti säilyttävää ainetta lisätään ravinnealustaan 8-15 painoprosentin pitoisuudeksi. 1 2 II Patenttivaatimusten 1-6 mukainen menetelmä epiteelikalvojen säilyttämiseksi, tunne ttu siitä, että inkubointivaihe toteutetaan 2 35 käyttäen kryologisesti säilyttävän aineen sellaista pitoisuutta ja inkuboinnin kestäessä sellaisen ajanjakson ajan, että kryologisesti 94147 säilyttävän aineen pitoisuudeksi solun sisällä saadaan sama pitoisuus kuin siinä tapauksessa, että inkubointi kestää 4-7 minuuttia kryolo-gisesti säilyttävän aineen pitoisuuden ollessa 8-15 %.
- 8. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen menetelmä epitee- likalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että mainittu alusta sisältää olennaisesti noin: Eagle-alustan Dulbecco-muunnos 54 paino-%
- 10 Ham:in F12 27 paino-% Sikiöasteisen vasikan seerumi (FCS) 9 paino-% Glyseroli 10 paino-% Glutamiini 4 mM Adeniini 1,8 x ΙΟ"* M
- 15 Insuliini 5 iig/ml Transferriini 5 /ig/ml Trijodityroniini 2 x 10~1 M Hydrokortisoni 0,4 μζ/ml orvaskeden kasvutekijä 10 ng/ml 20 penisilliini-streptomysiini 50 U/ml. 35 Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen menetelmä epitee-likalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että menetelmässä käytetään olennaisesti seuraavaa jäädytysohjelma: 25 Lähtölämpötila : +25 °C; nopeudella lämpötilaan - 5 °C/min + 3 °C; neljän minuutin pituinen tauko; 30 - 1 °C/min - 7 °C; -25 °C/min -40 eC; +15 °C/min -25 eC; - 2 °C/min -40 “C; ja - 3 °C/min -100 eC. 94147
- 10. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen menetelmä epitee-likalvojen säilyttämiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää lisäksi vaiheen, jossa mainitut jäädytetyt kalvot sulatetaan. 5 K 94147
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2100587 | 1987-06-23 | ||
| IT8721005A IT1207525B (it) | 1987-06-23 | 1987-06-23 | Metodo per la preservazione difogli trapiantabili di epitelio coltivato in vitro vitale. |
| PCT/EP1988/000532 WO1988010068A1 (en) | 1987-06-23 | 1988-06-15 | Method for preserving transplantable sheets of epithelium cultured in vitro |
| EP8800532 | 1988-06-15 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI890821A0 FI890821A0 (fi) | 1989-02-21 |
| FI890821L FI890821L (fi) | 1989-02-21 |
| FI94147B true FI94147B (fi) | 1995-04-13 |
| FI94147C FI94147C (fi) | 1995-07-25 |
Family
ID=11175297
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI890821A FI94147C (fi) | 1987-06-23 | 1989-02-21 | Menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, in vitro-viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5298417A (fi) |
| EP (1) | EP0296475B1 (fi) |
| JP (1) | JP2644024B2 (fi) |
| KR (1) | KR960009482B1 (fi) |
| AR (1) | AR240061A1 (fi) |
| AT (1) | ATE79720T1 (fi) |
| AU (1) | AU618012B2 (fi) |
| BR (1) | BR8807104A (fi) |
| CA (1) | CA1330541C (fi) |
| DE (1) | DE3874019T2 (fi) |
| DK (1) | DK81789D0 (fi) |
| ES (1) | ES2034034T3 (fi) |
| FI (1) | FI94147C (fi) |
| GR (1) | GR3006069T3 (fi) |
| HU (1) | HU203827B (fi) |
| IE (1) | IE61449B1 (fi) |
| IL (1) | IL86806A (fi) |
| IN (1) | IN167396B (fi) |
| IT (1) | IT1207525B (fi) |
| MX (1) | MX11997A (fi) |
| NO (1) | NO177211C (fi) |
| OA (1) | OA09038A (fi) |
| PT (1) | PT87789B (fi) |
| WO (1) | WO1988010068A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA884455B (fi) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5482834A (en) * | 1982-05-17 | 1996-01-09 | Hahnemann University | Evaluation of nucleic acids in a biological sample hybridization in a solution of chaotrophic salt solubilized cells |
| US5171660A (en) * | 1989-04-26 | 1992-12-15 | Cryolife, Inc. | Process of revitalizing cells and tissue prior to cryopreservation |
| DE3941873A1 (de) * | 1989-12-19 | 1991-06-20 | Jakob Dr Bodziony | Hohlfaser mit der beschichtung von zellen, die mehrjaehrige implantation in arterien und venen ermoeglichen |
| US5100676A (en) * | 1990-02-02 | 1992-03-31 | Biosurface Technology, Inc. | Cool storage of cultured epithelial sheets |
| DE4012079C2 (de) * | 1990-04-14 | 1997-11-06 | Jakob Dr Bodziony | Implantierbare Austausch- und Diffusionskammer |
| US5145770A (en) * | 1990-06-04 | 1992-09-08 | Biosurface Technology, Inc. | Cryopreservation of cultured epithelial sheets |
| US5192312A (en) * | 1991-03-05 | 1993-03-09 | Colorado State University Research Foundation | Treated tissue for implantation and methods of treatment and use |
| DE69233558T2 (de) * | 1991-11-20 | 2006-07-27 | Innogenetics N.V. | Keratinozyt-abstammende Granulate zur Verwendung als wundheilendes Mittel |
| US6585969B1 (en) | 1991-11-20 | 2003-07-01 | N. V. Innogenetics S.A. | Non-viable keratinocyte cell composition or lysate for promoting wound healing |
| JPH0646840A (ja) * | 1992-08-04 | 1994-02-22 | Nippon Zenyaku Kogyo Kk | 細胞凍結保存液 |
| IT1263023B (it) * | 1992-11-09 | 1996-07-23 | Biostruttura epitelio-supporto tubulare e metodo per la sua preparazione. | |
| IT1256621B (it) * | 1992-12-04 | 1995-12-12 | Soluzioni crioprotettrici | |
| US5891617A (en) * | 1993-09-15 | 1999-04-06 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of harvested skin and cultured skin or cornea equivalents by slow freezing |
| US5518878A (en) * | 1993-09-15 | 1996-05-21 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of cultured skin or cornea equivalents with agitation |
| DE69532976T2 (de) * | 1994-03-14 | 2005-05-04 | Cryolife, Inc. | Herstellungsverfahren von gewebe zur implantation |
| EP0790767B1 (en) * | 1994-11-09 | 2001-10-10 | Celadon Science, LLC | Wound repair dressings and methods for their preservation |
| US5689961A (en) | 1996-01-30 | 1997-11-25 | Organogenesis Inc. | Ice seeding apparatus for cryopreservation systems |
| US6713084B1 (en) * | 1997-01-17 | 2004-03-30 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of skin resurfacing wounds |
| AU6242298A (en) | 1997-01-17 | 1998-08-07 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of corneal resurfacing wounds |
| KR20020086678A (ko) * | 2000-03-24 | 2002-11-18 | 가부시끼가이샤 메니콘 | 조직 등가물의 동결 보존 방법 및 동결 보존된 조직 등가물 |
| IL157532A0 (en) * | 2000-12-27 | 2004-03-28 | Ortec International Inc | Processes for making cryopreserved composite living constructs and products resulting therefrom |
| DE10151296A1 (de) | 2001-10-17 | 2003-04-30 | Boehringer Ingelheim Pharma | Keratinozyten verwendbar als biologisch aktive Substanz bei der Behandlung von Wunden |
| WO2003064634A1 (en) * | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Asahi Techno Glass Corporation | Liquid for frozen storage of primate embryo stem cells and frozen storage method |
| US20060166360A1 (en) * | 2002-10-18 | 2006-07-27 | The General Hospital Corporation | Compositions, solutions, and methods used for transplantation |
| US20070185238A1 (en) * | 2006-02-06 | 2007-08-09 | No-Burn Investments, Llc | Paint with mold inhibitor and insecticide |
| CA2644091C (en) * | 2008-10-20 | 2015-12-15 | University Of Guelph | Embryo culture media containing thyroid hormone |
| WO2013174769A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of keratinocytes as a biologically active substance in the treatment of wounds, such as diabetic wounds, optionally in combination with a dpp-4 inhibitor |
| EP3207122B1 (en) | 2014-10-14 | 2019-05-08 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Generation of keratinocytes from pluripotent stem cells and maintenance of keratinocyte cultures |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1395002A (fr) * | 1963-03-01 | 1965-04-09 | Union Carbide Corp | Procédé de conservation de cellules |
| US3943993A (en) * | 1974-05-03 | 1976-03-16 | Smith Kendall O | Low temperature storage of surface attached living cell cultures |
| US3940943A (en) * | 1975-01-22 | 1976-03-02 | The Curators Of The University Of Missouri | Multistage freezing system for preservation of biological materials |
| US4016036A (en) * | 1975-11-14 | 1977-04-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for serially culturing keratinocytes |
| DE2715887A1 (de) * | 1977-04-09 | 1978-10-12 | Ayguen Suerayya Tahsin Prof Dr | Verfahren zur herstellung und konservierung von human-zellkulturen aus menschlichen foeten sowie nach diesem verfahren hergestellte human-zellkulturen fuer die intravenoese oder intramuskulaere anwendung beim menschlichen koerper |
| US4456687A (en) * | 1978-11-16 | 1984-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Agents for promoting growth of epithelial cells |
| WO1980001350A1 (en) * | 1978-12-26 | 1980-07-10 | Massachusetts Inst Technology | Skin-equivalent |
| JPS6029471B2 (ja) * | 1979-08-16 | 1985-07-10 | 日機装株式会社 | 肝細胞の凍結方法 |
| US4304866A (en) * | 1979-11-14 | 1981-12-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Transplantable sheets of living keratinous tissue |
| FR2493662A1 (fr) * | 1980-11-05 | 1982-05-07 | Rhone Poulenc Ind | Substrats metallises pour circuits imprimes et leur procede de preparation |
| US4673649A (en) * | 1983-07-15 | 1987-06-16 | University Patents, Inc. | Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells |
| CA2000181A1 (en) * | 1988-10-14 | 1990-04-14 | Chung-Faye Chao | Process for producing cultured epidermal sheet, product and method of use |
-
1987
- 1987-06-23 IT IT8721005A patent/IT1207525B/it active
-
1988
- 1988-06-15 AT AT88109528T patent/ATE79720T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 WO PCT/EP1988/000532 patent/WO1988010068A1/en not_active Ceased
- 1988-06-15 BR BR888807104A patent/BR8807104A/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 DE DE8888109528T patent/DE3874019T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-15 AU AU19957/88A patent/AU618012B2/en not_active Ceased
- 1988-06-15 EP EP88109528A patent/EP0296475B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 HU HU884206A patent/HU203827B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 JP JP63505845A patent/JP2644024B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 ES ES198888109528T patent/ES2034034T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-20 IL IL86806A patent/IL86806A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 IE IE188988A patent/IE61449B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 PT PT87789A patent/PT87789B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 MX MX1199788A patent/MX11997A/es unknown
- 1988-06-22 IN IN427/MAS/88A patent/IN167396B/en unknown
- 1988-06-22 AR AR311199A patent/AR240061A1/es active
- 1988-06-22 CA CA000570101A patent/CA1330541C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-22 ZA ZA884455A patent/ZA884455B/xx unknown
-
1989
- 1989-02-16 OA OA59526A patent/OA09038A/xx unknown
- 1989-02-20 NO NO890715A patent/NO177211C/no unknown
- 1989-02-21 FI FI890821A patent/FI94147C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-02-22 KR KR89700318A patent/KR960009482B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1989-02-22 DK DK081789A patent/DK81789D0/da not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-11-25 US US07/799,752 patent/US5298417A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-23 GR GR920402392T patent/GR3006069T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI94147B (fi) | Menetelmä kudossiirtoon soveltuvien, in vitro-viljeltyjen epiteelikalvojen säilyttämiseksi | |
| JP2722134B2 (ja) | 培養上皮細胞シートの凍結保存 | |
| DE69333926T2 (de) | Verfahren zur Verarbeitung und Konservierung von auf Kollagen basierten Gewebeteilen zur Transplantation | |
| JP6580028B2 (ja) | 生育可能なヒト皮膚代用物の凍結保存 | |
| US20120189707A1 (en) | Production Method For Cryopreserved Acellular Dermal Matrix, And Cryopreserved Acellular Dermal Matrix Produced Thereby | |
| Song et al. | In vivo evaluation of the effects of a new ice-free cryopreservation process on autologous vascular grafts | |
| JPH10509610A (ja) | 創傷修復用包帯およびそれらの保存法 | |
| JP2000514780A (ja) | 保存溶液 | |
| WO2001070021A1 (en) | Method of preserving tissue equivalent and tissue equivalent preserved in frozen state | |
| Vischjager et al. | Function of cryopreserved arterial allografts under immunosuppressive protection with cyclosporine A | |
| US6638709B2 (en) | Processes for making cryopreserved composite living constructs and products resulting therefrom | |
| Fujita et al. | Successful preservation of human skin by vitrification | |
| JPH09110601A (ja) | 培養上皮細胞シートの凍結保存 | |
| JP3025931B2 (ja) | 表皮細胞シートの凍結保存用液 | |
| JP2023539166A (ja) | 臓器保存のための装置および方法 | |
| CN1944636A (zh) | 一种家猪皮肤组织冷冻保存方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ISTITUTO NAZIONALE PER LA RICERCA SUL |