PT87789B - Metodo para a preservacao de laminas epiteliais - Google Patents
Metodo para a preservacao de laminas epiteliais Download PDFInfo
- Publication number
- PT87789B PT87789B PT87789A PT8778988A PT87789B PT 87789 B PT87789 B PT 87789B PT 87789 A PT87789 A PT 87789A PT 8778988 A PT8778988 A PT 8778988A PT 87789 B PT87789 B PT 87789B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- epithelial
- preservation
- laminae
- incubation
- sheets
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title claims description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 claims description 10
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 2
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 claims description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 2
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 claims 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims 2
- 230000009841 epithelial lesion Effects 0.000 claims 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 claims 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 claims 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 claims 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 claims 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 7
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 206010006803 Burns third degree Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 206010006802 Burns second degree Diseases 0.000 description 1
- 102000006835 Lamins Human genes 0.000 description 1
- 108010047294 Lamins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000005053 lamin Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Natural products CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/16—Physical preservation processes
- A01N1/162—Temperature processes, e.g. following predefined temperature changes over time
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/12—Chemical aspects of preservation
- A01N1/122—Preservation or perfusion media
- A01N1/125—Freeze protecting agents, e.g. cryoprotectants or osmolarity regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/10—Hair or skin implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
MEMÓRIA DESCRITIVA
Resumo
O presente invento diz respeito a um método de preservação de lâminas epiteliais cultivadas, o qual compreende a incubação das lâminas à temperatura ambiente, em meios que contêm um criopreservante constituído por glicerol ou dimetilsulfóxido, durante um período pré-determi nado de tempo, e a seguir a congelação das lâminas cultivada O gradiente de arrefecimento é caracterizado por uma velocidade inicial de arrefecimento mais baixa , seguida por uma ve locidade de arrefecimento mais alta.
ISTITUTO NAZIONALE PER LA RICERCA SUL CANCRO
MÉTODO PARA A PRESERVAÇÃO DE LAMINAS EPITELIAIS
-2RESUMO DO INVENTO
Processo para a preservação de lâmi nas epiteliais cultivadas, por incubação das lâminas à tempe ratura ambiente em meios que contêm um criopreservante forma do por glicerol ou dimetilsulfóxido, durante um período prédeterminado de tempo, e depois por congelação das lâminas cultivadas. O gradiente de arrefecimento caracteriza-se por uma velocidade inicial de arrefecimento mais baixa, seguida por uma velocidade de arrefecimento mais alta.
ANTECEDENTES DO INVENTO
1. Âmbito do Invento
Este invento refere-se em geral à preservação crológica do tecido celular. Mais concretamente, este invento refere-se à preservação criológica de lâminas epiteliais obtidas por cultura celular.
Breve descrição da técnica anterior
Apesar dos recentes progressos no tratamento do tecido queimado ( ou seja, tecido que se carac teriza por quantidades suficientes de proteínas desnaturalizadas para produzir lesões na célula, ou a sua morte ), a taxa de mortalidade das vítimas queimadas continua todavia a ser inaceitávelmente alta. Estes níveis de mortalidade depen dem muito, naturalmente, da idade do paciente e da percenta-3-
gem de superfície corporal queimada. De facto, as taxas de mortalidade são dramaticamente altas para as queimaduras do terceiro grau ( ou seja, quando se destruiu a derme em toda a sua espessura ) em 50 -60% ou mais da superfície corporal. Nestes casos, especialmente, para além dos problemas imediatos de choque cardiovascular avançado e de ameaça de sépsis ou deterioração hidroelectrolítica um pouco menos iminente, surge outro problema ( ligeiramente retardado ) que é causado pela ausência de um recobrimento cutâneo sobre uma grande superfície corporal. A dificuldade que apresentam estes recobrimentos ausentes, ou zonas abertas, é que não se podem recuperar espontaneamente, já que foram completamente deterioradas ou destruídas em toda a sua espessura.
Quando a barreira epitelial normalmente fechada se abre ao ambiente exterior, cria-se um estado patológico crónico que, adicionado ás complicações infecciosas e metabólicas anteriormente referidas, agrava progressivamente as condições locais e sistémicas do doente. A soma total de todos estes problemas agrava com frequência o estado de saúde da vítima queimada, que frequentemente morre.
Portanto, é evidente que, uma vez que se tenha superado a fase de emergência do tratamento, o principal problema médico é cobrir o défice cutâneo o mais rápida e eficazmente possível. De acordo com a prática médica convencionalmente utilizada, as zonas feridas são cobertas por transplante de peças de tecido de espessura reduzida, extirpadas de zonas sãs não queimadas ( autoenxertos ). No entanto, quando a superfície queimada é superior, por exemplo a 60 -70%, habitualmente o tecido doador de que se dispõe é insuficiente para o enxerto. Além disso, o sitio doador autoenxertado produz por sua vez outras zonas adicionais que carecem de recobrimento cutâneo completo. Devem ter-se em consideração estes inconvenientes juntamente com o facto de que
-4os sítios doadores de autoenxerto também se recuperam lentamente e podem deixar resíduos que saram mal.
Também é medicamente aceitável cobrir o défice cutâneo através do transplante de pele homóloga de cadáver, de pele heteróloga liofilizada ( por exeplo, de porco ), cútis artificial sintético e similares. No entanto, estes materiais alternativos, ao serem alogénicos, desprendem-se espontaneamente ao fim de 1 a 6 meses e finalmente devem substituídos por tecido autónomo e, portanto, no melhor dos casos, são de carácter temporal.
Métodos recentemente descritos nas patentes dos Estados Unidos 4.016.036, 4.304.866 e 4.456.657, consistem em cultivar películas epiteliais humanas obtidas a partir de queratinocitos cutâneos. Naturalmente, estas películas devem ser autólogas e, portanto, devem permitir que as zonas queimadas sejam cobertas sem o risco de retrocesso ou despreendimento posterior. Estes métodos das Patentes dos Estados Unidos baseiam-se na remoção de uma pequena peça ( 2-3 cm2 ) de uma superfície doadora sã. Depois, a suspensão de células epiteliais obtida empregando-se o tecido doador é cultivada e expandida mediante inoculações subsequentes de cultura primária. Quando as culturas secundária e terciária se tornam confluentes, podem obter-se lâminas multicapa de epitélio.
Desta forma, resolvem-se potencialmente vários problemas graves, tais como a escassa disponibilidade de pele sã residual no paciente gravemente queimado ou a necessidade de utilizar cutis de porco, de cadáver ou artificial, que são caros e que podem não ser fácilmente acessíveis e cuja utilização deve ser estritamente regulada devido à reacção de anticorpos.
Por outro lado, as culturas de queratinocitos obtidos de acordo com os métodos anteriores necessitam de 3 a 4 semanas até se terem expandido adequadamente de maneira a poderem-se obter lâminas em forma de película. Por outras palavras, o doente queimado deve permanecer sem protecção das superfícies queimadas durante as 3 - 4 semanas iniciais. Este período inicial, naturalmente, é o mais crítico e, portanto, o período durante o qual o enxerto de cutis são proporcionaria o beneficio máximo.
Além disso, as lâminas epiteliais cultivadas descritas nas referidas patentes dos Estados Unidos devem ser utilizadas dentro das poucas horas seguintes à sua recolha, já que não foi possível aperfeiçoar um método de conservação que possa manter o epitelio suficientemente expandido para permitir o seu transporte para centros utilizadores distantes.
A disponibilidade de epitélio cultivado congelado também é vantajosa para aqueles doentes que necessitem de vários transplantes, já que facilita uma melhor coordenação entre os programas de cultura e cirúrgico.
Portanto, agora é possível pôr em prática a instituição de bancos de tecidos ou outros depositários de epitélio expandido alogénico, onde se poderia recorrer em caso de emergência.
Os aloenxertos cultivados fácilmente disponíveis no estado congelado podem ter várias aplicações clínicas. Por exemplo, estes inventores têm provas que as queimaduras profundas de segundo grau se curam muito mais rapidamente quando se enxertam com aloenxertos cultivados.
A lesões abrangendo toda a espessura, que apareciam clinicamente como queimaduras do terceiro grau, foram reepiteliza-
-6das pelos queratinocitos do receptor, cujo crescimento e pro vavelmente a migração, foram fortemente estimulados pelos aloenxertos cultivados.
aplicados xertos de to destas
Os aloenxertos também poderiam ser na maioria dos sítios doadores utilizados para enespessura reduzida. Estes produzem um bom curamenzonas, inclusivé ao fim de apenas 4 dias.
método aqui descrito pode ser uti lizado também com êxito na preservação criológica de mucosas expandidas in vitro. Neste aspecto, os presentes inventores determinaram que pode-se obter mucosa expandida in vitro, partindo-se de uma biopsia tomada por troquei, seguindo-se a metodologia descrita para a produção de películas epiteliais a partir de queratinocitos cutâneos. Estes inventores também determinaram que a mucosa expandida in vitro pode ser transplantada com êxito em pacientes que requeiram o transplante da mucosa oral.
RESUMO
DO INVENTO
Este invento proporciona um processo de preservação de lâminas transplantáveis de epitélio que tenha sido cultivado in vitro.
Este invento também permite o trans porte de epitélio cultivado preservado e, portanto, a instituição de um banco de epitélio alogénico expandido criopreservado.
De acordo com este invento, as lâminas epiteliais cultivadas, que estão prontas para ser enxer tadas, incubam-se em meios que contêm agentes nutritivos convencionais e um agente criopreservativo. As lâminas são incubadas durante um período de tempo pré-determinado e depois são congeladas a uma temperatura final à volta de -100QC 0 gradiente de arrefecimento utilizado caracteriza-se por uma fase inicial mais lenta e uma fase final mais rápida.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura la é uma micrografia óptica de uma lâmina epitelial humana cultivada, antes de ser tratada de acordo com este invento;
A Figura lb é uma micrografia óptica da lâmina epitelial cultivada da Figura 1, que foi tratada de acordo com este invento, tendo sido depois descongelada, e
A Figura 2 é uma micrografia electrónica da lâmina epitelial cultivada da Figura 16
DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO
Este invento utiliza lâminas de películas epiteliais e semelhantes, como as produzidas de acordo com as patentes Norte Americanas 4.016.0 36, 4.30 4.866 e 4.456.657, mencionadas anteriormente, as quais são aqui
incorporadas expressamente. As lâminas são em primeiro lugar estabilizadas por incubação em meios, preferivelmente meios nutrientes, que contenham um agente ciopreservativo. 0 agente criopreservativo encontra-se preferivelmente numa proporção de 8 a 15% aproximadamente e é preferivelmente glicerol ou dimetilsulfóxido. No melhor dos casos, o criopreservativo é glicerol que se utiliza com uma concentração à volta dos 10% em peso. As lâminas são incubadas a uma temperatura próxima da temperatura ambiente, preferivelmente não mais de 15 minutos .
Neste aspecto, descobriu-se que o tempo de incubação é bastante crítico, já que os inventores determinaram que o prolongamento destes períodos afecta espectacularmente a viabilidade das células e a capacidade dos queratinocitos transplantados de formar colónias. Em particular, ensaios realizados variando o período de incubação revelam uma diminuição notável· da capacidade dos queratinocitos de formar colónias ao fim de tempos de incubação muito curtos ( inferiores a uns 2 minutos ) e de tempos bastante prolongados ( superiores a cerca de 15 minutos ) , enquanto que a capacidade de formar colónias aumenta consideravelmente com tempos à volta dos 4-7 minutos e é máxima com tempos de
5-7 minutos.
Depois da incubação, as lâminas epiteliais são submetidas a um processo de congelação onde a temperatura é rigorosamente controlada, de maneira que a velocidade de arrefecimento da temperatura seja mais lenta no inicio do processo que no final do mesmo. No fim da congelação, as lâminas então congeladas alcançaram preferivelmente como máximo uma temperatura de -80°C e mais preferivelmente de -100°C. Nesta fase, as lâminas epiteliais tratadas podem manter-se durante cerca de 3 minutos sem que variem substancialmente as suas caracterlsticas morfológicas e funcionais.
De facto, as peças de lâminas epiteliais obtidas por tratamento de acordo com este invento são completamente equivalentes, do ponto de vista de morfologia e enxertabilidade, às que se obtêm de outra maneira a partir de culturas frescas que não tenham sido submetidas a criopreservação.
A este respeito, a Figura 1 a ilustra uma lâmina antes de ser submetida ao processo deste invento, enquanto que a Figura lb refere-se a uma lâmina que foi submetida ao processo de congelação deste invento e que foi depois descongelada. Portanto, a lâmina da Figura lb está pronta para ser utilizada como transplante. Ambas as lâminas das Figuras la e lb foram fixadas, incorporadas, cortadas e sujeitadas a hematoxilineosina. A Figura 2 é uma micrografia electrónica da lâmina epidérmica cultivada in vitro da Figura lb. Nesta micrografias é evidente que este invento permite uma boa conservação celular da capa basal, bem como uma boa conservação da estrutura intercelular.
Quando se pretendem utilizar lâminas tratadas, é suficiente incubá-las a cerca de 37°C durante alguns minutos, seguido de lavagem em solução salina fisiológica ou num meio de cultura adequado.
Para além do recobrimento das superfícies queimadas , as lâminas epiteliais preservadas podem encontrar utilidade noutros campos, tais como por exemplo, em cirurgia oncológica plástica ou reconstrutiva. A mucosa expandida in vitro preservada também pode ser utilizada em cirurgia oral.
seguinte exemplo ilustra uma realização preferida do método desta invenção, a qual ser considerada limitativa do âmbito da mesma.
não deve
EXEMPLO
As culturas de queratinocitos foram obtidas por utilização dos procedimentos das patentes norte americanas mencionadas anteriormente, as quais são aqui incorporadas . Em particular, as culturas de queratinicitos secundários confluentes, obtidas de acordo com a patente norte americana 4.016.036, foram desprendidas dos seus frascos de cultura, foram transferidas para cima de gase recoberta com vaselina e foram fixadas por meio de clips cirúrgicos vasculares metálicas , de acordo com o método descrito na patente norte americana 4.304.866. Estas peças de tecido cultivado foram depois transferidas, em condições esterilizadas, para bolsas esterilizadas de poliéster/polietileno/alumínio de 12 χ 20 cm ( Gambro S. A. -18, rua de Calais - 75009 Paris ) ( 3 enxertos em cada bolsa ). Depois, juntaram-se às bolsas 100 ml de meio que era constituído por :
| Meio de Eagle | modificado por Dulbecco | 54% | em | peso | |
| F12 de Ham | 2 7% | em | peso | ||
| Soro fetal de | vitelo 1 | I SFV ) | 9% | em | peso |
| Glicerol | 10% | em | peso |
Glutamina
Adenina
Insulina
Transferrina
Triiodotironina
Hidrocortisona
Factor de crescimento epidérmico ( FCE Penicilina - estreptomicina mM
1,8x10“ 4 M mcg/ml 5 mcg/ml 2χ10“9 M ,4 mcg/ml 10 mg/ml 50 V/ml
-11As bolsas foram termofechadas e incubacas à temperatura ambiente durante 5 a 7 minutos. As bolsas foram introduzidas num frasco adequado e este foi transferido para um congelador programável adequado ( um destes congeladores é conhecido como PTC - 300 Controlador de Temperatura Programável e é vendido por Planer Produtos , Ltc ) Depois, as peças de tecido foram congeladas empregando-se o seguinte programa de congelação:
Temperatura inicial: + 25°C
| - 5°C / minuto até | + 3°C |
| Pausa de 4 minutos | |
| - 1°C / minuto até | - 7°C |
| - 25°C / minuto até | - 40 °C |
| + 15°C / minuto até | - 25°C |
| - 2°C / minuto até | - 40 °C |
| - 3°C / minuto até | - 10 0 °C |
Depois de se ter alcançado a temperatura final de -100°C, as bolsas de plástico foram transferidas para um recipiente metálico adequado que tinha sido previamente arrefecido até - 80°C , pelo menos duas horas antes. O recipiente metálico passou depois rápidamente para um congelador a -80°C.
As bolsas contendo as lâminas epiteliais congeladas podem ser enviadas para grandes distâncias, com a única condição de se evitarem aumentos de temperatura. As lâminas congeladas podem ser preservadas a - 80°C pelo menos durante 3 meses , mantendo as suas características morfológicas e funcionais.
Quando é necessário utilizar as películas congeladas, tiram-se as bolsas do congelador, submergem-se imediatamente num banho de água a + 37°C e incubam-se durante cerca de 10 minutos. Depois, voltam-se a submergir as bolsas durante alguns segundos em etanol a 70°C.
A seguir, abrem-se as bolsas em condições esterilizadas, retiram-se as lâminas apiteliais, estas são transferidas para recipientes esterilizados, são bem lavadas com meio de cultura ou com solução salina fisiológica e são utilizadas.
Naturalmente, pode-se concluir que estão ao alcance dos especialistas deste campo diversas modificações aos procedimentos descritos e que estas modificações e similares estão cobertos pelas reivindicações que se seguem.
Tendo-se descrito o invento anteriormente , reclama-se como propriedade o conteúdo das seguin-
Claims (2)
- REIVINDICAÇÕE5 lã. - Método para a preservação de lâminas epiteliais, caracterizado por compreender os passos de:a) incubação das lâminas epiteliais a uma temperatura próxima da temperatura ambiente, num meio contendo um criopreservante eb) congelamento das referidas lâminas epiteliais, utilizando-se um gradiente de arrefecimento, o qual tem uma velocidade de arrefecimento pré-determinada.
- 2ã. - Método para a preservação de lâminas epiteliais, caracterizado por compreender os passos de:a) incubação das lâminas epiteliais a uma temperatura próxima da temperatura ambiente, num meio contendo um criopreservante; eb) congelamento das referidas lâminas epiteliais, utilizando-se um gradiente de arrefecimento que possui uma fase inicial com uma velocidade de arrefecimento pré-determinada e uma segunda fase com uma velocidade de arrefecimento mais rápida do que a da fase inicial.-1435. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por as lâminas epiteliais terem sido obtidas a partir de cultura celular.45. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com as reivindicações 1 - 3, caracterizado por as referidas lâminas serem congeladas a pelo menos cerca de - 80 °C.55.lâminas epiteliais de acordo caracterizado por o referido dimetilsulfóxido.- Método para a preservação de com as reivindicações 1 - 4, criopreservante ser glicerol ou65. - Método para a preservação de de acordo com as reivindicações 1 - 5 , o referido criopreservante ser adicionado a uma concentração de 8 - 15 % em peso.lâminas epiteliais caracterizado por ao meio nutriente75. - Método para preservação de lâminas epiteliais de acordo com as reivindicações 1-6 caracterizado por a referida temperatura ambiente de incubação permanecer durante um período de tempo desde cerca de 2 minutos até cerca de 15 minutos.85. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com as reivindicações 1-7 caracterizado por as etapas de incubação serem conduzidas com utilização de uma concentração de criopreservante e uma-15duração de incubação tais que produzam uma concentração intracelular de criopreservante equivalente à concentração obtida quando a incubação é conduzida utilizando-se 8% a 15% em peso de concentração de criopreservante durante um período entre 4 e 7 minutos.9â. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o referido meio compreender aproximadamente:
modificação Dulbecco de meio Eagle 54% em peso F12 de Ham 2 7% em peso soro de vitela fetal ( FCS ) 9% em peso glicerol 10% em peso glutamina 4 mM adenina 1,8x 10 ' '4 M insulina 5 mcg/ml transferrina 5 mcg/ml _9 tri-iodotironina 2x10 M hidrocortisona factor de crescimento epidérmico penicilina-estreptomicina0,4 mcg/ml10 ng/ml50 U/ml10 §. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por se utilizar o seguinte programa de congelamento:Temperatura de partida : + 25°C; + 3°C; - 5°C / min. até pausa durante 4 minutos; - 1°C / min. até - 77°C; - 25°C / min . até - 40 °C; + 15°C / min . até - 25°C; - 2°C / min. até - 40 °C; e - 3°C / min. até - 100°C; llã. - Método para a preservação de lâminas epiteliais de acordo com qualquer uma das reivindica ções anteriores, caracterizado por compreender ainda o passo de descongelamento das referidas lâminas congeladas.123. - Lâminas epiteliais congeladas caracterizadas por serem obtidas peio método de qualquer uma das reivindicações anteriores.133. - Lâminas epiteliais descongeladas caracterizadas por serem obtidas pelo método da reivin dicação 11.143. - Tecido para tratamento de uma lesão epitelial, estabilizado para armazenagem, caracterizado por compreender:-17uma lâmina confluente congelada de células epiteliais, alogénicas cultivadas que, quando descongelada e aplicada à superfície de uma lesão, é metabolicamente competente e é capaz de induzir a cura da lesão.15â. - Tecido para tratamento de uma lesão epitelial, estabilizado para armazenagem, caracterizado por compreender:uma lâmina confluente congelada de células epiteliais cultivadas a partir de uma célula retirada a um doente, a qual, quando descongelada e aplicada à superfície de uma lesão da pele existente no referido doente, é metabolicamente competente e é capaz de proporcionar mitose, estratificação e diferenciação, de forma a produzir um auto-enxerto histologicamente permanente e normal.16â. - Tecido de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado por as células epiteliais serem ceratinócitos.vindicação 14 uma protecção173. _ Tecido ou 15, caracterizado por que está em contacto com de acordo com a reicompreender ainda a superfície da lâmi-1818â. - Tecido de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por a protecção ser constituída por um material que está adaptado para ser removido da superfície da referida lâmina.Lisboa, 22 de Junho de 1988
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT8721005A IT1207525B (it) | 1987-06-23 | 1987-06-23 | Metodo per la preservazione difogli trapiantabili di epitelio coltivato in vitro vitale. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT87789A PT87789A (pt) | 1989-05-31 |
| PT87789B true PT87789B (pt) | 1994-11-30 |
Family
ID=11175297
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT87789A PT87789B (pt) | 1987-06-23 | 1988-06-22 | Metodo para a preservacao de laminas epiteliais |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5298417A (pt) |
| EP (1) | EP0296475B1 (pt) |
| JP (1) | JP2644024B2 (pt) |
| KR (1) | KR960009482B1 (pt) |
| AR (1) | AR240061A1 (pt) |
| AT (1) | ATE79720T1 (pt) |
| AU (1) | AU618012B2 (pt) |
| BR (1) | BR8807104A (pt) |
| CA (1) | CA1330541C (pt) |
| DE (1) | DE3874019T2 (pt) |
| DK (1) | DK81789A (pt) |
| ES (1) | ES2034034T3 (pt) |
| FI (1) | FI94147C (pt) |
| GR (1) | GR3006069T3 (pt) |
| HU (1) | HU203827B (pt) |
| IE (1) | IE61449B1 (pt) |
| IL (1) | IL86806A (pt) |
| IN (1) | IN167396B (pt) |
| IT (1) | IT1207525B (pt) |
| MX (1) | MX11997A (pt) |
| NO (1) | NO177211C (pt) |
| OA (1) | OA09038A (pt) |
| PT (1) | PT87789B (pt) |
| WO (1) | WO1988010068A1 (pt) |
| ZA (1) | ZA884455B (pt) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5482834A (en) * | 1982-05-17 | 1996-01-09 | Hahnemann University | Evaluation of nucleic acids in a biological sample hybridization in a solution of chaotrophic salt solubilized cells |
| US5171660A (en) * | 1989-04-26 | 1992-12-15 | Cryolife, Inc. | Process of revitalizing cells and tissue prior to cryopreservation |
| DE3941873A1 (de) * | 1989-12-19 | 1991-06-20 | Jakob Dr Bodziony | Hohlfaser mit der beschichtung von zellen, die mehrjaehrige implantation in arterien und venen ermoeglichen |
| US5100676A (en) * | 1990-02-02 | 1992-03-31 | Biosurface Technology, Inc. | Cool storage of cultured epithelial sheets |
| DE4012079C2 (de) * | 1990-04-14 | 1997-11-06 | Jakob Dr Bodziony | Implantierbare Austausch- und Diffusionskammer |
| US5145770A (en) * | 1990-06-04 | 1992-09-08 | Biosurface Technology, Inc. | Cryopreservation of cultured epithelial sheets |
| US5192312A (en) * | 1991-03-05 | 1993-03-09 | Colorado State University Research Foundation | Treated tissue for implantation and methods of treatment and use |
| US6585969B1 (en) | 1991-11-20 | 2003-07-01 | N. V. Innogenetics S.A. | Non-viable keratinocyte cell composition or lysate for promoting wound healing |
| EP0970701B1 (en) * | 1991-11-20 | 2005-10-26 | Innogenetics N.V. | Pellets derived from keratinocytes for use as wound healing substances |
| JPH0646840A (ja) * | 1992-08-04 | 1994-02-22 | Nippon Zenyaku Kogyo Kk | 細胞凍結保存液 |
| IT1263023B (it) * | 1992-11-09 | 1996-07-23 | Biostruttura epitelio-supporto tubulare e metodo per la sua preparazione. | |
| IT1256621B (it) * | 1992-12-04 | 1995-12-12 | Soluzioni crioprotettrici | |
| US5518878A (en) * | 1993-09-15 | 1996-05-21 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of cultured skin or cornea equivalents with agitation |
| US5891617A (en) * | 1993-09-15 | 1999-04-06 | Organogenesis Inc. | Cryopreservation of harvested skin and cultured skin or cornea equivalents by slow freezing |
| AU1931495A (en) * | 1994-03-14 | 1995-10-03 | Cryolife, Inc. | Treated tissue for implantation and preparation methods |
| WO1996014738A2 (en) * | 1994-11-09 | 1996-05-23 | Walid Kuri Harcuch | Wound repair dressings and methods for their preservation |
| US5689961A (en) | 1996-01-30 | 1997-11-25 | Organogenesis Inc. | Ice seeding apparatus for cryopreservation systems |
| US6713084B1 (en) * | 1997-01-17 | 2004-03-30 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of skin resurfacing wounds |
| AU6242298A (en) | 1997-01-17 | 1998-08-07 | Celadon Science, Llc | Methods for promoting healing of corneal resurfacing wounds |
| AU2001236053A1 (en) * | 2000-03-24 | 2001-10-03 | Menicnon Co., Ltd. | Method of preserving tissue equivalent and tissue equivalent preserved in frozen state |
| JP2004520828A (ja) * | 2000-12-27 | 2004-07-15 | オーテック・インターナショナル，インコーポレイテッド | 凍結保存された複合生体構築物の製造方法および該方法から得られる製造物 |
| DE10151296A1 (de) * | 2001-10-17 | 2003-04-30 | Boehringer Ingelheim Pharma | Keratinozyten verwendbar als biologisch aktive Substanz bei der Behandlung von Wunden |
| EP1471140A4 (en) * | 2002-01-31 | 2005-02-16 | Asahi Techno Glass Cosporation | LIQUID FOR FROZEN STORAGE OF PRIMATE EMBRYONIC STEM CELLS AND FREEZING STORAGE METHOD |
| AU2003286474A1 (en) * | 2002-10-18 | 2004-05-04 | The General Hospital Corporation | Compositions, solutions, and methods used for transplantation |
| US20070185238A1 (en) * | 2006-02-06 | 2007-08-09 | No-Burn Investments, Llc | Paint with mold inhibitor and insecticide |
| CA2644091C (en) | 2008-10-20 | 2015-12-15 | University Of Guelph | Embryo culture media containing thyroid hormone |
| WO2013174769A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of keratinocytes as a biologically active substance in the treatment of wounds, such as diabetic wounds, optionally in combination with a dpp-4 inhibitor |
| JP6581655B2 (ja) | 2014-10-14 | 2019-09-25 | フジフィルム セルラー ダイナミクス，インコーポレイテッド | 多能性幹細胞由来ケラチノサイトの生成およびケラチノサイト培養の維持 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1395002A (fr) * | 1963-03-01 | 1965-04-09 | Union Carbide Corp | Procédé de conservation de cellules |
| US3943993A (en) * | 1974-05-03 | 1976-03-16 | Smith Kendall O | Low temperature storage of surface attached living cell cultures |
| US3940943A (en) * | 1975-01-22 | 1976-03-02 | The Curators Of The University Of Missouri | Multistage freezing system for preservation of biological materials |
| US4016036A (en) * | 1975-11-14 | 1977-04-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for serially culturing keratinocytes |
| DE2715887A1 (de) * | 1977-04-09 | 1978-10-12 | Ayguen Suerayya Tahsin Prof Dr | Verfahren zur herstellung und konservierung von human-zellkulturen aus menschlichen foeten sowie nach diesem verfahren hergestellte human-zellkulturen fuer die intravenoese oder intramuskulaere anwendung beim menschlichen koerper |
| US4456687A (en) * | 1978-11-16 | 1984-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Agents for promoting growth of epithelial cells |
| DE2967509D1 (en) * | 1978-12-26 | 1985-10-10 | Massachusetts Inst Technology | Skin-equivalent |
| JPS6029471B2 (ja) * | 1979-08-16 | 1985-07-10 | 日機装株式会社 | 肝細胞の凍結方法 |
| US4304866A (en) * | 1979-11-14 | 1981-12-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Transplantable sheets of living keratinous tissue |
| FR2493662A1 (fr) * | 1980-11-05 | 1982-05-07 | Rhone Poulenc Ind | Substrats metallises pour circuits imprimes et leur procede de preparation |
| US4673649A (en) * | 1983-07-15 | 1987-06-16 | University Patents, Inc. | Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells |
| CA2000181A1 (en) * | 1988-10-14 | 1990-04-14 | Chung-Faye Chao | Process for producing cultured epidermal sheet, product and method of use |
-
1987
- 1987-06-23 IT IT8721005A patent/IT1207525B/it active
-
1988
- 1988-06-15 HU HU884206A patent/HU203827B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 AT AT88109528T patent/ATE79720T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 AU AU19957/88A patent/AU618012B2/en not_active Ceased
- 1988-06-15 JP JP63505845A patent/JP2644024B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 EP EP88109528A patent/EP0296475B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-15 WO PCT/EP1988/000532 patent/WO1988010068A1/en not_active Ceased
- 1988-06-15 BR BR888807104A patent/BR8807104A/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-15 DE DE8888109528T patent/DE3874019T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-15 ES ES198888109528T patent/ES2034034T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-20 IL IL86806A patent/IL86806A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 MX MX1199788A patent/MX11997A/es unknown
- 1988-06-22 CA CA000570101A patent/CA1330541C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-22 IN IN427/MAS/88A patent/IN167396B/en unknown
- 1988-06-22 ZA ZA884455A patent/ZA884455B/xx unknown
- 1988-06-22 AR AR311199A patent/AR240061A1/es active
- 1988-06-22 PT PT87789A patent/PT87789B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-22 IE IE188988A patent/IE61449B1/en not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-02-16 OA OA59526A patent/OA09038A/xx unknown
- 1989-02-20 NO NO890715A patent/NO177211C/no unknown
- 1989-02-21 FI FI890821A patent/FI94147C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-02-22 DK DK081789A patent/DK81789A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-02-22 KR KR89700318A patent/KR960009482B1/ko not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-11-25 US US07/799,752 patent/US5298417A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-23 GR GR920402392T patent/GR3006069T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PT87789B (pt) | Metodo para a preservacao de laminas epiteliais | |
| CA1310588C (en) | Method for cryopreserving heart valves | |
| Date et al. | Evaluation of lung metabolism during successful twenty-four-hour canine lung preservation | |
| SCHACHAR et al. | Investigations of low-temperature storage of articular cartilage for transplantation. | |
| US5145769A (en) | Method for cryopreserving blood vessels | |
| Boren et al. | Maintenance of viable arterial allografts by cryopreservation | |
| Berggren et al. | Clinical use of viable frozen human skin | |
| Xu et al. | Application of cryopreserved autologous skin replantation in the treatment of degloving injury of limbs | |
| EP1677594B1 (en) | Method for freezing, thawing and transplantation of viable cartilage | |
| Gournier et al. | Cryopreserved arterial allografts for limb salvage in the absence of suitable saphenous vein: two-year results in 20 cases | |
| JP2004520828A (ja) | 凍結保存された複合生体構築物の製造方法および該方法から得られる製造物 | |
| Babin et al. | Survival of implanted irradiated cartilage | |
| JP2016039792A (ja) | 生体組織又は細胞の保存方法 | |
| Takeishi et al. | Experimental study of cryopreserved allogeneic transfer of vessel: preliminary report | |
| DE69100748T2 (de) | Kühllagerung gezüchteter epithelschichten. | |
| Nakagawa et al. | Cryopreserved autologous nipple-areola complex transfer to the reconstructed breast | |
| JPH09110601A (ja) | 培養上皮細胞シートの凍結保存 | |
| See et al. | Our clinical experience using cryopreserved cadaveric allograft for the management of severe burns | |
| CN116234441A (zh) | 用于器官保存的装置和方法 | |
| Kay et al. | Evaluation of dmso transport in human articular cartilage: Vehicle solutions and effects on cell function | |
| JP3211890U (ja) | 生体組織又は細胞の保存装置 | |
| Mericka et al. | 7.2 BIOLOGICAL SKIN COVER: BANKING AND APPLICATION | |
| Lehr | The preservation of tissues and organs | |
| Waller et al. | Electron microscopic study of the endothelium of stored and cryopreserved monkey corneas | |
| Wylds et al. | A model for thermal gradients during renal vascular anastomoses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG3A | Patent granted, date of granting |
Effective date: 19940524 |
|
| MM3A | Annulment or lapse |
Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES Effective date: 19991130 |