FI85504B - Medel foer bestaemning av peroxidasaktiviteten tillsammans med en stabilisator, dess framstaellningsfoerfarande och anvaendning. - Google Patents
Medel foer bestaemning av peroxidasaktiviteten tillsammans med en stabilisator, dess framstaellningsfoerfarande och anvaendning. Download PDFInfo
- Publication number
- FI85504B FI85504B FI864815A FI864815A FI85504B FI 85504 B FI85504 B FI 85504B FI 864815 A FI864815 A FI 864815A FI 864815 A FI864815 A FI 864815A FI 85504 B FI85504 B FI 85504B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- solution
- penicillin
- tetraalkylbenzidine
- agent
- peroxide
- Prior art date
Links
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 18
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 16
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 11
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 3
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical class C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SCNC2=C1 WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-azaniumyl-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylphenyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Substances C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 231100000206 health hazard Toxicity 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002535 lyotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002444 monopotassium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000015861 monopotassium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002524 monosodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000018342 monosodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000002352 nonmutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M potassium;hydron;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Dram (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Description
1 85504
Valmiste peroksidaasiaktiivisuuden määrittämiseksi stabi-loimisaineen kanssa, valmistusmenetelmä ja valmisteen käyttö Tämä keksintö koskee valmistetta peroksidaasiaktii-5 visuuden määrittämiseksi värireaktion avulla sekä sen valmistusmenetelmää ja käyttöä.
Oleellista edellytystä sille, että yleiseen käyttöön saatiin entsyymi-immunoanalyysit, jotka olivat toteamisherk-kyyden suhteen samanveroisia kuin radioimmunologiset mene-10 telmät, merkitsi stabiilien osoittajaentsyymien ja niihin kuuluvien erittäin herkkien värinmuodostusreagenssien käyttöön tulo, joiden avulla näiden osoittajaentsyymien katalyyttinen aktiivisuus voitiin rekisteröidä mittausteknisesti yksinkertaisella tavalla. Erikoisen sopiviksi osoittaja-15 entsyymeiksi osoittautuivat tällöin oksidoreduktaasit glu-koosioksidaasi ja peroksidaasi. Peroksidaasin reaktiot kuuluvat yleisesti useimmin käytettyihin entsymaattisiin osoi-tusreaktioihin. Esimerkiksi kaikki teoksessa "Methods of Enzymatic Analysis", H.U. Bergmeyer, toim., 3. painos, osa 20 1, ss. 210-221, Verlag Chemie, Weinheim (1983) kuvatut mene telmät perustuvat, kuten glukoosin määritys glukoosioksidaa-sin avulla, vetyperoksidin stökiometriseen tuottamiseen. Tämä voidaan sitten muuttaa peroksidaasin katalysoimassa värittömän substraatin hapetuksessa värilliseksi tuotteeksi, 25 joka voidaan yksinkertaisesti määrittää kvantitatiivisesti spektrofotometrian avulla.
*" ; Tähän peroksidaasin katalysoimaan reaktioon sopivia ’ ' väriä tuottavia systeemejä on siksi tutkittu ja kuvattu suuri määrä (katso Bergmeyer) . Kun on kysymyksessä peroksi-30 daasiaktiivisuuden määrittäminen entsyymi-immunoanalyyseis-sä, vastaavat vain harvat vaatimuksia, erityisesti toteamis-: : : herkkyyden suhteen. Yleensä pitäisi väriä tuottavan subst raatin sallia suuri muuttumisnopeus ja siitä pitäisi muo-dostua tuote, jonka väri pysyy ja jolla on suuri molaari-35 nen ekstintiokerroin. Lisäksi pitäisi suosia aineita, joi- 2 85504 den käsittely ei aiheuta vaaraa terveydelle. Kaupallisissa peroksidaasiin perustuvien entsyymi-immunoanalyysien testitarvikepakkauksissa käytetään ennen kaikkea o-feny-leenidiamiinia (OPD) ja yhdistettä 2,21-atsinodi-(3-ety-5 leenibentsotiatsoliinisulfonaatti-6) (ABTS). Sekä OPD että myös ABTS ovat, kuten useimmat peroksidaasin substraatit, mutageenisia. Eräs usein käytettyjen substraattien ryhmä ovat bentsidiini-tyyppiä olevat, joihin myös tetrametyyli-bentsidiini (TMB) kuuluu. TMB on turvallinen ei-mutageeni-10 nen korvike bontsidiinityyppiä oleville karsinogeenisille peroksidaasin substraateille, kuten mm. bentsidiinille, diaminobentsidiinille. Lukuisissa tutkimuksissa ei ilmennyt yhtäkään osoitusta tämän bentsidiinijohdannaisen muta-geenisista ominaisuuksista (Tetrahedron 30, 3299 (1976); 15 Cancer Lett. 1, 39 (1975); J. Forensic Sei. 21, 816 (1976). Erinäiset käyttäjät ovat vuodesta 1974 asti käyttäneet TMB:tä hemoglobiinin tai sytokromi P 450:n pseudoperoksi-daasiaktiivisuuden määrittämiseen ja jo Liem et ai., Anal. Biochem. 98, 388-393 (1979) peroksidaasiaktiivisuuden osoit-20 tamiseen immunikomplekseissa immunoperoksidaasi-värjäystek-niikalla. Nämä julkaisun tekijät viittaavat johtopäätöksessään sivulla 392 TMB:n hyviin väriominaisuuksiin, mutta kuitenkin myös sen vähäiseen liukenevuuteen tavallisesti käytettyihin puskurisysteemeihin ja sen hapetuksen kautta 25 tapahtuvaan hajoamiseen.
Eräs huono puoli tähän asti käytetyissä väriä tuot-”* ; tavissa systeemeissä, joissa käytetään TMBttä peroksidaasin osoittamiseen, on TMB:n vähäinen stabiilisuus käyttövalmiis-sa seoksissa. Silloinkin kun peroksidaasia ei ole läsnä, 30 aiheuttaa vetyperoksidi jo muutamissa tunneissa värinmuo-dostusta, jonka johdosta substraattiliuokset tulevat kel-: : : paamattomiksi entsyymi-immunoanalyysikäyttöön suuren nolla- koearvonsa vuoksi.
Tästä syystä oli olemassa tarve löytää peroksidaasin .··,·. 35 määritykseen soveltuva, tetra-alkyylibentsidiiniä sisältävä 3 85504 valmiste, jolla ei ole yllä mainittua huonoa puolta. Sellainen valmiste, sen valmistaminen ja käyttö ovat tämän keksinnön aiheena.
Yllättäen todettiin, että voidaan saada stabiili-5 suudeltaan aikaisempia oleellisesti parempi tetra-alkyyli-bentsidiinivalmiste lisäämällä tätä yhdistettä tai jotakin sen johdannaista sisältävään liuokseen penisilliiniä tai penisilliinijohdannaisia, jotka muodostuvat penisilliinin happamassa hydrolyysissä, konsentraatioksi, joka on välil-10 tä 2,7 yumool.ia/1 - 2,7 mmoolia/1, mieluimmin väliltä 13,5 yumoolia/1 - 135 yumoolia/1, ja säätämällä liuoksen pH välille 2,5 - 6, sekoittamalla liuos veteen valmistetun puskuri-liuoksen kanssa, joka sisältää sopivan pitoisuuden vetyperoksidia. Kun sellaisten valmisteiden, joihin ei ole teh-15 ty tällaista lisäystä, reagenssinollakoearvo kohoaa kelpaamattoman suureksi yhdessä tai useammassa tunnissa, paranee pysyvyys penisilliiniä tai sen johdannaisia lisäämällä yhdeksi tai useammaksi viikoksi.
Keksintö koskee siten nestemäisen sekoitteen muodos-20 sa olevaa valmistetta, jonka avulla voidaan osoittaa ja määrittää peroksidaasi, joka valmiste sisältää pääasiallisesti vettä sisältävässä liuoksessa tetra-alkyylibentsidiiniä tai sen suoloja, penisilliiniä tai penisilliinin kaksiren-kaisesta perusrakenteesta heikosti happamassa hydrolyysissä 25 muodostuvia jakautumistuotteita, esimerkiksi penisilliini-. happoa tai 6-aminopenisilliinihappoa tai myös ei-rengas- ·· ; maista penisilliiniamiinia pitoisuutena 2,7 yumoolia/1 - 2,7 mmoolia/1, peroksidia peroksidaasin substraatiksi pitoisuu-teen 0,5 - 50 mmoolia/1 ja puskuriaineita.
30 Lopullinen aine voidaan valmistaa liuottamalla kiin- - \ - teässä muodossa oleva sekoite, esimerkiksi lyofilisaatti, :V: granulaatti tai tabletti, joka sisältää nestemäiseen val misteeseen käytetyt aineosat tetra-alkyylibentsidiinin, penisilliinin tai sen jakautumistuotteet, peroksidit ja 35 puskuriaineet sellaisissa määräsuhteissa, että liuotettaessa < 85504 määrättyyn tilavuuteen pääasiallisesti vettä sisältävää liuotinta, aineosat ovat läsnä mainittuina pitoisuuksina. Kiinteä valmiste voi lisäksi vielä sisältää lisäaineita, kuten esimerkiksi liukastavaa ainetta, täyteainetta ja 5 hajotusainetta, esimerkiksi polyeteeniglykolia, virtsa- ainetta ja bikarbonaattia.
Tetra-alkyylibentsidiininä soveltuvat käytettäviksi ennen kaikkea sellaiset, jotka sisältävät yhdestä kolmeen hiiliatomia alkyyliosassa, mieluimmin 3,3', 5,51-tetrame-10 tyylibentsidiini (TMB) tai sen dihydrokloridi. Penisilliininä käytetään mieluimmin penisilliini G:tä ja V:tä. Perok-sidina soveltuvat käytettäviksi natriumperboraatti, vetyperoksidi nestemäisessä muodossa tai kiinteänä virtsa-aine-adduktina tai myös vetyperoksidin muodostumista aikaan saa-15 va systeemi, joka koostuu D-glukoosista ja glukoosioksidaa-sista, jolloin konsentraatio säädetään välille 0,5 - 10 m-moolia/1. Puskuriaineista pidetään parhaina lyotrooppisia aineita, kuten sitraattia ja asetaattia pitoisuuksina 5-100 mmoolia/1.
20 Valmistettaessa nestemuodossa olevaa valmistetta liuotetaan tetra-alkyylibentsidiini ensimmäiseen happameen liuokseen, jossa on laimennettua suolahappoa tai muurahaishappoa ja jonka pH-arvo on 1,5 - 2,0. Penisilliini tai sen happamassa hydrolyysissä muodostuvat jakautumistuotteet li-25 sätään mieluimmin tähän liuokseen.
Toinen, vähemmän hapan liuos valmistetaan liuotta-I maila peroksidi tai lisäämällä se, kun käytetään vetyperok- sidiliuosta. Puskurointiin käytetään esimerkiksi etikkahap-poa tai mononatrium- tahi monokaliumsitraattia, joiden pH-30 arvo voidaan säätää natriumhydroksidin avulla välille 3-6. Mainitut penisilliinin jakautumistuotteet lisätään tähän : toiseen liuokseen, ellei niitä tai penisilliiniä vielä ole lisätty happamampaan liuokseen.
Sekoittamalla nämä kaksi liuosta määrätyssä suhtees-.·*.*. 35 sa saadaan käyttövalmis valmiste.
5 85504
Keksintöä valaisevat lähemmin seuraavat esimerkit, sen rajoittumatta niihin.
Esimerkkejä 1. Käyttövalmiin TMB-substraattivalmisteen valmistus 5 Kantaliuos 1: TMB-dihydrokloridia liuotettiin se koittaen pitoisuudeksi 5 g/1, s.o. 16 mmoolia/1, kahdesti tislattuna veteen ja pH säädettiin 5 N suolahapon avulla l,5:ksi. Tähän liuokseen lisättiin sekoittaen penisilliini G:tä, siten että loppukonsentraatio oli 200 mg/1, s.o.
10 0,56 mmoolia/1.
Vertailun vuoksi valmistettiin kantaliuos 1 lisäämättä penisilliiniä.
Kantaliuos 2: 900 ml:aan kahdesti tislattua vettä lisättiin 1,4 ml jääotikkaa, 1,5 ml 1 N NaOH ja 250 mg, 15 s.o. 3 mmoolia H2O2 virtsa-ainevetyperoksidi-adduktia. Kun liukeneminen oli tapahtunut täydellisesti, täytettiin kahdesti tislatulla vedellä 1 l:ksi.
Käyttöliuos: Yksi tilavuusosa kantaliuosta 1 ja 10 tilavuusosaa kantaliuosta 2 sekoitettiin keskenään.
20 Tämän liuoksen optinen tiheys oli aallonpituudella 650 nm 0,025. Kun oli lisätty 5-kertainen tilavuus 0,5 N rikkihappoa, oli aallonpituudella 450 nm mitattu ekstinktio 0,008.
2. Käyttöliuoksen pysyvyystutkimus 25 TMB-käyttöliuosta valmistettiin esimerkin 1 mukai sesti ja sitä säilytettiin jääkaapissa 4-8°C:ssa. Samalla · : tavalla valmistettiin ja säilytettiin esimerkin 1 mukainen käyttövalmis liuos, johon ei kuitenkaan lisätty penisillii-ni G:tä. Määrätyn säilytysajan jälkeen otettiin näistä käyt- 30 töliuoksista näytteitä, laimennettiin 5-kertaisella tila-: : : vuudella 0,5 N rikkihappoa ja määritettiin ekstinktio 450 nm:n aallonpituudella (TMB) . Tulokset on koottu seuraavaan taulukkoon.
6 8S504
TAULUKKO
Peroksidaasin määritykseen tarkoitettujen käyttö-liuosten reagenssinollakoearvojen stabiilius, kun on laimennettu 6-kertaisesti 0,5 N rikkihapolla.
5 Reagenssinollakoearvoja, kun säilytys 4°C:ssa on kestänyt 0 2 24 48 7 14 tuntia tuntia tuntia tuntia päivää päivää TMB-käyttö- 0,008 0,015 0,006 0,008 0,014 0,024 liuos, jossa 10 on penisilliiniä TMB-käyttö- 0,010 0,038 0,105 0,365 liuos, jossa ei ole penisilliiniä a · * * *
Claims (8)
1. Valmiste peroksidaasiaktiivisuuden osoittamiseksi ja määrittämiseksi, joka valmiste sisältää jotakin tet-5 ra-alkyylibentsidiiniä tai jotakin sen suolaa, jotakin pe-roksidia tai vetyperoksidia tuottavaa systeemiä ja puskuri-ainetta, tunnettu siitä, että valmiste sisältää penisilliiniä tai jotakin sen happamassa hydrolyysissä muodostuvaa jakautumistuotetta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tun nettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini sisältää alkyyliosassa yhdestä kolmeen hiiliatomia.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen valmiste, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini on 3,3'- 15 5,5'-tetrametyylibentsidiini.
4. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen valmisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini liuotetaan happoon ja liuokseen lisätään jotakin penisilliiniä ja tämä liuos sekoitetaan toisen liu- 20 oksen kanssa, joka sisältää peroksidia ja puskurlaineita.
5. Menetelmä peroksidaasiaktiivisuuden osoittamiseen ja määrittämiseen soveltuvan valmisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiiniä tai jotakin sen suolaa liuotetaan liuokseen, jonka pH on 1,5- 25 2, ja tähän liuokseen lisätään jotakin penisilliiniä tai jotakin penisilliinin happamassa hydrolyysissä saatua jakautumistuotetta konsentraatioksi 2,7 yumoolia/1 - 2,7 m-moolia/1, lopputilavuutta tarkoittaen, ja tämä liuos sekoitetaan toisen liuoksen kanssa, joka sisältää peroksidia 30 ja puskuriaineita.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, t u n - :Y: n e t t u siitä, että jos käytetään penisilliinin jakau- tumistuotteita, nämä lisätään liuokseen, joka sisältää pe- ....: roksidia ja puskuriaineita. • * .•v. 35
7. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen valmisteen käyttö analyyttisissä menetelmissä, joissa osoitetaan tai määri-: ‘ tetään peroksidaasi- tai pseudoperoksidaasiaktiivisuutta.
8 85504
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853541979 DE3541979A1 (de) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| DE3541979 | 1985-11-28 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI864815A0 FI864815A0 (fi) | 1986-11-26 |
| FI864815L FI864815L (fi) | 1987-05-29 |
| FI85504B true FI85504B (fi) | 1992-01-15 |
| FI85504C FI85504C (fi) | 1992-04-27 |
Family
ID=6287014
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI864815A FI85504C (fi) | 1985-11-28 | 1986-11-26 | Medel foer bestaemning av peroxidasaktiviteten tillsammans med en stabilisator, dess framstaellningsfoerfarande och anvaendning. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4891314A (fi) |
| EP (1) | EP0224813B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0722519B2 (fi) |
| AT (1) | ATE56991T1 (fi) |
| AU (1) | AU611629B2 (fi) |
| CA (1) | CA1291401C (fi) |
| DE (2) | DE3541979A1 (fi) |
| DK (1) | DK571186A (fi) |
| ES (1) | ES2018154B3 (fi) |
| FI (1) | FI85504C (fi) |
| GR (1) | GR3001137T3 (fi) |
| MX (1) | MX170909B (fi) |
| NO (1) | NO171417C (fi) |
| PT (1) | PT83825B (fi) |
| ZA (1) | ZA868981B (fi) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3541978A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| US4895798A (en) * | 1987-11-13 | 1990-01-23 | Miles, Inc. | Test devices for determination of occult blood |
| IE68446B1 (en) * | 1989-07-19 | 1996-06-12 | Noctech Technology Limited | A colour stable chromogen composition |
| US5225325A (en) * | 1990-03-02 | 1993-07-06 | Ventana Medical Systems, Inc. | Immunohistochemical staining method and reagents therefor |
| US5532138A (en) * | 1990-04-26 | 1996-07-02 | Behringwerke Ag | Method and kits for determining peroxidatively active catalysts |
| US5215885A (en) * | 1990-10-23 | 1993-06-01 | Beckman Instruments, Inc. | Stable two-part chromogen substrate |
| US5206150A (en) * | 1990-10-26 | 1993-04-27 | University Of Kentucky Research Foundation | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity |
| DE4037776A1 (de) * | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrisches verfahren, die einen komplexbildner fuer metallionen enthaelt und ihre verwendung |
| DE4037764A1 (de) | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrische verfahren, die stabilisatoren fuer das markierungssystem enthaelt und ihre verwendung |
| GB9027131D0 (en) * | 1990-12-14 | 1991-02-06 | Rice Evans Catherine | Diagnostic test |
| US5332662A (en) * | 1992-07-31 | 1994-07-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Methods for determining peroxidatively active substances |
| US5447868A (en) | 1993-09-14 | 1995-09-05 | Propper Manufacturing Co. Inc. | Method, reagent and kit for the detection of fecal occult blood |
| US5925532A (en) * | 1995-03-14 | 1999-07-20 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enhancing the sensitivity of immunoassay procedures by use of antibodies directed to the product of a reaction between probe labels and assay substrates |
| US5650284A (en) * | 1995-03-14 | 1997-07-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enhancing the sensitivity of immunoassay procedures by use of antibodies directed to the product of a reaction between probe labels and assay substrates |
| DE19544150C2 (de) * | 1995-11-16 | 2002-06-13 | Seramun Diagnostica Gmbh | Stabile 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin-Lösungen |
| US5804404A (en) * | 1996-01-22 | 1998-09-08 | Dako Corporation | Stable substrate-chromogen solutions for enenzyme activity detection |
| CN1114830C (zh) * | 1997-06-18 | 2003-07-16 | 金红军 | 过氧化物酶测定用显色底物组合物 |
| WO1999004261A1 (en) | 1997-07-15 | 1999-01-28 | Kem-En-Tec A/S | Pre-stained 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine substrates for the detection of enzyme activity |
| CN101354354B (zh) * | 2007-07-23 | 2010-06-23 | 深圳市生科源技术有限公司 | 一种过氧化物酶测定用显色液体系及其制备方法 |
| US9393249B2 (en) | 2008-03-26 | 2016-07-19 | Institute Of Technology Sligo | Antimicrobial composition |
| CN103712982B (zh) * | 2013-12-13 | 2016-02-03 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高灵敏度的tmb显色液及其制备方法 |
| CN103884563B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-08-17 | 上海太阳生物技术有限公司 | 过氧化物酶（pox）染色液（化学染色法） |
| CN105116141B (zh) * | 2015-07-02 | 2016-09-14 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 一种单组份tmb显色液及其制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2460903C3 (de) * | 1974-12-21 | 1981-12-24 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine |
| JPS5263794A (en) * | 1975-11-21 | 1977-05-26 | Shionogi Seiyaku Kk | Test piece for latent blood |
| US4077772A (en) * | 1977-05-31 | 1978-03-07 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method for the determination of hemoglobin in trace amounts |
| US4340394A (en) * | 1979-11-13 | 1982-07-20 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilization of benzidine-type indicators with various enhancers |
| US4503143A (en) * | 1982-08-20 | 1985-03-05 | Btc Diagnostics Limited Partnership | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen |
| US4504579A (en) * | 1982-11-08 | 1985-03-12 | Abbott Laboratories | Stabilized peroxidase compositions |
| ZA841078B (en) * | 1983-03-01 | 1984-09-26 | Warner Lambert Co | Peroxidase activity detection composition |
| EP0121137A1 (en) * | 1983-04-04 | 1984-10-10 | Combustion Engineering, Inc. | Seal welded tube sleeve |
| US4789630A (en) * | 1985-10-04 | 1988-12-06 | Cetus Corporation | Ionic compounds containing the cationic meriquinone of a benzidine |
| DE3541978A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
-
1985
- 1985-11-28 DE DE19853541979 patent/DE3541979A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-11-21 DE DE8686116138T patent/DE3674549D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 ES ES86116138T patent/ES2018154B3/es not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 AT AT86116138T patent/ATE56991T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-11-21 EP EP86116138A patent/EP0224813B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-26 US US06/935,332 patent/US4891314A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-26 FI FI864815A patent/FI85504C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 AU AU65779/86A patent/AU611629B2/en not_active Ceased
- 1986-11-27 DK DK571186A patent/DK571186A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-11-27 MX MX004450A patent/MX170909B/es unknown
- 1986-11-27 JP JP61280950A patent/JPH0722519B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-27 ZA ZA868981A patent/ZA868981B/xx unknown
- 1986-11-27 PT PT83825A patent/PT83825B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 NO NO864775A patent/NO171417C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-11-28 CA CA000524124A patent/CA1291401C/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-11-30 GR GR90400904T patent/GR3001137T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO864775D0 (no) | 1986-11-27 |
| ATE56991T1 (de) | 1990-10-15 |
| ES2018154B3 (es) | 1991-04-01 |
| DK571186A (da) | 1987-05-29 |
| MX170909B (es) | 1993-09-22 |
| US4891314A (en) | 1990-01-02 |
| EP0224813A1 (de) | 1987-06-10 |
| NO171417C (no) | 1993-03-10 |
| AU611629B2 (en) | 1991-06-20 |
| AU6577986A (en) | 1987-06-04 |
| PT83825B (pt) | 1989-06-30 |
| JPH0722519B2 (ja) | 1995-03-15 |
| DE3674549D1 (de) | 1990-10-31 |
| CA1291401C (en) | 1991-10-29 |
| FI864815A0 (fi) | 1986-11-26 |
| DK571186D0 (da) | 1986-11-27 |
| DE3541979A1 (de) | 1987-06-04 |
| ZA868981B (en) | 1987-07-29 |
| FI85504C (fi) | 1992-04-27 |
| NO171417B (no) | 1992-11-30 |
| FI864815L (fi) | 1987-05-29 |
| GR3001137T3 (en) | 1992-06-25 |
| JPS62130700A (ja) | 1987-06-12 |
| EP0224813B1 (de) | 1990-09-26 |
| PT83825A (de) | 1986-12-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI85504B (fi) | Medel foer bestaemning av peroxidasaktiviteten tillsammans med en stabilisator, dess framstaellningsfoerfarande och anvaendning. | |
| Bruss et al. | Enzymatic microdetermination of glycogen | |
| Booth et al. | The biochemistry of aromatic amines. 3. Enzymic hydroxylation by rat-liver microsomes | |
| Steiner et al. | Respiratory inhibition and hypoglycemia by biguanides and decamethylenediguanidine | |
| JPS6134799B2 (fi) | ||
| US3092464A (en) | Blood detecting composition | |
| van Den Bossche et al. | The biochemical mechanism of action of the antinematodal drug tetramisole | |
| EP0185057A1 (en) | Assay of peroxidase enzyme activity | |
| US5206150A (en) | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity | |
| EP0307975A2 (en) | Improvements relating to assay reagents | |
| US3104209A (en) | Composition for determination of glucose | |
| WO1986004610A1 (en) | Stabilized enzyme substrate solutions | |
| EP0068438B1 (de) | Mittel und Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid | |
| FI85877C (fi) | Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. | |
| US4239649A (en) | Cholesterol standard | |
| Kurfurst et al. | Bioluminescence emission from the reaction of luciferase-flavin mononucleotide radical with superoxide ion | |
| US5266472A (en) | Stabilization of the enzyme urate oxidase in liquid form | |
| US6852503B1 (en) | Compositions and methods for utilizing mixed substrate solutions of luminols and dioxetanes | |
| AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| GB2107863A (en) | Colorimetric determination of peroxides | |
| KR100209097B1 (ko) | 퍼옥시다아제의 기질인 티엠비의 안정화된 조성물 | |
| Jayaram et al. | Assay of p-aminobenzoic acid with aromatic N-haloamines | |
| KAMACHI et al. | Spectrophotometric assay for lipase in serum using a chromogenic substrate, orange I laurate | |
| JPH0630630B2 (ja) | 遊離脂肪酸の定量方法及びそれに用いる定量用試薬組成物 | |
| HU200506B (en) | Reagent to the detection of the glucose in biological samples |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |