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ES3037595T3 - Akt inhibitor - Google Patents

Akt inhibitor

Info

Publication number
ES3037595T3
ES3037595T3 ES20748221T ES20748221T ES3037595T3 ES 3037595 T3 ES3037595 T3 ES 3037595T3 ES 20748221 T ES20748221 T ES 20748221T ES 20748221 T ES20748221 T ES 20748221T ES 3037595 T3 ES3037595 T3 ES 3037595T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
formula
methyl
reaction
solution
Prior art date
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Active
Application number
ES20748221T
Other languages
English (en)
Inventor
Changyou Ma
He Tian
Jie An
Jianliang Zhao
Donghui Chen
Jian Wu
Dan Xu
Chunxia Zhu
zhoushan Tian
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES3037595T3 publication Critical patent/ES3037595T3/es
Active legal-status Critical Current
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Abstract

La presente invención describe un inhibidor de AKT y se refiere específicamente a un compuesto representado por la fórmula I o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención proporciona además un método de preparación del mismo y su uso en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad mediada por la proteína quinasa AKT. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidor de la AKT
La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente china con el número de solicitud 201910084801.3 presentada ante la Administración Nacional de Propiedad Intelectual de China el 29 de enero de 2019.
Campo de la invención
La presente invención pertenece al campo de la química medicinal, y se refiere específicamente a un inhibidor de la AKT, y a un método de preparación y uso médico del mismo.
Antecedentes de la invención
La vía PI3K/AKT/mTOR está compuesta por la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) y su proteína AKT cadena abajo (también conocida como proteína cinasa B, PKB) y la diana de rapamicina en mamíferos (mTOR), como una vía de transducción de señales muy importante en las células, desempeña una función biológica extremadamente importante en el proceso de crecimiento celular, supervivencia, proliferación, apoptosis, angiogénesis y autofagia. La activación anormal de esta vía puede causar una serie de enfermedades, incluyendo el cáncer, neuropatía, enfermedades autoinmunes y enfermedades del sistema hemático y linfático.
AKT, un tipo de serina/treonina cinasa, afecta a la supervivencia, crecimiento, metabolismo, proliferación, migración y diferenciación celular a través de numerosos efectores cadena abajo. Más del 50 % de los tumores humanos presentan una sobreactivación de AKT, especialmente cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer de vejiga, cáncer de ovario y cáncer de mama. La sobreactivación de AKT puede conducir a la tumorigénesis, la metástasis tumoral y el desarrollo de resistencia a los fármacos.
AKT tiene tres subtipos: AKT1, AKT2 y AKT3. Como una proteína cinasa típica, cada subtipo está compuesto por un dominio aminoterminal PH (dominio de homología a Pleckstrina), un dominio cinasa que une ATP en el centro, y un dominio regulador carboxi-terminal. Aproximadamente el 80 % de las secuencias de aminoácidos de los tres subtipos son homólogas, con grandes cambios solo en la región de unión del dominio PH y el dominio cinasa.
En la actualidad, los fármacos dirigidos a la vía de señalización PI3K/AKT/mTOR son principalmente inhibidores de PI3K e inhibidores de mTOR, mientras que la AKT se encuentra en el núcleo de la vía de transducción de señales. La inhibición de la actividad de la AKT no solo puede evitar los graves efectos secundarios causados por la inhibición de la PI3K cadena arriba, sino también evitar el mecanismo de retroalimentación negativa causado por la inhibición de mTOR cadena abajo, lo cual afecta a la eficacia del fármaco. Por lo tanto, la búsqueda de inhibidores eficaces y selectivos de AKT es una dirección importante de la investigación y el desarrollo actuales de fármacos dirigidos contra tumores. El documento CN101631778A divulga una clase de derivados de ciclopenta[D]pirimidina, el documento CN101578273A divulga una clase de derivados de ciclopenta[D]pirimidina hidroxilados y metoxilados, El documento CN101511842A divulga una clase de derivados de dihidrofuro pirimidina, y el documento CN101970415A divulga una clase de derivados de 5H-ciclopenta[d]pirimidina. Estos compuestos tienen una CI50 de inhibición de AKT1 inferior a 10|jM.
Sumario de la invención
La invención se expone en el conjunto de reivindicaciones adjuntas. Los métodos de tratamiento divulgados en la presente divulgación no forman parte de la presente invención.
En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde
R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H y alquilo C1-C6;
R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 y cicloalquilo
C3-C6; o
R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y R2, forman un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que contiene nitrógeno;
m es 1 o 2; preferentemente, m es 1; n es 0;
R4 y R5 son ambos hidrógeno o R4 y R5 forman =O juntos;
se selecciona entre el grupo que consiste en
R6, R7, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H y alquilo C1-C6, donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno;
R10 es H o alquilo C1-C6, donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno, OH o CN;
L es un anillo heterocíclico saturado de 5-12 miembros que contiene 1-2 átomos de nitrógeno;
G es un arilo de 6-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-5 R11;
R11 es halógeno;
con la condición de que ni R1 ni R2 son H si R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que contiene nitrógeno.
En algunas realizaciones, R1 es H.
En algunas realizaciones más preferidas, R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, isopropilo y ciclopropilo.
En algunas realizaciones, R2 es isopropilo o ciclopropilo; y/o R3 es H.
En algunas realizaciones preferidas, R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y R 2, forman
donde, la definición de R3 es como la anterior.
En algunas realizaciones, R4 y R5 son ambos H.
En algunas realizaciones, R4y R5 forman =O juntos.
En algunas realizaciones,
se selecciona entre el grupo que consiste en
y
En algunas realizaciones,
es
y R4 y R5 forman =O juntos.
En algunas realizaciones,
es
y R4 y R5 forman =O juntos.
En algunas realizaciones,
es
y R4 y R5 forman =O juntos.
En algunas realizaciones, R<6>, R<7>, R<8>y R<9>se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, metilo y CF3.
En algunas realizaciones, R<6>se selecciona del grupo que consiste en H, CF3 y metilo; en algunas realizaciones más preferidas, R<6>es metilo o CF3.
En algunas realizaciones, R<7>es H.
En algunas realizaciones, R<8>es H o metilo; en algunas realizaciones más preferidas, R<8>es H.
En algunas realizaciones, R<9>es H.
En algunas realizaciones, R<10>se selecciona del grupo que consiste en H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, CF3, CH2CF3, CH2CHF2, CH2CH2F, CH2CN, CH2CH2CN, CH2OH y CH2CH2OH; en algunas realizaciones más preferidas, R<10>se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, CH2CN y CH2CH2OH; en algunas realizaciones más preferidas, R<10>es metilo.
En algunas realizaciones, L se selecciona del grupo que consiste en el siguiente grupo opcionalmente sustituido con uno o más R12:
donde
una línea ondulada simple es una posición en la que L está conectado al carbonilo, y una línea ondulada doble es una posición en la que L está conectado a pirimidina;
R12 es alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones más preferidas, L se selecciona del grupo que consiste en
En algunas realizaciones, G es fenilo opcionalmente sustituido con 1-5 R11.
En algunas realizaciones, R11 se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en F, Cl, Br e I; en algunas realizaciones más preferidas, R11 es Cl.
En algunas realizaciones, G es 4-clorofenilo.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula II o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R1, R2, R4, R5, G, L, m y
tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula III o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R4, R5, G, L, y
tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula IV o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, G, L, y
tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula V o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R6, R8, G y L tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula VI o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R6, R8, R11 y L tienen la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula I, y d es 0, 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, d es 0, 1, 2 o 5; en algunas realizaciones preferidas, d es 0, 1 o 2; en algunas realizaciones más preferidas, d es 1 o 2; en algunas realizaciones más preferidas, d es 1.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula VII o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R6, R8, R11 y L tienen la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula I, y d tiene la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula V<i>.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula VIII o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R8, R10, G y L tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula IX o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R8, R10, R11 y L tienen la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula I, y d tiene la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula VI.
En otro aspecto, la presente invención proporciona también un compuesto representado por la Fórmula X o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R1, R2, R3, G, L, m, n y
tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona también un compuesto representado por la fórmula XI o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R6, G y L tienen las mismas definiciones que en el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente invención proporciona también un compuesto representado por la fórmula XII o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
donde, R2, R6, R11 y L tienen la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula I, y d tiene la misma definición que en el compuesto representado por la fórmula VI.
En otro aspecto, la presente invención proporciona los siguientes compuestos o sales farmacéuticamente aceptables del mismo:
cis-(SR)-4-(5-((S)-2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona, o bien
trans-(5R)-4-(5-((S)-2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona.
En otro aspecto, la presente invención proporciona los siguientes compuestos:
En otro aspecto, la presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI o XII o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
En algunas realizaciones, la presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, X<i>o XII o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
La composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse mediante cualquier vía o método adecuado, por ejemplo, por administración oral o parenteral (por ejemplo, intravenosa). La cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, iX, X, XI o XII es de aproximadamente 0,001 a 20 mg/Kg de peso corporal/día, preferentemente de 0,01 a 10 mg/Kg de peso corporal/día.
Para la administración oral, la composición farmacéutica de la presente invención se proporciona normalmente en forma de comprimido, cápsula o solución. El comprimido puede contener el compuesto de la presente invención o sales farmacéuticamente aceptables del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable. El portador incluye, pero sin limitación, diluyentes, disgregantes, aglutinantes, lubricantes, colorantes o conservantes. La cápsula incluye una cápsula dura y una cápsula blanda.
Para administración parenteral, la composición farmacéutica de la presente invención se puede administrar mediante inyección intravenosa, inyección intramuscular o inyección subcutánea. Normalmente, se proporciona en forma de solución o suspensión acuosa estéril o polvo liofilizado, y se ajusta a un pH e isotonicidad adecuados.
En otro aspecto, la presente invención proporciona también el uso del compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI o XII en la fabricación de un medicamento para prevenir y/o tratar una enfermedad o afección mediada por la proteína cinasa AKT.
En otro aspecto, la presente invención también proporciona un método para prevenir y/o tratar una enfermedad o afección mediada por la proteína cinasa AKT, que comprende administrar el compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI o XII de la presente invención o la composición farmacéutica de la presente invención a un sujeto que lo necesite.
En otro aspecto, la presente invención proporciona también el compuesto de fórmula I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI o XII de la presente invención o la composición farmacéutica de la presente invención para su uso en la prevención y/o tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la proteína cinasa AKT.
Los ejemplos de enfermedades o afecciones mediadas por la proteína cinasa AKT incluyen, pero no se limitan a, cáncer de mama, cáncer de próstata o cáncer de ovario.
El compuesto de la presente invención tiene un efecto inhibidor sobre AKT1, AKT2 y AKT3, especialmente tiene un efecto inhibidor significativo sobre AKT3, tiene un importante efecto inhibidor de la proliferación en las células cancerosas, tiene una buena absorción farmacocinética y un efecto de absorción oral significativamente mejor. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar un compuesto representado por la fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, donde el compuesto representado por la fórmula I es un compuesto de fórmula 12-3, que comprende:
preparar un compuesto de fórmula 1-2 a partir de un compuesto de fórmula 1-1 en presencia de una base, tal como metóxido de sodio, y un disolvente, tal como metanol;
hacer reaccionar el compuesto de fórmula 1-2 con acetato de formamidina para preparar un compuesto de fórmula 1-3 en presencia de una base, tal como metóxido de sodio, y un disolvente, tal como metanol;
preparar un compuesto de fórmula 1-4 a partir del compuesto de fórmula 1-3 en presencia de una base, tal como diisopropiletilamina, y un disolvente, tal como acetonitrilo;
hacer reaccionar aún más el compuesto de fórmula 1-4 para producir un compuesto de fórmula 1-5; preparar un compuesto de fórmula 12-1 haciendo reaccionar el compuesto de fórmula 1-5 con un compuesto de fórmula 11-1;
eliminar un grupo protector del compuesto de fórmula 12-1 para preparar un compuesto de fórmula 12-2; y hacer reaccionar el compuesto de fórmula 12-2 con un compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 12-3,
donde, R2 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 y cicloalquilo C3-C6;
R6 y R8 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H y alquilo C1-C6, donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno;
h es 1;
j es 0;
k es 1;
G es un arilo de 6-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-5 R11;
R11 es halógeno;
P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido,
cuando P1 es un grupo protector amido, el método comprende además una etapa de eliminación del grupo protector amido.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula V, incluyendo, pero sin limitación, los siguientes esquemas sintéticos:
Esquema de síntesis 1:
donde, R2, R6, R8, G, h, y j son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
En presencia de una base (tal como metóxido de sodio) y un disolvente (tal como metanol), el compuesto de fórmula 1-2 se prepara a partir del compuesto de fórmula 1-1; en presencia de una base (tal como metóxido de sodio) y un disolvente (tal como metanol), el compuesto de fórmula 1-2 se hace reaccionar con acetato de formamidina para preparar el compuesto de fórmula 1-3; en presencia de una base (tal como diisopropiletilamina) y un disolvente (tal como acetonitrilo), el compuesto de fórmula 1-4 se prepara a partir del compuesto de fórmula 1-3; el compuesto de fórmula 1-4 se hace reaccionar además para producir el compuesto de fórmula 1-5; el compuesto de fórmula 1-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-6 para preparar el compuesto de fórmula 1-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 1-7 para preparar el compuesto de fórmula 1-8; el compuesto de fórmula 1-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 1-10. Cuando P1 es un grupo protector amino, el esquema de síntesis 1 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector amino.
Esquema de síntesis 2:
donde, R2, R6, R8, G, q, v, s, t y p son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 1-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 1; el compuesto de fórmula 1-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 2-6 para preparar el compuesto de fórmula 2-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 2-7 para preparar el compuesto de fórmula 2-8; el compuesto de fórmula 2-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 2-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 2 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector amido.
Esquema de síntesis 3:
donde, R2, R6, R8, G, h, j y k son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 1-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 1; el compuesto de fórmula 1-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 3-6 para preparar el compuesto de fórmula 3-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 3-7 para preparar el compuesto de fórmula 3-8; el compuesto de fórmula 3-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 3-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 3 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector amido.
Esquema de síntesis 4:
donde, R2, R6, R8, e y u son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 1-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 1; el compuesto de fórmula 1-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 4-6 para preparar el compuesto de fórmula 4-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 4-7 para preparar el compuesto de fórmula 4-8; el compuesto de fórmula 4-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 4-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 4 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector amido.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula VIII, incluyendo, pero sin limitación, los siguientes esquemas sintéticos:
Esquema de síntesis 5:
donde, R2, R10, R8, G, h, y j son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
En presencia de una base (tal como hidruro de sodio) y un disolvente (tal como tetrahidrofurano), el compuesto de fórmula 5-2 se prepara a partir del compuesto de fórmula 5-1; en presencia de una base (tal como trietilamina) y un disolvente (tal como isopropanol), el compuesto de fórmula 5-2 se hace reaccionar con NH2P2 para preparar el compuesto de fórmula 5-3; en presencia de una base (tal como hidruro de sodio) y un disolvente (tal como DMF), el compuesto de fórmula 5-4 se prepara a partir del compuesto de fórmula 5-3; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 5-4 para preparar el compuesto de fórmula 5-5; el compuesto de fórmula 5-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-6 para preparar el compuesto de fórmula 5-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 5-7 para preparar el compuesto de fórmula 5-8; el compuesto de fórmula 5-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 5-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema sintético 5 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 6:
donde, R2, R10, R8, G, q, s, v, t y p son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 5-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 5; el compuesto de fórmula 5-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 2-6 para preparar el compuesto de fórmula 6-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 6-7 para preparar el compuesto de fórmula 6-8; el compuesto de fórmula 6-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 6-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 6 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 7:
donde, R2, R10, R8, G, h, j y k son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 5-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 5; el compuesto de fórmula 5-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 3-6 para preparar el compuesto de fórmula 7-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 7-7 para preparar el compuesto de fórmula 7-8; el compuesto de fórmula 7-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 7-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 7 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 8:
donde, R2, R10, R8, G, e y u son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 5-5 se prepara de acuerdo con el esquema de síntesis 5; el compuesto de fórmula 5-5 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 4-6 para preparar el compuesto de fórmula 8-7; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 8-7 para preparar el compuesto de fórmula 8-8; el compuesto de fórmula 8-8 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 8-10. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 8 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 9:
donde, X es halógeno, R6, h, j y G son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 9-2 se prepara a partir del compuesto de fórmula 9-1; el compuesto de fórmula 9-2 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-6 para preparar el compuesto de fórmula 9-3; el compuesto de fórmula 9-3 se reduce para producir el compuesto de fórmula 9-4; el compuesto de fórmula 9-4 se somete a una reacción de formación de anillo para preparar el compuesto de fórmula 9-5; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 9-5 para producir el compuesto de fórmula 9-6 o sales del mismo, que se hace reaccionar además con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 9-7. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 9 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 10:
donde, X es halógeno, R6, q, v, s, t, p y G son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 9-2 se prepara a partir del compuesto de fórmula 9-1; el compuesto de fórmula 9-2 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 2-6 para preparar el compuesto de fórmula 10-3; el compuesto de fórmula 10-3 se reduce para producir el compuesto de fórmula 10-4; el compuesto de fórmula 10-4 se somete a una reacción de formación de anillo para preparar el compuesto de fórmula 10-5; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 10-5 para producir el compuesto de fórmula 10-6 o sales del mismo, que se hace reaccionar además con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 10-7. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 10 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 11:
donde, X es halógeno, R6, h, k, j y G son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 9-2 se prepara a partir del compuesto de fórmula 9-1; el compuesto de fórmula 9-2 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 11-1 para preparar el compuesto de fórmula 11-2; el compuesto de fórmula 11-2 se reduce para producir el compuesto de fórmula 11-3; el compuesto de fórmula 11-3 se somete a una reacción de formación de anillo para preparar el compuesto de fórmula 11-4; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 11-4 para producir el compuesto de fórmula 11-5 o sales del mismo, que se hace reaccionar además con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 11-6. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 11 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Esquema de síntesis 12:
donde, R6, R8, h, k, j y G son como se han definido anteriormente, P1 es H o un grupo protector amido, y P2 es un grupo protector amido.
El compuesto de fórmula 12-1 se prepara haciendo reaccionar el compuesto de fórmula 1-5 con el compuesto de fórmula 11-1; se elimina el grupo protector del compuesto de fórmula 12-1 para preparar el compuesto de fórmula 12 2; el compuesto de fórmula 12-2 se hace reaccionar con el compuesto de fórmula 1-9 para preparar el compuesto de fórmula 12-3. Cuando P1 es un grupo protector amido, el esquema de síntesis 12 incluye además una etapa de eliminación del grupo protector.
Los expertos en la materia podrían entender que cuando L está sustituido con R12, el compuesto de la presente invención puede prepararse siguiendo los esquemas de síntesis anteriormente mencionados.
Descripción de los dibujos
La Fig. 1 es un diagrama esquemático de una sola molécula del Isómero 2 del Ejemplo 15.
La Fig. 2 es un diagrama esquemático de una unidad estructural asimétrica de un monocristal del Isómero 2 del Ejemplo 15.
La Fig. 3 es un diagrama esquemático de una sola molécula del Isómero 1 del Ejemplo 34.
La Fig. 4 es un diagrama esquemático de una unidad estructural asimétrica de un monocristal del Isómero 1 del Ejemplo 34.
La Fig. 5 es un diagrama esquemático de una sola molécula del Isómero 3 del Ejemplo 34.
La Fig. 6 es un diagrama esquemático de una unidad estructural asimétrica de un monocristal del Isómero 3 del Ejemplo 34.
Descripción detallada de la invención
Definición
Salvo que se indique lo contrario, los siguientes términos usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los siguientes significados:
El término "compuesto", tal como se utiliza en el presente documento, incluye todos los estereoisómeros y tautómeros del mismo.
Los compuestos de la invención pueden ser asimétricos, por ejemplo, tener uno o más estereoisómeros. Salvo que se indique lo contrario, todos los estereoisómeros incluyen, por ejemplo, enantiómeros y diaestereoisómeros. Los compuestos que contienen átomos de carbono asimétricos de la presente invención pueden separarse en una forma pura ópticamente activa o en una forma racémica. Los compuestos en la forma pura ópticamente activa pueden resolverse a partir de la mezcla racémica de los mismos, o sintetizarse utilizando materias primas quirales o reactivos quirales. Los racematos, diastereoisómeros y enantiómeros están todos incluidos en el alcance de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención también incluyen tautómeros de los mismos. Los tautómeros se derivan del intercambio de un enlace sencillo con un doble enlace adyacente, que se acompañan de la transferencia de un protón conjuntamente.
El término "opcional" u "opcionalmente" significa que el acontecimiento o la situación descritos más adelante pueden producirse o no, y la descripción incluye la aparición del acontecimiento o la situación y la no aparición del acontecimiento o la situación.
El intervalo numérico como se usa en el presente documento se refiere a cada número entero en el intervalo dado. Por ejemplo, "C-i-Ca" significa que el grupo puede tener 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono o 6 átomos de carbono; "C3-C6" significa que el grupo puede tener 3 átomos de carbono, 4 átomos de carbono, 5 átomos de carbono o 6 átomos de carbono.
El término "sustituido" significa que uno cualquiera o más átomos de hidrógeno sobre un átomo o grupo específico están reemplazados por sustituyentes, siempre que la valencia del átomo o grupo específico sea normal y el compuesto sustituido sea estable. Cuando el sustituyente es un grupo ceto (es decir, =O), esto significa que dos átomos de hidrógeno están reemplazados. Salvo que se indique lo contrario, el tipo y el número de sustituyentes pueden ser arbitrarios siempre que sean químicamente realizables.
Cuando cualquier variable (tal como R) aparece más de una vez en la composición o estructura de un compuesto, su definición en cada caso es independiente. Por tanto, por ejemplo, en caso de que un grupo esté sustituido con 1-5 R, el grupo puede sustituirse opcionalmente con hasta 5 R y R tiene opciones independientes en cada caso. Además, solo se permiten combinaciones de sustituyentes y/o variantes de los mismos si se forman compuestos estables con dichas combinaciones.
El término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado, incluyendo grupos hidrocarburos saturados lineales o ramificados que tengan el número indicado de átomos de carbono. Por ejemplo, la expresión "alquilo C1-C6" incluye alquilo C1, alquilo C2, alquilo C3, alquilo C4, alquilo C5 y alquilo Ca, los ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, ferc-butilo, n-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, n-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, etc. Puede ser un grupo divalente, tal como metileno y etileno.
El término "alcoxi" se refiere a un grupo que tiene una estructura alquilo-O-, donde el alquilo incluye un grupo hidrocarburo monovalente saturado lineal o ramificado. Por ejemplo, "alcoxi C1-C3" incluye metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi.
El término "alcanoílo" se refiere a un grupo que tiene una estructura RC(=O)-, donde R es H o un grupo hidrocarburo alifático saturado, incluyendo los grupos hidrocarburos monovalentes saturados lineales o ramificados. Por ejemplo, "alcanoílo C1-C4" incluye alcanoílo C1 , alcanoílo C2, alcanoílo C3 y alcanoílo C4. Los alcanoílos adecuados incluyen formilo, acetilo, n-propionilo, isopropionilo, n-butirilo, isobutirilo y ferc-butirilo.
El término "halogenado" se refiere a estar sustituido con uno o más átomos de halógeno, y los ejemplos de átomos de halógeno incluyen los átomos de flúor, átomos de cloro, átomos de bromo y átomos de yodo. Por ejemplo, la expresión "alcoxi C1-C3 halogenado" se refiere a un alcoxi C1-C3 sustituido con uno o más átomos de halógeno, y ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, OCF3, OCHF2, OCH2F, OCH2CF3, OCH2CHF2 u OCF2CF3. Por ejemplo, la expresión "alquilo C1-C3 halogenado" se refiere a un alquilo C1-C3 sustituido con uno o más átomos de halógeno, y los ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, CF3, CHF2, CH2F, CH2CF3, CH2CHF2 u CF2CF3.
El término "cicloalquilo" se refiere a un sistema monocíclico de hidrocarburos saturados sin heteroátomos ni dobles enlaces. Los ejemplos del término "cicloalquilo C3-C6" incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
El término "arilo" se refiere a un grupo de anillos aromáticos monocíclicos o policíclicos fusionados completamente de carbono que tiene un sistema de electrones n conjugados, que se obtiene eliminando un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono del sistema de anillos aromáticos de origen. Por ejemplo, un arilo puede tener 6-20 átomos de carbono, 6-14 átomos de carbono o 6-10 átomos de carbono. También están implicados los grupos bicíclicos que contienen anillos aromáticos fusionados con anillos saturados, parcialmente insaturados o anillos carbocíclicos aromáticos. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, antrilo, indeno, indano, 1,2-dihidronaftaleno, 1,2,3,4-tetrahidronaftaleno.
El término "heteroarilo" se refiere a un arilo monovalente que contiene al menos un anillo de 5, 6 y 7 miembros con heteroátomos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre, e incluye un sistema de anillos fusionados con 5-10 átomos (al menos uno de los anillos es aromático). Los ejemplos de heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridilo, tienilo, imidazolilo, pirimidinilo, piridilo, furilo, pirazinilo, tiazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, benzimidazolilo, imidazopiridilo, benzofuranilo, piridazinilo, isoindolilo.
El término "miembros" se refiere al número de átomos de la cadena principal que constituyen el anillo. Por ejemplo, "de 5-10 miembros" significa que el número de átomos de la cadena principal que constituyen el anillo es 5, 6, 7, 8, 9 o 10. Por lo tanto, por ejemplo, piridina, piperidina, piperazina y benceno son anillos de 6 miembros, mientras que el tiofeno y el pirrol son anillos de 5 miembros.
La expresión "anillo heterocíclico" se refiere a un sistema no aromático saturado de 5-12 miembros que tiene átomos de carbono en el anillo y de 1 a 2 heteroátomos en el anillo, donde los heteroátomos se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en átomos de nitrógeno, azufre y oxígeno. En los grupos heterocíclicos que contienen uno o más átomos de nitrógeno, el punto de unión puede ser un átomo de carbono o nitrógeno, siempre que la valencia sea admisible. El anillo heterocíclico puede ser un sistema de anillos monocíclicos o policíclicos, tal como un anillo bicíclico, en el que dos o más anillos existen en forma de anillo fusionado, un anillo con puente o un espiroanillo, y al menos un anillo contiene uno o más heteroátomos.
El sustituyente R12 puede unirse a cualquier átomo de un anillo, siempre que la valencia sea admisible. Solo se permiten combinaciones de sustituyentes y/o variantes de los mismos si se forman compuestos estables con dichas combinaciones. Los expertos en la materia pueden entender que, para cualquier grupo que contiene uno o más sustituyentes R12, no se introducirá ninguna sustitución o patrón de sustitución que sea imposible que exista en el espacio y/o que no pueda sintetizarse.
Una sola línea ondulada
y doble línea ondulada
ambas se refieren a una posición a la que está conectado un enlace químico y ambas tienen el mismo significado químico. Salvo que se indique lo contrario, la diferencia entre
es solo la posición o secuencia de conexión.
La expresión "grupo protector amido" se refiere a un grupo protector adecuado para prevenir reacciones laterales en la posición de nitrógeno del amido. Los ejemplos de grupos amino protectores incluyen, pero no se limitan a: Boc, DMB, benciloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo, bencilo, formilo y acetilo.
La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales que conservan la eficacia biológica del ácido y la base libres de un compuesto específico sin efectos biológicos adversos, tales como sales de adición de ácidos (incluyendo ácidos orgánicos y ácidos inorgánicos) o sales de adición de bases (incluyendo bases orgánicas y bases inorgánicas).
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir de los compuestos precursores que contienen grupos ácidos o básicos mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se preparan haciendo reaccionar estos compuestos en forma de ácido libre o base con una cantidad estequiométricamente apropiada de base o ácido en agua o un disolvente orgánico o una mezcla de ambos.
La expresión "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente de un fármaco o medicamento que no es tóxica pero que puede lograr el efecto deseado.
La expresión "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos portadores que no tienen un efecto estimulante obvio en el organismo y no perjudican la actividad biológica y el rendimiento de los compuestos activos, incluyendo, pero sin limitación, cualquier diluyente, disgregantes, adhesivos, deslizante y agentes humectantes aprobados por la Administración de Medicamentos y Alimentos de Estados Unidos que pueden usarse para seres humanos y animales.
Las abreviaturas utilizadas en las reivindicaciones y la especificación y sus significados son los siguientes:
M: mol/l
mM: mmol/l
nM: nmol/l
Boc: ferc-butoxicarbonilo
DMB: 2,4-dimetoxibencilo
NMP: N-metilpirrolidona
DMAP: p-dimetilaminopiridina
DMF: N, N-dimetilformamida
DEA: dietilamina
PE: éter de petróleo
EA: acetato de etilo
HATU: (hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea)
TR: tiempo de retención
CFS: Cromatografía de fluidos supercríticos
h: hora
min: minuto
TK: Tirosina cinasa
SEB: potenciador de la señal de fluorescencia
HTRF: fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo
DTT: ditiotreitol
NR: no calculado
Método de preparación:
Los métodos de preparación de los compuestos de la presente invención se describen con más detalle a continuación, pero el alcance de la presente invención no se limita por estos métodos de preparación específicos. Además, las condiciones de reacción, como los reactivos, disolventes, bases, cantidades de compuestos utilizados, temperatura de reacción, tiempo de reacción, etc. no se limitan a los siguientes ejemplos.
Los compuestos de la presente invención también pueden prepararse convenientemente combinando varios métodos sintéticos descritos en esta memoria descriptiva o conocidos en la técnica, y dicha combinación puede realizarse fácilmente por un experto en la materia.
Proceso A:
Condiciones de reacción: a) crotonato de etilo, solución metanólica de metóxido de sodio (30 % en peso), metanol; b) acetato de formamidina, solución metanólica de metóxido de sodio (30 % en peso); c) oxicloruro de fósforo, diisopropiletilamina, acetonitrilo; d) amoníaco (25-28 % en peso); e) terc-butilpiperazin-1-carboxilato; (f) ácido trifluoroacético, diclorometano; g) ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina, diclorometano.
Ejemplo 1
4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
a) 2-metilpropan-1,1,3-tricarboxilato de trimetilo
Bajo protección con nitrógeno, se añadió una solución de metóxido sódico (30 % en peso) (8,16 g) a metanol (400 ml) a 20 °C. A continuación, la solución resultante se calentó a 70 °C, malonato de dimetilo (24,64 g) y crotonato de etilo (21,08 g) se mezclaron uniformemente, y a continuación se añadieron gota a gota a la solución de metóxido de sodio en metanol, y se hicieron reaccionar a 70 °C durante 3 horas. Después de que se completase la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida, se añadió acetato de etilo (100 ml) y el pH se ajustó a 7 con ácido clorhídrico 4 M, y a continuación se añadieron 100 ml de agua. La fase orgánica se separó y se concentró para obtener 45,48 g de líquido amarillo, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 2,26 (c, J = 12,0 Hz, 2H), 2,52-2,58 (m, 1H), 3,56 (d,J =6,8 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,67 (s, 3H).
b) 3-(4,6-dihidroxipirimidin-5-il)butirato de metilo
Bajo protección del nitrógeno, se añadió una solución de metóxido de sodio (30 % en peso) (97,55 g) a metanol (400 ml) a 20 °C. A continuación, la solución resultante se enfrió a -15 °C y se añadió acetato de formamidina (22,98 g). El sistema de reacción resultante se hizo reaccionar durante 30 min. Posteriormente, se añadió gota a gota 2-metilpropan-1,1,3-tricarboxilato de trimetilo (45,72 g), se elevó lentamente la temperatura a 20 °C y la reacción continuó durante 12 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, y se añadió ácido clorhídrico 4 M para ajustar el pH=2. El disolvente se evaporó a presión reducida, y a continuación se añadieron 100 ml de agua a 0 °C para obtener un precipitado sólido. Se recogió el sólido mediante filtración por aspiración. La torta de filtración se lavó con agua (50 ml) y se secó al vacío para obtener 29,60 g de sólido amarillo, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe)5(ppm) 11,62 (s, 2H), 7,86 (s, 1H), 3,53 (s, 3H), 3,34-3,42 (m, 1H), 2,58-2,70 (m, 2H), 1,11 (d,J= 6,8Hz, 3H).
c) 3-(4,6-dicloropirimidin-5-il)butirato de metilo
Bajo protección con nitrógeno, se dispersó 3-(4,6-dihidroxipirimidin-5-il)butirato de metilo (9,1 g) en acetonitrilo (100 ml) a 22 °C, y se añadieron gota a gota oxicloruro de fósforo (16,03 g) y diisopropiletilamina (7,79 g). El sistema de reacción fue obviamente exotérmico, y el sólido se disolvió y clarificó gradualmente, a continuación, se elevó la temperatura a 60 °C y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 18 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se vertió en 200 ml de agua helada, se ajustó a pH = 7-8 con solución saturada de bicarbonato sódico, se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). Las fases orgánicas se combinaron, y el disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo=4:1, relación en volumen) para obtener 8,36 g de líquido marrón.
d) 4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se añadieron 3-(4,6-dicloropirimidin-5-il)butirato de metilo (4,12 g) y amoníaco (25-28% en peso, 25 ml) en un autoclave de 100 ml a 20 °C, y el sistema de reacción se calentó a 60 °C y se hizo reaccionar durante 18 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se filtró con aspiración y la torta de filtración se disolvió con 30 ml (éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1, relación en volumen) para obtener 1,51 g de un sólido amarillo pálido. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 (ppm) 1,09-1,12 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 2,36-2,49 (m, 1H), 2,92 3,00 (m, 1H), 3,27-3,36 (m, 1H), 8,54 (s, 1H).
e) 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se calentaron directamente a 140 °C 4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,42 g) y tere-butilpiperazin-1-carboxilato (10,76 g) y se agitó durante 6 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se vertió en 30 ml de agua helada, se ajustó a pH = 7 con ácido clorhídrico 4 M y se extrajo con diclorometano (20 ml * 2). El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano: metanol =30:1, relación en volumen) para obtener 0,67 g de un sólido amarillo pálido. LC-MS (ESI) m/z: 348, (M+H).
RMN 1H (300 MHz, CDCla)5(ppm) 8,47 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 3,24-3,61 (m, 9H), 2,56-2,83 (m, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,23 1,26 (d,J= 6,9 Hz, 3H).
f) 5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (0,67 g) se disolvió en diclorometano (10 ml) a 25 °C, y se añadió ácido trifluoroacético (1,31 g), y el sistema de reacción se hizo reaccionar durante 16 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se enfrió a 0 °C, se ajustó a pH = 12 con una solución de hidróxido de sodio al 20 %, se extrajo con diclorometano (20 ml * 6). Las fases orgánicas se combinaron y evaporaron a presión reducida para retirar el disolvente, y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano: metanol=20:1, relación en volumen) para obtener 0,39 g de un sólido amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
g) 4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron 5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,10 g) y ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico (0,107g) en diclorometano (5 ml) a 20 °C, y después se añadieron por separado hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,184g) y diisopropiletilamina (0,078g), y el sistema de reacción se hizo reaccionar a 25 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, a la solución de reacción se le añadieron 10 ml de agua. La fase orgánica se separó y se lavó con solución saturada de cloruro sódico (2 ml). Después de evaporar el disolvente a presión reducida, el residuo se separó mediante cromatografía en columna (diclorometano: metanol = 25:1, relación en volumen) para obtener 0,12 g de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+H).
RMN 1H (300 MHz, CDCh)5(ppm) 1,06-1,28 (m, 6H), 1,30-1,38 (m, 3H), 2,57 (d,J= 15,0 Hz, 1H), 2,70-2,78 (m, 4H), 2,80-3,25 (m, 2H), 3,28-3,69 (m, 7H), 3,86-4,09 (m, 2H), 7,22-7,36 (m, 4H), 8,38 (s, 1H), 8,61 (s, 1H).
Ejemplo 2:
(S)-4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5, 8-dihidropirido[2,3, d]pirimidin-7(6H)-ona y (R)-4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5, 8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona.
y
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron 5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,49 g) y ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico (0,53 g) en N,N-dimetilformamida (20 ml) a 20 °C, y a continuación se añadieron por separado hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (1,50 g) y diisopropiletilamina (0,51 g), y el sistema de reacción se hizo reaccionar a 25 °C durante 4 horas. Después de completarse la reacción, a la solución de reacción se le añadieron 100 ml de agua. La fase orgánica se separó y se lavó con solución saturada de cloruro sódico (40 ml). Después de evaporar el disolvente a presión reducida, el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano: metanol = 25:1, relación en volumen) para obtener 0,59 g de un sólido blanco. Después de la resolución quiral, se obtuvieron 0,21 g (de% = 100 %) de producto de configuración (S) y 0,19 g (de% = 99 %) de producto de configuración (R).
Instrumento de resolución: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OD, 250 * 30 mm ID, 5 pm; fase móvil A: CO2, fase móvil B: isopropanol (que contiene NH3 H2O al 0,1 %), A: B = 70:30 (relación de volumen).
(S) producto de configuración: LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+H) RMN<1>H (300 MHz, DMSO-d<6>) 5 (ppm) 0,93-0,96 (m, 6H), 1,30 (d, J = 3,0 Hz, 3H), 2,23-2,36 (m, 1H), 2,61-2,84 (m, 4H), 3,12-3,31 (m, 5H), 3,35-3,49 (m, 2H), 3,65-3,78 (m, 3H), 4,21-4,29 (m, 1H), 7,33 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 10,66 (s, 1H); (R) producto de configuración: LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+1) RMN<1>H (300 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 0,95-1,03 (m, 9H), 2,26-2,30 (m, 1H), 2,66-2,79 (m, 1H), 2,82-2,96 (m, 3H), 3,11-3,20 (m, 4H), 3,34-3,47 (m, 3H), 3,62-3,69 (m, 3H), 4,18-4,22 (m, 1H), 7,34 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 6,6Hz, 2H), 8,28 (s, 1H), 10,62 (s, 1H).
Proceso B:
Condiciones de reacción: a) acrilato de metilo, solución metanólica de metóxido de sodio (30%en peso), metanol; b) acetato de formamidina, metóxido de sodio, metanol; c) oxicloruro de fósforo, diisopropiletilamina, acetonitrilo; d) amoníaco (25-28 % en peso); e) terc-butilpiperazin-1-carboxilato; (f) ácido trifluoroacético, diclorometano; g) ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina, diclorometano.
Ejemplo 3
(S)-4-(4-(2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación fue de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 1, donde se utilizó acrilato de metilo en lugar de crotonato de etilo.
LC-MS (ESI) m/z: 457 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 0,92-0,96 (m, 6H), 2,42-2,49 (m, 2H), 2,62-2,78 (m, 5H), 3,08-3,29 (m, 4H), 3,38-3,43 (m, 2H), 3,57-3,65 (m, 3H), 4,21-4,29 (m, 1H), 7,31-7,34 (m, 2H), 7,38-7,40 (m, 2H), 8,27 (s, 1H), 10,53 (s, 1H).
Ejemplo 4
4-((R)-4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2-metilpiperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 3, donde se utilizó (R)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo en lugar de terc-butilpiperazin-1-carboxilato.
LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe)5(ppm) 0,75-0,95 (m, 9H), 240-249 (m, 3H), 2,51-2,61 (m, 4H), 2,85-3,36 (m, 5H), 3,62-3,76 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 1H), 4,14-4,19 (m, 2H), 7,29-7,42 (m, 4H), 8,26 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 10,54 (s, 1H).
Ejemplo 5
4-((S)-4-((S)-2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2-metilpiperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 3, donde se utilizó (S)-3-metilpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato.
LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+H) RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe )5(ppm) 1,10-1,33 (m, 9H), 2,42-2,49 (m, 2H), 2,67-2,76 (m, 4H), 2,84-3,05 (m, 4H), 3,51-3,58 (m, 3H), 3,91-4,19 (m, 2H), 4,28-4,54 (m, 1H), 7,32-7,45 (m, 4H), 8,27 (s, 1H), 10,53 (s, 1H).
Proceso C:
Condiciones de reacción: a) crotonato de etilo, solución metanólica de metóxido de sodio (30 % en peso), metanol; b) hidrogenofosfato de disodio, agua desionizada, ácido clorhídrico, lipasa(Candida rugosa),hidróxido sódico; c) acetato de formamidina, metóxido de sodio, metanol; d) oxicloruro de fósforo, diisopropiletilamina, acetonitrilo; e) amoníaco (25-28 % en peso).
Intermedio(R)-4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
a) 2-metilpropan-1,1,3-tricarboxilato de trimetilo
Bajo protección con nitrógeno, se añadió una solución de metóxido de sodio (30 % en peso, 50,32 g) a metanol (900 ml) a 20 °C. A continuación, la solución resultante se calentó a 70 °C. Malonato de dimetilo (461,12 g) y crotonato de etilo (349,46 g) se mezclaron uniformemente, y a continuación se añadieron gota a gota a la solución de metóxido de sodio en metanol, y se hicieron reaccionar a 70 °C durante 3 horas. Después de que se completase la reacción, se evaporó el disolvente a presión reducida, se añadió acetato de etilo (1 L) y se ajustó el pH a 7-8 con ácido clorhídrico 4 M, y a continuación se añadieron 500 ml de agua. La fase orgánica se separó y se concentró para obtener 777,68 g de líquido amarillo.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 3,67 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,56 (d,J =6,8 Hz, 1H), 2,45-2,58 (m, 2H), 2,23-2,29 (m, 1H), 0,93 (d,J= 6,8 Hz, 3H).
b) (R)-2-metilpropan-1,1,3- tricarboxilato de trimetilo
Se disolvió hidrogenofosfato disódico (4,5 g) en 1,5 l de agua desionizada a 25 °C, y el pH se ajustó a 7,05 con ácido clorhídrico 2 N. Se añadieron 2-metilpropan-1,1,3-tricarboxilato de trimetilo (150,46 g) y lipasa(Candida rugosa,40 g, añadidos en 6 días) y se ajustó el pH a 7,0-7,6 con una solución de hidróxido de sodio 2 N. La reacción se llevó a cabo a 35 °C durante 6 días. El resultado de la prueba quiral es ee%>98 % (Condiciones de la prueba quiral: Chiralpak IC, 4,6 x 250 mm, 5 |jm, n-hexano:etanol=9:1, relación en volumen). La solución de reacción se enfrió hasta 10 °C, se ajustó a pH=3-4 con ácido clorhídrico 3 M y, a continuación, se añadieron 500 ml de acetato de etilo. Después de filtrar con aspiración, la torta de filtración obtenida se lavó con acetato de etilo (600 ml), se separó y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (100 ml). A continuación, se separó la fase orgánica y se concentró para obtener 26,89 g de líquido amarillo pálido.
RMN 1H (400 MHz, CDCh)5(ppm) 3,74 (s, 6H), 3,68 (s, 3H), 3,46 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 2,71-2,79 (m, 1H), 254 (dd,J= 15,6, 4,8 Hz, 1H), 2,32 (dd,J= 16,0, 8,4 Hz, 1H), 1,06 (d,J= 6,8 Hz, 3H).
c) (R)-3-(4,6-Dihidroxipirimidin-5-il)butirato de metilo
Bajo protección del nitrógeno, el acetato de formamidina (11,33 g) se disolvió en metanol (200 ml) a 20 °C, se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de metóxido sódico (30 %, 55,62 g) en metanol, que se hizo reaccionar a 0 °C durante 60 min. Se añadió gota a gota una solución de metanol (60 ml) de (R)-2-metilpropan-1,1,3-tricarboxilato de trimetilo (24,07 g). La temperatura se elevó naturalmente a 20 °C y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 10 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió ácido clorhídrico 3 N para ajustar el pH a 5-6. El disolvente se evaporó a presión reducida, y después el residuo se enfrió a 0 °C, y se añadió ácido clorhídrico 3 N para ajustar el pH = 3 y obtener un precipitado sólido. Se recogió el sólido mediante filtración por aspiración. La torta de filtración se lavó con agua helada (100 ml) y se secó al vacío para obtener 18,79 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) (R)-3-(4,6-Dicloropirimidin-5-il)butirato de metilo
Bajo protección con nitrógeno, se dispersó (R)-3-(4,6-dihidroxipirimidin-5-il)butirato de metilo (14,63 g) en acetonitrilo (70 ml) a 22 °C, y se añadieron gota a gota oxicloruro de fósforo (26,42 g) y diisopropiletilamina (12,51 g). El sistema de reacción era obviamente exotérmico, y a continuación se elevó la temperatura a 60 °C. El sólido se disolvió gradualmente y se clarificó, y la solución de reacción se continuó durante 18 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C y se añadieron 100 ml de acetato de etilo. El pH se ajustó a 7-8 con solución saturada de bicarbonato sódico, y la solución de reacción se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3), y se evaporó a presión reducida para retirar la fase orgánica y obtener 13,89 g de un sólido amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
e) (R)-4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se añadieron (R)-3-(4,6-dicloropirimidin-5-il)butirato de metilo (13,89 g) y amoníaco (25-28 % en peso, 70 ml) en un autoclave de 100 ml a 20 °C, y el sistema de reacción se calentó a 50 °C y se hizo reaccionar durante 18 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se filtró con aspiración y la torta de filtración se disolvió con 30 ml (éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1, relación en volumen) para obtener 7,32 g de un sólido amarillo pálido.
LC-MS (ESI) m/z: 198 (M+H). RMN 1H (300MHz, CDCla)5(ppm) 1,30 (d, J=7,2 Hz, 3H), 2,65-2,69 (m, 1H), 2,86-2,92 (m, 1H), 3,47-3,54 (m, 1H), 8,64 (s, 1H), 10,10 (s, 1H).
Proceso D:
Condiciones de reacción: a) 2,5-diazabiddo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo, 4-dimetilaminopiridina, N-metilpirrolidona; b) cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M), dioxano; c) ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida.
Ejemplo 6
(5R)-4-(5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
a) 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron (R)-4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,30 g), ferc-butil 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato (1,21 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,58 g) en N-metilpirrolidona a 22 °C, se calentó a 140 °C y se hizo reaccionar durante 6 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se vertió en 30 ml de agua helada, se ajustó a pH = 4-5 con ácido clorhídrico 4 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2). Las fases orgánicas se lavaron con solución saturada de cloruro sódico (10 ml * 3) y se evaporaron a presión reducida; el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo=1:1, relación en volumen) para obtener 0,33 g de un sólido amarillo pálido. LC-MS (ESI) m/z: 360 (M+H).
b) (5R)-4-(2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se disolvió 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,28 g) en dioxano (3 ml) a 25 °C, y se añadió cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 1,91 g) para que reaccionara durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se concentró para retirar el disolvente, se enfrió a 0 °C, se ajustó a pH = 12 con solución de hidróxido sódico al 20 % y se extrajo con diclorometano (20 ml * 8). La fase orgánica se evaporó a presión reducida para obtener 0,15 g de un sólido marrón, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) (5R)-4-(5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,15 g) y ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico (0,157g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) a 20 °C, y a continuación se añadieron por separado hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,26 g) y diisopropiletilamina (0,29 g). El sistema de reacción se hizo reaccionar a 25 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, a la solución de reacción se le añadieron 10 ml de agua.
La fase orgánica se separó y se lavó con solución saturada de cloruro sódico (2 ml). Después de que se evaporó la fase orgánica a presión reducida, el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano:metanol = 20:1, relación en volumen) para obtener 0,037 g de un sólido de color trigo.
LC-MS (ESI) m/z: 483 (M+H). RMN 1H (300MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 0,68-1,24 (m, 10H), 1,75-2,38 (m, 3H), 2,54-2,61 (m, 4H), 3,08-3,28 (m, 2H), 3,59-3,61 (m, 2H), 3,87-4,16 (m, 2H), 4,72-4,97 (m, 2H), 7,31-7,38 (m, 4H), 8,10 (d,J= 23,1 Hz, 1H), 10,36 (d,J=11,4 Hz, 1H).
Ejemplo 7
(R)-4-((R)-4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2-metilpiperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó (R)-4-Boc-2-metilpiperazina en lugar de 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo.
LC-MS (ESI) m/z: 485(M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe)5(ppm) 0,94-1,04 (m, 12H), 2,24-2,29 (m, 1H), 2,67-2,93 (m, 5H), 3,06-3,19 (m, 5H), 3,57-3,62 (m, 3H), 4,21-4,24 (m, 1H), 7,32-7,44 (m, 4H), 8,26 (s, 1H), 10,61 (s, 1H). Ejemplo 8
(R)-4-((R)-4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3-metilpiperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó (R)-1-N-Boc-2-metilpiperazina en lugar de 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo.
LC-MS (ESI) m/z: 485 (M+H). RMN 1H (300 MHz, CDCla)5(ppm) 8,37 (d, J=12,0 Hz, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,36 (d,J= 6,0 Hz, 2H), 7,26 (d,J= 6,0 Hz, 2H), 4,59-4,95 (m, 1H), 4,08-4,31 (m, 2H), 3,15-3,82 (m, 6H), 2,72-3,09 (m, 4H), 2,52 2,58 (m, 1H), 2,32-2,39 (m, 1H), 1,10-1,38 (m, 12H).
Ejemplo 9
(R)-4-((S)-4-((R)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3-metilpiperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó (S)-1-N-Boc-2-metilpiperazina en lugar de 2,5-diazabicido[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo.
LC-MS (ESI) m/z: 485 (M+H). RMN 1H (400 MHz, CDCh)5(ppm) 8,35 (d,J= 16,0 Hz, 1H), 7,41-7,28 (m, 3H), 7,26 7,21 (m, 1H), 4,89 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 4,76-4,49 (m, 1H), 3,75-3,65 (m, 1H), 3,64-3,54 (m, 1H), 3,51-3,49 (m, 1H), 3,44-3,34 (m, 1H), 3,34-3,17 (m, 3H), 3,17-3,09 (m, 1H), 3,06-2,96 (m, 1H), 2,89-2,49 (m, 3H), 1,44-1,29 (m, 7H), 1,25 1,06 (m, 5H).
Ejemplo 10
(R)-4-(8-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-formiato de ferc-butilo en lugar de 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo. LC-MS (ESI) m/z: 497 (M+H). RMN 1H (400 MHz, CDCla)5(ppm) 8,35 (d,J= 16,0 Hz, 1H), 7,41-7,28 (m, 3H), 7,26 7,21 (m, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,51 - 4,30 (m, 2H), 4,25-4,22 (m, 1H), 4,10-4,03 (m, 1H), 3,92-3,84 (m, 1H), 373-3,62 (m, 1H), 350-326 (m, 3H), 324-321 (m, 1H), 3,20-2,85 (m, 2H), 2,75-2,62 (m, 1H), 2,49-2,41 (m, 1H), 2,20-1,90 (m, 1H), 1,88-1,60 (m, 3H), 1,44-1,29 (m, 6H), 1,25-1,06 (m, 3H).
Ejemplo 11
(R)-4-(3-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó 3,8 diazabicido[3.2.1]octano-3-formiato de terc-butilo en lugar de 2,5-diazabiddo[2.2.1]heptan-2-carboxilato deterc-butilo.
LC-MS (ESI) m/z: 497 (M+H). RMN 1H (400 MHz, CDCI3)5(ppm) 8,66 (s, 1H), 8,28 (d,J = 5,2Hz, 1H), 7,15-7,38 (m, 4H), 4,31-4,56 (m, 3H), 3,93 (s, 1H), 3,49-3,66 (m, 2H), 3,15-3,31 (m, 2H), 2,70-3,01 (m, 4H), 2,26-2,50 (m, 1H), 1,74 2,03 (m, 3H), 1,57-1,67 (m, 1H), 1,43-1,50 (m, 1H), 1,03-1,26 (m, 9H).
Ejemplo 12
(R)-4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-4,7-diazaspiro[2.5]octan-7-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó 4,7-diazaspiro[2.5]odan-4-formiato de terc-butilo en lugar de 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de terc-butilo.
LC-MS (ESI) m/z=497 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe)510,58 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,33-7,38 (m, 4H), 4,37 (s, 1H), 3,40-4,15 (m, 4H), 2,97-3,09 (m, 3H), 2,57-2,90 (m, 4H), 2,24-2,32 (m, 1H), 0,44 -1,13 (m, 13H).
Ejemplo 13
(5R)-4-(5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó hexahidropirrolo[3,4-c]pirrol-2 (1 H)-formiato de terc-butilo en lugar de 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-carboxilato de terc-butilo. Se preparó el producto final y se resolvió para obtener un isómero cis y un isómero trans. Condiciones de resolución quiral: instrumento de resolución: waters SFC200; columna: Daicel Chiralcel AD, 250 * 30 mm ID, 5 pm; fase móvil A: CO2, fase móvil B: etanol (que contiene amoniaco al 0,1 %), A:B = 65:35 (relación de volumen). El producto con un tiempo de retención de 8-10 min se recogió como isómero cis, y el producto con un tiempo de retención de 11-13 min se recogió como isómero trans.
isómero cis: LC-MS (ESI) m/z: 497. (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 10,31 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,08 (d,J =13,5 Hz, 1H), 728-738 (m, 4H), 3,76-3,93 (m, 3H), 3,56-3,72 (m, 2H), 3,45-3,52 (m, 2H), 3,38-3,40 (m, 2H), 3,13-3,24 (m, 2H), 3,03-3,07 (m, 1H), 2,84-2,90 (m, 2H), 2,57-2,78 (m, 3H), 2,17-2,26 (m, 1H), 1,04 (d,J= 5,1 Hz, 2H), 0,87-0,93 (m, 7H).
isómero trans: LC-MS (ESI) m/z: 497. (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 10,31 (d,J= 7,8 Hz, 1H), 8,08 (d,J= 13,2 Hz, 1H), 7,28-7,40 (m, 4H), 3,82-3,94 (m, 2H), 3,68-3,79 (m, 1H), 3,47-3,63 (m, 2H), 3,07-3,22 (m, 3H), 2,62-3,02 (m, 5H), 2,18-2,27 (m, 1H), 1,20-1,29 (m, 3H), 1,05 (d,J= 5,4 Hz, 1H), 0,90-0,96 (m, 6H), 0,81-0,86 (m, 3H).
Ejemplo 14
(R)-4-(6-((S)-2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 6, donde se utilizó 2,6-diazaspiro[3.3]hepta-2-formiato de ferc-butilo en lugar de 2,5-diazabicido[2.2.1]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo. LC-MS (ESI) m/z: 483 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe)5(ppm) 10,38 (s, 1H), 809 (s, 1H), 7,36-7,38 (m, 2H), 7,30-7,32 (m, 2H), 4,48 (d,J= 9,6Hz, 1H), 4,35 (s, 2H), 4,26 (s, 2H), 3,98-4,08 (m, 3H), 3,63-3,67 (m, 1H), 3,00-3,10 (m, 2H), 2,61-2,73 (m, 4H), 2,23 (d,J= 16,0 Hz, 1H), 1,02 (d,J= 7,2 Hz, 3H), 0,91-0,93 (m, 6H).
Proceso E:
Condiciones de reacción: a) 2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo, N-metilpirrolidona, 4-dimetilaminopiridina; b) cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M), diclorometano; c) ácido (S)-3-(fercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, 4-dimetilaminopiridina, N,N-dimetilformamida; d) ácido trifluoroacético, diclorometano.
Ejemplo 15
(R)-4-((1S,6R)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona o (R)-4-((1R,6S)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Isómero 1 Isómero 2
a) 5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabicido[4.1.0]heptan-2-carboxilato deterc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron (R)-4-doro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,21 g), 2,5-diazabiddo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de terc-butilo (0,31 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,39 g) en N-metilpirrolidona (5 ml) a 22 °C, se calentó a 140 °C y se hizo reaccionar durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 20 °C, se vertió en 20 ml de agua helada, se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2) y se lavó con solución saturada de cloruro sódico (10 ml * 3). El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo=3:1-1:1, relación en volumen) para obtener 0,28 g de un líquido amarillo pálido. LC-M<s>(ESl) m/z: 360 (M+H).
b) clorhidrato de (5R)-4-(2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se disolvió 5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de terc-butilo (0,28 g) en diclorometano (5 ml) a 20 °C, y se añadió cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 ml) para que reaccionara durante 1 hora. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se evaporó para retirar el disolvente a presión reducida y obtener 0,23 g de un sólido amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) (2S)-2-(4-clorofenil)-3-(5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de terc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron clorhidrato de (5R)-4-(2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7 (6H)-ona (0,20 g) y ácido (S)-3-((terc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico (0,22g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) a 20 °C, y después se añadieron por separado hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,59 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,48 g), y se hicieron reaccionar a 25 °C durante 4 horas. Después de completarse la reacción, a la solución de reacción se le añadieron 20 ml de agua, y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 3). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (10 ml * 2) y se evaporó a presión reducida. A continuación se obtuvieron 0,18 g de un sólido amarillo mediante separación mediante cromatografía en columna (diclorometano:metanol=50:1). LC-MS (ESl) m/z: 583 (M+H).
d) (R)-4-((1S,6R)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona o (R)-4-((1R,6S)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-meti-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se disolvió (2S)-2-(4-clorofenil)-3-(5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido [2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo [4.1.0]heptan-2-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de terc-butilo (0,18 g) en diclorometano (2 ml) a 20 °C, y se añadió ácido trifluoroacético (0,86 ml) para que reaccionara durante 3 horas. Después de completarse la reacción, se añadió diclorometano (10 ml) a la solución de reacción, y se añadió gota a gota solución de hidróxido sódico 2 M a 0 °C para ajustar el pH = 12. Después de la separación, la fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (5 ml) y se secó con sulfato sódico anhidro. La fase orgánica se evaporó a presión reducida para obtener 0,10 g de un sólido amarillo. Después de la resolución mediante cromatografía líquida preparativa de alto rendimiento, se obtuvieron un isómero 1 (3 mg) y un isómero 2 (12 mg).
Condiciones de HPLC: Columna: Aglient 5 pm prep-C18 50*21,2 mm, fase móvil A: agua (que contiene amoníaco al 0,1 %); fase móvil B: metanol. Gradiente: tiempo 0-10 min, fase B: 60-70 % (relación de volumen).
isómero 1: TR-p 5,3 min, LC-MS (ESl) m/z: 483 (M+H).
isómero 2: TR2: 5,9 min; LC-MS (ESl) m/z: 483 (M+H); RMN 1H (400MHz, CDCla) 5 ppm 8,27 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,27-7,30 (m, 4H), 4,23-4,29 (m, 1H), 3,90-3,95 (m, 1H), 3,81-3,85 (m, 1H), 3,69-3,72 (m, 1H), 3,44 3,59 (m, 1H), 3,20-3,38 (m, 3H), 3,01-3,05 (m, 1H), 2,70-2,85 (m, 3H), 2,47-2,57 (m, 1H), 2,21-2,25 (m, 1H), 1,25 1,28 (m, 3H), 1,03-1,11 (m, 6H), 0,82-0,90 (m, 2H).
Medición de la configuración mediante difracción de monocristal:
Preparación de monocristales: se añadieron 30,0 mg del compuesto del isómero 2 y 2,0 ml de isopropanol en un frasco de vidrio con tapón de rosca de 5 ml, y se agitó durante 5 min. El sólido se disolvió y se clarificó. Se pesaron 3,9 mg de ácido oxálico dihidratado y se añadieron al frasco de vidrio anterior. En el frasco de vidrio se precipitó gradualmente un sólido blanco. Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, se depositó una gran cantidad de sólido blanco en el frasco de vidrio. Se añadieron 1,0 ml de metanol al frasco de vidrio y el sólido blanco desapareció gradualmente, mientras se aclaraba la solución. Se continuó agitando durante 1 h. La solución se filtró a través de una membrana microporosa de 0,22 pm en un frasco de vidrio con tapón de rosca de 3 ml, y se cubrió la boca del frasco de vidrio con una envoltura de plástico. La envoltura de plástico se perforó en la boca del frasco con una aguja para formar 8 pequeños agujeros, y la mezcla se dejó reposar a temperatura ambiente durante 7 días para obtener un monocristal de oxalato del compuesto del isómero 2.
Experimento de difracción de monocristal:
Difractómetro de rayos X de monocristal: BRUKER D8 VENTURE PHOTON II
Longitud de onda: Ga K a (A = 1,34139 A)
Temperatura de prueba: 190K
Programa informático de análisis estructural: SHELXL-2018
Datos del monocristal: fórmula molecular: C55H72ChNi2Og; peso molecular: 1116,14; sistema cristalino: sistema cristalino hexagonal; grupo espacial: P 61; parámetros de la celda unitaria: a = 25,8406(15) A, b = 25,8406(15) A, c = 45,916(3) A, a = 90°, p = 9o°,<y>= 120°; volumen de la celda unitaria: V = 26552(4) A3; número de fórmulas moleculares contenidas en la celda unitaria: Z = 12; densidad calculada: Dcalc= 0,838 g/cm3; R(Fo): 0,0730; RW(Fo2): 0,2069; bondad de ajuste (S): 1,034; Parámetro Flack: 0,066(9).
Descripción de la estructura: La difracción de rayos X de monocristal y el análisis de la estructura muestran que el monocristal obtenido es un complejo de oxalato isopropanol del isómero 2. La unidad estructural asimétrica del cristal contiene cuatro moléculas de isómero 2 , dos moléculas de ácido oxálico y dos moléculas de isopropanol, donde el isómero 2 y el ácido oxálico forman oxalato. El diagrama esquemático de una sola molécula del compuesto del isómero 2 se muestra en la Fig. 1, y la unidad estructural asimétrica del monocristal de oxalato se muestra en la Fig. 2. La fórmula estructural es la siguiente
Proceso F:
Condiciones de reacción: a) 4,4,4-trifluoro-2-crotonato de metilo, solución metanólica de metóxido de sodio (30 % en peso); b) acetato de formamidina, solución metanólica de metóxido de sodio (30 % en peso); c) oxicloruro de fósforo, diisopropiletilamina, acetonitrilo; d) amoníaco (25-28 % en peso); e) terc-butilpiperazin-1-carboxilato; (f) ácido trifluoroacético, diclorometano; g) ácido (S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propiónico, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina, diclorometano.
Ejemplo 16
4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1 -il)-5-(trifluorometil)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
De acuerdo con el proceso F, la preparación se realizó de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1. LC-MS (ESI) m/z: 525 (M+H).
Separación de isómeros: la resolución quiral del mencionado compuesto del título se llevó a cabo mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumentos y condiciones de resolución: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AS, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es etanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 85:15 (relación de volumen); caudal: 60 ml/min, temperatura de la columna: 38 °C.
Isómero 1:
LCMS (ESI) m/z:525 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 0,91-0,95, (m, 6H), 2,59-2,78 (m,4H), 3,07-3,12 (m, 1H), 3,20-3,31 (m, 4H), 3,37-3,50 (m, 3H), 3,69-3,75 (m, 2H), 4,08-4,19 (m, 2H), 7,35 (dd, J=25,2, 8,0Hz,4H), 8,36 (s,1H), 10,90 (s, 1H).
Isómero 2:
LCMS (ESI) m/z:525 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm) 0,93-1,06 (m, 6H), 2,58-2,72 (m, 4H), 3,06-3,31 (m, 4H), 3,45-3,68 (m, 6H), 4,11-4,20 (m, 2H), 7,31-7,43 (m, 4H), 8,34 (d,J= 6,0 Hz, 1H), 1092 (s, 1H).
Proceso G:
Condiciones de reacción: a) 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato deterc-butilo, dioxano, carbonato de cesio, agua, tetraquis(trifenilfosfina)paladio; b) metanol, ácido fórmico, paladio sobre carbono (5 %), hidrógeno; c) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M); d) ácido (S)-3-(tercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico, N,N-dimetilformamida, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina; e) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M).
Ejemplo 17
a) (R)-4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H))-formiato de terc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron (R)-4-cloro-5-meti-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,60 g) y 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (1,03 g) en dioxano (20 ml) a 22 °C, y se añadieron carbonato de cesio y agua (5 ml), y finalmente se añadió tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0,35 g) y se hizo reaccionar a 100 °C durante 7 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 20 °C, se vertió en 20 ml de agua helada y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). La fase orgánica se evaporó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo=4:1, relación en volumen) para obtener 0,81 g de un sólido amarillo pálido. MS (ESI) m/z: 345 (M+H).
b) (R)-4-(5-Metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
Se disolvió (R)-4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H))-formiato deterc-butilo (0,75 g) en metanol (50 ml) a 20 °C, y se añadieron ácido fórmico (0,11 g) y 0,30 g de paladio sobre carbono (5 %). El sistema de reacción se sustituyó por nitrógeno durante 3 veces y se llenó de hidrógeno, y se hizo reaccionar a 60 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió hasta 10 °C, se filtró paladio-carbono con aspiración, y el filtrado se evaporó a presión reducida para retirar el disolvente y obtener 0,66 g de un producto oleoso incoloro. Ms (ESI) m/z: 347 (M+H).
c) (R)-5-metil-4-(piperidin-4-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se disolvió (R)-4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,63 g) en diclorometano (10 ml) a 25 °C, y se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M) (10 ml) para que reaccionara durante 2 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se concentró para retirar el disolvente, se enfrió a 0 °C, se ajustó a pH = 12 añadiendo solución de hidróxido sódico al 20 %, y se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 3). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico y se evaporó a presión reducida para obtener 0,346 g de un sólido amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperidin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de ferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron (R)-5-metil-4-(piperidin-4-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,302g) y ácido (S)-3-((ferc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,308 g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) a 20 °C, y después se añadieron por separado de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,86 g) y diisopropiletilamina (0,76 g), y se hicieron reaccionar a 20 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, a la solución de reacción se le añadieron 30 ml de agua. Se añadió acetato de etilo (50 ml) para la extracción. Después de la separación, la fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (10 ml * 2 ) y se evaporó a presión reducida, y el residuo se separó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano:metanol = 25:1, relación en volumen) para obtener 0,339 g de un sólido blanco, que se usa directamente para la siguiente etapa.
e) (R)-4-(1-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperidin-4-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
(S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperidin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de ferc-butilo (0,320 g) se disolvió en diclorometano (3 ml) a 25 °C, y se añadió una solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M) (2,9 ml) para que reaccionara durante 2 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se evaporó a presión reducida para retirar el disolvente, se enfrió a 0 °C, se ajustó a pH = 12 añadiendo hidróxido sódico al 20 %, y se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 3). La solución resultante se lavó con solución saturada de cloruro sódico (15 ml). La fase orgánica se evaporó a presión reducida para obtener 0,176 g de un sólido blanco.
LC-MS (ESI) m/z: 470 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)5(ppm) 0,83-0,97 (m, 6H), 1,03-1,10 (m, 3H), 1,24-1,43 (m, 2H), 1,57-1,95 (m, 2H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,51-2,87 (m, 5H), 3,01-3,19 (m, 3H), 3,35-3,41 (m, 1H), 4,02-4,21 (m, 2H), 4,51-4,62 (m, 1H), 7,32-7,43 (m, 4H), 8,50-8,61 (m, 1H), 10,85 (s, 1H).
Proceso H:
Condiciones de reacción: a) ferc-butilpiperazin-1-carboxilato, N-metilpirrolidona, 4-dimetilaminopiridina; (b) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M); c) diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, ácido 1-(ferc-butoxicarbonil)-4-((4-clorofenil)piperidin-4-carboxílico; d) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M).
Ejemplo 18
Formiato de (R)-4-(4-(4-(4-clorofenil)piperidin-4-carbonil)piperazin-1-il)-5-metM-5,6-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona
a) (R)-4-(5-Metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropiido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Se disolvieron (R)-4-cloro-5-metil-5,6-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (400 mg), ferc-butilpiperazin-1-carboxilato (1,8 g) y 4-dimetilaminopiridina (494 mg) en N-metilpirrolidona (10 ml) a 20 °C. La solución de reacción se sustituyó con nitrógeno tres veces, y se calentó a 150 °C bajo la protección de nitrógeno y se hizo reaccionar durante 4 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en 20 ml de acetato de etilo, se lavó con agua (2 ml*2) y, a continuación, se lavó con ácido clorhídrico diluido 0,5 M hasta alcanzar un pH = 5-6. Después de la separación, la fase orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo=2:1, relación en volumen) para obtener 0,6 g de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z: 348 (M+H).
b) (R)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,6-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona
Se disolvió (R)-4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropmdo[2,3-d]pinmidin-4-il)ferc-butilpiperazin-1-carboxilato (0,6 g) en diclorometano (2 ml) a 18 °C, y se añadió gota a gota solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 5 ml) y se hizo reaccionar a 18 °C durante 2 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó de la solución de reacción a presión reducida para obtener un producto objetivo oleoso. El producto se disolvió en diclorometano y se añadió hidróxido sódico sólido. La mezcla se agitó hasta que se disolvió la sustancia oleosa. El sólido se retiró por filtración. El residuo se concentró para obtener un sólido blanco (0,3 g), que se utilizó directamente para la siguiente etapa.
c) (R)-4-(4-clorofenil)-4-(4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il))piperazin-1-carbonil)piperidin-1-carboxilatode ferc-butilo Se disolvieron (R)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,6-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (150 mg), (1-ferc-butoxicarbonil)-4-(4-clorofenil)piperidin-4-carboxílico (247 mg), diisopropiletilamina (235 mg) y hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol))-N,N,N',N'-tetrametilurea (346 ml) en N,N-dimetilformamida (3 ml) a 18 °C, y se hicieron reaccionar a 18 °C durante 12 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en acetato de etilo (20 ml) y se lavó con agua (5 ml * 3). La fase orgánica se evaporó a presión reducida para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó por columna sobre gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo=1 :2 , relación en volumen) y se purificó para obtener 280 mg del producto objetivo oleoso incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) Formiato de (R)-4-(4-(4-(4-clorofenil)piperidin-4-carbonil)piperazin-1 -il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se disolvió (R)-4-(4-clorofenil)-4-(4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il))piperazin-1-carbonil)piperidin-1-carboxilatode ferc-butilo (280 mg) en diclorometano (5 ml) a 15 °C, y se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 5 ml) para que reaccionara a 15 °C durante 1,5 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se concentró para obtener un producto blanco en bruto. El producto en bruto se separó mediante cromatografía líquida de alta resolución para obtener 60 mg del producto objetivo. Condiciones de HPLC: Columna: Kromasil 10 pm C18 50*250 mm, fase móvil A: agua (que contiene ácido fórmico al 0,1 %), fase móvil B: metanol. Gradiente: tiempo 0-10 min, fase B 20 %; 10-30 min, fase B 20-50 %; 30-40 min, fase B 50 % (relación en volumen), TR = 31,4 min.
LC-MS (ESI) m/z=469[M+H]. RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 6 (ppm) 10,62 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,48 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 2,74-3,74 (m, 12H), 2,49-2,50 (m, 2H), 2,22-2,26 (m, 3H), 1,96-2,00 (m, 2H), 0,97-0,99 (m, 3H).
Proceso I:
Condiciones de reacción: a) metacrilato de metilo, metóxido de sodio, metanol; b) acetato de formamidina, metóxido de sodio, metanol; c) oxicloruro de fósforo, diisopropiletilamina, acetonitrilo; d) amoníaco (25-28 % en peso); e)terc-butilpiperazin-1-carboxilato, N,N-lutidin-4-amina, N-metilpirrolidona; f) solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M); g) ácido (S)-3-(terc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, diisopropiletilamina, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, N,N-dimetilformamida; h) solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M).
Ejemplo 19
Clorhidrato de 4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propil)piperazin-1-il)-6-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
a) ácido 1,1,3-trimetilbutano tricarboxílico
Bajo protección con nitrógeno, se dispersó metóxido sódico (2,45 g) en metanol (50 ml) a 20 °C y se añadieron malonato de dimetilo (5 g) y metacrilato de metilo (3,75 g), se elevó la temperatura a 60 °C y la reacción se llevó a cabo durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se evaporó para retirar el disolvente a presión reducida y obtener 5 g de líquido amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 3-(4,6-dihidroxipirimidin-5-il)-2-metilpropionato de metilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvió metóxido de sodio (11,67 g) en metanol (30 ml) a 20 °C, que se enfrió a 0 °C. Bajo agitación, se añadió acetato de formamidina (2,44 g) y se hizo reaccionar durante 30 min, y después se añadió gota a gota ácido 1,1,3-trimetilbutano tricarboxílico (5 g), y la reacción se llevó a cabo a 20 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, se añadió clorhidrato de isopropanol (4,0 M) a la solución de reacción para ajustar el pH = 5. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se enfrió hasta 0 °C. Los sólidos se precipitaron y se filtraron con aspiración. La torta de filtración se lavó con agua (50 ml), y la torta de filtración se secó para obtener 3,7 g de un sólido amarillo pálido, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 3-(4,6-dicloropirimidin-5-il)-2-metilpropionato de metilo
Bajo protección con nitrógeno, se dispersó 3-(4,6-dihidroxipirimidin-5-il)-2-metilpropionato de metilo (3 g) en acetonitrilo (60 ml) a 22 °C, y se añadieron gota a gota oxicloruro de fósforo (2,91 ml) y diisopropiletilamina (1,18 ml). El sistema de reacción fue obviamente exotérmico, y el sólido se disolvió y clarificó gradualmente, después se elevó la temperatura a 90 °C y la reacción se llevó a cabo durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1, relación en volumen) para obtener 1,50 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) 4-cloro-6-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se añadió 3-(4,6-dicloropirimidin-5-il)-2-metilpropionato de metilo (1,5 g) a amoníaco (3 ml) a 20 °C y se hizo reaccionar a 20 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 4:1, relación en volumen) para obtener 0,30 g de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z: 199 (M+H).
e) 4-(6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo
Se añadieron tere-butilpiperazin-1-carboxilato (0,28 g) y N,N-lutidin-4-amina (0,31 g) a una solución de 4-cloro-6-metil-5.8- dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,1 g) en N-metilpirrolidona (3 ml) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 150 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1 , relación en volumen) para obtener 0,31 g de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z: 348,2 (M+H).
f) 6-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
Se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 10 ml) a 4-(6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (0,1 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida para obtener un sólido casi blanco (0,1 g). LC-MS (ESI) m/z: 248,2 (M+H).
g) (2S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropiridina[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil(isopropil)carbamato de tere-butilo
Se añadieron ácido (S)-3-((tere-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,17 g) y diisopropiletilamina (0,16 g) a una solución de 6-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (0,1 g) en N,N-dimetilformamida (10 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. Se añadió hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,23 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :2 , relación en volumen) para obtener 0,08 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
h) clorhidrato de 4-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-6-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
A 20 °C, se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 3 ml) a (2R)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil(isopropil)carbamato de tere-butilo (0,2 g). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se evaporó a presión reducida para retirar el disolvente y la solución resultante se separó por HPLC para obtener 0,06 g de un sólido casi blanco.
LC-MS (ESI) m/z: 471 (M+H). RMN 1H (400 MHz, MeOD) 88,42 (d,J= 4,5 Hz, 1H), 7,54-7,33 (m, 4H), 4,64-4,52 (m, 1H), 3,96-3,81 (m, 2H), 3,79-3,73 (m, 2H), 3,70-3,66 (m, 2H), 3,63-3,56 (m, 1H), 3,51-3,40 (m, 2H), 3,24 -3,16 (m, 1H), 3.09- 2,94 (m, 1H), 2,84 (s, 1H), 2,79-2,66 (m, 2H), 1,44-1,35 (m, 6H), 1,33-1,25 (m, 3H).
Separación de isómeros:
El mencionado compuesto del título se resolvió quiralmente mediante cromatografía de fluidos supercríticos.
Instrumento de resolución y condiciones: Waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AS, 250 * 30mm ID, 5 |jm; Fase móvil: A es CO2, B es metanol (NH3H2O al 0,1 %), A:B = 90:10 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Isómero 1:
LCMS (ESI) m/z: 471 (M+H). RMN 1H (400 MHz, CDCla) 88,36 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,32-7,37 (m, 2H), 7,21-7,27 (m, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,89-4,00 (m, 1H), 3,65-3,74 (m, 1H), 3,53-3,64 (m, 2H), 3,44-3,52 (m, 1H), 3,35-3,42 (m, 2H), 3,27 3,34 (m, 2H), 2,87-2,94 (m, 1H), 2,74-2,82 (m, 2H), 2,57-2,64 (m, 1H), 2,47-2,54 (m, 1H), 1,32 (d, J = 6,6Hz, 3H), 1,07 1,19 (m, 6H).
Isómero 2:
LCMS (ESI) m/z: 471 (M+H). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 88,37 (s, 1H), 7,33-7,38 (m, 2H), 7,21-7,27 (m, 2H), 4,09 (s, 1H), 3,83-3,91 (m, 1H), 3,62-3,72 (m, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,26-3,34 (m, 2H), 3,12-3,21 (m, 1H), 2,69-2,98 (m, 5H), 2,50 2,66 (m, 2H), 1,32 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,11 (dd, J = 14,8, 6,2 Hz, 6H).
Proceso J:
Condiciones de reacción: a) Bromoacetato de etilo, hidruro de sodio, yoduro de tetrabutilamonio, tetrahidrofurano; b) 2,4 dimetoxibencilamina, trietilamina, isopropanol; c) yoduro de metilo, hidruro de sodio, N,N-dimetilformamida; d) ácido trifluoroacético; e) terc-butilpiperazin-1-carboxilato, 4-dimetilaminopiridina, N-metilpirrolidona; f) solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M); g) ácido (S)-3-(terc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, diisopropiletilamina, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, N,Ndimetilformamida; h) solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M).
Ejemplo 20
Clorhidrato de (S)-4-(4-(2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
a) 2-((4,6-dicloropirimidin-5-il)amino)acetato de etilo
Se añadió hidruro sódico (2,93 g) a una solución de 4,6-dicloro-5-aminopirimidina (10,0 g) en tetrahidrofurano (100 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. La temperatura se elevó a 20 °C y se añadió bromoacetato de etilo (12,22 g), seguido de yoduro de tetrabutilamonio (27,03 g). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml), se agitó durante 30 min y, a continuación, se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 20:1, relación en volumen) para obtener 6,5 g de un producto oleoso incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
A 20 °C, se añadió 2,4-dimetoxibencilamina (3,67 g) a una solución de 2-((4,6-dicloropirimidin-5-il)amino)acetato de etilo (5 g) en isopropanol (150 ml), y a continuación se añadió trietilamina (4,45 g). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 18 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se filtró, y la torta del filtro se lavó con etanol y se secó a presión reducida para obtener 5,0 g de un sólido casi blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
A 0 °C, se añadió yoduro de metilo (1,68 g) a una solución de 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,6-dihidropteridin-7(8H)-ona (3,3 g) en N,N-dimetilformamida (30 ml), y la mezcla de reacción se agitó durante 20 min. La temperatura se mantuvo a 0 °C y se añadió hidruro sódico (0,47 g). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1, relación en volumen) para obtener 1,5 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
d) 4-cloro-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
A 20 °C, se añadió ácido trifluoroacético (20 ml) a 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-5,6-dihidropteridin-7(8H)-ona (5 g). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida para obtener un sólido casi púrpura (1,0 g). LC-MS (ESI) m/z: 199,1 (M+H). RMN 1H (300MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 11,60 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 3,77 (s, 2H), 2,85 (s, 3H).
e) 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il) piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Se añadieron ferc-butilpiperazin-1-carboxilato (0,85 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,93 g) a una solución de 4-cloro-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona (0,3 g) en N-metilpirrolidona (5 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 150 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1 , relación en volumen) para obtener 0,27 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
f) 5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
Se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 3 ml) a 4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,1 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida para obtener un sólido casi blanco (0,1 g).
g) (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroteridin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil(isopropil)carbamato de ferc-butilo
A 20 °C, se añadieron ácido (S)-3-((ferc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,17 g) y diisopropiletilamina (0,16 g) a una solución de 5-metil-4-(piperazin-1-il)-5,6-dihidropteridin-7(8H)-ona (0,1 g) en N,N-dimetilformamida (10 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. Después se añadió hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,23 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml x 3), se secó con sulfato sódico anhidro. El disolvente se evaporó a presión reducida. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1,5, relación en volumen) para obtener 0,08 g de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z: 572 (M+H).
h) Clorhidrato de (S)-4-(4-(2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
A 20 °C, se añadió solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 3 ml) a (S)-(2-(4-clorofenil)-3-(4-(5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil(isopropil)carbamato de ferc-butilo (0,08 g). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se evaporó a presión reducida para retirar el disolvente y la solución resultante se separó por HPLC para obtener 0,02 g de un sólido casi blanco.
LC-MS (ESI) m/z: 472 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm) 10,94 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,46-7,51 (m, 2H), 7,37-7,43 (m, 2H), 4,68-4,74 (m, 1H), 3,81-3,91 (m, 2H), 3,64-3,74 (m, 2H), 3,59-3,63 (m, 2H), 3,52-3,59 (m, 4H), 3,25 3,34 (m, 2H), 2,95-3,03 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 1,20-1,28 (m, 6H).
Ejemplo 21
Formiato de 4-(8-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 20, donde se utilizó 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. Las condiciones de HPLC para el producto objetivo: Columna: Aglient 5 pm prep-C1850x21,2 mm, fase móvil A: agua (que contiene ácido fórmico al 0,1 %); fase móvil B: acetonitrilo. Gradiente: tiempo 0-10 min, fase B 5-75 % (relación en volumen), TR = 3,4 min.
LC-MS (ESI) m/z: 498 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm) 10,89 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,10 (d, J = 25,6 Hz, 1H), 7,31-7,48 (m, 4H), 4,48-4,68 (m, 3H), 4,09-4,30 (m, 2H), 3,50-3,60 (m, 3H), 3,11-3,24 (m, 2H), 2,62-2,84 (m, 3H), 2,37-2,47 (m, 3H), 1,49-1,88 (m, 4H), 0,89-1,02 (m, 6H).
Ejemplo 22
4-((S)-4-((S)-2-(4-dorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3-metilpiperazin-1-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Ejemplo 20, donde se utilizó (S)-1-N-Boc-2-metilpiperazina en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se ajustó a pH = 9 añadiendo solución de hidróxido sódico al 10 % a 0 °C, y se extrajo con diclorometano (10 ml * 3). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (15 ml), se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó a presión reducida para obtener 70 mg de un sólido blanco.
LC-MS (ESI) m/z: 486 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm) 10,88 (s, 1H), 8,09 (d,J= 5,6Hz, 1H), 7,35-7,42 (m, 3H), 7,27 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 4,55-4,74 (m, 3H), 4,44-4,53 (m, 1H), 4,31-4,39 (m, 1H), 4,16-4,26 (m, 1H), 4,00-4,10 (m, 1H), 3,87-3,96 (m, 1H), 3,04-3,16 (m, 2H), 2,87-2,96 (m, 1H), 2,77-2,85 (m, 1H), 2,56-2,63 (m, 2H), 2,42-2,47 (m, 3H), 1,18-1,29 (m, 3H), 0,90-0,96 (m, 6H).
Proceso K:
Reactivos: a) amoníaco (25-28 % en peso), tetrahidrofurano; b) acetonitrilo, ferc-butilpiperazin-1-carboxilato, N,N-diisopropiletilamina; c) borohidruro de sodio, metanol, solución acuosa saturada de cloruro amónico; d) triclorometilcarbonato, N,N-diisopropiletilamina, tetrahidrofurano; e) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M); f) ácido (S)-3-(ferc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, N,N-diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida, hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea; g) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M).
Ejemplo 23
Formiato de 5-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona
A 20 °C, se disolvió 1-(4,6-dicloropirimidin-5-il)etanona (2,5 g) en tetrahidrofurano (15 ml) y se añadió amoníaco (9 g). La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 5 horas, después se concentró y se diluyó con una pequeña cantidad de agua, y se filtró con aspiración para obtener un sólido blanco, que se secó al vacío para obtener 2 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 4-(5-acetil-6-aminopirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Se disolvieron 1-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)etanona (2 g) y N,N-diisopropiletilamina (3 g) en acetonitrilo (20 ml) a 20 °C. A continuación se añadió 1-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)etanona, y la solución de reacción se agitó a 40 °C durante 5 horas. Después de completarse la reacción, el disolvente se evaporó a presión reducida para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo: éter de petróleo = 1:1, relación en volumen) para obtener 3,2 g de un sólido amarillo pálido, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 4-(6-amino-5-(1-hidroxietil)pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Se disolvió 4-(5-acetil-6-aminopirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,5 g) en metanol (15 ml) a 20 °C y se enfrió a -10 °C. A continuación, se añadió borohidruro sódico (1 g) por lotes. Después de completarse la adición, la solución de reacción se calentó lentamente hasta 20 °C y se agitó durante otras 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se interrumpió con solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La solución de reacción se concentró y se disolvió con acetato de etilo (20 ml * 2). El licor madre se concentra para obtener un producto en bruto oleoso. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano:metanol=1:30, relación en volumen) para obtener 400 mg de un producto oleoso blanco. LC-MS (ESI): m/z=324 [M+H].
d) 4-(4-meti-2-oxo-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-5-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
A 20 °C, se disolvieron 4-(6-amino-5-(1-hidroxietil)pirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de butilo (300 mg) y N,N-diisopropiletilamina (282 mg) en tetrahidrofurano (3 ml). Después se bajó la temperatura a -5 °C y se añadió lentamente carbonato de triclorometilo, y se agitó a -5 °C durante 0,5 horas. Después, se elevó lentamente la temperatura a 18 °C y la solución de reacción se agitó durante 1,5 horas. Después de completarse la reacción, la reacción se interrumpió con una solución acuosa de bicarbonato sódico y se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 3). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener un producto en bruto oleoso. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1, relación en volumen) para obtener 108 mg de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z=350[M+H].
e) Clorhidrato de 4-metil-5-(piperazin-1-il)-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d] [1,3]oxazin-2-ona
A 20 °C, se disolvió 4-(4-metil-2-oxo-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-5-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (100 mg) en diclorometano (3 ml) y se añadió con solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 3 ml) bajo agitación. La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora y se precipitó un sólido blanco. La solución de reacción se evaporó para retirar el disolvente a presión reducida y obtener 80 mg de producto objetivo sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
f) (2S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(4-metil-2-oxo-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-5-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de ferc-butilo
A 20 °C, se disolvieron 4-metil-5-(piperazin-1-il)-1H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-2(4H)-ona (80 mg), ácido (S)-3-(tercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico (100 mg), N,N-diisopropiletilamina (113 mg) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (167 mg) en N,N-dimetilformamida anhidra (2,5 ml). La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 12 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en acetato de etilo (20 ml) y se lavó dos veces con agua y una con solución acuosa de cloruro sódico. La fase orgánica se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1 , relación en volumen) para obtener 130 mg de un sólido blanco. LC-MS (ESI) m/z=573[M+H].
g) Formiato de 5-(4-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona
Se disolvió (2S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(4-metil-2-oxo-1,4-dihidro-1H-pirimido[4,5-d][1,3])oxazin-5-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato de terc-butilo (130 mg) en diclorometano (2 ml) a 20 °C. Bajo agitación, se añadió una solución de cloruro de hidrógeno/1,4-dioxano (4,0 M, 2 ml) y la solución de reacción se agitó a 20 °C durante 2 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se enfrió a 0 °C, se añadió solución de hidróxido sódico al 10 % para ajustar el pH = 9 y se añadió diclorometano (10 ml * 3) para la extracción. La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (15 ml), se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó a presión reducida. El residuo se separó y purificó mediante cromatografía líquida preparativa de alto rendimiento para obtener 32 mg de un sólido blanco. Condiciones de HPLC: Columna: Aglient 5 pm prep-C1850*21,2 mm, fase móvil A: agua (que contiene ácido fórmico al 0,1 %); fase móvil B: acetonitrilo, gradiente: tiempo 0-10 min, fase B 5-45 % (relación en volumen), TR = 3,7 min.
LC-MS (ESI):m/z=473 [M+H]. RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 5 (ppm) 8,22-8,31 (m, 2H), 7,37-7,45 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 2H), 5,68-5,81 (m, 1H), 4,18-4,28 (m, 1H), 3,41-3,78 (m, 8H), 3,03-3,26 (m, 3H), 2,89-3,01 (m, 1H), 2,74-2,83 (m, 1H), 2,64-2,72 (m, 1H), 1,33-2,49 (m, 3H), 0,89-1,04 (m, 6H).
Separación de isómeros:
El mencionado compuesto del título se resolvió quiralmente mediante cromatografía de fluidos supercríticos. Instrumento de resolución y condiciones: Waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AD, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es metanol (NH3H2O al 0,1 %), A:B = 65:35 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Isómero 1:
LCMS (ESI): m/z=473 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 68,28 (s, 1H), 7,47-7,23 (m, 4H), 5,76 (d,J= 6,3 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 3,75-3,44 (m, 6H), 3,28-3,20 (m, 2H), 3,15-3,04 (m, 2H), 2,74-2,58 (m, 2H), 1,41 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 0,93 (t, J = 6,9 Hz, 6H).
Isómero 2:
LCMS (ESI): M/Z=473 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 510,85 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,43 (dd,J =42,1, 8,2 Hz, 4H), 5,75 (c,J= 6,2 Hz, 1H), 4,76-4,54 (m, 1H), 3,79-3,39 (m, 8H), 3,32-3,20 (m, 2H), 3,10-2,85 (m, 2H), 1,43 (d,J= 6,4 Hz, 3H), 1,25 (t,J= 5,6Hz, 6H).
Ejemplo 24
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método de acuerdo con el método descrito en el Proceso F, donde se utilizó 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-formiato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumento de resolución y condiciones: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OD, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es etanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 70:30 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
isómero 1: LCMS (ESI) m/z:551 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de) 5 (ppm): 1,28-1,11 (m, 6H), 2,10-1,47 (m, 6H), 3,18-2,75 (m, 7H), 4,28-3,65 (m, 5H), 4,85-4,83 (m, 1H), 7,41-7,25 (m, 4H), 8,42-8,33 (m, 1H).
isómero 2: LCMS (ESI) m/z:551 (M+H). RMN 1H (300 MHz, DMSO-de) 5 (ppm): 2,28-1,20 (m, 13H), 3,43-2,89 (m, 6H), 4,37-3,71 (m, 5H), 4,86-4,81 (m, 1H), 7,39 -7,27 (m, 4H), 8,36 (s, 1H).
Ejemplo 25
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método de acuerdo con el método descrito en el Proceso F, donde se utilizó 3,8-diazabicido[3.2.1]octan-3-formiato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumento de resolución y condiciones: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OZ, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es etanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 60:40 (relación de volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
isómero 1:LCMS (ESI) m/z:551 (M+H). RMN 1H (400MHz, DMSO-de) 8 (ppm): 0,98-0,92 (m, 6H), 1,96-1,57 (m, 3H), 2,87-2,59 (m, 5H), 3,29-3,12 (m, 2H), 3,63-3,42 (m, 2H), 3,99 (s, 1H), 4,67-4,24 (m, 5H), 7,46-7,27 (m, 4H), 8,30 (d,J=3,6Hz, 1H), 10,84 (s, 1H).isómero 2:
LCMS (ESI) m/z:551 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 8 (ppm): 0,98-0,89 (m, 6H), 2,03-1,54 (m, 4H), 2,76-2,57 (m,4H), 3,27-2,95 (m, 4H), 3,70-3,67 (m, 1H), 3,99-3,95 (m, 1H), 4,67-4,20 (m, 4H), 7,45-7,27 (m, 4H), 8,28 (s, 1H), 10,83 (s, 1H).
Ejemplo 26
La preparación se realizó de conformidad con el método de acuerdo con el método descrito en el Proceso J, donde se utilizó 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-formiato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato.
LCMS (ESI): m/z=498 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 810,86 (s, 1H), 8,06-8,15 (m, 1H), 7,23-7,47 (m, 4H), 4,85-5,09 (m, 2H), 4,11-4,31 (m, 2H), 3,92-4,04 (m, 1H), 3,54-3,62 (m, 2H), 3,05-3,17 (m, 1H), 2,84-2,95 (m, 1H), 2,72 2,82 (m, 1H), 2,55-2,63 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 1,91 (s, 1H), 1,61 - 1,77 (m, 1H), 1,40-1,55 (m, 1H), 1,22-1,33 (m, 1H), 0,84-1,01 (m, 6H), 0,40-0,53 (m, 1H).
Ejemplo 27
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método de acuerdo con el método descrito en el Esquema J, donde se utilizó 2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumento de resolución y condiciones: Waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OZ, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es etanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 60:40 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Condiciones cromatográficas de convergencia de ultra alto rendimiento: Columna: Daicel Chiralcel AD, 2,1*150 mm de D.I., 3 pm, fase móvil A: CO2, fase móvil B: etanol (DEA al 0,1 %), gradiente: tiempo 0-8 min, fase B 5-40 % (relación en volumen); caudal: 1 ml/min; temperatura de la columna 40 °C. Isómero 1: TR = 4,0 min; Isómero 2: TR = 4,8 min.
isómero 1: LCMS (ESI): m/z = 484 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-ds) 810,97 (s, 1H), 8,17-8,25 (m, 1H), 7,38 7,52 (m, 4H), 4,44-4,51 (m, 1H), 4,20-4,38 (m, 1H), 3,65-3,78 (m 1H), 3,50-3,63 (m, 4H), 3,13-3,33 (m, 3H), 2,69 2,86 (m, 2H), 2,49-2,58 (m, 3H), 1,44-1,51 (m, 1H), 0,93-1,06 (m, 7H), 0,51 (d,J= 5,6 Hz, 1H).
isómero 2: LCMS (ESI): m/z = 484 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 810,89 (s, 1H), 7,99-8,19 (m, 1H), 7,16 7,47 (m, 4H), 4,07-4,36 (m, 2H), 3,56-3,69 (m, 2H), 3,39-3,54 (m, 3H), 3,03-3,25 (m, 3H), 2,71-2,79 (m, 1H), 2,57 2,69 (m, 2H), 2,27-2,32 (m, 3H), 1,23-1,35 (m, 1H), 0,80-1,02 (m, 6H), 0,66 (c,J= 4,9 Hz, 1H).
Ejemplo 28
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso J, donde se utilizó yoduro de etilo en lugar de yoduro de metilo, y 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato.
LCMS (ESI): m/z=512 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 810,88 (s, 1H), 8,15 (d, J = 26,0 Hz, 1H), 7,54-7,39 (m, 4H), 4,71-4,52 (m, 4H), 4,26-4,19 (m, 1H), 4,15-4,06 (m, 1H), 3,75-3,57 (m, 2H), 3,29-3,11 (m, 2H), 3,01-2,93 (m, 1H), 2,85-2,78 (m, 1H), 2,72-2,64 (m, 4H), 2,09-1,98 (m, 1H), 1,96-1,86 (m, 1H), 1,88-1,59 (m, 3H), 1,04-0,87 (m, 7H).
Ejemplo 29
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso J, donde se utilizó bromoacetonitrilo en lugar de yoduro de metilo.
LCMS (ESI): m/z: 523 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 8 11,02 (s, 1H), 8,16 (d,J= 22,9 Hz, 1H), 7,38 (dd, J=11,8, 2,4 Hz, 4H), 4,61-4,44 (m, 2H), 4,34-4,08 (m, 3H), 4,05-3,94 (m, 2H), 3,85-3,80 (m, 2H), 3,23-3,01 (m, 2H), 2,77-2,66 (m, 2H), 1,90-1,53 (m, 4H), 0,94 (t,J= 5,6 Hz, 6H).
Ejemplo 30
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso J, donde se utilizó 1-fluoro-2-yodoetano en lugar de yoduro de metilo.
LCMS (ESI) m/z: 530 (M+H) RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 88,28 (d,J= 5,3 Hz, 1H), 8,05-8,15 (m, 1H), 7,33-7,49 (m, 4H), 4,22-4,70 (m, 8H), 3,48-3,74 (m, 1H), 3,21-3,43 (m, 2H), 2,88-3,16 (m, 3H), 2,74-2,86 (m, 1H), 1,44-2,02 (m, 4H), 0,97-1,11 (m, 6H).
Proceso J-1:
Condiciones de reacción: a) dimetil ferc-butil (2-yodoetoxi) silano, hidruro de sodio, N,N-dimetilformamida; b) 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-formiato de ferc-butilo, 4-dimetilaminopiridina, N-metilpirrolidona; c) solución de cloruro de hidrógeno/dioxano; d) ácido (S)-3-(ferc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico, diisopropiletilamina, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, N,N-dimetilformamida; e) ácido trifluoroacético, diclorometano.
Ejemplo 31
a) 5-(2-((terc-butildimetilsilil)oxietil)-4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
A 0 °C, se añadió hidruro sódico (0,53 g) a una solución de 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona (2,2 g) en N,N-dimetilformamida (30 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 20 min. Se añadió dimetilterc-butil(2-yodoetoxi)silano (2,82 g) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) para obtener 0,8 g de un producto sólido blanco.
b) 5-(2-((terc-butildimetilsilil)oxietil)-4-(8-terc-butiloxicarbonil-3,8-diazabiciclo[3,2,1]octan-3-il)-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
Se añadieron 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-formiato de terc-butilo (0,85 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,17 g) a una solución del producto de la etapa a) (0,2 g) en N-metilpirrolidona a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 150 °C durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1 ) para obtener 0,08 g de un producto sólido blanco.
c) 4-(3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-8-(2,4-dimetoxibencil)-5-(2-hidroxietil)-5,8-dihidropteridin-7(6H)-ona
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno/dioxano (3 ml) al producto de la etapa b) (0,08 g) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. La solución de reacción se centrifugó para obtener un sólido casi blanco (0,06 g).
d) terc-butil ((S)-2-(4-clorofenil)-3-3-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-(2-hidroxietil)-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carbamato)-3-oxopropil(isopropil)éster
A una solución del producto de la etapa c) (0,06 g) en N,N-dimetilformamida (10 ml) a 20 °C se añadieron ácido (S)-3-((terc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,04 g) y diisopropiletilamina (0,03 g). La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. Se añadió hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,04 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:2) para obtener 0,04 g de un producto sólido blanco.
e) 4-8-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-(2-hidroxietil)-5,6-dihidropteridin-7(8H)-ona
Se añadió ácido trifluoroacético (3 ml) al producto de la etapa d) (40 mg) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 3 horas. La solución de reacción se secó por centrifugación, y se añadió NaHCO3 y se agitó durante 20 min, obteniéndose por filtración un producto sólido casi blanco (10 mg).
LCMS (ESI) m/z: 528 (M+H). RMN 1H: (400 MHz, DMSO-da) 810,78 (d,J=19,6Hz, 1H), 8,07 (d,J= 29,4 Hz, 1H), 7,30-7,51 (m, 4H), 4,61-4,70 (m, 1H), 4,384-454 (m, 1H), 4,26-4,36 (m, 1H), 4,04-4,25 (m, 1H), 3,49-3,78 (m, 6H), 2,97-3,23 (m, 4H), 2,82-2,91 (m, 1H), 2,63-2,80 (m, 1H), 1,62-2,02 (m, 4H), 1,27-1,17 (m, 8H).
Ejemplo 32
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso K, donde se utilizó 3,8-diazabicido[3.2.1]octan-8-formiato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumento de resolución y condiciones: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OZ, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es isopropanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 60:40 (relación de volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Condiciones cromatográficas de convergencia de ultra alto rendimiento: Columna: Daicel Chiralcel AD, 2,1 * 150 mm ID, 3 pm, fase móvil A: CO2, fase móvil B: isopropanol (DEA al 0,1 %), gradiente: tiempo 0-8 min, fase B 5-40 % (relación en volumen); caudal: 1 ml/min; temperatura de la columna 40 °C. Isómero 1: TR = 4,3 min; Isómero 2: TR = 4,5 min.
Isómero 1:
LCMS (ESI) m/z: 499 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 88,23 (d,J =11,7 Hz, 1H), 7,50-7,21 (m, 4H), 5,79-5,59 (m, 1H), 4,64-4,47 (m, 2H), 4,08-3,94 (m, 2H), 3,70 -3,40 (m, 2H), 3,31-3,20 (m, 2H), 3,16-3,06 (m, 1H), 2,82 (d,J= 9,2 Hz, 0.5H), 2,75-2,62 (m, 2H), 2,17 (d,J= 8,7 Hz, 0,5H), 1,96-1,49 (m, 4H), 1,46 -1,28 (m, 3H), 0,98-0,87 (m, 6H).
Isómero 2:
LCMS (ESI) m/z:499 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 88,24 (d,J =16,4 Hz, 1H), 7,53-7,21 (m, 4H), 5,81-5,65 (m, 1H), 4,73-4,60 (m, 2H), 4,46 (d,J= 4,9 Hz, 0.5H), 4,19 (d,J= 5,1 Hz, 0.5H), 4,03 (d,J= 9,3 Hz, 0.5H), 3,76 (d,J= 9,3 Hz, 0.5H), 3,70-3,49 (m, 3H), 3,21-3,16 (m, 1H), 3,06-2,92 (m, 2H), 2,11-1,86 (m, 1.5H), 1,84-1,52 (m, 4H), 1,48 1,33 (m, 3.5H), 1,30-1,22 (m, 6H).
Ejemplo 33
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso K, donde se utilizó 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-formiato de ferc-butilo en lugar de ferc-butilpiperazin-1-carboxilato. El producto final se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 y un isómero 2. Instrumento de resolución y condiciones: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel OZ, 250 * 30 mm ID, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es etanol (NH3H2O al 0,1 %); A: B = 60:40 (relación de volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Condiciones cromatográficas de convergencia de ultra alto rendimiento: Columna: Daicel Chiralcel AD, 2,1 x 150 mm ID, 3 pm, fase móvil A: CO2, fase móvil B: etanol (DEA al 0,1 %), gradiente: tiempo 0-8 min, fase B 5-40 % (relación en volumen); caudal: 1 ml/min; temperatura de la columna 40 °C. Isómero 1: TR = 4,6 min; Isómero 2: TR = 5,0 min. Isómero 1:
LCMS (ESI) m/z: 499 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 610,87 (s, 1H), 8,23 (d,J= 11,7 Hz, 1H), 7,50-7,21 (m, 4H), 5,80-5,76 (m, 1H), 4,68-4,64 (m, 1H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,33-4,14 (m, 2H), 4,07-3,88 (m, 2H), 3,66-3,62 (m, 1H), 3,16-2,88 (m, 2H), 2,79-2,55 (m, 4H), 2,01 -1,77 (m, 1H), 1,72-1,49 (m, 2H), 1,48-1,36 (m, 2H), 1,31-1,18 (m, 1H), 1,04 0,85 (m, 4H), 0,54-0,44 (m, 1H).
Isómero 2:
LCMS (ESI) m/z: 499 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 610,69 (s, 1H), 8,24 (d,J= 3,8 Hz, 1H), 7,53-7,21 (m, 4H), 5,80-5,76 (m, 1H), 4,64-4,48 (m, 1H), 4,43-4,42 (m, 1H), 4,27-4,18 (m, 1H), 4,02-3,92 (m, 1H), 3,68-3,60 (m, 1H), 3,21 -3,02 (m, 1H), 2,95-2,64 (m, 4H), 2,02-1,70 (m, 2H), 1,60-1,22 (m, 5H), 1,04-0,83 (m, 6H), 0,43-0,40 (m, 1H).
Ejemplo 34
a) 1-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)etanona (Compuesto 34-1)
A 20 °C, se disolvió 1-(4,6-dicloropirimidin-5-il)etanona (2,5 g) en tetrahidrofurano (15 ml) y se añadió amoníaco (9 g). La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 5 horas, después se concentró y se diluyó con una pequeña cantidad de agua, y se filtró con aspiración para obtener un sólido blanco, que se secó al vacío para obtener 2 g de un sólido blanco, que se usó directamente en la siguiente etapa.
b) 1-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)etan-1-ol (Compuesto 34-2)
Se disolvió 1-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)etanona (1,5 g) en metanol (15 ml) a 20 °C y se enfrió a -10 °C. A continuación, se añadió borohidruro sódico (1 g) en lotes. Después de completarse la adición, la solución de reacción se calentó lentamente hasta 20 °C y se agitó durante otras 3 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se interrumpió con solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La solución de reacción se concentró y se disolvió con acetato de etilo (20 ml x 2). El licor madre se concentra para obtener un producto en bruto oleoso. El producto en bruto se separó mediante una columna cromatográfica para obtener 400 mg de un producto oleoso blanco. LC-MS (ESI) m/z: 174 (M+H).
c) 5-Cloro-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimidin[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona (Compuesto 34-3)
A 20 °C, se disolvieron 1-(4-amino-6-doropirimidin-5-il)etan-1-ol (300 mg) y N,N-diisopropiletilamina (282 mg) en tetrahidrofurano (3 ml). A continuación, se bajó la temperatura a -5 °C y se añadió lentamente carbonato de bis(tridorometilo) (300 mg), y se agitó a -5 °C durante 0,5 horas. Después, se elevó lentamente la temperatura a 18 °C y la solución de reacción se agitó durante 1,5 horas. Después de completarse la reacción, la reacción se interrumpió con una solución acuosa de bicarbonato sódico y se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 3). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener un producto en bruto oleoso. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna para obtener 108 mg de un sólido blanco. LC/MS (ESI) m/z: 200 (M+H).
d) (S)-5-cloro-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimidin[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona (Compuesto 34-4a) y (R)-5-cloro-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimidin[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona (Compuesto 34-4b)
El compuesto 34-3 se resolvió mediante columna quiral SFC para obtener los productos deseados Compuesto 34-4a y Compuesto 34-4b.
Las condiciones de resolución quiral SFC son las siguientes: instrumento: waters SFC200; columna de separación: Daicel Chiralcel AD, 250 * 50 mm ID, 10 pm; fase móvil: A: CO2, B: metanol (NH3H2O al 0,1 %), A: B = 65:35 (relación en volumen); caudal: 150 ml/min; Presión: 10 MPa (100 bar); Temperatura de la columna: 38 °C; Longitud de onda de detección: 220 nm; Tiempo de ciclo: 14 min; Pretratamiento de la muestra: 10 g disueltos en 300 ml de MeOH; Volumen de inyección: 16 ml.
Postratamiento: La muestra se concentró a 40 °C y se liofilizó para obtener el Compuesto 34-4a y el Compuesto 34-4b del título, respectivamente.
Ruta 1: Preparación del isómero 1 y del isómero 4
e) 5-((S)-4-metil-2-oxo-1,4-dihidro-2H-pirimidin[4,5-d][1,3]oxazin-5-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo (Compuesto 34-5a)
El compuesto 34-4a (2 g) y 2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo (3,58 g) se disolvieron en MeCN anhidro (20 ml), y se añadió DIEA (3,89 g), y la solución de reacción se purgó con nitrógeno, y el tubo se selló y se agitó a 95 °C durante 6 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se concentró para obtener el producto en bruto del producto objetivo. El producto en bruto se disolvió en DCM, se lavó con agua y se concentró para obtener el producto en bruto, que se separó y purificó mediante cromatografía en columna (EA: PE=1:1) para obtener 3,2 g de un sólido marrón pálido.
f) Clorhidrato de (4S)-5-(2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-4-metil-1,4-dihidro-2H-pirimido[4,5-d][1,3]oxazin-2-ona (Compuesto 34-6a)
El producto de la etapa e) (3,2 g) se disolvió en HCl/i-PrOH (10 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Una vez completada la reacción, la solución de reacción se concentró para obtener un producto en bruto, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación.
g) Compuesto 34-7a
El producto de la etapa f) (3,3 g), ácido (S)-3-(ferc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico (4,9 g), HATU (6,32 g) y DIPEA (4,3 g) se disolvieron en DMF anhidra (50 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se vertió en 100 ml de acetato de etilo y se lavó con agua (20 ml * 3) y 10 ml de solución saturada de cloruro sódico. La fase orgánica se secó y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE: EA=1:1) para obtener 7,2 g de sólido marrón. MS (ESI) m/z: 585 (M+H).
h) Compuesto 34-8a
El producto de la etapa g) (7,2 g) se disolvió en MeOH (25 ml), después se añadió HCl/dioxano (70 ml), y la solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró para obtener un producto en bruto oleoso de color rojo. El producto en bruto se disolvió en MeOH (20 ml) y se liberó con Na2CO3 y se concentró para obtener 6 g de producto en bruto.
i) Isómero 1 e Isómero 4
El compuesto 34-8a se resolvió mediante columna quiral SFC para obtener el isómero 1 y el isómero 4.
Condiciones de resolución quiral SFC: instrumento: waters SFC200; columna de separación: Daicel Chiralcel AD, 250 * 50 mm ID, 10 pm; fase móvil: A: CO2, B: MeOH (NH3H2O al 0,1 %), A:B = 75:25; caudal: 70 ml/min; Presión: 10 MPa (100 bar); Temperatura de la columna: 38 °C; Longitud de onda de detección: 254 nm; Tiempo de ciclo: 5 min; Pretratamiento de la muestra: 10 g disueltos en 200 ml de MeOH; Volumen de inyección: 16 ml.
Postratamiento: La muestra se concentró a 40 °C y se liofilizó para obtener el isómero 1 y el isómero 4 del compuesto del título, respectivamente.
Ruta 2: Preparación del isómero 2 y del isómero 3
Utilizando el compuesto 34-4b como materia prima, de acuerdo con el método descrito en la Ruta 1, se prepararon respectivamente el isómero 2 y el isómero 3.
isómero 1 LCMS m/z: 485 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 810,70 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,6Hz, 2H), 6,13 (c, J = 6,6 Hz, 1H), 4,51 (s, 1H), 4,42-4,30 (m, 1H), 3,53-3,45 (m, 1H), 3,28-3,06 (m, 5H), 3,01-2,59 (m, 3H), 1,52-1,34 (m, 4H), 1,08-0,97 (m, 6H), 0,93-0,84 (m, 1H).
isómero 4: LCMS m/z: 485 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 810,73 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,41-7,32 (m, 4H), 6,14 (c,J= 8,0 Hz, 1H), 4,40-4,36 (m, 1H), 4,19-4,11 (m, 1H), 3,62-3,51 (m, 2H), 3,49-3,35 (m, 1H), 3,24-3,05 (m, 4H), 2,73-2,63 (m, 2H), 1,45 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 1,33 (d,J= 8,0 Hz, 2H), 1,12 (c,J= 4,0 Hz, 1H), 0,95-0,88 (m, 6H), 0,26 (c,J= 4,0 Hz, 1H).
isómero 2: LCMS m/z: 485 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,86 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,54 -7,27 (m, 4H), 6,32-6,18 (m, 1H), 4,69-4,52 (m, 1H), 4,27-3,97 (m, 2H), 3,66-3,43 (m, 2H), 3,29-2,92 (m, 6H), 2,61-2,55 (m, 1H), 1,63-1,58 (m, 1H), 1,53-1,28 (m, 3H), 1,28-1,12 (m, 6H).
isómero 3: LCMS m/z: 485 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,71 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,46-7,39 (m, 1H), 7,36-7,28 (m, 3H), 6,00 (c,J= 6,4 Hz, 1H), 4,53 (s, 1H), 4,46 - 4,33 (m, 1H), 3,56-3,44 (m, 2H), 3,26-3,09 (m, 5H), 3,00-2,71 (m, 2H), 1,43-1,38 (m, 3H), 1,10-0,93 (m, 7H), -0,07--0,11 (m, 1H).
Medición de la configuración por difracción monocristalina:
(1) Medición de la configuración del isómero 1
Preparación de monocristales: se pesó el compuesto del isómero 1 (50,0 mg) y 3,0 ml de isopropanol en un frasco de vidrio con tapón de rosca de 5 ml, y se agitó durante 5 min. El sólido se disolvió y se clarificó. Se pesaron 13,0 mg de ácido oxálico dihidratado y se añadieron al frasco de vidrio anterior. Un sólido blanco se precipitó gradualmente fuera del frasco de vidrio. Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, se depositó una gran cantidad de sólido blanco en el frasco de vidrio. Se añadieron 1,5 ml de metanol y 0,2 ml de agua purificada al frasco de vidrio, y el sólido blanco desapareció gradualmente, mientras se aclaraba la solución. Se continuó agitando durante 1 h. La solución se filtró a través de una membrana microporosa de 0,22 pm en un frasco de vidrio con tapón de rosca de 20ml, y se cubrió la boca del frasco de vidrio con una envoltura de plástico. La envoltura de plástico se perforó en la boca del frasco con una aguja para formar 8 pequeños agujeros, y la mezcla se dejó reposar a temperatura ambiente durante 10 días para obtener un monocristal de oxalato del compuesto del isómero 1.
Experimento de difracción de monocristal:
Difractómetro de rayos X de monocristal: BRUKER KAPPA APEX-II CCD
Longitud de onda: Cu Ka (A =1,54178 A)
Temperatura de prueba: 296K
Programa informático de análisis estructural: SHELXL-2018
Datos del monocristal: fórmula molecular: C50H60Cl2N12O-i0; peso molecular: 1060,00; sistema cristalino: sistema cristalino ortorrómbico; grupo espacial: C 222 ; parámetros de la celda unitaria: a = 15,719(2) A, b = 17,411(2) A, c = 48,335(6) A, a = 90°, p = 90°, y = 90°; volumen de la celda unitaria: V = 13228(3) A3; número de fórmulas moleculares contenidas en la celda unitaria: Z = 8; densidad calculada: Dcalc= 1,064 g/ cm3; R(Fo): 0,0612; Rw(Fo2): 0,1856; bondad de ajuste (S): 1,023; Parámetro Flack: 0,040(11).
Descripción de la estructura: La difracción de rayos X de monocristal y el análisis de estructura muestran que el monocristal obtenido es un oxalato del isómero 1. La unidad estructural asimétrica del cristal contiene dos moléculas de isómero y una molécula de ácido oxálico. El diagrama esquemático de una sola molécula del compuesto isómero 1 se muestra en la Fig. 3, y el monocristal de oxalato se muestra en la Fig. 4. La fórmula estructural es la siguiente:
(2) Medición de la configuración del isómero 3
Preparación de monocristales: El monocristal de oxalato del isómero 3 se preparó de acuerdo con el método descrito anteriormente en la preparación del monocristal del isómero 1.
Experimento de difracción de monocristal:
Difractómetro de rayos X de monocristal: BRUKER D8 VENTURE PHOTON II
Longitud de onda: Ga K a (A = 1,34139 A)
Temperatura de prueba: 173K
Programa informático de análisis estructural: SHELXL-2018
Datos del monocristal: fórmula molecular: C52H64ChN12O15; peso molecular: 1168,05; sistema cristalino: sistema monoclínico; grupo espacial: P 2 -i/c; parámetros de la celda unitaria: a = 20,1588(13) A, b = 21,4744(14) A, c = 14,4055(9) A, a = 90°, p = 98,259(3)°,<y>= 90°; volumen de la celda unitaria: V = 6171,4(7) A3; número de fórmulas moleculares contenidas en la celda unitaria: Z = 4; densidad calculada: Dcalc= 1,257 g/cm3; R(Fo): 0,0634; Rw(Fo2): 0,2016; bondad de ajuste (S): 1,053.
Descripción de la estructura: La difracción de rayos X de monocristal y el análisis de estructura muestran que el monocristal obtenido es un hidrato de oxalato del isómero 3. La unidad estructural asimétrica del cristal contiene tres moléculas de isómero 3, dos moléculas de ácido oxálico y una molécula de agua, donde el isómero 3 y el ácido oxálico forman oxalato. El diagrama esquemático de una sola molécula del compuesto del isómero 3 se muestra en la Figura 5, y la unidad estructural asimétrica del monocristal de oxalato se muestra en la Figura 6. La fórmula estructural es la siguiente:
Proceso L:
Condiciones de reacción: a) (2,4-dimetoxifenil)metilamina, trietilamina, tetrahidrofurano; b) 4,6-didoropirimidin-5-amina, trietilamina, isopropanol; c) yoduro de metilo, hidruro de sodio, N,N-dimetilformamida; d) terc-butilpiperazin-1-carboxilato, 4-dimetilaminopiridina, N-metilpirrolidona; e) Solución de cloruro de hidrógeno/dioxano; f) ácido (S)-3-(tercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, diisopropiletilamina, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, N,N-dimetilformamida; g) ácido trifluoroacético.
Ejemplo 35
a) 2-(2,4-dimetoxibencil)aminoacetato de etilo
A una solución de bromoacetato de etilo (1,0 g) en THF (10 ml) se añadieron trietilamina (0,6 g) y (2,4-dimetoxifenil)metilamina (1,0 g) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 3:1) para obtener 1,3 g de un producto sólido blanco.
b) 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona
Se añadieron trietilamina (1,56 g) y 4,6-dicloropirimidin-5-amina (0,84 g) a una solución de 2-(2,4-dimetoxibencil)aminoacetato de etilo (1,3 g) en isopropanol (10 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante 3 horas. La solución de reacción se filtró para obtener 0,7 g de un producto sólido blanco.
c) 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona
A 0 °C, se añadió hidruro sódico (76,7 mg) a una solución de 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona (0,5 g) en N,N-dimetilformamida (5 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 20 min. Se añadió yoduro de metilo (255 mg) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) para obtener 0,5 g de un producto sólido blanco.
d) 4-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)piperazin-1-carboxilato
Terc-butilpiperazin-1-carboxNato (0,53 g) y 4-dimetilaminopiridina (0,52 g) se añadieron a una solución de 4-cloro-8(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona (0,5 g) en N-metilpirrolidona(10 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 150 °C durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener 0,5 g de un producto sólido blanco.
e) 8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona
Se añadió solución de cloruro de hidrógeno/dioxano (5 ml) a 4-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetrahidroteridin-4-il)piperazin-1-carboxilato (0,1 g) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. La solución de reacción se centrifugó para obtener un sólido casi blanco (0,1g).
f) (S)-ferc-butil(2-(4-clorofenil)-3-(4-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato
Se añadieron ácido (S)-3-((terc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,12 g) y diisopropiletilamina (0,10 g) se añadieron a una solución de 8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona (0,1 g) en N,N-dimetilformamida (10 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. Se añadió hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,12 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :2 ) para obtener 0,1 g de un producto sólido blanco.
g) (S)-4-(4-(2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)piperazin-1-il)-5-metil-7,8-dihidropteridin-6(5H)-ona
Se añadió ácido trifluoroacético (5 ml) a (S)-terc-butil(2-(4-clorofenil)-3-(4-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)(isopropil)carbamato (100 mg) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 3 horas. La solución de reacción se centrifugó para obtener un sólido casi blanco (20 mg).
LCMS (ESI) m/z: 472 (M+H) RMN 1H (400 MHz, CDCla) 87,89 (s, 1H), 7,22-7,29 (m, 2H), 7,10-7,18 (m, 2H), 4,08 4,17 (m, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,32 -3,45 (m, 2H), 3,15-3,30 (m, 3H), 3,08 (s, 3H), 2,82 -2,93 (m, 2H), 2,51-2,78 (m, 4H), 1,21-1,31 (m, 2H), 1,03-1,12 (m, 6H).
Proceso M:
Condiciones de reacción: a) 2,4-dimetoxibencilamina, N,N-diisopropiletilamina, acetonitrilo; b) tetrahidrofurano, carbonato de potasio, 2-cloro-2-oxoacetato de metilo; c) N,N-diisopropiletilamina, etanol; d) 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de tere-butilo, N,N-diisopropiletilamina, acetonitrilo; e) N,N-dimetilformamida, carbonato de potasio, yoduro de metilo; f) ácido trifluoroacético; g) ácido (S)-3-(terc-butoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, N,N-diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida, HATU; h) diclorometano, solución de cloruro de hidrógeno/isopropanol.
Ejemplo 36
a) 6-doro-N-(2,4-dimetoxibencil)pirimidin-4,5-diamina
4,6-Didoropirimidin-5-amina (2 g), N,N-diisopropiletilamina (4,7 g) y 2,4-dimetoxibencilamina (2,45 g) se disolvieron en acetonitrilo (20 ml). La solución de reacción se agitó a 90 °C durante 5 horas y, a continuación, se concentró para obtener un producto en bruto, que luego se disolvió en diclorometano y se lavó con una pequeña cantidad de agua. La fase orgánica se secó por evaporación rotatoria para obtener el producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA=1:1), y se concentró para obtener un producto objetivo sólido de color amarillo pálido (3,5 g).
b) 2-((4-cloro-6-(((2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-5-il)amino)-2-oxoacetato de metilo
Se disolvieron 6-cloro-N-(2,4-dimetoxibencil)pirimidin-4,5-diamina (1,5 g), carbonato potásico (1,1 g) y 2-cloro-2-oxoacetato de metilo (623 mg) en etanol anhidro (20 ml). La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. La solución de reacción se vertió en 30 ml de acetato de etilo y se lavó con agua (10 ml * 2). La fase orgánica se concentró hasta un peso constante, obteniéndose un producto en bruto. El producto en bruto se purificó y se disolvió con (PE:EA=3:1) para obtener un producto sólido blanco (1,6 g).
c) 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-6,7-diona
Se disolvió 2-((4-cloro-6-(((2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-5-il)amino)-2-oxoacetato de metilo (1 g) en etanol anhidro (10 ml) y se añadió N,N-diisopropiletilamina (1,02 g). La solución de reacción se agitó a 90 °C-110 °C durante 2 horas bajo protección de nitrógeno. A continuación, la solución de reacción se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se disolvió en diclorometano, se ajustó a acidez débil con ácido clorhídrico diluido, y se lavó con agua para retirar las sales. La fase orgánica se concentró para obtener un producto en bruto. A continuación, el producto en bruto se purificó y se disolvió con (PE:EA=3:1) para obtener un producto oleoso blanco (800 mg).
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 812,15 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 6,88 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,59 (d,J= 2,3 Hz, 1H), 6,32 (dd,J= 8,4, 2,3 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 384 (s, 3H), 3,72 (s, 3H).
d) ferc-butil-3-(8-(2,4-dimetoxibencil)-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato
Se disolvieron 4-cloro-8-(2,4-dimetoxibencil)-5,8-dihidropteridin-6,7-diona (250 mg), (1R,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de terc-butilo (456 mg) y N,N-diisopropiletilamina (278 mg) en acetonitrilo anhidro (5 ml). Bajo protección con nitrógeno, la solución de reacción se selló y se agitó a 90 °C durante 3 horas. A continuación, la solución de reacción se concentró para obtener una sustancia oleosa en bruto. La sustancia oleosa en bruto se disolvió en acetato de etilo (30 ml), se ajustó a pH = 3-4 con ácido clorhídrico diluido, se lavó con agua hasta pH = 5-6 y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA=1:1) para obtener 200 mg de un sólido blanco, m/z = 525(M+H).
e) terc-butil-3-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato
Terc-butil-3-(8-(2,4-dimetoxibencil)-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidroteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato (180 mg), yoduro de metilo (146 mg) y carbonato de potasio (142 mg) se disolvieron en DMF anhidra (3 ml). La solución de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora, después se vertió en 30 ml de EA y se lavó con agua (10 ml * 2) y solución saturada de cloruro sódico (10 ml), y la fase orgánica se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:Ea =3:1) para obtener 180 mg de un sólido amarillo pálido.
f) 4-((1R,5S)-3,8-diazabicido[3.2.1]octan-3-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-6,7-diona
Terc-butil-3-(8-(2,4-dimetoxibencil)-5-metil-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidropiridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato (120 mg) se disolvió en DCM anhidro (1 ml), y se añadió gota a gota TFA (2 ml) y la solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción era roja. La solución de reacción se concentró directamente para obtener un producto en bruto, que se ajustó a pH = 8-9 con solución de bicarbonato sódico, después se concentró, se disolvió en THF, y se filtró para retirar las sales, y el residuo se separó mediante cromatografía en columna (DCM:MeOH=10:1) para obtener 60 mg de un producto oleoso.
g) ((S)-2-(4-clorofenil)-3-3-(5-metil-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-3-oxopropil carbamato de terc-butilo (isopropilo)
Compuesto 4-(3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-6,7-diona (60 mg), ácido (S)-3-(tercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico (90 mg), hexafluorofosfato de (2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (130 mg), y N,N-diisopropiletilamina (102 mg) se disolvieron en DMF anhidro (2 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y, a continuación, se vertió en 20 ml de acetato de etilo y se lavó con agua (50 ml * 2). La fase orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM:MeOH=10 :1 ) para obtener 120 mg de un producto oleoso.
h) 4-(8-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)propionil)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-5-metil-5,8-dihidropteridin-6,7-diona
((S)-2-(4-clorofenil)-3-3-(5-metil-6,7-dioxo-5,6,7,8-tetrahidropteridin-4-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-3-oxopropil carbamato de terc-butilo (isopropilo) se disolvió en DCM (2 ml), y se añadió gota a gota Hcl/i-PrOH (2 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y después se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó por HPLC y se liofilizó para obtener 14 mg de un sólido blanco. m/z: 499 (M+H).
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 88,32 (d,J= 25,7 Hz, 1H), 7,68 -7,32 (m, 4H), 5,14 (m, 1H), 4,71-4,28 (m, 3H), 4,12-3,92 (m, 3H), 3,80-3,40 (m, 3H), 3,23-3,15 (m, 2H), 2,24-2,16 (m, 1H), 1,92-1,82 (m, 2H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,48 -1,16 (m, 8H).
Ejemplo 37
Proceso N:
Condiciones de reacción: a) trietilamina, dicarbonato de di-terc-butilo, diclorometano; b) bis(trimetilsilil)amida sódica (2,0 mol/l en tetrahidrofurano), bromometil metil éter, 2-metiltetrahidrofurano; c) (R)-4-benciloxazolidin-2-ona, diisopropiletilamina, cloruro de trimetilacetilo, tolueno; d) Tetracloruro de titanio (1mol/l en tolueno), diisopropiletilamina, diclorometano; e) Solución de peróxido de hidrógeno (30 %), hidróxido de litio monohidratado, tetrahidrofurano, agua; f) 2,5-diazabicido[4.1.0]heptan-2-carboxNato de ferc-butilo, 4-dimetilaminopiridina, N-metilpirrolidona; g) Solución de cloruro de hidrógeno/ dioxano (4,0 M); h) hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida; i) Solución de cloruro de hidrógeno/dioxano (4,0 M).
a) ciclopropilcarbamato de ferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron ciclopropilamina (9,3 g) y trietilamina (19,7 g) en diclorometano (100 ml) a 20 °C, y se añadió gota a gota dicarbonato de di-fercbutilo (35,48 g) a 0 °C. La reacción se llevó a cabo a 20 °C durante 16 horas. Después de completarse la reacción, se retiró el disolvente para obtener 24,3 g de líquido incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 (ppm) 0,47-0,50 (m, 2H), 0,66-0,72 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 2,53 (m, 1H), 4,79 (s, 1H).
b) ciclopropil (metoximetil) carbamato de ferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, ciclopropil carbamato de ferc-butil (24,3 g) se disolvió en 2-metiltetrahidrofurano (100 ml), y se añadió bis(trimetilsilil)amida de sodio (120 ml) gota a gota a 0 °C. La solución de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora, y se añadió bromometil metil éter (35,7 g) gota a gota a 0 °C. La solución de reacción se agitó a 0 °C durante 6 horas y se vertió en 50 g de agua helada, se separó y se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 2). La solución de reacción se concentró directamente para obtener 29,1 g de un producto líquido incoloro, que se usó directamente en la etapa siguiente sin purificación.
c) (R)-4-bencil-3-(2-(4-(clorofenil)acetil)oxazolidin-2-ona
Bajo protección con nitrógeno, ácido 2-(4-clorofenil)acético (50 g), (R)-4-benciloxazolidin-2-ona (45,5 g) y diisopropiletilamina (127,3 g) disueltos en tolueno (600 ml) a 15 °C y, a continuación, se añadió gota a gota cloruro de trimetilacetilo (38,4 g). La solución de reacción se agitó a reflujo durante 16 horas, a continuación, se vertió en 200 ml de agua, se separó, se lavó con 120 ml de solución saturada de cloruro sódico. La fase orgánica se secó y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA=5:1) para obtener 32 g de un sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm) 2,88-3,02 (m, 2H), 4,12 4,37 (m, 4H), 4,64-4,70 (m, 1H), 7,13-7,16 (m, 2H), 7,23-7,32 (m, 5H), 7,39-7,42 (m, 2H).
d) ((S)-3-((R)-4-bencil-2-oxazolidin-3-il)-2-(4-clorofenil)-3-oxopropil)(ciclopropilo) carbamato deferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, (R)-4-bencil-3-(2-(4-(clorofenil)acetil)oxazolidin-2-ona (3,48 g) se disolvió en diclorometano (60 ml), y se añadió gota a gota solución de tetracloruro de titanio tolueno (13 ml) a 0°C. La solución de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se añadió gota a gota DIPEA (1,49 g) y la solución de reacción se agitó a 0 °C durante 1,5 horas, y se añadió gota a gota ciclopropil (metoximetil)carbamato de fercbutilo (2,77 g). La solución de reacción se agitó a 0 °C durante 6 h, y la reacción se completó. A continuación, la solución de reacción se vertió en 30 ml de solución saturada de cloruro amónico, se separó y se lavó con 120 ml de solución saturada de cloruro sódico. La fase orgánica se secó y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE:EA=10:1) para obtener 2,50 g de un producto oleoso incoloro.
e) Ácido (S)-3-(ferc-butoxicarbonil(ciclopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico
Se disolvió hidróxido de litio monohidratado (0,63 g) en agua (18 ml), se añadió tetrahidrofurano (20 ml) y peróxido de hidrógeno (1,6 ml) gota a gota a 0 °C. Se añadió ((S)-3-((R)-4-bencil-2-oxazolidin-3-il)-2-(4-clorofenil)-3-oxopropil)(ciclopropil)carbamato de ferc-butilo (2,50 g) a 0 °C. La solución de reacción se agitó a 0 °C durante 3 h, y se añadió una solución saturada de sulfito sódico (15 ml) a la solución de reacción, se hizo reaccionar durante 1,5 h, se ajustó a pH = 3-4 con una solución saturada de bisulfato de potasio, se extrajo con acetato de etilo (30 ml * 2) y se separó. La fase orgánica se secó y se concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA=1:1) para obtener 1,26 g de un sólido incoloro. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 0,45-0,48 (m, 2H), 0,60-0,64 (m, 2H), 1,30 (s, 9H), 2,19 (s, 1H), 3,61 (d,J= 7,6Hz, 1H), 3,95 (t,J= 8,0 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 26,8, 8,8 Hz, 4H), 12,7 (s, 1H).
f) 5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron (R)-4-cloro-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (300 mg), 2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-carboxilato de ferc-butilo (455 mg) y 4-dimetilaminopiridina (600 mg) en N-metilpirrolidona (5 ml). La solución de reacción se agitó a 120 °C durante 12 horas, a continuación, se vertió en 50 ml de agua, se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2) y se lavó con 15 ml de solución saturada de cloruro sódico. La fase orgánica se secó y se desolventizó para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE:EA=1:1-1:2) para obtener 400 mg de un sólido amarillo.
g) (SR)-4-(2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona 5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabicido[4.1.0]heptan-2-carboxilato (400 mg) se disolvió en dioxano (5 ml) y se añadió gota a gota una solución de cloruro de hidrógeno/dioxano (5 ml). La solución de reacción se agitó a 25 °C durante 2 horas. Después de completarse la reacción, la solución de reacción se concentró directamente para obtener un sólido amarillo crudo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
h) ((S)-2-(4-clorofenil)-3-((1R,6S)-5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-3-oxopropil) (ciclopropil) carbamato de ferc-butilo
Bajo protección con nitrógeno, (5R)-4-(2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona (270 mg), compuesto 5 (389 mg), hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (474 mg) y diisopropiletilamina (671 mg) se disolvieron en N,N-dimetilformamida (10 ml). La solución de reacción se agitó a 25 °C durante 3 horas hasta que se completó la reacción. A continuación, la solución de reacción se vertió en 50 ml de agua, se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2), se lavó con solución saturada de cloruro sódico (10 ml * 3) y la fase orgánica se secó y concentró para obtener un producto en bruto. El producto en bruto se separó y purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA=1:2) para obtener 320 mg de un sólido amarillo.
i) (R)-4-((1R, 6S)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona y (<r>)-4-((1S, 6R)-5-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilamino)propionil)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-5-metil-5,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7(6H)-ona
((S)-2-(4-clorofenil)-3-((1R,6S)-5-((R)-5-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirido[2,3-d]pirimidin-4-il)-2,5-diazabiciclo[4.1.0]heptan-2-il)-3-oxopropil)(ciclopropil)carbamato de ferc-butilo (320 mg) se disolvió en dioxano (2,5 ml) y se añadió gota a gota una solución de cloruro de hidrógeno/dioxano (2,7 ml). La solución de reacción se agitó a 25 °C durante 14 h, y la reacción se completó. A continuación, la solución de reacción se concentró para obtener un producto en bruto, se ajustó a pH = 13-14 con una solución saturada de carbonato potásico, se extrajo con DCM (10 ml *2 ), se lavó con agua (10 ml) y se desolventizó. El producto se resolvió mediante cromatografía de fluidos supercríticos para obtener un isómero 1 (61,2 mg) y un isómero 2 (31,2 mg).
Instrumento de resolución y condiciones: waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AS, 250 x 30 mm de DI, 5 pm; Fase móvil: A es CO2, B es isopropanol (NH3H2O al 0,1 %); A:B=70:30 (relación de volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
Condiciones cromatográficas de convergencia de ultra alto rendimiento: Columna: Daicel Chiralcel AD, 2,1 * 150 mm ID, 3 pm, fase móvil A: CO2, fase móvil B: isopropanol (DEA al 0,1 %), gradiente: tiempo 0-8 min, fase B 5-40 % (relación en volumen); caudal: 1 ml/min; temperatura de la columna 40 °C. Isómero 1: TR = 3,7 min; Isómero 2: TR = 4,6 min.
isómero 1: LCMS(ESI)m/z:481(M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 0,03-0,12 (m, 2H), 0,25-0,30 (m, 2H), 0,66-0,70 (m, 1H), 0,96-1,05 (m, 3H), 1,35-1,40 (m, 1H), 1,93-2,11 (m, 2H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,67-2,77 (m, 2H), 2,80-2,86 (m, 1H), 3,03-3,25 (m,4H), 3,39-3,48 (m, 1H), 3,69-3,79 (m, 1H), 4,24-4,34 (m, 2H), 7,34-7,41 (m, 4H), 8,17 (s, 1H), 10,52 (s, 1H).
isómero 2: LCMS (ESI) m/z:481(M+H). RMN 1H (400 MHz,DMSO-d6) 8 (ppm): 0,14-0,21 (m, 2H), 0,30-0,37 (m, 2H), 0,93-1,07 (m, 4H), 2,03-2,34 (m, 3H), 266-286 (m, 2H), 3,10-3,25 (m, 4H), 3,36-3,94 (m, 4H), 4,07-4,15 (m, 1H), 4,41-4,45 (m, 1H), 7,32-7,42 (m, 4H), 8,19 (s, 1H), 10,48 (s, 1H).
Ejemplo 38
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso N, donde se utilizó 3,8diazabiddo[3.2.1]octan-8-carboxilato de terc-butilo en lugar de 2,5-diazabicido[4.1.0]heptan-2-carboxNato deterc-butilo para preparar el compuesto objetivo.
LCMS (ESI) m/z:495 (M+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 6 (ppm): 0,11-0,22 (m, 2H), 0,29-0,37 (m, 2H), 1,01 (dd,J= 30,8, 6,8Hz, 3H), 1,52-1,69 (m,1H) 1,72-1,93 (m, 3H), 2,04-2,14 (m, 1H), 2,25 (d, J = 16Hz, 1H), 2,32 (d, J = 13,2Hz, 1H), 2,66-2,83 (m, 3H), 3,11-3,26 (m, 3H), 3,52 (d, J = 16Hz, 1H), 3,75-3,83 (m, 1H), 4,09-4,15 (m, 1H), 4,45-4,63 (m, 2H), 733-7,41 (m, 4H), 8,14 (d,J= 32 Hz, 1H), 10,57 (d,J= 9,6Hz, 1H).
Ejemplo 39
Proceso P:
Condiciones de reacción: a) terc-butilamina, N,N-dimetilformamida; b) 2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboran-2-il)ciclopropano carboxilato de etilo, acetato de paladio, triciclohexilfosfina, carbonato de potasio, tolueno, agua; c) ácido sulfúrico, diclorometano; d) trietilamina, etanol; e) 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de terc-butilo, N,N-diisopropiletilamina, N,N-dimetilformamida; f) solución de cloruro de hidrógeno/dioxano; g) ácido (S)-3-(fercbutoxicarbonil(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)-propiónico, diisopropiletilamina, hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7 benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea, N,N-dimetilformamida; h) SFC; i) solución de cloruro de hidrógeno/dioxano.
a) N-(ferc-butil)-6-cloro-5-yodopirimidin-4-amina
Se mezcló 4,6-dicloro-5-yodopirimidina (4,00 g) con N,N-dimetilformamida (60 ml) bajo agitación, y se añadióterc-butilamina (5,32 g) a temperatura ambiente bajo protección de nitrógeno. La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se vertió en agua (300 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato sódico anhidro. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida para obtener un sólido amarillo pálido (4,1 g).
b) 2-(4-(ferc-butil)-6-cloropirimidin-5-il)ciclopropilcarboxilato de etilo
Bajo protección con nitrógeno, se disolvieron N-ferc-butil-6-cloro-5-yodopirimidin-4-amina (4,10 g) y 2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro-2-il)ciclopropan-1-carboxilato (6,32 g) en tolueno (64,00 ml) y agua (16,00 ml). Se añadieron, respectivamente, triciclohexilfosfina (1,475 g), acetato de paladio (1,475 g) y carbonato potásico (0,59 g), y la mezcla se agitó a 90 °C durante toda la noche. A continuación, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato sódico anhidro. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida, y el producto se purificó mediante cromatografía en placa sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 10 :1 ) para obtener 2,50 g de un sólido amarillo oscuro.
c) 2-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)ciclopropilcarboxilato de etilo
Se añadió 2-(4-(ferc-butil)-6-cloropirimidin-5-il)ciclopropilcarboxilato de etilo (2,50 g) a diclorometano (40,00 ml). Bajo protección con nitrógeno a 0-5 °C, se añadió ácido sulfúrico (4,94 g) gota a gota. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después se enfrió a 0 °C, y la mezcla se neutralizó a pH = 8 con solución saturada de bicarbonato sódico. La solución de reacción se extrajo con diclorometano (2 * 50 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato de magnesio anhidro. Después de la filtración, el filtrado se concentró a presión reducida para obtener 2,4 g de líquido amarillo.
d) 1-cloro-7,7a-dihidro-5SH-ciclopropano[4,5]pirido[2,3-d]pirimidin-6(6aH)-ona
Bajo protección de nitrógeno a temperatura ambiente, se añadieron 2-(4-amino-6-cloropirimidin-5-il)ciclopropilcarboxilato de etilo (2,40 g) y trietilamina (6,03 g) a 200,00 ml de solución de etanol. La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante la noche. Después, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1 :1 ) para obtener 1,05 g de un sólido amarillo pálido.
e) 3-(6-oxo-6,6a,7,7a-tetrahidro-5H-ciclopropanopirido[4,5]pirimidin-1-il)-3,8-diazabiciclo [3.2.1] octan-8-carboxilato de ferc-butilo
3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de ferc-butilo (0,43 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,39 g) se añadieron a una solución de 1-cloro-7,7a-dihidro-5H-ciclopropano[4,5]pirido[2,3-d]pirimidin-6(6aH)-ona (0,20 g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 110 °C durante 24 horas. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para obtener 0,30 g de un sólido blanco.
f) 1-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-7,7-dihidro-5H-ciclopropano[4,5]pirido[2,3-d]pirimidin-6(6aH)-ona
Se añadió solución de cloruro de hidrógeno/dioxano 4 M (2 ml) a 3-(6-oxo-6,6a,7,7a-tetrahidro-5H-ciclopropanopiridin[4,5]pirimidin-1-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de ferc-butilo (0,15 g) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. La solución de reacción se centrifugó para obtener un sólido casi blanco (0,12 g).
g) (isopropil)éster ((2R)-2-(4-clorofenil)-3-oxo-3-3-(6-oxo-6,6a,7,7a-tetrahidro-5H-ciclopropil-4,5]pirido[2,3-d]pirimidin-1-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propil carbamato de ferc-butilo
Se añadieron ácido (S)-3-((ferc-butoxicarbonil)(isopropil)amino)-2-(4-clorofenil)propiónico (0,18 g) y diisopropiletilamina (0,17 g) se añadieron a una solución de 1-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-7,7-dihidro-5H-ciclopropano[4,5]pirido[2,3-d]pirimidin-6 (6aH)-ona (0,12 g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 min. Se añadió hexafluorofosfato de 2-(óxido de 7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea (0,20 g) a 20 °C, y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 1 hora. La solución de reacción se vertió en agua (100 ml) y se añadió acetato de etilo (100 ml) para la extracción. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de cloruro sódico (100 ml * 3), se secó con sulfato sódico anhidro y se secó por centrifugación. El producto se purificó mediante cromatografía en placa de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1,5) para obtener 0,20 g de un sólido blanco.
h) resolución quiral
Instrumento de resolución y condiciones: Waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AS, 250 * 50 mm ID, 10 pm; Fase móvil: A es CO2, B es metanol (NH3H2O al 0,1 %), A:B = 60:40 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
i) Preparación del isómero 1 y del isómero 2
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno/ dioxano 4 M (1 ml) al isómero 1a (20 mg) a 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 3 horas. La solución de reacción se centrifugó y la solución resultante se separó por HPLC para obtener un sólido casi blanco (10 mg).
De la misma manera, el isómero 2 se preparó a partir del isómero 2a.
isómero 1: LCMS (ESI) m/z: 495 (M+H) RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 88,69 - 8,59 (m, 1H), 7,34-7,52 (m, 4H), 5,39-5,53 (m, 1H), 4,69-4,81 (m, 3H), 4,52-4,67 (m, 1H), 4,09-4,38 (m, 2H), 3,75-3,81 (m, 1H), 3,64-3,73 (m, 2H), 3,45-3,53 (m, 2H), 3,26-3,36 (m, 1H), 2,95-3,06 (m, 1H), 1,96-2,07 (m, 1H), 1,50-1,66 (m, 2H), 1,21-1,30 (m, 8H), 1,01-1,11 (m, 1H), 0,83-0,90 (m, 1H).
isómero 2: LCMS (ESI) m/z: 495 (M+H) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,43 (d,J= 15,9 Hz, 1H), 8,20 (d,J= 26,6 Hz, 1H), 7,37-7,51 (m, 4H), 4,64-4,74 (m, 1H), 4,46-4,61 (m, 2H), 4,19-4,23 (m, 2H), 4,09-4,14 (m, 2H), 3,67 3,73 (m, 2H), 3,56-3,62 (m, 2H), 2,97-3,13 (m, 2H), 2,17-2,28 (m, 1H), 1,96-2,10 (m, 2H), 1,75-1,84 (m, 1H), 1,62 -1,68 (m, 1H), 1,20-1,30 (m, 6H), 0,67 - 0,77 (m, 1H).
Ejemplo 40
isómero 1 e isómero 2
La preparación se realizó de conformidad con el método descrito en el Proceso P del Ejemplo 39, donde se utilizóterc-butilpiperazin-1-carboxilato en lugar de 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilato de terc-butilo. Después de la separación mediante cromatografía de fluidos supercríticos, se retiró el grupo protector Boc para obtener un isómero 1 y un isómero 2, respectivamente. Instrumento de resolución y condiciones: Waters SFC200; Columna: Daicel Chiralcel AS, 250 * 50 mm ID, 10 pm; Fase móvil: A es CO2, B es isopropanol (NH3H2O al 0,1 %), A:B = 60:40 (relación en volumen); caudal 60 ml/min, temperatura de la columna 38 °C.
isómero 1 :
LCMS (ESI) m/z: 469 (M+H) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,49 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,34 -7,52 (m, 4H), 4,66 4,74 (m, 1H), 3,77-3,85 (m, 1H), 3,60-3,73 (m, 4H), 3,49-3,51 (m, 1H), 3,43-3,48 (m, 2H), 3,24-3,35 (m, 2H), 2,95 -3,04 (m, 1H), 2,80-2,92 (m, 1H), 2,62-2,73 (m, 1H), 2,21-2,29 (m, 1H), 2,01 -2,11 (m, 1H), 1,66-1,76 (m, 1H), 1,21 -1,27 (m, 6H), 0,72 (c, J = 4,9Hz, 1H).
isómero 2 :
LCMS (ESI) m/z: 469 (M+H) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,48 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,33 -7,57 (m, 4H), 4,59 4,68 (m, 1H), 3,64-3,72 (m, 4H), 3,45-3,53 (m, 3H), 3,27-3,36 (m, 2H), 3,16-3,24 (m, 1H), 3,04-3,12 (m, 1H), 2,93 -3,03 (m, 1H), 2,17-2,28 (m, 1H), 1,99-2,09 (m, 1H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,19-1,31 (m, 6H), 0,72 (c,J= 4,4 Hz, 1H). Ejemplo experimental 1: Prueba de actividad enzimáticain vitro
1. Materiales y reactivos
Lector Envision (Molecular Devices)
Placa blanca de 384 pocillos (N.° art. 264706, Thermo)
Los principales reactivos incluidos en el kit HTRF kinEASE TK (N° art. 62TKOPEC, Cisbio)
Sustrato de TK-biotina
Estreptavidina-XL665
anticuerpo sustrato de tirosina cinasa marcado con europio
5 x tampón de reacción enzimática
SEB
tampón de detección HTRF
AKT1 (N.° art 01-101, Carna)
AKT2 (N.° art. 01-102, Carna)
AKT3 (N.° art. PV3185, Invitrogen)
ATP 10 mM (N.° art. PV3227, Invitrogen)
DTT 1 M (N.° art. D5545, Sigma)
MgCl21 M (N.° art. M8266, Sigma)
Compuesto de la invención
Control positivo: GDC-0068
2. Procedimiento experimental
2.1 Preparación de los reactivos
Tabla 1 Com onentes concentraciones del sistema de reacción de cinasa
1 x Tampón de reacción de cinasa
1ml 1x Tampón de reacción de cinasa de la Cinasa AKT1, AKT2 y AKT3 contiene 200 pl 5x de tampón de reacción de cinasa, 5 pl de MgCh 1 M, 1 pl de DTT 1 M y 794 pl de agua ultrapura.
5 x sustrato de TK-Biotina y solución de trabajo de ATP
Las concentraciones específicas de sustrato de TK-biotina y ATP se muestran en la Tabla 1.
El sustrato y el ATP se diluyeron hasta 5 veces la concentración de la reacción con 1 x tampón de reacción de cinasa.
5 x solución de trabajo de cinasa
La concentración utilizada en el cribado enzimático se muestra en la Tabla 1. Se utilizó 1 x tampón de reacción cinasa para preparar 5 x solución de trabajo enzimática.
4 x solución de trabajo de estreptavidina-XL665
La concentración de estreptavidina-XL665 en la reacción se muestra en la Tabla 1. Se utilizó tampón de detección para preparar 4 x solución de trabajo de estreptavidina-XL665.
4 x solución de trabajo de anticuerpo sustrato de tirosina cinasa marcado con europio
El anticuerpo sustrato de tirosina cinasa marcado con europio se diluyó 100 veces con tampón de reacción de detección como solución de trabajo.
2.2 Proceso de experimentación
Todos los reactivos se prepararon según el método anterior. Estos reactivos se equilibraron a temperatura ambiente, excepto las enzimas, seguido de la carga de la muestra.
a) Primero, la solución madre del compuesto (solución DMSO 10 mM) se diluyó con DMSO hasta obtener una solución de compuesto 100 pM y, a continuación, se diluyó con 1 x tampón de reacción de cinasa hasta obtener una solución de trabajo de compuesto 2,5 pM (que contenía DMSO al 2,5 %). Se utilizó 1 x tampón de reacción de cinasa para preparar una solución de DMSo al 2,5 % y, a continuación, se utilizó una solución de DMSO al 2,5 % para diluir la solución de trabajo del compuesto 2,5 pM, que se diluyó siete veces en una proporción cuádruple para obtener soluciones de trabajo de compuestos con 8 concentraciones (2500 nM, 625 nM, 156 nM, 39 nM, 9,8 nM, 2,4 nM, 0,6 nM y 0,15 nM). Además del poro de control, se añadieron 4 pl de las soluciones de trabajo de los compuestos diluidos a todos los pocillos de reacción. En los pocillos de control se añadieron 4 pl de la solución tampón DMSO al 2,5 %/cinasa preparada previamente.
b) se añadieron 2 pl de la solución de sustrato de TK-biotina previamente preparada a todos los pocillos de reacción. Las concentraciones de sustrato utilizadas en el cribado enzimático se muestran en la Tabla 1.
c) se añadieron 2 pl de la solución enzimática previamente preparada a todos los pocillos de reacción, excepto los pocillos negativos. Las concentraciones de enzima se muestran en la Tabla 1. El volumen del pocillo negativo se llenó con 2 pl de enzima correspondiente a 1 x tampón de reacción de cinasa. La placa se selló con una película de sellado. Después de mezclar, la placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos para permitir que el compuesto y la enzima se combinaran completamente.
d) se añadieron 2 pl de solución de ATP a todos los pocillos de reacción para iniciar la reacción de cinasa. La concentración de ATP y el tiempo de reacción durante el cribado enzimático se muestran en la Tabla 1.
e) La solución de prueba se preparó 5 minutos antes de que finalizara la reacción de la cinasa. El tampón de detección del kit se utilizó para preparar la solución de detección de estreptavidina-XL665 y anticuerpo sustrato de tirosina cinasa marcado con europio (1:100). Las concentraciones del reactivo de detección durante el cribado enzimático se muestran en la Tabla 1.
f) Una vez completada la reacción de cinasa, se añadieron 5 pl de estreptavidina-XL665 diluida a todos los pocillos de reacción, e inmediatamente después de mezclar se añadió la solución de detección de anticuerpo sustrato de tirosina cinasa marcado con europio diluida.
g) Se selló la placa y se mezcló bien. Después de hacer reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora, se utilizó el instrumento ENVISION (Perkinelmer) para detectar la señal de fluorescencia (excitación a 320 nm, emisión a 665 nm, 615 nm). La tasa de inhibición de cada pocillo se calculó a través de los pocillos totalmente activos y los pocillos con señal de fondo, tomando el valor promedio en caso de múltiples pocillos. Mientras tanto, se utilizó el software profesional de análisis de diseños PRISM 6.0 para ajustar la concentración inhibitoria media máxima (CI50) de cada compuesto de prueba.
continuación
2.3 Análisis de datos
ER = valor de fluorescencia 665 nm / valor de fluorescencia 615 nm Tasa de inhibición = (ERcontrol positivo - ERmuestra/ (ERcontrol positivo - ERcontrol negativo) * 100 % 3. Resultados experimentales
En la Tabla 3 se muestran los resultados experimentales:
Tabla 3: Actividad inhibitoria de AKT
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
continuación
Ejemplo experimental 2 Evaluación farmacocinética
La formulación del compuesto del Ejemplo 10, Ejemplo 21, GDC-0068, y Ejemplo 34 Isómero 4:
Disolvente mixto: Tween 80: PEG400: agua = 1:9:90 v/v/v)
Los compuestos se formularon en una solución madre de 10 mg/ml con DMSO.
Se pipetearon con precisión 400 pl de solución madre con una concentración de 10 mg/ml en un frasco de vidrio y se añadieron 3,6 ml de disolvente mezclado. La proporción del disolvente en la formulación final es DMSO: disolvente mixto (v/v) = 10:90. Tras agitar en vórtex (o sonicación) y distribuir uniformemente, se obtuvieron 4 ml de una solución dosificadora con una concentración de 1 mg ml-1 para cada compuesto.
Formulación del Isómero 2 del compuesto del Ejemplo 15:
Disolvente: DMSO: PEG400: agua ultrapura = 5:20:75 (v/v/v)
Se pesaron 5,37 mg de la muestra de prueba Isómero 2 del compuesto del Ejemplo 15 en un frasco de vidrio; se añadieron 0,269 ml de DMSO, se agitó en vórtex para disolver completamente el material sólido; se añadieron 1,074 ml de PEG400, se agitó en vórtex y se mezcló; se añadieron 4,028 ml de agua ultrapura, se agitó en vórtex y se mezcló para obtener una solución incolora con una concentración de 1 mg-ml-1.
Animal experimental: ratón, cepa ICR, fuente: Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd., edad: 6 10 semanas, macho.
Esquema experimental
Tabla 4: Tabla del es uema de ex erimentación animal
continuación
Los animales de experimentación fueron alimentados en la sala de animales de Suzhou Shengsu New Pharmaceutical Development Co, Ltd. La sala de animales estaba bien ventilada y equipada con aire acondicionado. La temperatura se mantuvo a 20-25 °C y la humedad se mantuvo al 40 %-70 %. Iluminación clara y oscura durante 12 horas cada una, y los animales de experimentación comían y bebían libremente. Tras una alimentación normal durante al menos 5 días, se seleccionaron para este experimento ratones con buenos signos físicos tras una inspección veterinaria. Cada ratón fue marcado con una etiqueta en la cola. El esquema del experimento con animales se muestra en la Tabla 4.
Después de pesar el peso corporal, el volumen teórico de administración de cada ratón se calcula según la fórmula siguiente.
Dosis (m g -k
Volumen de dosificación teórico (m l) - g 1) \
---------------~ — —-----;— - — --------- ;— -----------■tI x Peso del animal (kg) Concentración de la solución de prueba (mg • m l_1y
El día antes del experimento, los ratones fueron sometidos a ayuno durante la noche y se les permitió beber libremente, y fueron alimentados 4 horas después de la administración.
El día del experimento, a los ratones de los grupos A a E se les administraron10 mg-kg'1 de la solución de administración del Ejemplo 10, Ejemplo 21, GDC-0068, Isómero 2 del Ejemplo 15, e Isómero 4 del Ejemplo 34 mediante administración intragástrica. Después de la administración, se extrajeron aproximadamente 100 pl de sangre de la órbita del ratón en cada punto temporal y se colocaron en un tubo de anticoagulación EDTA-K2. La muestra de sangre total se centrifugó a 5500 rpm durante 10 min, y el plasma separado se almacenó en un frigorífico a -40--20 °C para el análisis de muestras biológicas. Se estableció un método analítico LC-MS/MS para determinar la concentración de compuestos en plasma de ratón y se utilizó para determinar la concentración de compuestos en las muestras biológicas obtenidas en este experimento. Para calcular los parámetros farmacocinéticos se utilizó el modelo no compartimental de Pharsight Phoenix 7.0.
Resultados experimentales: Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 5.
Tabla 5: Parámetros farmacocinéticos de los com uestos de la invención

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto representado por la Fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables del mismo,
    donde R1 se selecciona entre el grupo que consiste en H y alquilo C1-C6; R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 y cicloalquilo C3-C6; o R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y R2, forman un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que contiene nitrógeno; m es 1 o 2; preferentemente, m es 1; n es 0; R4 y R5 son ambos hidrógeno o R4 y R5 forman =O juntos; preferentemente, R4 y R5 forman =O juntos;
    se selecciona entre el grupo que consiste en
    R6, R7, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H y alquilo C1-C6, donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno; R10 es H o alquilo C1-C6, donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con halógeno, OH o CN; L es un anillo heterocíclico saturado de 5-12 miembros que contiene 1-2 átomos de nitrógeno; G es un arilo de 6-10 miembros opcionalmente sustituido con 1-5 R11; R11 es halógeno; con la condición de que ni R1 ni R2 son H si R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y R2, forman un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que contiene nitrógeno; preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula II:
    preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula III:
    más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula IV:
    más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula V:
    más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula VI:
    donde, d es 1 ; más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula VII:
    donde, d es 1 ; preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula VIII:
    más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula IX:
    donde, d es 1 ; preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula XI:
    más preferentemente, el compuesto tiene la estructura representada por la fórmula XII:
    donde, d es 1.
  2. 2. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde R1 es H.
  3. 3. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde R2 y R3 cada uno de se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, isopropilo y ciclopropilo; preferentemente, R2 es isopropilo o ciclopropilo; y/o R3 es H.
  4. 4. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos R1 y R2, forman
  5. 5. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde
    se selecciona entre el grupo que consiste en
    preferentemente,
    es
    y R4 y R5 forman =O juntos; preferentemente,
    es
    y R4 y R5 forman =O juntos; preferentemente,
    es
    y R4 y R5 forman =O juntos.
  6. 6. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde R6, R7, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente entre el grupo que consiste en H, metilo y CF3; preferentemente, R6 se selecciona del grupo que consiste en H, CF3 y metilo; más preferentemente, R6 es metilo o CF3; preferentemente, R7 es H; preferentemente, R8 es H o metilo; más preferentemente, R8 es H; preferentemente, R9 es H.
  7. 7. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde R10 se selecciona del grupo que consiste en H, metilo, etilo, propilo, isopropilo, CF3, CH2CF3, CH2CHF2, CH2CH2F, CH2CN, CH2CH2CN, CH2OH y CH2CH2OH; preferentemente, R10 se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, CH2CN y CH2CH2OH; más preferentemente, R10 es metilo.
  8. 8. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde L se selecciona del grupo que consiste en los siguientes grupos opcionalmente sustituidos con uno o más R12:
    donde: una línea ondulada simple es una posición en la que L está conectado al carbonilo, y una línea ondulada doble es una posición en la que L está conectado a pirimidina; R12 es alquilo C1-C6.
  9. 9. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 8, donde L se selecciona del grupo que consiste en
  10. 10. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde G es fenilo opcionalmente sustituido con 1-5 R11; R11 se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en F, Cl, Br e I; preferentemente, R11 es Cl; preferentemente, G es 4-clorofenilo.
  11. 11. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
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