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TW202334138A - 癌症治療方法 - Google Patents

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TW202334138A
TW202334138A TW111142228A TW111142228A TW202334138A TW 202334138 A TW202334138 A TW 202334138A TW 111142228 A TW111142228 A TW 111142228A TW 111142228 A TW111142228 A TW 111142228A TW 202334138 A TW202334138 A TW 202334138A
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TW
Taiwan
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compound
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alkyl
halo
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TW111142228A
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English (en)
Inventor
史納赫 帕泰爾
田中裕子
丹尼爾 Ａ 艾爾藍森
飛利浦 Ａ 歌肯
約翰 Ｃ 威登
莫妮卡 珍 威廉斯
艾琳娜 道特珊柯
Original Assignee
美商新領域醫藥公司
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Publication date
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Abstract

本揭示案提供適用於治療及抑制癌症，例如，適用於治療或抑制由KRAS G12C表徵之癌症的化合物及方法。亦提供含有此類化合物之醫藥組合物及用於製備此類化合物之製程。

Description

癌症治療方法
本揭示案提供適用於治療或癌症癌症且特別適用於治療或抑制由KRAS G12C突變體表徵之癌症的化合物。亦提供含有此類化合物之醫藥調配物、用於製備此類化合物之製程及使用此類化合物治療或抑制癌症之方法。
KRAS為分子開關。在正常生理條件下，蛋白質結合至「關閉狀態」之二磷酸鳥苷(GDP)。對經由諸如EGFR之受體酪胺酸激酶(RTK)的信號傳導作出反應，在由諸如SOS之鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)促進之過程中GDP交換為三磷酸鳥苷(GTP)。KRAS之GTP結合形式處於「打開狀態」且與諸如RAF及PI3K之蛋白質相互作用以促進下游信號傳導，此導致細胞增殖及存活。在由GAP (GTPase活化蛋白)促進之過程中，KRAS可緩慢地使GTP水解變回GDP，由此返回關閉狀態。
KRAS突變在約30%之所有人類癌症中發現，且在三種最致命形式之癌症中極為普遍：胰臟癌(95%)、結腸直腸癌(45%)及肺癌(35%)。總之，此等癌症單獨在美國每年在超過200,000名患者中發生。一個特定突變，在位置12處甘胺酸至半胱胺酸取代(G12C)，每年在超過40,000名患者中發生。KRAS G12C突變削弱GTP至GDP之水解，由此將KRAS截留於打開狀態且促進癌細胞增殖。
G12C之半胱胺酸殘基為開發用於此突變體KRAS之靶向共價藥物提供一個機會。關於KRAS G12C抑制劑AMG 510及MRTX849之早期臨床試驗結果已顯示關於非小細胞肺癌(NSCLC)之令人鼓舞之結果，但對於結腸直腸癌(CRC)之數據不太令人信服。此外，甚至在患者對初始治療有反應之情況下，仍有跡象表明反應之持續時間可能受限制且可能快速產生抗性。
KRAS突變體之大多數抑制劑優先結合至蛋白質之GDP結合形式。舉例而言，Amgen KRAS抑制劑AMG 510及Mirati KRAS抑制劑MRTX849與KRAS G12C之GDP結合形式反應比與蛋白質之GTP結合形式快至少1000倍。已觀測之一種抗性形式為使癌細胞增加經由RTK之信號傳導，由此增加受當前抑制劑影響較小之GTP結合KRAS的量。因此，創造可結合至並抑制KRAS之GDP結合形式及GTP結合形式之分子可具有實質性效用。
需要適用於治療癌症，諸如由KRAS G12C表徵之癌症的化合物。進一步需要適用於治療由KRAS G12C表徵之癌症的化合物，其中該等化合物結合至並抑制KRAS之非活性GDP結合形式及活化GTP結合形式。進一步需要適用於治療由KRAS G12C表徵之癌症的化合物，其中該化合物改善對KRAS G12C之GTP結合形式的抑制。
式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體，包括本文所揭示之其實施例，可用於抑制細胞中之KRAS G12C之方法，此係藉由使其中需要抑制KRAS G12C活性之細胞與有效抑制KRAS G12C活性之量的化合物接觸來達成。抑制可為部分或完全的。在一些實施例中，接觸係在活體外。在一些實施例中，接觸係在活體內。
在第一個態樣中，提供式I或式II化合物： (式I) (式II)； 或其鹽；及/或其同位素體； 其中： R x係選自氫、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4烷氧基及C 1-C 4鹵烷氧基； R y係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R z係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代； R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c、R 2d及R 2e組成之群； R 3係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基組成之群； R 4係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 3-C 7環烷基、CN及C 2-C 3炔基組成之群； R 2a為-NR 5R 6； R 5係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7；或 R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代； R 7係選自由以下組成之群：氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及-(CH 2) m-NR 8R 9； R 8及R 9係獨立地選自由-H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含環原子內之至少一個氮且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基； n為0或1； m為1或2； R 2b為-NR 10R 11； R 10係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 11係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，及 -(CH 2) w-R 13；或 R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN， 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基； R 12為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代；或 R 13為包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該等氮中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；或 R 13為包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 14為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； w為0、1或2； x為0或1； R 2c為-NR 15R 16； R 15為H、視情況經CN之一個實例取代之C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -(CH 2) y-R 21；或 R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基； R 17係選自由氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)O-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基、-S(O) 2-C 1-C 4鹵烷基及R 35組成之群；且 R 20係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 18及R 20與其所連接之碳可一起形成含有一個選自N、O及S之雜原子的4-5員碳環或雜環，其中該碳環或雜環可視情況經甲基、鹵基、羥基、甲氧基或羰基之一個實例取代； R 19係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 22及R 23係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 1-C 4羥烷基、CH 2-(C 3-C 6雜環基)及C 2-C 3炔基； R 35為視情況經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的5-6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基； y為0、1或2； z為1或2； q為0或1； u為0、1或2； R 2d係選自由以下組成之群： -NR 24R 25， -C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26，及 -O-(C 1-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26； R 24為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26；或 R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代； R 26為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 27係選自氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基； R 2e為-NR 28R 29； R 28為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 29為-(CH 2) t-R 30； R 30係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 31係選自由-(CH 2) v-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群； R 32及R 33係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； t為0、1或2； v為1或2； p為0、1或2； R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基； 前提條件為當該化合物具有式I時，則R 2c不為 ；且 另一前提條件為當該化合物具有式II時，則R 2c不為-NR 15R 16，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該第二個氮經-C(O)-CH=CH 2取代。
在一些實施例中，包括前述段落中之實施例中之任一者，化合物係選自由表1之化合物及其所有鹽及同位素體組成之群。
在另一個態樣中，提供一種醫藥調配物，該醫藥調配物包含如本文所述之化合物，包括但不限於前述段落中所述之化合物，及醫藥學上可接受之載劑，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
在另一個態樣中，提供一種治療或抑制癌症之方法，該方法包括：向有需要之個體投與治療有效量之如本文所述之化合物，包括但不限於前述段落中所述之化合物，或醫藥調配物，包括但不限於前述段落中所述之醫藥調配物，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤(pediatric Wilms' tumor)、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該方法係用於治療癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該方法係用於抑制癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，癌症為KRAS G12C介導之癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。在一些實施例中，該方法進一步包括向個體投與治療有效量之額外化學治療劑。
在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物(包括但不限於前述實施例中之任一者)作為藥劑之用途。在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物(包括但不限於前述實施例中之任一者)用於治療或抑制癌症之用途。在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物(包括但不限於前述實施例中之任一者)製造用於治療或抑制癌症之藥劑的用途。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該用途係用於治療癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該用途係用於抑制癌症。
在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物，包括但不限於前述實施例中之任一者，其係用於製造用以治療或抑制癌症之藥劑。在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物，包括但不限於前述實施例中之任一者，其係用於治療或抑制癌症。在另一個態樣中，提供如本文所述之化合物，包括但不限於前述實施例中之任一者，其係用於製造用以治療或抑制癌症之藥劑。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該用途係用於治療癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，該用途係用於抑制癌症。
應了解，本文所述之化合物、組合物、調配物及治療方法之描述包括「包含實施例」、「由實施例組成」及「基本上由實施例組成」。在一些實施例中，對於本文所述之所有組合物及使用本文所述之組合物之所有方法，組合物可包含所列之組分或步驟，或可「基本上由所列之組分或步驟組成」。當組合物描述為「基本上由所列組分組成」時，組合物含有所列組分，且可含有不會實質上影響所治療之疾患的其他組分，但除明確所列之彼等組分以外不含實質上影響所治療之疾患的任何其他組分；或者，若組合物除所列之彼等以外不含實質上影響所治療之疾患的額外組分，則組合物不含足以實質上影響所治療之疾患之濃度或量的額外組分。當方法描述為「基本上由所列步驟組成」時，方法含有所列步驟，且可含有不會實質上影響所治療之疾患的其他步驟，但方法除明確所列之彼等步驟以外不含實質上影響所治療之疾患的任何其他步驟。作為一個非限制性特定實例，當組合物描述為『基本上由組分組成』時，組合物可另外含有任何量之醫藥學上可接受之載劑、媒劑或稀釋劑及不會實質上影響所治療之疾患的其他此類組分。
本揭示案之額外實施例、特徵及優點將自以下詳細描述及經由實施本揭示案顯而易見。
本文提供適用於治療癌症之化合物及使用此類化合物用於治療癌症之方法。在一些實施例中，化合物適用於治療由KRAS G12C表徵之癌症。在一些實施例中，化合物有利地抑制KRAS G12C之非活性GDP結合形式及活化GTP結合形式。在一些實施例中，化合物有利地改善對KRAS G12C之GTP結合形式的抑制。
除非另有規定，否則本文所用之縮寫具有其在化學及生物技術內之常規含義。
應了解，化合物結構(包括可能取代)之描述限於化學上可能之彼等。
除非另有指示，否則所有掌性原子之絕對立體化學如所描繪。在表1之第一欄中具有( or)命名之化合物為單一對映體，其中任意指定絕對立體化學(例如，基於如實例章節中所述之掌性SFC溶離)。在表1之第一欄中具有( and)命名之化合物為對映體混合物，其中相對立體化學如所示。具有其中構型未在所描繪之結構中指示之立體源中心且在表1之第一欄中不具有命名之化合物為在彼中心處之對映體混合物。在表1之第一欄中不具有命名或標記為( abs)之化合物為單一對映體，其中絕對立體化學如所指示。舉例而言，化合物1為具有所指示之立體化學的純對映體。 。
在一些情況下，表1之第一欄含有選自( abs)、( or)及( and)之不同指示符以指代分子之不同立體中心。
舉例而言，化合物43包括在表1之第1欄中「( or)稠合哌啶( abs)吡咯啶」之標註。 。
化合物為單一對映體，其中在吡咯啶基處之立體化學為所示之( S)，此係因為吡咯啶基自對映純之起始物質製備，且在稠合環丙基處之立體化學為(R,S)或(S,R)，但並非兩者之混合物，且經任意指定。當藉由層析將對映體或非對映體之混合物分離成相應單一對映體或非對映體時，常常任意指定立體化學。
熟習此項技術者將能夠使用此項技術中已知之方法，諸如掌性層析、掌性再結晶及類似方法將外消旋化合物分離成各別對映體。提及作為外消旋混合物之化合物意欲亦包括混合物中所含之個別對映體。
在本文中提及「約」一個值或參數包括(及描述)針對彼值或參數本身之變化。舉例而言，涉及「約X」之描述包括「X」之描述。如本文所用且除非另有規定，否則術語「約」及「近似」當結合溫度、組合物或劑型之成分之劑量、量或重量百分比使用時，意指由一般熟習此項技術者公認為提供等效於獲自指定劑量、量或重量百分比之藥理作用的藥理作用之劑量、量或重量百分比。特定而言，術語「約」及「近似」當在此情形中使用時，涵蓋在指定劑量、量或重量百分比之15%以內、10%以內、5%以內、4%以內、3%以內、2%以內、1%以內或0.5%以內之劑量、量或重量百分比。
除非上下文另有明確指示，否則如本文所用，術語「一個」及「一種」意指一或多個(種)。
術語「個體」、「個人」及「患者」意指個別生物體，較佳為脊椎動物，更佳為哺乳動物，最佳為人類。患者之實例包括人類；家畜，諸如乳牛、山羊、綿羊、豬及兔；及伴侶動物，諸如犬、貓及馬。在一些實施例中，個體已鑑定或經診斷患有具有KRAS G12C突變之癌症或腫瘤(例如，如使用管制機構核准，例如FDA核准之檢定或套組所確定)。
用本文所論述之化合物及方法「治療」病症定義為投與本文所論述之化合物中之一或多者，帶有或不帶有額外治療劑，以減輕或消除病症或病症之一或多種症狀，或延遲病症或病症之一或多種症狀的進展，或降低病症或病症之一或多種症狀的嚴重度。
用本文所論述之化合物及方法「抑制」病症定義為投與本文所論述之化合物中之一或多者，帶有或不帶有額外治療劑，以抑制病症之臨床表現，或抑制病症之不良症狀之表現。治療與抑制之間的區別在於治療在個體中表現出病症之不良症狀之後進行，而抑制在個體中表現出病症之不良症狀之前進行。抑制可為部分的、實質上完全的或完全的。在一些實施例中，基因篩選可用於鑑定處於病症風險下之患者。接著可向處於發展病症之臨床症狀之風險下的無症狀患者投與本文所揭示之化合物及方法，以抑制任何不良症狀出現。
本文所論述之化合物之「治療用途」定義為使用本文所論述之化合物中之一或多者以治療或抑制如本文所定義之病症。化合物之「治療有效量」為化合物之量，當向個體投與時，該量足以減輕或消除病症或病症之一或多種症狀，或延遲病症或病症之一或多種症狀的進展，或降低病症或病症之一或多種症狀的嚴重度，或抑制病症之臨床表現，或抑制病症之不良症狀之表現。治療有效量可在一或多次投藥中給與。
「KRAS G12C介導之癌症」在本文中與「由KRAS G12C表徵之癌症」可互換使用，且指示該癌症包含含有KRAS G12C突變體之細胞。
儘管本文所述之化合物可呈中性(非鹽)化合物形式出現且可作為中性(非鹽)化合物使用，描述欲包涵本文所述之化合物之所有鹽，以及使用化合物之此類鹽之方法。在一些實施例中，化合物之鹽包含醫藥學上可接受之鹽。
化合物之「醫藥學上可接受之鹽」意指對人類及/或動物而言為醫藥學上可接受的，且在投與後保持母體化合物之至少一些所需药理活性的鹽。此類鹽包括：(a)酸加成鹽，與以下無機酸形成：諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似酸；或與以下有機酸形成：諸如甲酸、乙酸、丙酸、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、丁二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙烷二磺酸、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡糖庚酸、4,4'-亞甲基雙(3-羥基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、三級丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、麩胺酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸及類似酸；或(b)當存在於母體化合物中之酸性質子由金屬離子，例如鹼金屬粒子、鹼土金屬離子或鋁離子置換時形成之鹽；或與以下有機鹼之配位體：諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、緩血酸胺、 N-甲基葡糖胺及類似物。關於適合醫藥學上可接受之鹽的額外資訊可見於 Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
當化學上相關時，本文中包括化合物之所有立體異構體，包括非對映體及對映體。亦包括任何比率之可能立體異構體之混合物，包括但不限於外消旋混合物。除非在結構中明確指示立體化學，否則結構欲包涵所描繪之化合物之所有可能立體異構體。若明確指示分子之一個部分或多個部分而非分子之另一個部分或多個部分的立體化學，則結構欲包涵其中未明確指示立體化學之該或該等部分之所有可能立體異構體。
「同位素體」在本文中係指同位素組成不同於其「天然」同位素組成之化合物。「同位素組成」係指對於給定原子所存在之各同位素之量，且「天然同位素組成」係指給定原子之天然存在之同位素組成或豐度。含有其天然同位素組成之原子在本文中亦可稱作「非富集」原子。除非另有指定，否則本文所敘述之化合物之原子意欲代表彼原子之任何穩定同位素。舉例而言，除非另有規定，否則當一個位置特別指定為「H」或「氫」時，該位置應理解為具有處於其天然同位素組成之氫。本文中化合物之描述亦包括本文中所有化合物之所有同位素體，在一些實施例中為部分氘化或全氘化類似物。「同位素富集」亦可指含有至少一個如下原子之化合物：該至少一個原子具有不同於彼原子之天然同位素組成的同位素組成。「同位素富集」係指在分子中之給定原子處併入特定同位素替代彼原子之天然同位素豐度的百分比。舉例而言，在給定位置處1%之氘富集意指給定樣品中1%之分子在指定位置處含有氘。因為天然存在之氘分佈為約0.0156%，所以在使用非富集之起始物質合成之化合物中之任何位置處之氘富集為約0.0156%。本文所提供之化合物之同位素富集可使用一般熟習此項技術者已知之常規分析方法確定，包括質譜法及核磁共振光譜法。
「烷基」意指具有指定碳數之直鏈、支鏈、環狀或其組合之飽和單價烴基。舉例而言，C 1-C 4烷基包括例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基、環丙基、環丁基及類似基團。
「伸烷基」意指具有指定碳數之直鏈、支鏈、環狀或其組合之飽和二價烴基。舉例而言，C 1-C 4伸烷基包括例如亞甲基、伸乙基、伸丙基、1-甲基伸丙基、2-甲基伸丙基、伸丁基及類似基團。「C 0伸烷基」意指一鍵。舉例而言，C 0-C 2伸烷基包括一鍵、亞甲基、伸乙基及類似基團。
「炔基」意指具有指定碳數及至少一個碳碳參鍵之直鏈或支鏈單價烴基。舉例而言，C 2-C 4炔烴包括例如乙炔基、丙炔基、2-丙炔基、丁炔基及類似基團。
「烷氧基」意指-OR o基團，其中R o為如上文所定義之烷基，或-R o'OR o"基團，其中R o'為伸烷基且R o"為如上文所定義之烷基，其中烷氧基中烷基碳之規定數目等於R o'及R o"中之總碳數。舉例而言，C 1-C 4烷氧基指示例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、三級丁氧基、環丙氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、異丙氧基甲基及類似基團。在一些實施例中，烷氧基為-OR o基團。在一些實施例中，烷氧基為-R o'OR o"基團。在一些實施例中，當氮經烷氧基取代時，烷氧基不經由氧或緊鄰烷氧基中之氧的碳連接至氮。舉例而言，經烷氧基取代之氮不為N-OR o或N-CH 2-O-R o"。
「烷氧基烷氧基」意指-OR r基團，其中R r為如上文所定義之烷氧基，前提條件為R r之連接點不為氧原子，或-R r'OR r"基團，其中R r為伸烷基且R r"為如上文所定義之烷氧基，前提條件為R r"之連接點不為氧原子，其中烷氧基烷氧基中烷基碳之規定數目等於R r'及R r"中之總碳數。舉例而言，C 1-C 6烷氧基烷氧基指示例如-OCH 2OCH 3、-OCH 2CH 2OCH 3、-OCH 2CH 2OCH 3、-CH 2OCH 2OCH 3、-CH 2OCH 2CH 2OCH 3、-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 3、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 3及類似基團。在一些實施例中，烷氧基烷氧基為-OR r基團。在一些實施例中，烷氧基烷氧基為-R r'OR r"基團。在一些實施例中，當氮經烷氧基烷氧基取代時，烷氧基烷氧基不經由氧或緊鄰烷氧基烷氧基中之氧的碳連接至氮。舉例而言，經烷氧基烷氧基取代之氮不為N-OR r或N-CH 2-O-R r"。
「胺基烷基」意指-NHR n基團，其中R n為如上文所定義之烷基，或-NR nR n'基團，其中R n及R n'為如上文所定義之烷基，或-R n"NH 2基團，其中R n"為如上文所定義之伸烷基，或-R n"NHR n基團，其中R n"為如上文所定義之伸烷基且R n為如上文所定義之烷基，或-R n"NR nR n'基團，其中R n"為如上文所定義之伸烷基且R n及R n'為如上文所定義之烷基，其中胺基烷基中烷基碳之規定數目等於R n、R n'及R n" (在適用情況下)中之總碳數。舉例而言，C 1-C 6胺基烷基指示例如-NHCH 3、-NHCH 2CH 3、-NHCH 2(CH 3) 2、-N(CH 3) 2、-N(CH 3)CH 2CH 3、-N(CH 2CH 3) 2、-CH 2NH 2、-CH 2CH 2NH 2、-CH 2NHCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-CH 2CH 2NHCH 3、-CH 2CH 2N(CH 3) 2及類似基團。在一些實施例中，胺基烷基為-NHR n基團。在一些實施例中，胺基烷基為-NR nR n'基團。在一些實施例中，胺基烷基為-R n"NH 2基團。在一些實施例中，胺基烷基為-R n"NHR n基團。在一些實施例中，胺基烷基為-R"NR nR n'基團。在一些實施例中，當氧經胺基烷基取代時，胺基烷基不經由氮或緊鄰胺基烷基中之氮的碳連接至氧。舉例而言，經胺基烷基取代之氧不為O-NR n或O-CH 2-NHR n。
「環烷基」意指具有規定數目之碳原子的單環飽和單價烴基。舉例而言，C 3-C 6環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
「氰基烷基」意指如上文所定義之烷基，其經氰基(-CN)取代。氰基烷基亦可稱作烷基腈。
「鹵基」意指氟、氯、溴或碘。在一些實施例中，鹵基為氟或氯。
「鹵烷基」意指如上文所定義之烷基，其經一或多個鹵素原子，例如一至五個鹵素原子，諸如氟或氯取代，包括經不同鹵素取代之彼等，例如，-CH 2Cl、-CF 3、-CHF 2、-CH 2CF 3、-CF 2CF 3、-CF(CH 3) 2及類似基團。當烷基僅經氟取代時，其在本申請案中可稱作氟烷基。
「鹵烷氧基」意指-OR a基團，其中R a為如上文所定義之鹵烷基，或-R bOR c基團，其中R b及R c為如上文所定義之烷基或鹵烷基，其中鹵烷氧基中烷基碳之規定數目等於R b及R c中之總碳數。鹵原子可存在於R b或R c或兩者中，前提條件為R b及R c中之至少一者包含鹵原子。舉例而言，C 1-C 4鹵烷氧基指示例如-OCF 3、-OCHF 2、-CH 2OCF 3、-CH 2CH(F)CH 2OCH 3、-CH 2CH(F)CH 2OCHF 2及類似基團。在一些實施例中，鹵烷氧基為-OR a基團。在一些實施例中，鹵烷氧基為-R bOR c基團。當鹵烷氧基中之所有鹵原子為氟時，其在本申請案中可稱作氟烷氧基。在一些實施例中，當氮經鹵烷氧基取代時，鹵烷氧基不經由氧或緊鄰鹵烷氧基中之氧的碳連接至氮。舉例而言，經鹵烷氧基取代之氮不為N-OR a或N-C(H) n(X) 2-n-O-R c。
「羥烷基」意指如上文所定義之烷基，其經一或多個羥基(-OH)基團，例如一至三個羥基取代，例如，-CH 2OH、-CH 2CH 2OH、-C(OH)(CH 3) 2、-CH(OH)CH 3及類似基團。
除非另有規定，否則「雜環基」意指包含3-12個環原子之飽和或部分不飽和環基，其中1-4個環原子為獨立地選自由氮、氧及硫組成之群的雜原子，其餘環為C。硫基可呈-S-或-S(O) 2-形式存在。除非另有規定，否則雜環基包括單環以及多環系統，包括稠環、橋環及螺環系統。在一些實施例中，雜環基為單環。在一些實施例中，雜環基包含兩個稠環。在一些實施例中，雜環基包含兩個螺環。在一些實施例中，雜環基包含橋環系統。
除非另有規定，否則「碳環基」意指包含3-12個環原子之飽和或部分不飽和環基，其中環原子為C。除非另有規定，否則碳環基包括單環以及多環系統，包括稠環、橋環及螺環系統。在一些實施例中，碳環基為單環。在一些實施例中，碳環基包含兩個稠環。在一些實施例中，碳環基包含兩個螺環。在一些實施例中，碳環基包含橋環系統。
除非另有規定，否則「雜芳基」意指5至10個環原子之單價單環或雙環芳族基團，其中一或多個(在一些實施例中，一個、兩個或三個)環原子為獨立地選自N、O或S之雜原子，其餘環原子為碳。代表性實例包括但不限於吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基、異吲哚基、噁唑基、異噁唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三唑基、四唑基及類似基團。
「螺」環烷基指示環烷基經螺鍵聯連接至化合物之其餘部分。「螺」環烷基取代基具有兩個連接至經取代之部分之同一碳的連接點，從而形成螺連接。舉例而言，經「螺C 3-C 4環烷基」基團取代之環己基指示： 或 。
如本文所用，「需要治療」意指患者在診斷出疾病後由醫師或其他照護者治療，或確定患者處於發展疾病之風險下。在一些實施例中，患者已診斷出患有KRAS G12C介導之癌症。在一些實施例中，患者已確定為處於發展KRAS G12C介導之癌症的風險下。
「投藥」、「投與」及類似術語，當應用於例如患者、細胞、組織、器官或生物流體時，係指例如式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)或式(II-2)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體、包含其之醫藥組合物、或診斷劑與個體、細胞、組織、器官或生物流體接觸。在細胞之情形中，投藥包括試劑與細胞接觸(例如，活體外或離體)，以及試劑與流體接觸，其中該流體係與細胞接觸。
「視情況存在」或「視情況」意指隨後描述之事件或情況可能但無需發生，且描述包括事件或情況發生之實例及不發生之實例。
「醫藥學上可接受之載劑或賦形劑」意指適用於製備醫藥組合物之載劑或賦形劑，其一般為安全、無毒的且在生物學上及其他方面均合乎需要，且包括對於獸醫學用途以及人類醫藥用途而言可接受之載劑或賦形劑。如本說明書及申請專利範圍中所用，「醫藥學上可接受之載劑/賦形劑」包括一種及多於一種此類賦形劑。
如本文所用，術語「疾病」欲與術語「病症」、「症候群」及「疾患」 (如在醫學疾患中)一般為同義的且可互換使用，此係因為該等術語全部反映人體或動物體或其一個部分之異常狀況，該異常狀況損害正常功能，典型地由區別性徵象及症狀表現，且導致人類或動物具有降低之壽命或生活品質。
術語「組合療法」意指投與兩種或更多種治療劑以治療本揭示案中所述之疾病或病症。此種投藥涵蓋以實質上同時之方式共同投與此等治療劑，諸如在具有固定比率之活性成分之單個膠囊或錠劑中或在多個針對各活性成分之獨立膠囊或錠劑中。另外，此種投藥亦涵蓋以順序方式使用各類型之治療劑。在任一種情況下，治療方案將提供藥物組合在治療本文所述之疾患或病症中之有益作用。 癌症治療方法
式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體，包括本文所揭示之其實施例，適用於治療癌症，包括但不限於各種類型之癌症，包括例如肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。更特別地，可由式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體(包括本文所揭示之其實施例)治療之癌症包括但不限於以下癌症：諸如多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，癌症為KRAS G12C介導之癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，個體已確定為處於發展KRAS G12C介導之癌症的風險下。
在一些實施例中，包括前述實施例中之任一者，個體及/或癌症對於KRAS抑制劑(例如，G12C KRAS抑制劑)治療為抗性的或難治的。 測試
式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體，包括本文所揭示之其實施例，可藉由例如以下實例中所述之方法或藉由已知及一般接受之細胞及/或動物模型來測試。
式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體抑制KRAS G12C之GTP結合形式之活性的能力可使用諸如以下實例308及309中所述之活體外檢定之方法來測試。實例308描述對於各種化合物確定負載有GTP類似物GMPPNP之KRAS G12C與作為Ras結合結構域(RBD)之cRaf之結合的半最大抑制(IC 50)。實例309描述對於各種化合物確定負載有GTP類似物GMPPNP之KRAS G12C與作為Ras結合結構域(RBD)之PI3Kα之結合的半最大抑制(IC 50)。實例310描述測試化合物抑制MCF10A G12C/A59G突變體中之細胞活力的能力，該突變體消除GTPase活性，由此阻止GTP水解成GDP。 醫藥組合物
一般而言，本揭示案之式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽及/或同位素體(在本文中亦可稱作「化合物」或「本揭示案之化合物」)將藉由對於提供類似效用之劑可接受之投藥模式中之任一者以治療有效量投與。本揭示案之化合物之治療有效量可在每天每公斤患者體重約0.01至約500 mg之範圍內，其可按單次或多次劑量投與。在一些實施例中，適合之劑量水準可為每天約0.1至約250 mg/kg；或每天約0.5至約100 mg/kg。適合之劑量水準可為每天約0.01至約250 mg/kg、每天約0.05至約100 mg/kg、或每天約0.1至約50 mg/kg。在此範圍內，劑量可為每天約0.05至約0.5、約0.5至約5、或約5至約50 mg/kg。對於經口投與，組合物可依錠劑之形式提供，該等錠劑含有約1.0至約1000毫克之活性成分，特別為約1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900及1000毫克之活性成分。本揭示案之化合物(亦即，活性成分)之實際量將取決於眾多因素，諸如待治療之疾病之嚴重度、患者之年齡及相對健康狀況、所利用之化合物之效力、投藥途徑及形式，及其他因素。
一般而言，本揭示案之化合物將作為醫藥組合物藉由以下途徑中之任一者投與：經口、全身(例如，經皮、鼻內或由栓劑)或非經腸(例如，肌肉內、靜脈內或皮下)投藥。較佳投藥方式為使用便利之日劑量方案經口，該方案可根據罹病程度作調整。組合物可採用錠劑、丸劑、膠囊、半固體、粉末、持續釋放調配物、溶液、懸浮液、酏劑、氣霧劑或任何其他適當組合物之形式。
調配物之選擇取決於各種因素，諸如藥物投與之模式(例如，對於經口投與，呈錠劑、丸劑或膠囊形式之調配物為較佳的，包括腸溶包衣或延遲釋放錠劑、丸劑或膠囊)及原料藥之生物可用性。
組合物一般包含本揭示案之化合物與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑的組合。可接受之賦形劑為無毒的，幫助投藥，且不會不利地影響本揭示案之化合物之治療效益。此種賦形劑可為任何固體、液體、半固體，或在氣霧劑組合物之情況下為熟習此項技術者一般可用之氣態賦形劑。
固體醫藥賦形劑包括澱粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂乳粉及類似物。液體及半固體賦形劑可選自甘油、丙二醇、水、乙醇及各種油，包括石油、動物、植物或合成來源之彼等，例如，花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。較佳液體載劑(尤其對於可注射溶液)包括水、鹽水、右旋糖水溶液及二醇。
化合物可經調配用於藉由注射非經腸投與，例如，藉由彈丸注射或連續輸注。用於注射之調配物可呈現為單位劑型，例如，於安瓿中或多劑量容器中，其中添加防腐劑。組合物可採用諸如油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。調配物可在單位劑量或多劑量容器，例如密封安瓿及小瓶中呈現，且可呈粉末形式或在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在臨用前添加無菌液體載劑，例如，鹽水或無菌無熱原水。即時注射溶液及懸浮液可自先前所述種類之無菌粉末、顆粒及錠劑製備。
用於非經腸投與之調配物包括活性化合物之水性及非水性(油性)無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及促使調配物與預期接受者之血液等張之溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。適合之親脂性溶劑或媒劑包括脂肪油，諸如芝麻油，或合成脂肪酸酯，諸如油酸乙酯或三酸甘油酯，或脂質體。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度之物質，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。視情況，懸浮液亦可含有適合之穩定劑或增加化合物之溶解度以允許製備高度濃縮溶液之劑。
除先前所述之調配物以外，化合物亦可調配成積存製劑。此類長效調配物可藉由植入(例如，皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射投與。因此，舉例而言，化合物可與適合之聚合或疏水材料(例如，作為可接受之油中之乳液)或離子交換樹脂一起調配，或作為微溶性衍生物，例如作為微溶性鹽來調配。
對於經頰或舌下投與，組合物可採用以常規方式調配之錠劑、口含錠、軟錠或膠囊之形式。此類組合物可包含調味基劑，諸如蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠中之活性成分。
化合物亦可調配於直腸組合物中，諸如栓劑或保留灌腸劑，例如，含有常規栓劑基劑，諸如可可脂、聚乙二醇或其他甘油酯。
本揭示案之某些化合物可局部投與，其係藉由非全身投藥。此包括將化合物外部施用至表皮或頰腔及將此類化合物滴注至耳、眼及鼻中，以使得化合物不會顯著進入血流。相比之下，全身投藥係指經口、靜脈內、腹膜內及肌肉內投藥。
適合於局部投與之調配物包括適合於經皮膚穿透至發炎部位之液體或半液體製劑，諸如凝膠、搽劑、洗劑、乳膏、軟膏或糊劑，及適合於向眼、耳或鼻投與之滴劑。用於局部投與之活性成分可占調配物之例如0.001%至10% w/w (以重量計)。在某些實施例中，活性成分可占至多10% w/w。在其他實施例中，其可占小於5% w/w。在某些實施例中，活性成分可占2% w/w至5% w/w。在其他實施例中，其可占調配物之0.1%至1% w/w。
對於藉由吸入投與，化合物可便利地自吹入器、噴霧器加壓包或遞送氣霧劑噴霧之其他便利方式遞送。加壓包可包含適合之推進劑，諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合氣體。在加壓氣霧劑之情況下，劑量單位可藉由提供閥門以遞送計量之量來確定。或者，對於藉由吸入或吹入投與，根據本揭示案之化合物可採用乾粉組合物之形式，例如，化合物與適合之粉末基劑(諸如乳糖或澱粉)之粉末混合物。粉末組合物可呈現為單位劑型，例如，膠囊、藥筒、明膠，或可藉助於吸入器或吹入器自其投與粉末之泡罩包裝。其他適合之醫藥賦形劑及其調配物描述於Remington's Pharmaceutical Sciences, E. W. Martin編 (Mack Publishing Company, 第20版, 2000)中。
調配物中化合物之水準可在熟習此項技術者所採用之完整範圍內變化。典型地，以重量百分比(重量%)計，調配物將含有基於總調配物約0.01-99.99重量%之本揭示案之化合物，其餘為一或多種適合之醫藥賦形劑。舉例而言，化合物以約1-80重量%之水準存在。 組合及組合療法
本揭示案之化合物可與一或多種其他藥物組合用於治療本揭示案之化合物或其他藥物可在其中具有效用之疾病或疾患。此種(此類)其他藥物可與本揭示案之化合物同時或依序投與。當本揭示案之化合物與一或多種其他藥物同時使用時，預期含有此類其他藥物及本揭示案之化合物的單位劑型中之醫藥組合物。然而，組合療法亦可包括按不同重疊時程投與本揭示案之化合物及一或多種其他藥物之療法。亦預期當與一或多種其他活性成分組合使用時，本揭示案之化合物及其他活性成分可按比各自單獨使用時更低之劑量使用。
因此，本揭示案之醫藥組合物亦包括除本揭示案之化合物以外含有一或多種其他藥物之彼等。
上述組合包括本揭示案之化合物不僅與一種其他藥物，而且與兩種或更多種其他活性藥物之組合。同樣地，本揭示案之化合物可與本揭示案之化合物所適用之疾病或疾患之預防、治療、控制、改善或風險降低中所用之其他藥物組合使用。此類其他藥物可與本揭示案之化合物同時或依序投與。當本揭示案之化合物與一或多種其他藥物同時使用時，可使用除本揭示案之化合物以外含有此類其他藥物之醫藥組合物。因此，本揭示案之醫藥組合物亦包括除本揭示案之化合物以外亦含有一或多種其他活性成分之彼等。本揭示案之化合物與第二活性成分之重量比可變化且將取決於各成分之有效劑量。一般而言，將使用各者之治療有效劑量。
在有需要之個體罹患癌症或有罹患癌症之風險的情況下，該個體可用本揭示案之化合物與一或多種其他抗癌劑之任何組合進行治療。
在一些實施例中，本揭示案之化合物與CDK 4/6抑制劑組合使用。適合用於所提供之組合物及方法之CDK 4/6抑制劑的實例包括但不限於阿貝西利(abemaciclib) (N-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(4-氟-1-異丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺)；呱柏西利(palbociclib) (6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮)及瑞博西利(ribociclib) (7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺)，而CDK 4/6抑制劑曲拉西利(trilaciclib) (2'-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7',8'-二氫-6'H-螺[環己烷-1,9'-吡嗪并[1',2':1,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'-酮)處於後期臨床試驗。另一種適用於本文中之方法的CDK 4/6抑制劑為CDK 2/4/6抑制劑PF-06873600 (6-(二氟甲基)-8-[(1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基]-2-[[1-(甲基磺醯基)-4-哌啶基]胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮)。
在另一個實施例中，本揭示案之化合物與Raf家族激酶抑制劑組合使用。適合用於所提供之組合物及方法之Raf家族激酶抑制劑的實例包括但不限於恩考芬尼(encorafenib) (LGX818)：(S)-(1-((4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺醯胺基)苯基)-1-異丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)丙-2-基)胺基甲酸甲酯；PLX-8394：N-(3-(5-(2-環丙基嘧啶-5-基)-3a,7a-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基)-2,4-二氟苯基)-3-氟吡咯啶-1-磺醯胺；Raf-709：N-(2-甲基-5'-嗎啉代-6'-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)-[3,3'-聯吡啶]-5-基)-3-(三氟甲基)苯甲醯胺；LXH254：N-(3-(2-(2-羥基乙氧基)-6-嗎啉代吡啶-4-基)-4-甲基苯基)-2-(三氟甲基)異菸鹼醯胺；索拉非尼(Sorafenib)：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺；LY 3009120：1-(3,3-二甲基丁基)-3-(2-氟-4-甲基-5-(7-甲基-2-(甲基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-基)苯基)脲；利菲拉非尼(Lifirafenib) (BGB-283)：5-(((1R,1aS,6bS)-1-(6-(三氟-甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1a,6b-二氫-1H-環丙烯并[b]苯并呋喃-5-基)甲基)-3,4-二氫-1,8-萘啶-2(1H)-酮；Tak-632：N-(7-氰基-6-(4-氟-3-(2-(3-(三氟甲基)-苯基)乙醯胺基)苯氧基)苯并[d]噻唑-2-基)環丙烷甲醯胺；CEP-32496：1-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)-3-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)異噁唑-3-基)脲；CCT196969：1-(3-(三級丁基)-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-((3-側氧基-3,4-二氫吡啶并[2,3-b]吡嗪-8-基)氧基)苯基)脲；及R05126766：N-[3-氟-4-[[4-甲基-2-側氧基-7-(2-嘧啶基氧基)-2H-1-苯并哌喃-3-基]甲基]-2-吡啶基]-N'-甲基硫醯胺。
在另一個實施例中，本揭示案之化合物與Src家族激酶組合使用。適合用於所提供之組合物及方法之Src家族激酶抑制劑的實例包括但不限於達沙替尼(Dasatinib) (N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-((6-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)胺基)噻唑-5-甲醯胺)；普納替尼(Ponatinib) (3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-基乙炔基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲醯胺)；凡德他尼(Vandetanib) (N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-((1-甲基哌啶-4-基)甲氧基)喹唑啉-4-胺)；博舒替尼(Bosutinib) (4-((2,4-二氯-5-甲氧基苯基)胺基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙氧基)喹啉-3-甲腈)；塞卡替尼(Saracatinib) (N-(5-氯苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)-5-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺)；KX2-391 (N-苯甲基-2-(5-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙醯胺)；SU6656 ((Z)-N,N-二甲基-2-側氧基-3-((4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-基)亞甲基)吲哚啉-5-磺醯胺)；PP1 (1-(三級丁基)-3-(對甲苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)；WH-4-023 ((2,4-二甲氧基苯基)(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基甲酸2,6-二甲基苯酯)；及KX-01 (N-苯甲基-2-(5-(4-(2-嗎啉代乙氧基)苯基)吡啶-2-基)乙醯胺)。在一個實施例中，Src抑制劑為達沙替尼。在一個實施例中，Src抑制劑為塞卡替尼。在一個實施例中，Src抑制劑為普納替尼。在一個實施例中，Src抑制劑為凡德他尼。在一個實施例中，Src抑制劑為KX-01。
在另一個實施例中，本揭示案之化合物與SHP-2抑制劑組合使用，該抑制劑包括但不限於SHP-099 (6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺二鹽酸鹽)、RMC-4550 (3(3S,4S)-(4-胺基-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-8-基)-6-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)甲醇)、RMC-4360 (Revolution Medicines)、TN0155 (Novartis)、BBP-398 (BridgeBio)及ERAS-601 (Erasca)。
在另一個實施例中，本揭示案之化合物與mTOR抑制劑組合使用。適合用於所提供之組合物及方法之mTOR抑制劑的實例包括但不限於依維莫司(Everolimus)、雷帕黴素(Rapamycin)、佐他莫司(Zotarolimus) (ABT-578)、地磷莫司(ridaforolimus) (Deforolimus；MK-8669)、沙帕色替(Sapanisertib) (INK128；5-(4-胺基-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯并[d]噁唑-2-胺)、Torin-1；1-(4-(4-丙醯基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)環己基)-9-(喹啉-3-基)苯并[h][1,6]萘啶-2(1H)-酮、達克利司(dactolisib) (BEZ235)；2-甲基-2-(4-(3-甲基-2-側氧基-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)苯基)丙腈、布帕尼西(buparlisib) (5-(2,6-二嗎啉-4-基嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺)；GDC-0941 (匹替司貝(pictilisib))；4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲基磺醯基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]嗎啉)；GDC-0349 ((S)-1-乙基-3-(4-(4-(3-甲基嗎啉代)-7-(氧雜環丁烷-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)苯基)脲)、VS-5584 (SB2343) (5-(8-甲基-2-嗎啉-4-基-9-丙-2-基嘌呤-6-基)嘧啶-2-胺)及維妥色替(vistusertib) (AZD-2014；3-(2,4-雙((S)-3-甲基嗎啉代)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基)-N-甲基苯甲醯胺)。
在另一個實施例中，本揭示案之化合物與泛ErbB家族抑制劑組合使用。在一個實施例中，KRAS及泛ErbB家族抑制劑為所提供之組合物及方法中之僅有活性劑。在一個實施例中，泛ErbB家族抑制劑為不可逆抑制劑。適合用於所提供之組合物及方法之不可逆泛ErbB家族抑制劑的實例包括但不限於阿法替尼(Afatinib)；達克替尼(Dacomitinib)；卡奈替尼(Canertinib)；波奇替尼(Poziotinib)、AV 412 (N-4-([3-(氯-4-氟苯基)胺基]-7-[3-甲基-3-(4-甲基-1-哌嗪-1-丁炔-1-基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯醯胺)；PF 6274484 N-4-([3-(氯-4-氟苯基)胺基]-7-甲氧基-6-喹唑啉基]-2-丙烯醯胺)及HKI 357 N-(2(E)-N-[[4-[[3-氯-4-[(氟苯基)甲氧基]苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基胺基)-2-丁醯胺)。在另一個實施例中，泛ErbB家族抑制劑為可逆抑制劑。適合用於所提供之組合物及方法之可逆泛ErbB家族抑制劑的實例包括但不限於埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、沙匹替尼(sapitinib)；瓦利替尼(varlitinib)；TAK-285 (N-[2-[4-[3-氯-4-[3-(三氟甲基)苯氧基]苯基胺基]-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基]乙基]-3-羥基-3-甲基丁醯胺)；AEE788 (S)-(6-(4-((4-乙基哌嗪-1-基甲基)苯基]-N-(1-苯基乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺)；他羅替尼(tarloxotinib) 3-[N-[4-(3-溴-4-氯苯基胺基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]胺甲醯基]-N,N-二甲基-N-(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基甲基)-2(E)-丙烯-1-溴化銨)；BMS 599626 ((3S)-3-嗎啉基甲基-[4-[[1-[(3-氟苯基)甲基]-1H-吲唑-5-基]胺基]-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]胺基甲酸酯二鹽酸鹽)；及GW 583340 (N-[3-氯-4-(3-氟苯甲氧基)苯基]-6-[2-[2-(甲基磺醯基)乙基胺基甲基]噻唑-4-基]喹唑啉-4-胺二鹽酸鹽)。
在一個實施例中，泛ErbB家族抑制劑為EGFR抑制劑與HER2抑制劑之組合，其中EGFR抑制劑及HER2抑制劑為以下中之兩者之組合：AG 1478 (N-(3-氯苯基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺鹽酸鹽)；AG 555 ((E)-2-氰基-3-(3,4-二羥基苯基)-N-(3-苯基丙基)-2-丙烯醯胺)；AG 556 ((E)-2-氰基-3-(3,4-二羥基苯基)-N-(4-苯基丁基)-2-丙烯醯胺；AG 825 (E-3-[3-苯并噻唑-2-基硫烷基甲基)-4-羥基-5-甲氧基苯基]-2-氰基-2-丙烯醯胺)；CP 724714 (2-甲氧基-N-[(2E)-3-[4-[3-甲基-4-(6-甲基吡啶-3-基氧基)苯基胺基]喹唑啉-6-基]-2-丙烯-1-基]乙醯胺；BIBU 1361 (N-(3-氯-4-氟苯基)-6-[4-(二乙基胺基甲基)-哌啶-1-基]嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽)；BIBU 1382 (N 8-(3-氯-4-氟苯基)-N 2-(1-甲基-4-哌啶基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶-4-胺二鹽酸鹽)；JNJ 28871063 (5E-4-胺基-6-[4-(苯甲氧基)-3-氯苯基胺基]-嘧啶-5-甲醛N-[2-(4-嗎啉基)乙基]肟鹽酸鹽)；PD 153035 (4-(3-溴苯基胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽)；及PD 158780 (N 4-(3-溴苯基)-N 6-甲基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺)。
在一個實施例中，泛ErbB家族抑制劑為抗EGFR抗體、抗HER2抗體或抗EGFR抗體與抗HER2抗體之組合。靶向EGFR及/或HER2之抗體，包括單株抗體、抗體結合物及雙特異性抗體為熟知的，且若干抗體商業上可用於研究及人類臨床用途。適合用於所提供之組合物及方法之抗EGFR抗體的實例包括耐昔妥珠單抗(necitumumab)、帕尼單抗(panitumumab)及西妥昔單抗(cetuximab)。適合用於所提供之組合物及方法之抗HER2抗體的實例包括帕妥珠單抗(pertuzumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)及恩美曲妥珠單抗(trastuzumab emtansine)。
在一些實施例中，本揭示案之化合物與免疫檢查點抑制劑組合使用。適合用於所提供之組合物及方法之免疫檢查點抑制劑的實例包括但不限於PD-1、PD-L1、CTLA-4及LAG-3抑制劑，諸如派姆單抗(Pembrolizumab) (Keytruda®)、納武單抗(Nivolumab) (Opdivo®)、西米普利單抗(Cemiplimab) (Libtayo®)、阿替利珠單抗(Atezolizumab) (Tecentriq®)、阿維魯單抗(Avelumab) (Bavencio®)、德瓦魯單抗(Durvalumab) (ImfinziTM)、伊匹單抗(Ipilimumab) (Yervoy®)、瑞拉利單抗(Relatlimab)、奧普杜拉格(Opdualag)及多塔利單抗(Dostarlimab) (Jemperli)。
化合物、其醫藥學上可接受之鹽及包含此類化合物及鹽之醫藥組合物亦可與其他抗腫瘤化合物(例如化學療法)共同投與，或與作為手術前或手術後之佐劑的其他治療(諸如放射線或手術干預)組合使用。 所選實施例
實施例1.     一種式I或式II化合物： (式I) (式II) 或其鹽；及/或其同位素體； 其中： R x係選自氫、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4烷氧基及C 1-C 4鹵烷氧基； R y係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R z係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代； R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c、R 2d及R 2e組成之群； R 3係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基組成之群； R 4係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 3-C 7環烷基、CN及C 2-C 3炔基組成之群； R 2a為-NR 5R 6； R 5係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7；或 R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代； R 7係選自由以下組成之群：氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及-(CH 2) m-NR 8R 9； R 8及R 9係獨立地選自由-H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含環原子內之至少一個氮且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基； n為0或1； m為1或2； R 2b為-NR 10R 11； R 10係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 11係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，及 -(CH 2) w-R 13；或 R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN， 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基； R 12為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代；或 R 13為包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該等氮中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；或 R 13為包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 14為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； w為0、1或2； x為0或1； R 2c為-NR 15R 16； R 15為H、視情況經CN之一個實例取代之C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -(CH 2) y-R 21；或 R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基； R 17係選自由氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)O-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基、-S(O) 2-C 1-C 4鹵烷基及R 35組成之群；且 R 20係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 18及R 20與其所連接之碳可一起形成含有一個選自N、O及S之雜原子的4-5員碳環或雜環，其中該碳環或雜環可視情況經甲基、鹵基、羥基、甲氧基或羰基之一個實例取代； R 19係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 22及R 23係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 1-C 4羥烷基、CH 2-(C 3-C 6雜環基)及C 2-C 3炔基； R 35為視情況經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的5-6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基； y為0、1或2； z為1或2； q為0或1； u為0、1或2； R 2d係選自由以下組成之群： -NR 24R 25， -C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26，及 -O-(C 1-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26； R 24為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26；或 R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代； R 26為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 27係選自氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基； R 2e為-NR 28R 29； R 28為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 29為-(CH 2) t-R 30； R 30係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 31係選自由-(CH 2) v-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群； R 32及R 33係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； t為0、1或2； v為1或2； p為0、1或2； R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基； 前提條件為當該化合物具有式I時，則R 2c不為 ；且 另一前提條件為當該化合物具有式II時，則R 2c不為-NR 15R 16，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該第二個氮經-C(O)-CH=CH 2取代。
實施例2.     如實施例1之化合物，其中該化合物為式I化合物或其鹽。
實施例3.     如實施例1之化合物，其中該化合物為式II化合物或其鹽。
實施例4.     如實施例1至3中任一項之化合物，其中R y係選自氫及鹵基。
實施例5.     如實施例1至3中任一項之化合物，其中R y係選自氫、Me、F及Cl。
實施例6.     如實施例1至3中任一項之化合物，其中R y係選自氫、F及Cl。
實施例7.     如實施例1至3中任一項之化合物，其中R y為H。
實施例8.     如實施例1至7中任一項之化合物，其中R z係選自氫、Me、F及Cl。
實施例9.     如實施例1至7中任一項之化合物，其中R z係選自氫、Me及F。
實施例10.   如實施例1至7中任一項之化合物，其中R z為氫。
實施例11.   一種式I-1或式II-1化合物： (式I-1) (式II-1)； 或其鹽；及/或其同位素體； 其中： R x係選自氫、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4烷氧基及C 1-C 4鹵烷氧基； R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代； R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c、R 2d及R 2e組成之群； R 3係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基組成之群； R 4係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基組成之群； R 2a為-NR 5R 6； R 5係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7；或 R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代； R 7係選自由以下組成之群：氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及-(CH 2) m-NR 8R 9； R 8及R 9係獨立地選自由-H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含環原子內之至少一個氮且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基； n為0或1； m為1或2； R 2b為-NR 10R 11； R 10係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 11係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，及 -(CH 2) w-R 13；或 R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN， 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基； R 12為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代；或 R 13為包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該等氮中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；或 R 13為包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 14為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； w為0、1或2； x為0或1； R 2c為-NR 15R 16； R 15為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -(CH 2) y-R 21；或 R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基； R 17係選自由氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)O-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基、-S(O) 2-C 1-C 4鹵烷基及R 35組成之群； R 19係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 20係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 22及R 23係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基； R 35為視情況經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代的5-6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基； y為0、1或2； z為1或2； q為0或1； u為0、1或2； R 2d係選自由以下組成之群： -NR 24R 25， -C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26，及 -O-(C 1-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26； R 24為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26；或 R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代； R 26為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 27係選自氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基； R 2e為-NR 28R 29； R 28為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 29為-(CH 2) t-R 30； R 30係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 31係選自由-(CH 2) v-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群； R 32及R 33係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； t為0、1或2； v為1或2； p為0、1或2； R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基； 前提條件為當該化合物具有式I-1時，則R 2c不為 ；且 另一前提條件為當該化合物具有式II-1時，則R 2c不為-NR 15R 16，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該第二個氮經-C(O)-CH=CH 2取代。
實施例12.   如實施例11之化合物，其中該化合物為式I-1化合物或其鹽。
實施例13.   如實施例11之化合物，其中該化合物為式II-1化合物或其鹽。
實施例14.   如實施例11至13中任一項之化合物，其中R x係選自氫、羥基及C 1-C 4鹵烷氧基。
實施例15.   如實施例11至13中任一項之化合物，其中R x係選自氫、羥基及-OCHF 2。
實施例16.   如實施例11至13中任一項之化合物，其中R x係選自氫及羥基。
實施例17.   如實施例11至13中任一項之化合物，其中R x為氫。
實施例18.   一種式I-2或式II-2化合物： (式I-2) (式II-2)；或其鹽；及/或其同位素體；其中： R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基，視情況經一或多個獨立地選自C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代； R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c及R 2d組成之群； R 3係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 1-C 3炔基組成之群； R 4係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 1-C 3炔基組成之群； R 2a為-NR 5R 6； R 5係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7；或 R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代； R 7係選自由以下組成之群：氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及-(CH 2) m-NR 8R 9； R 8及R 9係獨立地選自由-H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含環原子內之至少一個氮且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基； n為0或1； m為1或2； R 2b為-NR 10R 11； R 10係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 11係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，及 -(CH 2) w-R 13；或 R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN， 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基； R 12為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基取代；或 R 13為包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該等氮中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基取代；或 R 13為包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基取代； R 14為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； w為0、1或2； x為0或1； R 2c為-NR 15R 16； R 15為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -(CH 2) y-R 21，其中R 21為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基視情況進一步經一個選自由C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代；或 R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基； R 17係選自由氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)O-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基、-S(O) 2-C 1-C 4鹵烷基，及視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代之5-6員雜芳基； R 19係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 20係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 22及R 23係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； y為0、1或2； z為1或2； q為0或1； R 2d係選自由以下組成之群： -NR 24R 25， -C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26，及 -O-(C 1-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26； R 24為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26；或 R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代； R 26為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 27係選自氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基； 前提條件為當該化合物具有式I-2時，則R 2c不為 ；且 另一前提條件為當該化合物具有式II-2時，則R 2c不為-NR 15R 16，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該第二個氮經-C(O)-CH=CH 2取代。
實施例19.   如實施例18之化合物，其中該化合物為式I-2化合物或其鹽。
實施例20.   如實施例18之化合物，其中該化合物為式II-2化合物或其鹽。
實施例21.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基包含雜環基。
實施例22.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基包含碳環基。
實施例23.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基包含一個環。
實施例24.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基包含兩個環。
實施例25.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基未經取代。
實施例26.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1之該4-8員飽和雜環或碳環基經一個C 1-C 4烷基取代。
實施例27.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和單環碳環或單環雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代。
實施例28.   如實施例1至20中任一項之化合物，其中R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雙環碳環或雙環雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代。
實施例29.   如實施例1至28中任一項之化合物，其中R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代。
實施例30.   如實施例1至28中任一項之化合物，其中R 1為經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的4-8員飽和碳環基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基。
實施例31.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1為未經取代之包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基。
實施例32.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個鹵基、羥基或C 1-C 4烷基取代。
實施例33.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個鹵基或羥基取代。
實施例34.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個氟取代。
實施例35.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個氟或羥基取代。
實施例36.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基經一個氟取代。
實施例37.   如實施例1至30中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基經一個C 1-C 4烷基取代。
實施例38.   如實施例1至37中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例39.   如實施例1至37中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 、 、 及 。
實施例40.   如實施例1至37中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 、 、 及 。
實施例41.   如實施例1至37中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 及 。
實施例42.   如實施例1至37中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 及 。
實施例43.   如實施例1至41中任一項之化合物，其中R 3及R 4係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、乙炔基、氟及氯。
實施例44.   如實施例1至42中任一項之化合物，其中R 3及R 4係選自由以下組成之群：氫、氟及氯。
實施例45.   如實施例1至41中任一項之化合物，其中R 3係選自由以下組成之群：氫及氟。
實施例46.   如實施例1至41中任一項之化合物，其中R 3為氫。
實施例47.   如實施例1至41中任一項之化合物，其中R 3為氟。
實施例48.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、乙炔基、丙炔基、二氟甲基、CN、環丙基、氟及氯。
實施例49.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、乙炔基、氟及氯。
實施例50.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4係選自由以下組成之群：氫、氟及氯。
實施例51.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為丙炔基。
實施例52.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為CN。
實施例53.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為環丙基。
實施例54.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為二氟甲基。
實施例55.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為氯。
實施例56.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為氟。
實施例57.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為甲基。
實施例58.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為乙基。
實施例59.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為乙炔基。
實施例60.   如實施例1至47中任一項之化合物，其中R 4為氫。
實施例61.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c及R 2e組成之群。
實施例62.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2係選自由R 2a、R 2b及R 2c組成之群。
實施例63.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2係選自由R 2c及R 2e組成之群。
實施例64.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2係選自由R 2a及R 2b組成之群。
實施例65.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2為R 2a。
實施例66.   如實施例1至62、64及65中任一項之化合物，其中R 5為甲基或乙基。
實施例67.   如實施例1至62、64及65中任一項之化合物，其中R 5為甲基。
實施例68.   如實施例1至62及64至67中任一項之化合物，其中R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7。
實施例69.   如實施例1至62及64至68中任一項之化合物，其中R 6之該C 1-C 6伸烷基為直鏈。
實施例70.   如實施例1至62及64至68中任一項之化合物，其中R 6之該C 1-C 6伸烷基為環狀。
實施例71.   如實施例1至62及64至68中任一項之化合物，其中R 6之該C 1-C 6伸烷基為C 1-C 4伸烷基。
實施例72.   如實施例1至62及64至68中任一項之化合物，其中R 6之該C 1-C 6伸烷基係選自由以下組成之群：-(CH 2) 2-、-(CH 2) 3-、-(CH 2) 4-及 。
實施例73.   如實施例1至62、64及65中任一項之化合物，其中R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代。
實施例74.   如實施例73之化合物，其中R 5及R 6與其所連接之氮一起形成選自由以下組成之群的4-7員飽和雜環基： 、 、 及 ，其經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代。
實施例75.   如實施例1至62及64至74中任一項之化合物，其中n為0。
實施例76.   如實施例1至62及64至74中任一項之化合物，其中n為1。
實施例77.   如實施例1至62及64至76中任一項之化合物，其中R 7為氫。
實施例78.   如實施例1至62及64至76中任一項之化合物，其中R 7為-C 1-C 4烷基。
實施例79.   如實施例1至62及64至76中任一項之化合物，其中R 7為-(CH 2) m-NR 8R 9。
實施例80.   如實施例1至62及64至79中任一項之化合物，其中R 8及R 9獨立地為-C 1-C 2烷基。
實施例81.   如實施例1至62及64至79中任一項之化合物，其中R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基。
實施例82.   如實施例1至62及64至79中任一項之化合物，其中R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含兩個環之5-7員飽和雜環基，其中該等環原子包括一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子，且其視情況經鹵基取代。
實施例83.   如實施例81或82之化合物，其中由R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成之該飽和雜環基經-F取代。
實施例84.   如實施例1至62及64至76中任一項之化合物，其中R 7係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、-CH 2N(CH 3) 2、-CH 2N(CH 2CH 3) 2及 。
實施例85.   如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2為R 2b。
實施例86.   如實施例1至62、64及66至85中任一項之化合物，其中R 10為甲基或乙基。
實施例87.   如實施例1至62、64及66至85中任一項之化合物，其中R 10為甲基。
實施例88.   如實施例1至62、64及66至87中任一項之化合物，其中R 11為-(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN。
實施例89.   如實施例1至62、64及66至87中任一項之化合物，其中R 11為-(C 1-C 2伸烷基)-N(R 12)-CN。
實施例90.   如實施例1至62、64及66至87中任一項之化合物，其中R 11為-(C 3-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，其中該C 3-C 4伸烷基為環狀。
實施例91.   如實施例1至62、64及66至90中任一項之化合物，其中R 12為氫。
實施例92.   如實施例1至62、64及66至90中任一項之化合物，其中R 12為甲基。
實施例93.   如實施例1至63及66至87中任一項之化合物，其中R 11係選自由以下組成之群： 、 及-CH 2CH 2N(CH 3)CN。
實施例94.   如實施例1至62、64及66至87中任一項之化合物，其中R 11為-(CH 2) w-R 13。
實施例95.   如實施例94之化合物，其中w為0或1。
實施例96.   如實施例1至62、64、66至87、94及95中任一項之化合物，其中R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代。
實施例97.   如實施例1至62、64、66至87、94及95中任一項之化合物，其中R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基或鹵基取代。
實施例98.   如實施例1至62、64、66至87及94至97中任一項之化合物，其中R 13之該雜環基未進一步經羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基取代。
實施例99.   如實施例1至62、64、66至87及94至97中任一項之化合物，其中R 13之該雜環基未進一步經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基取代。
實施例100. 如實施例1至62、64、66至87及94至97中任一項之化合物，其中R 13之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代。
實施例101. 如實施例1至62、64、66至87及94至97中任一項之化合物，其中R 13之該雜環基進一步經1個選自由C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代。
實施例102. 如實施例1至62、64、66至87及94至97中任一項之化合物，其中R 13之該雜環基進一步經1個選自由甲基、甲氧基或氟組成之群的取代基取代。
實施例103. 如實施例1至62、64及66至87中任一項之化合物，其中R 11係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例104. 如實施例1至62、64及66至85中任一項之化合物，其中R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN； 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代；及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基。
實施例105. 如實施例1至62、64、66至85及104中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基為4-7員飽和雜環基。
實施例106. 如實施例1至62、64、66至85及104中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含環原子內之單個氮。
實施例107. 如實施例1至62、64、66至85及104中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含環原子內之兩個氮。
實施例108. 如實施例1至62、64、66至85及104中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 ，其經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN； 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代；及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基。
實施例109. 如實施例1至62、64、66至85及104至108中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經-(CH 2) x-N(R 14)-CN取代。
實施例110. 如實施例109之化合物，其中R 14為氫或甲基。
實施例111. 如實施例109之化合物，其中該-(CH 2) x-N(R 14)-CN基團係選自由以下組成之群：-CH 2NHCN、-CH 2N(CH 3)CN、-NHCN及-N(CH 3)CN。
實施例112. 如實施例1至62、64、66至85及104至108中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基取代，其中該氮經氰基取代。
實施例113. 如實施例1至62、64、66至85及104至108中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經 取代。
實施例114. 如實施例1至62、64、66至85、104、105、107及108中任一項之化合物，其中由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經氰基取代。
實施例115. 如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2為R 2c。
實施例116. 如實施例1至63、66至84及86至115中任一項之化合物，其中R 2c為-NR 15R 16，其中：
R 15為H、視情況經CN之一個實例取代之C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且
R 16係選自由以下組成之群：-(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18及-(CH 2) y-R 21。
實施例117. 如實施例1至63、66至84及86至115中任一項之化合物，其中R 2c為-NR 15R 16，其中：
R 15為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且
R 16係選自由以下組成之群：-(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18及-(CH 2) y-R 21。
實施例118. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15係選自由C 1-C 4烷基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4烷氧基組成之群。
實施例119. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15係選自由C 1-C 4烷基及C 1-C 4烷氧基組成之群。
實施例120. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15係選自由H、甲基、乙基、-CH 2-環丙基、-CH 2CH 2CN、-CH 2CHF 2及-CH 2CH 2OCH 3組成之群。
實施例121. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15係選自由甲基、乙基、-CH 2CHF 2及-CH 2CH 2OCH 3組成之群。
實施例122. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15係選自由甲基、乙基及-CH 2CH 2OCH 3組成之群。
實施例123. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15為甲基或乙基。
實施例124. 如實施例1至63、66至84及86至117中任一項之化合物，其中R 15為甲基。
實施例125. 如實施例1至63、66至84及86至124中任一項之化合物，其中R 16為-(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18。
實施例126. 如實施例1至63、66至84及86至125中任一項之化合物，其中R 16之該C 1-C 4伸烷基為直鏈。
實施例127. 如實施例1至63、66至84及86至125中任一項之化合物，其中R 16之該C 1-C 4伸烷基為支鏈。
實施例128. 如實施例1至63、66至84及86至125中任一項之化合物，其中R 16之該C 1-C 4伸烷基為環狀。
實施例129. 如實施例1至63、66至84及86至125中任一項之化合物，其中R 16之該C 1-C 4伸烷基係選自由-CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH(CH 3)-、-CH(CH 3)CH 2-、 及 組成之群。
實施例130. 如實施例1至63、66至84及86至125中任一項之化合物，其中R 16之該C 1-C 4伸烷基為-CH 2CH 2-。
實施例131. 如實施例1至63、66至84及86至130中任一項之化合物，其中R 17係選自由氫及甲基組成之群。
實施例132. 如實施例1至63、66至84及86至131中任一項之化合物，其中R 17為氫。
實施例133. 如實施例1至63、66至84及86至124中任一項之化合物，其中R 16為-(CH 2) y-R 21。
實施例134. 如實施例1至63、66至84、86至124及133中任一項之化合物，其中y為0或1。
實施例135. 如實施例1至63、66至84、86至124及133中任一項之化合物，其中y為0。
實施例136. 如實施例1至63、66至84、86至124及133中任一項之化合物，其中y為1。
實施例137. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該4-7員飽和雜環基包含一個環。
實施例138. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該4-7員飽和雜環基包含4-6個環原子。
實施例139. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21係選自：
包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和單環雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代；
包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和單環雜環基，其中该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及
包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和單環雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子。
實施例140. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和單環雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和單環雜環基，其中该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和單環雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子。
實施例141. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員單環飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雙環螺環雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子。
實施例142. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員單環飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雙環螺環雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子。
實施例143. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代。
實施例144. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例145. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基未經進一步取代。
實施例146. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代。
實施例147. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例148. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例149. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例150. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、Me、-CH 2CN及F組成之群的取代基取代。
實施例151. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經兩個鹵基取代基取代。
實施例152. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至144中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由Me及F組成之群的取代基取代。
實施例153. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代，或經兩個鹵基取代。
實施例154. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例155. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例156. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例157. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基未經進一步取代。
實施例158. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代。
實施例159. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例160. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由C 1-C 4烷基或鹵基組成之群的取代基取代。
實施例161. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、Me、-CH 2CN及F組成之群的取代基取代。
實施例162. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由Me及F組成之群的取代基取代，或進一步經兩個氟取代。
實施例163. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由Me及F組成之群的取代基取代。
實施例164. 如實施例153之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例165. 如實施例153或154之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例166. 如實施例153至155中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例167. 如實施例153之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例168. 如實施例153或154之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例169. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例170. 如實施例153之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群：
、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例171. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例172. 如實施例153之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群：
、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例173. 如實施例153至156t中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例174. 如實施例153至156中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基為 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例175. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代，或經兩個鹵基取代。
實施例176. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例177. 如實施例1至63、66至84、86至124及133至136中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例178. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代。
實施例179. 如實施例177之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代。
實施例180. 如實施例175之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代，或經兩個鹵基取代。
實施例181. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例182. 如實施例175之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團進一步經1個選自由羥基、CN、Me、-CH 2CN及F組成之群的取代基取代，或經兩個氟取代。
實施例183. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團進一步經1個選自由羥基、CN、Me、-CH 2CN及F組成之群的取代基取代。
實施例184. 如實施例175之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例185. 如實施例175至176e中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例186. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例187. 如實施例175之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例188. 如實施例175或176之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例189. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 及 。
實施例190. 如實施例175之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 及 。
實施例191. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 及 。
實施例192. 如實施例175之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 及 。
實施例193. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 及 。
實施例194. 如實施例175至177中任一項之化合物，其中R 16為： 。
實施例195. 如實施例1至63、66至84及86至115中任一項之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基。
實施例196. 如實施例195之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含一個環。
實施例197. 如實施例195之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含兩個環。
實施例198. 如實施例195之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例199. 如實施例195之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 。
實施例200. 如實施例195至199中任一項之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經-(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例201. 如實施例1至63、66至84、86至115及118至200中任一項之化合物，其中q為0。
實施例202. 如實施例1至63、66至84、86至115及118至201中任一項之化合物，其中R 17係選自由氫及C 1-C 4烷基組成之群。
實施例203. 如實施例1至63、66至84、86至115及118至201中任一項之化合物，其中R 17係選自由氫及甲基組成之群。
實施例204. 如實施例1至63、66至84、86至115及118至201中任一項之化合物，其中R 17為氫。
實施例205. 如實施例1至63、66至84、86至115及118至198中任一項之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
實施例206. 如實施例1至63、66至84及86至205中任一項之化合物，其中R 19為氫。
實施例207. 如實施例1至63、66至84及86至206中任一項之化合物，其中R 20係選自由氫及甲基組成之群。
實施例208. 如實施例1至63、66至84及86至206中任一項之化合物，其中R 20為氫。
實施例209. 如實施例1至63、66至84及86至206中任一項之化合物，其中R 18及R 20與R 18及R 20所連接之碳可一起形成含有一個選自N、O及S之雜原子的4-5員碳環或雜環，其中該碳環或雜環可視情況經甲基、鹵基、羥基、甲氧基或羰基之一個實例取代。
實施例210. 如實施例1至63、66至84及86至206中任一項之化合物，其中R 18及R 20與其所連接之碳一起形成環丁基或氮雜環丁烷環，其中該環丁基及該氮雜環丁烷可視情況經甲基之一個實例取代。
實施例211. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基及R 35組成之群。
實施例212. 如實施例1至63、66至84、86至208及211中任一項之化合物，其中R 22及R 23係獨立地選自甲基、乙基及甲氧基乙基。
實施例213. 如實施例1至63、66至84、86至208及211中任一項之化合物，其中R 22及R 23係獨立地選自甲基及乙基。
實施例214. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基，及視情況經C 1-C 4烷基取代之5-6員雜芳基；且其中N 22及N 23係獨立地選自甲基及乙基。
實施例215. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由H、-(CH 2) u-R 34及R 35組成之群。
實施例216. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中u為0或1。
實施例217. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中u為0。
實施例218. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中u為1。
實施例219. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中u為2。
實施例220. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中R 18係選自H、-R 34、-CH 2-R 34及-R 35。
實施例221. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至214中任一項之化合物，其中R 18係選自-R 34、-CH 2-R 34及-R 35。
實施例222. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至221中任一項之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 1-C 4羥烷基、CH 2-(C 3-C 6雜環基)及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例223. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至221中任一項之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例224. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34之該單環雜環經甲基、乙基、異丙基、甲氧基乙基、羥乙基或CH 2-氧雜環丁烷基之0或1個實例取代。
實施例225. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34之該單環雜環經甲基之0或1個實例取代。
實施例226. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34係選自經甲基、乙基、異丙基、甲氧基乙基、羥乙基或CH 2-氧雜環丁烷基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基、四氫呋喃基及嗎啉基。
實施例227. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34係選自經甲基、乙基、異丙基、甲氧基乙基、羥乙基或-CH 2-氧雜環丁烷基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
實施例228. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34係選自經甲基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
實施例229. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中一項之化合物，其中R 34為經甲基、乙基、異丙基、甲氧基乙基、羥乙基或CH 2-氧雜環丁烷基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基。
實施例230. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中一項之化合物，其中R 34為經甲基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基。
實施例231. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34為經甲基之0或1個實例取代之吡咯啶基。
實施例232. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之嗎啉基。
實施例233. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至223中任一項之化合物，其中R 34為經甲基之0或1個實例取代之嗎啉基。
實施例234. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至233中任一項之化合物，其中R 34之連接點為碳原子。
實施例235. 如實施例234之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例236. 如實施例234之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例237. 如實施例234之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例238. 如實施例234之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 。
實施例239. 如實施例234之化合物，其中R 34為 或 。
實施例240. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至221中任一項之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其中該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例241. 如實施例240之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其係選自由以下組成之群：4-8員單環雜環、6-10員稠合雙環雜環、6-10員橋聯雜環及6-10員螺雜環，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例242. 如實施例240之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-8員單環雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例243. 如實施例240之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員稠合雙環雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例244. 如實施例240之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員橋聯雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例245. 如實施例240之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員螺雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例246. 如實施例240至245中任一項之化合物，其中R 34係選自氮雜環丁烷、吡咯啶、2-氮雜雙環[2.1.1]己烷、嗎啉、2-氧雜-5-氮雜雙環[4.1.0]庚烷、1,4-氧雜氮雜環庚烷、2-氧雜-6-氮雜金剛烷、5-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬烷、2-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-2-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、3-氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,7-二氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,9-二氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.2]辛烷、7-氧雜-2-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、9-氧雜-3-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、6-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.2]壬烷、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、硫代嗎啉、硫代嗎啉1,1-二氧化物、1,4-硫雜氮雜環庚烷、1,4-硫雜氮雜環庚烷1,1-二氧化物、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-硫雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷3,3-二氧化物、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及六氫-1H-噻吩并[3,4-c]吡咯2,2-二氧化物，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例247. 如實施例246之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的吡咯啶：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例248. 如實施例246之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的嗎啉：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例249. 如實施例240至248中任一項之化合物，其中R 34之連接點為該雜環之該氮原子。
實施例250. 如實施例249之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例251. 如實施例249之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例252. 如實施例249之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例253. 如實施例249之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例254. 如實施例250之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例255. 如實施例250之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例256. 如實施例250之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例257. 如實施例250之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例258. 如實施例250之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例259. 如實施例240至258中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自氟、甲基、乙基、羥基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2及-CH 2CH 2N(CH 3) 2之取代基取代。
實施例260. 如實施例240至258中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟、甲基、乙基、羥基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、CH 2OCH 3、CH 2CH 2OCH 3、CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、CH 2N(CH 3) 2及CH 2CH 2N(CH 3) 2之取代基取代。
實施例261. 如實施例240至258中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟及甲基之取代基取代。
實施例262. 如實施例240至258中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環未經取代。
實施例263. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例264. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例265. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
實施例266. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
實施例267. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之 。
實施例268. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之 。
實施例269. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之 。
實施例270. 如實施例240至250中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之 。
實施例271. 如實施例240至270中任一項之化合物，其中u為1。
實施例272. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為含有至少一個氮原子之5-6員雜芳基，其中該雜芳基經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例273. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為含有至少一個氮原子之5-6員雜芳基，其中該雜芳基經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例274. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：嘧啶基、吡嗪基、噁唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1H-1,2,4-三唑基、咪唑基、4H-1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基及異噁唑基，各自經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例275. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：嘧啶基、吡嗪基、噁唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1H-1,2,4-三唑基、咪唑基、4H-1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基及異噁唑基，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例276. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：嘧啶基、噁唑基、1,2,4-噁二唑基、咪唑基及1,2,4-噻二唑基，各自經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例277. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：嘧啶基、噁唑基、1,2,4-噁二唑基、咪唑基及1,2,4-噻二唑基，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例278. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例279. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例280. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 及 ，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例281. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 及 ，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例282. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例283. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代的6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例284. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的嘧啶基或噠嗪基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例285. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代的嘧啶基或噠嗪基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例286. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的 、 及 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例287. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代的 、 及 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。 實施例288. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為含有至少一個氮原子之5員雜芳基，其中該雜芳基經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例289. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為含有至少一個氮原子之5員雜芳基，其中該雜芳基經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例290. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：噁唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1H-1,2,4-三唑基、咪唑基、4H-1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基及異噁唑基，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例291. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：噁唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1H-1,2,4-三唑基、咪唑基、4H-1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基及異噁唑基，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例292. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例293. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1或2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例294. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至293中任一項之化合物，其中R 35之該雜芳基經0或1個選自以下之取代基取代：C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4鹵烷基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例295. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至293中任一項之化合物，其中R 35之該雜芳基經0或1個選自以下之取代基取代：C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4鹵烷基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例296. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至293中任一項之化合物，其中R 35之該雜芳基經0或1個選自以下之取代基取代：氟、甲基、乙基、異丙基、三級丁基、二氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、-C(OH)(CH 3) 2、氧雜環丁烷-3-基、3-甲基氧雜環丁烷-3-基、環丁基、1-氟環丁基、1-羥基環丁基、環丙基、1-甲基環丙基及2-氟環丙基。
實施例297. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至293中任一項之化合物，其中R 35之該雜芳基經0或1個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、二氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、-C(OH)(CH 3) 2、氧雜環丁烷-3-基、3-甲基氧雜環丁烷-3-基、環丁基、環丙基、1-甲基環丙基及2-氟環丙基。
實施例298. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例299. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例300. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例301. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例302. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例303. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例304. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經1個選自以下之取代基取代的1,2,4-噁二唑基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例305. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經1個選自以下之取代基取代的1,2,4-噁二唑基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例306. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經1個選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例307. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經1個選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
實施例308. 如實施例304或306之化合物，其中該噁二唑基經一個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、二氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、-C(OH)(CH 3) 2、氧雜環丁烷-3-基、3-甲基氧雜環丁烷-3-基、環丁基、1-氟環丁基、1-羥基-環丁基、環丙基、1-甲基環丙基及2-氟環丙基。
實施例309. 如實施例304至307中任一項之化合物，其中該噁二唑基經一個選自以下之取代基取代：甲基、乙基、異丙基、三級丁基、二氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、-C(OH)(CH 3) 2、氧雜環丁烷-3-基、3-甲基氧雜環丁烷-3-基、環丁基、環丙基、1-甲基環丙基及2-氟環丙基。
實施例310. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例311. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例312. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經1或2個獨立地選自甲基及氟之取代基取代的嘧啶基或噠嗪基。
實施例313. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35為經甲基之0或1個實例取代之嘧啶基或噠嗪基。
實施例314. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自： 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例315. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自： 、 、 、 及 。
實施例316. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自： 、 、 、 、 、 及 。
實施例317. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自： 、 及 。
實施例318. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 35係選自： 及 。
實施例319. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至318中任一項之化合物，其中R 35之連接點在碳原子上。
實施例320. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 18為-(CH 2) uR 34。
實施例321. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至271中任一項之化合物，其中R 18為-CH 2-R 34。
實施例322. 如實施例1至63、66至84、86至208及211至270中任一項之化合物，其中R 18為R 34。
實施例323. 如實施例1至63、66至84、86至208及272至318中任一項之化合物，其中R 18為R 35。
實施例324. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18為H。
實施例325. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18不為H。
實施例326. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)OCH 3、-C(O)OCH 2CH 3、-C(O)OCH(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-C(O)-環丙基、-CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-S(O) 2CH 3、-S(O) 2CH 2CH 3、-S(O) 2-環丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例327. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)OCH 3、-C(O)OCH 2CH 3、-C(O)OCH(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-C(O)-環丙基、-CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-S(O) 2CH 3、-S(O) 2CH 2CH 3、-S(O) 2-環丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例328. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)OCH 3、-C(O)OCH 2CH 3、-C(O)OCH(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-C(O)-環丙基、-CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-S(O) 2CH 3、-S(O) 2CH 2CH 3、-S(O) 2-環丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例329. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)OCH 3、-C(O)OCH 2CH 3、-C(O)OCH(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-C(O)-環丙基、-CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-S(O) 2CH 3、-S(O) 2CH 2CH 3、-S(O) 2-環丙基、噁唑基及4-甲基噁唑基組成之群。
實施例330. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18不為氫。
實施例331. 如實施例1至63、66至84及86至208中任一項之化合物，其中R 18為-C(O)OCH 3。
實施例332. 如實施例1至63、66至84及86至331中任一項之化合物，其中該化合物之該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18部分中之雙鍵呈 E構型。
實施例333. 如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2為R 2d。
實施例334. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至333中任一項之化合物，其中R 2d為-NR 24R 25。
實施例335. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至334中任一項之化合物，其中R 24為甲基或乙基。
實施例336. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至334中任一項之化合物，其中R 24為甲基。
實施例337. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至336中任一項之化合物，其中R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26。
實施例338. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至337中任一項之化合物，其中R 25之該C 1-C 4伸烷基係選自由-CH 2-、-CH 2CH 2-、-(CH 2) 3-、-(CH 2) 4-、-CH 2CH(CH 3)-及 組成之群。
實施例339. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至334中任一項之化合物，其中R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該4-8員飽和雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基取代。
實施例340. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339中任一項之化合物，其中R 24及R 25與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例341. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339中任一項之化合物，其中R 24及R 25與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例342. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339至341中任一項之化合物，其中R 24及R 25與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基未經C 1-C 4烷基取代。
實施例343. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339至341中任一項之化合物，其中R 24及R 25與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經甲基取代。
實施例344. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339至343中任一項之化合物，其中該-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26基團之該C 0-C 2伸烷基係選自一鍵及亞甲基。
實施例345. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至334及339至343中任一項之化合物，其中該-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26基團之該C 0-C 2伸烷基為一鍵。
實施例346. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至333中任一項之化合物，其中R 2d為-C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26。
實施例347. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333及335至346中任一項之化合物，其中R 27為氫。
實施例348. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333及335至347中任一項之化合物，其中該-C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26基團之該C 1-C 4伸烷基為亞甲基。
實施例349. 如實施例1至60、66至84、86至114及116至333中任一項之化合物，其中R 2d為-O-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26。
實施例350. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333、335至345及347至349中任一項之化合物，其中該-O-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26基團之該C 1-C 4伸烷基為亞甲基。
實施例351. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333、335至345及347至350中任一項之化合物，其中R 26為氫或甲基。
實施例352. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333、335至345及347至350中任一項之化合物，其中R 26為氫。
實施例353. 如實施例1至60、66至84、86至114、116至333、335至345及347至350中任一項之化合物，其中R 26為甲基。
實施例354. 如實施例1至60中任一項之化合物，其中R 2為R 2e。
實施例355. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至354中任一項之化合物，其中R 28係選自由C 1-C 4烷基及C 1-C 4烷氧基組成之群。
實施例356. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至354中任一項之化合物，其中R 28係選自由甲基、乙基及-CH 2CH 2OCH 3組成之群。
實施例357. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至354中任一項之化合物，其中R 28為甲基或乙基。
實施例358. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至354中任一項之化合物，其中R 28為甲基。
實施例359. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至358中任一項之化合物，其中t為0或1。
實施例360. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至358中任一項之化合物，其中t為1。
實施例361. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至358中任一項之化合物，其中t為0。
實施例362. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至361中任一項之化合物，其中R 30為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例363. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至362中任一項之化合物，其中R 30之該雜環基未經進一步取代。
實施例364. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至362中任一項之化合物，其中R 30之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例365. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至362中任一項之化合物，其中R 30之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C≡CR 31取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例366. 如實施例365之化合物，其中R 30之該雜環基未經進一步取代。
實施例367. 如實施例365之化合物，其中R 30之該雜環基進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例368. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至367中任一項之化合物，其中R 29係選自由以下組成之群： 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷及吡咯啶基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
實施例369. 如實施例368之化合物，其中該等氮雜環丁烷及吡咯啶基團未經進一步取代。
實施例370. 如實施例368之化合物，其中該等氮雜環丁烷及吡咯啶基團進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4氰基烷基及鹵基組成之群的取代基取代。
實施例371. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至370中任一項之化合物，其中v為1。
實施例372. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至370中任一項之化合物，其中v為2。
實施例373. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至372中任一項之化合物，其中p為0或1。
實施例374. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至372中任一項之化合物，其中p為0。
實施例375. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至372中任一項之化合物，其中p為1。
實施例376. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332、334至370及373至375中任一項之化合物，其中R 31係選自由-CH 2-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群。
實施例377. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至376中任一項之化合物，其中R 32及R 33係獨立地選自甲基及乙基。
實施例378. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至370及373至375中任一項之化合物，其中R 31為-(CH 2) p-R 36。
實施例379. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332、334至370及377中任一項之化合物，其中R 31為-CH 2-NR 32R 33。
實施例380. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至378中任一項之化合物，其中R 36為含有氮原子且視情況含有氧原子作為僅有雜原子之4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例381. 如實施例1至61、63、63、66至84、86至114、116至332及334至378中任一項之化合物，其中R 36為含有氮原子作為僅有雜原子之4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例382. 如實施例380或381之化合物，其中R 36之該單環雜環經0、1或2個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代。
實施例383. 如實施例380或381之化合物，其中R 36之該單環雜環經甲基之0、1或2個實例取代。
實施例384. 如實施例380或381之化合物，其中R 36之該單環雜環經0或1個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代。
實施例385. 如實施例380或381之化合物，其中R 36之該單環雜環經甲基之0或1個實例取代。
實施例386. 如實施例384之化合物，其中R 36係選自經0、1或2個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代的氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
實施例387. 如實施例385之化合物，其中R 36係選自經甲基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
實施例388. 如實施例384之化合物，其中R 36為經0、1或2個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代的氮雜環丁烷基。
實施例389. 如實施例385之化合物，其中R 36為經甲基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基。
實施例390. 如實施例384之化合物，其中R 36為經0、1或2個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代的吡咯啶基。
實施例391. 如實施例385之化合物，其中R 36為經甲基之1或2個實例取代之吡咯啶基。
實施例392. 如實施例385之化合物，其中R 36為經甲基之0或1個實例取代之吡咯啶基。
實施例393. 如實施例385之化合物，其中R 36為經甲基之0或1個實例取代之嗎啉基。
實施例394. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332、334至378及380至393中任一項之化合物，其中R 36之連接點為碳原子。
實施例395. 如實施例394之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例396. 如實施例394之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例397. 如實施例394之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 。
實施例398. 如實施例394之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例399. 如實施例394之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例400. 如實施例380至399中任一項之化合物，其中p為0。
實施例401. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至378中任一項之化合物，其中R 36為含有氮原子及0、1或2個選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其中該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例402. 如實施例401之化合物，其中R 36為含有氮原子及0、1或2個選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其係選自由以下組成之群：4-8員單環雜環、6-10員稠合雙環雜環、6-10員橋聯雜環及6-10員螺雜環，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例403. 如實施例401之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-8員單環雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例404. 如實施例401之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員稠合雙環雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例405. 如實施例401之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員橋聯雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例406. 如實施例401之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的6-10員螺雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例407. 如實施例401至406中任一項之化合物，其中R 36係選自氮雜環丁烷、吡咯啶、2-氮雜雙環[2.1.1]己烷、嗎啉、2-氧雜-5-氮雜雙環[4.1.0]庚烷、1,4-氧雜氮雜環庚烷、2-氧雜-6-氮雜金剛烷、5-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬烷、2-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-2-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、3-氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,7-二氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,9-二氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.2]辛烷、7-氧雜-2-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、9-氧雜-3-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、6-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.2]壬烷、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、硫代嗎啉、硫代嗎啉1,1-二氧化物、1,4-硫雜氮雜環庚烷、1,4-硫雜氮雜環庚烷1,1-二氧化物、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-硫雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷3,3-二氧化物、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及六氫-1H-噻吩并[3,4-c]吡咯2,2-二氧化物，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例408. 如實施例407之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的嗎啉：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例409. 如實施例401至408中任一項之化合物，其中R 36之連接點為該雜環之該氮原子。
實施例410. 如實施例409之化合物，其中該R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例411. 如實施例410之化合物，其中R 36為 或 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
實施例412. 如實施例410之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例413. 如實施例410之化合物，其中R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的 ：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基。
實施例414. 如實施例401至413中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自氟、甲基、乙基、羥基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-CH 2CH 2N(CH 3) 2之取代基取代。
實施例415. 如實施例401至413中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟、甲基、乙基、羥基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-CH 2CH 2N(CH 3) 2之取代基取代。
實施例416. 如實施例401至413中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟及甲基之取代基取代。
實施例417. 如實施例401至413中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環經氟之0、1或2個實例取代。
實施例418. 如實施例401至413中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環未經取代。
實施例419. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例420. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例421. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
實施例422. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
實施例423. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 及 。
實施例424. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36為未經取代之 或未經取代之 。
實施例425. 如實施例401至410中任一項之化合物，其中R 36為未經取代之 。
實施例426. 如實施例401至425中任一項之化合物，其中p為1。
實施例427. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至370中任一項之化合物，其中R 31係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例428. 如實施例1至61、63、66至84、86至114、116至332及334至370中任一項之化合物，其中R 31係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 。
實施例429. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例430. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例431. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例432. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例433. 如實施例1、11及18e中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例434. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群：
、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例435. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例436. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 及其所有鹽及同位素體。
實施例437. 如實施例1或11之化合物，該化合物係選自： 、 、 、 、 、 、 、 、 ; 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例438. 如實施例1、11及18中任一項之化合物，該化合物係選自： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，及其所有鹽及同位素體。
實施例439. 如實施例1至438中任一項之化合物，其中該化合物不為鹽。
實施例440. 如實施例1至438中任一項之化合物，其中該化合物為鹽。
實施例441. 如實施例440之化合物，其中該鹽為甲酸鹽。
實施例442. 如實施例440之化合物，其中該鹽為三氟乙酸鹽。
實施例443. 如實施例440之化合物，其中該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例444. 一種醫藥調配物，該醫藥調配物包含如實施例1至440中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例445. 一種治療或抑制癌症之方法，該方法包括：向有需要之個體投與治療有效量之如實施例1至440中任一項之化合物，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽，或如實施例444之醫藥調配物。
實施例446. 如實施例445之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
實施例447. 如實施例445之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
實施例448. 如實施例445至447中任一項之方法，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
實施例449. 如實施例445至447中任一項之方法，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
實施例450. 如實施例445至449中任一項之方法，其中該方法進一步包括向該個體投與治療有效量之額外化學治療劑。
實施例451. 如實施例1至440中任一項之化合物或如實施例444之醫藥調配物，其係用作藥劑。
實施例452. 如實施例1至440中任一項之化合物或如實施例444之醫藥調配物，其係用於治療或抑制癌症，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例453. 如實施例452之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
實施例454. 如實施例452之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
實施例455. 如實施例452至454中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
實施例456. 如實施例452至454中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
實施例457. 如實施例452至456中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以與治療有效量之額外化學治療劑一起投與。
實施例458. 如實施例452至457中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以按治療有效量投與。
實施例459. 如實施例1至440中任一項之化合物或如實施例444之醫藥調配物，其係用於製造用以治療或抑制癌症之藥劑，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例460. 如實施例459之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
實施例461. 如實施例459之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
實施例462. 如實施例459至461中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
實施例463. 如實施例459至461中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
實施例464. 如實施例459至463中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以與治療有效量之額外化學治療劑一起投與。
實施例465. 如實施例459至464中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該藥劑包含治療有效量之該化合物或組合物。
實施例466. 一種如實施例1至440中任一項之化合物或如實施例444之醫藥調配物之用途，其係用於製造用以治療或抑制癌症之藥劑，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例467. 如實施例466之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
實施例468. 如實施例466之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
實施例469. 如實施例466至468中任一項之用途，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
實施例470. 如實施例466至468中任一項之用途，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
實施例471. 如實施例466至470中任一項之用途，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以與治療有效量之額外化學治療劑一起投與。
實施例472. 如實施例466至471中任一項之用途，其中該藥劑包含治療有效量之該化合物或醫藥組合物。
實施例473. 一種如實施例1至440中任一項之化合物或如實施例444之醫藥調配物之用途，其係用於治療或抑制癌症，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
實施例474. 如實施例473之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
實施例475. 如實施例473之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
實施例476. 如實施例473至475中任一項之用途，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
實施例477. 如實施例473至475中任一項之用途，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
實施例478. 如實施例473至477中任一項之用途，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以與治療有效量之額外化學治療劑一起投與。
實施例479. 如實施例473至478中任一項之用途，其中用途涉及治療有效量之該化合物或組合物。 一般合成方法
本揭示案之化合物可鑒於下文所示之實例中之揭示內容而製得。
用於製備此等化合物之起始物質及試劑可獲自商業供應商，諸如MilliporeSigma.、Bachem.等，或藉由熟習此項技術者已知之方法，遵循參考文獻中所闡述之程序來製備，諸如Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, 第1-17卷 (John Wiley and Sons, 1991)；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, 第1-5卷及增刊 (Elsevier Science Publishers, 1989)；Organic Reactions, 第1-40卷 (John Wiley and Sons, 1991)；March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 第4版)；及Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989)。此等流程僅說明可合成本揭示案之化合物之一些方法，且可對此等流程作出各種修改且將為閱讀本揭示案之熟習此項技術者所想到。反應之起始物質及中間物及最終產物可在必要時使用常規技術分離及純化，包括但不限於過濾、蒸餾、結晶、層析及類似技術。此類物質可使用常規方式表徵，包括物理常數及光譜數據。
除非有相反規定，否則本文所述之反應在大氣壓下在約-78℃至約150℃，諸如約0℃至約125℃之溫度範圍內且進一步諸如在約室溫(或周圍溫度)，例如約20℃下發生。 實例
給出式(I)、式(I-1)、式(I-2)、式(II)、式(II-1)及式(II-2)化合物及其醫藥學上可接受之鹽的以下製備以使熟習此項技術者能夠更清楚地理解及實施本揭示案。該等製備不應視為限制本揭示案之範疇，而僅為本揭示案之說明及代表。
在本章節中使用以下縮寫：
ACN 乙腈
br 寬
Boc 三級丁氧基羰基
d 二重峰
dd 雙二重峰
ddd 雙重雙二重峰
dt 雙三重峰
DCM 二氯甲烷
ESI+ 電噴霧電離
FA 甲酸
g 公克
h 小時
HPLC 高效液相層析
Hz 赫茲
J 偶合常數
LCMS 液相層析-質譜法
m 多重峰
M 莫耳濃度
mg 毫克
MHz 百萬赫茲
mL 毫升
mmol 毫莫耳
m/z 質量/電荷比
min 分鐘
NMR 核磁共振
OTf 三氟甲烷磺酸酯
ppm 百萬分率
quin 五重峰
Rt 滯留時間
s 單峰
SFC 超臨界流體層析
t 三重峰
td 三雙重峰
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
uL 微升
umol 微莫耳
除非另有規定，否則所有試劑皆獲自商業供應商且未經進一步純化即使用。 合成實例 實例 1 ( 方法 1-A) ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： ( S)-4-( 苯甲氧基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶
向4-苯甲氧基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶(400 mg，1.13 mmol)於甲苯(5 mL)中之溶液中添加三氟甲烷磺酸(8-氯-7-氟-1-萘基)酯(445.09 mg，1.35 mmol)、2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯苯(105.32 mg，225.70 µmol)、參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0) (103.34 mg，112.85 µmol)及碳酸銫(1.47 g，4.51 mmol)。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(0.1%TFA)-ACN；B%：45%-75%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之( S)-4-(苯甲氧基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶(260 mg，36%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.765分鐘，m/z = 532.2 [M + H]+。 步驟 2 ： ( S)-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 醇
在60℃下將( S)-4-(苯甲氧基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶(250 mg，386.36 µmol，三氟乙酸鹽)於三氟乙酸(1 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物。在0℃下用飽和碳酸鈉溶液(3 mL)淬滅殘餘物且用二氯甲烷(3 x 15 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-醇(200 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.644分鐘，m/z = 422.2 [M + H]+。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 ( S)-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基酯
在0℃下向( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-醇(190 mg，341.15 µmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(138.08 mg，1.36 mmol)及三氟甲基磺醯基三氟甲烷磺酸酯(240.63 mg，852.88 µmol)。在25℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水(5 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯(200 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.762分鐘，m/z = 574.1 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-(2-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在0℃下向三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯(100 mg，173.92 µmol)於 N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加 N-乙基- N-異丙基丙-2-胺(89.91 mg，695.68 µmol)及 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(45.46 mg，260.88 µmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之( S)-(2-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(100 mg，81%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.585分鐘，m/z = 598.3 [M + H]+。 步驟 5 ： ( S)- N 1-(7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N 1- 甲基乙烷 -1,2- 二胺
在25℃下将( S)-(2-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(90 mg，126.20 µmol，三氟乙酸鹽)於含4.0 M鹽酸之乙酸乙酯(1 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之( S)- N 1 -(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1 -甲基乙烷-1,2-二胺(50 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.585分鐘，m/z = 498.3 [M + H]+。 步驟 6 ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
在0℃下向( S)- N 1 -(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1 -甲基乙烷-1,2-二胺(40 mg，80.16 µmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸(5.21 mg，40.08 µmol)、 N-乙基- N-異丙基丙-2-胺(20.72 mg，160.31 µmol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷-2,4,6-三氧化物(38.26 mg，60.12 µmol，50%，於乙酸乙酯中)。在25℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物0.5小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：40%-70%，8分鐘)純化，得到呈黃色油狀之( S,E)-4-((2-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(4.13 mg，17%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.92 (dd, J= 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.56 - 7.39 (m, 3H), 7.38 - 7.25 (m, 1H), 6.87 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 4.24 - 4.10 (m, 2H), 3.89 - 3.80 (m, 1H), 3.79 - 3.69 (m, 4H), 3.66 - 3.49 (m, 4H), 3.31 - 3.21 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.15 - 3.01 (m, 2H), 2.69 (br d, J= 14.8 Hz, 1H), 2.63 (br s, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.32 - 2.28 (m, 1H), 2.02 (br d, J= 8.1 Hz, 1H), 1.83 - 1.66 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.162分鐘，m/z = 610.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.162分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 610.3。 實例 2 ( 方法 1-A13) ： ( E)-4-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： 3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(14 mg，11三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.721分鐘，m/z = 624.3 [M + H]+。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-( 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(12 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.603分鐘，m/z = 524.3 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-4-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：1%-35%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(1.9 mg，12%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (dd, J= 8.94, 5.84 Hz, 1 H) 7.69 (br d, J = 8.11 Hz, 1 H), 7.49 (td, J= 7.60, 3.04 Hz, 1 H), 7.44 - 7.36 (m, 2 H), 7.31 - 7.20 (m, 1 H), 6.73 - 6.65 (m, 1 H), 4.90 - 4.75 (m, 1 H), 4.49 - 4.40 (m, 1 H), 4.38 - 4.28 (m, 1 H), 4.22 (br d, J= 17.29 Hz, 1 H), 3.96 - 3.84 (m, 1 H), 3.78 - 3.70 (m, 5 H), 3.66 - 3.58 (m, 1 H), 3.56 - 3.43 (m, 2 H), 3.41 - 3.34 (m, 1 H), 3.18 - 3.04 (m, 3 H), 3.00 - 2.96 (m, 3 H), 2.64 - 2.57 (m, 5 H), 2.13 - 2.06 (m, 2 H), 1.87 - 1.81 (m, 1 H), 1.79 - 1.69 (m, 1 H), 1.64 - 1.40 (m, 2 H)。LCMS Rt = 2.196分鐘，m/z = 636.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.196分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.3。 實例 3 ( 方法 1-A14) ： ( E)-4-(( R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： ( R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用( R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-50%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之( R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(20 mg，16%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.727分鐘，m/z = 624.3 [M + H]+。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-(( R)- 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc反應之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(( R)-吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(17 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.700分鐘，m/z = 524.3 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-4-(( R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A ，步驟 6)類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(( R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(5 mg，23.38%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (dd, J= 5.9, 9.0 Hz, 1H), 7.81 (br d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.62 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 7.55 (br d, J= 3.4 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.22 (m, 1H), 6.88 - 6.56 (m, 1H), 5.00 - 4.65 (m, 1H), 4.40 - 4.03 (m, 3H), 3.98 - 3.87 (m, 1H), 3.86 - 3.60 (m, 9H), 3.19 - 3.04 (m, 3H), 3.03 - 2.94 (m, 3H), 2.65 - 2.54 (m, 5H), 2.28 - 1.94 (m, 2H), 1.88- 1.34 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.179分鐘，m/z = 636.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.179分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.3。 實例 4 ( 方法 1-A19) ： ( E)-4-((2 S,4 S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： (2 S,4 S)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2 S,4 S)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，2.50 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之溶液中添加氫氧化鈉(2 M，3.75 mL)及氯甲酸苯甲酯(426.48 mg，2.50 mmol)，接著在20℃下攪拌混合物2小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-15%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(2 S,4 S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，71.8%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56-7.55 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 5H), 5.09 (s, 2H), 4.09 - 4.05 (m, 1H), 3.92-3.82 (m, 1H), 3.44 - 3.39 (m, 1H), 3.17-3.12 (m, 1H), 2.01-1.92 (m. 1H), 1.79-1.74 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.20-1.16 (m, 3H)。 步驟 2 ： (2 S, 4 S)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2 S,4 S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，1.79 mmol)於 N,N-二甲基甲醛(7 mL)中之溶液中添加氫化鈉(143.52 mg，3.59 mmol，60%)且在0℃下攪拌0.5小時。將碘甲烷(382.00 mg，2.69 mmol)添加至上述溶液中且在25℃下攪拌2小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-15%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色膠狀之(2 S,4 S)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，80%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.40 - 7.35 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.76 - 4.72 (m, 1H), 3.93-3.88 (m, 1H) 3.43 - 3.39 (m, 1H), 3.25-3.20 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.25-2.18 (m. 1H), 1.70-1.67 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.20-1.16 (m, 3H)。 步驟 3 ： (2 S, 4 S)-2- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2 S,4 S)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，1.43 mmol)於乙酸乙酯(6 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(10 mg，10%純度)。接著將混合物脫氣且用氫氣吹掃3次，且在25℃下於氫氣下攪拌12小時。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈無色油狀之(2 S,4 S)-2-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(280 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.250分鐘，m/z = 241.2 [M + H]+。 步驟 4 ： (2 S,4 S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (Phenomenex Luna 80*30mm*3µm管柱；10%-50%乙腈/含1% TFA之水，8分鐘梯度)純化粗產物，得到呈黃色膠狀之(2 S,4 S)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 mg，31%)。LCMS Rt = 0.726分鐘，m/z = 620.3 [M + H]+。 步驟 5 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-((3 S,5 S)-5- 甲基吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色膠狀之7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-((3 S,5 S)-5-甲基吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(140 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.477分鐘，m/z = 520.3 [M + H]+。 步驟 6 ： ( E)-4-(( 2S,4 S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5µm；移動相：(水(碳酸氫銨)-ACN；B%：50%-80%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(( 2S,4 S)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(14.35 mg，23%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.61 - 7.49 (m, 2H), 7.42 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.33 (m, 1H), 7.31 - 7.21 (m, 1H), 6.80 - 6.66 (m, 1H), 5.09 - 4.97 (m, 1H), 4.47 - 4.31 (m, 2H), 4.26 (br d, J= 17.3 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 1H), 4.01 - 3.89 (m, 1H), 3.82 - 3.71 (m, 4H), 3.68 - 3.50 (m, 2H), 3.32 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.00 (m, 2H), 2.98 - 2.93 (m, 3H), 2.69 - 2.58 (m, 2H), 2.42 (d, J= 2.4 Hz, 3H) 2.37 - 2.29 (m, 2H), 2.01 (br d, J= 7.1 Hz, 1H), 1.88 - 1.67 (m, 4H), 1.36 - 1.22 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.707分鐘，m/z = 632.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 10 mM碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.707分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.3。 實例 5 ( 方法 1-A12) ： ( E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 甲氧基丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯且用3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，37%)。LCMS Rt = 0.720分鐘，m/z = 606.31 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]- N- 吡咯啶 -3- 基 -6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈紅色固體狀之7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-吡咯啶-3-基-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(160 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.520分鐘，m/z = 506.26 [M + H] +。 步驟 3 ： ( E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 甲氧基丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( E)-4-甲氧基丁-2-烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：40%-70%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之( E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-甲氧基丁-2-烯-1-酮(2.23 mg，4%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ ppm 7.80 - 7.75 (m, 1 H), 7.63 - 7.57 (m, 1 H), 7.50 - 7.38 (m, 2 H), 7.35 - 7.29 (m, 1 H), 7.27 - 7.22 (m, 1 H), 6.75 - 6.63 (m, 1 H), 6.37 - 6.24 (m, 1 H), 4.81 - 4.61 (m, 1 H), 4.28 - 4.11 (m, 2 H), 4.08 - 3.94 (m, 3 H), 3.86 - 3.57 (m, 3 H), 3.52 - 3.40 (m, 2 H), 3.35 - 3.24 (m, 4 H), 3.08 - 2.93 (m, 1 H), 2.96 - 2.86 (m, 4 H), 2.57 - 2.46 (m, 2 H), 2.32 - 2.27 (m, 3 H), 2.20 - 2.15 (m, 2 H), 2.08 - 1.97 (m, 2 H), 1.94 - 1.88 (m, 1 H), 1.71 - 1.53 (m, 3 H)。LCMS Rt = 3.206分鐘，m/z = 604.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.206分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 604.3。 實例 6 ( 方法 1-A2) ： ( E)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-吡咯啶-3-基-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(如 實例 5 步驟 2製備)替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：25%-55%，8分鐘)純化混合物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(9.68 mg，12%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.73 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.49 (m, 2H), 7.44 - 7.39 (m, 1H), 7.37 - 7.22 (m, 2H), 6.74 - 6.68 (m, 1H), 5.15 - 5.01 (m, 1H), 4.75 - 4.59 (m, 2H), 4.34 (br d, J= 17.8 Hz, 2H), 3.98 - 3.84 (m, 2H), 3.76 (d, J= 4.3 Hz, 3H), 3.73 - 3.52 (m, 4H), 3.48 - 3.26 (m, 2H), 3.19 - 3.04 (m, 5H), 2.92 (br s, 3H), 2.71 (br d, J= 15.4 Hz, 1H), 2.39 - 2.17 (m, 3H), 2.16 - 1.98 (m, 3H) LCMS Rt = 2.162分鐘，m/z = 618.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.162分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.3。 實例 7 ( 方法 1-A10) ： ( Z)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( Z)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸，自7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-吡咯啶-3-基-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(如 實例 5 步驟 2製備)來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：1%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之( Z)-4-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(4.87 mg，7%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ ppm 8.29 (s, 1 H), 7.87 (d, J= 8.00 Hz, 1 H), 7.70 (br d, J= 8.25 Hz, 1 H), 7.63 - 7.48 (m, 2 H), 7.46 - 7.38 (m, 1 H), 7.37 - 7.27 (m, 1 H), 6.73 - 6.47 (m, 1 H), 6.20-5.97 (m, 1 H), 4.90 - 4.73 (m, 1 H), 4.52 - 4.40 (m, 1 H), 4.26 (br d, J= 17.39 Hz, 2 H), 3.98 - 3.82 (m, 1 H), 3.80 - 3.67 (m, 5 H), 3.66 - 3.49 (m, 2 H), 3.47 - 3.17 (m, 5 H), 3.16 - 3.03 (m, 3 H), 3.02 - 2.94 (m, 3 H), 2.87 (br d, J= 3.63 Hz, 2 H), 2.05 - 2.24 (m, 3 H), 1.88 (br s, 2 H), 1.42 - 1.64 (m, 1 H)。LCMS Rt = 2.054分鐘，m/z = 618.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.054分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.3。 實例 8 ( 方法 1-A16) ： ( E)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用反丁烯二酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸，自7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-吡咯啶-3-基-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(如 實例 5 步驟 2製備)來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-45%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之( E)-4-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸(45 mg，34%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.93 (d, J= 8.19 Hz, 1 H), 7.71 - 7.83 (m, 1 H), 7.51 - 7.63 (m, 2 H), 7.46-7.42 (m, 1 H), 7.30 - 7.43 (m, 1 H), 7.22-7.18 (m, 1 H), 6.64-6.60 (m, 1 H), 4.68 - 4.95 (m, 1 H), 4.25 - 4.39 (m, 2 H), 4.11 - 4.24 (m, 3 H), 4.07-4.04 (m, 1 H), 3.83 - 3.98 (m, 3 H), 3.72 - 3.80 (m, 3 H), 3.04 - 3.13 (m, 2 H), 2.93 - 3.03 (m, 4 H), 2.82 - 2.93 (m, 1 H), 2.59 (br s, 2 H), 2.12 - 2.23 (m, 1 H), 1.95 - 2.05 (m, 1 H), 1.58 - 1.84 (m, 3 H), 1.42 - 1.56 (m, 1 H)。LCMS Rt = 2.591分鐘，m/z = 604.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.591分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 604.2。 實例 9 ( 方法 1-A21) ： ( E)-1-(( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 甲基磺醯基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： ( E)-3- 甲基磺醯基丙 -2- 烯酸
在80℃下將2,3-二溴丙酸(19.54 g，84.28 mmol)及乙烷亞磺酸鈉(11.72 g，126.43 mmol)於 N,N-二甲基甲醛(30 mL)中之混合物攪拌12小時。將反應混合物在真空中濃縮至乾。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：1%-20%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之( E)-3-甲基磺醯基丙-2-烯酸(8 g，63%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.65-7.61 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 6.64-6.60 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 3.17 (s, 3H)。 步驟 2 ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用( R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯之取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-50%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈棕色膠狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(270 mg，32%)。LCMS Rt = 0.942分鐘，m/z = 606.3 [M + H]+。 步驟 3 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-N-[(3 R)- 吡咯啶 -3- 基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色膠狀之7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-[(3 R)-吡咯啶-3-基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(240 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.453分鐘，m/z = 506.3 [M + H]+。 步驟 4 ： ( E)-1-(( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 甲基磺醯基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( E)-3-甲基磺醯基丙-2-烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：35%-55%，8分鐘)純化混合物，得到呈黃色固體狀之( E)-1-(( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(甲基磺醯基)丙-2-烯-1-酮(6.29 mg，10%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 - 7.82 (m, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.55 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.39 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 1H), 4.92 - 4.71 (m, 1H), 4.41 - 4.29 (m, 1H), 4.27 - 4.20 (m, 1H), 4.19 - 4.06 (m, 1H), 3.98 - 3.85 (m, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 3.57 - 3.49 (m, 1H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.28 - 3.04 (m, 3H), 3.03 - 3.00 (m, 3H), 2.99 - 2.94 (m, 3H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 2.47 - 2.36 (m, 4H), 2.11 - 1.98 (m, 2H), 1.86 - 1.55 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.449分鐘，m/z = 638.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.449分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 638.2。 實例 10 ( 方法 1-A7) ： ( E)-4-(( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(( R)-吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(根據 實例 9 步驟 3製備)替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之( E)-4-(( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(16.03 mg，30%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ ppm 7.84 (d, J= 8.13 Hz, 1 H), 7.67 (d, J= 8.13 Hz, 1 H), 7.57 - 7.45 (m, 2 H,) 7.42 - 7.36 (m, 1 H), 7.34 - 7.27 (m, 1 H), 7.26 - 7.18 (m, 1 H), 6.74 - 6.62 (m, 1 H), 4.92 - 4.67 (m, 1 H), 4.41 - 4.29 (m, 1 H), 4.25 - 4.13 (m, 2 H), 3.96 - 3.79 (m, 1 H), 3.77 - 3.66 (m, 5 H), 3.63 - 3.32 (m, 3 H), 3.31 - 3.19 (m, 1 H), 3.18 - 3.01 (m, 3 H), 2.98 - 2.94 (m, 3 H), 2.79-2.74 (m, 1 H), 2.61-2.57 (m, 1 H), 2.39 - 2.29 (m, 3 H), 2.09 - 2.22 (m, 2 H), 1.50 - 1.86 (m, 4 H)。LCMS Rt = 2.114分鐘，m/z = 618.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.114分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.3。 實例 11 ( 方法 1-A24) ： ( E)-4-(( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸異丙酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(( R)-吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(根據 實例 9 步驟 3製備)替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺且用( E)-4-異丙氧基-4-側氧基丁-2-烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (Phenomenex C18 75*30mm*3um管柱；60%-90%乙腈/含碳酸氫銨溶液之水，8分鐘梯度)純化反應混合物，得到呈黃色固體狀之( E)-4-(( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸異丙酯(12.14 mg，13%)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.68 (br d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.54 (m, 1H), 7.50 (dt, J= 2.8, 7.7 Hz, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.32 (br t, J= 6.3 Hz, 1H), 7.28 - 7.15 (m, 1H), 6.69 - 6.59 (m, 1H), 5.13 - 4.99 (m, 1H), 4.89 - 4.71 (m, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 4.08 (td, J= 5.7, 10.8 Hz, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 1H), 3.80 - 3.49 (m, 4H), 3.48 - 3.33 (m, 1H), 3.31 - 3.04 (m, 2H), 3.01 - 2.92 (m, 4H), 2.66 - 2.47 (m, 2H), 2.34 (br d, J= 4.1 Hz, 3H), 2.26 - 2.17 (m, 4H) 1.74 - 1.59 (m, 3H), 1.27 (dt, J= 2.0, 4.1 Hz, 6H)。LCMS Rt = 3.519分鐘，m/z = 646.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.519分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 646.3。 實例 12 ( 方法 1-A3) ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 乙基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： ( S)-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 乙基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用(2-(乙基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯之取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-80%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈白色固體狀之( S)-(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(乙基)胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(300 mg，47%)。LCMS Rt = 0.701分鐘，m/z = 594.3 [M + H]+。 步驟 2 ： N' -[7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ]- N'- 乙基 - 乙烷 -1,2- 二胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將所得混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色固體狀之 N'-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]- N'-乙基-乙烷-1,2-二胺(200 mg，80%)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.125分鐘，m/z = 494.3 [M + H]+。 步驟 3 ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 乙基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S,E)-4-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(乙基)胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(31.13 mg，24%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.95-7.65 (m, 1H), 7.63-7.21 (m, 5H), 7.01-6.81 (m, 1H), 6.75-6.52 (m, 1H), 4.47-4.05(m, 2H), 3.92-3.75 (m, 3H), 3.65-3.45 (m, 3H), 3.30-2.95 (m, 4H), 2.75-2.55 (m, 1H), 2.50-2.40 (m, 4H), 2.30-2.10 (m, 6H), 1.75-1.55 (m, 4H), 1.15-1.05 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.292分鐘，m/z = 606.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.292分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 606.3。 實例 13 ( 方法 1-A6) ： ( E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： (2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸(S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈棕色油狀之(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(580 mg，90%)。LCMS Rt = 1.740分鐘，m/z = 606.3 [M + H]+。 步驟 2 ： N 1 -(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N 1- 甲基乙烷 -1,2- 二胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將所得混合物在真空中濃縮至乾且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-45%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之 N 1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺(160 mg，27%，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.599分鐘，m/z = 506.2 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10µm；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈淡黃色固體狀之( E)-4-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(38 mg，23%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (dd, J= 8.2, 0.89 Hz, 1 H), 7.70 (d, J= 7.6 Hz, 1 H), 7.49 - 7.60 (m, 2 H), 7.40 - 7.45 (m, 1 H), 7.38 (br s, 1 H), 7.33 (dd, J= 7.6, 0.95 Hz, 1 H), 6.86 (d, J= 15.5 Hz, 1 H), 6.63 (d, J= 15.5 Hz, 1 H), 4.21 (d, 1 H), 3.96 - 4.01 (m, 2 H), 3.78 - 3.86 (m, 1 H), 3.76 (s, 3 H), 3.75-3.71 (d, 1 H), 3.49 - 3.64 (m, 4 H), 3.20 - 3.30 (m, 1 H), 3.16 (s, 3 H), 3.03 - 3.12 (m, 1 H), 2.95 - 3.02 (m, 2 H), 2.58 - 2.72 (m, 3 H), 1.72 - 1.95 (m, 6 H), 1.56 - 1.68 (m, 2 H)。LCMS Rt = 2.774分鐘，m/z = 618.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.774分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.3。 實例 14 ( 方法 1-A5) ： ( E)-4-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： N -[1-[7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ] 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯且用吡咯啶-3-基胺基甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈棕色固體狀之 N-[1-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[( 2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]吡咯啶-3-基]胺基甲酸三級丁酯(210 mg，37%)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.667分鐘，m/z = 592.2 [M + H]+。 步驟 2 ： 1-[7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ] 吡咯啶 -3- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮所得混合物，得到呈棕色固體狀之1-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]吡咯啶-3-胺(80 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.556分鐘，m/z = 492.2 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-4-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(10mM NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-60%，8分鐘)純化，得到呈白色固體狀之( E)-4-((1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)吡咯啶-3-基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(9.37 mg，10%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.84 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.66 (dd, J= 3.8, 7.8 Hz, 1H), 7.58 - 7.45 (m, 2H), 7.42 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 6.94 - 6.85 (m, 1H), 6.73 - 6.62 (m, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 1H), 4.29 (dd, J= 5.0, 10.9 Hz, 1H), 4.16 - 4.05 (m, 2H), 4.00 - 3.76 (m, 3H), 3.74 (d, J= 2.4 Hz, 3H), 3.71 - 3.64 (m, 2H), 3.58 - 3.46 (m, 1H), 3.39 - 3.20 (m, 1H), 3.13 - 2.96 (m, 2H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.28 - 2.17 (m, 4H), 1.78 - 1.57 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.143分鐘，m/z = 604.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.143分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 604.3。 實例 15 ( 方法 1-A22) ： ( E)-1-(( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 甲基磺醯基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： ( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用( S)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-30%甲醇/二氯甲烷)純化所得殘餘物，得到呈棕色油狀之( S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(200 mg，37%)。LCMS Rt = 0.953分鐘，m/z = 606.3 [M + H]+。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-N-[(3 S)- 吡咯啶 -3- 基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將所得混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-[(3 S)-吡咯啶-3-基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(100 mg，56%，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.896分鐘，m/z = 506.4 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-1-(( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 甲基磺醯基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( E)-3-(甲基磺醯基)丙烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (中性條件，管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：50%-80%，10分鐘)純化粗產物，得到呈棕色固體狀之( E)-1-(( S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(甲基磺醯基)丙-2-烯-1-酮(2.43 mg，1.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (d, J= 8.11 Hz, 1 H), 7.76 - 7.71 (m, 1 H), 7.61 (dd, J= 7.39, 0.83 Hz, 1 H), 7.55 (td, J= 7.81, 4.29 Hz, 1 H), 7.46 (d, J= 7.75 Hz, 1 H), 7.43 - 7.35 (m, 2 H), 7.24 - 7.17 (m, 1 H), 4.98 - 4.78 (m, 1 H), 4.44 (br s, 1 H), 4.36 - 4.23 (m, 2 H), 4.16 - 3.59 (m, 5 H), 3.58 - 3.41 (m, 2 H), 1.91 - 1.74 (m, 3 H), 3.40 - 3.10 (m, 4 H), 3.09 - 3.05 (m, 3 H), 3.04 - 3.00 (m, 3 H), 2.64 (br s, 1 H), 2.57 (br s, 3 H), 2.25 - 2.05 (m, 3 H) LCMS Rt = 2.056分鐘，m/z = 638.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.056分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 638.2。 實例 16 ( 方法 1-A4) ： ( S,E)-4-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( S)- N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-35%，8分鐘)純化粗產物，得到呈淡黃色固體狀之( S,E)-4-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(7.43 mg，4%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 - 7.79 (m, 1H), 7.67 (br d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.60 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.35 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.02 - 6.90 (m, 1H), 6.69 - 6.59 (m, 1H), 4.39 - 4.24 (m, 2H), 4.23 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 4H), 3.82 - 3.75 (m, 1H), 3.75 - 3.65 (m, 4H), 3.64 - 3.48 (m, 2H), 3.29 - 3.14 (m, 2H), 3.10 (d, J= 2.0 Hz, 3H), 3.09 - 3.01 (m, 2H), 3.00 - 2.93 (m, 1H), 2.63 (br d, J= 14.6 Hz, 1H), 2.56 - 2.48 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.13 - 2.08 (m, 1H), 1.79 - 1.60 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.101分鐘，m/z = 618.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.101分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.3。 實例 17 ( 方法 1-A18) ： ( E)-4-(( 2R,4 R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 4中所述類似之方式，用(2 R,4 R)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代(2 S,4 S)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯來製備7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-((3 R,5 R)-5-甲基吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺。以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-((3 R,5 R)-5-甲基吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：50%-80%，10分鐘))純化粗產物，得到呈白色固體狀之( E)-4-((2 R,4 R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(10.49 mg，18.47%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.30 - 7.19 (m, 1H), 6.77 - 6.64 (m, 1H), 5.10 - 4.91 (m, 1H), 4.45 - 4.27 (m, 2H), 4.26 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 4.00 (m, 1H), 3.80 - 3.69 (m, 4H), 3.64 - 3.49 (m, 2H), 3.26 - 3.02 (m, 3H), 2.97 - 2.93 (m, 3H), 2.73 - 2.56 (m, 2H), 2.45 - 2.39 (m, 3H), 2.33 - 2.25 (m, 2H), 2.02 - 1.99 (m, 1H), 1.87 - 1.64 (m, 4H), 1.32 - 1.18 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.172分鐘，m/z = 632.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.172分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.3。 實例 18 ( 方法 1-A23) ： ( R,E)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸異丙酯 步驟 1 ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用( R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-[2-(甲基胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(900 mg，44.31%)。LCMS Rt = 0.707分鐘，m/z = 632.3 [M + H]+。 步驟 2 ： ( R)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 - N-( 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( R)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫- 1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基- N-(吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(200 mg，21.74%，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.721分鐘，m/z = 532.3 [M + H] +。 步驟 3 ： ( R,E)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸異丙酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( E)-4-異丙氧基-4-側氧基丁-2-烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN]；B%：15%-50%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( R,E)-4-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸異丙酯(12.89 mg，37%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 - 7.86 (m, 1 H), 7.71 (dd, J= 8.07, 1.22 Hz, 1 H), 7.60 - 7.50 (m, 2 H), 7.46 - 7.40 (m, 1 H), 7.35 (t, J= 7.15 Hz, 1 H), 7.32 - 7.25 (m, 1 H), 6.73 - 6.63 (m, 1 H), 5.15 -4.96 (m, 1 H), 4.92 -4.75 (m, 1 H), 4.31 - 4.23 (m, 1 H), 4.15 - 4.07 (m, 2 H), 4.00 - 3.84 (m, 1 H), 3.81 - 3.73 (m, 1 H), 3.71 - 3.59 (m, 1 H), 3.58 -3.51 (m, 1 H), 3.50 - 3.39 (m, 1 H), 3.33 - 3.18 (m, 1 H), 3.17 - 3.08 (m, 3 H), 3.02 - 2.97 (m, 3 H), 2.71 -2.61 (m, 4 H), 2.32 - 2.10 (m, 2 H), 2.04 - 1.99 (m, 2 H), 1.94 - 1.83 (m, 4 H), 1.74 - 1.64 (m, 2 H), 1.33 - 1.28 (m, 6 H)。LCMS Rt = 2.274分鐘，m/z = 672.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.274分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 672.3。 實例 19 ( 方法 1-A25) ： ( R)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用( R)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫- 1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基- N-(吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺( 實例 18 步驟 2)替代( S)- N 1 -(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1 -甲基乙烷-1,2-二胺且用丙烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之( R)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(66.75 mg，34%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 - 7.86 (m, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 2H), 7.45 - 7.39 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 6.65 - 6.50 (m, 1H), 6.28 - 6.18 (m, 1H), 5.71 - 5.62 (m, 1H), 4.91 - 4.73 (m, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.09 - 4.03 (m, 2H), 3.96 - 3.67 (m, 3H), 3.66 - 3.50 (m, 2H), 3.47 - 3.36 (m, 1H), 3.34 - 3.22 (m, 1H), 3.21 - 3.14 (m, 1H), 3.13 - 3.04 (m, 2H), 3.01 - 2.98 (m, 3H), 2.70 - 2.59 (m, 3H), 2.14 - 2.06 (m, 2H), 1.94 - 1.73 (m, 6H), 1.70 - 1.59 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.112分鐘，m/z = 586.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.112分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 586.3。 實例 20 ( 方法 1-A26) ： ( E)-4-((2 S,4 R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 4中所述類似之方式，用(2 S,4 R)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代(2 S,4 S)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯且用三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯來製備7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基- N-((3 R,5 S)-5-甲基吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺。
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基- N-((3 R,5 S)-5-甲基吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( E)-4-((2 S,4 R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(14.85 mg，4%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.40 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.33 (br d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 6.73 - 6.62 (m, 1H), 4.67 - 4.50 (m, 1H), 4.25-4.21 (m, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 3H), 3.76 - 3.74 (m, 3H), 3.61 - 3.49 (m, 2H), 3.31 - 3.05 (m, 5H), 2.99 - 2.96 (m, 3H), 2.69 (br d, J= 7.2 Hz, 2H), 2.59 (br d, J= 15.3 Hz, 2H), 1.88 - 1.74 (m, 7H), 1.71 - 1.61 (m, 3H), 1.36 (br d, J= 5.7 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.292分鐘，m/z = 658.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.292分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 658.3。 實例 21 ( 方法 1-A9) ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸 步驟 1 ： ( S)-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈棕色固體狀之( S)-(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(4 g，87.19%)。LCMS Rt = 0.841分鐘，m/z = 580.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N '-[7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ]- N'- 甲基 - 乙烷 -1,2- 二胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色固體狀之 N'-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]- N'-甲基-乙烷-1,2-二胺(4 g，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.671分鐘，m/z = 481.4 [M + H] +。 步驟 3 ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用反丁烯二酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S,E)-4-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸(9.43 mg，7.53%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 11.17 (br s, 1H), 7.84 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.55 (dd, J= 1.1, 7.4 Hz, 1H), 7.49 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 5.99 (dd, J= 10.3, 13.4 Hz, 1H), 5.66 (dd, J= 8.4, 13.5 Hz, 1H), 4.79 - 4.58 (m, 1H), 4.56 - 4.39 (m, 1H), 4.20-4.12 (m, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 3H), 3.54 - 3.44 (m, 2H), 3.19 (d, J= 1.5 Hz, 3H), 2.92 - 2.91 (m, 1H), 3.09 - 2.90 (m, 3H), 2.87 (d, J= 1.3 Hz, 3H), 2.70-2.66 (m, 1H), 2.34 - 2.23 (m, 2H), 2.11 - 2.01 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.929分鐘，m/z = 578.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.929分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 578.2 實例 22 ( 方法 1-A1) ： ( S,E)-4-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4 -d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，以 N'-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]- N'-甲基-乙烷-1,2-二胺( 實例 21 步驟 2)起始來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.1%TFA)-ACN；B%：15%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S,E)-4-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(17.63 mg，13.89%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ ppm 10.78 - 10.49 (m, 1 H), 7.90 (d, J= 7.38 Hz, 1 H), 7.76 (d, J= 8.13 Hz, 1 H), 7.64 - 7.48 (m, 2 H), 7.48 - 7.34 (m, 2 H), 6.92 (d, J= 15.51 Hz, 1 H), 6.67 (d, J= 15.51 Hz, 1 H), 4.90 - 4.62 (m, 2 H), 4.30 (br d, J= 18.01 Hz, 1 H), 4.01 - 3.68 (m, 8 H), 3.67 - 3.47 (m, 3 H), 3.44 - 3.24 (m, 4 H), 3.18 - 3.04 (m, 2 H), 2.95 (s, 3 H), 2.88 - 2.76 (m, 1 H), 2.39 - 2.28 (m, 1 H), 2.20 - 2.08 (m, 3 H)。LCMS Rt = 2.048分鐘，m/z = 592.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.048分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 592.3 實例 23 ( 方法 1-A17) ： ( S,E)- N-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 )-3-( 甲基磺醯基 ) 丙烯醯胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，以 N'-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]- N'-甲基-乙烷-1,2-二胺( 實例 21 步驟 2)起始且用( E)-3-(甲基磺醯基)丙烯酸替代( E)-4-甲氧基-4-側氧基丁-2-烯酸來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S,E) -N-(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)-3-(甲基磺醯基)丙烯醯胺(57.05 mg，6.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 - 7.81 (m, 1H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 1.0, 7.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 1.5, 15.0 Hz, 1H), 4.28 - 4.26(m, 1H), 4.19 (br d, J = 16.5 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 6.3, 10.8 Hz, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 1H), 3.73 - 3.67 (m, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 4H), 3.23 - 3.12 (m, 5H), 3.09 - 3.03 (m, 1H), 3.01 -2.98 (m, 4H), 2.65 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.58 - 2.54 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.24 (br s, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.795分鐘，m/z = 612.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.795分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 612.2 實例 24 ( 方法 1-A11) ： ( E)-4-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 80*40mm*3µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(8.24 mg，12%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.20 (m, 1H), 8.17 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 8.06 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 2H), 7.57 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.80 - 6.72 (m, 1H), 5.53 - 5.35 (m, 1H), 4.54 - 4.45 (m, 1H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 4.20 - 3.88 (m, 2H), 3.80 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 3.47 (s, 3H), 3.08 - 3.00 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.38 - 2.24 (m, 3H), 2.15 (br s, 1H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 1.89 - 1.66 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.109分鐘，m/z = 632.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 10 mM碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.109分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.2。 實例 25 ( 方法 1-A20) ： ( E)-4-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-60%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( E)-4-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(10.81 mg，22.29%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) 9.22 (s, 1H), 8.12 (dd, J= 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 6.99 (dd, J= 1.2, 15.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.42 (t, J= 8.7 Hz, 1H), 4.28 - 4.19 (m, 2H), 4.17 - 4.08 (m, 4H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.60 - 3.56 (m, 3H), 3.27 - 3.19 (m, 1H), 3.02 - 2.94 (m, 2H), 2.63 - 2.57 (m, 2H), 1.92 - 1.91 (m, 1H), 1.89 - 1.73 (m, 6H), 1.65 - 1.58 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.058分鐘，m/z = 658.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.058分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 658.3 實例 26 ( 方法 1-A15) ： ( E)-4-(( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯 步驟 1 ： ( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 4類似之方式，用( S)-4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶替代4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶且用( S)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代3-(甲基胺基甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由急驟管柱(ISCO 20 g二氧化矽，0-40%二氯甲烷/甲醇，經20分鐘之梯度)純化粗產物，得到呈橙色油狀之( S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，60%)。LCMS Rt = 0.808分鐘，m/z = 620.2 [M + H]+。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )-8- 氟 - N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]- N-[(3 S)- 吡咯啶 -3- 基 ] 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。將反應混合物在真空中濃縮至乾且藉由逆相HPLC (Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈淡黃色油狀之7-(8-氯-1-萘基)-8-氟- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-[(3 S)-吡咯啶-3-基]吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺(60 mg，70%)。LCMS Rt = 0.551分鐘，m/z = 520.2 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-4-(( S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( E)-4-(( S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(11.29 mg，30%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.82 (s, 1 H), 7.82 - 7.80 (d, J= 8Hz, 1H), 7.71 - 7.69 (d, J= 8Hz, 1H), 7.38 - 7.34 (m, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 2H), 7.20 - 7.16 (m, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.44 - 6.39 (m, 1H), 5.09 - 5.01 (m, 1 H), 4.17 - 4.14 (m, 1H), 4.13 - 3.95 (m, 1H), 3.82 - 3.50 (m, 2H), 3.47 (s, 3H), 3.45 - 3.32 (m, 1H), 3.28 - 3.15 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.71 - 2.68 (m, 1H), 2.43 - 2.32 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.01-1.95 (m, 3H), 1.59 - 1.52 (m, 1H), 1.45 - 1.37 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.889分鐘，m/z = 632.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.889分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.2。 實例 27 ( 方法 1-A8) ： ( E)-4-(( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸甲酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(( R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺替代( S)- N 1-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N 1-甲基乙烷-1,2-二胺來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化混合物，得到呈黃色固體狀之( E)-4-(( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-側氧基丁-2-烯酸甲酯(9.02 mg，11%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 - 9.14 (m, 1H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 8.04 - 7.97 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 1H), 6.76 - 6.66 (m, 1H), 5.56 - 5.24 (m, 1H), 4.55 - 4.41 (m, 1H), 4.38 - 4.25 (m, 1H), 4.16 - 3.80 (m, 2H), 3.76 (d, J= 7.6 Hz, 3H), 3.73 - 3.65 (m, 1H), 3.63 - 3.46 (m, 1H), 3.47-3.43 (m, 3H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.71 - 2.59 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 3H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.82 - 1.64 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.897分鐘，m/z = 632.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.897分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.2。 實例 28 ( 方法 2-C) ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈 步驟 1 ： 4-( 苯甲硫基 )-7- 氯 -8- 氟 -2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶
向4-苯甲基硫烷基-2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3- d]嘧啶(10 g，29.39 mmol)於二噁烷(300 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙胺(11.40 g，88.18 mmol)及1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基甲醇(8.30 g，58.79 mmol)。在80℃下攪拌混合物1小時。用水(100 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。用石油醚:乙酸乙酯之(10:1)混合物(300 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈白色固體狀之4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(7.7 g，58.87%)。LCMS Rt = 0.740分鐘，m/z = 444.1 [M + H]+。 步驟 2 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶
在60℃下於氮氣氛圍下將4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(3.9 g，8.76 mmol)、(8-氯-1-萘基)硼酸(3.62 g，17.53 mmol)、磷酸鉀(5.58 g，26.29 mmol)、[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀:二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(689.63 mg，876.50 µmol)於水(20 mL)及二噁烷(40 mL)中之混合物攪拌1小時。用水(40 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 90 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(4.5 g，44.95%)。LCMS Rt = 2.825分鐘，m/z = 570.2 [M + H]+。 步驟 3 ： 4- 氯 -7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶
向4-(苯甲硫基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(100 mg，175.10 µmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加水(3.15 mg，175.10 µmol)、乙酸(10.52 mg，175.10 µmol)及1,3-二氯-5,5-二甲基-咪唑啶-2,4-二酮(93.14 mg，472.77 µmol)，接著在0℃下攪拌混合物1小時。用飽和亞硫酸鈉(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取水層。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(80 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.738分鐘，m/z = 482.1 [M + H]+。 步驟 4 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向3-(甲基胺基甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(155.38 mg，775.81 µmol)於 N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙胺(200.54 mg，1.55 mmol)及4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶(250 mg，517.21 µmol)，接著在25℃下攪拌混合物1小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈橙色固體狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(180 mg，38.86%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.610分鐘，m/z = 646.3 [M + H]+。 步驟 5 ： N -( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 胺
向3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，154.52 µmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(770.00 mg，6.75 mmol)，接著在20℃下攪拌混合物1小時。用飽和碳酸鈉溶液(5 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色膠狀之 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺(100 mg，97.90%)。LCMS Rt = 0.582分鐘，m/z = 546.2 [M + H]+。 步驟 6 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈
向 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺(50 mg，75.63 µmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙胺(29.32 mg，226.90 µmol)及氰化溴(5.61 mg，52.94 µmol)，接著在0℃下攪拌混合物30分鐘。用飽和碳酸鈉(5 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-30%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲腈(10.13 mg，23.05%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.14 - 8.10 (m, 1H), 8.01 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.61 (ddd, J = 1.1, 2.8, 7.3 Hz, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 4.42 - 4.37 (m, 2H), 4.29 - 4.21 (m, 2H), 4.14 - 4.09 (m, 3H), 3.57 - 3.54 (m, 3H), 3.35 - 3.30 (m, 2H), 3.23 (br d, J = 6.6 Hz, 2H), 2.83 (td, J = 6.5, 10.9 Hz, 2H), 2.13 - 2.05 (m, 2H), 2.00 - 1.95 (m, 4H), 1.86 - 1.78 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.112分鐘，m/z = 571.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.112分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 571.2。 實例 29 ( 方法 2-C1) ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(參見 實例 5 步驟 2)替代 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3µm；移動相：[水(0.2% FA)-ACN]；B%：1%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲腈(2.87 mg，3.68%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.52 (dt, J = 3.6, 7.8 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (br t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.84 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.22 (br s, 1H), 4.18 (br d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.82 - 3.63 (m, 2H), 3.61 - 3.51 (m, 2H), 3.47 - 3.36 (m, 2H), 3.26 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 2H), 2.97 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 2.73 - 2.69 (m, 1H), 2.62 - 2.55 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.33 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 2.25 - 1.98 (m, 3H), 1.84 - 1.64 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.153分鐘，m/z = 531.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.153分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 531.3。 實例 30 ( 方法 2-C2) ： ( S)-3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈 步驟 1 ： ( S)-3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，以三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯起始且用3-((甲基胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯替代 N-(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( S)-3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(90 mg，55.04%)。LCMS Rt = 0.691分鐘，m/z = 606.3 [M + H]+。 步驟 2 ： N -( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.667分鐘，m/z = 506.3 [M + H] +。 步驟 3 ： ( S)-3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：1%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( S)-3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲腈(15.06 mg，18.01%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.32 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.44 - 4.33 (m, 1H), 4.29 - 4.12 (m, 4H), 4.03 - 3.93 (m, 2H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.71 (br d, J=17.2 Hz, 1H), 3.60 (td, J=6.8, 13.9 Hz, 1H), 3.55 - 3.48 (m, 1H), 3.28 - 3.19 (m, 2H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 1H), 2.63 (br d, J=15.0 Hz, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 3H), 2.47 (q, J=8.8 Hz, 1H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.96 (td, J=2.5, 4.9 Hz, 1H), 1.90 - 1.68 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.063分鐘，m/z = 531.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.063分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 531.3。 實例 31 ( 方法 2-C3) ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈 步驟 1 ： 3-( 甲基胺基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向3-甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，2.51 mmol)及甲胺(779.36 mg，7.53 mmol，30%，於乙醇中)於乙醇(10 mL)中之溶液中添加乙酸(150.70 mg，2.51 mmol)及氰基硼氫化鈉(394.25 mg，6.27 mmol)，接著在30℃下攪拌混合物1小時。用水(10 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-(甲基胺基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(180 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.737分鐘，m/z = 214.2 [M + H]+。 步驟 2 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，以三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯起始且用3-(甲基胺基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代 N-(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，90%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(75 mg，44.83%)。LCMS Rt = 0.703分鐘，m/z = 620.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-( 吡咯啶 -3- 基甲基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(吡咯啶-3-基甲基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.664分鐘，m/z = 520.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：5%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)吡咯啶-1-甲腈(2.3 mg，4.82%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.59 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.54 (dt, J=2.4, 7.9 Hz, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 1H), 7.36 (dd, J=2.6, 7.2 Hz, 1H), 4.36 - 4.29 (m, 1H), 4.24 (br d, J=17.5 Hz, 1H), 4.14 (dd, J=5.9, 11.1 Hz, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 1H), 3.75 (dd, J=4.0, 17.4 Hz, 1H), 3.56 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 3.52 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 3.21 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 3.16 (s, 3H), 3.14 - 3.08 (m, 1H), 3.08 - 3.01 (m, 1H), 2.76 - 2.59 (m, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (br s, 1H), 2.07 - 2.02 (m, 1H), 1.83 - 1.60 (m, 5H)。LCMS Rt = 2.085分鐘，m/z = 545.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.085分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.3。 實例 32 ( 方法 2-C4) ： ( S)- N-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 氰醯胺 步驟 1 ： ( S)-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，以三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯起始且用(哌啶-4-基甲基)胺基甲酸三級丁酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，90%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈棕色油狀之( S)-((1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)甲基)胺基甲酸三級丁酯(150 mg，27.53%)。LCMS Rt = 0.895分鐘，m/z = 620.3 [M + H]+。 步驟 2 ： ( S)-(1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之( S)-(1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)甲胺(288 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.695分鐘，m/z = 520.3 [M + H] +。
步驟 3 ： ( S)- N-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 氰醯胺以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：1%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( S)- N-((1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)甲基)氰醯胺(5.5 mg，5.99%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.75 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.33 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.94 - 4.52 (m, 2H), 4.45 - 4.25 (m, 2H), 4.18 - 4.03 (m, 3H), 3.83 (dd, J= 10.8, 17.5 Hz, 2H), 3.56 - 3.38 (m, 3H), 3.20 - 2.96 (m, 6H), 2.86 (t, J= 12.4 Hz, 2H), 2.73 (d, J= 7.9 Hz, 3H), 2.64 (s, 1H), 2.49 (d, J= 13.4 Hz, 1H), 2.19 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.67 - 1.23 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.265分鐘，m/z = 545.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.265分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.3。 實例 33 ( 方法 2-C5) ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式，以7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-[(3 R)-吡咯啶-3-基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(參見 實例 9 步驟 3)起始來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3) - ACN；B%：40%-70%，10分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲腈(20 mg，30.96%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 1.2, 7.5 Hz, 1H), 7.51 (dt, J = 3.3, 7.8 Hz, 1H), 7.43 - 7.38 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 4.89 - 4.78 (m, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 4.11 (dd, J = 6.2, 10.8 Hz, 1H), 3.81 - 3.65 (m, 2H), 3.63 - 3.52 (m, 2H), 3.48 - 3.36 (m, 2H), 3.30 - 3.17 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 2.99 - 2.96 (m, 2H), 2.96 (s, 1H), 2.64 - 2.48 (m, 2H), 2.42 - 2.30 (m, 3H), 2.27 - 2.19 (m, 1H), 2.27 - 2.19 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 2H), 1.85 - 1.55 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.310分鐘，m/z = 531.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.310分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 531.3 實例 34 ( 方法 2-C6) ： ( S)-3-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈 步驟 1 ： 3-[2-( 甲基胺基 ) 乙基 ] 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向3-(2-側氧基乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，501.89 µmol)於甲醇(1 mL)中之溶液中添加甲胺(779.36 mg，7.53 mmol，30%，於乙醇中)及氰基硼氫化鈉(94.62 mg，1.51 mmol)，接著在20℃下攪拌混合物1小時。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之3-[2-(甲基胺基)乙基]氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： ( S)-3-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用3-(2-(甲基胺基)乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(0.1%TFA)-ACN；B%：25%-55%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S)-3-(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(30 mg，15.92%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.908分鐘，m/z = 620.3 [M + H]+。 步驟 3 ： ( S)- N-(2-( 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 乙基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之( S)- N-(2-(氮雜環丁烷-3-基)乙基)-7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(25 mg，96.47%，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.569分鐘，m/z = 520.3 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-3-(2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( S)-3-(2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)氮雜環丁烷-1-甲腈(4.71 mg，22.73%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.83 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.66 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.52 - 7.56 (m, 1 H), 7.48 (t, J=7.78 Hz, 1 H), 7.34 - 7.42 (m, 1 H), 7.30 (d, J=7.45 Hz, 1 H), 4.37 (dd, J=11.51, 6.03 Hz, 1 H), 4.26 (dt, J=11.35, 4.52 Hz, 1 H), 4.08 - 4.22 (m, 3 H), 3.78 - 3.84 (m, 2 H), 3.69 (d, J=17.32 Hz, 1 H), 3.43 - 3.56 (m, 2 H), 3.31 - 3.41 (m, 1 H) 3.12 - 3.27 (m, 3 H), 3.08 (s, 4 H), 2.94 - 3.02 (m, 1 H), 2.62 - 2.73 (m, 3 H), 2.55 - 2.60 (m, 3 H), 2.46 - 2.54 (m, 1 H), 2.02 - 2.13 (m, 1 H), 1.80 - 1.87 (m, 2 H), 1.68 - 1.78 (m, 1 H)。LCMS Rt = 2.067分鐘，m/z = 545.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.067分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.3 實例 35 ( 方法 2-C7) ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈 步驟 1 ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 4類似之方式，用( S)-4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶替代4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：45%-65%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，47.81%)。LCMS Rt = 2.603分鐘，m/z = 620.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )-8- 氟 - N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]- N- 吡咯啶 -3- 基 - 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-1-萘基)-8-氟- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-吡咯啶-3-基-吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺(120 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.561分鐘，m/z = 520.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲腈(1.35 mg，4.31%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.19 (m, 1H), 8.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.65 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 - 7.54 (m, 1H), 5.49 - 5.38 (m, 1H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 4.35 (br dd, J = 6.3, 10.9 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 1H), 3.74 - 3.66 (m, 1H), 3.62 - 3.51 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.09 - 3.01 (m, 1H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.46 (s, 4H), 2.07 - 2.01 (m, 2H), 1.82 - 1.73 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.057分鐘，m/z = 545.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.057分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.2。 實例 36 ( 方法 2-C8) ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈 步驟 1 ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 4類似之方式，用( S)-4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶替代4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶且用( R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代3-((甲基胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-9%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈橙色膠狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(930 mg，32.94%)。LCMS Rt = 0.702分鐘，m/z = 620.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )-8- 氟 - N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]- N-[(3 R)- 吡咯啶 -3- 基 ] 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之7-(8-氯-1-萘基)-8-氟- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- N-[(3 R)-吡咯啶-3-基]吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺(160 mg，40.72%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.574分鐘，m/z = 520.2 [M + H] +。 步驟 3 ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈淡黃色固體狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲腈(83.22 mg，58.80%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.19 (m, 1H), 8.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.65 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 - 7.54 (m, 1H), 5.49 - 5.38 (m, 1H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 4.35 (br dd, J = 6.3, 10.9 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 1H), 3.74 - 3.66 (m, 1H), 3.62 - 3.51 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.09 - 3.01 (m, 1H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.46 (s, 4H), 2.07 - 2.01 (m, 2H), 1.82 - 1.73 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.071分鐘，m/z = 545.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.071分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.2。 實例 37 ( 方法 2-C9) ： (3a R,6a R)-1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 六氫吡咯并 [3,4- b] 吡咯 -5(1 H)- 甲腈 步驟 1 ： (3a R,6a R)-1-[7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ]-2,3,3a,4,6,6a- 六氫吡咯并 [3,4- b] 吡咯 -5- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，以三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯起始且用(3a R,6a R)-六氫吡咯并[3,4- b]吡咯-5(1 H)-甲酸三級丁酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。用水(2 mL)淬滅反應混合物，接著過濾，得到呈棕色固體狀之(3a R,6a R)-1-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]-2,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯并[3,4- b]吡咯-5-甲酸三級丁酯(140 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.591分鐘，m/z = 618.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-[(3a R,6a R)-3,3a,4,5,6,6a- 六氫 -2 H- 吡咯并 [3,4- b] 吡咯 -1- 基 ]-7-(8- 氯 -1- 萘基 )-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之4-[(3a R,6a R)-3,3a,4,5,6,6a-六氫-2 H-吡咯并[3,4- b]吡咯-1-基]-7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶(150 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.582分鐘，m/z = 518.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (3a R,6a R)-1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 六氫吡咯并 [3,4- b] 吡咯 -5(1 H)- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式，用4-[(3a R,6a R)-3,3a,4,5,6,6a-六氫-2 H-吡咯并[3,4- b]吡咯-1-基]-7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶替代 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-35%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(3a R,6a R)-1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)六氫吡咯并[3,4- b]吡咯-5(1 H)-甲腈(4.32 mg，6.01%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 - 7.80 (m, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.57 - 7.43 (m, 2H), 7.42 - 7.23 (m, 2H), 4.85 - 4.64 (m, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.25 - 4.11 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.91 - 3.78 (m, 2H), 3.71 - 3.54 (m, 3H), 3.44 (dd, J = 1.5, 10.8 Hz, 1H), 3.39 - 3.27 (m, 2H), 3.19 - 3.08 (m, 2H), 3.03 (dt, J = 7.7, 11.2 Hz, 1H), 2.84 - 2.76 (m, 2H), 2.49 - 2.45 (m, 3H), 2.39 (dq, J = 5.1, 8.7 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 2H), 1.90 - 1.65 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.264分鐘，m/z = 543.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.264分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 543.3。 實例 38 ( 方法 2-C10) ： (2 R,4 R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲腈 步驟 1 ： (2 R,4 R)-4-( 苯甲氧基羰基胺基 )-2- 甲基 - 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2 R,4 R)-4-胺基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，2.50 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加氯甲酸苯甲酯(425.89 mg，2.50 mmol)及氫氧化鈉(2 M，3.74 mL)，接著在20℃下攪拌混合物2小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，30%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(2 R,4 R)-4-(苯甲氧基羰基胺基)-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(640 mg，76.66%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.40 - 7.32 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.83 - 4.72 (m, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 3.94 (br d, J= 3.4 Hz, 1H), 3.64 (br dd, J= 6.4, 11.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 2.03 - 1.82 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.23 (d, J= 6.4 Hz, 3H)。 步驟 2 ： (2 R,4 R)-4-[ 苯甲氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ]-2- 甲基 - 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2 R,4 R)-4-(苯甲氧基羰基胺基)-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(590 mg，1.76 mmol)於 N,N-二甲基甲醛(10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(141.13 mg，3.53 mmol)且在0℃下攪拌混合物0.5小時，繼而添加甲基碘(375.63 mg，2.65 mmol)。在20℃下攪拌混合物2小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，30%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之( 2R,4 R)-4-[苯甲氧基羰基(甲基)胺基]-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(360 mg，54.46%)。 步驟 3 ： (2 R,4 R)-2- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2 R,4 R)-4-[苯甲氧基羰基(甲基)胺基]-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(320 mg，918.39 µmol)於乙酸乙酯(10 mL)中之溶液中添加鈀/碳(300 mg，918.39 µmol，10%純度)。將反應混合物用氫氣脫氣三次且在20℃下於氫氣氛圍下攪拌2小時。過濾反應混合物且在真空中濃縮有機層，得到呈黃色膠狀之(2 R,4 R)-2-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(190 mg，粗物質)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.04 - 3.90 (m, 1H), 3.58 (dd, J = 6.1, 10.8 Hz, 1H), 3.34 - 3.08 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.88 - 1.77 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.20 (br d, J = 6.0 Hz, 3H)。 步驟 4 ： (2 R,4 R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用(2 R,4 R)-2-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(2 R,4 R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(180 mg，38.20%)。LCMS Rt = 1.826分鐘，m/z = 620.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N- 甲基 - N-[(3 R,5 R)-5- 甲基吡咯啶 -3- 基 ]-2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。濃縮混合物，得到呈黃色膠狀之7-(8-氯-1-萘基)- N-甲基- N-[(3 R,5 R)-5-甲基吡咯啶-3-基]-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(165 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.490分鐘，m/z = 520.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (2 R,4 R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式，用7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-((3 R,5 R)-5-甲基吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺替代 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(2 R,4 R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲腈(11.38 mg，22.09%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 1.2, 7.5 Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 2.4, 7.8 Hz, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.34 - 7.30 (m, 1H), 4.86 (br d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.10 (m, 3H), 3.95 - 3.86 (m, 2H), 3.78 - 3.65 (m, 2H), 3.57 - 3.49 (m, 1H), 3.43 (td, J = 7.2, 9.9 Hz, 1H), 3.28 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.06 (m, 1H), 3.05 - 2.99 (m, 1H), 2.95 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 2.63 - 2.54 (m, 2H), 2.44 - 2.37 (m, 3H), 2.30 (br dd, J = 5.9, 7.8 Hz, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 1H), 1.87 - 1.58 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 4.6, 6.3 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.161分鐘，m/z = 545.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.161分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.3。 實例 39 ( 方法 2-C11) ： ( R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a (5 H)- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲腈
以與 實例 28 ( 方法 2-C) 步驟 6類似之方式，用( R)-7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基- N-(吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(參見 實例 18 步驟 2)替代 N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟- N-甲基-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-4-胺來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：5%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲腈(9 mg，7.35%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=1.2, 7.5 Hz, 1H), 7.52 (dt, J=3.5, 7.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 1H), 4.95 - 4.77 (m, 1H), 4.25 (dd, J=3.7, 17.4 Hz, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.84 - 3.76 (m, 1H), 3.75 - 3.65 (m, 1H), 3.64 - 3.52 (m, 2H), 3.49 - 3.34 (m, 2H), 3.32 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 3.03 (m, 3H), 2.98 (d, J=4.6 Hz, 3H), 2.68 (td, J=6.7, 10.2 Hz, 2H), 2.64 - 2.55 (m, 1H), 2.22 - 2.06 (m, 3H), 1.93 - 1.75 (m, 5H), 1.73 - 1.61 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.172分鐘，m/z = 557.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.172分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 557.3。 實例 40 ( 方法 1-E) ： ( S)-1-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁 -3- 烯 -2- 酮 步驟 1 ： (2- 羥基丁 -3- 烯 -1- 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在5℃下向 N-甲基- N-(2-側氧基乙基)胺基甲酸三級丁酯(10 g，57.73 mmol)於四氫呋喃(400 mL)中之溶液中添加溴(乙烯基)鎂(1 M，230.93 mL)。在25℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物2小時。在0℃下用飽和氯化銨溶液(400 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之(2-羥基丁-3-烯-1-基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(12.4 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.78 (ddd, J = 5.8, 10.7, 16.9 Hz, 1H), 5.35 - 5.02 (m, 2H), 4.27 (br d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.35 (br d, J = 14.8 Hz, 3H), 2.95 - 2.77 (m, 3H), 1.40 (s, 9H)。 步驟 2 ： 1-( 甲基胺基 ) 丁 -3- 烯 -2- 醇
在25℃下將(2-羥基丁-3-烯-1-基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1 g，4.97 mmol)於鹽酸/乙酸乙酯(4M，20 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之1-(甲基胺基)丁-3-烯-2-醇(700 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.155分鐘，m/z = 101.08 [M + H]+。 步驟 3 ： 1-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁 -3- 烯 -2- 醇
在0℃下向1-(甲基胺基)丁-3-烯-2-醇(617.65 mg，4.49 mmol，鹽酸鹽)於 N,N-二甲基甲醛(3 mL)中之溶液中添加三乙胺(272.51 mg，2.69 mmol)及三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5 H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]酯(500 mg，897.69 µmol)。在0℃下攪拌反應物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%甲醇/二氯甲烷)純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之1-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)丁-3-烯-2-醇(200 mg，43.85%)。LCMS Rt = 2.387分鐘，m/z = 507.24 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-1-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁 -3- 烯 -2- 酮
向1-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)丁-3-烯-2-醇(200 mg，393.66 µmol)於二甲亞砜(2 mL)及二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加1-羥基-1,2-苯并碘雜噁唑-3(1 H)-酮-1-氧化物(275.58 mg，984.15 µmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Gemini-NX 80*40mm*3µm；移動相：水(10mM NH 4HCO 3)-ACN；B%：40%-70%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之( S)-1-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)丁-3-烯-2-酮(32.73 mg，15.79%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.58 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.52 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.42 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.56 - 6.48 (m, 1H), 6.38 - 6.31 (m, 1H), 5.91 (d, J=10.8 Hz, 1H), 4.67 - 4.61 (m, 1H), 4.47 - 4.39 (m, 1H), 4.24 - 4.12 (m, 2H), 4.01 (dd, J=6.1, 10.7 Hz, 1H), 3.72 (d, J=17.2 Hz, 1H), 3.53 (br s, 1H), 3.33 - 3.22 (m, 4H), 3.14 - 3.07 (m, 1H), 3.03 - 2.98 (m, 1H), 2.72 (br d, J=15.7 Hz, 1H), 2.58 - 2.51 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.28 - 2.22 (m, 1H), 1.79 (br s, 1H), 1.74 - 1.69 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 1H)。LCMS Rt = 3.260分鐘，m/z = 505.22 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.260分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 505.22。 實例 41 ( 方法 3-E) ： ( S)-1-(1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向 N-甲氧基甲胺鹽酸鹽(581.75 mg，5.96 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之溶液中添加4-甲基嗎啉(1.01 g，9.94 mmol)、1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-甲酸(1 g，4.97 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(1.43 g，7.46 mmol)及1-羥基苯并三唑(1.01 g，7.46 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之3-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(1.16 g，95.54%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.10 - 4.03 (m, 2H), 4.01 - 3.94 (m, 2H), 3.63 - 3.50 (m, 4H), 3.14 (s, 3H), 1.36 (s, 9H)。LCMS Rt = 1.322分鐘，m/z = 244.14 [M + H]+。 步驟 2 ： N - 甲氧基 - N- 甲基氮雜環丁烷 -3- 甲醯胺
在25℃下將3-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(300 mg，1.23 mmol)於二氯甲烷(1.5 mL)及三氟乙酸(0.5 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之 N-甲氧基- N-甲基氮雜環丁烷-3-甲醯胺(700 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.123分鐘，m/z = 144.09 [M + H]+。 步驟 3 ： ( S)-1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基氮雜環丁烷 -3- 甲醯胺
在0℃下向 N-甲氧基- N-甲基氮雜環丁烷-3-甲醯胺(278.13 mg，1.08 mmol)於 N,N-二甲基甲醛(5 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙胺(278.45 mg，2.15 mmol)及三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯(300 mg，538.62 µmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%甲醇/二氯甲烷)純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之( S)-1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基氮雜環丁烷-3-甲醯胺(150 mg，50.54%)。LCMS Rt = 0.510分鐘，m/z = 550.25 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-1-(1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在-78℃下於氮氣氛圍下向( S)-1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基氮雜環丁烷-3-甲醯胺(50 mg，90.73 µmol)於四氫呋喃(3 mL)中之溶液中添加溴(乙烯基)鎂(1 M，362.92 uL)。在0℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨溶液(2 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 3 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：水(0.1% TFA)-ACN；B%：15%-45%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之( S)-1-(1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)氮雜環丁烷-3-基)丙-2-烯-1-酮(17.95 mg，30.98%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.65 - 7.51 (m, 2H), 7.49 - 7.32 (m, 2H), 6.51 - 6.35 (m, 1H), 6.33 - 6.19 (m, 1H), 6.09 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 4.77 - 4.63 (m, 3H), 4.62 - 4.53 (m, 2H), 4.30 - 4.05 (m, 2H), 3.92 - 3.67 (m, 3H), 3.60 - 3.53 (m, 1H), 3.10 - 3.01 (m, 3H), 2.95 (br d, J = 3.4 Hz, 3H), 2.76 (br d, J = 14.3 Hz, 2H), 2.40 - 2.00 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.069分鐘，m/z = 517.22 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.069分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 517.22。 實例 42 ( 方法 3-E1) ： ( S)-1-(1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 41 ( 實例 41 ( 方法 3-E)) 步驟 1類似之方式，用1-三級丁氧基羰基哌啶-4-甲酸替代1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-甲酸來形成醯胺。在真空中濃縮粗產物，得到呈棕色油狀之4-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.4 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 3.9-4.0 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 2.7-2.9 (m, 3H), 1.63 (br d, 2H, J=11.3 Hz), 1.4-1.4 (m, 9H), 1.35 (br d, 2H, J=3.9 Hz)。LCMS Rt = 0.659分鐘，m/z = 272.2 [M + H]+。 步驟 2 ： N - 甲氧基 - N- 甲基哌啶 -4- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 2類似之方式來進行Boc基團之去保護，將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之 N-甲氧基- N-甲基哌啶-4-甲醯胺(650 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 3.68 (s, 3H), 3.23 (br d, J = 12.7 Hz, 2H), 3.09 (s, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 3H), 1.87 - 1.68 (m, 4H)。 步驟 3 ： ( S)-1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基哌啶 -4- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 3類似之方式來進行取代反應，藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：[水(0.1% TFA)-ACN]；B%：15%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S)-1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基哌啶-4-甲醯胺(38 mg，10.49%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.544分鐘，m/z = 578.3 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-1-(1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應(Grignard reaction)。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：25%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S)-1-(1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(8.87 mg，5.43%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.57 (br d, J=7.4 Hz, 1H), 7.51 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.41 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.34 (dd, J=3.1, 7.3 Hz, 1H), 6.55 - 6.45 (m, 1H), 6.34 - 6.26 (m, 1H), 5.86 (d, J=10.6 Hz, 1H), 4.71 - 4.60 (m, 2H), 4.45 - 4.29 (m, 3H), 3.81 (br d, J=17.8 Hz, 1H), 3.69 (br d, J=5.1 Hz, 2H), 3.52 (br d, J=11.1 Hz, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 7H), 2.91 (s, 3H), 2.59 (br d, J=14.3 Hz, 1H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.14 - 1.96 (m, 4H), 1.81 - 1.68 (m, 1H), 1.60 (q, J=11.8 Hz, 1H)。LCMS Rt = 2.213分鐘，m/z = 545.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.213分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 545.3 實例 43 ( 方法 3-E2) ： 1-((1 R,6 S,7 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -7- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮及 1-((1 S,6 R,7 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -7- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 7-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -3- 甲酸三級丁酯
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 1類似之方式，用3-三級丁氧基羰基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-7-甲酸替代1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-甲酸來形成醯胺。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到7-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-3-甲酸三級丁酯(700 mg，99.00%)。LCMS Rt = 1.701分鐘，m/z = 284.1 [M + H]+。 步驟 2 ： N - 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -7- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 2類似之方式來進行Boc基團之去保護，將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈無色油狀之 N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-7-甲醯胺(700 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.185分鐘，m/z = 184.1 [M + H]+。 步驟 3 ： (1 R,6 S,7 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -7- 甲醯胺及 (1 S,6 R,7 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -7- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 3類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之3-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基]- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-7-甲醯胺(250 mg，50%，三氟乙酸鹽)。藉由超臨界流體層析(SFC)進一步純化外消旋物質，得到任意指定之以下物質：
呈黃色固體狀之(1 R,6 S,7 R)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-7-甲醯胺(峰1，滯留時間 = 2.900分鐘) (75 mg，14.06%)。LCMS Rt = 0.644分鐘，m/z = 590.3 [M + H]+。
呈黃色固體狀之(1 S,6 R,7 S)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-7-甲醯胺(峰2，滯留時間 = 4.561分鐘) (100 mg，18.75%)。LCMS Rt = 0.644分鐘，m/z = 590.3 [M + H]+。
SFC (管柱：Phenomenex-Cellulose-2 (250mm*30mm，10µm)；移動相：[0.1% NH 3H 2O/MeOH]；B%：50%-50%，8分鐘)。 步驟 4 ： 1-((1 R,6 S,7 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -7- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：5%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((1 R,6 S,7 R)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚-7-基)丙-2-烯-1-酮(5.24 mg，16.27%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.93 - 7.82 (m, 1H), 7.71 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.61 - 7.48 (m, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 2H), 6.55 - 6.44 (m, 1H), 6.34 - 6.18 (m, 1H), 5.91 - 5.80 (m, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.06 (m, 2H), 3.85 - 3.66 (m, 2H), 3.62 - 3.49 (m, 2H), 3.28 - 3.17 (m, 1H), 3.11 (dt, J=2.8, 10.9 Hz, 1H), 3.06 - 3.01 (m, 1H), 2.91 (ddd, J=6.4, 9.8, 13.6 Hz, 1H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.48 (br t, J=4.2 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.25 - 2.22 (m, 2H), 2.16 - 2.07 (m, 2H), 2.02 - 1.99 (m, 1H), 1.93 - 1.84 (m, 2H), 1.77 - 1.68 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.204分鐘，m/z = 557.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.204分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 557.3。 步驟 4 ： 1-((1 S,6 R,7 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -7- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：5%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((1 S,6 R,7 S)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚-7-基)丙-2-烯-1-酮(3.64 mg，11.34%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (br d, J=8.19 Hz, 1 H), 7.68 - 7.75 (m, 1 H), 7.48 - 7.62 (m, 2 H), 7.30 - 7.47 (m, 2 H), 6.43 - 6.56 (m, 1 H), 6.19 - 6.37 (m, 1 H), 5.81 - 5.93 (m, 1 H), 4.22 - 4.40 (m, 2 H), 4.08 - 4.20 (m, 2 H), 3.67 - 3.88 (m, 2 H), 3.49 - 3.64 (m, 2 H), 3.18 - 3.31 (m, 1 H), 3.08 - 3.17 (m, 1 H), 3.06 (br d, J=5.99 Hz, 1 H), 2.92 (ddd, J=13.78, 9.99, 5.93 Hz, 1 H), 2.60 - 2.71 (m, 2 H), 2.52 - 2.59 (m, 1 H), 2.44 - 2.51 (m, 3 H), 2.25 - 2.34 (m, 2 H), 2.02 - 2.16 (m, 2 H), 1.83 - 1.96 (m, 2 H), 1.65 - 1.83 (m, 3 H)。LCMS Rt = 2.202分鐘，m/z = 557.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.202分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 557.3。 實例 44 ( 方法 3-E3) ： 1-((1 S,6 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮及 1-((1 R,6 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 6-[ 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ]-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -3- 甲酸三級丁酯
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 1類似之方式，用3-(三級丁氧基羰基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-6-甲酸替代1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-甲酸來形成醯胺。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之6-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-3-甲酸三級丁酯(1.1 g，94.28%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.72 (s, 3H), 3.42 - 3.34 (m, 1H), 3.22 - 3.17 (m, 3H), 3.00 - 2.85 (m, 3H), 2.09 - 1.84 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 10H), 1.31 - 1.11 (m, 1H), 0.53 (dd, J = 5.3, 6.1 Hz, 1H)。LCMS Rt = 0.194分鐘，m/z = 284.2 [M + H]+。 步驟 2 ： N - 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -6- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 2類似之方式來進行Boc基團之去保護。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之 N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-6-甲醯胺(700 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.175分鐘，m/z = 184.1 [M + H]+。 步驟 3 ： (1 S,6 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -6- 甲醯胺及 (1 R,6 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚烷 -6- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 3類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Kromasil C18 (250*50mm*10 µm)；移動相：(水(10mM NH 4HCO 3)-ACN；B%：50%-80%，10分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-6-甲醯胺(400 mg，85.33%)。藉由SFC進一步純化外消旋物質，得到任意指定之以下物質：
呈黃色固體狀之(1 S,6 R)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基-N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-6-甲醯胺(峰1，滯留時間 = 3.054分鐘) (50 mg，10.67%)。LCMS Rt = 0.965分鐘，m/z = 590.28 [M + H]+。
呈黃色固體狀之( 1R,6 S)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-N-甲氧基-N-甲基-3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷-6-甲醯胺(峰2，滯留時間 = 4.201分鐘) (50 mg，10.67%)。LCMS Rt = 0.965分鐘，m/z = 590.28 [M + H]+。
SFC (管柱：Phenomenex-Cellulose-2 (250mm*30mm，10µm)；移動相：([0.1% NH 3H 2O/MeOH]；B%：60%-60%，11分鐘)。 步驟 4 ： 1-((1 S, 6R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：15%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之1-((1 S,6 R)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚-6-基)丙-2-烯-1-酮(2 mg，9.69%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (br d, J = 8.19 Hz, 1 H), 7.68 - 7.74 (m, 1 H), 7.56 - 7.61 (m, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.40 - 7.46 (m, 1 H), 7.28 - 7.39 (m, 1 H), 6.51 - 6.62 (m, 1 H), 6.24 - 6.32 (m, 1 H), 5.67 - 5.74 (m, 1 H), 4.28 - 4.36 (m, 1 H), 4.21 - 4.28 (m, 1 H), 4.08 - 4.16 (m, 1 H), 3.71 - 3.85 (m, 2 H), 3.60 - 3.69 (m, 1 H), 3.46 - 3.59 (m, 2 H), 3.39 (s, 1 H), 3.32 - 3.45 (m, 1 H), 3.18 - 3.29 (m, 1 H), 3.01 - 3.17 (m, 2 H), 2.86 - 2.96 (m, 1 H), 2.75 - 2.84 (m, 1 H), 2.49 - 2.65 (m, 2 H), 2.42 (d, J=3.79 Hz, 2 H), 2.00 - 2.07 (m, 2 H), 1.63 - 1.91 (m, 5 H), 1.50 (td, J=8.80, 4.89 Hz, 1 H), 0.99 - 1.20 (m, 1 H)。LCMS Rt = 2.198分鐘，m/z = 557.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.198分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 557.3。 步驟 4 ： 1-((1 R,6 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [4.1.0] 庚 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((1 R,6 S)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-3-氮雜雙環[4.1.0]庚-6-基)丙-2-烯-1-酮(5 mg，19.08%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J=8.13 Hz, 1 H), 7.70 (t, J=6.69 Hz, 1 H), 7.47 - 7.60 (m, 2 H), 7.39 - 7.45 (m, 1 H), 7.28 - 7.38 (m, 1 H), 6.51 - 6.61 (m, 1 H), 6.22 - 6.32 (m, 1 H), 5.66 - 5.73 (m, 1 H), 4.32 - 4.39 (m, 1 H), 4.20 - 4.30 (m, 1 H), 4.17 (dd, J=10.94, 5.94 Hz, 1 H), 3.91 - 4.12 (m, 1 H), 3.69 - 3.83 (m, 2 H), 3.60 - 3.67 (m, 1 H), 3.48 - 3.57 (m, 1 H), 3.03 - 3.28 (m, 4 H), 2.91 (ddd, J=13.41, 10.98, 4.88 Hz, 1 H), 2.67 - 2.83 (m, 2 H), 2.56 (br d, J=14.63 Hz, 1 H), 2.46 (d, J=1.75 Hz, 3 H), 2.32 - 2.38 (m, 2 H), 1.99 - 2.06 (m, 2 H), 1.68 - 1.87 (m, 3 H), 1.49 (td, J=8.91, 4.82 Hz, 1 H), 1.00 - 1.18 (m, 1 H)。LCMS Rt = 2.207分鐘，m/z = 557.26 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.207分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 557.26。 實例 45 ( 方法 3-E4) ： 1-((1 R,5 S, 6R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [3.1.0] 己 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： ( 1R, 5S,6 S)-6-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 )-3- 氮雜雙環 [3.1.0] 己烷 -3- 甲酸三級丁酯
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 1類似之方式，用(1 S,5 R)-3-三級丁氧基羰基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸替代1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-甲酸來形成醯胺。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(1 R,5 S,6 S)-6-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸三級丁酯(4.7 g，98.78%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 3.64 (br s, 3H), 3.33 (br s, 2H), 3.14 - 3.01 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 3H), 1.35 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.481分鐘，m/z = 270.16 [M + H]+。 步驟 2 ： (1 R,5 S,6 S)- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [3.1.0] 己烷 -6- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 2類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色固體狀之(1 R,5 S,6 S)- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲醯胺(400 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.107分鐘，m/z = 170.11 [M + H]+。 步驟 3 ： (1 R,5 S,6 S)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )- N- 甲氧基 - N- 甲基 -3- 氮雜雙環 [3.1.0] 己烷 -6- 甲醯胺
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 3類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：30%-70%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(1 R,5 S,6 S)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)- N-甲氧基- N-甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲醯胺(300 mg，75.00%)。LCMS Rt = 0.900分鐘，m/z = 576.26 [M + H]+。 步驟 4 ： 1-(( 1R,5 S,6 R)-3-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )-3- 氮雜雙環 [3.1.0] 己 -6- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 實例 41 ( 方法 3-E) 步驟 4類似之方式來進行格林納反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-35%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之1-(( 1R,5 S,6 R)-3-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基)丙-2-烯-1-酮(2.52 mg，99.55%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.34 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 0.7, 8.1 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 1.0, 7.4 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 1H), 7.32 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.37 - 6.32 (m, 2H), 5.94 (dd, J = 4.3, 7.6 Hz, 1H), 4.33 - 4.26 (m, 2H), 4.15 - 4.09 (m, 2H), 4.02 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 4.0, 11.4 Hz, 1H), 3.71 (d, J = 16.9 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 4.0, 11.3 Hz, 1H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.23 (ddd, J = 5.6, 9.9, 15.3 Hz, 1H), 3.10 - 3.02 (m, 2H), 2.77 - 2.65 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.18 - 2.13 (m, 2H), 2.09 - 2.05 (m, 1H), 2.04 - 1.99 (m, 1H), 1.84 (br s, 4H)。LCMS Rt = 2.066分鐘，m/z = 543.24 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.066分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 543.24。 實例 46 ( 方法 4-V) ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 丙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： 4- 甲基苯磺酸 3-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙酯
在0℃下向 N-(3-羥丙基)- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，10.57 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.14 g，21.14 mmol)、 N,N-二甲基吡啶-4-胺(64.55 mg，528.40 µmol)、及4-甲基苯-1-磺醯氯(2.01 g，10.57 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液。在30℃下攪拌反應混合物2小時。用0.5 M鹽酸(300 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之4-甲基苯磺酸3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙酯(3.1 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.652分鐘，m/z = 343.2 [M + H]+。 步驟 2 ： (3-((2- 羥乙基 ) 硫基 ) 丙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向4-甲基苯磺酸3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙酯(2.63 g，7.65 mmol)於甲苯(26 mL)中之溶液中添加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(1.75 g，11.47 mmol)及2-硫烷基乙醇(896.00 mg，11.47 mmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。用水(30 ml)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之(3-((2-羥乙基)硫基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.5 g，78.68%)。LCMS Rt = 0.581分鐘，m/z = 249.1 [M + H]+。 步驟 3 ： (3-((2- 羥乙基 ) 磺醯基 ) 丙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向(3-((2-羥乙基)硫基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.5 g，6.02 mmol)於甲醇(30 mL)及四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加過氧單硫酸鉀(14.79 g，24.06 mmol)於水(30 mL)中之溶液。在30℃下攪拌混合物2小時。在0℃下用飽和亞硫酸鈉溶液(200 mL)淬滅反應混合物且在真空中濃縮以移除甲醇及四氫呋喃，接著用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。用鹽水(2 x 50 mL)洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(3-((2-羥乙基)磺醯基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.6 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.12 - 4.04 (m, 2H), 3.39 - 3.33 (m, 2H), 3.23 - 3.17 (m, 2H), 3.15 - 3.07 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.11 - 2.04 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。 步驟 4 ：肉桂酸 2-((3-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
向(3-((2-羥乙基)磺醯基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.6 g，5.69 mmol)、( E)-3-苯基丙-2-烯酸(842.51 mg，5.69 mmol)及 N,N-二甲基吡啶-4-胺(69.47 mg，568.65 µmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加 N-(3-二甲基胺基丙基)- N-乙基碳二亞胺(1.31 g，6.82 mmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之肉桂酸2-((3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙基)磺醯基)乙酯(2.2 g，94.01%)。LCMS Rt = 0.800分鐘，m/z = 411.2 [M + H]+。 步驟 5 ：肉桂酸 2-((3-( 甲基胺基 ) 丙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
在25℃下將肉桂酸2-((3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙基)磺醯基)乙酯(2.2 g，5.35 mmol)於含4.0 M氯化氫之乙酸乙酯(20 mL)中之溶液攪拌10分鐘。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之肉桂酸2-((3-(甲基胺基)丙基)磺醯基)乙酯(1.66 g，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.731分鐘，m/z = 311.1 [M + H]+。 步驟 6 ：肉桂酸 ( S)-2-((3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用肉桂酸2-((3-(甲基胺基)丙基)磺醯基)乙酯替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：20%-50%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之肉桂酸( S)-2-((3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)丙基)磺醯基)乙酯(240 mg，71.1%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.679分鐘，m/z = 717.3 [M + H]+。 步驟 7 ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 丙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
向肉桂酸( S)-2-((3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)丙基)磺醯基)乙酯(150 mg，180.22 µmol，三氟乙酸鹽)於丙酮(1 mL)及水(1 mL)中之溶液中添加碳酸氫鈉(22.71 mg，270.33 µmol)。在50℃下攪拌混合物12小時。過濾反應混合物且將濾液在真空中濃縮至乾。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：([水(0.1% TFA)-ACN]；B%：10%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之( S)-7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(3-(乙烯基磺醯基)丙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(31.2 mg，24.35%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 - 7.50 (m, 2H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 6.82 (ddd, J=1.7, 10.0, 16.6 Hz, 1H), 6.36 (d, J=16.5 Hz, 1H), 6.24 (d, J=10.0 Hz, 1H), 4.77 - 4.59 (m, 2H), 4.31 (br d, J=17.6 Hz, 1H), 3.90 - 3.70 (m, 5H), 3.56 (br dd, J=2.4, 9.2 Hz, 1H), 3.32 (d, J=3.3 Hz, 4H), 3.16 - 3.05 (m, 4H), 2.94 (d, J=2.1 Hz, 3H), 2.81 (br d, J=14.9 Hz, 1H), 2.40 - 2.19 (m, 2H), 2.17 - 2.00 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.066分鐘，m/z = 569.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.066分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 569.2。 實例 47 ( 方法 4-V1) ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-(2-( 乙烯基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： 4- 甲基苯磺酸 2-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 1類似之方式，用(2-羥乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯替代(3-羥丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯來進行醯化。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之4-甲基苯磺酸2-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)乙酯(6 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.71 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.28 (br d, J=8.0 Hz, 2H), 4.12 - 3.99 (m, 3H), 3.39 (br d, J=4.8 Hz, 2H), 3.18 - 3.10 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.37 - 1.26 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.646分鐘，m/z = 329.1 [M + H]+。 步驟 2 ： (2-((2- 羥乙基 ) 硫基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 2類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(2-((2-羥乙基)硫基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.7 g，39.66%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 3.68 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.33 (br d, J=5.0 Hz, 2H), 2.81 (br s, 3H), 2.69 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 2.61 (br d, J=6.5 Hz, 2H), 1.39 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.598分鐘，m/z = 235.1 [M + H]+。 步驟 3 ： (2-((2- 羥乙基 ) 磺醯基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 3類似之方式來進行環氧化。在真空中濃縮粗產物，得到呈無色油狀之(2-((2-羥乙基)磺醯基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.7 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 4.19 - 4.10 (m, 2H), 3.71 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.39 (br s, 2H), 3.28 (br s, 2H), 2.94 (s, 3H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 1.860分鐘，m/z = 267.1 [M + H]+。 步驟 4 ：肉桂酸 2-((2-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 4類似之方式來進行酯偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之肉桂酸2-((2-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)乙基)磺醯基)乙酯(2.1 g，83.08%)。LCMS Rt = 0.657分鐘，m/z = 397.2 [M + H]+。 步驟 5 ：肉桂酸 2-((2-( 甲基胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈白色固體狀之肉桂酸2-((2-(甲基胺基)乙基)磺醯基)乙酯(1.6 g，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.423分鐘，m/z = 297.1 [M + H]+。 步驟 6 ：肉桂酸 ( S)-2-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之肉桂酸( S)-2-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)磺醯基)乙酯(700 mg，47.65%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.927分鐘，m/z = 703.3 [M + H]+。 步驟 7 ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-(2-( 乙烯基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 7類似之方式來進行消除反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：10%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S)-7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(2-(乙烯基磺醯基)乙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(112 mg，39.37%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.36 (s, 1H), 7.87 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.61 - 7.48 (m, 2H), 7.41 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (br d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.85 (ddd, J = 3.9, 10.0, 16.4 Hz, 1H), 6.34 (br d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.20 (br d, J = 9.9 Hz, 1H), 4.45 (td, J = 5.8, 11.5 Hz, 1H), 4.31 (br dd, J = 2.7, 10.9 Hz, 1H), 4.22 (br d, J = 17.1 Hz, 1H), 3.98 - 3.82 (m, 2H), 3.73 (br d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.57 - 3.49 (m, 2H), 3.45 - 3.38 (m, 1H), 3.29 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 3.22 - 3.15 (m, 3H), 3.13 - 2.99 (m, 3H), 2.72 - 2.51 (m, 5H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.117分鐘，m/z = 555.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.117分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 555.2。 實例 48 ( 方法 5-V) ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-((1 r,3 S)-3-( 乙烯基磺醯基 ) 環丁基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： 4- 甲基苯磺酸順 - 3-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 環丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 1類似之方式，用(順-3-羥基環丁基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯替代(3-羥丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯來進行醯化。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之4-甲基苯磺酸順-3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)環丁酯(1.7 g，89%)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.86 - 7.76 (m, 2H), 7.38 (d, J=8.1 Hz, 2H), 4.52 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.59 - 2.51 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.820分鐘，m/z = 355.2 [M + H]+。 步驟 2 ：反 - N -[3-(2- 羥乙基硫烷基 ) 環丁基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 2類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之反- N-[3-(2-羥乙基硫烷基)環丁基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(1.1 g，93%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 4.76 (br s, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 3H), 3.40 - 3.31 (m, 1H), 2.80 (s, 2H), 2.71 - 2.67 (m, 2H), 2.58 - 2.54 (m, 2H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。LCMS Rt = 1.486分鐘，m/z = 261.1 [M + H]+。 步驟 3 ：反 - N -[3-(2- 羥乙基磺醯基 ) 環丁基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 3類似之方式來進行環氧化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之反- N-[3-(2-羥乙基磺醯基)環丁基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(400 mg，59.40%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 4.52 (quin, J=8.6 Hz, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 3H), 3.73 - 3.63 (m, 1H), 3.13 - 3.09 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.72 - 2.68 (m, 3H), 2.32 (br s, 1H), 1.39 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.580分鐘，m/z = 293.1 [M + H]+。 步驟 4 ：反 - 2-[3-( 甲基胺基 ) 環丁基 ] 磺醯基乙醇
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈白色固體狀之反-2-[3-(甲基胺基)環丁基]磺醯基乙醇(50 mg，98%，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.180分鐘，m/z = 193.1 [M + H]+。 步驟 5 ： 2-(( 反 - 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 環丁基 ) 磺醯基 ) 乙醇
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 6類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 µm；移動相：(水(0.1% TFA)-ACN；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之2-((反-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)環丁基)磺醯基)乙醇(250 mg，43.33%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.615分鐘，m/z = 599.2 [M + H]+。 步驟 6 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N- 甲基 -2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )- N-((1 r,3 S)-3-( 乙烯基磺醯基 ) 環丁基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
在0℃下向2-((反-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)環丁基)磺醯基)乙醇(100 mg，140.02 µmol，三氟乙酸鹽)於二氯甲烷(2 mL)及三乙胺(70.84 mg，700.1 µmol)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(80.20 mg，700.1 µmol)。在0℃下攪拌混合物2小時。在0℃下用飽和水(0.5 ml)淬滅反應混合物且用DCM (3 x 4 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(0.2% FA)-ACN；B%：22%-52%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)- N-甲基-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)- N-(( 1r,3 S)-3-(乙烯基磺醯基)環丁基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(27.45 mg，29.01%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (dd, J=1.0, 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 1H), 7.62 - 7.50 (m, 2H), 7.46 - 7.33 (m, 2H), 6.78 (dd, J=10.0, 16.6 Hz, 1H), 6.39 (d, J=16.6 Hz, 1H), 6.25 (d, J=10.0 Hz, 1H), 4.69 (quin, J=8.3 Hz, 1H), 4.37 (td, J=5.8, 11.4 Hz, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 2H), 3.75 (d, J=17.4 Hz, 1H), 3.65 (tt, J=4.3, 8.8 Hz, 1H), 3.56 (br d, J=11.3 Hz, 1H), 3.26 - 3.16 (m, 2H), 3.16 - 3.02 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.93 - 2.87 (m, 1H), 2.72 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.59 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.88 - 1.79 (m, 2H), 1.79 - 1.69 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.149分鐘，m/z = 581.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.149分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 581.2 實例 49 ( 方法 4-V2) ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 - N-(2-( 乙烯基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ：肉桂酸 2-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 乙酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 6類似之方式，用三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-((四氫-1 H-吡咯嗪-7a(5 H)-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯且用肉桂酸2-((2-(甲基胺基)乙基)磺醯基)乙酯(參見 實例 47 步驟 5)替代肉桂酸2-((3-(甲基胺基)丙基)磺醯基)乙酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5µm；移動相：(水(TFA)-ACN；B%：15%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之肉桂酸2-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)磺醯基)乙酯(65 mg，20.76%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.792分鐘，m/z = 729.3 [M + H]+。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 - N-(2-( 乙烯基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 7類似之方式來進行消除反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基- N-(2-(乙烯基磺醯基)乙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(5 mg，17.20%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.72 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.59 (dd, J=1.1, 7.5 Hz, 1H), 7.54 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.95 - 6.84 (m, 1H), 6.37 (d, J=16.6 Hz, 1H), 6.22 (d, J=9.9 Hz, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 2H), 4.24 (br d, J=17.1 Hz, 1H), 4.05 - 3.82 (m, 2H), 3.75 (br d, J=17.4 Hz, 1H), 3.64 - 3.51 (m, 2H), 3.50 - 3.35 (m, 3H), 3.33 - 3.17 (m, 4H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 3.02 - 2.84 (m, 3H), 2.17 - 2.08 (m, 2H), 2.06 - 1.99 (m, 4H), 1.87 (br dd, J=6.5, 12.7 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.135分鐘，m/z = 581.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.135分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 581.2。 實例 50 ( 方法 5-V1) ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-4-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 步驟 1 ： 3-((2- 羥乙基 ) 硫基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 2類似之方式，用3-碘氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯替代4-甲基苯磺酸3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙酯來進行取代反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈無色油狀之3-((2-羥乙基)硫基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(2.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.27-4.23 (m, 2H), 3.80-3.75 (m, 2H), 3.68-3.62 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 1H), 2.75-2.68 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)。 步驟 2 ： 3-((2- 羥乙基 ) 磺醯基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 3類似之方式來進行環氧化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之3-((2-羥乙基)磺醯基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(250 mg，19.79%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.31-4.29 (m, 2H), 4.17-4.09 (m, 4H), 3.20-3.18 (m, 2H), 2.51-2.48 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)。 步驟 3 ： 2-( 氮雜環丁烷 -3- 基磺醯基 ) 乙醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 4類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈無色油狀之2-(氮雜環丁烷-3-基磺醯基)乙醇(120 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.450分鐘，m/z = 165.1 [M + H]+。 步驟 4 ： ( S)-2-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 磺醯基 ) 乙醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 5類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈淡黃色油狀之( S)-2-((1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)氮雜環丁烷-3-基)磺醯基)乙醇(120 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.680分鐘，m/z = 571.2 [M + H]+。 步驟 5 ： ( S)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-4-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 6類似之方式來進行消除反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(NH 4HCO 3)-ACN；B%：45%-75%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(3-(乙烯基磺醯基)氮雜環丁烷-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶(11.7 mg，11.52%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 - 7.83 (d, J = 8.4, 1H), 7.68 - 7.66 (m, 1H), 7.55 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.39 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.30 (m, 1H), 6.81-6.77 (m, 1H), 6.47-6.43 (d, J = 16.4, 1H), 6.32-6.29 (d, J = 10, 1H), 4.55 - 4.51 (m, 2H), 4.49 - 4.45 (m, 1H), 4.37 - 4.34 (m, 1H), 4.25 - 4.21 (m, 1H), 4.12-4.07 (m, 3H), 3.73 - 3.69 (m, 1H), 3.51 - 3.47 (m, 1H), 3.11 - 3.08 (m, 2H), 2.95 - 2.91 (m, 1H),2.55-2.45 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.27 - 2.25 (m, 1H),1.71-1.67 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.115分鐘，m/z = 553.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.115分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 553.2。 實例 51 ( 方法 5-V2) ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-4-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 步驟 1 ： 3-((2- 羥乙基 ) 硫基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 2類似之方式，用3-碘吡咯啶-1-甲酸三級丁酯替代4-甲基苯磺酸3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之3-((2-羥乙基)硫基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，60.06%)。LCMS Rt = 0.720分鐘，m/z = 247.1 [M + H]+。 步驟 2 ： 3-((2- 羥乙基 ) 磺醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 3類似之方式來進行環氧化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈無色油狀之3-((2-羥乙基)磺醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，49.19%)。LCMS Rt = 0.620分鐘，m/z = 279.1 [M + H]+。 步驟 3 ： 2-( 吡咯啶 -3- 基磺醯基 ) 乙醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 4類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之2-(吡咯啶-3-基磺醯基)乙醇(400 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氧化氘) δ 4.52 (br t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.29 - 4.22 (m, 1H), 4.06 - 4.00 (m, 2H), 3.85 - 3.68 (m, 4H), 3.45 - 3.40 (m, 1H), 2.54 - 2.49 (m, 2H)。 步驟 4 ： 2-((1-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 磺醯基 ) 乙醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 5類似之方式來進行取代。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色膠狀之2-((1-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)吡咯啶-3-基)磺醯基)乙醇(180 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.310分鐘，m/z = 585.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-((( S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-4-(3-( 乙烯基磺醯基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 6類似之方式來進行消除反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5µm；移動相：(水(FA)-ACN；B%：13%-43%，8分鐘)純化粗產物，得到呈棕色膠狀之7-(8-氯萘-1-基)-2-((( S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(3-(乙烯基磺醯基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶(60 mg，30.61%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.23 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 1.1, 8.2 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 1.2, 7.3 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.31 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.80 (ddd, J = 6.2, 10.0, 16.5 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 3.9, 16.6 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 2.7, 10.0 Hz, 1H), 4.38 - 4.31 (m, 1H), 4.23 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 2H), 4.02 - 3.68 (m, 6H), 3.57 - 3.49 (m, 1H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.17 - 3.05 (m, 2H), 2.78 (br s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.40 - 2.28 (m, 3H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.80 - 1.74 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.082分鐘，m/z = 567.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.082分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 567.2。 實例 52 ( 方法 6-V) ： ( S,E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N-(2-((3-( 二甲基胺基 ) 丙 -1- 烯 -1- 基 ) 磺醯基 ) 乙基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： N - 甲基 - N-(2- 甲基磺醯基乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在0℃下向 N-(2-羥乙基)- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(20 g，114.14 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之溶液中添加三乙胺(23.10 g，228.28 mmol)及甲基磺醯基甲烷磺酸酯(39.77 g，228.28 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。用飽和碳酸氫鈉溶液(100 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 50 ml)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之 N-甲基- N-(2-甲基磺醯基乙基)胺基甲酸三級丁酯(22.2 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： (2-( 烯丙硫基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向 N-甲基- N-(2-甲基磺醯基乙基)胺基甲酸三級丁酯(22.2 g，93.42 mmol)於甲苯(100 mL)中之溶液中添加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(42.67 g，280.26 mmol)及丙-2-烯-1-硫醇(7.62 g，102.76 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用水(100 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 50 ml)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黑色油狀之(2-(烯丙硫基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(16 g，74.03%)。LCMS Rt = 0.715分鐘，m/z = 231.1 [M + H]+。 步驟 3 ： N -(2- 烯丙基磺醯基乙基 )- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
在-10℃下向(2-(烯丙硫基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(11 g，47.55 mmol)於水(10 mL)及乙腈(10 mL)中之溶液中添加Oxone® (64.71 g，105.25 mmol)。在25℃下攪拌混合物2小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黑色油狀之 N-(2-烯丙基磺醯基乙基)- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(10 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.671分鐘，m/z = 263.1 [M + H]+。 步驟 4 ： N -[2-(2,3- 二溴丙基磺醯基 ) 乙基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
在0℃下向 N-(2-烯丙基磺醯基乙基)- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，7.59 mmol)於三氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加溴(1.82 g，11.39 mmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之 N-[2-(2,3-二溴丙基磺醯基)乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.729分鐘，m/z = 321.0/323.0 [M + H]+。 步驟 5 ： N -[2-[( E)-3- 溴丙 -1- 烯基 ] 磺醯基乙基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
向 N-[2-(2,3-二溴丙基磺醯基)乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(3 g，7.09 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.43 g，14.18 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。用水(50 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。用鹽水(15 mL)洗滌合併之有機物，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之 N-[2-[( E)-3-溴丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(1.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.699分鐘，m/z = 341.0/343.0 [M + H]+。 步驟 6 ： N -[2-[( E)-3-( 二甲基胺基 ) 丙 -1- 烯基 ] 磺醯基乙基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
向 N-[2-[( E)-3-溴丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(2.5 g，7.30 mmol)及 N-乙基- N-異丙基丙-2-胺(1.89 g，14.61 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加 N-甲基甲胺(1.65 g，14.61 mmol，40%純度)。在0℃下攪拌混合物2小時。用水(50 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之 N-[2-[( E)-3-(二甲基胺基)丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(2 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.01 - 6.82 (m, 1H), 6.53 (br d, J = 15.1 Hz, 1H), 3.66 - 3.59 (m, 2H), 3.37-3.32 (m, 2H), 3.18 - 3.13 (m, 2H), 2.92 - 2.89 (m, 3H), 2.28 (s, 6H), 1.46 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.483分鐘，m/z = 306.2 [M + H]+。 步驟 7 ： ( E)- N,N- 二甲基 -3-[2-( 甲基胺基 ) 乙基磺醯基 ] 丙 -2- 烯 -1- 胺
向 N-[2-[( E)-3-(二甲基胺基)丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(500 mg，1.63 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(1 mL，13.51 mmol)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之( E)- N,N-二甲基-3-[2-(甲基胺基)乙基磺醯基]丙-2-烯-1-胺(400 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.184分鐘，m/z = 206.1 [M + H]+。
步驟 8 ： ( S,E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N-(2-((3-( 二甲基胺基 ) 丙 -1- 烯 -1- 基 ) 磺醯基 ) 乙基 )- N- 甲基 -2-((1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺以與 實例 1 ( 方法 1-A) 步驟 4類似之方式，用( E)- N,N-二甲基-3-((2-(甲基胺基)乙基)磺醯基)丙-2-烯-1-胺替代(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯且用三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯替代三氟甲烷磺酸( S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基酯來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 200*40mm*10µm；移動相：(水(FA) - 乙腈；B%：1%-30%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( S,E)-7-(8-氯萘-1-基)- N-(2-((3-(二甲基胺基)丙-1-烯-1-基)磺醯基)乙基)-N-甲基-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(54.59 mg，10.56%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.26 (br s, 1H), 7.85 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.58 - 7.47 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.32 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.79 (td, J = 5.5, 15.2 Hz, 1H), 6.62 (dd, J = 1.4, 15.3 Hz, 1H), 4.42 (br dd, J = 5.5, 11.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 1H), 4.20 (br d, J = 17.3 Hz, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 2H), 3.72 (br d, J = 17.1 Hz, 1H), 3.60 - 3.36 (m, 4H), 3.34 - 3.19 (m, 3H), 3.16 (s, 3H), 3.14 - 3.03 (m, 3H), 2.57 (br s, 5H), 2.22 (s, 5H), 2.16 - 2.08 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.926分鐘，m/z = 612.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.926分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 612.3。 實例 53 ( 方法 6-V1) ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N-[2-[( E)-3-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -1- 烯基 ] 磺醯基乙基 ]- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： N -[2-[( E)-3-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -1- 烯基 ] 磺醯基乙基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 6類似之方式，用3-氟氮雜環丁烷鹽酸鹽替代 N-甲基甲胺來進行取代反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈無色膠狀之 N-[2-[( E)-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.788分鐘，m/z = 336.2 [M + H]+。 步驟 2 ： 2-[( E)-3-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -1- 烯基 ] 磺醯基 - N- 甲基 - 乙胺
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 7類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈淡黃色膠狀之2-[( E)-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)丙-1-烯基]磺醯基- N-甲基-乙胺(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.529分鐘，m/z = 236.1 [M + H]+。 步驟 3 ： 7-(8- 氯 -1- 萘基 )- N-[2-[( E)-3-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -1- 烯基 ] 磺醯基乙基 ]- N- 甲基 -2-[[(2 S)-1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ] 甲氧基 ]-6,8- 二氫 -5 H- 吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：[水(碳酸氫鈉)-乙腈]；B%：55%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-1-萘基)- N-[2-[( E)-3-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)丙-1-烯基]磺醯基乙基]- N-甲基-2-[[(2 S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(7.26 mg，13.31%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 - 7.80 (m, 1 H), 7.68 (d, J=8.00 Hz, 1 H), 7.58 - 7.45 (m, 2 H), 7.43 - 7.36 (m, 1 H), 7.35 - 7.29 (m, 1 H), 6.79 - 6.66 (m, 1 H), 6.59 - 6.46 (m, 1 H), 5.25 - 4.95 (m, 1 H), 4.43 - 4.31 (m, 1 H), 4.26 - 4.11 (m, 2 H), 3.92 (ddt, J=14.15, 8.74, 5.44, 5.44 Hz, 1 H), 3.84 - 3.75 (m, 1 H), 3.74 - 3.67 (m, 1 H), 3.66 - 3.56 (m, 2 H), 3.55 - 3.43 (m, 2 H), 3.37 (dt, J=8.57, 5.35 Hz, 1 H), 3.31 (br dd, J=4.32, 1.81 Hz, 1 H), 3.24 - 3.16 (m, 3 H), 3.15 - 3.12 (m, 2 H), 3.11 - 3.01 (m, 2 H), 2.79 - 2.60 (m, 3 H), 2.48 - 2.41 (m, 3 H), 2.40 - 2.25 (m, 2 H), 2.06 - 1.99 (m, 1 H), 1.84 - 1.63 (m, 3 H)。LCMS Rt = 3.527分鐘，m/z = 642.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.527分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 642.3。 實例 54 ( 方法 5-V3) ： ( E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 - N-(2-( 丙 -1- 烯 -1- 基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： ((1- 溴丙 -2- 基 ) 氧基 )( 三級丁基 ) 二甲基矽烷
向1-溴丙-2-醇(7 g，50.36 mmol)於二氯甲烷(60 mL)中之溶液中添加三級丁基氯二甲基矽烷(9.11 g，60.44 mmol)及咪唑(4.11 g，60.44 mmol)。在20℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈無色油狀之((1-溴丙-2-基)氧基)(三級丁基)二甲基矽烷(12.75 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： (2-((2-(( 三級丁基 二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 ) 硫基 ) 乙基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 46 ( 方法 4-V) 步驟 2類似之方式，用((1-溴丙-2-基)氧基)(三級丁基)二甲基矽烷替代4-甲基苯磺酸3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙酯來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(2-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙基)硫基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(12 g，68.2%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 4.92 (br s, 1H), 3.91 (q, J=5.9 Hz, 1H), 3.29 (br s, 2H), 2.65 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.61 - 2.46 (m, 1H), 1.72 - 1.53 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.20 (d, J=6.1 Hz, 3H), 0.87 (s, 9H), 0.06 (d, J=5.0 Hz, 6H)。 步驟 3 ： (2-((2-(( 三級丁基 二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 ) 硫基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在0℃下向(2-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙基)硫基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(3 g，8.58 mmol)於 N,N-二甲基甲醛(20 mL)中之溶液中添加碘甲烷(3.65 g，25.74 mmol)及氫化鈉(1.03 g，25.74 mmol，60%純度)。在25℃下攪拌混合物2小時。在0℃下用飽和氯化銨(20 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，5-80%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(2-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙基)硫基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(2 g，64.1%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 2.80 (s, 3H), 2.73 (br s, 1H), 2.57 (br d, J=6.1 Hz, 2H), 2.54 - 2.41 (m, 2H), 1.69 - 1.50 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.13 (br d, J=6.0 Hz, 3H), 0.81 (s, 9H)、-0.01 (br d, J=5.3 Hz, 6H)。 步驟 4 ： (2-((2-(( 三級丁基 二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙基 ) 磺醯基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 3類似之方式來進行環氧化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(2-((2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙基)磺醯基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(1.2 g，55.15%)： 1H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 4.39 - 4.30 (m, 1H), 3.56 (br t, J=6.5 Hz, 2H), 3.15 (br s, 2H), 2.87 - 2.81 (m, 2H), 2.80 - 2.74 (m, 3H), 1.34 (s, 9H), 1.18 (d, J=6.3 Hz, 3H), 0.77 (s, 9H), 0.04 -0.05 (m, 6H)。 步驟 5 ： 1-((2-( 甲基胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 丙 -2- 醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 4類似之方式來進行Boc之去保護。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之1-((2-(甲基胺基)乙基)磺醯基)丙-2-醇(180 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.175分鐘，m/z = 181.1 [M + H]+。 步驟 6 ： 1-((2-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 丙 -2- 醇
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 5類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5µm；移動相：(水(三氟乙酸)-乙腈；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之1-((2-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)乙基)磺醯基)丙-2-醇(50 mg，20.02%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 2.136分鐘，m/z = 613.3 [M + H]+。 步驟 7 ： ( E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 - N-(2-( 丙 -1- 烯 -1- 基磺醯基 ) 乙基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 48 ( 方法 5-V) 步驟 6類似之方式來進行消除。首先藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3µm；移動相：(水(甲酸) - 乙腈；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( E)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基- N-(2-(丙-1-烯-1-基磺醯基)乙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(8.93 mg，18.72%，甲酸鹽)： 1H NMR (400MHz, 乙腈-d3) δ 8.35 (s, 1H), 7.88 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.71 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.35 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.92 - 6.80 (m, 1H), 6.48 (dd, J=1.6, 15.0 Hz, 1H), 4.23 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.17 - 4.13 (m, 2H), 3.98 - 3.90 (m, 1H), 3.88 - 3.79 (m, 1H), 3.75 (d, J=17.4 Hz, 1H), 3.57 - 3.45 (m, 2H), 3.39 - 3.32 (m, 1H), 3.26 - 3.22 (m, 1H), 3.18 - 3.17 (m, 3H), 3.13 - 3.08 (m, 1H), 2.80 - 2.74 (m, 2H), 2.68 (br d, J=15.3 Hz, 2H), 2.42 (br s, 1H), 2.06 - 2.01 (m, 2H), 1.96 - 1.93 (m, 3H), 1.93 (d, J=1.6 Hz, 2H), 1.91 - 1.85 (m, 2H), 1.78 - 1.71 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.144分鐘，m/z = 595.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.144分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 595.2。 實例 55 ( 方法 6-V2) ： ( E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N-(2-((3-( 二乙基胺基 ) 丙 -1- 烯 -1- 基 ) 磺醯基 ) 乙基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 -5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺 步驟 1 ： ( E)-(2-((3-( 二乙基胺基 ) 丙 -1- 烯 -1- 基 ) 磺醯基 ) 乙基 )( 甲基 ) 胺基甲酸三級丁酯
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 6類似之方式，用N-乙基乙胺替代N-甲基甲胺來進行取代。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色膠狀之( E)-(2-((3-(二乙基胺基)丙-1-烯-1-基)磺醯基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(100 mg，粗物質)。LCMS Rt = 0.833分鐘，m/z = 334.2 [M + H]+。 步驟 2 ： ( E)- N,N- 二乙基 -3-((2-( 甲基胺基 ) 乙基 ) 磺醯基 ) 丙 -2- 烯 -1- 胺
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 7類似之方式來進行Boc之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色膠狀之( E)- N,N-二乙基-3-[2-(甲基胺基)乙基磺醯基]丙-2-烯-1-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.581分鐘，m/z = 234.1 [M + H]+。 步驟 3 ： ( E)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )- N-(2-((3-( 二乙基胺基 ) 丙 -1- 烯 -1- 基 ) 磺醯基 ) 乙基 )-2-(( 六氫 -1 H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )- N- 甲基 -5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4- d] 嘧啶 -4- 胺
以與 實例 52 ( 方法 6-V) 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10µm；移動相：(水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：40%-70%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之( E)-7-(8-氯萘-1-基)- N-(2-((3-(二乙基胺基)丙-1-烯-1-基)磺醯基)乙基)-2-((六氫-1 H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)- N-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4- d]嘧啶-4-胺(8.64 mg，13.8%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 - 7.47 (m, 2H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.32 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.82 (td, J = 5.3, 15.1 Hz, 1H), 6.66 - 6.56 (m, 1H), 4.20 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.79 (ddd, J = 5.7, 8.7, 14.2 Hz, 1H), 3.71 (br d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 2H), 3.40 - 3.31 (m, 1H), 3.27 - 3.15 (m, 4H), 3.13 (s, 3H), 3.08 - 3.04 (m, 1H), 3.00 - 2.93 (m, 2H), 2.65 - 2.58 (m, 2H), 2.51 - 2.43 (m, 4H), 1.87 - 1.72 (m, 6H), 1.59 (td, J = 7.2, 12.1 Hz, 2H), 0.96 (t, J = 7.2 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.964分鐘，m/z = 666.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.964分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 666.3。 實例 56 ( 方法 1) ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： N,2- 二羥基 -2- 甲基丙脒
以與 方法 #1 步驟 1類似之方式來形成羥基脒。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之N,2-二羥基-2-甲基丙脒(2.2 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.351分鐘，m/z = 118.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-4-((2- 羥基 -2- 甲基丙脒基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-4-((2-羥基-2-甲基丙脒基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(2.2 g，49.89%)。LCMS Rt = 0.552分鐘，m/z = 244.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(350 mg，40%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.41 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.17 (m, 2H), 1.64 - 1.55 (m, 6H), 1.34 - 1.23 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.590分鐘，m/z = 226.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(180 mg，55.94%)。LCMS Rt = 0.467分鐘，m/z = 198.1 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(25.3 mg，22.65%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.80 - 7.75 (m, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 2H), 7.55 - 7.45 (m, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 5.80 - 5.54 (m, 1H), 5.41 - 5.13 (m, 2H), 4.52 - 4.33 (m, 1H), 4.25 - 4.13 (m, 3H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.96 - 3.80 (m, 1H), 3.63 - 3.54 (m, 3H), 3.23 - 3.05 (m, 3H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 3H), 1.93 - 1.80 (m, 3H), 1.61 (d, J = 6.9 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.418分鐘，m/z = 762.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.418分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 762.3。 實例 57 ( 方法 6) ： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3S,4S)-3-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(3S,4S)-3-(苯甲基(甲基)胺基)-4-羥基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.2 g，76.43%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) 7.42 - 7.21 (m, 5H), 4.43 - 4.32 (m, 1H), 3.84 - 3.60 (m, 4H), 3.46 - 3.06 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.50 (s, 9H)。 步驟 2 ： (3S,4S)-3- 羥基 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 6 步驟 6類似之方式來進行Bn基團之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈無色油狀之(3S,4S)-3-羥基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.4 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-羥基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(170 mg，26.80%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt =1.479分鐘，m/z = 680.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (3S,4S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -3- 醇
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(3S,4S)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-3-醇(10 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.573分鐘，m/z = 580.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #6 步驟 13類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-羥基吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(15.02 mg，19.66%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (dd, J= 2.5, 11.8 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.74 - 7.58 (m, 3H), 7.55 - 7.51 (m, 1H), 6.61 - 6.52 (m, 1H), 6.26 (br d, J= 16.8 Hz, 1H), 5.73 - 5.68 (m, 1H), 5.35 (br s, 1H), 4.73 - 4.64 (m, 1H), 4.26 - 4.22 (m, 1H), 4.19 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 4.17 - 4.10 (m, 1H), 4.02 - 4.01 (m, 1H), 4.08 - 3.94 (m, 1H), 3.76 - 3.51 (m, 1H), 3.46 - 3.42 (m, 3H), 3.29 - 3.12 (m, 3H), 3.10 (s, 1H), 2.96 - 2.89 (m, 1H), 2.24 - 2.18 (m, 1H), 2.15 - 2.12 (m, 1H), 2.07 (br d, J= 7.5 Hz, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.783分鐘，m/z = 634.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.783分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 634.2。 實例 58 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之3-(1-(三級丁氧基羰基)吡咯啶-3-基)丙炔酸(430 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 3-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之3-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(130 mg，29.73%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.768分鐘，m/z = 785.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行去Boc保護反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(吡咯啶-3-基)丙-2-炔-1-酮(8.51 mg，8.72%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (br d, J= 7.0 Hz, 1H), 8.38 - 8.02 (m, 3H), 7.78 - 7.53 (m, 4H), 5.39 - 5.19 (m, 2H), 4.21 - 4.04 (m, 4H), 3.95 - 3.77 (m, 2H), 3.73 - 3.60 (m, 2H), 3.48 - 3.38 (m, 4H), 3.32 - 3.23 (m, 1H), 3.10 (br d, J= 8.3 Hz, 2H), 3.02 (br s, 1H), 2.84 (br d, J= 4.0 Hz, 2H), 2.32 (br s, 2H), 2.17 - 1.99 (m, 4H), 1.89 - 1.72 (m, 4H)。LCMS Rt = 1.945分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間1.945分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 59 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
根據 方法 #7 步驟 1製備。在-78℃下於氮氣下向2-乙炔基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，512.14 umol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，102.43 uL)。在-78℃下攪拌混合物0.5小時，接著添加二氧化碳。在-78℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(5 mL)淬滅反應混合物，接著添加硫酸氫鉀(5 mL)，且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-(1-(三級丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)丙炔酸(110 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
根據 方法 #7 步驟 2製備。以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.708分鐘，m/z = 785.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
根據 方法 #7 步驟 3製備。以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(14.08 mg，14.77%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (dd, J= 2.1, 7.6 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.15 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.61 (m, 3H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 5.49 - 5.25 (m, 2H), 4.38 - 4.24 (m, 2H), 4.18 - 4.05 (m, 1H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.82 - 3.62 (m, 2H), 3.54 - 3.38 (m, 5H), 3.36 - 3.16 (m, 3H), 3.09 - 3.03 (m, 1H), 3.00 - 2.92 (m, 1H), 2.43 - 2.26 (m, 4H), 2.24 - 2.07 (m, 3H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.84 - 1.76 (m, 1H)。LCMS Rt = 1.942分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)滯留時間1.942分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 60 ( 方法 1) 1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 5- 氯 -6- 氟 -1,4- 二氫 -1,4- 環氧基萘
在-40℃下於氮氣氛圍下向1-溴-3-氯-2,4-二氟-苯(30 g，131.91 mmol)及呋喃(17.96 g，263.81 mmol)於甲苯(500 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，63.32 mL)。在25℃下攪拌混合物12小時。在0℃下用飽和氯化銨溶液(600 mL)逐滴淬滅混合物，用乙酸乙酯(3 x 200 ml)萃取。在真空中濃縮有機層，得到呈棕色油狀之5-氯-6-氟-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(28 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 8- 氯 -7- 氟萘 -1- 醇
向5-氯-6-氟-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(28.00 g，142.42 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液中添加氯化氫(142.42 mL)。在80℃下攪拌混合物6小時。在0℃下用飽和碳酸氫鈉溶液(500 mL)逐滴淬滅混合物，用乙酸乙酯(3 x 500 mL)萃取。在真空中濃縮有機層且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之8-氯-7-氟萘-1-醇(10 g，35.71%)。LCMS Rt = 0.565分鐘，m/z = 196.0 [M + H] +。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基酯
在20℃下將8-氯-7-氟萘-1-醇(9 g，45.78 mmol)、N-乙基-N,N-二異丙胺(35.50 g，274.66 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之混合物攪拌10分鐘。接著在-10℃下將三氟甲基磺酸酐(16.79 g，59.51 mmol)逐滴添加至混合物中。在-10℃下於氮氣氛圍下攪拌所得混合物20分鐘，接著用水(100 mL)稀釋且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。在真空中濃縮有機層且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之三氟甲烷磺酸8-氯-7-氟萘-1-基酯(14 g，93.05%)。LCMS Rt = 0.734分鐘，m/z = 328.0 [M + H] +。 步驟 4 ： 2-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
在80℃下於氮氣氛圍下將三氟甲烷磺酸8-氯-7-氟萘-1-基酯(20 g，60.85 mmol)、雙(頻哪醇)二硼烷(30.91 g，121.70 mmol)、(1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵)二氯化鈀(II) (4.45 g，6.09 mmol)、乙酸鉀(29.86 g，304.26 mmol)於N,N-二甲基-甲醯胺(400 mL)中之混合物攪拌12小時。用水(400 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 400 mL)萃取。在真空中濃縮有機層且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(18 g，96.49%)。LCMS Rt = 0.847分鐘，m/z = 306.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 ) 硼酸
向2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(18 g，58.71 mmol)於乙腈(200 mL)及水(60 mL)中之溶液中添加乙酸銨(18.10 g，234.86 mmol)及過碘酸鈉(50.23 g，234.86 mmol)。在70℃下攪拌混合物12小時。用水(100 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 200 mL)萃取。在真空中濃縮有機層。藉由逆相HPLC (管柱：管柱：Phenomenex luna C18 (250*70mm，10 um)；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：15%-45%，25分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(8-氯-7-氟萘-1-基)硼酸(4.9 g，37.18%)。LCMS Rt = 0.694分鐘，m/z = 224.0 [M + H] +。 步驟 6 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 6類似之方式來進行鈴木反應(Suzuki reaction)。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，2%-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.7 g，62.39%)。LCMS Rt = 0.655分鐘，m/z = 606.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 4- 氯 -7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應。呈黃色液體狀之粗產物4-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(200 mg，粗物質)未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.716分鐘，m/z = 518.1 [M + H] +。 步驟 8 ： 3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-3- 氟氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)-3-氟氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(110 mg，35.04%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.941分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +。 步驟 9 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N-((3- 氟氮雜環丁烷 -3- 基 ) 甲基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-((3-氟氮雜環丁烷-3-基)甲基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(110 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.600分鐘，m/z = 600.2 [M + H] +。 步驟 10 ： 1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)-3-氟氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(29.89 mg，31.08%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 (s, 1H), 8.17 - 8.12 (m, 1H), 8.08 (dd, J= 5.6, 9.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 2H), 7.53 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 6.34 - 6.17 (m, 2H), 5.68 (dd, J= 2.4, 9.9 Hz, 1H), 5.35 - 5.15 (m, 1H), 4.63 - 4.49 (m, 3H), 4.40 - 4.26 (m, 2H), 4.20 - 4.03 (m, 3H), 3.69 (d, J= 1.0 Hz, 3H), 3.16 - 3.10 (m, 2H), 3.05 (s, 1H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.22 - 2.13 (m, 2H), 2.08 (br s, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.85 (dt, J= 3.8, 9.8 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.999分鐘，m/z = 654.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.999分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 654.2。 實例 61 ( 方法 1) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色油狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(6.83 mg，5.66%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.20 - 8.15 (m, 1H), 8.11 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 5.50 - 5.36 (m, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 2H), 4.06 (br dd, J = 4.3, 12.1 Hz, 1H), 3.96 - 3.88 (m, 1H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.09 (br dd, J = 5.6, 10.0 Hz, 2H), 2.73 - 2.65 (m, 2H), 2.40 (br d, J = 2.9 Hz, 1H), 2.06 - 2.00 (m, 4H), 1.88 (td, J = 5.7, 11.5 Hz, 4H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.61 (d, J = 8.8 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.589分鐘，m/z = 744.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.589分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 62 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10%-30%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈棕色油狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(1 g，60.18%)。LCMS Rt = 0.796分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(151 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.497分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(2-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(37 mg，22.39%)。LCMS Rt = 0.762分鐘，m/z = 742.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應(Horner-Wadsworth-Emmons reaction)。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(17.47 mg，48.88%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.67 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.31 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 5.31 - 5.11 (m, 1H), 4.46 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.06 (m, 4H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.62 - 3.55 (m, 3H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.14 - 3.00 (m, 3H), 2.90 - 2.80 (m, 1H), 2.67 - 2.62 (m, 3H), 2.10 - 1.98 (m, 3H), 1.87 - 1.77 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.963分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間0.963分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 63 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-( 嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-( 嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(26.4 mg，17.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.80 - 8.75 (m, 1H), 8.12 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.32 - 7.21 (m, 1H), 5.32 - 5.12 (m, 1H), 4.47 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.33 - 4.24 (m, 2H), 4.23 - 4.03 (m, 4H), 3.97 - 3.86 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 3H), 3.28 - 3.18 (m, 1H), 3.13 - 3.02 (m, 3H), 2.91 - 2.80 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 3H), 1.90 - 1.73 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.833分鐘，m/z = 696.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.833分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3。 實例 64 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(4-( 三級丁氧基羰基 ) 嗎啉 -2- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之3-(4-(三級丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙炔酸(80 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 嗎啉 -4- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)嗎啉-4-甲酸三級丁酯(30 mg，14.53%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.717分鐘，m/z = 801.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行去Boc保護反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(嗎啉-2-基)丙-2-炔-1-酮(3.47 mg，11.70%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (dd, J = 1.5, 4.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.77 - 7.69 (m, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 5.53 - 5.14 (m, 2H), 4.57 - 4.40 (m, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 2H), 4.05 - 3.67 (m, 4H), 3.60 - 3.49 (m, 2H), 3.48 - 3.43 (m, 3H), 3.25 - 3.16 (m, 2H), 3.13 - 3.01 (m, 2H), 2.99 - 2.90 (m, 1H), 2.90 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.75 (m, 2H), 2.44 - 2.30 (m, 3H), 2.17 - 2.04 (m, 3H), 1.93 - 1.85 (m, 2H)。LCMS Rt = 0.961分鐘，m/z = 701.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間0.961分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 701.3 實例 65 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
如實例58製備起始物質。
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基吡咯啶-3-基)丙-2-炔-1-酮(16.99 mg，24.27%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.18 (m, 1H), 8.15 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 5.45 - 5.16 (m, 2H), 4.26 - 4.20 (m, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 1H), 4.00 - 3.85 (m, 1H), 3.79 - 3.63 (m, 2H), 3.48 (br s, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 4H), 3.19 - 3.13 (m, 2H), 3.10 (s, 1H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.60 - 2.45 (m, 3H), 2.40 - 2.34 (m, 2H), 2.33 (s, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.27 - 2.17 (m, 4H), 2.13 (br s, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.93 - 1.85 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.865分鐘，m/z = 699.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.014分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 699.3。 實例 66 ( 方法 7- 主方法 ) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
在-78℃下於氮氣下向2-乙炔基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，512.14 umol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，102.43 uL)。在-78℃下攪拌混合物0.5小時，接著添加二氧化碳。在-78℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(5 mL)淬滅反應混合物，接著添加硫酸氫鉀(5 mL)，且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-(1-(三級丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)丙炔酸(110 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.708分鐘，m/z = 785.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(14.08 mg，14.77%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (dd, J= 2.1, 7.6 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.15 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.61 (m, 3H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 5.49 - 5.25 (m, 2H), 4.38 - 4.24 (m, 2H), 4.18 - 4.05 (m, 1H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.82 - 3.62 (m, 2H), 3.54 - 3.38 (m, 5H), 3.36 - 3.16 (m, 3H), 3.09 - 3.03 (m, 1H), 3.00 - 2.92 (m, 1H), 2.43 - 2.26 (m, 4H), 2.24 - 2.07 (m, 3H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.84 - 1.76 (m, 1H)。LCMS Rt = 1.942分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)滯留時間1.942分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：10%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(10.78 mg，20.21%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.13 (m, 1H), 8.15 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.78 - 7.61 (m, 3H), 7.58 - 7.49 (m, 1H), 5.46 - 5.17 (m, 2H), 4.30 - 4.06 (m, 3H), 4.04 - 3.87 (m, 1H), 3.84 - 3.65 (m, 2H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.47 - 3.43 (m, 3H), 3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.29 - 3.12 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.85 - 2.71 (m, 1H), 2.50 - 2.43 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 4H), 2.26 - 2.18 (m, 2H), 2.13 (br s, 2H), 2.09 - 2.05 (m, 1H), 1.94 - 1.76 (m, 5H)。LCMS Rt = 3.054分鐘，m/z = 699.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.054分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 699.3。 實例 67 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在0℃下用飽和氯化銨水溶液(5 mL)淬滅反應混合物，接著添加硫酸氫鉀(10 mL)以調節PH ＜ 3且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。在真空中濃縮合併之有機層，得到呈黃色油狀之3-(1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-3-基)丙炔酸(280 mg，45.06%)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.842分鐘，m/z = 225.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 3-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經無水硫酸鈉乾燥合併之有機相，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(300 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.495分鐘，m/z = 771.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 3-( 氮雜環丁烷 -3- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮混合物。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(氮雜環丁烷-3-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-炔-1-酮(90 mg，34.47%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.589分鐘，m/z = 671.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：20%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔-1-酮(15.05 mg，21.11%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.13 (m, 1H), 8.15 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.78 - 7.61 (m, 3H), 7.58 - 7.49 (m, 1H), 5.46 - 5.17 (m, 2H), 4.30 - 4.06 (m, 3H), 4.04 - 3.87 (m, 1H), 3.84 - 3.65 (m, 2H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.47 - 3.43 (m, 3H), 3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.29 - 3.12 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.85 - 2.71 (m, 1H), 2.50 - 2.43 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 4H), 2.26 - 2.18 (m, 2H), 2.13 (br s, 2H), 2.09 - 2.05 (m, 1H), 1.94 - 1.76 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.916分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.916分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 68 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(340 mg，25.85%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.719分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(190 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.533分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 # 8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(2-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(190 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.548分鐘，m/z =760.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(6.64 mg，3.43%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.29 (s, 1H), 8.71 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 8.20 - 8.16 (m, 1H), 8.11 (dd, J= 5.7, 9.0 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 2H), 7.56 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.36 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 5.40 - 5.16 (m, 1H), 4.51 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.26 (m, 2H), 4.23 - 4.17 (m, 3H), 4.01 - 3.91 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.29 - 3.23 (m, 1H), 3.21 - 3.17 (m, 1H), 3.12 (br s, 1H), 2.97 - 2.88 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.29 - 2.18 (m, 1H), 2.17 - 2.12 (m, 1H), 2.11 - 2.04 (m, 1H), 1.94 - 1.79 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.159分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.159分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 69 ( 方法 9- 主方法 ) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #4 步驟 4類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲氧基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(143 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.592分鐘，m/z = 498.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
以與 方法 #4 步驟 5類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲氧基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(75 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.414分鐘，m/z = 398.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 4-( 苯甲氧基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
以與 方法 #4 步驟 6類似之方式來進行布赫瓦爾德反應(Buchwald reaction)。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈棕色油狀之4-(苯甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(36 g，73.31%)。LCMS Rt = 0.669分鐘，m/z = 558.2 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
以與 方法 #4 步驟 7類似之方式來進行Bn之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(44 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.561分鐘，m/z = 468.2 [M + H] +。 步驟 5 ：三氟甲烷磺酸 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基酯
以與 方法 #4 步驟 8類似之方式來進行磺醯化反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黑色油狀之三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(7 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.748分鐘，m/z = 600.1 [M + H] +。 步驟 6 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #4 步驟 9類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.5 g，65.92%)。LCMS Rt = 1.595分鐘，m/z = 650.3 [M + H] +。 步驟 7 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.5 g，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.600分鐘，m/z = 550.3 [M + H] +。 步驟 8 ： (2-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 # 8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(2-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(300 mg，45.60%)。LCMS Rt = 1.476分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。 步驟 9 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(52.22 mg，53.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.69 (dd, J = 1.4, 5.1 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 2.3, 8.0 Hz, 1H), 7.62 - 7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.22 (dd, J = 10.8, 15.4 Hz, 1H), 5.36 - 5.11 (m, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 1H), 4.31 - 4.15 (m, 2H), 4.15 - 3.81 (m, 5H), 3.77 - 3.66 (m, 2H), 3.65 - 3.48 (m, 2H), 3.33 - 3.18 (m, 1H), 3.15 (d, J = 2.5 Hz, 3H), 3.13 - 3.10 (m, 2H), 3.07 (br d, J = 5.4 Hz, 1H), 3.05 (br s, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.66 (m, 3H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 2.06 (br s, 1H), 2.00 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 1.92 - 1.74 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.996分鐘，m/z = 696.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.996分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3。 實例 70 ( 方法 9) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-( 嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-( 嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #9 步驟 9類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。
藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(32.03 mg，34.06%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.12 (m, 1H), 8.80 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.60 - 7.48 (m, 3H), 7.47 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.26 (dd, J = 10.6, 15.4 Hz, 1H), 5.37 - 5.10 (m, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 2H), 4.14 - 3.81 (m, 5H), 3.79 - 3.66 (m, 2H), 3.66 - 3.50 (m, 2H), 3.31 - 3.20 (m, 1H), 3.15 (d, J = 3.0 Hz, 3H), 3.13 (br d, J = 3.5 Hz, 2H), 3.07 - 3.02 (m, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.67 (br d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.15 - 2.09 (m, 2H), 2.07 (br s, 1H), 2.02 (br d, J = 3.3 Hz, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.138分鐘，m/z = 682.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.138分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 71 ( 方法 9) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #4 步驟 9類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.81 g，60.04%)。LCMS Rt = 1.652分鐘，m/z = 650.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.9 g，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.509分鐘，m/z = 550.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (2-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 # 9 步驟 8類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(2-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(1.9 g，96.28%)。LCMS Rt = 0.628分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 9 步驟 9類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(8.22 mg，5.59%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.73 - 8.66 (m, 1H), 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 - 7.38 (m, 5H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 5.38 - 5.11 (m, 1H), 4.93 - 4.73 (m, 1H), 4.31 - 4.15 (m, 1H), 4.11 - 3.91 (m, 3H), 3.87 - 3.62 (m, 3H), 3.60 - 3.40 (m, 2H), 3.24 - 2.97 (m, 8H), 2.94 - 2.79 (m, 1H), 2.71 - 2.59 (m, 4H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 2H), 1.93 - 1.67 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.238分鐘，m/z = 696.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間3.238分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3。 實例 72 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈棕色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(20.43 mg，42.47%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 - 9.14 (m, 1H), 8.79 - 8.63 (m, 1H), 8.25 - 7.95 (m, 2H), 7.81 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.59 (m, 2H), 7.58 - 7.44 (m, 3H), 7.36 (br dd, J= 4.8, 9.1 Hz, 1H), 5.52 - 5.09 (m, 2H), 4.26 - 4.20 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 4.09 - 3.98 (m, 1H), 3.96 - 3.73 (m, 2H), 3.70 - 3.54 (m, 1H), 3.52 - 3.40 (m, 3H), 3.24 - 3.00 (m, 3H), 2.96 - 2.80 (m, 1H), 2.75 - 2.62 (m, 3H), 2.50 - 2.31 (m, 2H), 2.14 - 2.06 (m, 2H), 1.86 (br s, 4H)。LCMS Rt = 2.922分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 +0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.922分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 73 ( 方法 6) ： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3S,4S)-3-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S,4S)-3-(苯甲基(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，66.3%)。LCMS Rt = 0.613分鐘，m/z = 308.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (3S,4S)-3- 氟 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行Bn基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈白色油狀之(3S,4S)-3-氟-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(550 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(25 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.770分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((3S,4S)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((3S,4S)-4-氟吡咯啶-3-基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(22.45 mg，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.876分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #6 步驟 13類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(5.3 mg，20.00%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.36 - 9.20 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.58 - 7.50 (m, 1H), 6.60 (dd, J = 10.4, 16.8 Hz, 1H), 6.30 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.75 (ddd, J = 1.9, 5.2, 10.3 Hz, 1H), 5.70 - 5.49 (m, 1H), 5.42 - 5.18 (m, 2H), 4.41 - 4.07 (m, 4H), 3.99 - 3.72 (m, 2H), 3.52 (dd, J = 3.9, 5.3 Hz, 3H), 3.29 - 3.06 (m, 3H), 3.06 - 2.87 (m, 1H), 2.22 - 2.05 (m, 4H), 1.93 - 1.82 (m, 2H)。LCMS Rt = 1.012分鐘，m/z = 636.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間1.012分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.2。 實例 74 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-[3-[[[7-(8-氯-1-萘基)-8-氟-2-[[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-胺基]甲基]氮雜環丁烷-1-基]-3-(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(26.37 mg，34.16%)。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.17 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.63 - 6.50 (m, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.27 - 6.17 (m, 1H), 5.71 - 5.61 (m, 1H), 5.42 - 5.22 (m, 2H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 3.92 (dd, J= 8.1, 12.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 1H), 3.62 (br s, 1H), 3.57 - 3.42 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.36 (br s, 1H), 3.34 - 3.16 (m, 2H), 2.99 (br d, J= 5.6 Hz, 1H), 2.40 - 2.25 (m, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (br s, 1H), 2.19 - 2.10 (m, 1H), 2.03 - 1.94 (m, 3H), 1.93 - 1.85 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.203分鐘，m/z = 716.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.203分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 716.2。 實例 75 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(30.39 mg，39.36%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.34 - 9.08 (m, 1H), 8.23 - 7.97 (m, 2H), 7.84 - 7.68 (m, 2H), 7.68 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.48 (m, 1H), 7.41 - 7.20 (m, 1H), 5.54 - 5.06 (m, 2H), 4.29 - 4.14 (m, 2H), 4.14 - 3.85 (m, 2H), 3.83 - 3.72 (m, 1H), 3.70 - 3.49 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.23 - 3.03 (m, 3H), 2.95 - 2.84 (m, 1H), 2.65 (d, J= 12.1 Hz, 3H), 2.43 (br d, J= 6.1 Hz, 1H), 2.34 (br d, J= 6.4 Hz, 1H), 2.23 - 2.17 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 2H), 1.95 - 1.78 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.222分鐘，m/z = 716.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.222分鐘，ESI+實驗值[M+H] =716.2。 實例 76 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((S)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((S)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-[3-[[[7-(8-氯-1-萘基)-8-氟-2-[[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-胺基]甲基]氮雜環丁烷-1-基]-3-[3-[(1S)-1-氟乙基]-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯-1-酮(22.7 mg，20.45%)。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.64 (br d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 5.94 - 5.76 (m, 1H), 5.40 - 5.19 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 4.31 (br s, 1H), 4.26 - 4.20 (m, 3H), 4.17 (br d, J = 1.4 Hz, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.32 - 3.27 (m, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 3.18 - 3.13 (m, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 1H), 2.27 - 2.22 (m, 2H), 2.09 (br d, J = 9.1 Hz, 2H), 1.94 - 1.87 (m, 3H), 1.79 - 1.71 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.116分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.116分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 77 ( 方法 5- 主方法 ) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((S)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙醯胺
向(2R)-2-羥基丙醯胺(10 g，112.24 mmol)於N,N-二甲基甲醛(250 mL)中之溶液中添加吡啶(35.51 g，448.97 mmol)及三級丁基-氯-二甲基-矽烷(33.83 g，224.48 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(200 mL)淬滅反應混合物，接著用乙酸乙酯(3 x 200 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，5-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(2R)-2-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基丙醯胺(16 g，70.1%)。LCMS Rt = 0.624分鐘，m/z = 203.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙烷硫醯胺
向(2R)-2-[三級丁基(二甲基)矽基]氧基丙醯胺(14.00 g，68.85 mmol)於2-甲基氧雜環戊烷(200 mL)中之溶液中添加勞森氏試劑(lawesson's reagent) (13.92 g，34.42 mmol)及碳酸鈉(8.03 g，75.73 mmol)。在80℃下攪拌混合物1小時。用水(200 mL)淬滅反應混合物，且用乙酸乙酯(3 x 200 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾，得到呈無色油狀之(R)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙烷硫醯胺(16 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.700分鐘，m/z = 219.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R,Z)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-N'- 羥基丙脒
向(R)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙烷硫醯胺(16 g，72.92 mmol)於乙醇(100 mL)及水(50 mL)中之溶液中添加三乙胺(22.14 g，218.76 mmol)、羥胺鹽酸鹽(10.13 g，145.84 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(200 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 200 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(R,Z)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-N'-羥基丙脒(16 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.473分鐘，m/z = 218.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R,E)-6- 亞胺基 -2,2,3,3,5- 五甲基 -9- 側氧基 -4,8- 二氧雜 -7- 氮雜 -3- 矽雜癸 -10- 烯 -12- 酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行偶合反應，將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之(R,E)-6-亞胺基-2,2,3,3,5-五甲基-9-側氧基-4,8-二氧雜-7-氮雜-3-矽雜癸-10-烯-12-酸乙酯(19 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.728分鐘，m/z = 344.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (R,E)-3-(3-(1-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應，藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化混合物，得到呈黃色油狀之(R,E)-3-(3-(1-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(9 g，52.76%)。LCMS Rt = 1.208分鐘，m/z = 326.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (R,E)-3-(3-(1- 羥乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 2 步驟 10類似之方式來進行TBS基團之去保護，在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(R,E)-3-(3-(1-羥乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(3.8 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.470分鐘，m/z = 212.1 [M + H] +。 步驟 7 ： (S,E)-3-(3-(1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
在-78℃下於氮氣氛圍下向(E)-3-[3-[(1R)-1-羥乙基]-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸乙酯(1 g，4.71 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三氟化二乙基胺基硫(1.14 g，7.07 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(50 mL)淬滅反應混合物，用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之(S,E)-3-(3-(1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(950 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.584分鐘，m/z = 214.1 [M + H] +。 步驟 8 ： (S,E)-3-(3-(1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 # 1 步驟 4類似之方式來進行水解反應，將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(S,E)-3-(3-(1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(600 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.163分鐘，m/z = 186.0 [M + H] +。 步驟 9 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((S)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((S)-1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(14.91 mg，13.53%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.16 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 5.99 - 5.74 (m, 1H), 5.57 - 5.21 (m, 2H), 4.41 - 4.07 (m, 3H), 4.06 - 3.89 (m, 1H), 3.85 - 3.53 (m, 2H), 3.51 - 3.47 (m, 3H), 3.46 - 3.07 (m, 3H), 3.07 - 2.92 (m, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 2H), 2.26 - 2.22 (m, 2H), 2.13 (br s, 1H), 1.81 - 1.71 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.156分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.156分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 78 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(11.22 mg，18.88%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 8.11 - 8.06 (m, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 1H), 7.24 - 7.13 (m, 1H), 5.35 - 5.18 (m, 1H), 4.50 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.27 - 4.12 (m, 5H), 3.97 (dt, J = 6.0, 9.7 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 3H), 2.94 - 2.87 (m, 1H), 2.20 - 2.01 (m, 5H), 1.90 - 1.85 (m, 2H), 1.59 (s, 6H)。LCMS Rt = 0.992分鐘，m/z = 762.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間0.992分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 762.3。 實例 79 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-4-嗎啉代丁-2-烯-1-酮(4.92 mg，24.06%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.13 (dd, J= 2.8, 6.8 Hz, 1H), 8.09 - 8.03 (m, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 2H), 7.51 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 6.64 (td, J= 6.2, 15.4 Hz, 1H), 6.10 (br d, J= 15.5 Hz, 1H), 5.35 - 5.18 (m, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.21 - 4.05 (m, 6H), 3.83 (br dd, J= 8.8, 14.8 Hz, 1H), 3.62 - 3.59 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.21 - 3.14 (m, 3H), 3.11 - 3.05 (m, 3H), 2.95 - 2.86 (m, 1H), 2.38 (br d, J= 4.0 Hz, 4H), 2.10 (br s, 2H), 2.04 (br d, J= 7.8 Hz, 1H), 1.87 (br dd, J= 6.4, 11.3 Hz, 3H), 1.79 - 1.74 (m, 1H)。LCMS Rt =2.828分鐘，m/z = 735.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.828分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 735.3。 實例 80 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲硫基 )-7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 5類似之方式來進行取代反應。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(3.4 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.572分鐘，m/z = 462.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 6類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.2 g，26.91%)。LCMS Rt = 0.640分鐘，m/z = 606.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 4- 氯 -7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之4-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(684 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.574分鐘，m/z = 518.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(270 mg，21.49%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.618分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.469分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-4-(((Z)-(1- 胺基 -2- 甲基亞丙基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮混合物，得到(E)-4-(((Z)-(1-胺基-2-甲基亞丙基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(15 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 228.1 [M + H] +。 步驟 7 ： (E)-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。在真空中濃縮混合物，得到(E)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(15 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.740分鐘，m/z = 210.1 [M + H] +。 步驟 8 ： (E)-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮混合物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(8 g，92.32%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 11.85 - 11.36 (m, 1H), 7.53 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.10 (s, 1H), 1.30 (d, J = 7.0 Hz, 6H)。 步驟 9 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(37.32 mg，34.00%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.19 (m, 1H), 8.18 - 8.06 (m, 2H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.48 - 7.34 (m, 2H), 5.52 - 5.22 (m, 2H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.10 - 3.97 (m, 1H), 3.96 - 3.74 (m, 2H), 3.70 - 3.52 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.40 - 3.25 (m, 1H), 3.19 - 3.08 (m, 1H), 3.06 - 2.99 (m, 1H), 2.95 - 2.78 (m, 1H), 2.63 (br dd, J= 5.9, 10.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 3H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 3H), 1.78 - 1.69 (m, 1H), 1.35 (dd, J= 7.0, 8.8 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.353分鐘，m/z = 746.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.353分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 746.3。 實例 81 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(27.41 mg，28.51%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.04 (m, 1H), 8.13 - 7.96 (m, 2H), 7.67 - 7.57 (m, 2H), 7.46 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 6.60 - 6.42 (m, 1H), 6.23 - 6.11 (m, 1H), 5.68 - 5.56 (m, 1H), 5.39 - 5.16 (m, 2H), 4.24 - 4.12 (m, 2H), 4.06 - 3.72 (m, 2H), 3.65 - 3.40 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.32 - 3.20 (m, 1H), 2.94 (td, J= 6.1, 10.5 Hz, 1H), 2.87 - 2.72 (m, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 1H), 2.37 - 2.19 (m, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.86 - 1.75 (m, 3H), 1.69 - 1.61 (m, 1H)。LCMS Rt =2.128分鐘，m/z = 636.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.128分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.2。 實例 82 ( 方法 3- 主方法 ) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3-( 二氟甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2,4- 二溴 -5- 氯萘 -1- 胺
在0℃下向5-氯萘-1-胺(20 g，112.59 mmol)於氯仿(250 mL)中之溶液中添加溴(53.98 g，337.78 mmol，17.41 mL)。在50℃下攪拌混合物12小時。用飽和碳酸氫鈉(500 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(50 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈棕色固體狀之2,4-二溴-5-氯萘-1-胺(40 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.829分鐘，m/z = 334.9 [M + H] +。 步驟 2 ： 5- 溴 -6- 氯萘并 [1,2-d][1,2,3] 噁二唑
在0℃下向2,4-二溴-5-氯-萘-1-胺(26 g，77.51 mmol)於乙酸(300 mL)中之溶液中添加丙酸鈉(30 mL)及亞硝酸鈉(8.02 g，116.27 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用水(200 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(50 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈棕色固體狀之5-溴-6-氯萘并[1,2-d][1,2,3]噁二唑(14 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 - 7.48 (m, 3H), 7.31 - 7.25 (m, 1H)。LCMS Rt = 0.707分鐘，m/z = 283.9 [M + H] +。 步驟 3 ： 4- 溴 -5- 氯萘 -2- 醇
在0℃下向5-溴-6-氯萘并[1,2-d][1,2,3]噁二唑(12 g，42.33 mmol)於乙醇(80 mL)及四氫呋喃(80 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(2.67 g，70.58 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用鹽酸(1M，50 mL)淬滅混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黑色油狀之4-溴-5-氯萘-2-醇(2.7 g，24.77%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.50 (dd, J = 1.2, 7.5 Hz, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.17 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.24 (br s, 1H)。LCMS Rt = 0.792分鐘，m/z = 257.9 [M + H] +。 步驟 4 ： 1- 溴 -8- 氯 -3-( 二氟甲氧基 ) 萘
向4-溴-5-氯-萘-2-醇(500 mg，1.94 mmol)於N,N-二甲基甲醛(10 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(322.03 mg，2.33 mmol)及2-氯-2,2-二氟-乙酸乙酯(369.38 mg，2.33 mmol)。用水(2 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之1-溴-8-氯-3-(二氟甲氧基)萘(600 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 5 ： (R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-( 三丁基錫烷基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將三丁基(三丁基錫烷基)錫烷(4.73 g，8.16 mmol)、(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(57.22 mg，204.05 umol)、氯化鋰(432.48 mg，10.20 mmol)及(1E,4E)-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮;鈀(373.70 mg，408.10 umol)於二噁烷(200 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，接著在110℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，2%-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(三丁基錫烷基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(3.3 g，74%)。LCMS Rt = 0.757分鐘，m/z = 794.4 [M + H] +。 步驟 6 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -3-( 二氟甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(三丁基錫烷基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(400 mg，504.02 umol)、1-溴-8-氯-3-(二氟甲氧基)萘(309.99 mg，1.01 mmol)及鈀;三-三級丁基磷烷(128.79 mg，252.01 umol)於二噁烷(2 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，接著在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。將反應混合物在真空中濃縮至乾。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯-3-(二氟甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，23.47%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.947分鐘，m/z = 730.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 7-(8- 氯 -3-( 二氟甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-3-(二氟甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.582分鐘，m/z = 630.2 [M + H] +。 步驟 8 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3-( 二氟甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-3-(二氟甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(7.93 mg，16.73%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.01 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.66 - 7.52 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 1H), 7.00 (t, J = 73.7 Hz, 1H), 6.69 - 6.52 (m, 1H), 6.26 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.69 (br t, J = 8.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.18 (m, 2H), 4.27 - 4.20 (m, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 4.03 (br dd, J = 8.4, 48.0 Hz, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.96 - 2.86 (m, 1H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.31 (br dd, J = 8.3, 14.5 Hz, 1H), 2.12 (br s, 1H), 2.07 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.93 - 1.80 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.069分鐘，m/z = 684.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.069分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 684.2。 實例 83 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((R)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((R)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-[3-[[[7-(8-氯-1-萘基)-8-氟-2-[[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-胺基]甲基]氮雜環丁烷-1-基]-3-[3-[(1R)-1-氟乙基]-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯-1-酮(29.28 mg，26.30%)。LCMS Rt = 3.119分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.119分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 84 ( 方法 5) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((R)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙醯胺
以與 方法 #5 步驟 1類似之方式來進行TBS保護反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，7-20%乙酸乙酯/石油醚)純化混合物，得到呈棕色油狀之(S)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙醯胺(7.6 g，73.99%)。LCMS Rt = 0.626分鐘，m/z = 203.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (S)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 丙烷硫醯胺
以與 方法 #5 步驟 2類似之方式來形成硫醯胺。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之(S)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)丙烷硫醯胺(7.9 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.691分鐘，m/z = 219.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (S)-2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-N- 羥基丙脒
以與 方法 #5 步驟 3類似之方式來形成羥基脒。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈灰色油狀之(S)-2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-N-羥基丙脒(6.4 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.604分鐘，m/z = 218.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (S,E)-6- 亞胺基 -2,2,3,3,5- 五甲基 -9- 側氧基 -4,8- 二氧雜 -7- 氮雜 -3- 矽雜癸 -10- 烯 -12- 酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 4類似之方式來進行偶合反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之(S,E)-6-亞胺基-2,2,3,3,5-五甲基-9-側氧基-4,8-二氧雜-7-氮雜-3-矽雜癸-10-烯-12-酸乙酯(10.6 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.732分鐘，m/z = 344.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (S,E)-3-(3-(1-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 5類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，2-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(S,E)-3-(3-(1-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(3.4 g，34.17%)。LCMS Rt = 0.817分鐘，m/z = 326.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (S,E)-3-(3-(1- 羥乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 6類似之方式來進行TBS基團之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之(S,E)-3-(3-(1-羥乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.467分鐘，m/z = 212.1 [M + H] +。 步驟 7 ： (R,E)-3-(3-(1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 7類似之方式來進行取代以引入F。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之(R,E)-3-(3-(1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.08 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.588分鐘，m/z = 214.1 [M + H] +。 步驟 8 ： (R,E)-3-(3-(1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #5 步驟 8類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮混合物，得到呈白色固體狀之(R,E)-3-(3-(1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(700 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 11.62 - 11.01 (m, 1H), 7.55 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 5.87 - 5.53 (m, 1H), 1.85 - 1.60 (m, 3H)。 步驟 9 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((R)-1- 氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #5 步驟 9類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((R)-1-氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(12.57 mg，11.43%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 - 7.68 (m, 1H), 7.64 (br d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.59 - 7.51 (m, 2H), 7.47 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.97 - 5.73 (m, 1H), 5.50 - 5.17 (m, 2H), 4.31 - 4.11 (m, 3H), 4.10 - 3.98 (m, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 2H), 3.47 (s, 3H), 3.25 - 3.03 (m, 3H), 3.01 - 2.88 (m, 1H), 2.48 - 2.32 (m, 2H), 2.23 (br d, J = 4.5 Hz, 2H), 2.14 (br d, J = 2.4 Hz, 2H), 2.10 (br s, 1H), 1.85 - 1.63 (m, 4H)。LCMS Rt = 3.165分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.165分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 85 ( 方法 1) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 6類似之方式來進行鈴木反應。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層，在真空中濃縮且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色油狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(1 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.759分鐘，m/z = 588.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 4- 氯 -7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之4-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(510 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.678分鐘，m/z = 500.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：15%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(30 mg，8.87%，甲酸鹽)。LCMS Rt = 1.734分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(25 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.633分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(4.93 mg，15.28%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.19 (m, 1H), 8.20 - 8.15 (m, 1H), 8.10 (dd, J = 5.7, 9.0 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 2H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.50 - 7.36 (m, 2H), 5.50 - 5.36 (m, 1H), 4.33 - 4.14 (m, 3H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.98 - 3.74 (m, 2H), 3.70 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.21 - 3.09 (m, 1H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.67 - 2.58 (m, 2H), 2.52 - 2.41 (m, 1H), 2.41 - 2.32 (m, 1H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 1.91 - 1.79 (m, 4H), 1.71 - 1.61 (m, 2H), 1.36 (dd, J = 7.0, 9.2 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.993分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)滯留時間2.993分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 86 ( 方法 2) ： (E)-1-(3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 3 ： 3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(110 mg，25.65%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.916分鐘，m/z = 690.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 4-(4-(( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )( 甲基 ) 胺基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 ) 萘 -2- 醇
以與 方法 #2 步驟 6類似之方式來進行去Boc及MOM保護反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：5%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-(4-((氮雜環丁烷-3-基甲基)(甲基)胺基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)萘-2-醇(70 mg，73.19%產率，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.728分鐘，m/z = 546.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-4- 氯 -4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
在20℃下將(E)-4-乙氧基-4-側氧基-丁-2-烯酸(13 g，90.20 mmol)、乙二醯二氯(12.59 g，99.22 mmol)及N,N-二甲基甲醛(659.27 mg，9.02 mmol)於二氯甲烷(80 mL)中之混合物攪拌0.5小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-4-氯-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(14 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 6 ： (E)-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。在真空中濃縮粗產物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈棕色油狀之(E)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(4.9 g，85%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.46 - 7.34, (m, 1 H), 6.98 - 6.88 (m, 1 H), 4.24 (q, J=7.13 Hz, 2 H), 2.38 (s, 3 H), 1.32 - 1.26 (m, 3 H)。LCMS Rt = 0.383分鐘，m/z = 182.1 [M + H] +。 步驟 7 ： (E)-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 # 1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈無色油狀之(E)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(860 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.34 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H)。LCMS Rt = 0.200分鐘，m/z = 154.0 [M + H] +。 步驟 8 ： (E)-1-(3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(4.14 mg，15.18%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.35 (s, 1H), 7.86 - 7.82 (m, 1H), 7.63 (br d, J= 9.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 4H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 5.40 - 5.19 (m, 1H), 4.54 - 4.45 (m, 1H), 4.34 - 4.30 (m, 1H), 4.27 (br d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.19 (m, 3H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 3.97 (dd, J= 5.8, 10.6 Hz, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.27 - 3.19 (m, 3H), 3.17 - 3.12 (m, 1H), 3.00 - 2.90 (m, 1H), 2.42 - 2.39 (m, 3H), 2.30 - 2.25 (m, 2H), 2.09 (br dd, J= 2.3, 6.8 Hz, 2H), 1.80 (dt, J= 1.9, 4.7 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.776分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.776分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 87 ( 方法 6) ： 2-((2R,4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈 步驟 1 ： (2R,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-1-( 三級丁氧基羰基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-1-(三級丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸。LCMS Rt = 0.533分鐘，m/z = 230.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (2R,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-2-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 2類似之方式來進行還原反應。在0℃下用十水合硫酸鈉(1 g)淬滅混合物，且經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(2R,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，84.62%)。LCMS Rt = 0.443分鐘，m/z = 320.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2R,4R)-2-( 羥甲基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行Bn基團之去保護，將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之(2R,4R)-2-(羥甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.9 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 4 ： (2R,4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2R,4R)-2-(羥甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.4 g，10.42 mmol)於四氫呋喃(20 mL)及水(20 mL)中之溶液中添加碳酸鈉(3.31 g，31.26 mmol)及氯甲酸苯甲酯(3.56 g，20.84 mmol)。在20℃下攪拌混合物12小時。用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取反應混合物。用鹽水(30 mL)洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮至乾。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.4 g，36.86%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.33 - 7.23 (m, 5H), 5.16 - 5.02 (m, 2H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.73 - 3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.49 (m, 1H), 3.40 - 3.29 (m, 2H), 3.12 - 3.01 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 3H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.62 - 1.58 (m, 1H), 1.42 - 1.33 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.636分鐘，m/z = 364.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (2R,4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2-((( 甲基磺醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 3類似之方式來進行甲磺醯化反應，在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(2R,4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.781分鐘，m/z = 442.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (2R,4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2-( 氰基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 4類似之方式來進行取代以引入腈基，在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(2R,4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-(氰基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.4 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 7 ： (2R,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 5類似之方式來進行腈基之水解，藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 (250*70mm，10 um)；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：26%-56%，20分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(950 mg，64.73%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.37 - 7.22 (m, 5H), 6.31 - 5.94 (m, 2H), 5.13 - 4.95 (m, 2H), 4.65 - 4.47 (m, 1H), 4.02 - 3.89 (m, 1H), 3.73 - 3.56 (m, 1H), 3.11 - 3.00 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.61 (br s, 2H), 2.30 - 2.06 (m, 2H), 1.46 - 1.32 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.610分鐘，m/z = 391.2 [M + H] +。 步驟 8 ： (2R,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行Cbz基團之去保護，將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈無色油狀之(2R,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(310 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 9 ： (2R,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：5%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.579分鐘，m/z = 721.3 [M + H] +。 步驟 10 ： (2R,4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2-( 氰基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 11類似之方式來進行脫水反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(2R,4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-(氰基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(68 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.618分鐘，m/z = 703.3 [M + H] +。 步驟 11 ： 2-((2R,4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之2-((2R,4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-2-基)乙腈(58 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.475分鐘，m/z = 603.2 [M + H] +。 步驟 12 ： 2-((2R,4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈
以與 方法 # 6 步驟 13類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之2-((2R,4R)-1-丙烯醯基-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-2-基)乙腈(9.07 mg，13.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 - 9.17 (m, 1H), 8.23 - 8.12 (m, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 2H), 7.59 - 7.52 (m, 1H), 6.67 - 6.55 (m, 1H), 6.36 - 6.27 (m, 1H), 5.80 - 5.73 (m, 1H), 5.39 - 5.19 (m, 2H), 4.41 - 4.31 (m, 1H), 4.25 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 3.81 - 3.66 (m, 1H), 3.55 - 3.44 (m, 3H), 3.32 - 3.21 (m, 1H), 3.19 - 3.14 (m, 2H), 3.10 - 3.07 (m, 1H), 3.05 - 2.97 (m, 1H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.75 - 2.66 (m, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 4H), 2.15 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.93 - 1.86 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.786分鐘，m/z = 657.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.786分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 657.2。 實例 88 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(6.69 mg，6.09%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (t, J= 1.9 Hz, 1H), 8.19 - 8.14 (m, 1H), 8.10 (dd, J= 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.73 - 7.67 (m, 2H), 7.58 - 7.38 (m, 3H), 5.45 - 5.19 (m, 2H), 4.28 - 4.23 (m, 1H), 4.21 - 4.16 (m, 1H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.87 - 3.75 (m, 1H), 3.70 - 3.52 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.21 - 3.14 (m, 2H), 3.10 (br d, J= 2.5 Hz, 1H), 2.96 - 2.88 (m, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.11 - 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.83 (m, 4H), 1.60 (d, J= 7.6 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.974分鐘，m/z = 762.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.974分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 762.3。 實例 89 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗物質，得到呈棕色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-4-嗎啉代丁-2-烯-1-酮(24.21 mg，25.80%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (dd, J= 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.65 - 7.62 (m, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 6.67 (td, J= 6.2, 15.4 Hz, 1H), 6.14 (br d, J= 15.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.27 (m, 1H), 4.39 - 4.26 (m, 3H), 4.19 (br d, J= 7.1 Hz, 2H), 4.15 - 4.05 (m, 2H), 3.95 - 3.81 (m, 1H), 3.69 - 3.62 (m, 4H), 3.60 (s, 3H), 3.41 (br s, 1H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.20 (br dd, J= 6.3, 13.5 Hz, 1H), 3.12 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 3.08 - 2.96 (m, 1H), 2.44 - 2.34 (m, 4H), 2.30 - 2.20 (m, 2H), 2.16 (br d, J= 8.8 Hz, 1H), 2.05 - 1.87 (m, 4H)。LCMS Rt =1.903分鐘，m/z = 717.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.903分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 717.3。 實例 90 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-嗎啉代丁-2-烯-1-酮(24.21 mg，25.80%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 6.76 - 6.66 (m, 1H), 6.33 (s, 1H), 5.45 - 5.16 (m, 2H), 4.23 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 3.99 (m, 2H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 3.86 - 3.70 (m, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 4H), 3.58 - 3.48 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.30 - 3.06 (m, 4H), 3.05 (s, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.40 (br s, 4H), 2.36 - 2.23 (m, 2H), 2.17 (br s, 2H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.86 (br dd, J= 9.6, 19.3 Hz, 2H)。LCMS Rt =2.679分鐘，m/z = 717.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)滯留時間2.679分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 717.3。 實例 91 ( 方法 1) ： 1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-4-嗎啉代丁-2-炔-1-酮(33.47 mg，9.99%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 (s, 1H), 8.15 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.64 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 7.56 - 7.52 (m, 1H), 5.38 - 5.19 (m, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.21 - 4.15 (m, 2H), 4.13 - 4.02 (m, 3H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.68 (br d, J= 4.5 Hz, 1H), 3.64 (br d, J= 4.8 Hz, 2H), 3.61 - 3.59 (m, 3H), 3.47 (s, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 2H), 3.19 - 3.14 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.95 - 2.88 (m, 1H), 2.54 - 2.47 (m, 4H), 2.14 - 2.12 (m, 2H), 2.06 (br s, 2H), 1.92 - 1.87 (m, 2H), 1.83 - 1.78 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.847分鐘，m/z = 715.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.847分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3。 實例 92 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-嗎啉代丁-2-炔-1-酮(3.74 mg，3.55%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 8.15 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.64 (br d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 5.45 - 5.21 (m, 2H), 4.29 - 4.09 (m, 3H), 4.08 - 3.79 (m, 2H), 3.78 - 3.72 (m, 1H), 3.70 - 3.66 (m, 2H), 3.65 - 3.59 (m, 2H), 3.53 (s, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.48 - 3.44 (m, 3H), 3.23 - 3.14 (m, 2H), 3.11 (br s, 1H), 2.98 - 2.90 (m, 1H), 2.55 (td, J= 4.7, 15.5 Hz, 4H), 2.43 - 2.34 (m, 2H), 2.11 - 2.06 (m, 2H), 2.03 (s, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.897分鐘，m/z = 715.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.897分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3 實例 93 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2R)-2-[ 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ] 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 1類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-20%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之(2R)-2-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(10 g，86.71%)。LCMS Rt = 0.501分鐘，m/z = 244.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (2R)-2- 甲醯基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 2類似之方式來進行還原反應。在真空中濃縮混合物，得到呈無色油狀之(2R)-2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應，在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)。LCMS Rt = 0.611分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(130 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.758分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(5.45 mg，4.62%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 3.4, 6.2 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 5.8, 9.1 Hz, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 5.7, 15.1 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 11.3, 14.6 Hz, 1H), 5.46 - 5.19 (m, 2H), 4.27 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 2H), 4.02 - 3.77 (m, 2H), 3.72 - 3.63 (m, 1H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 3.47 - 3.43 (m, 3H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 3.22 - 3.11 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.86 - 2.77 (m, 1H), 2.46 - 2.37 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 1H), 2.26 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 2.20 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 2.13 (br s, 1H), 2.11 - 2.04 (m, 1H), 1.95 - 1.81 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.938分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.938分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 94 ( 方法 8- 主方法 ) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2S)-2-[ 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ] 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2S)-1-三級丁氧基羰基氮雜環丁烷-2-甲酸(2 g，9.94 mmol)及N-甲氧基甲胺;鹽酸鹽(1.16 g，11.93 mmol)於N,N-二甲基甲醛(20 mL)中之溶液中添加4-甲基嗎啉(1.21 g，11.93 mmol)、1-羥基苯并三唑(1.61 g，11.93 mmol)及3-(乙基亞胺基亞甲基胺基)-N,N-二甲基-丙-1-胺;鹽酸鹽(2.29 g，11.93 mmol)。在20℃下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮，藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-35%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之(2S)-2-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(2.1 g，85.62%)。 步驟 2 ： (2S)-2- 甲醯基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2S)-2-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，409.36 umol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加二異丁基鋁烷(1 M，818.71 uL)。在20℃下於氮氣下攪拌混合物0.5小時。用水(10 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2S)-2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(75 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (2-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
向7-(8-氯-7-氟-1-萘基)-8-氟-2-[[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]-N-甲基-N-[(3R)-吡咯啶-3-基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(1.8 g，2.58 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(1.33 g，10.33 mmol)、2-二乙氧基磷醯基乙酸(1.01 g，5.16 mmol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2λ5,4λ5,6λ5-三氧雜三膦烷2,4,6-三氧化物(3.29 g，5.16 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 (250*70mm，10 um)；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：22%-52%，20分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(1.2 g，53.10%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.794分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (S)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向1-[(3R)-3-[[7-(8-氯-7-氟-1-萘基)-8-氟-2-[[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-胺基]吡咯啶-1-基]-2-二乙氧基磷醯基-乙酮(120 mg，157.65 umol)於乙腈(2 mL)中之溶液中添加氯化鋰(13.37 mg，315.30 umol)及N,N-二異丙基乙胺(61.13 mg，472.96 umol)、(2S)-2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(87.60 mg，472.96 umol)。在25℃下攪拌混合物1小時，用水(10 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之(S)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(134 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.613分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(110 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.590分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(12.63 mg，12.57%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 8.15 - 8.09 (m, 1H), 8.05 (dd, J= 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.51 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 6.76 (ddd, J= 2.4, 5.6, 15.1 Hz, 1H), 6.41 - 6.32 (m, 1H), 5.42 - 5.15 (m, 2H), 4.22 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 4.08 (m, 1H), 4.05 (br d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.98 - 3.75 (m, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 1H), 3.55 - 3.48 (m, 1H), 3.44 - 3.40 (m, 3H), 3.32 - 3.22 (m, 1H), 3.16 - 3.09 (m, 2H), 3.05 (s, 1H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 2.32 - 2.26 (m, 1H), 2.23 (d, J= 9.6 Hz, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.09 (br d, J= 2.4 Hz, 1H), 2.04 (br s, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.951分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.951分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 95 ( 方法 1- 主方法 ) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (Z)-N'- 羥基 -3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 甲脒
向3-甲基氧雜環丁烷-3-甲腈(1 g，10.30 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液中添加羥胺鹽酸鹽(1.07 g，15.45 mmol)及碳酸鉀(2.85 g，20.59 mmol)，在80℃下攪拌混合物2小時。將混合物在真空中濃縮至乾。用水(5 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(Z)-N'-羥基-3-甲基氧雜環丁烷-3-甲脒(510 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.64 - 9.45 (m, 1H), 8.30 - 8.09 (m, 2H), 4.80 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.63 - 1.57 (m, 3H)。 步驟 2 ： (E)-4-(((Z)-( 胺基 (3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 基 ) 亞甲基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
在0℃下向反丁烯二酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯乙酯(891.44 mg，3.70 mmol)於二噁烷(10 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.18 g，8.53 mmol)及(Z)-N'-羥基-3-甲基氧雜環丁烷-3-甲脒(370 mg，2.84 mmol)，在25℃下攪拌混合物3小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(2 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈淡黃色油狀之(E)-4-(((Z)-(胺基(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(330 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.629分鐘，m/z = 256.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(3-(3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
向(E)-4-(((Z)-(胺基(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(330 mg，1.29 mmol)於甲苯(3 mL)中之溶液中添加吡啶(152.80 mg，1.93 mmol)，在110℃下攪拌混合物12小時。用水(5 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之(E)-3-(3-(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(250 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.758分鐘，m/z = 238.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(3-(3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
在0℃下向(E)-3-(3-(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(100 mg，419.75 umol)於四氫呋喃(1 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(2 M，419.75 uL)，在0℃下攪拌混合物0.5小時。在0℃下用飽和檸檬酸淬滅混合物以調節pH = 4。用水(3 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(E)-3-[3-(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸(160 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 5 ： 4-( 苯甲硫基 )-7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
向4-苯甲基硫烷基-2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶(30 g，88.18 mmol)於二噁烷(500 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(34.19 g，264.55 mmol，46.08 mL)及((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(21.06 g，132.27 mmol)。在80℃下攪拌混合物1小時。用水(200 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用石油醚:乙酸乙酯之(10:1)混合物(110 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈棕色固體狀之4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(25 g，61%)。LCMS Rt = 0.577分鐘，m/z = 462.1 [M + H] +。 步驟 6 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
將4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(21 g，45.36 mmol)、(8-氯-1-萘基)硼酸(18.73 g，90.72 mmol)、[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(3.57 g，4.54 mmol)及磷酸鉀(28.89 g，136.09 mmol)於二噁烷(300 mL)及水(100 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。接著在60℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水(100 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20%-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(14 g，52.39%)。LCMS Rt = 0.616分鐘，m/z = 588.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 4- 氯 -7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
向4-(苯甲硫基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(0.3 g，509.25 umol)於乙腈(2 mL)中之溶液中添加水(917.68 ug，50.93 umol)及乙酸(3.06 mg，50.93 umol)。在0℃下將1,3-二氯-5,5-二甲基-咪唑啶-2,4-二酮(301.00 mg，1.53 mmol)於乙腈(1 mL)中之溶液添加至上述溶液中，接著在0℃下攪拌1小時。用飽和亞硫酸鈉(5 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(255 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.568分鐘，m/z = 500.1 [M + H] +。 步驟 8 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.5 g，2.99 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(1.16 g，8.98 mmol)及(3R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.50 g，7.48 mmol)。在-20℃下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(920 mg，46.23%)。LCMS Rt = 0.651分鐘，m/z = 664.3 [M + H] + 步驟 9 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
在25℃下將(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，105.24 umol)於含鹽酸之乙酸乙酯(4 M，1 mL)中之混合物攪拌1小時。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(63 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.647分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 10 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(3- 甲基氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在0℃下向7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(63 mg，104.74 umol，鹽酸鹽)於N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(67.68 mg，523.68 umol)、(E)-3-[3-(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸(33.02 mg，157.10 umol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷2,4,6-三氧化物(99.97 mg，157.10 umol)，在25℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3-甲基氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(6.99 mg，8.81%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.55 - 7.37 (m, 3H), 5.47 - 5.16 (m, 2H), 4.98 - 4.88 (m, 2H), 4.57 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.26 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 3.71 (m, 3H), 3.68 - 3.50 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.27 - 3.06 (m, 3H), 2.96 - 2.85 (m, 1H), 2.49 - 2.20 (m, 4H), 1.88 (br s, 3H), 1.76 (d, J = 7.5 Hz, 4H)。LCMS Rt = 2.873分鐘，m/z = 756.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.873分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 756.3。 實例 96 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-嗎啉代丁-2-烯-1-酮(32.88 mg，38.64%)。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.20 (m, 1H), 8.19 - 8.14 (m, 1H), 8.09 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.73 - 7.67 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.80 - 6.71 (m, 1H), 6.48 - 6.38 (m, 1H), 5.44 - 5.18 (m, 2H), 4.26 - 4.20 (m, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 3.93 (m, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 1H), 3.70 - 3.63 (m, 5H), 3.62 - 3.48 (m, 1H), 3.46 - 3.44 (m, 3H), 3.19 - 3.11 (m, 4H), 3.08 (s, 1H), 2.95 - 2.88 (m, 1H), 2.43 (br d, J = 1.9 Hz, 4H), 2.35 - 2.28 (m, 1H), 2.22 - 2.18 (m, 1H), 2.13 (br d, J = 2.5 Hz, 2H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.879分鐘，m/z = 735.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間1.879分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 735.3。 實例 97 ( 方法 3) ： 1-(3-(((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-[[(2,7- 二氯 -8- 氟 - 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )- 甲基 - 胺基 ] 甲基 ] 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 3類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色固體狀之3-[[(2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-甲基-胺基]甲基]氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(7 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.826分鐘，m/z = 415.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 3-(((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之3-(((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(2 g，44.12%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.87 (s, 1H), 5.41 - 5.18 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 2H), 4.08 (q, J= 8.3 Hz, 4H), 3.81 - 3.74 (m, 2H), 3.53 - 3.48 (m, 3H), 3.35 - 3.17 (m, 3H), 3.09 - 2.95 (m, 2H), 2.29 - 2.08 (m, 3H), 2.00 - 1.84 (m, 3H), 1.45 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.645分鐘，m/z = 538.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-( 三丁基錫烷基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #3 步驟 5類似之方式來形成錫試劑。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(三丁基錫烷基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(2.5 g，84.90%)。LCMS Rt = 2.437分鐘，m/z = 794.4 [M + H] +。 步驟 4 ： 3-(((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #3 步驟 6類似之方式來進行施蒂勒反應(Stille reaction)。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物3小時。用水(50 mL)淬滅混合物，用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。在真空中濃縮有機層且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，10分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之3-(((7-(8-氯-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(400 mg，72%)。LCMS Rt = 0.686分鐘，m/z = 680.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 4-(4-(( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )( 甲基 ) 胺基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 )-5- 氯萘 -2- 醇
以與 方法 #3 步驟 7類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到4-(4-((氮雜環丁烷-3-基甲基)(甲基)胺基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-氯萘-2-醇(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.549分鐘，m/z = 580.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-(3-(((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #3 步驟 8類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色非晶形固體狀之1-(3-(((7-(8-氯-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(9.71 mg，8.22%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.43 - 7.36 (m, 3H), 7.18 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.34 - 6.24 (m, 1H), 6.19 - 6.12 (m, 1H), 5.62 (dd, J= 1.5, 9.9 Hz, 1H), 5.35 - 5.16 (m, 1H), 4.34 (br t, J= 8.4 Hz, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 6H), 3.85 (br d, J= 5.3 Hz, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.23 - 3.03 (m, 5H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 3H), 1.86 (br d, J= 3.0 Hz, 3H)。LCMS Rt = 0.948分鐘，m/z = 634.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間0.948分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 634.2。 實例 98 ( 方法 3) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #3 步驟 8類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：20%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈白色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(4.27 mg，5.91%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 7.82 - 7.77 (m, 1H), 7.59 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.12 (m, 2H), 5.35 - 5.11 (m, 1H), 4.46 (br t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.33 - 3.95 (m, 6H), 3.95 - 3.89 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.12 (br s, 3H), 3.04 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.41 - 2.35 (m, 3H), 2.02 (br d, J = 8.3 Hz, 2H), 1.92 - 1.72 (m, 4H)。LCMS Rt =2.823分鐘，m/z =716.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.823分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 716.2 實例 99 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲氧基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
以與 方法 #4 步驟 6類似之方式來進行布赫瓦爾德反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80-100%乙酸乙酯/石油醚)純化混合物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲氧基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(530 mg，21.96%)。LCMS Rt = 1.007分鐘，m/z = 576.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
以與 方法 # 4 步驟 7類似之方式來進行氫化反應。
過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(340 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.776分鐘，m/z =486.2 [M + H] +。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基酯
以與 方法 # 4 步驟 8類似之方式來進行磺醯化反應。用水(20 mL)稀釋混合物且用二氯甲烷(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(400 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.925分鐘，m/z = 618.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 4 步驟 9類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈紅色油狀之(R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 mg，36.15%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.784分鐘，m/z = 668.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc反應之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.585分鐘，m/z = 568.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(23.48 mg，22.71%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.94 - 7.89 (m, 1H), 7.72 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.32 (m, 5H), 5.35 - 5.13 (m, 1H), 4.91 - 4.75 (m, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.05 (m, 1H), 4.05 - 3.98 (m, 1H), 3.98 - 3.92 (m, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.77 - 3.63 (m, 2H), 3.58 - 3.41 (m, 2H), 3.34 - 3.22 (m, 1H), 3.20 - 3.08 (m, 4H), 3.07 - 3.03 (m, 1H), 3.02 (s, 1H), 3.00 (s, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.58 (m, 1H), 2.43 - 2.22 (m, 2H), 2.10 - 2.05 (m, 1H), 2.05 - 1.98 (m, 2H), 1.94 - 1.75 (m, 3H), 1.42 - 1.28 (m, 6H)。LCMS Rt = 3.572分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間3.572分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 100 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 三氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(3-( 三氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(三氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(700 mg，37.96%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.46 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 4.27 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 1.29 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。 步驟 2 ： (E)-3-(3-( 三氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。用鹽酸(1M，1 mL)淬滅反應混合物且將pH調節至2，接著用二氯甲烷(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(三氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(500 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.449分鐘，m/z = 208.0 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80-100%甲醇/二氯甲烷)純化粗物質，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(840 mg，46.21%)。LCMS Rt = 0.725分鐘，m/z = 646.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc反應之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色固體狀之(R)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.568分鐘，m/z = 546.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 三氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(三氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(46.25 mg，40.47%)：1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.17 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 - 7.99 (m, 1H), 7.73 - 7.57 (m, 4H), 7.57 - 7.43 (m, 2H), 5.51 - 5.30 (m, 1H), 4.36 - 4.18 (m, 2H), 4.09 - 3.97 (m, 1H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 1H), 3.66 - 3.51 (m, 1H), 3.48 - 3.40 (m, 3H), 3.24 - 3.10 (m, 2H), 2.83 - 2.68 (m, 2H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.34 (br dd, J = 8.4, 15.6 Hz, 1H), 2.09 - 1.96 (m, 3H), 1.92 - 1.84 (m, 3H), 1.80 - 1.67 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.103分鐘，m/z = 736.2 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間3.103分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.2。 實例 101 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(11.87 mg，10.40%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.15 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 1H), 5.43 (td, J= 7.7, 15.0 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.28 - 4.15 (m, 1H), 4.06 - 3.98 (m, 1H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.82 - 3.73 (m, 1H), 3.69 - 3.54 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.28 - 3.20 (m, 2H), 2.81 - 2.72 (m, 2H), 2.48 - 2.31 (m, 2H), 2.13 - 2.03 (m, 2H), 1.96 - 1.86 (m, 4H), 1.84 - 1.73 (m, 2H), 1.51 (d, J= 8.0 Hz, 3H), 1.25 - 1.16 (m, 2H), 0.98 - 0.89 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.330分鐘，m/z = 722.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)滯留時間2.330分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 722.3 實例 102 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(130 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 805.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 8 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(吡咯啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(19.06 mg，32.23%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.15 (m, 1H), 8.50 - 8.27 (m, 1H), 8.14 (br d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.07 (br dd, J = 5.7, 8.9 Hz, 1H), 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.53 (br t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.90 - 6.77 (m, 1H), 6.64 - 6.53 (m, 1H), 5.46 - 5.21 (m, 2H), 4.38 - 4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.06 (m, 1H), 4.04 - 3.76 (m, 2H), 3.67 - 3.51 (m, 2H), 3.48 - 3.40 (m, 4H), 3.35 - 3.17 (m, 4H), 3.10 - 2.92 (m, 1H), 2.43 - 2.25 (m, 4H), 2.23 - 2.00 (m, 5H), 1.95 - 1.71 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.974分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.974分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 103 ( 方法 8) ： (E)-3-( 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空下濃縮合併之有機層，得到呈黃色油狀之2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，粗物質)。LCMS Rt = 0.858分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-( 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 8 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-3-(氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(10.72 mg，24.54%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (s, 1H), 8.18 - 8.03 (m, 2H), 7.76 - 7.62 (m, 2H), 7.53 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.90 (ddd, J = 2.9, 5.4, 15.0 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 10.3, 14.9 Hz, 1H), 5.47 - 5.18 (m, 2H), 4.49 (quin, J = 6.9 Hz, 1H), 4.26 - 4.10 (m, 2H), 4.08 - 3.77 (m, 2H), 3.74 - 3.47 (m, 3H), 3.46 - 3.42 (m, 3H), 3.30 - 3.20 (m, 1H), 3.19 - 3.11 (m, 2H), 3.07 (s, 1H), 2.95 - 2.85 (m, 1H), 2.48 - 2.34 (m, 2H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 2.19 (br d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.11 (br d, J = 3.0 Hz, 2H), 1.91 - 1.84 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.767分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.767分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 691.3。 實例 104 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-(((Z)-( 胺基 ( 環丙基 ) 亞甲基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(E)-4-(((Z)-(胺基(環丙基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(9 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.539分鐘，m/z = 226.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。
藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(5.6 g，67.61%)。LCMS Rt = 0.709分鐘，m/z = 208.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯酸(1.5 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.51 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.19 - 2.14 (m, 1H), 1.14 - 1.04 (m, 4H)。 步驟 4 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(32.23 mg，14.80%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.64 (br d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 1H), 5.36 - 5.18 (m, 1H), 4.48 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.31 - 4.11 (m, 6H), 4.00 - 3.91 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.30 - 3.22 (m, 1H), 3.15 (br s, 1H), 3.11 - 3.07 (m, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.14 - 2.11 (m, 3H), 2.08 - 2.04 (m, 1H), 1.92 - 1.84 (m, 3H), 1.33 - 1.19 (m, 1H), 1.11 (dd, J = 2.8, 8.3 Hz, 2H), 1.01 - 0.97 (m, 2H)。LCMS Rt =3.139分鐘，m/z =726.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.139分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3 實例 105 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(33.47 mg，9.99%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.04 - 7.99 (m, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.61 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 7.20 - 7.14 (m, 1H), 5.34 - 5.14 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 2H), 4.20 - 4.16 (m, 2H), 4.15 - 4.05 (m, 2H), 3.98 - 3.89 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.17 - 3.04 (m, 3H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.13 - 2.10 (m, 2H), 2.08 (br s, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 2H), 1.84 (br d, J = 3.3 Hz, 2H), 1.57 (s, 6H)。LCMS Rt = 2.905分鐘，m/z = 744.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.905分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 106 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(43.24 mg，19.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 1H), 7.65 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.35 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 7.22 - 7.16 (m, 1H), 5.37 - 5.19 (m, 1H), 4.51 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.34 - 4.15 (m, 6H), 4.01 - 3.94 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.16 (br d, J = 7.1 Hz, 2H), 3.09 (br s, 1H), 2.95 - 2.89 (m, 1H), 2.15 (br d, J = 2.3 Hz, 1H), 2.11 (br s, 1H), 2.07 (br d, J = 1.6 Hz, 1H), 2.05 (br dd, J = 1.9, 4.8 Hz, 1H), 1.92 - 1.84 (m, 3H), 1.35 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。LCMS Rt = 3.208分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.208分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 107 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(15.78 mg，14.98%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 (t, J= 1.8 Hz, 1H), 8.12 (dd, J= 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.35 (m, 3H), 5.46 - 5.15 (m, 2H), 4.23 - 4.11 (m, 2H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.88 - 3.76 (m, 1H), 3.67 - 3.48 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.14 - 3.05 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 4H), 1.92 - 1.74 (m, 4H), 1.58 (d, J = 7.6 Hz, 6H)。LCMS Rt = 2.799分鐘，m/z = 744.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.799分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 108 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(47.77 mg，45.73%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 5.48 - 5.36 (m, 1H), 5.35 - 5.16 (m, 1H), 4.26 - 4.16 (m, 2H), 4.09 - 3.98 (m, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 1H), 3.81 - 3.74 (m, 1H), 3.70 - 3.50 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.22 - 3.06 (m, 3H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.47 - 2.32 (m, 2H), 2.15 - 2.00 (m, 4H), 1.93 - 1.79 (m, 3H), 1.15 - 1.07 (m, 2H), 1.04 - 0.93 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.241分鐘，m/z = 726.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.241分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 109 ( 方法 2) ： 1-(3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1- 溴 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘
以與 方法 #2 步驟 1類似之方式來進行MOM保護，藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈紅色油狀之1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(9 g，93.95%)。LCMS Rt = 0.913分鐘，m/z = 266.0 [M + H] +。 步驟 2 ： 2-(3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
以與 方法 #2 步驟 2類似之方式來形成硼酸酯，藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 250*100mm 10u；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：65%-95%，20分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(5 g，85.02%)。LCMS Rt = 0.929分鐘，m/z = 314.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(320 mg，42.86%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.717分鐘，m/z = 690.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 4-(4-(( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )( 甲基 ) 胺基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 ) 萘 -2- 醇
以與 方法 #2 步驟 6類似之方式來進行去Boc及MOM保護反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之4-(4-((氮雜環丁烷-3-基甲基)(甲基)胺基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)萘-2-醇(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.529分鐘，m/z = 546.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-(3-(((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-(3-(((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(10.32 mg，12.59%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.34 (s, 1H), 7.84 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 1H), 7.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 2H), 6.39 - 6.24 (m, 1H), 6.23 - 6.11 (m, 1H), 5.66 (dd, J = 2.4, 10.0 Hz, 1H), 5.43 - 5.16 (m, 1H), 4.37 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.26 - 4.08 (m, 6H), 3.89 (br dd, J = 5.8, 9.4 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.27 - 3.14 (m, 4H), 2.28 - 2.20 (m, 3H), 1.89 - 1.76 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.669分鐘，m/z = 600.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間2.669分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 600.3。 實例 110 ( 方法 9) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 9 步驟 9類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(23.62 mg，22.52%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.52 (dt, J = 3.8, 7.8 Hz, 1H), 7.48 - 7.38 (m, 3H), 7.34 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.23 (br s, 1H), 6.92 - 6.80 (m, 1H), 5.37 - 5.11 (m, 1H), 4.90 - 4.68 (m, 1H), 4.25 (br d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.13 - 4.04 (m, 1H), 4.04 - 3.90 (m, 2H), 3.89 - 3.70 (m, 2H), 3.67 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 3.65 - 3.57 (m, 1H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 1H), 3.32 - 3.17 (m, 1H), 3.16 - 3.03 (m, 4H), 3.02 - 2.94 (m, 3H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.62 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 2H), 2.13 - 1.99 (m, 3H), 1.92 - 1.76 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.033分鐘，m/z = 684.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.033分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 684.3。 實例 111 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丁基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (Z)-N'- 羥基環丁烷甲脒
以與 方法 #1 步驟 1類似之方式來形成羥基脒。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色油狀之(Z)-N-羥基環丁烷甲脒(5.8 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.93 - 8.69 (m, 1H), 5.36 - 5.06 (m, 2H), 2.96 - 2.80 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 2.03 - 1.91 (m, 2H), 1.90 - 1.76 (m, 1H) 1.76 - 1.65 (m, 1H)。 步驟 2 ： (E)-4- 氯 -4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
在0℃下於氮氣氛圍下向(E)-4-乙氧基-4-側氧基-丁-2-烯酸(9.5 g，65.92 mmol)及二甲基甲醛(481.80 mg，6.59 mmol)於二氯甲烷(90 mL)中之混合物中添加乙二醯二氯(10.04 g，79.10 mmol)。在0℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物30分鐘。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之(E)-4-氯-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(10 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (E)-4-(((Z)-( 胺基 ( 環丁基 ) 亞甲基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
向(Z)-N-羥基環丁烷甲脒(5.8 g，50.81 mmol)及碳酸鉀(10.53 g，76.22 mmol)於二噁烷(50 mL)中之混合物中添加(E)-4-氯-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(9.91 g，60.97 mmol)。將混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在20℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物30分鐘。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(E)-4-(((Z)-(胺基(環丁基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(11.9 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.425分鐘，m/z = 240.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(3- 環丁基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色固體狀之(E)-3-(3-環丁基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(5.3 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.583分鐘，m/z = 222.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-(3- 環丁基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 200*40mm*10um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：24%-54%，10分鐘)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-環丁基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(240 mg，5.18%)。LCMS Rt = 0.237分鐘，m/z = 194.1 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丁基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：50%-80%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-環丁基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(23.48 mg，16.71%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 1.2, 8.2 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 0.9, 8.2 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.34 (m, 2H), 5.49 - 5.17 (m, 2H), 4.30 - 4.10 (m, 3H), 4.09 - 3.99 (m, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 1H), 3.67 - 3.50 (m, 1H), 3.49 - 3.43 (m, 3H), 3.20 - 3.04 (m, 3H), 2.95 - 2.85 (m, 1H), 2.49 - 2.32 (m, 6H), 2.26 - 2.19 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 4H), 1.93 - 1.81 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.298分鐘，m/z = 740.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.298分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 740.3。 實例 112 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(20.59 mg，18.00%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.15 (m, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 8.04 - 7.98 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.42 (m, 2H), 7.41 - 7.34 (m, 1H), 5.52 - 5.27 (m, 1H), 4.26 - 4.11 (m, 3H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.68 - 3.55 (m, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 3H), 3.02 - 2.91 (m, 2H), 2.64 - 2.54 (m, 2H), 2.48 - 2.29 (m, 2H), 2.19 - 2.02 (m, 2H), 1.89 - 1.71 (m, 4H), 1.68 - 1.52 (m, 8H)。LCMS Rt = 2.699分鐘，m/z = 726.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.699分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 113 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(54.34 mg，39.53%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 - 7.67 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.47 - 7.27 (m, 2H), 5.50 - 5.16 (m, 2H), 4.24 - 4.12 (m, 2H), 4.01 (br d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.94 - 3.67 (m, 2H), 3.66 - 3.49 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.23 - 3.04 (m, 3H), 2.99 - 2.82 (m, 1H), 2.43 (br d, J = 6.1 Hz, 1H), 2.41 - 2.27 (m, 2H), 2.27 - 2.15 (m, 2H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 1.85 (br s, 1H), 1.51 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 1.27 - 1.14 (m, 2H), 1.02 - 0.88 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.306分鐘，m/z = 740.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.306分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 740.3。 實例 114 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1- 甲基環丙烷甲硫醯胺
以與 方法 # 5 步驟 2類似之方式來形成硫醯胺。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-甲基環丙烷甲硫醯胺(1.8 g，77.45%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.43 (br s, 1H), 8.69 (br s, 1H), 1.36 - 1.29 (m, 5H), 0.74 (q, J = 3.6 Hz, 2H)。 步驟 2 ： N- 羥基 -1- 甲基環丙烷甲脒
以與 方法 #5 步驟 3類似之方式來形成羥基脒。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，40%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色膠狀之N-羥基-1-甲基-環丙烷甲脒(1.53 g，85.78%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.98 - 8.81 (m, 1H), 5.29 - 5.09 (m, 2H), 1.23 - 1.12 (m, 3H), 0.81 (br d, J = 8.2 Hz, 2H), 0.50 - 0.34 (m, 2H)。 步驟 3 ： (E)-4-((1- 甲基環丙烷甲脒基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，30%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-4-((1-甲基環丙烷甲脒基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(1.85 g，57.45%)。LCMS Rt = 0.630分鐘，m/z = 240.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色膠狀之(E)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.2 g，70.12%)。LCMS Rt = 0.820分鐘，m/z = 222.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(800 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.638分鐘，m/z = 194.1 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：60%-90%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(29.72 mg，25.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.53 (br d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.26 (m, 3H), 5.35 - 5.13 (m, 1H), 4.92 - 4.73 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.05 (m, 1H), 4.05 - 3.97 (m, 1H), 3.95 (br d, J = 1.1 Hz, 1H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 3.62 (br d, J = 2.5 Hz, 2H), 3.58 - 3.51 (m, 1H), 3.50 - 3.40 (m, 1H), 3.34 - 3.17 (m, 1H), 3.06 (br dd, J = 3.9, 11.6 Hz, 4H), 3.03 - 2.97 (m, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.63 (br d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.42 - 2.19 (m, 3H), 2.11 - 2.00 (m, 2H), 1.93 - 1.76 (m, 3H), 1.51 (d, J = 3.4 Hz, 3H), 1.23 - 1.17 (m, 2H), 0.97 - 0.91 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.500分鐘，m/z = 726.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間3.500分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 115 ( 方法 8) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-(2-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 # 8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R)-(2-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(90 mg，96.99%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.755分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(42.71 mg，65.23%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.47 - 7.39 (m, 2H), 7.21 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 9.6, 15.1 Hz, 1H), 5.48 - 5.28 (m, 1H), 4.20 - 4.08 (m, 2H), 4.02 - 3.90 (m, 1H), 3.88 - 3.79 (m, 1H), 3.78 - 3.69 (m, 1H), 3.65 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 3.61 - 3.45 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.00 - 2.90 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.01 - 1.95 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 5H), 1.66 - 1.56 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.438分鐘，m/z = 680.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.438分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 680.3。 實例 116 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：55%-90%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(39.75 mg，38.45%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.53 (m, 2H), 7.52 - 7.47 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 5.35 - 5.13 (m, 1H), 4.92 - 4.72 (m, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 1H), 4.11 - 3.91 (m, 3H), 3.89 - 3.75 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 2H), 3.57 - 3.39 (m, 2H), 3.30 - 3.12 (m, 3H), 3.11 - 3.03 (m, 2H), 3.01 - 2.96 (m, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.60 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 2.19 - 2.14 (m, 2H), 2.13 - 2.10 (m, 2H), 2.09 - 2.04 (m, 2H), 2.04 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.399分鐘，m/z = 736.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間3.399分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.3。 實例 117 ( 方法 4- 主方法 ) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )--(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4- 羥基 -2-( 甲硫基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 甲酸三級丁酯
向3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-三級丁酯4-乙酯(100 g，368.58 mmol)於甲醇(1.5 L)中之溶液中添加甲醇鈉(99.55 g，1.84 mol)及2-甲基異硫脲(124.88 g，667.02 mmol，硫酸鹽)。在25℃下攪拌反應混合物16小時，接著用2.0 M鹽酸淬滅且在真空中濃縮至乾以移除甲醇。用水(1 L)稀釋水層且過濾所得沈澱物且用乙醇(200 mL)洗滌，得到呈白色固體狀之4-羥基-2-(甲硫基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(184 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.56 (br s, 2H), 4.36 - 4.27 (m, 2H), 3.63 - 3.57 (m, 2H), 2.59 - 2.55 (m, 3H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.553分鐘，m/z = 297.1 [M + H]+。 步驟 2 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-( 甲硫基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 甲酸三級丁酯
在0℃下向4-羥基-2-(甲硫基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(92 g，309.38 mmol)於甲苯(1.2 L)中之溶液中添加銀氧基羰氧基銀(93.84 g，340.31 mmol)及(溴甲基)苯(63.50 g，371.25 mmol)。在110℃下攪拌反應混合物8小時。用水(1 L)稀釋所得黏性物質且用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用石油醚:乙酸乙酯之(10:1)混合物(1 L)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈白色固體狀之4-(苯甲氧基)-2-(甲硫基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(93 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.44 - 7.40 (m, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 5.46 (s, 2H), 4.48 (br s, 2H), 3.64 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 2.65 (br s, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.48 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.769分鐘，m/z = 387.2 [M + H]+。 步驟 3 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-( 甲基磺醯基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 甲酸三級丁酯
向4-(苯甲氧基)-2-(甲硫基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(75 g，193.55 mmol)於二氯甲烷(1 L)中之溶液中添加3-氯過氧苯甲酸甲酯(110.02 g，541.94 mmol，85%純度)。在0℃下攪拌混合物3小時。用飽和亞硫酸鈉溶液(1 L)淬滅反應混合物，且用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用石油醚:乙酸乙酯之(10:1)混合物(1 L)稀釋粗物質，過濾所得沈澱物且用石油醚:乙酸乙酯之(10:1)混合物(500 mL)洗滌，得到呈白色固體狀之4-(苯甲氧基)-2-(甲基磺醯基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(75 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.48 - 7.43 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 3H), 5.54 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 3.70 (br t, J=5.7 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.78 (br s, 2H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.675分鐘，m/z = 419.2 [M + H]+。 步驟 4 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 甲酸三級丁酯
向冷卻至-10℃之(六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(30 g，212.45 mmol)於甲苯(300 mL)中之溶液中添加三級丁醇鈉(15.31 g，159.34 mmol)，且在-10℃下添加4-(苯甲氧基)-2-(甲基磺醯基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(44.56 g，106.23 mmol)於甲苯(500 mL)中之溶液，且在-10℃下再攪拌反應混合物10分鐘。在0℃下用飽和氯化銨溶液(1 L)淬滅反應混合物，且用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之4-(苯甲氧基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸三級丁酯(54.33 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.33 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.22 (m, 1H), 7.16 - 7.12 (m, 1H), 7.09 - 7.05 (m, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.05 - 3.95 (m, 2H), 3.53 (br s, 2H), 2.99 (td, J=5.4, 10.4 Hz, 2H), 2.52 (br dd, J=3.1, 6.2 Hz, 3H), 2.25 (s, 1H), 1.99 - 1.91 (m, 2H), 1.79 - 1.69 (m, 4H), 1.54 (td, J=7.6, 12.7 Hz, 2H), 1.36 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.586分鐘，m/z = 480.3 [M + H]+。 步驟 5 ： 4-( 苯甲氧基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在25℃下將4-苯甲氧基-2-(1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基甲氧基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸三級丁酯(54 g，112.36 mmol)於鹽酸/乙酸乙酯(4M，600 mL)中之混合物攪拌0.5小時。在真空中濃縮反應混合物。在0℃下用飽和碳酸鈉溶液(300 mL)稀釋粗殘餘物，且用二氯甲烷:異丙醇之10:1混合物(3 x 300mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮，得到呈棕色油狀之4-(苯甲氧基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(40 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.44 - 7.40 (m, 2H), 7.39 - 7.31 (m, 3H), 5.43 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.14 - 3.05 (m, 4H), 2.66 - 2.53 (m, 4H), 2.00 - 1.55 (m, 8H)。LCMS Rt = 0.413分鐘，m/z = 380.2 [M + H]+。 步驟 6 ： 4-( 苯甲氧基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
將4-(苯甲氧基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(38.78 g，101.92 mmol)、1-溴-8-氯萘(44.31 g，183.46 mmol)、(1E,4E)-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮;鈀(9.33 g，10.19 mmol)、二環己基-[2-(2,6-二異丙氧基苯基)苯基]磷烷(9.51 g，20.38 mmol)及碳酸銫(132.83 g，407.69 mmol)於甲苯(500 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，接著在100℃下於氮氣氛圍下攪拌反應混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物。用水(1 L)稀釋粗物質且用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈棕色油狀之4-(苯甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(42.55 g，77.15%)。LCMS Rt = 0.670分鐘，m/z = 540.2 [M + H]+。 步驟 7 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
在60℃下將4-(苯甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(41 g，75.77 mmol)於三氟乙酸(500 mL)中之混合物攪拌0.5小時。在真空中濃縮反應混合物。在0℃下用飽和碳酸鈉溶液(300 mL)淬滅粗物質，且用二氯甲烷(3 x 150 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(45 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.62 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=0.9, 7.4 Hz, 1H), 7.21 - 7.15 (m, 2H), 7.10 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 3.68 - 3.52 (m, 3H), 3.48 - 3.36 (m, 1H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 2.90 - 2.69 (m, 3H), 2.14 - 1.67 (m, 10H)。LCMS Rt = 0.557分鐘，m/z = 450.2 [M + H]+。 步驟 8 ：三氟甲烷磺酸 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基酯
在0℃下於氮氣氛圍下向7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(1 g，2.22 mmol)及三乙胺(1.35 g，13.30 mmol)於二氯甲烷(450 mL)中之溶液中添加含三氟甲基磺醯基三氟甲烷磺酸酯(1.56 g，5.54 mmol)之二氯甲烷(50 mL)。在25℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水(40 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(1.2 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.788分鐘，m/z = 582.1 [M + H]+。 步驟 9 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向三氟甲烷磺酸7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(2.59 g，4.44 mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(2.87 g，22.21 mmol)於N,N-二甲基甲醛(5 mL)中之溶液中添加(3R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.78 g，8.88 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。通過添加水(20 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，71.10%)。LCMS Rt = 1.659分鐘，m/z = 632.3 [M + H]+。 步驟 10 ： (R)-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。
在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：5%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(R)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(220 mg，35.88%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.722分鐘，m/z = 532.3 [M + H] +。 步驟 11 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )--(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(31.95 mg，26.92%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.71 (br d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.63 - 7.50 (m, 3H), 7.49 - 7.40 (m, 2H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 4.94 - 4.76 (m, 1H), 4.34 - 4.14 (m, 1H), 4.09 - 3.93 (m, 3H), 3.92 - 3.65 (m, 3H), 3.60 - 3.41 (m, 2H), 3.36 - 3.06 (m, 2H), 3.05 - 2.91 (m, 5H), 2.68 - 2.55 (m, 3H), 2.22 - 2.15 (m, 2H), 2.14 - 2.06 (m, 3H), 1.96 - 1.89 (m, 2H), 1.88 - 1.73 (m, 4H), 1.68 - 1.56 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.361分鐘，m/z = 718.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.361分鐘，ESI+實驗值[M+H] =718.3。 實例 118 ( 方法 6) ： (4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 甲腈 步驟 1 ： (4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1,2- 二甲酸 1- 三級丁酯 2- 甲酯
在0℃下向(4R)-4-胺基吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(9.6 g，39.30 mmol)於四氫呋喃(90 mL)及水(30 mL)中之溶液中添加碳酸鈉(83.30 g，785.97 mmol)及氯甲酸苯甲酯(8.04 g，47.16 mmol)。在20℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(70 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(13 g，87.42%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.34 - 7.21 (m, 5H), 5.09 - 4.96 (m, 2H), 4.37 - 4.15 (m, 2H), 3.80 - 3.62 (m, 4H), 3.52 - 3.15 (m, 1H), 2.34 (br s, 1H), 2.28 - 2.04 (m, 1H), 1.96 - 1.78 (m, 1H), 1.36 (br d, J= 17.8 Hz, 9H)。LCMS Rt = 0.589分鐘，m/z = 378.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1,2- 二甲酸 1- 三級丁酯 2- 甲酯
在0℃下向(4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(13 g，34.35 mmol)於N,N-二甲基甲醛(100 mL)中之溶液中添加甲基碘(24.38 g，171.77 mmol)及氫化鈉(2.75 g，68.71 mmol，60%純度)，接著在25℃下攪拌1小時。在0℃下用飽和氯化銨(100 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(10 g，74.17%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.34 - 7.22 (m, 5H), 5.15 - 5.00 (m, 2H), 4.95 - 4.58 (m, 1H), 4.40 - 4.07 (m, 1H), 3.71 - 3.64 (m, 3H), 3.37 - 3.19 (m, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.42 - 2.15 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.97 - 1.84 (m, 1H), 1.40 - 1.32 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.607分鐘，m/z = 392.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (4R)-4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 胺甲醯基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在50℃下將(4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(8 g，20.39 mmol)於氫氧化銨(80 mL)中之混合物攪拌12小時。過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(4R)-4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-2-胺甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.0 g，25.99%)。LCMS Rt = 0.510分鐘，m/z = 377.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (4R)-2- 胺甲醯基 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行Cbz基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之(4R)-2-胺甲醯基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.0 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.117分鐘，m/z = 243.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (4R)-2- 胺甲醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應，藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(4R)-2-胺甲醯基-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(310 mg，46.58%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.806分鐘，m/z = 689.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 氰基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 11類似之方式來進行脫水反應，在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-氰基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(80 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 2.254分鐘，m/z = 671.3 [M + H] +。 步驟 7 ： (4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 甲腈
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-2-甲腈(70 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.748分鐘，m/z = 571.2 [M + H] +。 步驟 8 ： (4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 甲腈
以與 方法 # 6 步驟 13類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到黃色非晶形固體(5.15 mg，6.33%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 3H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 6.64 - 6.48 (m, 1H), 6.44 - 6.29 (m, 1H), 5.85 - 5.56 (m, 1H), 5.38 - 4.71 (m, 1H), 4.22 - 4.12 (m, 3H), 3.92 - 3.69 (m, 1H), 3.50 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 3.43 (s, 1H), 3.02 - 2.91 (m, 2H), 2.67 - 2.56 (m, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.88 - 1.71 (m, 5H), 1.68 - 1.59 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.743分鐘，m/z = 625.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.743分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 625.2。 實例 119 ( 方法 6- 主方法 ) ： 2-((2S,4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈 步驟 1 ： (2S,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1,2- 二甲酸 1- 三級丁酯 2- 甲酯
向(2S,4R)-4-胺基吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(10 g，40.94 mmol)於甲醇(500 mL)中之溶液中添加乙酸(245.83 mg，4.09 mmol)、氰基硼氫化鈉(7.72 g，40.94 mmol)及苯甲醛(4.34 g，40.94 mmol)，在0℃下攪拌反應物2小時，接著將甲醛(6.64 g，81.87 mmol，37%純度)添加至混合物中，接著在0℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和碳酸氫鈉(30 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(10 g，70.11%)。LCMS Rt = 0.452分鐘，m/z = 348.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (2S,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-2-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(10 g，28.70 mmol)於四氫呋喃(500 mL)中之溶液中添加氫化鋰鋁(2.18 g，57.40 mmol)，在0℃下攪拌反應物1小時。在0℃下用十水合硫酸鈉(1 g)淬滅混合物，且經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(9.5 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.959分鐘，m/z = 320.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2S,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-2-((( 甲基磺醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(9.2 g，28.71 mmol)於二氯甲烷(200 mL)中之溶液中添加三乙胺(5.81 g，57.42 mmol)及甲基磺醯基甲烷磺酸酯(15.00 g，86.14 mmol)，在0℃下攪拌反應物1小時。在0℃下用水(2 mL)稀釋混合物且用二氯甲烷(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.099分鐘，m/z = 398.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (2S,4R)-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-2-( 氰基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(16 g，40.15 mmol)於二甲亞砜(100 mL)中之溶液中添加氰化鉀(18.26 g，280.42 mmol)。在60℃下攪拌反應物12小時。在0℃下用水(50 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(氰基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.553分鐘，m/z = 329.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (2S,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-(苯甲基(甲基)胺基)-2-(氰基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，24.28 mmol)於二甲亞砜(100 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(10.07 g，72.85 mmol)及過氧化氫(34.86 g，307.46 mmol)，在60℃下攪拌反應物12小時。在0℃下用飽和亞硫酸鈉(100 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：5%-35%，20分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-(苯甲基(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，44.62%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.577分鐘，m/z = 347.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (2S,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-(苯甲基(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.3 g，4.98 mmol，三氟乙酸鹽)於甲醇(50 mL)中之溶液中添加鈀/碳(50 mg，10%純度)且在25℃下於氫氣氛圍下攪拌混合物1小時。過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.06 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.880分鐘，m/z = 257.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 4-( 苯甲硫基 )-7- 氯 -8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 5類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(10 g，47.79%)。LCMS Rt = 0.694分鐘，m/z = 444.1 [M + H] +。 步驟 8 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 6類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-50%乙酸乙酯/石油醚)純化混合物，得到呈黃色固體狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(4.5 g，80.45%)。LCMS Rt = 0.818分鐘，m/z = 570.2 [M + H] +。 步驟 9 ： 4- 氯 -7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應，經硫酸鈉乾燥混合物，得到呈黃色液體狀之4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(400 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.837分鐘，m/z = 482.1 [M + H] +。 步驟 10 ： (2S,4R)-2-(2- 胺基 -2- 側氧基乙基 )-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：5%-50%，8分鐘)純化混合物，得到呈黃色固體狀之(2S,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(80 mg，9.45%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.579分鐘，m/z = 703.3 [M + H] +。 步驟 11 ： (2S,4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-2-( 氰基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-2-(2-胺基-2-側氧基乙基)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，99.40 umol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加Py (7.86 mg，99.40 umol)、三氟乙酸A (104.38 mg，497.00 umol)。在0℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色固體狀之(2S,4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-2-(氰基甲基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.776分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。 步驟 12 ： 2-((2S,4R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在0℃下用飽和碳酸鈉(3 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之2-((2S,4R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-2-基)乙腈(60 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.665分鐘，m/z = 585.2 [M + H] +。 步驟 13 ： 2-((2S,4R)-1- 丙烯醯基 -4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 乙腈
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之2-((2S,4R)-1-丙烯醯基-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-2-基)乙腈(8.16 mg，12.45%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 0.9, 8.2 Hz, 1H), 7.76 - 7.67 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 6.61 (dd, J = 10.4, 16.5 Hz, 1H), 6.32 (dd, J = 2.0, 16.8 Hz, 1H), 5.81 - 5.64 (m, 2H), 4.56 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.26 - 4.16 (m, 3H), 3.79 (ddd, J = 7.8, 10.6, 15.3 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 3.07 - 2.99 (m, 2H), 2.91 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 2.69 - 2.59 (m, 3H), 2.41 - 2.31 (m, 2H), 2.02 - 1.98 (m, 2H), 1.85 (br dd, J = 5.9, 11.6 Hz, 4H), 1.71 - 1.61 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.710分鐘，m/z = 639.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間2.710分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 639.3。 實例 120 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(14.87 mg，17.50%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ = 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.40 (dt, J = 4.3, 7.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 2H), 5.24 - 5.00 (m, 1H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 1H), 3.95 - 3.75 (m, 3H), 3.74 - 3.29 (m, 5H), 3.23 - 2.91 (m, 5H), 2.88 - 2.84 (m, 3H), 2.80 - 2.71 (m, 1H), 2.54 - 2.45 (m, 1H), 2.19 - 2.06 (m, 2H), 2.00 - 1.86 (m, 4H), 1.79 - 1.65 (m, 3H), 1.03 - 0.95 (m, 2H), 0.91 - 0.82 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.432分鐘，m/z = 712.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.432分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 712.3。 實例 121 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(22.78 mg，19.75%)。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.13 (m, 1H), 8.17 - 8.01 (m, 2H), 7.71 - 7.63 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.46 - 7.32 (m, 2H), 5.48 - 5.14 (m, 2H), 4.24 - 4.18 (m, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.82 - 3.69 (m, 1H), 3.67 - 3.49 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.19 - 2.98 (m, 4H), 2.95 - 2.82 (m, 1H), 2.50 - 2.26 (m, 2H), 2.18 - 2.03 (m, 3H), 1.91 - 1.75 (m, 3H), 1.32 (dd, J = 7.0, 8.6 Hz, 6H)。LCMS Rt = 3.281分鐘，m/z = 746.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.281分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 746.3。 實例 122 ( 方法 8) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 嗎啉 -4- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)嗎啉-4-甲酸三級丁酯(40 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.724分鐘，m/z = 821.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 8 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(7.5 mg，19.96%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 8.09 (dd, J = 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.74 - 6.67 (m, 1H), 6.49 - 6.40 (m, 1H), 5.40 (br s, 1H), 5.37 - 5.24 (m, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 2H), 4.24 - 4.01 (m, 2H), 4.00 - 3.79 (m, 3H), 3.72 - 3.51 (m, 3H), 3.45 (br s, 3H), 3.33 (br d, J = 2.1 Hz, 2H), 3.00 (br s, 2H), 2.93 - 2.73 (m, 3H), 2.71 - 2.42 (m, 2H), 2.42 - 2.05 (m, 6H)。LCMS Rt = 1.881分鐘，m/z = 721.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.881分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 721.3。 實例 123 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 嗎啉 -4- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空下濃縮合併之有機層，得到呈黃色油狀之3-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)嗎啉-4-甲酸三級丁酯(100 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.602分鐘，m/z = 821.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 5 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(嗎啉-3-基)丙-2-烯-1-酮(16.01 mg，13.01%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.18 (m, 1H), 8.28 (br s, 1H), 8.18 - 8.05 (m, 2H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.72 - 6.62 (m, 1H), 6.58 - 6.32 (m, 1H), 5.49 - 5.27 (m, 2H), 4.48 - 4.29 (m, 2H), 4.20 - 4.08 (m, 1H), 4.06 - 3.73 (m, 4H), 3.52 (br d, J = 8.8 Hz, 7H), 3.37 - 3.14 (m, 3H), 3.13 - 2.85 (m, 3H), 2.49 - 2.13 (m, 6H), 2.11 - 2.00 (m, 2H)。LCMS Rt = 1.966分鐘，m/z = 721.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.966分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 721.3。 實例 124 ( 方法 7) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(19.24 mg，31.44%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.33 (br s, 1H), 8.17 (dd, J = 3.6, 5.8 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 5.7, 9.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.70 (dd, J = 8.3, 15.2 Hz, 1H), 6.52 - 6.35 (m, 1H), 5.47 - 5.23 (m, 2H), 4.38 - 4.21 (m, 2H), 4.18 - 3.80 (m, 2H), 3.73 - 3.57 (m, 1H), 3.52 - 3.41 (m, 4H), 3.37 - 3.16 (m, 4H), 3.10 - 2.93 (m, 2H), 2.56 (s, 1H), 2.47 - 2.36 (m, 4H), 2.35 - 2.27 (m, 2H), 2.24 - 2.06 (m, 3H), 1.96 - 1.70 (m, 5H)。LCMS Rt = 1.976分鐘，m/z = 719.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.976分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 719.3。 實例 125 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(30.75 mg，17.18%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (br d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.19 - 8.14 (m, 1H), 8.10 (dd, J = 5.6, 9.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.68 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 5.6, 15.1 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 12.3, 14.4 Hz, 1H), 5.47 - 5.19 (m, 2H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 4.02 - 3.80 (m, 2H), 3.72 - 3.62 (m, 1H), 3.61 - 3.49 (m, 2H), 3.46 (br d, J = 3.1 Hz, 3H), 3.36 - 3.28 (m, 1H), 3.19 - 3.13 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.97 - 2.87 (m, 1H), 2.86 - 2.77 (m, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 2H), 2.26 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 2.13 (br s, 3H), 2.09 - 2.06 (m, 1H), 1.90 (br dd, J = 7.9, 17.4 Hz, 4H)。LCMS Rt = 2.971分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間2.971分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 126 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-( 二甲基胺基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-(二甲基胺基)丁-2-炔-1-酮(18.72 mg，10.37%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (dd, J = 1.6, 4.5 Hz, 1H), 8.18 - 8.11 (m, 1H), 8.08 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.64 (m, 2H), 7.53 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 5.46 - 5.17 (m, 2H), 4.24 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.11 (m, 1H), 4.05 - 3.86 (m, 1H), 3.80 - 3.66 (m, 2H), 3.56 - 3.47 (m, 1H), 3.46 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.20 - 3.09 (m, 2H), 3.07 (s, 1H), 2.95 - 2.86 (m, 1H), 2.43 - 2.31 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.28 - 2.22 (m, 3H), 2.18 (br s, 2H), 2.11 (br d, J = 2.9 Hz, 1H), 2.08 - 2.03 (m, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.948分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間2.948分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 691.3。 實例 127 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空下濃縮合併之有機層，得到呈黃色油狀之3-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.600分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-( 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 5類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空下濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(150 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.662分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-烯-1-酮(30.75 mg，17.18%)。 1HNMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.21 - 8.04 (m, 2H), 7.78 - 7.64 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.01 - 6.88 (m, 1H), 6.39 - 6.16 (m, 1H), 5.48 - 5.16 (m, 2H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.17 - 4.11 (m, 1H), 4.11 - 4.02 (m, 1H), 4.01 - 3.92 (m, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 1H), 3.69 - 3.52 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 6H), 3.26 - 3.19 (m, 1H), 3.18 - 3.12 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.99 - 2.88 (m, 3H), 2.43 - 2.37 (m, 1H), 2.31 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 2.24 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 2.12 (br d, J = 2.6 Hz, 1H), 2.09 - 2.05 (m, 1H), 1.88 (br dd, J = 7.3, 10.8 Hz, 2H)。LCMS Rt = 1.874分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間1.874分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 128 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 甲基環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：60%-95%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-甲基環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(5.17 mg，4.28%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 3.9, 7.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 4.88 - 4.74 (m, 1H), 4.29 - 4.21 (m, 1H), 4.16 - 3.89 (m, 3H), 3.87 - 3.59 (m, 3H), 3.57 - 3.40 (m, 2H), 3.15 - 3.02 (m, 3H), 3.01 - 2.95 (m, 3H), 2.73 - 2.56 (m, 4H), 1.96 (br s, 2H), 1.92 - 1.75 (m, 6H), 1.71 - 1.60 (m, 2H), 1.49 (d, J = 3.3 Hz, 3H), 1.20 - 1.14 (m, 2H), 0.94 - 0.89 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.436分鐘，m/z = 708.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.436分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 708.3。 實例 129 ( 方法 2) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (1S,2R)-2- 氟環丙烷甲醯胺
以與 方法 # 5 步驟 1類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，90-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(1S,2R)-2-氟環丙烷甲醯胺(6.5 g，65.62%)： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 4.85 - 4.60 (m, 1H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.47 - 1.31 (m, 1H), 1.23 (qd, J = 6.5, 12.8 Hz, 1H)。 步驟 2 ： (1R,2R)-2- 氟環丙烷甲硫醯胺
以與 方法 # 5 步驟 2類似之方式來形成硫醯胺。
藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-20%乙酸乙酯/石油醚)純化粗殘餘物，得到呈白色固體狀之(1R,2R)-2-氟環丙烷甲硫醯胺(3 g，86.52%)： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 4.88 (ddd, J = 1.5, 3.4, 6.1 Hz, 0.5H), 4.72 (ddd, J = 1.4, 3.5, 6.0 Hz, 0.5H), 2.53 - 2.39 (m, 1H), 1.64 - 1.56 (m, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 1H)。 步驟 3 ： (1S,2R,E)-2- 氟 -N'- 羥基環丙烷甲脒
以與 方法 #5 步驟 3類似之方式來形成羥基脒，藉由急驟管柱(矽膠，100-200目，0-20%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色膠狀之(1S,2R,E)-2-氟-N'-羥基環丙烷甲脒(2.6 g，87.44%)： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 4.84 - 4.63 (m, 1H), 1.91 (dddd, J = 1.9, 7.3, 11.3, 18.5 Hz, 1H), 1.36 - 1.23 (m, 1H), 1.14 (qd, J = 6.9, 11.2 Hz, 1H)。 步驟 4 ： (E)-4-(((E)-( 胺基 ((1S,2R)-2- 氟環丙基 ) 亞甲基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。
藉由急驟管柱(矽膠，100-200目，0-20%乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色油狀之 (E)-4-(((E)-(胺基((1S,2R)-2-氟環丙基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(3.6 g，69.64%)： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.00 - 6.85 (m, 2H), 4.93 (ddd, J = 2.0, 3.2, 6.2 Hz, 0.5H), 4.77 (ddd, J = 2.1, 3.3, 6.1 Hz, 0.5H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.01 - 1.92 (m, 1H), 1.45 - 1.35 (m, 1H), 1.34 - 1.30 (m, 3H), 1.30 - 1.22 (m, 1H)。 步驟 5 ： (E)-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 5 步驟 5類似之方式來進行環化反應。
藉由管柱層析(矽膠，100-200目，30-50%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.5 g，80.97%)： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.44 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 5.08 - 4.88 (m, 1H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.71 - 2.55 (m, 1H), 1.79 - 1.62 (m, 1H), 1.44 - 1.36 (m, 1H), 1.36 - 1.32 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.768分鐘，m/z = 226.1 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #5 步驟 8類似之方式來進行水解反應。
用鹽酸(1M，20 mL)淬滅反應混合物且將pH調節至2，接著用二氯甲烷(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(1.2 g，91.33%)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.52 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.08 - 4.81 (m, 1H), 2.63 (dddd, J = 1.9, 7.0, 11.1, 17.0 Hz, 1H), 1.77 - 1.62 (m, 1H), 1.41 (qd, J = 6.8, 12.1 Hz, 1H)。LCMS Rt = 0.572分鐘，m/z = 198.0 [M + H] +。 步驟 7 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(8.97 mg，7.72%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.51 - 7.40 (m, 1H), 7.37 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.49 - 5.32 (m, 1H), 5.10 - 4.85 (m, 1H), 4.22 - 4.15 (m, 2H), 4.08 - 3.98 (m, 1H), 3.96 - 3.72 (m, 2H), 3.69 - 3.51 (m, 1H), 3.48 - 3.41 (m, 3H), 3.32 - 3.04 (m, 1H), 2.98 (dt, J = 3.5, 9.4 Hz, 2H), 2.69 - 2.55 (m, 3H), 2.49 - 2.39 (m, 1H), 2.39 - 2.29 (m, 2H), 1.74 (br dd, J = 3.7, 7.3 Hz, 5H), 1.69 - 1.59 (m, 2H), 1.44 - 1.31 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.359分鐘，m/z = 726.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘) 滯留時間2.359分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 130 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：50%-80%，10分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(32.58 mg，32.72%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.60 - 7.56 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.48 - 7.39 (m, 2H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 5.38 - 5.13 (m, 1H), 5.12 - 4.89 (m, 1H), 4.88 - 4.72 (m, 1H), 4.34 - 4.22 (m, 1H), 4.19 - 4.05 (m, 1H), 4.05 - 3.97 (m, 1H), 3.96 - 3.91 (m, 1H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.61 (m, 2H), 3.59 - 3.41 (m, 2H), 3.19 (br s, 1H), 3.16 - 3.07 (m, 3H), 3.07 - 3.03 (m, 1H), 3.02 - 2.98 (m, 3H), 2.93 - 2.83 (m, 1H), 2.70 - 2.59 (m, 2H), 2.37 - 2.19 (m, 2H), 2.14 - 2.10 (m, 1H), 2.09 - 2.00 (m, 2H), 1.92 - 1.69 (m, 4H), 1.42 - 1.32 (m, 1H)。LCMS Rt =2.455分鐘，m/z = 730.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.455分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 730.3。 實例 131 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(10.4 mg，6.28%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 1H), 7.65 (br d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 5.39 - 5.19 (m, 1H), 4.53 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.28 - 4.19 (m, 4H), 4.05 - 3.95 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.32 - 3.08 (m, 5H), 2.96 - 2.88 (m, 1H), 2.17 (br s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.08 (s, 2H), 1.92 - 1.86 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.284分鐘，m/z = 750.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘) 滯留時間2.284分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 750.3。 實例 132 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(10.07 mg，15.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.12 (t, J= 1.8 Hz, 1H), 8.04 (dd, J= 1.1, 8.1 Hz, 1H), 7.96 - 7.92 (m, 1H), 7.63 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.51 (m, 2H), 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.45 - 7.41 (m, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 5.38 - 5.27 (m, 1H), 5.26 - 5.09 (m, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 3.99 - 3.90 (m, 1H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 3.75 - 3.65 (m, 1H), 3.60 - 3.42 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.13 - 2.96 (m, 3H), 2.86 - 2.77 (m, 1H), 2.39 - 2.22 (m, 2H), 2.16 - 2.06 (m, 3H), 2.01 - 1.92 (m, 3H), 1.83 - 1.66 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.305分鐘，m/z = 750.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.305分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 750.3 實例 133 ( 方法 1) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-(((E)-(1- 胺基 -2,2- 二氟亞丙基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
在0℃下向(E)-4-乙氧基-4-側氧基-丁-2-烯酸(5 g，34.69 mmol)、1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(12 g，104.27 mmol)於乙腈(100 mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(13.30 g，69.38 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(50 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(E)-4-(((E)-(1-胺基-2,2-二氟亞丙基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(16.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： (E)-4-(((E)-(1- 胺基 -2,2- 二氟亞丙基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
在0℃下向2,2-二氟-N'-羥基-丙脒(2.4 g，19.34 mmol)於二噁烷(100 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(8.02 g，58.02 mmol)及(E)-丁-2-烯二酸O4-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯O1-乙酯(6.06 g，25.14 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之(E)-4-(((E)-(1-胺基-2,2-二氟亞丙基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(3.6 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.510分鐘，m/z = 250.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-[3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ] 丙 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-3-[3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸乙酯(1.1 g，32.04%)。LCMS Rt = 0.633分鐘，m/z = 232.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-[3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ] 丙 -2- 烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
用鹽酸(1M，20 mL)淬滅反應混合物且將pH調節至2，接著用二氯甲烷(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(E)-3-[3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸(1 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 204.0 [M + H] +。 步驟 5 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1,1- 二氟乙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1,1-二氟乙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(2.24 mg，1.90%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.64 (br d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.61 - 7.52 (m, 2H), 7.50 - 7.44 (m, 1H), 5.52 - 5.36 (m, 1H), 4.26 - 4.20 (m, 2H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.95 - 3.76 (m, 2H), 3.71 - 3.53 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.11 - 2.98 (m, 2H), 2.74 - 2.61 (m, 2H), 2.48 - 2.37 (m, 2H), 2.12 (dt, J = 8.1, 19.2 Hz, 4H), 1.93 - 1.78 (m, 5H), 1.75 - 1.64 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.354分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘) 滯留時間2.354分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 134 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(32.88 mg，27.31%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.20 - 8.05 (m, 2H), 7.74 - 7.65 (m, 2H), 7.59 - 7.50 (m, 2H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 5.48 - 5.16 (m, 2H), 5.00 (dt, J = 6.1, 8.4 Hz, 2H), 4.88 - 4.80 (m, 2H), 4.52 - 4.41 (m, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 1H), 3.95 - 3.76 (m, 2H), 3.71 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 2H), 3.41 (br s, 1H), 3.22 - 3.03 (m, 3H), 2.90 (quin, J = 7.1 Hz, 1H), 2.51 - 2.31 (m, 2H), 2.12 (br s, 2H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.93 - 1.84 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.183分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘) 滯留時間2.183分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 760.3。 實例 135 ( 方法 8) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙-2-烯-1-酮(23.62 mg，22.52%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 2H), 7.24 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 9.2, 15.1 Hz, 1H), 5.48 - 5.18 (m, 2H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 4.21 - 4.15 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.90 - 3.70 (m, 2H), 3.68 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 3.63 - 3.50 (m, 1H), 3.46 (d, J = 2.1 Hz, 3H), 3.19 (br d, J = 9.9 Hz, 2H), 3.12 (br s, 1H), 2.99 - 2.88 (m, 1H), 2.46 - 2.39 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 2H), 2.15 (br s, 1H), 2.09 (br d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.94 - 1.83 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.810分鐘，m/z = 698.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.810分鐘，ESI+實驗值[M+H] =698.3。 實例 136 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-乙腈]；B%：55%-85%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(28.97 mg，32.39%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 - 7.65 (m, 1H), 7.55 (dd, J = 1.1, 7.4 Hz, 1H), 7.50 (dt, J = 4.1, 7.8 Hz, 1H), 7.46 - 7.29 (m, 4H), 5.35 - 5.09 (m, 1H), 4.86 - 4.73 (m, 1H), 4.28 - 4.15 (m, 1H), 4.07 - 3.89 (m, 3H), 3.86 - 3.75 (m, 1H), 3.74 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.38 (m, 2H), 3.31 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.01 (m, 5H), 3.00 - 2.95 (m, 3H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.29 - 2.16 (m, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 3H), 1.86 - 1.74 (m, 3H), 1.34 - 1.30 (m, 6H)。LCMS Rt = 3.448分鐘，m/z = 714.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.448分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 714.3。 實例 137 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 羥基四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2S,4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -1,2- 二甲酸 1- 三級丁酯 2- 甲酯
在0℃下向(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸O1-三級丁酯O2-甲酯(10 g，40.77 mmol)於N,N-二甲基甲醛(100 mL)中之溶液中添加咪唑(8.33 g，122.31 mmol)及三級丁基氯二苯基矽烷(33.62 g，122.31 mmol)。在25℃下攪拌混合物3小時。用水(500 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(13.25 g，67.19%)。LCMS Rt = 0.961分鐘，m/z = 483.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-(3- 氯丙基 ) 吡咯啶 -1,2- 二甲酸 1- 三級丁酯 2- 甲酯
在-78℃下向(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(12.2 g，25.22 mmol)於四氫呋喃(200 mL)中之溶液中添加二異丙基胺基鋰(2 M，13.87 mL)持續2小時，繼而在-78℃下添加1-氯-3-碘-丙烷(10.31 g，50.45 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用飽和碳酸氫鈉(50 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 50 mL)萃取水層。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10%二氯甲烷/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-氯丙基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(10 g，70.77%)。LCMS Rt = 0.995分鐘，m/z = 559.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-(3- 氯丙基 ) 吡咯啶 -2- 甲酸甲酯
向(4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-氯丙基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-三級丁酯2-甲酯(9.5 g，16.96 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(77.00 g，675.32 mmol)。在25℃下攪拌混合物0.5小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-氯丙基)吡咯啶-2-甲酸甲酯(9.7 g，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.647分鐘，m/z = 459.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 甲酸甲酯及 (2R,7aR)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 甲酸甲酯
向(4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-氯丙基)吡咯啶-2-甲酸甲酯(9.7 g，16.90 mmol，三氟乙酸鹽)於甲醇(150 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(7.01 g，50.69 mmol)及碘化鉀(280.48 mg，1.69 mmol)。在35℃下攪拌混合物1.5小時。用水(30 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。偵測到兩種非對映異構體且藉由逆相HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 250*100mm#10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：70%-100%，20分鐘)純化粗產物，得到呈白色油狀之(2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-甲酸甲酯(2 g，32.51%)及呈白色油狀之(2R,7aR)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-甲酸甲酯(1.2 g，19.81%)。LCMS Rt = 3.095分鐘，m/z = 423.2 [M + H] +。 步驟 5 ： ((2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲醇
在0℃下向(2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-甲酸甲酯(2 g，4.72 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加氫化鋰鋁(358.34 mg，9.44 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。用十水合硫酸鈉淬滅反應混合物。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(1.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.734分鐘，m/z = 395.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 4-( 苯甲硫基 )-2-(((2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7- 氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 5類似之方式來進行取代反應。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之4-(苯甲硫基)-2-(((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.6 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.739分鐘，m/z = 698.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 4-( 苯甲硫基 )-2-(((2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 6類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈棕色油狀之4-(苯甲硫基)-2-(((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(1 g，32.58%)。LCMS Rt = 0.782分鐘，m/z = 824.3 [M + H] +。 步驟 8 ： 2-(((2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-4- 氯 -7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之2-(((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-4-氯-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(400 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.982分鐘，m/z = 736.2 [M + H] +。 步驟 9 ： (R)-3-((2-(((2R,7aS)-2-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：45%-85%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((2-(((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 mg，21.38%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.872分鐘，m/z = 900.4 [M + H] +。 步驟 10 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 羥基六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在25℃下將(R)-3-((2-(((2R,7aS)-2-((三級丁基二苯基矽基)氧基)六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，98.46 umol，三氟乙酸鹽)、N,N-二乙基乙胺;三氫氟酸鹽(158.73 mg，984.64 umol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物攪拌12小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-羥基六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(65 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.704分鐘，m/z = 662.3 [M + H] +。 步驟 11 ： (2R,7aS)-7a-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -2- 基 ) 氧基 ) 甲基 ) 六氫 -1H- 吡咯嗪 -2- 醇
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(2R,7aS)-7a-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)六氫-1H-吡咯嗪-2-醇(66 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.549分鐘，m/z = 562.2 [M + H] +。 步驟 12 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 羥基四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-羥基四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(12.33 mg，22.55%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.58 - 7.50 (m, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.26 (td, J = 2.9, 16.8 Hz, 1H), 5.76 - 5.65 (m, 1H), 5.47 - 5.30 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 4.19 (br d, J = 1.8 Hz, 2H), 4.15 - 3.97 (m, 1H), 3.87 (br s, 1H), 3.78 - 3.63 (m, 1H), 3.63 - 3.50 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 (br dd, J = 4.9, 10.3 Hz, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 1H), 3.00 - 2.85 (m, 1H), 2.65 (br dd, J = 5.8, 10.1 Hz, 2H), 2.42 (br s, 2H), 2.26 (br dd, J = 6.0, 13.0 Hz, 3H), 1.94 - 1.84 (m, 2H), 1.72 (dd, J = 6.3, 12.9 Hz, 1H)。LCMS Rt = 2.554分鐘，m/z = 616.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.554分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 616.2。 實例 138 ( 方法 9) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #9 步驟 9類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-70%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(18.54 mg，25.61%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.19 (m, 1H), 8.15 (dd, J = 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 0.8, 8.2 Hz, 1H), 7.80 - 7.69 (m, 2H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.58 - 7.50 (m, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 1H), 5.50 - 5.29 (m, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 3H), 4.10 - 3.98 (m, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 1H), 3.70 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.03 - 2.93 (m, 2H), 2.66 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 2.61 (br s, 1H), 2.50 - 2.42 (m, 1H), 2.39 - 2.32 (m, 1H), 2.00 - 1.99 (m, 1H), 1.96 - 1.92 (m, 2H), 1.88 - 1.78 (m, 4H), 1.69 - 1.60 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.741分鐘，m/z = 698.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.741分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 698.2。 實例 139 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(37.78 mg，24.60%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.16 - 8.07 (m, 1H), 8.05 - 7.97 (m, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.31 - 7.23 (m, 1H), 7.17 - 7.08 (m, 1H), 5.34 - 5.14 (m, 1H), 5.07 - 4.83 (m, 1H), 4.51 - 4.41 (m, 1H), 4.34 - 4.03 (m, 6H), 3.99 - 3.86 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.22 (br dd, J = 6.6, 11.8 Hz, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 3.06 - 3.00 (m, 1H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 3H), 1.91 - 1.77 (m, 3H), 1.76 - 1.61 (m, 1H), 1.39 - 1.29 (m, 1H)。LCMS Rt = 3.150分鐘，m/z = 744.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘) 滯留時間3.150分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 140 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(32.73 mg，35.19%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 (t, J= 1.9 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 1H), 5.49 - 5.17 (m, 2H), 5.08 - 4.85 (m, 1H), 4.22 (br d, J = 1.9 Hz, 2H), 4.05 - 3.95 (m, 1H), 3.93 - 3.67 (m, 2H), 3.63 - 3.51 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.04 (br s, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.68 - 2.59 (m, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 1H), 2.35 - 2.29 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 3H), 1.93 - 1.63 (m, 5H), 1.40 - 1.28 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.271分鐘，m/z = 744.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.271分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 744.3 實例 141 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-((1R,2S)-2- 氟環丙基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-((1R,2S)-2-氟環丙基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(5.26 mg，4.67%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.85 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 5.08 - 4.85 (m, 1H), 4.85 - 4.70 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 2H), 3.92 - 3.60 (m, 3H), 3.58 - 3.49 (m, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 1H), 3.32 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.08 (m, 1H), 3.06 - 2.85 (m, 5H), 2.73 - 2.49 (m, 4H), 2.32 - 2.16 (m, 3H), 1.93 - 1.86 (m, 2H), 1.85 - 1.64 (m, 5H), 1.63 - 1.51 (m, 2H), 1.40 - 1.28 (m, 1H)。LCMS Rt = 3.142分鐘，m/z = 712.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.142分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 712.3。 實例 142 ( 方法 2) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1- 溴 -8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘
以與 方法 #2 步驟 1類似之方式來進行MOM保護反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-溴-8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘(2.8 g，62.92%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.64 - 7.55 (m, 2H), 7.47 - 7.38 (m, 1H), 7.31 - 7.28 (m, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.44 (s, 3H)。LCMS Rt = 0.953分鐘，m/z = 302.0 [M + H] +。 步驟 2 ： 2-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
以與 方法 #2 步驟 2類似之方式來形成硼酸酯。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈綠色油狀之2-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.5 g，46.34%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 - 7.66 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 2H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.55 - 3.53 (m, 3H), 1.50 - 1.46 (m, 12H)。LCMS Rt = 0.758分鐘，m/z = 348.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(24 mg，7.14%)。LCMS Rt = 1.808分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 5- 氯 -4-(8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 ) 萘 -2- 醇
以與 方法 #2 步驟 6類似之方式來進行去Boc及MOM保護反應。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之5-氯-4-(8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)萘-2-醇(20 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 5 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(2.30 mg，10.43%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (s, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.46 - 7.34 (m, 3H), 7.27 - 7.15 (m, 1H), 6.67 - 6.48 (m, 1H), 6.32 - 6.16 (m, 1H), 5.67 (ddd, J = 2.3, 6.7, 10.3 Hz, 1H), 5.42 - 5.16 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 2H), 4.14 - 4.02 (m, 1H), 3.99 - 3.75 (m, 2H), 3.70 - 3.62 (m, 1H), 3.59 - 3.51 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.22 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.17 - 3.13 (m, 1H), 2.99 - 2.91 (m, 1H), 2.42 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (br dd, J = 5.4, 7.9 Hz, 3H), 1.91 - 1.70 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.760分鐘，m/z = 634.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.760分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 634.2。 實例 143 ( 方法 9) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(4- 甲基噁唑 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(4- 甲基噁唑 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #9 步驟 9類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈白色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(4-甲基噁唑-2-基)丙-2-烯-1-酮(27.68 mg，37.08%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.15 (m, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.57 (m, 3H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.21 - 7.09 (m, 1H), 5.48 - 5.31 (m, 1H), 4.21 - 4.16 (m, 2H), 4.09 - 3.96 (m, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 1H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.68 - 3.50 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.68 - 2.55 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 2.37 - 2.31 (m, 1H), 2.29 - 2.22 (m, 1H), 2.18 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 2.14 (br s, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 4H), 1.68 - 1.60 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.198分鐘，m/z = 681.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.198分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 681.3。 實例 144 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。在真空中濃縮粗產物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(2.2 g，55.50%)。LCMS Rt = 0.730分鐘，m/z = 218.1 [M + H]+。 步驟 2 ： (E)-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 # 1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。用鹽酸(1M，20 mL)淬滅反應混合物且將pH調節至2，接著用二氯甲烷(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(870 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.344分鐘，m/z = 190.0 [M + H] +。 步驟 3 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空下濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈橙色固體狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(140 mg，20.08%)。LCMS Rt = 0.736分鐘，m/z = 646.3 [M + H]+。 步驟 5 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc反應之去保護。用飽和碳酸鈉溶液(5 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色膠狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(59 mg，粗物質)。LCMS Rt = 0.629分鐘，m/z = 546.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(6.94 mg，10.15%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.20 (m, 1H), 8.12 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.42 - 7.27 (m, 2H), 7.14 - 6.84 (m, 1H), 4.54 - 4.47 (m, 1H), 4.33 (br d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.24 - 4.12 (m, 3H), 4.01 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.54 (m, 3H), 3.31 - 3.18 (m, 3H), 2.83 - 2.72 (m, 3H), 2.15 - 2.00 (m, 4H), 1.91 (br s, 2H), 1.82 - 1.72 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.337分鐘，m/z = 718.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.337分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 718.2。 實例 145 ( 方法 4) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲氧基 )-7-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
以與 方法 #4 步驟 6類似之方式來進行布赫瓦爾德反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之4-(苯甲氧基)-7-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.26 g，60.07%)。LCMS Rt = 0.876分鐘，m/z = 618.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
以與 方法 # 4 步驟 7類似之方式來進行氫化反應。過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈棕色固體狀之7-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(700 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.735分鐘，m/z = 528.2 [M + H] +。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 7-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基酯
以與 方法 # 4 步驟 8類似之方式來進行磺醯化反應。用飽和碳酸氫鈉(300 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之三氟甲烷磺酸7-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(660 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.857分鐘，m/z = 660.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #4 步驟 9類似之方式來進行取代反應，藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈棕色油狀之(R)-3-((7-(8-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(420 mg，59.14%)。LCMS Rt = 0.816分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 5- 氯 -4-(2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 )-5,6- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(8H)- 基 ) 萘 -2- 醇
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc及MOM基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之5-氯-4-(2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-基)萘-2-醇(20 mg，16.72%)。LCMS Rt = 0.652，m/z = 566.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -3- 羥基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-3-羥基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(1.78 mg，7.76%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.69 - 7.60 (m, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.03 - 6.88 (m, 2H), 6.66 - 6.49 (m, 1H), 6.31 - 6.16 (m, 1H), 5.73 - 5.60 (m, 1H), 5.38 - 5.16 (m, 1H), 4.90 - 4.69 (m, 1H), 4.24 (br d, J = 17.3 Hz, 1H), 4.13 - 3.98 (m, 2H), 3.96 - 3.64 (m, 3H), 3.63 - 3.48 (m, 2H), 3.47 - 3.34 (m, 1H), 3.32 - 3.16 (m, 3H), 3.16 - 3.01 (m, 3H), 3.00 - 2.89 (m, 4H), 2.65 - 2.55 (m, 1H), 2.13 (br d, J = 7.0 Hz, 3H), 2.09 - 2.03 (m, 2H), 1.82 (br s, 3H)。LCMS Rt = 2.113分鐘，m/z = 620.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.113分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 620.3。 實例 146 ( 方法 1) ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (Z)-N'- 羥基新戊脒
以與 方法 #1 步驟 1類似之方式來形成羥基脒。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈藍色固體狀之(Z)-N'-羥基新戊脒(3.54 g，25%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.91 - 8.76 (m, 1H), 5.27 - 5.13 (m, 2H), 1.08 (s, 9H)。 步驟 3 ： (E)-4-(((Z)-(1- 胺基 -2,2- 二甲基亞丙基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-4-(((Z)-(1-胺基-2,2-二甲基亞丙基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(1.14 g，56%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.06 - 6.87 (m, 2H), 4.88 - 4.71 (m, 2H), 4.35 - 4.18 (m, 2H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.30 - 1.26 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.636分鐘，m/z = 242.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化粗物質，得到呈無色油狀之(E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(730 mg，68%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.05 - 6.93 (m, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.37 - 1.32 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.907分鐘，m/z = 224.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
在0℃下用鹽酸(6 M，10 mL)淬滅反應混合物以調節pH = 2且用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(330 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.64 - 7.55 (m, 1H), 7.08 - 6.98 (m, 1H), 1.44 - 1.39 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.455分鐘，m/z = 196.1 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(19.4 mg，22.04%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.10 (m, 1H), 8.18 - 8.12 (m, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.48 - 7.36 (m, 2H), 5.50 - 5.17 (m, 2H), 4.30 - 4.10 (m, 3H), 4.03 (br s, 1H), 3.94 - 3.61 (m, 2H), 3.47 (s, 3H), 3.24 - 3.05 (m, 3H), 2.91 (br s, 1H), 2.36 (br d, J = 6.1 Hz, 3H), 2.13 (br s, 3H), 1.92 - 1.84 (m, 2H), 1.39 (d, J = 7.9 Hz, 9H)。LCMS Rt = 2.401分鐘，m/z = 742.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.401分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 742.3。 實例 147 ( 方法 2) ： (R,E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(11.98 mg，12.76%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.48 - 7.29 (m, 2H), 5.51 - 5.31 (m, 1H), 4.23 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.84 (m, 1H), 3.83 - 3.75 (m, 1H), 3.69 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.03 - 2.93 (m, 2H), 2.67 - 2.56 (m, 2H), 2.46 (dt, J = 6.0, 7.8 Hz, 1H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 1.93 (br s, 1H), 1.90 - 1.76 (m, 5H), 1.69 - 1.59 (m, 2H), 1.40 (d, J = 8.0 Hz, 9H)。LCMS Rt = 2.358分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.358分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 148 ( 方法 4) ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：50%-85%，10分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(48.81 mg，49.16%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.84 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.56 - 7.45 (m, 2H), 7.41 - 7.28 (m, 4H), 5.32 - 5.09 (m, 1H), 4.90 - 4.71 (m, 1H), 4.25 - 4.09 (m, 1H), 4.06 - 3.85 (m, 3H), 3.84 - 3.60 (m, 3H), 3.56 - 3.37 (m, 2H), 3.31 - 3.17 (m, 1H), 3.15 - 2.99 (m, 4H), 2.98 - 2.93 (m, 3H), 2.92 - 2.78 (m, 1H), 2.66 - 2.56 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 5H), 1.90 - 1.71 (m, 3H), 1.39 - 1.31 (m, 9H)。LCMS Rt = 3.572分鐘，m/z = 728.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.572分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 149 ( 方法 4) ： (R,E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-3-(3-( 三級丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 )-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：50%-80%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-3-(3-(三級丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(21.33 mg，23.55%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 - 7.81 (m, 1H), 7.68 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.57 - 7.46 (m, 2H), 7.46 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 4.95 - 4.66 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 1H), 4.18 - 3.77 (m, 4H), 3.76 - 3.60 (m, 2H), 3.57 - 3.38 (m, 2H), 3.16 (br s, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 3.05 - 2.85 (m, 5H), 2.66 - 2.51 (m, 3H), 2.43 - 2.26 (m, 2H), 1.92 - 1.85 (m, 2H), 1.85 - 1.71 (m, 4H), 1.59 (br dd, J = 6.9, 12.3 Hz, 2H), 1.41 - 1.30 (m, 9H) 。LCMS Rt = 3.512分鐘，m/z = 710.4 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.512分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.4。 實例 150 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #4 步驟 9類似之方式來進行取代反應。
在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[(水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：55%-85%，8分鐘)純化，得到呈棕色油狀之3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(150 mg，33.55%)。LCMS Rt = 0.884分鐘，m/z = 632.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。
在真空中濃縮混合物，得到呈橙色油狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(143 mg粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.628分鐘，m/z = 532.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸鹽)-乙腈]；B%：30%-70%，8分鐘)純化，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(7.7 mg，4.85%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.57 - 7.47 (m, 2H), 7.45 - 7.34 (m, 2H), 7.34 - 7.20 (m, 2H), 7.13 - 6.80 (m, 1H), 4.49 - 4.35 (m, 1H), 4.24 - 4.13 (m, 3H), 4.11 - 3.95 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 3.75 - 3.61 (m, 2H), 3.55 - 3.48 (m, 1H), 3.29 - 3.18 (m, 3H), 3.13 - 3.00 (m, 5H), 2.79 - 2.72 (m, 2H), 2.64 (br d, J = 15.1 Hz, 2H), 2.00 (br dd, J = 6.5, 12.1 Hz, 2H), 1.92 - 1.81 (m, 4H), 1.77 - 1.68 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.367分鐘，m/z = 704.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.367分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 704.3。 實例 151 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-( 苯甲硫基 )-7- 氯 -8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
向4-(苯甲硫基)-2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(2 g，5.88 mmol)及((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(1.40 g，8.82 mmol)於二噁烷(3 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(2.28 g，17.64 mmol)。在80℃下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色固體狀之4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(2.3 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.98 - 8.89 (m, 1H), 7.48 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 5.45 - 5.33 (m, 1H), 5.29 - 5.20 (m, 1H), 4.66 (s, 2H), 3.38 - 3.20 (m, 4H), 3.06 - 3.00 (m, 1H), 2.30 - 2.12 (m, 3H), 2.05 - 1.96 (m, 3H)。LCMS Rt = 0.577分鐘，m/z = 462.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-( 苯甲硫基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
向4-(苯甲硫基)-7-氯-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(700.00 mg，1.51 mmol)於二噁烷(13 mL)及水(4 mL)中之溶液中添加(8-氯-7-氟-1-萘基)硼酸(441.15 mg，1.97 mmol)、磷酸鉀(962.90 mg，4.54 mmol)及甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (118.97 mg，151.21 umol)，接著將混合物加熱至60℃且於氮氣氛圍下攪拌2小時。用水(20 mL)稀釋混合物，用二氯甲烷(2 x 20 mL)萃取。將合併之有機層在真空中濃縮至乾且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-12%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈黃色油狀之4-(苯甲硫基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(700 mg，76.26%)。LCMS Rt = 0.859分鐘，m/z = 606.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 4- 氯 -7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 # 1 步驟 7類似之方式來進行氯化反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之4-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(320 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.573分鐘，m/z = 518.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。在0℃下用水(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(510 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.625分鐘，m/z = 683.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(500 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.564分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2S,7aR)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(2 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 2 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2S,7aR)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(24.46 mg，5.00%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 - 9.11 (m, 1H), 8.22 - 7.99 (m, 2H), 7.76 - 7.66 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.71 - 6.52 (m, 1H), 6.34 - 6.19 (m, 1H), 5.70 (ddd, J = 2.2, 6.1, 10.3 Hz, 1H), 5.44 - 5.34 (m, 1H), 4.29 - 4.13 (m, 2H), 4.12 - 3.93 (m, 1H), 3.92 - 3.81 (m, 1H), 3.77 - 3.53 (m, 2H), 3.52 - 3.42 (m, 4H), 3.23 - 3.07 (m, 3H), 2.98 - 2.87 (m, 1H), 2.47 - 2.22 (m, 4H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.94 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.108分鐘，m/z = 636.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.108分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.2。 實例 152 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-(((Z)-( 胺基 ( 氧雜環丁烷 -3- 基 ) 亞甲基 ) 胺基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(E)-4-(((Z)-(胺基(氧雜環丁烷-3-基)亞甲基)胺基)氧基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(1.1 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.430分鐘，m/z = 242.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。
藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.1 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.671分鐘，m/z = 224.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(570 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.221分鐘，m/z = 196.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(7.09 mg，5.00%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.31 - 9.22 (m, 1H), 8.23 - 8.13 (m, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.21 (m, 2H), 5.42 - 5.19 (m, 1H), 4.99 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 2H), 4.82 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.55 - 4.40 (m, 2H), 4.28 (br d, J = 11.5 Hz, 2H), 4.25 - 4.22 (m, 1H), 4.21 - 4.17 (m, 2H), 3.98 (dt, J = 5.8, 9.8 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.29 - 3.16 (m, 4H), 2.97 - 2.93 (m, 1H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 2.19 - 2.14 (m, 1H), 2.13 - 2.07 (m, 1H), 1.96 - 1.78 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.131分鐘，m/z = 742.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.131分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 742.3。 實例 153 ( 方法 2) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(1.77 mg，1.08%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 1H), 7.59 (br d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 4.99 (dd, J = 6.1, 8.4 Hz, 2H), 4.82 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.54 - 4.42 (m, 1H), 4.42 (br s, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 1H), 4.22 - 4.09 (m, 4H), 3.96 (dt, J = 6.1, 9.4 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.32 - 3.19 (m, 1H), 3.02 - 2.92 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 1.95 - 1.90 (m, 1H), 1.95 - 1.73 (m, 5H), 1.70 - 1.58 (m, 1H), 1.71 - 1.58 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.682分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.682分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 154 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(13.28 mg，9.99%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 3H), 7.47 - 7.38 (m, 2H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 5.36 - 5.14 (m, 1H), 5.04 - 4.95 (m, 2H), 4.91 - 4.74 (m, 3H), 4.53 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.15 (m, 1H), 4.11 - 3.91 (m, 3H), 3.90 - 3.64 (m, 3H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.33 - 3.21 (m, 1H), 3.16 - 3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.97 (m, 3H), 2.95 - 2.81 (m, 1H), 2.62 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.40 - 2.29 (m, 1H), 2.23 - 2.19 (m, 1H), 2.18 - 2.14 (m, 1H), 2.08 (br s, 2H), 1.94 - 1.72 (m, 3H)。LCMS Rt =3.298分鐘，m/z = 728.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.298分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 155 ( 方法 1) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-55%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(19.46 mg，13.44%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.07 - 8.02 (m, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 5.50 - 5.34 (m, 1H), 5.00 (dt, J = 6.0, 8.3 Hz, 2H), 4.83 (td, J = 6.3, 10.4 Hz, 2H), 4.52 - 4.41 (m, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 2H), 3.70 - 3.52 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.99 (qd, J = 5.1, 10.3 Hz, 2H), 2.66 - 2.56 (m, 2H), 2.50 - 2.29 (m, 3H), 1.92 - 1.74 (m, 5H), 1.65 (br dd, J = 4.8, 7.4 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.122分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.122分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 156 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(14.23 mg，7.11%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.58 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.49 (m, 2H), 7.46 - 7.43 (m, 1H), 7.43 - 7.39 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 5.02 - 4.96 (m, 2H), 4.89 - 4.78 (m, 3H), 4.51 - 4.42 (m, 1H), 4.27 (br dd, J = 4.3, 17.3 Hz, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 3H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.59 - 3.42 (m, 2H), 3.34 - 3.18 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 3.03 (br s, 4H), 2.69 - 2.58 (m, 3H), 2.32 - 2.11 (m, 3H), 1.95 - 1.92 (m, 1H), 1.90 - 1.76 (m, 4H), 1.65 (dtd, J = 3.4, 7.8, 11.6 Hz, 2H)。LCMS Rt = 3.036分鐘，m/z = 710.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.036分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 157 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：50%-80%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(12.93 mg，18.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 1.1, 8.1 Hz, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.52 - 7.48 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.00 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.35 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.34 - 5.15 (m, 1H), 4.26 - 4.13 (m, 2H), 4.08 - 3.96 (m, 1H), 3.94 - 3.72 (m, 2H), 3.68 - 3.50 (m, 1H), 3.47 - 3.42 (m, 3H), 3.25 - 3.04 (m, 3H), 2.95 - 2.84 (m, 1H), 2.49 - 2.39 (m, 1H), 2.38 - 2.29 (m, 1H), 2.20 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 2.07 (br s, 2H), 1.92 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.015分鐘，m/z = 736.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.015分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 736.2。 實例 158 ( 方法 2- 主方法 ) ： 1-((R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1- 溴 -3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘
在0℃下向4-溴萘-2-醇(8 g，35.86 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(23.18 g，179.32 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加氯(甲氧基)甲烷(7.51 g，93.28 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。在0℃下用飽和碳酸氫鈉(20 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈紅色油狀之1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(9 g，93.95%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.08 - 8.01 (m, 1H), 7.66 - 7.58 (m, 1H), 7.48 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.28 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.41 (s, 3H)。LCMS Rt = 0.895分鐘，m/z = 266.0 [M + H] +。 步驟 2 ： 2-(3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
將1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(5 g，18.72 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(4.75 g，18.72 mmol)、[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) (1.37 g，1.87 mmol)及乙酸鉀(3.67 g，37.44 mmol)於二噁烷(300 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 250*100mm 10u；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：65%-95%，20分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之2-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(5 g，85.02%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.62 - 8.55 (m, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.40 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.33 (tt, J= 5.3, 7.2 Hz, 2H), 5.22 (s, 2H), 3.43 (s, 3H), 1.33 (s, 12H)。LCMS Rt = 0.929分鐘，m/z = 314.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (3R)-3-[(2,7- 二氯 -8- 氟 - 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )- 甲基 - 胺基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向2,4,7-三氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶(7 g，27.73 mmol)於N,N-二甲基甲醛(15 mL)中之溶液中添加(3R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4.44 g，22.18 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(10.75 g，83.18 mmol)，且在25℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(50 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色固體狀之(3R)-3-[(2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-甲基-胺基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(13 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.869分鐘，m/z = 416.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(3R)-3-[(2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-甲基-胺基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5.9 g，14.17 mmol)於二噁烷(70 mL)中之溶液中添加[(2R,8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲醇(6.77 g，42.52 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(7.33 g，56.69 mmol)。接著在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，30-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5.7 g，74%)。LCMS Rt = 0.655分鐘，m/z = 539.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(3-( 甲氧基甲氧基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(590 mg，1.09 mmol)、2-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(684.92 mg，2.18 mmol)、磷酸鉀(694.12 mg，3.27 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(85.76 mg，109.00 umol)於二噁烷(10 mL)及水(3 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，接著在60℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(三氟乙酸)-乙腈]；B%：30%-60%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(230 mg，31%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 2.241分鐘，m/z = 690.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 4-(8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 ) 萘 -2- 醇
在25℃下將(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(49 mg，70.93 umol)於二氯甲烷(0.5 mL)及三氟乙酸(0.5 mL)中之混合物攪拌0.5小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之4-(8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)萘-2-醇(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.435分鐘，m/z = 546.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(3- 羥基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(3.34 mg，6%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.50 (s, 1H), 8.06 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.88 (br d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.75 - 7.70 (m, 1H), 7.58 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 2H), 6.85 (dt, J= 10.4, 16.4 Hz, 1H), 6.55 - 6.45 (m, 1H), 5.95 (ddd, J= 2.3, 7.3, 10.1 Hz, 1H), 5.67 - 5.57 (m, 1H), 5.48 (br s, 1H), 4.56 - 4.40 (m, 2H), 4.36 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.02 (m, 1H), 3.95 - 3.87 (m, 1H), 3.82 - 3.81 (m, 1H), 3.81 (dd, J= 7.6, 12.8 Hz, 1H), 3.74 (br s, 3H), 3.53 - 3.41 (m, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 1H), 3.23 - 3.14 (m, 1H), 2.67 - 2.59 (m, 2H), 2.57 - 2.46 (m, 2H), 2.42 - 2.31 (m, 1H), 2.42 - 2.30 (m, 1H), 2.19 - 2.11 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.711分鐘，m/z = 600.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.711分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 600.3。 實例 159 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 氧雜環丁烷 -3- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：25%-75%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(25.43 mg，19.36%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.19 (m, 1H), 8.15 (dd, J = 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.59 - 7.40 (m, 3H), 5.39 - 5.18 (m, 1H), 5.00 (dt, J = 6.1, 8.2 Hz, 2H), 4.89 - 4.77 (m, 2H), 4.53 - 4.43 (m, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 4.09 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 2H), 3.71 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.20 - 3.06 (m, 3H), 2.96 - 2.86 (m, 1H), 2.49 - 2.41 (m, 1H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.26 - 2.22 (m, 2H), 2.13 (br s, 1H), 2.10 - 2.05 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.159分鐘，m/z = 742.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.159分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 742.3 實例 160 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(40.11 mg，11.07%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.19 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 5.49 - 5.37 (m, 1H), 5.35 (br d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.25 - 4.20 (m, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.09 - 3.99 (m, 1H), 3.94 - 3.86 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.69 - 3.51 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.21 - 3.10 (m, 3H), 3.08 (br d, J = 2.9 Hz, 1H), 2.96 - 2.84 (m, 1H), 2.51 - 2.40 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 1H), 2.24 (br d, J = 5.5 Hz, 1H), 2.12 (br s, 1H), 2.07 (br d, J = 5.4 Hz, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 3H), 1.38 - 1.27 (m, 6H)。LCMS Rt = 2.285分鐘，m/z = 728.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.285分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 161 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(氧雜環丁烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(51.9 mg，15.73%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 - 7.82 (m, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.61 - 7.49 (m, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 2H), 7.38 - 7.27 (m, 2H), 4.92 - 4.73 (m, 1H), 4.30 - 4.14 (m, 1H), 4.08 - 3.88 (m, 3H), 3.87 - 3.64 (m, 3H), 3.61 - 3.40 (m, 2H), 3.34 - 3.06 (m, 3H), 3.04 - 2.92 (m, 5H), 2.68 - 2.56 (m, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 2H), 2.13 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 1.93 (br d, J = 5.9 Hz, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 4H), 1.69 - 1.57 (m, 2H), 1.14 - 1.07 (m, 2H), 1.04 - 0.95 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.268分鐘，m/z = 694.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.268分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 694.3。 實例 162 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：55%-90%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(10.21 mg，5.84%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.45 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.16 - 6.88 (m, 1H), 5.35 - 5.14 (m, 1H), 4.42 (q, J = 8.3 Hz, 1H), 4.22 (br d, J = 17.0 Hz, 1H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 4.09 - 4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.98 (m, 1H), 3.97 - 3.90 (m, 1H), 3.89 - 3.84 (m, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.71 - 3.62 (m, 1H), 3.61 - 3.46 (m, 2H), 3.23 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.16 - 3.01 (m, 8H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.66 (br d, J = 15.1 Hz, 1H), 2.16 - 2.02 (m, 3H), 1.92 - 1.76 (m, 3H)。LCMS Rt =3.440分鐘，m/z = 722.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.440分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 722.3。 實例 163 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(5.06 mg，7.33%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 8.07 - 8.02 (m, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.58 - 7.51 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 1H), 5.44 - 5.18 (m, 1H), 4.58 - 4.48 (m, 1H), 4.36 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.20 (m, 4H), 4.20 - 4.15 (m, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.64 - 3.60 (m, 3H), 3.31 - 3.19 (m, 3H), 3.19 - 3.15 (m, 1H), 3.01 - 2.90 (m, 1H), 2.08 (br d, J = 9.5 Hz, 3H), 1.95 - 1.82 (m, 3H), 1.31 - 1.31 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.344分鐘，m/z = 736.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.344分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.2。 實例 164 ( 方法 1) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(甲酸)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(5.06 mg，7.33%，甲酸鹽)。 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.21 (m, 1H), 8.20 - 8.07 (m, 1H), 8.05 - 7.95 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 7.19 - 7.13 (m, 1H), 5.35 - 5.14 (m, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.34 - 4.25 (m, 1H), 4.25 - 4.12 (m, 4H), 4.11 - 4.03 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.26 - 3.20 (m, 1H), 3.17 (br d, 2H), 3.04 (br s, 1H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.40 - 2.36 (m, 3H), 2.10 - 1.99 (m, 3H), 1.86 - 1.75 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.212分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.212分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 700.3。 實例 165 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-65%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(20.76 mg，17.20%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.13 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.58 - 7.54 (m, 2H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.09 - 6.78 (m, 1H), 5.42 - 5.26 (m, 1H), 4.14 (s, 2H), 4.01 - 3.91 (m, 1H), 3.87 - 3.67 (m, 2H), 3.58 - 3.46 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.01 - 2.92 (m, 2H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.39 - 2.30 (m, 2H), 1.81 - 1.71 (m, 5H), 1.65 - 1.53 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.364分鐘，m/z = 718.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.364分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 718.2。 實例 166 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：55%-90%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(51.9 mg，15.73%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.74 - 7.73 (m, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 2H), 7.55 - 7.44 (m, 2H), 7.44 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.17 - 6.88 (m, 1H), 4.94 - 4.71 (m, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 1H), 4.06 - 3.88 (m, 3H), 3.86 - 3.61 (m, 3H), 3.58 - 3.43 (m, 2H), 3.32 - 3.17 (m, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 3.04 - 2.90 (m, 5H), 2.66 - 2.54 (m, 3H), 2.33 - 2.09 (m, 3H), 1.92 (br d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.88 - 1.73 (m, 4H), 1.67 - 1.55 (m, 2H)。LCMS Rt = 3.110分鐘，m/z = 704.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.110分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 704.3。 實例 167 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(372.29 mg，48.40%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.16 (m, 1H), 8.15 - 8.09 (m, 1H), 8.01 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.46 (m, 1H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 5.50 - 5.29 (m, 1H), 4.31 - 4.15 (m, 2H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.68 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 3H), 3.20 - 3.01 (m, 3H), 2.74 - 2.62 (m, 2H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 2H), 1.86 (tt, J = 6.6, 12.9 Hz, 4H), 1.75 - 1.64 (m, 2H), 1.32 (dd, J = 7.0, 8.9 Hz, 6H)。LCMS Rt = 3.000分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.000分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 168 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4- 側氧基 -4-( 丙脒基氧基 ) 丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-4-側氧基-4-(丙脒基氧基)丁-2-烯酸乙酯(7.3g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.508分鐘，m/z = 214.1 [M + H]+。 步驟 2 ： (E)-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(5g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.595分鐘，m/z = 196.1 [M + H]+。 步驟 4 ： (E)-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。
在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(4g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.435分鐘，m/z = 168.1 [M + H]+。 步驟 5 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。
在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(7.5 mg，6.45%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 - 7.80 (m, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.56 - 7.45 (m, 2H), 7.39 (dt, J = 3.8, 7.8 Hz, 1H), 7.33 - 7.19 (m, 2H), 7.17 - 7.07 (m, 1H), 4.45 - 4.32 (m, 1H), 4.24 - 4.00 (m, 4H), 3.98 - 3.90 (m, 2H), 3.87 - 3.77 (m, 1H), 3.75 - 3.62 (m, 2H), 3.61 - 3.46 (m, 2H), 3.29 - 3.13 (m, 2H), 3.12 - 3.08 (m, 3H), 2.97 (br s, 2H), 2.80 - 2.72 (m, 2H), 2.66 - 2.54 (m, 3H), 1.89 - 1.71 (m, 6H), 1.62 - 1.53 (m, 2H), 1.32 - 1.25 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.059分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間1.059分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 169 ( 方法 2) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈白色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(7.45 mg，6.17%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.21 (m, 1H), 8.15 - 8.07 (m, 1H), 8.04 - 7.98 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 4H), 3.96 - 3.88 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.28 - 3.19 (m, 1H), 2.98 - 2.91 (m, 2H), 2.76 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.61 - 2.55 (m, 2H), 1.90 (br d, J = 6.3 Hz, 1H), 1.86 - 1.73 (m, 5H), 1.64 - 1.57 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.686分鐘，m/z = 696.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.686分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3。 實例 170 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色油狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(15.56 mg，23.79%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 - 7.79 (m, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 1H), 7.59 - 7.55 (m, 1H), 7.54 - 7.46 (m, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 2H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 7.35 - 7.31 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 1H), 3.99 - 3.77 (m, 3H), 3.76 - 3.57 (m, 3H), 3.55 - 3.34 (m, 2H), 3.31 - 3.16 (m, 2H), 3.16 - 3.01 (m, 2H), 2.83 - 2.70 (m, 3H), 2.51 (br s, 3H), 2.30 - 2.29 (m, 1H), 2.28 (br s, 1H), 2.26 - 2.08 (m, 4H), 2.01 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 1.89 - 1.50 (m, 6H), 1.32 (t, J = 7.6 Hz, 3H)。LCMS Rt = 3.204分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.204分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 171 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 乙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色油狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-乙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(18.13 mg，17.19%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.75 - 7.67 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.49 - 7.34 (m, 2H), 5.51 - 5.29 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 4.02 (br dd, J= 8.7, 12.3 Hz, 1H), 3.90 - 3.76 (m, 1H), 3.54 (br s, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.03 - 2.91 (m, 2H), 2.79 (qd, J= 7.6, 10.9 Hz, 2H), 2.60 (qd, J= 6.8, 9.8 Hz, 2H), 2.47 - 2.39 (m, 1H), 2.33 (br s, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.68 - 1.57 (m, 2H), 1.32 (td, J= 7.5, 10.1 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.227分鐘，m/z = 696.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.227分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3。 實例 172 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(15.54 mg，15.26%)：1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.57 - 7.47 (m, 2H), 7.39 (dt, J = 3.1, 7.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 7.13 - 7.03 (m, 1H), 4.42 - 4.32 (m, 1H), 4.13 (br d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 2H), 3.99 - 3.87 (m, 3H), 3.84 - 3.63 (m, 3H), 3.60 - 3.48 (m, 2H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 3.12 - 3.09 (m, 3H), 3.09 - 3.04 (m, 1H), 2.96 - 2.88 (m, 2H), 2.65 (br s, 3H), 1.91 - 1.85 (m, 2H), 1.82 - 1.71 (m, 4H), 1.60 - 1.53 (m, 2H), 1.11 - 1.05 (m, 2H), 0.97 - 0.90 (m, 2H) LCMS Rt = 2.204分鐘，m/z = 694.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.204分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 694.3。 實例 173 ( 方法 2) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，10分鐘)純化反應混合物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(50.12 mg，25.96%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.70 (br d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.62 - 7.56 (m, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.26 - 7.10 (m, 1H), 4.59 - 4.49 (m, 1H), 4.41 - 4.29 (m, 2H), 4.28 - 4.14 (m, 4H), 4.05 - 3.96 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.31 (br s, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.77 - 2.66 (m, 2H), 1.95 - 1.83 (m, 6H), 1.77 - 1.67 (m, 3H), 1.19 - 1.15 (m, 2H), 1.06 - 1.02 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.747分鐘，m/z = 708.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.747分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 708.3。 實例 174 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 環丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-環丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(28 mg，20.77%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.21 (m, 1H), 8.17 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.09 - 8.04 (m, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.44 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 1H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 4.25 - 4.18 (m, 2H), 4.13 - 3.99 (m, 1H), 3.98 - 3.73 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.09 - 2.96 (m, 2H), 2.71 - 2.61 (m, 2H), 2.51 - 2.42 (m, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 3H), 1.93 - 1.78 (m, 5H), 1.73 - 1.63 (m, 2H), 1.16 - 1.10 (m, 1H), 1.16 - 1.08 (m, 1H), 1.05 - 0.97 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.257分鐘，m/z = 708.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.257分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 708.3。 實例 175 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-( 二氟甲基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：50%-80%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(二氟甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(5.63 mg，10.36%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.93 - 7.86 (m, 1H), 7.72 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.64 - 7.34 (m, 6H), 7.20 - 6.89 (m, 1H), 5.42 - 5.15 (m, 1H), 4.99 - 4.73 (m, 1H), 4.28 (br dd, J = 5.1, 17.3 Hz, 1H), 4.18 - 4.09 (m, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.90 - 3.79 (m, 1H), 3.77 - 3.65 (m, 2H), 3.62 - 3.44 (m, 2H), 3.29 - 3.10 (m, 5H), 3.02 (d, J = 4.9 Hz, 3H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.64 (br d, J = 15.5 Hz, 1H), 2.22 - 2.16 (m, 3H), 2.07 (br d, J = 4.8 Hz, 2H), 1.96 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt =3.328分鐘，m/z = 722.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.328分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 722.3。 實例 176 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：50%-85%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(18.11 mg，11.56%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 - 7.49 (m, 2H), 7.41 (dt, J = 2.9, 7.8 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 7.19 - 7.11 (m, 1H), 5.35 - 5.14 (m, 1H), 4.40 (q, J = 8.2 Hz, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 3H), 3.99 - 3.90 (m, 1H), 3.86 (dd, J = 6.5, 11.1 Hz, 1H), 3.78 - 3.48 (m, 4H), 3.31 - 3.19 (m, 1H), 3.16 - 2.98 (m, 8H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.65 (br d, J = 15.2 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.14 (br s, 1H), 2.07 (br s, 2H), 1.93 - 1.75 (m, 3H)。LCMS Rt =3.324分鐘，m/z = 686.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.324分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 686.3。 實例 177 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(10.07 mg，15.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 - 9.16 (m, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 1H), 8.04 - 7.98 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.44 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 5.45 - 5.15 (m, 2H), 4.24 - 4.15 (m, 3H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.92 - 3.71 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.13 - 3.02 (m, 3H), 2.93 - 2.83 (m, 1H), 2.38 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 2.33 - 2.29 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 3H), 1.89 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.047分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.047分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 700.3。 實例 178 ( 方法 4) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：50%-85%，8分鐘)純化，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(17.87 mg，12.03%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.70 (br d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.47 (m, 2H), 7.47 - 7.30 (m, 4H), 5.36 - 5.14 (m, 1H), 4.92 - 4.74 (m, 1H), 4.30 - 4.13 (m, 1H), 4.10 - 3.90 (m, 3H), 3.87 - 3.76 (m, 1H), 3.75 - 3.62 (m, 2H), 3.60 - 3.39 (m, 2H), 3.35 - 3.20 (m, 1H), 3.16 - 3.04 (m, 4H), 2.99 (br d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.62 (br d, J = 14.5 Hz, 1H), 2.41 (br d, J = 4.9 Hz, 3H), 2.15 (br d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.08 (br s, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 3H), 1.93 - 1.74 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.318分鐘，m/z = 686.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.318分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 686.3。 實例 179 ( 方法 4) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨)-乙腈]；B%：60%-90%，8分鐘)純化，得到呈白色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(17.87 mg，12.03%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.50 - 7.46 (m, 1H), 7.41 - 7.39 (m, 1H), 7.36 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 4.89 - 4.73 (m, 1H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.07 - 3.85 (m, 4H), 3.81 - 3.74 (m, 1H), 3.71 - 3.59 (m, 2H), 3.55 - 3.42 (m, 2H), 3.23 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.11 - 3.05 (m, 1H), 2.98 - 2.95 (m, 3H), 2.91 (br d, J = 5.5 Hz, 1H), 2.62 - 2.54 (m, 3H), 2.38 - 2.35 (m, 3H), 1.90 - 1.84 (m, 2H), 1.84 - 1.66 (m, 5H), 1.66 - 1.47 (m, 3H) LCMS Rt = 2.336分鐘，m/z = 668.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.336分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 668.3 實例 180 ( 方法 2) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，10分鐘)純化反應混合物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(12.75 mg，11.22%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 0.9, 8.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 7.18 - 7.13 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.35 - 4.19 (m, 2H), 4.17 - 4.07 (m, 4H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 3.60 - 3.55 (m, 3H), 3.27 - 3.20 (m, 1H), 3.01 - 2.94 (m, 2H), 2.63 - 2.56 (m, 2H), 2.40 - 2.34 (m, 3H), 1.97 - 1.96 (m, 1H), 1.90 (s, 1H), 1.86 - 1.75 (m, 4H), 1.66 - 1.58 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.541分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.541分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 181 ( 方法 4) ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a- 基 ) 甲氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #4 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(碳酸氫銨]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(19.84 mg，21.32%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.87 - 7.81 (m, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.57 - 7.46 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.26 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 7.17 - 7.08 (m, 1H), 4.38 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 3.95 (m, 3H), 3.88 (m, 2H), 3.85 - 3.55 (m, 3H), 3.54 - 3.48 (m, 1H), 3.27 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 3.01 (m, 5H), 2.96 - 2.88 (m, 2H), 2.68 - 2.50 (m, 3H), 2.41 - 2.32 (m, 3H), 1.91 - 1.84 (m, 2H), 1.83 - 1.67 (m, 4H), 1.61 - 1.51 (m, 2H) LCMS Rt = 2.945分鐘，m/z = 668.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.945分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 668.3 實例 182 ( 方法 2) ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：30%-60%，8分鐘)純化反應混合物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(27.19 mg，20.84%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 - 9.15 (m, 1H), 8.14 - 8.10 (m, 1H), 8.03 - 7.99 (m, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 5.47 - 5.28 (m, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 4.06 - 3.96 (m, 1H), 3.93 - 3.70 (m, 2H), 3.65 - 3.48 (m, 1H), 3.44 - 3.38 (m, 3H), 3.02 - 2.91 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.43 - 2.31 (m, 5H), 1.99 - 1.95 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 5H), 1.67 - 1.57 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.177分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.177分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 682.3。 實例 183 ( 方法 11) ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3S,4S)-3-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化，藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20-50%乙酸乙酯/石油醚)純化粗殘餘物，得到呈黃色油狀之(3S,4S)-3-(苯甲基(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.01 g，66.56%)。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 308.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (3S,4S)-3- 氟 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行苯甲基之去保護。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之(3S,4S)-3-氟-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(6.3 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.525分鐘，m/z = 218.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 (250*70mm，15 um)；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：33%-63%，22分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(270 mg，77.70%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.770分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((3S,4S)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((3S,4S)-4-氟吡咯啶-3-基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(255 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (2-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：C18-1 150*30mm*5um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(180 mg，54.07%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.696分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行霍納爾-沃茲沃思-埃蒙斯反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(110 mg，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.751分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 7 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.625分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 8 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。
藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(7.82 mg，6.99%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 6.85 - 6.75 (m, 1H), 6.37 (br dd, J = 4.1, 15.0 Hz, 1H), 5.69 - 5.47 (m, 1H), 5.34 - 5.16 (m, 2H), 4.20 - 4.06 (m, 3H), 3.96 - 3.62 (m, 3H), 3.49 (br d, J = 5.4 Hz, 3H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 3.12 (br s, 2H), 3.05 (br s, 1H), 2.93 - 2.75 (m, 3H), 2.24 (br d, J = 9.3 Hz, 4H), 2.10 - 2.00 (m, 3H), 1.90 - 1.82 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.823分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.823分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 184 ( 方法 1) ： 1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3R,4R)-3-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(3R,4R)-3-(苯甲基(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(15 g，99.34%)。LCMS Rt = 0.627分鐘，m/z = 308.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (3R,4R)-3- 氟 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行苯甲基之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈無色油狀之(3R,4R)-3-氟-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(12 g，粗物質)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.525分鐘，m/z = 218.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (3R,4R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3R,4R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(90 mg，10.88%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.771分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N-((3R,4R)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-((3R,4R)-4-氟吡咯啶-3-基)-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.764分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-乙腈]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色非晶形固體狀之1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(4.94 mg，5.75%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 (s，1H), 8.36 (s, 1H), 8.18 - 8.23 (m, 1H), 8.14 (dd, J = 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.71 - 7.78 (m, 2H), 7.59 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.66 (dt, J = 16.8 Hz, J = 10.0 Hz, 1H), 6.30 - 6.39 (m, 1H), 5.76 - 5.81 (m, 1H), 5.62 (dt, J = 6.9, 3.4 Hz, 1H), 5.26 - 5.45 (m, 1H), 4.42 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 4.31 - 4.40 (m, 1H), 4.13 - 4.23 (m, 1H), 3.78 - 4.04 (m, 2H), 3.58 (t, J = 5.3 Hz, 3H), 3.30 (br dd, J = 9.6, 6.7 Hz, 2H), 2.79 - 2.87 (m, 2H), 2.12 (br dd, J = 12.6, 6.1 Hz, 2H), 2.01 - 2.07 (m, 2H), 1.91 - 1.98 (m, 2H), 1.79 - 1.89 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.722分鐘，m/z = 636.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.722分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.2。 實例 185 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2,4,7- 三氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
在0℃下於氮氣氛圍下向7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(100 g，464 mmol)及三氯磷酸鹽(500 mL)於無水甲苯(600 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(148 g，1.15 mol)。在110℃下攪拌混合物12小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(117 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.725分鐘，m/z = 251.9 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((2,7- 二氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下於氮氣氛圍下向2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(177 g，701 mmol)於四氫呋喃(2400 mL)及N,N-二異丙基乙胺(119 g，927 mmol)中之溶液中添加(R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(79 g，394 mmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(400 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈淺黃色固體狀之(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 g，62.18%)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.798分鐘，m/z = 416.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(38.24 g，240.22 mmol)及4A MS (25 g)於二噁烷(1000 mL)中之溶液中添加(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(50 g，120.11 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(46.57 g，360.34 mmol)且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物24小時。過濾混合物且將濾餅用石油醚:乙酸乙酯之混合物(14 L，2.5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.87 (s, 1H), 5.39 - 5.29 (m, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.82 (dd, J = 11.2, 8.0 Hz, 1H), 3.66 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.32-3.22 (m, 2H), 3.17 (br s, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.34 - 2.08 (m, 5H), 2.04 - 1.78 (m, 3 H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 539.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，3.71 mmol)、2-(8-乙基-7-氟-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.67 g，5.57 mmol)、磷酸鉀(2.36 g，11.13 mmol)及氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (583.88 mg，742.09 umol)於二噁烷(150 mL)及水(50 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在60℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 90 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Welch Xtimate C18 250*70mm#10um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，20分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，34.08%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.596分鐘，m/z = 677.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
在25℃下將(R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(235 mg，297.17 umol，三氟乙酸鹽)於含4M鹽酸之乙酸乙酯(10 mL)中之溶液攪拌0.5小時。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(200 mg，粗物質，鹽酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.537分鐘，m/z = 577.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在0℃下向7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(200 mg，326.20 umol，鹽酸鹽)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(210.79 mg，1.63 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加丙烯酸(47.01 mg，652.41 umol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷-2,4,6-三氧化物(415.17 mg，652.41 umol，50%純度) (於乙酸乙酯中)。在25℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(83.75 mg，40.46%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 6.1, 9.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 1H), 7.38 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.66 - 6.52 (m, 1H), 6.24 (td, J = 2.5, 16.8 Hz, 1H), 5.67 (ddd, J = 2.2, 5.9, 10.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.13 (m, 2H), 4.24 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 4.10 (m, 1H), 4.10 - 3.77 (m, 2H), 3.66 (br d, J = 9.6 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.19 - 3.08 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.56 - 2.43 (m, 1H), 2.42 - 2.34 (m, 1H), 2.33 - 2.21 (m, 2H), 2.20 - 2.16 (m, 1H), 2.10 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 3H), 0.80 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。LCMS Rt = 3.095分鐘，m/z = 631.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.095分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 631.3。 實例 186 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 2- 乙炔基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(400 mg，2.16 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液中添加1-重氮基-1-二甲氧基磷醯基-丙-2-酮(622.32 mg，3.24 mmol)及碳酸鉀(596.94 mg，4.32 mmol)且在20℃下攪拌反應物12小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-15%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色油狀之2-乙炔基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(280 mg，71.54%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.76 - 4.67 (m, 1H), 3.98 - 3.89 (m, 1H), 3.88 - 3.80 (m, 1H), 2.55 - 2.45 (m, 2H), 2.31 - 2.22 (m, 1H), 1.45 (s, 9H)。 步驟 2 ： 3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙炔酸
在-70℃下向2-乙炔基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(50 mg，275.89 umol)於四氫呋喃(1 mL)中之溶液中逐滴添加丁基鋰(2.5 M，143.46 uL)，攪拌1小時，隨後添加乾冰(12.14 mg，275.89 umol)。在20℃下攪拌混合物1小時。用飽和氯化銨(1 mL)淬滅混合物且在真空中濃縮至乾。用甲醇濕磨粗物質並過濾，得到濾液。將濾液在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之3-(1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-2-基)丙炔酸(75 mg，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： 2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈黃色油狀之2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(140 mg，95.96%)。LCMS Rt = 0.677分鐘，m/z = 771.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 3-( 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之3-(氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-炔-1-酮(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.531分鐘，m/z = 671.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。將混合物在真空中濃縮至乾且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-炔-1-酮(12.47 mg，12.22%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 - 9.14 (m, 1H), 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 5.43 - 5.15 (m, 2H), 4.21 - 4.12 (m, 2H), 4.02 - 3.62 (m, 4H), 3.51 - 3.40 (m, 4H), 3.27 (tdd, J = 3.9, 7.7, 11.2 Hz, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 3H), 2.95 - 2.83 (m, 2H), 2.39 - 2.31 (m, 2H), 2.27 (d, J = 13.5 Hz, 3H), 2.22 - 2.17 (m, 2H), 2.10 (br d, J = 2.1 Hz, 3H), 1.90 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.966分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.966分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 187 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2,4,7- 三氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
在0℃下於氮氣氛圍下向7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(100 g，464 mmol)及三氯磷酸鹽(500 mL)於無水甲苯(600 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(148 g，1.15 mol)。在110℃下攪拌混合物12小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(117 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.725分鐘，m/z = 251.9 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((2,7- 二氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下於氮氣氛圍下向2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(177 g，701 mmol)於四氫呋喃(2400 mL)及N,N-二異丙基乙胺(119 g，927 mmol)中之溶液中添加(R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(79 g，394 mmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(400 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈淺黃色固體狀之(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 g，62.18%)。LCMS Rt = 0.798分鐘，m/z = 416.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(38.24 g，240.22 mmol)及4A MS (25 g)於二噁烷(1000 mL)中之溶液中添加(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(50 g，120.11 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(46.57 g，360.34 mmol)且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物24小時。過濾混合物且將濾餅用石油醚:乙酸乙酯之混合物(14 L，2.5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.87 (s, 1H), 5.39 - 5.29 (m, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.82 (dd, J = 11.2, 8.0 Hz, 1H), 3.66 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.32-3.22 (m, 2H), 3.17 (br s, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.34 - 2.08 (m, 5H), 2.04 - 1.78 (m, 3 H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 539.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(21.34 g，39.59 mmol)於二噁烷(500 mL)及水(100 mL)中之溶液中添加[2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1-萘基]乙炔基-三異丙基-矽烷(18.81 g，41.57 mmol)、磷酸鉀(25.21 g，118.77 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;雙(1-金剛烷基)-丁基-磷烷(2.65 g，3.96 mmol)，將所得混合物加熱至90℃且於氮氣氛圍下攪拌12小時。將混合物傾倒至水(200 mL)中且在減壓下濃縮以移除二噁烷，用水(500 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%四氫呋喃/石油醚)純化殘餘物。將產物溶解於乙酸乙酯(220 mL)中，繼而添加2-矽基乙硫醇(10 g，108.42 mmol)，接著在75℃下攪拌混合物12小時以移除殘餘Pd。過濾反應混合物且將濾餅在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(25 g，76.16%)。LCMS Rt = 0.872分鐘，m/z = 829.4 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(7 g，8.44 mmol)於乙腈(120 mL)中之溶液中添加氟化銫(7.70 g，50.66 mmol)，在25℃下攪拌混合物12小時。向反應混合物中添加水(200 ml)且在減壓下濃縮以移除乙腈，進一步用水(100 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。將殘餘物用石油醚:乙酸乙酯之混合物(180 mL，5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4.5 g，79.23%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.12 (s, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 2H), 7.59 (br d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.41 - 5.33 (m, 1H), 5.22 (br s, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.25 - 4.20 (m, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 5H), 3.31 - 3.23 (m, 2H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.29 (br s, 1H), 2.26 - 2.19 (m, 2H), 2.14 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.95 (dt, J = 5.0, 11.3 Hz, 4H), 1.50 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.673分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
在25℃下將(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，7.43 mmol)於鹽酸/二噁烷(4M，80 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(4.8 g，粗物質，2鹽酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.558分鐘，m/z = 573.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在0℃下於氮氣氛圍下向7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(50 g，77.45 mmol，雙鹽酸鹽)於四氫呋喃(1.5 L)及水(0.3 L)中之溶液中添加碳酸氫鈉(50.26 g，619.63 mmol)及丙-2-烯醯氯(14.02 g，154.91 mmol)。在0℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物0.5小時。用水(1.5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。將殘餘物於乙酸乙酯:石油醚之混合物(1:1，1 L)中濕磨隔夜並過濾。乾燥濾餅且於乙酸乙酯:乙醇之混合物(8:1，600 mL)中濕磨，接著過濾。乾燥濾餅，接著在60℃下溶解於乙酸乙酯:乙醇(5:1，500 mL)中，繼而添加石油醚(500 mL)以形成過飽和溶液並過濾。將濾液冷卻降溫且緩慢添加石油醚(500 mL)。過濾所得沈澱物，得到呈淺黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(26 g，53.57%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.17 - 9.14 (m, 1H), 8.14 - 8.09 (m, 2H), 7.69 - 7.64 (m, 2H), 7.45 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.59 (dt, J = 10.4, 16.0 Hz, 1H), 6.24 (td, J = 2.5, 16.8 Hz, 1H), 5.67 (ddd, J = 2.4, 5.2, 10.2 Hz, 1H), 5.42 - 5.30 (m, 1H), 5.19 (br s, 1H), 4.22 - 4.17 (m, 1H), 4.14 - 4.09 (m, 1H), 4.09 - 3.79 (m, 2H), 3.74 - 3.45 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.28 - 3.22 (m, 1H), 3.19 - 3.08 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.43 - 2.25 (m, 2H), 2.11 - 2.00 (m, 3H), 1.91 - 1.78 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.787分鐘，m/z = 627.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.787分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 627.3。 實例 188 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(4- 甲基嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(4-( 三級丁氧基羰基 ) 嗎啉 -3- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。將水層在真空中濃縮至乾，得到呈無色油狀之3-(4-(三級丁氧基羰基)嗎啉-3-基)丙炔酸(90 mg，粗物質)且未經進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.99 - 4.64 (m, 1H), 4.00 - 3.79 (m, 2H), 3.74 - 3.51 (m, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 2H), 1.50 - 1.31 (m, 9H)。 步驟 2 ： 3-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 嗎啉 -4- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。將反應混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之3-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)嗎啉-4-甲酸三級丁酯(140 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.661分鐘，m/z = 801.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(嗎啉-3-基)丙-2-炔-1-酮(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.547分鐘，m/z = 701.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(4- 甲基嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。將混合物在真空中濃縮至乾且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-65%，8分鐘)純化，得到呈淡黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(4-甲基嗎啉-3-基)丙-2-炔-1-酮(19.50 mg，22.94%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.14 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 5.42 - 5.17 (m, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 2H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.77 - 3.60 (m, 5H), 3.50 - 3.39 (m, 5H), 3.17 - 3.03 (m, 3H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.37 - 2.30 (m, 5H), 2.13 - 1.96 (m, 4H), 1.92 - 1.75 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.916分鐘，m/z = 715.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.916分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3。 實例 189 ( 方法 1) ： 1-((3R,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 甲基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3R,4S)-3-( 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基 )-4- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 1類似之方式來進行還原胺化。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(3R,4S)-3-(苯甲基(甲基)胺基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.9 g，86.21%)。LCMS Rt = 0.613分鐘，m/z = 304.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (3S,4R)-3- 甲基 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行苯甲基之去保護。過濾混合物且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(3S,4R)-3-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (3R,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30%-70%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3R,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(140 mg，22.12%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.782分鐘，m/z = 678.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((3R,4S)-4- 甲基吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((3R,4S)-4-甲基吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.632分鐘，m/z = 578.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((3R,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 甲基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((3R,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-甲基吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(35.99 mg，43.78%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.25 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 6.60 (td, J = 10.7, 16.8 Hz, 1H), 6.32 - 6.20 (m, 1H), 5.75 - 5.65 (m, 1H), 5.36 - 5.18 (m, 1H), 5.06 - 4.92 (m, 1H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.14 (m, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 1H), 3.70 - 3.51 (m, 1H), 3.48 - 3.43 (m, 3H), 3.28 (dt, J = 1.7, 10.0 Hz, 1H), 3.17 (br d, J = 9.1 Hz, 2H), 3.11 - 3.04 (m, 1H), 2.97 - 2.88 (m, 1H), 2.81 - 2.63 (m, 1H), 2.20 - 2.15 (m, 1H), 2.16 (br s, 1H), 2.17 - 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.80 (m, 3H), 1.18 - 1.09 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.206分鐘，m/z = 632.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.206分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 632.3。 實例 190 ( 方法 1) ： 1-((2R,3R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2R,3R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,3R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(80 mg，30.15%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.763分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N-((2R,3R)-2- 甲基吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-((2R,3R)-2-甲基吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.618分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((2R,3R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((2R,3R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)-2-甲基吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(5.02 mg，9.05%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.08 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.54 (br d, J = 6.3 Hz, 2H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 6.59 - 6.47 (m, 1H), 6.20 (br dd, J = 7.3, 16.6 Hz, 1H), 5.64 - 5.57 (m, 1H), 5.29 - 5.09 (m, 1H), 4.66 - 4.56 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 1H), 3.79 - 3.69 (m, 1H), 3.61 - 3.51 (m, 1H), 3.08 (br d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.01 (s, 1H), 2.88 - 2.79 (m, 1H), 2.34 - 2.23 (m, 2H), 2.07 - 1.96 (m, 3H), 1.85 - 1.75 (m, 3H), 1.07 - 0.98 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.945分鐘，m/z = 618.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.945分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 618.2。 實例 191 ( 方法 11) ： (E)-1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #11 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化所得殘餘物，得到呈黃色膠狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(530 mg，58.12%)。LCMS Rt = 0.691分鐘，m/z = 775.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(530 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.515分鐘，m/z = 675.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(101.33 mg，21.89%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.17 (s, 1H), 7.97 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 1.9, 4.5, 6.7 Hz, 1H), 7.68 - 7.57 (m, 2H), 7.45 - 7.36 (m, 1H), 7.06 - 6.93 (m, 1H), 6.37 (br dd, J = 12.4, 14.6 Hz, 1H), 5.53 - 5.40 (m, 1H), 5.38 - 5.19 (m, 1H), 4.34 - 3.95 (m, 4H), 3.74 - 3.56 (m, 3H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 3.36 - 3.17 (m, 3H), 3.07 - 2.83 (m, 2H), 2.54 - 2.41 (m, 1H), 2.39 - 2.29 (m, 5H), 2.26 - 2.14 (m, 3H), 2.05 - 1.90 (m, 4H)。LCMS Rt = 2.705分鐘，m/z = 689.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.705分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 689.3。 實例 192 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(158.81 mg，15.36%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.21 - 9.13 (m, 1H), 7.97 (br dd, J = 1.3, 7.8 Hz, 1H), 7.72 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.56 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 1H), 6.55 - 6.41 (m, 2H), 5.81 - 5.69 (m, 1H), 5.50 - 5.19 (m, 2H), 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.24 - 3.87 (m, 3H), 3.74 - 3.65 (m, 1H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.46 (dd, J = 3.6, 7.8 Hz, 3H), 3.33 - 3.22 (m, 2H), 3.18 (br s, 1H), 2.99 (br dd, J = 5.4, 8.9 Hz, 1H), 2.28 (br d, J = 6.4 Hz, 5H), 1.99 - 1.86 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.926分鐘，m/z = 620.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.926分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 620.3。 實例 193 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1,2- 二甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S)-1-三級丁氧基羰基-2-甲基-吡咯啶-2-甲酸(8 g，34.89 mmol)於N,N-二甲基甲醛(100 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(13.53 g，104.68 mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(19.90 g，52.34 mmol)及N-甲氧基甲胺鹽酸鹽(6.81 g，69.79 mmol)。在50℃下攪拌混合物12小時。用水(100 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-30%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(S)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(7.6 g，79.98%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.68 - 3.58 (m, 1H), 3.56 - 3.52 (m, 3H), 3.34 - 3.23 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.35 (br d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.94 - 1.81 (m, 2H), 1.79 - 1.68 (m, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.38 - 1.33 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.712分鐘，m/z = 272.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (S)-2- 甲醯基 -2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(S)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，11.02 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加含二異丁基鋁烷之四氫呋喃(1 M，22.03 mL)，在-78℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(S)-2-甲醯基-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.756分鐘，m/z = 213.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (S)-2- 乙炔基 -2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(S)-2-甲醯基-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，9.38 mmol)於甲醇(2 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.59 g，18.76 mmol)及1-重氮基-1-二甲氧基磷醯基-丙-2-酮(2.16 g，11.25 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(2 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 15 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色油狀之(S)-2-乙炔基-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，56.05%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.55 - 3.41 (m, 1H), 3.37 - 3.25 (m, 1H), 2.21 (br s, 2H), 1.95 - 1.82 (m, 2H), 1.80 - 1.68 (m, 1H), 1.54 (br s, 3H), 1.42 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.805分鐘，m/z = 209.1 [M+ H] +。 步驟 4 ： (S)-3-(1-( 三級丁氧基羰基 )-2- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(S)-3-(1-(三級丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)丙炔酸(300 mg，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 5 ： (S)-2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(S)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(20 mg，6.18%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.690分鐘，m/z =799.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-2- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(20 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.634分鐘，m/z = 699.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1,2- 二甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(2.7 mg，15.36%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 - 9.17 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.69 - 7.60 (m, 2H), 7.57 - 7.48 (m, 1H), 5.46 - 5.20 (m, 2H), 4.27 - 4.10 (m, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 3.83 - 3.65 (m, 2H), 3.50 - 3.38 (m, 4H), 3.18 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.11 (s, 1H), 3.06 - 2.89 (m, 2H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 2.43 - 2.33 (m, 3H), 2.32 (s, 2H), 2.28 (s, 2H), 1.95 - 1.86 (m, 3H), 1.86 - 1.69 (m, 4H), 1.40 (d, J = 11.1 Hz, 3H)。LCMS Rt = 3.074分鐘，m/z = 713.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.074分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 713.3。 實例 194 ( 方法 2) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2,2- 二氟乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3R)-3-(2,2- 二氟乙基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(3R)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，5.37 mmol)於二噁烷(10 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(902.10 mg，6.98 mmol)及三氟甲烷磺酸2,2-二氟乙酯(1.15 g，5.37 mmol)，在20℃下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，70-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色油狀之(3R)-3-(2,2-二氟乙基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.2 g，80.37%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.77 (tt, J= 4.3, 56.4 Hz, 1H), 3.54 - 3.35 (m, 2H), 3.30 (br d, J= 5.8 Hz, 2H), 3.11 - 2.97 (m, 1H), 2.91 (dt, J= 4.1, 15.0 Hz, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.65 (br d, J= 3.9 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.575分鐘，m/z = 250.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (3R)-3-[(2,7- 二氯 -8- 氟 - 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-(2,2- 二氟乙基 ) 胺基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 3類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3R)-3-[(2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-(2,2-二氟乙基)胺基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，54.76%)。LCMS Rt = 0.819分鐘，m/z = 465.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2,2- 二氟乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-80%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(2,2-二氟乙基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，58.26%)。LCMS Rt = 0.764分鐘，m/z = 588.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2,2- 二氟乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(2,2-二氟乙基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(270 mg，27.42%)。LCMS Rt = 0.717分鐘，m/z = 714.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-N-(2,2- 二氟乙基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc反應之去保護。將殘餘物在真空中濃縮至乾，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-N-(2,2-二氟乙基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.536分鐘，m/z = 614.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2,2- 二氟乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(2,2-二氟乙基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(7.13 mg，7.62%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.16 - 9.06 (m, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.02 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.65 (m, 1H), 7.62 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 7.56 - 7.47 (m, 1H), 6.62 - 6.48 (m, 1H), 6.40 - 6.05 (m, 2H), 5.70 - 5.61 (m, 1H), 5.36 - 5.06 (m, 2H), 4.26 - 4.10 (m, 4H), 4.07 - 3.67 (m, 3H), 3.64 - 3.52 (m, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.18 (br d, J = 4.1 Hz, 2H), 2.12 - 2.00 (m, 3H), 1.91 - 1.81 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.115分鐘，m/z = 668.2 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.115分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 668.2。 實例 195 ( 方法 10- 主方法 ) ： 1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4- 氟 -3- 甲基 -11- 氧雜三環 [6.2.1.02,7] 十一碳 -2,4,6,9- 四烯
將1-溴-2,4-二氟-3-甲基-苯(20 g，96.61 mmol)、呋喃(13.15 g，193.22 mmol)於甲苯(300 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，隨後在-20℃下添加正丁基鋰(2.5 M，46.37 mL)，在20℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用飽和氯化銨(900 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 500 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之4-氟-3-甲基-11-氧雜三環[6.2.1.02,7]十一碳-2,4,6,9-四烯(30 g，58.75%)。LCMS Rt = 0.676分鐘，m/z = 176.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 7- 氟 -8- 甲基 - 萘 -1- 醇
向4-氟-3-甲基-11-氧雜三環[6.2.1.02,7]十一碳-2,4,6,9-四烯(30 g，170.27 mmol)於乙醇(300 mL)中之溶液中添加氯化氫(12 M，170.27 mL)。在80℃下攪拌混合物2小時。在真空中濃縮反應混合物。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈紅色固體狀之7-氟-8-甲基-萘-1-醇(16.2 g，54.00%)。LCMS Rt = 0.732分鐘，m/z = 176.1 [M + H] +。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 (7- 氟 -8- 甲基 -1- 萘基 ) 酯
向7-氟-8-甲基-萘-1-醇(5 g，28.38 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物中添加N,N-二異丙基乙胺(22.01 g，170.27 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(10.41 g，36.89 mmol)，在0℃下於N 2氛圍下攪拌混合物0.5小時。用飽和碳酸氫鈉(50 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸(7-氟-8-甲基-1-萘基)酯(8 g，91.45%)。LCMS Rt = 0.951分鐘，m/z = 308.0 [M + H] +。 步驟 4 ： 2-(7- 氟 -8- 甲基 -1- 萘基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
將三氟甲烷磺酸(7-氟-8-甲基-1-萘基)酯(25 g，81.10 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(41.19 g，162.21 mmol)、乙酸鉀(39.80 g，405.52 mmol)及[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (5.93 g，8.11 mmol)於二噁烷(400 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在80℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(500 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 500 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(7-氟-8-甲基-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(23 g，99.11%)。LCMS Rt = 0.962分鐘，m/z = 286.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯及 (R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(3R)-3-[[7-氯-8-氟-2-[[(2R, 8S)-2-氟-1,2,3,5,6,7-六氫吡咯嗪-8-基]甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-胺基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，2.78 mmol)、2-(7-氟-8-甲基-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(2.39 g，8.35 mmol)、磷酸鉀(1.77 g，8.35 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;雙(1-金剛烷基)-丁基-磷烷(372.14 mg，556.57 umol)於二噁烷(30 mL)及水(10 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色油狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯及(R)-3-((8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.8 g，97.60%)。LCMS Rt = 0.790分鐘，m/z = 662.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(306 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其按原樣用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.510分鐘，m/z = 562.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (中性條件，管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(58.14 mg，20.09%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.18 (s, 1H), 7.99 - 7.94 (m, 1H), 7.81 (br t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.58 - 7.46 (m, 2H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 6.58 - 6.42 (m, 2H), 5.83 - 5.70 (m, 1H), 5.45 (quin, J = 7.8 Hz, 1H), 5.39 - 5.19 (m, 1H), 4.36 - 4.28 (m, 1H), 4.27 - 4.20 (m, 1H), 4.19 - 3.87 (m, 2H), 3.77 - 3.66 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 3H), 3.33 - 3.15 (m, 3H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 2.56 - 2.33 (m, 2H), 2.33 - 2.24 (m, 2H), 2.22 - 2.10 (m, 2H), 1.96 (br s, 2H), 1.90 - 1.64 (m, 3H)。LCMS Rt = 3.028分鐘，m/z = 616.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.028分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 616.3。 實例 196 ( 方法 11) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #11 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(220 mg，49.96%，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.613分鐘，m/z = 785.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(160 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.548分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(53.91 mg，36.54%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (br s, 1H), 8.04 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 - 7.44 (m, 2H), 7.37 (br t, J = 9.3 Hz, 1H), 6.76 (br dd, J = 5.3, 15.1 Hz, 1H), 6.37 (br dd, J = 11.1, 14.3 Hz, 1H), 5.47 - 5.14 (m, 2H), 4.25 - 4.17 (m, 1H), 4.15 - 4.09 (m, 1H), 4.09 - 3.90 (m, 1H), 3.89 - 3.75 (m, 1H), 3.64 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.27 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 3.18 - 3.07 (m, 2H), 3.05 (br s, 1H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.79 (quin, J = 7.6 Hz, 1H), 2.54 - 2.42 (m, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 2.27 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.24 (br s, 3H), 2.20 - 2.08 (m, 4H), 2.07 - 1.95 (m, 2H), 1.86 (br dd, J = 9.0, 17.5 Hz, 4H), 0.80 (br t, J = 7.1 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.903分鐘，m/z = 699.4 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.903分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 699.4。 實例 197 ( 方法 7) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1,2- 二甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2R)-1-三級丁氧基羰基-2-甲基-吡咯啶-2-甲酸(5 g，21.81 mmol)於N,N-二甲基甲醛(30 mL)中之溶液中添加2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(12.44 g，32.71 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(14.09 g，109.04 mmol)及N-甲氧基甲胺鹽酸鹽(4.25 g，43.62 mmol)，在50℃下攪拌混合物12小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-30%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5.2 g，87.55%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.77 - 3.69 (m, 1H), 3.66 - 3.62 (m, 3H), 3.42 - 3.31 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 2.50 - 2.25 (m, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 2H), 1.83 - 1.74 (m, 1H), 1.57 - 1.52 (m, 3H), 1.48 - 1.44 (m, 9H)。LCMS Rt = 0.712分鐘，m/z = 272.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-2- 甲醯基 -2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(2R)-2-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2 g，7.34 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，添加含二異丁基鋁烷之四氫呋喃(1 M，14.69 mL)且在-78℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物0.5小時。在0℃下用飽和氯化銨(30 mL)淬滅反應混合物，且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色油狀之(R)-2-甲醯基-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.6 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.756分鐘，m/z = 213.1 [M + H] + 步驟 3 ： (R)-2- 乙炔基 -2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2R)-2-甲醯基-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.5 g，11.72 mmol)、1-重氮基-1-二甲氧基磷醯基-丙-2-酮(3.38 g，17.58 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(4.86 g，35.17 mmol)，在25℃下攪拌混合物2小時。用水(30 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-15%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色油狀之(R)-2-乙炔基-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.7 g，69.30%)。LCMS Rt = 0.805分鐘，m/z = 209.1 [M + H] + 步驟 4 ： (R)-3-(1-( 三級丁氧基羰基 )-2- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色油狀之(R)-3-(1-(三級丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)丙炔酸(330 mg，粗物質)且未經純化即用於下一反應中。 步驟 5 ： (R)-2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 甲基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(110 mg，25.89)。LCMS Rt = 1.690分鐘，m/z = 799.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-2- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-2-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(70 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.634分鐘，m/z = 699.3 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1,2- 二甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(23.65 mg，31.64%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.15 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 - 7.99 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 5.43 - 5.34 (m, 1H), 5.33 - 5.15 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 4.00 - 3.85 (m, 1H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 3.52 - 3.44 (m, 1H), 3.44 - 3.38 (m, 3H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 3.04 - 2.84 (m, 2H), 2.50 - 2.31 (m, 3H), 2.29 (s, 2H), 2.25 - 2.19 (m, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 4H), 1.91 - 1.82 (m, 3H), 1.81 - 1.71 (m, 3H), 1.36 (d, J = 11.5 Hz, 3H)。LCMS Rt = 3.073分鐘，m/z = 713.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.073分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 713.3。 實例 198 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸乙酯
向4-氯-2-甲基-嘧啶(4.9 g，38.11 mmol)於二噁烷(30 mL)及水(10 mL)中之溶液中添加3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)丙酸乙酯(13.04 g，57.17 mmol)、磷酸鉀(24.27 g，114.34 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(3.00 g，3.81 mmol)，將混合物脫氣且用氮氣吹掃三次，隨後在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物2小時。用水(20 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-20%乙酸乙酯/石油醚)純化所得殘餘物，得到呈橙色膠狀之(E)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙烯酸乙酯(11 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.522分鐘，m/z = 192.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸
向(E)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯酸乙酯(10 g，52.03 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(2 M，52.03 mL)，在30℃下攪拌混合物12小時。用乙酸乙酯(2 x 80 mL)萃取混合物，在0℃下藉由逐滴添加1M鹽酸將水相酸化至pH = 2，藉由過濾收集固體，用水(3 x 10 mL)沖洗且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(E)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙烯酸(3.76 g，44.03%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 - 8.73 (m, 1H), 7.62 - 7.56 (m, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 1H), 7.06 - 6.96 (m, 1H), 2.63 (s, 3H)。LCMS Rt = 0.243分鐘，m/z = 164.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC ((管柱：Phenomenex C18 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，14.75%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.506分鐘，m/z = 678.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 哌啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc保護反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-哌啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(30 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.664分鐘，m/z = 578.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(9 mg，28.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.29 - 9.18 (m, 1H), 8.72 - 8.60 (m, 1H), 8.15 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.78 - 7.67 (m, 2H), 7.67 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.44 (br d, J= 15.6 Hz, 1H), 7.35 (br d, J= 5.0 Hz, 1H), 5.39 - 5.01 (m, 1H), 4.99 - 4.79 (m, 1H), 4.76 - 4.57 (m, 1H), 4.44 - 4.26 (m, 1H), 4.24 - 4.05 (m, 2H), 3.54 - 3.44 (m, 3H), 3.26 - 3.11 (m, 2H), 3.10 - 2.75 (m, 4H), 2.73 - 2.59 (m, 3H), 2.13 (br dd, J= 2.6, 4.9 Hz, 2H), 2.09 (br s, 2H), 1.93 - 1.83 (m, 3H), 1.80 (td, J= 2.4, 4.9 Hz, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 2H)。LCMS Rt = 2.979分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.979分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 199 ( 方法 11) ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #11 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(80 mg，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.722分鐘，m/z = 693.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((3S,4S)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((3S,4S)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.639分鐘，m/z = 693.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(2 mg，2.40%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.11 (br d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.94 - 7.86 (m, 1H), 7.71 - 7.61 (m, 2H), 7.59 - 7.49 (m, 1H), 6.91 - 6.74 (m, 1H), 6.41 (br dd, J = 7.8, 15.1 Hz, 1H), 5.74 - 5.51 (m, 1H), 5.40 - 5.14 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 3H), 4.16 - 4.04 (m, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 2H), 3.73 (br dd, J = 6.4, 12.8 Hz, 1H), 3.52 (br s, 3H), 3.39 (br s, 1H), 3.26 - 3.08 (m, 3H), 2.99 - 2.86 (m, 2H), 2.20 (br d, J = 7.3 Hz, 3H), 2.15 (br dd, J = 6.5, 10.6 Hz, 2H), 2.11 - 1.98 (m, 3H), 1.88 (br d, J = 8.0 Hz, 3H)。LCMS Rt = 2.012分鐘，m/z = 707.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間2.012分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 707.3。 實例 200 ( 方法 11- 主方法 ) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向N-甲氧基甲胺(4.85 g，49.70 mmol，鹽酸鹽)於N,N-二甲基甲醛(50 mL)中之溶液中添加(2R)-1-三級丁氧基羰基氮雜環丁烷-2-甲酸(5 g，24.85 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(9.53 g，49.70 mmol)、1-羥基苯并三唑(6.72 g，49.70 mmol)及4-甲基嗎啉(7.54 g，74.55 mmol)，接著在20℃下攪拌混合物2小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，60-80%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(R)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(5 g，82.37%)。LCMS Rt = 0.568分鐘，m/z = 244.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-2- 甲醯基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
在-65℃下向(R)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(5 g，20.47 mmol)於四氫呋喃(50 mL)中之溶液中添加含氫化二異丁基鋁之甲苯(1 M，40.94 mL)，接著在-65℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(20 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(R)-2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(3 g，79.13%)且未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 3 ： (R,E)-2-(3- 乙氧基 -3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向2-二乙氧基磷醯基乙酸乙酯(3.63 g，16.20 mmol)於乙腈(30 mL)中之溶液中添加(2R)-2-甲醯基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(3 g，16.20 mmol)、氯化鋰(2.06 g，48.59 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(6.28 g，48.59 mmol)且在20℃下攪拌混合物2小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，40-60%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色膠狀之(R,E)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(2.3 g，55.62%)。LCMS Rt = 0.768分鐘，m/z = 255.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R,E)-3-(1-( 三級丁氧基羰基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙烯酸
向(R,E)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(500 mg，1.96 mmol)於二噁烷(3 mL)及水(3 mL)中之溶液中添加水合鋰(123.27 mg，2.94 mmol)，接著在20℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用1M HCl (6 mL)淬滅反應混合物，接著用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(R,E)-3-(1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-2-基)丙烯酸(340 mg，76.39%)。LCMS Rt = 0.567分鐘，m/z = 227.1 [M + H] +。 步驟 5 ： 2,4,7- 三氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
在0℃下於氮氣氛圍下向7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(100 g，464 mmol)及三氯磷酸鹽(500 mL)於無水甲苯(600 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(148 g，1.15 mol)。在110℃下攪拌混合物12小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(117 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.725分鐘，m/z = 251.9 [M + H] +。 步驟 6 ： (R)-3-((2,7- 二氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下於氮氣氛圍下向2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(177 g，701 mmol)於四氫呋喃(2400 mL)及N,N-二異丙基乙胺(119 g，927 mmol)中之溶液中添加(R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(79 g，394 mmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(400 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈淺黃色固體狀之(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 g，62.18%)。LCMS Rt = 0.798分鐘，m/z = 416.1 [M + H] +。 步驟 7 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(38.24 g，240.22 mmol)及4A MS (25 g)於二噁烷(1000 mL)中之溶液中添加(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(50 g，120.11 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(46.57 g，360.34 mmol)，接著在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物24小時。過濾混合物且將濾餅用石油醚:乙酸乙酯之混合物(14 L，2.5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.87 (s, 1H), 5.39 - 5.29 (m, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.82 (dd, J = 11.2, 8.0 Hz, 1H), 3.66 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.32-3.22 (m, 2H), 3.17 (br s, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.34 - 2.08 (m, 5H), 2.04 - 1.78 (m, 3 H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 539.2 [M + H] +。 步驟 8 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(21.34 g，39.59 mmol)於二噁烷(500 mL)及水(100 mL)中之溶液中添加2-[2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1-萘基]乙炔基-三異丙基-矽烷(18.81 g，41.57 mmol)、磷酸鉀(25.21 g，118.77 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;雙(1-金剛烷基)-丁基-磷烷(2.65 g，3.96 mmol)，接著將混合物加熱至90℃且於氮氣氛圍下攪拌12小時。將混合物傾倒至水(200 mL)中且在減壓下濃縮以移除二噁烷，用水(500 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%四氫呋喃/石油醚)純化殘餘物。將產物溶解於乙酸乙酯(220 mL)中，繼而添加2-矽基乙硫醇(10 g，108.42 mmol)且在75℃下攪拌混合物12小時以移除殘餘Pd。過濾反應混合物且將濾餅在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(25 g，76.16%)。LCMS Rt = 0.872分鐘，m/z = 829.4 [M + H] +。 步驟 9 ： (R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(7 g，8.44 mmol)於乙腈(120 mL)中之溶液中添加氟化銫(7.70 g，50.66 mmol)且在25℃下攪拌混合物12小時。向反應混合物中添加水(200 ml)且在減壓下濃縮以移除乙腈，用水(100 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。將殘餘物用石油醚:乙酸乙酯之混合物(180 mL，5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4.5 g，79.23%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.12 (s, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 2H), 7.59 (br d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.41 - 5.33 (m, 1.5H), 5.22 (br s, 0.5H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.25 - 4.20 (m, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 5H), 3.31 - 3.23 (m, 2H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.29 (br s, 1H), 2.26 - 2.19 (m, 2H), 2.14 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.95 (dt, J = 5.0, 11.3 Hz, 4H), 1.50 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.673分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 10 ： 7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
在25℃下將(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，7.43 mmol)於鹽酸/二噁烷(4M，80 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(4.8 g，粗物質，2鹽酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.558分鐘，m/z = 573.3 [M + H] +。 步驟 11 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向(R,E)-3-(1-(三級丁氧基羰基)氮雜環丁烷-2-基)丙烯酸(388.04 mg，1.71 mmol)於二氯甲烷(8 mL)中之溶液中添加7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(800 mg，1.31 mmol，二鹽酸鹽)、N,N-二異丙基乙胺(509.25 mg，3.94 mmol)及2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷(V)酸鹽(749.12 mg，1.97 mmol)且在20℃下攪拌混合物1小時。用水(15 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-20%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(830 mg，80.82%)。LCMS Rt = 0.719分鐘，m/z = 782.4 [M + H] + 步驟 12 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在25℃下將(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(500 mg，639.50 umol)於二氯甲烷(3 mL)及三氟乙酸(1 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(500 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.523分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 13 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
在0℃下向甲醛(152.97 mg，1.88 mmol，85%純度)於甲醇(4 mL)中之溶液中添加乙酸(3.77 mg，62.83 umol)及(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(500 mg，628.32 umol，三氟乙酸)。在20℃下攪拌混合物0.5小時。將氰基硼氫化鈉(118.45 mg，1.88 mmol)添加至反應混合物中且在20℃下攪拌2小時。藉由逆相HPLC (管柱：C18-6 100*30mm*5um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：5%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(104.2 mg，23.41%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.16 (br s, 1H), 8.03 - 7.93 (m, 2H), 7.81 - 7.55 (m, 2H), 7.35 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.06 - 6.94 (m, 1H), 6.73 - 6.46 (m, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 2H), 5.17 - 4.80 (m, 4H), 4.72 - 4.60 (m, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 4.17 - 4.04 (m, 1H), 4.01 - 3.92 (m, 1H), 3.86 - 3.69 (m, 3H), 3.63 - 3.42 (m, 5H), 3.39 - 3.11 (m, 2H), 3.07 - 2.90 (m, 1H), 2.62 - 2.52 (m, 3H), 2.44 - 2.29 (m, 4H), 2.17 (br dd, J = 3.9, 12.4 Hz, 3H)。LCMS Rt = 1.953分鐘，m/z = 696.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.953分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 696.3 實例 201 ( 方法 1) ： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2,4,7- 三氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
在0℃下於氮氣氛圍下向7-氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4-二醇(100 g，464 mmol)及三氯磷酸鹽(500 mL)於無水甲苯(600 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(148 g，1.15 mol)。在110℃下攪拌混合物12小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(117 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.725分鐘，m/z = 251.9 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((2,7- 二氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下於氮氣氛圍下向2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶(177 g，701 mmol)於四氫呋喃(2400 mL)及N,N-二異丙基乙胺(119 g，927 mmol)中之溶液中添加(R)-3-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(79 g，394 mmol)。在0℃下攪拌混合物0.5小時。用水(5 L)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 L)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用三級丁基甲基醚(400 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈淺黃色固體狀之(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 g，62.18%)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.798分鐘，m/z = 416.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲醇(38.24 g，240.22 mmol)及4A MS (25 g)於二噁烷(1000 mL)中之溶液中添加(R)-3-((2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(50 g，120.11 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(46.57 g，360.34 mmol)且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物24小時。過濾混合物且將濾餅用石油醚:乙酸乙酯之混合物(14 L，2.5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 g，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.87 (s, 1H), 5.39 - 5.29 (m, 1H), 5.21 (br s, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.82 (dd, J = 11.2, 8.0 Hz, 1H), 3.66 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.47-3.39 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.32-3.22 (m, 2H), 3.17 (br s, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.34 - 2.08 (m, 5H), 2.04 - 1.78 (m, 3 H), 1.49 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.545分鐘，m/z = 539.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(21.34 g，39.59 mmol)於二噁烷(500 mL)及水(100 mL)中之溶液中添加2-[2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1-萘基]乙炔基-三異丙基-矽烷(18.81 g，41.57 mmol)、磷酸鉀(25.21 g，118.77 mmol)及[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀;雙(1-金剛烷基)-丁基-磷烷(2.65 g，3.96 mmol)，接著將混合物加熱至90℃且於氮氣氛圍下攪拌12小時。將混合物傾倒至水(200 mL)中且在減壓下濃縮以移除二噁烷，用水(500 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 300 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%四氫呋喃/石油醚)純化殘餘物。將產物溶解於乙酸乙酯(220 mL)中，繼而添加2-矽基乙硫醇(10 g，108.42 mmol)且在75℃下攪拌混合物12小時以移除殘餘Pd。過濾反應混合物且將濾餅在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(25 g，76.16%)。LCMS Rt = 0.872分鐘，m/z = 829.4 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(7 g，8.44 mmol)於乙腈(120 mL)中之溶液中添加氟化銫(7.70 g，50.66 mmol)且在25℃下攪拌混合物12小時。向反應混合物中添加水(200 ml)且在減壓下濃縮以移除乙腈，用水(100 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。將殘餘物用石油醚:乙酸乙酯之混合物(180 mL，5:1)稀釋兩次。過濾所得沈澱物且在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4.5 g，79.23%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.12 (s, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 2H), 7.59 (br d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.41 - 5.33 (m, 1.5H), 5.22 (br s, 0.5H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.25 - 4.20 (m, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 5H), 3.31 - 3.23 (m, 2H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.29 (br s, 1H), 2.26 - 2.19 (m, 2H), 2.14 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.95 (dt, J = 5.0, 11.3 Hz, 4H), 1.50 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.673分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
在25℃下將(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，7.43 mmol)於鹽酸/二噁烷(4M，80 mL)中之混合物攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(4.8 g，粗物質，2鹽酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.558分鐘，m/z = 573.3 [M + H] +。 步驟 7 ： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
向(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸鹽酸鹽(21.69 mg，130.98 umol)及7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(50 mg，87.32 umol，鹽酸鹽)於N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷2,4,6-三氧化物(111.13 mg，174.64 umol，50%純度)及N,N-二異丙基乙胺(33.86 mg，261.95 umol)。在20℃下攪拌混合物1小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-4-(二甲基胺基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(9.08 mg，15.21%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.15 (s, 1H), 8.05 - 7.91 (m, 2H), 7.71 - 7.51 (m, 2H), 7.41 - 7.31 (m, 1H), 7.03 - 6.87 (m, 1H), 6.67 - 6.40 (m, 1H), 5.50 - 5.26 (m, 2H), 4.55 - 4.36 (m, 2H), 4.33 - 4.16 (m, 1H), 4.11 - 3.97 (m, 2H), 3.90 (br d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.69 - 3.59 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 3H), 3.38 - 3.25 (m, 2H), 3.11 - 3.02 (m, 1H), 2.90 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 2.56 - 2.43 (m, 6H), 2.42 - 2.18 (m, 5H), 2.13 - 1.99 (m, 3H)。LCMS Rt = 1.985分鐘，m/z = 684.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%三氟乙酸，經6分鐘)滯留時間1.985分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 684.3 實例 202 ( 方法 1) ： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-4-(二甲基胺基)-1-((R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(26.07 mg，31.63%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 2.0, 7.4 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 6.0, 8.9 Hz, 1H), 7.61 - 7.48 (m, 2H), 7.38 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 6.74 (dtd, J = 2.4, 6.2, 15.1 Hz, 1H), 6.44 - 6.31 (m, 1H), 5.43 - 5.16 (m, 2H), 4.24 - 4.17 (m, 1H), 4.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.76 (m, 2H), 3.70 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.40 (m, 3H), 3.17 - 3.09 (m, 2H), 3.08 - 3.01 (m, 3H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.42 - 2.34 (m, 1H), 2.32 - 2.25 (m, 1H), 2.19 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 2.12 - 2.08 (m, 1H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.89 (m, 1H), 1.87 (br d, J = 2.1 Hz, 4H), 1.85 - 1.79 (m, 1H)。LCMS Rt = 2.053分鐘，m/z = 673.3 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.053分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 673.3。 實例 203 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ：三氟甲烷磺酸 (7, 8- 二氟 -1- 萘基 ) 酯
向7, 8-二氟萘-1-醇(1 g，5.55 mmol)於二氯甲烷(200 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(4.30 g，33.31 mmol)。在25℃下攪拌混合物5分鐘。接著在-40℃下將三氟甲烷磺酸酐(2.04 g，7.22 mmol)逐滴添加至混合物中且在-40℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物55分鐘。在真空中濃縮反應混合物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0%-10%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸(7, 8-二氟-1-萘基)酯(1.1 g，63.47%)且按原樣用於下一步驟中。 步驟 2 ： 2-(7, 8- 二氟 -1- 萘基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
將三氟甲烷磺酸(7, 8-二氟-1-萘基)酯(1.1 g，38.44 mmol)、[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) (281 mg，3.84 mmol)、乙酸鉀(1.88 g，192.18 mmol)及4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.95 g，76.87 mmol)於二噁烷(15 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在80℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(7, 8-二氟-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.35 g，92.82%)且按原樣用於下一步驟中。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10%-50%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(550 mg，88.93%)。LCMS Rt = 0.767分鐘，m/z = 666.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行去Boc反應。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色膠狀之7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 566.2 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7, 8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7, 8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(15.08 mg，14.09%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.20 - 8.12 (m, 1H), 7.98 - 7.90 (m, 1H), 7.73 (br d, J= 5.7 Hz, 2H), 7.63 - 7.52 (m, 2H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.28 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.50 - 5.17 (m, 2H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.20 - 4.15 (m, 1H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.76 (m, 2H), 3.71 - 3.55 (m, 1H), 3.49 (d, J= 4.3 Hz, 3H), 3.22 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 2.98 - 2.87 (m, 1H), 2.65 (d, J= 11.5 Hz, 3H), 2.49 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 2.42 - 2.28 (m, 2H), 2.16 - 2.06 (m, 3H), 1.95 - 1.79 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.943分鐘，m/z = 726.3 [M + H] +。
LCMS (35至65%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經8分鐘)滯留時間2.943分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 204 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(23.92 mg，22.34%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 8.12 (dd, J= 1.2, 8.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.45 - 7.36 (m, 1H), 7.23 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 5.45 - 5.15 (m, 2H), 4.23 - 4.19 (m, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 1H), 3.94 - 3.70 (m, 2H), 3.66 - 3.50 (m, 1H), 3.48 - 3.43 (m, 3H), 3.17 - 3.04 (m, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.60 (d, J= 11.5 Hz, 3H), 2.45 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 2.36 - 2.29 (m, 1H), 2.19 (br s, 1H), 2.10 - 1.99 (m, 3H), 1.90 - 1.78 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.951分鐘，m/z = 724.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.951分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 205 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-55%，8分鐘)純化，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(160 mg，39.55%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.601分鐘，m/z = 650.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(70 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.620分鐘，m/z = 550.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(19.32 mg，25.81%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.12 (br s, 1H), 8.18 - 7.94 (m, 2H), 7.73 - 7.55 (m, 3H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.19 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.42 - 5.13 (m, 1H), 5.01 - 4.81 (m, 1H), 4.29 - 4.06 (m, 3H), 3.99 - 3.59 (m, 4H), 3.25 - 3.00 (m, 3H), 2.98 - 2.78 (m, 1H), 2.58 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 2.43 (br d, J= 4.4 Hz, 3H), 2.36 - 2.22 (m, 2H), 2.10 (br s, 3H), 1.91 - 1.73 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.913分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.913分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 206 ( 方法 11) ： (E)-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #11 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(440 mg，粗物質)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.734分鐘，m/z = 771.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)且未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.176分鐘，m/z = 671.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(5.66 mg，5.02%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.16 (m, 1H), 8.05 (dd, J= 1.9, 7.4 Hz, 1H), 7.93 (dd, J= 6.1, 8.9 Hz, 1H), 7.63 - 7.49 (m, 2H), 7.38 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.76 (dd, J= 5.7, 15.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.49 - 5.15 (m, 2H), 4.25 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.03 (m, 2H), 3.99 - 3.75 (m, 2H), 3.70 - 3.60 (m, 1H), 3.59 - 3.49 (m, 2H), 3.45 - 3.39 (m, 4H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 3.14 (br d, J= 7.0 Hz, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.93 - 2.76 (m, 3H), 2.44 - 2.38 (m, 1H), 2.24 (d, J= 7.8 Hz, 4H), 2.10 - 2.03 (m, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.27 (s, 2H)。LCMS Rt = 2.000分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.000分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 207 ( 方法 1) ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸乙酯
將4-氯-2,6-二甲基-嘧啶(4 g，28.05 mmol)、(E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)丙-2-烯酸乙酯(7.61 g，33.66 mmol)、磷酸鉀(17.86 g，84.16 mmol)及氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (2.21 g，2.81 mmol)於二噁烷(60 mL)及水(20 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次，且在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物2小時。用水(30 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯酸乙酯(5 g，86.42%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.52 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.12 - 7.02 (m, 2H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 1.27 (d, J = 1.4 Hz, 3H)。LCMS Rt = 0.564分鐘，m/z = 206.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸
向(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯酸乙酯(5 g，24.24 mmol)於四氫呋喃(80 mL)、甲醇(80 mL)及水(80 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(1.53 g，36.37 mmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。在減壓下濃縮反應混合物以移除四氫呋喃及甲醇，接著用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取。在0℃下用1M鹽酸將水相調節至pH = 2，隨後用乙酸乙酯(3 x 120 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。用石油醚:乙酸乙酯之(5:1)混合物(20 mL)稀釋粗殘餘物且過濾所得沈澱物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯酸(3 g，粗物質)且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.349分鐘，m/z = 178.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(28.26 mg，26.48%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.25 - 9.18 (m, 1H), 8.28 - 8.20 (m, 2H), 7.74 - 7.66 (m, 2H), 7.63 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 5.45 - 5.16 (m, 2H), 4.26 - 4.13 (m, 2H), 4.13 - 4.03 (m, 2H), 4.02 - 3.77 (m, 2H), 3.67 - 3.50 (m, 1H), 3.47 (d, J = 3.4 Hz, 3H), 3.15 - 2.99 (m, 3H), 2.87 - 2.77 (m, 1H), 2.63 - 2.58 (m, 3H), 2.46 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 2.44 - 2.27 (m, 2H), 2.18 - 2.11 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.152分鐘，m/z = 732.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.152分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 208 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 氟環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(3-(1- 氟環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 #5 步驟 7類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(1-氟環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(135 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.798分鐘，m/z = 240.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(3-(1- 氟環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(3-(1-氟環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸(145 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.639分鐘，m/z = 212.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 氟環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-氟環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(12.45 mg，19.91%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.46 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 1H), 5.50 - 5.21 (m, 2H), 4.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 2H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 1H), 3.70 - 3.52 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.25 - 3.14 (m, 2H), 3.01 - 2.89 (m, 1H), 2.52 - 2.41 (m, 1H), 2.40 - 2.31 (m, 2H), 2.25 (br d, J = 5.0 Hz, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 3H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.43 - 1.34 (m, 2H), 1.30 - 1.22 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.063分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 758.3。 實例 209 ( 方法 13) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-(3,3- 二氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 4- 氯 -1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #13 步驟 1類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (中性條件，管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-氯-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-炔-1-酮(15 mg，29.98%)。LCMS Rt = 0.681分鐘，m/z = 682.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-(3,3- 二氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #13 步驟 2類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (中性條件；管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-(3,3-二氟氮雜環丁烷-1-基)丁-2-炔-1-酮(2 mg，4.47%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.10 (m, 1H), 8.16 (dd, J = 2.9, 6.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.74 - 7.66 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 5.44 - 5.21 (m, 2H), 4.87 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.46 - 4.29 (m, 1H), 4.26 - 4.12 (m, 3H), 4.05 - 3.88 (m, 1H), 3.78 - 3.62 (m, 5H), 3.54 - 3.41 (m, 4H), 3.23 - 3.06 (m, 3H), 2.98 - 2.83 (m, 1H), 2.48 - 2.28 (m, 3H), 2.13 - 2.05 (m, 3H), 1.92 - 1.86 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.063分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 739.3。 實例 210( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 乙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 乙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-乙基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(23.18 mg，23.44%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.31 - 9.13 (m, 1H), 8.25 - 8.04 (m, 2H), 7.82 - 7.64 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 5.9, 15.2 Hz, 1H), 6.49 - 6.34 (m, 1H), 5.53 - 5.14 (m, 2H), 4.29 - 4.05 (m, 3H), 4.04 - 3.77 (m, 1H), 3.74 - 3.56 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.38 - 3.28 (m, 1H), 3.21 - 3.07 (m, 3H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 1H), 2.64 - 2.51 (m, 1H), 2.46 - 2.28 (m, 2H), 2.25 - 2.04 (m, 6H), 1.96 - 1.80 (m, 4H), 1.04 - 0.85 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.994分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 719.3。 實例 211( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 異丙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 異丙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-異丙基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(24.7 mg，13.20%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.17 (m, 1H), 8.16 (dd, J = 3.3, 6.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 6.4, 15.1 Hz, 1H), 6.48 - 6.39 (m, 1H), 5.45 - 5.19 (m, 2H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 3.99 - 3.88 (m, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 1H), 3.76 - 3.63 (m, 2H), 3.62 - 3.49 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.33 - 3.26 (m, 1H), 3.16 (br d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.86 - 2.77 (m, 1H), 2.44 - 2.36 (m, 2H), 2.35 - 2.28 (m, 1H), 2.21 (br s, 1H), 2.13 (br s, 2H), 2.10 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.85 (m, 3H), 0.96 - 0.84 (m, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間3.071分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 733.3。 實例 212( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 甲氧基乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 甲氧基乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(2-甲氧基乙基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(14.63 mg，10.09%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.16 (br dd, J = 6.3 Hz, J = 3.1 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 9.1 Hz, J = 5.7 Hz, 1H), 7.67 - 7.74 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.74 - 6.86 (m, 1H), 6.38 - 6.52 (m, 1H), 5.19 - 5.44 (m, 2H), 4.20 - 4.27 (m, 1H), 4.10 - 4.18 (m, 2H), 3.79 - 4.00 (m, 2H), 3.66 - 3.73 (m, 1H), 3.50 - 3.65 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.31 - 3.39 (m, 2H), 3.26 (d, J = 19.5 Hz, 2H), 3.12 - 3.19 (m, 2H), 2.98 - 3.10 (m, 2H), 2.87 - 2.95 (m, 2H), 2.50 - 2.69 (m, 2H), 2.31 - 2.42 (m, 2H), 2.19 - 2.25 (m, 2H), 2.13 (br s, 1H), 2.06 - 2.10 (m, 1H), 1.85 - 1.94 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.951分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 749.3。 實例 213( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-( 氧雜環丁烷 -3- 基甲基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-( 氧雜環丁烷 -3- 基甲基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(2-甲氧基乙基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(40.63 mg，23.51%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.29 - 9.14 (m, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 8.09 (dd, J = 5.8, 9.1 Hz, 1H), 7.76 - 7.66 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 5.7, 15.1 Hz, 1H), 6.46 - 6.34 (m, 1H), 5.46 - 5.18 (m, 2H), 4.70 - 4.60 (m, 2H), 4.33 - 4.25 (m, 2H), 4.19 - 4.04 (m, 2H), 4.02 - 3.78 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.51 (br s, 1H), 3.48 - 3.44 (m, 3H), 3.33 - 3.24 (m, 1H), 3.20 - 3.13 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.91 - 2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 1H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 2.25 - 2.16 (m, 3H), 2.13 (br s, 1H), 2.10 - 2.06 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.889分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 761.3。 實例 214( 方法 1)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 羥基環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： N',1- 二羥基環丁烷甲脒
以與 方法 #1 步驟 1類似之方式來形成羥基脒。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之N',1-二羥基環丁烷甲脒(1.5 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.254分鐘，m/z = 130.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-4-[[(E)-N- 羥基 -C-(1- 羥基環丁基 ) 碳亞胺基 ] 胺基 ]-4- 側氧基 - 丁 -2- 烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 2類似之方式來進行偶合反應。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之(E)-4-[[(E)-N-羥基-C-(1-羥基環丁基)碳亞胺基]胺基]-4-側氧基-丁-2-烯酸乙酯(1.6 g，58.04%)。LCMS Rt = 0.627分鐘，m/z = 256.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(3-(1- 羥基環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯
以與 方法 # 1 步驟 3類似之方式來進行環化反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-(3-(1-羥基環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙烯酸乙酯(600 mg，64.54%)。LCMS Rt = 0.691分鐘，m/z = 238.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-[3-(1- 羥基環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ] 丙 -2- 烯酸
以與 方法 # 1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮混合物，得到呈白色固體狀之(E)-3-[3-(1-羥基環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙-2-烯酸(150 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.540分鐘，m/z = 210.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(1- 羥基環丁基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1-羥基環丁基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(10.26 mg，3.66%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 (s, 1H), 8.15 - 8.09 (m, 1H), 8.01 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.36 (m, 3H), 5.47 - 5.36 (m, 1H), 5.34 - 5.14 (m, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 3H), 4.05 - 3.96 (m, 1H), 3.91 - 3.72 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.18 - 3.11 (m, 1H), 3.09 - 3.03 (m, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.64 - 2.52 (m, 2H), 2.47 - 2.37 (m, 2H), 2.34 (br d, J = 7.8 Hz, 4H), 2.12 - 1.96 (m, 4H), 1.89 - 1.71 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.011分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 756.3。 實例 215( 方法 8)： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基 -1,2,4- 噻二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (中性條件，管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-80%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基-1,2,4-噻二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(14.76 mg，18.06%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.16 - 8.07 (m, 1H), 8.01 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 5.4, 15.3 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 7.31 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.75 - 5.51 (m, 1H), 5.39 - 5.12 (m, 2H), 4.49 - 4.32 (m, 1H), 4.24 - 4.08 (m, 3H), 4.06 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 1H), 3.60 - 3.46 (m, 3H), 3.17 - 3.03 (m, 3H), 2.93 - 2.80 (m, 1H), 2.66 - 2.57 (m, 3H), 2.19 - 2.15 (m, 1H), 2.08 (br dd, J = 3.6, 6.9 Hz, 1H), 2.02 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.958分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 734.2。 實例 216( 方法 1)： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(10.26 mg，11.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 (s, 1H), 8.72 - 8.66 (m, 1H), 8.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.46 (m, 3H), 7.38 - 7.33 (m, 1H), 5.78 - 5.53 (m, 1H), 5.37 - 5.13 (m, 2H), 4.51 - 4.34 (m, 1H), 4.23 - 4.09 (m, 3H), 4.06 - 3.80 (m, 2H), 3.54 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 3.16 - 3.01 (m, 3H), 2.92 - 2.79 (m, 1H), 2.66 (d, J = 10.6 Hz, 3H), 2.10 - 1.99 (m, 3H), 1.90 - 1.76 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.803分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 217( 方法 1)： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(17.69 mg，39.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 2H), 5.82 - 5.53 (m, 1H), 5.47 - 5.07 (m, 2H), 4.59 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 3H), 4.10 - 3.97 (m, 1H), 3.94 (br d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.70 - 3.59 (m, 1H), 3.56 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 3.29 - 3.07 (m, 3H), 3.03 - 2.85 (m, 1H), 2.26 - 2.18 (m, 2H), 2.12 (br d, J = 2.1 Hz, 2H), 1.90 (br d, J = 6.5 Hz, 2H), 1.61 (d, J = 7.0 Hz, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.247分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 762.3。 實例 218( 方法 8)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-2-((E)-3-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(S)-2-((E)-3-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(52 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.753分鐘，m/z = 773.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(60 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：10%-40%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(4.29 mg，7.00%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 (s, 1H), 8.27 (br s, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.64 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 6.74 (dd, J = 6.0, 15.3 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.22 (m, 1H), 4.36 (br t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.20 (br s, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 3H), 3.92 - 3.82 (m, 1H), 3.71 (br d, J = 7.1 Hz, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.40 (br t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.30 - 3.19 (m, 3H), 3.16 (br d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.27 - 2.19 (m, 2H), 2.18 - 2.07 (m, 2H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)；滯留時間2.873分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 687.3。 實例 219( 方法 8)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(R)-2-((E)-3-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(50 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.729分鐘，m/z = 773.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.752分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(6.21 mg，12.11%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 - 9.08 (m, 1H), 8.06 (dd, J = 1.2, 8.2 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 0.9, 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.55 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 6.62 (ddd, J = 1.7, 5.6, 15.2 Hz, 1H), 6.01 (br d, J = 15.4 Hz, 1H), 5.32 - 5.08 (m, 1H), 4.26 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.15 - 4.09 (m, 2H), 4.07 - 3.98 (m, 3H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.53 - 3.48 (m, 3H), 3.47 - 3.38 (m, 1H), 3.24 - 3.17 (m, 1H), 3.15 - 3.03 (m, 3H), 2.99 (br s, 1H), 2.87 - 2.78 (m, 1H), 2.76 - 2.67 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.10 (br d, J = 3.0 Hz, 2H), 2.03 (br s, 2H), 2.00 - 1.95 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.860分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 687.3。 實例 220( 方法 8)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-2-((E)-3-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(S)-2-((E)-3-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(52 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.735分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.616分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(7.65 mg，14.95%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.33 - 9.18 (m, 1H), 8.20 - 8.13 (m, 1H), 8.09 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 5.8, 15.3 Hz, 1H), 6.10 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.40 - 5.16 (m, 1H), 4.42 - 4.32 (m, 1H), 4.22 - 4.09 (m, 5H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.63 - 3.56 (m, 3H), 3.55 - 3.48 (m, 1H), 3.32 - 3.26 (m, 1H), 3.24 - 3.11 (m, 3H), 3.08 (s, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.85 - 2.70 (m, 1H), 2.26 - 2.21 (m, 3H), 2.20 - 2.10 (m, 4H), 2.06 (br s, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.891分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 221( 方法 8)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(R)-2-((E)-3-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(50 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.705分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(50 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.761分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(10.15 mg，28.97%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.31 - 9.19 (m, 1H), 8.15 (dd, J = 3.0, 6.6 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 5.8, 9.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.76 - 6.66 (m, 1H), 6.10 (br d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.38 - 5.19 (m, 1H), 4.41 - 4.31 (m, 1H), 4.22 - 4.09 (m, 5H), 3.91 - 3.79 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 3H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 3.31 - 3.26 (m, 1H), 3.23 - 3.13 (m, 3H), 3.11 - 3.06 (m, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.17 - 2.09 (m, 3H), 2.08 - 2.04 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.881分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 222( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 羥乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-((R)-1-(2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-((R)-1-(2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(26 mg，27.38%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.729分鐘，m/z = 849.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 羥乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
向(E)-3-((R)-1-(2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(15 mg，17.64 µmol，三氟乙酸鹽)於THF (1 mL)中之溶液中添加N,N-二乙基乙胺三氫氟酸鹽(28.43 mg，176.37 umol)。在25℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物，且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-35%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(2-羥乙基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(3.43 mg，26.42%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.11 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.05 (dd, J = 3.5, 6.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.64 - 7.55 (m, 2H), 7.44 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.83 - 6.71 (m, 1H), 6.51 - 6.37 (m, 1H), 5.39 - 5.04 (m, 2H), 4.30 - 3.94 (m, 4H), 3.91 - 3.67 (m, 2H), 3.62 - 3.48 (m, 3H), 3.43 (br t, J = 5.1 Hz, 3H), 3.20 - 3.07 (m, 4H), 3.01 - 2.82 (m, 2H), 2.77 - 2.57 (m, 2H), 2.39 - 1.98 (m, 8H), 1.89 (br s, 1H), 1.84 - 1.76 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間1.931分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 735.3。 實例 223( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 乙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 乙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-乙基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(15.53 mg，23.63%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.12 (m, 1H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 8.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 1H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 6.79 (dd, J = 5.8, 15.1 Hz, 1H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.43 - 5.15 (m, 2H), 4.24 - 4.09 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.68 - 3.54 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.32 - 3.23 (m, 1H), 3.16 - 3.08 (m, 2H), 3.05 (s, 1H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.82 - 2.67 (m, 1H), 2.61 - 2.45 (m, 1H), 2.44 - 2.23 (m, 3H), 2.39 - 2.00 (m, 6H), 1.92 - 1.79 (m, 4H), 1.11 - 0.88 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.993分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 701.3。 實例 224( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-( 氧雜環丁烷 -3- 基甲基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，6-7%甲醇/二氯甲烷)純化粗產物，得到呈橙色膠狀之(2-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(700 mg，72.96%)。LCMS Rt = 0.715分鐘，m/z = 742.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-60%四氫呋喃/石油醚)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(470 mg，63.80%)。LCMS Rt = 0.782分鐘，m/z = 773.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈淡黃色固體狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(162 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.638分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-( 氧雜環丁烷 -3- 基甲基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(10.51 mg，13.39%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 - 9.15 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 1H), 6.77 (dd, J = 5.7, 15.1 Hz, 1H), 6.42 - 6.31 (m, 1H), 5.43 - 5.15 (m, 2H), 4.68 - 4.56 (m, 2H), 4.32 - 4.17 (m, 3H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 4.06 - 3.76 (m, 2H), 3.72 - 3.61 (m, 2H), 3.54 (ddd, J = 7.4, 12.6, 17.2 Hz, 1H), 3.44 - 3.41 (m, 3H), 3.30 - 3.22 (m, 1H), 3.17 - 3.10 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.98 (br dd, J = 7.4, 14.6 Hz, 1H), 2.87 - 2.74 (m, 2H), 2.70 - 2.61 (m, 1H), 2.43 - 2.26 (m, 2H), 2.21 - 2.07 (m, 7H), 1.89 - 1.84 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.883分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 743.3。 實例 225( 方法 13- 主方法)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 4- 氯 -1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (TFA條件；管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-氯-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-炔-1-酮(130 mg，43.32%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.578分鐘，m/z = 682.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-(3- 氟氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
向4-氯-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-炔-1-酮(50 mg，73.15 umol)及3-氟氮雜環丁烷;鹽酸鹽(16.32 mg，146.30 µmol)於N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(30.33 mg，219.44 µmol)。在50℃下攪拌混合物0.5小時。過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。藉由逆相HPLC (中性條件；管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-(3-氟氮雜環丁烷-1-基)丁-2-炔-1-酮(4.83 mg，8.67%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.17 (br dd, J = 3.4, 6.1 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 5.8, 9.1 Hz, 1H), 7.76 - 7.67 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 5.53 - 5.00 (m, 3H), 4.28 - 4.11 (m, 3H), 4.10 - 3.89 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.70 - 3.59 (m, 2H), 3.54 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.50 - 3.44 (m, 4H), 3.44 - 3.31 (m, 2H), 3.24 - 3.06 (m, 3H), 2.99 - 2.87 (m, 1H), 2.47 - 2.30 (m, 2H), 2.18 - 2.04 (m, 3H), 1.95 - 1.81 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.960分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 721.3。 實例 226 ( 方法 8) ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 (250*70mm，15 um)；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-65%，24分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，13.98%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.764分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((3R,4R)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((3R,4R)-4-氟吡咯啶-3-基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(550 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.605分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(120 mg，47.79%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.702分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-2-((E)-3-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(60 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.755分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(60 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.623分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。
藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(7.72 mg，13.76%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.15 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.68 - 7.75 (m, 1H), 7.61 - 7.67 (m, 2H), 7.51 - 7.57 (m, 1H), 6.83 (dd, J = 15.1 Hz, J = 5.6 Hz, 1H), 6.35 - 6.46 (m, 1H), 5.55 - 5.69 (m, 1H), 5.19 - 5.38 (m, 2H), 4.14 - 4.25 (m, 3H), 3.76 - 3.96 (m, 3H), 3.53 (br d, J = 4.0 Hz, 3H), 3.31 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.14 (br d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.07 (br s, 1H), 2.80 - 2.96 (m, 3H), 2.28 (s, 2H), 2.26 (s, 1H), 2.19 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.08 - 2.16 (m, 3H), 2.06 (br s, 1H), 1.89 (br dd, J = 10.6 Hz, J = 6.6 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.961分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)滯留時間2.961分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 227( 方法 8)： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (2-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：C18 150*30mm*5um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(180 mg，54.07%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.696分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (S)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(S)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(83 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.711分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(84 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.625分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。
藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(3.99 mg，5.22%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.30 (s, 1H), 8.21 - 8.15 (m, 1H), 8.08 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 6.86 (br dd, J = 5.4, 15.2 Hz, 1H), 6.43 (br dd, J = 5.7, 15.5 Hz, 1H), 5.80 - 5.53 (m, 1H), 5.47 - 5.17 (m, 2H), 4.26 - 4.14 (m, 3H), 4.03 - 3.75 (m, 3H), 3.61 - 3.53 (m, 3H), 3.39 - 3.29 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 3.13 - 3.06 (m, 1H), 2.98 - 2.78 (m, 3H), 2.30 (br s, 3H), 2.21 - 2.04 (m, 5H), 1.96 - 1.81 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.967分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 228 ( 方法 8) ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 (250*70mm，15 um)；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-65%，24分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，13.98%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.769分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -N-((3R,4R)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-N-((3R,4R)-4-氟吡咯啶-3-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(550 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.605分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (2-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 # 8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：10%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之(2-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(120 mg，47.79%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.706分鐘，m/z = 760.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (S)-2-((E)-3-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。在真空中濃縮合併之有機層，得到呈棕色油狀之(S)-2-((E)-3-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(50 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.753分鐘，m/z = 791.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮粗產物，得到呈棕色油狀之(E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(43 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.625分鐘，m/z = 691.3 [M + H] +。 步驟 6 ： (E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((3R,4R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(4.73 mg，12.52%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 (s, 1H), 8.23 - 7.98 (m, 2H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 6.84 (dd, J = 5.7, 15.1 Hz, 1H), 6.51 - 6.28 (m, 1H), 5.79 - 5.50 (m, 1H), 5.43 - 5.12 (m, 2H), 4.32 - 4.08 (m, 4H), 3.94 - 3.71 (m, 2H), 3.53 (br d, J = 5.3 Hz, 3H), 3.40 - 3.24 (m, 1H), 3.15 (br d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.07 (br s, 1H), 3.04 - 2.73 (m, 3H), 2.30 - 2.23 (m, 4H), 2.12 (br s, 3H), 2.07 (br s, 2H), 1.88 (br d, J = 8.1 Hz, 2H)。LCMS Rt = 2.853分鐘，m/z = 705.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.853分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 705.3。 實例 229( 方法 2)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，10分鐘)純化粗殘餘物，得到呈白色固體狀之3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，15.67%)。LCMS Rt = 2.101分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N- 甲基 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-甲基-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.606分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a(5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(3-(2- 羥基丙 -2- 基 )-1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-45%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(3-(2-羥基丙-2-基)-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(13.82 mg，13.10%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.13 (dd, J = 3.3, 6.4 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 5.8, 9.0 Hz, 1H), 7.68-7.66 (m, 1H), 7.51 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.30-7.23 (m, 1H), 7.20-7.15 (m, 2H), 4.50-4.44 (m, 1H), 4.33-4.23 (m, 2H), 4.23-4.13 (m, 4H), 3.93 (td, J = 5.7, 9.4 Hz, 1H), 3.60-3.57 (m, 3H), 3.27-3.21 (m, 1H), 3.08-3.00 (m, 2H), 2.64 (dt, J = 6.7, 10.1 Hz, 2H), 2.01-1.96 (m, 2H), 1.83 (dq, J = 6.6, 13.5 Hz, 4H), 1.69-1.62 (m, 2H), 1.57 (s, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.567分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 230( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸乙酯
將4-氯-5-氟-嘧啶(500 mg，3.77 mmol)、(E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)丙-2-烯酸乙酯(1.28 g，5.66 mmol)、氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (296.85 mg，377.29 µmol)及磷酸鉀(2.40 g，11.32 mmol)於二噁烷(8 mL)及水(2 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物2小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之(E)-3-(5-氟嘧啶-4-基)丙烯酸乙酯(1.4 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.707分鐘，m/z = 196.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈棕色油狀之(E)-3-(5-氟嘧啶-4-基)丙烯酸(250 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.460分鐘，m/z = 168.0 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈棕色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(18.39 mg，11.01%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.28 - 9.20 (m, 1H), 9.01 (dd, J = 2.8, 12.6 Hz, 1H), 8.74 (dd, J = 2.3, 5.4 Hz, 1H), 8.20 - 7.99 (m, 2H), 7.73 - 7.69 (m, 2H), 7.69 - 7.62 (m, 3H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 5.50 - 5.16 (m, 2H), 4.32 - 4.14 (m, 3H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 1H), 3.82 (br dd, J = 2.9, 8.4 Hz, 1H), 3.50 - 3.45 (m, 3H), 3.26 - 3.10 (m, 3H), 3.01 - 2.89 (m, 1H), 2.51 - 2.32 (m, 3H), 2.18 - 2.13 (m, 3H), 1.90 (br s, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.968分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 714.2。 實例 231( 方法 2)： (R,E)-1-(3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(31.9 mg，36.11%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (s, 1H), 8.16 - 8.06 (m, 1H), 7.94 - 7.84 (m, 1H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.57 - 7.31 (m, 3H), 5.51 - 5.27 (m, 1H), 4.27 - 4.05 (m, 3H), 4.03 - 3.95 (m, 1H), 3.82 - 3.71 (m, 1H), 3.67 - 3.48 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.18 - 3.06 (m, 1H), 3.01 - 2.90 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 2H), 2.47 - 2.09 (m, 4H), 1.86 - 1.75 (m, 4H), 1.66 - 1.58 (m, 2H), 1.31 (dd, J = 7.0, 8.7 Hz, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.911分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 712.3。 實例 232( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 異丙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(470 mg，63.80%)。LCMS Rt = 0.779分鐘，m/z = 773.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(162 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.618分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 異丙基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-異丙基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(8.02 mg，10.40%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 - 9.14 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 2H), 7.51 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.89 - 6.78 (m, 1H), 6.47 - 6.36 (m, 1H), 5.40 - 5.18 (m, 2H), 4.24 - 4.08 (m, 2H), 4.08 - 3.98 (m, 1H), 3.96 - 3.77 (m, 2H), 3.75 - 3.61 (m, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.40 (m, 3H), 3.33 - 3.24 (m, 1H), 3.17 - 3.09 (m, 2H), 3.06 (br s, 1H), 2.92 - 2.76 (m, 2H), 2.45 - 2.22 (m, 4H), 2.11 - 2.05 (m, 3H), 1.86 (br s, 3H), 0.92 - 0.84 (m, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.050分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3。 實例 233( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 羥乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-((R)-1-(2-(( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ) 乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。在真空中濃縮混合物，得到呈淡黃色膠狀之(E)-3-((R)-1-(2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(70 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.141分鐘，m/z = 831.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 羥乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
向(E)-3-((R)-1-(2-((三級丁基二甲基矽基)氧基)乙基)氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(70 mg，84.08 µmol)於四氫呋喃(1 mL)中之溶液中添加N,N-二乙基乙胺三氫氟酸鹽(135.55 mg，137.06 µL)。在20℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物，且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(2-羥乙基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(2.9 mg，4.66%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 - 9.12 (m, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 6.81 (td, J = 6.1, 15.1 Hz, 1H), 6.46 (dd, J = 4.9, 15.1 Hz, 1H), 5.41 - 5.18 (m, 2H), 4.28 - 4.07 (m, 2H), 3.97 - 3.76 (m, 2H), 3.73 - 3.51 (m, 2H), 3.50 - 3.44 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.25 - 3.09 (m, 3H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 2.73 - 2.60 (m, 2H), 2.52 (br d, J = 5.5 Hz, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 4H), 2.18 - 1.96 (m, 4H), 1.91 - 1.79 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.639分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 717.3。 實例 234( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 甲氧基乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1-(2- 甲氧基乙基 ) 氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-(2-甲氧基乙基)氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(8.68 mg，9.20%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.18 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.55 - 7.48 (m, 1H), 6.78 (dd, J = 5.6, 15.1 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 10.7, 14.6 Hz, 1H), 5.42 - 5.16 (m, 2H), 4.23 - 4.17 (m, 1H), 4.16 - 4.03 (m, 2H), 3.99 - 3.76 (m, 2H), 3.72 - 3.62 (m, 2H), 3.61 - 3.46 (m, 1H), 3.43 - 3.41 (m, 3H), 3.35 - 3.28 (m, 3H), 3.26 (s, 1H), 3.21 (s, 1H), 3.18 - 3.09 (m, 2H), 3.05 (s, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 2H), 2.68 - 2.48 (m, 2H), 2.41 - 2.27 (m, 2H), 2.18 (br d, J = 7.9 Hz, 2H), 2.10 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.940分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 731.3。 實例 235( 方法 12- 主方法 ) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((2- 甲氧基乙基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4- 溴 -1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
向7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(150 mg，220.89 umol，三氟乙酸)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(28.55 mg，220.89 µmol)及(E)-4-溴丁-2-烯醯氯(81.04 mg，441.78 µmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。過濾混合物，且濾液(黃色溶液)未經任何純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.705分鐘，m/z = 710.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((2- 甲氧基乙基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
向(E)-4-溴-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(假定150 mg，210.67 µmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(81.68 mg，632.00 µmol)及2-甲氧基-N-甲基-乙胺(56.33 mg，632.00 µmol)。在50℃下攪拌混合物1小時。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)胺基)丁-2-烯-1-酮(30.6 mg，19.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.16 (m, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.61 (m, 3H), 7.58 - 7.49 (m, 1H), 6.84 - 6.69 (m, 1H), 6.45 (dd, J = 9.9, 15.1 Hz, 1H), 5.49 - 5.18 (m, 2H), 4.27 - 4.20 (m, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.78 (m, 1H), 3.72 - 3.51 (m, 2H), 3.49 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.45 (m, 3H), 3.30 (d, J = 15.5 Hz, 3H), 3.20 (br t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.17 - 3.15 (m, 1H), 3.08 (s, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.56 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.46 - 2.37 (m, 1H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 2.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 2.23 - 2.18 (m, 2H), 2.14 - 2.11 (m, 2H), 2.10 - 2.05 (m, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.920分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 719.3。 實例 236( 方法 13)： 4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 4- 氯 -1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #13 步驟 1類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-氯-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-炔-1-酮(130 mg，43.32%)。LCMS Rt = 0.681分鐘，m/z = 682.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-( 氮雜環丁烷 -1- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #13 步驟 2類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之4-(氮雜環丁烷-1-基)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-炔-1-酮(3.87 mg，9.07%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.31 - 9.18 (m, 1H), 8.17 (br dd, J = 3.1, 6.1 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 5.7, 9.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 5.48 - 5.20 (m, 2H), 4.26 - 4.20 (m, 1H), 4.20 - 4.12 (m, 1H), 4.07 - 3.88 (m, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 1H), 3.58 - 3.44 (m, 4H), 3.40 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 3.29 (td, J = 7.1, 14.5 Hz, 4H), 3.20 - 3.01 (m, 4H), 2.99 - 2.89 (m, 1H), 2.47 - 2.33 (m, 2H), 2.15 - 2.00 (m, 5H), 1.93 - 1.81 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.948分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 703.3。 實例 237( 方法 1)： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(110 mg，35.25%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.729分鐘，m/z = 682.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N-((3S,4S)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-N- 甲基 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-((3S,4S)-4-氟吡咯啶-3-基)-N-甲基-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.622分鐘，m/z = 582.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-55%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(28.31 mg，27.37%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.06 (dd, J = 5.7, 9.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.62 (m, 2H), 7.52 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.63 - 6.51 (m, 1H), 6.27 (br d, J = 16.6 Hz, 1H), 5.72 (td, J = 2.4, 10.4 Hz, 1H), 5.67 - 5.48 (m, 1H), 5.44 - 5.20 (m, 1H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.14 (m, 2H), 4.13 - 3.98 (m, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 1H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.49 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 3.02 - 2.92 (m, 2H), 2.64 - 2.55 (m, 2H), 1.93 - 1.70 (m, 6H), 1.67 - 1.52 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.545分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 636.2。 實例 238( 方法 7)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 嗎啉 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-30%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(嗎啉-3-基)丙-2-炔-1-酮(2.09 mg，14.73%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.15 (m, 1H), 8.12 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 5.42 - 5.17 (m, 2H), 4.26 - 4.09 (m, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 3.84 - 3.66 (m, 4H), 3.63 - 3.54 (m, 3H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.44 - 3.41 (m, 3H), 3.18 (br d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.10 (s, 1H), 3.04 - 2.88 (m, 2H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.27 - 2.03 (m, 5H), 1.91 - 1.75 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.646分鐘，m/z = 701.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)；滯留時間2.646分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 701.3。 實例 239( 方法 1)： 1-((S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向4-胺基-3,3-二氟-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，22.50 mmol)於二噁烷(30 mL)及水(30 mL)中之溶液中添加碳酸鈉(2.86 g，27.00 mmol)及氯甲酸苯甲酯(4.61 g，27.00 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(9 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.838分鐘，m/z = 356.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 4-((( 苯甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(9 g，25.26 mmol)於N,N-二甲基甲醛(50 mL)中之溶液中添加氫化鈉(3.03 g，75.77 mmol，60%純度)及碘甲烷(5.38 g，37.88 mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之4-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(3.7 g，39.55%)。LCMS Rt = 0.885分鐘，m/z = 370.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 3,3- 二氟 -4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #6 步驟 6類似之方式來進行Cbz基團之去保護。將混合物在真空中濃縮至乾，得到呈黃色油狀之3,3-二氟-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.8 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.502分鐘，m/z = 236.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯及 (R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-55%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(200 mg，72.36%，三氟乙酸鹽)。藉由SFC (管柱：DAICEL CHIRALPAK IG (250mm*30mm，10um)；移動相：[50% CO 2，50% 0.1% NH 3H 2O/EtOH]，11分鐘)進一步純化外消旋物質，得到： 1603.1  呈黃色油狀之(S)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(峰1，滯留時間 = 1.544分鐘) (100 mg，36.18%)。LCMS Rt = 1.660分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +；基於生物數據來假定絕對立體化學。 1603.2  呈黃色油狀之(R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(峰2，滯留時間 = 1.753分鐘) (50 mg，18.09%)。LCMS Rt = 1.660分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +；基於生物數據來假定絕對立體化學。 步驟 5 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-N-((S)-4,4- 二氟吡咯啶 -3- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-N-((S)-4,4-二氟吡咯啶-3-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.765分鐘，m/z = 600.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((S)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((S)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(11.42 mg，15.56%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 0.9, 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 6.68 - 6.48 (m, 1H), 6.33 (dd, J = 2.1, 16.8 Hz, 1H), 5.90 - 5.69 (m, 2H), 5.40 - 5.18 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.22 (br d, J = 4.6 Hz, 2H), 4.20 - 3.94 (m, 3H), 3.59 (br d, J = 3.8 Hz, 3H), 3.26 - 3.08 (m, 3H), 2.92 (br d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.20 (br s, 1H), 2.13 (br s, 1H), 2.09 - 2.02 (m, 1H), 1.95 - 1.81 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.111分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 654.2。 實例 240( 方法 2)： 1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(123 mg，25.97%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.583分鐘，m/z = 692.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 5- 乙基 -6- 氟 -4-(8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 ) 萘 -2- 醇
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之5-乙基-6-氟-4-(8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)萘-2-醇(60 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.429分鐘，m/z = 592.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟 -3- 羥基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(30.28 mg，44.25%，三氟乙酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.30 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 5.9, 9.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.27 (m, 2H), 7.14 (dd, J = 2.4, 5.4 Hz, 1H), 6.70 - 6.55 (m, 1H), 6.31 - 6.23 (m, 1H), 5.77 - 5.65 (m, 1H), 5.61 - 5.37 (m, 2H), 4.74 - 4.45 (m, 4H), 4.16 - 3.82 (m, 4H), 3.78 - 3.55 (m, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.40 - 3.27 (m, 1H), 2.59 - 2.51 (m, 1H), 2.46 - 2.33 (m, 3H), 2.31 - 2.21 (m, 3H), 2.16 - 2.04 (m, 1H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.114分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 646.3。 實例 241( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(19.24 mg，19.30%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.27 - 9.12 (m, 1H), 8.62 - 8.50 (m, 1H), 8.11 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.64 - 7.60 (m, 2H), 7.60 - 7.56 (m, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 1H), 5.44 - 5.10 (m, 2H), 4.25 - 4.19 (m, 1H), 4.17 - 4.10 (m, 1H), 4.07 - 3.96 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.63 (m, 1H), 3.62 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.39 (m, 3H), 3.19 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.02 (m, 2H), 2.93 - 2.83 (m, 1H), 2.66 (d, J = 19.9 Hz, 3H), 2.45 - 2.31 (m, 2H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.79 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.197分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 242( 方法 7)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1,3- 二甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1- 三級丁氧基羰基 -3- 甲基 - 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在真空中濃縮水層，得到呈白色固體狀之3-(1-三級丁氧基羰基-3-甲基-氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔酸(320 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 3-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 )-3- 甲基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)-3-甲基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(400 mg，96.69%)。LCMS Rt = 2.564分鐘，m/z = 785.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-甲基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔-1-酮(150 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 2.937分鐘，m/z = 685.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(1,3- 二甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。在真空中濃縮混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(1,3-二甲基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔-1-酮(20.25 mg，21.66%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 - 9.12 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 5.44 - 5.15 (m, 2H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 1H), 3.74 - 3.66 (m, 1H), 3.50 - 3.40 (m, 4H), 3.26 (dd, J = 6.9, 11.4 Hz, 2H), 3.20 - 3.10 (m, 4H), 3.06 (s, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 2H), 2.23 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 2.10 (br d, J = 2.5 Hz, 4H), 1.92 - 1.75 (m, 4H), 1.52 (d, J = 10.3 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.987分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 699.3。 實例 243( 方法 1)： (E)-1-(4-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌嗪 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-4-( 哌嗪 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：1%-45%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(300 mg，37.69%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.295分鐘，m/z = 550.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-(4-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 哌嗪 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-(4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(30.00 mg，18.43%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.10 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 1.3, 8.1 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 1.1, 8.2 Hz, 1H), 7.72 - 7.58 (m, 4H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.41 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.36 - 5.17 (m, 1H), 4.25 - 4.19 (m, 1H), 4.15 - 4.02 (m, 5H), 3.93 (br s, 4H), 3.20 - 3.10 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.21 - 2.17 (m, 1H), 2.11 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 2.09 - 2.02 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.133分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 244( 方法 1)： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸乙酯
將4-氯-5-氟-2-甲基-嘧啶(1 g，6.82 mmol)、(E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)丙-2-烯酸乙酯(2.31 g，10.24 mmol)、[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(536.88 mg，682.36 µmol)及磷酸鉀(4.35 g，20.47 mmol)於二噁烷(30 mL)及水(10 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在80℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1.5小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙烯酸乙酯(1.1 g，31.45%)。LCMS Rt = 0.753分鐘，m/z = 210.1 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈棕色固體狀之(E)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙烯酸(140 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.557分鐘，m/z = 182.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(25.37 mg，19.66%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.09 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 1.8, 3.8 Hz, 1H), 7.92 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.86 - 7.71 (m, 2H), 7.64 - 7.44 (m, 3H), 7.32 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 5.66 - 5.32 (m, 1H), 4.41 - 4.15 (m, 2H), 4.13 - 3.91 (m, 2H), 3.88 - 3.62 (m, 2H), 3.46 - 3.36 (m, 3H), 2.70 - 2.61 (m, 4H), 2.17 - 2.01 (m, 2H), 1.98 - 1.77 (m, 5H), 1.33 - 1.07 (m, 3H), 0.86 - 0.67 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.262分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 245( 方法 11)： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-55%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(232 mg，18.48%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.473分鐘，m/z = 700.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N-((3S,4S)-4- 氟吡咯啶 -3- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-((3S,4S)-4-氟吡咯啶-3-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.482分鐘，m/z = 600.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #11 步驟 11類似之方式來進行偶合反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(200 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.664分鐘，m/z = 810.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.488分鐘，m/z = 710.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。
藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((3S,4S)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-4-氟吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(4.7 mg，2.63%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.23 (s, 1H), 8.06 - 7.94 (m, 1H), 7.94 - 7.84 (m, 1H), 7.69 - 7.53 (m, 2H), 7.40 (br t, J = 8.7 Hz, 1H), 7.10 - 6.92 (m, 1H), 6.63 - 6.41 (m, 1H), 5.75 - 5.32 (m, 2H), 5.25 - 5.02 (m, 1H), 4.69 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.20 (m, 3H), 4.04 - 3.34 (m, 10H), 3.28 - 3.05 (m, 2H), 2.54 (br d, J = 19.8 Hz, 3H), 2.48 - 2.24 (m, 5H), 2.21 - 2.06 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間1.969分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 723.3 實例 246( 方法 2) ： 1-(3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之3-(((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(300 mg，58.14%)。LCMS Rt = 0.691分鐘，m/z = 666.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.502分鐘，m/z = 566.2 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-(3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-(3-(((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(30.19 mg，34.45%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.18 (s, 1H), 7.97 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.72 (br dd, J = 4.8, 8.9 Hz, 1H), 7.66 - 7.57 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 1H), 6.41 - 6.33 (m, 1H), 6.25 - 6.16 (m, 1H), 5.70 (br d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.35 (br s, 1H), 4.40 - 4.16 (m, 6H), 4.04 - 3.92 (m, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.29 - 3.14 (m, 4H), 3.03 - 2.92 (m, 1H), 2.29 - 2.11 (m, 3H), 2.00 - 1.85 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.871分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 620.3。 實例 247( 方法 7)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2S,4R)-4- 羥基 -1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： (2S,4R)-4- 羥基 -2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2S,4R)-1-三級丁氧基羰基-4-羥基-吡咯啶-2-甲酸(10 g，43.24 mmol)於二氯甲烷(250 mL)中之溶液中添加N-甲氧基甲胺(5.28 g，86.49 mmol)、4-甲基嗎啉(8.75 g，86.49 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(16.58 g，86.49 mmol)及1-羥基苯并三唑(11.69 g，86.49 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(250 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(2S,4R)-4-羥基-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(12 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.461分鐘，m/z = 274.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (2S,4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-羥基-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(11 g，40.10 mmol)於二氯甲烷(200 mL)中之溶液中添加三級丁基-氯-二苯基-矽烷(33.07 g，120.30 mmol，30.90 mL)及咪唑(8.19 g，120.30 mmol)。在0℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(18 g，76.2%)。LCMS Rt = 1.037分鐘，m/z = 512.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (2S,4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2- 甲醯基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，9.75 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之溶液中添加氫化二異丁基鋁(1M，19.50 mL)。在-75℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.038分鐘，m/z = 453.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (2S,4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2- 乙炔基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(4 g，8.82 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液中添加1-重氮基-1-二甲氧基磷醯基-丙-2-酮(5.08 g，26.45 mmol)及碳酸鉀(3.66 g，26.45 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(100 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-20%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈無色油狀之(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-乙炔基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(2.1 g，43.7%)。LCMS Rt = 1.072分鐘，m/z = 449.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 3-((2S,4R)-1-( 三級丁氧基羰基 )-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
向(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-乙炔基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，1.33 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5M，1.60 mL)及固態二氧化碳。在-78℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(30 mL)淬滅反應混合物，接著用硫酸氫鉀調節pH= 2。用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取混合物。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-((2S,4R)-1-(三級丁氧基羰基)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)吡咯啶-2-基)丙炔酸(350 mg，粗物質)，其未經純化即用於下一反應中。LCMS Rt = 0.967分鐘，m/z = 493.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (2S,4R)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：65%-95%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(60 mg，32.56%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.970分鐘，m/z = 1039.4 [M + H] +。 步驟 7 ： (2S,4R)-2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2S,4R)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(60 mg，51.96 µmol，三氟乙酸)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中添加N,N-二乙基乙胺三氫氟酸鹽(83.76 mg，519.60 µmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(2S,4R)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)-4-羥基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(40 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.754分鐘，m/z = 801.3 [M + H] +。 步驟 8 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2S,4R)-4- 羥基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：1%-40%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((2S,4R)-4-羥基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(20 mg，49.15%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.601分鐘，m/z = 701.3 [M + H] +。 步驟 9 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2S,4R)-4- 羥基 -1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-50%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(7.85 mg，88.74%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.12 - 9.02 (m, 1H), 7.99 - 7.90 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 2.8, 8.1 Hz, 1H), 7.57 - 7.45 (m, 3H), 7.35 (dt, J = 3.2, 7.8 Hz, 1H), 5.41 - 5.14 (m, 2H), 4.44 - 4.37 (m, 1H), 4.32 - 4.10 (m, 3H), 3.98 - 3.78 (m, 2H), 3.70 - 3.51 (m, 3H), 3.49 - 3.43 (m, 1H), 3.41 - 3.34 (m, 3H), 3.25 - 3.10 (m, 3H), 3.04 - 2.90 (m, 2H), 2.52 - 2.43 (m, 2H), 2.41 (s, 2H), 2.36 - 2.28 (m, 2H), 2.26 - 2.17 (m, 3H), 2.13 - 1.94 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間1.936分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3。 實例 248( 方法 7)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2R,4S)-4- 羥基 -1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： (2R,4S)-4- 羥基 -2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2R,4S)-1-(三級丁氧基羰基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(9 g，38.92 mmol)及N-甲氧基甲胺鹽酸鹽(7.59 g，77.84 mmol)於二氯甲烷(90 mL)中之溶液中添加4-甲基嗎啉(15.75 g，155.68 mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(14.92 g，77.84 mmol)及1-羥基苯并三唑(7.89 g，58.38 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(200 mL)稀釋混合物且用二氯甲烷(3 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(2R,4S)-4-羥基-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，74.93%)。LCMS Rt = 0.487分鐘，m/z = 274.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (2R,4S)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-( 甲氧基 ( 甲基 ) 胺甲醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2R,4S)-4-羥基-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，29.16 mmol)於二氯甲烷(80 mL)中之溶液中添加咪唑(9.93 g，145.82 mmol)及三級丁基-氯-二苯基-矽烷(16.03 g，58.33 mmol)。在25℃下攪拌混合物1小時。用水(200 mL)稀釋混合物且用二氯甲烷(3 x 200 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，20-50%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色油狀之(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(13 g，86.94%)。LCMS Rt = 0.996分鐘，m/z = 512.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (2R,4S)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2- 甲醯基吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(甲氧基(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，1.95 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加氫化二異丁基鋁(1 M，5.85 mL)。在0℃下攪拌混合物1小時。用飽和氯化銨(20 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.046分鐘，m/z = 453.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (2R,4S)-4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -2- 乙炔基 - 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在0℃下向(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，2.20 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(609.31 mg，4.41 mmol)及1-重氮基-1-二甲氧基磷醯基-丙-2-酮(635.22 mg，3.31 mmol)。在25℃下攪拌混合物2小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用二氯甲烷(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-20%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色油狀之(2R,4S)-4-[三級丁基(二苯基)矽基]氧基-2-乙炔基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，50.44%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.61 - 7.52 (m, 4H), 7.43 - 7.27 (m, 6H), 4.62 - 4.41 (m, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 3.41 - 3.17 (m, 2H), 2.21 - 2.06 (m, 2H), 1.92 (br d, J = 4.5 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 0.97 (s, 9H)。LCMS Rt = 0.937分鐘，m/z = 449.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 3-((2R,4S)-1-( 三級丁氧基羰基 )-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 吡咯啶 -2- 基 ) 丙炔酸
向(2R,4S)-4-[三級丁基(二苯基)矽基]氧基-2-乙炔基-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(300 mg，667.18 umol)於四氫呋喃(3 mL)中之溶液中添加固態二氧化碳及正丁基鋰(2.5M，533.74 uL)。在-78℃下攪拌混合物2小時。在0℃下用飽和氯化銨(10 mL)及硫酸氫鉀(10 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 15 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之3-((2R,4S)-1-(三級丁氧基羰基)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)吡咯啶-2-基)丙炔酸(300 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.985分鐘，m/z = 493.2 [M + H] +。 步驟 6 ： (2R,4S)-4-(( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 )-2-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(35 mg，17.15%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.969分鐘，m/z = 1039.4 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2R,4S)-4- 羥基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
在60℃下將(2R,4S)-4-((三級丁基二苯基矽基)氧基)-2-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(30 mg，25.98 umol，三氟乙酸鹽)於三氟乙酸(1 mL)中之混合物攪拌2小時。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((2R,4S)-4-羥基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮(30 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.544分鐘，m/z = 701.3 [M + H] +。 步驟 8 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((2R,4S)-4- 羥基 -1- 甲基吡咯啶 -2- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((2R,4S)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)丙-2-炔-1-酮： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (dd, J = 1.4, 3.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.50 (m, 1H), 5.45 - 5.24 (m, 2H), 4.54 - 4.49 (m, 1H), 4.36 - 4.32 (m, 2H), 4.22 - 3.86 (m, 2H), 3.78 - 3.64 (m, 2H), 3.61 - 3.57 (m, 1H), 3.47 - 3.43 (m, 3H), 3.36 (br d, J = 14.4 Hz, 2H), 3.29 (br dd, J = 2.9, 7.1 Hz, 1H), 3.19 (br s, 2H), 3.07 - 3.01 (m, 2H), 2.73 (s, 1H), 2.68 (s, 2H), 1.85 - 1.78 (m, 3H), 1.64 - 1.53 (m, 2H), 1.48 - 1.41 (m, 2H), 1.34 (dd, J = 6.5, 11.5 Hz, 1H), 1.27 (s, 1H), 0.96 (s, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.789分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 715.3。 實例 249( 方法 2)： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R,E)-1-(3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之(R,E)-1-(3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(8.56 mg，7.30%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 1.8, 3.8 Hz, 1H), 8.01 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.93 - 7.80 (m, 2H), 7.70 - 7.50 (m, 4H), 7.48 - 7.36 (m, 1H), 5.65 - 5.46 (m, 1H), 4.39 - 4.24 (m, 2H), 4.22 - 4.02 (m, 2H), 3.77 (dt, J = 7.8, 12.9 Hz, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 3H), 3.26 - 3.01 (m, 2H), 2.74 (d, J = 10.5 Hz, 3H), 2.45 - 2.29 (m, 2H), 1.90 (br s, 10H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.793分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 250( 方法 2)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 環丙基甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-(( 環丙基甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(3R)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，5.37 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加環丙烷甲醛(376.32 mg，5.37 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉(1.71 g，8.05 mmol)及乙酸(64.49 mg，1.07 mmol)。在25℃下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，5-7%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((環丙基甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，46.50%)。 步驟 2 ： (R)-3-(( 環丙基甲基 )(2,7- 二氯 -8- 氟吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 3類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，10-30%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((環丙基甲基)(2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(0.5 g，27.66%)。LCMS Rt = 0.533分鐘，m/z = 455.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 環丙基甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-80%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(環丙基甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(450 mg，70.92%)。LCMS Rt = 0.789分鐘，m/z = 578.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 環丙基甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，90-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(環丙基甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(300 mg，61.58%)。LCMS Rt = 0.742分鐘，m/z = 704.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-N-( 環丙基甲基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-N-(環丙基甲基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.591分鐘，m/z = 604.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 環丙基甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。
藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-80%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(環丙基甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(16.98 mg，18.13%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.29 - 9.14 (m, 1H), 8.01 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.89 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.67 - 7.50 (m, 3H), 7.47 - 7.38 (m, 1H), 6.54 - 6.36 (m, 2H), 5.79 - 5.66 (m, 1H), 5.43 - 5.16 (m, 1H), 5.15 - 4.99 (m, 1H), 4.10 (s, 3H), 4.05 - 3.86 (m, 1H), 3.55 (br s, 4H), 3.36 - 3.10 (m, 3H), 3.06 - 2.90 (m, 1H), 2.54 - 2.35 (m, 2H), 2.32 - 2.08 (m, 3H), 2.03 - 1.81 (m, 3H), 1.24 - 1.17 (m, 1H), 0.76 - 0.64 (m, 2H), 0.36 - 0.21 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.010分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 658.3 實例 251( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(77.96 mg，38.47%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.14 - 8.07 (m, 1H), 7.89 (ddd, J = 1.6, 5.1, 9.2 Hz, 1H), 7.68 (br d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.57 - 7.48 (m, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 5.47 - 5.13 (m, 2H), 4.25 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.10 (m, 1H), 4.06 - 3.96 (m, 1H), 3.94 - 3.71 (m, 2H), 3.68 - 3.46 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.18 - 3.04 (m, 4H), 2.95 - 2.82 (m, 1H), 2.46 - 2.30 (m, 2H), 2.24 - 2.12 (m, 3H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.85 (br dd, J = 4.6, 7.6 Hz, 2H), 1.32 (dd, J = 7.1, 7.7 Hz, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.092分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 730.3。 實例 252( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 四氫呋喃 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-( 四氫呋喃 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(四氫呋喃-2-基)丙-2-烯-1-酮(1 mg，1.00%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.19 - 8.14 (m, 1H), 8.10 (dd, J = 5.7, 9.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.67 (m, 2H), 7.55 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 5.3, 15.1 Hz, 1H), 6.48 - 6.34 (m, 1H), 5.45 - 5.20 (m, 2H), 4.50 (br t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.28 - 4.22 (m, 1H), 4.20 - 4.15 (m, 1H), 4.13 - 4.05 (m, 1H), 3.88 (br s, 2H), 3.83 - 3.77 (m, 2H), 3.68 - 3.59 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 - 3.15 (m, 2H), 3.11 (s, 1H), 2.97 - 2.90 (m, 1H), 2.12 - 2.07 (m, 4H), 1.92 - 1.84 (m, 6H), 1.80 (td, J = 2.5, 5.0 Hz, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)；滯留時間2.228分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 706.3。 實例 253( 方法 2)： (R)-1-(3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(350 mg，55.36%)。LCMS Rt = 1.742分鐘，m/z = 658.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈白色固體狀之(R)-7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(200 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.541分鐘，m/z = 558.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-1-(3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之(R)-1-(3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(60.44 mg，89.84%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 1.1, 8.2 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 6.1, 9.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 1H), 7.38 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.24 (td, J = 2.5, 16.9 Hz, 1H), 5.67 (ddd, J = 2.2, 6.2, 10.3 Hz, 1H), 5.46 - 5.31 (m, 1H), 4.15 (s, 2H), 4.10 - 3.92 (m, 1H), 3.89 - 3.79 (m, 1H), 3.68 - 3.54 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.01 - 2.92 (m, 2H), 2.59 (td, J = 6.8, 10.0 Hz, 2H), 2.53 - 2.45 (m, 1H), 2.43 - 2.34 (m, 1H), 2.31 - 2.27 (m, 1H), 2.10 (br d, J = 2.5 Hz, 2H), 1.99 - 1.95 (m, 1H), 1.91 (br s, 1H), 1.87 - 1.75 (m, 4H), 1.67 - 1.57 (m, 2H), 0.81 (br t, J = 7.4 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.873分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 612.3。 實例 254( 方法 2)： 1-(3-(((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-(((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(300 mg，40.90%)。LCMS Rt = 1.495分鐘，m/z = 676.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(150 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.564分鐘，m/z = 576.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-(3-(((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-(3-(((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(34.89 mg，27.26%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.05 (dd, J = 1.3, 8.1 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 6.1, 9.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.38 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 1H), 6.21 - 6.12 (m, 1H), 5.64 (dd, J = 2.3, 10.1 Hz, 1H), 5.35 - 5.16 (m, 1H), 4.35 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.26 - 4.06 (m, 6H), 3.86 (dt, J = 5.6, 9.8 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.25 - 3.17 (m, 1H), 3.17 - 3.10 (m, 2H), 3.10 - 3.04 (m, 1H), 2.93 - 2.84 (m, 1H), 2.55 - 2.43 (m, 1H), 2.34 - 2.28 (m, 1H), 2.20 - 2.15 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.058分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 630.3。 實例 255( 方法 7)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 羥基 -1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(1- 三級丁氧基羰基 -3- 羥基 - 氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔酸
以與 方法 #7 步驟 1類似之方式來進行羰基化反應。在真空中濃縮水層，得到3-(1-三級丁氧基羰基-3-羥基-氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔酸(373 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 3-(3-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 炔 -1- 基 )-3- 羥基氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #7 步驟 2類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，80-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-(3-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-炔-1-基)-3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(56 mg，50%)。LCMS Rt = 0.734分鐘，m/z = 787.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 羥基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-羥基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔-1-酮(65 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.530分鐘，m/z = 687.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 羥基 -1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 酮
以與 方法 #7 步驟 4類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：20%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-羥基-1-甲基氮雜環丁烷-3-基)丙-2-炔-1-酮(14.69 mg，27.72%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.19 - 9.12 (m, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 - 7.49 (m, 3H), 7.49 - 7.38 (m, 1H), 5.51 - 5.33 (m, 1H), 5.31 - 5.08 (m, 1H), 4.56 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.14 (m, 2H), 4.13 - 3.98 (m, 1H), 3.90 - 3.73 (m, 1H), 3.69 (br t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.66 - 3.53 (m, 2H), 3.53 - 3.48 (m, 3H), 3.45 (s, 1H), 3.38 - 3.19 (m, 3H), 3.12 - 2.92 (m, 1H), 2.43 - 2.38 (m, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 2H), 2.24 - 2.09 (m, 2H), 2.07 - 1.75 (m, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.635分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 701.3。 實例 256( 方法 11)： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 11 步驟 11類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之(S)-2-((E)-3-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(400 mg，粗物質)。LCMS Rt = 0.682分鐘，m/z = 775.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((S)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 12類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色油狀之(E)-3-((S)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(400 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.541分鐘，m/z = 675.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((S)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #11 步驟 13類似之方式來進行還原胺化。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-50%，10分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((S)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(37.05 mg，10.53%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 1H), 7.97 - 7.88 (m, 1H), 7.71 (br d, J= 5.6 Hz, 2H), 7.60 - 7.51 (m, 1H), 6.87 - 6.72 (m, 1H), 6.49 - 6.35 (m, 1H), 5.46 - 5.19 (m, 2H), 4.29 - 4.15 (m, 2H), 4.12 - 3.81 (m, 2H), 3.79 - 3.53 (m, 3H), 3.46 (d, J= 5.4 Hz, 4H), 3.38 - 3.28 (m, 1H), 3.20 - 3.16 (m, 1H), 3.14 - 3.08 (m, 1H), 2.98 - 2.79 (m, 2H), 2.49 - 2.35 (m, 1H), 2.34 - 2.26 (m, 4H), 2.12 - 2.07 (m, 2H), 1.91 - 1.83 (m, 4H), 1.80 (td, J= 2.5, 5.0 Hz, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.935分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 689.3。 實例 257( 方法 2)： (R,E)-1-(3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2-(8- 氟萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
在氮氣氛圍下向1-溴-8-氟-萘(1 g，4.44 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，2.67 mL)。在-78℃下攪拌反應物0.5小時。添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(2.48 g，13.33 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之混合物，且在-78℃下攪拌混合物0.5小時。在0℃下用飽和碳酸氫鈉(30 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之2-(8-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.2 g，99.25%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.82 - 7.75 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.42 (dd, J = 6.9, 8.2 Hz, 1H), 7.31 (dt, J = 5.4, 7.9 Hz, 1H), 7.08 (ddd, J = 0.8, 7.7, 11.4 Hz, 1H), 1.37 (s, 12H)。 步驟 2 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，10分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(560 mg，78.36%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.400分鐘，m/z = 630.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(160 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.497分鐘，m/z = 530.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R,E)-1-(3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(3- 異丙基 -1,2,4- 噁二唑 -5- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R,E)-1-(3-((8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(3-異丙基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-烯-1-酮(92.8 mg，48.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.13 (br d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.76 - 7.70 (m, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.56 (dt, J= 5.0, 7.9 Hz, 1H), 7.51 - 7.33 (m, 2H), 7.24 (dd, J= 7.7, 13.2 Hz, 1H), 5.50 - 5.32 (m, 1H), 4.27 - 4.07 (m, 3H), 4.06 - 3.98 (m, 1H), 3.90 (spt, J= 6.1 Hz, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 3.68 - 3.48 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.21 - 3.08 (m, 1H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.66 - 2.54 (m, 2H), 2.49 - 2.40 (m, 1H), 2.39 - 2.29 (m, 1H), 2.19 - 2.09 (m, 1H), 1.88 - 1.78 (m, 4H), 1.69 - 1.58 (m, 2H), 1.34 (dd, J= 7.0, 8.8 Hz, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.980分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 694.3。 實例 258( 方法 2)： 1-((R)-3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex C18 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，53.00%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.431分鐘，m/z = 648.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(60 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.634分鐘，m/z = 548.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(25.2 mg，46.18%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 (s, 1H), 8.12 (br d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.88 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.56 (dt, J= 5.1, 8.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J= 7.2, 13.2 Hz, 1H), 6.68 - 6.52 (m, 1H), 6.31 - 6.21 (m, 1H), 5.74 - 5.65 (m, 1H), 5.45 - 5.18 (m, 2H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.17 - 4.11 (m, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 1H), 3.62 - 3.45 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 3.12 - 3.06 (m, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.20 (br d, J= 6.6 Hz, 1H), 2.12 (d, J= 3.1 Hz, 1H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 1.95 - 1.90 (m, 1H), 1.89 - 1.80 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.891分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 602.3。 實例 259( 方法 2)： (R)-1-(3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-1-(3-((8- 氟 -7-(8- 氟萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R)-1-(3-((8-氟-7-(8-氟萘-1-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(4.3 mg，7.86%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.20 (m, 1H), 8.14 (br d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 1H), 7.65 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 7.57 (dt, J= 5.0, 7.9 Hz, 1H), 7.25 (dd, J= 7.6, 13.3 Hz, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.33 - 6.20 (m, 1H), 5.70 (ddd, J= 2.2, 6.4, 10.3 Hz, 1H), 5.50 - 5.28 (m, 1H), 4.19 (s, 2H), 4.14 - 3.95 (m, 1H), 3.94 - 3.80 (m, 1H), 3.74 - 3.64 (m, 1H), 3.63 - 3.48 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.05 - 2.97 (m, 2H), 2.64 (td, J= 6.7, 9.9 Hz, 2H), 2.46 - 2.37 (m, 1H), 2.35 - 2.30 (m, 1H), 2.02 - 1.99 (m, 2H), 1.91 - 1.87 (m, 1H), 1.87 - 1.83 (m, 2H), 1.82 - 1.78 (m, 1H), 1.70 - 1.62 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.627分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 584.3。 實例 260( 方法 1)： (E)-1-((S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-45%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(90 mg，26.05%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.729分鐘，m/z = 678.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((S)- 哌啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到棕色油狀物(91 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.588分鐘，m/z = 578.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((S)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：32%-62%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((S)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(11.51 mg，11.84%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 - 9.10 (m, 1H), 8.63 - 8.51 (m, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.73 - 7.59 (m, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.48 - 7.39 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 7.28 - 7.20 (m, 1H), 5.32 - 5.01 (m, 1H), 4.99 - 4.69 (m, 1H), 4.66 - 4.45 (m, 1H), 4.35 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.05 (m, 2H), 4.02 - 3.83 (m, 1H), 3.41 - 3.34 (m, 3H), 3.13 - 3.00 (m, 2H), 2.95 - 2.81 (m, 2H), 2.76 - 2.63 (m, 1H), 2.62 - 2.52 (m, 3H), 2.11 - 1.93 (m, 5H), 1.80 (br s, 3H), 1.70 - 1.53 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.976分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 261( 方法 1)： (E)-1-(4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，29.56%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.764分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N-( 哌啶 -4- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-(哌啶-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.626分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(16.86 mg，16.10%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.10 (s, 1H), 8.70 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.79 - 7.68 (m, 2H), 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.43 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.30 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.40 - 5.17 (m, 1H), 4.70 - 4.50 (m, 2H), 4.30 - 4.11 (m, 3H), 3.38 (br t, J = 13.1 Hz, 1H), 3.24 - 3.08 (m, 3H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.24 - 2.05 (m, 6H), 1.87 (br s, 2H), 1.78 - 1.61 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.932分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 262( 方法 1)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30%-70%，10分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(80 mg，17.16%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.773分鐘，m/z = 664.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N-((R)- 哌啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-((R)-哌啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.514分鐘，m/z = 564.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(26.08 mg，31.13%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.15 - 8.97 (m, 1H), 8.76 - 8.52 (m, 1H), 8.20 - 7.96 (m, 2H), 7.76 - 7.64 (m, 1H), 7.62 - 7.56 (m, 2H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.46 - 7.24 (m, 2H), 7.23 - 7.05 (m, 1H), 5.37 - 5.10 (m, 1H), 4.70 - 4.23 (m, 2H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 4.00 - 3.87 (m, 1H), 3.77 - 3.62 (m, 1H), 3.49 - 3.27 (m, 1H), 3.18 - 3.00 (m, 3H), 2.91 - 2.81 (m, 1H), 2.73 - 2.63 (m, 3H), 2.24 - 2.01 (m, 4H), 1.93 - 1.62 (m, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.902分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 710.3。 實例 263( 方法 2)： 1-((R)-3-((7-(6,8- 二氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 5,7- 二氯 -1,4- 二氫 -1,4- 環氧基萘
在-15℃下向1-溴-3,5-二氯-2-氟-苯(10 g，41.00 mmol)及呋喃(5.58 g，82.00 mmol)於甲苯(100 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，19.68 mL)。在25℃下攪拌混合物12小時。用飽和氯化銨(100 mL)淬滅反應混合物且用石油醚(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之5,7-二氯-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(10 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 6,8- 二氯萘 -1- 醇
向5,7-二氯-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(10 g，46.94 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液中添加鹽酸(12 M，46.94 mL)，且在80℃下攪拌混合物6小時。在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物懸浮於水中，且藉由添加飽和碳酸氫鈉(500 mL)將pH調節至7。用三級丁基甲基醚(3 x 100 mL)萃取混合物。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-2%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6,8-二氯萘-1-醇(2.8 g，28.00%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 10.34 (s, 1H), 7.96 - 7.89 (m, 1H), 7.52 - 7.48 (m, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 2H), 6.99 - 6.92 (m, 1H)。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 6,8- 二氯萘 -1- 基酯
在-40℃下向6,8-二氯萘-1-醇(500 mg，2.35 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(1.21 g，9.39 mmol)及4Å MS (50 mg)。在-40℃下攪拌混合物10分鐘。添加三氟甲烷磺酸酐(993.17 mg，3.52 mmol)，且在-40℃下攪拌混合物30分鐘。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸6,8-二氯萘-1-基酯(350 mg，43.21%)。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(6,8- 二氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(三丁基錫烷基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(140 mg，176.41 umol)於二噁烷(2 mL)中之溶液中添加三氟甲烷磺酸6,8-二氯萘-1-基酯(73.06 mg，211.69 umol)及鈀三-三級丁基磷烷(18.03 mg，35.28 umol)。在90℃下於氮氣下攪拌混合物12小時。用水(2 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(3 x 2 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(6,8-二氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(15 mg，10.45%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.716分鐘，m/z = 698.2 [M + H] +。 步驟 5 ： 7-(6,8- 二氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈黃色固體狀之7-(6,8-二氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(10 mg，粗物質，鹽酸鹽)。LCMS Rt = 0.510分鐘，m/z = 598.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 1-((R)-3-((7-(6,8- 二氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-75%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((7-(6,8-二氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(2.82 mg，13.72%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.14 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.92 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.54 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.53 - 6.40 (m, 2H), 5.80 - 5.72 (m, 1H), 5.50 - 5.39 (m, 1H), 5.38 - 5.19 (m, 1H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 1H), 3.99 (br dd, J = 9.4, 11.8 Hz, 1H), 3.75 - 3.65 (m, 1H), 3.64 - 3.53 (m, 1H), 3.51 - 3.43 (m, 3H), 3.34 - 3.22 (m, 2H), 3.18 (br s, 1H), 3.05 - 2.93 (m, 1H), 2.54 - 2.26 (m, 3H), 2.25 - 2.09 (m, 2H), 2.03 - 1.83 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.996分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 652.2。 實例 264( 方法 2)： 3-(((R)-1- 丙烯醯基吡咯啶 -3- 基 )(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 丙腈 步驟 1 ： (R)-3-((2- 氰基乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
向丙-2-烯腈(427.35 mg，8.05 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加(3R)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1 g，5.37 mmol)。在60℃下將攪拌混合物1小時。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((2-氰基乙基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： (3R)-3-[(2,7- 二氯 -8- 氟 - 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-(2- 異氰基乙基 ) 胺基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 3類似之方式來進行取代反應。
用三級丁基甲基醚(30 mL)稀釋粗殘餘物，且過濾所得沈澱物，得到呈黃色固體狀之(3R)-3-[(2,7-二氯-8-氟-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-(2-異氰基乙基)胺基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，83.17%)。LCMS Rt = 0.774分鐘，m/z = 454.1 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2- 氰基乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，3-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(2-氰基乙基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(1.5 g，81.48%)。LCMS Rt = 0.570分鐘，m/z = 577.2 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )(2- 氰基乙基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(2-氰基乙基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(70 mg，8.21%)。LCMS Rt = 2.142分鐘，m/z = 703.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 丙腈
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈棕色油狀之3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)((R)-吡咯啶-3-基)胺基)丙腈(70 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.467分鐘，m/z = 603.2 [M + H] +。 步驟 6 ： 3-(((R)-1- 丙烯醯基吡咯啶 -3- 基 )(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 丙腈
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之3-(((R)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)丙腈(25.23 mg，39.16%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.11 - 9.04 (m, 1H), 8.07 - 7.99 (m, 1H), 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.52 (m, 3H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 6.44 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 5.81 - 5.69 (m, 1H), 5.40 - 5.20 (m, 1H), 5.17 (br s, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 1H), 4.26 (br d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.20 - 4.02 (m, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 2H), 3.87 - 3.71 (m, 1H), 3.71- 3.44 (m, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 2H), 3.18 (br s, 1H), 3.13 - 2.94 (m, 2H), 2.91 - 2.70 (m, 1H), 2.68 - 2.52 (m, 1H), 2.37 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.26 (br s, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 2H), 2.00 - 1.85 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.954分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 657.3。 實例 265( 方法 2)： (R)-1-(3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：20%-50%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黑色固體狀之(R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，60.24%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.574分鐘，m/z = 648.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.481分鐘，m/z = 548.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-1-(3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R)-1-(3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(16.07 mg，15.19%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.16 (s, 1H), 7.97 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.56 (m, 2H), 7.40 (q, J = 8.5 Hz, 1H), 6.56 - 6.39 (m, 2H), 5.80 - 5.70 (m, 1H), 5.56 - 5.39 (m, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.84 (m, 1H), 3.70 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.59 (br d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.46 (br s, 3H), 3.13 (br s, 2H), 2.73 - 2.60 (m, 2H), 2.53 - 2.24 (m, 2H), 2.09 (br dd, J = 5.9, 11.6 Hz, 2H), 1.89 (br d, J = 5.6 Hz, 4H), 1.73 - 1.68 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)； 滯留時間2.472分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 602.3。 實例 266( 方法 2)： 1-((R)-3-((7-(6,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 6,7- 二氟 -1,4- 二氫 -1,4- 環氧基萘
在-40℃下向1-溴-2,4,5-三氟-苯(5 g，23.70 mmol)於甲苯(50 mL)中之溶液中添加呋喃(3.23 g，47.40 mmol)。添加正丁基鋰(2.5 M，12.32 mL)，且在25℃下於氮氣下攪拌混合物12小時。用飽和氯化銨(50 mL)淬滅反應混合物且用石油醚 (3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之6,7-二氟-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(5 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 6,7- 二氟萘 -1- 醇
向6,7-二氟-1,4-二氫-1,4-環氧基萘(5 g，27.75 mmol)於乙醇(50 mL)中之溶液中添加鹽酸(12 M，27.75 mL)，且在80℃下攪拌混合物6小時。在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物懸浮於水中，且用飽和碳酸氫鈉(500 mL)將pH調節至7。用三級丁基甲基醚(3 x 50 mL)萃取混合物。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-2%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6,7-二氟萘-1-醇(2.2 g，44.00%)： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.40 (s, 1H), 7.97 - 7.82 (m, 2H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 6.89 (dd, J = 3.1, 5.4 Hz, 1H)。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 6,7- 二氟萘 -1- 基酯
向6,7-二氟萘-1-醇(800 mg，4.44 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(2.30 g，17.76 mmol)及4Å MS (50 mg)。在-40℃下攪拌混合物10分鐘，且添加三氟甲烷磺酸酐(1.88 g，6.66 mmol)。在-40℃下攪拌混合物30分鐘。用水(5 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-5%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之三氟甲烷磺酸6,7-二氟萘-1-基酯(800 mg，57.70%)。 步驟 4 ： 2-(6,7- 二氟萘 -1- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
向三氟甲烷磺酸6,7-二氟萘-1-基酯(800 mg，2.56 mmol)於二噁烷(10 mL)中之溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(976.02 mg，3.84 mmol)、[2-(2-胺基苯基)苯基]-氯-鈀二環己基-[3-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(187.49 mg，256.24 umol)及乙酸鉀(754.41 mg，7.69 mmol)。在100℃下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-2%乙酸乙酯/石油醚)純化剩餘殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(6,7-二氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(600 mg，80.71%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.52 (dd, J = 8.5, 13.3 Hz, 1H), 8.13 - 7.96 (m, 3H), 7.61 - 7.53 (m, 1H), 1.37 (s, 12H)。 步驟 5 ： (R)-3-((7-(6,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，50-60%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(6,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，80.85%)。LCMS Rt = 0.672分鐘，m/z = 666.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 7-(6,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈黃色固體狀之7-(6,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，鹽酸鹽)。LCMS Rt = 0.566分鐘，m/z = 566.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(6,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(6,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(15.78 mg，15.52%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.24 (s, 1H), 7.95 - 7.87 (m, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.68 - 7.56 (m, 3H), 6.54 (s, 2H), 5.80 - 5.71 (m, 1H), 5.51 - 5.39 (m, 1H), 5.38 - 5.19 (m, 1H), 4.36 - 4.28 (m, 1H), 4.27 - 4.05 (m, 2H), 4.04 - 3.87 (m, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 1H), 3.64 - 3.54 (m, 1H), 3.47 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 3.31 - 3.22 (m, 2H), 3.17 (br s, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.52 - 2.13 (m, 5H), 2.00 - 1.85 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.797分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 620.3。 實例 267( 方法 1)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 亞環丁基乙 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 亞環丁基乙 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-亞環丁基乙-1-酮(24.3 mg，24.76%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 2H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 5.95 (br d, J = 11.1 Hz, 1H), 5.61 - 5.22 (m, 2H), 4.36 - 4.21 (m, 2H), 4.09 - 3.89 (m, 1H), 3.80 (br dd, J = 4.6, 12.0 Hz, 1H), 3.67 - 3.50 (m, 2H), 3.49 - 3.43 (m, 3H), 3.38 - 3.29 (m, 1H), 3.27 - 3.19 (m, 1H), 3.18 - 3.11 (m, 2H), 3.10 - 2.93 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 2H), 2.46 - 2.36 (m, 2H), 2.31 (br d, J = 4.8 Hz, 2H), 2.16 - 2.03 (m, 6H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.156分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 658.3。 實例 268( 方法 2)： 1-((R)-3-((7-(6,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3,5- 二氟 -11- 氧雜三環 [6.2.1.02,7] 十一碳 -2,4,6,9- 四烯
在-40℃下於氮氣氛圍下向1-溴-2,3,5-三氟-苯(5 g，23.70 mmol)及呋喃(3.23 g，47.40 mmol)於甲苯(100 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，11.38 mL)。在0℃下用飽和氯化銨(100 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之3,5-二氟-11-氧雜三環[6.2.1.02,7]十一碳-2,4,6,9-四烯(8.5 g，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 6,8- 二氟萘 -1- 醇及 5,7- 二氟萘 -1- 醇
向3,5-二氟-11-氧雜三環[6.2.1.02,7]十一碳-2,4,6,9-四烯(4.2 g，23.31 mmol)於乙醇(40 mL)中之溶液中添加鹽酸(12 M，23.31 mL)。在80℃下攪拌混合物6小時。用水(20 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之6,8-二氟萘-1-醇(1.8 g，21.43%)及呈黃色固體狀之5,7-二氟萘-1-醇(2.4 g，28.57%)。 步驟 3 ：三氟甲烷磺酸 (6,8- 二氟 -1- 萘基 ) 酯
向6,8-二氟萘-1-醇(1.6 g，8.88 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物中添加N,N-二異丙基乙胺(6.89 g，53.29 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(3.26 g，11.55 mmol)，在0℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物0.5小時。用飽和碳酸氫鈉(20 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之三氟甲烷磺酸(6,8-二氟-1-萘基)酯(1.8 g，64.91%)。LCMS Rt = 0.713分鐘，m/z = 312.0 [M + H] +。 步驟 4 ： 2-(6,8- 二氟 -1- 萘基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
將三氟甲烷磺酸(6,8-二氟-1-萘基)酯(500 mg，1.60 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(427.01mg，1.68 mmol)、乙酸鉀(471.52 mg，4.80 mmol)及[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (117.18 mg，160.15 mmol)於N,N-二甲基甲醛(5mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在80℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2-(6,8-二氟-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(140 mg，30.13%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.06 - 8.00 (m, 1H), 7.75 - 7.57 (m, 3H), 7.51 - 7.44 (m, 1H), 1.36 (s, 12H)。LCMS Rt = 0.726分鐘，m/z = 290.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-3-((7-(6,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：15%-50%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(6,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(140 mg，60.03%)。LCMS Rt = 0.797分鐘，m/z = 666.3 [M + H] +。 步驟 6 ： 7-(6,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮混合物，得到呈棕色油狀之7-(6,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(130 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 566.2 [M + H] +。 步驟 7 ： 1-((R)-3-((7-(6,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：40%-70%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(6,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(38.58 mg，37.49%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.15 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.01 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 1H), 7.14 - 7.06 (m, 1H), 6.60 - 6.45 (m, 1H), 6.26 - 6.18 (m, 1H), 5.69 - 5.61 (m, 1H), 5.15 (br s, 2H), 4.20 - 4.15 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 1H), 4.06 - 3.87 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.65 - 3.57 (m, 1H), 3.57 - 3.37 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 3.07 - 3.03 (m, 1H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.30 - 2.19 (m, 2H), 2.18 - 2.10 (m, 1H), 2.08 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.883分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 620.3 實例 269( 方法 2)： (R)-1-(3-((7-(5,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ：三氟甲烷磺酸 (5,7- 二氟 -1- 萘基 ) 酯
向5,7-二氟萘-1-醇(2.2 g，12.21 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之混合物中添加N,N-二異丙基乙胺(6.31 g，48.85 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(4.48 g，15.88 mmol)，且在0℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物0.5小時。用飽和碳酸氫鈉(20 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之三氟甲烷磺酸(5,7-二氟-1-萘基)酯(2.2 g，57.70%)。LCMS Rt = 0.720分鐘，m/z = 312.0 [M + H] +。 步驟 2 ： 2-(5,7- 二氟 -1- 萘基 )-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
將三氟甲烷磺酸(5,7-二氟-1-萘基)酯(2 g，6.41 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(2.44 g，9.61 mmol)、乙酸鉀(1.89 g，19.22 mmol)及[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (468.72 mg，640.59 µmol)於N,N-二甲基甲醛(20 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在80℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物12小時。用水(50 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(5,7-二氟-1-萘基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(1.18 g，63.49%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 8.25 - 8.16 (m, 2H), 8.10 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 7.1, 8.3 Hz, 1H), 7.50 (ddd, J = 2.4, 9.0, 11.0 Hz, 1H), 1.41 - 1.35 (m, 12H)。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(5,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 100*40mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-80%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(5,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(200 mg，27.32%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.787分鐘，m/z = 648.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-7-(5,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 2 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈棕色油狀之(R)-7-(5,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.643分鐘，m/z = 548.3 [M + H] +。 步驟 5 ： (R)-1-(3-((7-(5,7- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-乙腈]；B%：50%-80%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-1-(3-((7-(5,7-二氟萘-1-基)-8-氟-2-((六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(16.64 mg，15.00%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.67 (m, 1H), 7.36 (br d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.15 (m, 1H), 6.58 (ddd, J = 10.4, 13.7, 16.7 Hz, 1H), 6.24 (td, J = 2.7, 16.8 Hz, 1H), 5.73 - 5.60 (m, 1H), 5.47 - 5.28 (m, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.11 - 3.92 (m, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 1H), 3.71 - 3.61 (m, 1H), 3.60 - 3.40 (m, 4H), 3.02 - 2.93 (m, 2H), 2.60 (td, J = 6.8, 9.9 Hz, 2H), 2.43 - 2.27 (m, 2H), 1.99 - 1.96 (m, 1H), 1.93 (br s, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 4H), 1.68 - 1.59 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.141分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 602.3。 實例 270( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；移動相：[水(FA)-ACN]；B%：1%-30%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(7.97 mg，7.17%，甲酸鹽)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.30 - 9.18 (m, 1H), 8.68 (dd, J = 5.1, 7.9 Hz, 1H), 8.25 (br s, 1H), 8.16 - 8.04 (m, 2H), 7.78 - 7.61 (m, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.39 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 5.49 - 5.26 (m, 2H), 4.46 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 4.00 (m, 1H), 3.78 (br s, 2H), 3.47 (d, J = 2.5 Hz, 4H), 3.41 - 3.23 (m, 2H), 3.11 - 2.99 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 3H), 2.52 - 2.33 (m, 3H), 2.32 - 2.12 (m, 3H), 2.07 - 1.97 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%甲酸，經6分鐘)；滯留時間2.179分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 728.3。 實例 271( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(10.05 mg，10.26%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 8.68 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.13 - 8.06 (m, 1H), 7.93 - 7.84 (m, 1H), 7.71 - 7.64 (m, 2H), 7.58 - 7.41 (m, 3H), 7.34 (dd, J = 5.2, 6.7 Hz, 1H), 5.48 - 5.11 (m, 2H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.17 - 4.10 (m, 1H), 4.08 - 3.96 (m, 1H), 3.91 - 3.73 (m, 2H), 3.67 - 3.50 (m, 1H), 3.45 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 3.19 - 3.01 (m, 3H), 2.81 (s, 1H), 2.69 - 2.61 (m, 3H), 2.48 - 2.26 (m, 2H), 2.09 - 1.99 (m, 3H), 1.87 - 1.78 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.690分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 712.3。 實例 272( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(7.97 mg，7.17%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 - 9.16 (m, 1H), 8.14 - 8.03 (m, 2H), 7.71 - 7.62 (m, 2H), 7.54 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.45 - 5.09 (m, 2H), 4.27 - 4.11 (m, 2H), 4.04 - 3.95 (m, 1H), 3.86 (ddd, J = 4.3, 7.6, 12.2 Hz, 1H), 3.80 - 3.70 (m, 1H), 3.67 - 3.51 (m, 1H), 3.47 - 3.40 (m, 3H), 3.19 - 3.00 (m, 3H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.60 (d, J = 14.4 Hz, 3H), 2.47 - 2.41 (m, 3H), 2.39 - 2.26 (m, 2H), 2.16 - 2.00 (m, 3H), 1.91 - 1.77 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.964分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 742.3。 實例 273( 方法 2)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(3-(((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(29.28 mg，16.68%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.18 - 8.01 (m, 2H), 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.51 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 2H), 5.32 - 5.06 (m, 1H), 4.46 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.12 (m, 3H), 3.95 - 3.86 (m, 1H), 3.60 - 3.53 (m, 3H), 3.29 - 3.19 (m, 1H), 3.13 - 3.06 (m, 2H), 3.02 (br s, 1H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.11 (br s, 1H), 2.09 - 1.96 (m, 3H), 1.88 - 1.75 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.909分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 742.3。 實例 274( 方法 2)： (E)-1-(3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Phenomenex Luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-80%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之3-(((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(190 mg，45.18%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.869分鐘，m/z = 666.3 [M + H] +。 步驟 2 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.617分鐘，m/z = 566.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(3-(((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-(3-(((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(13.37 mg，12.73%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 - 9.21 (m, 1H), 8.17 - 8.02 (m, 1H), 7.94 - 7.86 (m, 1H), 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.24 - 7.15 (m, 2H), 5.30 - 5.10 (m, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 3H), 3.97 - 3.85 (m, 1H), 3.77 - 3.64 (m, 1H), 3.63 - 3.55 (m, 2H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 3.14 - 3.05 (m, 2H), 3.04 - 2.98 (m, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 1H), 2.62 - 2.54 (m, 3H), 2.47 - 2.40 (m, 3H), 2.38 (s, 1H), 2.10 - 1.97 (m, 3H), 1.88 - 1.66 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.886分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 726.3。 實例 275( 方法 1)： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-(3-(((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到(E)-1-(3-(((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.19 - 8.06 (m, 1H), 8.01 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.22 - 7.16 (m, 2H), 5.33 - 5.06 (m, 1H), 4.45 (br t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 4H), 3.91 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.28 - 3.17 (m, 1H), 3.10 (br d, J = 12.3 Hz, 2H), 3.06 - 3.01 (m, 1H), 2.89 - 2.81 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.09 - 1.97 (m, 3H), 1.87 - 1.76 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%三氟乙酸，經6分鐘)；滯留時間2.872分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 724.3。 實例 276( 方法 8)： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-50%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-(1-甲基氮雜環丁烷-3-亞基)乙-1-酮(8.35 mg，20.32%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 2H), 7.58 - 7.51 (m, 1H), 6.07 - 5.97 (m, 1H), 5.43 - 5.18 (m, 2H), 4.26 - 4.11 (m, 4H), 4.07 - 3.89 (m, 3H), 3.88 - 3.75 (m, 1H), 3.68 - 3.47 (m, 2H), 3.47 - 3.37 (m, 3H), 3.16 (br d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.96 - 2.88 (m, 1H), 2.41 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.38 - 2.24 (m, 2H), 2.14 - 2.02 (m, 3H), 1.94 - 1.83 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)；滯留時間1.918分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 673.3。 實例 277( 方法 1)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈灰色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(39.04 mg，36.26%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.24 - 9.19 (m, 1H), 8.74 - 8.66 (m, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 6.1, 9.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.52 - 7.42 (m, 3H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 5.40 - 5.07 (m, 2H), 4.19 - 3.98 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 2H), 3.59 - 3.43 (m, 1H), 3.42 - 3.38 (m, 3H), 3.06 - 2.91 (m, 3H), 2.80 - 2.69 (m, 1H), 2.58 (d, J = 13.0 Hz, 3H), 2.42 - 2.31 (m, 2H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 1H), 2.08 - 1.89 (m, 3H), 1.80 - 1.65 (m, 3H), 0.75 - 0.67 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.275分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 722.3。 實例 278( 方法 2)： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(24.5 mg，23.41%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.22 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 8.82 - 8.75 (m, 1H), 8.29 - 8.19 (m, 2H), 7.75 - 7.67 (m, 2H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 5.45 - 5.16 (m, 2H), 4.27 - 4.13 (m, 2H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 4.00 - 3.76 (m, 2H), 3.68 - 3.51 (m, 1H), 3.47 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 3.15 - 2.98 (m, 3H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.66 (d, J = 12.7 Hz, 3H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.33 (br t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.18 - 2.11 (m, 1H), 2.10 - 1.97 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 3H)。LCMS Rt = 2.160分鐘，m/z = 718.3 [M + H] +。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.160分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 718.3。 實例 279( 方法 1)： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(25.23 mg，22.34%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.31 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 6.1, 9.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.50 (m, 5H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 5.49 - 5.14 (m, 2H), 4.30 - 4.06 (m, 3H), 4.04 - 3.79 (m, 2H), 3.67 - 3.53 (m, 1H), 3.51 (br d, J = 3.3 Hz, 3H), 3.20 - 2.97 (m, 4H), 2.90 - 2.80 (m, 1H), 2.65 (s, 1H), 2.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.58 - 2.53 (m, 2H), 2.49 - 2.40 (m, 3H), 2.38 - 2.22 (m, 2H), 2.21 - 1.97 (m, 3H), 1.92 - 1.73 (m, 3H), 0.84 - 0.77 (m, 3H) LCMS Rt = 2.274分鐘，m/z = 736.4 [M + H]+。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.274分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.4。 實例 280( 方法 14- 主方法)： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-(3-(((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 3-(((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #2 步驟 5類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之3-(((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(100 mg，43.34%)。LCMS Rt = 0.977分鐘，m/z = 828.4 [M + H] +。 步驟 2 ： 3-(((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
向3-(((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(95 mg，114.59 µmol)於N,N-二甲基甲醛(1 mL)中之溶液中添加氟化銫(87.03 mg，572.93 µmol)，且在20℃下攪拌混合物1小時。用水(10 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(150 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.707分鐘，m/z = 672.3 [M + H] +。 步驟 3 ： N-( 氮雜環丁烷 -3- 基甲基 )-7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色膠狀之N-(氮雜環丁烷-3-基甲基)-7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.536分鐘，m/z = 572.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-(3-(((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 2 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)-1-(3-(((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(7.23 mg，8.31%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.27 - 9.16 (m, 1H), 8.22 - 8.14 (m, 2H), 7.72 - 7.52 (m, 4H), 7.38 - 7.13 (m, 2H), 5.33 - 5.16 (m, 1H), 4.56 - 4.40 (m, 1H), 4.33 - 4.02 (m, 5H), 3.93 - 3.86 (m, 1H), 3.76 - 3.65 (m, 1H), 3.60 (s, 2H), 3.49 - 3.32 (m, 1H), 3.31 - 3.14 (m, 3H), 3.01 - 2.92 (m, 2H), 2.89 - 2.76 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.22 - 1.96 (m, 3H), 1.89 - 1.70 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.640分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 732.3。 實例 281( 方法 10)： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 10 步驟 6類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(153 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.520分鐘，m/z = 562.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-4-( 二甲基胺基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 10 步驟 7類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (中性條件，管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-4-(二甲基胺基)-1-((R)-3-((8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(19.14 mg，12.17%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.81 - 7.72 (m, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 2H), 7.34 - 7.25 (m, 1H), 6.77 (dtd, J = 2.4, 6.2, 15.1 Hz, 1H), 6.47 - 6.36 (m, 1H), 5.47 - 5.19 (m, 2H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.15 (m, 1H), 4.14 - 3.93 (m, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 1H), 3.72 - 3.54 (m, 2H), 3.46 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 3.17 (br dd, J = 2.1, 7.3 Hz, 2H), 3.11 - 3.06 (m, 3H), 2.97 - 2.88 (m, 1H), 2.66 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.45 - 2.38 (m, 1H), 2.36 - 2.31 (m, 1H), 2.23 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 2.20 (br s, 1H), 2.13 (br d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.08 (br s, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.853分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 673.3。 實例 282( 方法 8)： (E)-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-2-((E)-3-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3- 側氧基丙 -1- 烯 -1- 基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-2-((E)-3-((R)-3-((8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-側氧基丙-1-烯-1-基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(440 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.734分鐘，m/z = 771.4 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-3-((R)- 氮雜環丁烷 -2- 基 )-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之(E)-3-((R)-氮雜環丁烷-2-基)-1-((R)-3-((8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(100 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 1.229分鐘，m/z = 671.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((8- 氟 -7-(6- 氟 -5- 甲基萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-((R)-1- 甲基氮雜環丁烷 -2- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 6類似之方式來進行還原胺化。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((8-氟-7-(6-氟-5-甲基萘-1-基)-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-((R)-1-甲基氮雜環丁烷-2-基)丙-2-烯-1-酮(3.75 mg，3.38%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.29 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.29 - 8.18 (m, 1H), 7.83 - 7.69 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 2H), 7.35 - 7.26 (m, 1H), 6.79 (dd, J = 5.8, 15.1 Hz, 1H), 6.46 - 6.35 (m, 1H), 5.45 - 5.20 (m, 2H), 4.31 - 4.07 (m, 3H), 4.02 - 3.75 (m, 2H), 3.72 - 3.64 (m, 1H), 3.61 - 3.51 (m, 2H), 3.46 (d, J = 1.9 Hz, 4H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 3.19 - 3.14 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.97 - 2.77 (m, 3H), 2.67 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.48 - 2.37 (m, 1H), 2.35 - 2.30 (m, 1H), 2.29 - 2.24 (m, 3H), 1.91 - 1.85 (m, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%三氟乙酸，經6分鐘)；滯留時間2.063分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 685.3。 實例 283( 方法 1)： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-(3-(((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 )-1-(3-(((7-(8- 乙基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 氮雜環丁烷 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈灰色非晶形固體狀之(E)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)-1-(3-(((7-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮(36.28 mg，55.09%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.30 (s, 1H), 8.14 - 8.08 (m, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.58 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 7.25 - 7.16 (m, 1H), 5.31 - 5.14 (m, 1H), 4.48 (br t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.22 - 4.13 (m, 2H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.24 - 3.18 (m, 1H), 3.06 (br d, J = 14.5 Hz, 2H), 2.99 (br d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.60 - 2.57 (m, 3H), 2.45 - 2.42 (m, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.15 - 1.94 (m, 4H), 1.86 - 1.66 (m, 4H), 0.80 - 0.74 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.051分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.4。 實例 284( 方法 1)： (E)-1-(2-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.4] 辛 -6- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 2-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.4] 辛烷 -6- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之2-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.4]辛烷-6-甲酸三級丁酯(80 mg，15.83%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.789分鐘，m/z = 676.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-4-(2,6- 二氮雜螺 [3.4] 辛 -2- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-4-(2,6-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(70 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.525分鐘，m/z = 576.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-(2-(7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.4] 辛 -6- 基 )-4- 嗎啉代丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-70%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-(2-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.4]辛-6-基)-4-嗎啉代丁-2-烯-1-酮(7.46 mg，9.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.91 (s, 1H), 8.11 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.01 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 7.55 - 7.46 (m, 1H), 6.68 (br s, 1H), 6.42 - 6.31 (m, 1H), 5.36 - 5.13 (m, 1H), 4.68 (br d, J = 5.6 Hz, 4H), 4.22 - 4.02 (m, 2H), 3.92 - 3.70 (m, 2H), 3.67 - 3.59 (m, 5H), 3.53 (br t, J = 6.3 Hz, 1H), 3.19 - 3.02 (m, 5H), 2.96 - 2.82 (m, 1H), 2.40 (br s, 4H), 2.35 - 2.23 (m, 2H), 2.11 - 2.00 (m, 3H), 1.90 - 1.73 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間1.865分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 729.3。 實例 285 ( 方法 1) ： 1-((R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 7-(8- 氯萘 -1- 基 )-N-((R)-4,4- 二氟吡咯啶 -3- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之7-(8-氯萘-1-基)-N-((R)-4,4-二氟吡咯啶-3-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.765分鐘，m/z = 600.2 [M + H] +。 步驟 2 ： 1-((R)-4-((7-(8- 氯萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-3,3- 二氟吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之1-((R)-4-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)-3,3-二氟吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(14.54 mg，31.62%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.32 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 8.18 - 8.14 (m, 1H), 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 6.67 - 6.47 (m, 1H), 6.33 (dd, J = 2.1, 16.8 Hz, 1H), 5.91 - 5.70 (m, 2H), 5.38 - 5.16 (m, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 4.25 - 4.18 (m, 2H), 4.18 - 3.96 (m, 3H), 3.60 (br s, 3H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 3.07 (s, 1H), 2.95 - 2.88 (m, 1H), 2.15 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.03 (m, 1H), 1.94 - 1.83 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.107分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 654.2。 實例 286 ( 方法 12) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((S)-3- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4- 溴 -1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 1類似之方式來進行偶合反應。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之(E)-4-溴-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(850 mg，粗物質)，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.786分鐘，m/z = 718.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((S)-3- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。將反應混合物在真空中濃縮至乾且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-((S)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(8.63 mg，8.14%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.19 (t, J = 3.8 Hz, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.74 - 7.65 (m, 2H), 7.61 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.74 - 6.63 (m, 1H), 6.49 - 6.36 (m, 1H), 5.37 - 5.20 (m, 2H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.11 - 4.03 (m, 2H), 3.92 - 3.84 (m, 2H), 3.77 - 3.60 (m, 2H), 3.56 - 3.45 (m, 1H), 3.43 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 3.23 - 3.19 (m, 2H), 3.18 - 3.15 (m, 3H), 3.12 - 3.00 (m, 3H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.60 - 2.54 (m, 1H), 2.49 - 2.40 (m, 2H), 2.38 - 2.24 (m, 2H), 2.16 - 2.04 (m, 2H), 2.03 - 1.93 (m, 2H), 1.87 - 1.64 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.933分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 739.4。 實例 287 ( 方法 12) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((R)-3- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((R)-3- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-((R)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(7 mg，6.46%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.19 - 9.15 (m, 1H), 8.18 - 8.10 (m, 2H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.47 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.84 - 6.74 (m, 1H), 6.46 - 6.36 (m, 1H), 5.43 - 5.19 (m, 2H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.11 (m, 1H), 4.04 - 3.82 (m, 3H), 3.73 - 3.52 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.30 - 3.27 (m, 1H), 3.26 - 3.23 (m, 3H), 3.22 (s, 2H), 3.18 - 3.13 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.72 - 2.63 (m, 2H), 2.57 (td, J = 3.7, 10.2 Hz, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 3H), 2.19 (br d, J = 1.8 Hz, 1H), 2.12 (br d, J = 2.6 Hz, 1H), 2.09 - 2.01 (m, 2H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.78 - 1.67 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.929分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 739.4。 實例 288 ( 方法 12) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((S)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((S)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-((S)-3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(8.82 mg，8.70%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.19 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.75 - 7.64 (m, 2H), 7.61 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.79 - 6.66 (m, 1H), 6.50 - 6.39 (m, 1H), 5.38 - 5.24 (m, 2H), 5.23 - 5.10 (m, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 2H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.79 - 3.58 (m, 2H), 3.57 - 3.45 (m, 1H), 3.43 (d, J = 3.8 Hz, 3H), 3.39 (br s, 1H), 3.28 - 3.23 (m, 2H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 3.02 (s, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 3H), 2.71 - 2.55 (m, 1H), 2.35 (td, J = 7.5, 14.9 Hz, 2H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 2H), 2.05 - 1.88 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.966分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 727.3。 實例 289 ( 方法 12) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-4-((R)-3- 氟吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-4-((R)-3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(7 mg，6.86%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.21 - 9.13 (m, 1H), 8.18 - 8.08 (m, 2H), 7.74 - 7.65 (m, 2H), 7.47 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.85 - 6.75 (m, 1H), 6.50 - 6.37 (m, 1H), 5.44 - 5.09 (m, 3H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 4.11 - 3.82 (m, 2H), 3.72 - 3.62 (m, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.32 - 3.27 (m, 2H), 3.20 - 3.14 (m, 2H), 3.13 - 3.08 (m, 1H), 2.96 - 2.83 (m, 3H), 2.75 - 2.59 (m, 1H), 2.40 (br dd, J = 7.9, 15.0 Hz, 2H), 2.29 (br s, 1H), 2.20 (br d, J = 1.0 Hz, 2H), 2.17 - 2.11 (m, 2H), 2.04 (br s, 2H), 1.94 - 1.85 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.963分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 727.3。 實例 290 ( 方法 12) ： (E)-4-((1R,4R)-2- 氧雜 -5- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-((1R,4R)-2- 氧雜 -5- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-4-((1R,4R)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(9.72 mg，9.26%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.19 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.61 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.73 - 6.62 (m, 1H), 6.48 - 6.37 (m, 1H), 5.37 - 5.20 (m, 2H), 4.34 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.11 - 4.02 (m, 2H), 3.95 - 3.81 (m, 2H), 3.77 - 3.60 (m, 2H), 3.55 - 3.45 (m, 3H), 3.43 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 3.39 (br d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.33 - 3.25 (m, 2H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 3.05 - 3.00 (m, 1H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.78 - 2.72 (m, 1H), 2.47 - 2.41 (m, 1H), 2.39 - 2.24 (m, 2H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 2.08 - 1.96 (m, 2H), 1.87 - 1.80 (m, 1H), 1.78 - 1.72 (m, 2H), 1.61 - 1.55 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.821分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 737.3。 實例 291 ( 方法 12) ： (E)-4-((1S,4S)-2- 氧雜 -5- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-((1S,4S)-2- 氧雜 -5- 氮雜雙環 [2.2.1] 庚 -5- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(E)-4-((1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(8 mg，7.80%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.17 (dd, J = 2.6, 4.1 Hz, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.47 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.81 - 6.71 (m, 1H), 6.48 - 6.38 (m, 1H), 5.44 - 5.18 (m, 2H), 4.34 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.12 (m, 1H), 4.09 - 3.81 (m, 3H), 3.74 - 3.47 (m, 4H), 3.45 (s, 3H), 3.39 (dt, J = 1.6, 6.6 Hz, 1H), 3.32 - 3.25 (m, 1H), 3.19 - 3.13 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.97 - 2.88 (m, 1H), 2.85 - 2.77 (m, 1H), 2.53 (br dd, J = 6.6, 9.6 Hz, 1H), 2.46 - 2.40 (m, 1H), 2.38 - 2.25 (m, 2H), 2.19 - 2.15 (m, 1H), 2.12 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.09 - 2.04 (m, 1H), 1.94 - 1.77 (m, 4H), 1.70 - 1.62 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.816分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 737.3。 實例 292 ( 方法 12) ： (E)-4-((1R,5S)-3- 氧雜 -8- 氮雜雙環 [3.2.1] 辛 -8- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-((1R,5S)-3- 氧雜 -8- 氮雜雙環 [3.2.1] 辛 -8- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-4-((1R,5S)-3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(7.88 mg，7.54%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.19 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.61 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.71 - 6.63 (m, 1H), 6.53 - 6.42 (m, 1H), 5.37 - 5.19 (m, 2H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 2H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.77 - 3.61 (m, 2H), 3.59 - 3.49 (m, 3H), 3.43 (br d, J = 4.4 Hz, 4H), 3.15 - 2.98 (m, 8H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 2H), 1.88 - 1.82 (m, 3H), 1.81 - 1.76 (m, 2H), 1.75 - 1.70 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.928分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 751.4。 實例 293 ( 方法 12) ： (E)-4-(3- 氧雜 -6- 氮雜雙環 [3.1.1] 庚 -6- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-4-(3- 氧雜 -6- 氮雜雙環 [3.1.1] 庚 -6- 基 )-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #12 步驟 2類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(E)-4-(3-氧雜-6-氮雜雙環[3.1.1]庚-6-基)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯-1-酮(7 mg，6.83%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.17 (dd, J = 2.4, 4.8 Hz, 1H), 8.18 - 8.06 (m, 2H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.47 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.78 (td, J = 5.3, 15.2 Hz, 1H), 6.51 - 6.38 (m, 1H), 5.44 - 5.18 (m, 2H), 4.23 - 4.11 (m, 4H), 4.09 - 3.78 (m, 2H), 3.70 - 3.66 (m, 2H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.56 - 3.47 (m, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.31 - 3.25 (m, 1H), 3.21 - 3.12 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 1H), 2.66 - 2.56 (m, 1H), 2.47 - 2.37 (m, 1H), 2.34 - 2.25 (m, 2H), 2.19 (br d, J = 1.8 Hz, 1H), 2.17 - 2.10 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.84 - 1.78 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.833分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 737.3。 實例 294 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 醇
向乙脒鹽酸鹽(702.06 mg，7.43 mmol)於甲醇(15 mL)中之溶液中添加甲醇鈉(2.70 mL)及2-氟-3-側氧基-丁酸乙酯(1 g，6.75 mmol)。在80℃下攪拌混合物12小時。用水(10 mL)稀釋反應混合物且用二氯甲烷(2 x 10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈黃色固體狀之5-氟-2,6-二甲基嘧啶-4-醇(850 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.433分鐘，m/z = 142.1 [M + H] +。 步驟 2 ： 4- 氯 -5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶
向5-氟-2,6-二甲基-嘧啶-4-醇(800 mg，5.63 mmol)於氧氯化磷(10 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(3.64 g，28.14 mmol)。在80℃下攪拌混合物1小時。用飽和碳酸氫鈉(30 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2 x 100 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之4-氯-5-氟-2,6-二甲基嘧啶(2.5 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.543分鐘，m/z = 160.0 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸乙酯
將4-氯-5-氟-2,6-二甲基-嘧啶(1 g，6.23 mmol)、(E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)丙-2-烯酸乙酯(1.41 g，6.23 mmol)、[2-(胺基-κN)[1,1-聯苯]-2-基-κC]氯[二環己基[2,4,6-參(1-甲基乙基)[1,1-聯苯]-2-基]膦]鈀(489.98 mg，622.76 umol)及磷酸鉀(3.97 g，18.68 mmol)於二噁烷(10 mL)及水(5 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物2小時。用水(30 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，得到呈棕色油狀之(E)-3-(5-氟-2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙烯酸乙酯(2.4 g，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.679分鐘，m/z = 224.1 [M + H] +。 步驟 4 ： (E)-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙烯酸
以與 方法 #1 步驟 4類似之方式來進行水解反應。在真空中濃縮粗產物，得到呈黃色固體狀之(E)-3-(5-氟-2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙烯酸(50 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.433分鐘，m/z = 196.1 [M + H] +。 步驟 5 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈黃色油狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(3.16 mg，14.14%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.42 - 9.17 (m, 1H), 8.25 - 8.07 (m, 1H), 7.92 (br dd, J = 4.3, 8.6 Hz, 1H), 7.72 (br d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.66 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 1H), 5.51 - 5.21 (m, 2H), 4.35 - 4.18 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.95 - 3.74 (m, 2H), 3.71 - 3.60 (m, 1H), 3.48 (d, J = 3.1 Hz, 3H), 3.32 - 3.06 (m, 3H), 3.03 - 2.90 (m, 1H), 2.62 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 2.49 (br dd, J = 2.8, 4.0 Hz, 3H), 2.14 - 2.02 (m, 4H), 1.95 - 1.72 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.076分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 744.3。 實例 295 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(29.25 mg，27.16%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (s, 1H), 8.60 (dd, J = 2.2, 6.6 Hz, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.96 - 7.85 (m, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 2H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.55 (dt, J = 7.8, 9.6 Hz, 1H), 5.48 - 5.15 (m, 2H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.08 - 3.99 (m, 1H), 3.96 - 3.74 (m, 2H), 3.71 - 3.51 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.21 - 3.05 (m, 3H), 2.96 - 2.84 (m, 1H), 2.68 (d, J = 14.6 Hz, 3H), 2.51 - 2.41 (m, 1H), 2.39 - 2.30 (m, 1H), 2.18 - 2.04 (m, 3H), 1.88 (br d, J = 14.9 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.042分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 730.3。 實例 296 ( 方法 1) ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #1 步驟 8類似之方式來進行取代反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(97 mg，43.89%)。LCMS Rt = 0.717分鐘，m/z = 652.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(60 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.518分鐘，m/z = 552.2 [M + H] +。 步驟 3 ： (E)-1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-65%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(97 mg，43.89%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.15 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.16 - 8.09 (m, 1H), 7.91 (ddd, J= 1.6, 5.1, 9.2 Hz, 1H), 7.73 - 7.67 (m, 2H), 7.39 (br s, 4H), 7.24 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 5.37 - 5.20 (m, 1H), 5.03 - 4.90 (m, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.19 - 4.15 (m, 1H), 4.03 - 3.62 (m, 4H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 3.11 - 3.07 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.62 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 2.46 (d, J= 4.5 Hz, 3H), 2.41 - 2.30 (m, 1H), 2.28 - 2.22 (m, 1H), 2.16 - 2.06 (m, 3H), 1.94 - 1.81 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.915分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 712.3。 實例 297 ( 方法 3) ： 8-(4-(((R)-1- 丙烯醯基吡咯啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 )-1- 萘甲腈 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 氰基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #3 步驟 6類似之方式來進行施蒂勒反應。在真空中濃縮混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 100*40mm*3 um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30%-72%，8分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-氰基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(100 mg，60.51%，三氟乙酸)。LCMS Rt = 1.601分鐘，m/z = 655.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 8-(8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-4-( 甲基 ((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 )-1- 萘甲腈
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈棕色油狀之8-(8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-4-(甲基((R)-吡咯啶-3-基)胺基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-1-萘甲腈(90 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.438n，m/z = 555.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 8-(4-(((R)-1- 丙烯醯基吡咯啶 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -7- 基 )-1- 萘甲腈
以與 方法 #3 步驟 8類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之8-(4-(((R)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)(甲基)胺基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-1-萘甲腈(16.68 mg，20.36%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.23 - 8.16 (m, 1H), 8.02 (dd, J = 1.1, 7.2 Hz, 1H), 7.82 - 7.75 (m, 2H), 7.67 (dd, J = 7.4, 8.1 Hz, 1H), 6.58 (ddd, J = 10.3, 15.4, 16.7 Hz, 1H), 6.26 - 6.20 (m, 1H), 5.67 (ddd, J = 2.3, 6.4, 10.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.34 (m, 1H), 5.33 - 5.17 (m, 1H), 4.24 - 4.19 (m, 1H), 4.15 - 4.08 (m, 1H), 3.99 - 3.77 (m, 2H), 3.69 - 3.61 (m, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 3.43 (d, J = 1.7 Hz, 3H), 3.17 - 3.09 (m, 2H), 3.06 (s, 1H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 1H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 2.22 - 2.19 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 2H), 1.91 - 1.73 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.770分鐘。ESI+實驗值[M+H] = 609.3。 實例 298 ( 方法 8) ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮 步驟 1 ： (2-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 膦酸二乙酯
以與 方法 #8 步驟 3類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈棕色油狀之(2-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)膦酸二乙酯(150 mg，68.60%)。LCMS Rt = 1.487分鐘，m/z = 750.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-(1-甲基氮雜環丁烷-3-亞基)乙-1-酮(17.92 mg，18.25%)： 1H NMR (400 MHz, 二甲亞砜-d6) δ 9.20 - 9.13 (m, 1H), 8.25 - 8.17 (m, 2H), 7.72 - 7.63 (m, 2H), 7.60 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.09 - 6.01 (m, 1H), 5.37 - 5.19 (m, 2H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.11 - 4.05 (m, 3H), 4.04 - 3.97 (m, 1H), 3.92 - 3.74 (m, 3H), 3.71 - 3.44 (m, 6H), 3.08 (br d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.04 - 2.99 (m, 1H), 2.86 - 2.78 (m, 1H), 2.37 - 2.30 (m, 3H), 2.28 - 2.21 (m, 1H), 2.13 (br s, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 2H), 1.94 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.67 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.880分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 681.3。 實例 299 ( 方法 8) ： 1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(7,8- 二氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-55%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(7,8-二氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-(1-甲基氮雜環丁烷-3-亞基)乙-1-酮(8.15 mg，7.42%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.20 - 9.12 (m, 1H), 8.03 - 7.92 (m, 1H), 7.77 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 1H), 5.88 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.49 - 5.38 (m, 1H), 5.37 - 5.18 (m, 1H), 4.47 - 4.25 (m, 3H), 4.24 - 4.17 (m, 1H), 4.13 - 4.00 (m, 2H), 3.98 - 3.78 (m, 1H), 3.73 - 3.60 (m, 1H), 3.59 - 3.50 (m, 1H), 3.50 - 3.40 (m, 3H), 3.32 - 3.15 (m, 3H), 3.05 - 2.91 (m, 1H), 2.58 - 2.43 (m, 3H), 2.40 - 2.10 (m, 5H), 2.05 - 1.84 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.902分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 675.3。 實例 300 ( 方法 8) ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮 步驟 1 ： 1-((R)-3-((7-(8- 氯 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-2-(1- 甲基氮雜環丁烷 -3- 亞基 ) 乙 -1- 酮
以與 方法 #8 步驟 4類似之方式來進行HWE反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-2-(1-甲基氮雜環丁烷-3-亞基)乙-1-酮(16.59 mg，13.81%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.20 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.21 - 8.06 (m, 2H), 7.78 - 7.63 (m, 2H), 7.54 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 6.08 - 5.94 (m, 1H), 5.44 - 5.17 (m, 2H), 4.26 - 4.11 (m, 4H), 4.09 - 3.87 (m, 3H), 3.85 - 3.74 (m, 1H), 3.68 - 3.48 (m, 2H), 3.44 (br d, J = 4.1 Hz, 3H), 3.19 - 3.04 (m, 3H), 2.98 - 2.86 (m, 1H), 2.43 - 2.36 (m, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 2H), 2.17 - 2.02 (m, 3H), 1.94 - 1.82 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間1.970分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 691.3。 實例 301 ( 方法 14) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2- 甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #14 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2-甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(17.13 mg，26.49%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.26 - 9.17 (m, 1H), 8.68 - 8.57 (m, 1H), 8.22 - 8.09 (m, 2H), 7.74 - 7.58 (m, 4H), 7.52 - 7.42 (m, 1H), 5.51 - 5.17 (m, 2H), 4.24 (br d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.97 - 3.69 (m, 2H), 3.67 - 3.53 (m, 1H), 3.48 (d, J = 3.3 Hz, 3H), 3.32 - 3.25 (m, 1H), 3.19 - 3.06 (m, 3H), 2.95 - 2.86 (m, 1H), 2.73 - 2.65 (m, 3H), 2.53 - 2.45 (m, 1H), 2.41 - 2.34 (m, 1H), 2.13 (br d, J = 3.3 Hz, 3H), 1.92 - 1.78 (m, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.999分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 736.3。 實例 302 ( 方法 14) ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (E)-1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-3-(5- 氟 -2,6- 二甲基嘧啶 -4- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #14 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：40%-70%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色非晶形固體狀之(E)-1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)-3-(5-氟-2,6-二甲基嘧啶-4-基)丙-2-烯-1-酮(16.23 mg，9.70%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.22 - 9.17 (m, 1H), 8.18 - 8.11 (m, 2H), 7.72 - 7.65 (m, 3H), 7.64 - 7.55 (m, 1H), 7.47 (t, J= 9.1 Hz, 1H), 5.54 - 5.17 (m, 2H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.18 - 4.00 (m, 2H), 3.98 - 3.67 (m, 2H), 3.65 - 3.52 (m, 1H), 3.48 (d, J= 3.4 Hz, 3H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.17 (br d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.11 - 3.06 (m, 1H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.65 - 2.59 (m, 3H), 2.48 (dd, J= 2.6, 4.6 Hz, 3H), 2.16 - 2.01 (m, 4H), 1.94 - 1.77 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.045分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 750.3。 實例 303 ( 方法 14) ： (R)-1-(3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #14 步驟 1類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(340 mg，87.36%)。LCMS Rt = 0.873分鐘，m/z = 810.5 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 14 步驟 2類似之方式來進行TIPS基團之去保護。在真空中濃縮殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(140 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.648分鐘，m/z = 654.3 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -N- 甲基 -N-( 吡咯啶 -3- 基 )-2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 14 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之(R)-7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-N-甲基-N-(吡咯啶-3-基)-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(122.55 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.475分鐘，m/z = 554.3 [M + H] +。 步驟 4 ： (R)-1-(3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(( 四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 14 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色非晶形固體狀之(R)-1-(3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(8.11 mg，7.27%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.25 - 9.10 (m, 1H), 8.23 - 8.07 (m, 2H), 7.76 - 7.64 (m, 2H), 7.47 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 6.62 (ddd, J = 10.3, 14.1, 16.8 Hz, 1H), 6.26 (td, J = 2.4, 16.9 Hz, 1H), 5.70 (ddd, J = 2.2, 5.7, 10.3 Hz, 1H), 5.51 - 5.30 (m, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.17 - 3.82 (m, 2H), 3.79 - 3.49 (m, 2H), 3.48 - 3.41 (m, 3H), 3.34 - 3.25 (m, 1H), 3.08 - 2.94 (m, 2H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.50 - 2.37 (m, 1H), 2.14 (br dd, J = 2.6, 4.9 Hz, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 2H), 1.92 - 1.77 (m, 5H), 1.72 - 1.62 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.711分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 608.3。 實例 304 ( 方法 1) ： 1-((R)-3-((7-(8- 環丙基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7-(8- 環丙基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
將(R)-3-((7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(90 mg，135.30 umol)、環丙基硼酸(58.11 mg，676.52 umol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (39.60 mg，54.12 umol)、氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) (21.29 mg，27.06 umol)及碳酸銫(132.25 mg，405.91 umol)於二噁烷(1.5 mL)及水(0.5 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化剩餘殘餘物，得到呈黃色固體狀之(R)-3-((7-(8-環丙基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(32 mg，35.26%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 1.850分鐘，m/z = 670.3 [M + H] +。 步驟 2 ： 7-(8- 環丙基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 1 步驟 9類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈淡黃色油狀之7-(8-環丙基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(25.52 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.539分鐘，m/z = 570.3 [M + H] +。 步驟 3 ： 1-((R)-3-((7-(8- 環丙基萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #1 步驟 10類似之方式來進行醯胺偶合反應。在真空中濃縮反應混合物且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-環丙基萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(4.67 mg，18.95%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 1H), 7.35 - 7.31 (m, 1H), 6.66 - 6.32 (m, 1H), 6.16 (td, J = 2.6, 16.9 Hz, 1H), 5.59 (ddd, J = 2.3, 6.0, 10.3 Hz, 1H), 5.39 - 4.99 (m, 2H), 4.18 - 4.09 (m, 1H), 4.07 - 4.00 (m, 1H), 3.93 - 3.69 (m, 2H), 3.65 - 3.53 (m, 1H), 3.52 - 3.36 (m, 1H), 3.34 - 3.26 (m, 3H), 3.09 - 2.96 (m, 3H), 2.87 - 2.77 (m, 1H), 2.36 - 2.27 (m, 1H), 2.24 - 2.17 (m, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 3H), 1.80 - 1.75 (m, 2H), 1.58 - 1.48 (m, 1H), 1.27 - 1.13 (m, 1H), 0.64 - 0.35 (m, 1H), 0.34 - 0.15 (m, 2H), 0.06 - 0.11 (m, 1H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.114分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 624.3。 實例 305 ( 方法 14) ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((7- 氯 -8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 2 步驟 4類似之方式來進行取代反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，70-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黑色油狀之(R)-3-((7-氯-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(500 mg，77.23%)。LCMS Rt = 0.615分鐘，m/z = 539.2 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((8- 氟 -7-(7- 氟 -8-(( 三異丙基矽基 ) 乙炔基 ) 萘 -1- 基 )-2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #14 步驟 1類似之方式來進行鈴木反應。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-8%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((8-氟-7-(7-氟-8-((三異丙基矽基)乙炔基)萘-1-基)-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(120 mg，9.10%)。LCMS Rt = 0.930分鐘，m/z = 829.4 [M + H] +。 步驟 3 ： (R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 # 14 步驟 2類似之方式來進行TIPS基團之去保護。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之(R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(60 mg，67.22%)。LCMS Rt = 0.673分鐘，m/z = 673.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 14 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(45 mg，粗物質，鹽酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.544分鐘，m/z = 573.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((R)-3-((7-(8- 乙炔基 -7- 氟萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aR)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 14 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈淡黃色固體狀之1-((R)-3-((7-(8-乙炔基-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aR)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(11.35 mg，22.51%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 9.19 - 9.12 (m, 1H), 8.02 - 7.92 (m, 2H), 7.67 - 7.52 (m, 2H), 7.39 - 7.32 (m, 1H), 6.57 - 6.39 (m, 2H), 5.79 - 5.69 (m, 1H), 5.56 - 5.27 (m, 2H), 4.64 - 4.42 (m, 2H), 4.30 - 3.95 (m, 2H), 3.93 - 3.72 (m, 2H), 3.67 - 3.56 (m, 1H), 3.48 (br d, J = 4.4 Hz, 3H), 3.32 - 2.84 (m, 3H), 2.83 - 2.53 (m, 2H), 2.52 - 2.20 (m, 3H), 2.11 - 1.75 (m, 4H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.837分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 627.3。 實例 306 ( 方法 15) ： 1-((R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： 1- 溴 -8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘
將1,8-二溴萘(5 g，17.48 mmol)、丁-2-炔酸(1.76 g，20.98 mmol)、雙(三苯基膦)二氯化鈀(II) (613.63 mg，874.24 umol)、1,4-雙(二苯基膦基)丁烷(745.67 mg，1.75 mmol)及1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(7.99 g，52.45 mmol)於DMSO (100 mL)中之混合物脫氣且用氮氣吹掃3次。在100℃下於氮氣氛圍下攪拌混合物1小時。用水(80 mL)稀釋混合物且用甲基三級丁基醚(3 x 80 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，100-200目，0-100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之1-溴-8-(丙-1-炔-1-基)萘(4.2 g，98.00%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.94 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 2.13 (s, 3H)。 步驟 2 ： 4,4,5,5- 四甲基 -2-(8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘 -1- 基 )-1,3,2- 二氧硼雜環戊烷
向1-溴-8-丙-1-炔基-萘(500 mg，2.04 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(2.5 M，917.94 uL，於正己烷中)及2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(379.53 mg，2.04 mmol)。在-78℃下攪拌混合物1小時。在0℃下用飽和氯化銨(30 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 x 30 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化粗產物，得到呈白色固體狀之4,4,5,5-四甲基-2-(8-(丙-1-炔-1-基)萘-1-基)-1,3,2-二氧硼雜環戊烷(140 mg，23.49%)： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.84 (dd, J = 1.1, 8.2 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.70 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 6.9, 8.1 Hz, 1H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.45 (s, 12H)。 步驟 3 ： (R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #14 步驟 1類似之方式來進行鈴木反應。藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(8-(丙-1-炔-1-基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(106 mg，60.78%)。LCMS Rt = 0.665分鐘，m/z = 668.3 [M + H] +。 步驟 4 ： 8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -7-(8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘 -1- 基 )-N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 # 14 步驟 3類似之方式來進行Boc基團之去保護。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-N-甲基-7-(8-(丙-1-炔-1-基)萘-1-基)-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(87 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.520分鐘，m/z = 568.3 [M + H] +。 步驟 5 ： 1-((R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟四氫 -1H- 吡咯嗪 -7a (5H)- 基 ) 甲氧基 )-7-(8-( 丙 -1- 炔 -1- 基 ) 萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 # 14 步驟 4類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：35%-65%，8分鐘)純化粗產物，得到呈黃色油狀之1-((R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(8-(丙-1-炔-1-基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(45.13 mg，57.53%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 9.24 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 0.9, 8.1 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.53 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.23 (td, J= 2.7, 16.8 Hz, 1H), 5.71 - 5.63 (m, 1H), 5.43 - 5.16 (m, 2H), 4.24 - 4.18 (m, 1H), 4.16 - 4.12 (m, 1H), 4.11 - 3.93 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 1H), 3.70 - 3.62 (m, 1H), 3.60 - 3.45 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.18 - 3.07 (m, 2H), 3.05 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.42 - 2.18 (m, 3H), 2.11 - 2.00 (m, 2H), 1.92 - 1.78 (m, 3H), 1.27 (dd, J= 4.1, 11.7 Hz, 3H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.03%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間3.899分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 622.3。 實例 307 ( 方法 3) ： 1-((R)-3-((7-(8-( 二氟甲基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 步驟 1 ： (R)-3-((8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-7-(8- 甲醯基萘 -1- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
以與 方法 #3 步驟 6類似之方式來進行施蒂勒反應。在真空中濃縮有機層且藉由逆相HPLC (管柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：45%-75%，8分鐘)純化，得到呈棕色固體狀之(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(8-甲醯基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(50 mg，28.72%)。LCMS Rt = 0.686分鐘，m/z = 658.3 [M + H] +。 步驟 2 ： (R)-3-((7-(8-( 二氟甲基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
在25℃下於氮氣氛圍下將(R)-3-((8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-7-(8-甲醯基萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(20 mg，30.36 umol)於氫化三氟化(二乙基胺基)硫(24.47 mg，151.81 umol)中之混合物攪拌12小時。用水(2 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 x 2 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併之有機層且在真空中濃縮。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；移動相：[水(TFA)-ACN]；B%：30%-60%，8分鐘)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(R)-3-((7-(8-(二氟甲基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(10 mg，40.00%，三氟乙酸鹽)。LCMS Rt = 0.749分鐘，m/z = 680.3[M + H] +。 步驟 3 ： 7-(8-( 二氟甲基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 )-N- 甲基 -N-((R)- 吡咯啶 -3- 基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 胺
以與 方法 #1 步驟 9類似之方式來移除Boc基團。在真空中濃縮反應混合物，得到呈黃色油狀之7-(8-(二氟甲基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)-N-甲基-N-((R)-吡咯啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-胺(10 mg，粗物質，三氟乙酸鹽)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS Rt = 0.530分鐘，m/z = 580.2 [M + H] +。 步驟 4 ： 1-((R)-3-((7-(8-( 二氟甲基 ) 萘 -1- 基 )-8- 氟 -2-(((2R,7aS)-2- 氟六氫 -1H- 吡咯嗪 -7a - 基 ) 甲氧基 ) 吡啶并 [4,3-d] 嘧啶 -4- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮
以與 方法 #3 步驟 8類似之方式來進行醯胺偶合反應。藉由逆相HPLC (管柱：Phenomenex C18 75*30mm*3um；移動相：[水(NH 4HCO 3)-ACN]；B%：25%-80%，8分鐘)純化粗殘餘物，得到呈白色非晶形固體狀之1-((R)-3-((7-(8-(二氟甲基)萘-1-基)-8-氟-2-(((2R,7aS)-2-氟六氫-1H-吡咯嗪-7a-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)胺基)吡咯啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(1.11 mg，11.90%)： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.96 (s, 1H), 8.02 - 7.86 (m, 3H), 7.58 - 7.51 (m, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.33 - 7.22 (m, 1H), 6.47 (ddd, J = 10.2, 16.8, 20.4 Hz, 1H), 6.13 (td, J = 2.8, 16.8 Hz, 1H), 5.66 - 5.47 (m, 1H), 5.38 - 4.91 (m, 2H), 4.21 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.57 (m, 3H), 3.57 - 3.48 (m, 1H), 3.44 - 3.29 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.19 - 3.13 (m, 1H), 3.06 (br s, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.31 - 2.15 (m, 4H), 1.99 (br d, J = 1.0 Hz, 2H), 1.82 - 1.67 (m, 2H)。
LCMS (5%至95%乙腈/水 + 0.1%碳酸氫銨，經6分鐘)；滯留時間2.256分鐘，ESI+實驗值[M+H] = 634.3。 生物實例 實例 308 ： KRAS G12C 及 cRAF 結合之抑制
AlphaScreen技術用於確定KRAS G12C (以Cys-輕(C51S、C80L及C118S)形式存在，包含胺基酸1-169之截短形式)及cRAF相互作用之化合物抑制的IC 50。將化合物稀釋於100% DMSO中且將各種化合物濃度以每孔200 nl點漬於低容量白色384孔板上。當Ras結合結構域(胺基酸50-131，RBD)經GST標記時，KRAS G12C含有生物素-AviTag及cRaf。KRAS G12C預加載有GTP類似物鳥苷5'-[β,γ-亞胺基]三磷酸(GMPPNP)。將KRAS G12C稀釋於25 mM Hepes (pH 7.4)、150 mM NaCl、5 mM MgCl 2、0.01% TritonX-100及10 µM GMPPNP中，且以每孔10 ul添加至化合物點漬之板中，使得DMSO濃度為2%。將板培育19-20小時。接著以每孔10 ul添加稀釋於25 mM Hepes (pH 7.4)、150 mM NaCl、5 mM MgCl 2、0.01% TritonX-100及2% DMSO中之RBD與AlphaScreen抗生蛋白鏈菌素供體及麩胱甘肽受體珠粒之混合物且培育60-90分鐘，隨後在680 nm下激發供體珠粒之後讀取樣品在570 nm下之發射。在室溫下進行所有培育。對於10點劑量反應曲線以1:3滴定，最終最高化合物濃度為50 µM。最終檢定條件為0.5 nM KRAS G12C、0.75 nM RBD及5 ug/ml AlphaScreen供體及受體珠粒中之每一者。使用[抑制劑]對比反應(4參數)之非線性回歸擬合來確定IC 50。
亦設置計數器檢定以排除AlphaScreen技術本身之抑制劑。如上文所述，將僅含緩衝液之化合物板培育19-20小時。如上文所述添加AlphaScreen珠粒，例外為用生物素-AviTag-GST替代RBD。如上文所述讀取及分析樣品。
化合物之結果示於表1中。 表1. KRAS G12C及cRAF結合之抑制(IC 50)
合成 實例 結構 IC 50
1 +++
2 (甲酸鹽) +++
3 +++
4 +
5 +
6 (三氟乙酸鹽) +++
7 (甲酸鹽) +
8 (甲酸鹽) ++
9 ++++
10 (甲酸鹽) +++
11 +++
12 +
13 +++
14 +
15 ++++
16 (甲酸鹽) +++
17 +++
18 (甲酸鹽) ++++
19 +++
20 +++
21 +
22 (三氟乙酸鹽) ++
23 +++
24 ++++
25 ++++
26 +
27 ++++
28 (甲酸鹽) +++
29 (甲酸鹽) ++
30 (甲酸鹽) +
31 (甲酸鹽) +
32 (甲酸鹽) +
33 ++
34 (甲酸鹽) ++
35 +++
36 (甲酸鹽) +++
37 在八氫吡咯并吡咯處( and) 在吡咯啶處( abs) (甲酸鹽) ++
38 (甲酸鹽) +
39 (甲酸鹽) ++
40 +++
41 (三氟乙酸鹽) +++
42 (三氟乙酸鹽) +++
43 在稠合哌啶處( or) 在吡咯啶處( abs) (甲酸鹽) +++
43 在稠合哌啶處( or) 在吡咯啶處( abs) (甲酸鹽) ++
44 在稠合哌啶處( or) 在吡咯啶處( abs) (甲酸鹽) ++++
44 在稠合哌啶處( or) 在吡咯啶處( abs) (甲酸鹽) +++
45 (甲酸鹽) +++
46 (三氟乙酸鹽) +
47 (甲酸鹽) +++
48 (甲酸鹽) ++
49 (甲酸鹽) ++++
50 +
51 (甲酸鹽) +
52 (甲酸鹽) +++
53 ++
54 (甲酸鹽) ++
55 ++++
56   +++
57   ++
58 (甲酸鹽) +++
59 (甲酸鹽) ++++
60 ++
61 +++
62   +++
63 +++
64 ++++
65 +++
66 +++
67 +++
68  (甲酸鹽) +++
69 ++
70 +++
71 +
72 ++
73 +++
74 ++
75 +++
76 ++++
77 ++++
78 ++++
79 +++
80 +++
81 +++
82 +
83 ++++
84 ++++
85  (甲酸鹽) ++++
86 ++++
87 ++
88 ++++
89  (甲酸鹽) +++
90  (甲酸鹽) +++
91 ++
92 +
93 +++
94 +++
95 ++++
96 ++
97 ++++
98  (甲酸鹽) ++++
99 +++
100 ++++
101  (甲酸鹽) ++++
102  (甲酸鹽) +++
103 +++
104 ++
105 ++++
106 +++
107 ++++
108 ++++
109 +++
110   +
111   +++
112   ++++
113   +++
114   +++
115   +
116   ++++
117   ++++
118   +++
119   ++
120   +++
121   ++++
122  (甲酸鹽) ++
123  (甲酸鹽) ++
124  (甲酸鹽) +++
125   ++++
126   ++++
127   ++
128   ++
129   +++
130 +++
131   ++++
132   ++++
133  (甲酸鹽) ++++
134   ++++
135   ++
136   +++
137   +++
138   +++
139   +++
140   +++
141   +++
142   ++++
143   ++
144  (甲酸鹽) ++++
145   ++++
146   +++
147   +++
148   ++
149   +++
150  (甲酸鹽) ++++
151   +
152  (甲酸鹽) ++++
153   +++
154   ++++
155   ++++
156   +++
157   ++++
158  (甲酸鹽) ++++
159   ++++
160   ++++
161   +++
162   ++++
163  (甲酸鹽) ++++
164  (甲酸鹽) +++
165   ++++
166   +++
167   ++++
168   +++
169   +++
170   +++
171   +++
172   +++
173   +++
174   ++++
175   ++++
176   ++++
177   +++
178   ++++
179   +++
180   +++
181   +++
182   ++++
183 ++++
184 甲酸鹽 +++
185 ++
186 ++++
187 ++++
188 ++
189 ++
190 ++
191 ++++
192 +++
193 +++
194 +++
195 +++
196 +++
197 +++
198 +
199 甲酸鹽 ++++
200 甲酸鹽 ++++
201 甲酸鹽 ++++
202 +++
203 +++
204 ++
205 ++
206 +++
207 +++
208 ++++
209 +++
210 ++++
211 +++
212 +++
213 +++
214 ++++
215 ++
216 ++
217 +
218 甲酸鹽 +++
219 +++
220 ++++
221 ++++
222 甲酸鹽 ++++
223 +++
224 +++
225 +++
226 ++
227 +++
228 ++
229 三氟乙酸鹽 ++++
230 +++
231 ++++
232 +++
233 +++
234 +++
235 ++++
236 ++++
237 +++
238 甲酸鹽 +++
239 +++
240 三氟乙酸鹽 ++++
241 ++
242 ++++
243 ++
244 ++
245 ++++
246 +++
247 ++++
248 +++
249 +++
250 ++
251 ++++
252 甲酸鹽 ++
253 ++
254 +++
255 ++++
256 +++
257 ++++
258 +++
259 ++
260 ++
261 +
262 ++
263 +
264 ++
265 +++
266 ++
267 ++
268 ++
269 ++
270 甲酸鹽 +++
271 +++
272 +++
273 ++
274 +++
275 ++
276 +++
277 ++
278 +++
279 ++
280 +++
281 ++
282 ++
283 ++
284   
285 +
286 +++
287 +++
288 +++
289 +++
290 ++++
291 ++++
292 ++++
293 ++++
294 ++
295 +++
296 +++
297 ++
298 ++++
299 ++++
300 +++
301 +++
302 +++
303 ++++
304 +
305 +++
306 +
307 +
* ++++為小於10 nM，+++為10至小於100 nM，++為100至小於500 nM，+為大於或等於500 nM 表1a. 額外示例性化合物 - KRAS G12C及cRAF結合之抑制
結構 RAF1 RBD IC50 結構 RAF1 RBD IC50
   +++
   +
   +
   +
   +
   ++
   +++
   +
   +
   +
++ ++
   +
   ++
+ ++
+ +
++ +
+ +
+++ +
++++ +++
+ ++++
+ +++
+ +++
+ +
+ +
+ +++
+ +
+++ +++
   +
   ++++
   +
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   +
   +++
+++ +
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   +
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   +
++ +
   +
   +
   +
++ +
+ +
++ +
++++ +
++ +
   +
+ +
   +
   +
++++ +
+++ +++
+++ +
++ +
++++ +
   +
++ +
++ +
+++ +
   +
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+++ +
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   +
   ++
   +
   +++
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   +
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+ +
+ +
++ ++
++ +
+++ +
+++ +
++++ ++
+++ +
++ +++
+++ +
+++ ++
+++ ++++
+++      
* ++++為小於10 nM，+++為10至小於100 nM，++為100至小於500 nM，+為大於或等於500 nM 實例 309 ： KRAS G12C 及 PI3Ka 結合之抑制
AlphaScreen技術用於確定KRAS G12C (以Cys-輕(C51S、C80L及C118S)形式存在，包含胺基酸1-169之截短形式)及PI3Ka相互作用之化合物抑制的IC 50。將化合物稀釋於100% DMSO中且將各種化合物濃度以每孔200 nl點漬於低容量白色384孔板上。當Ras結合結構域(胺基酸157-300，RBD)經His標記時，KRAS G12C含有生物素-AviTag及PI3Ka。KRAS G12C預加載有GTP類似物鳥苷5'-[β,γ-亞胺基]三磷酸(GMPPNP)。將KRAS G12C稀釋於25 mM Hepes (pH 7.4)、150 mM NaCl、5 mM MgCl 2、0.01% TritonX-100及10 µM GMPPNP中，且以每孔10 ul添加至化合物點漬之板中，使得DMSO濃度為2%。將板培育2小時。接著以每孔10 ul添加稀釋於25 mM Hepes (pH 7.4)、150 mM NaCl、5 mM MgCl 2、0.01% TritonX-100及2% DMSO中之RBD與AlphaScreen抗生蛋白鏈菌素供體及鎳螯合物受體珠粒之混合物且培育60-90分鐘，隨後在680 nm下激發供體珠粒之後讀取樣品在570 nm下之發射。在室溫下進行所有培育。對於10點劑量反應曲線以1:3滴定，最終最高化合物濃度為50 µM。最終檢定條件為1.5 nM KRAS G12C、100 nM RBD、1.25 ug/ml AlphaScreen供體珠粒及10 ug/ml AlphaLISA受體珠粒。使用[抑制劑]對比反應(4參數)之非線性回歸擬合來確定IC 50。
亦設置計數器檢定以排除AlphaScreen技術本身之抑制劑。如上文所述，將僅含緩衝液之化合物板培育19-20小時。如上文所述添加AlphaScreen珠粒，例外為用無關生物素化His標記肽替代RBD。如上文所述讀取及分析樣品。
示例性化合物之結果示於表2中。 表2. KRAS G12C及cRAF結合之抑制(IC 50)
化合物 PI3Ka RBD IC50 化合物 PI3Ka RBD IC50 化合物 PI3Ka RBD IC50
108 ++++ 146 ++++ 179 ++++
109 ++++ 160 ++++ 180 ++++
112 ++++ 161 +++ 181 ++++
113 ++++ 162 ++++ 182 ++++
116 ++++ 163 ++++ 183 ++++
117 ++++ 164 ++++ 210 ++++
121 ++++ 165 ++++ 214 ++++
125 ++++ 166 ++++ 231 ++++
126 ++++ 167 ++++ 236 ++++
130 +++ 168 +++ 240 ++++
131 ++++ 169 ++++ 245 ++++
132 ++++ 170 + 247 +++
133 ++++ 171 ++++ 248 +++
134 ++++ 172 +++ 251 ++++
139 +++ 173 +++ 255 ++++
140 +++ 174 ++++ 256 ++++
142 ++++ 175 ++++ 257 ++++
144 ++++ 176 ++++ 258 +++
145 ++++ 177 ++++ 259 +++
* ++++為小於10 nM，+++為10至小於100 nM，++為100至小於500 nM，+為大於或等於500 nM 實例 310 ： MCF10A (G12C 或 G12C-A59G)-KRAS 細胞活力檢定
將MCF10A (ATCC，目錄號CRL-10317)細胞維持於MEBM (Lonza，目錄號CC-3151)與1%馬血清(Sigma，目錄號H1270)、MEGM乳腺上皮細胞生長培養基SingleQuotsKit (Lonza，目錄號CC-4146)及25ng/ml霍亂毒素(Sigma，目錄號C8052)中。用KRAS G12C或G12C/A59G轉導此等細胞，繼而進行嘌呤黴素選擇以產生穩定表達細胞。對於細胞活力檢定，將MCF10A KRAS G12C或MCF10A G12C/A59G之1000個細胞鋪於384孔球形微板(Corning，目錄號3830)中。次日，用化合物(10uM最高濃度，3倍稀釋，及11個劑量)處理細胞。10uM曲美替尼(Tremetinib) (MCE，目錄號HY-10999/CS-0060)用作對照。Tecan: HP D300E用於分配化合物。培育五天後，根據製造商之方案使用celltiter-glo發光檢定套組(Promega，目錄號G7573)以使用BioTek板讀取器量測細胞活力。接著將數據輸入Dotmatics中並進行處理，其中使用列文伯格-馬誇爾特(Lavenberg-Marquardt) 4參數擬合程序以不同梯度計算EC50。 實例 311 ： 人類患者之治療
可向罹患癌症(例如，如本文所揭示之KRAS介導之癌症)之人類患者投與治療有效劑量之本文所揭示之化合物(例如，表1之化合物)。治療可在患者中減緩或停止腫瘤生長，減小腫瘤體積或質量，或根除腫瘤。
本文中由標識性引用所提及之所有公開案、專利、專利申請案及公開專利申請案之揭示內容藉此以全文引用之方式併入本文中。
儘管前述發明內容已出於清楚理解之目的經由說明及實例詳細地描述，但熟習此項技術者顯而易見，將實施某些微小變化及修改。因此，描述及實例不應視為限制本發明之範疇。

Claims (119)

  1. 一種式I或式II化合物： (式I) (式II) 或其鹽；及/或其同位素體； 其中： R x係選自氫、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4烷氧基及C 1-C 4鹵烷氧基； R y係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R z係選自氫、C 1-C 4烷基及鹵基； R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和碳環或雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代； R 2係選自由R 2a、R 2b、R 2c、R 2d及R 2e組成之群； R 3係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基組成之群； R 4係選自由氫、鹵基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 3-C 7環烷基、CN及C 2-C 3炔基組成之群； R 2a為-NR 5R 6； R 5係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 6為-C 1-C 6伸烷基-S(O) 2-CH=CHR 7；或 R 5及R 6與其所連接之氮一起形成包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-7員飽和雜環基，其中該4-7員飽和雜環基經-(CH 2) n-S(O) 2-CH=CHR 7取代； R 7係選自由以下組成之群：氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及-(CH 2) m-NR 8R 9； R 8及R 9係獨立地選自由-H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 8及R 9與其所連接之氮原子一起形成包含環原子內之至少一個氮且視情況經鹵基取代的4-7員飽和雜環基； n為0或1； m為1或2； R 2b為-NR 10R 11； R 10係選自由H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；且 R 11係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 12)-CN，及 -(CH 2) w-R 13；或 R 10及R 11與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該4-8員飽和雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) x-N(R 14)-CN， 包含一個環且包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-6員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，及 氰基，前提條件為當氰基為該取代基時，則由R 10及R 11與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該氰基在該第二個環氮處連接至該4-8員飽和雜環基； R 12為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； R 13為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該氮經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代；或 R 13為包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該等氮中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；或 R 13為包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該(等)氮環原子中之一者經氰基取代，且其中該雜環基視情況進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 14為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基； w為0、1或2； x為0或1； R 2c為-NR 15R 16； R 15為H、視情況經CN之一個實例取代之C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群： -(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -(CH 2) y-R 21；或 R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代： -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基； R 17係選自由氫、-C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)O-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4鹵烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基、-S(O) 2-C 1-C 4鹵烷基及R 35組成之群；且 R 20係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群；或 R 18及R 20與其所連接之碳可一起形成含有一個選自N、O及S之雜原子的4-5員碳環或雜環，其中該碳環或雜環可視情況經甲基、鹵基、羥基、甲氧基或羰基之一個實例取代； R 19係選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 21係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 22及R 23係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 1-C 4羥烷基、CH 2-(C 3-C 6雜環基)及C 2-C 3炔基； R 35為視情況經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代的5-6員雜芳基：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基； y為0、1或2； z為1或2； q為0或1； u為0、1或2； R 2d係選自由以下組成之群： -NR 24R 25， -C(O)N(R 27)-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26，及 -O-(C 1-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26； R 24為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 25為-(C 1-C 4伸烷基)-C(O)CH=CHR 26；或 R 24及R 25與其所連接之氮一起形成包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經-(C 0-C 2伸烷基)-C(O)CH=CHR 26取代，且其中該雜環基進一步視情況經C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基取代； R 26為氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 27係選自氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基； R 2e為-NR 28R 29； R 28為H、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 29為-(CH 2) t-R 30； R 30係選自： 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子；及 包含一個氮且視情況包含一個選自氮、氧及硫之額外雜原子作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雜環基，其中該雜環基之該(等)氮環原子中之一者經-C(O)C≡CR 31取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； R 31係選自由-(CH 2) v-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群； R 32及R 33係獨立地選自由氫、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基組成之群； t為0、1或2； v為1或2； p為0、1或2； R 36為經0、1、2、3或4個獨立地選自以下之取代基取代的4-10員雜環：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基； 前提條件為當該化合物具有式I時，則R 2c不為 ；且 另一前提條件為當該化合物具有式II時，則R 2c不為-NR 15R 16，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該第二個氮經-C(O)-CH=CH 2取代。
  2. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式I化合物或其鹽。
  3. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式II化合物或其鹽。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R y係選自氫、F及Cl。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中R y為H。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中R z係選自氫、Me、F及Cl。
  7. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中R z為氫。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物，其中R x係選自氫、羥基及-OCHF 2。
  9. 如請求項1至7中任一項之化合物，其中R x為氫。
  10. 如請求項1至9中任一項之化合物，其中R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雙環碳環或雙環雜環基，其中該碳環或雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物，其中R 1為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經0、1、2或3個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、螺C 3-C 4環烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基及C 1-C 4鹵烷氧基之取代基取代。
  12. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個鹵基或羥基取代。
  13. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中R 1之該碳環或雜環基未經取代，或經一個氟取代。
  14. 如請求項1至10中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 及 。
  15. 如請求項1至10中任一項之化合物，其中R 1係選自由以下組成之群： 、 及 。
  16. 如請求項1至15中任一項之化合物，其中R 3及R 4係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、乙炔基、氟及氯。
  17. 如請求項1至15中任一項之化合物，其中R 3係選自由以下組成之群：氫及氟。
  18. 如請求項1至15及17中任一項之化合物，其中R 4係選自由以下組成之群：氫、甲基、乙基、乙炔基、丙炔基、二氟甲基、CN、環丙基、氟及氯。
  19. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2係選自由R 2c及R 2e組成之群。
  20. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2為R 2c。
  21. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R 2c為-NR 15R 16，其中：  R 15為H、視情況經CN之一個實例取代之C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基或C 1-C 4鹵烷氧基；且 R 16係選自由以下組成之群：-(C 1-C 4伸烷基)-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18及-(CH 2) y-R 21。
  22. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R 15係選自由H、甲基、乙基、-CH 2-環丙基、-CH 2CH 2CN、-CH 2CHF 2及-CH 2CH 2OCH 3組成之群。
  23. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R 15為甲基。
  24. 如請求項1至23中任一項之化合物，其中R 16為-(CH 2) y-R 21。
  25. 如請求項1至24中任一項之化合物，其中y為0或1。
  26. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R 21係選自：  包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代； 包含一或兩個氮作為環原子內之僅有雜原子的6員單環飽和雜環基，其中該雜環基之该等氮中之一者經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子； 包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的7員飽和雙環螺環雜環基，其中該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基或鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代，前提條件為該等視情況存在之羥基、CN、氰基烷基及鹵基取代基不連接至雜原子。
  27. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R 21為包含一個氮作為環原子內之僅有雜原子的4-5員單環飽和雜環基，其中該雜環基之該氮環原子經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且其中該雜環基未經進一步取代，或進一步經1個選自由羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基組成之群的取代基取代，或進一步經兩個鹵基取代基取代。
  28. 如請求項1至25中任一項之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代，且該雜環基未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代，或經兩個鹵基取代。
  29. 如請求項28之化合物，其中R 21之該雜環基未經進一步取代。
  30. 如請求項28之化合物，其中R 21之該雜環基進一步經1個選自由Me及F組成之群的取代基取代，或進一步經兩個氟取代。
  31. 如請求項28之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
  32. 如請求項28之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
  33. 如請求項28之化合物，其中R 21之該雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 及 ，其中該雜環基之該環氮經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
  34. 如請求項1至23中任一項之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代，或經兩個鹵基取代。
  35. 如請求項34之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團未經進一步取代。
  36. 如請求項34之化合物，其中該等氮雜環丁烷、吡咯啶及5-氮雜螺[2.4]庚烷基團進一步經1個選自由羥基、CN、Me、-CH 2CN及F組成之群的取代基取代，或經兩個氟取代。
  37. 如請求項34之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  38. 如請求項34之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  39. 如請求項34之化合物，其中R 16係選自由以下組成之群： 、 、 及 。
  40. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成視情況包含第二個氮作為環原子內之僅有額外雜原子的4-8員飽和雜環基，其中該雜環基經一個選自由以下組成之群的取代基取代：  -(CH 2) q-N(R 17)C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，及 -C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18，前提條件為當-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18為該取代基時，則由R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基包含該第二個氮環原子且該-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18在該第二個環氮處連接至該雜環基。
  41. 如請求項40之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  42. 如請求項1至20、40及41中任一項之化合物，其中R 15及R 16與其所連接之氮一起形成之該4-8員飽和雜環基經-C(O)C(R 19)=C(R 20)R 18取代。
  43. 如請求項1至42中任一項之化合物，其中R 19為氫。
  44. 如請求項1至43中任一項之化合物，其中R 20為氫。
  45. 如請求項1至43中任一項之化合物，其中R 18及R 20與其所連接之碳一起形成環丁基或氮雜環丁烷環，其中該環丁基及該氮雜環丁烷可視情況經甲基之一個實例取代。
  46. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中R 18係選自由氫、-COOH、-C(O)O-C 1-C 4烷基、-C(O)-C 1-C 4烷基、-C(O)NR 22R 23、-(CH 2) z-NR 22R 23、-(CH 2) u-R 34、-(C 1-C 2烷基)-(C 1-C 2烷氧基)、-S(O) 2-C 1-C 4烷基及R 35組成之群。
  47. 如請求項1至44及46中任一項之化合物，其中R 22及R 23係獨立地選自甲基、乙基及甲氧基乙基。
  48. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中R 18係選自H、-R 34、-CH 2-R 34及-R 35。
  49. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中R 18係選自-R 34、-CH 2-R 34及-R 35。
  50. 如請求項1至44及46至49中任一項之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基、C 1-C 4羥烷基、CH 2-(C 3-C 6雜環基)及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  51. 如請求項1至44及46至49中任一項之化合物，其中R 34係選自經甲基、乙基、異丙基、甲氧基乙基、羥乙基或-CH 2-氧雜環丁烷基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
  52. 如請求項1至44及46至49中任一項之化合物，其中R 34係選自經甲基之0或1個實例取代之氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
  53. 如請求項1至44及46至52中任一項之化合物，其中R 34之連接點為碳原子。
  54. 如請求項53之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  55. 如請求項53之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  56. 如請求項53之化合物，其中R 34為 或 。
  57. 如請求項1至44及46至49中任一項之化合物，其中R 34為含有氮原子及0、1或2個獨立地選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其中該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  58. 如請求項57之化合物，其中R 34為經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代的6-10員橋聯雜環。
  59. 如請求項57之化合物，其中R 34係選自氮雜環丁烷、吡咯啶、2-氮雜雙環[2.1.1]己烷、嗎啉、2-氧雜-5-氮雜雙環[4.1.0]庚烷、1, 4-氧雜氮雜環庚烷、2-氧雜-6-氮雜金剛烷、5-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬烷、2-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-2-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、3-氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,7-二氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,9-二氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.2]辛烷、7-氧雜-2-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、9-氧雜-3-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、6-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.2]壬烷、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、硫代嗎啉、硫代嗎啉1,1-二氧化物、1,4-硫雜氮雜環庚烷、1,4-硫雜氮雜環庚烷1,1-二氧化物、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-硫雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷3,3-二氧化物、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及六氫-1H-噻吩并[3,4-c]吡咯2,2-二氧化物，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  60. 如請求項57至59中任一項之化合物，其中R 34之連接點為該雜環之該氮原子。
  61. 如請求項60之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  62. 如請求項60之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  63. 如請求項57至62中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟及甲基之取代基取代。
  64. 如請求項57至62中任一項之化合物，其中R 34之該4-10員雜環未經取代。
  65. 如請求項57至61中任一項之化合物，其中R 34係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  66. 如請求項57至61中任一項之化合物，其中R 34為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  67. 如請求項57至66中任一項之化合物，其中u為1。
  68. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群：嘧啶基、吡嗪基、噁唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1H-1,2,4-三唑基、咪唑基、4H-1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基及異噁唑基，各自經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
  69. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、羥基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
  70. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 及 ，經0、1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 4羥烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基，視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6雜環基，及視情況經一或兩個獨立地選自鹵基及甲基之取代基取代的C 3-C 6環烷基。
  71. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 35係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  72. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 35係選自： 、 、 、 、 、 及 。
  73. 如請求項1至44及46至72中任一項之化合物，其中R 35之連接點在碳原子上。
  74. 如請求項1至44及46至67中任一項之化合物，其中R 18為-CH 2-R 34。
  75. 如請求項1至44及46至66中任一項之化合物，其中R 18為R 34。
  76. 如請求項1至44及68至73中任一項之化合物，其中R 18為R 35。
  77. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中R 18為H。
  78. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中R 18係選自由以下組成之群：氫、-COOH、-C(O)OCH 3、-C(O)OCH 2CH 3、-C(O)OCH(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-C(O)-環丙基、-CH 2OCH 3、-CH 2N(CH 3) 2、-S(O) 2CH 3、-S(O) 2CH 2CH 3、-S(O) 2-環丙基、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  79. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2為R 2e。
  80. 如請求項1至19及21至79中任一項之化合物，其中R 28為甲基。
  81. 如請求項1至19及21至80中任一項之化合物，其中t為0或1。
  82. 如請求項1至19及21至81中任一項之化合物，其中R 29係選自由以下組成之群： 、 、 及 ，其中該等氮雜環丁烷及吡咯啶基團未經進一步取代，或經一個選自羥基、CN、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4氰基烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及鹵基之取代基取代。
  83. 如請求項82之化合物，其中該等氮雜環丁烷及吡咯啶基團未經進一步取代。
  84. 如請求項1至19及21至83中任一項之化合物，其中v為1。
  85. 如請求項1至19及21至84中任一項之化合物，其中p為0或1。
  86. 如請求項1至19及21至85中任一項之化合物，其中R 31係選自由-CH 2-NR 32R 33及-(CH 2) p-R 36組成之群。
  87. 如請求項1至19及21至86中任一項之化合物，其中R 32及R 33係獨立地選自甲基及乙基。
  88. 如請求項1至19及21至87中任一項之化合物，其中R 36為含有氮原子且視情況含有氧原子作為僅有雜原子之4-7員單環雜環，其中該單環雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  89. 如請求項88之化合物，其中R 36係選自經0、1或2個獨立地選自甲基及羥基之取代基取代的氮雜環丁烷基、吡咯啶基及嗎啉基。
  90. 如請求項1至19及21至89中任一項之化合物，其中R 36之連接點為碳原子。
  91. 如請求項90之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  92. 如請求項90之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  93. 如請求項88至92中任一項之化合物，其中p為0。
  94. 如請求項1至19及21至87中任一項之化合物，其中R 36為含有氮原子及0、1或2個選自氧及硫(包括二氧化硫)之額外雜原子的4-10員雜環，其中該4-10員雜環經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  95. 如請求項94之化合物，其中R 36係選自氮雜環丁烷、吡咯啶、2-氮雜雙環[2.1.1]己烷、嗎啉、2-氧雜-5-氮雜雙環[4.1.0]庚烷、1, 4-氧雜氮雜環庚烷、2-氧雜-6-氮雜金剛烷、5-氧雜-8-氮雜螺[2.6]壬烷、2-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、6-氧雜-2-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、3-氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,7-二氧雜-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3,9-二氧雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.2]辛烷、7-氧雜-2-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、9-氧雜-3-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、6-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.2]壬烷、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷、3-氧雜-6-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷、硫代嗎啉、硫代嗎啉1,1-二氧化物、1,4-硫雜氮雜環庚烷、1,4-硫雜氮雜環庚烷1,1-二氧化物、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-硫雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷、3-硫雜-6-氮雜雙環[3.2.1]辛烷3,3-二氧化物、3-硫雜-7-氮雜雙環[3.3.1]壬烷3,3-二氧化物、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷、2-硫雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.4]辛烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷2,2-二氧化物、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及六氫-1H-噻吩并[3,4-c]吡咯2,2-二氧化物，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  96. 如請求項94或95之化合物，其中R 36之連接點為該雜環之該氮原子。
  97. 如請求項96之化合物，其中該R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  98. 如請求項97之化合物，其中R 36為 或 ，各自經0、1、2、3或4個獨立地選自鹵基、羥基、C 1-C 4烷基、C 1-C 6胺基烷基、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 4鹵烷氧基及C 2-C 3炔基之取代基取代。
  99. 如請求項94至98中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環經0、1或2個獨立地選自氟及甲基之取代基取代。
  100. 如請求項94至98中任一項之化合物，其中R 36之該4-10員雜環未經取代。
  101. 如請求項94至97中任一項之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  102. 如請求項94至97中任一項之化合物，其中R 36為未經取代之以下基團： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  103. 如請求項94至97中任一項之化合物，其中R 36係選自由以下組成之群： 、 、 及 。
  104. 如請求項94至103中任一項之化合物，其中p為1。
  105. 如請求項1至19及21至104中任一項之化合物，其中R 31係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  106. 如請求項1至19及21至104中任一項之化合物，其中R 31係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 及 。
  107. 如請求項1之化合物，該化合物係選自由以下組成之群： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ，及其所有鹽及同位素體。
  108. 如請求項1至107中任一項之化合物，其中該化合物不為鹽。
  109. 如請求項1至107中任一項之化合物，其中該化合物為鹽。
  110. 如請求項109之化合物，其中該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
  111. 一種醫藥調配物，該醫藥調配物包含如請求項1至109中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
  112. 一種治療或抑制癌症之方法，該方法包括：向有需要之個體投與治療有效量之如請求項1至109中任一項之化合物，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽，或如請求項111之醫藥調配物。
  113. 如請求項1至109中任一項之化合物或如請求項111之醫藥調配物，該化合物或醫藥調配物係用於治療或抑制癌症，其中當該化合物為鹽時，該鹽為醫藥學上可接受之鹽。
  114. 如請求項113之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：肺癌、結腸直腸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、膽囊癌、子宮癌、間皮瘤、子宮頸癌及膀胱癌。
  115. 如請求項113之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症係選自由以下組成之群：多形性神經膠質母細胞瘤、低級別神經膠質瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、乳突狀甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、濾泡狀甲狀腺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌、侵襲性乳癌、食管癌、胃腺癌、小腸腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、肝細胞癌、膽管癌、膽囊癌、胰臟腺癌、腎透明細胞癌、膀胱尿路上皮癌、前列腺腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、子宮體子宮內膜癌、子宮頸鱗狀癌及子宮頸內腺癌、皮膚黑色素瘤、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、漿細胞骨髓瘤、子宮癌肉瘤、間皮瘤、腎上腺皮質癌、腦部低級別神經膠質瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、食管腺癌、腎嫌色細胞癌、腎乳突狀細胞癌、嗜鉻細胞瘤及副神經節結瘤、肉瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胸腺瘤、葡萄膜黑色素瘤、轉移性結腸直腸癌、膀胱癌、腺樣囊性癌、骨髓化生不良、乳癌、甲狀腺癌、神經膠質瘤、食管/胃癌、小兒威爾姆斯氏瘤(pediatric Wilms' tumor)、小兒急性淋巴樣白血病、慢性淋巴球性白血病、成熟B細胞惡性病、小兒神經母細胞瘤及黑色素瘤。
  116. 如請求項113至115中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該癌症為KRAS G12C介導之癌症。
  117. 如請求項113至115中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該個體已經診斷患有KRAS G12C介導之癌症。
  118. 如請求項113至117中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以與治療有效量之額外化學治療劑一起投與。
  119. 如請求項113至118中任一項之供使用之化合物或醫藥組合物，其中該化合物或醫藥組合物係經組態以按治療有效量投與。
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