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ES3012510T3 - Methods and compositions relating to emulsions comprising fish oil and/or omega-3 fatty acids - Google Patents

Methods and compositions relating to emulsions comprising fish oil and/or omega-3 fatty acids Download PDF

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ES3012510T3
ES3012510T3 ES18844969T ES18844969T ES3012510T3 ES 3012510 T3 ES3012510 T3 ES 3012510T3 ES 18844969 T ES18844969 T ES 18844969T ES 18844969 T ES18844969 T ES 18844969T ES 3012510 T3 ES3012510 T3 ES 3012510T3
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ES
Spain
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emulsion
omega
fatty acids
fish oil
oil
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ES18844969T
Other languages
English (en)
Inventor
Mark Puder
Kathleen Gura
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boston Childrens Hospital
Original Assignee
Boston Childrens Hospital
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Abstract

Se describen aquí composiciones en emulsión que comprenden aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) y/o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT). En algunas realizaciones, las composiciones comprenden además, por ejemplo, alfa-tocoferol o uno o más ácidos grasos. También se describen métodos para usar las composiciones, por ejemplo, para proporcionar nutrición (por ejemplo, nutrición parenteral) a un sujeto, y/o para tratar o prevenir ciertas afecciones descritas aquí. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimientos y composiciones en relación a emulsiones que comprenden aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3
REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS
[0001] La presente solicitud reclama el beneficio bajo el Título 35 del Código de los Estados Unidos, artículo 119(e) de la Solicitud provisional estadounidense n.° 62/543.437 presentada el 10 de agosto de 2017.
APOYO GUBERNAMENTAL
[0002] La presente invención se realizó con el apoyo del gobierno en virtud de las subvenciones n.° 1F32DK104525-01; 5T32HL007734-22; y T35HL110843 otorgadas por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene ciertos derechos sobre la invención.
CAMPO TÉCNICO
[0003] La tecnología descrita en este documento se relaciona con emulsiones lipídicas, tal como se define en las reivindicaciones, y su uso para proporcionar nutrición parenteral a pacientes, tal como se define en las reivindicaciones.
ESTADO DE LA TÉCNICA
[0004] Los pacientes dependientes de NP a largo y corto plazo pueden ser vulnerables a agresiones inflamatorias. Para los pacientes dependientes de NP a largo plazo, los estados de enfermedad crónica y un catéter venoso central permanente a largo plazo para la administración de NP pueden precipitar un estado proinflamatorio. Los pacientes dependientes de NP a corto plazo, tales como los pacientes con traumatismos, los pacientes posoperatorios y los pacientes con enfermedades agudas que requieren una unidad de cuidados intensivos, también están sujetos a desafíos proinflamatorios.
[0005] Además del uso de la propia NP, la emulsión lipídica particular administrada a través de la NP puede modular la respuesta inflamatoria y afectar el estado inflamatorio de los pacientes dependientes de la NP. Las emulsiones lipídicas a base de aceite de soja son ricas en ácidos grasos omega-6 proinflamatorios, mientras que las emulsiones lipídicas de aceite de pescado contienen una abundancia de los ácidos grasos omega-3 más antiinflamatorios. Las emulsiones lipídicas de aceite de pescado se han utilizado para tratar la enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD,parenteral nutrition-associated liver disease)en pacientes, una afección caracterizada por inflamación hepática y colestasis. El documento WO 2016/040570 describe formulaciones de emulsiones dietéticas y procedimientos para utilizarlas. El documento US 5.874.470 describe una emulsión de grasa isotónica que contiene ácidos grasos omega-3 y su uso. El documento US 2014/0120171 describe la aplicación terapéutica del aceite de krill parenteral. El documento US 2015/0246013 describe emulsiones de nutrición parenteral de aceite de pescado en agua enriquecidas con omega-3. Helmut Grimm, Clinical Nutrition Supplements, vol. 1, n.° 3 (2005), páginas 25-30 describe una emulsión lipídica equilibrada y un nuevo concepto en nutrición parenteral.
RESUMEN
[0006] La presente invención se define en las reivindicaciones independientes y ciertas características opcionales de la misma se definen en las reivindicaciones dependientes. La información técnica que se expone a continuación puede, en algunos aspectos, ir más allá del alcance de la presente invención, que se define exclusivamente por las reivindicaciones adjuntas. La información técnica adicional se proporciona para situar la invención real en un contexto técnico más amplio y para ilustrar posibles desarrollos técnicos relacionados. En la medida en que se utilicen en el presente documento los términos "invención", "ejemplo" y "realización", estos términos se interpretarán de tal manera que la protección no se extienda más allá del alcance de las reivindicaciones. Cualquier referencia a procedimientos para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugía o terapia y prácticas de procedimientos de diagnóstico en el cuerpo humano o animal no debe interpretarse como una reivindicación de protección para dichos procedimientos como tales, sino que debe interpretarse como una referencia a productos, en particular sustancias o composiciones para su uso en cualquiera de estos procedimientos.
[0007] El desarrollo de emulsiones lipídicas que reducen aún más el riesgo de desarrollar respuestas inflamatorias y/o enfermedad hepática puede mejorar el tratamiento de una serie de pacientes para los que no se recomienda o no es adecuada una ingesta nutricional normal. Tal como se describe en el presente documento, los inventores han descubierto que las emulsiones mixtas de a) MCT y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 (por ejemplo, aceite de ácidos grasos predominantemente omega-3) proporcionan un rendimiento antiinflamatorio mejorado en comparación con el aceite de pescado o los MCT solos. Además, se describe en el presente documento la sorprendente eficacia obtenida con proporciones particulares de a) MCT y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 (por ejemplo, aceite de ácidos grasos predominantemente omega-3).
[0008] En particular, se demuestra en el presente documento que las emulsiones mixtas de FO y MCT proporcionan un beneficio antiinflamatorio mejorado en respuesta a un estímulo inflamatorio en comparación con FO solo. En particular, las mezclas entre proporciones de 30:70 a 70:30 proporcionaron un equilibrio sorprendentemente mejorado de protección hepática y atenuación de la respuesta inflamatoria en comparación con mezclas menos equilibradas. La proporción de 50:50 fue sorprendentemente óptima para proporcionar tales efectos. Tal como se utiliza en el presente documento, las proporciones de MCT con respecto a aceite de pescado o ácidos grasos omega-3 entre sí se proporcionan en unidades p/p. La cantidad p/v de MCT, aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 en las presentes composiciones se describe en otra parte del presente documento.
[0009] Además, muchas formulaciones de la técnica anterior requieren explícitamente aceites vegetales, ya que sus desarrolladores creen que la falta de aceites vegetales dará como resultado una deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD) (véase, por ejemplo, Publicación de patente de EE. UU. 2010/0233280). Por el contrario, ciertas formulaciones y procedimientos descritos en este documento no comprenden aceite vegetal y no son predominantemente ácidos grasos omega-6 y, sin embargo, no inducen EFAD, a pesar de las declaraciones de los expertos de que tal resultado se produciría.
[0010] La presente invención definida en las reivindicaciones adjuntas proporciona una composición de emulsión que comprende: aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción entre, pero no incluida, 30:70 a aproximadamente 70:30; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 30:70 a aproximadamente 70:30, en donde el contenido total de triglicéridos diglicéridos del aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 comprende no más del 10% de diglicéridos. En algunas realizaciones, la composición de emulsión comprende ácidos grasos omega-3 y MCT en una proporción entre, pero no incluida, 30:70 y 70:30. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 se proporcionan como un aceite de ácido graso predominantemente omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 se proporcionan como un aceite de ácido graso predominantemente omega-3 que no ha sufrido reesterificación.
[0011] Tal como se utiliza en el presente documento, "aceite de ácidos grasos predominantemente omega-3" se refiere a un aceite de ácidos grasos que comprende una mayor proporción de ácidos grasos omega-3 que de ácidos grasos omega-6. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos en un aceite de ácidos grasos predominantemente omega-3 son más del 50 %, por ejemplo, más del 50 %, más del 60 %, más del 70 %, más del 80 %, más del 90 %, más del 95 % o más del 98 % de ácidos grasos omega-3 (los porcentajes anteriores son % de ácidos grasos en el aceite de ácidos grasos en peso).
[0012] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende además alfa-tocoferol. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en un nivel de al menos 100 mg/L de toda la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en un nivel de al menos 120 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E (por ejemplo, beta tocoferol, gamma tocoferol, delta tocoferol, alfa tocotrienol, beta tocotrienol, gamma tocotrienol y/o delta tocotrienol) en una proporción de al menos 2:1 en peso en toda la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 10:1. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión no comprende formas de vitamina E distintas del alfatocoferol.
[0013] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles no están presentes en la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles están presentes en la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles están presentes en la composición en una concentración de menos de 50 mg/L. Los fitoesteroles pueden incluir esteroles vegetales y estanoles vegetales, por ejemplo, beta-sitosterol, campesterol, estigmasterol, ergosterol, sitostanol, campestanol, avenasterol y/o estigmastanol.
[0014] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido araquidónico está presente en la composición en una concentración de al menos 900 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido docosahexaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 13,4 g/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido eicosapentaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 11,6 g/L.
[0015] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición está formulada para administración oral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición está formulada para administración parenteral o intravenosa. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende además un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo comprende uno o más ácidos grasos que son terapéuticos para una enfermedad.
[0016] La presente invención proporciona además una formulación de emulsión como se define en las reivindicaciones para su uso en el suministro de nutrición parenteral a un sujeto que la necesita. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición es para administración por administración parenteral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición es para administración por administración parenteral total. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el sujeto es un sujeto que necesita tratamiento o prevención de una afección seleccionada del grupo que consiste en: esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el sujeto es un sujeto que necesita tratamiento o prevención de la enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD).
[0017] Tal como se define en las reivindicaciones, el sujeto necesita nutrición parenteral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el sujeto necesita nutrición parenteral total. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe nutrición oral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras formulaciones parenterales. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe nutrición oral que sea suficiente para mantener un equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras formulaciones parenterales que sean suficientes para mantener un equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras formulaciones tópicas que sean suficientes para mantener un equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras fuentes nutricionales de ácidos grasos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras fuentes nutricionales parenterales de ácidos grasos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras fuentes nutricionales de ácidos grasos esenciales. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente no recibe otras fuentes nutricionales parenterales de ácidos grasos esenciales.
[0018] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es para administración como monoterapia. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es para administración como monoterapia para beneficio terapéutico. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es para administración como monoterapia para necesidades nutricionales.
[0019] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el paciente es un paciente que necesita tratamiento para una afección seleccionada del grupo que consiste en: esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3.
[0020] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión es para administración en una dosis de aproximadamente 0,5 g de ácidos grasos totales en la emulsión/kg/día a aproximadamente 5 g de ácidos grasos totales en la emulsión/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión es para administración en una dosis de aproximadamente 1 g de ácidos grasos totales en la emulsión/kg/día a aproximadamente 3 g de ácidos grasos totales en la emulsión/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión es para administración en una dosis de aproximadamente 2 g de ácidos grasos totales en la emulsión/kg/día. En las dosis anteriores, "kg" se refiere a la masa del sujeto al que se le administra la composición.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0021]
Figuras 1A-1B demuestran que no existen diferencias en el crecimiento (Figura 1A) o en masas de órganos (Figura 1B) entre los grupos de tratamiento. N = 9-10 ratones por grupo, análisis estadístico ANOVA de un solo factor. Figuras 2A-2C representan los niveles séricos de ácidos grasos esenciales. Figura 2A: Ningún grupo que recibió una fuente de grasa desarrolló EFAD bioquímica, sólo el grupo alimentado con NP que recibió solución salina desarrolló EFAD. * = p<0,05 en comparación con el pienso. Figura 2B:SO y SO+AT contienen más ácidos grasos omega-6 que los grupos tratados con f O. * = p<0,05 en comparación con FO. Figura 2C: FO y FO+P contienen más ácidos grasos omega-3 en comparación con los grupos tratados con SO. 8 = p<0,05 en comparación con FO. Todos los análisis estadísticos se realizaron con ANOVA de un solo factor.
Figuras 3A-3B demuestran que el alfa-tocoferol confiere propiedades hepatoprotectoras al SO. El SO+AT da como resultado una arquitectura hepática normalizada (Figura 3A, fila inferior, columna del medio) y disminución de la acumulación de grasa hepática (Figura 3B, fila inferior, columna del medio) en comparación con SO (Figuras 3A y 3B, fila superior, columna central). Los fitoesteroles (FO+P) no comprometen las propiedades hepatoprotectoras del FO (Figura 3A y 3B, columna derecha, ambas filas).
Figura 4 representa los perfiles de expresión génica de PPARg y ACC2. Los ratones alimentados con NP y NP sin grasa a los que se les administró SO tuvieron una mayor expresión de PPARg y ACC2. Los grupos tratados con FO tuvieron una expresión normal de estos genes, al igual que el grupo SO+AT. * = p<0,05 en comparación con la dieta de pienso mediante ANOVA de un solo factor. Los resultados se muestran como la diferencia de factor multiplicador en comparación con los controles de dieta de pienso.
Figuras 5A-5B representan la expresión de proteínas de PPARg y ACC. Figura 5A: Imágenes de transferencia Western para ACC, PPARg y el gen de mantenimiento de beta-actina. Figura 5B: Cuantificación de la expresión de proteínas para cada grupo, normalizada a beta-actina y comparada con el pienso.
Figura 6A representa Hemotoxilina y Eosina, y Figura 6B muestra la tinción de hígados con Oil Red O. FO, 70:30 y 50:50 muestran una arquitectura hepática normal similar a la del pienso. 30:70 ha mejorado la arquitectura hepática en comparación con los grupos de solución salina y SO, con esteatosis leve (Figura 6A). FO, 70:30, 50:50 y 30:70 no tienen acumulación de grasa hepática observable (Figura 6B).
Figura 7 demuestra que FO, SO y todas las mezclas de FO y MCT previenen eficazmente la EFAD bioquímica. * = p<0,0001 en comparación con el pienso según ANOVA de un solo factor.
Figura 8A representa los niveles de TNFa y Figura 8B representa los niveles de IL-6 después de un estimulación con solución salina o LPS. 3A: * = p<0,05 en comparación con pienso y # = p<0,05 en comparación con FO mediante ANOVA de un solo factor. 3B: * = p<0,002 en comparación con pienso y # = p<0,05 en comparación con FO mediante ANOVA de un solo factor.
Figura 9A representa hematoxilina y eosina y Figura 9B muestra el análisis con Oil Red O de los hígados de cada grupo de tratamiento. Los ratones tratados con solución salina y SO desarrollaron esteatosis hepática (4A) y grasa hepática acumulada (Figura 9B). FO, FOE, FO/MCT y FOE/MCT conservaron la arquitectura hepática normal (Figura 9A), y no acumuló grasa hepática observable (Figura 9B).
Figura 10A representa el TNFa sérico y Figura 10B representa la IL-6 sérica en ratones tratados con LPS. Ambos marcadores disminuyeron en comparación con FO en los grupos tratados con FOE, FO/MCT y FOE/MCT. No hubo diferencias significativas entre los grupos FOE, FO/MCT y FOE/MCT. * = p<0,003 en comparación con el pienso y # = p<0,006 en comparación con FO según ANOVA de un solo factor.
Figuras 11A-11D demuestran que no hay diferencia en los parámetros de crecimiento entre los grupos administrados con dieta NP y la administración de emulsiones grasas formuladas en el laboratorio. Figura 11A: Se controlaron las masas corporales cada dos días durante el transcurso del régimen de NP sin diferencias estadísticas en el crecimiento entre los grupos. Masas de hígado (Figura 11B), bazo (Figura 11C) y el riñón derecho (Figura 11D) en el momento de la eutanasia después de 19 días de dieta NP. No hubo diferencias en las masas de los órganos entre los grupos. N = 10 ratones por grupo de tratamiento. El análisis estadístico se realizó con ANOVA de una vía.
Figuras 12A-12C representan los perfiles de ácidos grasos séricos después de 19 días de dieta NP con administración de emulsiones grasas formuladas en el laboratorio. Figura 12A: Proporciones de trienos con respecto a tetraenos. Solo los ratones que no recibieron ninguna fuente de grasa (NP solución salina) cumplieron los criterios bioquímicos para EFAD. Distribución de los principales ácidos grasos omega-6 (Figura 12B) y ácidos grasos omega-3 (Figura 12C) reflejan la fuente de grasa administrada a cada grupo. N = 3 muestras por grupo de tratamiento seleccionadas al azar. El análisis estadístico se realizó con ANOVA de una vía.
Figuras 13A-13B representan la normalización de la arquitectura hepática y la acumulación de grasa hepática con la adición de a-tocoferol a SO en una fuente de grasa intravenosa con la dieta NP. Imágenes de hematoxilina y eosina (H&E, Figura 13A) y Oil Red O (Figura 13B) representativas que demuestran la arquitectura hepática y la acumulación de grasa hepática respectivamente. N = 10 muestras por grupo de tratamiento para H&E (Figura 13A), y n = 3 muestras representativas para Oil Red O (Figura 13B). Las imágenes tienen un aumento de 100X (objetivo 10X, ocular 10X). Figuras 14A-14B representan que la expresión de ACC (Figura 14A) y PPARy (Figura 14B) se desregula con la dieta NP sin grasa y la dieta NP con SO como fuente de grasa, y se normaliza con FO y con la adición de a-tocoferol a SO como fuentes de grasa. La expresión génica se mide como diferencia con factor multiplicador en comparación con el grupo alimentado con pienso. N = 5 muestras por grupo de tratamiento, cada una realizada por duplicado técnico. El análisis estadístico se realizó con ANOVA de una vía. Los resultados se muestran como la diferencia con factor multiplicador en comparación con los controles de dieta de pienso.
Figuras 15A-15C representan los niveles de proteína de ACC (Figura 15A) y PPARy (Figura 15B) regulados positivamente por la dieta NP sin grasa y la dieta NP con SO como fuente de grasa, y normalizados por FO y por la adición de a-tocoferol a SO como fuentes de grasa. Los niveles de proteína se cuantificaron comparativamente normalizando cada grupo al nivel de beta-actina correspondiente y comparándolo con el grupo alimentado con pienso. Se realizaron transferencias Western por duplicado biológico para cada grupo. El análisis estadístico se realizó con ANOVA de una vía. Figura 15C: Imagen de transferencia Western.
Figura 16 demuestra que las emulsiones grasas formuladas en el laboratorio recapitulan los efectos de emulsiones grasas intravenosas similares disponibles comercialmente en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP. La NP sin grasa da como resultado el desarrollo de esteatosis durante 19 días (panel inferior izquierdo). El FO formulado en el laboratorio (NP+FO) y la emulsión de FO disponible comercialmente (OM) conservan la arquitectura hepática normal con la dieta NP, mientras que el SO formulado en el laboratorio (NP+SO) y el SO disponible comercialmente (IL) no lo hacen.
Figura 17 y Figura 18 representan tablas de contenido y tamaño de partícula de las emulsiones grasas utilizadas en el Ejemplo 3.
DESCRIPCION DETALLADA
[0022] Tal como se describe en el presente documento, los inventores han descubierto que emulsiones particulares de a) aceite de pescado o ácidos grasos omega-3 y b) triglicéridos de cadena media (MCT), proporcionan una eficacia sorprendente como fuente nutricional y funcionan mejor, por ejemplo, en la prevención y reducción de respuestas inflamatorias, que cualquiera de los componentes solos. Además, las emulsiones descritas en el presente documento tienen una estabilidad mejorada. Finalmente, a diferencia de trabajos anteriores en esta área, las emulsiones descritas en el presente documento no inducen deficiencia de ácidos grasos esenciales y se pueden usar como monoterapia con respecto a fuentes de grasa nutricionales para un paciente. La presente invención proporciona una composición de emulsión como se define en las reivindicaciones.
[0023] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "emulsión" se refiere a un sistema heterogéneo que comprende al menos dos o más líquidos sustancialmente inmiscibles, en el que un líquido se dispersa en otro líquido en forma de gotitas. A modo de ejemplo únicamente, las emulsiones pueden ser sistemas bifásicos que comprenden dos fases líquidas inmiscibles mezcladas íntimamente y dispersas entre sí. Los ejemplos de una emulsión incluyen, pero no se limitan a, emulsiones de agua en aceite, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en agua, emulsiones de agua en aceite en agua y emulsiones de aceite en agua en aceite. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la fase continua de la emulsión es agua.
[0024] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión comprende agua. En algunas realizaciones, la emulsión tiene aproximadamente un 20 % de grasas totales en agua en peso/volumen. En algunas realizaciones, la emulsión tiene desde aproximadamente un 10 % de grasas totales en agua en peso/volumen hasta aproximadamente un 50 % de grasas totales en agua en peso/volumen. En algunas realizaciones, la emulsión tiene aproximadamente un 20 % de grasas totales en agua en peso/volumen. En algunas realizaciones, la emulsión tiene desde un 10 % de grasas totales en agua en peso/volumen hasta un 50 % de grasas totales en agua en peso/volumen.
[0025] Las emulsiones son generalmente mezclas inestables y no se forman espontáneamente, por lo tanto, para mezclar las fases continuas y dispersas y formar la emulsión, se requiere un aporte de energía. Esta energía se puede aplicar, por ejemplo, mediante agitación, remoción, homogeneización, procesamiento por pulverización, bombeo a alta presión y emulsificación ultrasónica. La formulación de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones se puede realizar mezclando los componentes grasos enumerados en el presente documento con cualquier proteína, carbohidratos y/u otros aditivos adicionales, y homogeneizando la mezcla en una emulsión estable. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, tanto el MCT como el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 se emulsionan, por ejemplo, no simplemente se mezclan o se mezclan en una emulsión del otro. Sin embargo, con el tiempo, la emulsión formada puede tender a volver al estado estable de capas de aceite y acuosas separadas. En consecuencia, en algunas realizaciones, la formulación de emulsión de la presente invención puede comprender además cualquier emulsionante natural o sintético conocido en la técnica. La adición de un emulsionante puede aumentar la estabilidad cinética de las emulsiones de modo que, una vez formadas, la emulsión no cambie significativamente durante el almacenamiento a largo plazo.
[0026] Las emulsiones como las descritas en el presente documento se pueden preparar mediante una serie de técnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, primero se mezclan el o los lípidos centrales con uno o más emulsionantes y el antioxidante, si se utiliza uno. A continuación, se prepara la emulsión añadiendo lentamente esta fase oleosa al agua con agitación constante. Si se utiliza un modificador de osmolalidad, se añade al agua antes de mezclarlo con la fase oleosa. El pH se puede ajustar en esta etapa, si es necesario, y el volumen final se puede ajustar con agua, si se requiere.
[0027] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el tamaño de partícula de los glóbulos de aceite en la emulsión, por ejemplo, cuando se formula para administración parenteral, está dentro o por debajo del intervalo de tamaño del quilomicrón de origen natural, que es de 0,4-1,0 um. Si el tamaño de partícula es mayor que esto, las partículas lipídicas pueden depositarse en el hígado, el bazo y los pulmones, lo que da como resultado una carga de grasa significativa después de la infusión. Rahui CM, et al., Am. Hosp. Pharm. 1992, 49:2749-2755). Los lípidos con tamaños de partículas pequeños se dispersan mejor en la emulsión y tienden a producir emulsiones más seguras y estables. La selección de condiciones apropiadas para la preparación de la emulsión según la presente invención se considera que está dentro de las habilidades habituales de un experto en la materia.
[0028] En algunas realizaciones, la emulsión es una emulsión estable. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "emulsión estable" se refiere a una emulsión en la que las gotitas permanecen dispersas de manera sustancialmente uniforme a lo largo de una fase continua (o un líquido portador) durante un período de tiempo prolongado (por ejemplo, al menos aproximadamente 1 mes o más), incluidos tiempos de almacenamiento y uso razonables. Por ejemplo, las gotitas no se agregan ni se sedimentan después de un período de tiempo prolongado (por ejemplo, al menos aproximadamente 1 mes o más).
[0029] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "sustancialmente inmiscible" se refiere a dos o más líquidos que no forman una mezcla homogénea cuando están en contacto entre sí. En algunas realizaciones, cuando dos o más líquidos sustancialmente inmiscibles están en contacto entre sí, uno de los líquidos puede tener una solubilidad parcial (por ejemplo , no más del 10 % o menos) en otro líquido sustancialmente inmiscible. El término "mezcla homogénea" como se utiliza en el presente documento significa que todos los componentes y/o líquidos en una mezcla están fácilmente presentes en una sola fase. Por ejemplo, uno o más de los componentes y/o líquidos no se separan en diferentes fases ni cuando la mezcla se deja estacionaria durante un período de tiempo prolongado (por ejemplo, al menos aproximadamente 6 horas o más, incluyendo, por ejemplo, al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 18 horas, al menos aproximadamente 24 horas o más). Cuando se hace referencia a la miscibilidad de las gotitas y el líquido portador, el término "sustancialmente inmiscible" se refiere a un líquido (por ejemplo, una fina capa de líquido) que forma al menos la superficie exterior de las gotitas y el líquido portador que no forman una mezcla homogénea cuando están en contacto entre sí.
[0030] Tal como se utiliza en el presente documento y a lo largo de la memoria descriptiva, el término "gotita" se refiere a un volumen finito de materia que comprende al menos un líquido o al menos una fase líquida, incluyendo, por ejemplo, al menos dos o más líquidos o fases líquidas. Las gotitas pueden ser de cualquier dimensión, configuración y/o forma. En algunas realizaciones de diversos aspectos descritos en el presente documento, las gotitas pueden tener un tamaño de gotita que es más pequeño (por ejemplo, al menos un 50 % más pequeño) que el diámetro interior de una aguja que se utiliza para administrar una emulsión que comprende las gotitas. Un experto en la materia entenderá que las gotitas suelen presentar una distribución de tamaños de gotitas en torno al "tamaño" indicado. A menos que se indique lo contrario, el término "tamaño de gotita" o "tamaño" como se utiliza en el presente documento se refiere al modo de una distribución de tamaño de gotitas, es decir, el valor que se produce con mayor frecuencia en la distribución de tamaño. Un experto en la materia conoce procedimientos para medir el tamaño de gotita, por ejemplo, mediante dispersión dinámica de luz (tal como espectroscopia de fotocorrelación, difracción láser, dispersión de luz láser de ángulo bajo (LALLS) y dispersión de luz láser de ángulo medio (MALLS)), procedimientos de oscurecimiento de la luz (tal como el procedimiento de análisis de Coulter) u otras técnicas (tales como reología y microscopía óptica o electrónica).
[0031] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es de aproximadamente 10-50 % de emulsión, lo que significa que el MCT y el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 descritos en este documento están presentes en una cantidad de aproximadamente 10 g a aproximadamente 50 g por 100 ml de la formulación. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es de aproximadamente 20-40 % de emulsión.
[0032] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión es de aproximadamente 10-50 % de emulsión. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el MCT y el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 descritos en el presente documento proporcionan de 1,1 kcal/ml a 5 kcal/ml de la formulación.
[0033] Si bien las composiciones para nutrición enteral o parenteral total descritas en el presente documento están destinadas a administrarse como emulsiones, también se pueden preparar otras formas de las formulaciones, pero no forman parte de la presente invención. Por ejemplo, las composiciones descritas en el presente documento como emulsiones también se pueden preparar en forma de polvo incrementando el porcentaje de sólidos totales en la fórmula, utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia. El concentrado o polvo se puede reconstituir para la alimentación añadiendo agua (agua corriente o agua desionizada esterilizada) para formar una emulsión.
[0034] Tal como se utiliza en el presente documento, "aceite de pescado" se refiere a un aceite derivado de un pescado o tejido de pescado. El aceite de pescado está disponible comercialmente, por ejemplo, se pueden obtener triglicéridos de aceite de pescado al 10% (peso/peso) de Nisshin Flour Milling Co. ubicada en Nisshin, Japón. OMEGAVEN (Fresenius Kabi) es adecuado para su uso en los procedimientos y composiciones descritos en el presente documento. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aceite de pescado puede comprender ácidos grasos omega-3, DHA y/o EPA. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, un aceite de pescado puede ser un aceite de pescado derivado de uno o más peces de agua fría, que son conocidos por tener un alto contenido de ácidos grasos omega-3. Ejemplos no limitativos de pescado de agua fría pueden incluir un pez de aguas profundas, tiburón, salmón, bacalao, salmón, bonito, caballa, caballa del Atlántico, eglefino, arenque, dorado, lacha, caballa, capelán, tilapia, paparda del Pacífico, krill, anchoas, abadejo, trucha, pescado blanco, atún, eperlano, sábalo y sardinas. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, un aceite de pescado puede ser un aceite de pescado derivado de uno o más peces de agua salada de agua fría. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, un aceite de pescado puede ser un aceite de pescado derivado de tiburón, salmón, bacalao, salmón, bonito, caballa, caballa del Atlántico, eglefino, arenque, dorado, lacha, caballa, capelán, tilapia, paparda del Pacífico, krill, anchoas, abadejo, trucha, pescado blanco, atún, eperlano, sábalo, sardinas o cualquier combinación de los mismos.
[0035] Tal como se utiliza en este documento, el término "ácido graso" incluye ácidos grasos, tales como ácidos grasos insaturados (por ejemplo, monoinsaturados, poliinsaturados) o saturados, así como ésteres farmacéuticamente aceptables, ácidos libres, mono-, di- y triglicéridos, derivados, conjugados, precursores, sales y mezclas de los mismos.
[0036] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "ácidos grasos omega-3" incluye ácidos grasos omega-3 naturales y sintéticos, así como ésteres farmacéuticamente aceptables, ácidos libres, triglicéridos, derivados, conjugados, precursores, sales y mezclas de los mismos. Los ácidos grasos omega-3 pueden incluir, entre otros, ácido hexadecatrienoico (HTA); ácido a-linolénico (ALA); ácido estearidónico (SDA); ácido eicosatrienoico (ETE); ácido eicosatetraenoico (ETA); ácido eicosapentaenoico (EPA); ácido heneicosapentaenoico (HPA); ácido docosapentaenoico (DPA); ácido clupanodónico; ácido docosahexaenoico (DHA); ácido tetracosapentaenoico; y ácido tetracosahexaenoico (ácido nisínico). Los ácidos grasos omega-3 para su uso en las emulsiones descritas en el presente documento pueden tener un alto contenido de ácido eicosapentaenoico (EPA) así como de ácido docosahexaenoico (DHA). Los ácidos grasos omega-3 pueden ser de origen marino o sintético. Por ejemplo, una fuente adecuada de ácidos grasos omega-3 es el aceite de pescado o de foca. Las fuentes adecuadas de aceite de pescado incluyen pescado de aguas profundas, tiburón, salmón, bacalao, salmón, bonito, caballa, caballa del Atlántico, eglefino, arenque, dorado, lacha, caballa, capelán, tilapia, paparda del Pacífico, krill, anchoas, abadejo, trucha, pescado blanco, atún, eperlano, sábalo y sardinas, pescado de agua fría como se describe en otras partes del presente documento y similares.
[0037] El o los ácidos grasos según la presente divulgación pueden derivarse de aceites animales y/o aceites no animales. En algunas realizaciones, el o los ácidos grasos se derivan de al menos un aceite elegido entre aceite marino, aceite de algas, aceite de origen vegetal y aceite microbiano. Los aceites marinos incluyen, por ejemplo, aceite de pescado, tal como aceite de atún, aceite de krill y composición lipídica derivada de pescado. Los aceites de origen vegetal incluyen, por ejemplo, aceite de linaza, aceite de canola, aceite de semilla de mostaza y aceite de soja. Los aceites microbianos incluyen, por ejemplo, productos de Martek. En al menos una realización, el o los ácidos grasos se derivan de un aceite marino, tal como un aceite de pescado. En al menos una realización, el aceite marino es un aceite de pescado purificado.
[0038] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 de una emulsión de la presente invención pueden comprender EPA, DHA o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 de una emulsión de la presente invención pueden consistir esencialmente en EPA, DHA o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 de una emulsión de la presente invención pueden consistir en EPA, DHA o una combinación de los mismos.
[0039] Los ejemplos de otros ácidos grasos omega-3 (por ejemplo, aceites predominantes de omega-3) y mezclas de los mismos abarcados por la presente divulgación incluyen los ácidos grasos omega-3 como se definen en los Triglicéridos Omega-3 de la Farmacopea Europea, o la monografía de Aceite de pescado rico en ácidos omega-3. Los ejemplos de otros ácidos grasos omega-3 (por ejemplo, aceites predominantes de omega-3) y mezclas de los mismos abarcados por la presente divulgación incluyen los ácidos grasos omega-3 como se definen en los Triglicéridos Omega-3 de la Farmacopea Europea, los Ésteres Etílicos de Ácidos Omega-3 60 de la Farmacopea Europea, o la monografía de Aceite de pescado rico en ácidos omega-3.
[0040] Los ejemplos comerciales de ácidos grasos omega-3 adecuados para la presente divulgación comprenden diferentes mezclas de ácidos grasos (por ejemplo, que pueden estar en forma de triglicéridos (TG), ésteres etílicos (EE), forma de ácido graso libre (FA) y/o como fosfolípidos) que incluyen, pero sin limitación: concentrados de aceite marino omega-3 de Incromega™, tales como Incromega™ E1070, Incromega™ TG7010 SR, Incromega™ E7010 SR, Incromega™ TG6015, Incromega™ EPA500TG SR, Incromega™ E400200 SR, Incromega™ E4010, Incromega™ DHA700TG SR, Incromega™ DHA700E SR, Incromega™ DHA500TG SR, Incromega™ TG3322 SR, Incromega™ E3322 SR, Incromega™ TG3322, Incromega™ E3322, Incromega™ Trio TG/EE (Croda International PLC, Yorkshire, Inglaterra); EPAX6000FA, EPAX5000TG, EPAX4510TG, EPAX2050TG, EPAX7010EE, EPAX5500EE, EPAX5500TG, EPAX5000EE, EPAX5000TG, EPAX6000EE, EPAX6000TG, EPAX6000FA, EPAX6500EE, EPAX6500TG, EPAX4510TG, EPAX1050TG, EPAX2050TG, EPAX 7010TG, EPAX7010EE, EPAX6015TG/EE, EPAX4020TG y EPAX4020EE (EPAX es una subsidiaria de propiedad absoluta de la empresa noruega Austevoll Seafood ASA); Concentrados de aceite de pescado MEG-3® EPA/DHA (Ocean Nutrition Cañada); DHA FNO "Functional Nutritional Oil" y DHA CL "Clear Liquid" (Lonza); Superba™ Krill Oil (Aker); productos omega-3 que comprenden DHA producidos por Martek; aceite de krill Neptune (Neptune); productos de aceite de hígado de bacalao y concentrado de aceite de pescado antireflujo (TG) producidos por M0llers; aceite de pescado Lysi Omega-3; mezcla de aceite de hígado de bacalao Seven Seas Triomega® (Seven Seas); y Fri Flyt Omega-3 (Vesterálens).
[0041] El aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 utilizados en el presente documento pueden purificarse, por ejemplo, para cumplir con los estándares de calidad para la administración parenteral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 pueden enriquecerse con triglicéridos de ácidos grasos omega-3 adicionales, por ejemplo, se pueden añadir triglicéridos de ácidos grasos omega-3 purificados o sintetizados de otra fuente al aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 para aumentar el contenido de triglicéridos de ácidos grasos omega-3. Los procedimientos de extracción y refinación de aceites son bien conocidos en la técnica. No es necesario que los aceites se sometan a una reesterificación para purificarlos, extraerlos o refinarlos.
[0042] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 descritos en este documento pueden comprender de 0 a 100 por ciento de DHA y de 0 a 100 de EPA.
[0043] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 y/o el aceite de pescado pueden estar altamente refinados, por ejemplo, altamente enriquecidos más allá del contenido inicial de ácidos grasos omega-3 y su compuesto de triglicerina como parte de este procedimiento específico. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, estas composiciones pueden comprender un mínimo de 95 % en peso, por ejemplo, 96 % en peso, 97 % en peso, 98 % en peso o más, de triglicéridos monoméricos. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, estas composiciones pueden comprender menos de 1 % en peso de triglicéridos oxidados, menos de 0,2 % en peso de triglicéridos triméricos y oligoméricos y menos de 0,8 % en peso de poliglicéridos diméricos, y menos de 1,5 % en peso, de no emulsionables, particularmente carbohidratos y esterano. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el contenido total de ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexanoico en el aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 es de aproximadamente 25 %-50 % en peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el contenido total de ácido eicosapentaenoico y ácido docosahexanoico en el aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 es de aproximadamente 35 %-50 % en peso. Si bien los aceites de pescado generalmente pueden tener un contenido de colesterol de 4000 a 12000 ppm, el contenido de colesterol del aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 tal como se usa en el presente documento (por ejemplo, después del refinamiento o enriquecimiento) comprende menos de 2500 ppm, por ejemplo, menos de 1500 ppm.
[0044] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aceite de pescado y/o el ácido graso omega-3 de las composiciones de la presente invención son triglicéridos naturales, por ejemplo, no se han destilado ni reesterificado. La destilación y/o reesterificación de triglicéridos se utiliza en ciertas composiciones conocidas en la técnica (por ejemplo, para eliminar los ácidos mirístico o pamitoleico), pero se contempla específicamente en el presente documento que dichos procedimientos alteran los triglicéridos para inducir toxicidad en ellos y aumentar la presencia de diglicéridos, monoglicéridos y ácidos grasos libres. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-3 de las composiciones de la presente invención son triglicéridos, por ejemplo, no son diglicéridos como se describe en otra parte. Tal como se indica en las reivindicaciones, los ácidos grasos omega-3 de las composiciones de la presente invención comprenden no más del 10 % de diglicéridos como proporción del contenido total de diglicéridos triglicéridos. Por ejemplo, los ácidos grasos omega-3 de las composiciones de la presente invención pueden comprender no más de 9 %, no más de 8 %, no más de 7 %, no más de 6 %, no más de 5 %, no más de 4 %, no más de 3 %, no más de 2 %, no más de 1 %, o menos, o nada de diglicéridos como proporción del contenido total de diglicéridos triglicéridos.
[0045] Tal como se utiliza en el presente documento, "triglicéridos de cadena media" o "MCT" se refieren a triglicéridos que tienen ácidos grasos de cadenas de 6 a 12 átomos de carbono. Los MCT tienen ácidos grasos saturados. Un triglicérido ("TG") (también conocido como triacilglicerol o triacilglicérido) es un glicérido en el que el glicerol está esterificado con tres ácidos grasos. Los MCT pueden comprender ácidos grasos seleccionados entre, por ejemplo, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico y ácido caproico. Los MCT pueden derivarse de una planta, tal como una fruta o verdura, por ejemplo, una pluralidad de plantas. La descripción del MCT para su uso en esta divulgación puede, por ejemplo, cumplir con los requisitos de la monografía EP 0868, titulada "Triglycerides, Medium Chain" (Triglicéridos de cadena media saturada) (EP 0868, 2008).
[0046] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los MCT pueden comprender 90 % o más de ácidos grasos C8 y/o C10. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los MCT pueden comprender 95 % o más de ácidos grasos C8 y/o C10. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los MCT pueden comprender 30 %-50 % de ácidos grasos C10 y 45 %-65 % de ácidos grasos C8. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los MCT pueden comprender aproximadamente 41 % de ácidos grasos C10 y aproximadamente 54 % de ácidos grasos C8.
[0047] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 70:30 a 30:70; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 70:30 a 30:70. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 60:40 a aproximadamente 30:70; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 60:40 a aproximadamente 30:70. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 60:40 a 30:70; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 60:40 a 30:70.
[0048] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50 a aproximadamente 30:70; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50 a aproximadamente 30:70. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50 a 30:70; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50 a 30:70.
[0049] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 40:60 a 60:40; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 40:60 a 60:40.
[0050] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión puede comprender a) una combinación de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50; o b) una combinación de ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50.
[0051] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de aproximadamente 5 % p/v a aproximadamente 50 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. Las grasas totales pueden referirse a los MCT y al aceite de pescado/ácidos grasos omega-3 colectivamente. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de aproximadamente 15 % p/v a aproximadamente 25 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de aproximadamente 5 % p/v a aproximadamente 50 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de aproximadamente 20 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de 5 % p/v a 50 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de 15 % p/v a 25 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden de 5 % p/v a 50 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de emulsión de la presente invención comprenden un 20 % p/v de grasas totales en el volumen total de la composición.
[0052] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las emulsiones de la presente invención pueden comprender además alfa-tocoferol. Tal como se utiliza en el presente documento, "alfa-tocoferol" se refiere a la forma
[0053] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 50 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 75 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 100 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 120 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 150 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el alfa-tocoferol está presente en la emulsión a un nivel de al menos 200 mg/L.
[0054] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E (por ejemplo, beta tocoferol, gamma tocoferol, delta tocoferol, alfa tocotrienol, beta tocotrienol, gamma tocotrienol y/o delta tocotrienol) en una proporción de al menos 2:1 en peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 3:1 en peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 5:1 en peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 10:1 en peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión no comprende formas de vitamina E distintas del alfa-tocoferol.
[0055] Tal como se indica en las reivindicaciones, la emulsión de la presente invención comprende a) MCT y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 en las proporciones indicadas. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido graso omega-3 se proporciona como un aceite de ácido graso predominantemente omega-3.
[0056] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) uno o más de un emulsionante (por ejemplo, fosfolípido de huevo), fosfolípidos, glicerina y oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) uno o más de un emulsionante (por ejemplo, fosfolípidos y/o fosfolípidos de huevo), glicerina y oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, y b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3.
[0057] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) uno o más de un emulsionante, fosfolípidos, fosfolípidos de huevo, glicerina y oleato de sodio.
[0058] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) alfa-tocoferol. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) alfa-tocoferol. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) alfa-tocoferol.
[0059] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) alfa-tocoferol, y d) uno o más de un emulsionante, fosfolípidos, fosfolípidos de huevo, glicerina y oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) alfa-tocoferol, y d) uno o más de un emulsionante (por ejemplo, fosfolípidos o fosfolípidos de huevo), glicerina y oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) alfa-tocoferol, y d) uno o más de un emulsionante (por ejemplo, fosfolípidos y/o fosfolípidos de huevo), glicerina y oleato de sodio.
[0060] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) uno o más de fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) uno o más de fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) uno o más de fosfolípidos de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles.
[0061] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio y, opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio y, opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y opcionalmente, e) alfa-tocoferol y/o fitoesteroles.
[0062] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede comprender a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y e) alfa-tocoferol. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir esencialmente en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y e) alfa-tocoferol. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión es tal como se define en las reivindicaciones y puede consistir en a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) agua, d) fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, y e) alfa-tocoferol.
[0063] En determinadas condiciones, por ejemplo, durante la NPT, los fitoesteroles (por ejemplo, p-sitosterol, campesterol, estigmasterol, sitostanol y campestanol) pueden inducir afecciones inflamatorias y PNALD. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión no comprende fitoesteroles. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión no comprende ácidos grasos omega-6. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión no comprende grasas y/o ácidos grasos obtenidos de una fuente vegetal. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión no comprende ácidos grasos de cadena larga obtenidos de una fuente vegetal.
[0064] Tal como se describe en el presente documento, las formulaciones de la presente invención pueden contrarrestar los efectos secundarios negativos de los fitoesteroles (por ejemplo, p-sitosterol, campesterol, estigmasterol, sitostanol y campestanolomega). Por consiguiente, en algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles y/o los ácidos grasos omega-6 están presentes en las emulsiones de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 50 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 50 mg/L.
[0065] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles están presentes en la composición de emulsión en una concentración de menos de 100 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 100 mg/L.
[0066] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los fitoesteroles están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 25 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 25 mg/L.
[0067] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las grasas y/o los ácidos grasos obtenidos de una fuente vegetal están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 100 mg/L, por ejemplo, menos de 100 mg/L, menos de 50 mg/L o menos de 25 mg/L.
[0068] Tal como se utiliza en el presente documento, "fitoesterol" se refiere a esteroles y estanoles de origen vegetal, por ejemplo, fitoesteroides. Ejemplos no limitativos de fitoesteroles pueden incluir p-sitosterol, campesterol, estigmasterol, sitostanol y campestanol.
[0069] Tal como se utiliza en el presente documento, "ácido graso omega-6" incluye ácidos grasos omega-6 naturales y sintéticos, así como ésteres farmacéuticamente aceptables, ácidos libres, triglicéridos, derivados, conjugados, precursores, sales y mezclas de los mismos. Los ácidos grasos omega-6 pueden incluir, pero sin limitarse a los mismos, ácido linoleico (LA); ácido gamma-linolénico (GLA); ácido caléndico; ácido eicosadienoico; ácido dihomogamma-linolénico (DGLA); ácido araquidónico (AA, ARA); ácido docosadienoico; ácido adrenico; ácido Osbond; ácido tetracosatetraenoico; y ácido tetracosapentaenoico. Los ácidos grasos omega-6 pueden ser de origen vegetal o sintético.
[0070] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido araquidónico está presente en la composición en una concentración de al menos 900 mg/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido docosahexaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 13,4 gramos/L. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el ácido eicosapentaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 11,6 gramos/L.
[0071] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las emulsiones de la presente invención pueden comprender además uno o más de un emulsionante (por ejemplo, fosfolípidos y/o fosfolípidos de huevo), glicerina y oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención puede comprender entre un 10 y un 30 % de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, entre un 0,5 y un 2,5 % de fosfolípido de huevo, entre un 0,5 y un 5,0 % de glicerina y entre un 0,005 y un 0,1 % de oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención puede comprender aproximadamente un 20 % de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, aproximadamente un 1,2 % de fosfolípido de huevo, aproximadamente un 2,5 % de glicerina y aproximadamente un 0,03 % de oleato de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención puede comprender 20 % de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio.
[0072] La emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones puede ser para administración, por ejemplo, por vía oral, parenteral o intravenosa. En algunas realizaciones, la emulsión de la presente invención está formulada para administración oral. En algunas realizaciones, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones está formulada para administración parenteral y/o intravenosa.
[0073] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones se pueden preparar primero emulsionando cada componente como una emulsión separada y a continuación mezclando o combinando esas emulsiones juntas, por ejemplo, emulsionando una fuente de aceite de ácido graso omega-3 (por ejemplo, un aceite predominantemente de ácido graso omega-3) y/o aceite de pescado, emulsionando un MCT y a continuación mezclando o combinando esas dos emulsiones juntas para producir la emulsión combinada final de MCT y aceite de pescado (o ácidos grasos omega-3) en las combinaciones mencionadas anteriormente.
[0074] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, cada emulsión se puede formular individualmente de la siguiente manera mediante homogeneización a alta presión: primero se crea una dispersión lipídica utilizando un emulsionante de fosfolípidos de huevo que se añade a agua estéril para inyección (SWFI) de grado USP calentada (75-90 °C), en condiciones de mezclado con cizallamiento a alta velocidad. Se deja que la temperatura disminuya a 40-45 °C. A continuación, se añade oleato de sodio y se continúa mezclando con cizallamiento a 3900-4000 RPM durante 40 minutos. A continuación, se añade SWFI calentada en serie para mantener la temperatura a 40-45 °C. Se añade glicerina en condiciones de mezclado con cizallamiento continuo. Esto da como resultado una dispersión compuesta por 12 % de fosfolípidos de huevo, 25 % de glicerina y 0,3 % de oleato de sodio. La dispersión en bruto se transfiere a continuación a un homogeneizador y se homogeneiza a 9000 psi a 40-45 °C durante 20 ciclos, se filtra a través de una membrana de 0,45 pm y el pH se ajusta a 10,4 con hidróxido de sodio 0,5 N (NaOH). Todos los pasos se realizan bajo una atmósfera de nitrógeno. Para componer las emulsiones, el aceite (por ejemplo, aceite de pescado o aceite MCT) se agrega al agente de dispersión en una corriente fina bajo condiciones de mezcla de cizallamiento continuo a 3500-4500 RPM durante 40-45 minutos, manteniendo una temperatura de 40-45 °C. Las emulsiones en bruto resultantes se transfieren al homogeneizador y se homogeneizan a 5000 psi y 40-45 °C durante no menos de 9 ciclos de la emulsión. El pH de las emulsiones se tampona a > 8,8 utilizando NaOH 0,1 N. Todos los pasos del proceso de combinación se realizan bajo una atmósfera de nitrógeno. Las emulsiones terminadas se dividen en alícuotas en viales de vidrio para suero y los espacios de cabeza se llenan con gas nitrógeno antes de sellar. Todos los viales se esterilizaron por calor. Esto permite una homogeneización óptima de cada tipo de aceite para mejorar el cumplimiento de los requisitos del Capítulo <729> de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) que establecen que las emulsiones de grasa parenteral tienen un tamaño medio de glóbulo de grasa < 500 nm y un porcentaje de glóbulos de grasa > 5 pm (PFAT5) < 0,05 %.
[0075] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las emulsiones lipídicas de la presente invención pueden ser una mezcla de dos o más emulsiones. Este enfoque puede tener la ventaja de permitir que se añadan fácilmente componentes adicionales a la mezcla después de la emulsión inicial de los lípidos. A modo de ejemplo no limitativo, una mezcla 50:50 de emulsión de aceite de pescado al 20 % combinada con emulsión de aceite con MCT al 20 % se puede complementar además con, por ejemplo, emulsión de aceite de pescado adicional, triglicéridos, DHA, ácido linoleico u otros lípidos según sea necesario, para una afección específica del paciente en el momento de la administración en lugar de en el momento de la fabricación. Esto permite una mayor flexibilidad para que el médico prescriptor titule la mezcla de aceites para las afecciones específicas del paciente y disminuye la necesidad de que los médicos mantengan múltiples combinaciones de combinaciones de emulsiones de MCT y aceite de pescado (o ácidos grasos omega-3) terminadas.
[0076] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las composiciones de la presente invención se pueden preparar mezclando primero los componentes y a continuación preparando una emulsión de la mezcla, por ejemplo, mezclando una fuente de aceite de ácido graso omega-3 y/o aceite de pescado con un MCT, y a continuación emulsionando la mezcla. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, las emulsiones lipídicas de la presente invención pueden ser una emulsión de una mezcla de preparaciones lipídicas.
[0077] Para preparar las emulsiones lipídicas de acuerdo con la presente invención, se pueden mezclar uno o más agentes emulsionantes con, por ejemplo, la fuente de ácidos grasos omega-3 o MCT. Los agentes emulsionantes para este fin son generalmente fosfolípidos de origen natural, sintético o semisintético. Se conocen en la técnica una variedad de agentes emulsionantes adecuados. Los ejemplos de agentes emulsionantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilcolina de huevo, lecitina de huevo, L-a-dipalmitoil fosfatidilcolina (DPPC), DL-a-dipalmitoil fosfatidiletanolamina (DPPE) y dioleoil fosfatidilcolina (DOPC). De acuerdo con la presente invención, la concentración total de diglicéridos y monoglicéridos, así como de ácidos grasos libres en el emulsionante, debe ser baja para minimizar la contribución a la concentración total de aceite de la emulsión. En una realización de la presente invención, la concentración total de triglicéridos, así como de ácidos grasos libres, en el emulsionante es inferior a aproximadamente el 3,5 %. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se utiliza lecitina como agente emulsionante en las emulsiones lipídicas. Alternativamente, se puede utilizar lecitina de huevo como agente emulsionante. También se puede utilizar lecitina de huevo que contiene entre un 80 y un 85 % de fosfatidilcolina y menos de aproximadamente el 3,5 % de grasa como agente emulsionante. Un experto en la materia entenderá que pueden estar presentes otros componentes en la lecitina de huevo sin afectar negativamente a las propiedades emulsionantes. Por ejemplo, la lecitina de huevo puede contener uno o más de los siguientes componentes: fosfatidiletanolamina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina, esfingomeilina y otros componentes naturales.
[0078] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención comprende entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 5% (p/v) de agente emulsionante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención comprende entre aproximadamente 0,6 % y aproximadamente 2 % (p/v) de agente emulsionante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención comprende entre aproximadamente 0,8% y aproximadamente 1,8% (p/v) de agente emulsionante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención comprende entre aproximadamente 1,0% y aproximadamente 1,5% (p/v) de agente emulsionante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención comprende aproximadamente 1,2 % (p/v) de agente emulsionante.
[0079] La relación de lecitina con respecto a aceite (por ejemplo, MCT, aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3) en la emulsión es importante para determinar el tamaño de los glóbulos de aceite formados dentro de la emulsión. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la relación de lecitina con respecto a aceite está entre aproximadamente 1:4 y aproximadamente 1:20. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la relación está entre aproximadamente 1:4 y aproximadamente 1:18. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la relación está entre aproximadamente 1:4 y aproximadamente 1:15. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la relación está entre aproximadamente 1:4 y aproximadamente 1:10.
[0080] La emulsión lipídica de acuerdo con la presente invención puede comprender además componentes adicionales, tales como antioxidantes, agentes quelantes, modificadores de osmolalidad, tampones, agentes de neutralización y similares que mejoran la estabilidad, uniformidad y/u otras propiedades de la emulsión. Los antioxidantes adecuados que se pueden añadir a las emulsiones lipídicas incluyen, pero no se limitan a, alfa-tocoferol (vitamina E) y tocotrienoles. Tal como se sabe en la técnica, los tocotrienoles son una mezcla natural de tocotrienoles y extracto de vitamina E concentrado a partir de destilado de aceite de salvado de arroz. Los tocotrienoles tienen una estructura similar a la vitamina E y contienen tres enlaces dobles en la cadena lateral de carbono de la molécula. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la concentración de antioxidante añadido a la emulsión es típicamente entre aproximadamente 0,002 y aproximadamente 1,0 % (p/v). En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la concentración de antioxidante utilizado en la emulsión está entre aproximadamente 0,02 % y aproximadamente 0,5 % (p/v). En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añaden tocotrienoles a la emulsión como antioxidante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añaden aproximadamente 0,5 % (p/v) de tocotrienoles a la emulsión. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añade vitamina E a la emulsión como antioxidante. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añade aproximadamente 0,02 % (p/v) de vitamina E a la emulsión.
[0081] La emulsión puede comprender además un agente quelante para mejorar la estabilidad de la emulsión y reducir la formación de ácidos grasos oxidados. Los agentes quelantes adecuados son conocidos en la técnica y son aquellos que generalmente se reconocen como compuestos seguros (GRAS). Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, EDTA. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión comprende EDTA. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión comprende concentraciones de EDTA entre aproximadamente 1 * 10'6 M y 5 x 10'5 M.
[0082] También se puede incorporar un modificador de osmolalidad a la emulsión para ajustar la osmolalidad de la emulsión a un valor adecuado para la administración parenteral. Las cantidades y los tipos de modificadores de osmolalidad para su uso en emulsiones parenterales son bien conocidos en la técnica. Un ejemplo de un modificador de osmolalidad adecuado es el glicerol. La concentración de modificador de osmolalidad varía típicamente de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 5 % (p/v). En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la cantidad de modificador de osmolalidad añadido a la emulsión está entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 4 %. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la cantidad de modificador de osmolalidad añadido a la emulsión está entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 3 %. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añade aproximadamente el 2,25 % (p/v) de glicerol a la emulsión como modificador de osmolalidad. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el producto final es isotónico para permitir la infusión de la emulsión a través de un catéter venoso central o periférico.
[0083] El pH de la emulsión se puede ajustar mediante el uso de tampones o agentes de neutralización. Se ha demostrado que las emulsiones con valores de pH cercanos al pH fisiológico o superiores son menos propensas a la peroxidación de ácidos grasos. Un experto en la materia entenderá que el pH de las emulsiones se puede ajustar mediante el uso de una base apropiada que neutralice la carga negativa de los ácidos grasos, mediante el uso de un tampón apropiado o una combinación de los mismos. Una variedad de bases y tampones son adecuados para su uso con las emulsiones de la presente invención. Un experto en la materia entenderá que la adición de tampón a la emulsión afectará no solo al pH final, sino también a la fuerza iónica de la emulsión. Las altas fuerzas iónicas pueden afectar negativamente al potencial zeta de la emulsión (es decir, la carga superficial de los glóbulos de aceite) y, por lo tanto, no son deseables. La selección de una fuerza de tampón apropiada para proporcionar un pH adecuado se considera que está dentro de las habilidades ordinarias de un experto en la materia. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el pH de la emulsión se ajusta utilizando hidróxido de sodio. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el pH se ajusta con un tampón. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el tampón es un tampón de fosfato. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, se añaden tanto hidróxido de sodio como un tampón de fosfato a la emulsión. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el pH final de la emulsión está entre aproximadamente 6,0 y aproximadamente 9,0. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el pH de la emulsión está entre aproximadamente 7,0 y aproximadamente 8,5. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el pH de la emulsión está entre aproximadamente 7,0 y aproximadamente 8,0.
[0084] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión lipídica puede comprender además componentes para ajustar la estabilidad de la emulsión, por ejemplo, aminoácidos o carbohidratos, tales como fructosa o glucosa. La emulsión lipídica también puede formularse para incluir nutrientes, tales como glucosa, aminoácidos, vitaminas u otros suplementos nutricionales parenterales. La formulación de la emulsión lipídica para incorporar un agente terapéutico también se considera que está dentro del alcance de la presente invención. Un "agente terapéutico", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una sustancia fisiológica o farmacológicamente activa que produce un efecto o efectos localizados o sistémicos en animales y se refiere en general a fármacos, suplementos nutricionales, vitaminas, minerales, enzimas, hormonas, proteínas, polipéptidos, antígenos y otros compuestos terapéutica o diagnósticamente útiles.
[0085] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición de emulsión puede comprender además un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos. Los procedimientos descritos en el presente documento que no forman parte de la presente invención pueden comprender además la administración de un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos. El aditivo puede comprender uno o más ácidos grasos que son terapéuticos para una enfermedad, por ejemplo, una enfermedad para la que el sujeto necesita tratamiento. Por ejemplo, el DHA puede ser terapéutico para pacientes con fibrosis quística, y un aditivo para un sujeto con fibrosis quística puede comprender DHA, por ejemplo, más allá de lo que es necesario para el equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo comprende ácidos grasos en una proporción o mezcla que es terapéutica. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo se proporciona en una dosis de nanogramos a gramos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo se proporciona en una dosis de 1 nanogramo a 10 gramos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo se proporciona en una dosis de 1 nanogramo a 100 gramos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo se proporciona en una dosis de 1 nanogramo a 1000 gramos/kg/día.
[0086] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la composición comprende una mezcla de a) una emulsión del aditivo (por ejemplo, el o los ácidos grasos adicionales) y b) una o más emulsiones de i) el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 y ii) el MCT. Este enfoque, es decir, mezclas de emulsiones, permite que la mezcla se prepare durante o inmediatamente antes de la administración (por ejemplo, junto a la cama del paciente o en una farmacia del lugar) y, por lo tanto, la concentración y/o identidad del aditivo se personalice según las necesidades del paciente según lo indicado clínicamente, por ejemplo, en función de sus síntomas, patología y/o edad. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, el aditivo puede ser, por ejemplo, una emulsión adicional de aceite de pescado, triglicéridos, DHA, ácido linoleico u otros lípidos según sea necesario.
[0087] Se describe en este documento, pero no forma parte de la presente invención, un kit que comprende una composición como se describe en este documento,por ejemplo,una emulsión como se describe en este documento. Un kit es cualquier producto manufacturado (por ejemplo, un paquete o recipiente) que comprende al menos un reactivo, por ejemplo, la emulsión, que se promociona, distribuye o vende como una unidad para realizar los procedimientos descritos en este documento. Los kits descritos en este documento pueden comprender opcionalmente componentes adicionales útiles para realizar los procedimientos descritos en este documento, por ejemplo, agujas, tubos, etc. útiles para la administración por la vía deseada. A modo de ejemplo, el kit puede comprender fluidos ( por ejemplo , tampones ) adecuados para su uso con las emulsiones descritas en este documento, un material instructivo que describe la realización de un procedimiento como se describe en este documento, y similares. Un kit puede comprender además dispositivos y/o reactivos para la administración de la composición como se describe en este documento. Además, el kit puede comprender un folleto instructivo y/o puede proporcionar información sobre dosis, frecuencia de administración, etc.
[0088] Los kits descritos en el presente documento que no forman parte de la presente invención comprenden uno o más paquetes o recipientes que contienen la emulsión en combinación con un conjunto de instrucciones, generalmente instrucciones escritas, relacionadas con el uso y la dosificación de la emulsión. Los kits pueden comprender además recipientes adicionales que contienen uno o más nutrientes o compuestos terapéuticos o de diagnóstico que pueden añadirse a la emulsión antes de la administración. Los paquetes que contienen la emulsión pueden estar en forma de dosis unitarias o paquetes de farmacia a granel. Las dosis pueden envasarse en un formato tal que cada dosis esté asociada, por ejemplo, con un día de la semana. También puede haber asociado con el kit un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, el uso o la venta de productos biológicos, cuyo aviso refleja la aprobación por parte de la agencia de la fabricación, el uso o la venta para la administración a seres humanos o animales.
[0089] El diseño del recipiente también es un factor importante a la hora de fabricar emulsiones grasas. Por ejemplo, si la emulsión se envasa en vidrio, el recipiente se puede llenar con nitrógeno antes de añadir la emulsión propiamente dicha. Después de añadir la emulsión, el recipiente de vidrio se puede llenar de nuevo con nitrógeno para eliminar el espacio muerto cuando se fija la tapa. Este llenado con nitrógeno evita la formación de peróxido. Si el producto se envasa en plástico, se puede utilizar un recipiente sin DEHP que sea impermeable a los gases. El recipiente también puede tener la envoltura adecuada para minimizar la formación de peróxido en los lípidos, así como la lixiviación del plastificante del recipiente al propio producto. Además, si se utiliza plástico, se puede incluir un desecante con la bolsa, así como un indicador que indique si hay una fuga de aire en la envoltura. El recipiente puede estar libre de látex.
[0090] La presente invención proporciona además una formulación de emulsión tal como se define en las reivindicaciones para su uso en el suministro de nutrición parenteral a un sujeto que la necesita. Un sujeto que necesita una formulación de emulsión como se define en las reivindicaciones puede ser un sujeto que necesita nutrición suplementaria por vía parenteral, un sujeto que necesita nutrición parenteral total, un sujeto que necesita tratamiento para una afección inflamatoria y/o un sujeto que necesita tratamiento para o reducción de la inflamación. Un experto en la materia puede identificar fácilmente a los sujetos que necesitan una formulación de emulsión de la presente invención, por ejemplo, sujetos que reciben nutrición parenteral que presentan síntomas de inflamación y/o síntomas que se aceptan como indicadores de que la NP o la NPT tradicionales deben reducirse o interrumpirse debido al riesgo de efectos secundarios (incluida la inflamación y/o la enfermedad hepática). Dichos sujetos y sus síntomas se describen en detalle, por ejemplo, en Guidelines for the Provision and Assessment of Nutrition Support Therapy in the Adult Critically Ill PAtient: Society of Critical Care Medicine (SCCM) and American Society for Parenteral and Enteral Nutrition (A.S.P.E.N.), Taylor et al. (disponible en la web en journals.lww.com/ccmjournal/Fulltext/2016/02000/Guidelines_for_the_Provision_and_Assessment_o f.20.aspx)
[0091] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto que necesita tratamiento para una afección seleccionada del grupo que consiste en: esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la formulación de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto que tiene o ha sido diagnosticado con una afección seleccionada del grupo que consiste en: esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3.
[0092] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto que tiene o necesita tratamiento para una enfermedad hepática, por ejemplo, enfermedad del hígado graso. Tal como se usa en el presente documento, "enfermedad del hígado graso" se refiere a una enfermedad en la que la grasa (hepatocitos) se acumula excesivamente en el hígado y puede causar enfermedades graves tales como hepatitis crónica y cirrosis hepática. En pacientes con enfermedad del hígado graso, los lípidos, particularmente la grasa neutra, se acumulan en los hepatocitos en la medida en que la cantidad excede el intervalo fisiológicamente permisible. Desde un punto de vista bioquímico, un estándar para juzgar el hígado graso es que el peso de la grasa neutra es aproximadamente el 10 % (100 mg/g de peso húmedo) o más del peso húmedo del tejido hepático. La enfermedad del hígado graso generalmente se detecta mediante la observación de niveles séricos elevados de enzimas específicas del hígado, tales como las transaminasas ALT y AST, que sirven como índices de lesión de los hepatocitos, así como por la presentación de síntomas, que incluyen fatiga y dolor en la región del hígado, aunque el diagnóstico definitivo a menudo requiere una biopsia.
[0093] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto que tiene o necesita tratamiento para enfermedad hepática asociada o inducida por NP. Esta enfermedad incluye alteraciones tanto bioquímicas, es decir, elevación de aminotransferasa sérica, bilirrubina y fosfatasa alcalina, como histológicas, tales como esteatosis, esteatohepatitis, lipidosis, colestasis, fibrosis y cirrosis. La enfermedad puede ser progresiva y empeorar con el transcurso de la administración de NP y parece ser más prevalente en la población pediátrica. Factores de riesgo adicionales para esta afección incluyen prematuridad, bajo peso al nacer, uso a largo plazo, falta de ingesta oral concomitante, sepsis y múltiples procedimientos quirúrgicos. En general, se cree que la gravedad de la patología hepática inducida por NP está inversamente relacionada con la edad del paciente.
[0094] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración por administración parenteral (NP). En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración por administración parenteral total (NPT). En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto que necesita administración parenteral total (NPT). Los procedimientos de administración de emulsiones lipídicas a pacientes para aplicaciones de NP o beneficio terapéutico son conocidos en la técnica. Normalmente, las composiciones de emulsión se administran por infusión durante un período de tiempo adecuado. Las dosis y regímenes de administración apropiados pueden ser determinados fácilmente por un experto en las técnicas clínicas.
[0095] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna nutrición oral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna nutrición oral que comprenda grasas y/o ácidos grasos.
[0096] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra ninguna otra formulación parenteral. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra ninguna otra formulación parenteral que comprenda grasas y/o ácidos grasos.
[0097] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional de grasas y/o ácidos grasos.
[0098] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administró una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administró la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administró la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional de ácidos grasos esenciales. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administró una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administró la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administró la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional oral de ácidos grasos esenciales. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administró una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administró la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administró la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional parenteral de ácidos grasos esenciales.
[0099] En algunas circunstancias que no forman parte de la presente invención reivindicada, la emulsión descrita en este documento se administra mediante administración oral.
[0100] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional que sería suficiente para mantener un equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite ninguna otra fuente nutricional oral/enteral que sería suficiente para mantener un equilibrio nutricional. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, al sujeto al que se le administra una emulsión de la presente invención, durante el período de tratamiento en el que se le administra la emulsión (por ejemplo, el período de días o semanas en el que se le administra la emulsión), no se le administra y/o se le permite cualquier otra fuente nutricional parenteral que sería suficiente para mantener un equilibrio nutricional. En el presente documento, el término "equilibrio nutricional" hace referencia al mantenimiento del crecimiento, el desarrollo y la falta de deficiencias nutricionales mediante el suministro de una nutrición adecuada. El equilibrio nutricional satisface los requerimientos de cada individuo sin un aporte excesivo de ningún nutriente en particular que pueda producir un resultado adverso.
[0101] Tal como se describe en otra parte del presente documento, se ha demostrado que las emulsiones de la presente invención son adecuadas para la monoterapia, por ejemplo, no inducen deficiencia de ácidos grasos esenciales, inflamación y/u otras deficiencias nutricionales cuando se administran como monoterapia. Esta es una característica que no comparten todas las composiciones de grasas/ácidos grasos que pueden ser adecuadas para la administración (por ejemplo, administración parenteral). Por consiguiente, en algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración como monoterapia para la afección para la que el sujeto necesita tratamiento. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración como monoterapia para necesidades nutricionales, por ejemplo, se podría administrar simultáneamente un antiinflamatorio sin valor nutricional significativo, pero la emulsión seguiría siendo una monoterapia en lo que respecta a las necesidades nutricionales. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración como monoterapia con respecto a los ácidos grasos, por ejemplo, no se administra ni consume ninguna otra fuente de ácidos grasos al sujeto.
[0102] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención puede ser para administración en una dosis de aproximadamente 0,5 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 5 g de ácidos grasos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención puede ser para administración en una dosis de 0,5 g de ácidos grasos/kg/día a 5 g de ácidos grasos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención puede ser para administración en una dosis de aproximadamente 1 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 3 g de ácidos grasos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención puede ser para administración en una dosis de 1 g de ácidos grasos/kg/día a 3 g de ácidos grasos/kg/día. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, una emulsión de la presente invención puede ser para administración en una dosis de aproximadamente 2 g de ácidos grasos/kg/día.
[0103] En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la administración de una emulsión de la presente invención se continúa durante al menos 3 días, por ejemplo, 3 o más días, 4 o más días, 5 o más días, 7 o más días, 2 o más semanas, 3 o más semanas, 4 o más semanas, 6 o más semanas, 2 meses o más, o 3 meses o más. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la administración de una emulsión de la presente invención se continúa durante al menos 3 semanas. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la administración de una emulsión de la presente invención se continúa durante al menos 6 semanas. En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos, la administración de una emulsión de la presente invención se continúa durante al menos 3 meses.
[0104] En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones pueden ser para administración a un sujeto que tiene o ha sido diagnosticado con una afección descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz de las composiciones de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es para administración a un sujeto con el fin de aliviar un síntoma de una afección descrita en el presente documento. Tal como se usa en el presente documento, "aliviar un síntoma" es mejorar cualquier afección o síntoma asociado con la afección. En comparación con un control no tratado equivalente, dicha reducción es de al menos 5 %, 10 %, 20 %, 40 %, 50 %, 60 %, 80 %, 90 %, 95 %, 99 % o más, medido mediante cualquier técnica estándar. Los expertos en la materia conocen una variedad de medios para administrar las composiciones descritas en el presente documento a sujetos. Dichos procedimientos que no forman parte de la presente invención reivindicada pueden incluir, pero no se limitan a, administración oral, parenteral o intravenosa.
[0105] El término "cantidad eficaz" tal como se utiliza en el presente documento se refiere a la cantidad de una emulsión de la presente invención necesaria para aliviar al menos uno o más síntomas de la enfermedad o trastorno, y se relaciona con una cantidad suficiente de composición farmacológica para proporcionar el efecto deseado. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" por lo tanto se refiere a una cantidad de una emulsión descrita en el presente documento que es suficiente para proporcionar un efecto particular (por ejemplo, efecto nutricional o antiinflamatorio) cuando se administra a un sujeto típico. Una cantidad eficaz tal como se utiliza en el presente documento, en varios contextos, también incluiría una cantidad suficiente para retrasar el desarrollo de un síntoma de la enfermedad, alterar el curso de una enfermedad sintomática (por ejemplo, pero no limitado a, ralentizar la progresión de un síntoma de la enfermedad), o revertir un síntoma de la enfermedad. Por lo tanto, no es generalmente factible especificar una "cantidad eficaz" exacta. Sin embargo, para cualquier caso dado, una "cantidad eficaz" apropiada puede ser determinada por una persona con experiencia ordinaria en la técnica utilizando únicamente experimentación de rutina.
[0106] Las cantidades efectivas, la toxicidad y la eficacia terapéutica se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50 % de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50 % de la población). La dosificación puede variar dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se prefieren las composiciones y los procedimientos que exhiben índices terapéuticos grandes. Una dosis terapéuticamente efectiva se puede estimar inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Además, se puede formular una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración plasmática circulante que incluya la IC50 (es decir, la concentración de la emulsión o componentes de la misma, que logra una inhibición de los síntomas a la mitad de la máxima) según se determina en el cultivo celular o en un modelo animal apropiado. Los niveles en plasma se pueden medir, por ejemplo, mediante cromatografía líquida de alto rendimiento. Los efectos de una dosis determinada pueden controlarse mediante un bioensayo adecuado, por ejemplo, un ensayo de inflamación o de función hepática, entre otros. La dosis puede ser determinada por un médico y ajustada, según sea necesario, para adaptarse a los efectos observados del tratamiento.
[0107] En algunas circunstancias, la tecnología descrita en el presente documento se refiere a una composición farmacéutica (que no forma parte de la presente invención reivindicada) que comprende una emulsión como se describe en el presente documento, y opcionalmente un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas circunstancias, los principios activos de la composición farmacéutica comprenden una emulsión como se describe en el presente documento. En algunas circunstancias, los principios activos de la composición farmacéutica consisten esencialmente en una emulsión como se describe en el presente documento. En algunas circunstancias, los principios activos de la composición farmacéutica consisten en una emulsión como se describe en el presente documento. Los portadores y diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen solución salina, soluciones tampón acuosas, disolventes y/o medios de dispersión. El uso de dichos portadores y diluyentes es bien conocido en la técnica. Algunos ejemplos no limitantes de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; (3) celulosa y sus derivados, como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, etilcelulosa, celulosa microcristalina y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio y talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) glicoles, tales como propilenglicol; (10) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol (PEG); (11) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (12) agar; (13) agentes tampón, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (14) ácido algínico; (15) agua libre de pirógenos; (16) solución salina isotónica; (17) solución de Ringer; (18) alcohol etílico; (19) soluciones tamponadas con pH; (20) poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; (21) agentes de relleno, tales como polipéptidos y aminoácidos (22) componentes del suero, tales como albúmina sérica, HDL y LDL; (23) alcoholes C2-C12, tales como etanol; y (24) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas. También pueden estar presentes en la formulación agentes humectantes, agentes colorantes, agentes desmoldantes, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes perfumantes, conservantes y antioxidantes. Los términos tales como "excipiente", "portador", "portador farmacéuticamente aceptable" o similares se utilizan indistintamente en el presente documento. En algunas circunstancias, el portador inhibe la degradación de los agentes activos como se describe en el presente documento. Cabe indicar que la emulsión en sí puede comprender agua. La emulsión se puede administrar con otros componentes utilizados en soluciones de nutrición parenteral (por ejemplo, dextrosa, aminoácidos cristalinos, elementos traza, multivitaminas, electrolitos y minerales).
[0108] En algunas circunstancias, la composición farmacéutica (que no forma parte de la presente invención reivindicada) que comprende una emulsión como se describe en el presente documento puede ser una forma de dosificación parenteral. Dado que la administración de formas de dosificación parenteral normalmente evita las defensas naturales del paciente contra los contaminantes, las formas de dosificación parenteral son preferiblemente estériles o capaces de esterilizarse antes de la administración a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen, pero no se limitan a, soluciones listas para inyección, productos secos listos para disolverse o suspenderse en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones listas para inyección y emulsiones. Además, se pueden preparar formas de dosificación parenteral de liberación controlada para la administración a un paciente, incluyendo, pero no limitado a, formas de dosificación de tipo DUROS® y de dosificación por descarga.
[0109] Las composiciones farmacéuticas (que no forman parte de la presente invención reivindicada) que comprenden una emulsión descrita en el presente documento también se pueden formular para que sean adecuadas para la administración oral, por ejemplo, como formas de dosificación discretas, tales como, pero sin limitarse a, comprimidos (incluidos, sin limitación, comprimidos ranurados o recubiertos), píldoras, comprimidos oblongos, cápsulas, comprimidos masticables, paquetes de polvo, sellos, trociscos, obleas o líquidos, tales como, pero sin limitarse a, jarabes, elixires, soluciones o suspensiones en un líquido acuoso, un líquido no acuoso, una emulsión de aceite en agua o una emulsión de agua en aceite. Dichas composiciones contienen una cantidad predeterminada de la sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos descritos y se pueden preparar mediante procedimientos de farmacia bien conocidos por los expertos en la materia. Véase en general, Remington: The Science and Practice of Pharmacay, 21.a edición, Lippincott, Williams y Wilkins, Filadelfia, Pensilvania (2005)).
[0110] Los procedimientos descritos en este documento (que no forman parte de la presente invención reivindicada) pueden comprender además la administración de un segundo agente y/o tratamiento al sujeto, por ejemplo, como parte de una terapia combinatoria. A modo de ejemplo no limitativo, si un sujeto va a ser tratado por dolor o inflamación de acuerdo con los procedimientos descritos en este documento, al sujeto también se le puede administrar un segundo agente y/o tratamiento que se sabe que es beneficioso para sujetos que sufren dolor o inflamación. Los ejemplos de dichos agentes y/o tratamientos incluyen, pero no se limitan a, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE, tales como aspirina, ibuprofeno o naproxeno); corticosteroides, incluidos glucocorticoides (por ejemplo, cortisol, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona y beclometasona); metotrexato; sulfasalazina; leflunomida; medicamentos anti-TNF; ciclofosfamida; fármacos pro-resolución; micofenolato; u opiáceos (por ejemplo, endorfinas, encefalinas y dinorfina), esteroides, analgésicos, barbitúricos, oxicodona, morfina, lidocaína y similares.
[0111] En ciertas realizaciones, una dosis eficaz de una composición de la presente invención se puede administrar a un paciente una vez. En ciertas realizaciones, una dosis eficaz de una composición de la presente invención se puede administrar a un paciente repetidamente, por ejemplo, diariamente o varias veces al día durante un período de al menos 3 días, al menos 4 días, al menos 5 días, al menos 6 días, al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 3 semanas, al menos 4 semanas, al menos 6 semanas, al menos 2 meses o al menos 3 meses.
[0112] La dosis de una composición tal como se describe en el presente documento puede ser determinada por un médico y ajustada, según sea necesario, para adaptarse a los efectos observados del tratamiento. Con respecto a la duración y frecuencia del tratamiento, es típico que los médicos expertos controlen a los sujetos para determinar cuándo el tratamiento está proporcionando un beneficio terapéutico y para determinar si se debe aumentar o disminuir la dosis, aumentar o disminuir la frecuencia de administración, interrumpir el tratamiento, reanudar el tratamiento o realizar otras modificaciones en el régimen de tratamiento. El programa de dosificación puede variar de una vez por semana a diariamente dependiendo de una serie de factores clínicos, tales como la sensibilidad del sujeto a los componentes de la emulsión. La dosis o cantidad de activación deseada se puede administrar de una vez o dividir en subdosis, por ejemplo, 2-4 subdosis y administrar durante un período de tiempo, por ejemplo, a intervalos apropiados a lo largo del día u otro programa apropiado. En algunas realizaciones, la administración puede ser crónica, por ejemplo, una o más dosis y/o tratamientos diariamente durante un período de semanas o meses. Ejemplos de pautas de dosificación y/o tratamiento son la administración diaria, dos veces al día, tres veces al día o cuatro o más veces al día durante un período de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses o 6 meses, o más. Una composición de la presente invención puede ser para administración durante un período de tiempo, tal como durante un período de 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos o 25 minutos.
[0113] Los intervalos de dosificación para la administración de una emulsión descrita en el presente documento, de acuerdo con los procedimientos descritos en el presente documento (que no forman parte de la presente invención reivindicada) dependen, por ejemplo, de la forma de la emulsión, su potencia y el grado en que se desea reducir los síntomas, marcadores o indicadores de una afección descrita en el presente documento. La dosificación no debe ser tan grande como para causar efectos secundarios adversos. En general, la dosificación variará con la edad, la afección y el género del paciente y puede ser determinada por un experto en la materia. La dosificación también puede ser ajustada por el médico individual en caso de cualquier complicación.
[0114] La eficacia de una emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones, por ejemplo, para el tratamiento de una afección descrita en el presente documento, o para inducir una respuesta tal como se describe en el presente documento, puede ser determinada por el médico experto. Sin embargo, un tratamiento se considera "tratamiento eficaz", tal como se utiliza el término en el presente documento, si uno o más de los signos o síntomas de una afección descrita en el presente documento se modifican de manera beneficiosa, se mejoran otros síntomas clínicamente aceptados, o incluso se atenúan, o se induce una respuesta deseada, por ejemplo, en al menos un 10 % después del tratamiento de acuerdo con los procedimientos descritos en el presente documento. La eficacia se puede evaluar, por ejemplo, midiendo un marcador, indicador, síntoma y/o la incidencia de una afección tratada de acuerdo con los procedimientos descritos en el presente documento o cualquier otro parámetro medible apropiado, por ejemplo, equilibrio nutricional, inflamación y/o función hepática. La eficacia también se puede medir por la incapacidad de un individuo para empeorar según se evalúe mediante la hospitalización o la necesidad de intervenciones médicas (es decir, se detiene la progresión de la enfermedad). Los procedimientos para medir estos indicadores son conocidos por los expertos en la materia y/o se describen en el presente documento. El tratamiento incluye cualquier tratamiento de una enfermedad en un individuo o un animal (algunos ejemplos no limitantes incluyen un ser humano o un animal) e incluye: (1) inhibir la enfermedad, por ejemplo, prevenir un empeoramiento de los síntomas (por ejemplo, dolor o inflamación); o (2) aliviar la gravedad de la enfermedad, por ejemplo, provocar la regresión de los síntomas. Una cantidad eficaz para el tratamiento de una enfermedad significa aquella cantidad que, cuando se administra a un sujeto que la necesita, es suficiente para dar como resultado un tratamiento eficaz según se define ese término en el presente documento, para esa enfermedad. La eficacia de un agente se puede determinar evaluando los indicadores físicos de una afección o respuesta deseada. Está dentro de la capacidad de un experto en la materia controlar la eficacia de la administración y/o el tratamiento midiendo cualquiera de dichos parámetros, o cualquier combinación de parámetros. La eficacia se puede evaluar en modelos animales de una afección descrita en el presente documento. Cuando se utiliza un modelo animal experimental, la eficacia del tratamiento se evidencia cuando se observa un cambio estadísticamente significativo en un marcador.
[0115] En el presente documento se proporcionan ensayosin vitroy en modelos animales que permiten la evaluación de una dosis dada de una emulsión tal como se describe en el presente documento. A modo de ejemplo no limitativo, los efectos de una dosis de una emulsión se pueden evaluar administrando la emulsión por vía oral o parenteral y evaluando a continuación los niveles de ácidos grasos en suero, los marcadores inflamatorios (por ejemplo, TNF-alfa y/o IL-6circulante) y la histología del hígado, el bazo y/o el riñón.
[0116] Para mayor comodidad, a continuación se proporciona el significado de algunos términos y frases utilizados en la memoria descriptiva, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas. A menos que se indique lo contrario o que el contexto lo indique de forma implícita, los siguientes términos y frases incluyen los significados que se proporcionan a continuación. Las definiciones se proporcionan para ayudar a describir realizaciones particulares y no tienen por objeto limitar la invención reivindicada, ya que el alcance de la presente invención está limitado únicamente por las reivindicaciones. A menos que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece esta invención. Si existe una discrepancia aparente entre el uso de un término en la técnica y su definición proporcionada en el presente documento, prevalecerá la definición proporcionada en la memoria descriptiva.
[0117] Para mayor comodidad, ciertos términos empleados en este documento, en la memoria descriptiva, ejemplos y reivindicaciones adjuntas se recogen aquí.
[0118] Los términos "disminuir", "reducido", "reducción" o "inhibir" se utilizan todos en el presente documento para significar una disminución en una cantidad estadísticamente significativa. En algunas realizaciones, "reducir", "reducción" o "disminuir" o "inhibir" normalmente significa una disminución de al menos un 10 % en comparación con un nivel de referencia (por ejemplo, la ausencia de un tratamiento o agente determinado) y puede incluir, por ejemplo, una disminución de al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 30 %, al menos aproximadamente un 35 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 45 %, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 60 %, al menos aproximadamente un 65 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos aproximadamente un 99 %, o más. Tal como se utiliza en el presente documento, "reducción" o "inhibición" no abarca una inhibición o reducción completa en comparación con un nivel de referencia.
"Inhibición completa" es una inhibición del 100 % en comparación con un nivel de referencia. Una disminución puede ser preferiblemente hasta un nivel aceptado dentro del intervalo normal para un individuo sin un trastorno determinado.
[0119] Los términos "aumentado", "aumentar", "mejorar" o "activar" se utilizan todos en el presente documento para significar un aumento en una cantidad estáticamente significativa. En algunas realizaciones, los términos "aumentado", "aumentar", "mejorar" o "activar" pueden significar un aumento de al menos 10 % en comparación con un nivel de referencia, por ejemplo, un aumento de al menos aproximadamente 20 %, o al menos aproximadamente 30 %, o al menos aproximadamente 40 %, o al menos aproximadamente 50 %, o al menos aproximadamente 60 %, o al menos aproximadamente 70 %, o al menos aproximadamente 80 %, o al menos aproximadamente 90 % o hasta e incluyendo un aumento de 100 % o cualquier aumento entre 10-100 % en comparación con un nivel de referencia, o al menos aproximadamente 2 veces, o al menos aproximadamente 3 veces, o al menos aproximadamente 4 veces, o al menos aproximadamente 5 veces o al menos aproximadamente 10 veces de aumento, o cualquier aumento entre 2 veces y 10 veces o más en comparación con un nivel de referencia. En el contexto de un marcador o síntoma, un "aumento" es un aumento estadísticamente significativo de dicho nivel.
[0120] Tal como se utiliza en el presente documento, un "sujeto" significa un ser humano o un animal. Por lo general, el animal es un vertebrado, tal como un primate, un roedor, un animal doméstico o un animal de caza. Los primates incluyen chimpancés, monos cinomólogos, monos araña y macacos, por ejemplo, Rhesus. Los roedores incluyen ratones, ratas, marmotas, hurones, conejos y hámsteres. Los animales domésticos y de caza incluyen vacas, caballos, cerdos, ciervos, bisontes, búfalos, especies felinas, por ejemplo, gato doméstico, especies caninas, por ejemplo, perro, zorro, lobo, especies aviares, por ejemplo, pollo, emú, avestruz y peces, por ejemplo, trucha, bagre y salmón. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero, por ejemplo, un primate, por ejemplo, un ser humano. Los términos "individuo", "paciente" y "sujeto" se utilizan indistintamente en el presente documento.
[0121] Preferentemente, el sujeto es un mamífero. El mamífero puede ser un ser humano, un primate no humano, un ratón, una rata, un perro, un gato, un caballo o una vaca, pero no se limita a estos ejemplos. Se pueden utilizar ventajosamente mamíferos distintos de los seres humanos como sujetos que representan modelos animales de las enfermedades y afecciones descritas en el presente documento. Un sujeto puede ser macho o hembra.
[0122] Un sujeto puede ser alguien a quien se le ha diagnosticado previamente o se le ha identificado como que padece o tiene una afección que necesita tratamiento o una o más complicaciones relacionadas con dicha afección y, opcionalmente, ya se ha sometido a tratamiento para la afección o dichas una o más complicaciones relacionadas con la afección. Alternativamente, un sujeto también puede ser alguien a quien no se le ha diagnosticado previamente que tiene la afección o una o más complicaciones relacionadas con la afección. Por ejemplo, un sujeto puede ser alguien que exhibe uno o más factores de riesgo para la afección o una o más complicaciones relacionadas con la afección o un sujeto que no exhibe factores de riesgo.
[0123] Un "sujeto que necesita" tratamiento para una afección particular puede ser un sujeto que padece esa afección, que ha sido diagnosticado con esa afección o que está en riesgo de desarrollar esa afección.
[0124] Tal como se utilizan en el presente documento, los términos "tratar", "tratamiento", "que trata" o "mejora" se refieren a tratamientos terapéuticos, en los que el objetivo es revertir, aliviar, mejorar, inhibir, ralentizar o detener la progresión o gravedad de una afección asociada con una enfermedad o trastorno, por ejemplo, una afección, enfermedad o trastorno tal como se describe en el presente documento. El término "tratar" incluye reducir o aliviar al menos un efecto adverso o síntoma de una afección, enfermedad o trastorno. El tratamiento es generalmente "efectivo" si se reducen uno o más síntomas o marcadores clínicos. Alternativamente, el tratamiento es "efectivo" si se reduce o detiene la progresión de una enfermedad. Es decir, "tratamiento" incluye no solo la mejora de los síntomas o marcadores, sino también un cese, o al menos una ralentización, del progreso o empeoramiento de los síntomas en comparación con lo que se esperaría en ausencia de tratamiento. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, el alivio de uno o más síntomas, la disminución de la extensión de la enfermedad, la estabilización (es decir, que no empeore) del estado de la enfermedad, el retraso o la ralentización de la progresión de la enfermedad, la mejora o paliación del estado de la enfermedad, la remisión (parcial o total) y/o la disminución de la mortalidad, ya sea detectable o indetectable. El término "tratamiento" de una enfermedad también incluye el alivio de los síntomas o los efectos secundarios de la enfermedad (incluido el tratamiento paliativo).
[0125] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "composición farmacéutica" se refiere al agente activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, un portador comúnmente utilizado en la industria farmacéutica. La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable. Un portador farmacéuticamente aceptable puede ser un portador distinto del agua. Un portador farmacéuticamente aceptable puede ser una emulsión, gel, liposoma, nanopartícula y/o pomada. Un portador farmacéuticamente aceptable puede ser un portador artificial o diseñado, por ejemplo, un portador en el que no se encontraría el principio activo en la naturaleza.
[0126] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "administrar" se refiere a la colocación de un compuesto como se describe en el presente documento en un sujeto mediante un procedimiento o vía que da como resultado el suministro al menos parcial del agente en un sitio deseado. Las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos descritos en el presente documento se pueden administrar mediante cualquier vía apropiada que dé como resultado un tratamiento eficaz en el sujeto.
[0127] El término "estadísticamente significativo" o "significativamente" se refiere a la significancia estadística y generalmente significa una diferencia de dos desviaciones estándar (2DE) o mayor.
[0128] Salvo en los ejemplos de funcionamiento, o cuando se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes o condiciones de reacción utilizados en el presente documento deben entenderse modificados en todos los casos por el término "aproximadamente". El término "aproximadamente" cuando se utiliza en relación con porcentajes puede significar ±1 %.
[0129] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "que comprende" significa que también pueden estar presentes otros elementos además de los elementos definidos presentados. El uso de "que comprende" indica inclusión en lugar de limitación.
[0130] El término "que consiste en" se refiere a composiciones, procedimientos y respectivos componentes de los mismos tal como se describe en este documento, que son exclusivos de cualquier elemento no mencionado en esa descripción de la realización.
[0131] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "que consiste esencialmente en" se refiere a aquellos elementos necesarios para una realización determinada. El término permite la presencia de elementos adicionales que no afectan materialmente a la(s) característica(s) básica(s) y novedosa(s) o funcional(es) de esa realización de la presente invención.
[0132] Los términos singulares "un", "una" y "el" o “ la” incluyen referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De manera similar, la palabra "o" pretende incluir "y", a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Aunque se pueden utilizar procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento en la práctica o prueba de esta divulgación, a continuación se describen procedimientos y materiales adecuados. La abreviatura "e.g." se deriva del latín exempli gratia y se utiliza en el presente documento para indicar un ejemplo no limitativo. Por lo tanto, la abreviatura "e.g." es sinónimo del término "por ejemplo".
[0133] Las agrupaciones de elementos alternativos o realizaciones de la presente invención descritas en el presente documento no deben interpretarse como limitaciones. Se puede hacer referencia a cada miembro del grupo y reivindicarlo individualmente o en cualquier combinación con otros miembros del grupo u otros elementos que se encuentran en el presente documento. Uno o más miembros de un grupo pueden incluirse en un grupo o eliminarse de el mismo por razones de conveniencia y/o patentabilidad. Cuando se produce dicha inclusión o eliminación, se considera que la memoria descriptiva contiene el grupo modificado, cumpliendo así la descripción escrita de todos los grupos Markush utilizados en las reivindicaciones adjuntas.
[0134] A menos que se defina lo contrario en el presente documento, los términos científicos y técnicos utilizados en relación con la presente solicitud tendrán los significados que entienden comúnmente los expertos en la materia a la que pertenece esta divulgación. Debe entenderse que esta invención no se limita a la metodología, los protocolos y los reactivos, etc. particulares, descritos en el presente documento y, por tanto, pueden variar. La terminología utilizada en el presente documento tiene el propósito de describir realizaciones particulares únicamente, y no pretende limitar el alcance de la presente invención, que se define únicamente por las reivindicaciones. Las definiciones de términos comunes en inmunología y biología molecular se pueden encontrar en The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 19 Edición, publicado por Merck Sharp & Dohme Corp., 2011 (ISBN 978-0-911910-19-3); Robert S. Porter et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Cell Biology and Molecular Medicine, publicado por Blackwell Science Ltd., 1999-2012 (ISBN 9783527600908); y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8); Immunology by Werner Luttmann, publicado por Elsevier, 2006; Janeway's Immunobiology, Kenneth Murphy, Allan Mowat, Casey Weaver (eds.), Taylor & Francis Limited, 2014 (ISBN 0815345305, 9780815345305); Lewin's Genes XI, publicado por Jones & Bartlett Publishers, 2014 (ISBN-1449659055); Michael Richard Green and Joseph Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2012) (ISBN 1936113414); Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (2012) (ISBN 044460149X); Laboratory Methods in Enzymology: DNA, Jon Lorsch (ed.) Elsevier, 2013 (ISBN 0124199542); Current Protocols in Molecular Biology (CPMB), Frederick M. Ausubel (ed.), John Wiley and Sons, 2014 (ISBN 047150338X, 9780471503385), Current Protocols in Protein Science (CPp S), John E. Coligan (ed.), John Wiley and Sons, Inc., 2005; y Current Protocols in Immunology (CPI) (John E. Coligan, ADA M Kruisbeek, David H Margulies, Ethan M Shevach, Warren Strobe, (eds.) John Wiley and Sons, Inc., 2003 (ISBN 0471142735, 9780471142737).
[0135] Otros términos se definen en el presente documento dentro de la descripción de los diversos aspectos de la presente invención.
[0136] Todas las patentes y otras publicaciones, incluidas las referencias bibliográficas, las patentes concedidas, las solicitudes de patente publicadas y las solicitudes de patente en tramitación, citadas en esta solicitud se incluyen con el fin de describir y divulgar, por ejemplo, las metodologías descritas en dichas publicaciones que podrían utilizarse en relación con la tecnología descrita en este documento. Estas publicaciones se proporcionan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada de lo expuesto en este sentido debe interpretarse como una admisión de que los inventores no tienen derecho a anteceder dicha divulgación en virtud de una invención anterior o por cualquier otro motivo. Todas las declaraciones en cuanto a la fecha o la representación en cuanto al contenido de estos documentos se basan en la información disponible para los solicitantes y no constituyen ninguna admisión en cuanto a la exactitud de las fechas o el contenido de estos documentos.
[0137] Los elementos específicos de cualquiera de las realizaciones anteriores se pueden combinar o sustituir por elementos de otras realizaciones. Además, si bien las ventajas asociadas con ciertas realizaciones de la divulgación se han descrito en el contexto de estas realizaciones, otras realizaciones también pueden exhibir dichas ventajas, y no todas las realizaciones necesitan exhibir necesariamente dichas ventajas para estar dentro del alcance de la divulgación.
[0138] La tecnología descrita en este documento se ilustra además con los siguientes ejemplos, que de ninguna manera deben interpretarse como limitantes.
[0139] A continuación se describen realizaciones adicionales de la presente invención.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende: aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones, comprende aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones es una emulsión de aceite en agua.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende además alfa-tocoferol.
En algunas realizaciones, el alfa-tocoferol está presente en un nivel de al menos 100 mg por litro de la composición de emulsión.
En algunas realizaciones, el alfa-tocoferol está presente en un nivel de al menos 120 mg por litro de la composición de emulsión.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 2:1.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 10:1.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones no comprende formas de vitamina E distintas del alfa-tocoferol.
En algunas realizaciones, los fitoesteroles están presentes en la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones.
En algunas realizaciones, los fitoesteroles están presentes en la composición de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones en una concentración de menos de 50 mg por litro de la composición de emulsión. En algunas realizaciones, el ácido araquidónico está presente en la composición de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones en una concentración de al menos 900 mg/L.
En algunas realizaciones, el ácido docosahexaenoico está presente en la composición de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones en una concentración de al menos 13,4 gramos/L.
En algunas realizaciones, el ácido eicosapentaenoico está presente en la composición de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones en una concentración de al menos 11,6 gramos/L.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende una mezcla de una emulsión de un aceite de pescado y/o aceite de ácido graso omega-3 y una emulsión de MCT.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende una emulsión de una mezcla de un aceite de pescado y/o aceite de ácido graso omega-3 y un MCT.
En algunas realizaciones, el aceite de pescado y/o el aceite de ácido graso omega-3 no han sido destilados ni reesterificados.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones está formulada para administración parenteral o intravenosa.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones, comprende además un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos. En algunas realizaciones, el aditivo comprende uno o más ácidos grasos que son terapéuticos para una enfermedad. En algunas realizaciones, la composición de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones comprende una mezcla de a) una emulsión del aditivo y b) una o más emulsiones de i) el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 y ii) el MCT.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones, comprende además uno o más de fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones, comprende además fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición de emulsión tal como se define en las reivindicaciones, para su uso en el suministro de nutrición parenteral a un sujeto que la necesita.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para administración mediante administración parenteral. En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para administración mediante administración parenteral total. En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un sujeto que necesita nutrición parenteral total. En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe nutrición oral. En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras formulaciones parenterales.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe una nutrición oral suficiente para mantener un equilibrio nutricional.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras formulaciones parenterales que sean suficientes para mantener un equilibrio nutricional.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras fuentes nutricionales de ácidos grasos.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras fuentes nutricionales parenterales de ácidos grasos.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras fuentes nutricionales de ácidos grasos esenciales.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que no recibe otras fuentes nutricionales parenterales de ácidos grasos esenciales.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión se administra como monoterapia.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión se administra como monoterapia para necesidades nutricionales.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso en un paciente que necesita tratamiento para una afección seleccionada del grupo que consiste en:
esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado, aceite de ácido graso predominantemente omega-3 y/o ácidos grasos omega-3.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 0,5 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 5 g de ácidos grasos/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 1 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 3 g de ácidos grasos/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 0,5 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 5 g de ácidos grasos/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 1 g de ácidos grasos/kg/día a aproximadamente 3 g de ácidos grasos/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 2 g de ácidos grasos/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 0,5 g de aceite de pescado/kg/día a aproximadamente 5 g de aceite de pescado/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 1 g de aceite de pescado/kg/día a aproximadamente 3 g de aceite de pescado/kg/día.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión es para uso mediante administración en una dosis de aproximadamente 2 g de aceite de pescado/kg/día.
En algunas realizaciones, proporcionar nutrición parenteral a un sujeto, tal como se define en las reivindicaciones, comprende además administrar al paciente un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos.
En algunas realizaciones, la composición de emulsión para uso en la provisión de nutrición parenteral comprende además un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos.
En algunas realizaciones, el aditivo comprende uno o más ácidos grasos que son terapéuticos para una enfermedad. En algunas realizaciones, la composición de emulsión para uso en proporcionar nutrición parenteral comprende una mezcla de a) una emulsión del aditivo y b) una o más emulsiones de i) el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 y ii) el MCT. En algunas realizaciones, la mezcla se prepara en el momento o el lugar de la administración. En algunas realizaciones, la mezcla se prepara según lo indicado clínicamente.
EJEMPLOS
[0140]EJEMPLO 1 - El papel del alfa-tocoferol y los fitoesteroles en la protección mediada por aceite de pescado de la lesión hepática asociada a la nutrición parenteral.La enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD) es un riesgo de dependencia de la nutrición parenteral (NP) a largo plazo que se caracteriza por el desarrollo de inflamación hepática y colestasis. El uso de emulsiones lipídicas intravenosas a base de aceite de soja como fuentes de grasa parenteral puede exacerbar el riesgo de desarrollar PNALD, sin embargo, la grasa intravenosa para pacientes dependientes de NP no se puede eliminar debido al riesgo de deficiencia de ácidos grasos esenciales. Las emulsiones lipídicas de aceite de pescado intravenosas pueden tratar eficazmente la PNALD al tiempo que proporcionan suficientes ácidos grasos esenciales. Sin embargo, los mecanismos por los cuales el aceite de pescado protege el hígado no se comprenden completamente. Dos diferencias importantes entre el aceite de pescado y el aceite de soja son el contenido de fitoesterol y el contenido de alfa-tocoferol. Tal como se describe en este documento, se formularon emulsiones lipídicas intravenosas en el laboratorio para explorar las funciones de los fitoesteroles y el alfa-tocoferol en la modulación de la protección hepática en un modelo murino de lesión hepática asociada a la nutrición parenteral. Utilizando emulsiones lipídicas formuladas en el laboratorio, una emulsión de aceite de soja (SO) no pudo proteger de la esteatosis hepática inducida por NP en ratones, mientras que una emulsión de aceite de soja a la que se había añadido a-tocoferol (SO+AT) conservó la arquitectura hepática normal. Una emulsión de aceite de pescado (FO,fish oil)y una emulsión de aceite de pescado a la que se habían añadido fitoesteroles (FO+P) pudieron proteger de la esteatosis inducida por NP. La expresión de genes clave del metabolismo hepático de las grasas, la acetil CoA carboxilasa (ACC) y el receptor gamma activado por el proliferador de peroxisomas (PPAR<y>), aumentó en los animales a los que se les administró SO, mientras que los niveles de ACC y PPAR<y>fueron comparables a los de los controles alimentados con pienso en los animales que recibieron SO+AT, FO y FO+P. Este estudio demuestra un papel hepatoprotector del a-tocoferol en la lesión hepática inducida por NP y que los fitoesteroles no parecen comprometer los efectos hepatoprotectores del aceite de pescado.
[0141] La nutrición parenteral (NP) es la administración intravenosa de macronutrientes y micronutrientes, incluyendo carbohidratos, proteínas en forma de aminoácidos, lípidos, vitaminas y oligoelementos. La NP es un componente crítico de la terapia para pacientes con insuficiencia intestinal (IF,intestinal failure)que no pueden absorber suficientes nutrientes ingeridos por vía oral debido a una longitud intestinal inadecuada o un mal funcionamiento intestinal. Aunque la NP es un soporte vital para los pacientes con IF, existen complicaciones asociadas con la administración de nutrición por vía intravenosa. Una de estas complicaciones es el desarrollo de la enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD), que se caracteriza por una enfermedad hepática colestásica que puede progresar a cirrosis y enfermedad hepática terminal que requiere un trasplante de hígado. Tradicionalmente, la progresión de la PNALD solo podía detenerse si los pacientes podían dejar de tomar NP y lograr una autonomía enteral. Más recientemente, se ha demostrado que el uso de aceite de pescado como fuente de grasa parenteral puede prevenir la lesión hepática inducida por NP en modelos animales y revertir la colestasis y detener o ralentizar la progresión de la enfermedad hepática en pacientes con PNALD.
[0142] La grasa es un componente importante de la NP. La grasa en la NP es una fuente de calorías de alta densidad energética, así como una fuente de ácidos grasos esenciales poliinsaturados de cadena larga (EFA,essential fatty acids),que incluyen las familias de ácidos grasos omega-3 y omega-6. La administración de NP sin grasa requiere un exceso de calorías de carbohidratos para satisfacer la demanda calórica. El suministro de NP sin grasa también da como resultado el desarrollo de deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD,essential fatty acid deficiency),que puede caracterizarse por dermatitis, pérdida de cabello, retraso del desarrollo y deterioro del crecimiento. Los pacientes dependientes de NP pueden ser monitorizados bioquímicamente para EFAD a través del perfil de ácidos grasos séricos y la medición de la relación del ácido mead, un ácido graso omega-9 no esencial, que es un trieno, con respecto al ácido araquidónico, un ácido graso omega-6 esencial, que es un tetraeno. La definición bioquímica de EFAD es una relación de trieno con respecto a tetraeno mayor de 0,2.
[0143] La grasa en NP se administra como una emulsión de aceite en agua en la que el aceite se dispersa como glóbulos rodeados por una monocapa de fosfolípidos dentro de un medio acuoso. Los glóbulos deben ser lo suficientemente pequeños como para viajar en la circulación sin causar eventos embólicos. En los Estados Unidos, la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) ha establecido estándares que establecen que las emulsiones de grasa intravenosas deben tener un tamaño medio de glóbulo de menos de 500 nm de diámetro y un porcentaje de glóbulos de grasa mayor de 5 pm de diámetro (PFAT5) de no más del 0,05 %. Los tipos y proporciones de ácidos grasos administrados están determinados por la composición de los aceites utilizados para formular la emulsión. Los aceites también pueden contener componentes no triglicéridos de origen natural o aditivos que se incorporan a emulsiones formuladas con dichos aceites.
[0144] Las emulsiones de grasa a base de aceite de soja son las fuentes de grasa parenteral más utilizadas. En los Estados Unidos, las únicas fuentes de grasa parenteral aprobadas por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) contienen aceite de soja. La exposición a emulsiones de aceite de soja intravenosas (SO) puede exacerbar el riesgo de desarrollar PNALD. Se ha demostrado que las emulsiones de aceite de pescado intravenosas (FO) previenen la lesión hepática inducida por NP en modelos animales. Cuando se administra como la única fuente de grasa parenteral a pacientes que desarrollan PNALD, el FO puede revertir la colestasis y detener la progresión de la enfermedad hepática. Si bien los mecanismos de las propiedades hepatoprotectoras del FO y las propiedades hepatotóxicas del SO no se comprenden por completo, existen varias diferencias entre el aceite de pescado y el aceite de soja que pueden ser contribuyentes importantes a los efectos diferenciales del SO y el FO en el hígado.
[0145] El propósito de este estudio es probar la hipótesis de que el a-tocoferol contribuye con propiedades hepatoprotectoras y los fitoesteroles contribuyen con propiedades hepatotóxicas a las emulsiones grasas intravenosas. Para probar esta hipótesis, no es posible utilizar emulsiones grasas intravenosas disponibles comercialmente, ya que no existen SO y FO con niveles variables de fitoesteroles y a-tocoferol. Por lo tanto, las emulsiones se formularon en el laboratorio para permitir tanto el control de la cantidad de a-tocoferol y fitoesteroles en cada emulsión como la uniformidad de todos los componentes de la emulsión con variación únicamente en el tipo de aceite. El SO y el FO formulados en el laboratorio son seguros y bien tolerados en ratones. El FO y el SO fabricados en el laboratorio tienen los mismos efectos sobre el hígado que sus homólogos comerciales en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Aquí se evaluó si la adición de fitoesteroles al aceite de pescado hacía que el FO fuera hepatotóxico, y si la adición de a-tocoferol al aceite de soja hacía que el SO fuera hepatoprotector.
Procedimientos:
[0146] El aceite de pescado puede proteger contra la esteatosis hepática inducida por nutrición parenteral en un modelo murino. Se utilizó un enfoque para probar si la adición de fitoesteroles al aceite de pescado compromete las propiedades hepatoprotectoras de las emulsiones de aceite de pescado intravenosas y/o si la adición de alfa-tocoferol al aceite de soja hace que las emulsiones de aceite de soja sean más hepatoprotectoras.
[0147] En el laboratorio, se formularon emulsiones de aceite en agua al 20 % que contenían aceite de soja (SO), aceite de pescado (FO), aceite de soja al que se habían añadido 200 mg/L de alfa-tocoferol (SO+AT) o aceite de pescado al que se habían añadido 450 mg/L de fitoesteroles (85% de beta-sitosterol, 15% de estigmasterol) (FO+P). Las emulsiones se formularon utilizando homogeneización a alta presión. Todas las emulsiones finales contenían 20 % de aceite, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio. La Tabla 2 muestra los niveles de fitoesteroles y alfa-tocoferoles en las emulsiones elaboradas con estos aceites, así como en FO (OM) y SO (IL) disponibles comercialmente. Los niveles de fitoesteroles en las emulsiones formuladas con SO, SO+AT y FO+P fueron comparables. Los niveles de alfa-tocoferol en las emulsiones formuladas con FO, FO+P y SO+AT fueron comparables. El tamaño medio de los glóbulos y el análisis de PFAT5 para todas las emulsiones cumplieron con los estándares de la USP (Tabla 1).
[0148] En los ejemplos proporcionados en este documento, el aceite de pescado utilizado fue Crystal pure 28/12 TG™ (N.° de producto 30572344; BASF Pharma, Florham Park NJ) que comprende una mezcla de aproximadamente 38 % de EPA+DHA, donde 11,4 % es DHA y 26,9 % es EPA (por área). A menos que se especifique lo contrario, cada componente de las emulsiones utilizadas en cada uno de los Ejemplos descritos en este documento fue de grado farmacéutico, alimentario y/o técnico.
[0149] Se utilizaron emulsiones como fuentes de grasa en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Los ratones se sometieron a una dieta estándar con pienso o a una dieta líquida oral que consistía en NP sin grasa, equivalente a la que reciben los pacientes. A los ratones alimentados con NP se les administró solución salina (sin fuente de grasa) o una de las emulsiones formuladas (2,4 g/kg/día por vía intravenosa mediante inyección en la vena de la cola). Después de 19 días con sus respectivas dietas, los ratones fueron sacrificados. Se obtuvieron hígados para histología (hematoxilina y eosina y oil red O), análisis de expresión génica mediante RT-PCR y análisis de expresión proteica mediante transferencia Western. También se obtuvieron riñones derechos y bazos para histología.
Formulación de emulsión lipídica
[0150] Materiales para emulsiones: Se utilizaron agua estéril para inyección (SWFI, Hospira, Lake Forest, IL), fosfolípido de huevo (Lipoid LLC, Newark, NJ), oleato de sodio (Lipoid LLC, Newark NJ) y glicerina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) para formular la dispersión. Los aceites utilizados fueron aceite de soja de grado USP (Spectrum Chemicals, New Brunswick, NJ) y aceite de pescado CrystalPure EPA 28/12 TG (BASF Ludwigshafen, Alemania). Los aditivos utilizados fueron a-tocoferol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), beta-sitosterol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y estigmasterol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Las emulsiones comerciales utilizadas para los análisis incluyeron Omegaven (Fresenius Kabi, Bad Homburg, Alemania) e Intralipid (Fresenius Kabi, Uppsala, Suecia).
[0151] Preparación de aceite FO+P: El aceite de pescado CrystalPure EPA 28/12 TG se calentó para mantener la temperatura entre 50 y 60 °C en condiciones de agitación constante. Se añadieron fitoesteroles (85 % beta-sitosterol, 15 % estigmasterol) hasta una concentración final de 2,25 mg de fitoesteroles por gramo de aceite y se agitó hasta que se disolvieron. Cuando se utilizó para formular una emulsión al 20 %, la concentración de fitoesteroles calculada es de 450 mg de fitoesteroles por litro de emulsión.
[0152] Preparación de aceite SO+AT: Se calentó el aceite de soja para mantener la temperatura entre 50 y 60 °C en condiciones de agitación constante. Se añadió alfa-tocoferol a una concentración final de 1 mg de a-tocoferol por gramo de aceite y se agitó durante 10 a 15 minutos. Cuando se utilizó para formular una emulsión al 20 %, el contenido calculado de a-tocoferol es de 200 mg de a-tocoferol por litro de emulsión.
[0153] Formulación de emulsión: La emulsión se formuló mediante homogeneización a alta presión como se describió anteriormente (Fell et al. JPEN 2017 41:181-187). Todos los pasos se realizaron a 40-45 °C a menos que se especifique lo contrario. Todos los pasos se realizaron bajo una atmósfera de nitrógeno.
[0154] En primer lugar, se formuló una dispersión añadiendo fosfolípido de huevo congelado a SWFI calentado a 75 90 °C en condiciones de mezclado a alta velocidad y dejando que la mezcla se equilibrara a 40-45 °C. Se añadió oleato de sodio y se continuó mezclando a alta cizallamiento (4000-4100 RPM) durante 40 minutos, después de lo cual se añadió glicerina. La dispersión en bruto se homogeneizó (Homogeneizador Panda Plus™, GEA Niro Saovi, Columbia, MD) a 9000 psi durante 20 ciclos. La dispersión se filtró a través de una membrana de 0,45 um y el pH se ajustó a 10,4 con hidróxido de sodio 0,5 N. La dispersión final estaba compuesta por 12 % de fosfolípido de huevo, 25% de glicerina y 0,3% de oleato de sodio. Un lote de dispersión fue suficiente para la formulación de cinco emulsiones de 1 litro.
[0155] Las emulsiones se formularon añadiendo aceite a un volumen apropiado de dispersión en condiciones de mezclado a alto cizallamiento (3800-4200 RPM, ajustado para evitar la formación de espuma), con mezcla continua durante 40-45 minutos y llevada lentamente a un volumen final de 500 ml con SWFI, manteniendo la temperatura a 40-45 °C. La emulsión en bruto se homogeneizó a 5000 psi durante al menos 9 ciclos. La emulsión final se ajustó al pH a 9-9,5 utilizando hidróxido de sodio 0,1 N, se envasó en viales de suero de 20 ml con espacios de cabeza inundados con gas nitrógeno y las emulsiones envasadas se esterilizaron en autoclave. La composición final de la emulsión fue 20 % de aceite, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio.
[0156] Todas las emulsiones se sometieron a pruebas de tamaño medio de glóbulo y PFAT5 (Micro Measurements, Deerfield, IL) de acuerdo con las normas USP <401>.
[0157] Determinación de los niveles de fitoesterol y alfa-tocoferol en emulsiones: Para determinar los niveles de fitoesterol, las muestras se saponificaron con KOH etanólico de 2 mol/L y los esteroles se extrajeron con n-heptano. Los extractos se evaporaron y se separaron en una columna de cromatografía de gases capilar. La detección se realizó con un detector de ionización de llama. La cuantificación se realizó utilizando epicoprostanol como control interno. Los niveles de alfa-tocoferol se determinaron tal como se ha descrito (Xu et al. Eur. J. Lipid Sci Technol. 2015 117:15-22), sin embargo, en lugar de utilizar una calibración interna, se utilizó una calibración externa.
[0158] Modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Boston Children's Hospital. Se administró a ratones C57BL/6 de seis semanas de edad (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) una dieta estándar de pienso o una dieta líquida compuesta por la NP administrada a pacientes en el Boston Children's Hospital (20 % de dextrosa, 2 % de aminoácidos, 30 mEq/L de sodio, 20 mEq/L de potasio, 15 mEq/L de calcio, 10 mEq/L de magnesio, 10 mMol/L de fosfato, 36,67 mEq/L de cloruro, 19,4 mEq/L de acetato, multivitaminas pediátricas, elementos traza pediátricos). A los ratones alimentados con NP se les administró solución salina intravenosa (IV), FO IV, FO IV P, SO IV o SO AT IV (2,4 g/kg/día mediante inyección en la vena de la cola). Después de 19 días, los animales fueron sacrificados por asfixia con dióxido de carbono. Se extrajo sangre para la recolección de suero. Se obtuvieron hígados, bazos y el riñón derecho para su posterior análisis. Este experimento se realizó dos veces con diferentes lotes de emulsiones para cada experimento. En el primer experimento, se utilizaron 5 ratones por grupo de tratamiento y en el segundo experimento se utilizaron 10 ratones por grupo de tratamiento.
[0159] Procesamiento de órganos e histología. Los bazos, los riñones y una porción de cada hígado se colocaron en formalina al 10 % y se almacenaron a 4 °C durante 24 horas, a continuación se transfirieron a etanol al 70 %. Las muestras se incluyeron en parafina y se seccionaron para la tinción con hematoxilina y eosina (H&E) para evaluar la arquitectura hepática. Una segunda porción de cada hígado se colocó en medio de temperatura de corte óptima (OCT) (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) y se congeló en nitrógeno líquido. Las muestras se sometieron a seccionamiento por congelación y tinción con oil red O para evaluar la acumulación de grasa hepática. La visualización se realizó con un microscopio Zeiss Axiophot™ (Oberkochen, Alemania). Los portaobjetos fueron analizados por un patólogo certificado que desconocía los grupos de tratamiento. Una tercera porción de cada hígado se congeló rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80 °C para el análisis de expresión de genes y proteínas.
[0160] Perfil de ácidos grasos séricos. La extracción de ácidos grasos séricos se realizó como se describió anteriormente (Meisel et al. J Pediatr Surg 2011 46:666-673). De forma resumida, las muestras de suero (30 pL por muestra) con ácido tricosanoico agregado como patrón interno se sometieron a extracción con cloroformo y metanol en una proporción de 2:1 para aislar la fracción lipídica. Las muestras se saponificaron con hidróxido de sodio metanólico 0,5 N. Las muestras se incubaron en BF3 al 14 %/metanol durante 30 minutos a 100 °C. Los pasos se realizaron bajo una atmósfera de gas nitrógeno para minimizar la oxidación. El análisis se realizó con cromatografía de gas líquido (Hewlett Packard 6890™) y la detección con un detector de ionización de llama. Se utilizó un patrón externo de éster metílico de ácido graso (NuCheck Prep™, Elysian, MN) para identificar los picos de ácidos grasos de la muestra.
[0161] Análisis de expresión génica. Los hígados se cortaron a 25 mg por muestra y se extrajo el ARN utilizando el kit de ADN/ARN/proteína Qiagen AllPrep™ (Gaithersburg, MD) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para cada reacción se utilizaron cebadores Taqman (Invitrogen, Carlsbad, CA) y reactivos (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante con 200 ng de ARN. Se utilizó un protocolo de RT-PCR ciclado de 2 pasos en un ciclador ABI One Step Plus™. Un paso de transcripción inversa inicial de 30 minutos a 50 °C y 10 minutos a 95 °C fue seguido por un paso de amplificación que consistió en 15 segundos a 95 °C y 1 minuto a 60 °C ciclado 40 veces. La expresión del gen diana se normalizó al gen de GAPDH y se comparó con el grupo de control alimentado con pienso utilizando el procedimiento 2-AACt.
[0162] Análisis de proteínas. Los hígados se cortaron a 25 mg por muestra y se homogeneizaron en un tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) con inhibidor de proteasa e inhibidor de fosfatasa utilizando perlas de acero inoxidable en un Bullet Blender™. Las concentraciones de proteína se determinaron utilizando un ensayo Bradford (Bio-Rad, Hercules, CA). Se separaron diez miligramos de proteína por muestra utilizando un gel de poliacrilamida Bis Tris al 4-12 % (Invitrogen, Carlsbad, CA) antes de transferirlos a una membrana de nitrocelulosa. Las membranas se bloquearon en leche descremada al 5 % durante 1 hora. Las membranas se incubaron en anticuerpo primario durante la noche y en anticuerpo secundario durante 1 hora. Los anticuerpos de ACC y PPARy eran de Cell Signaling Technologies (Danvers, MA). El anticuerpo de beta-actina era de Santa Cruz Biotechnologies (Paso Robles, CA).
Resultados:
[0163] Todas las emulsiones cumplieron con los criterios de la USP para el tamaño medio de los glóbulos y el PFAT5 (Tabla 1). FO, FO y SO+AT tenían niveles similares de alfa-tocoferol, mientras que SO contenía poco alfa-tocoferol, similar a la emulsión de SO comercial (IL) (Tabla 2). En el análisis de los niveles de fitoesteroles, SO, SO+AT y FO+P contenían cantidades similares de fitoesteroles, mientras que FO y la emulsión de aceite de pescado comercial OM contienen muy pocos fitoesteroles (Tabla 2).
[0164] No se observaron efectos clínicos adversos con la administración de ninguna de las emulsiones utilizadas, y los animales toleraron bien todas las emulsiones. No hubo diferencias en los parámetros de crecimiento entre los grupos de tratamiento, ni tampoco hubo diferencias en la evaluación macroscópica de los órganos entre los grupos (Figuras 1A-1B).
[0165] Las emulsiones intravenosas inestables pueden producir organomegalia, en particular agrandamiento del bazo y del hígado debido a la deposición de glóbulos grasos. No hubo evidencia de organomegalia en ninguno de los grupos de tratamiento. Las masas de hígado (Figura 1B), el bazo (Fig. 1C) y el riñón (Fig. 1D) fueron similares en todos los grupos de tratamiento.
[0166] Se realizaron perfiles de ácidos grasos séricos para confirmar que cada emulsión era capaz de prevenir la EFAD y proporcionaba el complemento esperado de EFA para el aceite utilizado en la emulsión. SO es abundante en ácidos grasos omega-6 y contiene pocos ácidos grasos omega-3, mientras que FO es más abundante en ácidos grasos omega-3 y contiene una escasez de ácidos grasos omega-6. Estos equilibrios de EFA deberían reflejarse en el suero de los animales en cada grupo de tratamiento respectivo. Todas las emulsiones previnieron la deficiencia bioquímica de ácidos grasos esenciales (Figura 2A). Las emulsiones de FO y FO+P dieron como resultado niveles séricos más bajos del ácido graso omega-6 ácido araquidónico y niveles séricos más altos de los ácidos grasos omega-3 ácido eicosapentanoico (EPA) y ácido docosahexaenoico (DHA) en comparación con las emulsiones de SO y SO+AT (Figura 2C).
[0167] El análisis de ácidos grasos séricos demuestra que solo los ratones que recibieron NP sin fuente de grasa desarrollaron deficiencia de ácidos grasos esenciales, definida como una relación trieno con respecto tetraeno mayor a 0,2 (Figura 2A). El equilibrio de ácidos grasos esenciales reflejó la fuente de grasa que recibió cada grupo. Los ratones que recibieron SO y SO+AT tuvieron niveles más altos de ácidos grasos omega-6 séricos que los grupos FO y FO+P (Figura 2B) y los ratones que recibieron FO y FO+P tenían niveles más altos de ácidos grasos omega-3 que los que recibieron SO y SO+AT.
[0168] Para evaluar el efecto de cada emulsión en el desarrollo de la esteatosis inducida por NP, se realizó un análisis histológico hepático. El SO no previno la esteatosis inducida por NP (Figura 3A). Sin embargo, la adición de a-tocoferol al SO (SO+<a>T) resultó en la conservación de la arquitectura hepática normal en animales alimentados con NP (Figura 3A). FO y FO+P también conservaron la arquitectura hepática normal (Figura 3A) lo que indica que la adición de fitoesteroles al FO no compromete la capacidad del FO para proteger al hígado de la esteatosis inducida por NP. En el análisis de Oil Red O para evaluar la acumulación de grasa hepática, SO+AT dio lugar a una disminución de la acumulación de grasa hepática en comparación con SO (Figura 3B), lo que indica que el a-tocoferol confiere propiedades hepatoprotectoras al SO. Tanto el FO como el FO+P tuvieron una acumulación mínima de grasa hepática, lo que nuevamente sugiere que la adición de fitoesteroles al FO no compromete las propiedades hepatoprotectoras del FO (Figura 3B). Histológicamente, el grupo alimentado con NP que recibió solución salina desarrolló esteatosis hepática, como se ha demostrado previamente. La emulsión de SO no pudo proteger al hígado de la esteatosis inducida por N P. FO, FO+P y SO+AT pudieron prevenir la esteatosis hepática inducida por NP (Figuras 3A-3B).
[0169] Como la dieta NP produce esteatosis hepática y acumulación de grasa hepática, se planteó la hipótesis de que estos cambios histológicos pueden estar asociados con la expresión alterada de los genes de manipulación de la grasa hepática y que el aceite de pescado puede conservar la expresión normal de dichos genes. En el análisis de la expresión génica, el receptor activado por el proliferador de peroxisomas gamma (PPARg), que es un regulador transcripcional de la manipulación de la grasa hepática; y la acetil CoA carboxilasa 2 (ACC) que cataliza el paso limitante de la velocidad de la lipogénesisde novoaumentaron con la dieta NP sin grasa y los ratones alimentados con NP que recibieron SO, pero se normalizaron a niveles cercanos a los de los controles alimentados con pienso en los ratones que recibieron FO, FO+P y SO+AT (Figura 4). Este patrón también se observó a nivel de expresión de proteínas (Figuras 5A-5B). Esto indica que la adición de a-tocoferol puede impartir propiedades hepatoprotectoras al SO. Tanto FO como FO+P dieron como resultado una normalización de la expresión del gen (Figura 4) y la proteína (Figura 5) de ACC2 y PPARy, lo que indica que a nivel molecular, la adición de fitoesteroles no compromete las propiedades hepatoprotectoras del FO.
[0170] Este modelo murino demuestra histológicamente esteatosis en respuesta a la dieta PN+SO. Sin embargo, el correlato clínico, la enfermedad hepática asociada a NP, se caracteriza por colestasis. Por lo tanto, se plantea la hipótesis de que la grasa intravenosa que contiene fitoesterol puede causar alteraciones en la expresión de genes que regulan la síntesis y el transporte de bilis. En este documento se demuestra que:
a.La adición de fitoesteroles no compromete las propiedades hepatoprotectoras del aceite de pescado en este modelo de ratón de lesión hepática inducida por NP.
b.La adición de alfa-tocoferol confiere propiedades hepatoprotectoras al aceite de soja, tanto histológicamente como a nivel molecular, lo que sugiere que el alfa-tocoferol contribuye a las propiedades hepatoprotectoras del aceite de pescado.
c.Se han identificado marcadores moleculares (PPARg y ACC) que caracterizan una emulsión lipídica más hepatoprotectora y distinguen dichas emulsiones de las emulsiones lipídicas más hepatotóxicas.
[0171] SHP (Small heterodimer partner) actúa con FXR para regular el transporte de ácidos biliares y su expresión está regulado por incremento en presencia de fitoesteroles, mientras que la presencia de alfa-tocoferol tiende a normalizarse. El propio FXR se regula por disminución de forma interesante en su expresión en presencia de fitoesteroles. MRP3 (también MRP2 y BSEp ) es una diana de la expresión génica mediada por FXR. m RP3 se regula por disminución por SO, AT no puede normalizar los niveles de MRP3, pero los fitoesteroles no parecen estar modulando esta disminución en la expresión ya que la administración de FO+P no disminuye la expresión de MRP3. Cyp7a1 disminuye típicamente en el contexto de la colestasis. Los regímenes de tratamiento descritos en este documento disminuyen en todos los ratones que reciben NP independientemente de la fuente de grasa. Los que recibieron NP+SO o NP+FOP presentan disminuciones más drásticas de la expresión en comparación con los otros grupos, y parece que el alfa-tocoferol es capaz de normalizar parcialmente la expresión en los animales que recibieron SO+AT. Pero no parece que los fitoesteroles añadidos a FO (FO+P en comparación con FO) afecten negativamente la expresión de Cyp7a1. (Algunos datos no se muestran)
[0172] En este estudio, una emulsión lipídica intravenosa formulada en el laboratorio utilizando aceite de soja al que se había añadido a-tocoferol fue capaz de conservar la arquitectura hepática normal y la expresión normal de 2 genes importantes de manipulación de la grasa hepática en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Una emulsión lipídica intravenosa formulada en el laboratorio utilizando aceite de soja que no contenía a-tocoferol añadido no fue capaz de proteger de la esteatosis hepática inducida por NP y de la desregulación de la manipulación de la grasa hepática. En este caso, se añadió a-tocoferol al aceite de soja antes de formular las emulsiones.
[0173] Este estudio también identificó a PPARy y ACC2 como genes que están desregulados por la dieta NP, normalizados por FO y SO que contiene a-tocoferol, pero no por SO solo. PPARy es un regulador transcripcional del metabolismo sistémico y hepático de las grasas, así como de la inflamación. Curiosamente, este estudio no encontró un efecto hepatotóxico de añadir fitoesteroles al aceite de pescado en la lesión hepática inducida por NP. Una posible conclusión es que los fitoesteroles en el aceite de soja no son responsables de los efectos hepatotóxicos asociados al aceite de soja en el modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Una explicación alternativa es que los fitoesteroles tienen propiedades hepatotóxicas pero no pueden superar las propiedades hepatoprotectoras del aceite de pescado. Los ácidos grasos omega-3 abundantes en el aceite de pescado son precursores de mediadores lipídicos antiinflamatorios, y el aceite de pescado también es abundante en a-tocoferol. Estas propiedades pueden ofrecer una hepatoprotección que no puede ser superada por la presencia de fitoesteroles. Una tercera explicación posible es que se requieren fitoesteroles específicos en concentraciones específicas, o que se requiere un cierto equilibrio de fitoesteroles para que se produzcan las propiedades hepatotóxicas asociadas a los fitoesteroles. En este estudio, la composición de los fitoesteroles añadidos al aceite de pescado se aproximó a los tipos y cantidades de fitoesteroles que se encuentran en el aceite de soja.
[0174] Todas las emulsiones formuladas en este estudio protegieron del desarrollo de EFAD. Tradicionalmente, los ácidos linoleico (LA) y alfa-linolénico (ALA), los ácidos grasos omega-6 y omega-3 originales respectivamente, se han considerado los EFA. Curiosamente, este estudio descubrió que el ARA, EPA y DHA séricos reflejaban el equilibrio de EFA proporcionados por la emulsión administrada en lugar de los niveles séricos de LA y ALA.
[0175] La capacidad del a-tocoferol para hacer que el SO sea menos hepatotóxico en un modelo de lesión hepática inducida por NP indica que el a-tocoferol puede ser útil en el tratamiento clínico de la PNALD y otras patologías hepáticas similares.
Tabla 1: USP <729> Análisis de emulsiones
Tabla 2: Contenido de fitoesteroles alfa-tocoferol en las emulsiones
EJEMPLO 2 - Formulación de emulsiones lipídicas con beneficio antiinflamatorio para pacientes dependientes de NP
[0176] Los pacientes dependientes de NP a largo y corto plazo pueden ser vulnerables a agresiones inflamatorias. Para los pacientes dependientes de NP a largo plazo, los estados de enfermedad crónica y un catéter venoso central permanente a largo plazo para la administración de NP pueden precipitar un estado proinflamatorio. Los pacientes dependientes de NP a corto plazo también están sujetos a desafíos proinflamatorios e incluyen pacientes con traumatismos, pacientes posoperatorios y pacientes con enfermedades agudas que requieren una unidad de cuidados intensivos.
[0177] Las emulsiones lipídicas parenterales pueden modular la respuesta inflamatoria y afectar el estado inflamatorio de los pacientes dependientes de PN. Las emulsiones lipídicas a base de aceite de soja son ricas en ácidos grasos omega-6 proinflamatorios, mientras que las emulsiones lipídicas de aceite de pescado contienen una abundancia de los ácidos grasos omega-3 más antiinflamatorios. Las emulsiones lipídicas de aceite de pescado se han utilizado para tratar la enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD) en pacientes, caracterizada por inflamación hepática y colestasis. Sin embargo, en estudios del efecto de las fuentes de grasa oral sobre la respuesta inflamatoria, se ha demostrado que el aceite de pescado como única fuente de grasa no proporcionó un mayor beneficio antiinflamatorio que el aceite de soja. En cambio, las mezclas de aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) proporcionaron un mayor beneficio antiinflamatorio a medida que disminuía la relación de aceite de pescado a MCT.
[0178] Si bien el alfa-tocoferol es un componente importante del aceite de pescado para prevenir la degradación oxidativa de los ácidos grasos, aún se desconoce si el alfa-tocoferol puede desempeñar un papel en la atenuación de la respuesta inflamatoria para los pacientes dependientes de NP. Como hay muchas poblaciones de pacientes dependientes de NP que se beneficiarían de la atenuación de la respuesta inflamatoria, el objetivo de este estudio fue desarrollar emulsiones lipídicas intravenosas que ofrezcan beneficios antiinflamatorios para la población dependiente de NP y que al mismo tiempo proporcionen cantidades adecuadas de ácidos grasos esenciales.
[0179] Se comprobó si:
a.Las composiciones de emulsión mixta de aceite de pescado y MCT proporcionan un mayor beneficio antiinflamatorio que el aceite de pescado solo en respuesta a una estimulación con lipopolisacáridos en un modelo murino.
b.Las composiciones de emulsión que contienen aceite de pescado con alfa-tocoferol adicional proporcionan un mayor beneficio antiinflamatorio que el aceite de pescado solo.
Procedimientos
[0180] Composiciones de emulsión de aceite en agua al 20 % de aceite de soja (SO), aceite de pescado (FO) o MCT. Se probaron SO, FO y proporciones variables de FO:MCT como fuentes de grasa en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP, y se probaron sus efectos sobre los marcadores inflamatorios Factor de necrosis tumoral alfa (TNFa) e interleucina-6 (IL-6) después de una prueba de estimulación con lipopolisacárido (LPS). La prueba de LPS se realizó tal como se describe en Ling PR, Malkan A, Le HD, Puder M, Bistrian BR. Arachidonic acid and docosahexaenoic acid supplemented to an essential fatty acid-deficient diet alters the response to endotoxin in rats. Metabolism. 2012 Mar;61(3):395-406.
[0181] El MCT utilizado fue MCT OIL™ obtenido de Nestle Health Science (Bridgewater, NJ; Código HCPCS B4155) que es una emulsión de aceite que comprende triglicéridos de cadena media obtenidos a partir de aceite de coco y/o de palmiste. Los ácidos grasos son <1 % más cortos que C8, 54 % C8 (octanoico), 41 % C10 (decanoico) y menos de 5 % más largos que C10.
[0182] Se formularon composiciones de emulsión que contenían 20 % de SO, 20 % de FO o 20 % de MCT utilizando homogeneización a alta presión. Todas las emulsiones contenían 20 % de aceite, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio.
[0183] A los ratones se les administró pienso estándar o una dieta líquida oral que consistía en la dieta sin grasa que reciben los pacientes con NP. A los ratones alimentados con NP se les administró solución salina (sin grasa) o una de las siguientes composiciones de emulsión de grasa (2,4 g/kg/día, por vía intravenosa mediante inyección en la vena de la cola: SO, FO, 70 % FO: 30 % MCT (70:30), 50 % FO: 50 % MCT (50:50), 30 % FO: 70 % MCT (70:30). Después de 19 días de tratamiento, a los animales se les administró solución salina o LPS (150 pg/kg por vía intraperitoneal). Cuatro horas después de la inyección intraperitoneal, los animales fueron sacrificados. Se recogió suero para análisis de ácidos grasos y medición de TNFa e IL-6 mediante ELISA. Se obtuvieron hígados, bazos y riñones derechos para análisis histológico.
[0184] Se formularon composiciones de emulsión de aceite en agua al 20% apartir de composiciones de aceite puro al 100% de SO, FO, FO al que se había añadido 500 mg/L de alfa-tocoferol (FOE) o MCT. A continuación, se prepararon mezclas de lo anterior en diferentes proporciones utilizando un volumen, por ejemplo, 100 ml de una mezcla 50:50 de MCT:FO como se describe en el presente documento, se prepara combinando 50 ml de una emulsión de MCT al 20 % y 50 ml de una emulsión de FO al 20 %. Por lo tanto, las composiciones de emulsión utilizadas en los ejemplos del presente documento son siempre una composición de grasa total del 20 % medida en peso/volumen.
[0185] Se probaron SO, FO, FOE y mezclas 50 %:50 % de FO:MCT y FOE:MCT como fuentes de grasa en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP y se probaron sus efectos sobre los marcadores inflamatorios TNFa e IL-6 después de una estimulación con LPS.
[0186] Se formularon emulsiones que contenían 20 % de SO, 20 % de FO, 20 % de FOE o 20 % de MCT utilizando homogeneización a alta presión. Todas las emulsiones contenían 20 % de aceite, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio. El resto de las composiciones de emulsión comprendían agua.
[0187] A los ratones se les administró pienso estándar o una dieta líquida oral que consistía en la dieta sin grasa que reciben los pacientes con NP. A los ratones alimentados con NP se les administró solución salina (sin grasa), o una de las siguientes composiciones de emulsión de grasa (2,4 g/kg/día, por vía intravenosa mediante inyección en la vena de la cola: SO, FO, FOE, 50 %FO:50 %MCT (FO/MCT), o 50 %FOE:50 %MCT (FOE/MCT). Después de 19 días de tratamiento, a los animales se les administró LPS (150 pg/kg por vía intraperitoneal). Cuatro horas después de la inyección intraperitoneal, los animales fueron sacrificados. Se recogió suero para análisis de ácidos grasos y medición de TNFa e IL-6 por ELISA. Se obtuvieron hígados, bazos y riñones derechos para análisis histológico.
Resultados:
[0188] Todas las emulsiones cumplieron con los criterios de la Farmacopea de los Estados Unidos para el tamaño medio de los glóbulos y el porcentaje de partículas mayores de 0,5 pm de diámetro (PFAT5) (Tabla 3).
[0189] Histológicamente, mientras que los ratones alimentados con NP sin una fuente de grasa y los ratones alimentados con NP con SO como fuente de grasa desarrollaron esteatosis hepática (Figura 6A) y la acumulación de grasa hepática en el oil red O (Figura 6B), los ratones alimentados con NP tratados con FO o cualquier proporción de FO:MCT tuvieron una arquitectura hepática mejorada (Figura 6A) y mínima acumulación de grasa hepática (Figura 6B). Mientras que FO, 70:30 y 50:50 demostraron una arquitectura hepática completamente normal, 30:70 mostró trazas de esteatosis (Figura 6B).
[0190] Como el MCT no contiene ácidos grasos esenciales, se probó si las mezclas de FO:MCT contenían concentraciones suficientes de ácidos grasos esenciales para prevenir la deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD). SO, FO y todas las mezclas de FO:MCT pudieron prevenir el desarrollo de EFAD bioquímica (Figura 7).
[0191] En la evaluación del TNFa y la IL-6 séricos, los ratones inyectados con solución salina antes de la eutanasia no demostraron elevaciones significativas en ninguno de estos marcadores (Figura 8A y 8B, gráficos de la izquierda). Entre los ratones inyectados con LPS, los niveles de IL-6 y TNFa después de la inyección de LPS disminuyeron con la disminución de la relación FO:MCT (Figura 8A y 8B, gráficos de la derecha). Tanto 50:50 como 30:70 demostraron niveles significativamente más bajos de IL-6 que FO, y 30:70 también tuvo niveles significativamente más bajos de TNFa en comparación con FO.
[0192] Todas las emulsiones cumplieron con los criterios de la Farmacopea de los Estados Unidos para el tamaño medio de los glóbulos y el PFAT5 (Tabla 4). En base a los resultados anteriores, se decidió utilizar la proporción 50 %FO:50 %MCT en este experimento para composiciones de emulsión mixta de FO o FOE y MCT. El grupo 50:50 proporcionó el equilibrio más favorable de arquitectura hepática normal y beneficio antiinflamatorio en los resultados anteriores.
[0193] En vista de los resultados anteriores, se probaron proporciones adicionales de FO:MCT, incluyendo 40:60 y 60:40. Por encima del 30 % de aceite de pescado, se mejoró la arquitectura hepática, con mejoras adicionales detectables a medida que mejoraba el porcentaje de aceite de pescado, hasta el 50 %. La inclusión de 30 % o más de MCT proporcionó mejoras en el perfil antiinflamatorio, medido como se describió anteriormente. En consecuencia, se contempla en el presente documento que las composiciones de FO y MCT con más del 30 % y menos del 70 % de aceite de pescado (y en consecuencia, menos del 70 % y más del 30 % de MCT) proporcionan una combinación sorprendentemente ventajosa de efectos sobre la arquitectura hepática y la actividad antiinflamatoria.
[0194] En el análisis histológico, los animales alimentados con NP sin grasa y con NP a los que se les administró SO desarrollaron hepatoesteatosis (Figura 9A) y acumulación de grasa hepática en la tinción con oil red O (Figura 9B). Los grupos FO, FOE, FO/MCT y FOE/MCT conservaron una arquitectura hepática normal similar a los controles alimentados con pienso (Figura 9A) y no tenían acumulación significativa de grasa hepática (Figura 9B).
[0195] En la evaluación del TNFa y la IL-6 sérica después de una prueba de estimulación con LPS, FOE, FO/MCT y FOE/MCT tuvieron niveles significativamente más bajos de ambos marcadores en comparación con FO. No hubo una diferencia significativa en los niveles de ninguno de estos marcadores entre los grupos FOE, FO/MCT y FOE/MCT (Figura 10A-10B).
[0196] Se demuestra en el presente documento que:
a.Las composiciones de emulsión mixta de FO y MCT proporcionan un beneficio antiinflamatorio en respuesta a un estímulo inflamatorio en comparación con FO solo. La mezcla 50:50 de FO y MCT dio como resultado el mejor equilibrio entre la protección hepática conservada y la atenuación de la respuesta inflamatoria.
b.El alfa-tocoferol añadido al FO produce un beneficio antiinflamatorio mejorado en respuesta a un estímulo inflamatorio en comparación con el FO solo.
T l 4: P <72 > An li i m l i n r n l hi i 2
EJEMPLO 3
[0197] La enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD) es un riesgo de dependencia de la nutrición parenteral (NP). El aceite de soja intravenoso como fuente de grasa parenteral puede exacerbar el riesgo de desarrollar PNALD mientras que el aceite de pescado intravenoso puede detener la progresión de la enfermedad hepática. Sin embargo, los mecanismos por los cuales el aceite de soja daña y el aceite de pescado protege el hígado son inciertos. Dos propiedades que diferencian el aceite de soja y el aceite de pescado son el contenido de a-tocoferol y fitoesterol. El aceite de soja es rico en fitoesteroles y contiene poco a-tocoferol, mientras que el aceite de pescado contiene una abundancia de a-tocoferol y solo niveles traza de fitoesteroles. Este estudio tuvo como objetivo probar si el a-tocoferol confiere propiedades hepatoprotectoras mientras que los fitoesteroles confieren propiedades hepatotóxicas a las emulsiones grasas intravenosas. Utilizando emulsiones lipídicas formuladas en el laboratorio, una emulsión de aceite de soja (SO) no fue capaz de proteger de la esteatosis hepática inducida por NP en ratones, mientras que una composición de emulsión de aceite de soja a la que se había añadido a-tocoferol (SO+AT) conservó la arquitectura hepática normal. Una emulsión de aceite de pescado (FO) y una emulsión de aceite de pescado a la que se habían añadido fitoesteroles (FO+P) fueron capaces de proteger de la esteatosis inducida por NP. La expresión de genes y proteínas de los genes clave para el manejo de la grasa hepática, la acetil CoA carboxilasa (ACC) y el receptor activado por el proliferador de peroxisomas gamma (PPARy), aumentaron en los animales a los que se les administró SO, mientras que los niveles de ACC y PPARy fueron comparables a los controles alimentados con pienso en animales que recibieron SO+AT, FO y FO+P. Este estudio demuestra un papel hepatoprotector del a-tocoferol en la lesión hepática inducida por NP y que los fitoesteroles no parecen comprometer los efectos hepatoprotectores del aceite de pescado.
[0198] La nutrición parenteral (NP) es la administración intravenosa de macronutrientes y micronutrientes, incluyendo carbohidratos, proteínas en forma de aminoácidos, lípidos, vitaminas y oligoelementos. La NP es un componente crítico de la terapia para pacientes con insuficiencia intestinal (IF) que no pueden absorber suficientes nutrientes ingeridos por vía oral debido a una longitud intestinal inadecuada o un mal funcionamiento intestinal. Aunque la NP es un soporte vital para los pacientes con IF, existen complicaciones asociadas con la administración de nutrición por vía intravenosa. Una de estas complicaciones es el desarrollo de la enfermedad hepática asociada a la nutrición parenteral (PNALD), que se caracteriza por una enfermedad hepática colestásica que puede progresar a cirrosis y enfermedad hepática terminal que requiere un trasplante de hígado. Tradicionalmente, la progresión de la PNALD solo podía detenerse si los pacientes podían dejar de depender de la NP y lograr la autonomía enteral. Más recientemente, se ha demostrado que el uso de aceite de pescado como fuente de grasa parenteral puede prevenir la lesión hepática inducida por NP en modelos animales (1, 2) y revertir la colestasis y detener la progresión de la enfermedad hepática en pacientes con PNALD (3-9).
[0199] La grasa es un componente importante de la NP. La grasa en la NP es una fuente de calorías de alta densidad energética, así como una fuente de ácidos grasos esenciales poliinsaturados de cadena larga (EFA), que incluyen las familias de ácidos grasos omega-3 y omega-6. La administración de NP sin grasa requiere un exceso de calorías de carbohidratos para satisfacer la demanda calórica. El suministro de NP sin grasa también da como resultado el desarrollo de deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), que puede caracterizarse por dermatitis, pérdida de cabello, retraso del desarrollo y deterioro del crecimiento (10, 11). Los pacientes dependientes de NP pueden ser monitorizados bioquímicamente para EFAD a través del perfil de ácidos grasos séricos y la medición de la relación del ácido mead, un ácido graso omega-9 no esencial, que es un trieno, con el ácido araquidónico, un ácido graso omega-6 esencial, que es un tetraeno. La definición bioquímica de EFAD es una relación de trieno con respecto a tetraeno mayor de 0,2 (12).
[0200] La grasa en la NP se administra como una emulsión de aceite en agua en la que el aceite se dispersa como glóbulos rodeados por una monocapa de fosfolípidos dentro de un medio acuoso. Los glóbulos deben ser lo suficientemente pequeños como para viajar en la circulación sin causar eventos embólicos. En los Estados Unidos, la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) ha establecido normas que establecen que las emulsiones de grasa intravenosas deben tener un tamaño medio de glóbulo de menos de 500 nm de diámetro y un porcentaje de glóbulos de grasa mayor de 5 pm de diámetro (PFAT5) de no más del 0,05 % (13, 14). Los tipos y proporciones de ácidos grasos administrados están determinados por la composición de los aceites utilizados para formular la emulsión. Los aceites también pueden contener componentes no triglicéridos de origen natural o aditivos que se incorporan a emulsiones formuladas con dichos aceites.
[0201] Las emulsiones de grasa a base de aceite de soja son las fuentes de grasa parenteral más utilizadas. En los Estados Unidos, las únicas fuentes de grasa parenteral aprobadas por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) contienen aceite de soja. La exposición a emulsiones de aceite de soja intravenosas (SO) puede exacerbar el riesgo de desarrollar PNALD (15). Se ha demostrado que las emulsiones de aceite de pescado intravenosas (FO) previenen (1, 2) la lesión hepática inducida por NP en modelos animales. Cuando se administra como la única fuente de grasa parenteral a pacientes que desarrollan PNALD, el FO puede revertir la colestasis y detener la progresión de la enfermedad hepática (3-9). Si bien los mecanismos de las propiedades hepatoprotectoras del FO y las propiedades hepatotóxicas del SO no se comprenden por completo, existen varias diferencias entre el aceite de pescado y el aceite de soja que pueden ser contribuyentes importantes a los efectos diferenciales del SO y el FO en el hígado.
[0202] El aceite de soja es abundante de forma natural en fitoesteroles, que son compuestos de esteroles de origen vegetal. El SO disponible comercialmente contiene aproximadamente 450 mg/L de fitoesteroles (16). El fitoesterol predominante en el SO comercial es el beta-sitosterol, que comprende -70% de los fitoesteroles totales (16). El estigmasterol y el campesterol están presentes en cantidades más pequeñas, pero significativas, ~15% y ~13% respectivamente (16). Estudiosin vitrohan demostrado que el estigmasterol puede inhibir la expresión del transportador de ácidos biliares Receptor X Farsenoide (FXR) así como los genes modulados por FXR (17). En un modelo murino de PNALD, el estigmasterol podría exacerbar la lesión hepática, suprimir la activación de los transportadores de ácidos biliares y provocar la activación de los macrófagos hepáticos (18). A diferencia del SO, el FO contiene solo trazas de fitoesteroles.
[0203] El alfa-tocoferol es un antioxidante que constituye un aditivo importante en el aceite de pescado para prevenir la oxidación de los ácidos grasos omega-3 poliinsaturados de cadena larga. El aceite de soja contiene menos ácidos grasos omega-3 que el aceite de pescado y no requiere la adición de alfa-tocoferol para mantener la estabilidad.
[0204] En el presente documento se describe la prueba de la hipótesis de que el a-tocoferol contribuye a las propiedades hepatoprotectoras y los fitoesteroles contribuyen a las propiedades hepatotóxicas de las emulsiones grasas intravenosas. Para probar esta hipótesis, no es posible utilizar emulsiones grasas intravenosas disponibles comercialmente, ya que no existen SO y FO con niveles variables de fitoesteroles y a-tocoferol. Por lo tanto, las composiciones de emulsión se formularon en el laboratorio para permitir tanto el control de la cantidad de a-tocoferol y fitoesteroles en cada composición de emulsión como la uniformidad de todos los componentes de la emulsión con variación únicamente en el tipo de aceite. El SO y el FO formulados en el laboratorio son seguros y bien tolerados en ratones (22). Las emulsiones de FO y SO elaboradas en el laboratorio tienen los mismos efectos sobre el hígado que sus homólogos comerciales en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP (Figura 16). Se evaluó aquí si la adición de fitoesteroles al aceite de pescado hace que el FO sea hepatotóxico, y si la adición de a-tocoferol al aceite de soja hace que el SO sea hepatoprotector.
Resultados
[0205]Análisis de emulsiones.Se utilizaron los siguientes aceites para elaborar emulsiones de aceite en agua al 20 %: aceite de pescado, aceite de pescado al que se habían añadido fitoesteroles (FO+P), aceite de soja y aceite de soja al que se había añadido a-tocoferol (SO+AT). La Figura 17 muestra los niveles de fitoesterol y a-tocoferol en las emulsiones elaboradas con estos aceites, así como en FO (OM) y SO (IL) disponibles comercialmente. Los niveles de fitoesterol en las emulsiones formuladas con SO, SO+AT y FO+P fueron comparables. Los niveles de alfa-tocoferol en las emulsiones formuladas con FO, FO+P y SO+AT fueron comparables. El tamaño medio de los glóbulos y el análisis de PFAT5 para todas las emulsiones cumplieron con las normas de la USP (Figura 18).
[0206]Parámetros de crecimiento y perfiles de ácidos grasos.No se observaron efectos clínicos adversos con la administración de ninguna de las emulsiones utilizadas y los animales toleraron bien todas las emulsiones. No se observaron diferencias en el crecimiento entre los grupos de tratamiento (Figura 11A).
[0207] Las emulsiones intravenosas inestables pueden producir organomegalia, en particular agrandamiento del bazo y del hígado debido a la deposición de glóbulos grasos (23). No hubo evidencia de organomegalia en ninguno de los grupos de tratamiento. Las masas de hígado (Figura 11B), bazo (Figura 11C) y riñón (Figura 11D) fueron similares en todos los grupos de tratamiento.
[0208] Se realizaron perfiles de ácidos grasos séricos para confirmar que cada emulsión era capaz de prevenir la EFAD y proporcionaba el complemento esperado de EFA para el aceite utilizado en la emulsión. SO es abundante en ácidos grasos omega-6 y contiene pocos ácidos grasos omega-3, mientras que FO es más abundante en ácidos grasos omega-3 y contiene una escasez de ácidos grasos omega-6. Estos equilibrios de EFA deberían reflejarse en el suero de los animales en cada grupo de tratamiento respectivo. Todas las emulsiones previnieron la deficiencia bioquímica de ácidos grasos esenciales (Figura 12A). Las emulsiones de FO y FO+P dieron como resultado niveles séricos más bajos del ácido graso omega-6 ácido araquidónico y niveles séricos más altos de los ácidos grasos omega-3 ácido eicosapentanoico (EPA) y ácido docosahexaenoico (DHA) en comparación con las emulsiones SO y SO+AT (Figura 12By 12C).
[0209]Análisis histológico.Para evaluar el efecto de cada emulsión en el desarrollo de la esteatosis inducida por NP, los hígados se sometieron a un análisis histológico. El SO no pudo prevenir la esteatosis inducida por NP (Figura 13A, fila superior, panel central). Sin embargo, la adición de a-tocoferol a SO (SO+AT) resultó en la conservación de la arquitectura hepática normal en animales alimentados con NP (Figura 13A, fila inferior, panel central). FO y FO+P también conservaron la arquitectura hepática normal (Figura 13A, paneles de la derecha) lo que sugiere que la adición de fitoesteroles a FO no compromete la capacidad de FO para proteger al hígado de la esteatosis inducida por NP. En el análisis con Oil Red O para evaluar la acumulación de grasa hepática, SO AT resultó en una disminución de la acumulación de grasa hepática en comparación con SO (Figura 13b , paneles centrales), lo que indica que el atocoferol confiere propiedades hepatoprotectoras al SO. Tanto el FO como el FO+P tuvieron una acumulación mínima de grasa hepática, lo que nuevamente indica que la adición de fitoesteroles al FO no compromete las propiedades hepatoprotectoras del F<o>(Figura 13B, paneles de la derecha).
Evaluación molecular
[0210] Dado que los ratones a los que se les administró la dieta NP con SO como fuente de grasa desarrollan esteatosis mientras que aquellos con la dieta NP con FO como fuente de grasa no lo hacen, se planteó la hipótesis de que SO y FO pueden afectar de manera diferencial el manejo de la grasa hepática. Para probar el efecto de cada emulsión en el manejo de la grasa hepática, se realizó un análisis de expresión génica de genes clave en el manejo de la grasa hepática. La acetil CoA carboxilasa 2 (ACC2), que cataliza el paso limitante de la velocidad en la lipogénesisde novo,y el receptor activado por proliferador de peroxisomas gamma (PPARy), que es un regulador transcripcional del manejo de la grasa hepática, se identificaron como genes cuya expresión aumenta con una dieta NP sin grasa, se normaliza con el suministro de FO, pero no con el suministro de SO (Figuras 14A y 14B). SO+AT demostró la normalización de ACC2 y PPAR<y>en la expresión génica (Figuras 14A y 14B) y la expresión de proteínas (Figuras 15A-15C), lo que indica que la adición de a-tocoferol puede impartir propiedades hepatoprotectoras al SO. Tanto FO como FO+P dieron como resultado una normalización de la expresión de genes (Figuras 14A y 14B) y proteína (Figuras 15A-15C) de ACC2 y PPARy, lo que indica que a nivel molecular, la adición de fitoesteroles no compromete las propiedades hepatoprotectoras del FO.
Discusión
[0211] Se ha demostrado que los niveles de fitoesterol sérico y hepático son más altos en pacientes dependientes de NP que reciben emulsiones lipídicas intravenosas que contienen aceite de soja que en pacientes que han dejado de administrar NP (24). Además, entre los pacientes dependientes de NP, los niveles de fitoesteroles séricos y hepáticos se correlacionan positivamente con los análisis de laboratorio de la función hepática, así como con el grado de inflamación portal y fibrosis hepática en el análisis histológico (24). En pacientes neonatales dependientes de PN, los niveles de fitoesteroles séricos son más altos en pacientes que cumplen los criterios bioquímicos de PNALD que en aquellos sin PNALD (25). Los estudiosin vitrohan demostrado que el estigmasterol, uno de los principales fitoesteroles en SO (16), inhibe la expresión de genes diana del receptor nuclear sensible a los ácidos biliares FXR (17). Por el contrario, Ng et al. no encontraron efectos adversos en la depuración de ácidos biliares con la adición de beta-sitosterol y estigmasterol a FO comercial en un modelo de lechones prematuros con PNALD (21). Los estudios realizados por Muto et al. en un modelo de lechones neonatales con PNALD no mostraron mejoras en el flujo biliar, la concentración sérica de ácidos biliares o los niveles séricos de bilirrubina directa con la adición de a-tocoferol a una emulsión de SO disponible comercialmente (26).
[0212] En este estudio, una emulsión lipídica intravenosa formulada en el laboratorio utilizando aceite de soja al que se había añadido a-tocoferol fue capaz de conservar la arquitectura hepática normal y la expresión normal de 2 genes importantes de manipulación de la grasa hepática en un modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Una emulsión lipídica intravenosa formulada en el laboratorio utilizando aceite de soja que no contenía a-tocoferol añadido no fue capaz de proteger de la esteatosis hepática inducida por NP y la desregulación de la manipulación de la grasa hepática. Estos resultados son coherentes con los hallazgos de Ng et al; aunque en un modelo diferente de lesión hepática inducida por NP que utiliza emulsiones lipídicas intravenosas formuladas en el laboratorio. La formulación de las emulsiones lipídicas intravenosas en el laboratorio permitió el control del protocolo de formulación y el uso de los mismos instrumentos e ingredientes para garantizar que todas las emulsiones utilizadas en el estudio se hicieran exactamente de la misma manera. Aquí, se añadió a-tocoferol al aceite de soja antes de formular las emulsiones, lo que recapitula el proceso de formulación de emulsiones de FO comerciales y es la forma en que el a-tocoferol se integra en las emulsiones disponibles comercialmente.
[0213] Este estudio también identificó a PPARy y ACC2 como genes que están desregulados por la dieta NP, normalizados por FO y SO que contiene a-tocoferol, pero no por SO solo. PPAR<y>es un regulador transcripcional del manejo sistémico y hepático de la grasa, así como de la inflamación. ACC codifica la enzima que cataliza el paso limitante de la velocidad de la lipogénesisde novo.Se ha demostrado que el agonista de PPARy rosiglitazona puede reducir la inflamación hepática y los biomarcadores asociados en un modelo de ratón con dieta deficiente en metionina y colina de esteatohepatitis no alcohólica (27). En ratones que carecen del receptor de lipoproteína de baja densidad, se ha demostrado que la rosiglitazona mejora la hepatoesteatosis inducida por una dieta rica en grasas (28). Otros estudios han descrito una correlación positiva entre el aumento de la expresión de PPAR<y>y el desarrollo de esteatosis hepática y la acumulación de triglicéridos hepáticos en modelos murinos de enfermedad del hígado graso no alcohólico (29-31). Los ratones knock out STATS que acumulan triglicéridos hepáticos también muestran una reducción de la grasa hepática tras el antagonismo de PPAR<y>(32). Los estudiosin vitrotambién sugieren un efecto adipogénico asociado con el aumento de la expresión de PPARy (33). Curiosamente, también se ha demostrado que el betasitosterol, uno de los principales fitoesteroles del SO, regula positivamente la expresión de PPAR<y>en un modelo de rata de estrés oxidativo inducido por radiación (34). Se ha demostrado que la expresión de ACC2 aumenta en respuesta a condiciones de alto contenido de fructosa y se normaliza mediante el tratamiento con el ácido graso omega-3 ácido docosahexaenoico (DHA) en hepatocitos murinos primarios (35).
[0214] Curiosamente, este estudio no encontró un efecto hepatotóxico de la adición de fitoesteroles al aceite de pescado en la lesión hepática inducida por NP. Una posible conclusión es que los fitoesteroles en el aceite de soja no son responsables de los efectos hepatotóxicos asociados al aceite de soja en el modelo murino de lesión hepática inducida por NP. Una explicación alternativa es que los fitoesteroles tienen propiedades hepatotóxicas pero no pueden superar las propiedades hepatoprotectoras del aceite de pescado. Los ácidos grasos omega-3 abundantes en el aceite de pescado son precursores de mediadores lipídicos antiinflamatorios (36, 37), y el aceite de pescado también es abundante en a-tocoferol. Estas propiedades pueden ofrecer hepatoprotección que no puede superarse con la presencia de fitoesteroles. Si bien se han observado resultados consistentes con los de este estudio en un modelo de lechones prematuros de PNALD (21), otros estudiosin vivoein vitrosugieren que los fitoesteroles tienen propiedades hepatotóxicas (17, 18). Una tercera explicación posible es que se requieren fitoesteroles específicos en concentraciones específicas, o que se requiere un cierto equilibrio de fitoesteroles para que se produzcan las propiedades hepatotóxicas asociadas a los fitoesteroles. En este estudio, la composición de los fitoesteroles añadidos al aceite de pescado se aproximó a los tipos y cantidades de fitoesteroles que se encuentran en el aceite de soja.
[0215] Todas las emulsiones formuladas en este estudio protegieron del desarrollo de EFAD. Tradicionalmente, los ácidos linoleico (LA) y alfa-linolénico (ALA), los ácidos grasos omega-6 y omega-3 originales, respectivamente, se han considerado los EFA. Datos más recientes han sugerido que el aporte de metabolitos de LA y ALA, tales como el ácido araquidónico (ARA), el ácido eicosapentaenoico (EPA) y el DHA es suficiente para prevenir el desarrollo de EFAD (38). Curiosamente, este estudio encontró que el ARA, el EPA y el DHA séricos reflejaban el equilibrio de los EFA proporcionados por la emulsión administrada en lugar de los niveles séricos de LA y a La .
[0216] La capacidad del a-tocoferol para hacer que el SO sea menos hepatotóxico en un modelo de lesión hepática inducida por NP implica que el a-tocoferol es útil en el tratamiento clínico de la PNALD y otras patologías hepáticas similares. Actualmente, el FO puede usarse para el tratamiento de la PNALD, sin embargo, el FO no está fácilmente disponible para todos los pacientes. Los beneficios del a-tocoferol en el tratamiento de la PNALD aún deben probarse clínicamente, y es probable que el FO tenga propiedades adicionales, tales como una abundancia de ácidos grasos omega-3, que hacen que el FO sea más beneficioso que el a-tocoferol solo. Sin embargo, los resultados de este estudio indican que el a-tocoferol es una opción en la prevención o el tratamiento de la PNALD en pacientes para quienes el FO no está disponible.
Procedimientos experimentales
Formulación de emulsión lipídica
[0217]Materiales para emulsiones:Se utilizaron agua estéril para inyección (SWFI, Hospira, Lake Forest, IL), fosfolípido de huevo (Lipoid LLC, Newark, NJ), oleato de sodio (Lipoid LLC, Newark NJ) y glicerina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) para formular la dispersión. Los aceites utilizados fueron aceite de soja de grado USP (Spectrum Chemicals, New Brunswick, NJ) y aceite de pescado CrystalPure EPA 28/12 TG (BASF). Los aditivos utilizados fueron a-tocoferol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), beta-sitosterol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y estigmasterol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Las emulsiones comerciales utilizadas para los análisis incluyeron Omegaven (Fresenius Kabi, Bad Homburg, Alemania) e Intralipid (Fresenius Kabi, Uppsala, Suecia).
[0218]Preparaciónde aceiteFO P:El aceite de pescado Crystal Pure EPA 28/12 TG se calentó para mantener la temperatura entre 50 y 60 °C en condiciones de agitación constante. Se añadieron fitoesteroles (85 % beta-sitosterol, 15 % estigmasterol) hasta una concentración final de 2,25 mg de fitoesteroles por gramo de aceite y se agitó hasta que se disolvieron. Cuando se utilizó para formular una emulsión al 20 %, la concentración de fitoesteroles calculada es de 450 mg de fitoesteroles por litro de emulsión.
[0219]Preparación de aceite SO+AT:Se calentó el aceite de soja para mantener la temperatura entre 50 y 60 ° Cen condiciones de agitación constante. Se añadió alfa-tocoferol hasta una concentración final de 1 mg de a-tocoferol por gramo de aceite y se agitó durante 10 a 15 minutos. Cuando se utilizó para formular una emulsión al 20 %, el contenido calculado de a-tocoferol es de 200 mg de a-tocoferol por litro de emulsión.
[0220]Formulación de la emulsión:La emulsión se formuló mediante homogeneización a alta presión como se describió anteriormente (22). Todos los pasos se realizaron a 40-45 °C a menos que se especifique lo contrario. Todos los pasos se realizaron en una atmósfera de nitrógeno.
[0221] Primero se formuló una dispersión añadiendo fosfolípido de huevo congelado a SWFI calentado a 75-90 °C en condiciones de mezclado a alto cizallamiento y dejando que la mezcla se equilibrara a 40-45 °C. Se añadió oleato de sodio y se continuó mezclando a alto cizallamiento (4000-4100 RPM) durante 40 minutos, después de lo cual se añadió glicerina. La dispersión en bruto se homogeneizó (Panda Plus Homogenizer, GEA Niro Saovi, Columbia, MD) a 9000 psi durante 20 ciclos. La dispersión se filtró a través de una membrana de 0,45 um y el pH se ajustó a 10,4 con hidróxido de sodio 0,5 N. La dispersión final estaba compuesta por 12 % de fosfolípido de huevo, 25 % de glicerina y 0,3 % de oleato de sodio. Un lote de dispersión fue suficiente para la formulación de 5 emulsiones de 1 litro.
[0222] Las emulsiones se formularon añadiendo aceite a un volumen apropiado de dispersión en condiciones de mezclado a alto cizallamiento (3800-4200 RPM, ajustado para evitar la formación de espuma), con mezcla continua durante 40-45 minutos y llevada lentamente a un volumen final de 500 ml con SWFI, manteniendo la temperatura a 40-45 °C. La emulsión en bruto se homogeneizó a 5000 psi durante al menos 9 ciclos. La emulsión final se ajustó al pH a 9-9,5 utilizando hidróxido de sodio 0,1 N, se envasó en viales de suero de 20 ml con espacios de cabeza inundados con gas nitrógeno y las emulsiones envasadas se esterilizaron en autoclave. La composición final de la emulsión fue 20 % de aceite, 1,2 % de fosfolípido de huevo, 2,5 % de glicerina y 0,03 % de oleato de sodio.
[0223] Todas las emulsiones se sometieron a pruebas de tamaño medio de glóbulo y PFAT5 (Micro Measurements, Deerfield, IL) de acuerdo con las normas de u Sp <401>.
[0224]Determinación de los niveles de fitoesterol y alfa-tocoferol en emulsiones:Para determinar los niveles de fitoesterol, las muestras se saponificaron con KOH etanólico de 2 mol/L y los esteroles se extrajeron con n-heptano. Los extractos se evaporaron y se separaron en una columna de cromatografía de gases capilar. La detección se realizó con un detector de ionización de llama. La cuantificación se realizó utilizando epicoprostanol como control interno.
[0225] Los niveles de alfa-tocoferol se determinaron como se describe (39), sin embargo, en lugar de utilizar una calibración interna, se utilizó una calibración externa.
[0226]Modelo murino de lesión hepática inducida por NP.Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Boston Children's Hospital. Se administró a ratones C57BL/6 de seis semanas de edad (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) una dieta estándar de pienso o una dieta líquida compuesta por la NP administrada a pacientes en el Boston Children's Hospital (20 % de dextrosa, 2 % de aminoácidos, 30 mEq/L de sodio, 20 mEq/L de potasio, 15 mEq/L de calcio, 10 mEq/L de magnesio, 10 mMol/L de fosfato, 36,67 mEq/L de cloruro, 19,4 mEq/L de acetato, multivitaminas pediátricas, oelementos traza pediátricos). A los ratones alimentados con NP se les administró solución salina intravenosa (IV), FO IV, FO IV P, SO IV o SO AT IV (2,4 g/kg/día mediante inyección en la vena de la cola). Después de 19 días, los animales fueron sacrificados por asfixia con dióxido de carbono. Se extrajo sangre para la recolección de suero. Se obtuvieron hígados, bazos y el riñón derecho para su posterior análisis. Este experimento se realizó dos veces con diferentes lotes de emulsiones para cada experimento. En el primer experimento, se utilizaron 5 ratones por grupo de tratamiento y en el segundo experimento se utilizaron 10 ratones por grupo de tratamiento.
[0227]Procesamiento de órganos e histología.Los bazos, los riñones y una porción de cada hígado se colocaron en formalina al 10 % y se almacenaron a 4°C durante 24 horas, a continuación se transfirieron a etanol al 70 %. Las muestras se incluyeron en parafina y se seccionaron para tinción con hematoxilina y eosina (H&E) para evaluar la arquitectura hepática. Una segunda porción de cada hígado se colocó en medio de temperatura de corte óptima (OCT) (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) y se congeló en nitrógeno líquido. Las muestras se sometieron a seccionamiento por congelación y tinción con Oil Red O para evaluar la acumulación de grasa hepática. La visualización se realizó con un microscopio Zeiss Axiophot ™ (Oberkochen, Alemania). Los portaobjetos fueron analizados por un patólogo certificado que desconocía los grupos de tratamiento. Una tercera porción de cada hígado se congeló rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80°C para el análisis de expresión de genes y proteínas.
[0228]Perfil de ácidos grasos séricos.La extracción de ácidos grasos séricos se realizó como se describió previamente (2). Brevemente, las muestras de suero (30 pL por muestra) con ácido tricosanoico añadido como patrón interno se sometieron a extracción con cloroformo y metanol en una proporción de 2:1 para aislar la fracción lipídica. Las muestras se saponificaron con hidróxido de sodio metanólico 0,5 N. Las muestras se incubaron en BF3 al 14 %/metanol durante 30 minutos a 100 °C. Los pasos se realizaron en una atmósfera de gas nitrógeno para minimizar la oxidación. El análisis se realizó con cromatografía de gas líquido (Hewlett Packard 6890) y la detección se realizó con un detector de ionización de llama. Se utilizó un patrón externo de éster metílico de ácido graso (NuCheck ™ Prep, Elysian, MN) para identificar los picos de ácidos grasos de la muestra.
[0229]Análisis de expresión génica.Los hígados se cortaron a 25 mg por muestra y se extrajo el ARN utilizando el kit de ADN/ARN/proteína Qiagen AllPrep™ (Gaithersburg, MD) según las instrucciones del fabricante. Para cada reacción se utilizaron cebadores Taqman™(Invitrogen, Carlsbad, CA) y reactivos (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) según las instrucciones del fabricante con 200 ng de ARN. Se utilizó un protocolo de RT-PCR ciclado de 2 pasos en un ciclador ABI One Step Plus. Un paso de transcripción inversa inicial de 30 minutos a 50 °C y 10 minutos a 95 °C fue seguido por un paso de amplificación que consistió en 15 segundos a 95 °C y 1 minuto a 60 °C ciclado 40 veces. La expresión del gen diana se normalizó al gen GAPDH y se comparó con el grupo de control alimentado con pienso utilizando el procedimiento 2 "ññCt (40).
[0230]Análisis de proteínas/Los hígados se cortaron a 25mg por muestra y se homogeneizaron en un tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) con inhibidor de proteasa e inhibidor de fosfatasa utilizando perlas de acero inoxidable en un mezclador Bullet. Las concentraciones de proteína se determinaron utilizando un ensayo Bradford (Bio-Rad, Hercules, CA). Se separaron diez miligramos de proteína por muestra utilizando un gel de poliacrilamida Bis Tris al 4-12 % (Invitrogen, Carlsbad, CA) antes de transferirlos a una membrana de nitrocelulosa. Las membranas se bloquearon en leche descremada al 5 % durante 1 hora. Las membranas se incubaron en anticuerpo primario durante la noche y en anticuerpo secundario durante 1 hora. Los anticuerpos de ACC y PPARy eran de Cell Signaling Technologies (Danvers, MA). El anticuerpo de beta-actina era de Santa Cruz Biotechnologies (Paso Robles, CA).
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EJEMPLO 4
[0232] En los Ejemplos 1-3, las mezclas de composición de emulsión de aceite se prepararon de la siguiente manera: se desarrollaron emulsiones de aceite en agua de la concentración deseada utilizando el Panda Plus GEA Niro Soavi™. Utilizando un mezclador de alto cizallamiento Silverson, se dispersó el fosfolípido mientras aún estaba congelado en un volumen de agua para inyección, previamente calentado a 100 grados Celsius, igual a aproximadamente 3 veces el peso del aceite. A continuación se agregó oleato de sodio y se disolvió con la mezcla hasta que se dividió finamente y formó un fluido viscoso. A continuación se agregó glicerina a la dispersión y se mezcló utilizando el mezclador de alto cizallamiento Silverson hasta que estuvo uniforme a una velocidad de 3000 rpm durante 10 minutos. Esta solución se pasó a continuación a través del homogeneizador Panda Plus GEA Niro Soavi ™ ajustado a 500 psi (2a etapa) y 4500 psi (1a etapa) para una presión total de 5000 psi (+ o - 400 psi) en forma de recirculación durante un tiempo equivalente a 10 pases completos de este volumen de dispersión a través del homogeneizador. La temperatura de la dispersión se mantuvo alrededor de 40 grados Celsius durante todo este proceso. Posteriormente, se registró el pH y se ajustó a 10,2 a 10,8 a 40 grados C (intervalo 38-42 grados Celsius) con solución de hidróxido de sodio 0,5 Normal. El aceite se calentó hasta aproximadamente 40 grados Celsius bajo una atmósfera de nitrógeno y se agregó en una corriente fina a la dispersión con pH ajustado con aproximadamente 200 mL de agua para inyección (calentada hasta 100 grados Celsius) utilizando el mezclador de alto cizallamiento Silverson y se mezcló a 3000 rpm durante un total de 10 minutos, a continuación a 4000 rpm durante un total de 5 minutos. A continuación, se agregó agua para inyección (calentada hasta 100 grados Celsius) al concentrado de emulsión en bruto hasta el 100 % del volumen de la emulsión final. A continuación, la emulsión diluida se agregó a la tolva Panda Plus GEA Niro Soavi ™ y se pasó a través del homogeneizador a 900 psi (2.a etapa) y 8100 psi (1.a etapa) para una presión total de 9000 psi (la relación de presión es 1:10 de la 2.a etapa a la 1.a etapa) durante un tiempo no menor al requerido para 9 pases completos consecutivos. La emulsión en la tolva estuvo en circulación continua con un mezclador Heidolph RZR 2020™ ajustado a una potencia de 1 y una velocidad de 8. La temperatura de la emulsión se mantuvo estable alrededor de 40 grados con un enfriador de agua Thermo Cube™ajustado a 38 grados Celsius. Después del noveno pase, la emulsión se transfirió a un recipiente de vidrio limpio. El pH se registró a 40 grados Celsius (intervalo de 38-40 grados Celsius) y se ajustó a 9 (intervalo 8,8-9,2) con solución de hidróxido de sodio 0,1 Normal. Todos los componentes de esta emulsión se mantuvieron bajo una atmósfera de gas nitrógeno en el espacio de cabeza de todos los recipientes durante la fabricación. Los recipientes estaban fabricados de recipientes de acero inoxidable de grado 316. Después del ajuste del pH, la emulsión se transfirió a viales lavados estériles para su almacenamiento, se esterilizó en autoclave durante 15 minutos y se almacenó en el refrigerador, sin superar los 30 grados Celsius.
[0233] En realizaciones en las que se utilizaron combinaciones de MCT, FO y/o SO, se prepararon emulsiones del aceite indicado como en el párrafo anterior a una concentración de 20 % p/v en agua. A continuación, estas emulsiones se mezclaron entre sí para obtener diferentes proporciones. Por ejemplo, se prepararon 100 ml de una composición de emulsión de MCT:FO 50:50 mezclando 50 ml de una emulsión de MCT al 20 % y 50 ml de una emulsión de FO al 20 %. De esta manera, las composiciones de emulsión finales tenían un contenido de grasa total/volumen del 20 %.

Claims (22)

REIVINDICACIONES
1. Composición de emulsión que comprende:
aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de, pero sin incluir, 30:70 a aproximadamente 70:30; o
ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 30:70 a aproximadamente 70:30,
en la que el contenido total de triglicéridos diglicéridos del aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 no comprende más del 10 % de diglicéridos.
2. Composición de emulsión, según la reivindicación 1, que comprende:
aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 40:60 a aproximadamente 60:40;
o que comprende opcionalmente: aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de aproximadamente 50:50;
o que comprende opcionalmente: aceite de pescado y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50; o ácidos grasos omega-3 y triglicéridos de cadena media (MCT) en una proporción de 50:50.
3. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en la que la composición comprende además alfa-tocoferol, opcionalmente a un nivel de al menos 100 mg o 120 mg por litro de la composición de emulsión.
4. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la composición de emulsión comprende alfa-tocoferol y otras formas de vitamina E en una proporción de al menos 2:1 o al menos 10:1;
o en la que la composición de emulsión no comprende formas de vitamina E distintas del alfa-tocoferol.
5. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que los fitoesteroles están presentes en la composición; opcionalmente en la que los fitoesteroles están presentes en una concentración de menos de 100 mg/L o menos de 50 mg/L de la composición de emulsión.
6. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 100 mg/L; o en la que el ácido araquidónico está presente en la composición en una concentración de al menos 900 mg/L.
7. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que el ácido docosahexaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 13,4 gramos/L; y/o el ácido eicosapentaenoico está presente en la composición en una concentración de al menos 11,6 gramos/L.
8. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la composición comprende una mezcla de una emulsión de un aceite de pescado y/o un aceite de ácido graso omega-3 y una emulsión de MCT; o en la que la composición comprende una emulsión de una mezcla de un aceite de pescado y/o un aceite de ácido graso omega-3 y un MCT.
9. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que el aceite de pescado y/o el aceite de ácido graso omega-3 no han sido destilados ni reesterificados.
10. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que los ácidos grasos omega-3 se proporcionan como un aceite de ácido graso predominantemente omega-3 que no ha sufrido reesterificación.
11. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el aceite de pescado y/o los ácidos grasos omega-3 no comprenden diglicéridos.
12. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que la composición comprende a) el aceite de pescado y el MCT en una concentración de 10 g a 50 g por 100 ml; o b) los ácidos grasos omega-3 y el MCT en una concentración de 10 g a 50 g por 100 ml.
13. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, formulada para administración parenteral o intravenosa.
14. Composición de emulsión según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, que comprende además:
a. un aditivo de uno o más ácidos grasos adicionales o una mezcla de los mismos, opcionalmente en la que el aditivo comprende uno o más ácidos grasos que son terapéuticos para una enfermedad; opcionalmente en la que la composición comprende una mezcla de a) una emulsión del aditivo y b) una o más emulsiones de i) el aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 y ii) el MCT; y/o
b. uno o más de fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio, opcionalmente en la que la composición comprende además fosfolípido de huevo, glicerina, oleato de sodio e hidróxido de sodio.
15. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 y 5-14, que comprende a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, y c) uno o más emulsionantes.
16. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que comprende a) MCT, b) aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3, c) alfa-tocoferol, y d) uno o más emulsionantes.
17. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la que la composición comprende una mezcla de a) una emulsión de un aceite de pescado y/o ácidos grasos omega-3 y b) una emulsión de MCT.
18. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en la que los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 100 mg/L.
19. Composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en la que los ácidos grasos omega-6 están presentes en la emulsión en una concentración de menos de 50 mg/L.
20. Una composición de emulsión, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, para uso en el suministro de nutrición parenteral a un sujeto que la necesita, opcionalmente en la que la composición se administra mediante administración parenteral total.
21. Composición en emulsión para uso, según la reivindicación 20, en la que el sujeto es un paciente que necesita tratamiento para una afección seleccionada del grupo que consiste en:
esteatosis hepática; insuficiencia intestinal; enfermedad hepática asociada a nutrición parenteral (PNALD); sepsis; fibrosis quística; anemia de células falciformes; pancreatitis; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad de Crohn; atresia biliar; colangitis esclerosante primaria; una infección inflamatoria; una afección inflamatoria; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS); hipertrigliceridemia; hipertrigliceridemia grave; esteatosis hepática grave; retinopatía del prematuro; necrosis tubular aguda; nefropatías por IgA; lesión por isquemia-reperfusión; lesión cerebral traumática; insuficiencia orgánica multisistémica; síndrome de dificultad respiratoria; infarto agudo de miocardio; infarto de miocardio; estado anginoso; estado asmático; estado epiléptico; estado lacunar; enfermedad inflamatoria intestinal; enteritis regional; colitis ulcerosa; artritis grave o debilitante; artritis; psoriasis; psoriasis grave; quemaduras; quemaduras de tercer grado; pancreatitis; pancreatitis aguda; enfermedad hepática asociada a insuficiencia intestinal (IFALD), colestasis asociada a nutrición parenteral (PNAC), deficiencia de ácidos grasos esenciales (EFAD), dependencia de nutrición parenteral complicada por alergia a la soja o alergia a emulsiones lipídicas que comprenden ingredientes distintos de MCT y aceite de pescado, aceite de ácido graso predominantemente omega-3 y/o ácidos grasos omega-3.
22. Composición de emulsión para uso, según cualquiera de las reivindicaciones 20-21, en la que la administración es crónica.
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