ES2928169T3

ES2928169T3 - Derivados de 4-(3H-indol-5-il)-N-(piridin-2-il)pirimidin-2-amina como inhibidores de proteína cinasa, y método de preparación y uso médico de los mismos

Info

Publication number: ES2928169T3
Application number: ES16869945T
Authority: ES
Inventors: Lei Yin; Wenjian Liu; Heng Li; Dianxi Zhu
Original assignee: Gan and Lee Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Gan and Lee Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2015-11-30
Filing date: 2016-11-28
Publication date: 2022-11-15
Anticipated expiration: 2036-11-28
Also published as: US11787801B2; IL259711A; RU2018122864A3; JP2021138737A; AU2016365366A1; UA124001C2; KR20180083421A; ZA201803531B; RU2018122864A; EP3385262A4; BR112018010879A2; US20210371418A1; MX387207B; PH12018550049A1; CN106810536A; MA42341B2; CO2018005854A2; CA3002884A1; US20200165239A1; JP2019500413A

Abstract

La presente invención proporciona compuestos como se muestra en la fórmula I o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereoisómero, un compuesto deuterado, un profármaco o una mezcla de los mismos, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los compuestos como se muestra en fórmula I o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereoisómero, un compuesto deuterado, un profármaco o una mezcla de los mismos, en donde R1 a R7 son como se definen en la descripción. La presente invención también proporciona un método de preparación y un uso médico de los compuestos. Los compuestos de la presente invención tienen una actividad superior o equivalente al fármaco candidato LY283521 9 actualmente en ensayo clínico de fase III, y algunos de los compuestos exhiben mejor selectividad. Además, los compuestos preferidos presentan una buena absorción y una buena distribución hematoencefálica cuando se administran por vía oral. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención son prometedores para el desarrollo de nuevos fármacos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la proliferación celular, particularmente tumores cerebrales, proporcionando nuevas opciones para médicos y pacientes. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 4-(3H-indol-5-il)-N-(piridin-2-il)pirimidin-2-amina como inhibidores de proteína cinasa, y método de preparación y uso médico de los mismos

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente de invención china n.° CN201510856641.1, presentada el 30 de noviembre de 2015.

Campo técnico

La presente invención pertenece al campo de la medicina, y particularmente se refiere a una serie de 2-(piridin-2-il)aminopirimidinas sustituidas que tienen la actividad de inhibir la proteína cinasa, y al método de preparación y uso farmacéutico de las mismas.

Antecedentes de la invención

El ciclo celular es una parte importante de la actividad vital celular. En el crecimiento celular normal, el logro de la progresión del ciclo celular depende de una regulación precisa y ajustada del ciclo celular por diversos niveles de factores reguladores. El núcleo de estos factores reguladores es la cinasa dependiente de ciclina (CDK) y sus reguladores positivos y negativos, es decir, la ciclina y los inhibidores de cinasa dependiente de ciclina (cDl). El complejo CDK-Ciclina formado por la proteína cinasa dependiente de ciclina y la ciclina participa en el crecimiento, la proliferación, la latencia o la apoptosis de las células. Durante el proceso del ciclo celular, la ciclina se expresa y degrada de manera periódica y continua, y se une a las CDK que son activadas transitoriamente por ellas, respectivamente. La fosforilación de diferentes sustratos es catalizada por la actividad de CDK para realizar la potenciación y conversión de diferentes fases del ciclo celular.

Actualmente, se han encontrado 13 miembros de la familia CDK, y son CDK1-CDK13, respectivamente, en los que CDK1, CDK2, CDK3, CDK4 y CDK6 participan en la regulación de la proliferación celular, y CDK7, CDK8, C^dK9, CDK11, CDK12 y CDK13 participan en la regulación de la transcripción.

La Ciclina se divide en A-L, y diferentes CDK se conectan a diferentes subtipos de Ciclina. Entre ellos, la familia Ciclina D (Ciclina D1, D2, D3) comienza a expresarse en la fase G1, se une y activa CDK4 y CDK6 para formar un complejo CDK4/6-Ciclina D, a fin de fosforilar una serie de sustratos que incluyen la Retinoblastomaproteína (Rb). Después de la fosforilación, la Rb libera las proteínas que se unen a ella y son inhibidas por esta, que incluyen principalmente el factor de transcripción E2F que activa y transcribe algunos genes necesarios para entrar en la fase S (MA Ke, “Advance in Anti-tumor Effect of CDK4/6 Inhibitors”, World Notes on Antibiotics, 2013, 34 (5):197-202). Si el equilibrio se rompe debido a diversos factores, si se potencia la señal para promover la proliferación celular o se disminuye la señal para inhibir la proliferación celular hasta cierto punto, la proliferación celular estará fuera de control, y entonces se produce un tumor. Se ha encontrado en el estudio que la alteración de la vía Ciclina D-CDK4/6-INK4-Rb está presente en aproximadamente el 80 % de los cánceres humanos (1, Malumbres M., Barbacid M., “To cycle or not to cycle: a critical decision in cancer” [J]. Nature Reviews Cáncer, 2001, 1 (3): 222; 2, Shapiro G. I., “Cyclin-dependent kinase pathways as targets for cancer treatment” [J]. J Clinical Oncology, 2006, 24 (11):1770). El cambio de esta vía acelera el proceso de la fase G1, de manera que las células tumorales se aceleran en la proliferación y obtienen una ventaja de supervivencia. Por lo tanto, la intervención en la vía se ha convertido en una estrategia terapéutica y, así CDK4/6 se ha convertido en una de las posibles dianas antitumorales.

Las ventajas de CDK4/6 como diana antitumoral se encuentran en que: (1) la mayoría de las células en proliferación dependen de la proliferación de CDK2 o CDK4/6, pero los inhibidores de CDK4/6 no presentan citotoxicidad como “inhibidores pan-CDK”, tales como la mielosupresión y reacción intestinal; y (2) los experimentos preclínicos muestran que si se aumenta el nivel de Ciclina D en las células o se inactiva p16INK4a, puede aumentar la sensibilidad de las células al fármaco. Dado que las células tumorales presentan el fenómeno mencionado anteriormente con relación a las células normales, el direccionamiento de los fármacos aumenta hasta cierto punto.

Además de la inhibición del crecimiento tumoral, los inhibidores de CDK también se usan en el tratamiento de otros trastornos, por ejemplo, trastornos cardiovasculares, que incluyen aterosclerosis, reestenosis después de la implantación de una endoprótesis vascular y otros trastornos cardiovasculares provocados por la proliferación de células anormales; por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades provocadas por hongos, protozoos parásitos (tales como Plasmodium falciparum) y las infecciones por virus de ADN y ARN, que incluyen malaria, SIDA, etc. Además, se ha encontrado adicionalmente en los estudios que los inhibidores de CDK también pueden usarse para tratar enfermedades autoinmunitarias (tales como psoriasis, artritis reumatoide, glomerulonefritis y lupus eritematoso, etc.), e inhibir la proliferación de células inflamatorias.

Dado que el documento de patente n.° WO9811095 divulga una serie de compuestos de 2-pirimidinamina que tienen actividad inhibidora de citocinas, muchos compuestos basados en tal estructura central y que tienen actividad inhibidora de CDK4/6 han aparecido sucesivamente en la técnica anterior, y algunos se han convertido en fármacos candidatos prometedores, e incluso entraron en los ensayos clínicos de fase III. Por ejemplo, el compuesto PD0332991, además conocido como Palbociclib, que se ha descrito en el documento de patente n.° WO2003062236, se representa por la fórmula estructural 1, y se desarrolló por Pfizer. PD0332991 tiene una CI⁵⁰de 11 nmol/l y 15 nmol/l para inhibir ^cDK4 y CDK6, respectivamente; y su CI⁵⁰para inhibir CDK2, CDK1 y CDK5 es mayor que 10 pmol/l (Fry D. W., Harvey P. J., Keller P. R., et al. “Specific inhibition of cyclin-dependent kinase 4/6 by PD 0332991 and associated antitumor activity in human tumor xenografts” [J]. Molecular Cáncer Therapeutics, 2004, 3 (11):1427). El compuesto LEE011 que está en desarrollo por Novartis (divulgado en el documento de patente n.° WO2011101409) se representa por la fórmula estructural 2. El compuesto LY2835219 (divulgado en el documento de patente n.° WO2010075074), además conocido como Bemaciclib, se representa por la fórmula estructural 3; se ha reportado que sus CI⁵⁰para inhibir CDK4 y CDK6 son 2 nmol/l y 9,9 nmol/l, respectivamente (Lawrence M. G.; S. F. Cai, X. Lin et al., “Preclinical characterization of the CDK4/6 inhibitor LY2835219: in-vivo cell cycle-dependent/independent anti-tumor activities alone/in combination with gemcitabine” [J]. Invest New Drugs, (2014), 32: 825). Actualmente, LY2835219 se encuentra en el ensayo clínico de fase III de la Compañía Eli Lilly.

Debido a la aparición de estos compuestos, CDK4/6 se ha convertido en una clara diana antitumoral. El solicitante además ha presentado una solicitud de patente (n.° 201510708487.3, presentada el 27 de octubre de 2015) para una serie de nuevas 2-(piridin-2-il)aminopirimidinas sustituidas que presentan la actividad de inhibir selectivamente CDK4/6.

Los tumores malignos siguen siendo una amenaza grave para la salud humana. Por lo tanto, es necesario y urgente desarrollar inhibidores de CDK4/6 con mayor actividad, selectividad y biodisponibilidad a fin de proporcionar más opciones clínicas para el tratamiento de enfermedades asociadas con la proliferación celular anormal, tal como el cáncer.

Sumario de la invención

La invención se expone en el conjunto de reivindicaciones adjunto.

Las referencias a los métodos de tratamiento en los párrafos siguientes de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

En vista de los problemas anteriores, un objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto 2-(piridin-2-il)aminopirimidina sustituido. El compuesto proporcionado en la invención puede inhibir selectivamente la ciclina cinasa CDK4/6 y detener la célula en la fase G1, y así puede usarse para tratar el trastorno proliferativo celular.

Para lograr el efecto técnico anterior, la presente invención proporciona las siguientes soluciones técnicas: en un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula estructural I, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto deuterado, un profármaco o una de sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural I, o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto deuterado, profármaco o una de sus mezclas,

en donde Ri se selecciona de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado no sustituido;

en donde R²y R³se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado no sustituido, o R²y R³, junto con los átomos de C a los que están unidos respectivamente, forman un anillo saturado o insaturado de 3 a 7 miembros;

R⁴y R⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y halógeno, y al menos uno de R⁴y R⁵es halógeno;

R6 se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxilo o halógeno;

R⁷es

en donde Z es carbonilo, O, S, imino, sulfonilo o

n es un número entero de 0 a 4; W e Y son cada uno independientemente C, N, O o S, pero W e Y no pueden ser ambos C al mismo tiempo, y cuando Z es O o S, W es C; R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxilo, halógeno; o

R6 y R⁷, junto con los átomos C a los que están unidos, forman un heterociclo de 5 a 7 miembros que contiene uno o más átomos seleccionados de N, O o S, y el heterociclo de 5 a 7 miembros se sustituye por uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C6, hidroxilo, halógeno, ciano, -NH², -NHRs, -NRsR9,

en donde R⁵y R⁹se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶e hidroxialquilo C¹-C⁶.

Con la máxima preferencia, R¹, R²y R³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado no sustituido.

Como otra realización preferida, R²y R³, junto con los átomos de C a los que ambos están unidos, forman un anillo saturado o insaturado de 3 a 7 miembros.

Con mayor preferencia, R²y R³, junto con los átomos de C a los que ambos están unidos, forman un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

Preferentemente, R⁴y R⁵se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, flúor o cloro, y al menos uno de R⁴y R⁵es flúor o cloro.

Con mayor preferencia, R⁴y R⁵son cada uno independientemente hidrógeno o flúor, y al menos uno de R⁴y R⁵es flúor.

Con la máxima preferencia, R⁴es hidrógeno o flúor, y R⁵es flúor.

Preferentemente, R6 se selecciona de un átomo de hidrógeno o alquilo C¹-C⁶.

Preferentemente, Z es un grupo carbonilo, O o

n es un número entero de 0 a 4.

Con mayor preferencia, Z es

n es un número entero de 0 a 2, con mayor preferencia, n= 0 o 1.

Preferentemente, W e Y se seleccionan cada uno independientemente de C o N, pero W e Y no pueden ser ambos C al mismo tiempo.

Preferentemente, R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo

C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxilo o -NR⁸R⁹, y cuando Y = N, R¹⁰no puede ser -NR⁸R⁹, en donde R8 y R⁹se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno y

C¹-C⁴alquilo.

Con mayor preferencia, R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o -NR⁸R⁹, en donde R8 y R⁹independientemente de un átomo de hidrógeno y alquilo C¹-C⁴.

Con mayor preferencia, R⁷se selecciona de los sustituyentes que tienen las siguientes estructuras:

en donde R¹⁴y R¹⁵se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo

C³-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o hidroxilo; R¹⁶se selecciona de un átomo de hidrógeno, cicloalquilo C³-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o hidroxilo.

Con mayor preferencia, R¹⁴y R¹⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶e hidroxialquilo C¹-C⁶; R¹⁶se selecciona de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶o hidroxialquilo C¹-C⁶.

Como otra realización preferida, R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman un heterociclo de

6 miembros que contiene uno o más átomos seleccionados de N, O o S.

Con mayor preferencia, R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman un heterociclo de 6 miembros que contiene N.

Con mayor preferencia, R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman la siguiente estructura química:

en donde R¹⁷se selecciona de hidroxilo o alcoxi C¹-C³; además preferentemente, R¹⁷es hidroxilo.

Como una realización preferida, la presente invención proporciona además los compuestos de fórmula estructural II, III, IV o V, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula II, i Ii, IV o V, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas,

en donde Z, W, Y, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R6, R¹⁰, R¹¹y R¹⁷se definen como anteriormente, el anillo A es un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

Preferentemente, el anillo A es un anillo saturado de 3 a 6 miembros.

Con mayor preferencia, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula estructural VIII, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto deuterado, un profármaco, o una de sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural VIII o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto deuterado, profármaco o sus mezclas,

en donde R²⁰, R²¹, R²²se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C¹-C⁴, o R²⁰es alquilo C¹-C⁴, y R²¹y R²², junto con el átomo de C al que están unidos, forman un anillo saturado de 5 a 6 miembros; R²³se selecciona de hidrógeno o flúor; n = 0 o 1; R²⁴se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C¹-C⁴o hidroxialquilo C¹-C⁴, Q es C o N.

Como una realización más preferible, la presente invención proporciona compuestos de las siguientes estructuras, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto deuterado, un profármaco, o una de sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos de las estructuras o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas,



Los compuestos de acuerdo con la presente invención además incluyen todos los compuestos mencionados anteriormente que se marcan isotópicamente.

En otro aspecto, la presente invención proporciona además un compuesto de fórmula estructural VI, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto deuterado, un profármaco o una de sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural VI o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto deuterado, profármaco, o una de sus mezclas,

en donde R¹, R², R³, R⁴y R⁵se definen como anteriormente, X es un grupo saliente o un grupo amino.

Preferentemente, X es halógeno o amino, con mayor preferencia flúor, bromo, cloro o amino.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula estructural I, que comprende llevar a cabo una reacción de acoplamiento catalizada por paladio entre un compuesto de fórmula VI y un compuesto de fórmula VII en un disolvente para dar un compuesto de fórmula I,

en donde Ri, R², R³, R⁴, R⁵, R6 y R⁷se definen como anteriormente; X y M son cada uno independientemente un grupo saliente o amino, solo uno de X y M es amino y uno de los dos debe ser amino;

preferentemente, el grupo saliente es halógeno;

con mayor preferencia, el grupo saliente es flúor, bromo o cloro.

En donde, el método de preparación anterior puede comprender además la eliminación del grupo protector.

En donde, el método de preparación anterior puede comprender además la separación y/o purificación del producto, y la separación y/o purificación puede realizarse mediante un método generalmente usado en síntesis orgánica, por ejemplo, una combinación adecuada de los métodos de filtración, extracción, lavado, concentración, cromatografía y similares.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales farmacéuticamente aceptables o solvatos de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas, en la fabricación de una formulación farmacéutica para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

Preferentemente, la formulación farmacéutica comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Preferentemente, el trastorno proliferativo celular se refiere a cáncer de mamífero o de ser humano, con mayor preferencia se refiere a cáncer humano, que incluyen tumores sólidos malignos y tumores no sólidos malignos, que incluyen específicamente, pero sin limitarse a, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, leucemia, cáncer cerebral, cáncer gástrico y glioma.

Preferentemente, el trastorno proliferativo celular además puede ser SIDA, aterosclerosis, y reestenosis después del implante de una endoprótesis vascular.

Preferentemente, dicho uso se refiere al uso de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas, como único principio activo o junto con otras sustancias biológicamente activas, en la fabricación de una formulación farmacéutica para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

Las otras sustancias biológicamente activas incluyen pero sin limitarse a, agentes antineoplásicos, agentes inmunosupresores y agentes antivíricos; en donde el agente antineoplásico se selecciona de un agente alquilante (tales como ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, semustina, clorhidrato de mecloretamina, busulfano, clorambucilo, melfalán, nitrocafano, formilmelfalano, carmustina, lomustina, altretamina, dibromomanitol, temozolomida, y similares), fármacos antimetabolitos antineoplásicos (tales como citarabina, fluorouracilo, metotrexato, hidroxiurea, tegafur, meisoindigo, mercaptopurina y similares), agente complejante de platino (tal como cisplatino, carboplatino, oxaliplatino y similares), antibióticos fármacos antineoplásicos (actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina, pingyangmicina, epirrubicina, pirarrubicina, daunorrubicina, bleomicina y similares), fármacos antineoplásicos de origen natural (homoharringtonina y sus derivados, vincristina y sus derivados, hidroxicamptotecina y sus derivados, etopósido y sus derivados, vindesina y sus derivados, vinblastina y sus derivados, bitartrato de vinortabina, taxol y sus derivados, colchicina y sus derivados, elemeno y sus derivados y similares), fármacos antineoplásicos hormonales (tales como aminoglutetimida, tamoxifeno, dexametasona, dutasterida, flutamida, gonadorelina, acetato de leuprolida, letrozol y similares), inhibidores de VEGFR o EGFR (tales como sunitinib, sorafenib, imatinib, gefitinib, erlotinib, vandetanib, pazopanib, lapatinib, canertinib, afatinib, mubritinib, dasatinib, neratinib y similares), fármacos antineoplásicos anticuerpos (tales como trastuzumab, pertuzumab, rituximab, panitumumab, bevacizumab, ipilimumab, ofatumumab, ramucirumab y similares), inhibidores de mTOR (tales como everolimus, sirolimus, zotarolimus y similares), y los fármacos para tratar tumores cerebrales, tales como temozolomida y similares.

En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un producto de combinación para tratar un trastorno proliferativo celular, en donde el producto de combinación comprende uno o más compuestos seleccionados de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas.

Preferentemente, el producto de combinación incluye además excipientes farmacéuticamente aceptables y/o el producto de combinación es un estuche.

En otro aspecto, la presente invención proporciona además un método para tratar un trastorno proliferativo celular, que comprende administrar a un paciente que lo necesita, por vía oral o no oral, una cantidad eficaz de los compuestos de la presente invención o el producto de combinación mencionado anteriormente.

Preferentemente, el método anterior para tratar un trastorno proliferativo celular comprende administrar a un paciente, por vía oral o no oral, una cantidad eficaz de los compuestos de la presente invención y dichas otras sustancias biológicamente activas. Dichas otras sustancias biológicamente activas incluyen, pero sin limitarse a, agentes antineoplásicos, agentes inmunosupresores y agentes antivíricos; en donde el agente antineoplásico se selecciona de un agente alquilante (tales como ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, semustina, clorhidrato de mecloretamina, busulfano, clorambucilo, melfalán, nitrocafano, formilmelfalano, carmustina, lomustina, altretamina, dibromomanitol, temozolomida y similares), fármacos antimetabolitos antineoplásicos (tales como citarabina, fluorouracilo, metotrexato, hidroxiurea, tegafur, meisoindigo, mercaptopurina y similares), agente complejante de platino (tales como cisplatino, carboplatino y oxaliplatino), antibióticos antineoplásicos (actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina, pingyangmicina, epirrubicina, pirarrubicina, daunorrubicina, bleomicina y similares), fármacos antineoplásicos de origen natural (homoharringtonina y sus derivados, vincristina y sus derivados, hidroxicamptotecina y sus derivados, etopósido y sus derivados, vindesina y sus derivados, vinblastina y sus derivados, bitartrato de vinorelbina, taxol y sus derivados, colchicina y sus derivados, elemeno y sus derivados y similares), fármacos antineoplásicos hormonales (tales como aminoglutetimida, tamoxifeno, dexametasona, dutasterida, flutamida, gonadorelina, acetato de leuprolida, letrozol y similares), inhibidores de VEGFR o EGFR (tales como sunitinib, sorafenib, imatinib, gefitinib, erlotinib, vandetanib, pazopanib, lapatinib, canertinib, afatinib, mubritinib, dasatinib, neratinib y similares), fármacos antineoplásicos anticuerpos (tales como trastuzumab, pertuzumab, rituximab, panitumumab, bevacizumab, ipilimumab, ofatumumab, ramucirumab y similares), inhibidores de mTOR (tales como everolimus, sirolimus zotarolimus y similares) y los fármacos para tratar tumores cerebrales, tales como temozolomida y similares.

La vía oral o no oral puede administrarse al paciente por vía oral o mediante inyección, parche, aerosol y una o más vías conocidas. La cantidad eficaz puede incluir una cantidad eficaz para tratar, reducir, moderar, aliviar, eliminar uno o más síntomas de una afección que se pretende tratar o alternativamente que se pretende evitar, o una cantidad eficaz para generar adicionalmente cambios ventajosos clínicamente identificables en la afección o su efecto.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas, en donde fórmula estructural del compuesto es una o más fórmulas estructurales seleccionadas del grupo que consiste en las fórmulas estructurales I-V y VIII;

preferentemente, el trastorno proliferativo celular se refiere a cáncer de mamífero o humano, con mayor preferencia se refiere a cáncer humano, que incluye tumores sólidos malignos y tumores no sólidos malignos, que incluyen específicamente, pero no se limita a, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, leucemia, cáncer cerebral, glioma y cáncer gástrico; y/o

el trastorno proliferativo celular es una o más enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en SIDA, aterosclerosis, y reestenosis después del implante de una endoprótesis vascular.

En la descripción de la presente invención, a menos que se especifique de otra manera, el “alquilo C¹-C⁶” se refiere a un alquilo C¹-C⁶lineal o ramificado; el “alquilo C¹-C⁴” se refiere a un alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado, preferentemente metilo, etilo, propilo o isopropilo. El “alcoxi C¹-C⁶” se refiere a un alcoxi C¹-C⁶lineal o ramificado, preferentemente un alcoxi C¹-C⁴lineal o ramificado, con mayor preferencia metoxi, etoxi, propoxi o 2-metiletoxi. El “cicloalquilo C³-C⁶” se refiere a un cicloalquilo C³-C⁶no sustituido o cicloalquilo C³-C⁶sustituido por alquilo C¹-C⁴y/o alcoxi C¹-C⁴, preferentemente cicloalquilo C³-C⁶no sustituido o cicloalquilo C³-C⁶sustituido por alquilo C¹-C⁴y/o alcoxi C¹-C⁴, con mayor preferencia ciclopropilo, ciclobutilo, metilciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo. El “halógeno” se refiere a bromo, cloro o flúor. El “haloalquilo C¹-C⁶” se refiere a alquilo C¹-C⁶lineal o ramificado sustituido con bromo, cloro o flúor, preferentemente alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado sustituido con cloro o flúor, con mayor preferencia monofluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, monoclorometilo, diclorometilo, triclorometilo, 1-fluoroetilo, 1-cloropropilo, 1 -cloroetilo y 1-cloropropilo.

La investigación existente sugiere que la toxicidad de los inhibidores de las CDK se refiere a principalmente su inhibición de CDK1 y otras proteínas cinasas, como Pim-1, una treonina/serina cinasa codificada por un protooncogén del mismo nombre. Por lo tanto, como compuestos inhibidores de CDK, se espera que tengan una diferencia más significativa entre el efecto sobre CDK4/CDK6 y sobre CDK1 y otras cinasas, es decir, la inhibición selectiva de CDK4/CDK6. Los compuestos proporcionados por la presente invención son superiores o comparables en actividad a LY2835219, un candidato que se encuentra actualmente en ensayos clínicos de fase III, y algunos compuestos muestran una mejor selectividad de cinasas. Además, el compuesto preferido (preparado en el Ejemplo 17) se absorbe bien por vía oral y tiene una buena distribución sangre-cerebro. Los resultados anteriores indican que los compuestos de la presente invención prometen desarrollarse en nuevos fármacos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la proliferación celular, especialmente tumores malignos, especialmente cáncer cerebral.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se describe más abajo con referencia a ejemplos específicos. Un experto en la técnica entenderá que estos ejemplos son meramente ilustrativos de la invención y no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera.

Los compuestos de fórmula VI de la invención son productos intermedios clave para la síntesis de los compuestos de fórmula I, y se someten a una reacción de acoplamiento catalizada por paladio con los compuestos de fórmula VII en un disolvente para dar los compuestos de fórmula I.

Los compuestos de fórmula VI pueden sintetizarse mediante el siguiente esquema de reacción:

en donde R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R6 y R⁷se definen como anteriormente; X es un grupo saliente o un grupo amino.

Preferentemente, R¹, R²y R³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, grupo hidrocarburo C¹-C⁶no sustituido, o un grupo hidrocarburo C¹-C⁶sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados de grupo hidrocarburo C¹-C⁶, hidroxilo o halógeno.

Con mayor preferencia, R¹, R²y R³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶lineal o ramificado no sustituido, alquenilo C²-C⁴lineal o ramificado no sustituido.

Alternativamente, como otro modo preferido, R¹se define como anteriormente, y R²y R³, junto con el átomo de C al que están unidos, forman un anillo saturado o insaturado de 3 a 7 miembros; con mayor preferencia, R²y R³, junto con el átomo de C al que están unidos, forman un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

Preferentemente, R⁴y R⁵son cada uno independientemente hidrógeno o flúor, y al menos uno de R⁴y R⁵es flúor.

X es preferentemente halógeno o amino, con mayor preferencia flúor, bromo, cloro o amino.

R6 es preferentemente un átomo de hidrógeno o alquilo C¹-C⁴.

R⁷es preferentemente un sustituyente de la siguiente estructura:

En donde, R¹⁴y R¹⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁴e hidroxialquilo C¹-C⁴.

Alternativamente, como otra realización preferida, R6 y R⁷, junto con el átomo de C al que están unidos, forman una estructura química de la siguiente manera:

en donde, R¹⁷se selecciona de hidroxilo o alcoxi C¹-C³; con mayor preferencia, hidroxilo.

A menos que se especifique de otra manera, todos los métodos experimentales en los siguientes ejemplos son métodos convencionales. A menos que se especifique de otra manera, las materias primas químicas, reactivos y similares usados en los siguientes ejemplos son productos disponibles comercialmente.

Las abreviaturas y sus significados que aparecen en los ejemplos de la presente invención se dan de la siguiente manera:

PE: éter de petróleo

EA: acetato de etilo

DCM: diclorometano

MeOH: metanol

Pd (dppf)Cte: dicloruro de [1,1'-bis(difenilfosfin)ferroceno]paladio

Pd (PPh3)4: tetraquis(trifenilfosfin)paladio

Pd2(dba)3: tris(dibencilidenoacetona)dipaladio

NaHB(OAc)3: triacetoxiborohidruro de sodio

LHMDS: hexametildisilazida de litio

DAPI: colorante fluorescente DAPI

Ejemplo 1

5-Fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Etapa 1: éster í-butílico del ácido 4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxílico

Hoc

Un matraz de reacción se cargó con 5-bromo-2-nitropiridina (5,0 g, 24,63 mmol), éster í-butílico del ácido piperazin-1-carboxílico (5,04 g, 27,09 mol), acetonitrilo (30 ml) y diisopropiletilamina (4,77 g, 36,94 mmol). La mezcla se dejó reaccionar a reflujo durante 2 h. El producto de reacción se sometió a evaporación rotatoria para eliminar el disolvente, y se separó mediante cromatografía en columna y (PE/EA = 1:1 a DCM/MeOH = 20:1) para obtener el compuesto del título (3,8 g, sólido amarillo).

EM (IEN): masa calc. para C¹⁴H²⁰N⁴O⁴308,1, m/z encontrado 309,1 [M+H]+.

Etapa 2: éster í-butílico del ácido 4-(6-aminopiridin-3-il) piperazin-1-carboxílico

Un matraz de reacción se cargó con éster í-butílico del ácido 4-(6-nitropiridin-3-il)piperazin-1-carboxílico (0,92 g, 3,0 mmol) preparado en la etapa 1, acetato de etilo/metanol (10 ml/10 ml) y Pd/C (0,1 g), y se introdujo con gas de hidrógeno. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 2 h. El producto de reacción se filtró y se concentró para obtener el compuesto del título (792 mg, sólido blanquecino).

EM (IEN): masa calc. para C¹⁴H²²N⁴O²278,2, m/z encontrado 279,2 [M+H]+.

Etapa 3: preparación de 5-bromo-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol

Un matraz de reacción se cargó con clorhidrato de 4-bromo-2-fluorofenil)hidrazina (1,0 g, 4,14 mmol), ácido acético (10 ml) y 3-metil-2-butanona (0,32 g, 4,14 mmol). La mezcla se dejó reaccionar a reflujo durante 5 h. El producto de reacción se sometió a evaporación rotatoria para eliminar el disolvente, se añadió con 20 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (20 ml por cada vez). La fase orgánica combinada se lavó una vez con 25 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se desecó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se sometió a evaporación rotatoria y se separó mediante cromatografía en columna (DCM: MeOH = 50:1 a 25:1) para obtener el compuesto del título (420 mg, sólido amarillo).

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 87,23-7,21 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,32 (s, 6H).

EM (IEN): m/z 258,0 [M+H]+.

Etapa 4: preparación de 7-fluoro-2,3,3-trimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3H-indol

Un matraz de reacción se cargó con 5-bromo-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol (400,0 mg, 1,56 mmol) preparado en la Etapa 3, 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bis(1,3,2-dioxaborolano) (436,5 mg, 1,71 mmol), acetato potasio (306,3 mg, 3,12 mmol), dioxano (10 ml), y Pd(dppf)Cl²(228,7 mg, 0,32 mmol). La mezcla se calentó a 90 °C bajo la protección del gas nitrógeno, y se dejó reaccionar durante toda la noche. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (20 ml por cada vez). La fase orgánica de acetato de etilo se combinó, se lavó con 25 ml de solución salina saturada una vez, se desecó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 50:1-30:1) para obtener el compuesto del título (306,5 mg, aceite amarillo).

EM (IEN): m/z 304,1 [M+H]+.

Etapa 5: preparación de 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol

Un matraz de reacción en microondas se cargó con 7-fluoro-2,3,3-trimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3H-indol (300 mg, 0,99 mmol) preparado en la etapa 4, 2,4-dicloro-5-fluoropirimidina (181,8 mg, 1,08 mmol), fosfato de potasio (419,8 mg, 1,98 mmol), dioxano/agua (4 ml/1 ml) y Pd (PPh3)4 (114,5 mg, 0,09 mmol). La reacción en microondas se llevó a cabo bajo la protección del gas nitrógeno a 130 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con diclorometano tres veces (15 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con 20 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio una vez, se desecaron después con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se sometieron a evaporación rotatoria y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1-50:1) para obtener el compuesto del título (301,2 mg, sólido amarillo).

EM (IEN): masa calc. para C¹⁵H¹²C F ²N³307,1, m/z encontrado 308,1 [M+H]+.

Etapa 6: preparación de éster í-butílico del ácido 4-(6-((5-fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)pirimidin-2-il)amino)piridin-3-il)piperazin-1-carboxílico

Un matraz de reacción se cargó con 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol (150,0 mg, 0,48 mmol) preparado en la Etapa 5, éster í-butílico del ácido 4-(6-aminopiridin-3-il)piperazin-1-carboxílico (135,8 mg, 0,48 mmol) preparado en la Etapa 2, carbonato de cesio (371,6 mg, 0,96 mmol), dioxano (3 ml), Pd2(dba)3 (44,7 mg, 0,05 mmol) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (30,4 mg, 0,05 mmol). La mezcla se calentó a 150 °C bajo la protección de gas nitrógeno para llevar a cabo la reacción en microondas durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con diclorometano tres veces (10 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con 30 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio una vez, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 50:1) para obtener el compuesto del título (53,4 mg, sólido amarillo).

EM (IEN): masa calc. para C²⁹H³³F²N⁷O²549,3, m/z encontrado 550,3 [M+H]+.

Etapa 7: preparación de trifluoroacetato de 5-fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)-N-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Un matraz de reacción se cargó con éster í-butílico del ácido 4-(6-((5-fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)pirimidin-2-il)amino)piridin-3-il)piperazin a-1-carboxílico (30,0 mg, 0,054 mmol) preparado en la Etapa 6, diclorometano (4 ml) y ácido trifluoroacético (1 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El producto de reacción se sometió a evaporación rotatoria para eliminar el disolvente, se ajustó a pH 8 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano tres veces (5 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con 10 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio una vez, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se sometieron a evaporación rotatoria y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 20:1) para obtener el compuesto del título (10,5 mg, sólido amarillo).

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,75 (s a, 1H), 8,65 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,02-7,94 (m, 3H), 7,82 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,09-3,02 (m, 4H), 2,84-2,83 (m, 4H), 2,31 (s, 3H), 1,34 (s, 6H).

EM (IEN): masa calc. para C²⁴H²⁵F²N⁷449,50, m/z encontrado 450,2[M+H]+.

Ejemplo 2

N-(5-((4-Etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)pirimidin-2-amino

Etapa 1: 1-((6-bromopiridin-3-il)metil)-4-etilpiperazina

2-bromo-5-formilpiridina (1,5 g, 8,15 mmol), 1-etilpiperazina (0,93 g, 8,15 mmol), y diclorometano (15 ml) se añadieron al matraz de reacción, y después NaHB(OAc) 3 (2,58 g, 12,23 mmol) en lotes. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto de reacción se filtró, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100:1 a 10:1) para obtener el producto del título (1,64 g, aceite amarillo).

EM (IEN): masa calc. para C12H1sBrN3285,1, m/z encontrado 286,1 [M+H]+.

Etapa 2: 5-((4-etilpiperazin-1-il)metM)piridin-2-amino

Un matraz de reacción se cargó con 1-((6-bromopiridin-3-il)metil)-4-etilpiperazina (2,84 g, 10 mmol) preparado en la Etapa 1, 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo (700 mg, 2 mmol), Pd2(dba)3 (915 mg, 1 mmol) y tolueno (30 ml), LHMDS (1 N) (20 ml, 20 mmol) se añadió bajo la protección de gas nitrógeno. La mezcla se calentó a 80 °C y se dejó reaccionar durante toda la noche, se enfrió después a temperatura ambiente, se filtró, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100:1-10:1) para dar 1,52 g del producto del título (sólido marrón).

EM (IEN): masa calc. para C¹³H²¹N³220,2, m/z encontrado 221,2 [M+H]+.

Etapa 3: preparación de 5-bromo-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol

(4-bromo-2-fluorobenceno)hidrazina (900,0 mg, 3,73 mmol), ácido acético (5 ml) y 3-metilbutan-2-ona (353,3 mg, 4,09 mmol) se añadieron al matraz de reacción. La mezcla se dejó reaccionar a reflujo durante 5 h. El producto de reacción se sometió a evaporación rotatoria para eliminar el disolvente, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (20 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con 25 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio una vez, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se sometieron a evaporación rotatoria. El residuo se separó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo: éter de petróleo=1: 50-1: 25) para dar 910 mg del compuesto pirimidina (sólido amarillo).

EM (IEN): m/z 258,0 [M+H]+.

5-Bromo-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol (1,0 g, 3,91 mmol) preparado en la Etapa 3, 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bis(1,3,2-dioxaborolano) (1,09 g, 4,29 mmol), acetato de potasio (770 mg, 7,82 mmol), dioxano (10 ml), Pd(dppf)Cb (570 mg, 0,78 mmol) se añadieron a un matraz de reacción, y se calentaron a 90 °C bajo la protección de gas nitrógeno para reaccionar durante toda la noche. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se diluyó con 10 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (20 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 25 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio, se filtraron, se sometieron a evaporación rotatoria y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA: PE = 1:100-1:20) para dar 1,02 g del compuesto del título (aceite amarillo).

EM (IEN): m/z 304,2 [M+H]+.

Un matraz para reacciones en microondas se cargó con 7-fluoro-2,3,3-trimetN-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3H-indol (1,0 g, 3,30 mmol) preparado en la Etapa 4, 2,4-didoro-5-fluoropirimidina (610 mg, 3,63 mmol), fosfato de potasio (1,39 g, 6,60 mmol), dioxano/agua (8 ml/2 ml), y Pd(PPh3)4 (380 mg, 0,33 mmol). La reacción en microondas se llevó a cabo a 130 °C bajo la protección del gas nitrógeno durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua, se extrajo tres veces con diclorometano (15 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 20 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA: PE=1:50 a 1:10) para dar el compuesto del título (290,0 mg, sólido amarillo).

EM (IEN): m/z 308,1 [M+H]+.

Etapa 6: preparación de N-(5-((4-etilpiperazin-1 -il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)pirimidin-2-amino

Un matraz de reacción se cargó con 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol (290,0 mg, 0,94 mmol) preparado en la etapa 5, 5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-amino (228,6 mg, 1,04 mmol) preparado en la Etapa 2, fosfato de potasio (400,5 mg, 1,88 mmol), 10 ml de dioxano, Pd2(dba)3 (86,4 mg, 0,09 mmol) y 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (109,2 mg, 0,19 mmol). La reacción en microondas se llevó a cabo a 150 °C bajo la protección de gas nitrógeno durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua, se extrajo tres veces con diclorometano (10 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 30 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se sometieron a evaporación rotatoria y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano: metanol = 30:1) para dar el compuesto del título (140,3 mg, sólido amarillo).

RMN de 1H (400 MHz,CDCla) 88,72 (s,1H), 8,49 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,31 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,52 (s, 2H), 2,54-2,41 (m, 10H), 2,38 (s, 3H), 1,40 (s, 6H), 1,10 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN): m/z 492,2[M+H]+.

Ejemplo 3

N-(5-((4-Etilpiperazin-1-il)metilpiridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 2.

RMN de 1H (400 MHz,CDCb) 89,75 (s,1H), 8,54 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,38-8,37 (m, 2H), 7,94 (s, 1H), 7,87 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,49 (s, 2H), 2,99-2,39 (m, 10H), 2,37 (s, 3H), 2,14-2,08 (m, 6H), 1,87-1,84 (m, 2H), 1,06 (t,3H,J = 6,4 Hz).

EM (IEN): m/z 518,3[M+H]+.

Ejemplo 4

N-(5-((4-Etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclobutano-1,3'-indol]-5' il)aminopirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz,CDCb) 88,36-8,32 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,78-7,75 (m, 2H), 7,71 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,84-5,83 (m, 1H), 5,63-5,62 (m, 1H), 4,39-4,38 (m, 1H), 3,66-3,64 (m, 1H), 3,51 (s, 2H), 3,06-3,00(m, 1H), 2,71-2,38 (m, 11H), 1,55 (s, 3H), 1,11 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN): m/z 504,3[M+H]+

Ejemplo 5

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-((4-etMpiperazin-1-il)metM)piridin-2-il)-5-fluoropirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,71 (s, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,31 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,86 (s, 1H), 7,72 (dd, 1H, J = 8,0, 1,2 Hz), 3,52 (s, 2H), 2,53-2,41 (m, 10H), 2,34 (s, 3H), 2,06-1,93 (m, 1H), 1,91-1,84 (m, 1H), 1,39 (s, 3H), 1,09 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,50(t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN): m/z 506,3[M+H]+.

Ejemplo 6

5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 1.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,67 (s a, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,11 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,95 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 9,2, 2,8 Hz), 3,12-3,06 (m, 8H), 2,39 (s, 3H), 2,16-2,10(m, 6H), 1,89-1,86 (m, 2H).

EM (IEN): m/z 476,2[M+H]+

Ejemplo 7

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,33 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,28 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,16 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,8 Hz), 3,10-3,03 (m, 8H), 2,31 (s, 3H), 2,03-1,80 (m, 3H), 1,36 (s, 3H), 0,47 (t, 6H, J = 7,6 Hz).

EM (IEN): m/z 464,2[M+H]+.

Ejemplo 8

N-(5-((4-Etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 88,83 (s, 1H), 8,61 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 8,49 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,32 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 7,91 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,78 (dd, 1H, J = 8,4, 1,6 Hz), 7,21 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 3,52 (s, 2H), 2,54-2,41 (m, 10H), 2,38 (s, 3H), 2,19-2,08 (m, 6H), 1,90-1,87 (m, 2H), 1,10 (t, 3H, J = 6,8 Hz).

EM (IEN): m/z 500,3[M+H]+.

Ejemplo 9

N-(5-((4-Etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 88,73 (s a, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,43 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,30 (s, 1H), 8,15-8,13 (m, 2H), 7,70-7,64 (m, 2H), 3,52 (s, 2H), 2,53-2,37 (m, 10H), 2,31 (s, 3H), 2,21-2,06 (m, 6H), 1,89-1,86 (m, 2H), 1,10 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 500,3[M+H]+.

Ejemplo 10

4-(3,3-Dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-N-(5-((4-etilpiperidin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoropirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,19 (s a, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,39-8,34 (m, 2H), 7,95 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,51 (s, 2H), 2,52-2,41 (m, 10H), 2,31 (s, 3H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,90-1,85 (m, 2H), 1,08 (t, 3H, J = 6,8 Hz), 0,46 (t, 6H, J = 6,8 Hz).

EM (IEN): m/z 520,3[M+H]+.

Ejemplo 11

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperidin-1-M)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Etapa 1: éster í-butílico del ácido 6-nitro-3',6'-dihidro-[3,4'-bipiridin]-1'(2'H)-carboxílico

Se cargó un matraz de reacción con 5-bromo-2-nitropiridina (20,3 g, 0,1 mol), éster í-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxílico (31 g, 0,1 mol), dioxano/agua (250 ml/30 ml), carbonato de cesio (66 g, 0,2 mol) y Pd(dppf)Cl²(7,33 g, 0,01 mol), y protegido por gas nitrógeno. La mezcla se calentó a 85 °C durante 12 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 1:1 para DCM/MeOH = 20:1) para dar el producto del título (11 g, sólido amarillo). EM (IEN): masa calc. para C¹⁵H¹⁹N³O⁴305,1, m/z encontrado 306,1 [M+H]+.

Etapa 2: éster í-butílico del ácido 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-1-carboxílico

iim

Se cargó un matraz de reacción con éster í-butílico del ácido 6-nitro-3',6'-dihidro-[3,4'-bipiridin]-1'(2'H)-carboxílico (0,9 g, 3,0 mmol) preparado en la etapa 1, acetato de etilo/metanol (10 ml/10 ml) y Pd/C (0,1 g). Se le introdujo hidrógeno y la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 2 h. El producto de reacción se filtró y se concentró para obtener el producto del título (790 mg, sólido blanquecino).

EM (IEN): masa calc. para C¹⁵H²³N³O²277,2, m/z encontrado 278,2 [M+H]+.

Se llevaron a cabo otras etapas de acuerdo con etapas similares a las Etapas 3-7 del Ejemplo 1 para obtener el compuesto del título de este ejemplo.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,61 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,26 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,93 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,86 (s, 1H), 7,61 (dd, 1H, J = 8,4 Hz, 2,0 Hz), 3,24-3,21 (m, 2H), 2,77(t, 1H, J = 10,8 Hz), 2,64-2,61 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,06-1,91 (m, 4H), 1,89-1,84 (m, 3H), 1,72-1,63 (m, 2H), 1,39 (s, 3H), 0,50 (t, 1H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z encontrado 463,3[M+H]+.

Ejemplo 12

N-(5-(1-Etilpiperidin-4-il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Este producto intermedio se obtuvo de acuerdo con una etapa similar a la del Ejemplo 11.

Se cargó un matraz de reacción con 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro [ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino 50 mg (0,1 mmol) preparado en la etapa anterior, acetaldehído 26 mg (0,6 mmol) y diclorometano 5 ml, y la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 0,5 h. Después se añadió trietilborohidruro sódico 60 mg (0,28 mmol) y la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 2 h. La solución de reacción se añadió con 20 ml de solución saturada de carbonato de sodio acuoso, y después se extrajo tres veces con diclorometano (10 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron a presión reducida y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE/EA = 5:1) para dar el compuesto del título (11 mg, 22 % de rendimiento).

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,45 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,38 (s, 1H), 8,33 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,25 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,62 (dd, 1H, J = 8,8, 2,0 Hz), 3,14-3,11 (m, 2H), 2,55-2,46 (m, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,18 2,03 (m, 8H), 1,90-1,82 (m, 6H), 1,15 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN): m/z 503,3[M+H]+.

Ejemplo 13

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 11.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,14 (s a, 1H), 8,48 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,34-8,30(m, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,58 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,22-3,19 (m, 2H), 2,76 (t, 2H, J = 11,6 Hz), 2,66-2,60 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,16 2,02 (m, 6H), 1,88-1,83 (m, 4H), 1,69-1,61 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 475,3[M+H]+.

Ejemplo 14

5-Fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,28 (s a, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,16-8,09 (m, 3H), 7,63 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,32 (dd, 1H, J = 9,2 Hz, 2,8 Hz), 3,08-3,06 (m, 4H), 3,03-3,02 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,29 2,04 (m, 7H), 1,86-1,83 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 458,3[M+H]+.

Ejemplo 15

5-Fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,99 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 8,15-8,11 (m, 2H), 7,65 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,58 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,0 Hz), 3,22-3,19 (m, 2H), 2,76(t, 2H, J = 10,4 Hz), 2,65-2,59 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,18-2,05 (m, 7H), 1,88-1,83 (m, 4H), 1,70-1,60 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 457,3[M+H]+.

Ejemplo 16

4-(3,3-Dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Etapa 1: preparación de 5-bromo-3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol

10 ml de ácido acético, 5,0 g (20,75 mmol) de hidrocloruro de (4-bromo-2-fluorofenil)hidrazina y 2,35 g (20,75 mmol) de 3-etilpentan-2-ona se añadieron a un matraz de reacción, y la mezcla se dejó reaccionar a reflujo durante 5 h. El producto de reacción se sometió a evaporación rotatoria para eliminar el disolvente, se añadió con 50 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (50 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio, se filtraron, se sometieron a evaporación rotatoria y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA: PE = 1:100-1:10) para obtener el compuesto del título (2,5 g, aceite amarillo), 87,1 % de rendimiento.

EM (IEN): m/z 286,1 [M+H]+.

Etapa 2: preparación de 3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3H-indol

2,0 g (7,07 mol) de 5-bromo-3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol preparado en la Etapa 1, 1,97 g (7,77 mmol) de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bis(1,3,2-dioxaborolano), 1,38 g (1,41 mmol) de acetato de potasio, 10 ml de 1,4-dioxano y 1,03 g (1,41 mmol) de Pd(dppf)Cl²se añadieron al matraz de reacción y la mezcla se calentó a 90 °C bajo la protección de gas de nitrógeno para llevar a cabo la reacción durante toda la noche. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se diluyó con 10 ml de agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo (10 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 15 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA: PE=1:50 a 1:10) para dar el compuesto del título (2,0 g, sólido amarillo), 86,96 % de rendimiento.

EM (IEN): m/z 332,3 [M+H]+.

Etapa 3: 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol

Se cargó un matraz de reacción con 2,0 g (6,05 mmol) de 3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3H-indol preparado en la Etapa 2, 1,10 g (6,65 mmol) de 2,4-dicloro-5-fluoropirimidina, 2,56 g (12,1 mmol) de fosfato de potasio, 20 ml/5 ml de dioxano/agua, 0,69 g (0,61 mmol) de Pd(PPh3)4, y la mezcla se calentó a 120 °C bajo la protección de gas de nitrógeno y se dejó reaccionar durante 2 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se diluyó con 10 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de diclorometano. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 20 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron a presión reducida y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA: PE = 1:100-1:10) para dar el compuesto del título (1,2 g, sólido amarillo), 59,4 % de rendimiento.

EM (IEN): m/z 336,1 [M+H]+.

Etapa 4: preparación de éster í-butílico del ácido 4-(6-((4-(3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoropirimidin-2-il)amino)piridin-3-il)piperazin-1 -carboxílico

Se cargó un matraz de reacción con 400,0 mg (1,19 mmol) de 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol preparado en la Etapa 3, 331,9 mg (1,19 mmol) de 4-(6-aminopiridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de t-butilo preparado de acuerdo con las Etapas 1-2 del Ejemplo 1, 776,2 mg (2,38 mmol) de carbonato de cesio, 10 ml de 1,4-dioxano, 109,5 mg (0,12 mmol) de Pd2(dba)3, y 69,0 mg (0,12 mmol) de 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno, y protegido con nitrógeno. La mezcla se permitió para llevar a cabo la reacción en microondas a 130 °C durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se diluyó con 10 ml de agua y se extrajo tres veces con 10 ml de diclorometano. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 30 ml de solución salina, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron mediante CCF para obtener el compuesto del título (253,1 mg, sólido amarillo), 36,74 % de rendimiento.

EM (IEN): m/z 578,3 [M+H]+.

Etapa 5: 4-(3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Se cargó un matraz de reacción con el éster í-butílico del ácido 4-(6-((4-(3,3-dietil-7-fluoro-2-metM-3H-indol-5-il)-5-fluoropirimidin-2-il)amino)piridin-3-M)piperazin-1-carboxíMco, 250,0 mg (0,43 mmol) preparado en la etapa 4, diclorometano 4 ml, y TFA 1 ml. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y se eliminó el disolvente. El residuo se ajustó a pH 8 con 5 ml de solución saturada de bicarbonato sódico y se extrajo tres veces con diclorometano (5 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 10 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron a presión reducida y se separaron mediante CCF para dar el compuesto del título (201,2 mg, sólido amarillo), 97,6 % de rendimiento.

EM (IEN): m/z 478,3 [M+H]+.

Etapa 6: 4-(3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Se cargó un matraz de reacción con 50,0 mg (0,10 mmol) de 4-(3,3-dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino, 30,8 mg (1,0 mmol) de formaldehído, 2 ml de 1-etil-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida, 65,3 mg (0,3 mmol) de trietilborohidruro de sodio, y la mezcla se dejó reaccionar durante toda la noche. Se añadieron 2 ml de metanol para desactivar la reacción, y el producto de reacción se extrajo tres veces con diclorometano (5 ml por cada vez). La fase orgánica se lavó una vez con 10 ml de solución de salina saturada, se desecó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se separó por CCF para obtener el compuesto del título (20,3 mg, sólido amarillo), 39,4 % de rendimiento.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,57 (s a, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,28 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,18 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,91 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,78 (s, 1H), 7,33 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,16-3,15 (m, 4H), 2,58-2,57 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,04-1,95 (m, 2H), 1,85-1,78 (m, 7H), 0,43 (t, 6H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 492,3[M+H]+.

Ejemplo 17

5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

El producto intermedio 5'-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol] se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 1.

Etapa 1: 1'-metil-6-nitro-1',2',3',6'-tetrahidro-3,4'-bipiridina

Se cargó un matraz de reacción con 5-bromo-2-nitropiridina (20,3 g, 0,1 mol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridina (22,3 g, 0,1 mol), dioxano/agua (250 ml/30 ml), carbonato de cesio (66 g, 0,2 mol) y Pd(dppf)Cl²(7,33 g, 0,01 mol). La mezcla se agitó para reaccionar a 85 °C bajo la protección del gas nitrógeno durante 12 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna (PE/EA = 1:1 para DCM/MeOH = 20:1) para dar el producto del título (5,7 g, sólido blanco).

EM (IEN): masa calc. para C¹¹H¹³N³O²219,1, m/z encontrada 220,1 [M+H]+.

Etapa 2: 5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-amino

Se cargó un matraz de reacción con 1'-metil-6-nitro-1',2',3',6'-tetrahidro-3,4'-bipiridina (657 mg, 3,0 mmol) preparado en la Etapa 1, etil acetato/metanol (10 ml/10 ml), y Pd/C (0,1 g). Se introdujo gas de hidrógeno en la mezcla, y la mezcla se agitó para reaccionar durante 2 h, se filtró y se concentró para dar el producto del título (550 mg, sólido blanco).

EM (IEN): masa calc. para C¹¹H¹⁷N³191,1, m/z encontrado 192,2 [M+H]+.

Etapa 3: 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

Se cargó un matraz de reacción con el producto intermedio 5'-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol] (150,0 mg, 0,45 mmol), 5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-amino (86,6 mg, 0,45 mmol) preparado en la Etapa 2, carbonato de cesio (293,2 mg, 0,9 mmol), dioxano (3 ml), Pd2(dba)3 (44,7 mg, 0,05 mmol), 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (30,4 mg, 0,05 mmol). La mezcla se calentó a 150 °C bajo la protección de gas nitrógeno para llevar a cabo la reacción en microondas durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con diclorometano tres veces (10 ml por cada vez). Las fase orgánica combinada, se lavó una vez con 30 ml de solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se desecó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se separó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 50:1) para obtener el compuesto del título (51,1 mg, sólido amarillo).

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,38 (s a, 1H), 8,49 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,34-8,33 (m, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,58 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 1,6 Hz), 3,01-2,98 (m, 2H), 2,52-2,44 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,25 2,04 (m, 8H), 1,87-1,76 (m, 6H).

EM (IEN):m/z 489,3[M+H]+.

Ejemplo 18

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 16.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,48 (s a, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,28 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,17 (s, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,34 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,17-3,16 (m, 4H), 2,59-2,58 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,01-1,96 (m, 1H), 1,87-1,82 (m, 1H), 1,35 (s, 3H), 0,47 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 478,3[M+H]+.

Ejemplo 19

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-2-il)-5-fluoropirimidin-2-amino

Etapa 1: preparación de 1-etil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazina

4,00 g (19,7 mmol) de 5-bromo-2-nitropiridina, 3,40 g (2,98 mmol) de 1-etilpiperazina, 4,10 g (29,6 mmol) de carbonato de potasio, 0,4 g (1,2 mmol) de yoduro de tetrabutilamonio, y 40 ml de DMSO se añadieron a un matraz de reacción y se reaccionaron a 80 °C durante 16 h. La solución de reacción se vertió después en agua helada y se extrajo tres veces con diclorometano (20 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 100:1-10:1) para dar 3,59 g de un sólido amarillo, rendimiento de 56,1 %.

EM (IEN): m/z 237,2 [M+H]+.

Etapa 2: preparación de 5-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-2-amino

650 mg (2,13 mmol) de 1-etil-4-(6-nitropiridin-3-il)piperazina preparado en la Etapa 1 se disolvieron en 45 ml de metanol, se añadió paladio de carbono al 10 % (250 mg, cat.), la atmósfera se reemplazó tres veces con gas de hidrógeno, y la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 12 h en la atmósfera de gas hidrógeno bajo 3 atmósferas. Después de que se detuvo la reacción, el producto de reacción se filtró con una pequeña cantidad de diatomita, y la torta de filtro se lavó una vez con 20 ml de un disolvente mixto de diclorometano y metanol (V/V = 10:1). Después, el filtrado se recogió y se concentró a presión reducida para dar 559 mg de producto bruto del compuesto del título (material transparente y viscoso) que se usó en la reacción posterior directamente sin purificación adicional.

EM (IEN): m/z 207,1 [M+H]+.

Etapa 3: preparación de 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-3-etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol

Este producto intermedio se preparó mediante el mismo método que las Etapas 1-3 del Ejemplo 16.

Etapa 4: preparación de 4-(3-etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-2-il)-5-fluoropirimidin-2-amino

Se cargó un matraz de reacción con 321 mg (1 mmol) de 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-3-etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol preparado en la Etapa 3, 206 mg (1 mmol) de 5-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-2-aminoobtenido en la Etapa 2, 2 ml de 1,4-dioxano, 650 mg (2 mmol) de Cs2CO3, 91 mg (0,1 mmol) de Pd2(dba)3, y 58 mg (0,1 mmol) de difenilfosfino. La mezcla se calentó a 120 °C para llevar a cabo la reacción en microondas durante 1 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió con 10 ml de agua y luego se extrajo con acetato de etilo tres veces (40 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 40 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato sódico, se filtraron, se concentraron a presión reducida y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 10:1) para dar el compuesto del título (49 mg, sólido amarillo), rendimiento de 10 %.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,25 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,28 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,17 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H, J = 9,2 Hz, 2,8 Hz), 3,20-3,18 (m, 4H), 2,64-2,61 (m, 4H), 2,51 (c, 2H, J = 6,8 Hz), 2,31 (s, 3H), 2,03-1,94 (m, 1H), 1,89-1,82 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,13(t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,48(t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 492,3[M+H]+.

Ejemplo 20

5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,77 (s a, 1H), 8,63 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 8,02-7,98 (m, 3H), 7,82 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,41 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,8 Hz), 3,13-3,11 (m, 4H), 2,49-2,46 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,23-2,07 (m, 6H), 1,76-1,74 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 490,3[M+H]+.

Ejemplo 21

N-(5-(1-Etilpiperidin-4-il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 12.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,91 (s a, 1H), 8,65 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 8,28-8,14 (m, 3H), 8,04 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,43 (dd, 1H, J = 8,4 Hz, 2,0 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,00-2,97 (m, 4H), 2,38-2,33 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,08 2,07 (m, 6H), 1,99-1,94 (m, 2H), 1,77-1,64 (m, 6H), 1,02(t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 485,3[M+H]+.

Ejemplo 22

N-(5-(4-Etilpiperazin-1-il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 19.

RMN de 1H (400 MHz,CDCla) 88,87 (s a, 1H), 8,42 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,13-8,10(m, 3H), 7,65 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,35 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,4 Hz), 3,19-3,18 (m, 4H), 2,64-2,63 (m, 4H), 2,53 (c, 2H, J = 6,8 Hz), 2,35 (s, 3H), 2,27-2,06 (m, 6H), 1,88-1,85 (m, 2H), 1,14 (t, 3H, J = 6,8 Hz).

EM (IEN):m/z 486,4[M+H]+.

Ejemplo 23

N-(5-(4-Metilpiperidin-1 -il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 17.

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,24 (s a, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,31 (s, 1H), 8,14-8,09 (m, 2H), 7,64 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,57 (dd, 1H, J = 8,4 Hz, 2,4 Hz), 3,00-2,98 (m, 2H), 2,49-2,46 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,16-1,99 (m, 8H), 1,85-1,76 (m, 6H).

EM (IEN):m/z 471,3[M+H]+.

Ejemplo 24

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,74 (s a, 1H), 8,50 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,35-8,32 (m, 2H), 7,88-7,82 (m, 2H), 7,57 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 2,97-2,95 (m, 2H), 2,49-2,42 (m, 1H), 2,30 (s, 6H), 2,24-1,93 (m, 3H), 1,88-1,74 (m, 5H), 1,35 (s, 3H), 0,47 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 477,3[M+H]+.

Ejemplo 25

5-Fluoro-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)-4-(2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 89,28 (s a, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,18 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,12-8,09 (m, 2H), 7,64 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,33 (dd, 1H, J = 9,2 Hz, 2,4 Hz), 3,16-3,14 (m, 4H), 2,59-2,58 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,15-2,06 (m, 6H), 1,87-1,83 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 472,3[M+H]+.

Ejemplo 26

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(1-etMpiperidin-4-il)piridin-2-M)-5-fluoropirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,99 (s a, 1H), 8,70 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,19 (s, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,04-3,02 (m, 2H), 2,42-2,41 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,04 1,99 (m, 3H), 1,89-1,84 (m, 1H), 1,78-1,63 (m, 4H), 1,33 (s, 3H), 1,04(t, 3H, J = 6,8 Hz), 0,36 (t, 3H, J = 7,2 Hz). EM (IEN):m/z 491,3[M+H]+.

Ejemplo 27

N-(5-(4-Etilpiperazin-1-il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[cidopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,92 (s a, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 9,2 Hz, 2,8 Hz), 3,21-3,19 (m, 4H), 2,65-2,63 (m, 4H), 2,51(c, 2H, J = 7,2 Hz), 2,38 (s, 3H), 2,22-2,07 (m, 6H), 1,89-1,86 (m, 2H), 1,15 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 504,3[M+H]+.

Ejemplo 28

2-(4-(6-((5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-il)amino)piridin-3-il)piperazin-1-il)etanol

Se cargó un matraz de reacción con 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il) pirimidin-2-amino 20 mg (0,04 mmol, preparado con el mismo método del Ejemplo 6), 16 mg (0,12 mmol) de 2-bromoethanol, 2 ml de DMF y 17 mg (0,12 mmol) de carbonato de cesio. La mezcla se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h, y después el producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo (40 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 40 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato sódico, se filtraron, se concentraron a presión reducida y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 10:1) para dar el compuesto del título (10 mg, sólido amarillo), rendimiento de 55 %.

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 88,52 (s a, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,09 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,36 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,70-3,68 (m, 2H), 3,19-3,18 (m, 4H), 2,71-2,63 (m, 7H), 2,39 (s, 3H), 2,25-2,00(m, 6H), 1,90-1,87 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 520,3[M+H]+.

Ejemplo 29

4-(3,3-Dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperazin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,66 (s a, 1H), 8,45 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,11 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,81 (s, 1H), 7,37 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,4 Hz), 3,13-3,12 (m, 4H), 3,08-3,07 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 2,08-1,99 (m, 2H), 1,91-1,82 (m, 3H), 0,46 (t, 6H, J = 7,6 Hz).

EM (IEN):m/z 478,3[M+H]+.

Ejemplo 30

2-(4-(6-((5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-il)amino)piridin-3-il)piperidin-1-il)etanol

Un matraz de reacción se cargó con 20 mg (0,04 mmol) de 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperidin-4-il)piridin-2-il) pirimidin-2-amino preparado con métodos similares a los del Ejemplo 13, 16 mg (0,12 mmol) de 2-bromoetanol, 2 ml de DMF y 17 mg (0,12 mmol) de carbonato de cesio, y la mezcla se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h. Después, el producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió con 10 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces (40 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 40 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato sódico anhidro, se filtraron y concentraron a presión reducida y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 10:1) para dar el compuesto del título (10 mg, sólido amarillo), rendimiento de 55 %.

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 88,63 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,34 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,26 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,67-3,66 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,60-2,52 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,25-2,11 (m, 8H), 1,89-1,83 (m, 4H), 1,80-1,77 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 519,3[M+H]+.

Ejemplo 31

5-Fluoro-4-(7-fluoro-2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, Metanol-d4) 88,57 (s a, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,18 (s, 1H), 8,13 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,84 (s, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,51 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 3,21-3,18 (m, 2H), 2,60-2,54 (m, 4H), 2,50-2,44 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 1,90-1,79 (m, 4H), 1,38 (s, 6H).

EM (IEN):m/z 463,3[M+H]+.

Ejemplo 32

4-(3-Etil-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 6.

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,68 (s a, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,32 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,18 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 8,11 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,64 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,30 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 3,05-3,04 (m, 4H), 3,00-2,98 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,00-1,90(m, 2H), 1,83-1,74 (m, 1H), 1,32 (s, 3H), 0,45 (t, 1H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 446,3[M+H]+.

Ejemplo 33

4-(3-Etil-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(piperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 13.

RMN de 1H (400 MHz, Metanol-d4) 88,33 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 8,16-8,13 (m, 2H), 7,95-7,93 (m, 2H), 7,48-7,41 (m, 2H), 3,18-3,15 (m, 2H), 2,73(t, 1H, J = 11,6 Hz), 2,59-2,53 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,01-1,96 (m, 1H), 1,89-1,83 (m, 1H), 1,79 1,76 (m, 2H), 1,66-1,58 (m, 2H), 1,32 (s, 3H), 0,42(t, 1H, J = 6,8 Hz).

EM (IEN):m/z 445,3[M+H]+.

Ejemplo 34

4-(3-Etil-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, Metanol-d4) 88,42 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,18 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,09-8,01 (m, 3H), 7,57 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,42-7,37 (m, 1H), 3,22-3,15 (m, 4H), 2,61-2,60(m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,07-2,02 (m, 1H), 1,94 1,89 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 0,43 (t, 1H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 460,3[M+H]+.

Ejemplo 35

4-(3-Etil-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 88,97 (s a, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,15 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,04 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,59 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 2,4 Hz), 3,01-2,98 (m, 4H), 2,51-2,45 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,10-1,97 (m, 3H), 1,85-1,81 (m, 5H), 1,37 (s, 3H), 0,49 (t, 1H, J = 7,2 Hz). EM (IEN):m/z 459,3[M+H]+.

Ejemplo 36

4-(3-Etil-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-N-(5-(4-etilpiperazin-1 -il)piridin-2-il)-5-fluoropirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCb) 88,93 (s a, 1H), 8,44 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 8,15-8,13 (m, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 3,19-3,18 (m, 4H), 2,63-2,62 (m, 4H), 2,52-2,47 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,02-1,97 (m, 1H), 1,86-1,80(m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,14(t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,57(t, 1H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 474,3[M+H]+.

Ejemplo 37

5-Fluoro-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)-4-(2,3,3-trimetil-3H-indol-5-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 89,03 (s a, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 8,29 (s, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,60 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, 1,6 Hz), 3,00-2,97 (m, 2H), 2,49-2,44 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,10 2,03 (m, 2H), 1,84-1,79 (m, 4H), 1,37 (s, 6H).

EM (IEN):m/z 445,3[M+H]+.

Ejemplo 38

4-(3,3-Dietil-7-fluoro-2-metil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,95 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,19-8,11 (m, 2H), 7,89-7,84 (m, 2H), 7,67 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 2,87-2,85 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,02-1,92 (m, 6H), 1,90-1,65 (m, 4H), 0,34 (m, 6H).

EM (IEN):m/z 491,3[M+H]+.

Ejemplo 39

1-(2-((4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoropirimidin-2-il)amino)-7,8-dihidro-1,6-naftiridina-6(5H)-il)-2-hidroxiacetamida

Etapa 1: 2-(2-doro-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-6(5H)-il)-2-acetoxiacetamida

Se cargó un matraz de reacción con 1,0 g (5,95 mmol) de 2-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-1,6-naftiridina, 1,21 g (11,90 mmol) de trietilamina, y 5 ml de diclorometano, y después se añadió lentamente gota a gota cloruro de 2-cloro-2-acetoxiacetilo (1,22 g, 8,93 mmol). La mezcla se dejó reaccionar durante 1 h a temperatura ambiente, y la reacción se inactivó con 5 ml de agua. El disolvente se eliminó, y el residuo se extrajo tres veces con diclorometano (15 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 10 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto bruto del compuesto del título (1,09 g, blanquecino), rendimiento de 68,21 %.

EM (IEN): m/z 269,1 [M+H]+.

Etapa 2: 1-(2-((4-(3-etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoropirimidin-2-il)amino)-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-6(5H)-il)-2-hidroxiacetamida

Se cargó un matraz de reacción con 101 mg (0,34 mmol) de 4-(3-etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoropirimidin-2-amino preparado por el método similar a las etapas 1-3 del Ejemplo 1, 85,2 mg (0,32 mmol) de 2-(2-cloro-7,8-dihidro-1,6-naftiridina-6(5H)-il)-2-acetoxiacetamida, 10 ml de dioxano, 65,3 mg (0,68 mmol) de ferc-butóxido de sodio, 31,2 mg (0,034 mmol) de Pd2(dba)3, 19,7 mg (0,034 mmol) de 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno. La mezcla se calentó a 120 °C y se permitió llevar a cabo la reacción en microondas durante 1 h, y después, el producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió 50 ml de agua y se extrajo tres veces con acetato de etilo (50 ml por cada vez). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron y se separaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 10:1) para dar el compuesto del título (20 mg, sólido blanco), rendimiento de 12 %.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 89,98 (s, 1H), 8,70 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,87 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,64-7,57 (m, 1H), 4,68-4,55 (m, 3H), 4,22-4,21 (m, 2H), 4,21-4,19 (m, 2H), 2,89-2,81 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,04-1,84 (m, 2H), 1,33 (s, 3H), 0,37 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 493,2[M+H]+.

Ejemplo 40

1-(2-((5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-il)amino)-7,8-dihidro-1,6-naftiridina-6(5H)-il)-2-hidroxiacetamida

El compuesto del título se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 39.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da) 610,07(s a, 1H), 8,69 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 8,53 (s, 1H), 8,09-8,02 (m, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,88 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 7,62-7,54 (m, 1H), 4,73(s a, 1H), 4,62-4,61 (m, 2H), 4,21-4,19 (m, 2H), 2,89-2,81 (m, 2H), 2,50 (s, 2H), 2,34-2,11 (m, 5H), 1,75-1,72 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 505,2[M+H]+.

Ejemplo 41

N-(5-(4-(Cidopropilmetil)piperazin-1-il)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[cidopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

El producto intermedio de 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)pirimidin-2-amino se obtuvo mediante las etapas similares a las del Ejemplo 6.

El producto intermedio anterior 5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-(piperazin-1-il)piridin-2-il) pirimidin-2-amino (150 mg, 0,32 mmol), ciclopropano de bromometilo, acetonitrilo (5 ml), y carbonato de potasio (130,0 mg, 0,96 mmol) se añadieron a un matraz de reacción, y se calentó a 80 °C y se dejó reaccionar durante 4 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió con 50 ml de agua y se extrajo con 10 ml de diclorometano tres veces (10 ml por cada vez). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 15 mg de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y se separaron mediante cromatografía en columna (diclorometano/metanol = 10:1) para dar el compuesto del título de este ejemplo (42,1 mg, sólido blanco).

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 69,89 (s, 1H), 8,68 (m, 1H), 8,64-8,01 (m, 3H), 7,87 (d, 1H, J = 14,4 Hz), 7,42-7,40 (m, 1H), 3,14-3,13 (m, 5H), 2,60-2,51 (m, 5H), 2,33 (s, 3H), 2,24-2,23 (m, 2H), 2,09-2,02 (m, 6H), 1,99-1,97 (m, 2H), 1,75-1,74 (m, 2H), 0,85-0,83 (m, 2H), 0,48-0,47 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 530,3[M+H]+.

Ejemplo 42

4-(3-Etil-7-fluoro-2,3-dimetil-3H-indol-5-il)-5-fluoro-N-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-da) 810,06 (s a, 1H), 8,72 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,18-8,15 (m, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,86 (d, 1H, J = 11,6 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 3,42 (s, 2H), 2,35-2,28 (m, 8H), 2,14 (s, 3H), 2,04-1,98 (m, 1H), 1,89-1,84 (m, 1H), 1,34 (s, 3H), 0,36 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

EM (IEN):m/z 492,3[M+H]+.

Ejemplo 43

5-Fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[cidopentano-1,3'-indol]-5'-il)-N-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 810,09 (s, 1H), 8,71 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,18-8,15 (m, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,43 (s, 2H), 2,50-2,34 (m, 8H), 2,14 (s, 3H), 2,14-2,08 (m, 6H), 1,75-1,74 (m, 2H), 1,75-1,72 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 504,2[M+H]+.

Ejemplo 44

N-(5-(1-Metilpiperidin-4-il)-(6-metilpiridin)-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), 89,84 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,98-8,01 (d, 2H), 7,81-7,85 (d, 1H), 2,87 2,90 (d, 2H), 2,50-2,51 (m, 1H), 2,20-2,34 (m, 6H), 1,78-1,98 (m, 8H), 1,69-1,75 (m, 6H).

EM (IEN):m/z 503,3[M+H]+.

Ejemplo 45

N-(5-((1-Metilpiperidin-4-il)oxi)-piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5’-il)pirimidin-2-amino

El producto intermedio de 5'-(2-doro-5-fluoropirimidin-4-il)-7'-fluoro-2'-metilespiro[cidopentano-1,3'-indol] se preparó mediante las etapas similares a las del Ejemplo 1.

Etapa 1: 1-metilpiperidin-4-il-4-metilbencenosulfonato

4-Hidroxi-1-metilpiperidina (1,000 mg, 8,69 mmol), cloruro de p-toluenosulfonilo (3310 mg, 17,38 mmol), diclorometano (50 ml) y trietilamina (1 ml) se añadieron a un matraz de reacción, y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. El producto de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió con 50 ml de agua y se extrajo con 30 ml de diclorometano tres veces (30 ml por cada vez). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 mg de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y se separaron mediante cromatografía en columna (diclorometano/metanol = 50:1) para dar 1,87 g del producto intermedio, rendimiento de 80,0 % (sólido amarillo pálido).

Etapa 2: 2-bromo-5-((1-metilpiperidin-4-il)oxi)piridina

El producto intermedio 1-metilpiperidin-4-il 4-metilbenzenosulfonato (1,000 mg, 3,70 mmol), 2-bromo-5-hidroxipiridina (637 mg, 3,70 mmol), y DMF (50 ml) se añadieron a un matraz de reacción, y la mezcla se calentó a 90 °C y dejó reaccionar durante 2 h. El producto de reacción se añadió con 50 ml de agua y se extrajo con diclorometano tres veces (30 ml por cada vez). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 mg de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y se separaron mediante cromatografía en columna (diclorometano/metanol = 40:1) para dar 0,49 g del producto intermedio (sólido amarillo pálido), rendimiento de 50,1 %.

Etapa 3: 5-((1-metilpiperidin-4-il)oxi)-piridin-2-amina

Se cargo un matraz de reacción con el producto intermedio 2-bromo-5-((l-metMpiperidin-4-M)oxi)pmdma (1,000 mg, 3,70 mmol), bis(trimetilsilil)amida de sodio (618 mg, 3,70 mmol), tetrahidrofurano (50 ml), 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo (120 mg, 0,37 mmol) y tris(dibencilidenaindenoacetona)dipaladio (338 mg, 0,37 mmol), y la mezcla se calentó a 65 °C y dejó reaccionar durante 12 h. El producto de reacción se añadió con 50 ml de agua, se extrajo con diclorometano tres veces (30 ml por cada vez). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de solución salina saturada, se desecaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y se separaron mediante cromatografía en columna (diclorometano/metanol = 10:1) para dar el producto intermedio (0,37 g, sólido amarillo), rendimiento de 49,3 %. Etapa 4:

N-(5-((1-metilpiperidin-4-il)oxi)-piridin-2-il)-5-fluoro-4-(7'-fluoro-2'-metilespiro[ciclopentano-1,3'-indol]-5'-il)pirimidin-2-amino se preparó por el método similar a la Etapa 6 del Ejemplo 1.

RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), 89,69 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,93-7,99 (d, 1H), 7,80-7,83 (d, 1H), 7,81-7,85 (d, 1H), 7,12-7,14 (d, 1H), 5,76-5,82 (m, 1H), 5,02-5,13 (m, 2H), 3,79 (s, 2H), 2,56-2,59 (m, 13H), 2,28-2,33 (m, 6H), 1,74-1,99 (m, 2H).

EM (IEN):m/z 505,2[M+H]+.

El control utilizado en los siguientes ejemplos experimentales con el n.° LY2835219 se preparó de acuerdo con el método de preparación del documento de patente n.° WO2010075074, y su fórmula estructural fue la que se muestra en la fórmula estructural 3 de los antecedentes.

Ejemplo experimental 1

Medición de la actividad inhibidora de CDK cinasa de los compuestos de la presente invención

El efecto inhibidor in vitro de los compuestos de la presente invención sobre la actividad cinasa de CDK (CDK1, CDK4 y CDK6) se ensayó mediante el siguiente método.

1.1 Información del instrumento y del estuche

1.2 Preparación experimental

1.2.1 Preparación del tampón de reacción cinasa I: El tampón de reacción A x5 (Promega; V307A-C) proporcionado en el estuche se mezcló y se diluyó con H²O milli Q y DTT (ditiotreitol) 0,1 M para dar el tampón cinasa x4, y después se adicionó H²O Milli Q para formular finalmente la solución en el tampón cinasa x1.

Preparación del tampón de reacción cinasa II: DMSO (dimetilsulfóxido) al 0,5 % se añadió al tampón de reacción cinasa x1 y se mezcló bien.

1.2.2 Preparación de la solución cinasa: se prepararon soluciones de cinasa que tienen las concentraciones requeridas para cada sistema de reacción a partir de 100 ng/pl de solución madre de cinasa y el tampón de reacción de cinasa x1.

1.2.3 Preparación de la solución del compuesto de prueba y la solución de control LY2835219:

(1) Preparación de la solución de control LY2835219

a. Se tomó 1 pl de solución madre de la sustancia patrón 10 mM y se añadió a 9 pl de tampón de reacción de cinasa I y se mezcló bien; después se añadieron 90 pl de tampón de reacción de cinasa I y se mezcló bien; después se añadió 100 pl de tampón de reacción de cinasa I y se mezcló bien. La concentración final fue 50 pM.

b. Se añadieron 40 pl de tampón de reacción cinasa II de B2 a B10 de una placa de 96 pocillos, y 50 pl de la solución anterior se añadió a B1;

c. Se tomaron 10 pl de solución del pocillo B1, se añadió a B2 y se mezcló bien; después se tomaron 10 pl de la solución resultante y se añadió a B3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a B9, para obtener soluciones de control que se diluyen secuencialmente en 5 veces.

(2) Preparación de la solución del compuesto de prueba:

a. Se tomaron las soluciones de los compuestos de prueba a una cierta concentración, respectivamente, diluidas con el tampón de reacción de cinasa I hasta una concentración final de solución de compuesto de 50 pM;

b. Se añadieron 40 pl de tampón de reacción cinasa II de H²a H¹⁰de la placa de 96 pocillos; y 50 pl de la solución anterior se añadieron a H1;

c. Se tomaron 10 pl de solución del pocillo H1, se añadió a H²y se mezcló bien; después se tomaron 10 pl de la solución resultante y se añadieron a H3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a H9, para obtener soluciones de compuestos de prueba que se diluyen secuencialmente en 5 veces.

1.2.4 Preparación de una solución mixta de sustrato de reacción y ATP:

a. Preparación de la solución ATP:

200 pl de solución de ATP 0,1 mM: se añadieron 2 pl de ATP 10 mM a 198 pl de tampón de reacción cinasa I; 300 pl de solución de ATP 50 pM: se añadieron 150 pl de tampón de reacción cinasa I a 150 pl de la solución anterior de ATP 0,1 mM;

b. Preparación de 300 pl de solución de sustrato de reacción:

se añadieron 150 pl de solución madre del sustrato de reacción a 1 pg/pl a 150 pl del tampón de reacción cinasa I, y se mezcló bien;

c. Las soluciones a/b anteriores se mezclaron para obtener soluciones mixtas, respectivamente.

1.3 Proceso experimental:

1.3.1: se tomaron 2 pl de soluciones de compuestos de diversas concentraciones, se añadieron a una placa de 384 pocillos y se centrifugaron 3 min;

1.3.2: se añadieron a cada pocillo 4 pl de solución cinasa, se centrifugó a 5000 rpm y a 18 °C durante 10 minutos, y se agitaron en un agitador de placas durante 10 minutos;

1.3.3: se añadieron 4 pl de solución mixta de sustrato y ATP a cada pocillo, se centrifugó a 5000 rpm y 18 °C durante 10 minutos, y se agitó en un agitador de placas a 37 °C durante 90 minutos;

1.3.4: se sacó la placa de 384 pocillos y se dejó reposar a temperatura ambiente;

1.3.5: se añadieron 10 pl de reactivo ADP-Glo a cada pocillo, se centrifugó a 5000 rpm y a 18 °C durante 18 minutos, y se agitó en un agitador de placas a 25 °C durante 40 minutos, y después se detuvo la reacción; 1.3.6: se añadieron 20 pl de reactivo de detección de cinasa a cada pocillo, se centrifugó a 5000 rpm y a 18 °C durante 10 minutos, y se agitó en un agitador de placas a 25 °C durante 30 minutos; y

1.3.7: el lector de microplacas M1000pro se usó para leer valores de fluorescencia.

1.4 Procesamiento de datos:

La tasa de inhibición de cada compuesto en cada punto de concentración se calculó mediante la fórmula de la siguiente manera y el ajuste de la curva se realizó mediante el programa GraphPad Prism 5 para obtener el valor de CI⁵⁰.

Tasa de inhibición en cada punto de concentración (% de inh)

— _ ⁼__ ^(V_^a_^l_^o_^r_ ^d_^e_ ^f_^l_^u_^o_^re_^s_^c_^e_ⁿ_^c_^ia__ ^a_ ^c_^o_ⁿ_^c_^e_ⁿ_^tr_^a_^c_^ió_ⁿ__ ^d_^e_^l_ ^p_^u_ⁿ_^t_^o_ ^c_^e_^ro__ ^—__ ^V_^a_^lo_^r__ ^d_^e_ ^f_^lu_^o_^r_^e_^s_^ce_ⁿ_^c_ⁱ_^a_ ^e_ⁿ__ ^ca_^d_^a__ ^p_^u_ⁿ_^to__ ^d_^e_ ^c_^o_ⁿ_^c_^e_ⁿ_^t_^ra_^c_ⁱ_^ó_ⁿ_⁾^10

(Valor de fluorescencia a concentración cero)

1.5 Resultados de la prueba:

Los efectos inhibidores de LY2835219 descritos en el documento de patente n.° WO2010075074 y los compuestos de los Ejemplos 1-43 sobre CDK1/CiclinaA2 y CDK6/CiclinaD3 se expresan mediante CI⁵⁰, y los resultados específicos se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1: Resultados de detección de actividad inhibidora de los compuestos de prueba sobre CDK1/CiclinaA2 y CDK6/CiclinaD3 CI : nM

Los efectos inhibidores de algunos compuestos representativos de la presente invención sobre CDK9/CiclinaD3, Pim-1 y CDK2/CiclinaE1 y CDK4/CiclinaE1 se muestran en la Tabla 2, Tabla 3 y Tabla 4, respectivamente.

Tabla 2: Resultados de detección de actividad inhibidora de algunos compuestos de prueba sobre CDK9/CiclinaD3

CI : nM

continuación

-

T l 4: Ef i inhi i r n r ^ l m r r DK4 DK2 I : nM

1.6 Conclusión de la prueba:

1) Los compuestos de la presente invención tienen un efecto inhibidor significativo sobre CDK6 y CDK4.

2) CDK1/CDK6, CDK9/CKD6 y Pim-1/CDK6 pueden reflejar la selectividad del compuesto por las proteínas cinasas. Cuanto mayor sea el número, mejor será la selectividad del compuesto para CDK6, lo que indica que la toxicidad del compuesto para inhibir la pan-cinasa puede ser menor. El compuesto de control (LY2835219) exhibe CDK1/c Dk6 = 83,83, CDK9/CDK6 = 1,33, y Pim-1/CDK6 = 1,03; algunos de los compuestos de la presente invención muestran una mejor selectividad que LY2835219, especialmente el compuesto preparado en el Ejemplo 17 muestra una mayor actividad enzimática para CDK6 y una mejor selectividad para CDK1, CDK9 y Pim1. Ejemplo Experimental 2

Medición del efecto inhibidor de los compuestos representativos de la presente invención sobre la proliferación de las células de cáncer de mama humano MDB-MA-231.

2.1 Materiales experimentales: células de cáncer de mama humano MDA-MB-231 adquiridas del Centro de Recursos Celulares del Colegio Médico de la Unión de Pekín, DAPI (5 mg/ml, Beyotime, c1002), paraformaldehído al 4 % (DINGGUO BIOTECHNOLOGY CO. LTD, AR-0211), placa de 96 pocilios con fondo transparente negro (PE, 6005182), analizador de células 2200 (GE Healthcare).

2.2 Preparación experimental:

2.2.1 Preparación de medio para células de cáncer de mama humano MDA-MB-231: RPIM1640 FBS al 10 % penicilina/estreptomicina al 1 %

2.2.2 Preparación de soluciones del compuesto de prueba y soluciones del patrón LY2835219:

(1) Preparación de soluciones del patrón LY2835219

a. Se tomaron 3,6 pl de solución madre patrón 10 mM, se añadieron a 6,4 pl de medio y se mezclaron bien; después se añadieron 90 pl de medio y se mezclaron bien; luego se añadieron 200 pl de medio y se mezclaron bien para dar una concentración inicial de 20 mM;

b. Se añadieron 200 pl de medio que contenía DMSO al 0,2 % (dimetilsulfóxido) de B2 a B10 de una placa de 96 pocillos; se añadieron 300 pl de la solución anterior en B1; y

c. Se tomaron 100 pl de solución del pocillo B1, se añadieron a B2 y se mezcló bien; después se tomaron 100 pl de la solución resultante y se añadió a B3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a B9, para obtener soluciones patrón diluidas secuencialmente en 3 veces.

(2) Preparación de soluciones del compuesto de prueba

a. Se tomó la solución del compuesto de prueba a una cierta concentración, y se diluyó con un medio para dar una solución del compuesto con una concentración final de 20 pM;

b. Se añadieron 200 pl de medio que contenía DMSO (dimetilsulfóxido) al 0,2 % de H²a H¹⁰de la placa de 96 pocillos; y 300 pl de la solución anterior se añadieron a H1; y

c. Se tomaron 100 pl de solución del pocillo H1, se añadió a H²y se mezcló bien; después se tomaron 100 pl de la solución resultante y se añadieron en H3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a B9, para obtener soluciones del compuesto de prueba diluidas secuencialmente en 3 veces.

2.3 Proceso experimental:

2.3.1: se inocularon células MDA-MB-231 en una placa de células de 96 pocillos con fondo negro transparente a 4000 células/100 ul/pocillo, y se cultivaron durante toda la noche a 37 °C;

2.3.2: las muestras anteriores se añadieron a 100 pl/pocillo a una placa de cultivo inoculada con células, se agitó suavemente para mezclar bien y se incubó a 37 °C durante 72 horas;

2.3.3: fijación: se extrajo la placa de células, se retiró el medio y se añadió 50 pl de paraformaldehído al 4 % por pocillo para fijar durante 10 min;

2.3.4: 50 pl de glicina 0,1 M se añadió para neutralizar durante 10 min;

2.3.5: PBS (tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar dos veces;

2.3.6: permeabilización: Se añadió a cada pocillo 50 pl de Tritón X-100 (Tritón) al 0,2 % y la permeabilización se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 10 min;

2.3.7: PBS (Tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar dos veces;

2.3.8: solución madre de DAPI 5 mg/ml se diluyó en una relación de 1: 5000 (concentración final de 1 pg/ml), y la tinción se realizó a temperatura ambiente durante 20 min;

2.3.9: PBS (Tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar tres veces; y

2.3.10: la exploración y el análisis se realizaron mediante el analizador de células.

2.4 Procesamiento de datos:

La tasa de inhibición de cada compuesto en cada punto de concentración se calculó mediante la fórmula de la siguiente manera y el ajuste de la curva se realizó mediante el programa GraphPad Prism 5 para obtener el valor de CI⁵⁰,

Valor de fluorescencia a Valor de fluorescencia en ca

Tasa de inhibición en cada punto de concentración del punto da punto de concentración

concentración (% de inh) cero

Valor de fluorescencia a concentración cero * 100%

2.5 Resultados de la determinación:

La detección de los resultados de la actividad citológica de LY2835219 descritos en el documento de patente n.° WO2010075074 y los compuestos de los Ejemplos 12 y 17 se expresaron mediante CI⁵⁰, y los resultados específicos se muestran en la Tabla 5.

Tabla 5: Medición del efecto inhibidor de los compuestos representativos de la presente invención sobre la - -

2.6 Conclusión experimental:

Los compuestos de los Ejemplos 12 y 17 tienen una actividad inhibidora significativa sobre la proliferación de la estirpe celular MDA-MB-231, y los compuestos representativos de la presente invención tienen una mayor actividad inhibidora de la proliferación con respecto al compuesto de control LY2835219.

Ejemplo Experimental 3

Determinación farmacocinética en rata de compuestos representativos de la presente invención

3.1 Resumen del experimento

Se usaron ratas SD como animales de prueba, y se determinaron las concentraciones de los fármacos en el plasma de ratas en diferentes intervalos de tiempo después de la administración intravenosa y la administración intragástrica de los compuestos representativos por LC/MS/MS, para estudiar el comportamiento farmacocinético de los compuestos de la presente invención en ratas y evaluar sus características farmacocinéticas.

3.2 Esquema experimental

3.2.1 Fármacos de prueba:

El compuesto preparado en el Ejemplo 17 de la presente invención.

El fármaco de control LY2835219, se preparó por nosotros mismos.

3.2.2 Animales de prueba:

12 ratas sanas adultas SD, machos, 6-8 semanas de edad, que pesan 200-250g, adquiridas del Centro de Investigaciones de Nuevos Fármacos Suzhou ZhaoYan Co., Ltd., Licencia de producción animal n.° SCXK (Su) 2013 0003

3.2.3 Preparación de los fármacos de prueba

Administración intragástrica: se pesó una cantidad apropiada de la muestra, y se añadió con hidroxietilcelulosa al 0,1 %/ Tween 80 al 0,5 % a un volumen final para dar una solución de 1 mg/ml.

Inyección intravenosa: se pesó una cantidad apropiada de muestra y se añadió con N-metil-2-pirrolidona al 10 % y 90 % de sulfobutil-p-ciclodextrina al 18 % a un volumen final para dar solución de 0,4 mg/ml para la inyección intravenosa.

3.2.4 Administración de los fármacos de prueba

Administración intravenosa: para cada compuesto de prueba, 3 ratas SD macho se administraron por vía intravenosa a una dosis de 2 mg/kg y el volumen de administración de 1 ml/kg después de ayunar durante toda la noche.

Administración intragástrica: para cada compuesto de prueba, 3 ratas SD macho se administraron por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg y un volumen de administración de 5 ml/kg después de ayunar durante toda la noche.

3.3 Operación experimental

Antes de la administración y 0,0833, 0,25, 0,5, 1,2, 4, 8, 12 y 24 horas después de la administración, se extrajo sangre a través de la cánula en la arteria carótida. La sangre completa se anticoaguló con EDTA-K2 y se centrifugó, el sobrenadante se eliminó y el residuo se congeló a -20 °C hasta el análisis de la muestra. Las muestras de plasma se analizaron por LC-MS/^mS, el pretratamiento de la muestra se realizó mediante el uso del método de precipitación de proteínas, el intervalo lineal de análisis de las muestras fue de 1-2000 ng/ml, y el límite de cuantificación más bajo fue de 1 ng/ml.

3.4 Resultados de los datos farmacocinéticos

Los parámetros farmacocinéticos de los compuestos de la presente invención se muestran en la Tabla 6 y la Tabla 7.

Tabla 6: Parámetros PK del compuesto 17 de la presente invención en ratas sometidas a la administración ________________________________ intravenosa única (media ± DT)________________________________ Parámetros PK LY2835219 Ejemplo 17 Semivida T1/2 (h) 3,69±1,40 8,67±4,98

Área bajo la curva AUC⁰-t (ngh/ml) 1499±337,3 1018±239

Área bajo la curva AUC⁰-~ (ngh/ml) 1535±346,9 1220±456

Volumen aparente de distribución V^z(l/kg) 6,95±2,43 19,42±5,89 Velocidad de eliminación Cl (ml/min/kg) 22,4±4,49 30,0±11,1

Tiempo de retención MRT (h) 3,82±1,44 7,78±1,30

Tabla 7: Parámetros PK del compuesto 17 de la presente invención en ratas sometidas a administración _______________________________intragástrica única (media ± DT)______________________________ Parámetros PK LY2835219 Ejemplo 17 Semivida T1/2 (h) 4,07 2,00 Concentración sanguínea Cmáxima (ng/ml) 312±33,0 188±75

Área bajo la curva AUC⁰-t (ngh/ml) 3275±731 2608±1217,8

Área bajo la curva AUC⁰-~ (ngh/ml) 3438 5256

Tiempo de retención MRT (h) 7,97±1,17 10,21±0,27 Biodisponibilidad (%) 87,4 102,5

3.5 Conclusión experimental: el compuesto representativo de la presente invención (preparado en el Ejemplo 17) tiene una mayor biodisponibilidad en ratas en relación con el compuesto LY2835219, y tiene un buen efecto de absorción oral.

Ejemplo experimental 4

Determinación farmacocinética en ratón de los compuestos representativos de la presente invención

4.1 Resumen del experimento

Los ratones ICR se usaron como animales de prueba, y las concentraciones de los fármacos en el plasma de ratones en diferentes momentos después de la administración intragástrica y la administración intravenosa del compuesto representativo de la presente invención se determinaron mediante LC/MS/MS, para estudiar el comportamiento farmacocinético de los compuestos de la presente invención en ratones y evaluar sus características farmacocinéticas.

4.2 Esquema experimental

4.2.1 Fármacos de prueba:

El compuesto preparado en el Ejemplo 17 de la presente invención.

El fármaco de control LY2835219, se preparó por nosotros mismos.

4.2.2 Animales de prueba:

12 ratones adultos sanos ICR, machos, 6-8 semanas de edad, que pesan de 20-25 g, adquiridos en el Centro de Investigaciones para Nuevos Fármacos Suzhou ZhaoYan Co., Ltd. Licencia de Producción Animal n.° SCXK (Su) 2013-0003

4.2.3 Preparación de los fármacos de prueba

Se pesó una cantidad apropiada de la muestra, y se añadió con hidroxietilcelulosa al 0,1 %/ Tween 80 al 0,5 % a un volumen final para dar una solución de 0,5 mg/ml para la administración intragástrica.

Se pesó una cantidad apropiada de muestra y se añadió con N-metil-2-pirrolidona al 10 % y 90 % de sulfobutilp-ciclodextrina al 18 % a un volumen final para dar solución de 0,2 mg/ml para la inyección intravenosa.

4.2.4 Administración de los fármacos de prueba

Para cada fármaco de prueba, 3 ratones ICR machos se administraron por vía intragástrica a una dosis de 5 mg/kg y un volumen de administración de 10 ml/kg después de ayunar durante toda la noche.

Para cada fármaco de prueba, 3 ratones ICR machos se administraron por vía intravenosa a una dosis de 2 mg/kg y un volumen de administración de 10 ml/kg después de ayunar durante toda la noche.

4.3 Operación experimental

Antes de la administración y 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 y 24 horas después de la administración, la sangre del grupo administrado por vía intragástrica se extrajo a través de la cánula en la arteria carótida. La sangre completa se anticoaguló con EDTA-K2 y se centrifugó, el sobrenadante se eliminó y el residuo se congeló a -20 °C hasta el análisis de la muestra. Antes de la administración y 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 y 24 horas después de la administración, la sangre del grupo administrado por vía intravenosa se extrajo a través de la cánula en la arteria carótida. Las muestras de plasma se trataron de la misma manera que la empleada para las muestras de plasma del grupo administrado por vía intragástrica. Las muestras de plasma se analizaron por LC-MS/MS, el pretratamiento de la muestra se realizó mediante el uso del método de precipitación de proteínas, el intervalo lineal de análisis de las muestras fue de 1 2000 ng/ml, y el límite de cuantificación más bajo fue de 1 ng/ml.

4.4 Resultados de datos farmacocinéticos: véanse la Tabla 8 y Tabla 9.

Tabla 8: Parámetros PK del compuesto 17 de la presente invención en ratones sometidos a la administración ________________________________ intravenosa única (Media ± DT)________________________________ Parámetros PK LY2835219 Ejemplo 17 Semivida T1/2 (h) 1,68±0,10 9,1±0,26

Área bajo la curva AUC⁰-t (ngh/ml) 674±82,1 1137±77,8

Área bajo la curva AUC⁰-~ (ngh/ml) 679±81,0 1327±4

Volumen aparente de distribución V^z(l/kg) 7,21±1,08 19,8±0,81 Velocidad de eliminación Cl (ml/min/kg) 49,6±5,72 25,2±1,72

Tiempo de retención MRT (h) 1,64±0,17 7,51±0,28

Tabla 9: Parámetros PK del compuesto 17 de la presente invención en ratones sometidos a la administración ________________________________intragástrica única (Media ± DT)________________________________ Parámetros PK LY2835219 Ejemplo 17 Semivida T1/2 (h) 1,70±0,02 8,38±3,16 Concentración sanguínea Cmáxima (ng/ml) 154±6,4 134±11,8

Área bajo la curva AUC⁰-t (ngh/ml) 756±34 2134±96,9

Área bajo la curva AUC⁰-~ (ngh/ml) 765±34 2504±387

Tiempo de retención MRT (h) 3,08±0,02 9,45±1,05 Biodisponibilidad (%) 45,1 75,1

4.5 Conclusión experimental: el compuesto representativo 17 de la presente invención tiene una biodisponibilidad mayor y una semivida más prolongada en ratones en relación con el compuesto LY2835219, y tiene un efecto de absorción oral bueno.

Ejemplo experimental 5

Determinación de los niveles de exposición en plasma y cerebro del compuesto representativo 17 de la presente invención

5.1 Resumen del experimento

Los ratones CD-1 se usaron como animales de prueba, las concentraciones de los fármacos en el plasma y el tejido cerebral de ratones en diferentes intervalos de tiempo después de la administración intragástrica única del compuesto representativo de la presente invención se determinaron mediante LC/MS/MS, para estudiar el nivel plasmático y el nivel de exposición cerebral de los compuestos de la presente invención en ratones.

5.2 Esquema experimental

5.2.1 Fármacos de prueba:

El compuesto preparado en el Ejemplo 17 de la presente invención.

El fármaco de control LY2835219, se preparó por nosotros mismos.

5.2.2 Animales de prueba:

24 ratones CD-1 adultos sanos, machos, 6-8 semanas de edad, peso corporal 20-25 g, adquiridos de Laboratorio de Animales Shanghai sippr BK Co., Ltd., Licencia de Producción Animal núm.: SCXK (Shanghai) 2013-0016.

5.2.3 Preparación de los fármacos de prueba

Se pesó una cantidad apropiada de la muestra, y se añadió con hidroxietilcelulosa al 0,1 %/Tween 80 al 0,5 % a un volumen final para dar una solución de 1,0 mg/ml.

5.2.4 Administración de fármacos de prueba

Para cada fármaco de prueba, se administraron 12 ratones CD-1 machos por vía intragástrica a una dosis de 10 mg/kg y un volumen de administración de 10 ml/kg después de ayunar durante toda la noche.

5.3 Operación experimental

LY2835219: antes de la administración y 0,25, 1,5 y 6 horas después de la administración, se extrajo sangre a través de la cánula en la arteria carótida, y se sacrificaron tres ratones al mismo tiempo. Todo el cerebro se recogió, se trituró y se congeló en nitrógeno líquido. 10 horas después de la administración, se sacrificaron los animales restantes, se recogió la sangre completa mediante punción cardíaca, y se recogió todo el cerebro, se trituró y se congeló en nitrógeno líquido.

Ejemplo 17: antes de la administración y 2, 4 y 24 horas después de la administración, se extrajo la sangre a través de la cánula en la arteria carótida y se sacrificaron tres ratones al mismo tiempo. Todo el cerebro se recogió, se trituró y se congeló en nitrógeno líquido. 48 horas después de la administración, se sacrificaron los animales restantes, se recogió la sangre completa mediante punción cardíaca, y se recogió todo el cerebro, se trituró y se congeló en nitrógeno líquido.

Tratamiento de la muestra de sangre completa: la sangre completa recogida se anticoaguló con EDTA-K2, y se centrifugó, el sobrenadante se separó, y el residuo se congeló y se almacenó a -20 °C hasta que la muestra se analizó por LC-MS/MS.

Muestreo del homogeneizado cerebral: los homogeneizados cerebrales se dispersaron con PBS (pH = 7,4): solución de MeOH (v: v, 2: 1) en un volumen de 5 veces el volumen del homogeneizado cerebral. Se tomaron 100 pl de solución, y la proteína que contenía se precipitó con 600 pl de IS. La mezcla se centrifugó a 13,000 rpm y 20-25 °C durante 15 minutos. Se mezclaron 50 pl del sobrenadante con 150 pl de agua que contenía FA al 0,3 % y se centrifugó a 4 °C. Se analizaron 5 pl de la muestra por LC-MS/MS.

El intervalo lineal del análisis de la muestra fue de 1-2000 ng/ml, y el límite de cuantificación más bajo fue de 1 ng/ml.

5.4 Los resultados de la medición del nivel de exposición de la sangre cerebral se muestran en la Tabla 10.

T l 1 : Ex i i n m i l m r n l m r r r n D-1

5.5 Conclusión experimental: el compuesto representativo de la presente invención (preparado en el Ejemplo 17) tiene una distribución sanguínea cerebral mejor, una relación AUC ⁰-final (cerebro/plasma) más alta y una relación Cmáxima (cerebro/plasma) en relación con el compuesto LY2835219 más alta, y el Tmáximo en el cerebro es igual al Tmáximo en plasma, lo que indica que el fármaco tiene un comportamiento PK similar en el cerebro y el plasma. Se sugiere que los compuestos de la presente invención pueden cruzar la barrera hematoencefálica para inhibir el crecimiento de los tumores cerebrales (cáncer cerebral) y tratar el cáncer cerebral.

Ejemplo Experimental 6

Determinación del efecto inhibidor del compuesto representativo 17 de la presente invención sobre la proliferación de la estirpe celular MG U87.

6.1 Materiales experimentales: la estirpe celular U87 MG de células de glioma humanas se adquirió del Banco de Células de la Academia de Ciencias de China, Shanghai, DAPI (5 mg/ml, Beyotime, C¹⁰⁰²), paraformaldehído al 4 % (DINGGUO BIOTECHNOLOGY CO. LTD AR-0211), placa de 96 pocillos con fondo negro transparente (PE, 6005182), Analizador celular 2200 (GE Healthcare).

6.2 Preparación experimental:

6.2.1 Preparación del medio U87 MG: RPIM1640 FBS al 10 % penicilina/estreptomicina al 1 %

6.2.2 Preparación de soluciones del compuesto de prueba y soluciones del patrón LY2835219:

(1) Preparación de soluciones del patrón LY2835219

a. Se tomaron 3,6 j l de solución concentrada patrón 10 mM, se añadieron a 6,4 j l de medio y se mezcló bien; después se añadieron 90 j l de medio, y se mezcló bien; después se añadieron 200 j l de medio, y se mezcló bien para dar una concentración inicial de 20 jM .

b. Se añadieron 200 j l de medio que contenía DMSO al 0,2 % (dimetilsulfóxido) en oB2 a B10 de una placa de 96 pocillos; se añadió 300 j l de la solución anterior a B1;

c. Se tomaron 100 j l de solución del pocillo B1, se añadió a B2 y se mezcló bien; después se tomaron 100 j l de la solución resultante y se añadieron a B3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a B9, para obtener soluciones patrón diluidas secuencialmente en 3 veces.

(2) Preparación de las soluciones de los compuestos de prueba:

a. Se tomaron la solución del compuesto de prueba a una cierta concentración, y se diluyó con un medio para dar una solución del compuesto con una concentración final de 20 jM ;

b. Se añadieron 200 j l de medio que contenía DMSO (dimetilsulfóxido) al 0,2 % de H²a H¹⁰de la placa de 96 pocillos; y 300 j l de la solución anterior se añadieron a H1;

c. Se tomaron 100 j l de solución del pocillo H1, se añadieron a H²y se mezcló bien; después se tomaron 100 j l de la solución resultante y se añadieron en H3, y la dilución se llevó a cabo en secuencia a H9, para obtener soluciones del compuesto de prueba diluidas secuencialmente en 3 veces.

6.3 Proceso experimental:

6.3.1: se inocularon las células U87 MG en una placa de 96 pocillos con fondo transparente negro a 4000 células/100 jl/pocillo, y se cultivaron a 37 °C durante toda la noche;

6.3.2: las muestras anteriores se añadieron a 100 jl/pocillo a una placa de cultivo inoculada con células, se agitó suavemente para mezclar bien y se incubó a 37 °C durante 72 horas;

6.3.3: fijación: se extrajo la placa de células, se retiró el medio y se añadió 50 j l de paraformaldehído al 4 % por pocillo para fijar durante 10 min;

6.3.4: 50 j l de glicina 0,1 M se añadió para neutralizar durante 10 min;

6.3.5: PBS (tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar dos veces;

6.3.6: permeabilización: Se añadió a cada pocillo 50 j l de TritónX-100 (Tritón) al 0,2 % y la permeabilización se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 10 min;

6.3.7: PBS (Tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar dos veces;

6.3.8: solución madre de DAPI 5 mg/ml se diluyó en una relación de 1:5000 (concentración final de 1 jg/ml), y la tinción se realizó a temperatura ambiente durante 20 min;

6.3.9: PBS (tampón fosfato pH 7,2) x1 se usó para lavar tres veces; y

6.3.10: la exploración y el análisis se realizaron mediante el analizador de células.

6.4 Procesamiento de datos:

_Valorr _d._{e fluorescencia}„ _aV _.alor d _,e fl _.uorescencia en ca-Tasa de inhibición en cada punto de concentración del punto _ da pun,° de concentracl<:in

concentración (% de inh) cero

Valor de fluorescencia a concentración cero *100°o

6.5 Resultados de la determinación:

Los resultados de la detección de la actividad citológica de LY2835219 descrita en el documento de la patente n.° WO2010075074 y el compuesto del Ejemplo 17 se expresaron por CI⁵⁰, y los resultados específicos se muestran en la Tabla 11,

Tabla 11: Actividad inhibidora del compuesto representativo de la presente invención sobre la proliferación de la estir e celular U87MG CI⁵⁰: nM

6.6 Conclusión Experimental:

El compuesto del Ejemplo 17 tiene una actividad inhibidora significativa sobre la proliferación de la estirpe celular U87MG; y el compuesto representativo de la presente invención tiene una actividad inhibidora de la proliferación más alta con respecto al compuesto de control LY2835219,

Ejemplo Experimental 7

Estudio farmacodinámico del compuesto 17 de la presente invención y la combinación del compuesto 17 de la presente invención y la temozolomida en un modelo de xenoinjerto de cerebro ortotópico U87-luc.

7.1 Resumen del experimento

Se usaron ratones atímicos BALB/c hembras adultos como animales de prueba. Un modelo de xenoinjerto de cerebro ortotópico U87-luc se usó para estudiar el efecto del compuesto 17 representativo de la presente invención sobre la supervivencia media de ratones atímicos BALB/c hembras después de la administración intragástrica.

7.2 Esquema Experimental

7.2.1 Fármacos de prueba:

El compuesto preparado en el Ejemplo 17 de la presente invención.

El fármaco de control LY2835219, se preparó por nosotros mismos.

La temozolomida se adquirió de Selleck.

7.2.2 Animales de prueba:

Los ratones atímicos BALB/c hembras adultas, sanos, 8 ratones/grupo, de 6-8 semanas de edad, con un peso de 18-22 g, adquiridos del Laboratorio de AnimalesShanghai sippr BK Co., Ltd., Licencia de Producción Animal núm.: 2008001658261; 2008001658263,

7.2.3 Preparación de los compuestos de prueba

Se pesó una cantidad apropiada del compuesto 17 y se añadió con hidroxietilcelulosa al 0,1 %/Tween 80 al 0,5 % como vehículo a 0,3125 mg/ml;

Se pesó una cantidad apropiada de la muestra de temozolomida, y se añadió con CMC-Na al 0,1 % Tween 80 al 0,25 % como vehículo a 0,3 mg/ml.

7.3 Modelo de xenoinjerto de cerebro ortotópico

Los ratones atímicos BALB/c hembras adultos se anestesiaron mediante inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico a una dosis de 80 mg/kg. Para aliviar el dolor, los animales se inyectaron con buprenorfina por vía subcutánea en el intervalo de tiempo de 30 minutos antes de la operación y 6 horas después de la operación, a una dosis de 0,1 mg/kg. Los animales se observaron después de la anestesia hasta que todos los animales se despertaron. Los animales anestesiados se fijaron correctamente, la piel de la cabeza de los animales se esterilizó con etanol al 70 %, y se realizó una incisión de aproximadamente 10 mm en el lado derecho de la línea media desde la frente hasta la línea de la oreja. Se inocularon 3 x 105 U87-luc células (3 pl, mezcla de PBS y Matrigel en una proporción de 4:1) en el lóbulo frontal derecho que está a 2 mm del lado derecho del bregma y está a 1 mm de distancia del lado frontal de la sutura coronal en cada animal. La incisión se suturó con sutura n.° 6, y se esterilizó con polivinilpirrolidona. Los animales se mantienen calientes hasta la anabiosis. 6 días después del trasplante de células tumorales, los animales tumorales se agruparon por aleatorización estratificada {ut} en base a los valores de intensidad de la señal de fluorescencia, y la bioluminiscencia promedio alcanzó 2,812E 07 fotones/s cuando los grupos se administraron en grupos. Diferentes grupos de animales se administraron a diferentes dosis durante un total de 35 días.

7.4 Mediana de supervivencia (días) del compuesto 17 de la presente invención y la combinación del compuesto 17 de la presente invención con Temozolomida en un modelo de xenoinjerto de cerebro ortotópico U87-luc.

T l 12: rviv n i m i r l m 17 l m in i n l m 17 n m z l mi

continuación

7.5 Conclusión experimental: el compuesto representativo 17 de la presente invención puede prolongar significativamente la mediana de supervivencia de animales en un modelo de xenoinjerto cerebral ortotópico U87-luc de una manera dependiente de la dosis. En el estudio sobre la medicación combinada con temozolomida, la medicación combinada prolonga además la mediana de la supervivencia de los animales en comparación con el uso de la temozolomida sola.

En resumen, la presente invención proporciona una serie de compuestos novedosos que tienen actividad inhibidora cinasa CDK4/6 selectiva que es superior, o comparable a, la de LY2835219, un fármaco candidato actualmente en ensayos clínicos de Fase III, con algunos de los compuestos que presentan una mejor selectividad. Además, el compuesto preferido exhibe un efecto de absorción oral bueno y una distribución en la sangre cerebral buena, y tiene un efecto farmacológico significativo sobre el modelo de xenoinjerto cerebral ortotópico U87-luc, lo que sugiere que los compuestos de la presente invención prometen desarrollarse en nuevos fármacos para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la proliferación celular, particularmente tumores malignos, especialmente cánceres cerebrales, y para ofrecer nuevas opciones para los médicos y los pacientes.

Estuches

La presente invención proporciona además un estuche que comprende los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas, o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, compuestos deuterados diastereoméricos, profármacos o sus mezclas.

Además, el estuche puede comprender las instrucciones de funcionamiento.

Composiciones farmacéuticas

La presente invención se refiere además a un producto de combinación para tratar un trastorno proliferativo celular, en donde, el producto de combinación comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable, y los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas. Los compuestos o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o la mezcla pueden estar en una cantidad eficaz o una cantidad terapéuticamente eficaz en la composición farmacéutica.

Como se usa en la presente descripción, “una cantidad eficaz” se refiere a una cantidad que es funcional y activa para los humanos y/o los animales y aceptable para los humanos y/o animales.

Como se usa en la presente descripción, los ingredientes “farmacéuticamente aceptables” son adecuados para usarse en los humanos y/o los animales (tales como mamíferos o aves) sin efectos secundarios adversos indebidos (tales como toxicidad, irritación y alergia), es decir, una sustancia con relación beneficio/riesgo razonable. “Vehículo farmacéuticamente aceptable” significa un vehículo para la administración y puede incluir diversos excipientes y diluyentes y similares. Dichos vehículos pueden incluir, pero sin limitarse, al agua, solución salina normal, liposomas, lípidos, proteínas, conjugados proteína anticuerpo, péptidos, celulosa, nanogel, tampón, glucosa, glicerol, etanol y sus combinaciones. La elección del vehículo debería ser generalmente compatible con el modo de administración, como es bien conocido por una persona con experiencia en la técnica.

La cantidad eficaz de la presente invención puede variar en dependencia del modo de administración y la gravedad de la enfermedad a tratar. La cantidad eficaz preferida puede determinarse por una persona con experiencia en la técnica en base a diversos factores (por ejemplo, a través de los ensayos clínicos). Tales factores incluyen, pero no se limitan a: los parámetros farmacocinéticos del principio activo tales como la biodisponibilidad, metabolismo, semivida, etc.; la gravedad de la enfermedad del paciente a tratar, el peso corporal del paciente, el estado inmunológico del paciente, la vía de administración, etc.

Método de tratamiento

Las referencias a los métodos de tratamiento en este párrafo deben interpretarse como referencias a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

La presente invención proporciona además un método para tratar un trastorno proliferativo celular, que comprende administrar a un paciente, por vía oral o no oral, una cantidad eficaz de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos deuterados, profármacos o sus mezclas, o la composición farmacéutica mencionada anteriormente.

Las vías orales o no orales pueden ser de administración gastrointestinal, administración nasal, administración intratraqueal, administración intrapulmonar, administración a través de las venas o epidermis en sitios no lesionados, administración intradérmica, administración subcutánea, administración intracardíaca, administración intramuscular, administración intraósea, administración intraperitoneal, administración epidural, administración bucal, administración sublingual, administración oftálmica, administración rectal, administración vaginal, administración uretral, administración por el canal auditivo y otras formas. Los modos preferidos de administración incluyen la administración oral, la administración por vías respiratorias, la inyección, la administración transdérmica, la administración a través de las mucosas o la administración cavitaria.

En donde, la administración oral incluye deglución, sublingual y similares. El modo de administración del tubo respiratorio incluye la inhalación, tal como la inhalación de atomización ultrasónica, la inhalación de aerosol de atomización de oxígeno, la inhalación de atomización a presión manual y similares. El modo de administración de inyección incluye inyección arterial, inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección intracardíaca, inyección intradérmica y similares. Los métodos de administración transdérmica incluyen iontoforesis, electroporación y similares. El modo de administración a través de las mucosas incluye la administración por la mucosa nasal, la administración por la mucosa oral, la administración por la mucosa oftálmica, la administración por la mucosa rectal, la administración por la mucosa uterina y la administración por la mucosa vaginal. El modo de administración cavitaria incluye la administración rectal, la administración vaginal, la administración uretral, la administración nasal y la administración por el canal auditivo. Se puede entender que la invención no se limita a las realizaciones descritas, sino que se define por el alcance de las reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula estructural I,

en donde R¹se selecciona de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁴lineal o ramificado no sustituido;

R6 se selecciona de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxilo o halógeno;

R⁷es

en donde Z es carbonilo, O, S, imino, sulfonilo o

y n es un número entero de 0 a 4; W e Y son cada uno independientemente C, N, O o S, pero W e Y no pueden ser ambos C al mismo tiempo, y cuando Z es O o S, W es C; R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶, hidroxilo, halógeno; o

Cs O O ó

” " ¹CNR_eR_s, ^t GR}) 5 —Q- ¹CKg Q — ^i!CGRa

?

en donde Rs y R⁹se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶e hidroxialquilo C¹-C⁶;

o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural I o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto marcado isotópicamente es un compuesto deuterado.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde R²y R³, junto con los átomos de C a los que ambos están unidos, forman un anillo saturado o insaturado de 3 a 7 miembros;

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en donde R²y R³, junto con los átomos de C a los que ambos están unidos, forman un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

5. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R⁴y R⁵se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, flúor o cloro, y al menos uno de R⁴y R⁵es flúor o cloro.

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde R⁴y R⁵son cada uno independientemente hidrógeno o flúor, y al menos uno de R⁴y R⁵es flúor.

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 6, en donde R⁴es hidrógeno o flúor, y R⁵es flúor.

8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R6 se selecciona de un átomo de hidrógeno o alquilo C¹-C⁶.

9. El compuesto de fórmula estructural I, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural I o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde Z es un grupo carbonilo, O o

y n es un número entero de 0 a 4 y/o W e Y se seleccionan cada uno independientemente de C o N, pero W e Y no pueden ser ambos C al mismo tiempo y/o R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o hidroxilo.

10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en donde Z es

y n es un número entero de 0 a 2.

11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, en donde n es 0 o 1.

12. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en donde R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶o alcoxi C¹-C⁶.

13. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde R⁷se selecciona de los sustituyentes de las siguientes estructuras:

en donde, R¹⁴y R¹⁵se seleccionan cada uno independientemente de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o hidroxilo; R¹⁶se selecciona de un átomo de hidrógeno, cicloalquilo C³-C⁶, haloalquilo C¹-C⁶, hidroxialquilo C¹-C⁶, alcoxi C¹-C⁶o hidroxilo.

14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, en donde R¹⁴y R¹⁵se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶e hidroxialquilo C¹-C⁶; R¹⁶se selecciona de un átomo de hidrógeno, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁶o hidroxialquilo C¹-C⁶.

15. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman un heterociclo de 6 miembros que contiene uno o más átomos seleccionados de N, O o S.

16. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 15, en donde R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman un heterociclo de 6 miembros que contiene N.

17. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 16, en donde R6 y R⁷, junto con los átomos de C a los que están unidos, forman la siguiente estructura química

en donde R¹⁷se selecciona de hidroxilo o alcoxi C¹-C³.

18. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 17, en donde R⁷es hidroxilo.

19. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el compuesto está representado por las fórmulas estructurales II, III, IV o V,

en donde, R¹, R²y R³son tal como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, R⁴y R⁵son tal como se han definido en las reivindicaciones 1, 2, 5, 6 o 7; R6 es tal como se ha definido en la reivindicación 1, 2 u 8; R¹⁰y R¹¹son tal como se han definido en las reivindicaciones 1, 2, 9 o 12; R¹⁷es tal como se ha definido en la reivindicación 17 o 18; Z, W e Y son tal como se han definido en la reivindicación 1, 2, 9, 10 u 11;

el anillo A es un anillo saturado de 3 a 7 miembros.

20. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el anillo A es un anillo saturado de 3 a 6 miembros.

21. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el compuesto está representado por la fórmula estructural VIII,

en donde R²⁰, R²¹, R²²se seleccionan cada uno independientemente de alquilo C¹-C⁴, o R²⁰es alquilo C¹-C⁴, y R²¹y R²², junto con el átomo de C al que están unidos, forman un anillo saturado de 5 a 6 miembros; R²³se selecciona de hidrógeno o flúor; n = 0 o 1; R²⁴se selecciona de hidrógeno, alquilo C¹-C⁴o hidroxialquilo C¹-C⁴, y Q es C o N.

22. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el compuesto está representado por una de las siguientes estructuras:

23. Un compuesto de fórmula estructural VI,

en donde R¹, R²y R³son tal como se han definido en las reivindicaciones 1 o 4; R⁴y R⁵son tal como se han definido en las reivindicaciones 1, 5, 6 o 7; X es un grupo saliente o amino; en donde el grupo saliente permite que el compuesto de fórmula VI reaccione con un compuesto de fórmula VII para dar el compuesto de fórmula I de acuerdo con la

o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural VI o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero o una mezcla de los mismos.

24. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en donde X es halógeno o amino.

25. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 24, en donde el halógeno es flúor, bromo o cloro.

26. Un método para preparar el compuesto de fórmula estructural I, o un tautómero, un mesómero, un racemato, un enantiómero, un diastereómero, un compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula estructural I o su tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero, compuesto marcado isotópicamente o una mezcla de los mismos de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, comprende: llevar a cabo una reacción de acoplamiento catalizada por paladio entre un compuesto

en donde R¹, R², y R³son tal como se han definido en las reivindicaciones 1 o 3, R⁴y R⁵son tal como se han definido en las reivindicaciones 1, 5, 6 o 7; R6 son tal como se ha definido en las reivindicaciones 1, 8, 15, 16, 17 o 18; R⁷es tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 o 9 a 18; X y M son cada uno independientemente un grupo saliente o amino, y solo uno de X y M es amino y uno de los dos debe ser amino.

27. El método de acuerdo con la reivindicación 26, en donde el grupo saliente es halógeno.

28. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el grupo saliente es flúor, bromo o cloro.

29. Compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos, para su uso como un medicamento.

30. Compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos, para su uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

31. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 30, en donde el trastorno proliferativo celular se refiere a cáncer de mamífero o de ser humano; y/o el trastorno proliferativo celular es una o más enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en SIDA, ateroesclerosis y reestenosis después de la implantación de una endoprótesis vascular.

32. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 31, en donde el trastorno proliferativo celular se refiere a cáncer humano, incluidos tumores sólidos malignos y tumores no sólidos malignos, incluidos específicamente, pero sin limitarse a, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, leucemia, cáncer cerebral, cáncer gástrico y glioma.

33. El compuesto para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32, en donde el compuesto se administra al sujeto que lo necesita como el único principio activo o junto con otras sustancias biológicamente activas.

34. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 33, en donde las otras sustancias biológicamente activas incluyen, pero sin limitarse a, agentes antineoplásicos, agentes inmunosupresores y agentes antivíricos; en donde el agente antineoplásico es uno o más agentes seleccionados de ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, semustina, clorhidrato de mecloretamina, busulfano, clorambucilo, melfalán, nitrocafano, formilmelfalano, carmustina, lomustina, altretamina, dibromomanitol, citarabina, fluorouracilo, metotrexato, hidroxiurea, tegafur, meisoindigo, mercaptopurina, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, actinomicina D, mitomicina, doxorrubicina, pingyangmicina, epirrubicina, pirarrubicina, daunorrubicina, bleomicina, homoharringtonina y sus derivados, vincristina y sus derivados, hidroxicamptotecina y sus derivados, etopósido y sus derivados, vindesina y sus derivados, vinblastina y sus derivados, bitartrato de vinorelbina, taxol y sus derivados, colchicina y sus derivados, elemeno y sus derivados, aminoglutetimida, tamoxifeno, dexametasona, dutasterida, flutamida, gonadorelina, acetato de leuprolida, letrozol, sunitinib, sorafenib, imatinib, gefitinib, erlotinib, vandetanib, pazopanib, lapatinib, canertinib, afatinib, mubritinib, dasatinib, neratinib, termozolomida, trastuzumab, pertuzumab, rituximab, panitumumab, bevacizumab, ipilimumab, ofatumumab, ramucirumab, everolimus, sirolimus y zotarolimus.

35. Un producto de combinación para tratar un trastorno proliferativo celular, en donde el producto de combinación comprende uno o más compuestos seleccionados de los compuestos de fórmulas estructurales I-V y VIII de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos; o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmulas I-V y VIII de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o sus respectivos tautómeros, mesómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, compuestos marcados isotópicamente o una mezcla de los mismos; y/o el producto de combinación es un estuche.

36. La combinación de acuerdo con la reivindicación 35, en donde el producto de combinación incluye además excipientes farmacéuticamente aceptables.